KR960013130B1 - 식물 종묘의 증식방법 - Google Patents

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미쓰이 세끼유 카가꾸 코오교오 가부시기가이샤
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Abstract

내용없음

Description

식물 종묘의 증식방법
본 발명은 식물을 특정의 방법으로 조직배양함으로써 종묘(種苗)를 대량으로 증식하는 방법에 관한 것이다.
양배추, 토마토, 오이등의 야채류나 벼는 식용으로 이용되고 있고, 또 튜울립, 수레국화, 루도베키아등은 원예식물로서 감상용으로 애호되고 있다. 이들 식물의 증식은 종래 파종, 구근 분할, 관상기관 분할에 의하여 실시되었다. 그러나 이와 같은 증식법은 많은 토지와 사람이 손을 필요로 할 뿐만 아니라, 근래에는 바이러스병의 만연으로 인해 종묘의 생육속도 저하나 꽃의 품질 저하가 문제로 되고 있다. 또한, 우량형질을 갖는 품질을 육성 유지하기 위해서는 영양번식을 실행시키는 것이 효과적이다. 이러한 문제점을 개량하고, 증식효율의 향상을 목적으로 하여 근년 식물조직배양기술을 이용한 방법도 보고되고 있다(예를 들면 일본 특개소 55-15734호 공보). 조직배양기술에 의한 증식은 배양조직편, 배양세포로부터의 부정아(不定芽), 부정배(不定胚), 구근등의 분화를 거쳐서 달성되고, 또 이들의 분화는 식물 호르몬인 사이토카이닌과 오키신의 농도비율에 의해서 제어되고 있는 것으로 생각되어 왔다(예를 들면, 문헌 : Annals fo Botany, 제45권, 321-327, 1980년), 그런, 식물 호르몬만으로는 분화가 일어나지 않는 식물종이나 분화가 일어나도 그 빈도가 대단히 낮은 식물종도 다수 존재하는 바, 보다 직접적이고 또한 효과적인 분화유도 방법의 확립이 기대되고 있다.
본 발명자등은 종래 식물의 조직배양 방법에는 상기한 여러가지의 문제점이 있음을 확인하고, 종래법과는 상이한 신규의 방법으로 식물을 조직배양시켜 그 식물의 종래에 비해서 효율적으로 증식하는 방법에 대하여 검토했다.
그 결과, 본 발명자들은 식물의 세포에 작용해서 그 식물의 부정아, 부정배 및 구근의 분화를 촉진시키는 물질을 발견하여, 이들의 확인을 기초로 하여 식물의 종묘를 효과적으로 증식하는 방법을 발견하였다. 즉, 본 발명의 방법에 의하면, 식물의 조직편 또는 배양세포의 세포속에 칼슘(calmodulin) 및/또는 칼슘을 도입하고 나서 조직배양하는 것을 특징으로 하는 식물 종묘의 증식방법이 제공된다.
본 발명에 관한 조직배양 방법을 적용시킬 수 있는 식물은 특별한 제한은 없고, 모든 식물에 대하여 적용시킬 수 있다.
본 발명의 방법을 적용할 수 있는 식물로서 구체적으로는 앵속목, 가지목, 미나리목, 장미목, 국화목, 풍로초목, 오이목, 벼목등에 속하는 식물을 예시할 수 있다. 또 그 식물로서 구체적으로 문헌[야마기시편집, 「식물계통 분류의 기초」고꾸류칸, 1974년]년 기재되어 있는 식물을 예시할 수 있고, 보다 구체적으로 가지목에 속하는 식물로서 가지, 토마토, 감자, 고무마, 자소등이 있고,, 앵속목에 속하는 식물로서 앵속(양귀비), 유채, 양배추, 무, 백채(白菜)등이 있고, 미나리목에 속하는 식물로는 당근, 미나리, 파슬리등이 있고, 장미목에 속하는 식물로는 장미, 딸기, 대두, 벚등이 있고, 나리목에 속하는 식물로는 옥파, 튜울립등이 있고, 국화목에 속하는 식물로서는 국화, 수레국화, 해바라기등이 있고, 풍로초목에 속하는 식물로는 풍로초, 천축규(양아욱), 아마등이 있고, 오이목에 속하는 식물로는 오이, 호박등이 있고, 벼목에 속하는 식물로는 벼, 옥수수등을 들 수 있다. 본 발명에 관한 이들의 식물 중에서도 바람직한 식물로서 구체적으로 토마토, 가지, 담배, 토레니아, 당근, 양배추, 옥파, 대두, 자소, 수레국화, 루도베키아, 카네이션, 나팔나리, 튜울립, 아스파라거스, 아마, 오이, 벼 등을 들 수 있다.
본 발명에서 식물의 조직배양은 그 식물의 조직편 또는 배양세포를 사용해서 실시할 수 있다. 그 조직배양편으로서 구체적으로는 자엽, 배축, 경정, 줄기, 잎, 인편, 뿌리 또는 그 밖의 조직을 작은 조각으로 절단한 식물의 조직편을 예시할 수 있다. 이들 조직편은 보통, 차아염소산나트륨아니 에틸알콜로 살균한 후에 사용된다. 그런, 무균적으로 재배한 식물을 사용할 경우에는 상기의 살균조작은 불필요하다. 또한, 무병·무바이러스의 식물의 종묘를 증식할 경우에는 배양재료로서 생장점 부근의 조직, 생장점 부근의 조직에서 얻은 식물의 전술한 조직편등을 사용할 수 있다. 본 발명 식품의 조직배양에 있어서 사용할 수 있는 배양세포로는, 상기 조직편을 공지의 방법으로 조직배양하므로써 얻어지는 칼루스 조직을 포함한 미분화의 부정형 세포가 있다.
본 발명에서 식물의 조직편 또는 배양세포를 조직배양시켜 식물의 종묘를 형성하는데 있어서 이하에 설명하는 방법이 채용된다.
본 발명에 관한 조직배양 방법에서는 식물의 조직편 또는 배양세포의 세포속에 칼모듈린 및/또는 칼슘을 도입하고 나서 조직배양을 실시한다.
본 발명에 있어서 칼슘이란 적혈구막의 Ca2+-ATPase나 뇌의 포스포디에스테라제등의 활성화 능력을 가지고, 전기영동을 실시했을 때에 칼슘존재하에서 이동도가 작아지는 단백질이다. 칼모듈린은, 예를 들면, 나팔나리의 구근, 소의 대뇌, 래트의 정소등으로부터 통상의 전기영동법에 의해 단리 정제할 수 있다. 또한, 칼모듈린은 일본의 와코 퓨어 케미칼 인더스트리즈, 리미티드 및 후나코시 컴패니 리미티드에서 상표명 「CALMODULIN」으로 시판되고 있다.
이하, 본 발명에 관한 칼모듈린 및/또는 칼슘을 세포속에 도입하고 나서 조직배양시키는 방법에 대하여 상세히 설명하고자 한다.
(1) 본 발명에 관한 조직배양 방법에 의하면, 식물의 조직편 또는 배양세포의 세포속에 칼모듈린으로 명명되는 특징의 단백질을 도입하고 나서 조직배양하는 방법이 제공된다.
본 발명에 관한 칼모듈린의 도입방법으로는 하기의 방법을 예시할 수 있다. 조직배양을 하고자 하는 식물의 조직배양편 또는 배양세포를 전극 사이에 놓고, 칼슘을 함유하는 용액을 첨가한 후, 전계강도 30V/cm 내지 1.5K/cm의 펄스를 3μ초 내지 1m초 부여하므로써 칼모듈린의 도입처리를 실시한다. 이때, 상기 용액중의 칼모듈린은 보통 3㎍/ml 내지 1mg/ml의 농도로 사용되는 것이 바람직하다. 칼모듈린의 세포내의 도입방법으로는 상기의 전기적 주입법 이외에도 현미경 아래에서 유리 마이크로피펫을 사용하여 칼모듈린을 함유하는 용액을 세포내부로 주입하는 방법, 일본 특공소 62-7838호 공보에 제안되어 이는 생세포내에 물질을 이입하는 방법을 응용해서 칼모듈린함유 용액중에 있는 세포에 레이저광 펄스를 조사하여 세포에 서브미크론의 미소한 구멍을 뚫어 이 구멍으로부터 칼모듈린을 세로 내부로 취입시키는 방법, 또는 최근 보고된 텅스텐탄에 의하여 대분자를 식물세포중에 도입하는 방법등 여러가지의 방법을 사용할 수 있다. 본 발명에서 상기 방법등에 의하여 세포내부에 도입되는 칼슘의 양은, 칼모듈린을 형광색소에 의하여 표식하고, 세포내부로의 도입후에 형광강도를 측정하므로써 알 수 있으나, 통상은 1㎍/ml-300㎍/ml, 바람직하게는 10㎍/ml-100㎍/ml의 범위에 있다.
본 발명에 관한 식물의 조직편 또는 배양세포의 세포속에 칼모듈린을 도입한 후 조직배양하는 방법에서는, 칼모듈린 도입후에는 후술하는 배지를 사용해서 조직배양해도 좋으나, 칼슘이온을 통상 1mM 이상 함유하는 배지를 사용해서 조직배양하면 식물의 부정아, 부정배, 구근의 분화가 더욱 촉진되므로 바람직하다. 이 경우, 특히 본 발명자가 일본국 특원소 61-308539호에서 제안한 A23187등의 칼슘 이오노포어를 통상 10-8-10-4M, 바람직하게는 10-7-10-5M의 범위로 함유하는 배지를 사용해서 조직배양하면 상기의 분화가 현저하므로 바람직하다. 또한 본 발명에 있어서, 식물의 조직배양편 또는 배양세포를 전술한 A23187등의 칼슘 이오노포어를 10-8-10-4M의 범위로 함유하는 배지를 사용해서 조직배양한 후에 칼모듈린을 도입하여 다시 조직배양하면 분화가 더욱 촉진되므로 바람직하다.
(2) 본 발명에 관한 조직배양 방법에 의하면 식물의 조직편 또는 배양세포의 세포속에 칼슘을 도입한 다음 조직배양하는 방법이 제공된다.
본 발명에 관한 칼슘의 도입방법은 칼모듈린 도입의 경우와 동일한 방법으로 실시할 수 있다. 예를 들면, 전기적 주입법의 경우는 조직편 또는 배양세포를 전극 사이에 놓고 칼슘함유 용액을 첨가한 후에 펄스를 부여하므로써 칼슘을 세포내로 도입할 수가 있다. 이 경우의 칼슘함유 용액중의 칼슘이온농도는 보통 100μM 내지 30mM의 범위에 있다. 칼슘함유 용액으로서 구체적으로 염화칼슘, 질산칼슘, 탄산칼슘등의 칼슘 화합물등을 용해시킨 수용액을 예시할 수 있다. 본 발명에서 상기 방법에 의하여 세포 내부로 도입되는 칼슘의 양은 칼모듈린의 경우와 동일하게 표시하여 보통은 10-8M-10-5M, 바람직하기로는 10-6M-10-5M의 범위에 있다.
(3) 본 발명에 관한 조직배양 방법에 의하면 식물의 조직편 또는 배양세포의 세포중에 칼슘과 칼모듈린을 도입한 후 조직배양하는 방법이 제공된다.
본 발명에 있어서, 상기 방법은 상기 (1),(2)의 방법과 비교해서 식물의 부정아, 부정배 및 구근의 분화가 현저히 촉진되므로 특히 바람직한 방법이다. 칼모듈린과 칼슘을 세포내부에 도입하는 방법은 상기 (1),(2)의 경우와 동일하게 실시할 수가 있고, 예를 들면, 식물의 조직편 또는 배양세포를 전극 사이에 놓고, 칼모듈린을 함유하는 칼슘함유 용액을 첨가한 후에 상기와 동일한 전계강도의 펄스를 동일한 방법으로 부여하므로써 도입처리를 할 수 있다. 이때 상기 용액중의 칼모듈린과 칼슘이온의 농도는 상기 (1),(2)의 경우와 같은 범위에 있고, 또 세포중에 도입되는 칼모듈린과 칼슘이온의 양도 상기 (1),(2)의 경우와 같은 범위에 있다.
본 발명에서는 칼모듈린과 칼슘을 세포 내부에 도입할 경우, 전술한 바와 같이 칼모듈린을 함유하는 칼슘함유 용액을 사용해서 칼모듈린에 칼슘이온을 결합시켜서 동시에 세포속에 도입하는 방법이 통상적으로 적절히 사용되지만, 필요에 따라 칼슘과 칼슘을 따로따로 상기 방법등에 의해 세포속에 도입하고 나서 조직배양하는 방법을 사용해도 좋다.
칼슘 및/또는 칼슘의 도입후에 실시되는 조직배양에 있어서 사용되는 배지로서는 이하에 상세히 설명하는 배지를 예시할 수 있다.
본 발명에서 사용하는 배지는 무기성분 및 탄소원을 필수성분으로 하고, 이것에 식물 호르몬류, 비타민류를 첨가하고, 다시 필요에 따라 아미노산류를 첨가한 배지이다. 상기 배지의 무기성분으로는 질소, 인, 칼륨, 나트륨, 칼슘, 마그네슘, 황, 철, 망간, 아연, 붕소, 몰리브덴, 염소, 요오드, 코발트등의 원소를 함유하는 무기염을 들 수 있고, 구체적으로는 질산칼륨, 질산나트륨, 질산암모늄, 염화암모늄, 염화칼륨, 염화칼슘, 인산 1 수소 칼륨, 인산 2수소 나트륨, 황산마그네슘, 염화마그네슘, 황산나트륨, 황산 제 1 철, 제 2 철, 황산망간, 황산구리, 몰리브덴산나트륨, 3산화몰리브덴, 요오드화 칼륨, 황산아연, 붕산, 염화코발트등의 화합물을 예시할 수 있다.
상기 배지의 탄소원으로는 설탕등의 탄수화물과 이의 유도체, 지방산등의 유기산 및 에탄올 등의 1급 알콜등을 예시할 수 있다.
상기 배지의 식물 호르몬으로서는, 예컨대, 나프탈렌아세트산(NAA), 인돌아세트산(IAA), p-클로로페녹시아세트산, 2,4-디클로로페녹시아세트산(2,4-D), 인돌부티르산(IBA) 및 이들의 유도체등의 오키신류 및 벤질아데닌(BA), 카이네틴, 제아틴등의 사이토카이닌류를 예시할 수 있다.
상기 배지의 비타민류로서는 비오틴, 티아민(비타민 B1), 피리독신(비타민 B6), 피리독살, 피리독사민, 판토텐산칼슘, 아스코르빈산(비타민 C), 이노시톨, 니코틴산, 니코틴산아미드 및 리보플라빈(비타민 B2)등을 예시할 수 있다.
상기 배지의 아미노산으로서는, 예컨대, 글리신, 알라닌, 글루타민산, 시스테인, 페닐알라닌 및 리신등을 예시할 수 있다.
본 발명의 상기 배지는 통상적으로 상기 무기성분을 약 0.1μM 내지 약 100mM, 상기 탄소원을 약 1g/l 내지 100g/ℓ, 상기 식물 호르몬을 약 0.01mg/1 내지 약 10mg/1, 상기 비타민류를 약 0.1mg/1 내지 약 150mg/1 및 상기 아미노산류를 0 내지 약 1000mg/1 함유해서 사용하는 것이 바람직하다.
본 발명에 관한 조직배양에 사용되는 상기 배지로서 구체적으로는 종래부터 공지된 식물의 조직배양에 사용되고 있는 배지, 예를 들면 무라시게 스쿡(62)[Murashige Skoog]의 배지, 린스마이어 스쿡(RM-1965)[LinsmaierSkoog]의 배지, 화이트('63)[White]의 배지, 갬보그[Gamborg]의 B-5 배지, 미쓰이(三井)의 M-9 배지, 니치·니치[Nitch Nitch]의 배지등에 상기 설명한 탄소원 및 식물 호르몬을 첨가하고, 또 필요에 따라서 상기 설명한 비타민류, 아미노산류를 첨가해서 조제되는 배지를 예시할 수 있으나, 본 발명에서는 이 중에서도 특히, 니치·니치, 린스마이어·스쿡 또는 무라시케·스쿡의 배지를 사용하여 조제되는 배지가 바람직하다. 본 발명에서는 상기 배지에 일본 특원소 61-308539호에서 제안한 칼슘 이오노포어, 사이클릭 AMP, 폴리아민을 첨가한 배지를 사용해도 좋다. 또한, 상기한 종래 공지된 배지의 조성에 관해서는, 예를 들면, 다께우찌, 나까지마, 후루야의 공동 저서인 「신식물조직배양」 p386-p391, 아사구리서점, 1979년에 기재되어 있다.
본 발명에서 사용할 수 있는 상기 배지는 액체 배지 또는 예를 들면, 한천이나 겔라이트등의 겔화제를 통상 0.1-2% 함유시킨 고형 배지이다.
본 발명에서는 상기한 식물의 조직편 또는 배양세포는 본 출원인에 의한 일본 특원소 60-128348호와 동일한 함유기체를 통기시킨 액체배지를 사용해서 조직배양할 수도 있다.
본 발명의 방법에 의하면, 식물의 조직편 또는 배양세포로부터 부정아. 부정배, 자구(소구근)등을 효과적으로 다량 얻을 수 있다. 이점에 대하여 다시 언급하면 본 발명의 방법에 의해 얻어지는 부정아는 이것을 발근시켜서 식물체로 한 다음 가늘게 잘라서 조직편으로 만들고, 또 자구도 동일하게 가늘게 잘라서 이들을 다시 본 발명에 관한 상기의 배양방법에 의해 조직배양하며, 종묘를 대량으로 증식시킬 수가 있다. 또 본 발명에서 얻은 식물은 통상의 재배를 실시하면 성질이 일정하고 온전한 식물체로 생장시킬 수 있다.
본 발명에 관한 식물의 조직편 또는 배양세포의 세포중에 칼모듈린 및/또는 칼슘을 도입한 다음 조직배양하는 방법을 사용하면 식물의 부정아, 부정배 및 구근의 분화가 현저히 촉진되므로, 이를 통해서 종묘를 다량으로 증식할 수 있다. 따라서, 본 발명의 방법에 의하면, 식물의 조직 또는 배양세포로부터 종래법에 비해 효과적이고 고품질인 식물체를 다량으로 배양할 수 있고, 종묘를 다량으로 증식할 수 있다. 또한 본 발명의 방법을 사용하면 분화된 부정아의 줄기의 직경이 굵어지므로, 우량종묘를 얻을 수 있다. 이 방법은 본 발명에 관련되는 신규한 발견에 따르는 조직배양 방법이다.
실시예 1
나팔구리 구근의 인편을 70%의 에탄올 및 차아염소산나트륨 수용액(유효염소량 1%)으로 살균하여 약 2mm폭으로 절단한 후, 전극 사이에 놓고, 나팔나리 구근으로부터 단리정제한 칼슘 100㎍/ml를 함유하는 3mM의 염화칼슘용액을 첨가하고, 전계강도 500V/cm의 펄스를 200μ초간 3회 부여한 후, 설탕 4%, 나프탈렌 아세트산 0.01mg/1 , 벤질아데닌 0.02mg/l를 함유하는 pH6.0의 무균의 무라시게 수쿡(1962년)의 고형배지(겔라이트 농도 0.2%)를 조제하고, 이것에 상기 나팔구리 구근의 인편의 절편을 10개 첨가하여 25℃로 밝은 장소에서 3주간 배양한 결과 절편 하나당 구근의 형성수를 표시하는 하기 표 1의 결과를 얻었다. 어느 것이나 처리한 시료에서는 분화해서 얻어지는 구근수가 비교예 1과 비교해서 증가되었다.
비교예 1
실시예 1에 있어서, 칼슘을 함유하는 염화칼슘용액 대신에 증류수를 사용하는 것이외에는 실시예 1과 동일한 방법으로 나팔나리편의 절편을 배양했다.
실시예 2-3
실시예 1에 있어서, 재료로는 나팔나리 잎의 절편, 나팔나리 칼루스 세포를 사용하는 것 이외에는 실시예 1과 동일한 방법으로 나팔나리를 조직배양한 결과, 하기 표 1의 결과를 얻었다. 어느 경우에서도, 처리한 시료에서는 분화하는 구근수도 비교예 2-3에 비해서 증가했다.
비교예 2-3
실시예 2-3에 있어서, 칼모듈린을 함유하는 염화칼슘용액 대신 증류수를 사용하는 것 이외에는, 실시예와 동일한 방법으로 나팔나리 잎의 절편과 나팔나리 칼루스 세포를 조직배양 하였으며, 그 결과를 표 1에 나타내었다.
실시예 4-5
실시예 3에 있어서, 도입하는 칼모듈린으로서, 소의 대뇌 또는 래트의 정소로부터 단리정제한 칼슘을 사용한 것 이외에는 실시예와 동일한 방법으로 나팔나리 칼루스 세포를 조직배양한 결과를 하기 표 1에 표시했다.
[표 1]
Figure kpo00001
Figure kpo00002
실시예 6-14
실시예 1에 있어서, 재료로서 토마토 잎 절편, 토마토 칼루스 세포, 가지 잎 절편, 가지 칼루스 세포, 담배잎 절편, 트레니어 줄기 절편, 카네이션 줄기 절편, 양배추 배축 절편, 양파 인편 절편을 사용하는 것 이외에는 실시예와 동일한 방법으로 조직배양한 결과를 하기 표 2에 나타내었다. 어느 것이나 처리한 시료에서는 분화해서 얻어지는 부정아 수가 비교예 4-12에 비해서 증가되었다.
비교예 4-12
실시예 6-14에 있어서, 칼슘을 함유하는 염화칼슘용액 대신 증류수를 사용하는 것 이외에는 실시예와 동일한 방법으로, 토마토 잎 절편, 토마토 칼루스 세포, 가지 잎 절편, 가지 칼루스 세포, 담배 잎 절편, 트레니어 줄기 절편, 카네이션 줄기 절편, 양배추 배축 절편, 양파 인편 절편을 조직배양한 결과를 하기 표 2에 나타내었다.
[표 2]
Figure kpo00003
실시예 15-20
실시예 1에 있어서, 재료로서 자소 잎 절편, 수레국화 자엽 절편, 루도베키아 잎 절편, 튜울립 인편 절편, 아마 줄기 절편, 아스파라거스 줄기 절편을 사용하는 것 이외에는 실시예와 동일한 방법으로 조직배양한 결과를 하기 표 3에 나타내었다.
비교예 13-18
실시예 15-20에 있어서, 칼모듈린을 함유하는 염화칼슘용액 대신에 증류수를 사용하는 것 이외에는 실시예와 동일한 방법으로 자소 잎 절편, 수레국화자엽 절편, 루도베키아 잎 절편, 튜울립 인편 절편, 아마 줄기 절편, 아스파라거스 줄기 절편을 조직배양한 결과를 하기 표 3에 나타내었다.
[표 3]
Figure kpo00004
실시예 21-28 및 비교예 19
실시예 1에서 사용한 살균처리된 나팔나리 구근의 인편을 약 2mm폭으로 절단한 후, 전극 사이에 놓고, 나팔나리 구근으로부터 단리정제한 칼모듈린을 표 4에 표시한 농도로, 또는 염화 칼슘을 표 4에 표시한 농도로 함유하는 용액을 상기 절단편에 첨가하여 실시예 1과 동일한 방법으로 나팔나리 인편 절편을 배양한 결과를 하기 표 4에 나타내었다.
또한 실시예 27에서는 도입처리에 의하여 세포내에 도입된 칼모듈린은 약 33㎍/ml이고, 또 세포내 Ca2+농도는 10-7M에서 6×10-5M까지 상승했다.
[표 4]
Figure kpo00005
Figure kpo00006
실시예 29-37
실시예 10, 11, 14에 있어서, 염화칼슘을 표 5에 표시한 농도로 함유하는 용액을 사용해서 실시예 1과 동일한 방법으로 조직배양한 결과를 표 5에 나타내었다.
실시예 38-40
실시예 3, 11, 14에 있어서, 조직편 또는 배양세포를 3 내지 7일간, A23187를 10-6M 함유하는 배지에서 배양한 후, 100㎍/ml의 칼모듈린용액을 사용해서 전기펄스를 부여하고, 다시 조직배양한 결과를 표 6에 나타내었다.
실시예 41-43
실시예 3, 11, 14에 있어서, 100㎍/ml의 칼슘을 사용해서 실시예 1과 동일한 방법으로 칼모듈린 도입처리를 실시한 후, A23187를 10-6M 함유하는 배지에서 조직배양한 결과를 표 6에 나타내었다.
[표 5]
Figure kpo00007
[표 6]
Figure kpo00008
실시예 44-49
실시예 1에 있어서, 재료로서 당근 배축 절편, 대두 칼루스 세포, 이이 칼루스 세포, 벼 칼루스 세포, 금어초 칼루스 세포, 아스파라거스 칼루스 세포를 사용하는 것 이외에는 실시예와 동일한 방법으로 조직배양한 결과를 표 7에 나타내었다. 어느것이나 처리한 시료에서는 분화하여 수득한 부정배 수가 비교예 20-25에 비교해서 증가했다.
비교예 20-25
실시예 44-49에 있어서, 칼슘을 염화칼슘용액 대신에 증류수를 사용하는 것 이외에는 실시예 1과 동일한 방법으로 당근 배축 절편, 대두 칼루스 세포, 오이 칼루스 세포 벼 칼루스 세포, 금어초 칼루스 세포, 아스파라거스 칼루스 세포를 배양했다.
실시예 50-52
실시예 20에 있어서, 칼슘을 표 8에 표시한 농도로, 또한, 염화칼슘을 표 8에 표시한 농도로 함유하는 용액을 사용해서, 실시예 1과 동일한 방법으로 아스파라거스 줄기 절편을 조직배양한 결과를 표 8에 나타내었다. 어느것이나 처리한 시료에서는 분화하여 수득한 부정아 수가 비교예 26에 비해서 증가하고, 또 그 줄기의 직경도 비교예 26보다 굵었다.
비교예 26
실시예 50-52에 있어서, 칼모듈린을 함유하는 염화칼슘용액 대신에 증류수를 사용하는 것 이외에는 실시예와 동일한 방법으로 아스파라거스 줄기 절편을 배양했다.
[표 7]
Figure kpo00009
[표 8]
Figure kpo00010

Claims (1)

  1. 식물의 조직편 또는 배양세포의 세포속에 칼모듈린(calmodulin) 또는 칼슘, 또는 칼모듈린과 칼슘을 둘다 도입한 후에 조직배양하는 것으로 구성되며, 이때 세포내로 도입되는 칼모듈린의 양은 1㎍/ml 내지 300㎍/ml이고, 세로내로 도입되는 칼슘의 농도는 10-8M 내지 10-5M인 것을 특징으로 하는 식물 종묘의 증식방법.
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