KR910009283A - 백일해 독소 및 또는 사상혈구 응집소 항원의 정제 방법(Process) - Google Patents
백일해 독소 및 또는 사상혈구 응집소 항원의 정제 방법(Process) Download PDFInfo
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Abstract
내용 없음
Description
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 실시예1에 기술된 바와 같이 본 발명의 방법을 수행한 후 얻어진 단백질 피이크의 280nm에서 기록된 용리프로필이다.
제2도는 실시예1에 기술된 바와 같이 본 발명의 방법을 두개 크로마토그래피 단계 중 첫번째로부터의 단백질 피이크의 280nm에서 기록된 용리 프로필이다.
Claims (19)
- 백일해 독소(PT)및/또는 사상 혈구응집소 항원(FHA)을 흡수시키기에 충분한 시간동안 흡수제를 함유하는 히드록시아파티트와비이. 페르투씨스(B.pertussis)발효액 또는 무세포 배양 상청액을 접촉시키고, 상기 흡수된 속도 및/ 또는 항원 중 적어도 하나를 함유하는 첫번째 혼합물을 상기 흡수제로부터 용리시키는 것으로 구성되는, 상기 독소 및 항원중 적어도 하나를 함유하는 상기 무세포 배양 상청액 또는 상기 발효액으로부터 상기 백일해독소(PT)및/또는 사상 혈구응집소 항원(FHA)을 정제시키기 위한 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 흡수제의 특이 밀도가 적어도 1.15인 방법.
- 제1항 또는 제2항중 어느 한 항에 있어서, 상기 흡수제가 다공성 또는 반-투과성 담체상 히드록시아파리트로 구성되는 방법.
- 제3항에 있어서, 상기 담체가 실리카; 알루미나;다른 무기 다공성 지지재; 아크릴산 수지, 비닐산 수지, 아가로즈 및 셀룰로즈를 포함하는 유기 수지 및 바이오-겔화 지지재; 및 그의 혼합물로 구성되는 군으로부터 선택되고, 가교에 의해 임의로 조직화되거나 강성화되는 방법.
- 제1항 내지 4항중 어느 한 항에 있어서, 상기 흡수제가 히드록시아파티트 적어도 0.5g/ 상기 육즙 1의 양으로 상기 육즙에 첨가되는 방법.
- 제1항 내지 제5항중 어느 한 항에 있어서, 상기 흡수 시간이 5분-30시간인 방법.
- 제1항 내지 제6항중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원(들)이 부착된 상기 흡수제를 200mM이하의 이온강도에서 완충액으로 세척시킴을 포함함을 특징으로 하는 방법.
- 제1항 내지 제7항중 어느 한 항에 있어서, 상기 용리 단계가 pH6.0-9.0의 조건하에 이온강도 200mM 이상에서 완충액으로 수행되는 방법.
- 제1항 내지 제8항중 어느 한 항에 있어서, 상기 첫번째 혼합물이 용리되는 첫번째 단백질 피이크에 상응하는 푸울링된 부분으로 구성되는 방법.
- 제1항 내지 제9항중 어느 한 항에 있어서, 상기 첫번째 혼합물이 적어도 30%의 양으로 상기 독소 및/ 또는 항원을 포함하는 방법.
- 제1항 내지 10항중 어느 한 항에 있어서, 컬럼중 하나가 무극성-리간드 크로마토그래피 컬럼으로 구성되는 두개의 연속적인 크로마토그래피 컬럼에 상기 첫번째 혼합물을 놓고, 실질적으로 내부독소 없는 FHA 및/또는 PT및 다른 단백질성 재료로 구성되는 두번째 크로마토그래피의 컬럼으로부터 용리시키는 단계들을 포함함을 특징으로 하는 방법.
- 제11항에 있어서, 상기 무극성 리간드 크로마토그래피 컬럼이, 무극성 리간드들이 지지재에 소수 특성을 제공하기에 충분한 양으로 결합되는 지지재로 구성되는 방법.
- 제12항에 있어서, 상기 무극성 리간드가, 리간드와 지지재 사이의 결합과 반응할 수 있는 기를 함유하지 않는 방향족 또는 선형, 분지된 또는 시클릭 지방족 화합물로 구성되는 방법.
- 제13항에 있어서, 상기 무극성 리간드 지지재가, 치환 또는 비치환페닐, 알킬페닐 또는 C2-26인 선형 지방족기들이 결합된 중합체 메트릭스로 구성되는 방법.
- 제12항, 제13항 또는 제14항에 있어서, 상기 지지재가 셀룰로즈, 아가로즈, 덱스트란, 아크릴산 폴리카르보히드레이트, 가교되고 개질된 그의 유도체, 다공성 수지 및 무기 지지재로 구성되는 군으로부터 선택되는 방법.
- 제11항 내지 제15항중 어느 한 항에 있어서, 무극성-리간드 크로마토그래피 단계가(a) pH6.0이사, 이온강도 0.2M 이상에서 컬럼을 적하시키고/시키거나 (b) pH7.0 이상의 조건하에 적하된 컬럼을 세척하고/하거나 (c) 수용성, 비이온 세정제 존재하에 이온강도 300mM이하, pH7.0이하의 조건하에 산성 완충액내에서 컬럼으로부터 항원(들)을 함께 용리시키는 것으로 구성되는 방법.
- 제11항 내지 제16항중 어느 한 항에 있어서, 상기 무극성-리간드 크로마토그래피 컬럼이 두개 컬럼중 첫번째인 방법.
- 제11항 내지 제17항중 어느 한 항에 있어서, 상기두번째 크로마토그래피 단계가, pH 7.0이하, 이온강도 200mM 이하에서 첫번째 컬럼으로부터 혼합물을, PT 및 FHA 둘다를 결합시킬 수 있는 지지재 상에 적하시키고, pH 6.0이상, 이온 강도 200mM 이상의 조건하에 상기 지지재로 부터 내부독소가 실질적으로 없는 상기 FHA및/또는 PT 및 다른 단백질성 재료를 용리시키는 것으로 구성되는 방법.
- 제1항 내지 18항중 어느 한항에 있어서, 크기 배제 크로마토그래피에 의한 FHA로부터의 PT분리를 포함함을 특징으로 하는 방법.※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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