KR940005800A - 재조합 사람 혈청 알부민, 이의 제조 방법 및 이를 함유하는 약제 - Google Patents

재조합 사람 혈청 알부민, 이의 제조 방법 및 이를 함유하는 약제 Download PDF

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와타루 오타니
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가에코 가미데
무네히로 노다
마사히데 곤도
쇼이치 이시카와
가즈히로 오하라
가즈마사 요코야마
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Abstract

유전자 조작 기술에 의해 수득한 사람 혈청 알부민은 사람 혈청 알부민-생성 숙주로부터 수득한 배양 상동액을 한의 여과, 가열 처리, 산 처리 및 제한의여과한 다음, 양이온 교환체, 소수성 크로마토그래피 담체 및 음이온 교환체를 사용한 후속 처리, 및 염석시킴으로써 약제로 제형될, 실질적으로 어떠한 단백질 및 다당류 오염물로 함유하지 않는 순수한 형태의 사람 혈청 알부민을 수득하는 단계를 조합함으로써 정제될 수 있다.
이와 같은 과정을 수행함으로써 제조합 사람 혈청 알부민을 효율적으로 정제할 수 있고, 생산자 숙주-관련 물질 및 기타 오염물을 함유하지 않고 충분히 착섹으로부터 배재된 실질적으로 순수한 사람 혈청 알부민을 제공 할 수있다.

Description

재조합 사람 혈청 알부민, 이의 제조방법 및 이를 함유하는 약제
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 소수성 크로마토그래피 정화 단계후에 수득한 HSA의 HPLC 분석 결과를 나타내는 그래프이다. 제2도는 HSA에 대한 라우르산 결합 곡선을 나타내는 그래프이다

Claims (11)

  1. (1) 사람 혈청 알부민을 발현하는 숙주의 배양 상동액을, 분자량 배제 한계가 100,000 내지 500,000인 제1한외여가막으로 처리하고 이어서, 이를 분자량 배제 한계가 1,000 내지 50,000인 제2한외여과막으로 처리하여 1차 여액을 수득하고; (2) 1차 여액을 50 내지 70℃에서 30분 내지 5시간 동안 가열처리하여 가열된 샘츨을 수득하며; (3) 가열된 샘플을 pH 3내지 5에서 산-처리하여 산-처리된 샘플을 수득하고; (4) 산-처리된 샘플을 분자량 배제 한계가 100,000 내지 500,000인 한외여과막으로 처리하여 2차 여액을 수득하며; (5) 2차 여액을 pH 3 내지 5, 염농도 0.01 내지 0.2M에서 양이온 교환체와 접촉시킨 다음, 양이온 교환체를 pH 8내지 10의 pH, 0.2 내지 0.5M의 염농도에 노츨시켜 1차 용출액을 수득하고; (6) 1차 용출약을 pH 6내지 8, 염농도 0.01 내지 0.5M에서 소수성 크로마토그래피용 담체와 접촉시키고, 비-흡착 분획을 회수하여 2차 용출액을 수득한 후; (7) 2차 용출액을 pH 6내지 8에서 음이온 교환체와 접촉시켜 비-흡착 분획을 회수하여 알부민을 수득하는 단계를 포함하는 제조합 사람 혈청 알부민의 제조방법.
  2. 제1항에 있어서. 단계 (6)에서 염농도가 1 내지 3M이고 이어서 담체를 0. 01 내지 0.5M의 염농도에 노출시켜 2차 용출액을 수득하는 방법.
  3. 제1항에 있어서, 단계(7)에서 2차 용출액을 pH 6 내지 8, 염농도 0.001 내지 0.05M에서 음이온 교환체와 접촉시킨 다음, 음이온 교환체를 6 내지 8의 pH, 0.05 내지 1M의 염농도에 노출시키는 방법.
  4. 제1항에 있어서, 단계(5), 단계(6) 및 단계 (7) 다음에, 1차 용출액, 2차 용출액 또는 알부민을 3 내지 5의 pH, 0.1 내지 3M의 염농도에 노출시켜 침전물을 수득하고 이 침전물을 완충액에 용해시키는 과정으로 이루어지는 염 침전 단계를 추가로 포함하는 방법.
  5. 제1항에 있어서, 단계 (7)의 알부민을 킬레이트 수지에 노출시키고 비-흡착 분획을 회수함으로서 알부민을 수득하는 과정을 포함하는 방법.
  6. 제5항에 있어서, 킬레이트 수지가 폴리올 그룹, 폴리아민 그룹 및 티오우레아 그룹으로 이루어진 그룹중에서 선택된 킬레이트를 형성할 수 있는, 리간드로서의 교환 그룹을 갖는 방법.
  7. 제1항에 있어서. 가열 처리 단계 (2)를 아세틸트립토관. 유기 카복실산 및 유기 카복실산염으로 이루어진 그룹중에서 선택된 화합물 존재하에서 수행하는 방법.
  8. 제1항에 있어서, 가열-처리 단계(2)를 티올 화합물의 존재하에서 수행하는 방법.
  9. 제1항에 있어서, 가열처리단계 (2)률 아미노구아니딘의 존재하에서 수행되는 방법.
  10. 알부민의 25%용액 이 오염된 단백질을 0.1ng/ml 이하의 양으로 및 오염 된 다당류를 1ng/ml 이하의 양으로 함유하는, 실질적으로 순수한 재조합 사람 혈청 알부민.
  11. 재조합 사람 혈청 알부민, 아세틸트립토판 또는 이의 염 및 나트륨 카프릴레이트를 함유함을 특징으로 하는 약제.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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