KR880001931B1 - 세균 유래 살충제의 제조방법 - Google Patents

세균 유래 살충제의 제조방법 Download PDF

Info

Publication number
KR880001931B1
KR880001931B1 KR8200882A KR820000882A KR880001931B1 KR 880001931 B1 KR880001931 B1 KR 880001931B1 KR 8200882 A KR8200882 A KR 8200882A KR 820000882 A KR820000882 A KR 820000882A KR 880001931 B1 KR880001931 B1 KR 880001931B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
strain
bacillus thuringiensis
spores
medium
spore
Prior art date
Application number
KR8200882A
Other languages
English (en)
Other versions
KR830008496A (ko
Inventor
요시하루 와끼사까
쥰꼬 우오
고오이찌 마쓰모또
오사무 오오다이라
겐따로 다나까
Original Assignee
요시도시 가즈오
시오노기세이야꾸가부시끼가이샤
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=12257947&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=KR880001931(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by 요시도시 가즈오, 시오노기세이야꾸가부시끼가이샤 filed Critical 요시도시 가즈오
Publication of KR830008496A publication Critical patent/KR830008496A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR880001931B1 publication Critical patent/KR880001931B1/ko

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/22—Bacillus
    • A01N63/23—B. thuringiensis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C12R2001/075—Bacillus thuringiensis
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/832—Bacillus

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

내용 없음.

Description

세균 유래 살충제의 제조방법
본 발명은 바실루스 투린지엔시스의 실질적 비복귀성 포자결손 변이주에 의해 생산되는 살충물질을 함유하는 살충제 및 그의 제법에 관한것이다. 또한, 본 발명은 바실루스 투린지엔시스의 실질적 비복귀성 포자 결손 변이주 및 그의 제조방법에 관한 것이다.
통상으로 사용되는 화학 살충제는 예를들어 인간, 동물 및 어류에 대한 유해성, 잔류독성 및 약제 저항성 해충이 유도되는 등의 많은 결점이 있으므로, 이에 대신할 살충제의 개발 및 연구가 수행 되어 왔다. 그 일환으로서, 바실루스 투린지엔시스를 이용하는 세균성 농약이 연구되어, 부분적으로는 실용화 되어 왔다. 이는 δ --엔도톡신(이하, δ - 톡신으로 약칭)의 살균력의 이용을 그 기초로 한다. 일반적으로, 바실루스 투린지엔시스는 세포내에 δ -톡신의 결정체 및 포자를 생산한다.
이 결정체 및 포자는 보통, 세포벽이 배양의 종기에 자연적으로 파괴될때에 세포외로 방출되어, 살충제로서 유효한 효력을 발휘한다. 바실루스 투린지엔시스를 살충제로서 사용하는 경우, 분리 공정이 매우 복잡하므로, 결정체를 포자로부터 분리시키지 않고, 전체 배양육즙을 건조 시켜서 직접 사용한다. 그러나 공교롭게도 제제중에 포함되 있는 포자가 살포 후에 자연계에서 증식하여 양잠업에 해를 끼칠 우려가 있으므로, 그 사용이 매우 제한된다. 이 결점을 제거하기 위해 바실루스 투린지엔시스의 포자결손 균주의 창제가 시도되어, 바실루스 투린지엔스를 함유하지만 누에에 대한 2차 오염이 없는 살충제가 개발되었다.(일본국 특허 출원(미심사) 제50/125022호)
그러나, 본 발명자들은 그들에 의해 발명된 바실루스 투린지엔시스 포자결손 변이주의 발효 육즙중에 1~10포자/ml또는 그 이상의 포자가 조재함을 발견하였다. 이 포자들은 변이주의 변이복귀(reverse mutation)로 부터 파생된다고 생각된다. 이와 동일한 변이복귀가 보고된 모든 포자결손 변이중에도 존재함이 확인 되었다.
따라서, 본 발명자들은 포자 형성 능력 및 재생능력을 완전히 상실한 완전한 비복귀성 포자결손 변이주의 창제를 시도하여, 누에에 해가되는 2차 오염(즉, 2차 증식)이 없는 살충제 개발을 시도한 결과, 에틸 메탄술포네이트 변이에 의해 실질적 비복귀성 포자결손 변이주를 수득하였다. 본 발명자들은 이 변이주의 발효육즙에 포자가 전혀 함유되어 있지 않으며, 안전한 살충물질로서 이용할 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다. 따라서, 비 복귀성 포자결손 변이주가 본 발명자들에 의해 최초로 창제되었다.
본 발명은 신규의 실질적 비복귀성 포자 결손 변이주 및 그의 제조 방법에 더하여, 이변이주를 이용하는 신규하고도 유용한 세균 유래 살충제 및 그의 제조 방법에 제공한다.
상술의 실질적 비복귀성 포자결손 변이주는 포자결손 변이주의 포자에 결손변이(deletion mutation)를 유도하는 변이제(예 ; 알킬 알칸 술포네이트, 특히 에틸 메탄술포네이트)를 작용시킴으로써 수득된다. 사용되는 친균주(parent strain)로는 바실루스 투린지엔시스(예 ; 바실루스 투린지엔시스 변종(serovar)쿠르스타키, 아이자바이, 투린지엔시스, 알레스티, 갈레리아에, 톨워르리, 서브톡시쿠스 ; 바람직하게는 쿠르스타키)의 포자결손 변이주가 있다. 이들 포자결손 변이주는 일본국 특허출원(미심사) 제50/125022호 및 기타 간행물에 기재되어 있다. (예 ; J,Invertebr.Pathol.25,355-361(1975), Eur.J.Biochem.18,226~(1971) 및 Can.J.Microbiol.24, 492~494 (1978) ). 실질적 비복귀성 포자결손 변이주의 제조 실시예가 하기에 표시된다.
[실시예 1]
바실루스 투린지엔시스 변종 쿠르스타키 IK의 포자 현탁액(10ml,ca,108포자/ml,0.1M 인산 완충액, pH7.0)을 15분간 70℃로 가열한다. 실온으로 냉각시킨후, 여기에 에틸 메탄술포네이트1)(0.25ml)을 가한다. 혼합물을 280℃에서 15~18시간 진탕하고, 무균 조건하 원심 분리한다(x4000,20분, 5℃). 침전물을 살균 식염수로 2회 원심 세정한 후, 0.1M살균 인산 완충액(pH 7.0 5.0ml)에 현탁시킨다. CL-한천 배지2)(15ml)가 담긴 30개의 페트리접시 표면에, 접시 1개당 현탁액 100㎕의 비로 이 현탁액을 도포한다. 28℃에서 2~5일간 배양시킨 후, 생성 콜로니를 랜덤 단리법에 의해 한몫에 약 200~300씩 단리 시킨다.
단리된 콜로니를 영양 한천 판에 접종시키고, 28℃에서 3~5일간 배양시킨 후, 포자 및 δ -톡신의 유무를 조사한다. 별도로, 이들 콜로니를 CL-한천판에 접종시키고, 28℃에서 1일간 배양시키후, 5℃로 유지시킨다.
상기의 테스트에서는 42개의 콜로니가 포자를 형성하지 않았고, 양호한 δ -톡신 생산성을 나타내었다. 이들은 10ml의 M배지3)및 S배지4)에 접종시키고, 28℃에서 3~4일간 진탕 배양 시킨다. 배양배지 약 5ml씩을 20분간 70℃로 가열시키고, 1ml당 포자의 수를 센다. 나머지 가열 배지를 원심분리, 수세 및 동결건조 시킨다. 이와 같이 하여 수득된 세포의 누에에 대한 살충활성을 측정하고, 또 시험균수의 δ -톡신 생산 안정싱도 관찰한다.
균주의 천성(즉, 포자 무생성, δ -톡신의 과잉생산 및 안정성)에 따라 4개의 균주를 선택한다. 이 균주를 사까구찌 플라스크내에서 S배지(100ml)에 접종시키고, 28℃에서 3~4일간 배양시킨다. 배양을 7~17회 반복하여, 배지 5ml당 포자의 수 및 δ -톡신의 생산력을 측정한다. 그 결과로서 290-1균주가 관찰되었는데, 이는 17회의 배양시에 포지를 생성하지 않는다.
1) Ito,J. 및 J.spizizen : 방사선연구 13, 93-96(1971)
2) CL-한천 배지 : 0.25%글리세롤, 0.5%폴리펩톤, 0.5%카세인, 0.3%염화나트륨, 1.25%한천.
3) M배지 : 0.5%글루코오즈, 1.0%폴리펩톤, 0.5%락토카세인, 1.0%사탕수수 당밀, 0.3%염화나트륨.
4) S배지 : 3.0%전분, 3.0%콩가루, 1/5%옥수수침지액, 0.1%탄산나트륨, 0.3%황산 암모늄.
상기의 290-1균주는 바실루스 투린지엔시스 변종 쿠르스타키 290-1로 명명되고, 일본 이바라에껭 쓰꾸바궁 아마베마찌히가시 1-쪼, 1-1소재의 공업 기술원 미생물 기술 연구소에 1980년 12월 3일 이래로 FERM-P 5794호로 기탁되어 있다. 그리고, 이 균주는 1982년 3월 6일자로 한국과학기술원에 KAIST 820306-01511의 수탁번호로 기탁되어 있다. 또한, 본 명세서에는 명명법의 규칙에 따라, 그의 명칭을 바실루스 투린지엔시스 변종 쿠르스타키 290-1로 변경하였다.
290-1균주의 친균주는 일본 시오노기제약 주식회사의 야외시험소에 분리되었고, 이는 하기의 간행물의 기재로부터 바실루스 투린지엔시스 변종 쿠르스타키로 정해진 HD-1균주와 동일하다는 것이 확인되었다. (예 : J.Invertebr.Pathol.11,335~347 (1986), ibid.15,139~140(1970), ibid 15,232~239(1970) 및 ibid 22, 273~277 (1973)).
290-1균주는 포자형상의 비복귀성을 제외하고는 친균주와 동일한 특성을 갖는다. 290-1균주는 친균주와 거의 동량으로 δ -톡신을 생산하고, 17회의 계대 배양(subinoculation)시에도 포자를 전혀 형성하지 않는다. 또한, 30.5ml의 S배지에서 3일간 배양시켰을 경우 및 같은 기간 동안 45ml M배지에서 배양시켰을 경우 모두 포자가 검출되지 않았다. 290-1균주의 비복귀성 테스트의 결과를 하기에 표시한다.
[실험예 2]
290-1균주를 사까구찌 플라스크내에서 S배지(100ml)에 접종시키고 이를 28℃에서 4일간 17회 반복하여 배양시킨다. 각 회의 발표 배지를 70℃에서 15분간 가열하고, 영양한천 배지를 이식한다. 28℃에서 3~4일간 배양시킨후, 포자 형성의 유무를 조사한다. 동시에, 원심 분리 침전물의 동결건조물로 살충활성을 측정한다. 활성의 측정방법은 니시이 쓰쓰지-우오(Nishiitsutsuji-Uwo)등에 의해 간행물(예 : J.Invertebr. Pathol.29,162~169(1997)에 발표되어 있다. 결과는 하기 표 1에 나타내었다.
Figure kpo00001
[실험예 3]
CL-한천 배지 상에서 28℃ 1일간 예비 배양시킨 290-1균주액을 영양 육즙에 접종시키고, 28℃에서 1일간 진탕 배양시킨다. 이 발효육즙을 300ml삼각 플라스크내에 M배지(60ml) 및 S배지 각각에 최종 농도 2%로 하여 접종시키고, 28℃에서 3일간 배양시킨다. 이 발효 배지 15ml씩을 기벽에 닿지 않게 유의하면서 무수(non-necked)시험관에 이식시키고, 70℃에서 30분간 가열한다. M발효 배지를 5개의 페트리접시에 각 1ml씩, 20개의 페트리접시에 각 1.5ml씩, 그리고 5개의 페트리접시에 각 2.0ml씩 분배한다. S발효 배지를 11개의 페트리접시에 각 0.5ml씩, 25개의 페트리접시에 각 1.0ml씩 분할한다. 모든 접시를 28℃에서 2.4일간 배양시킨 결과, 콜로니가 전혀 형성되지 않았음이 발견되었다.
따라서, 45ml의 발효 배지 및 30.5ml S발효 배지에 모두 포자가 형성되지 않았음이 확인 되었다. 테스트의 결과를 생세포의 수 및 중량에 대한 비로 환산하고 결과를 하기 표 2에 표시한다. 상기와 동일한 방법으로, 실질적 비복귀성 포자결손 변이주를 가타 변종으로 부터 통상의 방법에 의해 수득할 수 있다.
[표 2]
Figure kpo00002
상기에 표시한 바와 같이 본 발명자들에 의해 제조된 비복귀성 포자결손 변이주는 실질적으로 포자를 전혀 형성하지 않는다. 따라서, 발효 육즙은 그 자체로서 살충제로 사용된다. 또한, 본 발명의 "살충물질(insecticidal substance)"은 상술의 δ -톡신 유리결정체 뿐만 아니라, 상기의 결정을 함유하는 바실루스 투린지엔시스, 특히 바실루스 투린지엔시스 변종 쿠르스키 290-1의 실질적 비복귀성 포자 결손 변이주의 생세포, 사세포 및 그의 혼합물, 세균세포 및/또는 유리결정을 함유하는 발효 육즙, 발효 육즙의 농축물, 이들의 건조물 등을 함유한다.
상기의 실질적 비복귀성 포자결손 균주의 살충물질의 제조는 친균주의 살충물질의 제조방법에 따른다. 살충물질은, 일본국 특허출원(미심사) 제50/125022호 및 덜메이지, 에이치.티(Dul-mage,H.T.)에 의해 간행물(J.Invertebr.Pathol.22,237~277(1971))에 기재된 방법에 의해, 제조할 수도 있다. 좀더 구체적으로는 바실루스 투린지엔시스, 특히 바실루스 투린지엔시스 변종 쿠루스타키 290-1의 실질적 비복귀성 포자결손 변이주를 질소원 및 탄소원이 충분한 유기 배지에 접종시킨다. δ -톡신의 수율은 배지가 최종농도 약 2~50mM. 좀더 바람직하게는 3~30mM 농도의 칼륨이온을 함유할 때 상당히 증가된다. 또한, δ -톡신의 생산은 통기량, 특히 산소 공급량에 많이 좌우된다. 산소를 충분히 공급시킨 발효는 δ -톡신을 많이 생산한다. 발효는 강한 통기 조건하, 약 25~30℃에서 2~5일간 계속시킨다. 탄소원으로는 예를 들어 슈크로오스, 말토오스, 클루코오스, 프룩토오스, 사탕수수당밀, 무우 설탕, 옥수수 침지액등이 포함된다. 질소원으로는 예를 들어 황산 암모늄, 염화 암모늄, 면실분(POWDER), 콩가루, 카세인 가수분해물 등이 포함된다. 필요하다면 미네랄 및 비타민을 첨가시킬 수 있다. 발효는 상기에 표시한 호기 상태하에서 실시한다. 액중 통기 발효는 대량 생산에 바람직하다.
발효종료후, 유리 δ -톡신 결정체, 세포 등과 같은 살충물질을 분리시키는 것이 바람직한 경우에는 일반적으로 이용되는 원심분리, 여과 등과 같은 방법을 사용한다. 세포 및/또는 유기 결정체를 함유하는 발효육즙을 분말화 하기 위해서는 일반적인 농축 및 건조법을 채택할 수도 있다. 특히, 최근에 널리 사용되는 분무-건조 방법은 활성을 감소시키지 않고 미세분말을 수득할 수 있기 때문에, 사용이 바람직하다. 이 방법에서는 정착제, 전착제, 희석제 등을 분무 건조시에 세포 부유액에 첨가함으로써 일회작동으로 수화제를 수득할 수 있다. 이와 같은 방법으로 수득된 생성물이 생세포를 함유하는 경우, 만약 필요하다면, 통상의 살균 방법을 이용할 수 있다. 그 예로는, 열처리, 초음파처리, X선 조사등과 같은 물리적 살균법, 포르말린, 과산화수소, 아황산염, 니트로 푸릴아크릴아미드, 푸릴프르아미드, 염소화합물, β -프로피오락톤, 아질산염, 질산염, 계면 활성제, 산화 에틸렌, 산화프로필렌의 처리 등과 같은 화학적 살균법, 자가분해, 파아지처리, 리소자임 처리 등과 같은 생물학적 살균법이 포함된다. 상기의 살균법중, 열처리 및 화학적 살균법이 공업적 제조용으로 편리하다. 분무 건조법은 특히 생성물이 동시에 가열처리되기 때문에 살균 공정이 필요없는 제제 방법에 유리하다.
이와 같이 수득된 살충물질은 제제, 예를 들어, 정제, 분제, 입제, 수화제, 현탁액, 에멀션, 페이스트 등으로 제제화된다. 만약 필요하다면 예를들어 카놀린, 벤토나이트, 활석, 규조토, 소맥분 및 설탕과 같은 첨가제를, 제조시에 전착제, 계면 활성제, 안정화제 등과 함께 첨가한다. 만약 원한다면, 살충 활성에 해를 끼치지 않는 범위내에서, 기타 살충제, 살균제, 제초제, 식물 생장 조정제, 향료, 영양소 등을 가할 수 있다.
본 발명에서 수득된 살충제는, 배추 좀나방(Plutella maculipennis Curtis), 이화명충(Chilo suppressalis Walker), 크니도캄파 플라베센스 월커(Cnidocampa flavescens Walker), 피에리스 라파에 크루시보라 보이스듀발(Pieris rapae crucivora Boisduval), 모메스트라 브라시카에 린네(Momestra brassicae Linne), 산호랑나비(Papilio machaon hippocrates Felder et Felder), 반백먹 나방(Chalcosia remota Walker), 재주나방(Stauropos fagipersimilis Butler), 불나방(Arctia caja Linne), 페르나라 구타타브레머 에트 그레이(Pernara guttata bremer et Grey)등과 같은 나미목의 유충에 대하여 효과적이다. 이 살충제는 이차증식을 일으키지 않기 때문에 누에에 끼칠 악영향을 염려하지 않고도 논, 밭, 숲 및 황무지 등에 자유로이 분무할 수 있다.
본 발명은 하기의 실시예에서 좀 더 구체적으로 예시된다.
[실시예 1]
KB-5배지 : 1.0%감자녹말, 0.5%글루코오스, 1.5%콩가루, 2.0%파르마메디아(상품명), 1.0%돈육분말, 0.2%폴리펩톤, 0.03%황산마그네슘 7수화물, 1.0%탄산칼슘, 0.002%황산아연 7수화물 및 0.002%염화제 1철.
바실루스 투린지엔시스 변종 쿠르스타키 290-1(FERM-P 제5794호)을 영양 한천 배지에서 28℃ 1일간 배양시킨후, 생성육즙 1백금이를 2ℓ메이어 플라스크 내의 영양배지(700ml)에 접종시키고, 28℃에서 12시간 동안 진탕 배양시킨다(180 r.p.m). 생성 배양액을 30ℓ 단지 속에서 상기 조성의 KB-5배지(15ℓ)에 접종시키고, 28℃에서 52시간 동안 통기 교반 배양시킨후(400 r.p.m), 발효 육즙을 약하게 원심분리(x 13,000g)처리하여, 15.2mg/ml(건조 중량)의 살충물질을 수득한다(활성 : 3070/ml). 이 활성은 하기의 간행물에 기재된 방법으로 측정된다. (J.Invertebr. Pathol.29,162 ~169(1977)bg Nishiitsutsuji-Uwo.J.등)
[실시예 2]
발효용 KB-5배지 대신에, S배지(조성을 상기와 동일함)를 사용하여, 실시예 1과 동일한 방법으로 배양시켜, 14.7mg/ml(건조중량)의 살충물질을 수득한다.(활성 : 2279/ml)
[실시예 3]
실시예 2에서 수득한 세균세포(원심분리후의 불용성 침전물)를, 불용성분의 농도가 약 5% W/V가 되도록 물에 현탁시킨다. 생성된 현탁액을 미니스프레이(야마또 과학제, 모델 DL-21)로 분무 건조시킨다. 미니스프레이를 다음과 같은 조건으로 유지시킨다.(입구 온도 : 190℃, 출구온도 : 90℃이하, 송액률 : 3~4ml/분, 열풍 유동률 : 0.4~0.5m3/분, 2원 노즐(binory nozzle)의 분무압력 : 3.0~1.0kg/㎠, 노즐에서의 공기율 : 13~9ℓ/분)
생성된 분말 표본물의 활성 및 입도를, 상기 현탁액의 일부를 동결 건조킨다음 유체 에너지 분쇄기(일명, 제트 분쇄기)를 써서 분말 제조한 분말 표본물의 결과와 비교하여, 표 3에 표시한다. 상기의 2가지 방법으로 각각 제조된 분말 표본물의 활성 및 입도는 거의 동일하다.
Figure kpo00003
주의 : 1) 동결건조물은 2.7%의 수분을 함유하고, 활성은 LC5067㎍/ml이다.
2) LC50은 누에에 대한 50%치사농도(㎍/ml)를 나타낸다.
3) 입도는 광투과식 원심침강법 입도분포 측정기(CP-5- ; 시마쯔사제품)을 사용하여 측정되었다.
실시예 4
실시예 2와 동일한 방법으로, S배지에서 54시간 동안 통기 교반 배양시켜서, 살충물 표본을 수득한다. 그리고, 생성된 살충 표본물을 불용 고체 성분의 농도가 약 3%가 되도록 물에 현탁시킨다. 불용성 고체 성분의 1/3량에 해당하는 표 4에 표시된 첨가제를 현탁액에 가하고, 이를 분무 건조시킨다. 이와 같은 경우의 LG50계산치는 86이다.
수득된 표본물의 활성 및 살균 효과를 표 4에 표시한다.
[표 4]
Figure kpo00004
* 다께모또 유지사 제조
[실시예 5]
실시예 3에서 수득한 바실루스 투린지엔시스 변종 쿠르스타키 290-1의 분무 건조 분말(25부)를 활석(75부)와 배합시켜 수득한 분제, 이 조제는 10아르당 100g이상의 양으로 사용된다.
[실시예 6]
실시예 3에서 수득한 분부 건조분말(25부), 도데실벤젠 술폰산나트륨(2부), 디나프틸메탄 디술폰산나트륨(2부) 및 규조토 및 점토의 혼합물(11부)를 혼합하고, 분말로 만들어 수화제를 얻는다.
[실시예 7]
실시예 4에서 카르복시메틸 셀룰로오스와 함께 분무 건조시켜서 얻은 분말(30부)를 활석(70부)과 배합함으로써 제조된 분제.

Claims (9)

  1. 바실루스 투린지에시스의 실질적 비복귀성 포자결손 변이주를 약 25~30℃에서 호기성 조건하에 약 2~5일간 배양시켜 살충물질을 수집함을 특징으로 하는 세균유래 살충제의 제조방법.
  2. 제 1 항에 있어서, 배양이 2~50mM 농도의 칼륨이온 존재하 수행됨을 특징으로 하는 방법.
  3. 제 2 항에 있어서, 칼륨이온의 농도가 3~30mM임을 특징으로 하는 방법.
  4. 제 1 항에 있어서, 변이주가 바실루스 투린지엔시스 변종 쿠르스타키 290-1(ATCC 제 31813호, KAIST 820306-01511)임을 특징으로 하는 방법.
  5. 제 1 항에 있어서, 수집이 분무건조법에 의해 수행됨을 특징으로 하는 방법.
  6. 포자결손 변이주를 알킬알칸 술포네이트로 변이시킴을 특징으로 하는 바실루스 투린지엔시스의 실질적 비복귀성 포자결손 변이주의 제조방법.
  7. 제 6 항에 있어서, 변이가 바실루스 투린지엔시스 변종 쿠르스타키의 균주로 수행됨을 특징으로 하는 방법.
  8. 제 7 항에 있어서, 변이주가 바실루스 투린지엔시스 변종 쿠르스타키 290-1(ATCC 제31813호, KAIST 820306-01511)임을 특징으로 하는 방법.
  9. 제 6 항에 있어서, 알킬알칸 술포네이트가 에틸메탄술포네이트임을 특징으로 하는 방법.
KR8200882A 1981-02-27 1982-02-27 세균 유래 살충제의 제조방법 KR880001931B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP56028781A JPS57142907A (en) 1981-02-27 1981-02-27 Bacterium-originated insecticide and its preparation
JP28781 1981-02-27
JP56-28781 1981-02-27

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR830008496A KR830008496A (ko) 1983-12-10
KR880001931B1 true KR880001931B1 (ko) 1988-10-04

Family

ID=12257947

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR8200882A KR880001931B1 (ko) 1981-02-27 1982-02-27 세균 유래 살충제의 제조방법

Country Status (9)

Country Link
US (1) US4713241A (ko)
EP (1) EP0059460B2 (ko)
JP (1) JPS57142907A (ko)
KR (1) KR880001931B1 (ko)
AU (1) AU557491B2 (ko)
CA (1) CA1184137A (ko)
DE (1) DE3278506D1 (ko)
GB (1) GB2093860B (ko)
NZ (1) NZ199725A (ko)

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1193564A (en) * 1982-07-09 1985-09-17 University Of Western Ontario Mutated microorganism with toxin inclusion for pest control
FR2545326B1 (fr) * 1983-05-02 1988-05-20 Solvay Compositions contenant des produits pesticides biosynthetiques et au moins un phosphate et procedes pour leur fabrication et leur utilisation
GB8425487D0 (en) * 1984-10-09 1984-11-14 Agricultural Genetics Co Strain of bacillus thuringiensis
DE3541893A1 (de) * 1985-11-27 1987-06-11 Basf Ag Verfahren zur herstellung sporenfreier, konzentrierter protein-praeparate von mueckentoxischem bacillus thuringiensis serovar. israelensis sowie mikroorganismus zur durchfuehrung des verfahrens bzw. verfahren zur gewinnung des mikroorganismus
JPS62146593A (ja) * 1985-12-16 1987-06-30 マイコゲン　コ−ポレ−シヨン バシラス・スリンギエンシスの安定なｓｐｏ−ｃｒｙ＋変異株の製法
GB2188049B (en) * 1986-03-15 1990-09-05 Ciba Geigy Ag Insecticidal proteinaceous substance
US5338544A (en) * 1987-04-16 1994-08-16 Ecogen Inc. CryIIB protein, insecticidal compositions and methods of use thereof
US4859377A (en) * 1987-07-10 1989-08-22 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture Starch encapsulation of entomopathogens
US4781922A (en) * 1987-07-20 1988-11-01 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Control of parasitic nematode ova with Bacillus sphaericus
US4910016A (en) * 1987-08-03 1990-03-20 Mycogen Corporation Novel Bacillus thuringiensis isolate
US4902507A (en) * 1987-08-14 1990-02-20 Canadian Patents & Development Ltd. Toxic strains of the bacterium Bacillus thuringiensis for control of the bertha armyworm Mamestra configurata
FR2620306B1 (fr) * 1987-09-14 1990-10-12 Solvay Compositions contenant des produits pesticides biosynthetiques, procedes pour leur production et leur utilisation
US5147640A (en) * 1988-11-07 1992-09-15 Ecogen Inc. Strains of bacillus thuringiensis insecticidal compositions containing the same
US5164180A (en) * 1989-05-18 1992-11-17 Mycogen Corporation Bacillus thuringiensis isolates active against lepidopteran pests
US5126133A (en) * 1989-06-27 1992-06-30 Mycogen Corporation Bacillus thuringiensis isolate active against lepidopteran pests, and genes encoding novel lepidopteran-active toxins
US5874289A (en) * 1989-11-17 1999-02-23 Abbott Laboratories Bacillus thuringiensis mutants which produce high yields of crystal delta-endotoxin
US5242815A (en) * 1990-01-24 1993-09-07 Shin-Etsu Chemical Co., Ltd. Process for preparation of streptovaricin
US5137825A (en) * 1990-10-23 1992-08-11 Shin-Etsu Bio, Inc. Process for producing streptovaricin
US5698440A (en) * 1990-11-14 1997-12-16 Abbott Laboratories Bacillus thuringiensis mutants which produce high yelds of crystal delta-endotoxin
US5466680A (en) * 1992-03-26 1995-11-14 Cytologics, Inc. Method and compositions for enhancing white blood cell functioning on a mucosal or cutaneous surface
US6669105B2 (en) * 2000-09-13 2003-12-30 Adapco, Inc. Closed-loop mosquito insecticide delivery system and method
GB201712908D0 (en) * 2017-08-11 2017-09-27 Univ Exeter Biopesticides
CA3077696A1 (en) * 2017-10-04 2019-04-11 NCH Life Sciences LLC Nutrient-spore formulations and uses thereof

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1106887A (en) * 1966-06-27 1968-03-20 Shell Int Research Sporicidal agents
JPS5823365B2 (ja) * 1974-03-26 1983-05-14 ダイワカセイ カブシキガイシヤ サイキンセイサツチユウザイ オヨビ ソノセイゾウホウホウ
US4277564A (en) * 1980-01-09 1981-07-07 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Preparing entomocidal products with oligosporogenic mutants of bacillus thuringiensis
CA1193564A (en) * 1982-07-09 1985-09-17 University Of Western Ontario Mutated microorganism with toxin inclusion for pest control

Also Published As

Publication number Publication date
EP0059460A3 (en) 1983-08-31
NZ199725A (en) 1985-07-12
GB2093860B (en) 1985-03-06
EP0059460B1 (en) 1988-05-18
EP0059460A2 (en) 1982-09-08
CA1184137A (en) 1985-03-19
JPS57142907A (en) 1982-09-03
DE3278506D1 (en) 1988-06-23
JPS6326987B2 (ko) 1988-06-01
AU557491B2 (en) 1986-12-24
AU8094682A (en) 1982-09-02
US4713241A (en) 1987-12-15
KR830008496A (ko) 1983-12-10
GB2093860A (en) 1982-09-08
EP0059460B2 (en) 1991-11-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR880001931B1 (ko) 세균 유래 살충제의 제조방법
JPS61181372A (ja) 或る種の鱗翅類害虫に対して改良された活性を有するバチルス・スリンギエンシスの株の製法及びそれにより製造された新規株
SK13062001A3 (sk) Biologicky čistá kultúra, prostriedok, izolovaný metabolit, supernatant, čiastočne vyčistená frakcia, vo vode rozpustná látka, spôsob produkcie fungicídneho supernatantu, spôsob čiastočného vyčistenia supernatantu, spôsob zvýšenia insekticídnej aktivity
EP0228228A2 (en) Mutants of bacillus thuringiensis
US5080897A (en) Novel bacillus thuringiensis strains, and related insecticidal compositions
Devi et al. Cost-effective production of Bacillus thuringiensis by solid-state fermentation
US10039286B2 (en) Insecticidal yersinia entomophaga compositions and uses thereof
JPH0722506B2 (ja) 抗菌活性を有する微生物菌株
Demirbag et al. The first study on bacterial flora and biological control agent of Anoplus roboris (Sufr., Coleoptera)
Junge et al. Strain selection, production, and formulation of the biological plant vitality enhancing agent FZB24® Bacillus subtilis
Poopathi et al. Use of feather-based culture media for the production of mosquitocidal bacteria
Iskandarov et al. Effects of nutrient medium composition and temperature on the germination of conidia and the entomopathogenic activity of the fungi Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae
US7067299B2 (en) Materials and methods for in vitro production of bacteria
US4133716A (en) Method for the biosynthesis of a microbial insecticide
JPH0515364A (ja) 新規なバシラス菌株及び害虫防除剤
JPH04505998A (ja) バシラススリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　Ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）の新株、その製造法及び、昆虫の制御ならびに昆虫の攻撃からの植物の保護におけるその利用
JPH0358904A (ja) 新規なバシラス・スリンギエンシス分離体
KR100403896B1 (ko) 채소류 모잘록병균에 길항하는 바실러스 에히멘시스
RU1837772C (ru) Штамм бактерий BacILLUS тнURINGIеNSIS VaR кURSтакI дл получени инсектицидного препарата
JPS5823365B2 (ja) サイキンセイサツチユウザイ オヨビ ソノセイゾウホウホウ
KR20160136261A (ko) 살충 활성을 갖는 신규한 제노랍두스 네마토필라 c2-3 균주 및 이의 이용방법
Singh et al. ANTAGONISTIC ACTION OF MUTANT BACILLUS SUBTILIS AGAINST PLANT PATHOGANDENIC FUNGI ASPERGILLUS NIGER AND MICROSPORUM BULLARDI
JP2658378B2 (ja) 殺虫剤の製造方法
JPH0310681A (ja) バチルス・チューリンゲンシス変異株及び殺虫剤
JPH05284963A (ja) 新規微生物、該微生物を含有する除草剤及びそれらによる雑草の防除方法

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
G160 Decision to publish patent application
O035 Opposition [patent]: request for opposition
O073 Decision to grant registration after opposition [patent]: decision to grant registration
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20010808

Year of fee payment: 14

EXPY Expiration of term