JPS6345227A - Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原蛋白質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、Ｂ型肝炎ウィルス表面抗原に対応する免疫原
性ペプチド配列をコードしうるヌクレオチド配列を含む
核酸、及び得られたポリペプチドとペプチドに関係する
。

本発明はまたこのような核酸を得ることを可能にする方
法にも関する。

Ｂ型肝炎は特に熱帯アフリカ、東南アジア及び極東にお
いて多発するウィルス性疾患である。

病因はウィルス（ＨＢ■）ｔなわちゾーン粒子であって
、エンベロープ（オーストラリア抗原すなわちＨＢｓ抗
原）、キャプシド（ＨＢｃ抗原）、内因性のＤＮＡポリ
メラーゼ、及び部分的に一本鎖の環状ＤＮＡ分子からな
り、このＤＮＡ分子の最長のストランドは約３２００個
のヌクレオチドを有する（Ｓｕｍｍｅｒｓ　Ｊ、　０°
Ｃｏｎｎｅｌｌ　Ａ、　ａｎｄ　Ｈｉｌｌｍａｎ　Ｉ。

（１９７５）　　Ｐｒｏｃ、　Ｍａｔ、　Ａｃａｄ、　
Ｓｃｉ、ＵＳＡ　７２．　４５６７−４６０１）　　。

内因性のＤＮＡポリメラーゼは、試験管内（ｉｎｖｉｔ
ｒｏ）で類い方のストランドを！！復するために使用す
ることができる（Ｔ八、　Ｌａｎｄｅｒｓ、　Ｎ、　Ｂ
、　Ｇｒｅｅｎｂｅｒｔａｎｄ　　Ｊ、Ｓ、Ｒｏｂｉｎ
ｓｏｎ、　Ｊ、Ｖｉｒｏｌ、、２３．１９７７、　ｐ、
３６８−３７６）。

エンベロープ蛋白質の電気泳動分析によって２乃至７個
のポリペプチドの存在が示されており、そのうち主要な
ものはポリペプチドＩ及びポリペプチド■と呼ばれてい
る（ｐｅｔｅｒｓｏｎ　Ｄ、Ｌ、、ＲＯｂＯｒｔＳｌ、
Ｈ，ａｎｄ　　Ｖｙａｓ　　Ｇ、Ｎ、　　（１９７？）
　　　Ｐｒｏｃ、　　Ｈａｔ、　　八ｃａｄＳｃｉ、、
　ＵＳＡ、　７４．１５３０−１５３４．及びＰｃｔｅ
ｒｓｏｎ　Ｄ、Ｌ、。

Ｃｈｉｅｎ　Ｄ、Ｙ、、　Ｖｙａｓ　Ｇ、Ｎ、、　Ｎ１
ｔｅｃｋｉ　Ｄ、　ａｎｄ　Ｂｏｎｄ）１．　（１９７
８）　Ｉｎ　Ｖｉｒａｌ　　Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ、　ｅ
ｄ、　Ｇ、　ＶｙａＳ。

Ｓ、Ｃｏｈｅｎ　ａｎｄ　Ｒ，Ｓｃｈｍｉｄ、　Ｔｈｅ
　Ｆｒａｎｋｌｉｎ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅＰｒｅｓｓ、
　Ｐｈ１ｌａｄｅｌｐｈｉａ、　５６９−５７３）。

ポリペプチド■は分子聞が２２０００乃至２６０００ダ
ルトンであり、ポリペプチド■はグリコジル化されてお
り分子品は２８０００乃至３００００ダルトンである。

こ机ら二種のポリペプチドのアミノ酸組成は非常に類似
しており、（Ｎ−末端から）最初の１５個のアミノ酸及
び最後の３個のアミノ酸はそれぞれ同一である。従って
ポリペプチド■はグリコジル化されている点でのみポリ
ペプチド■と異なるという仮説が立てられた。

このウィルスの研究は、その増殖を可能にするｉ胞培養
系がないという点において非常に困難である。この困難
は部分的には、特に血清を匹に関してはすでにゆるめら
れている。このウィルスのＤＮＡ全体くゲノム）は、Ｆ
ｒ１ｔｓｃｈ　Ａ、、ＰｏｕｒｃｅｌＣ，、Ｃｈａｒｎ
ａｙ　Ｐ、　ａｎｄ　Ｔｉｏｌｌａｉｓ　Ｐ、　（１９
７８）　　Ｃ，Ｒ。

Ａｃａｄ、　ｄｅ　Ｐａｒｉｓ、　　２８７．１４５３
−１４５６に記載の技術によって、λ（ｉｔ、　１４Ｅ
ｓλＢベクターの唯一のＥ臼Ｒ１部位に予め挿入した後
ロー匹旦中で同定され、クローン化されている。

今日までのところポリペプチドＩ及び■自体の配列決定
、並びにこれらのペプチドをコードしている配列のウィ
ルスＤＮＡ中の位置決定は実現されていない。

本発明の目的は、免疫特性を有するペプチド配列をコー
ドするように適合された配列を含有し、ウィルスＤＮＡ
自体よりもはるかに小さいＤＮＡ配列を得ることであり
、前記ペプチド配列が生体宿主の体内に入ると、特に毒
性（ビルレント）状態にあるＢ型肝炎ウィルスに対して
以後この宿主を保護しうる抗体がこの宿主にによって産
生される。

本発明は、ゾーン粒子のゲノムの完全なヌクレオチド分
析（本発明名等が連成した）に基づくものであるがそれ
だけではなく、前記ポリペプチドをコードしている遺伝
子（以後”　Ｓ　ｍ伝子”という）を同定するために本
発明者等が持っていたアイデアにも基づくものであり、
このアイデアによって、上のようにあらかじめ決定され
たゾーン粒子ゲノムの完全なヌクレオチド構造中で、前
記のポリペプチドの公知の基部（ｐｒｏｘｉｍａｌ　）
及び末端のペプチド配列をコードし得るヌクレオチド配
列の構造を探求する。

ＰｅｔｅｒＳＯｎ等により、特に上で引用した文献中で
、１５個の最初のアミノ酸からなる基部゛配列（Ｎ−末
端の最初のアミノ酸）が原則的に■ｅｔ　ｇｌｕ　ａｓ
ｎｉｌｅ　ｔｈｒ　ｓｅｒ　ｏＬｙ　ｐｈｅ　ｌｅｕ　
ｌｅｕ　ｇｌｙ　ｐｒｏ　Ｉｅｕ　ｖａｔｓｅｔであり
、同じポリペプチドの末端配列（Ｃ末端の最後のアミノ
酸）がｖａｌ　ｔｙｒ　ｉｌｅであると報告されている
ことを想起されたい。

第１図はゾーン粒子のゲノムの概略図である。

ゾーン粒子は二本のストランドｂ　及びｂ２を有し、こ
れらの短い方（ｂ２）は通常図の点線で表わされた部分
を欠いている。

このＤＮＡＧ、ｔＥＣｏＲＩ部位を１個しかもたないこ
とが知られている。

矢印ｆ１は長い方のストランドｂ１を構成するヌクレオ
チドの番号付の方向であり、矢印ｆ２は遺伝子Ｓの発現
に関するウィルスのＤ　ｒＱ　Ａの転写の方向、特にＢ
型肝炎ウィルスに侵された細胞のメカニズムによつル転
写方向である。

ＥＣｏＲｌ部位は番号Ｏを付は得、または血清型匹に屈
するＢ型肝炎ウィルスのＥＣｏＲｌ部位に対してもつと
正確に決定されているように３１８２と番号付は得る。

内部にある実線の円旦はＤＮＡの全長に対する目盛を％
で示すスケールであり、ＤＮＡの開部の位置を明確に表
わすことができる。

第１図の下部にある数３°、５゛及び５゛、３°は核酸
鎖の末端の慣用的表現で、鎖末端を示している。

本発明によって、“遺伝子Ｓ”は本質的に第１図の説明
図の位置７３．６と９５．１の門にある長い方のストラ
ンドｂ、の新月を構成していることが示された。図中“
開始”及び“終結”は“遺伝子Ｓ″の転写の開始及び終
結点を表わす。

第３Ａ、３Ｂ、３０図は前記ゲノムの末端部を表わし、
特に位置６０．４から１００（ＤＮＡの全長に対する％
）までを示す。第３図中の各文字は従来通りＤＮＡの４
８の基本ヌクレオチドすなわちＡ：アデニン Ｇニゲアニン Ｔ：チミン Ｃ：シトシン の一つに対応する。

第３Ａ、３Ｂ、３Ｃ図中の１対の配列の下側の配列はヌ
クレオチド鎖ｂ２に対応する核酸を示す。

第３Ａ、３８１３０図の表わす詳細な地図を製作するた
めに用いられる分析技術を想起されるべく以下に簡単に
記述しよう。

本発明の範囲内で提案されている如き“遺伝子Ｓ”のヌ
クレオチド（その基部側末端ｐ″Ｓ”及び末端側末端ｔ
″Ｓ”が第３Ａ、３Ｂ、３Ｃ図中に示されている）の特
定決定は次の観察の結果である。すなわち −ＥＣＯＲＩ末端から第３０３０ｇのヌクレオチドから
（ｆ２の解読方向で）最初の１４個のトリブレットはそ
れぞれ前記ポリペプチドの最初の１５個のアミノ酸から
なる基部配列の最初の１４個のアミノ酸をコードし１ｑ
る。

一転写される鎖ｂ１に対して相補的な鎖ｂ２上で読取ら
れる最後の４ｗＡのトリブレットＧＴ＾ＴＡＣＡＴＴ　
Ｔへへがそれぞれ前記ポリペプチドの３個の末端アミノ
酸及び終結コドンに対応する。

−このヌクレオチド配列（６７８個のヌクレオチド）は
、少なくとも、細胞のメカニズムによってＤＮＡ上で″
読み取られる”最初のトリブレットがＡＵＧ　（ＡＴＧ
と相補的なストランドに対応する）となるような解読枠
（ｒｅａｄｉｎｇ　ｆｒａｉ＋ｅ）を採用した場合には
、終結コドンを全（含まない。

一開始コトンＡＴＧで始まる遺伝情報を完全に翻訳する
と、分子１１２５．４２２ダルトンを有するアミノｌ　
２２６個の理論上のポリペプチドが得られることになる
。

“遺伝子Ｓ”のヌクレオチド構造並びに“遺伝子Ｓ”の
翻訳の結果１７られるポリペプチド鎖を第５Ａ、５Ｂ、
５Ｃ図に示す。

上記の値はすでに報告されているポリアクリルアミドゲ
ル上でのポリペプチドＩの電気泳動で得られた分析デー
タとよく一致する（木用ａｍ末尾に挙げた参考文献一覧
表中の文献１［９−１２）。

ポリペプチドＩの基部ペプチド配列の１５番目のアミノ
酸のレベルで観察される相違すなわち上記文献の著者諸
氏によるセリンではなく、前述の第３Ａ、３８．３Ｃ図
及び第５Ａ、５８．５Ｃ図ではロイシンとなっているこ
とは、これらの著者が用いた変異体が本発明で用いた変
異体とは異なる遺伝子変異体であったためと思われる。

この相違はまた、セリンに翻訳され得るトリブレットの
一つ“ＴＣＡ”の代りに第３Ａ、３８．３Ｃ図及び第５
Ａ、５８．５Ｃ図に示した特定の°゛遺伝子Ｓ　ＩＩ中
ではトリブレット“ＴＴＡ”となっているように、ヌク
レオチド１個の置換に起因し得ることに注目されたい。

従って本発明は特にゾーン粒子のＤＮＡから切り出され
得る核酸の断片に関係し、これらの断片は特にＢ型肝炎
ウィルスの免疫学的特性を生じる原因であるウィルスの
エンベロープの蛋白質の一部分をコードし得る“遺伝子
Ｓ”の一部分を含むことを特徴とする。

従って本発明は、多くとも１０００−１１００個程度０
ヌクレオチドからなる核酸に関係し、特にこの核酸が免
疫原性ペプチド配列をコードするように適合されている
ことと、このベプブド配列自体がＢ型肝炎ウィルスに対
して活性な抗体の生体内（ｉｎｖｉｖｏ）生成を誘発す
るように適合されていることと、このペプチド配列が本
質的に第５Ａ、５Ｂ。

５Ｃ図に示した構造または同等な免疫原特性を有する任
意のペプチド配列を含むこととを特徴とする。

本発明はまた、微生物中または真核生物細胞中で前記ヌ
クレオチド配列を発現させるためのベクターに係り、こ
の際遺伝子融合は“遺伝子Ｓ”の解読相（ｒｅａｄｉｎ
ｇ　ｐｈａｓｅ、ｉみ取り枠）を保って行われる。

本発明によって用いられるヌクレオチド配列は互いにそ
の発現の際にＢ型肝炎ウィルスのサブタイプ（群ａのサ
ブタイプｄ、ｗ、ｙ、ｒ）によって変化する決定基の形
成に導く変賃を有する。

第５Ａ、５８．５Ｃ図に表わされたペプチド配列の一つ
では、前記配列の第一アミノ酸すなわちメチオニンがＮ
−末端であり、反対の端のアミノ酸すなわちイソロイシ
ンがＣ末端である。

本発明はまた特に第・７図に示した如きペプチド配列を
コードしている第６Ａ、６Ｂ図に表わされたヌクレオチ
ド配列または同等な免疫原特性をもつ類似の任意のペプ
チド配列に関する。

上述の“同等なペプチド配列”という用語は、言うまで
もなく、第５Ａ、５８．５Ｃ図及び第７図に表わされた
ペプチド配列中の対応する部分と厳密に同一ではないい
くつかの部分の存在する全ペプチド配列を意味するので
あって、これらの変化は蛋白質の一般的免疫原形質に影
響しない局部的突然変異に起因し、または問題の種類の
蛋白質が見い出され得る種々の血清型（特に血清型ａｄ
ｗ。

ａｄｒ及びａｙｒ）に応じた構造上の修！ｉ　（１ｏｄ
ｉｆｉｃａｔｉｏｎ）を伴う。

本発明は特に第８図に表わされる如きペプチド配列また
は同等な免疫原特性をもつ類似の任意のペプチド配列を
含有するヌクレオチド配列に関する。

本発明は特にまた次のペプチド配列に関する。

すなわち、 アラニン−グルタミン−グリシン−トレオニン−セリン
、 トレオニン−アラニン−グルタミン−グリシン−トレオ
ニン−セリン、 トレオニン−トレオニン−アラニン−グルタミン−グリ
シン−トレオニン−セリン。

上に示した第一のペプチド中、アラニン末端がＮ−末端
であり、セリン末端がＣ−末端である。

上記の第二と第三のペプチドではトレオニンがＮ−末端
でセリンがＣ−末端である。

例として特にＣ−末端のせリンから始まるペンタペプチ
ドを製造することが可能であり、その場合、Ｔｅｔｒａ
ｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ、　１９７５．Ｎｏ、　
１４．　１２１９−１２２２頁にＦｉｌ！載のカスドロ
Ｃｃａｓｔｒｏ）法によってＣ−末端セリンに、トレニ
オンを連結する。次に、Ｂｅｉｅｒｍａｎ、　Ｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｐｅｐｔ
ｉｄｅｓ。

Ｅｄ、Ｊ、Ｈｅ１ｅｎｈｏｆｅｒ、　Ａｎｎ、　Ａｒｂ
ｏｕｒ　５ｃｉｅｎｃｅ　Ｐｕｂｌ、。

Ａｎｎ、　Ａｒｂ、旧ｃｈ、　３４１（１９７２）に記
載の所謂反復混合無水物法（レマ（ｒｅｍａ）法）によ
って、グリシン、グルタミン、アラニンのアミノ酸を付
加する。

本発明はまた、大きめの担体分子、特にポリペプチドま
たは蛋白質の形態の担体分子へ前記ペンタペプチドを固
定した結果骨られる生成物、特に薬剤上許容し得るベヒ
クルと共に固定生成物中のペンタペプチドを含有する組
成物、とりわけＢ型肝炎に対するワクチンに係る。これ
らの薬剤ベヒクルは従来、特に経口、非経口、経直腸及
び粘膜特に鼻粘腰への噴霧から選ばれた投与法に適して
いる。

ヘキサペプチド及び７個のアミノ酸を有するポリペプチ
ドは古典的なペプチド合成法によって製造することがで
きる。

これらのペプチドは、本発明によると上記で考察したサ
イズの大きいポリペプチドの抗原部位であると思われ、
ウィルスエンベロープのワクチン化能の主因である（Ｊ
ｏｕｒｎａｌ　ｏｒ　Ｂｉｏｌ、５ｔａｎｄ、　１９７
６゜４．２９５−３０４．　ＲＡＯ及びＶＹＡＳ″Ｂｉ
ｏｃｈｅｍｉｃａｌＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ
　ｏｆ　　Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　　Ｂ　　Ｓｕｒｆａｃ
ｅＡｎｔｉｇｅｎ　ｉｎ　Ｒｅ１ａｔｉｏｎ　ｔｏ　Ｓ
ｅｒｏｌｏｇｉｃ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ”。

本発明はまたこのようなペンタペプチド、ヘキサペプチ
ド、及び７個のアミノ酸を有するポリペプチドの産生を
コードし得るＤＮＡ断片にも関する。すなわち、 一ペンタペプチドについては、特に式 ５式％ 一へキサペプチドについては、特に式 ５’　　ＡＣＴ　　ＧＣＴ　　ＣＡＡ　　ＧＧＡ　　Ａ
ＣＣＴＣＴ　　３’３’　　ＴＧＡ　　ＣＧＡ　　ＧＴ
Ｔ　　ＣＣＴ　　丁ＧＧ　　ＡＧＡ　　５゜のポリヌク
レオチド、 一７個のアミノ酸を有するポリペプチドについては、式 ％式％ または前記三つの場合の各々において、先の３個のそれ
ぞれのポリヌクレオチドに関する相補的ポリヌクレオチ
ド、またはその中の各トリブレットが同じアミノ酸の産
生をコードし１！！る類似の任意のトリブレットによっ
て置換されているすべてのポリヌクレオチドである。

本発明による核酸はまた、第６Ａ、６８図に表わされる
如きＤＮＡ配列の相互に相補的な二本のストランドの少
なくとも一木を含むことを特徴とし得る（第６Ａ、６Ｂ
図は、この図には示してない位置ＥＣ０ＲＩに対して番
号付けした、一連の１０個ずつのヌクレオチドの断片の
各々の第一のヌクレオチドの位置に対応する番号も表わ
し、これらの番号は問題の種類のヌクレオチド配列の特
性決定の観点からは考慮する必要がないことは言うまで
もない）。このＤＮＡ断片の両端はＨｉｎｃ１１部位に
なっている。

このヌクレオチド配列は、翻訳すると第７図に示された
ペプチド配列が得られる遺伝情報に対応する。

本発明は勿論−重ストランド（特にこのストランドｔよ
、第６へ、６Ｂ図の下側のＭｉ！　’７１５の構造を有
する）または二重ストランドを有する同等なヌクレオチ
ド配列、または対応する二重ストランドＤＮＡ、または
対応するメツセンジャーＲＮＡ５Ｍに第６Ａ、６Ｂ図（
矢印ｆ２の向き）の下側の配列によって構成されるヌク
レオブトの相補鎖によって表わされるヌクレオチド配列
に関する。

同様に、前出のヌクレオチド鎖とはいくつかのトリブレ
ット又はトリブレットの小配列が異なるが、Ｂ型肝炎ウ
ィルスの特徴的免疫原活性を保有するポリペプチドをコ
ードするように適合されているヌクレオチド鎖も本発明
の範囲に含まれる。

一般に、これらは、対応する単一ストランドの核酸が生
成するように二重ストランドのＤＮＡが変性した後で、
その長さの少なくとも約９０％に亘って、第６Ａ、６８
図のＤＮＡストランドの１個とハイブリッドし得るヌク
レオチド鎖を意味する。

更に本発明の好ましい核酸として、肝炎ウィルスのＤＮ
Ａから切り出すことが可能であり、且つ二重ストランド
になっているときに１端がＨｉｎｃ■、比」工、Ｎ■工
又はＦＣＯＲＩ末端で他端が肪■、ｌ−１ｉｎｃＩＩ又
はＨｈａＩ末喘であることを特徴とする”＜Ｉ’ｌｌを
挙げることができる。

ＥＣｏＲｌ部位に対するこれらの種々の末端の位置を第
３Ａ、３８．３Ｃ図に概略的に示した。

本発明の核酸は、特に生体宿主の体内でＢ型肝炎のウィ
ルスに対して活性のある抗体の産生を誘導し得る蛋白質
又はペプチドを生産するために、細菌及び真核＄ｌＩｌ
胞中で発現し得るベクターに組込まわるべく構成されて
いる。本発明のヌクレオチド配列の翻訳により（りられ
る蛋白質又はペプチドは、ワクチン又は診断用薬剤とし
て使用され青る。

本発明の核酸は更に、血液サンプル又はテスト血清サン
プルの中にゾーン粒子、ＨＢＳ抗原又は該抗原の断片等
が存在するか否かを（従来のＤＮＡ−ＤＮＡハイブリダ
イゼーション技術を用いて）追跡するためのプローブと
して使用され得る。

本発明の別の特徴は、本発明のＤＮＡ断片の分析、同定
及び産生技術に関する下記の命中な２桟により明らかに
なるであろう。当然図面を参照されるであろうが、図中
の記号に関しては前記に於いてすでに説明した。括弧内
の数字は不明ＩＩＢＪの末尾の）考文献の番号に対応す
る。

本発明はまた、前記のヌクレオチド配列を特にハイブリ
ッド蛋白質の形状で発現し得るベクターに係る。該ハイ
ブリッド蛋白質に於いて１１８ｓ八りの免疫学的特性を
有する蛋白質断片は、この蛋白質を導入し宿主生体中で
ウィルス感染に対する保４抗体の産生を誘導し得る免疫
原性すなわち免疫反応性をこのハイブリッド全体に付与
する担体分子に付加されている。

特に本発明は、ラクトースオペロンの少なくとも１部特
に該オペロンのプロモーター及びｚ遺伝子を含むベクタ
ーすなわちファージ又はプラスミドに係る。このベクタ
ーの特徴は、本発明のＤＮＡ断片の任意の１個特に“遺
伝子Ｓ”の最大部分を含むＤＮＡ断片の任意の１個が、
ＥＣｏＲＩ部位の如きＺ遺伝子の適当な部位に位相を合
わせて（ｉｎ　ｐｈａｓｅ）挿入されるように修飾され
ていることである。本発明は更に、これらの修飾された
ベクターのうちで、β−ガラクトシダーゼの最大部分を
コードしているＤＮＡ断片の少なくとも１部が、免疫原
性でない任意の別の坦体分子、又は、たとえ免疫学的特
性が存在しているとしてもＨＢＳＡｇの免疫学的特性を
持つペプチド部分の免疫学的特性例えば本質的にＨｈａ
　１部位から解読方向に伸びるペプチド部分の免疫学的
特性を妨害しない担体分子をコードするように適合され
たＤＮＡ断片によって置換されているベクターに係る。

更に、本発明はより詳細には、ＨＢＳＡＱの特定の免疫
学的特性を有するポリペプチド配列を含んでおり、該配
列が、担体蛋白質の機能を果すβ−ガラクトシダーゼの
大部分から成るポリペプチド配列と３！！！続して結合
していることを特徴とするハイブリッド蛋白質に係る。

本発明の範囲は甲に、遺伝子工学の方法で構築され且つ
ＨＢｓＡｏ抗原の特徴たる免疫原性及び免疫反応性を備
えた蛋白質のモデルの構成を特徴とする特別なハイブリ
ッド分子に及ぶのみでなく、β−ガラクトシダーゼの全
部又は１部が非免疫性の任意の別の担体分子又は例え免
疫学的特性１が存在していてもこれらの免疫特性がＨＢ
ＳＡＱの免疫学的特性を有するペプチド部分の免疫学的
特性を妨害しない任意の別の坦体分子によって置換され
ている任意の別のハイブリッド蛋白質にも及ぶ。

本発明の別の特徴は、添付図面に基づいてなされる好ま
しい実施例の記載により一層明らかになるであろう。

一第２ａ図乃至第２ｈ図は、ＨＢＶ　　ＤＮＡ断片を組
込んだプラスミド型のベクターの製造工程を概略的に示
す。

一第４ａ図乃至第４Ｃ図は、使用したベクターの最初の
構造（第４ａ図）と、１すられたｒｉ飾ベクターの最終
構造（第４ｂ図）と、この修飾ベクターが旦−一以Ｉユ
巾に発現した結果１９られたハイブリッド蛋白質の構造
（第４Ｃ図）とを示す。

Ａ、ヌクレオチド配列 使用制限酵素：　ｆｌｕ！ＨＩ　、比ｈａＩ、比舗ｃ［
。

土挫■９尺崩工、■堕■、土肋ｒ　　■、　　堕■。

泣堕工はＢＩＯＬＡＢＳにより製造された酵素である。

ＢＯＥＨＲＩＮＧＥＩ（のＤＮＡ−ボリメラーゼエを使
用した。

細菌性アルカリホスファターゼとポリヌクレオチド−キ
ナーゼはＰ、　Ｌ、　ＢＩＯＣＩＩＥＨＩＣＡＬＳによ
り供給された。下記の化学薬品を使用した。

・硫酸ジメチル（ＡＬＤＲＩＣＩ＋　）　。

・ヒドラジン（ＥＡＳＴＭＡＮにＯＤＡに）。

・アクリルアミド及びビス−アクリルアミド（２回結晶
化−３［ＲＶ＾）。

・ジデオキシヌクレオチドトリホスフェート及びデオキ
シヌクレオチドトリホスフェート（Ｐ。

Ｌ、ＢＩＯＣ）ｌＥＨＩｃ八［Ｓ）　。

・減圧下で再蒸留したピペリジン（ＨＥＲＣに）。

−ＤＮＡ　　ＨＦ３Ｖの調製 λＱｔ、ＷＥＳ、λＢベクター０の唯１つの制限部位Ｅ
Ｃ０ＲＩを使用してＥ、Ｃ０Ｉｉ中で全ＨＢＶゲノム（
ａｙｗ亜型）をクローン化した。クローン化したＤＮＡ
を以後”Ｅｃｏ　　ＨＢＶ　　ＤＮＡ”と指称する。

組換えバクテリオファージをペトリ皿の寒天上で増殖さ
せ、それ自体公知の方法で所望のＤＮＡを抽出した。Ｅ
ｃｏＲＩｌｌＪ限酵素によるＤＮＡの消化後、参考文献
（１６，１７）に記載の方法でスクロース濃度勾配超遠
心によりＥｃｏ　　ＨＢＶ　　ＤＮＡ配列を精製した。

製造業者が勤める条件を用い種々の制限酵素によってＥ
ＣＯＨＢｖ　ＤＮＡ１０乃至２０ピコモルを完全に加水
分解した。このＤＮＡ断片をアルカリ性ホスファーゼに
よって脱リン酸化し、次に該ボスフ７ターゼをアルカリ
処理によって不活性化した。次に論文（１８）に記載の
方法によりＤＮＡをエタノールで沈澱さゼた。スペルミ
ジンをベースにしたＷＷＪ液に再溶解後、（論文（１９
）に記載の方法により）ＡＴＰ（λ３２Ｐ　）　（ＮＥ
Ｗ　ＥＮＧＬＡ１４Ｄ　ＮＩＩＣＬＥＡＲにより製造さ
れた３０００　Ｃｉ／ｉＨ）とポリヌクレオチド−キナ
ーゼによって５′末端でＤＮＡを標識した。

このＤＮＡ制限断片をポリアクリルアミドゲル電気泳動
により分離し次に溶離した。別の酵素による制限後のそ
れ自体公知の方法によるポリアクリルアミドゲル電気泳
動、又は問題の種類のＤＮＡ断片の変性によって、Ｉｆ
Ａ識された末端を分離（ｓｅｇｒｅｑａｔｉｏｎ）した
。

−ＤＮＡのヌクレオチ゛　　の　　の′二重ストランド
（二本鎖）又は単一ストランド（−重鎖）のＤＮＡ断片
の一次構造は、主としてＭＡＸＡＨ及びＧＩＬＢＥＲＴ
によって記載された方法（１９）により決定された。更
に、５′末端の１詞で標識された二重ストランドの断片
に関しては５ＡＮＧ［：Ｒ等（至）により記載され、Ｈ
ＡＡＴ及びＳＭＩＴＨ（２１）により応用された末端Ｉ
ＩｖＡ書法（ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｔｅｒｍｉ
ｎａｌｃｈａｉｎ　１ｎｈｉｂｉｔｅｒｓ）を使用した
。

化学反応及び酵素反応の生成物の分析は、厚み１厘で８
．１６又は２５％のアクリルアミドグル内で順次電気泳
動して行なわれた。

析の方法　び結束 ＨＢＶゲノムがポリペプチドＩ及び■をコードし得るか
否かを決定するために、［ａＯ１ｌ断片全部（ＨＢＶゲ
ノムのＨａｃＩ［［制限部位は第１図に小さい矢印で示
した）を５′末端で標識した。それらの−次構造のかな
りの部分はＨＡＸＡＨ及びＣＩＩＢＥＲＴの方法により
決定した。ポリペプチドエ及び■の基部及び末端のアミ
ノ酸配列をコードし得るヌクレオチド配列は、参考文献
（１７）に記載の方法によって既にＨＢＶゲノムの制限
地図上で９置が決定されているＨａｅＩ［［断片Ｅ及び
ＨａｅｌＩ［断片Ｆに局在していた。すでに記載の理由
により、Ｌ！Ｒ１制限部位に対して７３．６から９５．
１までの位置（第１図）を占める“遺伝子Ｓ”の末端に
存在すると考えられるのはこれらのヌクレオチド配列で
ある。

これらの両位置間のヌクレオチド配列を、公知の化学的
方法、特に硫酸ジメチル／ヒドラジンによる化学的分解
方法及びチエインターミネーション法により分析した。

ＨＡＸＡＨ及びＧＩＬＢＥＲＴにより提案された種々の
化学反応のうちで、蟻酸による部分的変性（ｄｃｐｕｒ
ｉｎａｊｉｏｎ）とピペリジンによる開裂とを使用した
。これらの方法は、グアニン及びアデニンを末端にもつ
断片に対しオートラジオグラムで等しい強度のバンドを
与える。また、シドシン及びチミジンヌクレオチドに対
して等しい強度のバンドを得るために、ヒドラジンによ
る反応とそれに続くピペリジンによる開裂を使用した。

これらの２種の反応の生成物の電気泳動分画を行なうと
、すべての塩基に対し、使用ゲルカラムの１方又は他方
にスポットが生じる。この方法によれば、ゲルのオート
ラジオグラムの解読が容易である。シトシンに対して特
異的な塩化ナトリウムの存在中でヒドラジンによる反応
を行なうとこのヌクレオチドをチミジンから区別し得る
。硫酸ジメチルによる反応後グアニンに対して特異的な
ピペリジンによる開裂を行なうと、グアニンヌクレオチ
ドをアデニンから区別し得る。

可能な最高精度を確保するために、互いにまたがって正
なる種々の断片を形成する別々のヌクレオチド配列を、
下記の種々のυ１限酵素によるＥＣ０）−ＩＢＶＤＮＡ
の加水分解によって製造した。比］ＨＩ　、　Ｈｉｎｆ
　Ｉ　、　Ｈ（ｌａＩＩ　、　ＨａｅＩＩ［及びＨｉｎ
ｃＩＩ。

このようにして、第１試験断片の出発点として用いた制
限部位の夫々の分析結果は、別の断片（これらの別の断
片に於いては第１断片の制限部位がこの別の断片の新し
い末端と末端の間に存在している）の分析により確認さ
れた。。

第５Ａ、５８．５Ｃ図（図中の用語づイトは部位の意）
に示された“遺伝子Ｓ”は開始コドンＡＴＧから始まり
、終結コドンＴＡＡを含めて２２７個のトリブレットか
らなる。対応ポリペプチドのカルボキシ末端の３個のア
ミノ酸に対応する３個のコドンは、終結コドンＴＡＡの
直前で同じ解読枠内に位置している。別の２個の解読枠
（夫々、前記Ｗ？読枠とはヌクレオチド１個及び２個だ
けずれている）の一方も終結コドンを持たないが、前記
ポリペプチド■及び■とは全く異なる蛋白質をコードし
ている。第３の解読枠は１０個の終結コドンを含む（Ｔ
ＡＧ５個、ＴＧＡ４個、ＴＡＡ１個）。ＤＮＡの別のス
トランド上では、３個の解読枠はＤＮＡ配列に沿って分
布した夫々１１．１１及び６個の終結コドンにより閉鎖
されている。

すでに前記に於いて示したように、開始コドンＡＴＧか
ら始まる遺伝情報の完全な翻訳は、分子１２５４２２ダ
ルトンに相応する２２６個のアミノ酸からなる理論的ポ
リペプチドに至る。

”遺伝子Ｓ”に相応するヌクレオチド配列が通常は、翻
訳過程で完全に読み取られるということは興味深い。

前記の“遺伝子Ｓ”型のヌクレオチド鎖であって、約１
００個までのヌクレオチドを含有し得る補足的小配列を
含むヌクレオチド鎖、又は、逆に相応する遺伝情報を変
更せずにヌクレオチドが除去され（ｑる（２２．２３）
ヌクレオチド鎖もまた本発明の１部である。

前記に於いて定義した本発明の種々の断片は、ＤＮＡ配
列即ちＥ　ｃｏＨＢ　Ｖ　　Ｄ　Ｎ　Ａから得ることが
できる。このとぎに、相応する１ｔｌｌ限酵素を使用し
、ＤＮＡ断片の公知の分画方法を使用する。この分画方
法は特にポリアクリルアミドゲル上で行なわれ、ＤＮＡ
断片が自身の分子量の関数たる距離だけ移動することを
利用している。したがって、例えば、酵素、／（ｖａｌ
ｌによりＥｃｏＨＢＶ　　ＤＮＡを制限開裂すると、１
個の末端がＥＣｏＲＩ部位から形成され別の末端がＡｖ
ａＩ［［部位から形成された断片を得ることができる。

所望の断片は得られた最小断片である（　Ｅ　ｃｏＨＢ
　Ｖ　　Ｄ　Ｎ　Ａ中のＡｖａｌ［［部位は１個だけで
ある）。

対向する両末端が夫々ＥＣ０ＲＩ及び比ｈａＩにより形
成される断片は、Ｅ　ｃｏＨＢ　Ｖ　　Ｄ　Ｎ　Ａを、
最初にＥＣ０ＲＩで加水分解し、次に制限酵素ＨｈａＩ
で部分加水分解して得られる。このときに、制限生成物
の中からＮ■■部位を含む生成物を回収する。

これらのυ１限方法は例として示しただけであり、当業
者は勿論、有用なん１１限末端を持つ断片を、特にＥ　
ｃｏＨＢ　Ｖ　　Ｄ　Ｎ　Ａから子離するだめの制限酵
素による処理順序を決定し１ワる。

有用である限り、これらの制限操作は１０ＩＩＩＭトリ
ス（Ｔｒｉｓ）　緩衝液、　ｌ）Ｈ７，８，Ｍ　ＯＣＩ
　２６ｍＭ　。

β−メルカプトエタノール６１１Ｍの中で行なうことが
でき、ＥＣ０ＲＩを使用するときは好ましくはこの媒質
が更にＮＮａＣｌ３０ｒａを含有することを指摘してお
きたい。

すでに説明したように、本発明は、ゾーン粒子又はその
派生粒子が血清中に存在するか否かを診断し得るプロー
ブとしての前記ＤＮＡ断片の使用に係る。これらの粒子
はＢ型肝炎に特徴的な免疫原蛋白質をコードし得るＤＮ
Ａを担持している。

本発明のＤＮＡは更にベクターに組込むことが可能であ
る。このようなベクターｔよ、組込みが同位相（ｉｎ　
ｐｈａｓｄ）で行なわれるならば、細菌その他の微生物
又は真核細胞の中でこのＤＮＡを発現させ（りるベクタ
ーである。

Ｂ、　　比旦」」虹夙Ｍ、（ダ］竺仁工」口！刀」＝１
本ベクター 組換えバクテリオファージλ！ａｃｌ−Ｉ　Ｂ　ｓ−１
の構築 この構築の種々の段階のレベルに於ける生成物は第２８
乃至２ｈ図に示されている。これらの生成物を２ａ乃至
２ｈの符号で示す。

第２ａ図に於いて、゛遺伝子３　ＩＩといくつかの制限
酵素部位の位置が丞されている。

ＨＢＶ　　ＤＮＡを制限酵素ＨｈａＩで処理した後アガ
ロースゲル上の電気泳動及び電気溶離によって１０８４
個の塩基対（図ではｐ、　ｂ、と記載）を含有するＤＮ
Ａ断片（２ｂ）、すなわち“遺伝子Ｓ”の全体を分離し
た（第２ｂ図）。こうして（Ｗられた断片をエンドヌク
レアーゼＳ１によって処理した後、断片（２ｂ）の末端
を、式 ％式％ で示される“ＥＣ０ＲＩリンカ−′°と指称されるＤＮ
Ａ要素で延長して、断片（２ｃ）　（第２Ｃ図）を製造
した。

（９られた断片を、ＥＣ０ＲＩ付着端の形成侵プラスミ
ドｐＢ　Ｒ３２２中でクローン化した。

こうして得られ、以１ｐＢＲ１−（Ｂｓと指称されるプ
ラスミド（第２ｄ図）は、゛遺伝子Ｓ”の頭部の近傍に
位置する唯１個の制限部位Ｘｂａ■を含む。

ＥｃｏＲＩ及び％ｂａ■の酵素混合物で組換えプラスミ
ドｐＢ　ＲＨＢ　ｓを消化し、約９８０塩基対を含み且
つ“遺伝子Ｓ”の大部分を含むＤ　Ｎ　Ａ断片を作成し
たく第２ｅ図）。この断片を７ガロースゲル上の電気泳
動によって分１！ｆｖＪ製した。冑られた断片をエンド
ヌクレアーぜＳｌによって再び処理し、次に前記“ＥＣ
０ＲＩリンカ−′°を用いてヒＲ１末端を再び作り、次
にエンドヌクレアーゼＥ並Ｒｌによって処理し、相応す
る付着仝Ｚ：を再形成した。ここで、約９８０塩基対を
含む第２ｅ図の断片をｉｎ　ｖｉｔｒｏＰＡ合によッテ
プラスミドｐＢＲ３２２のＥＣｏＲｌ部位に挿入し、プ
ラスミドｐＸ　ｂａＨＢ　ｓを形成した（第２ｆ図）。

このプラスミドをプラスミドｐＢ　Ｒ３２２と同様に常
法でクローン化した。

数個のクローンが１ｇられた。

これらのクローンのうちの３個、寸へりちｐＸｂａＨＢ
ｓ−１，ｐＸｂａｌ−ＩＢｓ−２，ｐＸｂａｌｌＢｓ−
３（第２Ｑ図）のＤＮＡをＥｃｏＲＩによって処理した
後、以下で“Ｈａｓ所片”　（第２ｈ図）と呼、；断片
を抽出精製した。

上記断片（通常は“遺伝子Ｓ”の内部）の末端のヌクレ
オチド配列を、ＨへＸＡＨ及びＧＩＬＢ［ＲＴによって
記載された方法（Ｐｒｏ、　Ｎａｔ、　Ａｃａｄ、　Ｓ
ｃｉ、　ＵＳＡ７４、５６０−５６４　（１９７７））
を用いて決定した。この結果、“遺伝子Ｓ”に相当する
末端のヌクレオチド配列が３個のクローンで同一ではな
いことが示され（第２ｇ図）、この相違は明らかにエン
ドヌクレアーゼ＄１による消化過程中に生起する変化に
依る。

ｐＸ　ｂａＨＢ　ｓ−１とｐＸ　ｂａＨＢ　ｓ−２とか
ら得られた２種の断片を、試験管内融合によりバクテリ
オファージλｐｌａｃ５−１　（２１）のゲノム中に挿
入した。

このファージゲノムは、ｌ１ａＣ７−遺伝子の末端近傍
に位置するＥＣｏＲｌ部位を１円しか有していない。

Ｂ−ガラクトシダーゼ（２３）のアミノ酸配列から誘導
推論されるような！ａＣＺ遺伝子の解読枠から、ｔ）Ｘ
　ｂａＨＢ　ｓ−１のＨＢＳ断片をλｐｌａｃ５−１の
、２ａｃ２３Ｈ伝子のＥＣｏＲｌ部位中に挿入すると「
遺伝子Ｓ」の的確なｗ？読相Ｄｅａｅｉｎｑ　ｐｈａｓ
ｅ　）が維持されることが観察され、かつ実験によって
確認される。これに対して、ｌ）Ｘ　ｂａＨＢ　Ｓ−２
のＨＢＳ断片は、適切なＭ読枠を維持しながら上述のベ
クター中に挿入されるのは不可能であると証明された。

しかしながら前記断片は後の実験に於ける対照（コント
ロール）として使用された。

これらの操作は、既知の技術を使用して実施された。特
にｐｘ　ｂａｔ−Ｉ　Ｂ　Ｓ−１，ｐｘ　ｂａＨＢ　Ｓ
−２のｒｈｏｓ断片」は、リガーゼを使用して、館もっ
てＥＣ０ＲＩにより開裂されているλｐｌａｃ５−１の
ＤＮＡ中に挿入された。次いで、かくして得られたＤＮ
Ａ断片の混合物を用いてＥ、ｃｏｌｉの菌株Ｃ６００Ｒ
ｅｃ　　ＢＣｒｋ−ｍｋ−をトランスフェクションした
。ＨＢ＆断片が　１ａｃＺ遺伝子のＥＣｏＲｌ部位中に
挿入された結果　１ａｃ−となったバクテリオファージ
のクローンは、（２１）に記載した方法に従って増殖及
び精製される。

異なるバクテリオファージのＤＮＡを抽出し、挿入され
たＤＮＡ断片の配向（ｏｒｉｅｎｔａｔｉｏｎ）をそれ
らの、旦ａｉＨＩ制限断片の電気泳動分析により決定し
た。この結果、プラスミドＤＸ　ｂａＨＢ　Ｓ−１とｐ
ｘ　ｂａＨＢ　ｓ−２とに対応させて名付けた２個のフ
ァージλＩａｃＨＢｓ−１とλ１ａｃＨＢｓ−２とが正
確に配向されたＨＢＳ　ｉ１片を含んでいることが決定
できた。

第４ａ図は、ｐＸｂａＨＢ　ｓ−１から得られたＨＢｓ
−１所片によるｒｉ飾以前のベクターλｐｌａｃ　５−
１の概略図である。

第４ｂ図は、同一ベクターの一部の概略図であり、上記
ＨＢ　ｓ−１所片をＥｃｏＲ１部位中に挿入することに
より遭伝子Ｚ中に導入された修飾（部）を示す。

第４Ｃ図は、第４ｂ図の修飾されたベクターの発現の結
果前られるハイブリッドポリペプチドの構造を略示する
。

この発現は、Ｅ、ｃｏ＋；の細菌菌株、特に）−１ｒｒ
ΔＩａｃＸ７４のトランスフェクションによって達成し
た。

Ｅ、ｃｏｌｉの菌株、特に［、ｃｏｌｉの菌株ＨｆｒΔ
Ｉａｃ　Ｘ７４を、ｐｌａｃ　５−１．　λＩａｃＨＢ
ｓ−１及びλ１ａｃｔｌＢｓ−２によりそれぞれ形質転
換した。培養後、細胞を溶解し、得られた溶解物をＳＤ
Ｓポリアクリルアミドゲル（２４）上で電気泳動により
分析し、蛋白質をクーマシーブルーで染色して検出した
。対照としてのλｏｌａｃ　５−１の発現産物中には、
β−ガラクトシダーゼ（分子１１１６．２４８）に相当
する位置により強度なバンドが存在し、λ１ａｃＨＢｓ
−１の発現８物中には分子量約１３５０００乃至１４１
０００を有する新規な蛋白質に相当する顕著なバンドが
存在する（λｌａｃｌｌＢｓ−２の発現産物中には存在
しない）。

λ１　ａＣＨＢ　Ｓ−１及びλｐｌａｃ　５−１によっ
てトランスフェクションしたｍ菌が合成する蛋白質を（
３５Ｓ）メヂオニンで標識した。該蛋白質を抗−ＨＢＳ
ＡＱ血清と接触させＳＤＳポリアクリルアミドゲルのオ
ートラジオグラムを実施すると、λ１　ａｃＨＢ　ｓ−
１の発現産物中のみに、他のベクターの発現産物中の等
価のバンドに対応しない１個のバンドの存在が示された
。当該バンドは、非標識）ＩＢｓＡｏの存在下で免疫沈
降を実施すると特異的に消滅した。β−ガラクトシダー
ぜに対する抗血清を用いて免疫沈降を実施すると、λｊ
ａｃ）（Ｓｓ−１の発現産物中にはやはり同一のバンド
が再びＩ２察された。

ｊａｃＺＭ伝子と）−１８Ｓ−１断片との間の融合で得
られるハイブリッド蛋白質部分の推定される構造を第４
Ｃ図に示す。「β−９ａｌ」断片はβ−ガラクトシダー
ゼ（アミノ１１１００５個）に相当する。

ＨＢｓＡｇ断片（７ミ／Ｍ　１９２ｔｌ！ａ）も示すレ
テイル。

これら２四の断片は、ベクター、Ｉｔ　１　ａｃＨＢ　
ｓ−１中に含まれる’　、Ｅ」刃ＲＩリンカ−″の一部
に相当するアミノ酸であるプロリンにより分離されてい
る。

したがって本発明は、上記のポリペプチド■もしくは■
より分子量が小さく同等の免疫原特性を有する蛋白質の
製法を提供しうる。

本発明の結果が示すところによれば、Ｅ、ｃｏｌｉもく
しは細菌或いは真核生物細胞培養物の如き他のあらゆる
好ましい微生物は、λｊ　ａＣＨＢ　Ｓ−１で感染させ
ることができ、約１３８．０００の分子量を有すると共
に、同時に）ＩＢＳＡＱとβ−ガラクトシダーゼとの抗
原決定基を有する蛋白質を合成しうる。当該蛋白質分子
は、本発明方法によって獲得されうるハイブリッドポリ
ペプチドの代表例であり、これらのハイブリッドポリペ
プチドに於いて、ＨＢｓＡｇは（Ｂ−ガラクトシダーゼ
断片の部分的もしくは全体的ａ換の結果として）支持蛋
白質と結合しているにもかかわらず、これらのハイブリ
ッドはＨＢＳＡＱの抗原特性を有する。これらの新規分
子は、Ｂ型肝炎ウィルスに対して活性なワクチンを製造
するために有益である。

自明のこととして、また上述の事実から既に明らかなよ
うに、本発明は、特に考察された適用方法及び実施方法
に何ら限定されず、逆にあらゆる変形に及んでいる。

以上の記載に加えて、特に発明に関して引用された参考
文献を以下に示す。

１−２−二ＬＪ１ １−Ｂｌｕｍｂｅｒｇ、　Ｂ、Ｓ、　（１９７７）　５
ｃｉｅｎｃｅ　　１９７　、１７−２−　［１ａｎｅ　
Ｄ、Ｓ、、　　Ｃａｍｅｒｏｎ　Ｃ，Ｈ，、ａｎｄ　Ｂ
ｒ１ｇ５ｓ　Ｈ。

（１９７０）Ｌａｎｃｅｔ　　１．６９６−６９８３−
Ｗｈｏ　Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ　　Ｒｅｐｏｒｔ　　５ｅ
ｒｉｅｓ、　　ｎｕｍｂｅｒ　６０２４−　Ｓｕｎ＋ｅ
ｒｓ　　Ｊ、、　　ＯｏＣｏｎｎｃｌ　　Ａ、、ａｎｄ
　　Ｈｉｌｌｍａｎ　　１゜（１Ｇ７５）　　Ｐｒｏｃ
、　　Ｍａｔ、　　Ａｃａｄ、　　Ｓｃｉ、　　ＬＩＳ
Ａ　　　７２　　。

５−１１ｒｕｓｋａ　ＪＪ、、　ｃｌａｙｔｏｎ　Ｅ、
Ａ、、　Ｒｕｂｅｎｓｔｅｉｎ　Ｊ。

Ｌ、Ｒ，ａｎｄ　　Ｒｏｂｉｎｓｏｎ　Ｗ、Ｓ、　　（
１９７７）　　Ｊ、　　Ｖｉｒｏ１２１、　６６６−６
８２ ６−　Ｌａｎｄｅｒｓ　　ＴＥＡ、、Ｇｒｅｅｎｂｅｒ
ｇ　　Ｈ，Ｂ、ａｎｄ　　ＲｏｂｉｎｓｏｎＷ、Ｓ、　
　（１９７７）　Ｊ、　　Ｖｉｒｏｌ、　　２３．３６
８−３７６７−Ｃｈａｒｎａｙ　　Ｐ、、Ｐｏｕｒｃｃ
ｌ　　Ｃ，、Ｌｏｕｉｓｅ　＾　、Ｆｒ１ｔｓｃｈＡ、
　　ａｎｄ　　Ｔｉｏｌｌａｉｓ　　Ｐ、（１９７９）
Ｐｒｏｃ、　　Ｎａｔ、Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、ｕｓＡ、７６．２，２２２−２，２２６８−Ｄ
ｒｅｅｓｍａｎ　　Ｇ、Ｒ，，１ｌｏｌｌｉｎａｅｒ　
　Ｆ、Ｂ、、５ｕｒｉａｎｓＪ、Ｒ，、ｒｕｊｉｏｋａ
　　Ｒ，Ｂ、、　　Ｂｒｕｎｓｃｈｗｉｇ　　Ｊ、Ｐ、
　　ａｎｄＨｅ１ｎｉｃｋ　Ｊ、Ｌ、　　（１９７２）
　　Ｊ、　　Ｖｉｒｏｌ、　　１０　　、　４６９−９
−Ｇｅｒｉｎ　　Ｊ、Ｌ、（１９７４）ｉｎ　Ｍｅｃｈ
ａｎｉｓｍｓ　ｏｆ　　ｖｉｒｕｓｄｉｓｅａｓｅ　　
Ｅｄ、Ｗ、Ｓ、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ、Ｃ，Ｒ，Ｆｏｘ　　
Ｄｌ）２１５−２４　　　Ｈｅｎ１ｏ　　Ｐａｒｋ：　
　Ｗ、Ａ、　　Ｂｅｎｊａｍｉｎｌｏ−Ｄｒｅｅｓｍａ
ｎ　　Ｇ、Ｒ，、Ｃｈａｉｒｅｚ　　Ｒ，，５ｕａｒｅ
ｚ　　Ｈ，。

ｔｌｏｌｌｉｎｇｅｒ　Ｆ、Ｂ、、　　Ｃｏｕｒｔｎｃ
ｙ　Ｒ，Ｊ、ａｎｄ　Ｈｅ１ｎｉｃｋＪ、Ｌ、　　（１
９７′Ｓ）　Ｊ、　　Ｖｉｒｏｌ、　　１６．　５０８
−５１５１１−３ｈｉｎ　　Ｊ、Ｗ、　　ａｎｄ　　Ｇ
ｅｒｉｎ　　Ｊ、Ｌ、　　（１９７７）　　Ｊ、Ｖｉｒ
ｏｌ。

２１、　１，２１９−１，２２２ １２−　Ｐｅｔｅｒｓｏｎ　　Ｄ、Ｌ、、Ｒｏｂｅｒｔ
ｓ　　１．Ｈ，ａｎｄ　　Ｖｙａｓ　　Ｇ、Ｈｏ（１９
７７）　　Ｐｒｏｃ、　　Ｍａｔ、　　Ａｃａｄ、　　
Ｓｃｉ、　　ＵＳＡ　　７４　　。

１３−Ｐｅｔｅｒｓｏｎ　Ｄ、Ｌ、、　Ｃｈｉｅｎ　Ｄ
、Ｙ、、　Ｖｙａｓ　Ｇ、　Ｎ、。

Ｎ１ｔｅｃｋｉ　　Ｄ、　　ａｎｄ　　Ｂｏｎｄ　　Ｈ
，（１９７８）　　ｉｎ　ＶｉｒａｌＨｅｐａｔｉｔｉ
ｓ、Ｅｄ、Ｇ、ＶＶａＳ、Ｓ、ｃｏｈｅｎ　ａｎｄ　　
Ｒ。

５ｃｔｖｉｄ、　　Ｔｈｅ　　Ｆｒａｎｋｌｉｎ　　Ｉ
ｎ５ｔｉｔｕｔｅ　Ｐｒｅｓｓ。

ｐｈｉｌａｃｌｏｌｐｈｉａ、　　５６９−５７３１４
−Ｆｒｉｔｓｃｈ　Ａ、、　　Ｐｏｕｒｃｅｌ　　Ｃ，
、Ｃｈａｒｎａｙ　Ｐ、　　ａｎｄＴｉｏｌｌａｉｓ　
ｐ、　　（１９７８）　Ｃ，Ｒ，Ａｃａｄ、　　ｓｃ、
　　Ｐ、：１ｒｉＳ２８７　．１，４５３−１，４５６ １５−Ｂｕｒｒｅｌｌ　　Ｃ１，、Ｈａｃｋａｙ　Ｐ、
、　　Ｇｒｅｃｎａｗａｙ　Ｐ、Ｊ、。

）１ｏｆｓｃｈｎｃｉｄｃｒ　Ｐ、Ｈ，ａｎｄ　Ｈｕｒ
ｒａｙ　Ｋ、　　（１９７９）Ｎａｔｕｒｅ　　２７９
　．４３−４７１６−Ｔｉｏｌｌａｉｓ　Ｐ、、　　Ｐ
ｃｒｒｉｃａｕｄｅｔ　Ｈ，、Ｐｅｔｔｅｒｓｓｏｎυ
、　ａｎｄ　Ｐｈ１ｌｉｐｓｏｎ　Ｌ、　　（１９７６
）　Ｇｅｎｅ　　１，４９−６３１７−ｔｌｅｒｉｓｓ
ｅ　Ｊ、、　Ｃｏｕｒｔｏｉｓ　Ｇ、、　　ａｎｄ　Ｇ
ａ１ｉｂｅｒｔ　Ｆ。

（１９７８）　Ｇｅｎｅ　　４．　２７９−２９４１８
−Ｋｒｏｅｋｅｒ　１４．０．　　ａｎｄ　Ｌａｓｋｏ
ｗｓｋｉ　Ｈ，Ｓ、Ｒ，（１９７７）Ａｎａｌ、　　Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ、　　７９．　６６３−７２１９−Ｈａｘ
ａ　Ａ、Ｈ，ａｎｄ　Ｇ１１ｂｅｒｔ　Ｗ、　　（１９
７７）　　Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔ、　　Ａｃａｄ、　　Ｓｃｉ、　　ＵＳＡ　７４
．　５６０−５６４２０−３ａｎｇｅｒ　Ｆ、、　　Ｎ
１ｃｋｌｃｎ　Ｓ、　　ａｎｄ　Ｃｏｕｌｓｏｎ　Ａ、
　　Ｒ。

（１９７７）　Ｐｒｏｃ、　　Ｎａｔ、　　Ａｃａｄ、
　　Ｓｃｉ、　　ＵＳＡ　　７４　。

２１−Ｍａａｔ　Ｊ、　　ａｎｄ　Ｓｍ１ｔｈΔ１．Ｗ
、　　（１９７Ｂ）　ＮｕｃｌｅｉｃＡＣｉｄ、　　Ｒ
ｅｄ、　　５．　４　５３７−４５４５２２−Ｂｅｒｇ
ｅｔ　Ｓ、Ｍ、、　　Ｈｏｏｒｅ　Ｃ，ａｎｄ　　５ｈ
ａｒｐ　Ｐ、　　Ａ。

（１９７７）　　Ｐｒｏｃ、　　Ｈａｔ、　　ａｃａｄ
、　　Ｓｃｉ、　　ＵＳＡ　　７４　　。

２３−Ｃｈｏｗ　Ｌ、Ｔ、、　　Ｇｅ１ｉｎａｓ　Ｒ，
Ｅ、、　　Ｂｒｏｋｅｒ　Ｔ、Ｒ，。

ａｎｄ　Ｒｏｂｅｒｔｓ　Ｊ、　　（１９７７）、　　
Ｃｅ１ｌ　　１２．　１−８２４−３ｈｉｒａｉｓｈｉ
　　Ｈ，、、Ｋｏｈａｍａ　　丁、、　　５ｈｉｒａｃ
ｈｉ　　Ｒ，ａｎｄＩｓｈｉｄａ　Ｎ、　　（１９７７
）　Ｊ、　Ｇｅｎ、　ｖｉｒｏｌ、　３６．２０７−２
５−Ｓｔｒｕｃｋ　Ｄ、に、、　　Ｌｅｎｎａｒｚ　’
ｄ、　　Ｊ、、　　ａｎｄ　Ｂｒｅｗ　Ｋ。

（１９７８）　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｃａ、　　２５
３．５７８６−５７９４２６−Ｒｅｄｄｙ　Ｖ、　　Ｂ
、、　　Ｔｈｉｍｍａｐｐａｙａ　Ｂ、、　　Ｄｈａｒ
　Ｒ，。

Ｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ　に、Ｎ、２ａｉｎ　Ｂ、Ｓ、
、　　Ｐａｎ　Ｊ、、　　ＣｅｌｍａＣ，Ｌ、　　ａｎ
ｄ　Ｗｅｉｓｓｍａｎ　Ｓ、　　Ｈ，（１９７８）　５
ｃｉｅｎｃｅ２００　．４９４−５０２ ２７−　Ｆｉｅｒｓ　Ｗ、　、　　Ｃｏｎｔｒｅｒａｓ
　Ｒ，、ｌｌａｒｇｃｎａｎ　Ｇ、　。

Ｒｏｇｉｅｒｓ　Ｒ，、Ｖａｎ　ｄｅ　Ｖｏｏｒｄｅ　
Ａ、、　　Ｖａｎ　Ｈｅｎｖｅｒｓｗｙｎ　Ｈ，、Ｖａ
ｎ　Ｈｃｒｒｅｗｅｇｈｅ　Ｊ、、　Ｖｏｌｃｈａｃｒ
ｔｓ　Ｇ。

ａｎｄ　ＹｓｅｂａｅｒｔＨ，（１９７８）　　Ｎａｔ
ｕｒｅ　　２７３，１１３−２８−３ａｎｇｅｒ　Ｆ、
、　　Ａｉｒ　Ｇ、Ｍ、、　　Ｂａｒｒｅｌｌ　　Ｂ、
Ｇ、、　　ＢｒｏｗｎＮ、Ｌ、、Ｃｏｕｌｓｏｎ　　Ａ
、Ｒ，、Ｆｉｄｄｅｓ　　Ｊ、Ｃ，、Ｈｕｔｃｈｉｓｏ
ｎｌｌｌ　　Ｃ，Ａ、、　　５ｌｏｃｏａｂａ　Ｐ、　
　Ｈ，ａｎｄ　Ｓａ＋ｉｔｈ　　Ｈ。

（１９７７）　Ｎａｔｕｒｅ　　２６５．　６８７−６
９１２９−Ｂａｒｒｅｌｌ　　Ｂ、　　Ｇ１．　　Ｓｂ
ａ＊　Ｄ、Ｃ，、Ｗａｌｋｅｒ　Ｊ、Ｅ、。

Ｎｏｒｔｈｒｏｐ　Ｆ、Ｄ、、　　Ｇｏｄｓｏｎ　Ｇ、
Ｎ、　　ａｎｄ　Ｆｉｄｄｅｓ　Ｊ。

Ｃ，（１９７８）　　ＢｉｏＣｈｃｍ、　　Ｓｏｃ、　
　■ｒａｎｓ、　　ｓ、　　６３−６７３０−３ｚｍｕ
ｎｃｓｓ　Ｗ、、　　Ａｍ、Ｊ、Ｐａｔｈ、　　８１．
　６２９−１３４９（１９７５）３１−８ｎｉｎｓｋｙ
　Ｊ、Ｊ、、　　５ｉｄｄｉｑｕｉ　　Ａ、、　　Ｒｏ
ｂｉｎｓｏｎ　ｌ１１．ｓ。

ａｎｄ　Ｃｏｈｅｎ　Ｓ、　　Ｎ、、　　Ｎａｔｕｒｅ
　　２７９　、　３４６−３４８３２−Ｖａｌｅｎｚｕ
ｅｌａ　Ｐ、　　ｅｔ　ａｔ、、　　Ｎａｔｕｒｅ　　
２８０．　８１５−８１９　　（１’１７９） ３３−Ｃｈａｒｎａｙ　Ｐ、　　ｅｔ　ａｌ、、　　Ｈ
ｕｃｈ　　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｃｓ、　　７゜３．４−Ｇａ
１ｉｂｅｒｔ　　Ｆ、、Ｈａｎｄａｒｔ　　Ｅ、、Ｆｉ
ｔＯｌｊＳＳｉ　　Ｆ、。

Ｔｉｏｌｌａｉｓ　Ｐ、　　ａｎｄ　Ｃｈａｒｎａｙ　
Ｐ、、　　Ｎａｔｕｒｅ　　２８１゜３５−Ｐａｓｅｋ
　　Ｈ，ｅｔ　　ａｔ、、Ｎａｔｕｒｅ　　２８２，５
７５−５７９３Ｇ−Ｖｙａｓ　Ｇ、Ｎ、、　　Ｗｉｌｌ
ｉａｇ＋ｓ　　Ｅ、Ｗ、、　　にｔａｕｓ　Ｇ、　　Ｇ
、　　Ｂａｎｄ　　Ｂｏｎｄ、Ｈ，Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ
、　　１０８．　１，１１４−１，１１８３７−Ｈｏｌ
ｌｉｎｇｃｒ　　Ｆ、Ｂ、、Ｄｒｅｅｓ＋＋ａｎ　Ｇ、
Ｒ，，５ａｎｃｈｃｚＹ、、　　Ｃａｂｒａｌ　　Ｇ、
　　ａｎｄ　Ｈｅ１ｎｉｃｋ　Ｊ、Ｌ、、　　ｉｎ　Ｖ
ｉｒａｌＨｅｐａｔｉ口ｓ　（Ｅｄ、　Ｖｙａｓ　Ｇ、
Ｎ、　Ｃｏｈｅｎ　Ｓ、Ｎ、　ａｎｄＳｃｈＩ！ｌｉｄ
　Ｒ，）　Ｆｒａｎｋｌｉｎ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ、　
Ｐｈ１ｌａｄｅｌ−ｐｈｉａ、　（１９７８） ３Ｂ−Ｐｕｒｃｅｌｌ　　Ｒ，Ｈ，、ａｎｄ　　Ｇｅｒ
ｉｎ　Ｊ、Ｌ、、　　Ａｍ、　　Ｊ、　　Ｒｅｄ。

Ｓｃｉ、　　２７０　．３９５−３９９　　（１９７５
）３９−ｔｌｉｌｌｅｍａｎ　　Ｈ，Ｒ，ｅｔ　　ａｔ
、、　　八ｍ、　　Ｊ、　　Ｈｅｄ、　　Ｓｃｉ。

２７０　　、　４０１−４０４　　（１９７５）４０−
）４ａｕｐａｓ　Ｐ、、　Ｃｏｕｒｓａｇｃｔ　Ｐ、、
Ｇｏｕｄｅａｕ　Ａ、　ａｎｄＤｒｕｃｋｃｒ　Ｊ、、
　Ｌａｎｃｅｔ　１．１，３６７−１，３７０　（１９
７６）４１−４ｍｔａｇｅ　Ｊ、Ｓ、ｅｔ　ａｌ、、　
Ｎａｔｕｒｅ　　２８３．１７１−１７４４２−１ｔａ
ｋｕｒａ　Ｋ、ｅｔ　ａｔ、、　５ｃｉｅｎｃｅ　　１
９８．１０５６−１０６３４３−Ｇｏｅｄｄｅｌ　　Ｄ
、Ｖ、ｅｔ　　ａｌ、、　　Ｐｒｏｘ、　　Ｈａｔ、　
　八ｃａｄ、Ｓｃｉ。

ＵＳＡ　７６、　１０６−１１０　　（１９７９）４４
−Ｐｏｕｒｃｅｌ　Ｃ，、Ｈａｒｃｈａｌ　Ｃ，、Ｌｏ
ｕｉｓｅ　Ａ、、Ｆｒ１ｔｓｃｈＡ、　　ａｎｄ　Ｔｉ
ｏｌｌａｉｓ　Ｐ、、　　Ｈｏ１ｅｃ、　　Ｇｅｎ、　
　Ｇｃｎｃｔ。

１７０　．１６１−１６９　　（１９７９）４５−Ｂｏ
ｌｉｖａｒ　　ｒ、　　ａｔ　　ａｔ、、　　Ｇｅｎｅ
　　　２　．９５−１１３　　（１９７７ン４６−４ｏ
ｖｌｅｒ　Ａ、Ｖ、　　ａｎｄ　２ａｂｉｎ　１．、　
　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ、Ａｃａｄ。

ｓｃｉ、　　ＵＳＡ　　７４．　１５０７−１５１０　
（１９７７）４７−Ｌａｅｍｍｌｉ　Ｕ、に、、Ｎａｔ
ｕｒｅ　　２２７．　Ｇ３０−６８５　（１９７０）４
８−Ｂｕｒｑｅｓｓ　Ｒ，Ｒ，、Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃ
ｈｅＩｌｌ、　２４４．　６１６８−４９−　Ｂｏｎｎ
ｅｒ　Ｗ、Ｈ，ａｎｄ　Ｌａ５ｋｅｙ　Ｒ，＾、　、　
［ｕｒｊ、　Ｂｉｏｃｈｃｍ。

、！１６．　８３−８８　　（１９７４１５０−Ｌａ５
ｋｅｙ　　Ｒ，八、　　ａｎｄ　　Ｈｉｌｌｓ　　Ａ、
Ｄ、Ｊｕｒ、Ｊ、Ｂｉｏｃｈｃｍ。

５６、　３３５−３４１　　（１９７５）５１−　ｆｗ
ａｋｕｒａ　Ｙ、、　　ＩｔＯに、　　ａｎｄ　Ｉｓｈ
ｉｈａｍａ　Ａ、、Ｈｏ１ｅｃ。

Ｇｃｎ、　Ｇｅｎｅｔ、　　１３３．１−２３　（１９
７４）５２−Ｔａｌｗａｉ　Ｇ、Ｐ、、　ｅｔ　ａｌ、
、　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ。

ＵＳＡ　７３．２１８−２２２　（１９７６）

【図面の簡単な説明】

球配列を示す図、 およびその発現によって得られるハイブリッドボ伝子の
翻訳の結果前られるポリペプチド鎖を示す第７図は第６
図に示したＤＮＡから得られるポリペプチドのアミノ酸
配列を示す図、 第８図は本発明のポリペブトのアミノ酸配列を示す図で
ある。 中ｓ＜　　７二又ナイナ１八−飄にウー、し代理人　弁
理士用１　　口　　義　　雄Ｐｌ’Ｄ　Ｌａｌ　ＬＥＤ
　ＶＡＬ　Ｌａｌ　ＧＬＮ　ＡＬＡ　ＧＬＹ　Ｐ）Ｅ　
Ｐ）Ｅ史 Ｌａｌ　Ｌａｌ　Ｔ）ＩＲＡＲ６ＩＬＥ　Ｌａｌ　ＴＨ
ＲＩＬＥ　Ｐ［（）ＬＮπつ ＳＥＲＬＥＬＩ　−ＡＳＰ　ｃＢ翌翌布ＲヨＵ■Ｆ！Ｅ
　ＬＥＩＪ　ＧＬＹ　ＧＬＹ蓮鉗ＲＶＡＬαＳ田Ｊ　Ｏ
ＬＹＧＬＮ　ＡＳＮ　ＳＥＲＧＬＮ　ＳＥＲＦＩＫＪ’
昭窓溌ＨＩＳ７田 町ＴＹＲ高昭旧α５Ｌａｌ高晟籠 Ｔ／ｌｆｉ　ＴＡＧ崩（資）周面χＸ弘Ｔ庭ＡＴＣＡＴ
ＣＴｒＣＣＴＣＴｒＣＡＴＣＣＴＧ　ＣＴＧ　ＣＴＡ　
ＴＧＣＩＬＥ　ＩＬＥ　Ｆ［田Ｊ　Ｐ）Ｅ　Ｉ匡Ｕ田Ｊ
田ｊαＳ苅 （Ａ　ＴＡＧ　％　ＭＣＡＡＣＣＭ　ＧＡＡ　ＧＫ　Ｃ
ＴＧ　ＡＴＡＣＴＣＡＴＣＴｒＣＴｒＧ　ＴｒＧ　ＧＴ
ｒ　Ｃ’ｒｒ　ＣＴＧ　ＧＡＣＴＡＴ田Ｊ　　ＩＬＥ　
Ｆ［Ｌａｌ　田Ｊ　ＶＡＬ　Ｌａｌ　　Ｌａｌ　／Ｉｓ
Ｐ　ＴＹＲ孜 ＧＴｒ　ＣＣＡ　ＴＡＣ晟（６）愚息％いＴＴβＡＣＡ
Ａ　ＧＧＴ　ＡＴＧ　ＴｒＧ　ＣＣＣＧＴｒ　ＴＧＴ　
ＣＣＴ　ＣＴＡ　ＡＴｒＣＣＡα込Ｔ匡Ｔ訊崩肛廐姫礎
Ｃい ＰＲＯＧＬＹ　氾Ｓ］歌猟這皿ＧＬＹ　（９）３美 ／ｌｃ［３ＧＣＣＴ）Ｇ　ｐｃ、ＧＴＡＣｍ　ＴＧＡ　
ＣＭ　ＧＴｒ　ＣＣＴＣＴＣＧＧＡＣＣπ℃価　訂Ｎゴ
αＪ閃α込ＣＹＳ　ＡＦＧ　ＴＨＲＣＹＳ　［ＴＨＲＴ
ＨＲＡＬＡ　ＧＬＮ　ＧＬＹ（℃ ＴＧＧ　ＫＪＡＴＡＣＡＴＡ　ｅｆ　Ｇ　ＡＣＡ　ＡＣ
Ｇ　ＡＣＡ　ＴＧＧ＾ＣＣＴＣＴ　　ＡＴＧ　　ＴＡＴ
　　ＣＣＣＴＣＣＴＧＴ　　ＴＧＣＴＧＴ　　ＡＣＣＴ
ＨＲＳＥＲ［ＴＹＲＰＩｃＪＳＥＲＣ１’Ｓ　　Ｃ’ｆ
Ｓ　ＣＹＳ　兇ηＴＧＧＡ晟α　ＣＣＴ　ＴｒＡ紙逼心
鳳ＭＡ　ＣｃＴ　筋ＧＡＣＧＧＡ　ＭＴ　ＴＧＣＡＣＣ
ＴＧＴ　ＡＴｒＬＹＳ　■浸玉府ＧＬＹ　畑函π伏業　
Ｉ匡ζ迫 ＧＧＧ　ＴＡＧ　ＧＧＴ　ＡＧＴ　Ｇ　ＡＣＣＣ９％　
ＣＣＴ　ｍＣＣＣＡＴＣＣＣＡ　ＴＣＡ　ＴＣＣＴＧＧ
　ＧＣＴ　ＴＴＣｅ３Ａ　ＭＡＰＩ（）Ｉ圧（９）氾這
翌υ徒ｆＥＬＹ　シ兆扉迫 ＣＹＳ　ＬＥｔＪ　ＴＲＰ　ＶＡＬ　ＴＹＲＩＬＥ　５
ＴＯＰ２９５０２９ＥＯ Ｆｉ＝ ２へ Ｎ石　Ｉ「田Ｊ…俄　ＩＬ 匂Ｏ ｗｎ玉氾Ｕ鳩％ＬＥＩＩＧ ＧＬＮ　ＡＳＮ　ＳＥＲＧＬＮ　ＳＥＲＰｌ（）丑俄Ｓ
Ｐｉｎ　ＰＲＯＴ）ＩＲＣＹＳ　ＰＲＯＧＬＹ　ＴＹＲ
／ＩＩＬＥ　　１ｔＥ　Ｐ）Ｅ　ＬＥＩＪ　Ｐ）Ｅ　Ｉ
ＬＥ　ＬＢｊ　Ｌｌ（Ｘ） ＶＡＬ　Ｌａｌ　　ＬａＪ　ＡＳＰ　ＴＩ’ＲＧＬＮ　
ＧＬＹ　？’ＰＲＯＧＬＹ　　這ＳＥＲＴＨＲ止ＲヨＩ
Ｐ迫 “昭Ｔ）（ＲＡＬＡ　ＧＬＮ　ＧＬＹ　Ｔ）ＩＲＳＥＲ
ＦＬＹＳ　ＰＲＯＳＥＲ府ＧＬＹ　超ン１　業　１１Ｆ
ｉ：Ｊ ＴＲＰ　　ＡＬＡ　　Ｐ［ＧＬＹ　　　ＬＹＳ　　Ｐ）
Ｅ　　　ＬａＪ　　　１Ｄ　ＴＲＰ　　ＬＥＩＩ　　Ｓ
ＥＲＬＢＪ　　ｔＢＪ　ＶＡＬ　ＦｃＯ ｔｍ　　ＳＥＲｐｍ　　ＴＨＲＶＡＬ　ＴＲＰ　　ｔａ
　　５ＴＲＰ　ＧＬＹ　　■　袋λ　Ｕ　官ＲＳ訊　１
田」（９）１田Ｐ圧Ｐ田Ｃ（Ｓロコ Ｅ　ＰＲＯＧＬＮ　ＳＥＲＬＥＩＩ　ＡＳＰ　ＳＥＲＴ
ＨＲ男 、ＬＹ　ＧＬＹ　躇丑Ｒ乳αＳ田Ｊ　ＧＬＹω ＥＲＡＳＮ　　ＨＩＳ　ＳＥＲ閣眼Ｓ業田 ＰＳｗｌ’Ｅｒ　ＣＹＳ　ＬＥＩＩ　ＡＩ’Ｅ　ＡＲＧ
　Ｐ）Ｅ史 Ｅｌｆ　ＬａＪ　ＣＹＳ　ＬＥＩＩ　　ＩＬＥ　Ｆ）Ｅ
　Ｌａｌ　Ｌａ１ＥＴ　ＬＥＬＩ　ＰＦｃＪＶＡＬ　Ｃ
ＹＳ　ＰＲＯＬＢＪ　ＩＬＥ五つ １（ＲＧＬＹ　（９）αＳ高］取業ト［ｌ切 ＥＴ　Ｔ／ＲＰＲＯモαＳαＳ　αＳ紺Ｒ１（ＲＣＹＳ
　　ＩＬＥ　Ｐ舶　Ｉ匡Ｐ（イ）モ浸ヌ’ＲＰ　ＧＬＩ
Ｉ　　ＴＲＰ　ＡＬＡ　モ心高　暉）（イ）ｈεＶＡＬ
　ＧＬＮ　　ＴＲＰ　　鼾■匙ＧＬＹχ℃ ＥＲＶＡＬ　　ＩＬＥ　ＴＲＰ　ｒＭＥＴ　ＴＲＰ　Ｔ
ＹＲ［ＬＥ　ＬＥＬＩ　ＳＥＲ汽　２圧田」　（９）田
」２２ら ｒＲＰ　ＶＡＬ　ＴＹＲＩＬＥ ３’１ｌ ＡｌＧＣＣＴＧＧ　ＡＣＧ　ＴＡＣＴひＴ弘ＢＡ　ＧＴ
Ｔ　Ｃ口Ｔ印ＴＧＣＣＧＧ　ＡＣＣＴＧＣＡＴＧ　ＡＣ
Ｔ　ＡＣＴ　ＧＣＴ　ＣＡＡ陥ＡＣＣＣＹＳ　ＡＲＧ　
　Ｔ）ＩＲＣＹＳ　Ｆｒ　ＴＨＲＴＨＲＡＬＡ　ＧＬＮ
　ＧＬＹ　ＴＨＲ■猶超Ｃ口ＧＣ口ＴｒＡ　Ａ印Ｔ印Ａ
いＴＭ　宣ＡＡＡ　　ＣＣＴ　ＴＣＧ　　ＧＡＣＧＳＡ
　ＭＴ　ＴＧＣＡＣＣＴＧＴ　Ａ″ｒｒ　　ｃｃｃＬＹ
Ｓ　　ＰＲＯＳＥＲＡＳＰ　　ＧＬＹ　ＡＳＮ　　ＣＹ
Ｓ　ＴＨＲＣＹＳ　　ＩＬＥ　ＰＲＯ％　　ＧＡｒＡＣ
Ｃｃｒｃ　　ＡＣＣ ″ｒＴＣＣＴＡ　ＴＧＧ　　ＧＡＧ　　ＴＣｆ：ＪＰ）
Ｅ　　ＬＥＵ　　ＴＲＰ　　ＧＬＬＩ　　ＴＲＰＴＣＣ
ＴＣＡ　　ＡＣＡ　　ＡＣＣＡＧＣＡＣＧ　　ＧＧＡ　
　ＣＣＡＳＥＲＳＥＲＴ）ＩＲＴＨＲ５ＥＲＴｔｆＲＧ
ＬＹ　　園４２Ｏ Ｎ込　ＴＡＣＡＴＡ　　ＧＧＧ　　ＫｉＪＡ弘　Ａ印　
Ａい　ＴＧＧＴＣＴ　ＡＴＧ　ＴＡＴ　ＣＣＣＴＣＣＴ
ＧＴ　ＴＧＣＴＧＴ　ＡＣＣ３ＥＲ旧−ＴＹＲＰＲＯＳ
ＥＲＣＹＳ　　αＳ　αＳ　刊ＲＪ１８０

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）Ｂ型肝炎ウィルスのＳ−蛋白質中に含まれている
   アミノ酸配列から成り、場合により別の蛋白質の他の配
   列と共にハイブリッド蛋白質を形成しているペプチドで
   あつて、前記アミノ酸配列が第８図の配列またはその一
   部分から成つており、該ペプチドはＨＢｓ抗原に対する
   抗体によつて認識されることを特徴とする前記ペプチド
   。
2. （２）前記アミノ酸配列が式： アラニン−グルタミン−グリシン−トレオニン−セリン を有することを特徴とする特許請求の範囲第１項に記載
   のペプチド。
3. （３）前記アミノ酸配列が式： トレオニン−アラニン−グルタミン−グリシン−トレオ
   ニン−セリン を有することを特徴とする特許請求の範囲第１項に記載
   のペプチド。
4. （４）前記アミノ酸配列が式： トレオニン−トレオニン−アラニン−グルタミン−グリ
   シン−トレオニン−セリン を有することを特徴とする特許請求の範囲第１項に記載
   のペプチド。
5. （５）ハイブリッド蛋白質であつて、前記他の配列が、
   非−免疫原性を有する蛋白質、または、ＨＢＳ抗原の免
   疫学的特性を有するアミノ酸配列の免疫学的特性に悪影
   響を及ぼすことがない免疫原性を有する蛋白質に属する
   ことを特徴とする特許請求の範囲第１項〜第４項のいず
   れかに記載のペプチド。