KR920700284A - 카르복실 에스테라제의 안정화 - Google Patents

카르복실 에스테라제의 안정화

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KR920700284A
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엔리카 게르디나 마리아 뮤트샤에르 요한나
야콥스 반 데르 라켄 코르넬리스
페트루스 브로에쿠이첸 코르넬리스
요한네스 크박스 빌헬무스
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안스 월터 라벤
기스트 브로카데스 나암로제 베노오트하프
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    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
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    • C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
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Abstract

내용 없음

Description

카르복실 에스테라제의 안정화
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 고초균 Thai I－8(CBS 679.85)로부터의 카르복실 에스테라에 대한 유전자의 코팅 영역의 뉴클레오티드 서열을 도시한다.
제2도는 야생형 카르복실 에스테라제 및 여러가지 돌연변이형 카르복실 에스테라제의 활성을 도시한다.
제3도는 카르복실 에스테라제의 활성에 미치는 포름알데히드 처리의 영향을 도시한다.

Claims (20)

  1. 야생형 카르복실 에스테라제에 대하여 변형되고, 산업적인 공정에 적용된 에스테르 농도에서의 입체 특이적인 에스테라제 가수분해반응에서 야생형 카르복실 에스테라제와, 비교하여 개선된 안정성을 보이는 변형된 카르복실 에스테라제.
  2. 야생형 카르복실 에스테라제에 대하여 변형되고, 15mg/ml의 (S)－나프록센과 40℃에서 1.5 시간 동안 접촉할 때 야생형 카르복실 에스테라제와 비교하여 증가된 안정성을 보이는 변형된 카르복실 에스테라제.
  3. 제1항 또는 2항에 있어서, 상기 야생형 카르복실 에스테라제가 제1도의 DNA와 적어도 70%의 동종성을 보이는 DNA에 의하여 코드화되거나 또는 고초균 Thai I－8카르복실 에스테라의 적어도 70%의 동종성을 보이며 상기 변형된 카르복실 에스테라제는 상기 야생형 카르복실 에스테라제에 존재하는 적어도 하나의 염기성 아미노산 잔기가 상기 야생형 에스테라제와 상이한 것을 특징으로 하는 변형된 카르복실 에스테라제.
  4. 제1항 내지 3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 염기성 아미노산 잔기는 적어도 하나의 알데히드 또는 무수물기를 포함하는 화합물로 야생형 카르복실 에스테라제를 처리함으로써 변경되는 것을 특징으로 하는 변형된 카르복실 에스테라제.
  5. 제4항에 있어서, 화합물은 알데히드 도는 무수물이고, 바람직하게는 포름알데히드, 글루타르알데히드, 글리옥살, 글루타르산 무수물 및 숙신산 무수물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 변형된 카르복실 에스테라제.
  6. 제1항 내지 3항 중 어느 하나에 있어서, 상기 염기성 아미노산 잔기가 다른 아미노산 잔기에 대하여 대치되는 것을 특징으로 하는 변형된 카르복실 에스테라제.
  7. 제3항 또는 6항에 있어서, 상기 염기성 아미노산 잔기가 라이신, 아르기닌 또는 히스티딘 잔기인 것을 특징으로 하는 변형된 카르복실 에스테라제.
  8. 제7항에 있어서, 상기 염기성 아미노산 잔기는 Lys 34, Lys 81 또는 Lys 217인 것을 특징으로 하는 변형된 카르복실 에스테라제.
  9. 제6항 내지 제8항중 어느 하나에 있어서, 상기 염기성 아미노산 잔기가 글루타민 또는 아르기닌에 대하여 대치되는 것을 특징으로 하는 변형된 카르복실 에스테라제.
  10. 제1항 내지 9항중 어느 하나에 있어서, 야생형 카르복실 에스테라제가 고초균 균주, 바람직하게는 고초균 Thai I－8균주(CBS 679.85)로부터 얻을 수 있는 카르복실 에스테라제와 동일하거나 실질적으로 동일한 것을 특징으로 하는 변형된 카르복실 에스테라제.
  11. 야생형 카르복실 에스테라제의 적어도 하나의 염기성 아미노산 잔기를 변형 또는 치환하는 것으로 이루어지는 야생형 카르복실 에스테라제의 안정화방법.
  12. 상기 야생형 에스테라제를 염기성 아미노산 잔기를 중성화할 수 있는 시약으로 처리하는 것으로 이루어지는 야생형 카르복실 에스테라제의 안정화방법.
  13. 제12항에 있어서, 상기 시약이 알데히드 또는 무수물인 것을 특징으로 하는 방법.
  14. 제13항에 있어서, 상기 알데히드가 포름알데히드, 글루타르 알데히드 및 글리옥살로 이루이지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  15. 제13항에 있어서, 상기 무수물이 글루타르산 무수물 또는 숙신산 무수물인 것을 특징으로 하는 방법.
  16. 제11항 내지 15항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조된 변형된 카르복실 에스테라제.
  17. 적어도 하나의 염기성 아미노산 잔기에 대한 코돈을 대치하기 위하여 상기 야생형 에스테라제를 코드화하는 유전자를 다른 아미노산 잔기에 대한 코돈으로 변형시켜 변형된 유전자를 얻는 단계와, 그 결과의 변형된 유전자를 발현시켜 상기 변형된 카르복실 에스테라제를 생성하는 단계로 이루어지는, 야생형 카르복실 에스테라제에 대하여 변형된 카르복실 에스테라제의 제조방법.
  18. 제17항의 방법에 의하여 제조된 변형된 카르복실 에스테라제.
  19. 상기 에스테르를, 입체특이적 가수분해를 유발하는데 효과적인 양의 제1항 내지 10항, 16항 또는 18항 중 어느 하나의 변형된 카르복실 에스테라제와 접촉시키는 것으로 이루어지는, 카르복실 에스테라제의 입체를 이적 가수분해의 수행방법.
  20. 제19항에 있어서, (R, S)－2－치환 프로피온산 에스테르, 바람직하게는 나프록센, 이부프로펜 또는 디클로포프 에스테르가 입체 특이적으로 가수분해되어 해당하는 경상 이성질체인(S)－산이 지배적으로 얻어지는 것을 특징으로 하는 방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
KR1019900702582A 1989-04-28 1990-04-06 카르복실 에스테라제의 안정화 KR100204837B1 (ko)

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PCT/NL1990/000058 WO1990013635A1 (en) 1989-04-28 1990-04-26 Stabilization of carboxyl esterase

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