JP2002265383A

JP2002265383A - インターフェロンα注射用液状製剤

Info

Publication number: JP2002265383A
Application number: JP2001071307A
Authority: JP
Inventors: Katsumi Tanaka; 克実田中
Original assignee: Mitsubishi Pharma Corp
Current assignee: Mitsubishi Pharma Corp
Priority date: 2001-03-14
Filing date: 2001-03-14
Publication date: 2002-09-18
Also published as: WO2002072135A1

Abstract

(57)【要約】【課題】インターフェロンαを含有し、長期保
存が可能な、安定性に優れた注射用液状製剤を提供する
こと。【解決手段】インターフェロンα、組換えヒト血清
アルブミンおよび非イオン系界面活性剤を含有してな
り、かつｐＨが６．５〜７．５である注射用液状製剤、
および、インターフェロンαおよび非イオン系界面活性
剤を含有してなり、かつｐＨが６．５〜７．５である注
射用液状製剤において、組換えヒト血清アルブミンを添
加することを特徴とするインターフェロンαの安定化方
法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、インターフェロン
αを含有する注射用液状製剤、および当該液状製剤にお
ける安定化方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】インターフェロン（ＩＦＮ）は生体内に
おいて産生される糖蛋白質の一種であり、サイトカイン
とも呼ばれる。細胞内でのウイルス複製および細胞増殖
を抑制し、免疫反応などに関与するといった生理活性を
有する。ＩＦＮはα型、β型、γ型の３種に大別され
る。ＩＦＮαは生体内においてウイルス感染後に主に白
血球などにより産生される。

【０００３】ＩＦＮα製剤には凍結乾燥製剤と液状製剤
の２種類がある。前者は製剤としての長期保存安定性に
優れるものの、製造工程における凍結乾燥の手間、用時
（患者への投与時）に注射用水などで再溶解する手間な
どが欠点である。後者は、ＩＦＮαが他の蛋白質と同様
に水溶液中で、蛋白質分解、酸化、ジスルフィド交換、
オリゴマー化、脱アミド化あるいはβ−脱離のような化
学的影響、ならびに凝集、沈殿および吸着のような物理
的影響を受けやすいために、長期保存安定性をいかに改
善するかが焦点である。

【０００４】ＩＦＮαを注射用として液状製剤化する手
法としては、安定化剤を添加する方法として、例えば、
ポリソルベート（商品名「トウイーン」、特開昭６１−
２７７６３３号公報、特公平７−５４７９号公報、特表
平１０−５０６９１２号公報）などが報告されている。
また、ＩＦＮαは特定のｐＨで安定化することが知られ
ており、市販されている多くのＩＦＮαの凍結乾燥製剤
においても溶解時のｐＨとして５〜６が選択されてい
る。また、ＩＦＮαの液状製剤においてｐＨを４．５〜
５．５に調製する方法（特開平８−２８３１７６号公
報、特許２７５８１５４号公報）などが報告されてい
る。

【０００５】また、ＩＦＮα（ナマルバ細胞由来）、血
漿由来のヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、トロメタモー
ル、グリシンおよび塩化ナトリウムを含有してなり、ｐ
Ｈが７．１の注射用液状製剤が市販されている（商品名
「スミフェロン」、住友製薬）。

【０００６】なお、特開昭６３−２９５５１３号公報
は、ＩＦＮ、血漿由来のＨＳＡ、非イオン系界面活性
剤、等張剤および緩衝剤からなる凍結乾燥製剤を開示し
ている。しかしながら、凍結乾燥製剤は溶液状態として
長期間（例えば、１〜３年間）保存することを想定した
ものではないので、液状製剤としての長期安定性を担保
するものではない。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、ヒト
ＩＦＮαを含有し、長期保存が可能な、安定性に優れた
注射用液状製剤を提供することにある。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の事
情を考慮に入れて研究を行った結果、組換えＨＳＡを用
いることにより、ＩＦＮαの力価の低下を抑えることを
確認した。しかしながら、この製剤は長期保存により凝
集を起こすことから、さらに研究を進めた結果、組換え
ＨＳＡと非イオン系界面活性剤を併用することにより、
ＩＦＮαの力価の低下を抑え、しかも凝集を生じないと
いう、優れた長期保存安定性を有する、ＩＦＮαの注射
用液状製剤を調製できることを見出して、本発明を完成
した。

【０００９】すなわち、本発明は、１）ＩＦＮα、組換
えＨＳＡおよび非イオン系界面活性剤を含有してなり、
かつｐＨが６．５〜７．５であるＩＦＮα注射用液状製
剤、および、２）ＩＦＮαおよび非イオン系界面活性剤
を含有してなり、かつｐＨが６．５〜７．５であるＩＦ
Ｎα注射用液状製剤において、組換えＨＳＡを添加する
ことを特徴とするＩＦＮαの安定化方法、に関するもの
である。以下に詳細を説明する。

【００１０】

【発明の実施の形態】ＩＦＮα 本発明で用いられるＩＦＮαは、天然型または遺伝子組
換え型のいずれでもよいが、好ましくは天然型ヒトＩＦ
Ｎαが挙げられる。ＩＦＮαはウイルス複製および細胞
増殖を阻害し、免疫応答を調整する作用を有する。ＩＦ
Ｎαにはアミノ酸配列の一部の置換もしくは欠失、また
は糖鎖などとの結合により２０種以上のサブタイプが存
在する。代表的なＩＦＮαサブタイプとしては、ＩＦＮ
α２ａ、α２ｂ、α２ｃが挙げられるが、その他にも、
ＩＦＮα１、α４、α５、α６、α７ａ、α７ｂ、α７
ｃ、α８、α１０、α１３、α１４、α１７ａ、α１７
ｂ、α１７ｃ、α２１、α７８、α８８、λ２などが挙
げられ、さらに糖鎖の違いなどによる多数のサブタイプ
が存在する。本発明では、ＩＦＮαとして上記のサブタ
イプのいずれを含むものであっても使用することができ
る。好ましくは少なくとも５種類のサブタイプ、より好
ましくは少なくとも１０種類のサブタイプ、特に好まし
くは少なくとも２０種類のサブタイプを含有するＩＦＮ
αを使用することができる。天然型ＩＦＮαにはナマル
バ細胞由来あるいはＢＡＬＬ−１細胞由来のもの（持田
製薬の「ＩＦＮαモチダ」、大塚製薬の「オーアイエ
フ」）などが存在する。また、遺伝子組換え型ＩＦＮα
には、組換えＩＦＮα２ａ（武田薬品の「キャニフェロ
ンＡ」、日本ロシュの「ロフェロンＡ」）あるいは組換
えＩＦＮα２ｂ（シェリングプラウ社の「イントロン
Ａ」）などが存在する。特には、ナマルバ細胞由来の天
然型ＩＦＮαの精製混合物が好適である。

【００１１】本発明の注射用液状製剤において、ＩＦＮ
αの濃度は１×１０⁶〜２０×１０⁶ＩＵ／ｍＬ程度の範
囲が好適である。

【００１２】組換えＨＳＡ本発明で用いられる組換えＨＳＡは、遺伝子組換え技術
を用いて調製されたものであって、医薬品（注射剤）と
して利用可能な程度に十分に精製されたものであれば特
に限定されるものではなく、公知のものを利用すること
ができる。

【００１３】組換えＨＳＡ（ｒＨＳＡ）は、遺伝子操作
を経て調製されたＨＳＡ産生宿主により産生されるＨＳ
Ａであれば特に限定されないが、好ましくは産生宿主に
由来する夾雑成分（例えば、蛋白質、多糖類等）を実質
的に含まない、より好ましくは公知の手段でｒＨＳＡ産
生宿主を培養した後、その培養濾液または菌体、細胞か
らそれぞれ公知の分離手段および精製手段により採取お
よび精製されたものが用いられる。また、トランスジェ
ニック動物、トランスジェニック植物を利用することも
できる（特表平９−５０９５６５号公報、同１０−５０
４２８９号公報）。具体的には以下の方法が挙げられ
る。

【００１４】本発明において用いられる、ｒＨＳＡを得
るための宿主は、遺伝子操作を経て調製されたものであ
れば特に限定されず、既に公知文献記載のものの他、今
後開発されるものであっても適宜利用することができ
る。具体的には、遺伝子操作を経てｒＨＳＡ産生性とさ
れた菌（例えば、大腸菌、酵母、枯草菌等）、動物細胞
等が例示される。特に、宿主として酵母、好ましくはサ
ッカロマイセス属［例えば、サッカロマイセス・セレビ
シエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉ
ａｅ）］、もしくはピキア属［例えば、ピキア・パスト
リス（Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ）］を用いる。ま
た、栄養要求性株や抗生物質感受性株を用いてもよい。
さらに好適にはサッカロマイセス・セレビシエＡＨ２２
株（ａ，ｈｉｓ４，ｌｅｕ２，ｃａｎ１）、ピキ
ア・パストリスＧＴＳ１１５株（ｈｉｓ４）が用いら
れる。

【００１５】これらのｒＨＳＡ産生宿主の調製方法、該
宿主を培養することによるｒＨＳＡの生産方法および培
養物からのｒＨＳＡの分離採取方法は、公知ならびにそ
れに準じた手法を採用することによって実施することが
できる。例えば、ｒＨＳＡ産生宿主の調製方法として
は、例えば通常のＨＳＡ遺伝子を用いる方法（特開昭５
８−５６６８４号公報、同５８−９０５１５号公報、同
５８−１５０５１７号公報）、新規なＨＳＡ遺伝子を用
いる方法（特開昭６２−２９９８５号公報、特開平１−
９８４８６号公報）、合成シグナル配列を用いる方法
（特開平１−２４０１９１号公報）、血清アルブミンシ
グナル配列を用いる方法（特開平２−１６７０９５号公
報）、組み換えプラスミドを染色体上に組み込む方法
（特開平３−７２８８９号公報）、宿主同士を融合させ
る方法（特開平３−５３８７７号公報）、メタノール含
有培地で変異を起こさせる方法、変異型ＡＯＸ２プロモ
ーターを用いる方法（特開平６−９０７６８号公報、同
４−２９９９８４号公報）、枯草菌によるＨＳＡの発現
（特開昭６２−２５１３３号公報）、酵母によるＨＳＡ
の発現（特開昭６０−４１４８７号公報、同６３−３９
５７６号公報、同６３−７４４９３号公報）、ピキア酵
母によるＨＳＡの発現（特開平２−１０４２９０号公
報）などが例示される。

【００１６】このうち、メタノール含有培地で変異を起
こさせる方法は具体的には以下のように行う。すなわ
ち、まず適当な宿主、好ましくはピキア酵母、具体的に
はＧＴＳ１１５株（ＮＲＲＬ寄託番号Ｙ−１５８５１）
のＡＯＸ１遺伝子領域に常法によりＡＯＸ１プロモータ
ー支配下にＨＳＡが発現する転写ユニットを有するプラ
スミドを導入して形質転換体を得る（特開平２−１０４
２９０号公報を参照のこと）。この形質転換体はメタノ
ール培地中での増殖能は弱い。そこで、この形質転換体
をメタノール含有培地中で培養して変異を起こさせ、生
育可能な菌株のみを回収する。この際、メタノール濃度
としては０．０００１〜５％程度が例示される。培地は
人工培地、天然培地のいずれでもよい。培養条件として
は１５〜４０℃、１〜１０００時間程度が例示される。

【００１７】また、ｒＨＳＡ産生宿主の培養方法として
は、上記の各公報に記載された方法の他に、フェッドバ
ッチ培養（半回分培養）により、高濃度のグルコースあ
るいはメタノール等を適度に少量ずつ供給し、産生菌体
に対する高濃度基質阻害を避けて高濃度の菌体と産生物
を得る方法（特開平３−８３５９５号公報）、培地中に
脂肪酸を添加してｒＨＳＡの産生を増強する方法（特開
平４−２９３４９５号公報）等が例示される。

【００１８】培養処理により産生されたｒＨＳＡを、宿
主細胞に由来する成分及び培養成分等から十分な精度を
もって単離・精製する方法については各種の方法が提案
されている。例えば、従来行われている方法としてｒＨ
ＳＡを含有する酵母培養液を、圧搾→限外濾過膜処理→
加熱処理→限外濾過膜処理に供した後、陽イオン交換体
処理、疎水性クロマト処理、陰イオン交換体処理等の工
程に供する方法（特開平５−３１７０７９号公報；バイ
オテクノロジー・オブ・ブラッド・プロテインズ、２２
７巻、２９３〜２９８頁、１９９３年発行）などが挙げ
られる。また、上記の従来法の後で、さらにキレート樹
脂処理またはホウ酸・塩処理の工程に供する方法も報告
されている（特開平６−５６８８３号公報、同６−２４
５７８９号公報）。また、当該酵母培養液を加熱処理後
に、吸着流動床技術を用いたストリームライン法（特開
平８−１１６９８５号公報）等を用いることもできる。
このようにして調製・精製されたｒＨＳＡは公知の手
法、例えば、滅菌加熱、限外濾過膜処理、安定化剤の添
加、除菌濾過、分注、凍結乾燥等の処理を施すことがで
きる。

【００１９】組換えＨＳＡはＩＦＮα １×１０⁶ＩＵ
当たり０．０５〜１ｍｇ程度を添加することが好まし
く、ＩＦＮα １×１０⁶ＩＵ当たり０．０８〜０．５
ｍｇ程度を添加することがより好ましい。

【００２０】非イオン系界面活性剤本発明で用いられる非イオン系界面活性剤としては、ポ
リオキシアルキレン誘導体あるいはポリオキシアルキレ
ン共重合体などが挙げられる。具体的には、ポリオキシ
エチレンソルビタン脂肪酸エステル（ポリソルベート、
商品名「トウイーン」）、ポリオキシエチレンアルキル
エーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテ
ル（商品名「トリトン」）、ポリオキシエチレンポリオ
キシプロピレングリコール（商品名「プルロニッ
ク」）、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（商品名「Ｈ
ＣＯ」）、脂肪酸モノグリセリドなどが例示される。こ
のうち、好ましい非イオン系界面活性剤は、ポリオキシ
エチレンソルビタン脂肪酸エステルである。これにはモ
ノオレエート（ポリソルベート２０）、モノラウレート
（同４０）、モノステアレート（同６０）、モノパルミ
テート（同８０）などが存在するが、特に好ましいのは
ポリソルベート８０である。

【００２１】非イオン系界面活性剤の添加濃度として
は、０．００１〜１０ｍｇ／ｍＬ程度が例示される。好
ましくは０．０１〜１ｍｇ／ｍＬ程度であり、特に好ま
しくは、０．１〜０．３ｍｇ／ｍＬ程度である。

【００２２】ｐＨ・緩衝剤本発明の注射用液状製剤のｐＨは６．５〜７．５の範囲
で、ＩＦＮαの安定化を図ることができるが、より好ま
しいｐＨは６．８〜７．１程度である。

【００２３】本発明の注射用液状製剤は緩衝剤を含有し
ていてもよい。緩衝剤は、注射剤に利用可能であって、
上記のｐＨ範囲で緩衝能を有するものであれば特に限定
されず、慣用のものを利用することができる。また、緩
衝剤を添加した後に、慣用のｐＨ調整剤を使用して、上
記のｐＨ範囲に調整することもできる。本発明で用いら
れる緩衝剤としては、例えば、トロメタモール、グリシ
ン、リン酸緩衝剤（第一リン酸塩と第二リン酸塩の組合
せ、例えば、リン酸二水素ナトリウムとリン酸水素二ナ
トリウムの組合せ）などが例示される。好ましくは、ト
ロメタモールおよびグリシンを用いる。緩衝剤の添加濃
度はｐＨを所望の範囲に維持できる程度であれば特に限
定されないが、トロメタモールの場合ならば１〜２ｍｇ
／ｍＬ程度、グリシンの場合ならば０．５〜１ｍｇ／ｍ
Ｌ程度が例示される。

【００２４】等張化剤本発明の注射用液状製剤は等張化剤を含有していてもよ
い。等張化剤は、医薬的に許容され、注射剤に利用可能
なものであれば特に限定されず、慣用のものを使用する
ことができる。例えば、塩化ナトリウムなどの無機塩、
グリセリンなどのポリオール、ブドウ糖などの単糖類、
ショ糖などの二糖類、マンニトールなどの糖アルコール
などが例示される。好ましくは、塩化ナトリウムを用い
る。等張化剤は、注射用液状製剤の浸透圧比を１〜２程
度に維持する濃度で添加される。なお、浸透圧比とは、
０．９ｗ／ｖ％の塩化ナトリウム（生理食塩液）の浸透
圧に対する溶液の浸透圧の比をいう。

【００２５】その他の添加剤本発明の液状製剤においては、組換えＨＳＡを安定化す
るための公知の添加剤を添加・含有していてもよい。例
えば、アセチルトリプトファンまたはその塩、カプリル
酸またはその塩などである。その添加濃度としては各
々、０．０１〜１０ｍｇ／ｍＬ程度（あるいはモル表示
では１〜１０ｍＭ程度）が例示される。

【００２６】調製方法本発明の注射用液状製剤は、例えば以下の方法により製
造することができる。すなわち、ＩＦＮαを含む水溶液
（好適には、塩化ナトリウムなどの等張化剤、トロメタ
モールおよびグリシンなどの緩衝剤などを含む）に組換
えＨＳＡおよび非イオン系界面活性剤（例えば、ポリソ
ルベート８０など）を所定濃度となるように添加し、ｐ
Ｈを調整後に、ＩＦＮαを所定濃度となるように希釈す
る。その後に無菌条件下にて除菌濾過し、バイアル等の
密封容器に充填することにより、本発明の注射用液状製
剤を得ることができる。

【００２７】本発明の注射用液状製剤は、凍結乾燥を経
ることなく調製されたものであり、凍結乾燥製剤とは異
なり、用時に注射用蒸留水のような溶剤に溶解する必要
がなく、そのまま患者に注射投与することができるもの
である。

【００２８】用法用量・適応症本発明のＩＦＮα注射剤は、腎臓癌、多発性骨髄種、白
血病、慢性および急性Ｂ型／Ｃ型肝炎、亜急性硬化性全
脳炎、ＨＴＬＶ−１脊髄症（ＨＡＭ）等の種々の疾患の
処置に有効である。通常は皮下または筋肉内に１日当た
り３×１０⁶〜９×１０⁶ＩＵが投与される。

【００２９】

【実施例】本発明をより詳細に説明するために、実施例
および実験例を挙げるが、本発明はこれらにより何ら限
定されるものではない。

【００３０】なお、実施例および実験例で使用したＩＦ
Ｎα（ナマルバ細胞由来、住友製薬）は、サブタイプα
１、α２、α５、α７、α８、α８８、λ２ｈ等を含有
する（糖鎖の違いなどで１６種類以上を含有する）もの
である。また、ＭＵは１００万ＩＵを意味する。

【００３１】実施例１ＩＦＮα ３ＭＵ、ｒＨＳＡ１．５ｍｇおよびポリソ
ルベート８００．１ｍｇを適量の注射用水に溶解し、
ｐＨを７．１に調整して、全量を１ｍＬとした。これを
１ｍＬ容のガラスバイアルに充填してＩＦＮα注射用液
状製剤を調製した。

【００３２】実施例２〜４実施例１と同様にして表１に示す処方のＩＦＮα注射用
液状製剤を調製した。

【００３３】

【表１】

【００３４】実験例１１ｍＬ当たりＩＦＮα ３ＭＵ、ｒＨＳＡ１．５また
は３ｍｇ、およびトリス／グリシン緩衝液を含み、ｐＨ
を６．８または７．１に調整した液状製剤を、長期保存
後に凝集の有無を観察した。結果を表２に示す。

【００３５】

【表２】

【００３６】ＩＦＮα液状製剤にｒＨＳＡを添加して長
期保存した場合は、凝集が起きることが判明した。

【００３７】実験例２実験例１のロットＡ〜ＣのＩＦＮα液状製剤を、１０℃
で１年間保存後にＩＦＮα含量を測定した。結果を表３
に示す。

【００３８】

【表３】

【００３９】ｒＨＳＡはＩＦＮαの活性を保持するため
の安定化剤として有効であることが判明した。

【００４０】実験例３１ｍＬ当たりＩＦＮα ３ＭＵ、ｒＨＳＡ１．５ｍ
ｇ、各種添加剤、トロメタモール１．２２ｍｇ、塩化ナ
トリウム８．８ｍｇおよびグリシン０．７６ｍｇを含
み、ｐＨを７．１に調整したＩＦＮα液状製剤を、１ｍ
Ｌ容のガラスバイアルに充填して、１０℃で２カ月間保
存後に凝集の有無を観察した。結果を表４に示す。

【００４１】

【表４】

【００４２】ＩＦＮα液状製剤に、ｒＨＳＡとともにア
セチルトリプトファンナトリウムおよびカプリル酸ナト
リウムを添加することにより、長期保存時の凝集を抑え
ることができた。オレイン酸ナトリウムの効果は弱いも
のであった。

【００４３】実験例４１ｍＬ当たりＩＦＮα ３ＭＵ、ｒＨＳＡ１．５ｍ
ｇ、ポリソルベート８００または０．１ｍｇ、トロメタ
モール１．２２ｍｇ、塩化ナトリウム８．８ｍｇおよび
グリシン０．７６ｍｇを含み、ｐＨを７．１に調整した
ＩＦＮα液状製剤を、１ｍＬ容のガラスバイアルに充填
した。１０℃で１０カ月間の保存後に凝集の有無を観察
した。結果を表５に示す。

【００４４】

【表５】

【００４５】ＩＦＮα液状製剤に、ｒＨＳＡとともにポ
リソルベートを添加することにより、長期保存時の凝集
を抑えることができた。

【００４６】実験例５１ｍＬ当たりＩＦＮα ３ＭＵ、ｒＨＳＡ１．５ｍ
ｇ、ポリソルベート８００〜０．３ｍｇ、トロメタモー
ル１．２２ｍｇ、塩化ナトリウム８．８ｍｇおよび
グリシン０．７６ｍｇを含み、ｐＨを７．１に調整し
たＩＦＮα液状製剤を、１ｍＬ容のガラスバイアルに充
填した。振とう下、室温で５０日間保存後に凝集の有無
を観察した。結果を表６に示す。

【００４７】

【表６】

【００４８】ポリソルベートの添加効果は、０．１〜
０．３ｍｇ／ｍＬの濃度のときが最も優れていることが
判明した。

【００４９】実験例６１ｍＬ当たりＩＦＮα ３または６ＭＵ、ｒＨＳＡ
１．５ｍｇ、ポリソルベート８００．１ｍｇ、トロメ
タモール１．２２ｍｇ、塩化ナトリウム８．８ｍｇ
およびグリシン０．７６ｍｇを含み、ｐＨを７．１に
調整したＩＦＮα液状製剤を、１ｍＬ容のガラスバイア
ルまたはシリンジに充填した。長期保存後に凝集の有無
を観察した。結果を表７に示す。

【００５０】

【表７】

【００５１】ＩＦＮαの含量、剤型の種類に関係なく、
凝集の生成を抑制できることが判明した。

【００５２】参考例（ｒＨＳＡの調製）ｒＨＳＡ産生酵母ピキア・パストリスの取得およびその
培養については、特開平５−３１７０７９号公報に記載
された方法に準じて行った。得られた培養液からｒＨＳ
Ａを回収・精製するには、特開平８−１１６９８５号公
報に記載された方法に準じて行った。

【００５３】精製されたｒＨＳＡを２５％溶液に調整
し、さらにカプリン酸ナトリウムおよびアセチルトリプ
トファンナトリウムを終濃度０．０２Ｍとなるように添
加した後に、６０℃３０分間の加熱滅菌処理および０．
２２μｍフィルター（ミリポア社）を用いて除菌濾過す
ることにより、ｒＨＳＡを注射剤として使用することが
できる。その組成としては、塩化ナトリウム含量が３．
７ｍｇ／ｍＬ以下、ｐＨが６．４〜７．４、浸透圧比が
約１（生理食塩液に対する比）であった。

【００５４】精製されたｒＨＳＡ（含有組成物）の性状
を確認した。ＨＰＬＣ分析：ｒＨＳＡをＨＰＬＣゲル濾過により分
析した。ゲル濾過分析は以下の条件で行った。カラムは
ＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷ（東ソー）。展開液は
０．１ＭＫＨ₂ＰＯ₄／０．３ＭＮａＣｌ緩衝液。検
出は波長２８０ｎｍの吸光度。

【００５５】酵母由来成分の分析：ＨＳＡ非産生酵母
の上清を、上記の方法で粗精製したものをウサギに免疫
し、得られた抗血清を用いて精製ｒＨＳＡ含有組成物中
に夾雑する酵母由来成分を検出した。測定は酵素免疫測
定法（ＥＩＡ法）によった。ｒＨＳＡ濃度として２５％
に調整したものを用いて測定した。

【００５６】分子量：前述のＨＰＬＣゲル濾過法によ
った。

【００５７】等電点：薄層ポリアクリルアミドゲルを
用い、Ａｌｌｅｎらの方法（Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏ
ｇ．、１４６、ｐ１、１９７８年）に準じて測定した。

【００５８】着色度：波長２８０ｎｍ、３５０ｎｍ、
４５０ｎｍおよび５００ｎｍでの吸光度を測定し、Ａ
₃₅₀／Ａ₂₈₀、Ａ₄₅₀／Ａ₂₈₀、Ａ₅₀₀／Ａ₂₈₀を各々算出し
た。

【００５９】パイロジェン：生化学工業のエンドスペ
シーを用いた。全ての測定結果を表８に示す。

【００６０】

【表８】

【００６１】当該ｒＨＳＡ含有組成物を本発明の実施例
および実験例に供した。

【００６２】

【発明の効果】本発明によれば、ＩＦＮα注射用液状製
剤に、組換えＨＳＡおよび非イオン系界面活性剤を添加
し、ｐＨを特定範囲（ｐＨ６．５〜７．５）に調整する
ことにより、長期間にわたってＩＦＮαの力価の低下を
抑制し、高度な安定性を維持することができる。特に、
長期保存中の凝集物または沈殿物の生成を抑制するとい
う組換えＨＳＡを添加したＩＦＮαの液状製剤に特有の
問題を解決するものである。本発明の製剤は、長期保存
が可能で安定な注射用液状製剤であり、用時に溶剤に溶
解する必要がなく、簡便に患者に投与できるという利点
を有する。本発明によれば、ヒト生体内で産生されるも
のと同じサブタイプを含有するＩＦＮαを含有し、かつ
長期保存可能で安定な注射用液状製剤を提供することが
可能となる。

【００６３】また、組換えＨＳＡを用いることにより血
漿由来のＨＳＡより均一な性状のものを、より安定的に
供給できるなど、組換えＨＳＡは質および量の両面から
も好適なものと期待される。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】インターフェロンα、組換えヒト血
清アルブミンおよび非イオン系界面活性剤を含有してな
り、かつｐＨが６．５〜７．５であるインターフェロン
α注射用液状製剤。
【請求項２】インターフェロンαおよび非イオン
系界面活性剤を含有してなり、かつｐＨが６．５〜７．
５であるインターフェロンα注射用液状製剤において、
組換えヒト血清アルブミンを添加することを特徴とする
インターフェロンαの安定化方法。