JPS61181372A - 或る種の鱗翅類害虫に対して改良された活性を有するバチルス・スリンギエンシスの株の製法及びそれにより製造された新規株 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は殺昆虫活性を有する毒素生成細菌の新へ 親株の製造、それにより製造される新親株およびこの細
菌の成る種の害虫に感染する植物を保護する用途に関す
る。

より詳しくは、本発明は鱗翅類害虫に対して改良された
殺昆虫活性を有するバチルス・スリンギｚｙシｘ（Ｂａ
ｃｉｌユｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎａｉｓ　）の新株
に関する。

商業的および／または家庭的に重要な多くの植物は鱗翅
類害虫による侵略および損傷にＷｈされる。

これらの害虫は世界中に見出され、現在それらの抑制は
利用可能な殺虫剤の繰返された且つ費用のかかる適用を
必要とする。

多、くの穀物は数多くの鱗翅類害虫に感染する。

最も重大な害虫の中には綿羽虫（８ｐｏｄＯｐｔｅｒａ
１１ｔｔＯｒａｌｉｓ　）、蛾の幼虫（Ｈｅ１ｉｏｔｈ
ｉｓ　ａｒｍｉｇｓｒａ　）、タバコ育虫（Ｈｅｌｉｏ
ｔｈｉｓ　ｖｉｒｅｓｃｓｎｓ）、Ｐｌｕｔｅｌｌａｍ
ａｃｕユ１ｐｅｎｎｉｓ、　　Ｍａｍｅｓｔｒａ　ｓｐ
ｐおよびＰｉｅｒｉｇｂｒａｓｓｉｃａｅなどがある。

広いスペクトルの殺虫剤は穀物保護のための有用且つ貴
重な道具であるが、しかし、広いスペク□トルの化学的
殺昆虫剤の見境のない使用は多くの天然抑制剤を破壊す
る可能性がある。殆んどの化学的殺昆虫剤は比較的非選
択的であるので破壊的害虫の有益な捕食者および寄生虫
を含む非目標生物体を破壊し得る。成る種の昆虫はまた
、化学的殺昆虫剤に対して耐性を発達させ、それはしば
しば弱小の害虫を強大な害虫に丁番ことがある。

天然に存在する細菌を活性且つ宿主−特異性成分として
用いる選択的微生物殺昆虫剤の導入はこれらの多くの問
題を克服するの？助けてきた。

微生物殺昆虫剤の具体例はバチルス・スリンギエンシス
であり、それらの多くの株は市販されており、感染性幼
虫特に昆虫目の１＃翅目のそれらにより食べられた際の
独特な殺昆虫活性に対して現在開発が行われている。

これらの株は有益な昆虫に対する悪影響なしに使用され
る。バチルス・スリンギエンシスは有Ｗな昆虫を抑制す
るために天然に存在する生物体の使用を支持する現在の
農業理論にうまく適合している。それは広く分布した桿
状の、胞子形成性、好気性、グラム陽性微生物であり、
胞子形成周期時に１以上の蛋白質側胞子結晶の生成、そ
の鱗翅類幼虫に対する病原性、そのクエン酸塩を唯一の
炭素源とする利用能力およびその胞子の極めて高いリン
酸塩含量により特徴付けられる。

バチルス・スＩＪ　ｙイエ／シスは環境の普通の生息物
であり、成る種の土壌において生育することができる。

それは人、ペット類、鳥類、魚類、土中の虫、最も有益
な昆虫類或いは植物に対しては悪影響が知られていない
。その感染昆虫に対する病原性は本質的に胞子形成時に
細胞の乾燥重量の３０〜４０％を占める。副胞子結晶の
存在によるものである。

バチルス・スリンギエンシスは摂取された場合にのみ活
性である。摂取後数時間後に鱗翅類害虫は食べることを
止め、植物に対する損傷が停止される。殆んどの種は結
晶毒物による毒血症により約２４〜７２時間後に死亡す
る。これには胞子の存在の結果として敗血症が伴うこと
がある。

この様に、主たる効果は幼虫の腸内におけるその溶解後
にのみ作用する結晶によるものである。

結晶の活性化は消化管内容物中のアルカリ性ｐｉｌ！お
よび蛋白質分解酵素の組合せにより生ずる。この反応は
結晶の毒性成分の放出を行’５８翅類幼虫の高消化管ｐ
Ｈ（ｐＨ＞７）に依存する。これらの毒素は中腸壁を破
壊し食べることを停止させる。

この様に、腹腔内に放出された細菌の生育の結果、昆虫
の死亡に一部の役割も果て敗血症を生じさせる。

バチルス・スリンギエンシスの殺昆虫剤としての使用は
鱗翅類害虫を取扱うための有効且つ環境的に許容可能な
方法を提供することは明らかである。

この理由により、与えられた種に対してより大きな毒性
を有するか或いはより広い活性スペクトルを有する意味
での改良された殺昆虫活性を有する新たな株が現在探索
されている。しかしながら、高毒性と広い活性スペクト
ルの組合せは実際には極めて達成が困難であった。

本発明においてバチルス・スリンギエンシスの新株ＧＣ
！９１が成る種の鱗翅類害虫に対して改良された殺昆虫
活性を有することが見出された。

従って、本発明は、その試料がナショナル・コレクショ
ン・オブ・タイプ・カルチャーズ（Ｎ０ＴＯ）、セント
ラル・パブリック・ヘルス・ラボラドＩＪ−（コリンド
ール通、ロンドン　ＮＷ９５ＨＴ　）　Ｋ受託番号ＮＧ
ＴＯ１１８２１で寄託された（　１９８４年９月７日寄
託）バチルス・スリンギエンシスノ新株ＧＣ９１、或い
は鱗翅類害虫に対して殺昆虫活性な有するその銹導体ま
たは突然変異体を提供する。

この新株はバチルス・スリンギエンシスの二つの株の潜
在的殺昆虫活性を有効に組合せろものであり、その一つ
は胞子形成反能突然異体であり、従ってそれが実際に胞
子或いは結晶を生成するならば殺昆虫活性を示すように
させる遺伝子物質を含有するが殺昆虫活性は示さないも
のである。この様に、新株ＧＣ　９１の驚くべき能力は
二つの突然変異株の単なる混合物の使用によっては達成
することができないものである。

この新規株は、Ｇａ１ｌｅｒｉａ　、　Ｍａｍｅｇｔｒ
ａ　、　Ｈｅｌｏ−ｔｈｉｇ、８ｐｏｄｏｐｔｓｒａお
よびＰｉｅｒｉｓ　属における鱗翅類害虫に対して改良
された殺昆虫活性を有する。

本発明はまた、単一株中に二つの各出発株の異った殺昆
虫特性を組合せて導入することにより改良された殺昆虫
特性を有するバチルス・スリンギエンシスの株を創造す
る方法において、（ａ）第一の出発株から結晶蛋白質の
部分馨形成するポリペプチドをコードするプラスミドの
損失により特徴付けられる突然変異体を選択し、および （１））　　第二の出発株（供与体）或いはその突然変
異体からデルタ−エンドトキシン結晶合成ｔコードする
プラスミドを工程（ａ）において生成された突然変異体
（受容体）中に移して所望の新規株を生成する ことを特徴とする方法を提供する。

好ましくは、先ず第二の出発株から第二の出発株のそれ
と実質的に同一のプラスミドプロフィールを有する胞子
形成不能突然変異体が選択される。

この１ラスミドを次いで胞子形成不能突然変異体から工
程（ａ）において生成された受容体突然変異体に移丁。

好ましくは、第一の出発株は株ＨＤ１３５であり、工程
（ＩＬ）において生成される突然変異体は株１３５−８
４　（ＮＣＴＣ１１８２２）である。

好ましくは、第二の出発株は株ＨＤ１９１であり、胞子
形成不能突然変異体は株１９１−　Ａ２（ＮＯＴＣ１１
８２３）である。

本発明は更に、バチルス・スリンギエンシス株１９１−
　Ａ２　（ＮＯＴＣ！　１１８２３）からバチルス・ス
リンギエンシス株１３５−８４　（ＮＣＴＣ　１１８２
２）中に株１９１−ム２においてデルタ−エンドトキシ
ン結晶合成をコードするプラスミドを移すことを特徴と
するバチルス・スリンギエンシスＧＣ　９１（ＮＣＴＣ
　１１８２］）の製造方法を提供する。

この方法の一つの実施態様において、株１９１−ム２お
よび１３５−８４　”２−緒に混合培養液中において生
育させ、接合様プラスミド転移を行わせ、混合培養液を
稀釈し、固体培地に移して単一コロニーを得、株ＧＣ　
９１のコロニーＶ増大した大きさの副胞子結晶により選
択し、株ＧＣ９１をそれから培養する。

本発明はまた、バチルス・スリンギエンシス株ＧＣ９１
（ＮＣＴＣ　１１８２１）、或いはその誘導体または突
然変異体或いは上記方法により製造された株に由来する
殺昆虫物質も提供する。一つの実施態様において、この
殺昆虫物質は胞子−結晶複合体である。

本発明は更に、バチルス・スリンギエンシス株ＧＣ　９
１　（ＮＣＴＣ　１１８２１）或いはその誘導体または
突然変異体或いは上記定義の殺昆虫物質な担体、稀釈剤
、界面活性剤、或いは適用促進アジユバントと共に含ん
でなることを特徴とする殺昆虫剤組成物を提供する。こ
の組成物はまた、更に、肥料、微量養分供与体、植物成
長調剤、殺草剤、殺虫剤、殺真菌剤、殺細菌剤、殺線虫
剤および軟体動物駆除剤およびそれらの混合物から選ば
れる生物学的に活性な化合物を含むことができる。この
組成物は、０．１〜９９重量％のバチルス・スリンギエ
ンシスＧＯ９１或いはその誘導体または突然変異体或い
は殺昆虫物質、１〜９９．９重量係の固体または液体ア
ジユバント、および０〜２５重量％の界面活性剤よりな
ることができる。

本発明は更に、害虫或いはそれらの環境に殺昆虫的に有
効量のバチルス・スリンギエンシス株ＧＣ９１（ＮＣＴ
Ｃ１１８２１）或いはその誘導体または突然変異体、或
いは上記定義の殺昆虫物質或いは該株誘導体、突然変異
体或いは物質を含む組成物を適用す するこちを特徴とする鯖翅類害虫の対抗方法を提供する
。

バチルス・スリンギエンシスの株Ｇ（！９１ｆｆｉいは
それを含む組成物は成る種の他の殺昆虫剤或いは化学薬
品と共に効力？失うことなく保護されるべき植物或いは
穀物に投与することができる。

それは殆んどの他の通常使用される農業スプレー材料と
相溶性であるが、極端にアルカリ性のスプレー溶液中に
おいては使用されるべきではない。

それはまた、粉末、懸濁液、浸濶剤或いはその他の任意
の農業用に適した剤形において投与することかできる。

バチルス・スリンギエンシスの正常な生育後、母細胞が
溶解し、胞子および結晶を生育培地中に放出する。これ
らの胞子および結晶は遠心分離、スプレー乾燥或いはダ
ルメージ（Ｄｕｌｍａｇｅ　）など〔ジャーナル・オプ
ーインバータプレート・バンロジー（Ｊｏｕｒｎａｌ　
ｏｆ工ｎｖｅｒｔｅ’ｂｒａｔｅ　ｐａｔｈｏｘｏｇｙ
）　１５．１５−２０．　１９７０　］　　に報告され
るようなラクトース共沈澱技術のような沈澱法により採
取される。得られる胞子−結晶複合体は長期間安定であ
り、穀物への適用に適した製品に配合することができる
。

本発明による殺昆虫組成物の製造方法はバチルス・スリ
ンギエンシス株ＧＣ　９１　’に培養することよりなり
、培養は、 Ａ）この株を凍結乾燥されたアンプル中に維持し、Ｂ〕
　この株を寒天斜面上に接種し、 Ｃ）これらの斜面を２０〜４０℃、好ましくは２５〜３
３℃で１〜５日間インキュベートし、 Ｄ）これらの斜面から水性培養培地を含む振盪フラスコ
に接種し、 Ｌ）この容器ヲ２０〜４０℃、好ましくは３０℃の温度
において１〜５日間、好ましくは１〜２日間振盪し、任
薯にこの成長期を別のフラスコ内で少なくとも１回繰返
し、 Ｆ）予備培養ファーメンタ−内において水性培養培地に
段階Ｌ）の培養液を接種し、 Ｇ）接種液を含有する培地を２０〜４０℃、好ましくは
３０〜３５℃の温度で撹拌および通気し、任意にこの予
備培養発酵段階を別のより大きい容器内において少なく
とも１回繰返し、 Ｈ）段階Ｏ）のインキュベージ冒ン用の液の２〜２０重
量係を水性培養培地を含有する製造７アーメンター中に
導入し、 工）培地ｙａｌ−２０〜４０℃、好ましくは３（１〜３
５℃の温度で撹拌および通気し、 Ｊ）　バチルス・スリンギエンシスＧＣ　９’ｌ　培養
液’に製造ファーメンタ−内の胞子形成および結晶生成
が最大に達した時点で採取することにより行われ、 Ｋ）Ａ、Ｄにおける寒天および培養液は少なくとも一つ
の窒素源、少なくとも一つの炭素源および少なくとも一
つの塩、好ましくはペプトン、グルコースおよび少なく
とも一つの塩を含有すべきである。Ｆ−Ｊにおけろ培地
は少なくとも一つの窒素源（例、ペプトン、酵母エキス
、コーンステイープリカー、大豆ミール、綿実ミール、
魚ミール）、少なくとも一つの炭水化物源（例、グルコ
ース、ラクトース、スクロース、デンプン或いはこれら
の成分に富んだ原料）、および少なくとも一つの鉱物塩
を含有丁べきである。窒素および炭水化物はなるべく同
時に消費されるようにバランスが取られるべきである。

この胞子−結晶複合体或いはそれｔ含む組成物はある種
のその他の殺昆虫剤或いは化学薬品と共に効力の損失な
しに保護されるべき植物或いは穀物に投与することがで
きる。

胞子−結晶複合体における胞子を例えばガンマ線照射或
いは結晶を損傷しないその他の方法で殺すことが可能で
あり、それにより生存不能生成物を形成することかでき
る。生存不能生成物は安全の理由により細菌の広がりを
防止することが望ましい成る種の状況において或いは有
益な鱗翅類例えばカイコにおける病気を引起こ丁ことを
避けるために有利な場合がある。しかしながら、生存不
能生成物は一般的に生きた胞子を含むもの根治性でなく
、更に欠点として胞子を殺すだめのコストの上昇がある
。

本発明は更に殺昆虫的に有効量の　Ｂ、スリンギエンシ
スａｃ９１或いはその組成物を適用することな特徴とす
る植物の処理方法に関する。

本発明の範囲内において保護されるべき目標穀物には、
例えば次の植物種が含まれる：穀類（コムギ、オオムギ
、ライムギ、カラスムギ、コメ、サトウモロコシ、およ
び関連した穀類〕、ビート（サトウビートおよび飼料ビ
ート）、５果、仁果、および小果樹（リンゴ、セイヨウ
ナシ、プラム、モモ、アーモンド、サクランボ、イチビ
、ラズベリーおよびブラックベリー）、豆科植物（イン
ゲンマメ、ヒラマメ、ピース、大豆）、油植物（ナタネ
、アブラナ、ケシ、オリーブ、ヒマワリ、ココナツツ、
ヒマシ油植物、ココアマメ、ナンキンマメ）、キューリ
植物（キューリ、マロー、メロン）、繊維植物（ワタ、
アマ、アサ、シェード）、柑橘果物（オレンジ、レモン
、グレープフルーツ、マンダリン）、野菜（ホーレンン
ー、レタス、アスパラガス、キャベツ、ニンジン、タマ
ネギ、トマト、ジャガイモ、パプリカ）、クスノキ（ア
ボカド、シナモン、シラーノー）、落葉樹および針葉樹
（ボダイジュ、セイヨウィチイ、カシツキ、ハンノキ、
ポプラ、ブナ、モミ、カラマツ、マツ）、或いはメイズ
、タバコ、ナツツ、コーヒー、ブドーキビ、紅茶、ブド
ー、ホップ、バナナおよび天然ゴム植物並びに観賞植物
（複合体）。

バチルス・スリンギエンシスＧＣ　９１は通常組成物の
形態で適用され、被処理作物面積或いは植物に更に生物
学的活性化合物と同時に或いは順次適用することができ
る。これらの化合物はいづれも肥料或いは微量養分供与
体或いはその他の植物生育に影４１を及ぼす調剤である
。それらはまた、選択的殺草剤、殺昆虫剤、殺真菌剤、
殺細菌剤、殺線虫剤、軟体動物駆除剤或いはこれらの調
剤のいくつかの混合物でもよく、必要に応じて更に通常
配合技術において用いられる担体、界面活性剤、或いは
適用促進アジュバントと共に用いられる。

適当な担体およびアジュバントは固体または液体であり
、通常配合技術において用いられる物質例えば天然或い
は再生鉱物物質、溶媒、分散剤、湿潤剤、粘着剤、バイ
ンダー、或いは肥料などに対応する。

これらのＢ、スリンギエンシスＧＣ　９１を活性成分と
して或いはそれと他の活性成分との組合せｔ含み、また
適当な場合には固体或いは液体アジュパン）Ｙ含む配合
物即ち組成物、調剤或いは混合物は公知の方法例えば活
性成分を増量剤例えば溶媒、固体担体および場合に応じ
ては界面活性化合物（界面活性剤）と共に均一に混合お
よび／または摩砕することにより調製されろ。

適当な溶媒は芳香族炭化水素、好ましくは、８〜１２の
炭素数を有する両分例えばキシレン混合物或いは置換ナ
フタレン類、ジブチルフタレート或いはジオクチルフタ
レートなどの７タレート類、シクロヘキサン或いはパラ
フィン類などのような脂肪族炭化水素類、アルコール類
およびグリコール類およびそれらのエーテル類およびエ
ステル類例工はエタノール、エチレングリコールモノメ
チル或いはモノエチルエーテル、シクロヘキサノンなど
のケトン類、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、ジメチルス
ルホキシド或いはジメチルホルムアミドなどの強極性溶
媒、植゛物油或いはエポキシ化ヤシ油或いは大豆油など
のエポキシ化植物油、或いは水である。

例えば、粉末および分散性粉末に使用される固体担体は
通常は方解石、タルク、カオリン、モンモリロナイト或
いはアタパルガイドなどの天然鉱物充填剤である。物理
的性質を改良するためには高度分散ケイ酸或いは高度分
散吸着剤重合体を添加することも可能である。適当な顆
粒化吸着性担体は多孔質タイプ、例えば、軽石、破砕レ
ンガ、海泡石、或いはベントナイトであり、適当な非吸
着性担体は方解石或いは砂のような物質である。

加えて、無機質或いは有機質の数多くの予備微粒化材料
例えば特にドロマイト或いは粒状化植物残渣を使用する
ことができる。

配合されるべき活性成分の性質に応じて、適当な表面活
性化合物は浪好な乳化、分散および湿潤特性を有する非
イオン性、カチオン性および／またはアニオン性界面活
性剤である。「界面活性剤」という用語は界面活性剤の
混合物を含むものとしても理解されろ。

適当なアニオン性界面活性剤は水溶性石ケンおよび水溶
性合成界面活性化合物の両者であり得る。

適当な石ケンは高級脂肪酸（Ｃ！１０−０２２　）のア
ルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩或いは未置換或いは
置換アンモニウム塩例えばオレイン酸或いはステアリン
酸のナトリウム或いはカリウム塩、或いは例えばヤシ油
或いは牛脂から得ろことのできる天然脂肪酸混合物のこ
れらの塩である。更に適当な界面活性剤はまた脂肪酸メ
チルタウリン塩並びに変性および未変性リン脂質である
。

しかしながら、より頻繁には所謂合成界面活性剤、特に
脂肪族スルホネート類、脂肪族サルフェート類、スルホ
ン化ベンズイミダゾール誘導体或いはアルキルアリール
スルホネート類が使用される。

脂肪族スルホネート類或いはサルフェート類は通常アル
カリ金属塩、アルカリ土類金属塩或いは未置換或いは置
換アンモニウム塩の形態であり、一般的にアシル基のア
ルキル部分も含むＣＢ　−０２２アルキル基を含み、例
えばリグノスルホン酸、ドデシルサルフェート或いは天
然脂肪酸から得られたＮ肪アルコールサルフェートの混
合物のナトリウム或いはカルシウム塩である。これらの
化合物はまた硫酸エステルおよび脂肪アルコール／エチ
レンオキシドアダクトのスルホン酸の塩も含む。

スルホン化ベンズイミダゾール誘導体は好ましくは２個
のスルホン酸基および８〜２２の炭素数を含む一つの脂
肪酸基を含有する。アルキルアリールスルホネート類の
具体例は、ドデシルベンゼンスルホン酸、ジブチルナフ
タレンスルホン酸、或いはナフタレンスルホン酸／ホル
ムアルデヒド縮合生成物のナトリウム、カルシウム或い
はトリエタノールアミン塩である。また対応するホスフ
ェート例えばｐ−ノニルフェノールと４〜１４モルのエ
チレンオキシドとのアダクトのリン酸エステルの塩も適
当である。

非イオン性界面活性剤は、好ましくは、脂肪族或いは環
式脂肪族アルコール類、或いは飽和或いは不飽和脂肪酸
およびアルキルフェノール類のポリグリコールエーテル
銹導体であり、該誘導体は３〜３０個のグリコールエー
テル基および（脂肪族）炭化水素部分に８〜２０個の炭
素原子およびアルキルフェノールのアルキル部分に６〜
１８個の炭素原子を含有する。

更に適当な非イオン性界面活性剤は、ポリエチレンオキ
シドとポリプロピレングリコール、エチレンジアミノポ
リプロピレングリコールおよびアルキル鎖に１〜１０個
の炭素原子を含むアルキルポリプロピレングリコールと
の水溶性アダクトであり、これらのアダクトは２０〜２
５０個のエチレングリコールエーテル基および１０〜１
００個のグロビレングリコールエーテル基を含む。これ
らの化合物は通常プロピレングリコール単位当り１〜５
個のエチレングリコール単位を含有する。

非イオン性界面活性剤の代表例はノニルフェノールポリ
エトキシエタノール、ヒマシ油ポリグリコールエーテル
、ポリプロピレン／ポリエチレンオキシドアダクト、ト
リブチルフェノキシポリエトキシエタノール、ポリエチ
レングリコールおよびオクチルフェノキシポリエトキシ
エタノールである。ポリオキシエチレンソルビタンのＩ
ｆｆ’ｆ　肪Ｈエステル例えばポリオキシエチレンソル
ビタントリオレエートもまた適当な非イオン性界面活性
剤である。

カチオン性界面活性剤は、好ましくは、Ｎ−置換基とし
て少なくとも１個のＣ８−Ｃ２２アルキル基および更に
置換基として低級未置換或いはハロゲン化アルキル、ベ
ンジル或いはヒドロキシ−低級アルキル基を含む四級ア
ンモニウム塩である。これらの塩は、好ましくは、ハロ
ゲン化物、メチルサルフェート或いはエチルサルフェー
トの形態、例えばステアリルトリメチルアンモニウムク
ロライド或いはベンジルジー（２−クロロエチＡＩ）エ
チルアンモニウムブロマイドである。

配合技術において通常使用される界面活性剤は、例えば
「マツカッチョンの洗剤および乳化剤年報阜 Ｊ　　（”ＭｃＯｕｔｃｈｅｎ’ｓ　　Ｄｅｔｅｒｇｅ
ｎｔｓ　　ａｎｄ　　ＫｍｕｌｓｉｆｉｅｒｓＡｎｎｕ
ａｘ’　、　ＭＣＰｕ’ｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏｒｐ、
　Ｒｌｄｇｅｗｏｏｄ　。

Ｎｅｗ　Ｊｅｒｓｅｙ、　１９７ｓ　）　ｉ　　ヘルム
ートースタツへ博士（Ｄｒ、Ｈｅｌｍｕｔ　８ｔａｃｈ
ｅ　）　　「界面活性剤ハンドブックＪ　　（”Ｔｅｎ
８１ｄＴａｓｃｈｅｎｂｕｃｈ’、ＣａｒユＨａｎｓｅ
ｒＶｅｒユａｇ、　Ｍｕｎｉｃｈ　／　Ｖｉｅｎｎａ　
）などに記載されている。

本発明の殺昆虫組成物は、通常、０．１〜９９％、好ま
しくは０．１〜９５％のバチルス・スリンギエンシスＧ
Ｃ　９１、或いはそれと他の活性成分との組合せ、ｌ〜
９９．９％の固体または液体アジュバント、および０〜
２５％、好ましくは０．１〜２０チの界面活性剤を含む
。

市販品は濃縮物として配合されるのが好ましいが、末端
ユーザーは通常実質的により低い濃度の稀釈配合物を使
用する。

これらの組成物はまた、更に安定剤、消泡剤、粘度調節
剤、バインダー、粘着剤並びに肥料その他の活性成分を
特別の効果を得るために含有することができる。

以下、野性タイプ、突然変異体供与体、突然変異体受容
体および組換え株ＧＯ９１のプラスミドプロフィールを
示す添付図面を参照する。括弧０）は染色体ＤＮＡの位
置を示す〇 バチルス・スリンギエンシスｏｃ　ｇｌの新株は、具体
例に示される、下記の実験処方を用いて二つの他のバチ
ルス・スリンギエンシス株から作成された。

例１−株１３５−８４の調製 出発株はバチルス・スリンギエンシス　ＨＤ１３５野性
種のと一セロタイプａｉＺａＷａｉ株であった（テキサ
ス州ブラウンスピル、米国農務省、綿昆虫研究室、Ｌ　
Ｔ、ダルメージ博士より自由に入手可能）。株ＨＤ１３
５は「米国農務省から利用可能なバチルス・スリンギエ
ンシス培養物」と題されろ、カタログ（Ａｇｒｉｃｕｌ
ｕｒａｌ　Ｒｅｖｉｅｗｓ　ａｎｄ　ＭａｎｕａｌｓＡ
ＲＭ　−８−３０，１９８２年１０月）に掲載されてい
る。

それはまた、’　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ　ｄｅ　５ｏｕ
ｃｈｅｓ　ｄ。

Ｂａｅ　ｉユｌｕｇ　ｔｈｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ　１９
８３　’　　と称されるカタログ〔パスツール研究所、
２５　ｒｕｅ　６ｅ　ＤｏｃｔｅｕｒＲｏｕｘ、　７５
７２４　Ｐａｒｉｓ　Ｃｅｄｅｘ　１５．　Ｆｒａｎｃ
ｅ　　（インデックス番号７−２８）］にも利用可能な
ものとして掲載されている。

株ＨＤ１３５は、ビニリス・ブラシカｘ　（Ｐｉｅｒｉ
ｓｂｒａｓｓｉｃａｅ　）、マメストラ・ブラシカｘ　
（Ｍａｍｅｓｔｒａｂｒａｓｓｉｃａｅ　）、へりオチ
スーピレ七ｙ　ス（Ｈｅ１ｉｏｔｈｉｓＶ１ｒ＠ＢＱＩ
；ＨｌＢ　）　、ヘリオチス・アルミゲラ（Ｈｅユｉｏ
ｔｈｉｓａｒｍｉｇｅｒａ　）、ガレリア・メロネラ（
Ｇａｌｌｅｒｉａｍｅｌｌｏｎｅｌｌａ　）およびスポ
ドブテラ・リトラリス（８ｐｏｄｏｐｔｅｒａ　１ｉｔ
ｔｏｒａｌｉｓ　）に対して殺虫活性な示した（表１参
照）。

株ＨＤ１３５は栄養ブａ　ｘ　（０ｘｏ１社、英国）（
組成：　Ｌａｂ−ＬｅｍｃＯＰｏｗｄｅｒ　１．０　ｇ
／ｘ、酵母エキスＬ　−２０２，０ｇ／ｌ　、ペプトン
Ｌ　−３７５，０ｇ／ユ、Ｎａ１ｌ　５．Ｏｇ／ｌ　）
中において４２℃で１６時間生育した。培養液を次いで
ｏ、ｓ　４　（Ｗ／ｖ）バクトベプトｙ　（ＤｉｆｃＯ
）中で稀釈し、栄養寒天（０ＸＯ１ｄ社、英国〕（栄養
ブロスと同様な組成物但し、寒天Ｎ３１５、Ｏｇ／ｌを
添加）上にプレート培養し、プレート当りほぼ１００コ
ロニーを達成した。次いで、インキュベーションを３０
℃において４８時間行った。

個々のコロニーを顕微鏡で検査したところ、一つのコロ
ニーが減少した大ぎさの副胞子結晶を生成することか見
出された。このコロニーはＨＤ１３５の突然変異株であ
ることが判明し、１３５−８４と命名された。株１３５
−８４はＮ０ＴＯに受託番号ＮＣ！Ｔ。

１１８２２として寄託されている（寄託臼　１９８４年
９月７日）。突然変異体１３５−８４中のプラスミドの
ジャレット（Ｊａｒｒｅｔ、　Ｐ−）、（１９８３年）
、〔ＦＲＭ８　　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　Ｌｅｔｔ
ｅｒｓ　　ｔ６、　　ｐｐ　５０　−６０　　：］　　
　の方法による分析は、それが親株に存在した５３Ｍｄ
プラスミドおよび３Ｊ　Ｍａ　プラスミドが欠けること
を示した（図面参照）。野性ａｉＨＤ１３５　および１
３５−８４からの可溶化結晶蛋白質の８ＤＳ　（ドデシ
ル硫酸ナトリウム〕ポリアクリルアミドゲル上の電気泳
動は１３５−　［１４の副胞子結晶は１３（ｌのポリペ
プチドを欠いていることを示した。結晶の精製、それら
の溶解およびそれら７８ＤＢポリアクリルアミドゲル上
で操作する方法は公知であり、例えばＰ、ジャレット（
ｐ、　Ｊａｒｒｅｔｔ、　Ｊｏｕｒｎａユｏｆ　Ａｐｐ
ｌｉｅｄＢａｃｔｅｒｉｏユＯｇ７１９８５．５８．４
３７−４４８　）に記載されている。株１３５−８４の
バイオアッセイは殺虫活性がビニリス・ブラシカニおよ
びヘリオチス・ビレセンスに対しては失われたが、しか
し、マメストラ・ブラシカニ、ガレリア・メロネラ、ヘ
リオチス・アルミゲラおよびスポドプテラ・リトラリス
においては保持されたこと７示した（表１）。

この細菌株のガレリア・メロネラに対する活性はバージ
ニス（Ｂｕｒｇｅａ、　Ｈ，Ｄ、　）　（１９７６年）
〔ｉｎｔｏｍｏユｏｇｉａ　ＩＬｘｐｅｒｉｍｅｎｔａ
ｌｉｓ　　ａｔ　　ＡｐｐＨｃａｔｅ　１９　　。

２１７−２２２　］の方法を用いて行った。

ヘリオチス・アルミゲラ、ヘリオチス・ビレセンス、マ
メストラ・ブラシカニおよびスボドブテラ・リットラリ
スに対する細菌株の活性は、幼虫が飼育された人工の寒
天−ペース食餌に対して一連の濃度の細菌を添加するこ
とにより行った。使用された培地はペイｙ　（Ｐａｙｎ
ｅ、　０．０．　）　（１９８１年）　　（Ｊｏｕｒｎ
ａユ　ｏｆ　　Ｉｎｖｅｒｔｅ’ｂｒａｔｅ　　Ｐａｔ
ｈｏユｏｇｙ　３８　．７１−７７〕により記載されて
いる。

ビニリス・ブラシカニに対してはダビット（Ｄａｖｉｄ
、　Ｗ、Ａ、０．　）およびガーディナー（Ｇａｒｄｉ
ｎｅｒ。

ＲｏＯｌＯ，）　（１９６５年）　（Ｎａｔｕｒｅ、　
Ｌｏｎｄｏｎ　２０７、Ｎｏ。

４９９９、ｐｐ　８８２−８８３　）の単一合成食餌を
使用した。

バイオアッセイに使用した全ての幼虫は生後６日目のも
のであった。死亡耶は、温度を２５℃に保って６日後に
記録された。

幾つかの鱗翅類害虫に対する株１３５−８４の殺昆虫活
性を表１に示す。

例２−株１９１−　Ａ２の調製 １９１−　Ａ２の記号で示される第二の突然変異株は野
性種Ｈ−セロタイプｋｕｒＳｔａｋｉ株ＨＤ１９１　（
テキサス州、ブラウンズビル、米国農務省線昆虫研究室
、Ｈ，Ｔ、ダルマージ博士より入手）から得られクス番
号３θ−４９）のカタログにおいて利用可能なものとし
て掲載されている。

株ＨＤ１９１を栄養寒天（培地の組成：　Ｌａｂ−Ｌｓ
ｍｃ。

Ｐｏｗｄｅｒ　（Ｌ　−２９）　１．０　ｇ／ｌ、酵母
エキス（Ｌ−２０）２・Ｏｇ／ｌ、ペプトン（Ｌ−３７
）　５．０　ｇ／ｌ、塩化ナトリウム５．０ｇ／ｌ、寒
天Ｎｏ、３１５．０　ｇ／ｌ）の表面上に条痕接種し、
４２℃で４８時間インキュベートした。インキュベージ
１ン後プレートヲ約８倍の倍高において解剖顕微鏡の下
に検査した。多くの小さな隆起領域即ち乳頭状突起が条
痕内に散在して見られ、非−胞子形成コロニーヲ示した
。

これらを突つき出し栄養寒天上に再条痕接種し、３０℃
で４８時間インキュベートした。得られた生育物は１９
１−　Ａ２と命名された安定な胞子形成不能突然変異株
の単一コロニーとしての単離な可能にした。株１９１−
　Ａ２はＮＤＴＯに受託番号Ｎ０ＴＯ１１８２３として
寄託された（寄託日　１９８４年９月７日〕。

親株および突然変異株の両者のプラスミドプロフィール
をアガロースゲル電気泳動（図面参照）により分析した
際に両者間に何等の差異も検出されなかった。これは殺
昆虫活性に対するプラスミドプロフィールは胞子形成親
株ＨＤ１９１　　のそれとおそらく同一であること即ち
ヘリオテス・アルミゲラ、ヘリオチス・ビレセンスおよ
びビニリス・ブラシカニに対する殺昆虫活性を有ｊるこ
とを示した（表１）。

例３−株ＧＣ　９１の調製 ゴンザレス（ＧＣｎｚａｌｅｚ、　Ｊ、Ｍ、Ｊｒ、　）
　、ブラウン（Ｂｒｏｗｎ、　Ｂ、Ｊ、　）およびカー
ルドア　（０ａｒｌｔｏｎ。

Ｂ、Ｃ０）　（１９８２年）　（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ
　Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、Ｏ８Ａ’Ｖｏｗ　７９１）Ｉｌ　
６９５１−５５１　Ｋより報告された接合様プラスミド
転移系を次の変更を加えて用いて突然変異株１９１−　
Ａ２について、どのプラスミドが毒素生成を担うもので
あるかを決定する試験を行った。

供与体１９１−ム２およびバチルス・スリンギエンシス
株ＨＤ１に由来する非結晶産生（ａｃｒｙｓ　−ｔａｌ
ｉｆｅｒｏｕｓ　）突然変異体である受容住棟を別々に
、脳心臓圧入寒天（０ｘｏｉｄ　）プレート上に生育し
た〔ｇ／ｌで表わした成分：仔つシ脳注入物固形分１２
．５、　ウシ心臓注入物固形分５．０、グロテアーゼペ
プトｙ　（０ｘｏｉｃｌ　Ｌ　４６　）　１０．０　、
塩化ナトリウム５．０１デキストロース２．０、無水リ
ン酸ナトリウム２．５および寒天Ｎｏ、３１ｓ、ｏ　〕
ｏ　３θ℃で１６時間インキュベーション後、各棟から
のループ一杯の細胞を脳心臓注入寒天グレートの表面上
で混ぜ合せ更に３０℃で２４時間インキエベートした。

得られた生育物を次いで栄養寒天プレー）　（０ｘｏｉ
ｄ　）上に条痕接種し、３（１℃において４８時間イン
キュベートして受容体に胞子形成させた。栄養寒天プレ
ートからのループ一杯の生育物を次いで１０１ｎｌの無
菌蒸留水中に懸濁させ６０℃で１５分間加熱して胞子形
成不能供与体１９１−ム２′ｌｋ：殺した（胞子形成受
容体は無傷である）。供与体１９１−ム２の耐熱性内生
胞子を生成するだめの転換は栄養寒天プレート上での生
育後、１０’個の生きた細胞中１よりも大の頻度で生じ
た。

加熱後、培養液を稀釈し、栄養寒天上にプレート培養し
て個々のコロニーヲ得た。３０℃で４８時間インキュベ
ーション後コロニーを顕微鏡検査してデルタ−エンドト
キシン結晶合成の存在を探した。

四つの別々の実験における結晶を生成するコロニーのパ
ーセントは５９係、４１％、２２％および３１壬であっ
た。結晶生成を再取得する受容体からのプラスミドプロ
フィールは結晶合成に供与体１９１−Ａ２からの５０Ｍ
ｄプラスミドの転移が伴うことが示された。２０個の個
々のコロニーを調べたところ全てが５９Ｍ（ｌプラスミ
ドを含有した。１９１−　Ａ２から５０Ｍ（ｌプラスミ
ドを受取る受容体は供与体野性種親ＨＤ１９１の完全な
生物学的活性を示した。結果を表２に示す。このデータ
から５ＱＭｄプラスミドが１９１−　Ａ２におけろデル
タ−エンドトキシン結晶合成をコードしたものと結論付
けられた。

上記プラスミド転移および耐熱性胞子形成受容体の選択
の方法を用いて１９１−Ａ２からの５９　Ｍ（ｌプラス
ミドを突然変異体１３５−８４に移した。先ず、５Ｑ　
Ｍ（ｌプラスミドを含有する可能性のある個々の１３５
−８４のコロニーを選択するためにコロニーを顕微鏡で
検査して増大した大きさの結晶を生成するものを選択し
た。二つの別々の実験におけろプラスミド転移後の増大
した大きさの結晶を生成す、ｂ　１３５−８４コロニー
のパーセントは２９％および２１係であった。その様な
コロニーのプラスミドプロフィールは分析された全ての
（１０）大結晶形成コロニーにおいて５０　Ｍ（ｌプラ
スミドの存在を示した。

５Ｑ　Ｍ＋１プラスミドの取込みの結果、副胞子結晶の
大きさの増大および同時に突然変異体１３５−８４の殺
昆虫活性の変更および増大が生じたものと結論付けられ
た。

組合された殺昆虫活性は害虫種スポドブテラ・リトラリ
ス、ヘリオチス・アルミゲラ、ヘリオチス・ビレセンス
、マメストラ・ブラシカニ、ガレリア・メロネラおよび
ビニリス・ブラシカニに関して改良された。

更に５Ｑ　Ｍｄプラスミドを含有する突然変異体１３５
−８４は突然変異体ＧＣ　９１と命名された。

株ＧＣ９１およびバチルス・スリンギエンシスのその他
の株の殺昆虫活性は表１に示される。

また野性種、突然変異体供与体、突然変異体受容体およ
び組換え株ｏｃ　ｇｌのプラスミドプロフィールを示す
添付図面が参照される。括弧０）は染色体ＤＮＡの位置
を示す。

表　　　　１ 餐肋１は鱗翅類幼虫の抑制のための殆んどの市販のバチ
ルス・スリンギエンシス製品に使用される細菌株である
。それは例えば米国農務省およびパスツール研究所（詳
細は例１に示される）から入手可能である。

峠細菌はダにメージ等（ｋｌｒｎａｇｅ　ａｔ　ａｌ　
）　（１９７０年〕［Ｊｏｕｒｎａｌ　　ｏｆ　　Ｉｎ
ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ　　ＰａｔｈｏユＯｇ７１５、１
５表　　　　２ 注）　表２の結果は表１で説明したのと同様の方法を用
いて得られた。ＨＤ１９１に対するバイオアッセイ結果
は細菌が異った日に培養され、バイオアッセイされたの
で９１のものとは若干異る。

バチルス・スリンギエンシスＧＣ　９１の固体活性成合
例　（パーセントは全て重量基準である）１、湿潤性粉
末　　　　　　　　ａ）　　ｂ）　　ｃ）バチルス・ス
リンギエンシスＧＯ９１２５％　５０％　７５％リグノ
スルホン酸ナトリウム　　　　５％　５％　−ラウリル
硫酸ナトリウム　　　　　　３％　−５係キサイド）　
　　　　　　　　　　　　　　　−２％　　−高分散ケ
イ酸　　　　　　　　　５％　１０％　１０％カオリン
　　　　　　　　　　　６２％　２フ憾　−バチルス・
スリンギエンシスＧＣ！　９１をアジユバントと共に十
分に混合し、混合物を適当なミル内で十分に摩砕し、水
で稀釈して所望の濃度の懸濁液を与えることのできる湿
潤性粉末を得た。

バチルス・スリンギエンシスＧＣ　９１　　　　１０　
％オクチルフェノールポリエチレングリコールエーテル
（４〜５モルのエチレンオｎイド）　　　　３％ドデシ
ルベンゼンスルホン酸カルシウム　　　　３％シクロヘ
キサノン　　　　　　　　　　３０％キシレン混合物　
　　　　　　　　　５０％任意の濃度のエマルジ１ンを
この濃縮液から稀釈することにより得ることができる。

３、粉剤　　　　　　ａ）　　ｂ） バチルス・スリンギエンシスＧＯ９１５％　　　８％タ
ルク　　　　　　　　　　　　　９５％　　−力オリン
　　　　　　　　　　　　　−　　９２％直ぐに使用で
きる粉剤は活性成分な担体と混合し、混合物を適当なミ
ル内で摩砕することにより得られる。

４、押出し顆粒剤 バチルス・スリンギエンシスＧＯ９１１０％リグノスル
ホン酸ナトリウム　　　　　　　　２％カルボキシメチ
ルセルロース　　　　　　　　１％カオリン　　　　　
　　　　　　　　　８７１活性成分或いは組合せをアジ
ユバントと混合および摩砕し、混合物を引続き水で湿潤
する。この混合物を押出し、顆粒化し、次いで空気流中
で乾燥させる。

５、被覆顆粒剤 バチルス健スリンギエンシスＧＯ９１３％ホリエチレン
クリコール（モルＸ量２００　）　　　３％カオリン　
　　　　　　　　　　　　　９４％微細に摩砕された活
性成分或いは組合せをミキサー中においてポリエチレン
グリコールで湿潤されたカオリンに均一に適用する。こ
の様にして非粉末状被覆顆粒が得られる。

バチルス・スリンギエンシスａｃ　９１　　　　４０９
６エチレングリコール　　　　　　　　　　　　１０％
ノニルフェノールポリエテレングリコールエーテル（１
５％へのエチレンオキサイド）　　　　　　６係リグノ
ス２ホン酸ナトリウム　　　　　　　　１０％カルボキ
シメチルセルロース　　　　　　　　１％３７％ホルム
アルデヒド水溶液　　　　　　　　０．２％水　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　３２％微細に摩
砕された活性成分或いは組合せをアジユバントと緊密に
混合し、任意の濃度の懸濁液が水で稀釈して得ることの
できる懸濁液濃縮物を得る。

本発明において開示されるバチルス・スリンギエンシス
の新親株即ちＧＯ９１，１３５−８４および１９１−ム
２は全て特別に述べた例外の他はこの属および種の典型
的な形態学的および生化学的特性を有する。異った変種
はＨ，ドバルジャック（Ｈ，ｄ。

Ｂａｒｊａｃ　）　（１９８１年〕〔害虫および植物病
の微生物学的抑制（Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　Ｃｏｎｔｒｏ
ｌ　ｏｆ　Ｐｅ５ｔｓ　ａｎｄＰユａｎｔ　Ｄｉｓｅａ
ｓｅｓ　）の第３章、１９７０−１９８０、ＨｏＤ、　
Ｂｕｒｇｅｓ　ｌｉ　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、
１９８１年〕に記載されるＲ−セロタイピング（鞭毛或
いはＲ−抗原に基づく）により区別することができる。

下記のＮ０ＴＣ１１８２１（−ＧＣ　９１　）、Ｎ０Ｔ
Ｏ１１８２２（−１３５−８４）、およびＮＣＴＣ１１
８２３　（−１９１−ム２）の生化学的特性の試験を行
った： ダラム反応　　　　　　　　＋　　　＋　　＋運動性（
懸垂落下）＋＋士 気体条件　　　　　　　　好気性好気性好気性栄養寒天
上成長 ２２℃　＋＋十 ３７℃　　　　　　＋　　＋　　＋ ４２℃　　　　　　＋　　＋　　千 ６０℃　　　　　　−ＮＴ　　　＋ コープー（Ｋｏθｅｒ）クエン酸塩　　　　−−−イン
ドール　　　　　　　　−−− メチルレッド　　　　　　　＋　　＋　　＋フォーゲス
ープロスカウアー　　　　　＋＋＋硫化水素生成　　　
　　　　−−− 硝酸塩還元　　　　　　　　＋　　＋　　＋亜硝酸塩還
元　　　　　　　−−− カタラーゼ　　　　　　　　＋　　＋　　＋ゼラチン液
化　　　　　　　十　　ＮＴ　　　土酸生成ニ ゲルコース　　　　　　＋　　　＋　　　＋アラビノー
ス　　　　　−−− キシロース　　　　　　ＮＴ　　　　　　ＮＴラクトー
ス　　　　　　　−　　　−−スクロース　　　　　　
−　　　−＋ マルトース　　　　　　＋　　千　　十マンニトール　
　　　　−−− ズルシトール　　　　　−−− ンルピトール　　　　　−　　　−− サリシン　　　　　　　＋　　＋　　＋デンプンの加水
分解：＋＋十 尿素　　　　＋　＋　＋ カゼイン　　　　　　　＋　　　＋　　　＋ニスキュリ
ン　　　　　ＮＴ　　　　　　　ＮＴヒユー（Ｈｕｇｈ
　）およびレイフソン（Ｌｅｉｆｅｏｎ）反応　　　　
　　ＮＩＬ　　　ＮＩＬ　　　Ｎ工Ｌオキシダーゼ　　
　　　　　＋　　＋　　＋グルコネート　　　　　　　
−　　ＮＴ　　　−マロネート　　　　　　　　　−　
　　−−フェニルアラニン　　　　　−　　ＮＴ　　　
−デカルボキシラーゼ： アルギニン　　　　　　＋　　　＋　　＋リジン　　　
　　　　　　−　　　−−オルニチン　　　　　　−　
　　−− （ＮＴ＝試験されず）

【図面の簡単な説明】

添付図面は野性種、突然変異体供与体、突然変異受容体
および組換え株ＧＣ　９１のプラスミドプロフィールな
示す。 出願人代理人　　　佐　藤　−雄 図面の浄書（− 〔二二コ　〔＝＝コ ５０Ｍｄ＋　　−− ■■■１−一■ １容に変更なし］ 口＝＝コ　ロ＝＝コ　【：＝コ 一一＝］ ニー４−８．８Ｍｄ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、その試料が受託番号ＮＣＴＣ１１８２１で寄託され
   ているバチルス・スリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
   ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）ＧＣ９１株或いは鱗翅類
   害虫に対して殺昆虫活性を有するその誘導体或いは突然
   変異体。 ２、単一株中に二つの各出発株の異った殺昆虫特性を組
   み合わせて導入することにより改良された殺昆虫特性を
   有するバチルス・スリンギエンシスの株を製造する方法
   において、（ａ）第一の出発株から結晶蛋白質の部分を
   形成するポリペプチドをコードするプラスミドの損失に
   より特徴付けられる突然変異体を選択し、および （ｂ）第二の出発株或いはその突然変異体からデルタ−
   エンドトキシン結晶合成をコードするプラスミドを工程
   （ａ）において生成された突然変異体中に移して所望の
   新規株を生成する ことを特徴とする方法。 ３、第二出発株のそれと実質的に同一のプラスミドプロ
   フィールを有する第二出発株の胞子形成不能突然変異体
   からプラスミドが移される、特許請求の範囲第２項記載
   の方法。 ４、第一出発株が株ＨＤ１３５であり、工程（ａ）にお
   いて生成される突然変異体が株１３５−Ｓ４（ＮＣＴＣ
   １１８２２）である、特許請求の範囲第２項記載の方法
   。 ５、第二出発株がＨＤ１９１であり胞子形成不能突然変
   異体が株１９１−Ａ２（ＮＣＴＣ１１８２３）である、
   特許請求の範囲第３項記載の方法。 ６、バチルス、スリンギエンシス株１９１−Ａ２（ＮＣ
   ＴＣ１１８２３）からバチルス・スリンギエンシス株１
   ３５−Ｓ４（ＮＣＴＣ１１８２２）中に株１９１−Ａ２
   においてデルタ−エンドトキシン結晶合成をコードする
   プラスミドを移すことを特徴とするバチルス・スリンギ
   エンシスＧＣ９１（ＮＣＴＣ１１８２１）の製造方法。 ７、株１９１−Ａ２および１３５−Ｓ４が共に混合培養
   液中で生育されて接合様プラスミド転移を行い、混合培
   養液を稀釈し、固体培地に移して単一コロニーを得、株
   ＧＣ９１のコロニーを増大した大きさの副胞子結晶によ
   り選択し、および株ＧＣ９１をそれから培養する、特許
   請求の範囲第６項記載の方法。 ８、バチルス・スリンギエンシス株ＧＣ９１（ＮＣＴＣ
   １１８２１）或いはその誘導体または突然変異体、或い
   は特許請求の範囲第２項記載の方法により製造された株
   に由来する殺昆虫物質。 ９、胞子−結晶複合体である、特許請求の範囲第８項記
   載の殺昆虫物質。 １０、バチルス・スリンギエンシス株ＧＣ９１（ＮＣＴ
   Ｃ１１８２１）或いはその誘導体または突然変異体或い
   は特許請求の範囲第８項記載の殺昆虫物質を担体、稀釈
   剤、界面活性剤或いは適用促進アジュバントと共に含ん
   でなることを特徴とする殺昆虫剤組成物。 １１、肥料、微量養分供与体、植物成長調剤、殺草剤、
   殺虫剤、殺真菌剤、殺細菌剤、殺線虫剤および軟体動物
   駆除剤、およびそれらの混合物から選択される生物学的
   に活性な化合物を更に含む、特許請求の範囲第１０項記
   載の組成物。 １２、０．１〜９９重量％のバチルス・スリンギエンシ
   スＧＣ９１或いはその誘導体または突然変異体或いは殺
   昆虫物質、１〜９９．９重量％の固体または液体アジュ
   バント、および０〜２５重量％の界面活性剤を含んでな
   る、特許請求の範囲第１０項記載の組成物。１３、害虫
   或いはそれらの環境に殺昆虫的に有効量のバチルス・ス
   リンギエンシス株ＧＣ９１（ＮＣＴＣ１１８２１）或い
   はその誘導体または突然変異体、或いは特許請求の範囲
   第８項記載の殺昆虫物質或いは該株、誘導体、突然変異
   体或いは物質を含む組成物を適用することを特徴とする
   鱗翅類害虫の対抗方法。