JP2022502437A - 農業および獣医用の固体組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
例1.バイオマスの生成。
寄託番号がCBS613.95である細菌株C−924のバイオマスを、以下の組成の培養培地でバッチシステムでの深部発酵によって得た:酵母エキス、59g/L;スクロース、170g/L;硫酸マグネシウム七水和物、4.8g/Lおよび消泡物質グラナポンDG−158(Glanapon DG−158)、1g/L。発酵は、50Lの作業容量の発酵槽で、36℃、500rpmの撹拌、培養培地1リットルあたり1.5リットルの空気の通気、および1バールの発酵槽のガラス内圧力で行った。添加された全スクロースが消費されるまで、培養を72時間維持し、その後、それを少なくとも4時間定常期に置いた。管状遠心分離機での遠心分離により微生物を採取し、培養上清を除去した。得られたバイオマスを、乾燥させるクリームまたは細菌濃縮物の配合に使用した。図1に、得られた生育速度を示す。前記の図に示されているパラメータにより、乾燥バイオマス濃度の値が100g/Lを超えているため、高密度の生育が観察され得、これにより後続の乾燥プロセスのための細胞のより良い準備が可能となる。
濡れ性によって測定された、細菌株C−924の配合物の物理的特性における異なる添加剤の発生率の評価を行った。例1に記載されているようにバイオマスを得た。評価した添加剤は、アカシアガム、キサンタンガム、トラガカントガム、SDS、ポリソルベート80(tween80)、ポリソルベート20(tween20)、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、スクロース、硫酸アンモニウム、グラナポンDG−158(Glanapon DG−158)(Bussetti&Co,GmbH、オーストリア)、大豆レシチン、カルボキシメチルセルロース(CMC)、ポリエチレングリコール600(PEG600)およびポリエチレングリコール8000(PEG8000)であった。微生物(細菌株C−924)の濃度が8.4%〜9.2%(w/w)で、培養培地(酵母エキス)が76%〜85%(w/w)である組成物を生成した。添加剤は、キサンタンガムを除いて、一方は最小(2.3%(w/w))、他方は最大(10.5%(w/w))の2つの濃度レベルで添加した。キサンタンガムの場合、この添加剤が乾燥するために配合されたクリームまたは濃縮物に与える高粘度に起因して、最小値は0.23%、最大値は1.2%(w/w)であった。対照として、9.5%(w/w)のバイオマスおよび85.5%(w/w)の酵母エキスの組成で、添加物を含まない配合物を使用した。配合されたクリームを、37±1℃の熱交換器によってインラインで予熱された噴霧乾燥機で乾燥させ、130±2℃の入口温度および60℃〜62℃の間の出口温度で乾燥させた。得られた組成物を真空シーラーで3層材料(ポリエチレン、アルミニウムおよびポリエステル)に充填した。乾燥後の組成物の残留水分は、平均5%であった。それに応じて、組成物の濡れ性を評価し、国際農薬分析法協議会(CIPAC)によりCIPAC MT53.3において説明される方法によって決定した。
グラナポンDG−158(Glanapon DG−158)の濃度が組成物の濡れ性に及ぼす影響を評価するために、有機物の存在下および非存在下の2つの実験を行い、さらに消泡物質グラナポンDG−158(Glanapon DG−158)の濃度を0〜6.6%の間で変動させた。酵母エキスを、第1の実験の配合物に含めた。これは、23.5%の乾燥バイオマス、67.1%の酵母エキス、1.1%のスクロースの濃度で行い、グラナポンDG−158(Glanapon DG−158)は0〜6.6%であった。第2の実験の組成物は酵母エキスを含まず、90.6%の乾燥バイオマス、1.1%のスクロース、および0〜6.6%のグラナポンDG−158(Glanapon DG−158)の濃度を有していた。例1に記載されているようにバイオマスを得た。乾燥プロセスは、例2に記載されているように、80℃の出口温度を使用して行った。測定された応答変数は、CIPAC MT53.3手法による濡れ性であった。表1は、酵母エキスが配合物に含まれている第1の実験で得られた結果を示す。得られた結果は、1.8%以上のグラナポンDG−158(Glanapon DG−158)濃度から、1分未満の濡れ性が達成されることを示している。
製品の濡れ性に対するスクロース濃度の影響を評価した。23.5%の乾燥バイオマス、2%のグラナポンDG−158(Glanapon DG−158)、67%の酵母エキス、0〜3.3%のスクロースの基本組成で、乾燥させる様々な種類のクリームを調製した。例1に記載されているようにバイオマスを得た。クリームは、40%の総固形分濃度で調製した。乾燥は、入口温度が130±2℃、出口温度が80℃の噴霧乾燥機で行った。測定された応答変数は、CIPAC MT53.3手法による濡れ性であった。
C−924株の細菌を含む乾燥させるクリームは、30%に等しい全固形分濃度で調製した。最初に酵母エキスおよびスクロースを、各配合物を調製するのに必要な量でクリームに添加し、得られた湿潤バイオマスの添加を可能にする量のプロセス水において各配合物で使用するグラナポンDG−158(Glanapon DG−158)の総量の15%を添加した。得られた混合物を、温度制御された撹拌槽内で均質化した。それらを95℃で1時間加熱した。続いて、それらを15℃未満の温度に冷却した。前記温度に達したときに、得られた湿潤バイオマスおよび残りのグラナポンDG−158(Glanapon DG−158)を各配合物に添加し、それを少なくとも1時間撹拌し続けた。
−配合物1:微生物を使用しない対照。乾燥バイオマス0%;酵母エキス90.4%、スクロース1.4%、グラナポンDG−158(Glanapon DG−158)3.2%。
−配合物2:乾燥バイオマス2.3%;酵母エキス88.2%、スクロース1.4%、グラナポンDG−158(Glanapon DG−158)3.2%。
−配合物3:乾燥バイオマス4.5%;酵母エキス85.9%、スクロース1.4%、グラナポンDG−158(Glanapon DG−158)3.2%。
−配合物4:乾燥バイオマス22.6%;酵母エキス67.8%、スクロース1.4%、グラナポンDG−158(Glanapon DG−158)3.2%。
−配合物5:乾燥バイオマス45.2%;酵母エキス45.2%、スクロース1.4%、グラナポンDG−158(Glanapon DG−158)3.2%。
−配合物6:乾燥バイオマス90.4%;酵母エキス0%、スクロース1.4%、グラナポンDG−158(Glanapon DG−158)3.2%。
有機物/微生物の比率が変動する菌株C−924を含む組成物の殺線虫効果を評価するために、実験室レベルでの方法を行った。有機物として、酵母エキスを使用した。この実験で使用された組成物は、例5に記載されたものである。インビトロ活性の判定基準として、各組成物の卵孵化の阻害および幼体の死亡率を評価した。この評価は、様々な線虫種で行った。
A)ポット管理された条件
サツマイモネコブセンチュウ(Meloidogyne incognita)に対する組成物の殺線虫活性を、インビボ条件下(容量1kgのポット)で測定した。この実験で使用された組成物は、例5に記載されたものであった。フィトネマトーデス(phytonematodes)の攻撃を受けやすい品種UC8213のトマト植物を使用した。各組成物に50の植物を使用した。滅菌砂および泥炭の1:1混合物を基質として使用し、組成物を最初に適用する3日前に、各ポットあたり1000個の線虫の卵を侵入させた。6.25gの量の各固体組成物を秤量し、5Lの水に懸濁した。ポットあたり100ミリリットルを適用した。処理において、組成物の適用は3回行った。最初の適用は苗の移植の7日前、2回目の適用は移植の14日後、3回目の適用は2回目の適用の21日後に行った。
研究対象の組成物の殺線虫活性を、0.1haの保護された作物ハウスの条件で決定した。土壌の最初の侵入は、指標植物の無作為サンプリングおよび植え付けから評価した。BridgeおよびPageのスケールの結果に従って、7以上の高レベルの初期侵入を有する保護された作物ハウスを選択した。線虫の攻撃を受けやすい3019という名前のトマト雑種の植物を使用した。組成物は、無作為ブロック設計に従って適用した。各組成物の濃縮溶液を調製し、500gの各組成物を50Lの水に懸濁した。これらの懸濁液から、各ブロックに適用する前に1:8希釈液を調製し、最初の適用では、各苗の移植が行われる領域に100mLを適用した。2回目および3回目の適用では、植物の発達に応じて、植物ごとに200mL〜300mLの前記希釈液を供給した。適用スキームは、ポット条件下での試験で使用されたものと同様であり、1回の適用は苗を畝間に移植する7日前、2回目の適用は移植の14日後、3回目の適用は2回目の適用の21日後であった。根の損傷は、70日間の栽培で、BridgeおよびPageのスケールによって各配合物で処理された植物の総数で評価した。損傷値を統計的に比較した。各処理における収穫量も、果実の総重量から評価した(栽培サイクルの終了時、125日)。得られた結果を表6に示す。
植物病原性真菌に対する活性試験を、固形培養培地を含むペトリ皿で行った。真菌の接種は、培地がまだ液体である(温度が40℃に近い)ときに行った。培地が固化したら、各組成物1mg/mLの懸濁液で湿らせた濾紙のディスクを各プレートの中央に設置し、30℃でインキュベートした。この実験で使用された組成物は、例5に記載されている。各処理には3つのペトリ皿を使用した。5日後、各処理の阻害ゾーンを評価し、真菌の種類ごとに同じ組成物に対応する阻害ゾーンの値を平均した。得られた結果を表7に示す。
生物活性実験で得られた満足のいく結果は、22.6%の乾燥バイオマス;67.8%の酵母エキス;1.4%のスクロース;グラナポンDG−158(Glanapon DG−158)3.2%、5%の残留湿度からなる組成物4で製造された8つのロットのリアルタイム安定性研究へとつながった。噴霧乾燥機の出口温度は80℃であった。バッチを2℃〜8℃の温度で保管した。バッチの安定性の指標は、24ヶ月の保管が完了するまで、製造の開始時および様々な時点で分析した。
線虫および真菌に対して最大の効果を示した菌株C−924の固体組成物(配合物4)のトウモロコシ植物におけるバイオ肥料活性を確認するために、苗を植える7日前および7日後に土壌接種を行った。配合物から得られた水和剤を、108cfu/mLの濃度で懸濁した。適用量は、ポットあたり100mLであった。陽性対照として、植物生育刺激細菌シュードモナス・フルオレセンス(Pseudomonas fluorescens)C16およびアゾトバクター・クロオコッカム(Azotobacter chroococcum)INIFAT12で処理された植物を使用した。陰性対照として、接種されていない植物を使用した。複製の数は、処理あたり20の植物であった。種子は、1dm3の容量のポットに、ネストあたり1つの種子、ポットあたり4つのネストの割合で、深さ3センチメートルで播種した。
−播種後7日で発芽した種子の割合。
−根の首から葉の旗の葉腋までの植物の高さ(cm単位、植物を植えてから7日後および35日後に測定)。
−茎の高さ2cmでの植物の茎の直径(mm)。
例5の配合物4と同様の組成物の、サツマイモネコブセンチュウ(Meloidogyne incognita)に対する殺線虫活性をインビボで決定した。この組成物4は、殺線虫、殺菌、および生育促進活性に関して最良の結果が得られるため選択された。この実験で評価された同様の組成物は、微生物の異なる培養培地を含み、以下の通りであった:
−組成物4A(対照):乾燥バイオマス22.6%;酵母エキス67.8%、スクロース1.4%、グラナポンDG−158(Glanapon DG−158)3.2%
−組成物4B:乾燥バイオマス22.6%。カゼイン加水分解物67.8%、スクロース1.4%、グラナポンDG−158(Glanapon DG−158)3.2%
−組成物4C:乾燥バイオマス22.6%。ペプトン67.8%、スクロース1.4%、グラナポンDG−158(Glanapon DG−158)3.2%
−組成物4D:乾燥バイオマス22.6%。トリプトン67.8%、スクロース1.4%、グラナポンDG−158(Glanapon DG−158)3.2%
−組成物4E(微生物を含まない対照):乾燥バイオマス0%。酵母エキス90.4%、スクロース1.4%、グラナポンDG−158(Glanapon DG−158)3.2%
Claims (13)
- 農業または獣医用の固体組成物であって、前記固体組成物が1)最大92.4%の、菌株C−924の細菌濃縮物と微生物の生育および発達のための培養培地または市販の有機改良剤との混合物;2)1.8%〜6.6%の消泡物質;3)0.8%〜3%のスクロース、ならびに4)12%未満の残留水分を含み、前記細菌は、固体組成物1グラムあたり1010コロニー形成単位(cfu)〜1012cfuの間で見られる、上記固体組成物。
- 前記消泡物質が、脂肪酸エステルとエチレンオキシド−プロピレンオキシドのコポリマーとの混合物である、請求項1に記載の組成物。
- 前記消泡物質が、グラナポン(Glanapon)タイプである、請求項2に記載の組成物。
- 前記培養培地が、酵母エキス、カゼイン加水分解物、ペプトンおよびトリプトンからなる群から選択される、請求項1に記載の組成物。
- 前記市販の有機改良剤が、タンパク質加水分解物または糖蜜である、請求項1に記載の組成物。
- 植物および動物の病原体を防除するための、請求項1から5のいずれかに記載の固体組成物の使用。
- 前記病原体が、寄生線虫である、請求項6に記載の使用。
- 前記寄生線虫が、ネコブセンチュウ(Meloidogyne)属、ラドフォラス(Radopholus)属、ネグサレセンチュウ(Pratylenchus)属、ヘモンクス(Haemonchus)属、トリコストロンギルス(Trichostrongylus)属およびディクチオカウルス(Dictiocaulus)属に属する、請求項7に記載の使用。
- 前記病原体が、真菌である、請求項6に記載の使用。
- 前記真菌が、アルテルナリア・タバシナ(Alternaria tabacina)、アルテルナリア・ロンギペス(Alternaria longipes)、ビポラリス・オリザエ(Bipolaris oryzae)、コレトトリカム・グロエオスポリオイデス(Collectotrichum gloeosporioides)、フザリウム・オキシスポラム(Fusarium oxysporum)、ペスタロチア・パルマルム(Pestalotia palmarum)、リゾプス・ストロニファー(Rhizopus stolonifer)、リゾクトニア・ソラニ(Rhizoctonia solani)、サロクラジウム・オリザエ(Sarocladium oryzae)、およびチェラウィオプシス・パラドクサ(Thielaviopsis paradoxa)からなる群から選択される、請求項9に記載の使用。
- 種子発芽および植物生育を刺激するための、請求項1から5のいずれか一項に記載の固体組成物の使用。
- 植物および動物の病原体を防除するための方法であって、請求項1から5のいずれか一項に記載の固体組成物の有効量を、それを必要とする植物または動物に、該植物または動物への前記組成物の適切な適用形態により投与することを特徴とする、上記方法。
- 種子発芽および植物生育を刺激するための方法であって、請求項1から5のいずれか一項に記載の固体組成物の有効量を、種子または植物に、該種子または植物への前記組成物の適切な適用形態により投与することを特徴とする、上記方法。
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