KR890004805B1 - 가압식 배양장치 - Google Patents

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가부시기가이샤 시마즈세이사구쇼
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Abstract

내용 없음.

Description

가압식 배양장치
제 1 도, 제 2 도는 본 발명의 가압식 배양장치의 일실시예의 구성설명도.
제 3 도는 본 발명의 장치를 사용하여 히트·임파계세포를 배양하였을 때의 배양시간과 세포밀도의 관계를 표시하는 그래프도.
* 도면의 주요부분에 대한 부호의 설명
2 : 배양조 3 : 교반수단
15 : 배기수단 16 : 배지공급수단
17 : 배양액여과수단 8 : 제어부
21 : DO센서 22 : pH전극
23 : 액면센서 31 : 회전자
61 : 배지탱크 72 : 여과부
41, 52, 9, 10 : 전자밸브 62, 71, 73 : 페리스 타펌프
a : 산소공급용관로 b : 배기용관로
c : 배기공급용관로 d : 배양액순환유로
e : 여액배출용관로 f : 2산화탄소 공급용관로
g : 공기도입용관로
본 발명은 가압식 배양장치에 관한 것이다. 더욱 상세히는 생체외에서 세포 또는 호기적 미생물을 고밀도로 배양하는 가압식 배양장치에 관한 것이다.
생체외에서 세포 또는 호기적 미생물로 고밀도로 배양함에는, 배양조내의 배양액중에 충분한 산소량을 공급하는 것과, 배양액중에 생기는 노폐물을 제거하고 또한 영양분을 보급하는 등의 배양액의 교환을 충분히 행하는 것이 필요하다. 전자에 대하여는 헤모글로빈이나 O2캐리어로서 물의 20배나되는 산소를 용해할 수 있는 플루오르카아본 등을 첨가(일본국 스기노유키오편, 「세포 배양기술」고오단샤, 1985, P 133)하여 상압하에서 배양을 실시하는 장치이나, 상기 배양조내의 배양액상 또는 이 액중에 통기가능하게 산소도입관을 착설하고, 상압하에서 산소가스를 이 배양액과 접촉 또는 이 액중에 버블링시키도록 구성된 장치등이 알려져 있다. 한편 후자에 대하여는 세포를 배양액으로부터 분리하지 않으면 안되며, 이것에는 세포를 포함한 배양액의 직접 여과 혹은 세포가 배양액보다도 비중이 큰 것을 이용한 세포 침전관방식이 사용되고 있다(일본국 스기노유키오편,「세포 배양기술」고오단샤, 1985, P 148).
그러나, 배양액중에 여분의 물질을 첨가하는 것은 생산물질을 배양액 중으로부터 회수·분리정제할때에 조작이 번잡하게되고, 또 산소가스의 배양액상에의 통기는 배양액의 교반속도에 의하여 그 효율이 좌우되고 또 한편 산소가스를 배양액중에 통기하는 것은 효율적으로는 우수하나 배양액이 발포하여 세포등이 파괴되는등 각각 문제가 있다.
한편, 상기 배양액으로부터의 세포의 분리에 있어서 배양액을 직접여과할 경우, 눈막힘이 빨리 생기고 따라서 장기에 걸쳐서 사용할 수 없으며, 또 세포침전관방식에서는 주위온도를 일정하게 하지 않으면 침전관내에서 대류(對流)가 발생하고, 배양액으로부터 세포를 분리할 수 없으며 또한 분리할 수 있는 배양액의 양은 세포의 감기는 속도에 제한되기 때문에, 고밀도로 배양을 실시할 경우에 배양액의 교환이 충분히 행해질 수 없는등의 문제가 있었다.
본 발명은 이러한 상황에 비추어 이루어진 것이며, 특히 고밀도 배양을 위한 충분량의 산소를 공급할 수 있고, 또한 배양액교환을 충분히 행할 수 있도록 구성된 가압식 배양장치를 제공코저하는 것이다.
이렇게하여 이 발명에 의하면, 세포 또는 호기적 미생물의 배양액을 내부에 저류하는 밀폐가능한 배양조(槽)와, 이 배양조내의 상부공극에 접속된 산소공급부로부터 유량조절부를 개재하여 상기 배양조내에 산소를 공급할 수 있는 산소공급용관로와, 마찬가지로 상기 배양조에 접속되어 배기조절부를 개재하여 상기 배양조내의 기체를 배출할 수 있는 배기용관로와, 배양액중의 배양액을 교반하는 교반수단과, 배양액중의 용존산소농도를 검지하는 용존산소농도 검지수단과, 이 용존산소농도 검지수단의 검지출력에 의거하여 상기 조절부를 제어하여 배양조내를 산소 가압상태로 유지할 수 있는 제어부를 구비하고 있다.
또 배양조에 배지(培地)를 보급하는 배지공급수단과, 배양액의 순환유로를 부설하고, 이 순환유로의 도중에 세포등을 투과하지 않으나 배양액중의 용해성분을 투과할 수 있는 필터관로로 된 배양액 여과수단을 삽설하여 이루어진 가압식 배양장치가 제공된다.
본 발명의 장치는, 배양액중의 용존산소농도에 의거하여 자동적으로 배양조내를 산소가압상태로 유지하여 배양액중에 강제적으로 산소를 용해시켜서 충분한 산소량을 공급할 수 있도록 구성된다. 또한 배양액을 순환하는 과정에서 이 순환유로 밖으로 배양액중의 용해성분을 방출하고, 한편 배양조내에 새로히 배지를 공급하여 배양액을 효율좋게 교환할 수 있는 배양액 교환수단이 부설된 것을 특징으로 한다.
본 발명의 장치는, 세포 또는 호기적 미생물(이하 세포등)을 대상으로 하는 고밀도 배양장치이다.
본 발명의 장치에 사용되는 배양조는, 배양액저류조와 이 조에 착탈가능하게 장착되고 또한 이 조를 밀폐할 수 있는 개체(蓋體)로 구성된 것이 바람직하다. 따라서, 이 배양조에 후술하는 바와같이 장착되는 소정의 부재 및 관로는 상기 개체에 장착되는 것이 바람직하다. 이 경우 소정의 부재 및 관로는 상기 밀폐상태를 유지할 수 있도록 장착된다.
본 발명의 장치에 사용되는 산소공급용관로는, 상기 배양조내의 공극에 개구를 가질 수 있도록 장착된다.
상기 산소공급용관로는 유량조절부를 개재하여 산소공급부에 접속된다. 이 산소공급부에는, 이 공급부로부터의 공급산소압에 의하여 상기 배양조내를 가압상태로 할 수 있도록 고압산소 봄베 또는 필요에 따라서 콤프레서 등이 사용된다. 상기 유량조절부는 이 관로를 폐쇄 또는 이 관로내의 산소 가스유량을 조절할 수 있는 구성의 것이 사용된다. 예를들면, 전자밸브, 니이들밸브 등을 들 수 있다. 또한, 이 산소공급용관로에는 제균필터등이 착설되어 있어도 좋다.
본 발명의 장치에 사용되는 배기용관로는, 상기 배양조내의 공극에 개구를 가지도록 장착된다. 상기 배기용관로에는 배기조절부가 착설된다. 이 배기조절부는 관로를 폐쇄 또는 배기량을 조절할 수 있는 구성의 것이 사용된다. 예를들면 전자밸브, 니이들밸브 등을 들 수 있다. 상기 배기용관로는 단지 드레인에 연설되어 있어도 된다.
본 발명의 장치에 사용되는 교반수단은, 배양액의 용존산소농도를 균일하게 할 수 있는 것이라면 어느것이라도 좋으나, 배양액중의 세포등을 파괴하지 않고 또한 배양조내의 가압상태를 일정하게 유지할 수 있는 점에서, 마그네틱교반기, 교반용 프로펠러등을 사용한 기계적인 것이 바람직하다.
본 발명의 장치에 사용되는 용존산소 검지수단으로서는, 용존산소전극(DO센서)이 바람직하다. 이 농도검지수단은 후술하는 제어부에 접속된다.
상기 제어부는, 소정의 용존산소농도를 기억하는 기억부와, 이 기억부와 상기 용존산소농도 검지수단에 의하여 측정되는 측정농도치를 비교하는 비교부를 가지고, 이 비교부의 출력신호에 의거하여 상기 산소공급용관로상의 조절부, 배기용관로상의 배기부 및 산소공급부가 작동되도록 구성된다. 상기 기억부에 기억되는 기억용존산소농도치는, 배양대상물의 배양시에 요구산소량에 의하여 약간 다르나 5ppm 정도가 바람직하다. 상기 비교부에 있어서 측정농도치가 기억농도치보다도 작을때 이 비교부로부터의 신호에 의하여 상기 조절부 및 배기부가 각 관로를 폐쇄할 수 있도록 작동되고, 이어서 산소공급부가 작동된다.
이 산소공급부에 콤프레서를 사용하고 있을때는, 이 콤프레서가 상기 비교부로부터의 신호에 의하여 작동된다. 이 작동에 의하여 배양조내가 산소가압상태로 되나, 이 가압은 상기 기억농도치에 대응하여 0.3∼0.7kg/㎠ 정도가 바람직하다.
또, 본 발명의 장치의 배양조에는, 여과수단이 삽설된 배양액순환 유로와, 배지공급수단이 부설된다. 이들 부설되는 순환유로와 배지공급수단에 의하여 배양액 교환수단이 구성된다. 상기 삽설되는 여과수단은, 세포등을 투과하지 않으나 배양액중의 용해성분을 투과할 수 있는 필터관로로 주로 구성된것이 사용된다. 즉 필터면이 순환유로에 대하여 동일축에 설정됨으로서, 이 유로를 배양액이 순환하는 과정에 있어서 상기 투과성분이 이 순환유로 밖으로 방출될 수 있도록 구성된 소위 크로스플로우형 여과장치가 사용된다. 상기 여과수단은 순환유로에 삽탈가능하게 구성되는 것이 바람직하다.
상기 순환유로에는 송액수단이 착설된다. 이 송액수단으로서는 페리스 타펌프등이 바람직하다. 상기 배지공급수단은, 배지저류조와, 이 저류조로부터 송액수단을 개재하여 배양조까지 접속되는 배지이송용관로로 구성된다. 상기 송액수단으로서는 페리스 타펌프등이 바람직하다. 이 배지공급수단은 배양조내의 저류배양액이 소정량 보다도 감소한 경우에 작동되나, 이 작동은 자동적으로 제어되는 것이 바람직하다. 이 자동제어의 기구로서는, 배양조내의 배양액의 액면변동에 의거하여 상기 송액수단을 작동할 수 있는 구성이 바람직하고, 예를들면 배양조내에 액면센서를 착설하고, 이 액면센서로부터의 출력신호에 의거하여 상기 송액수단의 구동 및 정지작동을 제어할 수 있는 구성을 들 수 있다.
또한, 본 발명의 장치에는 또 필요에 따라서 배양조에로의 2산화탄소공급용관로 및 공기도입용관로가 설정되어 있어도 좋다. 즉, 2산화탄소의 공급은 배양액의 pH의 염기성쪽으로 시프트를 억제하는 경우에 필요하며, 공기의 도입은 산소공급량이 너무 많아서 세포 그 자체에 장해가 생기는 경우에 배양조내의 산소농도를 저감하기 위하여 필요하다. 상기 2산화탄소공급용관로 및 공기도입용관로는, 각각 조절부를 가지고 독립으로 배설되어도 되고, 또 각각 조절부를 가지고 상기 산소공급용관에 관로 접속되어 있어도 된다.
또 이 발명의 배양조에는 통상의 배양액의 pH를 측정하는 수단 및 배양액의 온도를 콘트롤하는 수단이 설정되어 있어도 좋다.
본 발명에 의하면, 배양조내에서 산소 가압상태가 유지할 수 있고, 이것에 의하여 배양액중에 산소가스가 강제적으로 용해되어 항상 일정농도 이상으로 용존산소가 존재함으로 세포 및 호기적 미생물의 배양이 고밀도로 실시된다. 또 배양액이 여과수단이 삽설된 순환유로를 순환됨으로서, 이 순환유로 밖으로 배양액중의 용해성분이 방출되는 한편 세포는 이 유로내에 분리잔류되고, 순환류에 의하여 다시 배양조내로 되돌아가게 된다. 또한 배지공급수단으로부터 신선한 배지가 공급되어서, 배양조내에는 일정량의 배양액이 저류하게 된다.
이하 실시예에 의하여 본 발명을 상세히 설명하나, 이것에 의하여 본 발명은 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
제 1 도는 본 발명의 가압식 배양장치의 일실시예의 구성설명도이다. 도면에 있어서 가압식배양장치(1)는, 배양조(2), 교반장치(3), DO센서(4), 제어부(5), 산소공급용관로(a), 배기용관로(b)로 구성되어 있다.
배양조(2)는 밀폐가능한 배양액주입구 및 배출구(도시하지 않음)를 가지고 또한 교반장치(3)가 설치되어 있다. 이 교반장치는 배양액을 교반하고 이 배양액중의 용존산소농도를 균일하게 하기 위한 것이다.
산소공급용관로(a)는 산소봄베(6)로부터 전자밸브(7), 유량계(8), 제균필터(9), 세기병(洗氣甁) (10)을 이순서로 개재해서 배양조(2)에 접속되어 있으며, 한편 배기용관로(b)는 전자밸브(12) 및 제균필터(11)를 개재하여 배양조(2)에 접속되어 있다.
제어부(5)는 기억부(51) 및 농도비교부(52)를 가지고 있고, 기억부(51)는 미리 설정되는 용존산소농도의 농도치를 기억한다. 한편 농도비교부(52)는 DO센서(4)와 접속되어 있고 이 DO센서에서 측정되는 용존산소농도치와 상기 기억농도치를 비교한다. 이 농도비교부로부터의 신호에 의거하여 제어부(5)는 산소공급용관로(a)상의 전자밸브(7) 및 배기용관로(b)상의 전자밸브(12)의 개폐를 작동하도록 구성되어 있다.
다음에 이 장치의 작동을 설명한다.
먼저, 설정할 용존산소농도를 미리 제어부의 기억부에 기억시켜 둔다. 한편 배양조내에는 세포 또는 호기적 미생물을 함유하는 배양액을 저류하여 교반한다. 이 상태에서 산소공급용관로상의 전자밸브 및 배기용관로상의 전자밸브를 어느 것이나 열린상태로 하여 배양액상에 산소를 접촉·통과시킨다. 이후 상기 각 전자밸브가 닫혀지고, 이 상태에서 배양이 개시된다. 이 사이 제어부의 농도비교부에서는 이 배양액중에 설정된 DO센서에 의하여 측정되는 용존산소농도와 처음에 설정된 기억농도치와의 비교가 이루어진다. 이 상태에서 배양을 진행시키면 배양액중의 용존산소가 세포 또는 호기적 미생물에 의하여 소비되어 DO센서에 의한 측정농도치가 상기 기억농도치 이하로 된다. 이 점에서 산소공급용관로상의 전자밸브 및 배기용관로상의 전자밸브가 열린상태로 작동되어 산소봄베로부터 산소가 공급되어 배약액상면에 통기시킨다. 이 상태에서 더욱 더 배양을 계속해가면 세포밀도 또는 호기적 미생물의 밀도가 높게되고, 이 배양액중의 용존산소의 소비속도가 빨라지게되어, 상기와 같이 산소의 배양액상면 통기만으로는 상기 기억농도치를 유지할 수 없게된다.
이 상태에서는 DO센서에 의한 배양액중의 용존산소농도의 측정치가 상기 기억농도치 보다도 저하하는 것을 의미하나, 이 경우 제어부는 상기 배기용관로상의 전자밸브만을 닫도록 작동하고 이 결과, 배양조내가 공급산소에 의하여 가압상태로 된다. 이 상태에서는 산소는 배양액중에 강제적으로 용해되어, 배양액중의 용존산소농도가 높게되고, 배양은 더욱 더 진행되어 고밀도의 배양을 달성할 수 있게 된다.
다음에 배양조에 더욱 더 배지를 보급하는 배지공급수단과, 배양액의 순환유로를 부설하고, 이 순환유로의 도중에 세포등을 투과하지 않으나 배양액중의 용해성분을 투과할 수 있는 필터관로로 된 배양액 여과수단을 삽설하여 이루어지는 장치를 설명한다.
제 2 도는 본 발명의 가압식 배양장치의 일실시예의 구성설명도이다. 도면에 있어서 가압식 배양장치(1)는, 배양조(1), 교반수단(13), 산소공급수단(23), 배기수단(15), 배지공급수단(16), 배양액여과수단(17), 제어부(18)로 주로 구성되어 있다.
배양조(2)는 배양액 저류조와 이것을 착탈가능하게 밀폐할 수 있는 개체로 구성되어 있다. 이 개체에는 DO센서(21), pH전극(22), 액면센서(23)와 후술하는 각 관로가 각각 소정의 위치에 설정되어 있다. 또 이 배양조에는 도시하지 않은 온도조절기가 부설되어 있으며, 배양액의 온도가 일정하게 유지할 수 있도록 구성되어 있다.
교반수단(13)에는 마그네틱교반기가 사용되고 있다. (31)은 그 회전자이다. 이 교반수단에 의하여 배양액은 교반되고 이 배양액중의 용존산소농도가 균일하게 된다.
산소공급수단(14)은, 도시하지 않은 산소봄베로부터 전자밸브(41), 제균필터(42)를 이 순서로 개재하여 배양조(2)의 개체에 접속되는 산소공급용관로(a)로 구성되어 있다. 이 관로(a)는 배양조내의 상부공간에 개구하여 착설되어 있다. 또한, 이 관로의 전자밸브(41)와 제균필터(42)와의 사이에 세기병이 착설되어 있어도 된다. 또 산소유량은 봄베에 부속하는 유량계에 의하여 조절된다.
배기수단(15)은, 배양조내의 상부공간에 개구하여 배양조(2)의 개체에 장착되고, 제균필터(151) 및 전자밸브(152)를 이 순서로 관로접속하여, 도시하지 않은 배기구에 연설되는 배기용관로(b)로 구성되어 있다.
배지공급수단(16)은, 신선한 배지를 저류하는 배지탱크(61)와 이 탱크내의 저부근방에 개구하여, 페리스타펌프(62)를 개재하여 배양조(2)의 개체에 접속되고, 배양조내의 상부공간에 개구하는 배지공급용관로(c)로 구성되어 있다.
배양액여과수단(17)은, 배양조내의 저부근방에 개구하여 장착되고, 페리스타펌프(71), 여과부(72)를 이 순서로 개재하여, 다시 상기 개체에 접속되어 배양조내의 상부공간에 개구하여 설정되는 배양액순환유로(d)로 구성되어 있다. 상기 여과부(72)는, 크로스플로우형 여과장치가 사용되고 있다. 즉, 통형상으로 필터면을 가진 필터관로를 상기 순환유로(d)에 삽설하므로서, 이 유로와, 동축에 필터면이 설정된것이며, 이 필터관로의 바깥쪽에 여액을 수용하는 외통형상 용기가 설정되어 있다. 이 필터관로는 교환가능하게 장착되어 있다. 상기 여과부(72)에는 여액배출용관로(e)가 페리스타펌프(73)를 개재하여 배양액회수용펌프(74)에 접속되어 있다.
또한, (f)는 2산화탄소 봄베에 관로 접속되어, 전자밸브(19)를 가진 2산화탄소 공급용관로이고, (g)는 공기봄베에 관로접속되어, 전자밸브(20)를 가진 공기도입용관로이다.
제어부(8)는, DO센서(21), pH전극(22), 액면센서(23), 전자밸브(41) (52) (9) (10), 페리스타펌프(62) (71) (73)에 각각 전기접속되어 있으며, 이들의 작동을 제어한다. 이 제어부(18)는 주로, 배양액중의 용존산소농도를 콘트롤하는 용존산소농도제어계와, 배양액교환을 콘트롤하는 배양액교환제어계로 구성되어 있다. 상기 용존산소농도제어계에서는, 기억부 및 농도비교부를 가지고 있고, 기억부는 미리 설정되는 용존산소농도의 농도치를 기억한다. 한편 농도비교부는 DO센서로 측정되는 용존산소농도치와 상기 기억농도치를 비교한다. 그리하여 이 농도비교부로부터의 신호에 의거하여 산소공급용관로(a)상의 전자밸브(41) 및 배기용관로(b)상의 전자밸브(152)의 개폐를 작동하도록 구성되어 있다. 또 상기 배양액교환제어계에서는, 액면센서(23)의 도통(導通)의 유무에 의하여 일정시간에 배지공급수단의 페리스타펌프(62)를 작동하도록 작동하도록 구성되어 있다.
다음에 이 장치의 작동을 설명한다.
용존산소농도의 검지, 산소의 공급에 대하여는 제 1 도의 장치의 작동과 마찬가지임을 생략하고, 특히 배양액의 교환에 대하여 설명한다.
먼저, 제어부의 지령에 의하여 배양액순환유로에 설정된 페리스타펌프가 작동되어, 배양조내의 배양액이 이 유로를 순환한다. 이 순환에 따라 이 유로의 여과부에 있어서, 이 유로내의 배양액중에 용해되어 있는 노폐물이나 배지성분등의 용해성분이, 필터관로로부터 침출하므로서 이 유로밖으로 방출되고, 한편 이들로부터 분리되어 잔류하는 배양세포는 순환류를 타고 다시 배양조내로 되돌아가게 된다. 상기 방출된 용액성분은 회수용관로에 설정된 페리스타펌프의 작동에 의하여, 배양액회수탱크로 이송된다. 이와같은 여과조작에 의하여 배양조내의 저류배양액량이 감소함에 따라 액면이 저하하고, 미리 설정되어 있는 액면센서가 액면으로부터 떨어지면 이 센서에서의 도통이 없어지고, 이것이 액면검출신호로 되어 제어부에 출력되고, 이 출력치에 의거하여 제어부는 배지공급수단의 페리스타펌프를 일정시간 작동한다. 이것에 의하여 신선한 배지가 일정량, 배양조내에 공급되어 배양이 더욱 더 고밀도로 실시된다.
상기 제 2 도의 장치를 사용하여, 히트·임파계 세포 NAT-30을 배양한 결과를 제 3 도에 표시한다. 이때의 제조건을 하기에 표시한다
배양액량 : 500ml
배지 : 우시혈청알부민, 인슐린, 트랜스페린, 에탄올아민, 아셀렌산나트륨 첨가 RDF배지
배양조건 : 온도 37℃, 교반회전수 60rpm, DO 5.0ppm, pH 7.2
배양액교환율 : 1.0l/일
필터관로 : 공경 10μm, 외경 10mm, 내경 7mm, 길이 200mm의 세라믹필터
제 2 도의 결과에서, 본 발명의 장치에 의하면, 고밀도배양이 장기간에 걸쳐서 실시할 수 있는것을 알 수 있다.
본 발명에 의하면, 배양액중에 산소가스가 가압에 의하여 강제적으로 용해되어 항상 일정농도 이상에서 용존산소가 존재함으로서 세포 또는 호기적 미생물의 배양을 종래보다도 고밀도로 실시할 수가 있으며, 소량의 배양액으로부터 다량의 세포생산물을 회수할 수 있다. 또 산소공급용의 물질을 배양액중에 첨가할 필요가 없기때문에, 세포생산물의 회수·분리정제를 용이하게 실시할 수 있다. 또 이 장치는 배양액의 교환을 장기에 걸쳐서 또한 효율좋게 실시할 수가 있다. 상기의 사항에서 장기간에 걸쳐서 고밀도 배양을 실시할 수가 있다.

Claims (4)

  1. 세포 또는 호기적 미생물의 배양액을 내부에 저류하는 밀폐가능한 배양조와, 산소공급부로부터 유량조절부를 개재하여 상기 배양조내에 산소를 공급할 수 있는 산소공급용관로와, 상기 배양액으로부터 배기조절부를 개재하여 배양조내에 기체를 배기할 수 있는 배기용관로와, 배양조내의 배양액을 교반하는 교반수단과, 배양액중의 용존산소농도를 검지하는 용존산소농도 검지수단과, 이 용존산소농도 검지수단의 검지출력에 의거하여 상기 조절부를 제어하여 배양조내를 산소가압상태로 유지할 수 있는 제어부를 구비하여 이루어지고, 상기 산소공급용관로가, 그것에 의하여 공급되는 산소가 배양액을 실질적으로 버블링하지 않도록 배양조내의 액상부에 존재하는 공극부에 개구하고, 한편 배기용관로가 상기 공극부에 개구할 수 있도록 구성되어 이루어진 가압식 배양장치.
  2. 제 1 항에 있어서, 제어부가, 소정의 용존산소농도를 기억하는 기억부와, 이 기억부에 기억되는 기억농도치와 용존산소농도 검지수단에 의하여 측정되는 측정농도치를 비교하는 비교부를 가지고, 이 측정농도치가 상기 기억농도치 보다도 작을때에 배양조내에 산소를 공급하고 또한 상기 기억농도치 이상의 용존산소농도로 될때까지 이 조내를 산소가압상태로 유지하도록 산소공급부, 유량조절부 및 배기조절부에 작동을 지령할 수 있도록 구성되어 이루어진 가압식 배양장치.
  3. 제 1 항에 있어서, 배양조에 더욱 더 배지를 보급하는 배지공급수단과, 배양액의 순환유로를 부설하고, 이 순환유로의 도중에 세포등을 투과하지 않으나 배양액중의 용해성분을 투과할 수 있는 필터관로로 된 배양액 여과수단을 삽설하여 이루어진 가압식 배양장치.
  4. 제 1 항에 있어서, 산소공급용관로에, 적어도 일산화탄소공급용관로 및 공기도입용관로의 어느것인가가 접속되어 이루어진 가압식 배양장치.
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