JPS63279722A

JPS63279722A - 植物の種苗の増殖方法

Info

Publication number: JPS63279722A
Application number: JP62157809A
Authority: JP
Inventors: Kiyoshi Tanimoto; 谷本　靜史; Shigeru Takahashi; 滋高橋
Original assignee: Mitsui Petrochemical Industries Ltd
Current assignee: Mitsui Petrochemical Industries Ltd
Priority date: 1986-12-26
Filing date: 1987-06-26
Publication date: 1988-11-16

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野〕本発明は植物を特定の方法によって組織培養することに
より、種苗を大量に増殖する方法に関する。

〔従来の技術〕

キャベツ、トマト、キュウリなどの野菜類やイネは食用
として利用されており、またチューリップ、ヤグルマギ
ク、ルドベキアなどは園芸植物として鑑賞用に愛好され
ている。

これらの植物の増殖は、従来、播種、球根分割、塊茎分
割によって行われてきた。しかし、このような増殖法は
多くの土地と人手を必要とするばかりでなく、近年では
ウィルス病の蔓延により種苗の生育速度の低下や花の品
質低下が問題となっている。また、優良形質を持つ品質
を育成維持するためには、栄養繁殖を行わせることが有
効である。これらの問題点を改良し、増殖効率の向上を
目的として近年植物組織培養技術を利用した方法も報告
されている（例えば特開昭５５−１５７３４号公報）。

組織培養技術による増殖は培養組織片、培養細胞からの
不定芽、不定奸、球根等の分化を経て達成辛れ、またこ
れらの分化は植物ホルモンであるサイトカイニンとオー
キシンの濃度比によって制御されていると考えられてき
た（例えばＡｎｎａｌｓ　ｏｆ　Ｂｏｔａｎｙｖｏｌ　
４５．３２１−３２７．１９８０年）。しかし、植物ホ
ルモンのみでは分化が起こらない植物種や分化が起こっ
たとしてもその頻度が非常に低い植物種も多数存在し、
より直接的かつ効果的な分化誘導方法の確立が期待され
ている。

〔発明が解決しようとする問題点〕

本発明者らは従来の植物の組織培養方法には前記した種
々の問題点のあることを認知した上で、従来法とは異な
る新規な方法によって植物を組織培養して該植物の種苗
を従来に比べて効率良く増殖する方法について検討した
。

〔発明の概要〕

その結果、本発明者らは植物の細胞に作用して該植物の
不定芽、不定胚および球根分化を促進さセる物質を見出
し、これらの知見を基にして植物の種苗を効率よく増殖
する方法を見出した。すなわち本発明の方法によれば、
カルシウムイオノフオア、サイクリックＡＭＰおよびポ
リアミンからなる群から選ばれた少なくとも１種の化合
物を含む培地を用いて、ケシ目、ツルウリフサ属を除く
ナス目、セリ目、バラ目、ユリ属を除くユリ目、キク目
、フウロソウ目、ウリ目、イネ目に属する植物の組織片
または培養細胞を組織培養することを特徴とする植物の
種苗の増殖方法が提供される。

〔発明の詳細な説明〕

零発、明に係わる組織培養方法が適用できる植物は、ケ
シ目、ツルウリフサ属を除くナス目、セリ目、バラ目、
ユリ属を除くユリ目、キク目、フウロソウ目、ウリ目、
イネ目に属する植物から選択される。該植物として具体
的には、山岸績「植物系統分類の基礎」北隆館、１９７
４年に記載されている植物を例示でき、より具体的には
ナス目に属する植物としては、ナス、トマト、ジャガイ
モ、サツマイモ、シソなどが、ケシ目に属する植物とし
て、ケシ、アブラナ、キャベツ、ダイコン、ハクサイな
どが、セリ目に属する植物として、ニンジン、セリ、パ
セリなどが、バラ目に属する植つとして、バラ、イチゴ
、ダイズ、サクシなどがユリ属を除くユリ目に属する植
物として、タマネギ、チューリップなどが、キク目に属
する植物として、キク、ヤグルマギク、ヒマワリなどが
、フウロソウ目に属する植物として、フウロソウ、テン
ジクアオイ、アマなどが、ウリ目に属する植物としてキ
ュウリ、カポチャなどが、イネ目に属する植物としてイ
ネ、トウモロコシなとが示される。本発明に係わるこれ
らの植物の中でも好ましい植物として具体的に（まトマ
ト、ナス、ジャガイモ、ニンジン、キャベツ、タマネギ
、ダイズ、ダイコン、シソ、ヤグルマギク、ルドベキア
、チューリップ、アマ、キュウリおよびイネ等を例示で
きる。

本発明では植物の組織培養は該植物の組織片または培養
細胞を用いて行うことができる。該組織培養片として具
体的には子葉、胚軸、茎頂、茎、葉、リン片、根または
その他の組織を小片に切断した植物の組織片を例示する
ことができ、これらの組織片は通常、次亜塩素酸ソーダ
やエチルアルコールによって殺菌した後に使用される。

しかし、無菌的に栽培した植物を使用する場合には、上
記の殺菌操作は不要である。また、無病・無ウィルスの
植物の種苗を増殖する場合には、培養材料として生長点
近傍組織、生長点近傍組織から得られた植物の前述した
組織片などを用いることができる。本発明の植物の組織
培養において用いることのできる培養細胞とは、前記組
織片を公知の方法によって組織培養することによって得
られるカルス組織を含めた未分化の不定形細胞である。

本発明において一１１植物の組織片又は培養細胞を組織
培養して一一曖植物の種苗を形成させるに当たって以下
に詳述する方法が採用される。

本発明では一一醗植物の種苗を増殖させ°る方法として
、カルシウムイオノフオア（Ｃａ”−１ｏｎｏｐｈ−−
ｏｒｅ）　、’Ｊ−イタリックＡ　Ｍ　Ｐ　（Ｃｙｃｌ
ｉｃ−ａｄｅｎｏｓｉｎｅ−３°−５’−ｍｏｎｏｐｈ
ｏｓｐｈａｔｅ）　、およびポリアミ７（０群から選ば
れる少な（とも１種の化合物を添加した根へ分化するの
力く著しく促進される。このような特定の化合物を添加
した培地を用いて組織培養を行うと一１分化が促進され
るとＬ）うことζ本発明者に係わる新規な知見である。

本発明では前記したポリアミン等の特定の化合物を添加
するのに使用される培地は、無機成分および炭素源を必
須成分とし、これに植物ホルモン類、ビタミン類を添加
し、更に必要に応じてアミノｆｆ１ｌｌｌを添加した培
地である。該培地の無機成分としては、Ｍｆｐ、リン、
カリウム、ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、イ
オウ、鉄、マンガン、亜鉛、ホウ素、モリブデン、塩素
、ヨウ素、コバルト等の元素を含む無機塩を挙げること
ができ、具体的には硝酸カリウム、硝酸ナトリウム、硝
酸アンモニウム、塩化アンモニウム、塩化カリウム、塩
化カルシウム、１ノン酸１水素カリウム、リン酸２水素
ナトリウム、硫酸マグネシウム、塩化マグネシウム、硫
酸ナトリウム、硫酸第１鉄、硫酸第２鉄、硫酸マンガン
、硫酸銅、モリブデン酸す上リウム、二酸化モリブデン
、ヨウ化カリウム、硫酸亜鉛、ホウ酸、塩化コバルト等
の化合物とそ′の誘導体、脂肪酸等の有機酸およびエタ
ノール等の１級アルコールなどを例示できる。

該培地の植物ホルモン類としては、例えば、ナフクレン
酢酸（ＮＡＡ）　、インドール酢酸（ＩＡＡ　）ｐ−り
０υフユノキシ酢敢、２．４−ジクロロフユノキシ酢酸
（２，４−Ｄ）　、インドール酪酸（７８人）：Ｂよび
これらの誘導体等のオー干シン類およびベンジル、アデ
ニン（ＢＡ）、カイネチン、ゼアチン等のサイトカイニ
ン類を例示できる。

該培地のビタミン類としては、ビオチン、チアミン（ビ
タミンＢ１）、ピリドキシン（ビタミンＢ、）、ピリド
キサール、ピリドキサミン、パントテン酸カルシウム、
アスコルビン酸（ビタミンＣ）、イノシトール、ニコチ
ン酸、ニコチン酸アミドおよびリボフラビン（ビタミン
Ｅ２）などを例示できる。

該培地のアミノ酸類としては、例えばグリシン、アラニ
ン、グルタミン酸、システィン、フェニルアラニンおよ
び１ノジンなどを例示で°きる−、を発明の前記培地は
、通常は、前記無機成分を約０．１μ）１ないし約１０
０ｍＭ、前記炭素源を約１ｇ／βないし約１００ｇ／β
、前記植物ホルモン類を１約０．Ｄｌｍｇ　／　ｊ！な
いし約１０　ｍｇ　／　ｆ！、前記ビタミン類を約０−
１ｍｇ　／　ｊ！ないし約１５０吋／ｌおよび前記アミ
ノ酸類を０・・ないし約１０００ｍｇ　／’Ｉｌ含ませ
て使用されることが望ましい。

本発明に係わる組織培養に用いら−れる前記培地として
具体的には、従来から知られている植物の組織培養に用
いられている培地１１例えば、ムラシゲ・スクーグ（’
６２　）　　（Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ　＆　Ｓｋｏｏｇ）
の培地、リンスマイヤー・スクーグ（ＲＭ−１９６５）
ＣＬｉｎｓｍａｉｅｒ　＆　Ｓｋｏｏｇ）の培地、ホワ
イト（’６３　）（Ｗｈｉｔｅ　）の培地、ガンボルグ
ＣＧａｍｂｏｒｇ　）のＢ−５培地、三井のＭ−９培地
、エッチ・エッチの培地ＣＮ１ｔｃｈ　＆　Ｎ１ｔｃｈ
）等に前記した炭素源および植物ホルモンを添加し、更
に遼−要に応じて前記したビタミン類、アミノＩｆを添
加して調製される培地を例示できるが、本発明ではこの
中でも特にエッチ・エッチ、リンスマイヤー・スクーグ
又はムラシゲ・スクーグの培地を用いて調製される培地
が好ましい。なお、上記した従来公知の培地の組成に関
しては、例えば、行内、中島、古谷著の「新植物組織培
養Ｊ　Ｐ３８６〜Ｐ３９１、朝倉沓店、−１９７９年に
記載されている。

本発明で使用できる前記培地は液体培地又は寒天を這當
０．５〜１％含有させた固型培地である。

不発明では前記した培地に添加されるカルシウムイオノ
フォアの培地における濃度は通常１０　〜１０−″Ｍ／
ｌ、好ましくは１０−７〜１０−’Ｍ／Ａの範囲にあり
、カルシウムイオノフオアの中ではＡ、２３１８７を用
いることが好ましい。ここでＡ２３１８７とは６Ｓ−〔
６α（２５″、　３３″）、８β（Ｒ′）、９β、１１
α〕−５−（ｍｅｔｈｙｌａ＋ｎ１ｎｏ　）　−２−（
（３，９，１１−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ−８−（１−ｍｅ
ｔｈｙ’ｌ−２−ｏｘｏ−２−（１１（−ｐｙｒｒｏｌ
−２−ｙｌ）ｅｔｈｙｌ　）−１＋　７−ｄｉｏｘａｓ
ｐｉｒｏ　（５＋５　）　−ｕｎｄｅｃ−２−ｙｌ　）
　ｍｅｔｈｙｌ）−４−ｂｅｎｚｏｘａｚｏｌｅｃａｒ
ｂｏｘｙｌｉｃ　ａｃｉｄである。同様にサイクリック
ＡＭＰについては通常は１０　〜１０Ｍ／４２、好まし
くは１ｅ〜１０−’Ｍ／βの範囲にある。ポリアミンに
ついては通常は１０　〜１０　Ｍ／−Ｅ、好ましくは１
０″〜１ｏ’Ｐ／ｐの範囲【ある。

ここで本発明において培地に加えられるポリアミンとは
゛ポリメチレン基［（Ｃ，Ｈ２嘱−１ｎＰ！整数〕の両
端にアミノ基及び／又はイミノ基を有する構造単位をも
つ化合物であって、具体的にはスペルミン（Ｂｉｓ　（
ａｉｉｎｏｐｒｏｐｙｌ　）　−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙ
ｌｅｎｅｄｉ−−ａｍｉｎｅ　；　Ｈ２Ｎ　（ＣＨ２）
５　Ｎ’Ｈ（ＣＨ２）（ＮＨ（Ｃ’）＋２　）３Ｎ）＋
２　〕、スペルミジン（Ｉｔ、Ｎ　（Ｃ）＋２　）３Ｎ
Ｈ（ＣＩ＋２　）ｚＮＩｈ　）およびプトレシン（Ｈ２
Ｎ　（Ｃｔ１２）４ＮＩＩ２　）などのテトラメチレン
ジアミン類を例示できる。

本発明では前記したー植物の組織片又淋培養細胞は、本
出願人に係わる特願昭６０−１２８３４８号と同様に酸
素含有気体を通気させた液体培地を用いて組織培養する
こともできる。

本発明の方法によれば、植物の組織片または培養細胞か
ら不定芽、不定胚、子球（小球根）などを効率良く多量
に得ることができる。この点にこつれらを更に本発明に
係わる前記した培養方法によって組織培養し、種苗を大
量に増殖する赫唯ができる。尚、本発明で得られた植物
は通常の栽培を行うと、性質が一定で健全な植物体に生
長させることができる。

〔発明の効果〕

本発明め植物の組織培養方法を用いれば、植物の組織又
は培養細胞から従来法に比べて効率良く高品質の植物体
を大量に培養することができ、種苗を多量に増殖するこ
とができる。

〔実施例〕

以下、実施例を用いて本発明の構成および効果を具体的
に説明する。

素酸ソーダ水溶液（有効塩素量１％）で殺菌、して、約
１ｃｍ長に切断した後に、シヨ糖３箱ψフタレン酢酸１
０−’Ｍ　、ベンジルアデニン１０−　’Ｍおよび本発
し ◆シンから選ばれる化合物を表１に示した濃度で含有す
るＰＨ５−６の無菌のムラシゲスクーグ（１９６２年）
の寒天培地（寒天濃度０．８％）を調製し、これに先の
トマトの胚軸切片を添加して、２５℃で明所で３週間培
養したところ切片光たりの不定芽の形成数として表１に
示す結果を得プこ。いずれも処理した試料では分化しで
得られる不定芽数は比較例１に比べて増加した。

比較例１実施例１において培地として本発明に係わる実施例６〜
８実施例１において、材料としてナス胚軸切片を用いる以
外は該実施例１と同様にして組織培養した結果、表２に
示す結果を得た。いずれも処理した試料では分化する不
定芽数も比較例２に比べて増加した。

！！実施例９〜日実施例１において、材料としてキャベツ胚軸切片を用い
た以外は実施例１と同様にして行った。

実施例１２〜１４実施例１において、材料としてシソ葉切片を用いた以外
は実施例１と同様にして行った。

実施例１５実施例１において、材料としてダイズ葉切片を用いた以
外は実施例１と同様にして行った。

実施例１６実施例１において、材料としてダイコン胚軸切片を用い
た以外は実施例１と同様にして行、つた。

比較例２〜６実施例６〜１６において、培地として本発明に係わる特
定の化合物を含有しない以外は該実施例と同様にこして
ナス胚軸切片、キャベツ胚軸切片、シソ葉切片、ダイズ
葉切片、ダ・イコン胚軸切片を組織培養した結果を表２
に示した。

実施例１７〜１９実施例１において、材料としてヤグルマギク葉切片を用
いる以外は該実施例１と同様にし、て組織培養した結果
を表３に示した。いずれも処理した試料では分化する不
定芽数も比較例７に比べて増加した。

実施例２０〜２２実施例１において、材料としてルドベキア茎切片を用い
た以外は実施例１と同様にして行った。

実施例２４比較例７〜１０実施例１７〜２４において、培地として本発明に係わる
特定の化合物を含有しな・い以外は該実施例と同様にし
てヤグルマギク葉切片、ルトベキア葉切片、トマトカル
ス細胞、ナスカルス細胞を組織培養した結果を表３に示
した。

実施例２５〜２７実施例１において、材料としてタマネギの盤茎を付けた
リン葉切片を用いた以外は実施例１と同様にして行った
。

実施例２８〜３０実施例１において、材料としてジャガイモ葉切片を用い
た以外は実施例１と同様にして行った。

実施例３１〜３３実施例１において、材料としてアマ胚軸切片を用いた以
外は実施例１と同様にして行った。

実施例３４実施例１において、材料としてチューリップリン片切片
を用いた以外は実施例１と同様にして行った。

実施例３５〜３７実施例１において、材料としてアスパラガス茎切片を用
いた以外は実施例１と同様にして行った。

比較例１１〜１５実施例２５〜３７において、培地として本発明に係わる
特定の化合物を含有しない以外は該実施例と同様にして
タマネギリン葉切片、ジャガイモ葉切片、アマ胚軸切片
、チューリップリン片切片、アスパラガス茎切片を組織
培養した結果を表４に示した。

実施例３８〜４０ニンジンの胚軸を７０％エタノールおよび次亜塩素酸ソ
ーダ水溶液（有効塩素量１％）で殺菌して、約ＩＣＩＩ
Ｉ長に切断した後に、ショ糖４％、２．４−ジクロロフ
ェノキシ酢酸１０−６Ｍおよび本発明に係わる特定の化
合物としてＡ２３１８７、サイクリックＡＭＰ　、スペ
ルミンから選ばれる化合物を表５に示した濃度で含有す
るｐＨ５，６の無菌のムラシゲスクーグ（１９６２年）
の液体培地を調製し、これに先のニンジンの胚軸切片を
添加して、２５°Ｃで暗所で３週間培養し、その後植物
ホルモンを含まない培地で２週間培養したところ切片１
個当りの不定胚形実施例４１実施例４０において、材料として未熟胚より誘導したイ
ネのカルス細胞を用い、本発明に係わる特定の化合物と
してプトレシンを含有する培地を用いる以外は該実施例
と同様にして行った。

実施例４２実施例４０において、材料としてキュウリ葉切片より誘
導したカルス細胞を用いる以外は該実施例と同様にして
行った。

実施例４３実施例４０において、材料として金魚草の葉切片から誘
導したカルス細胞を用いる以外は該実施例と同様にして
行った。

実施例４４実施例４０において、材料としてアスパラガスの茎切片
から誘導したカルス細胞を用いる以外は該実施例と同様
にして行った。

比較例１５〜１９実施例３５〜４１において、培地として本発明に係わる
特定の化合物を含有しない以外は該実施例と同様にして
ニンジン胚輪切片、あるいはイネ、キュウリ、金魚草、
アスパラガスのカルス細胞を組織培養した結果を表５に
示した。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）カルシウムイオノフオア、サイクリツクＡＭＰお
よびポリアミンからなる群から選ばれた少なくとも１種
の化合物を含む培地を用いて、ケシ目、ツルウリクサ属
を除くナス目、セリ目、バラ目、ユリ属を除くユリ目、
キク目、フウロソウ目、ウリ目、イネ目に属する植物の
組織片または培養細胞を組織培養することを特徴とする
植物の種苗の増殖方法。
（２）カルシウムイオノフオアがＡ２３１８７である特
許請求の範囲第（１）項記載の方法。
（３）ポリアミンがスペルミン、スペルミジン又はプト
レシンである特許請求の範囲第（１）項記載の方法。