LU85161A1 - Nouveaux conjugues de la vinblastine,leur procede de preparation et leur utilisation therapeutique - Google Patents
Nouveaux conjugues de la vinblastine,leur procede de preparation et leur utilisation therapeutique Download PDFInfo
- Publication number
- LU85161A1 LU85161A1 LU85161A LU85161A LU85161A1 LU 85161 A1 LU85161 A1 LU 85161A1 LU 85161 A LU85161 A LU 85161A LU 85161 A LU85161 A LU 85161A LU 85161 A1 LU85161 A1 LU 85161A1
- Authority
- LU
- Luxembourg
- Prior art keywords
- group
- protein
- vinblastine
- derivatives
- derivative according
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
- C07D519/04—Dimeric indole alkaloids, e.g. vincaleucoblastine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/6805—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a vinca alkaloid
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
- 2 - ι i \ ' i
La présente invention se rapporte à de nouveaux conjugués de la Vinblastine et-de certains de ses dérivés connus avec des protéines, leur , méthode d'obtention et leur utilisation en tant qu'agent anti-tumoral.
L'invention comprend également certains intermédiaires actifs en 5 chimiothérapie, et des dérivés aminés de ceux-ci.
La Vinblastine et certains de ses dérivés, en particulier la vincristine ou la vindésine, ont déjà été couplés à des protéines par exemple l'albumine ou diverses immunoglobulines. Il en résulte des produits de couplage ou 10 des composés dits "conjugués". Nous relevons notamment les références suivantes de la littérature : - J.D.Teaie, Jacqueline M.Clough et V.Marks, Br. J.Clin.Pharmac. 4, 169-172 ,1977 - C.H.J.Ford, C.E.Newman, J,R.Johnson, C.S.Woodhouse, T.A.Reeder, 15 C.F.Rowiand, R.G.Simmonds, Br.J.Cancer 47. 35-42, 1983 - M.J.Embleton, G.F.Rowland, R.G.Simmonds, E.Jacobs, C.H.Marsden, R.W.Baidwin Br.J.Cancer 47,43-49, 1983 -J.R.Johnson, C.H.J.Ford, C.E.Newman, C.S.Woodhouse, G.F.Rowland, R.G.Simmonds Br.J.Cancer , 44, 472-475, 1981 20 - Eli Lfîlv Eur.PEi.ADDiic. , Pub!. nc5€.322, 21 .07.82 - R.A. Conrad, G.J.Cuiiinan, K.Gerzon, G.A.Poore J.Med.Cnem. 22, 391, 1979
Le couplage de ces dérivés bis-indoliques a été entrepris non seulement 25 dans le but de mettre au point de nouveaux réactifs immunologiques mais surtout en vue de la préparation de substances anti-tumorales plus 6 actives ,plus sélectives et moins toxiques.
Dans cette dernière optique de nombreux conjugués protéiques avec 30 d'autres agents antitumoraux sont actuellement étudiés. Il en est en particulier ainsi avec des conjugués d'anticorps et d'un fragment de la ricîne ou de conjugués d'albumine et de méthotrexate (Demande de brevet français 2.437.213, C» M» Industries; B.C.F.Chu, S.B.Howell J. of Pharmacology and Exp. Therapeutics ,219 (2), 389-393, 1981).
i / 'b'· / fi! * f " '
J
- 3 - « r · » ..
Les anti-corps monoclonaux, en particulier ceux d'origine humaine, couplés aux médicaments anti-tumoraux connus sont plus particulièrement l'objet d'études diverses.
5 On relèvera enfin que l'utilisation et l'évaluation de complexes 1:1 d'alcaloides bis-indoliques avec la tubuline a été décrite dans le brevet belge 854.053. Dans certains cas il peut en résulter une toxicité moindre et une activité chimiothérapique plus importante que celles des alcaloïdes libres correspondants.
10 1 La présente invention se caractérise notamment par la préparation et l'utilisation de conjugués vinblastine-protéine dans lesquels le lien covalent qui unit la molécule active à la protéine jouant le rôle de vecteur chimiothérapique, est un lien du type ester au niveau de la 15 fonction hydroxyle en C-4 de la 0-4 désacétylvinblastine ou de ses dérivés.
Les composés de l'invention répondent plus particulièrement à la formule générale suivante 20 ch3ooc/ (\TQï i s . - ·' i ; - 4 - j: dans laquelle A représente un "bras" tel que -COCH2~, ’ -COCH2-CH2GO-., COCH2-CH2-CH2CO-,R.j représente un radical . protéique éventuellement modifié, un groupe amino NR^R^, un chlore ou ij un groupe ester d'acide aminé lié via la fonction amine et R_ représente ji ^ : 5 un groupe méthoxy, un groupe amino ou un radical ester d'acide alpha-aminé lié par une liaison de type amide et dont le groupe ester ' comporte de 1 à 6 atomes de carbone, R, et R^ représentent des groupes alkyle comportant de 1 à 3 atomes de carbone ou »ensemble, ur, groupe alkanediyle comportant de 3 à 5 atomes de carbone j ‘ίο
Dans l'art antérieur, la liaison était effectuée par l'intermédiaire d'un lien amide au niveau de la fonction vinblastinoyl-23 du dérivé bis-indolique. De manière surprenante nous avons constaté que l'activité anti-tumorale peut être mieux conservée lorsque la liaison est effectuée j 5 en C-4 plutôt qu'en C-23.
Les dérivés de la présente invention sont obtenus, dans une première étape, par condensation du chlorure d'acide chloroacétiaue ou d'un anhydride, par exemple l'anhydride succinique ou glutarique, sur 20 l'hydroxyle en C-4 de la 0-4 désacétylvinblastine ou l'un des dérivés du type 0-4 désacétylvinblastine - carboxamide-3.
ri
Les dérivés 4-chloroacétate hémisuccinate ou hémiglutarate ainsi obtenus sont alors condensés avec la protéine, l'acide aminé ou l'amine simple 25 dans un solvant dans lequel ces composés sont solubles. On peut à cette fin utiliser un mélange eau-dioxanne à un pH adéquat maintenu par un tampon , par exemple un tampon borate. La condensation est confirmée par chromatographie ou électrophorèse. Dans ce dernier cas on peut utiliser de la Vinblastine radio-active (par exemp t tritiée) afin 30 de faciliter la caractérisation.
L'obtention du chloro-acétate en C-4 de la Vinblastine est décrite par W.W.Hargrove Lloydia, 27 (4), 342, 1964. 11 peut ainsi être obtenu par action de l'anhydride chloroacétique sur la désacétyl Vinblastine dans le 35 . dichlorométhane.
/5-·' > - 5 -
Du point de vue chimique la condensation avec les protéines peut s'expliquer par J'obtention de liens covalents résultant de la réaction des groupes amines de la lysine protéique avec le chlore activé de la fonction chloroacétate ou avec le groupe ester activé dérivé de l'hémïsuccinate ou 5 hémiglutarate. L'activation peut être effectuée de manière classique par traitement avec un chloroformïate. L'albumine de sérum bovin par exemple comprend 56 résidus aminés de lysine. Le nombre de molécule de Vinblastine par protéine variera en fonction des conditions opératoires mais sera généralement compris entre 1 et 20.
' 10
Le conjugué obtenu est isolé au moyen de méthodes classiques utilisées en chimie ou, dans le cas de conjugués protéiques, en biochimie. Le conjugué protéique est ainsi précipité du milieu réactionnel par addition d'acétone, puis centrifugé, rincé, lyophilisé et purifié par filtration sur 15 gel. Eventuellement on peut soumettre le dérivé ainsi obtenu à une réaction de succinylation classique qui permet d'éviter des problèmes d'aggrégation que caractérisent certaines protéines, conjuguées ou non.
Les protéines qui peuvent être avantageusement utilisées sont en 20 particulier l'albumine de sérum bovin ou humain, la fétuine ou des immunoglobulines, ces dernières étant éventuellement obtenues par la technique des anti-corps monoclonaux. Dans ce dernier cas, l'utilisation d'anti-corps monoclonaux d'origine humaine et montrant une certaine spécificité vis à vis de tumeurs humaines s'avère particulièrement 25 intéressante.
Les protéines utilisées peuvent également être traitées afin d'être sélectivement modifiées. Ces modifications permettent d'obtenir des conjugués protéiques qui seront, lors de leur utilisation thérapeuticue 30 préférentiellement concentrées au niveau de certains tissus, par exerpie au niveau du foie. Il est par exemple possible, préalablement à la condensation du dérivé de la Vinblastine à la protéine, de galactosyier cette dernière. La galactosylation est effectuée en appliquant par exemple le mode opératoire décrit par G.Wilson dans The Journal of 35 ^ Biochemistry , 253 (7) 2070-2072, 1978.
* - 6 - I Les essais in-vitro effectués avec les composés de l'invention pour démontrer leur activité antl-tumorale indiquent que la formation du ! · conjugué par un lien en C-4 peut être plus avantageuse que lorsque ce lien est effectué en 03.
5 : Le couplage via le carbone 3 de la Vinblastine ou de ses dérivés | s'effectue de manière classique en formant, dans une première étape, l'hydrazîde en 023 (carboxhydrazide) puis l'azoture d'acide correspondant par nitrosation. L'azoture est alors directement couplé 10 avec la protéine, j
Cet azoture d'acide peut cependant aussi être condensé de manière également connue avec un ester d'acide aminé , par exemple un ester méthyliaue. La fonction ester de l'acide aminé peut être à son tour 15 soumise à une hydrazinolyse puis à une nitrosation. Le nouvel azoture d'acide du produit de couplage acide aminé-vinblastine est alors condensé avec la protéine. L'acide aminé constitue dans ce cas le lien unissant la protéine à la molécule de Vinblastine.
? 20
On a ainsi obtenu des dérivés de condensation couplés en C-3 ou C-4 et 0-4-désacétyiés par exemple du type vinblastine-fétuine (Fét-VDS-C-3), vinblastine-tétuine succinylée (Fét(S)-VDS-C-3) 25 vinblastine-isoleucine-fetuine (Fét-lle-VDS-C-3) vinblastine-tryptophane-albumine de sérum bovin (BSA-TrpV-C-3) vinblastine-tryptophane-albumine de sérum bovin succinylée {BSA ( S ) -T rpV-C-3 ) vinblastine-isoleucine-albumine de sérum bovin succinylée (BSA(S)-Viie 30 C-4) vindésine-albumine de sérum bovin (BSA-VDS-C-4).
S ....
vindésine-albumine de sérum bovin succinylée (BSA(S)-VDS-C-4).
i vindésine-albumine de sérum bovin galactosilée (BSA(G)-VD5-C-4)
s 35 J
/ » - 7 -
En utilisant comme bras l'acide succinique on a également obtenu de nombreux conjugués protéiques, p.e. vindesine-albumine de sérum bovin.
Les composés de l'invention ont été testés sur des souris BDF^ ou DBA2 5 auxquelles une leucémie P388 a été implantée par voie intra - péritonéale ou intra-veineuse, l'activité anti-tumorale étant mesurée par le pourcentage d'ILS (Increased Life Span, augmentation de la durée de survie des survivants/total).
10 Ainsi des expériences effectuées avec ia vindésine, le N-(04-déacétyl-3- de(méthoxycarbonyl)- vinblastinoyl-23) tryptophanate d'éthyle (voir demande de brevet européen Publ. n°41.935, Omnichem), ainsi que d'autres dérivés en C-3 d'acides aminés, couplé via le carbone C-3 avec la fétuine ou l'albumine de sérum bovin dans un rapport variant de 2 à 15 6, démontrent que ces conjugués sont peu actifs sur les tumeurs P388 (voir tableau ). L'administration du conjugué a été effectuée par voie intra-péritonéale ou intra-veineuse, identique au mode d'injection de la tumeur.
20 Par contre ces mêmes substances pour lesquels le couplage est effectué en C-4 montrent, de manière inattendue, une activité significative a l'occasion de tests similaires. Des augmentations de durée de survie de plus de 70% ont été observées.
25 L'activité supérieure des conjugués protéiques de la présente invention a
également été mise en évidence sur des cellules L1210 in vitro en milieu RPMl contenant 10% de sérum de veau foetal. Après incubation, la technique adoptée consiste à mesurer le contenu en protéines cellulaires, estimation effectuée en adoptant la technique de Lowry. Ainsi après 2 30 jours à une concentration de 10-50 microgrammes/mL de BSA(S)-C4-VDS
on obtient une inhibition de la croissance cellulaire, alors que la culture cellulaire non traitée s'est multipliée par un facteur 2,5.
- 8 -
TABLEAU
ACTIVITES DE DERIVES DE LA VINBLASTINE POUR DES TUMEURS INDUITES CHEZ LA SOURIS.
j
I PRODUITS (a) (b) (c) SOURIS TUMEUR ILS
(d) (e) (f) (g) BSA-TrpV-C-3 2 10 423 DBA^ ΙΟ9 P388 iv 9,4 ! BSA(S)TrpV-C-3 2 6,3 261 DBA2 ΙΟ4 P388 iv -8 j Fét-VDS-C-3 6 15 298 BDF^ ΙΟ6 P388 ip 4,1 Fét(S)-VDS-C-3 2 15 298 BDF^ ΙΟ6 P388 ip 8,2 Fét-!Le-VDSC3 2 10 294 BDF^ ΙΟ6 P388 ip 2,6 BSA-VDS-C-4 1 ,7 8 398 BDF^ 106 P388 ip 2 2,7 16 500 BDF1 ΙΟ6 P3B8 ip 48 BSA(S)-VDS-C-4 2,5 10 332 BDF1 ΙΟ6 P388 ip 76 2,4 27.5 968 BDF1 106 P388 ip 71 BSA(S)-Vlle-C-4 1 ,3 3 165 BDF1 ΙΟ6 P388 ip 18 1 ,3 10 550 BDF1 ΙΟ6 P388 ip 20 1 ,3 14 771 BDF1 ΙΟ6 P388 ip 32 BSA-Succ-VDS 18 35 173 BDF. 108 P388 ,p 39 , 18 75 371 BDFj 10b P388 ip 79 • r j ! t.
j j t i - 9 - TABLEAU (SUITE)
(b) SOURIS TUMEUR ILS
VDS-Chioroacét 4 DBA2 FR ΙΟ5 P388 iv 24 8 DBA2 FR ΙΟ5 P388 iv 38 10 DBA2 FR 105 P388 iv 57 14 DBA2 FR ΙΟ5 P388 iv 70 12 DBA2 US 1Û5 P388 iv 63 5 BDF1 106 P388 ip 15 BDF1 ΙΟ6 P388 ip >60 VILE-Chloroacét 4 DBA2 ΙΟ6 P388 ip 2£.
8 DBA2 ΙΟ6 P388 ip 52 12 DBA2 ΙΟ6 P388 ip 80 16 DBA2 ΙΟ6 P388 ip -29 DAVLB-Pyrroiidino 6,25 DBA2 10^ P388 iv 9 12.5 DBA2 ΙΟ5 P388 iv 20 25 DBA2 ΙΟ5 P388 iv 43 50 DBA2 ΙΟ5 P388 iv 82 (a) rapport molaire vinca:protéine (b) dose mg vinca/kg (c) dose mg protéine/kg (d) nombre de cellules injectées (e) type de la tumeur injectée, (f) voie d'injection (g) pourcentage d'augmentation du temps de survie des survivants comparativement à des souris non-traitées / - 10 -
La comparaison avec les cellules d'hépatome in vitro (300.000 cellules sur milieu hep 3B, incubation de 8 jours, estimation par la technique de ! Lowry) démontre que l'albumine de sérum humain couplé en C4 inhibe mieux la croissance que lorsqu'elle est couplée en C3 (0,395 5 microgrammes/mL de Vinblastine).
La présente invention s'étend donc également aux applications industrielles et notamment pharmaceutiques des composés bisindoliques 10 nouveaux.
Les composés de l'invention présentent en effet des propriétés antitumorales particulièrement intéressantes et susceptibles d'être utilisées en thérapeutique humaine.
'15
Ces dérivés de la Vinblastine peuvent être , en particulier, utilisés pour le traitement des leucémies, de gliomes, de lymphosarcomes ou d'autres tumeurs malignes, y compris les tumeurs dites "solides".
20 En thérapeutique humaine , ils sont ainsi utilisés pour le traitement de la maladie de Hodgkin et pour d'autres tumeurs pouvant bénéficier d'un traitement avec la Vinblastine, la vincristine ou la vindésine.
Pour leur application thérapeutique, les composés de l'invention, 25 éventuellement sous forme lyophilisée, sont de préférence administrés par voie parentérale, dissous dans un solvant pharmaceutiquement acceptable. Parmi les sels d'addition, on préférera, les sels non toxiques pharmaceutiquement acceptables, tels que les sels d'acides minéraux comme l'acide chlorhydrique, l'acide phosphorique et l'acide 30 sulfurique ou d'acides organiques comme l'acide acétique, propionique, . ;
» X
X
. - X ^ \ -11- L'eau physiologique ou d'autres solutions salines tamponnées, par exemple aved un phosphate, sont des solvants appropriés.
La substance active est généralement administrée à une posologie pouvant 5 varier de 50 mg à plusieurs grammes . Les composés de l'invention peuvent en outre être utilisés en combinaison avec d'autres agents anti-tumoraux.
Les exemples suivants illustrent de manière non limitative le procédé 10 conduisant aux composés de l'invention.
Exemple 1 0-¾ chloroacétate de vindésine (VDS-Chloroacét) 15
Dans un ballon, on introduit 0,92 M de vindésine , 25 mL de CH2CI2 et 4,1 mM d'anhydride chloroacétique. La solution est agitée en absence c'e lumière pendant 1¾ h. On ajoute 25 mL de méthanol (aicoolyse de l'excès d'anhydride). On agite à température normale pendant deux heures. Le 20 solvant est évaporé sous vide et le résidu dissout dans 500 mL de CH2C12, lavé par une solution aqueuse de NH^OH dilué à froid. Après évaporation de la phase organique le résidu est dissout dans 47 mL de méthanol contenant 11,2 mL d'eau et 2,33 g de silice. Le mélange est agité 6 h à température normale. La silice est séparée par filtration et 25 lavée à plusieurs reprises reprises avec du méthanol chaud. Le filtrat est concentré sous vide, alcalinisé avec une solution d'ammoniaque diluée et extrait au CH2C12· Les extraits sont réunis, séchés sur Na^Q^ et évaporé à siccité. La purification est effectuée sur colonne de silice en eluant avec un mélange CH2CI2:5% MeOH. Rendement 88 %.
30 • IR : 3470, 3040, 2970, 2880, 1740, 1690, 1615, 1510, 1500, 1430, 1225, 1190, 1010, 740 cm“1 I Spectre de masse 830 (M + -1), 813, 796, 773, 754, 297, 277, 293, 108 ”1 c/ ' ! - I 2 - i - !' I RMN : ppm 8(lH,s,NHind), 7,45(lH,d), 7,2-7,0(4H,m), 6,9(1H,d), '] * 6,5(1H,s, 'C14-H), 6,05(1H,s,C17-H), 5,8(1H,m,C7-H), 5,5 (1H,m,C4-H), 5,28(1H,d,C6-H), 4,0(2H,CH2Cl), 3,7(3H,s,-C02CH3), ; 3,55(3H,s,0CH3), 2,8(3H,s,NCH3}, 0,9-0,65(8H,m).
5
Exemple 2 a) Couplage en C-4 de la O-4-désacétyl-vindésine (BSA-VDS-C-4) [ j q L'alpha-chloroacétate en C-4 de la 0-4 désacétyl-vindésine radioactive (150 mg), dissous dans 5 mL de dioxanne est ajouté goutte à goutte à une solution de 216 mg de BSA (albumine de sérum bovin, Cal Biochem) dans 5 mL de tampon borate 0,4 M pH 9,0. Le mélange est ajouté à température ambiante pendant 48 h. Le conjugué est précipité par j 5 addition de 6 volumes d'acétone et centrifugé 30 min à 1300 rpm. Le précipité est lavé 2 fois dans l'acétone et centrifugé dans les mêmes conditions. Après ces deux rinçages le précipité est lyophilisé et purifié par filtration sur gel G-25 (3x90 cm) équilibré dans une solution de NH4HC03 0,1 M pH 7,8. Le pic exclu est récupéré et lyophilisé. Le 20 contenu en protéine est mesuré par la technique de Lowry et le contenu en alcaloïde estimé par mesure de la radioactivité. Le conjugué obtenu contient 2,5 moles de vindésine par mole de BSA. Par chromatographie sur gel d'agarose on démontre que la radioactivité est bien associée aux protéines.
25 b) Succinylation ( BSA(S)-VDS-C-4 )
Le conjugué est dissous dans l'eau à une concentration de 100 mg/5ml et le pH de la solution porté à 7 avec une solution de NaOH 0,1 N. 30 55 mg d'anhydride succinique sont alors ajoutés par petites fractions.
Le pH est maintenu à 7 par addition de NaOH 0,1 N. Lorsque le pH est stabilisé on ajoute encore 55 mg d'anhydride succinique. La solution est agitée 1 h à température ambiante, dialysée à l'eau à 0°C pendant une nuit et lyophilisée. Les contenus en protéines et en alcaloïdes sont 35 J estimés selon les techniques décrites en a).
i - 13 - *
Exemple 3 0-4 chloroacétate de N(04-désacétyl- decarbomethoxy-3 vinblastin-23-oyl) L- isoleucinate d'éthyle (BSA(S)-VIle-C-A) 5
En suivant le mode opératoire de l'exemple 1, à partir du dérivé j correspondant de la Vinblastine (voir brevet belge 889.136), on obtient le dérivé ci-dessus avec un rendement de 85% .
10 IR : 3470, 3410, 3040, 2970, 2880, 1740, 1680, 1615, 1500, 1460, 1430, 1300, 1225, 1190, 1150, 1010, 740 cm”1
Spectre de masse : 988 (M+17), 973(M+2), 939, 917, 391 , 236, 94 15 RMN : ppm 9,85 (1H ,s,C3-OH), 8,6(1H,s,NH), 7,55(1H,d), 7,4(1H,d], 7,2-7,0 (m,3H), 6,65(1 H,s,C14H), 6,1 (1H,s,C17H), 5,85(1 H,m,C7H), j 5,58(1 H ,s,C4H), 5,32(1 H ,m,C6H), 4,6(lH,q), 4,2(2H,m,C02CH2-), 1 4,0(2H, C02CH2CI), 3,78(3H,s,-C02CH3), 3,1(3H,s,-OCH3), | 2,7(3H,s,NCH3), 1,28(3H,t,C02CH2CH3), 1,0-0,8(14H,m).
20 ' Exemple 4
Formation de l'hémisuccinate en 0-4 de la vindésïne et couplage avec 1' 25 albumine de sérum bovin (BSA). (BSA-Succ-VDS)
Dans un ballon, on introduit 0,125 mM de vindésine, 0,187 mM d'anhydride succinique et 4 mL de Ci^C^ anhydre. La solution est égitée à l'abri de la lumière à température ambiante pendant 14 h.
30 La solution est ensuite plongée dans un bain de glace. On y ajoute 0,250 mM de triéthylamine ,0,250 mM de chloroformiate d'éthyle et 5 mL de dioxanne. On agite pendant 1/2 h. D'autre part, on prépare une solution de 90 mg de BSA dans 17,3 mL d'h^O et 17,3 mL de dioxanne y sont ajoutés goutte à goutte. Le pK est ajusté à 8,5 avec de la soude 1 35 I N. La solution est refroidie à 5°C. Après 1/2 h l'ester activé est Λ - 14 - ajouté à la solution de BSA. La solution est agitée pendant 4 h à 5°C, tandis que le pH est maintenu à 8,5 par addition de NaOH IN. La précipitation. du conjugué et sa caractérisation sont effectués comme précédemment décrits. Le rapport molaire est d'environ 18 et reste I 5 constant après chromatographie sur sépharose 6B en présence de guanidine 6M.
Exemple 5 10 Vinblastine 0-4 hémisuccinate pyrrolidine (DAVLB-Pyrrolidino) A une solution de 500 mg (0,651 mM) de 0-4 déacétylvinblastine dans 15 mL de dichlorométhane anhydre, on ajoute 97,6 mg (0,976 mM) d'anhydride succinique. La solution est agitée 20 h à t ambiante. On 15 refroidit ensuite à 0°C par un bain de glace et ajoute goutte à goutte successivement une solution de 131,5 mg (1 ,303 mM) de triéthylamine dans 8 mL de dichlorométhane et une solution de 141,2 mg (1 ,302 mM) de chloroformiate d'éthyle dans 8 mL de dichlorométhane. On agite 1 h 30 έ 0°C et ajoute 92,5 mg (1 ,302 mM) de pyrrolidine en solution dans 8 mL 2 0 de dichlorométhane. On laisse revenir à t ambiante et agite le mélange 2 heures. On ajoute 50 mL de dichlorométhane et 50 mL d'une solution aqueuse à 10% de carbonate de sodium. On agite, décante et sépare ic phase organique. La phase organique est extraite 3 fois par du dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont lavées par une 25 solution aqueuse saturée en NaCI et séchées sur MgSO^. Le résidu que“ l'on obtient après évaporation est purifié par chromatographie sur colonne de Si02 (élution dichlorométhane/méthano! 92:8). Après trituration dans un mélange acétate d'éthyle/ cyclohexane, on obtient ainsi 386 mg de produit pur sous forme d'une poudre amorphe. 30 Rendement : 64%.
Spectre de masse : DCI (isobutane) : 936 (M + 14), 922 (M) : - IR (CHCI,, 5%): 3477, 3015, 2980, 2885, 1741 , 1635, 1505, 1450, 1250 /-1 J cm - 15 - ! * RMN (CDCI3, 360 MHz, ppm) : 8,05 (NH, 1H), 7,53 (1H), 7,16(3H), 6,66 (1H), 6,10 fl H), 5,85 (1H) et 5,45(1H)(H14,H15), 5,51 (1H,H17), 3,95 (1H,H17'a), 3,78 (3H,OMe), 3,75 (3H,OMe). 3,60 (3H,OMe), 3,70(1H,H2), 3,43(7H), 3,11(2H, H5'b+H6'b), 2,78 (2H, H21a'+H21,b). 5 2,70 (3H,NMe), 2,61 (1H, H21), 2,25 (1H,H17·), 1,90 (2H,CH2-CO), 1,80(2H,CH2CO), 1,73 (2H, beta pyrrolidine), 1,28 (2H,idem), 1,45 (1H, H15'a), 1,37 (1H, H14'b), 0,86(3H,CH3), 0,80(3H,CH3), 0,76(1 H,H14').
10
Exemple 6
Vinblastine 0-4 hémisuccinate-ethyl tryptophanate amide A une solution de 0,310 g (0,403 mM) de 04-déacétylvinblastine dans 7 mL de dichlorométhane anhydre, on ajoute 52 mg (0,524 mM) d'anhydride succinique. La solution est agitée 15 heures à t ambiante puis refroidie à 0°C. Après addition successive d'une solution de 81 mg (0,806 mM) de trïéthylamine dans 5 mL de dichlorométhane et d'une solution de 87 mg 20 de chloroformiate d'éthyle dans 5 mL de dichlorométhane, le mélange réactionnel est agité 1 h 30 à 0°C. On ajoute ensuite 187 mg (0,806 mM) de L-trypfophanate d'éthyle en solution dans 7 mL de dichlorométhane. On laisse revenir à t ambiante et agite le mélange pendant 15 h. La solution est ensuite traitée comme dans l'exemple 5. Le résidu obtenu 25 est purifié par chromatographie sur colonnede SiO^ (élution éther-méthanol saturé en N92:8). On obtient ainsi 305 mg du produit pur sous forme d'une poudre blanche après trituration dans l'isopropanol. Rendement 70%.
” ji.
-16- t | k Spectre de masse (DCI, isobutane): 1097 (M+14), 1083 (M) IR (CHCI3) : 3460, 2995, 2960, 2870, 1735, 1669, 1613, 1502, 1457, 1331, 1251 , 1167, 1010 cm"1 UV (méthanol, max, log ): 216 (4,87), 265 (4,27), 288 (3,01) 5 j RMN (360 MHz,CDCI3) : 8,44(1H,NH), 8,08(1H,NH). 7,52(2H), 7,33(1H), 7,10(6H), 6,66(1 H ,H9), 6,06(1 H ,H12), 5,86 (1H,H14), 5,50(1H,H17), 5,38(1H ,H15), 4,91(1H), 4,10(2H,CH2-O), 3,76{3H ,OMe), 3,72 (3H,OMe), 3,63 (3H,OMe), 3,13 (2H,5'b,6'b), 2,80(H2V), 2,68 (NCH3), 10 0,90 (CH3,3H), 0.78(CH3,3H), 0,74 (H14*).
Exemple 7
Vindésine 0-4 hémisuccinate-pyrrolidine amide 15
En partant de la vindésine et en appliquant un mode opératoire analogue à celui de l'exemple 1 on obtient le conjugué correspondant avec un rendement de 62%.
20 Spectre de masse (DCI, isobutane) : 921 (M+14), 907 (M) IR (CHCI3. 4%): 3400, 2975, 2882, 1732, 1693, 1632, 1503, 1462, 1380, 1247 cm“1 RMN (360 MHz, CDCI3) 8,05 (1H,NH), 7,50(1H), 7,15(3H), 6,10 (1H,H12), 5,86 (1H,H14), 5,53 (1H,H17), 5,46(1H,H15), 3,96 25 (1H,H17'a), 3,80(3H,OMe), 3,64(3H,OMe), 3,45 (4CH2-pyrrolidine), 2,88 • (3H,N-CH,), 0,95 (3H.CH-), 0,83(3H,CH,).
Λ
Claims (19)
1. Dérivés de la' Vinblastine de formule générale cœu- H /iVfOH CH300C / 10 / 15' CH30'Iî:î^N'Jn4^0-a-r1 ch3 OH 1 «1 20 dans laquelle A représente un "bras" tel que -COCH2-, -COCH^-Cl^CO-, COCH^-CHj-CH^CO-, représente un radical protéique éventuellement modifié , un atome d'halogène, un groupe amino NR^R^ ou un groupe ester d'acide aminé lié via la fonction amine et R^ 25 représente un groupe méthoxy, un groupe amino ou un radical ester d'acide alpha-aminé lié par une liaison de type amide et dont le groupe ester comporte de 1 à 6 atomes de carbone, R^ et R^ représentent des - groupes alkyle comportant de 1 à 3 atomes de carbone ou .ensemble, un 30 groupe alkanediyl- comportant de 3 à 5 atomes de carbone. *
2. Nouveaux produits anti-cancéreux caractérisés en ce qu'ils sont constitués par des composés dits "conjugués" dans lesquels une protéine ! ou un fragment de protéine est couplée par une liaison ester au groupe j 35 hydroxyle en C-4 de la Vinblastine, de la vindésine ou d'un dérivé !' jj vinblastinoyl-23 d'ester d'acide aminé. 4* Φ - 18 -9 \ \
3. Dérivé selon la revendication 1 dans lequel le radical protéique est j dérivé de la fêtuine ou de l'albumine. i *»
4. Dérivé selon les revendications 1 et 2 dans lequel le radical protéique 5 est dérivé d'une immunoglobuline.
5. Dérivé selon les revendications 1,2 et 4 dans lequel le radical protéique est dérivé d'un anti-corps monoclonal. 10
6. Dérivé selon les revendications 1 à 5 caractérisé en ce que l'ester d'acide aminé est le tryptophanate d'éthyle.
7. Dérivé selon les revendications 1 à 5 caractérisé en ce que l'ester d'acide aminé est l'isoleucinate d'éthyle. 1 5
8. Dérivé selon les revendications 2 à 4 caractérisé en ce que R2 représente un groupe méthoxy ou amino.
9. Dérivé selon la revendication 1 dans lequel A représente un groupe
20 CO-CH^ et R.j un atome de chlore mais R2 ne représente pas un groupe méthoxy .
10. Dérivé selon la revendication 1 dans lequel A représente un groupe CO-CH2-CH2~CO- et Rj est un groupe pyrrolidine ou N-tryptophanate 25 d'éthyle.
11. Dérivé selon les revendication 1 à 8 dans lesquels le groupe A représente un groupe CO-CH2 ou CO-CH2~CH2-CO- .
12. Procédé de préparation de dérivés de la Vinblastine selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on condense, dans une première étape, le chlorure d’acide chloroacétique ou un anhydride sur l'hydroxyle en position C-4 de la 0-4-désacétyl- ' Vinblastine ou l'un des.dérivés du type 0-4-désacétylvinblastim V .. -4 / * ! tr I - 19 - . carboxamide-3 et en ce qu'on condense ensuite les dérivés ainsi obtenus avec la protéine, l'acide aminé ou l'amine simple dans un solvant dans lequel ces composés sont solubles. te 5
13. Procédé suivant la revendication 12, caractérisé en ce que l'anhydride utilisé dans la première étape de con-' densation est l'anhydride succinique ou l'anhydride glutarique. 10
* 14. Procédé suivant l'une des revendications 12 ou 13, caractérisé en ce que le solvant utilisé dans la deuxième ! étape de condensation consiste en un mélange eau-dioxanne à un pH adéquat maintenu par un tampon. 15
15. Procédé suivant l'une quelconque des revendications 12 à 14, caractérisé en ce qu'on isole le conjugué obtenu par précipitation du milieu réactionnel et en ce qu'on effectue encore une centrifugation, un rinçage, une lyophi- 20 lisation et une purification par filtration sur gel, ainsi qu'éventuellement une succinylation classique.
16. Procédé suivant l'une quelconque des revendications 12 à 15, caractérisé en ce que les protéines utilisées sont 25 traitées afin d'être sélectivement modifiées.
17. Procédé suivant l'une quelconque des revendications 12 à 16, caractérisé en ce qu'on utilise, comme protéine, l'albumine de sérum bovin ou humain, la fétuine ou des 30 immunoglobulines éventuellement obtenues par la technique • des anticorps monoclonaux, de préférence d'anti-corps 3 monoclonaux humains.
18. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle : “ 35 comporte les dérivés selon l'une des revendications 1 à 11 en combinaison avec un diluant, solvant, excipiant ou support pharmaceutiquement acceptable. 0> Λ t I - 20 -
19. Utilisation des dérives selon l'une des revendications 1 à 11 pour le traitement des leucémies, de gliomes, de lymphosarcomes ou d'autres tumeurs malignes, y compris | _ les tumeurs dites "solides" ainsi que pour le traitement i * 5 de la maladie de Hodgkin et autres tumeurs. % \ i i j. t A « [ i i s i
Priority Applications (17)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| LU85161A LU85161A1 (fr) | 1983-12-29 | 1983-12-29 | Nouveaux conjugues de la vinblastine,leur procede de preparation et leur utilisation therapeutique |
| IL71642A IL71642A (en) | 1983-12-29 | 1984-04-25 | Galactosylated human albumin conjugates of vinblastine derivatives,their preparation and pharmaceutical compositions containing them |
| DE8484870057T DE3484691D1 (de) | 1983-04-29 | 1984-04-26 | Konjugierte vinblastin-verbindungen und ihre derivate, verfahren zu ihrer herstellung und diese enthaltende pharmazeutische zusammensetzungen. |
| AT84870057T ATE64396T1 (de) | 1983-04-29 | 1984-04-26 | Konjugierte vinblastin-verbindungen und ihre derivate, verfahren zu ihrer herstellung und diese enthaltende pharmazeutische zusammensetzungen. |
| GR74519A GR81790B (fr) | 1983-04-29 | 1984-04-26 | |
| EP84870057A EP0124502B1 (fr) | 1983-04-29 | 1984-04-26 | Nouveaux conjugués de la vinblastine et de ses dérivés, procédé pour leur préparation et compositions pharmaceutiques contenant ces conjugués |
| HU841610A HUT34212A (en) | 1983-04-29 | 1984-04-26 | Process for the production of new vindblastin conjugates |
| ES531965A ES531965A0 (es) | 1983-04-29 | 1984-04-27 | Procedimiento de preparar compuestos vinblastinicos y similares |
| OA58284A OA07711A (fr) | 1983-04-29 | 1984-04-27 | Nouveaux conjugués de la vinblastine, leur procédé de préparation et leur utilisation thérapeutique. |
| DK210784A DK210784A (da) | 1983-04-29 | 1984-04-27 | Konjugater af vinblastin eller vinblastinderivater og fremgangsmaade til fremstilling deraf |
| AU27434/84A AU575819B2 (en) | 1983-04-29 | 1984-04-27 | Vinblastine conjugates |
| PT78508A PT78508B (en) | 1983-04-29 | 1984-04-27 | Process for the preparation of new vinblastine coupled |
| CA000453143A CA1234800A (fr) | 1983-04-29 | 1984-04-30 | Procede de preparation de nouveaux conjugats de vinblastine ou de derives de vinblastine et produits de ces procedes |
| NZ207992A NZ207992A (en) | 1983-04-29 | 1984-04-30 | Vinblastine conjugates and pharmaceutical compositions |
| DD84263250A DD219771A5 (de) | 1983-12-29 | 1984-05-22 | Verfahren zur herstellung neuer konjugierter verbindungen von vinblastin und seinen derivaten |
| PH30778A PH21394A (en) | 1983-12-29 | 1984-06-06 | New conjugates of vinblastine, a process for their preparation and their use in therapy |
| US06/854,909 US4870162A (en) | 1983-04-29 | 1986-04-23 | Conjugates of vinblastine, a process for their preparation and their use in therapy |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| LU85161A LU85161A1 (fr) | 1983-12-29 | 1983-12-29 | Nouveaux conjugues de la vinblastine,leur procede de preparation et leur utilisation therapeutique |
| LU85161 | 1983-12-29 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| LU85161A1 true LU85161A1 (fr) | 1985-09-12 |
Family
ID=19730204
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| LU85161A LU85161A1 (fr) | 1983-04-29 | 1983-12-29 | Nouveaux conjugues de la vinblastine,leur procede de preparation et leur utilisation therapeutique |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| DD (1) | DD219771A5 (fr) |
| IL (1) | IL71642A (fr) |
| LU (1) | LU85161A1 (fr) |
| PH (1) | PH21394A (fr) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2604284A1 (fr) * | 2007-02-16 | 2013-06-19 | KTB Tumorforschungsgesellschaft mbH | Récepteur et promédicament ciblé antigène |
-
1983
- 1983-12-29 LU LU85161A patent/LU85161A1/fr unknown
-
1984
- 1984-04-25 IL IL71642A patent/IL71642A/xx unknown
- 1984-05-22 DD DD84263250A patent/DD219771A5/de not_active IP Right Cessation
- 1984-06-06 PH PH30778A patent/PH21394A/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DD219771A5 (de) | 1985-03-13 |
| PH21394A (en) | 1987-10-15 |
| IL71642A (en) | 1990-11-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0124502A2 (fr) | Nouveaux conjugués de la vinblastine et de ses dérivés, procédé pour leur préparation et compositions pharmaceutiques contenant ces conjugués | |
| EP0328446B1 (fr) | Conjugués de dérivé de vinca comportant une chaine détergente en position C-3 | |
| EP0041935B1 (fr) | Dérivés n-(vinblastinoyl-23) d'acides aminés et de peptides ainsi que leur préparation | |
| CN112138171B (zh) | 抗体偶联药物、其中间体、制备方法及应用 | |
| EP0321353A1 (fr) | Cryptates de terres rares, procédés d'obtention, intermédiaires de synthèse et application à titre de marqueurs fluorescents | |
| FR2677361A1 (fr) | Nouveaux peptides et pseudopeptides, derives de tachykinines, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent. | |
| FR2645866A1 (fr) | Nouvelles lipopolyamines, leur preparation et leur emploi | |
| EP0232693A2 (fr) | Conjugués de la vinblastine et de ses dérivés, procédé pour leur préparation et compositions pharmaceutiques les contenant | |
| CH643269A5 (fr) | Derives anti-tumoraux de carboxhydrazide en c-3 de la 4-desacetyl vincaleucoblastine. | |
| JP2023053386A (ja) | チューブリシンおよびそれらの中間体の調製のためのプロセス | |
| Kralovec et al. | Synthesis of methotrexate-antibody conjugates by regiospecific coupling and assessment of drug and antitumor activities | |
| CA1335686C (fr) | Vinblastine et composition pharmaceutique les contenant | |
| LU85161A1 (fr) | Nouveaux conjugues de la vinblastine,leur procede de preparation et leur utilisation therapeutique | |
| EP0222722B1 (fr) | Nouveaux conjugués de la vinblastine et de ses dérivés, procédé pour leur préparation et compositions pharmaceutiques contenant ces conjugués | |
| LU83822A1 (fr) | Derives n-(vinblastinoyl-23)d'acides amines,leur preparation et leur application therapeutique | |
| DK164107B (da) | Konjugater af vinblastin eller derivater deraf, fremgangsmaader til deres fremstilling og farmaceutiske praeparater indeholdende dem | |
| JP2021536475A (ja) | チューブリシンおよびそれらの中間体の調製のための代替プロセス | |
| LU86212A1 (fr) | Nouveaux conjugues de la vinblastine et de ses derives,procede pour leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant | |
| LU84784A1 (fr) | Nouveaux conjugues proteiques de la vinblastine leur procede de preparation et leur utilisation therapeutique | |
| JPS61291589A (ja) | インド−ル−ジヒドロインド−ルアルカロイドのヒドラジドイミド誘導体類 | |
| RU2800137C1 (ru) | Конъюгат антитело-лекарственное средство, промежуточное соединение для его получения, способ его получения и его применение | |
| WO1996031518A1 (fr) | Nouveaux derives bisindoliques inhibant les tumeurs et presentant un effet de liberation de calmoduline, et composition pharmaceutique les contenant | |
| FR2531949A1 (fr) | Esters d'epinine, compositions pharmaceutiques les contenant et leur procede de preparation | |
| Ross et al. | Synthesis and antineoplastic activity of alanyl-2-glycyl peptide derivatives of nocodazole | |
| LU83034A1 (fr) | Derives n-(vinblastinoyl-23) d'acides amines et de peptides, leur preparation et leur application therapeutique |