KR930701619A - 인체 면역 결핍 바이러스의 gag 단백질 전구체 p55에 대한 단일클론 항체 - Google Patents
인체 면역 결핍 바이러스의 gag 단백질 전구체 p55에 대한 단일클론 항체Info
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Abstract
본 발명은 HIV-1 프로테아제에 의해 보다 작은 구조 단백질로 절단되는, p55라 명명된 전구체 단백질에 대한 특이적 반응성을 나타내는 단일클론 항체에 관한 것이다. 본 발명의 항체는 HIV-1 프로테아제에 의해 p24 및 p17 구조 단백질을 생성하는 절단 부위와 일치하는, p55 단백질의 에피토프에 대해 특이적 반응성을 나타낸다. 이 특이적 항체는 p24/p17 절단 부위를 포함하는 p55 단편 및 골수종 세포계를 함유하는 클로닝시킨 융합 단백질로 면역화시킨 동물의 비장 세포의 융합으로부터 유래되는 하이브리도마에 의해 생성되는, 약 150,000 달톤의 분자량을 갖는 IgG1단백질이다. 이 특이적 항체는 HIV-1 노출의 모니터링, p55 서열 또는 그의 p24/p17 절단 부위를 포함하는 단편을 함유하는 천연 또는 합성 펩타이드의 단리 및 정제, 및 HIV-1 프로테아제 억제 활성에 대한 물질의 스크리닝에 유용하다.
Description
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 (A) HIV-1 프로테아제에 의한 절단 전후의 gal-gag 110 융합 단백질의 SDS-PAGE 분석, 제2도는 AIDS 환자로부터 얻은 인체 혈청(레인 a) 또는 단일클론 항체 1G12(레인 b)를 이용한 HIV-1의 완전한 바이러스성 단백질의 이뮤노블롯 분석, 제3도는 비환원(레인 1,2,3)및 환원(4,5) 조건 하에서의 단일클론 항체 1G12의 SDS-PAGE 분석을 나타낸다.
Claims (22)
- p24/p17 HIV-1 프로테아제 절단 부위를 함유하는 에피토프에 대한 특이성을 갖는 것을 특징으로 하는 HIV-1 gag 단백질 전구에 p55에 대한 단일클론 항체.
- 제1항에 있어서, 추가로 a) 분자량이 약 150,000 달톤이고, b) IgG1군에 속하며 κ 유형의 경쇄를 갖고, c) 약 5×109M-1의 친화도 상수를 갖는 것을 특징으로 하는 단일클론 항체.
- 제1 또는 2항에 있어서, 추가로 상기 항체가 gal-gag 110 융합 단백질을 항원으로 사용하여 생성된 것을 특징으로 하는 항체.
- 제1 내지 3항 중 어느 하나의 항에 기재한 항체를 생성하는 하이브리도마인 세포주.
- 제4항에 있어서, p24/p17 HIV-1 프로테아제 절단 부위를 함유하는 HIV-1 gag 단백질 전구체 p55 또는 그의 단편에 대해 면역화된 동물의 비장으로부터 얻은 항체 생성 세포와 임파아구종 세포 또는 골수종 세포의 융합에 의해 생성된 하이브리도마.
- 제4 또는 5항에 있어서, 상기 면역화된 동물이 작은 포유동물, 바람직하게는 쥐 또는 생쥐이고, 융합 짝들이 동질유전자류인 하이브리도마.
- 제4 내지 6항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 골수종 세포주가 HAT 감응성 비생산자 생쥐 골수종 세포주 Sp 2/0-Ag14인 하이브리도마.
- 제4 내지 7항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 면역화제가 β-갈락토시다제에 결합되어 있는, p24 및 p17 부분을 갖고 p24/p17 HIV-1 프로테아제 절단 부위를 포함하는 p55 단편을 함유하는 재조합 HIV-gag 융합 단백질은 하이브리도마.
- 제8항에 있어서, 상기 면역화제가 gal-gag 110 융합 단백질인 하이브리도마.
- (i) 생쥐를 β-갈락토시다제에 결합되어 있는 p24 및 p17 부분을 갖고 p24/p17 HIV-1 프로테아제 절단 부위를 포함하는 p55 서열 또는 그의 단편을 함유하는 HIV-gag 융합 단백질로 면역화시키는 단계, (ii) 얻은 하이브리드를 융합 단백질의 p55 부분에 대한 단일클론 항체의 생산에 대해 적절한 면역분석법으로 시험하는 단계, (iv) 상기 분석에서 양성인 세포를 서브클로닝시키는 단계, (v) 서브클로닝시킨 세포를 에피토프 특이성에 대해 분석하여 보다 대량 배양하기 위해 융합 단백질의 p24/p17 HIV-1 프로테아제 절단 부위에 대한 특이성을 갖는 항체를 분비하는 하이브리도마를 선별하는 단계, (vi) 특이적 항체를 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 따라 단리시키고 정제시키는 단계로 이루어진, 제1 내지 3항 중 어느 하나의 항에 기재한 단일클론 항체의 제조방법.
- 제10항에 있어서, 상기 면역화제가 gal-gag 110 융합 단백질인 방법.
- p24/p17 HIV-1 절단 부위를 함유하는 HIV-1 gag 단백질 전구체 p55 또는 그의 단편, p24/p17 HIV-1 프로테아제 절단 부위를 함유하는 p55 또는 그의 단편과 동일한 아미노산 서열을 갖는 천연 또는 합성 폴리펩타이드를 검출하기 위하 효소 면역분석법에 사용되는 제1 내지 3항 중 어느 하나의 항에 기재한 항체.
- p24/p17 HIV-1 프로테아제 절단 부위를 함유하는 HIV-1 gag 단백질 전구체 p55 또는 그의 단편, p24/p17 HIV-1 프로테아제 절단 부위를 함유하는 p55 또는 그의 단편과 동일한 아미노산 서열을 갖는 천연 또는 합성 폴리펩타이드의 단리 및 정제에 사용되는, 제1 내지 3항 중 어느 하나의 항에 기재한 항체의 용도.
- 제13항의 단리 및 정제를 위한 친화 매트릭스 중에 사용되는, 제1 내지 3항 중 어느 하나의 항에 기재한 항체의 용도.
- HIV-1 프로테아제 억제 활성을 스크리닝하는데 사용되는 제1 내지 3항 중 어느 하나의 항에 기재한 항체.
- 제15항에 있어서, 상기 항체가 샌드위치 ELISA 분석에 사용되는 용도.
- HIV-1 노출의 진단 및 모니터링에 사용되는, 제1 내지 3항 중 어느 하나의 항에 기재한 항체.
- 제15항에 있어서, 상기 HIV-프로테아제 억제 활성을 시험할 샘플이 세포 추출물, 미생물 발효 브로쓰, 합성 또는 천연 생성물을 함유하는 용액 또는 식물을 비롯한 생물학적 물질의 추출물로부터 선택되는, 제1 내지 3항 중 어느 하나의 항에 기재한 단일클론 항체의 용도.
- 제18항에 있어서, (a) 시험 샘플을 마커 효소, 바람직하게는 β-갈락토시다제에 결합되어 있는, p24 및 p17 부분을 모두 함유하고, p24/p17 HIV-1 프로테아제 절단 부위를 포함하는 p55 단편을 함유하는 HIV-gag 융합 단백질 및 HIV-1 프로테아제와 함께 배양시키고, (b) 반응혼합물을 제1 내지 3항 중 어느 하나의 항에 기재한 고정화시킨 단일클론 항체와 함께 배양시키고, (c) 생성된 반응 혼합물을 고정화시킨 항체로부터 분리시키고, (d) 융합 단백질의 마커 효소 부분의 반응물, 바람직하게는 β-갈락토시다제 색원성 기질을 고정화시키는 단일클론 항체에 첨가하고, (e) 잠재적 억제제를 함유하지 않은 공 샘플과 비교하며 마커 효소를 정량화함으로써 HIV-1 프로테아제 억제 활성을 측정하는 용도.
- 제19항에 있어서, 상기 HIV-gag 융합 단백질이 gal-gag 110 융합 단백질인 용도.
- 제1 내지 3항 중 어느 하나의 항에 기재한 선택적 항체를 분석 방법을 수행하는데 필요한 기타 시약 및 수단과 함께 함유하는, 제12, 15, 16, 17, 18, 19 및 20항 중 어느 하나의 항에 기재한 용도를 위한 키트.
- ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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