JPH06509237A - ワクチンとしてのネコ白血病ウィルスｇｐ７０からの融合蛋白質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ワクチンとしてのネコ白血病ウィルス ｇｐ７０からの融合蛋白質 −発明の技術分野 本発明は、ネコ白血病ウィルス（ＦｅＬＶ）から誘導′　される免疫原融合組換 蛋白質およびこの免疫原蛋白質からなる予防ワクチンに関するものである。

発明の背景 ＦｅＬＶは亜科オンコビリネーのレトロウィルスである。このウィルスは、ウィ ルス蛋白質をコードする３種の遺伝子、すなわちｇａｇｓｐｏｌおよびｅｎｖを 持った簡単なゲノム構成を有する。

ＦｅＬＶは３種のサブ群ＡＳＢもしくはＣが見いだされ、そのｅｎｖ遺伝子が相 違する。ＦｅＬＶ−Ａは全ゆる分離体に存在し、天然のネコ間で効率的に伝染す る。

他の２種のサブ群のウィルスは、内生ＦｅＬＶ　ｅｎｖ遺伝子の組換（ＦｅＬＶ −Ｂ）もしくはｅｎｖ遺伝子内の突然変異（ＦｅＬＶ−Ｃ）により個々のネコに おけるＦｅＬＶ−Ａの変種として生ずる。したがって、サブ群ＢもしくはＣの発 生はＦｅＬＶ−Ａによるネコの天然感染に依存する。

ＦｅＬＶはリンパ性および骨髄性白血病、繊維肉腫、貧血症、免疫不全症、腸炎 および生殖不全を包含する飼ネコにおける数種の致命的病気の原因である。この ウィルスは自然界で普通にみられる。すなわち英国における最近の研究が示した ところでは、全体的な感染の度合は病ネコの約１５％であり、健康ネコの６％で ある。これらのネコはウィルス血症による永久的感染を有し、感受性動物の感染 源である。ＦｅＬＶは感染性唾液の移行を介する接触によって或いは胎盤を介し 出生前に伝染する。

ＦｅＬＶに対しネコが自然に或いは実験的に露呈された後、２種の可能性が生ず る。ネコは永久的な一生涯の感染を発現するか或いは回復する。永久感染したネ コはウィルス血症を有する一方、回復したネコはその血液にウィルスを持たない 。回復するネコは数週間もしくは数ケ月にわたり、除去されるまで骨髄内に潜在 的感染を有する。回復したネコは、その後のウィルス攻撃に対する耐性により証 明されるようにＦｅＬＶに対し免疫性となる。

２種の因子が感染の結果に影響を及ぼす。第１は、ネコがウィルスに露呈される 年齢である。１４週合間での子ネコは極めて感受性が高く、はぼ全部がウィルス 攻撃誘発により悪影響を受ける。それより高年齢の子ネコは一層耐性であって、 はぼ１６週合間て僅か約２０％のみが感染しうるにすぎない。感受性を支配する 他の因子はウィルスの量である。多量は永久的ウィルス血症をもたらす一方、少 量は免疫化をもたらす。永久的感染の結果は重大であって、はぼ全てのウィルス 血症のネコは感染から４年間以内に死亡する。これに対し、回復したネコは正常 な寿命を有する。

回復はウィルスに対する免疫反応に基づく。抗体反応のみが詳細に検討されてい る。しかしながら再感染に対する耐性は、ウィルスのエンベロブ表面グリコ蛋白 質、すなわちｇｐ７０に関連するウィルス中和性抗体によって媒介されることが 明かである。ｇｐ７０を含有するワクチンによりＦｅＬＶ感染に対しネコを免疫 化する試みがなされており、その幾つかが成功を収めている。

ヨーロッパ特許ＥＰ　０３７７８４２号明細書は、複製欠損ＦｅＬＶウィルス配 列の産生につき記載している。

米国特許第４，７９４，１６８号は、ワクチンにおけるＦｅＬＶエンベロブ蛋白 質Ｐ１５Ｅからの免疫原の使用に関するものである。ヨーロッパ特許第０２４７ ９０４号、第０１７３９９７号および第０２１６５６４号各公報、国際特許公報 ＷＯ３５１０２６２５号、並びに米国特許第４，７８９，７０２号は全て、抗原 としてのＦｅＬＶエンベロブ蛋白質ｇｐ７０もしくはその断片の使用につき記載 している。

発明の要点 本発明は、一般に隣接しないＦｅＬＶ分子の２つの領域からなる融合組換蛋白質 が合体するとネコに接種した際に抗ＦｅＬＶ抗体を誘発させうる免疫原決定子を 産生ずると言う知見に基づいている。免疫化されたネコは生きているＦｅＬＶの 攻撃誘発に対し耐性となる。

したがって本発明は、 ネコ白血病ウィルス（ＦｅＬＶ）ｇｐ７０　ＶＲＩ蛋白質またはそれに融合した 有効断片である第１蛋白質と、第１蛋白質とは異なると共に、融合組換蛋白質が ＦｅＬＶ感染に対し免疫原性かつ予防性となるよう第１蛋白質を安定化させうる 第２の非隣接ＦｅＬＶ蛋白質もしくはその有効断片と からなる免疫原性融合組換蛋白質を提供する。

ｇｐ７０　ＶＲＩ蛋白質を単独で使用すれば抗体を産生ずるが、ＦｅＬＶ感染に 対し予防性にならないことが判明した。

しかしながら、第２の非隣接ＦｅＬＶ蛋白質（またはその断片）を融合させれば 、ＦｅＬＶ感染に対し抗原性になると共に予防性にもなる融合組換蛋白質をもた らしつることが判明した。第２蛋白質も好ましくはｇｐ７０から誘導される。特 にｇｐ７０　ＶＲ５蛋白質（またはその断片）はそれ自身では抗体を産生じない が、第１蛋白質を安定化させうると共に驚くことに免疫原性および予防性を有す る融合蛋白質を産生ずることができる。

好ましくは、第２蛋白質はＶＲＩのカルボキシ末端に融合される。

一般に、融合組換蛋白質はグリコジル化を伴わない。

好ましくは融合組換蛋白質は、たとえばグルタチオン−５−トランスフェラーゼ （ＧＳＴ）またはβ−ガラクトシダーゼのような抗原性コブロチイン（ｃｏ−ｐ ｒｏｔｅｉｎ）をさらに含む。これら比較的大きいコブロチインは蛋白質を可溶 化させると共に、その産生および精製を容易にする。さらに、コブロチインは免 疫系の一般的刺激を与える意味でアジュバントとしても作用することができる。

好ましくは、コブロチインは融合蛋白質のアミノ末端に結合する。

驚くことに、コブロチイン（たとえばＧＳＴまたはβ−ガラクトシダーゼ）は融 合蛋白質のアミノ末端に対しその免疫原性に悪影響を与えることなく結合するこ とができ、しかも所望の溶解性および安定性を付与しうることが判明した。しか しながら、カルボキシ末端に対する他の蛋白質の結合は製造の際の分解に対し融 合蛋白質を安定化させるのに有用であるが、その免疫原性に悪影響を及ぼしうろ ことも判明した。これは、カルボキシ末端に結合したコブロチインの存在により もたらされるコンフオーメーンヨン上の変化に起因すると推定される。したがっ てカルボキシ末端に結合するコブロチインは、融合蛋白質の抗原コンフォーメー ションを乱さないよう比較的小型でなければならない。

本発明はさらに、免疫原融合組換蛋白質を適当なキャリヤと共に含んでなるワク チン組成物をも提供する。この蛋白質は胃内て分解されうるのて、好ましくは非 経口的（皮下、筋肉内、静脈内、皮肉などの注射を包含する）に投与される。非 経口投与に適する組成物は水性および非水性の無菌注射溶液を包含し、これらは 酸化防止剤、緩衝剤、制細菌剤および組成物を受容体の血液に対し等優性にする 溶質を含有することができ、さらに水性および非水性の無菌懸濁物をも包含し、 懸濁剤もしくは増粘剤を含有することができる。これら組成物は単位投与もしく は複数投与の容器（たとえば密閉アンプルおよび小瓶）で存在させることができ 、さらに使用直前に無菌液体キャリヤの添加のみを必要とする凍結乾燥状態で貯 蔵することができる。

このワクチン組成物はさらに組成物の免疫原性を増大させるアジュバント系、た とえば当業界で公知の水中油型アジュバント系および他のアジュバント系をも含 むことができる。

投与量はワクチンの比活性に依存すると共に、日常の実験により容易に決定する ことができる。

さらに本発明は融合組換蛋白質の作成方法をも提供し、この方法は： 第１蛋白質をコードするＤＮＡ配列をプラスミド中へ導入し： このプラスミドを開くと共に、第２蛋白質をコードするＤＮＡ配列を第１ＤＮＡ 配列に隣接して導入し；組換蛋白質を発現させる ことを特徴とする 特に、ＤＮＡ配列はＤＮＡ複製連鎖反応（ＰＣＲ）を用いて増幅させることがで きる。次いで増幅した配列を順次にプラスミドにおける隣接位置に挿入すること ができる。さらにプラスミドはＧＳＴもしくは同様なコブロチインをコードする 遺伝子を含むこともできる。

このように作成されたプラスミドは任意の適する細菌（たとえば大腸菌）で発現 させることができる。

たとえばｇｐ７０　ＶＲＩおよびＶＲ５蛋白質のような成る種の命名蛋白質を参 照して本発明につき説明したが、これは天然蛋白質およびたとえば融合組換蛋白 質の免疫原性に実質的に影響を及ぼさない付加、欠失もしくは買換を含む同様な 蛋白質の断片（たとえば５０％もしくはそれ以上の配列相同性を有する）を包含 すると了解すべきである。

第２蛋白質は、一般に天然ＦｅＬＶ　ｇｐ７０蛋白質における第１蛋白質に対し 隣接して位置しないものである。非隣接と言う用語は線状のアミノ酸配列にて隣 接しないことを意味する。

好適具体例の説明 以下、添付図面および実施例を参照して例示の目的で本発明を説明する。

第１図は融合組換蛋白質の作成に用いられるプラスミドｐＧＥＸ−２Ｔを示し； 第２図は制限部位を含む末端配列を示し；第３図は天然ＦｅＬＶ　ｇｐ７０　Ｖ ＲＩ配列を示し；第４図は天然ＦｅＬＶ　ｇｐ７０　ＶＲ５配列を示し；第５図 はＦｅＬＶ　ｇｐ７０遺伝子における可変領域の図面である。

以下、実施例により融合組換蛋白質ＧＳＴ−ＶＲＩ−ＶＲ５の作成および免疫原 性を示す。

これら実験に用いたクローン化ベクターはｐＧＥＸ−２Ｔ［スミス・アンド・ジ ョンストン、ジーン、第６７巻（１９８８）、第３１〜４０頁］である。ＦｅＬ Ｖｇｐ７０遺伝子断片をこのプラスミドにクローン化させて、酵素グルタチオン −ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）の−ＣＯＯＨ末端に融合したポリペプチド を生成させた。従来の実験が示したところでは、ｇｐ７０の大型断片（２０ｋｄ を越える）はしばしば不溶解性および分解の問題をもたらす。これらの問題を解 決する試みにおいて、広範な小型のｇｐ７０断片を発現させることに決定した。

さらに、発現のため選択した領域はｇｐ７０の「可変」領域、すなわちサブ群Ａ ＳＢおよびＣの間で最も大きい変動を示す領域である。

ＶＲＩ　を含むＦｅＬＶ　ｇｐ７０遺伝子の領域を次のプライマーにより増幅さ せた。クローン化したエンベロブ遺伝子を鋳型として用いた。

ＰＣＲ生成物を制限酵素ＢａｍＨＩおよびＥｃｏＲＩで切断し、その部位には予 め上記プライマーが組込まれている。これら２種の制限酵素のための部位は増幅 断片には存在しない。

切断されたＰＣＲ生成物をアガロースゲルての電気泳動によりＰＣＲ反応の生成 物による汚染物から分離した。

ＤＮＡ断片を含有するアガロースゲルの部分を切除し、ＤＮＡを電気溶出により 除去した。エタノール沈殿の後、ＤＮＡ断片をＢ　ａ　ｍ　ＨＩ　／　Ｅ　ｃ　 ｏ　ＲＩ切断ｐＧＥＸ−２Ｔにクローン化させた。

受容体イー・コリ（Ｅ、ｃｏｌｌ）菌株の形質転換の後、組ＩｋｐＧＥＸ−２Ｔ ／ＶＲプラスミドを有するクローンを分離した。　ＶＲ５領域にまたがるＤＮＡ 断片を増幅すべく次のプライマーを使用した： ５’　ＧＡＣＧＡＡ　ＴＣＣＣＡＧ　ＧＣＴ　ＴＴＧ　ＴＧＣＡＡＴ　ＡＡＧ　 ＡＣＡ　ＣＡＡ３’ｃｏＲ１ ５’　ＴＡＧ　ＧＡＡ　ＴＴＣＧＣＡ　ＴＧＣＧＧＴ　ＧＡＧ　ＴＣＣＡＧＴ　 ＧＴＴ　ＡＣＡ３′ＥｃｏＲＩ　５ｐｈｌ クローン化したＦｅＬＶ　ｇｐ７０遺伝子を再び鋳型として用い、ＰＣＲ生成物 をＥｃｏＲＩで切断した後にアガロースで精製した。このＰＣＲ生成物を上記ｐ ＧＥＸ−２Ｔ／ＶＲＩプラスミドにクローン化させた。ＶＲｌに対し正確に配列 したＶＲ５を有するクローンをＤＮＡ配列分析および制限酵素分析の両者によっ て同定した。

日本住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｓａ　ｊａｐｏｎｉｃｕｓ　）のグルタチオ ン〜Ｓ−）ランスフェラーゼ（Ｇ　Ｓ　Ｔ）は小さい極めて可溶性の酵素であっ て、そのカルボキシル末端における挿入に耐えうる。この酵素をコードする遺伝 子（Ｓｉ２０）を誘発性プロモータの制御下に置くと共にアンピシリン耐性マー カーと一緒にプラスミド中に導入した。

多重制限部位を、トロンビン切断部位をコードする領域に対し直列に５ｊ２６の ３′末端に導入した。得られたプラスミド（ｐＧＥＸ−２７）は、親和性クロマ トグラフィーにより抽出しつる多量の融合蛋白質を産生ずることができる。この 融合蛋白質は切断可能であり、得られるペプチドは親和性クロマトグラフィーを 反復して精製することができる。

以下の材料および方法は日常の実験室慣例の１部であって、「モレキュラ・クロ ーニング、ア・ラボラトリ−・マニュアル」、第２版、サムプルツク、フリッチ およびマニアチス編、並びに「カレント・プロトコールス・イン番モレキュラ・ バイオロジー」に見ることができる。

以下は用いた材料および方法の詳細な説明である。

材料 １ｍｌ　２Ｍグルコース １　ｍ　１　１　Ｍ　Ｍ　ｇ　Ｃ１２ ２０００Ｘ　Ｉ　ＰＴＧ １ｇイソプロピルＤチオーガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ） ８ｍｌ水（１０ｍ　ｌにする） フィルタを滅菌し、０．５ｍｌの量に分配し、−２０”Ｃて凍結させる。

１００１００ＯＸＰ　（イソプロパツール中）］、　ｍ　ｇ　／　ｍ　ｌフェニ ルメチルスルホニルフルオライド２０％　ＴＸｌｏｏ ２ｍｌ　ＴＸｌｏｏ ８ｍｌ水 フィルタを滅菌する。この濃度にて取扱いが容易である。

グルタチオン／トリス ２５０ｍ１　１．０Ｍ）リス ４．７５ｍ１水 ３０．７３ｍｇグルタチオン フィルタを滅菌する。

（ａ）グルタチオンビーズの作成 １５ｍ１のポリプロピレンチューブに、７０ｍｇの脱水されたグルタチオンアガ ロースビーズを１０ｍ１のＰＢＳ／１％　ＴＸｌｏｏにより３０分間緩和に攪拌 しながら膨潤させた。

次いで、これらを５分間２００Ｏｒｐｍにて沈殿させた。ビーズを５ｍｌのＰＢ Ｓに再懸濁してこれらを洗浄し、この手順を３回反復した（Ｐ　Ｂ　Ｓ／１％　 ＴＸｌｏｏもしくはＰＢＳ／ツイーンは有効な代替物である）。

（ｂ）融合蛋白質の産生 １、　興味の対象である蛋白質をコードするＤＮＡを含んだ組換ｐＧＥＸプラス ミドによりトランスフェクトされた細菌菌体を１００ｍ１の強化しブロス中でア ンピシリンの存在下に１晩培養した。

２、　１晩の培養物を９００ｍ１の強化しブロス（アンピシリンを含む）に接種 した。細菌懸濁物を激しく振とうしながら約０．６の０．Ｄ　（５５０ｎｍ）ま で増殖させ（約２時間）、次いてＩ　ＰＴＧを５０μｇ／ｍｌの最終濃度まで添 加した。培養物をさらに９０分間放置した。培養を行わせながら、膨潤した洗浄 グルタチオンビーズを下記の段階５に使用すべく作成を開始した。

３、　次いで培養物を６００Ｏｒｐｍにて１５分間遠心分離した。上澄液を捨て た。ベレットを１０ｍ１のＰＢＳ／１％　ＴＸｌｏｏに再懸濁させた。イソプロ パツール中における１０μｌのＰＭＳＦを添加した。

４、　濃縮した細菌懸濁物を水中で３０秒間にわたり超音波処理し、次いで１８ ０００ｒｐｍにて１５分間遠心分離した。上澄液を保持した。

５、　次いでビーズを上記工程４からの上澄液に再懸濁させ、２０％　ＴＸｌｏ ｏを１％　ＴＸｌｏｏの最終濃度まで添加した。この混合物を緩和に１時間攪拌 した。

６、　混合物を２００Ｏｒｐｍにて１５分間遠心分離し、ビーズを上記と同様に ３回洗浄した。１ｍｌの２０ｍ　Ｍグルタチオン／　５０　ｍ　Ｍ　トリスの溶 液をビーズに添加して３０分間放置した。ビーズを再び遠心分離しく上澄液を保 持する）、さらに１ｍｌの上記グルタチオン溶液により１回洗浄した。洗液を上 澄液に加えた。

７、この上澄液は融合蛋白質を含有する。これを証明するため、１部をとってお くべきである。次いで上澄液をＰＢＳ中で１晩透析して、過剰のグルタチオンを 除去した。次いで一２０℃にて凍結させることができる。

この作成は成る程度の分解および／または不完全な合成を示した。しかしながら 、これら実験を行うのに充分な材料が２リツトルの培養物から得られた（４ｍｇ 　総蛋白質）。

殆どの若い子ネコはＦｅＬＶ感染の危険を有するので、重合の子ネコを予防する と共に他のネコウィルスに対するワクチン接種のタイミングに適合するワクチン の能力を試験すべく免疫化方式を設計した。

攻撃誘発のルートは、ＦｅＬＶの自然水平伝染を模倣すべく口臭の経路による。

１４週令の子ネコの９０％以上に永久的ウィルス血症をもたらす量のウィルスを 用いた。

ワクチン接種および監視のスケジュールを第１表に示す。ワクチン接種攻撃誘発 に対する子ネコの反応を第２表に示す。

ＶＲＩ−ＶＲ５調製物は免疫反応を示した。発生した抗体の大部分は、ＥＬ　Ｉ 　ＳＡ分析により測定したように組換分子のＧＳＴ部分に向けられている。しか しながら、天然ＧＳＴおよび組換蛋白質を用いる競合ＥＬＩＳＡ分析は、免疫化 されたネコが組換蛋白質のＦｅＬＶ成分に対しても反応したことを示した。

抗原としてＦｅＬＶを用いるウェスタンプロット分析は、４匹のＶＲＩ−ＶＲ５ 処理ネコノうち３匹（５９，６１，６２）が容易に検出しうる抗−ｇｐ７０抗体 を産生じたのに対しネコ６０はウェスタン分析にて弱い反応しか与えないことを 示した。対照は全て陰性であった。

ウィルス中和性抗体が攻撃誘発の前の１匹のネコで見られ、さらに４匹のネコの うち２匹にて攻撃誘発の６週間後に見られた。

４匹のワクチン接種ネコのうち３匹（５９，６１，６２）はさらにウィルス分離 につき攻撃誘発の３週、６週および９週間後に陰性であることが判明し、４匹の 対照動物は全てウィルス血症を発症した。

免疫処理および攻撃誘発に対するネコの反応は、ＶＲｌ−ＶＲ５３１製物が抗ｇ ｐ７０抗体反応を発生すると共にウィルスの攻撃誘発から動物を予防しうろこと を示す。

第１表 子ネコの年齢　攻撃誘発から　現象 ワクチン接種−１ １２−２血液試料 ワクチン接種−２ １４０血液試料 攻撃誘発 １７　３　血液試料 ２０　６　血液試料 ２３　９　血液試料 配列リスト（第２図） ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１ 配列型：誘導蛋白質配列を有する 配列長さ；５１塩基対 鎧型ニ一本用 トポロジー二線状 分子型ニゲツムＤＮＡ 初期原料 生物体；ネコ白血病ウィルス（ＦｅＬＶ）使用： 寄託： 配列リスト（第３図） ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２ 配列型：２０８塩基対 鎧型ニ一本用 トポロジー二線状 分子型ニゲツムＤＮＡ 初期原料 生物体：ネコ白血病ウィルス（Ｆ　ｅ　ＬＶ）使用：融合蛋白質におけるワクチ ンとして寄託： 配列リスト（第４図） ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３ 配列型：誘導蛋白質配列を有するヌクレオチド配列長さ：４２塩基対 鎧型ニ一本用 トポロジー：線状 分子型ニゲツムＤＮＡ 初期原料 生物体二ネコ白血病ウィルス（ＦｅＬＶ）使用：融合蛋白質におけるワクチンと じて」ユ」 乙ユユ ム１１ ＦａＬＶ　ＶＨ２ ＣＡＧ　ＧＣＴ　ＴＴＧ　ＴＧＣＭＴ　ＭＧ　ＡＣＡ　ＣＡＡ　ＣＡＧ　ＧＧＡ 　ＣＡＴ　ＡＣＡ　ＧＧＧ　ＧＣＧＧｌｎ　Ａｌａ　Ｌａｕ　Ｃｙｓ　Ａｓｎ　 Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　Ｇｌｎ　Ｇｉｎ　Ｇｌｙ　Ｈｉｓ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　ＡｌａＣ ＡＣＴＡＴ　ＣＴＡ　ＧＣＣＧＣＣＣＣＣＡＡＣＧＧＣＡＣＣＴＡＴ　ＴＧＧ　 ＧＣＣＴＧＴ　ＡＡＣＨｉｓ　Ｔｙｒ　Ｌ＠ｕ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ａｓ ｎ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｔｙｒ　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｃｙｓ　ＡｓｎＡＣＴ　ＧＧＡ 　ＣＴＣＡＣＣ Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｌａｕ　Ｔｈｒ 、１１−Ｎｍ　”■／ＧＢ　９３１００９９６国際調査報告 フロントページの続き （５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，５識別記号　庁内整理番号Ｃｌ２Ｎ　１５／６２ Ｉ

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. １．ネコ白血病ウィルス（ＦｅＬＶ）ｇｐ７０　ＶＲ１蛋白質である第１蛋白質 またはそれに融合した有効断片と； 第１蛋白質とは異なると共に、融合組換蛋白質がＦｅＬＶ感染に対し免疫原性か つ予防性となるよう第１蛋白質を安定化させうる第２の非隣接ＦｅＬＶ蛋白質も しくはその有効断片と からなることを特徴とする免疫原性融合組換蛋白質。
2. ２．前記第２蛋白質が前記第１ＶＲ１蛋白質のカルボキシ末端に融合する請求の 範囲第１項に記載の融合蛋白質。
3. ３．第２蛋白質もしくはその断片がＦｅＬＶ　ｇｐ７０から誘導される請求の範 囲第１項または第２項に記載の融合蛋白質。
4. ４．第２蛋白質がＦｅＬＶ　ｇｐ７０　ＶＲ５蛋白質またはその有効断片である 請求の範囲第３項に記載の融合蛋白質。
5. ５．抗原性コプロテインをさらに結合させてなる請求の範囲第１〜４項のいずれ かに記載の融合蛋白質。
6. ６．コプロテインがそのアミノ末端に結合する請求の範囲第５項に記載の融合蛋 白質。
7. ７．コプロテインがグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼまたはβ−ガラクト シダーゼである請求の範囲第５項または第６項に記載の融合蛋白質。
8. ８．請求の範囲第１〜７項のいずれかに記載の融合蛋白質を医薬上許容しうるキ ャリヤと共に含んでなるワクチン組成物。