JP2658378B2 - 殺虫剤の製造方法 - Google Patents
殺虫剤の製造方法Info
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Description
【発明の詳細な説明】 （イ） 発明の目的 〔産業上の利用分野〕 本発明は、バチルス・チューリングゲンシス（Bacill
us thuringiensis:以下BT菌という）の産生する結晶毒
素を有効成分とする鱗翅目昆虫等に対して有効な殺虫剤
（以下BT農薬という）を製造する方法に関するもので、
農薬業界及び農業の分野で広く利用されるものである。
us thuringiensis:以下BT菌という）の産生する結晶毒
素を有効成分とする鱗翅目昆虫等に対して有効な殺虫剤
（以下BT農薬という）を製造する方法に関するもので、
農薬業界及び農業の分野で広く利用されるものである。
BT菌の産生する結晶毒素は、鱗翅目、双翅目、鞘翅目
等の昆虫に対して強力な殺虫作用を示し、しかも、人畜
魚介類に対して、無害であることから、バイオ農薬とし
て実用化されている。
等の昆虫に対して強力な殺虫作用を示し、しかも、人畜
魚介類に対して、無害であることから、バイオ農薬とし
て実用化されている。
一般に、BT農薬は結晶毒素の他に、自己再生のための
生命体である胞子（芽胞とも言う）を含んでおり、自然
界において、そのままの状態で散布されると、胞子が発
芽し、BT菌の増殖が生じ、蚕に薬害を与える恐れがあ
り、国内の養蚕業保護の立場から、胞子の二次増殖のな
いBT農薬が求められている。
生命体である胞子（芽胞とも言う）を含んでおり、自然
界において、そのままの状態で散布されると、胞子が発
芽し、BT菌の増殖が生じ、蚕に薬害を与える恐れがあ
り、国内の養蚕業保護の立場から、胞子の二次増殖のな
いBT農薬が求められている。
この課題を解決するために、結晶毒素を含有するBT菌
の培養液内の細菌細胞・芽胞に対して、該結晶毒素の殺
虫能を喪失せしめることなく、細菌細胞・芽胞を殺滅し
得る緩徐な化学的細菌処理と同じく緩徐な物理的殺菌処
理とを組合せ、それらを同時に行なうことを特徴とする
殺虫剤の製造法が提案されている（特公昭51−5047号公
報）。
の培養液内の細菌細胞・芽胞に対して、該結晶毒素の殺
虫能を喪失せしめることなく、細菌細胞・芽胞を殺滅し
得る緩徐な化学的細菌処理と同じく緩徐な物理的殺菌処
理とを組合せ、それらを同時に行なうことを特徴とする
殺虫剤の製造法が提案されている（特公昭51−5047号公
報）。
上記の方法は、細菌細胞・芽胞の殺滅方法としては優
れているものであり、実用化されている方法であるが、
該方法で得られた結晶毒素はその実用的な濃度（BT農薬
は一般にコナガに対して1,000乃至2,000倍の製剤水懸濁
液として用いられる）における残存殺虫活性が製造毎に
異なり、場合によってはかなりの高濃度で使用しなけれ
ば充分な殺虫活性を示さないものが得られることがあ
り、一定の薬効を示す製品を定常的に得ることが困難な
方法であった。
れているものであり、実用化されている方法であるが、
該方法で得られた結晶毒素はその実用的な濃度（BT農薬
は一般にコナガに対して1,000乃至2,000倍の製剤水懸濁
液として用いられる）における残存殺虫活性が製造毎に
異なり、場合によってはかなりの高濃度で使用しなけれ
ば充分な殺虫活性を示さないものが得られることがあ
り、一定の薬効を示す製品を定常的に得ることが困難な
方法であった。
本発明者等は、上記の問題点を追求し、それを解消
し、品質の一定した製品が得られる製造方法を確立すべ
く鋭意検討を行なった。
し、品質の一定した製品が得られる製造方法を確立すべ
く鋭意検討を行なった。
（ロ） 発明の構成 〔課題を解決するための手段〕 本発明者等は、前記問題点を解消するための検討課程
において、殺菌処理を施す培養液の培養期間に応じて、
殺菌処理後の残存殺虫活性が変化することを見出し、殺
菌処理をする培養液の培養期間を特定の範囲内、すなわ
ち該微生物の培養過程において、芽砲の90％が細胞外に
放出されてから24時間以内の培養期間内に制御すること
によって、実用に供し得る殺虫剤を製造するに足る残存
殺虫活性を有する結晶毒素が一定して得られるのみなら
ず、残存殺虫活性の飛躍的に向上した結晶毒素が得られ
ることを見出し、本発明を完成した。
において、殺菌処理を施す培養液の培養期間に応じて、
殺菌処理後の残存殺虫活性が変化することを見出し、殺
菌処理をする培養液の培養期間を特定の範囲内、すなわ
ち該微生物の培養過程において、芽砲の90％が細胞外に
放出されてから24時間以内の培養期間内に制御すること
によって、実用に供し得る殺虫剤を製造するに足る残存
殺虫活性を有する結晶毒素が一定して得られるのみなら
ず、残存殺虫活性の飛躍的に向上した結晶毒素が得られ
ることを見出し、本発明を完成した。
すなわち、本発明は、BT菌の培養液の殺菌を、芽胞の
90％が放出された後であって、かつ該放出後24時間以内
に実施することを特徴とする殺虫剤の製造方法に関する
ものである。
90％が放出された後であって、かつ該放出後24時間以内
に実施することを特徴とする殺虫剤の製造方法に関する
ものである。
◯ BT菌の培養液 本発明に用いられる培養液としては、結晶毒素を産生
するBT菌株を、通常公知の培養方法及び条件で培養して
得られる一般的な培養液があげられる。
するBT菌株を、通常公知の培養方法及び条件で培養して
得られる一般的な培養液があげられる。
例えば、肉エキス、ペプトンなどよりなる培地を用
い、BT菌を通常の方法及び条件で培養し、芽胞及び結晶
毒素が形成され、所定の培養期間内にある培養終了液、
或いは該培養液を部分精製または精製して得られた結晶
毒素と芽胞を含有する水懸濁液等が使用される。
い、BT菌を通常の方法及び条件で培養し、芽胞及び結晶
毒素が形成され、所定の培養期間内にある培養終了液、
或いは該培養液を部分精製または精製して得られた結晶
毒素と芽胞を含有する水懸濁液等が使用される。
培養について、さらに具体的に説明すると、窒素源、
炭素源、ミネラルおよびビタミンに富む天然培地で培養
する。結晶毒素ならびに菌体の産生は、通気攪拌条件に
大きく左右され、充分な好気的条件で培養した場合に、
両者の産生量が増す。培養温度は、約25〜30℃がよい。
炭素源としては、例えば、コーンスチープリカー、硫酸
アンモニウム、塩化アンモニウム、綿実粉、酵母エキ
ス、大豆粉、カゼイン水解物などが挙げられる。また、
ミネラルおよびビタミンは、糖密、コーンスチープリカ
ー、酵母エキスで代用することができ、必要に応じて
は、無機塩類、ビタミン類をさらに添加してもよい。特
に、大量生産を行う場合、深部通気攪拌培養が望まし
い。
炭素源、ミネラルおよびビタミンに富む天然培地で培養
する。結晶毒素ならびに菌体の産生は、通気攪拌条件に
大きく左右され、充分な好気的条件で培養した場合に、
両者の産生量が増す。培養温度は、約25〜30℃がよい。
炭素源としては、例えば、コーンスチープリカー、硫酸
アンモニウム、塩化アンモニウム、綿実粉、酵母エキ
ス、大豆粉、カゼイン水解物などが挙げられる。また、
ミネラルおよびビタミンは、糖密、コーンスチープリカ
ー、酵母エキスで代用することができ、必要に応じて
は、無機塩類、ビタミン類をさらに添加してもよい。特
に、大量生産を行う場合、深部通気攪拌培養が望まし
い。
○ 培養期間の設定 芽胞が細胞外に放出され始めてから、芽胞の90％が細
胞外に放出されるまでの経過は、無菌的に経時採取した
培養液を位相差光学顕微鏡を用いて鏡検することによ
り、容易に追跡できる。芽胞の放出は、細胞内に形成さ
れた結晶毒素と芽胞が、培養の進行に拌ってBT菌細胞壁
が自己消化した結果、細胞外にそれらが放出され、培養
液中にて浮遊した状態を言う。
胞外に放出されるまでの経過は、無菌的に経時採取した
培養液を位相差光学顕微鏡を用いて鏡検することによ
り、容易に追跡できる。芽胞の放出は、細胞内に形成さ
れた結晶毒素と芽胞が、培養の進行に拌ってBT菌細胞壁
が自己消化した結果、細胞外にそれらが放出され、培養
液中にて浮遊した状態を言う。
芽胞は短軸１〜３μ×長軸５〜10μの楕円状物体で、
光屈折性を有するため、位相差光学顕微鏡の視野内で
は、青白い光を放つことから、他の顆粒と識別できる。
また、公知の染色法によっても、結晶毒素と芽砲は区別
できる（Fadel A.Sharif et al.,J.Ind.Microbiol.,3,
227〜229（1988））。
光屈折性を有するため、位相差光学顕微鏡の視野内で
は、青白い光を放つことから、他の顆粒と識別できる。
また、公知の染色法によっても、結晶毒素と芽砲は区別
できる（Fadel A.Sharif et al.,J.Ind.Microbiol.,3,
227〜229（1988））。
さらに、芽胞の90％が細胞外に放出されたことは、顕
微鏡視野内の全菌数（結晶毒素・芽胞を内在する細胞と
遊離芽胞の総数）に対する遊離芽胞の割合が当該範囲に
あることで確認できる。なお、培養条件によって、ある
程度の差はあるものの、芽胞が細胞外に放出され始めて
から、上記の状態に達するまで８〜24時間を必要とす
る。本発明においては、この様にして芽胞の90％が細胞
外に放出された培養液に対して24時間以内に殺菌処理を
施こすのである。
微鏡視野内の全菌数（結晶毒素・芽胞を内在する細胞と
遊離芽胞の総数）に対する遊離芽胞の割合が当該範囲に
あることで確認できる。なお、培養条件によって、ある
程度の差はあるものの、芽胞が細胞外に放出され始めて
から、上記の状態に達するまで８〜24時間を必要とす
る。本発明においては、この様にして芽胞の90％が細胞
外に放出された培養液に対して24時間以内に殺菌処理を
施こすのである。
上記範囲外で殺菌処理を行なうと、結晶毒素の殺虫活
性が損なわれ、実用的濃度で有効な殺虫剤を定常的に製
造することが不可能となり、また残存殺虫活性が飛躍的
には向上しない。
性が損なわれ、実用的濃度で有効な殺虫剤を定常的に製
造することが不可能となり、また残存殺虫活性が飛躍的
には向上しない。
○ 殺菌 本発明における殺菌は、細菌細胞・芽胞を殺滅するた
めに行われるものであって、下記のような化学的殺菌処
理及び物理的殺菌処理方法があり、前掲の特公昭51−50
47号公報に開示されているように、単に一種類の殺菌処
理のみでは、結晶毒素の殺虫能力を保持させながら、細
菌細胞・芽胞を完全に死滅させることは困難であるか
ら、本発明においても緩徐な化学的殺菌処理と物理的殺
菌処理とを組合わせて、それらを同時に行うことが好ま
しく、その方法により、容易に細菌細胞・芽胞を完全に
死滅させることができ、殺虫能の優れた産業上極めて有
用な殺虫剤を得ることができる。
めに行われるものであって、下記のような化学的殺菌処
理及び物理的殺菌処理方法があり、前掲の特公昭51−50
47号公報に開示されているように、単に一種類の殺菌処
理のみでは、結晶毒素の殺虫能力を保持させながら、細
菌細胞・芽胞を完全に死滅させることは困難であるか
ら、本発明においても緩徐な化学的殺菌処理と物理的殺
菌処理とを組合わせて、それらを同時に行うことが好ま
しく、その方法により、容易に細菌細胞・芽胞を完全に
死滅させることができ、殺虫能の優れた産業上極めて有
用な殺虫剤を得ることができる。
○ 化学的殺菌処理 化学的殺菌処理方法は、ホルマリン、パラトルエンス
ルホンクロルアミドナトリウム、パラトルエンスルホン
酸ジクロアミド、アゾビスクロロホルムアミジン、アク
リフラビン、メチレンブルー、塩化ベンザルコニウム、
塩化ベンゼトニウム、塩化セチルピリジニウムなどの薬
剤を上述の培養液等に適量加え殺菌する方法である。
ルホンクロルアミドナトリウム、パラトルエンスルホン
酸ジクロアミド、アゾビスクロロホルムアミジン、アク
リフラビン、メチレンブルー、塩化ベンザルコニウム、
塩化ベンゼトニウム、塩化セチルピリジニウムなどの薬
剤を上述の培養液等に適量加え殺菌する方法である。
○ 物理的殺菌処理 物理的殺菌処理方法は、加熱、超音波、放射線などに
より、上述の培養液等を殺菌する方法である。
より、上述の培養液等を殺菌する方法である。
○ 殺虫活性の測定法 結晶毒素の殺虫活性を定量的に把握する方法として
は、コナガを用いた殺虫試験により半数致死濃度を求
め、残存殺虫活性を定量的に測定するという方法を採用
した。すなわち、適当に希釈した試料液夫々に対する検
定供試昆虫の死亡率を測定し、試料液の濃度と死亡率と
の関係から半数致死濃度を求め殺虫活性の高低を比較す
る方法である。
は、コナガを用いた殺虫試験により半数致死濃度を求
め、残存殺虫活性を定量的に測定するという方法を採用
した。すなわち、適当に希釈した試料液夫々に対する検
定供試昆虫の死亡率を測定し、試料液の濃度と死亡率と
の関係から半数致死濃度を求め殺虫活性の高低を比較す
る方法である。
殺菌処理を施すBTの培養液を、その培養期間が芽砲の
90％が細胞から放出されてから、24時間以内のものとす
ることが、なぜ結晶毒素の殺虫活性を維持することに有
効であるのか、その具体的な機構は不明であるが、本発
明によれば殺菌処理後の殺虫活性を飛躍的に高めること
ができるのである。
90％が細胞から放出されてから、24時間以内のものとす
ることが、なぜ結晶毒素の殺虫活性を維持することに有
効であるのか、その具体的な機構は不明であるが、本発
明によれば殺菌処理後の殺虫活性を飛躍的に高めること
ができるのである。
次に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明す
る。
る。
実施例中に於ける芽胞の放出率測定、生残細胞・芽胞
数測定及び残存殺虫活性測定は以下の方法に準じて行な
われた。
数測定及び残存殺虫活性測定は以下の方法に準じて行な
われた。
芽胞の放出率測定： 培養の種々の過程で培養液を適宜、無菌採取し、位相
差光学顕微鏡（倍率1500倍、油浸法）下で培養状況を観
察する。培養液一試料あたり、任意に視野を５箇所選
び、芽胞の放出率を個々に求め、その平均値をもって、
各培養過程における芽胞の放出率とした。
差光学顕微鏡（倍率1500倍、油浸法）下で培養状況を観
察する。培養液一試料あたり、任意に視野を５箇所選
び、芽胞の放出率を個々に求め、その平均値をもって、
各培養過程における芽胞の放出率とした。
なお、芽胞の放出率は、視野に存在する全芽砲数（結
晶毒素ならびに芽砲を自己体内に含む細胞と培養液中に
遊離する芽胞の総数）に対する遊離芽胞数の割合（％）
で表示することとする。
晶毒素ならびに芽砲を自己体内に含む細胞と培養液中に
遊離する芽胞の総数）に対する遊離芽胞数の割合（％）
で表示することとする。
生残細胞・芽胞数測定： 試料液1mlを採り、無菌水にて適宜希釈し、肉エキス
・ペプトン寒天平板上に流し、30℃にて48時間培養し、
発生する集落を数えて、これより試料中の生残細胞・芽
胞数（ケ/ml）を計算する。
・ペプトン寒天平板上に流し、30℃にて48時間培養し、
発生する集落を数えて、これより試料中の生残細胞・芽
胞数（ケ/ml）を計算する。
残存殺虫活性測定： 試料液を適当に水で希釈した一連の５乃至６濃度段階
の被検定液を作製し、この一連の被検定液50mlに200cm2
のキャベツ生葉を１分間浸漬する。キャベツ生葉風乾
後、これを大型シャーレに敷き各区30頭のコナガ３令幼
虫を放飼し、72時間後に死虫数を数え、死亡率（％）を
算出する。この結果をフィニー（Finney）の図解法（Fi
nney,D.J.（1947）Probit Analysis.Cambridge Univ.
Press,Cambridge,pp318）により解析し、半数致死濃度
（被検定液中の試料液の濃度;ppm）を求める。
の被検定液を作製し、この一連の被検定液50mlに200cm2
のキャベツ生葉を１分間浸漬する。キャベツ生葉風乾
後、これを大型シャーレに敷き各区30頭のコナガ３令幼
虫を放飼し、72時間後に死虫数を数え、死亡率（％）を
算出する。この結果をフィニー（Finney）の図解法（Fi
nney,D.J.（1947）Probit Analysis.Cambridge Univ.
Press,Cambridge,pp318）により解析し、半数致死濃度
（被検定液中の試料液の濃度;ppm）を求める。
培養例 肉エキス１％、ペプトン１％、Nacl0.5％、pH7.0の培
養原料液100mlを500ml容坂口フラスコに入れ、110℃に
て10分間加熱殺菌し、これにバチルス・チューリンゲン
シスバラエティクルスタキHD−１菌株を肉エキス・
ペプトン寒天斜面に30℃、24時間生地静置した種菌を接
種し、30℃にて振盪培養を行った。
養原料液100mlを500ml容坂口フラスコに入れ、110℃に
て10分間加熱殺菌し、これにバチルス・チューリンゲン
シスバラエティクルスタキHD−１菌株を肉エキス・
ペプトン寒天斜面に30℃、24時間生地静置した種菌を接
種し、30℃にて振盪培養を行った。
表１に培養時間と芽胞の放出率の関係を示す。
視野によって芽胞の放出率に若干のばらつきが認めら
れるものの、培養48時間目には、芽胞の放出率は90％以
上となった。なお、培養に用いる培地の種類ならびに培
養条件（フラスコ培養：培地仕込量と振盪速度，ジャー
培養：培地仕込量，通気量と攪拌速度）によって培養の
進行状態に差異は生ずるが、当該方法に基づいて、培養
時間と芽胞の放出率の関係が容易に得られる。
れるものの、培養48時間目には、芽胞の放出率は90％以
上となった。なお、培養に用いる培地の種類ならびに培
養条件（フラスコ培養：培地仕込量と振盪速度，ジャー
培養：培地仕込量，通気量と攪拌速度）によって培養の
進行状態に差異は生ずるが、当該方法に基づいて、培養
時間と芽胞の放出率の関係が容易に得られる。
実施例１（ホルマリン及び加熱による殺菌処理） 培養例に示した各培養時間毎に、培養液を採取する。
つぎに、それらの固形分を測定（培養液の遠心14,000rp
m,4℃,10分）残渣を100℃で恒量となるまで乾燥し、そ
の重量百分率で算出し、適当な濃度のH2SO4或はNaOH溶
液及び無菌水を用いて、それらの培養液固形分を単位重
量中に同量含み、かつpHが5.5となるように調製する。
上記の培養液を5mlずつ試験管に分注し、これに２％の
ホルマリン水溶液5mlを夫々加えて、混合液中のホルマ
リン濃度を１％となるようにし、これを70℃に10分間加
熱した後、室温に冷却し、14,000rpmにおいて10分間遠
心分離操作に付し、上漬液を捨てて沈降物に5mlの無菌
水を加えて懸濁する操作を２回繰り返し、ホルマリン及
び菌体外可溶性毒素物質を除去した。
つぎに、それらの固形分を測定（培養液の遠心14,000rp
m,4℃,10分）残渣を100℃で恒量となるまで乾燥し、そ
の重量百分率で算出し、適当な濃度のH2SO4或はNaOH溶
液及び無菌水を用いて、それらの培養液固形分を単位重
量中に同量含み、かつpHが5.5となるように調製する。
上記の培養液を5mlずつ試験管に分注し、これに２％の
ホルマリン水溶液5mlを夫々加えて、混合液中のホルマ
リン濃度を１％となるようにし、これを70℃に10分間加
熱した後、室温に冷却し、14,000rpmにおいて10分間遠
心分離操作に付し、上漬液を捨てて沈降物に5mlの無菌
水を加えて懸濁する操作を２回繰り返し、ホルマリン及
び菌体外可溶性毒素物質を除去した。
このようにして得られた夫々の試料液の生残細胞・芽
胞数（ケ/ml）と残存殺虫活性を測定した結果を表２に
示す。この結果より、殺菌処理を施す培養液を、その培
養時間が芽胞の90％が放出された後、24時間以内のもの
に設定することで高い残存殺虫活性が得られることがわ
かる。
胞数（ケ/ml）と残存殺虫活性を測定した結果を表２に
示す。この結果より、殺菌処理を施す培養液を、その培
養時間が芽胞の90％が放出された後、24時間以内のもの
に設定することで高い残存殺虫活性が得られることがわ
かる。
実施例２（パラトルエンスルホンクロルアミドナトリウ
ム及び加熱による殺菌処理） 実施例１の方法に準じて調製された培養液を、5mlず
つ試験管に分注し、混合液中のパラトルエンスルホンク
ロルアミドナトリウムの濃度が0.1％となるように、夫
々の化合物を添加混合し、60℃に10分間加熱した後、直
ちに冷却した。この試料液から実施例１の方法により、
パラトルエンスルホンクロルアミドナトリウム及び菌体
外可溶性毒素物質を除去した。
ム及び加熱による殺菌処理） 実施例１の方法に準じて調製された培養液を、5mlず
つ試験管に分注し、混合液中のパラトルエンスルホンク
ロルアミドナトリウムの濃度が0.1％となるように、夫
々の化合物を添加混合し、60℃に10分間加熱した後、直
ちに冷却した。この試料液から実施例１の方法により、
パラトルエンスルホンクロルアミドナトリウム及び菌体
外可溶性毒素物質を除去した。
このようにして得られた夫々の試料液の生残細胞・芽
胞数（ケ/ml）と残存殺虫活性を測定した結果を表２に
示す。この結果より、殺菌処理を施す培養液を、その培
養時間が芽胞の90％が放出された後、24時間以内のもの
に設定することで高い残存殺虫活性が得られることがわ
かる。
胞数（ケ/ml）と残存殺虫活性を測定した結果を表２に
示す。この結果より、殺菌処理を施す培養液を、その培
養時間が芽胞の90％が放出された後、24時間以内のもの
に設定することで高い残存殺虫活性が得られることがわ
かる。
実施例３（実施例２の培養条件を変えたもの） バチルス・チューリンゲンシス・バラエティ・クルス
タキHD−１を、坂口フラスコ中のＣ培地（グルコース％
１、コーンスチープリカー１％、Mn1ppm:pH7.0）50mlに
接種し、30℃、10時間振盪培養する。同培養液120mlを
種菌とし、予め12lの２×Ｃ培地（Ｃ培地の２倍濃度:12
0℃、1atm、15分滅菌）を仕込んでおいたジャーファー
メンター（全容量20l）に接種し、pHを7.0に調整、維持
しつつ、30℃で通気攪拌培養（回転数300rpm、通気量0.
5vvm）を行う。培養過程において、培養液を経時採取
し、pH調整、殺菌処理及びパラトルエンスホンクロルア
ミドナトリウムと菌体外可溶性毒素物質の除去を行っ
た。
タキHD−１を、坂口フラスコ中のＣ培地（グルコース％
１、コーンスチープリカー１％、Mn1ppm:pH7.0）50mlに
接種し、30℃、10時間振盪培養する。同培養液120mlを
種菌とし、予め12lの２×Ｃ培地（Ｃ培地の２倍濃度:12
0℃、1atm、15分滅菌）を仕込んでおいたジャーファー
メンター（全容量20l）に接種し、pHを7.0に調整、維持
しつつ、30℃で通気攪拌培養（回転数300rpm、通気量0.
5vvm）を行う。培養過程において、培養液を経時採取
し、pH調整、殺菌処理及びパラトルエンスホンクロルア
ミドナトリウムと菌体外可溶性毒素物質の除去を行っ
た。
このようにして得られた夫々の試料液の芽胞の放出率
（％）、生残細胞・芽胞数（ケ/ml）と残存殺虫活性を
測定した結果を表３に示す。この結果より、殺菌処理を
施す培養液を、その培養時間が芽胞の90％が放出された
後、24時間以内のものに設定することで高い残存殺虫活
性が得られることがわかる。
（％）、生残細胞・芽胞数（ケ/ml）と残存殺虫活性を
測定した結果を表３に示す。この結果より、殺菌処理を
施す培養液を、その培養時間が芽胞の90％が放出された
後、24時間以内のものに設定することで高い残存殺虫活
性が得られることがわかる。
実施例４（実施例３の殺菌剤を変えたもの） 実施例３と同様、培養過程において、培養液を経時採
取し、pH調整後、殺菌処理を施した。殺菌剤としては、
次亜塩素酸ソーダ、過酸化水素、過硫酸アンモニウム、
過ほう酸ナトリウムの４種を用いた。殺菌処理後の殺菌
剤と菌体外可溶性毒素物質の除去を行い、得られた試料
液の生残細胞・芽胞数が０ケ/mlとなる殺菌処理条件
（殺菌剤濃度と温度条件）を事前に求めておき、同条件
での試料液の残存殺虫活性率を測定した。
取し、pH調整後、殺菌処理を施した。殺菌剤としては、
次亜塩素酸ソーダ、過酸化水素、過硫酸アンモニウム、
過ほう酸ナトリウムの４種を用いた。殺菌処理後の殺菌
剤と菌体外可溶性毒素物質の除去を行い、得られた試料
液の生残細胞・芽胞数が０ケ/mlとなる殺菌処理条件
（殺菌剤濃度と温度条件）を事前に求めておき、同条件
での試料液の残存殺虫活性率を測定した。
同結果を表４に示す。この結果より、殺菌剤の種類を
変えても、殺菌処理を施す培養液をその培養時間が芽胞
の90％が放出された後、24時間以内のものに設定するこ
とで高い残存殺虫活性が得られることがわかる。
変えても、殺菌処理を施す培養液をその培養時間が芽胞
の90％が放出された後、24時間以内のものに設定するこ
とで高い残存殺虫活性が得られることがわかる。
（ハ） 発明の効果 本発明方法は、BT菌の結晶毒素を含む培養液の細菌細
胞及び芽胞を高い殺虫活性を維持したまま完全に殺滅す
ることができ、安全でより高い薬効のBT農薬を、安定に
製造することが可能となるという優れた効果を奏する。
胞及び芽胞を高い殺虫活性を維持したまま完全に殺滅す
ることができ、安全でより高い薬効のBT農薬を、安定に
製造することが可能となるという優れた効果を奏する。
Claims (1)
- 【請求項１】バチルス・チューリンゲンシス（Bacillus
thuringiensis）の培養液の殺菌を芽胞の90％が放出
された後であって、かつ該放出後24時間以内に実施する
ことを特徴とする殺虫剤の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1098904A JP2658378B2 (ja) | 1989-04-20 | 1989-04-20 | 殺虫剤の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1098904A JP2658378B2 (ja) | 1989-04-20 | 1989-04-20 | 殺虫剤の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02279613A JPH02279613A (ja) | 1990-11-15 |
| JP2658378B2 true JP2658378B2 (ja) | 1997-09-30 |
Family
ID=14232122
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1098904A Expired - Fee Related JP2658378B2 (ja) | 1989-04-20 | 1989-04-20 | 殺虫剤の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2658378B2 (ja) |
-
1989
- 1989-04-20 JP JP1098904A patent/JP2658378B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH02279613A (ja) | 1990-11-15 |
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