JPH0675513B2 - ヒト血清アルブミンの脱色方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は遺伝子操作により発現さ
れるヒト血清アルブミンの脱色方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】アルブミン、特にヒト血清アルブミン
（以下、「ＨＳＡ」ともいう。）は血漿の主要な蛋白構
成成分である。この蛋白は肝臓中で作られ、主に血流中
で正常な浸透圧を維持する責を負う。また種々の血清分
子のキャリアーとしての機能を持っている。ＨＳＡは種
々の臨床上の状況において投与される。例えば、ショッ
クや熱傷患者では血液量を元に戻し、それにより外傷に
関連するいくつかの症状を改善させるために、通常はＨ
ＳＡの頻回投与を必要とする。低蛋白血症や胎児性赤芽
球症に罹っている患者にもＨＳＡによる治療を必要とす
ることがある。従って、ＨＳＡを投与する基本的な治療
上の意義は、外科手術、ショック、火傷、浮腫を起こす
低蛋白血症におけるがごとく、血管からの液体の損失が
ある様な状態を治療する点に存する。

【０００３】現在、ＨＳＡは、主として採取した血液の
分画からの産物として製造されている。この製造法の欠
点は不経済であることと、血液の供給が困難であるとい
うことである。また、血液は肝炎ウイルスのように好ま
しくない物質を含んでいることがある。従って、ＨＳＡ
の代替の原料を開発することが有益となろう。

【０００４】ところで、組換ＤＮＡ技術の出現によっ
て、多種多様の有用なポリペプチドの微生物による生産
が可能となり、多くの哺乳動物ポリペプチド類が既に種
々の微生物により生産されている。ＨＳＡについても、
遺伝子操作の技術により大量生産し、それを高度精製す
る技術が確立されつつある。

【０００５】ところが、遺伝子操作においては、宿主で
ある微生物を培養する際、さらにはＨＳＡを精製する際
に、原料中のある種の着色成分あるいは微生物が分泌す
る物質が夾雑してくるため、これがＨＳＡと結合するこ
とによりＨＳＡそのものが着色してしまうものと思われ
る。しかもこれらの夾雑物質は、従来の血漿由来ＨＳＡ
の精製方法では充分に除去することはできない。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】したがって、本発明の
課題は、遺伝子操作によりＨＳＡを得るに際し、従来の
血漿由来ＨＳＡの精製方法では充分に除去することがで
きなかった上記着色成分ならびに夾雑成分を除去し、着
色を充分に抑えられたＨＳＡを提供することにある。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記事情
に鑑みて鋭意研究を進めた結果、遺伝子操作により得ら
れるＨＳＡを得るに際して、当該ＨＳＡの精製工程にお
いて、特に好ましくはその最後に当該ＨＳＡをキレート
樹脂で処理することにより着色物質がキレート樹脂に吸
着され、ＨＳＡの着色を減少できることを見出し、本発
明を完成した。

【０００８】即ち、本発明は、精製工程において、特に
好ましくはその最後に、キレート樹脂、好ましくはポリ
オール基、ポリアミン基またはチオ尿素基から選ばれた
キレート能を有する交換基をリガンドとして有するキレ
ート樹脂で処理することを特徴とする、遺伝子操作によ
り得られるＨＳＡの脱色方法に関する。

【０００９】本発明は、遺伝子操作によってＨＳＡを調
製する場合のＨＳＡの脱色方法に係わるものであり、当
該ＨＳＡは遺伝子操作を経てＨＳＡを発現する菌体（例
えば、大腸菌、酵母、枯草菌、麹、動物細胞等）を培養
し、菌体外発現（分泌発現）により産生される。

【００１０】（１）遺伝子操作による得られるＨＳＡ 本発明において用いられる遺伝子操作により調製された
ＨＳＡ産生性宿主は、遺伝子操作を経て調製されたもの
であれば特に限定されず、既に公知文献記載のものの
他、今後開発されるものであっても適宜利用することが
できる。具体的には、遺伝子操作を経てＨＳＡ産生性と
された菌（例えば、大腸菌、酵母、枯草菌等）、動物細
胞などが挙げられる。特に、本発明においては、宿主と
して、酵母、就中サッカロマイセス属〔例えば、サッカ
ロマイセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae)
〕、もしくはピキア属〔例えば、ピキア・パストリス
（Pichia pastoris)〕が使用されることが好ましい。ま
た、栄養要求性株や抗生物質感受性株が使用できる。さ
らにまた、サッカロマイセス・セレビシエＡＨ２２株
（a, his 4, leu 2, can 1) 、ピキア・パストリスＧＴ
Ｓ１１５株 (his 4)等が好適に用いられる。

【００１１】これらのＨＳＡ産生性宿主の調製方法およ
びその培養によるＨＳＡの生産方法、培養物からのＨＳ
Ａの分離採取方法はすべて公知ならびにそれに準じた手
法を採用することによって実施される。例えば、ＨＳＡ
産生性宿主（またはＨＳＡ産生株）の調製方法として
は、例えば通常のヒト血清アルブミン遺伝子を用いる方
法（特開昭５８−５６６８４、同５８−９０５１５、同
５８−１５０５１７号公報）、新規なヒト血清アルブミ
ン遺伝子を用いる方法（特開昭６２−２９９８５、特開
平１−９８４８６号公報）、合成シグナル配列を用いる
方法（特開平１−２４０１９１号公報）、血清アルブミ
ンシグナル配列を用いる方法（特開平２−１６７０９５
号公報）、組換えプラスミドを染色体上に組込む方法
（特開平３−７２８８９号公報）、宿主同士を融合させ
る方法（特開平３−５３８７７号公報）、メタノール含
有培地中で変異を起こさせる方法、変異型ＡＯＸ₂ プロ
モーターを用いる方法（特願平３−６３５９８、同３−
６３５９９号）、枯草菌によるＨＳＡの発現（特開昭６
２−２５１３３号公報）、酵母によるＨＳＡの発現（特
開昭６０−４１４８７、同６３−３９５７６、同６３−
７４４９３号公報）、ピキア酵母によるＨＳＡの発現
（特開平２−１０４２９０号公報）等が例示される。

【００１２】このうち、メタノール含有培地中で変異を
起こさせる方法は具体的には以下のように行う。すなわ
ち、まず適当な宿主、好ましくはピキア酵母、具体的に
はＧＴＳ１１５株（ＮＲＲＬ寄託番号Ｙ−１５８５１）
のＡＯＸ₁ 遺伝子領域に常法によりＡＯＸ₁ プロモータ
ー支配下にＨＳＡが発現する転写ユニットを有するプラ
スミドを導入して形質転換体を得る（特開平２−１０４
２９０号公報を参照）。この形質転換体はメタノール培
地中での増殖能は弱い。そこで、この形質転換体をメタ
ノール含有培地中で培養して変異を起こさせ、生育可能
な菌株のみを回収する。この際、メタノール濃度として
は、０．０００１〜５％程度が例示される。培地は人工
培地、天然培地のいずれでもよい。培養条件としては１
５〜４０℃、１〜１０００時間程度が例示される。

【００１３】また、ＨＳＡ産生性宿主の培養方法（すな
わちＨＳＡの産生方法）としては、上記の各公報に記載
された方法の他に、フェッドバッチ培養により、高濃度
のグルコースを適度に少量づつ供給し、産生菌体に対す
る高濃度基質阻害を避けて高濃度の菌体と産生物を得る
方法（特願平１−２１９５６１号）、培地中に脂肪酸を
添加してＨＳＡの産生を増強する方法（特願平３−８１
７１９号）等が例示される。さらにＨＳＡの分離採取方
法としては、上記の各公報に記載された方法の他に加熱
処理によるプロテアーゼの不活化（特開平３−１０３１
８８号公報）、陰イオン交換体、疎水性担体および活性
炭からなる群より選ばれた少なくとも一を用いてＨＳＡ
と着色成分を分離することによる着色抑制方法（特開平
４−５４１９８号公報）等が例示される。

【００１４】形質転換宿主の培養に用いられる培地は、
通常この分野で既知の培地に炭素数１０〜２６の脂肪酸
またはその塩を添加したものが使用され、培養条件は一
般的な常法に準じて実施される。培地は合成培地、天然
培地のいずれでもよく、液体培地が好ましい。例えば、
合成培地としては、一般に炭素源として各種糖類、窒素
源として尿素、アンモニウム塩、硝酸塩など、微量栄養
素として各種ビタミン、ヌクレオチドなどの他、無機塩
としてＭｇ、Ｃａ、Ｆｅ、Ｎａ、Ｋ、Ｍｎ、Ｃｏ、Ｃｕ
などが例示される。ＹＮＢ液体培地〔０．７％イースト
ナイトロジエンのベース（Difco 社製）、２％グルコー
ス〕などが挙げられる。また天然培地としては、ＹＰＤ
液体培地〔１％イーストエキストラクト（Difco 社
製）、２％バクトペプトン（Difco 社製）、２％グルコ
ース〕が例示される。培地のｐＨは中性または弱塩基
性、弱酸性でよい。またメタノール資化性宿主の場合
は、メタノール含有培地を用いることができる。この場
合メタノール濃度は０．０１〜５％程度である。

【００１５】培養温度は、１５〜４３℃（酵母は２０〜
３０℃、細菌は２０〜３７℃）が好ましい。培養時間は
１〜１０００時間程度であり、培養は静置または振盪、
攪拌、通気下に回分培養法や半回分培養法あるいは連続
培養法により実施される。なお、当該培養に先立って前
培養を行うことが好ましい。この際の培地としては、例
えばＹＮＢ液体培地やＹＰＤ液体培地が使用される。前
培養の培養条件は次の通りである。すなわち、培養時間
は１０〜１００時間、温度は酵母では３０℃、細菌では
３７℃程度が好ましい。

【００１６】かくして培養終了後、ＨＳＡは培養濾液ま
たは菌体、細胞からそれぞれ公知の分離手段により採取
される。

【００１７】（２）ＨＳＡの精製 本発明のＨＳＡの脱色方法による処理は、従来より行わ
れている遺伝子操作由来ＨＳＡの精製工程において、特
に好ましくはその最後に行う。精製工程としては、各種
分画法、吸着クロマトグラフィー、アフィニティクロマ
トグラフィー、ゲル濾過、密度勾配遠心分離法、透析等
の公知の方法が採用される。当該精製工程としては、例
えば以下の〜を含む工程が好適に挙げられる。 ヒト血清アルブミンの産生宿主の培養上清を分画分
子量１０万〜５０万、及び１０００〜５万の限外濾過膜
を用いて処理する。 ５０〜７０℃で３０分〜５時間加熱処理する。 ｐＨ３〜５で酸処理する。 分画分子量１０万〜５０万の限外濾過膜を用いて処
理する。 ｐＨ３〜５、塩濃度０．０１〜０．２Ｍの条件下で
陽イオン交換体に接触させた後にｐＨ８〜１０、塩濃度
０．２〜０．５Ｍの条件下で溶出する。 ｐＨ６〜８、塩濃度０．０１〜０．５Ｍの条件下で
疎水性クロマト用担体に接触させて、非吸着画分を回収
する、そして ｐＨ６〜８、塩濃度０．０１〜０．１Ｍの条件下で
陰イオン交換体に接触させて、非吸着画分を回収する。 また、前記工程の代わりに、ｐＨ６〜８、塩濃度１〜
３Ｍの条件下で疎水性クロマト用担体に接触させた後
に、ｐＨ６〜８、塩濃度０．０１〜０．５Ｍの条件下で
溶出する工程、または前記工程の代わりに、ｐＨ６〜
８、塩濃度０．００１〜０．０５Ｍの条件下で陰イオン
交換体に接触させた後に、ｐＨ６〜８、塩濃度０．０５
〜１Ｍの条件下で溶出する工程、さらには前記工程と
の間、との間、またはの後で、ｐＨ３〜５、塩
濃度０．５〜３Ｍの条件下で塩析処理し、沈澱画分を回
収する工程をさらに含むものであってもよい。

【００１８】（３）ＨＳＡの脱色 本発明のＨＳＡの脱色工程は、上記精製工程において、
特に好ましくはその最後に組み込まれ、特定のリガンド
部を有するキレート樹脂とＨＳＡを接触することにより
行われる。キレート樹脂の担体部分は疎水性を有する担
体であることが好ましく、例えばスチレンとジビニルベ
ンゼンの共重合体、アクリル酸とメタクリル酸の共重合
体等が挙げられる。一方、リガンド部は、Ｎ−メチルグ
ルカミン基等のポリオール基、イミノ基、アミノ基、エ
チレンイミノ基等を分子内に複数個有するポリアミン基
（この中にはポリエチレンポリアミン等のポリアルキレ
ンポリアミン基も含まれる）、およびチオ尿素基が挙げ
られる。上記担体部分とリガンド部を有するキレート樹
脂の市販品としては、担体部分がいずれもスチレンとジ
ビニルベンゼンの共重合体であるDIAION CRB02（リガン
ド部；Ｎ−メチルグルカミン基、三菱化成製）、DIAION
CR20 （リガンド部；−ＮＨ(CH₂CH₂NH)_n Ｈ、三菱化成
製）、LEWATIT TP214（リガンド部；−ＮＨＣＳＮＨ
₂ 、バイエル製）、アンバライトＣＧ４０００が好適に
使用される。

【００１９】当該キレート樹脂による処理条件は、好適
には次の通りである。 ｐＨ条件：酸性または中性（３〜９、好ましくは４〜
７) 時間：少なくとも１時間以上、好ましくは６時間以上 イオン強度：５０ｍｈｏ以下、好ましくは１〜１０ｍｈ
ｏ 混合比：ＨＳＡ２５０ｍｇに対して樹脂０．１〜１００
ｇ、好ましくは１〜１０ｇ（湿重量）

【００２０】上記の工程（〜および塩析処理、さら
にキレート樹脂処理を含む）を経て得られたＨＳＡの着
色度は、ＨＳＡ２５％溶液の場合でＡ_500nm ／Ａ_280nm
が０．００１〜０．００５程度である。本発明のキレー
ト樹脂処理によりＨＳＡの着色度は１／２〜１／１０に
低減される。特に吸収波長５００ｎｍ付近、すなわち赤
色系の着色度が１／３〜１／１０に低減される。

【００２１】（４）製剤化 得られたＨＳＡは公知の手法（限外濾過、安定化剤の添
加、除菌濾過、分注、凍結乾燥等）により製剤化するこ
とができる。こうして調製されたＨＳＡ製剤は注射剤と
して血漿由来ＨＳＡ製剤と同様に臨床上用いることがで
きる。また、医薬品の安定化剤あるいは担体、運搬体と
しても利用可能である。

【００２２】

【発明の効果】本発明によれば、遺伝子操作により得ら
れるＨＳＡについて、原料中のある種の着色成分、ある
いは微生物が分泌する物質が夾雑し、これらがＨＳＡと
結合することによって起こる着色が充分に抑えられたＨ
ＳＡを提供することができる。本発明は、吸収波長５０
０ｎｍ付近の着色成分、すなわち赤色系の着色成分の除
去に極めて有用である。

【００２３】

【実施例】本発明をより詳細に説明するために、実施例
を挙げるが、本発明はこれらによって何ら限定されるも
のではない。

【００２４】参考例１ ＨＳＡ産生宿主の培養 (1) 使用菌株：Pichia pastoris GCP101株 特開平２−１０４２９０号公報に述べられている方法に
より、ピキアパストリス（Pichia pastoris)ＧＴＳ１１
５（ｈｉｓ４）のＡＯＸ₁ 遺伝子領域に、ＡＯＸ₁ プロ
モーター支配下にＨＳＡが発現する転写ユニットを持つ
プラスミドｐＰＧＰ１のＮｏｔ１で切断した断片を置換
して、ＰＣ４１３０が得られている。この株はＡＯＸ₁
遺伝子が存在しないためにメタノールを炭素源とする培
地での増殖能が低くなっている（Ｍｕｔ−株）。

【００２５】ＰＣ４１３０をＹＰＤ培地（１％イースト
エキストラクト、２％バクトペプトン、２％グルコー
ス）３mlに植菌し、２４時間後に初期ＯＤ₅₄₀ ＝０．１
となるようにＹＰＤ培地５０mlに植菌した。３日間３０
℃で培養後に初期ＯＤ₅₄₀ ＝０．１となるようにＹＰＤ
培地５０mlに植菌した。さらに３日毎に同様の継代を繰
り返した。継代毎に菌体を１０⁷ cells/plate になるよ
うに滅菌水で希釈して２％ＭｅＯＨ−ＹＮＢｗ／ｏａ．
ａ．プレート（０．７％イーストナイトロジエンベース
ウイズアウトアミノアシッド、２％メタノール、１．５
％寒天末に塗布し、３０℃５日間培養してコロニーの有
無を判断した。その結果、１２日間継代後に塗布した２
％ＭｅＯＨ−ＹＮＢｗ／ｏａ．ａ．プレートから２０個
のコロニーが生じた。このプレートではＭｕｔ−株はほ
とんど生育できず、Ｍｕｔ＋株は生育できる。すなわ
ち、このプレートではコロニーが生じるということはメ
タノールの資化性が上昇し、Ｍｕｔ＋に変換した株が得
られたことを示している。生じたコロニーの内の１つを
適当に滅菌水で希釈して２％ＭｅＯＨ−ＹＮＢｗ／ｏ
ａ．ａ．プレートに拡げシングルコロニーに単離した。
その１つをＧＣＰ１０１と名付けた。

【００２６】(2) 菌株の培養 （前々培養）グリセロール凍結ストック菌株１mlを２０
０mlのＹＰＤ培地（表１）を含むバッフル付１，０００
ml容三角フラスコに植菌、３０℃にて２４時間振盪培養
した。

【００２７】

【表１】

【００２８】（前培養）ＹＰＤ培地５Ｌを含む１０Ｌ容
ジャーファーメンターに前々培養液を植菌し、２４時間
通気攪拌培養した。培養温度は３０℃、通気量は５Ｌ／
分とした。また、前培養においてはｐＨの制御は実施し
なかった。

【００２９】（本培養）バッチ培養用培地（表２）２５
０Ｌに前培養液を植菌し、１，２００Ｌ容ファーメンタ
ーを用いて通気攪拌培養した。槽内圧は０．５kg／c
m² 、最大通気量を８００Ｎ−L/min として溶存酸素濃
度が飽和溶存酸素濃度の５０％〜３０％程度を保持する
ように、攪拌速度を制御しながら回分培養を開始した。
回分培養において培地中のグリセロールが消費された時
点よりフィード培地（表３）の添加を開始した。このフ
ィード培地の添加にはコンピュータを使用し、培地中に
メタノールが蓄積しないように制御しながら高密度培養
を実施した。ｐＨは２８％アンモニア水を添加すること
により、ｐＨ５．８５に定値制御した。消泡は消泡剤
（Adecanol、旭電化工業製) を回分培養開始時に０．３
０ml／Ｌ添加しておき、その後は必要に応じて少量添加
することで実施した。

【００３０】

【表２】

【００３１】

【表３】

【００３２】参考例２ 参考例１のＧＣＰ１０１株から単離したＡＯＸ２プロモ
ーター [変異型。天然型ＡＯＸ２プロモーター（TEAST,
5, 167-177 (1988)またはMol. Cell, Biol.,9, 1316-1
323 (1989))中、開始コドン上流の２５５番目の塩基が
ＴからＣに変異したもの] を用いてＨＳＡ発現用プラス
ミドｐＭＭ０４２を構築し、ピキアパストリス(Pichia
pastoris) ＧＴＳ１１５株に導入し、形質転換体ＵＨＧ
４２−３株を得た（特願平３−６３５９９号）。参考例
１に準じてこのＵＨＧ４２−３株を培養し、ＨＳＡを産
生させた。

【００３３】参考例３ ＨＳＡの精製 [i] 培養上清の分離〜膜分画（ＩＩ） 参考例１、または参考例２で得られた培養液約８００Ｌ
を圧搾することにより培養上清を分離した。培養上清を
分画分子量が３０万の限外濾過膜で処理した。次いで、
分画分子量が３万の限外濾過膜を用いて液量を約８０Ｌ
に濃縮した〔膜分画（Ｉ）〕。この濃縮液を６０℃、３
時間の加熱処理後、急速に約１５℃に冷却し、ｐＨ４．
５に調整し、再度分画分子量が３０万の限外濾過膜を用
いて除去した〔膜分画（ＩＩ）〕。次いで、分画分子量
が３万の限外濾過膜を用いてアルブンミン溶液中の緩衝
液を５０ｍＭ塩化ナトリウムを含む５０ｍＭ酢酸緩衝
液，ｐＨ４．５に交換した。

【００３４】[ii]陽イオン交換体処理 ５０ｍＭ塩化ナトリウムを含む５０ｍＭ酢酸緩衝液，ｐ
Ｈ４．５で平衡化したＳ−セファロース充填カラムにア
ルブミンを吸着させ、同緩衝液で十分洗浄したのち、
０．３Ｍ塩化ナトリウムを含む０．１Ｍリン酸緩衝液、
ｐＨ９でアルブミンの溶出を行った。

【００３５】[iii] 疎水性クロマト処理 Ｓ−セファロース充填カラムから溶出されたアルブミン
溶液を０．１５Ｍ塩化ナトリウムを含む５０ｍＭリン酸
緩衝液，ｐＨ６．８で平衡化したフェニルセルロファイ
ンを充填したカラムに添加した。この条件ではアルブミ
ンはフェニルセルロファインを吸着することなく、カラ
ムを通過した。カラムを通過したアルブミンは、分画分
子量３万の限外濾過膜を用いて液量を約５０Ｌに濃縮す
るとともに、アルブミン溶液中の緩衝液を５０ｍＭリン
酸緩衝液、ｐＨ６．８に交換した。

【００３６】[iv]陰イオン交換体処理 疎水クロマト処理後、濃縮及び緩衝液交換を行ったアル
ブミン溶液を５０ｍＭリン酸緩衝液，ｐＨ６．８で平衡
化したＤＥＡＥ−セファロースを充填したカラムに添加
した。この条件ではアルブミンはＤＥＡＥ−セファロー
スに吸着することなく、カラムを通過した。

【００３７】[v] ＨＳＡの塩析処理 ５％濃度のＨＳＡに塩化ナトリウムを添加して最終濃度
１Ｍとした溶液を、酢酸でｐＨ３．５に調整し、ＨＳＡ
を沈澱させた。この沈澱を遠心により上清と分離し、不
純物を除去した。

【００３８】実施例１ 参考例１、３を経て得られた精製２５％組換えＨＳＡ１
ｍｌにＤＩＡＩＯＮＣＲＢ０２（三菱化成製）１ｇを加
え、ｐＨ６．８、イオン強度５ｍｍｈｏの条件下、室温
で２４時間攪拌した。樹脂を蒸留水で洗浄後、回収され
たＨＳＡの吸光度を測定した。尚、着色度はＡ₅₀₀ ／Ａ
₂₈₀の値で求めた。また、ＤＩＡＩＯＮ ＣＲＢ０２の
代わりにＤＩＡＩＯＮ ＣＲ２０（三菱化成製）、ＬＥ
ＷＡＴＩＴ ＴＰ２１４（バイエル製）を用いる以外は
上記と同様にしてそれぞれＨＳＡの吸光度を測定し、着
色度を求めた。結果を表４に示す。また、対照として本
発明のキレート樹脂以外の他の担体、および陽イオン交
換体、陰イオン交換体、疎水性クロマト用担体の各処理
による結果も併せて表４に示す。

【００３９】

【表４】

【００４０】実施例２ （測定波長の検討）参考例１、３を経て得られた精製２
５％組換えＨＳＡ１ｍｌにＤＩＡＩＯＮＣＲＢ０２（三
菱化成製）１ｇを加え、ｐＨ６．８、イオン強度５ｍｍ
ｈｏの条件下、室温で２４時間攪拌した。樹脂を蒸留水
で洗浄後、回収されたＨＳＡについて３５０〜６５０ｎ
ｍにおける吸光度を測定した。その結果、波長５００ｎ
ｍでの吸光度の減少度が最も高かった。結果を表５に示
す。

【００４１】

【表５】

【００４２】実施例３ 参考例２、３を経て得られた精製２５％組換えＨＳＡ１
ｍｌにＤＩＡＩＯＮＣＲＢ０２（三菱化成製）１ｇを加
え、ｐＨ６．８、イオン強度５ｍｍｈｏの条件下、室温
で２４時間攪拌した。樹脂を蒸留水で洗浄後、回収され
たＨＳＡ〔濃度２５％（ｗ／ｖ）〕について波長２８０
および５００ｎｍにおける吸光度を測定し、Ａ₅₀₀ ／Ａ
₂₈₀ を算出したところ、０．００２であった。また、着
色度（Ａ₅₀₀ ／Ａ₂₈₀ ）はキレート樹脂処理前後で１／
５に低減した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｐ 21/00 Ｂ 8214−4Ｂ // Ａ６１Ｋ 37/04 ＡＢＹ 8314−4Ｃ (72)発明者 上出 佳永子 大阪府枚方市招提大谷２丁目25番１号 株 式会社ミドリ十字中央研究所内 (72)発明者 野田 宗宏 大阪府枚方市招提大谷２丁目25番１号 株 式会社ミドリ十字中央研究所内 (72)発明者 大村 孝男 大阪府枚方市招提大谷２丁目25番１号 株 式会社ミドリ十字中央研究所内 (72)発明者 横山 和正 大阪府枚方市招提大谷２丁目25番１号 株 式会社ミドリ十字中央研究所内

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 遺伝子操作により発現されるヒト血清ア
   ルブミンをキレート樹脂で処理することを特徴とするヒ
   ト血清アルブミンの脱色方法。
2. 【請求項２】 キレート樹脂がポリオール基、ポリアミ
   ン基またはチオ尿素基から選ばれたキレート生成能を有
   する交換基をリガンドとして有する請求項１記載のヒト
   血清アルブミンの脱色方法。