KR920701448A - 산업적 사용조건에서 안정성이 저하된 변이체 효소 - Google Patents

산업적 사용조건에서 안정성이 저하된 변이체 효소

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KR920701448A
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KR1019910700065A
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헨리쿠스 반 아이크 얀
요하네스 크박 빌헬무스
피이터 마리누스 산데르스 요한
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기스트-브로카데스 나암로제 베노오트하프
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Abstract

내용 없음

Description

산업적 사용조건에서 안정성이 저하된 변이체 효소
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도 : 플라스미드 pUCAm4의 구조, 제2도 : α-아밀라아제 유전자의 DNA서열, 제3도 : pMaTBac의 EcoRI-BamHI의 서열.

Claims (25)

  1. 미생물 발효공정의 제조물이고, 산업상의 사용조건에서 대응 야생형 효소에 비해 감소된 안정성을 나타내는 것을 특징으로 하는 변이체 효소.
  2. 야생형 효소를 1개 또는 그이상의 선택된 돌연변이시켜 얻을 수 있고, 변이된 효소가 산업상의 사용조건에서 원하는 감소된 안정성을 나타내는 것을 특징으로 하는 변이체 효소.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 빵을 굽는 조건에서 빵의 개선된 특성을 나타내는 것을 특징으로 하는 변이체 효소.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 베이킹 효소, 바람직하게는 박테리아의 α-아밀라아제인 것을 특징으로 하는 변이체 효소.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 베이킹 조건에서 대응 야생형 효소에 비해 감소된 열안정성을 나타내는 박테리아 α-아밀라아제인 것을 특징으로 하는 변이체 효소.
  6. 제1항 내지 제5항중의 어느 한 항에 있어서, 야생형 효소와는 1내지 10개의 아미노산이 다른 아미노산 서열을 가지는 변성된 효소를 코드화하는 유전자의 발현에 의해 얻어지는 것을 특징으로 하는 변성된 효소.
  7. 제5항에 있어서, 야생형 효소의 Arg 123이 Cys 123으로 교체된 아미노산 사열을 가지는 것을 특징으로 하는 변성된 박테리아 α-아밀라아제.
  8. 제5항에 있어서, 아미노산 서열이 바실루스 아밀로리퀴팩신스의 야생형 효소와는 아미노산 번호 113, 114, 116, 123, 163, l64, 166, 238, 316, 322, 345, 349, 356, 386, 394또는 398이 다르거나, 동일구조 α-아밀라아제의 동일한 위치가 다른 것을 특징으로 하는 변성된 박테리아 α-아밀라아제.
  9. 제7항 또는 8항에 있어서, 상기 박테리아 α-아밀라아제가 바실루스 α-아밀라아제, 더욱 바람직하게는 바실루스 아밀로리퀴팩신스 α-아밀라아제인 것을 특징으로 하는 변성된 박테리아 α-아밀라아제.
  10. 제3항 내지 제9항중의 어느 한 항에 따른 빵 개선 특성을 가진 변이체 효소를 사용하는 것으로 이루어지는 것을 특징으로 하는, 빵반죽 또는 이와 유사한 제조물의 제조방법.
  11. 제3항 내지 제9항중의 어느 한 항에 따른 빵 개선 특성을 가진 변이체 효소로 이루어지는 것을 특징으로 하는, 빵반죽 또는 이와 유사한 제조물.
  12. 제3항 내지 제9항중의 어느 한 항에 따른 빵 개선 특성을 가진 변이체 효소를 포함하는 것으로 이루어지는 것을 특징으로 하는, 빵 또는 관련 제조물의 제조방법.
  13. 제12항의 방법에 의해 제조된 것을 특징으로 하는 빵 또는 관련 제조물.
  14. 제1항 내지 제9항에 따른 변이체 효소를 제조할 수 있는 것을 특징으로 하는 미생물.
  15. 내인성 α-아밀라아제의 발현을 배제시키거나 비활성화시킴으로써 변이체 박테리아 α-아밀라아제의 제조에 적합하게 된 것을 특징으로 하는 미생물.
  16. 바람직하게 박테리아, 효모 또는 균류 더욱 바람직하게는 E. coli, 바실루스 또는 아스페르길루스이고, 바람직하게는 바실루스 섭틸리스, 바실루스 아밀로리퀴팩신스 또는 바실루스 리케니포미스이며, 제1항 내지 제9항중의 어느 한 항에 따른 변이체 효소를 코드화하는 유전자로 이루어지는 것을 특징으로 하는 미생물.
  17. 야생형 유전자와는 1-10개 잔기가 다른 DNA서열을 가지는 제1항 내지 9항의 변이체 효소를 코드화하는 것을 특징으로 하는 유전자.
  18. 제2도의 DNA서열을 가지는 야생형 유전자와는 1-10개의 잔기가 다른 박테리아 α-아밀라아제를 코드화하는 것을 특징으로 하는, 제14항에 따른 유전자.
  19. 제17항이나 18항에 따른 유전자로 이루어지는 것을 특징으로 하는 리터 또는 플라스미드.
  20. 제19항에 따른 벡터나 플라스미드로 형질전환된 것을 특징으로 하는 미생물.
  21. 제14-16항 또는 20항에 따른 미생물을 발효시키고 형성된 변이체 효소를 임의로 분리 및 정제하는 것으로 이루어지는 것을 특징으로 하는, 제1항 내지 9항중의 한 항에 따른 변이체 효소의 제조방법.
  22. 산업상의 사용조건에서 원하는 안정성을 나타내며, (a)야생형 효소를 코드하는 유전자를 변이원화하는 단계; (b)안정성이 변화된 변이체를 선별하는 단계; (c)야생형 효소에 비해 대응 아미노산 치환을 측정하는 단계; 및 (d)각각의 선택된 아미노산 치환을 결합하여 변이체 효소를 코드화하는 변이된 유전자를 형성하는 단계; 로 이루어지는 것을 특징으로 하는, 변이체 효소의 제조방법.
  23. 산업상의 사용조건에서 원하는 안정성을 나타내는 변이체 효소를 코드화하는 유전자를 사용하여 클로닝된 미생물의 제조방법에 있어서, (a)야생형 효소를 코드화하는 유전자를 클로닝하는 단계; (b)야생형 유전자를 코드하는 유전자를 변이원화하는 단계; (c)안정성이 변화된 변이체를 선별하는 단계; (d)야생형 효소에 비해 대응 아미노산 치환을 측정하는 단계; (e)선택된 개별적 아미노산 치환을 결합하여 변이체 효소를 코드화하는 돌연변이 유전자를 형성하는 단계; 및 (f)적당한 숙주내에서 돌연변이 유전자를 다시 클로닝하는 단계;로 이루어지는 것을 특징으로 하는 방법.
  24. 산업상의 사용조건에서 원하는 안정성을 나타내는 변이체 효소의 제조방법에 있어서, 제23항에 따라 제조된 미생물을 발효시키는 것으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 방법.
  25. 활성 성분으로서 제3항 내지 제9항중의 어느 한 항에 따른 빵 개선 특성을 가지는 변이체로 이루어지는 것을 특징으로 하는 빵 개선제 조성물.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개되는 것임.
KR1019910700065A 1989-06-29 1990-06-27 산업적 사용조건에서 안정성이 저하된 변이체 효소 KR920701448A (ko)

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