JPH03160935A - 植物体の作出方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は例えば、ニンニク（Ａｌｌｉｕｍ　ｓａｔｉｖ
ｕｍ）の植物組織からのクローン増殖およびウィルスフ
リー株作出の方法に関するものである。

ニンニクは、アリウム属の植物であるが、香辛料として
の食材として重要な作物の１つである。

ニンニクは、一般的には栄養繁殖であり種子ができない
。このため栄養体であるりん片へのウィルスの侵入が避
けられず収量の減少などが起こる。

それを防ぐ手段として、ウィルスに犯されていない茎頂
（威長点）を無菌的に切り出し、増殖させることによっ
てウィルスフリー株を作出できる。

またこれらを種子として増やすことはできないのでウィ
ルスフリー株の増殖や優良株の増殖には、カルスあるい
は茎葉あるいは、多芽体を用いたクローン増殖が行なわ
れている。

〔従来の技術〕

クローン増殖およびウィルスフリー株の作出には、りん
片内の普通葉、あるいは茎頂を無菌的に切り出し、オー
キシンやサイ１・カイニンを含む培地で茎葉あるいは多
芽体を形威させ、この茎葉を１本ずつに分離し、発根培
地としてオーキシンのみ、あるいはオーキシンとサイト
カイニンあるいはホルモン無添加の培地に移植し培養し
て発根させている。ここで生産性を向上させるためには
、いかに多くの生育のよい茎葉を形威できるか、という
点と、高い発根率が重要である。

〔発明が解決しようとする課題〕

しかし、従来の方法では、小さな茎葉のみしか形威され
ず、しかもその発根率は高いものではなかった。また、
茎葉の数を増加させるのにサイトカイニンの添加量の効
果は知られているがこれにより次のステップの発根はい
ちしるしく低下する。

従って、本発明の課題は生育のよい茎葉を数多く形威さ
せ、また、高い頻度で発根させ効率よくニンニク等のア
リウム属植物のクローン増殖およびウィルスフリー株を
作出することである。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らは上記目的を達戒するべく鋭意検討の結果、
アリウム属の植物ｉｆＪｌｌｌｌｉより誘導した多芽体
又は茎葉をインドール酪酸及びヘンジルアデニンを含む
培地で培養すると茎葉の生育が著しく良化されること及
び前記培地で培養して茎葉を生育させたものであっても
アブシジン酸を含む培地で培養することにより良好な発
根率で発根させることができることを見出してこの知見
に基いて本発明を完威するに至った。

本発明の作出方法で作出される植物はアリウム属の植物
である。アリウム属の植物であれば特に制限されないが
、例えばニンニク（ＡＩｌｉｕｍ　ｓａｔｉνｕｍ）　
、ニラ（ＡＩｌｉｕｍ　ｃｈｉｎｅｎｓｅ）、タマネギ
（Ａｌｌｉｕｍ　ｃｅｐａ）等である。これらのなかで
ニンニクが特に好ましい。上記植物にはそれぞれ各種の
品種、栽培種等があるがその種類を問わない。多芽体又
は茎葉を誘導する植物の組織はクローン増殖を目的とす
る場合には葉、根でも良いがりん片内茎頂、あるいは普
通葉が望ましく、ウィルスフリー株作出を目的とする場
合にはウィルスの少ない茎頂が望ましい。

本発明において使用する茎葉および多芽体の誘導には、
無機塩類、炭素源及び他の栄養戒分を含有する培地が用
いられる。無機塩類としては、通常の植物組威培養で使
用される基本培地、例えば、ムラシゲとスクーグ（Ｍｕ
ｒａｓｈｉｇｅ　＆　Ｓｋｏｏｇ）の培地、リンズマイ
ヤーとスクーグ（Ｌｉｎｓｍａｉｐｒ　＆　Ｓｋｏｏｇ
　）の培地、ホワイト（Ｗｈｉｔｅ）の培地、ガンボー
グ（Ｇａｍｂｏｒｇ）の培地、ヘラー（ｌｌｅｌｌｅｒ
）の培地等、あるいは、上記等の培地の無機イオン濃度
を適当量に改変した培地等が用いられる。炭素源として
は、シュークローズ、グルコース、フラクトース等が５
〜１００ｇ／　ｊ２で使用される。

上記の培地にさらにイノシトール１〜１０００■／ｌ１
ニコチン酸０．０１〜５■／ｌ，チアミン塩酸塩０．０
１〜５　一 １■／１、ビリドキサール塩酸０．０１〜１■／ｉおよ
びグリシン０．０１〜１０■／Ｉ！．を添加すれば、よ
り良好な増殖が得られる。

上記の培地に更にオーキシン類、望ましくはサイトカイ
ニン類を添加した培地を用いると良好な結果が得られる
。オーキシン類の例としては、インドール酢酸、ナフタ
リン酢酸、２．４−ジク口口フェノキシ酢酸等を挙げる
ことができ、サイトカイニン類には、ゼアヂン、ベルジ
ルアデニン、カイネチン等がある。これらの戒長調節物
質は、通常の組織培養で用いる量の範囲であれば良い。

上述のように調製した培地はｐｌ＋４．０〜８．０に調
整し、寒天等を０．２％〜２％加え常法通り殺菌して固
体培地として用いられる。前記の植物組織を上記の如き
培地に置床し、２０〜３０゜Ｃ程度、通常は室温で培養
することによって多芽体あるいは茎葉を形威させること
ができる．茎葉および多芽体はオーキシン、サイトカイ
ニン添加培地にて増殖を繰返したものでよく、さらにカ
ルスより分化したものでもよい。

６　一 植物組織より誘導した茎葉および多芽体は、前記と同様
の無機塩類、炭素源及び他の栄養或分を含有する培地に
インドール醋酸及びヘンジルアデニンをさらに添加した
培地で培養する。インドール酪酸の濃度としては０．５
〜５■／ｌ程度が適当であり、１〜３■／ｌ程度が好ま
しい。ベンジルアデニンの濃度は０．１〜２■／ｉ程度
が適当であり、０．５〜ｌｌｌｌｇ／Ｉ！．程度が好ま
しい．この培地もやはりｐＨ４．０〜８．０に調整し、
寒天等を０．２〜２％を加えて常法通り殺菌して固体培
地として用いる。培養条件としては２０〜３０゜Ｃ程度
、通常は室温で１〜２４時間／日、好ましくは１０〜２
０時間／日の光照射下で１〜４週間程度培養することに
よって生育のよい茎葉をうることかできる。

さらに、茎葉および多芽体を発根せしめるためには、植
物威長調節物質としてアブシジン酸を添加した培地を用
いることが望ましい。このとき、他の植物威長調節物質
は添加しなくともよい。アプシジン酸の濃度としては０
．０１〜ｌ■／ｌ程度が適当であり、０．０５〜０．５
■／ｌ程度が好ましい。アブシジン酸を添加する培地も
前記と同様の無機塩類、炭素源及び他の栄養威分を含有
ずる培地でよい。

この培地もやはりｐｌ１４．０〜８．０に調整し、寒天
等を０．　２〜２％を加えて常法通り殺菌して固体培地
として用いる。培養条件としては２０〜３０゜Ｃ程度、
通常は室温で１〜２４時間／日、好ましくは１０〜２０
時間／日の光照射下で１〜４週間程度培養することによ
って充分に発根した幼植物体をうることができる。この
アブシジン酸を添加した培地はインドール醋酸及びヘン
ジルアデニンを含む培地に予め培養したものでなくとも
発根促進作用がある。

インドール酪酸、ベンジルアデニンとアブシジン酸を一
つの培地に加えてもよいが別々の培地とすることが望ま
しい。

〔作用〕

アリウム属の植物組織より誘導した多芽体又は茎葉をイ
ンドール醋酸とベンジルアデニンを含む培地に培養する
ことによって茎葉の生育が促進され、アブシジン酸を含
む培地に培養することによって発根が促進される。

〔実施例］ 実施例１ ムラシゲとスクーグの無機塩培地にシヨ糖３０ｇ／ｌ１
ニコチン酸０．５■／Ｉ！．、イノシトール１００■／
Ｅ１チアミン塩酸０．ｂｎｇ／ｊ２，ピリドキサール塩
酸０．　５■Ｎ．、グリシン１■／Ｉ！．及び寒天１０
ｇ／　Ｉ！を加え、ｐｌ１５．８に調整したものを基本
培地として常法により下記の培地を調整した。

培地１　基本培地＋２．４−Ｄ　　　　　２ｍｇ／Ｉ！
．培地２　基本培地＋ナフタレン酢酸０．５ｍｇ＃！十
ベンジノレアデニン０．５ｍｇ／４２培地３　基本培地
＋インドール酪酸　２■／ｌ１−ベンジルアデニン０．
０■／ｌ 培地４　基本培地＋インドール酪酸　２■／ｉ十ペンジ
ノレアデニン０．１■／ｊ２ 培地５　基本培地＋インドール酪酸　２■／ｌ十ペンジ
ノレアデニン０．２■／ｌ 培地６　基本培地士インドール醋酸　２■／Ｉ！．＋ベ
ンジルアデニン０．５■／ｌ 培地７　基本培地十インドール酪酸　２■／ｌ十ペンジ
ノレアデニン１．０■／Ｉ！．９ ニンニクリん片の戒長点および普通葉を無菌的に切り出
し、培地１に置床して、２５゜Ｃ暗黒下で培養した。１
〜２カ月ほどでカルスが派生した。カルスを培地２へ移
植し、２５゜Ｃで１６時間／日の光照射下で培養し、茎
葉を分化させた。ほとんどのカルスは、複数の茎葉を分
化し、多芽体を形威した。

多芽体を茎葉１本ずつに分離し、培地３〜７へ移植した
。このとき、各茎葉の生重量を測定した。

茎葉は、２５゜Ｃ，１６時間／日の光照射下で培養した
。

培養４週間後、茎葉数の増加がみとめられた。また、生
重量を測定した。結果を第１図に示す。

実施例２ 実施例１と同じ基本培地にアブシジン酸等を加えて常法
により下記の培地８〜１１を作製した。

培地８　基本培地十アプシジン酸　０．０１■／Ｉ！．
培地９　基本培地＋アブシジン酸　０．１■／ｉ培地１
０　　基本培地＋アプシジン酸　１．０■／ｌ培地１１
　　基本培地＋ナフタレン酢酸０．１■／Ｉ！．十カイ
ネチン０．１ｍｇ＃！ １０ 実施例１でえられた茎葉を１本ずつに分離し、培地８〜
ｌ１に移植した。茎葉は、２５℃、１６時間／日の光照
射下にて培養した。４週間後の移植した茎葉の茎葉増加
と発根を調べた。下表に結果を示す。

培地Ｎｏ．　　　　　茎葉形或数　　　　発根率（％）
実施例３ ニンニクリん片の威長点および普通葉を無菌的に切り出
し、培地２へ置床した。２５゜Ｃ、１６時間／日の光照
射下で培養したところ１〜２カ月ほどで茎葉が派生した
。ほとんどの移植片は、複数の茎葉を分化し多芽体を形
威した。多芽体を茎葉１本ずつに分離し、培地６〜１１
へ移植した。茎葉は、２５℃、ｌ６時間／日の光照射下
で培養した。４週間後、移植した茎葉の茎葉数増加と発
根率を調べた。

桔果を下表に示す。

〔発明の効果〕

本発明の方法によりアリウム属の幼植物体、特にクロー
ンやウィルスフリー株を容易に効率よく作製することが
できる。

【図面の簡単な説明】

第１図はインドール酪酸添加培地においてヘンジルアデ
ニンの濃度を変えて生重量の増加を測定した結果を示す
グラフである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）アリウム属の植物組織より誘導した多芽体又は茎
   葉をインドール酪酸及びベンジルアデニンを含む培地に
   て培養することを特徴とするアリウム属植物体の作出方
   法 （２）アリウム属の植物組織より誘導した多芽体又は茎
   葉をアブシジン酸を含む培地にて培養することを特徴と
   するアリウム属植物体の作出方法 （３）アリウム属の植物組織より誘導した多芽体又は茎
   葉をインドール酪酸及びベンジルアデニンを含む培地で
   培養して茎葉を生長せしめ、次いでアブシジン酸を含む
   培地で培養して発根せしめることを特徴とするアリウム
   属幼植物体の作出方法（４）多芽体又は茎葉を誘導する
   植物組織がりん片内の茎頂である請求項１、２又は３に
   記載の作出方法 （５）多芽体又は茎葉を誘導する植物組織がりん片内の
   普通葉である請求項１、２又は３に記載の作出方法 （６）多芽体又は茎葉が継代培養を繰返されたものであ
   る請求項１、２又は３に記載の作出方法 （７）多芽体又は茎葉がカルスを経由して分化したもの
   である請求項１、２又は３に記載の作出方法