KR970074934A - 섬자리공 항바이러스성 단백질의 신규한 유전자 및 그를 발현하는 재조합 미생물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 한국산 섬자리공(Phytolacca insularisNakai)의 게놈 DNA로부터 분리한 항바이러스성 단백질을 암호화하고 있는 gPIP2와 gPIP50 유전자, 그들로부터 번역되는 아미노산 서열을 가지는 gPIP2와 gPIP50 단백질, 전기 각 항바이러스성 단백질의 유전자를 포함하는 발현벡터 및 그로형질전환된 제조합 미생물로부터 항바이러스성 단백질을 제조하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 gPIP2 유전자의 성숙단백질(mature protein) 코딩 부분은 번역 개시코돈을 포함한 882개의 염기로 구성되어 있고, 그의 개방 해독틀은 개시 아미노산 메티오닌을 포함하여 292개의 아미노산으로 이루어진 분자량이 약 32.8kDa인 단백질을 암호화하고 있다. 또한 본 발명의 gPIP50 유전자의 성숙단백질 코딩부분은 번역 개시코돈을 포함하여 951개의 염기로 구성되어 있고, 그의 개방해독틀은 개시 아미노산 메티오닌을 포함하여 315개의 아미노산으로 이루어진 분자량이 약 35.7kDa인 단백질을 암호화하고 있다. 전기 gPIP2 또는 gPIP50 유전자를 포함한 재조합 발현벡터로 형질전환된 미생물은 재조합 gPIP2 또는 gPIP50 유전자를 포함한 재조합 발현벡터로 형질전환된 미생물은 재조합 gPIP2 또는 gPIP50 유전자를 포함한 재조합 발현벡터로 형질전환된 미생물은 재조합 gPIP2 또는 gPIP50 단백질을 성공적으로 발현함을 알 수 있었다. 따라서, 본 발명의 항바이러스성 단백질을 암호화하고 있는 gPIP2 또는 gPIP50 유전자는 식물 형질전환을 통해서 바이러스 저항성을 띤 유용 식물체의 제조에 이용될 수 있다. 또한 gPIP2 또는 gPIP50 유전자를 포함한 발현벡터로 형질전환된 미생물에서 대량생산된 재조합 gPIP2 또는 gPIP2 단백질은 식물의 바이러스 방제제의 유효성분으로 이용되거나, AIDS 및 암 치료에 사용되는 면역결합체 등의 제조에 이용될 수 있다.

Description

섬자리공 항바이러스성 단백질의 신규한 유전자 및 그를 발현하는 재조합 미생물
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 본 발명의 gPIP2 유전자의 염기서열 및 그로부터 번역되는 아미노산 서열을 나타낸다, 제2도는 섬자리공(Phytolacca insularisNakai)의 게놈 DNA로부터 gPIP2 유전자를 분리하고, 그를 포함하는 발현벡터의 구축과정을 나타내는 개략도이다, 제3도는 gPIP2 또는 gPIP50 유전자를 포함한 발현벡터를 제한효소 HindIII로 절단하고 아가로스 젤 전기영동한 결과를 나타내는 사진이다, 제5도는 본 발명의 gPIP50 유전자의 염기서열 및 그로부터 번역되는 아미노산 서열을 나타낸다, 제6도는 플라스미드 pPIP50의 3.4kb BamHI 절편으로부터 gPIP50 유전잘 PCR 증폭하고, 그를 포함하는 발현벡터의 구축과정을 나타내는 개략도이다.

Claims (12)

  1. 한국산 섬자리공 (Phytolacca insularisNakai)의 게놈 DNA(genomic DNA)로부터 분리한 항바이러스성 단백질을 암호화하고 있는 하기의 gPIP2 유전자 및 그의 기능적 등가물 :
  2. 제1항의 유전자로부터 번역되는 하기와 같은 아미노산 서열 또는 이와 기능적으로 동등한 아미노산 서열을 가지는 항바이러스성 gPIP2 단백질 :
  3. 항-FLAG 단일클론항체의 결합과 엔테로키나제(enterokinase) 절단에 관여하는 옥타펩타이드의 FLAG서열 및 코딩서열의 삽입에 관여하는 다클론부위(multiple colning site) 마커를 포함하는 벡터에, 제1항의 gPIP2 유전자를 삽입하여 제조한 발현벡터.
  4. 제3항의 발현벡터로 형질전환된 대장균(Epicurian coli) XL1-Blue MRF' gPIP2 (KCCM-10080).
  5. (ⅰ) 제-4항의 형질전환된 미생물을 배양하고 IPTG(isopropyl-β-D-thiogalactoside)로 항바이러스성 재조합 gPIP2 단백질의 발현을 유도하는 공정; (ⅱ) 전기에서 발현 유도된 미생물을 수득하고 파쇄하여 봉입체(inclusion body)를 수득하는 공정; 및, (ⅲ) 전기에서 수득한 봉입체로부터 재조합 gPIP2 단백질을 분리하는 공정을 포함하는 항바이러스성 재조합 gPIP2 단백질의 제조 방법.
  6. 제4항의 형질전환된 미생물을 배양하여 발현유도 과정을 수행한 다음, 미생물을 파쇄하여 봉입체를 수득하고, 그로부터 재조합 단백질을 분리하는 공정을 포함하는 방법에 의해 제조된 항바이러스성 재조합 gPIP2 단백질.
  7. 한국산 섬자리공(Phytolacca insularisNakai)의 게놈 DNA(genomic DNA)로부터 분리한 항바이러스성 단백질을 암호화하고 있는 하기의 gPIP50 유전자 및 그의 기능적 등가물 :
  8. 제7항의 유전자로부터 번역되는 하기와 같은 아미노산 서열 또는 이와 기능적으로 동등한 아미노산 서열을 가지는 항바이러스성 gPIP50 단백질 :
  9. 항-FLAG 단일클론항체의 결합과 엔테로키나제(enterokinase) 절단에 관여하는 옥타펩타이드의 FLAG 서열 및 코딩서열의 삽입에 관여하는 다클론부위(multiple cloning site) 마커를 포함하는 벡터에, 제7항의 gPIP50 유전자를 삽입하여 제조한 발현벡터.
  10. 제9항의 발현벡터로 형질전환된 대장균(Epicurian coil) XL1-Blue MRF' gPIP50 (KCCM-10081).
  11. (ⅰ) 제10항의 형질전환된 미생물을 배양하고 IPTG(isopropyl-β-D-thiogalactoside)로 항바이러스성 재조합 gPIP50 단백질의 발현을 유도하는 공정; (ⅱ) 전기에서 발현 유도된 미생물을 수득하고 파쇄하여 봉입체(inclusion body)를 수득하는 공정; 및, (ⅲ) 전기에서 수득한 봉입체로부터 재조합 gPIP50 단백질을 분리하는 공정을 포함하는 항바이러스성 재조합 gPIP50 단백질의 제조 방법.
  12. 제10항의 형질전환된 미생물을 배양하여 발현유도 과정을 수행한 다음, 미생물을 파쇄하여 봉입체를 수득하고, 그로부터 재조합 단백질을 분리하는 공정을 포함하는 방법에 의해 제조된 항바이러스성 재조합 gPIP50 단백질.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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