KR20240004559A

KR20240004559A - 올리고 핵산 화합물의 제조 방법

Info

Publication number: KR20240004559A
Application number: KR1020237039847A
Authority: KR
Inventors: 고키 가토; 마사키 노가타; 슌스케 도다; 스케 도다
Original assignee: 니뽄 신야쿠 가부시키가이샤
Priority date: 2021-04-28
Filing date: 2022-04-27
Publication date: 2024-01-11
Also published as: CN117279926A; EP4332111A1; JPWO2022230954A1; CA3218264A1; WO2022230954A1; AU2022266379A1

Abstract

본 발명은, (1) 식 [A-1]의 화합물과, 식 [B-1]의 화합물을, (1) 염기의 존재하, 축합제로 처리하고, 그리고 (2) 산화제 및 유기 아민으로 처리하여, 식 [C-1]의 화합물을 얻는 것을 특징으로 하는, 올리고 핵산 화합물의 제조 방법에 관한 것이다(식 중, 각 기호는 명세서에서 정의한 바와 같다).

Description

올리고 핵산 화합물의 제조 방법

본 발명은, 신규한 올리고 핵산 화합물의 제조 방법에 관한 것이다.

올리고 핵산 화합물의 제조 방법으로서, 고상(固相)법과 액상(液相)법이 알려져 있다. 고상법은 고상 담체에 담지(擔持)된 기질과 반응 시약을 포함하는 용액을 접촉시키면서 핵산을 신장(伸長)하는 불균일계의 반응 방법이다. 고상법에서는 필터가 부착된 반응 용기를 사용하여, 용기 내에서 반응을 행하는, 이른바 배치법이 사용된다(예를 들면, 비특허문헌 1, 특허문헌 1을 참조.). 또, 핵산 자동 합성기(예를 들면, DNA, RNA 신세사이저)와 같이, 고상 담체를 컬럼에 넣고, 그 컬럼에 반응 시약을 포함하는 용액을 흘림으로써 반응시키는 의사적(擬似的)인 플로우 합성법도 알려져 있다.

한편, 액상법은 기질과 반응 시약의 양쪽을 포함하는 용액 중에서 반응시킴으로써 핵산을 신장하는 균일계의 반응 방법이다. 액상법도 용기 내에서 반응을 행하는 배치법이 사용된다(예를 들면, 특허문헌 2, 특허문헌 3을 참조.).

고상법, 액상법, 배치법, 의사적인 플로우 합성법 중 어느 경우라도, 올리고 핵산 화합물의 화학적 합성법에서는, 핵산 화합물 상의 산소 원자 또는 아미노기의 보호기를 제거하는 「탈(脫)보호」 반응과, 탈보호되어 반응할 수 있게 된 산소 원자 또는 질소 원자와 인 원자와의 결합 형성을 행하는 「축합」 반응을 몇 번이나 반복함으로써 핵산을 신장해 간다.

그중에서도, 인 원자와 산소 원자 또는 질소 원자와의 결합 형성을 행하는 「축합」 반응에 있어서의 반응 효율이나 반응 속도를 제어하는 것은 올리고 핵산 화합물의 제조에 있어서 매우 중요하고, 이 축합 반응의 조건은 올리고 핵산 화합물의 제조 기간에 큰 임팩트를 주는 요소가 된다.

고상법은 고상 담체와 용액의 불균일계의 반응이기 때문에, 고상 담체에 의한 입체 장해가 원인으로 축합 반응의 반응성이 떨어지는 것이 알려져 있다. 고상 담체로는, 일반적으로 폴리스티렌 수지가 사용되는데, 반응 중에는 사용하는 반응 용매에 의해 팽윤하여, 건조 상태보다 그 체적이 커진다. 그 팽윤도는 반응 용매에 의존한다.

따라서, 고상법에 있어서의 축합 반응의 반응 효율 및 반응 속도는 사용하는 반응 용매에 의존한다. 특히, 폴리스티렌 수지는 올리고 핵산 화합물의 합성에 일반적으로 사용되는 아세토니트릴과 같은 극성 용매에서는, 팽윤도가 그만큼 크지 않아, 고상법에 있어서 극성 용매를 사용한다는 것은, 축합 반응의 반응 효율 및 반응 속도를 향상한다는 측면에서 바람직하다고는 할 수 없다.

한편, 균일계의 반응 방법으로는, 액상법과 소수성기 결합 뉴클레오시드나 의사 고상 보호 뉴클레오시드 등을 이용한 합성법이 알려져 있다.

액상법은, 기질과 반응 시약의 양쪽을 포함하는 용액 중에서 반응시키는 균일계의 반응 방법이며, 고상법과 비교하여 반응 효율은 높고, 반응 속도는 빠르지만, 불순물이 되는 반응 시약이나 반응 용매를 제거하기 위해, 컬럼 정제 등이 필요해진다.

소수성기 결합 뉴클레오시드나 의사 고상 보호 뉴클레오시드 등을 이용한 합성법은, 액상법과 마찬가지로, 균일계로 반응할 수 있기 때문에, 고상법과 비교하여 반응 효율은 높고, 반응 속도는 빠르다. 또한, 반응 후, 반응 혼합물로부터 목적으로 하는 화합물을 석출시킴으로써 불필요한 반응 시약이나 반응 용매를 제거할 수 있다(예를 들면, 특허문헌 4를 참조.).

국제공개공보 제1991/09033 A1 국제공개공보 제2014/077292 A1 국제공개공보 제2013/122236 A1 일본국 특허 제5548852호 공보 국제공개공보 제2016/060135 A1

Acc.Chem.Res., Vol. 24, 278-284, 1991

본 발명의 목적은, 올리고 핵산 화합물의 제조 기간을 단축할 수 있는, 신규한 제조 방법을 제공하는 것에 있다.

본 발명자들은, 올리고 핵산 화합물의 축합 반응에 있어서, H-포스포네이트를 형성함으로써, 효율 좋게 축합 반응이 진행되는 것을 찾아내어, 본 발명을 완성했다.

즉, 본 발명은, 이하에 관한 것이다.

＜1＞

식 [A-1]:

[화학식 1]

[식 중,

B^P는, 각각 동일 또는 다르고, 보호되어 있어도 되는 핵산 염기이며;

n은, 1∼50의 정수, 바람직하게는 1∼30의 정수, 더욱 바람직하게는 1∼25의 정수, 가장 바람직하게는 1∼15의 정수이고;

W는, 각각 동일 또는 다르고, 산소 원자 또는 유황 원자이며; 그리고

X는, 각각 동일 또는 다르고, 중성 조건하에서 탈리 가능한 기로 치환되어 있는 수산기, 1,1,3,3-테트라(C_1-6 알킬)구아니딜, C_1-6 알콕시, 디(C_1-6 알킬)아미노, 모노(염기성 조건하에서 탈리 가능한 기로 치환되어 있는 아미노-C_1-6 알킬)아미노, 디(염기성 조건하에서 탈리 가능한 기로 치환되어 있는 아미노-C_1-6 알킬)아미노, 또는 일반식 [2]:

[화학식 2]

(식 중,

＊는, P와의 결합 위치이며;

a는, 0∼2의 정수이고;

E는, CH₂, CH-A¹ 또는 N-A²이며;

A¹은, C_1-6 알킬, 염기성 조건하에서 제거 가능한 기로 치환되어 있는 모노(C_1-6 알킬)아미노-C_1-6 알킬, 디(C_1-6 알킬)아미노-C_1-6 알킬, 트리(C_1-6 알킬)암모니오-C_1-6 알킬, 염기성 조건하에서 제거 가능한 기로 치환되어 있는 아미노, 염기성 조건하에서 제거 가능한 기로 치환되어 있는 모노(C_1-6 알킬)아미노, 디(C_1-6 알킬)아미노, 트리(C_1-6 알킬)암모니오, 염기성 조건하에서 제거 가능한 기로 치환되어 있는 아미디노로 치환되어 있는 아미노, 또는 일반식 [3]:

[화학식 3]

(식 중,

＊는, E와의 결합 위치이고;

b는, 0∼2의 정수이며;

c는, 0 또는 1이고;

R¹¹은, C_1-6 알킬이며; 그리고

M은, CH₂, 산소 원자, 유황 원자 또는 N-(염기성 조건하에서 제거 가능한 기)이다)으로 표시되는 치환기이고; 그리고

A²는, C_1-6 알킬, 염기성 조건하에서 제거 가능한 기로 치환되어 있는 모노(C_1-6 알킬)아미노-C_1-6 알킬, 디(C_1-6 알킬)아미노-C_1-6 알킬, 트리(C_1-6 알킬)암모니오-C_1-6 알킬, 염기성 조건하에서 제거 가능한 기, 아릴 또는 헤테로아릴이다)

로 표시되는 치환기이며;

G는,

(1) 규소 치환기,

(2) 경우에 따라 치환되어 있는 C_1-18 알킬-카르보닐, 경우에 따라 치환되어 있는 C_1-18 알콕시-카르보닐, 장쇄(長鎖) 알킬-카르보닐, 또는 장쇄 알콕시-카르보닐,

(3) 1개∼5개의, 장쇄 알킬옥시 및/또는 장쇄 알케닐옥시로 치환되어 있는 벤조일, 또는

(4) 일반식 [7]:

[화학식 4]

(식 중,

＊는, T와의 결합 위치이고;

Z는,

(1) (유기 용매에 용해하는 가용성 폴리머)-옥시,

(2) (유기 용매에 용해하는 가용성 폴리머)-아미노,

(3) 장쇄 알킬옥시, 1개∼5개의 장쇄 알킬옥시 및/또는 장쇄 알케닐옥시로 치환되어 있는 벤조일, 또는 1개∼5개의 장쇄 알킬옥시 및/또는 장쇄 알케닐옥시로 치환되어 있는 벤질,

(4) 고상 담체, 또는

(5) 다음의 일반식 [8A]∼[8N]:

[화학식 5]

(식 중,

＊는, L과의 결합 위치이며;

j는, 0∼4의 정수이고;

k는, 0∼5의 정수이며;

R^8a는, 수소 원자 또는 C_1-6 알킬이고;

R^8b는, 각각 동일 또는 다르고, 장쇄 알킬이며;

R^8c는, 각각 동일 또는 다르고, 일반식 [9A]∼[9E]:

[화학식 6]

(식 중,

＊는, 결합 위치이고; 및

R⁹는 장쇄 알킬 및/또는 장쇄 알케닐이다)

로 표시되는 치환기이며;

R^8d는, 각각 동일 또는 다르고, 수소 원자, 할로겐, 1개∼13개의 할로겐으로 치환되어 있어도 되는 장쇄 알킬 또는 1개∼13개의 할로겐으로 치환되어 있어도 되는 장쇄 알킬옥시이며;

R^8e는

(1) 장쇄 알킬,

(2) 장쇄 알킬-카르보닐, 또는

(3) 1개∼5개의, 장쇄 알킬옥시 및/또는 장쇄 알케닐옥시로 치환되어 있는 벤조일이고; 그리고

R^8f는,

(1) 장쇄 알킬,

(2) 장쇄 알킬-카르보닐, 또는

(3) 장쇄 알케닐-카르보닐이다)

로 표시되는 치환기이며; 그리고

L은, 일반식 [10]:

[화학식 7]

(식 중,

＊는, Z와의 결합 위치이고;

＊＊는, T와의 결합 위치이며; 그리고

L¹은, 치환되어 있어도 되는 C_2-10 알킬렌 또는 치환되어 있어도 되는 C_6-10 아릴렌이다), 또는 일반식 [10-1]:

[화학식 8]

(식 중,

＊는, Z와의 결합 위치이고;

＊＊는, T와의 결합 위치이며; 그리고

L¹은, 치환되어 있어도 되는 C_1-10 알킬렌 또는 치환되어 있어도 되는 C_6-10 아릴렌이다)

로 표시되는 치환기이다)

로 표시되는 치환기이고; 그리고

T는, 단(單)결합 또는 일반식 [11]:

[화학식 9]

(식 중,

X 및 W는, 상기와 동의(同義)이며;

＊는, 상기 일반식 [4a]∼[4d]의 **O, *O 또는 *N과의 결합 위치이고;

＊＊는, G와의 결합 위치이며; 그리고

q는, 0∼10의 정수이다)

로 표시되는 치환기이지만, G가 규소 치환기인 경우, T는 단결합이다]의 화합물과, 식 [B-1]:

[화학식 10]

[식 중,

B^P, W, 및 X는, 상기와 동의이고, 그리고

p는, 1∼50의 정수, 바람직하게는 1∼30의 정수, 더욱 바람직하게는 1∼25의 정수, 가장 바람직하게는 1∼15의 정수이며;

L'는, OH, -O^-N^＋H(지방족 아민), -O^-N^＋H(환상(環狀) 아민), 또는 -O^-N^＋H(방향족 아민)이고, 바람직하게는 -O^-N^＋H(C_1-6 알킬)₃ 또는 -O^-N^＋H(환상 아민)이며, -O^-N^＋H(C_1-6 알킬)₃은, 예를 들면 -O^-N^＋H(CH₂CH₃)₃이고, -O^-N^＋H(환상 아민)은, 예를 들면 -O^-(HDBU)^＋이며;

Q¹은, 산성 조건하에서 제거 가능한 기이다]

의 화합물을,

(1) 염기의 존재하, 인 시약 1, 인 시약 2, 및 오늄 시약으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 축합제로 처리하고, 그리고

(2) 산화제 및 유기 아민으로 처리하여

식 [C-1]:

[화학식 11]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, G, T, n, 및 p는, 상기와 동의이다]

의 화합물을 얻는 방법.

＜2＞

추가로, 식 [C-1]:

[화학식 12]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, G, T, n, 및 p는, 상기와 동의이다]

의 화합물을, 산, 또는 산 및 스캐빈저로 처리하여,

식 [C-0-1]:

[화학식 13]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, G, T, n, 및 p는, 상기와 동의이다]

의 화합물로 하고, 그리고

해당 식 [C-0-1]의 화합물과, 식 [B-0-1]:

[화학식 14]

[식 중, B^P, Q¹, W, 및 L'는, 상기와 동의이다]

의 화합물을,

(1) 염기의 존재하, 인 시약 1, 인 시약 2, 및 오늄 시약으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 축합제로 처리하며, 그리고 이어서

(2) 산화제 및 유기 아민으로 처리하여,

식 [C-1-1]:

[화학식 15]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, G, T, n, 및 p는, 상기와 동의이다]

의 화합물을 얻는 것을 포함하는, ＜1＞에 기재한 방법.

＜3＞

추가로, 식 [C-1]:

[화학식 16]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, G, T, n, 및 p는, 상기와 동의이다]

의 화합물을, 수산기의 보호기의 제거 조건으로 처리하여,

식 [C-0-2]:

[화학식 17]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, n, 및 p는, 상기와 동의이다]

의 화합물을 얻고,

(1) 식 [P-1]:

[화학식 18]

[식 중, W는, 산소 원자 또는 유황 원자이며, 그리고 R¹ 및 R²는, 각각 동일 또는 다르고, H, 경우에 따라 치환되어 있는 C_1-6 알킬, 경우에 따라 치환되어 있는 페닐, PH(＝O)-OH로 이루어지는 군으로부터 선택된다]

의 화합물 및 염기로 처리하며, 그리고 이어서

(2) 가수분해 용액으로 처리하여,

식 [C-0-2-1]:

[화학식 19]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, L', n, 및 p는, 상기와 동의이다]

의 화합물을 얻는 것을 포함하는, ＜1＞에 기재한 방법.

＜4＞

추가로, 식 [C-0-2-1]:

[화학식 20]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, L', n, 및 p는, 상기와 동의이다]

의 화합물과, 식 [A-0-1]:

[화학식 21]

[식 중, B^P, G, 및 T는, 상기와 동의이다]

의 화합물을,

(1) 염기의 존재하, 인 시약 1, 인 시약 2, 및 오늄 시약으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 축합제로 처리하고, 그리고 이어서

(2) 산화제 및 유기 아민으로 처리하여,

식 [C-1-2]:

[화학식 22]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, G, T, n, 및 p는, 상기와 동의이다]

의 화합물을 얻는 것을 포함하는, ＜3＞에 기재한 방법.

＜5＞

추가로, 식 [B-1-0]:

[화학식 23]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, 및 p는, 상기와 동의이다]

의 화합물을,

(1) 식 [P-1]:

[화학식 24]

[식 중, W, R¹, 및 R²는, 상기와 동의이다]

의 화합물 및 염기로 처리하고, 그리고 이어서

(2) 가수분해 용액으로 처리하여,

식 [B-1]:

[화학식 25]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, L', 및 p는, 상기와 동의이다]

의 화합물을 얻는 것을 포함하는, ＜1＞에 기재한 방법.

＜6＞

추가로, 식 [A-0]:

[화학식 26]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, G, T, 및 n은, 상기와 동의이다]

의 화합물을, 산, 또는 산 및 스캐빈저로 처리하여,

식 [A-1]:

[화학식 27]

[식 중, B^P, W, X, G, T, 및 n은, 상기와 동의이다]

의 화합물을 얻는 것을 포함하는, ＜1＞에 기재한 방법.

＜7＞

G가, 하기의 식:

[식 중, *는 T와의 결합 위치를 나타낸다.]

으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;

T가 단결합인,

＜1＞∼＜6＞ 중 어느 것에 기재한 방법.

＜8＞

식 [B-1] 중,

B^P가, 각각 동일 또는 다르고, 보호되어 있어도 되는 핵산 염기이며,

Q¹이, 트리틸 또는 디메톡시트리틸이고,

L'가, -O^-N^＋H(CH₂CH₃)₃, 또는 -O^-(HDBU)^＋이며,

W가, O이고, 그리고

p가, 2∼20의 정수, 바람직하게는 2∼15의 정수이며, 더욱 바람직하게는 2∼10의 정수인,

＜1＞에 기재한 식 [B-1]의 화합물.

＜9＞

((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-((((2S,6R)-6-(6-벤즈아미드-9H-푸린-9-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트(즉, H-포스포네이트-PMO[C^Bz-A^Bz]-ON),

트리에틸암모늄((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-((((2S,6R)-6-(6-벤즈아미드-9H-푸린-9-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트(즉, H-포스포네이트-PMO[C^Bz-A^Bz]-ON(트리에틸아민염)),

((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-((((2S,6R)-4-((((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-((디메틸아미노)(((2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)포스포릴)모르폴린-2-일)(디메틸아미노)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일)메톡시)포스포릴)-6-(6-벤즈아미드-9H-푸린-9-일)모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트(즉, H-포스포네이트-PMO[C^Bz-A^Bz-T-C^Bz-T]-ON),

트리에틸암모늄((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-((((2S,6R)-4-((((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-((디메틸아미노)(((2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)포스포릴)모르폴린-2-일)(디메틸아미노)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일)메톡시)포스포릴)-6-(6-벤즈아미드-9H-푸린-9-일)모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트(즉, H-포스포네이트-PMO[C^Bz-A^Bz-T-C^Bz-T]-ON(트리에틸아민염)),

((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-((((2S,6R)-4-((((2S,6R)-6-(6-벤즈아미드-9H-푸린-9-일)-4-((((2S,6R)-6-(6-벤즈아미드-9H-푸린-9-일)-4-((((2S,6R)-6-((2-시아노에톡시)-2-(2-페녹시아세트아미드)-9H-푸린-9-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)-6-((2-시아노에톡시)-2-(2-페녹시아세트아미드)-9H-푸린-9-일)모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트(즉, H-포스포네이트-PMO[C^Bz-G^CE,Pac-A^Bz-A^Bz-G^{CE, Pac}]-ON),

트리에틸암모늄((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-((((2S,6R)-4-((((2S,6R)-6-(6-벤즈아미드-9H-푸린-9-일)-4-((((2S,6R)-6-(6-벤즈아미드-9H-푸린-9-일)-4-((((2S,6R)-6-((2-시아노에톡시)-2-(2-페녹시아세트아미드)-9H-푸린-9-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)-6-((2-시아노에톡시)-2-(2-페녹시아세트아미드)-9H-푸린-9-일)모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트(즉, H-포스포네이트-PMO[C^Bz-G^CE,Pac-A^Bz-A^Bz-G^CE,Pac]-ON(트리에틸아민염)),

((2S,6R)-4-((((2S,6R)-4-((((2S,6R)-4-((((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)-6-((2-시아노에톡시)-2-(2-페녹시아세트아미드)-9H-푸린-9-일)모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)-6-((2-시아노에톡시)-2-(2-페녹시아세트아미드)-9H-푸린-9-일)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트(즉, H-포스포네이트-PMO[G^CE,Pac-G^CE,Pac-T-T-C^Bz]-ON),

트리에틸암모늄((2S,6R)-4-((((2S,6R)-4-((((2S,6R)-4-((((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)-6-((2-시아노에톡시)-2-(2-페녹시아세트아미드)-9H-푸린-9-일)모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)-6-((2-시아노에톡시)-2-(2-페녹시아세트아미드)-9H-푸린-9-일)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트(즉, H-포스포네이트-PMO[G^CE,Pac-G^CE,Pac-T-T-C^Bz]-ON(트리에틸아민염)),

((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-((((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트(즉, H-포스포네이트-PMO[C^Bz-C^Bz]-ON),

트리에틸암모늄((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-((((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트(즉, H-포스포네이트-PMO[C^Bz-C^Bz]-ON(트리에틸아민염)),

((2S,6R)-4-((디메틸아미노)(((2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트(즉, H-포스포네이트-PMO[T-T]-ON),

트리에틸암모늄(2S,6R)-4-((디메틸아미노)(((2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트(즉, H-포스포네이트-PMO[T-T]-ON(트리에틸아민염)),

((2S,6R)-4-((디메틸아미노)(((2S,6R)-4-((디메틸아미노)(((2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)메톡시)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트(즉, H-포스포네이트-PMO[T-T-T]-ON),

트리에틸암모늄((2S,6R)-4-((디메틸아미노)(((2S,6R)-4-((디메틸아미노)(((2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)메톡시)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트(즉, H-포스포네이트-PMO[T-T-T]-ON(트리에틸아민염)),

((2S,6R)-4-((디메틸아미노)(((2S,6R)-4-((디메틸아미노)(((2S,6R)-4-((디메틸아미노)((((2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)메톡시)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)메톡시)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트(즉, H-포스포네이트-PMO[T-T-T-T]-ON),

트리에틸암모늄((2S,6R)-4-((디메틸아미노)(((2S,6R)-4-((디메틸아미노)(((2S,6R)-4-((디메틸아미노)((((2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)메톡시)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)메톡시)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트(즉, H-포스포네이트-PMO[T-T-T-T]-ON(트리에틸아민염)),

1,8-디아자비시클로(5.4.0)-7-운데세늄((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-((((2S,6R)-4-((((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-((디메틸아미노)(((2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)포스포릴)모르폴린-2-일)(디메틸아미노)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일)메톡시)포스포릴)-6-(6-벤즈아미드-9H-푸린-9-일)모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트(즉, H-포스포네이트-PMO[C^Bz-A^Bz-T-C^Bz-T]-ON(DBU 염)), 및

＜10＞

식 [B-0-1] 중,

B^P가, 보호되어 있어도 되는 핵산 염기이고,

Q¹이, 트리틸 또는 디메톡시트리틸이며,

L'가, -O^-(HDBU)^＋이고, 그리고

W가, O인,

＜2＞에 기재한 식 [B-0-1]의 화합물.

＜11＞

1,8-디아자비시클로(5.4.0)-7-운데세늄((2S,6R)-6-(6-벤즈아미드-9H-푸린-9-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메틸포스포네이트,

1,8-디아자비시클로(5.4.0)-7-운데세늄((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메틸포스포네이트,

1,8-디아자비시클로(5.4.0)-7-운데세늄((2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메틸포스포네이트,

1,8-디아자비시클로(5.4.0)-7-운데세늄((2S,6R)-6-((2-시아노에톡시)-2-(2-페녹시아세트아미드)-9H-푸린-9-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메틸포스포네이트, 및

1,8-디아자비시클로(5.4.0)-7-운데세늄((2S,6R)-6-(2-(2-페닐아세트아미드)-6-((4-(피발로일옥시)벤질)옥시)-9H-푸린-9-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메틸포스포네이트로 이루어지는 군으로부터 선택되는, ＜10＞에 기재한 식 [B-0-1]의 화합물.

올리고 핵산 화합물은, 2개∼복수개의 뉴클레오시드 유닛이 인 결합을 개재하여 늘어선 구조를 갖는 화합물이다. 올리고 핵산 화합물을 제조하기 위해서는, 몇 번이나 축합 반응을 행하여, 인접하는 뉴클레오시드 유닛간에서 인 결합을 형성할 필요가 있다.

본 발명에 의하면, 효율적으로 인 결합을 형성할 수 있기 때문에, 결과적으로 올리고 핵산 화합물의 제조 시간을 짧게 하는 것을 기대할 수 있다.

이하에, 본 발명의 상세를 설명한다.

용어의 설명

「핵산 염기」는, 예를 들면, 아데닌, 구아닌, 히포크산틴, 시토신, 티민, 우라실 또는 그들의 수식(修飾) 염기를 들 수 있다. 이러한 수식 염기로는, 예를 들면, 슈도우라실, 3-메틸우라실, 디히드로우라실, 5-알킬시토신(예를 들면, 5-메틸시토신), 5-알킬우라실(예를 들면, 5-에틸우라실), 5-할로우라실(5-브로모우라실), 6-아자피리미딘, 6-알킬피리미딘(6-메틸우라실), 2-티오우라실, 4-티오우라실, 4-아세틸시토신, 5-(카르복시히드록시메틸)우라실, 5'-카르복시메틸아미노메틸-2-티오우라실, 5-카르복시메틸아미노메틸우라실, 1-메틸아데닌, 1-메틸히포크산틴, 2,2-디메틸구아닌, 3-메틸시토신, 2-메틸아데닌, 2-메틸구아닌, N⁶-메틸아데닌, 7-메틸구아닌, 5-메톡시아미노메틸-2-티오우라실, 5-메틸아미노메틸우라실, 5-메틸카르보닐메틸우라실, 5-메틸옥시우라실, 5-메틸-2-티오우라실, 2-메틸티오-N⁶-이소펜테닐아데닌, 우라실-5-옥시초산(酢酸), 2-티오시토신, 푸린, 2,6-디아미노푸린, 2-아미노푸린, 이소구아닌, 인돌, 이미다졸, 크산틴을 들 수 있지만, 이들로 한정되는 것은 아니다. 단, B^P에 관한 핵산 염기의 아미노기 또는 수산기는 보호되어 있어도 된다.

「보호되어 있어도 되는 핵산 염기」는, 보호되어 있지 않은 「핵산 염기」 및 보호되어 있는 「핵산 염기」의 양쪽을 포함하고, 예를 들면, 아미노기 및/또는 수산기가 보호되어 있지 않은 또는 보호되어 있는, 아데닌, 구아닌, 히포크산틴, 시토신, 티민, 우라실 등을 들 수 있다.

아미노기의 보호기로는, 핵산의 보호기로서 사용되는 것이면 특별히 제한되지 않고, 구체적으로는, 예를 들면, 벤조일, 4-메톡시벤조일, 아세틸, 프로피오닐, 부티릴, 이소부티릴, 페닐아세틸, 페녹시아세틸, 4-tert-부틸페녹시아세틸, 4-이소프로필페녹시아세틸, (디메틸아미노)메틸렌을 들 수 있다. 아미노기의 보호기로는, 벤조일, 아세틸, 페닐아세틸, 4-tert-부틸페녹시아세틸이 바람직하다. 수산기의 보호기로는, 예를 들면, 2-시아노에틸, 4-니트로페네틸, 페닐술포닐에틸, 메틸술포닐에틸, 트리메틸실릴에틸, 치환 가능한 임의의 위치에서 1∼5개의 전자 흡인성기로 치환되어 있어도 되는 페닐, 디페닐카르바모일, 디메틸카르바모일, 디에틸카르바모일, 메틸페닐카르바모일, 1-피롤리디닐카르바모일, 모르폴리노카르바모일, 4-(tert-부틸카르복시)벤질, 4-[(디메틸아미노)카르복시]벤질, 4-(페닐카르복시)벤질을 들 수 있다(예를 들면, 국제공개공보 제2009/064471 A1을 참조.). 수산기의 보호기로는, 2-시아노에틸, 4-니트로페네틸, 4-(tert-부틸카르복시)벤질이 바람직하다. 구아닌의 6번 위치 수산기의 보호기는, 2-시아노에틸이 바람직하다.

일 실시형태에 있어서, 보호되어 있는 핵산 염기로는, 예를 들면 이하에 나타내는 것을 들 수 있다.

[화학식 28]

[식 중, Pg는 보호기를 나타낸다].

보다 구체적인 보호되어 있는 핵산 염기의 양태로는, 아미노기가 벤조일로 보호된 아데닌(A^Bz), 아미노기가 벤조일로 보호된 시토신(C^Bz), 수산기가 2-시아노에틸로 보호되고, 그리고 아미노기가 페녹시아세틸로 보호된 구아닌(G^CE,Pac) 등을 들 수 있지만, 이들로 한정되지 않는다.

「장쇄 알킬」은, 예를 들면, 직쇄상 또는 분지쇄상의 탄소수 10∼300의 알킬을 나타내고, 바람직하게는 직쇄상 또는 분지쇄상의 탄소수 10∼100의 알킬을 나타내며, 보다 바람직하게는 직쇄상 또는 분지쇄상의 탄소수 10∼30의 알킬을 나타낸다.

「장쇄 알킬-카르보닐」 및 「장쇄 알킬옥시」의 「장쇄 알킬」 부분은, 상기 「장쇄 알킬」과 동일한 것을 들 수 있다.

「장쇄 알케닐」은, 예를 들면, 직쇄상 또는 분지쇄상의 탄소수 10∼300의 알케닐을 나타내고, 바람직하게는 직쇄상 또는 분지쇄상의 탄소수 10∼100의 알케닐을 나타내며, 보다 바람직하게는 직쇄상 또는 분지쇄상의 탄소수 10∼30의 알케닐을 나타낸다.

「장쇄 알케닐옥시」 및 「장쇄 알케닐-카르보닐」의 「장쇄 알케닐」 부분은, 상기 「장쇄 알케닐」과 동일한 것을 들 수 있다.

「할로겐」은, 예를 들면, 불소 원자, 염소 원자, 브롬 원자, 요오드 원자를 들 수 있다.

「5∼6원의 포화 환상 아미노」로는, 예를 들면, 고리 구성 원자로서, O 또는 S를 1개 갖고 있어도 되는, N을 1개 또는 2개 갖는 5원∼6원의 포화 환상 아미노기, 구체적으로는, 1-피롤리디닐, 1-이미다졸리디닐, 피페리디노, 1-피페라지닐, 1-테트라히드로피리미디닐, 4-모르폴리노, 4-티오모르폴리노, 1-호모피페라지닐, 옥사졸리딘-3-일을 들 수 있다.

「C_1-6 알킬」은, 직쇄상 또는 분지쇄상의 탄소수 1∼6의 알킬을 나타내고, 구체적으로는, 예를 들면, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, n-헥실을 들 수 있다.

「C_1-6 알콕시」는, 직쇄상 또는 분지쇄상의 탄소수 1∼6의 알콕시를 나타내고, 구체적으로는, 예를 들면, 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 이소프로폭시, n-부톡시, 이소부톡시, sec-부톡시, tert-부톡시, n-펜틸옥시, n-헥실옥시를 들 수 있다.

「C_1-6 알콕시-C_1-6 알킬」의 「C_1-6 알콕시」 부분은, 상기 「C_1-6 알콕시」와 동일한 것을 들 수 있다.

「디(C_1-6 알킬)아미노」, 모노(염기성 조건하에서 제거 가능한 기로 치환되어 있는 아미노-C_1-6 알킬)아미노, 디(염기성 조건하에서 제거 가능한 기로 치환되어 있는 아미노-C_1-6 알킬)아미노, 모노(C_1-6 알킬)아미노-C_1-6 알킬, 디(C_1-6 알킬)아미노-C_1-6 알킬, 트리(C_1-6 알킬)암모니오-C_1-6 알킬, 모노(C_1-6 알킬)아미노, 디(C_1-6 알킬)아미노, 트리(C_1-6 알킬)암모니오, 모노(아미노-C_1-6 알킬)아미노 및 디(아미노-C_1-6 알킬)아미노의 「C_1-6 알킬」 부분은, 상기 「C_1-6 알킬」과 동일한 것을 들 수 있다.

「C_2-10 알킬렌」은, 직쇄상 또는 분지쇄상의 탄소수 2∼10의 알킬로부터 다른 구성 탄소 원자에 결합하고 있는 하나의 수소 원자를 제거함으로써 생성되는 2가의 기이고, 예를 들면, 에틸렌기, 프로필렌기, 이소프로필렌기, 부틸렌기, 펜틸렌기, 헥실렌기를 들 수 있다. 이러한 「알킬렌」은, 치환 가능한 임의의 위치에서, 1개∼12개의 할로겐으로 치환되어 있어도 된다. L¹에 관한 「알킬렌」으로는, 에틸렌이 특히 바람직하다.

「C_6-10 아릴렌」은, 탄소수 6∼10의 단환식 또는 다환식의 방향족 탄화수소로부터 2개의 다른 고리 구성 탄소 원자에 결합하고 있는 2개의 수소 원자를 제거함으로써 생성되는 2가의 기이고, 예를 들면, 페닐렌, 나프틸렌을 들 수 있다. 이러한 「아릴렌」은, 치환 가능한 임의의 위치에서, 1개∼6개의 할로겐으로 치환되어 있어도 된다. L¹에 관한 「아릴렌」으로는, 페닐렌이 특히 바람직하다.

「1,1,3,3-테트라(C_1-6 알킬)구아니딜」, 「C_1-6 알콕시-C_1-6 알킬」, 「디(C_1-6 알킬)아미노」, 「디(C_1-6 알킬)아미노-C_1-6 알킬」, 「트리(C_1-6 알킬)암모니오」, 「트리(C_1-6 알킬)암모니오-C_1-6 알킬」, 「염기성 조건하에서 탈리 가능한 기로 치환되어 있는 모노(C_1-6 알킬)아미노」, 「염기성 조건하에서 탈리 가능한 기로 치환되어 있는 모노(C_1-6 알킬)아미노-C_1-6 알킬」, 「모노(염기성 조건하에서 탈리 가능한 기로 치환되어 있는 아미노-C_1-6 알킬)아미노」, 「디(염기성 조건하에서 탈리 가능한 기로 치환되어 있는 아미노-C_1-6 알킬)아미노」의 「C_1-6 알킬」 부분은, 상기 「C_1-6 알킬」과 동일한 것을 들 수 있다.

「산성 조건하에서 제거 가능한 기」로는, 예를 들면, 트리틸, 모노메톡시트리틸, tert-부틸디메틸실릴, 디메톡시트리틸을 들 수 있다.

「염기성 조건하에서 제거 가능한 기」로는, 예를 들면, 트리플루오로아세틸을 들 수 있다.

「중성 조건하에서 제거 가능한 기」로는, 예를 들면, 테트라부틸암모늄 플루오리드 또는 삼불화 수소·트리에틸아민염을 작용시킴으로써 탈리시킬 수 있는 기를 들 수 있고, 예를 들면, 2-시아노에톡시메톡시, 2-시아노에톡시-2-에톡시, tert-부틸디메틸실릴을 들 수 있다.

「규소 치환기」로는, 예를 들면, 트리페닐실릴, 디이소프로필페닐실릴, tert-부틸디메틸실릴, tert-부틸디페닐실릴을 들 수 있다.

「아릴」은, 예를 들면, 페닐을 들 수 있다.

「헤테로아릴」은, 예를 들면, 피리딜, 피리미딜, 피리다질, 피라지닐, 티에닐, 푸라닐을 들 수 있다.

「고상 담체」로는, 일반적으로, 핵산, 펩티드, 펩티드 핵산, 당 등의 고상 합성에 사용할 수 있는 것이면, 특별히 문제없이 사용할 수 있고, 예를 들면, 정공(定孔) 유리(controlled pore glass; CPG), 옥살릴화-정공 유리(예를 들면, Nucleic Acids Research, Vol. 19, 1527(1991)를 참조.), TentaGel 지지체-아미노폴리에틸렌 글리콜 유도체화 지지체(예를 들면, Tetrahedron Letters, Vol. 34, 3373(1993)을 참조.), Poros-폴리스티렌/디비닐벤젠의 코폴리머, 폴리스티렌계 수지, 폴리아크릴아미드계 수지를 들 수 있다.

「유기 용매에 용해하는 가용성 폴리머」로는, 예를 들면, 가교가 없는 스티렌 폴리머나 폴리에틸렌 글리콜 유도체를 들 수 있다.

「(유기 용매에 용해하는 가용성 폴리머)-옥시」 및 「(유기 용매에 용해하는 가용성 폴리머)-아미노」의 「유기 용매에 용해하는 가용성 폴리머」 부분은, 상기 「유기 용매에 용해하는 가용성 폴리머」와 동일한 것을 들 수 있다.

「가교가 없는 스티렌 폴리머」로는, 예를 들면, 디비닐벤젠으로 가교되어 있지 않은 폴리스티렌으로 폴리에틸렌 글리콜 등의 스페이서를 갖는 유도체(TentaGel 시리즈, ArgoGel 시리즈)를 들 수 있다.

「폴리에틸렌 글리콜 유도체」로는, 예를 들면, 분자량 100∼40000의 폴리에틸렌 글리콜로 치환기를 갖는 유도체 등(SUNBRIGHT(등록상표) 시리즈)을 들 수 있다.

＜신장 반응＞

본 발명의 일 양태는, 식 [A-1]의 화합물과, 식 [B-1]의 화합물을 반응시켜, 식 [C-1]의 화합물을 얻는 방법:

[화학식 29]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, G, T, n, L' 및 p는, 상기와 동의이다]

이고, 그리고

공정 (1): 축합 및

공정 (2): 산화적 아미노화를 포함할 수 있다.

본 발명의 일 양태는,

식 [A-1]:

[화학식 30]

[식 중, B^P, W, X, G, T, n, 및 p는, 상기와 동의이다]

의 화합물과, 식 [B-1]:

[화학식 31]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, L', 및 p는, 상기와 동의이다]

의 화합물을,

공정 (1): 염기의 존재하, 인 시약 1, 인 시약 2, 및 오늄 시약으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 축합제로 처리하고, 그리고

공정 (2): 산화제 및 유기 아민으로 처리하여,

식 [C-1]:

[화학식 32]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, G, T, n, 및 p는, 상기와 동의이다]

을 얻는 방법이다.

＜공정 (1): 축합＞

＜공정 (1)의 축합제＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 축합제는, 인 시약 1, 인 시약 2, 및 오늄 시약으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나를 사용할 수 있다.

＜공정 (1)의 축합제의 구체예＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 축합제는, 인 시약 1, 인 시약 2, 및 오늄 시약으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나를 사용할 수 있고, 예를 들면, 클로로 인산 디페닐, 클로로 인산 비스(2,6-디메틸페닐), 비스(2-옥소-3-옥사졸리디닐)포스핀산 클로리드, PyBrop(브로모트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트), PyBOP(헥사플루오로 인산(벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄), PyClop(클로로트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트), PyAOP((7-아자벤조트리아졸-1-일옥시)트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트), PyNTP(3-니트로-1,2,4-트리아졸-1-일-트리스(피롤리딘-1-일)포스포늄 헥사플루오로포스페이트), HATU(1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아조로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트), COMU((1-시아노-2-에톡시-2-옥소에틸리덴아미노옥시)디메틸아미노-모르폴리노-카르베늄 헥사플루오로포스페이트), HBTU(1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-벤조트리아졸륨 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트), BOI(2-(벤조트리아졸-1-일)옥시-1,3-디메틸이미다졸리디늄 헥사플루오로포스페이트), DMINTP(1-(1',3'-디메틸-1H-이미다졸-2'-일)-3-니트로-1,2,4-트리아졸 헥사플루오로포스페이트)이며, 바람직하게는, 클로로 인산 디페닐, 클로로 인산 비스(2,6-디메틸페닐), PyBrop, BOI이고, 더욱 바람직하게는, 클로로 인산 디페닐, 클로로 인산 비스(2,6-디메틸페닐), PyBrop이다.

본 발명의 일 양태에 있어서, 인 시약 1은,

식 [P-2]:

[화학식 33]

[식 중,

W는, 산소 원자 또는 유황 원자이며;

R¹ 및 R²는, 동일 또는 다르고, 경우에 따라 치환되어 있는 방향족환 -O- 및 경우에 따라 치환되어 있는 복소환으로 이루어지는 군으로부터 선택되며, 바람직하게는 페닐, 2,6-디메틸페닐 및, 2-옥소옥사졸리디드로 이루어지는 군으로부터 선택된다]

의 화합물이고, 바람직하게는 클로로 인산 디페닐, 클로로 인산 비스(2,6-디메틸페닐), 및 비스(2-옥소-3-옥사졸리디닐)포스핀산 클로리드로부터 선택되는 하나이며, 더욱 바람직하게는 클로로 인산 디페닐, 클로로 인산 비스(2,6-디메틸페닐)이다.

본 발명의 일 양태에 있어서, 인 시약 2는,

식 [P-3]:

[화학식 34]

[식 중,

R¹, R², R³, 및 R⁴는, 동일 또는 다르고, 할로겐, C_1-6 알킬아미노, 디(C_1-6 알킬)아미노, 경우에 따라 치환되어 있는 환상 C_1-6 아미노, 경우에 따라 치환되어 있는 방향족 아미노, 경우에 따라 치환되어 있는 방향환, 및 경우에 따라 치환되어 있는 복소환 -O-로 이루어지는 군으로부터 선택되거나, 또는

R¹ 및 R²는, 그들이 결합하는 인 원자와 함께, 경우에 따라 치환되어 있는 환 구조를 형성하며, 그리고 R³ 및 R⁴는, 동일 또는 다르고, 할로겐, C_1-6 알킬아미노, 디(C_1-6 알킬)아미노, 경우에 따라 치환되어 있는 환상 C_1-6 아미노, 경우에 따라 치환되어 있는 방향족 아미노, 경우에 따라 치환되어 있는 방향환, 및 경우에 따라 치환되어 있는 복소환 -O-로 이루어지는 군으로부터 선택되며,

바람직하게는, R¹, R², 및 R³은, 경우에 따라 치환되어 있는 환상 C_1-6 아미노이고, 그리고 R⁴는, 할로겐, 경우에 따라 치환되어 있는 방향족 아미노, 또는 경우에 따라 치환되어 있는 복소환 -O-이며,

더욱 바람직하게는, R¹, R², 및 R³은, 피롤리딜이고, 그리고 R⁴는, 클로로, 브로모, 벤조트리아졸-1-일옥시, 7-아자벤조트리아졸-1-일옥시, 또는 3-니트로-1,2,4-트리아졸-1-일이다]의 화합물이고, 바람직하게는, PyBrop, PyBOP, PyClop, PyAOP, PyNTP로부터 선택되는 하나이며, 더욱 바람직하게는 PyBrop이다.

본 발명의 일 양태에 있어서, 오늄 시약은,

식 [O]:

[화학식 35]

[식 중,

R¹, R², R³, 및 R⁴는, 동일 또는 다르고, 할로겐, C_1-6 알킬아미노, 디(C_1-6 알킬)아미노, 경우에 따라 치환되어 있는 환상 C_1-6 아미노, 경우에 따라 치환되어 있는 방향족 아미노, 경우에 따라 치환되어 있는 방향환, 경우에 따라 치환되어 있는 복소환 -O-, 및 경우에 따라 치환되어 있는 C_1-6 알킬리덴아미노옥시로 이루어지는 군으로부터 선택되거나, 또는

R¹ 및 R²는, 그들이 결합하는 탄소 원자와 함께, 환 구조를 형성하며, 그리고 R³은, 할로겐, C_1-6 알킬아미노, 디(C_1-6 알킬)아미노, 경우에 따라 치환되어 있는 환상 C_1-6 아미노, 경우에 따라 치환되어 있는 방향족 아미노, 경우에 따라 치환되어 있는 방향환, 및 경우에 따라 치환되어 있는 복소환 -O- 로 이루어지는 군으로부터 선택되고,

바람직하게는, R¹ 및 R²는, 동일 또는 다르고, 디(C_1-6 알킬)아미노 및 경우에 따라 치환되어 있는 환상 C_1-6 아미노로 이루어지는 군으로부터 선택되며, 그리고 R³은, 경우에 따라 치환되어 있는 복소환 -O-, 또는 경우에 따라 치환되어 있는 C_1-6 알킬리덴아미노옥시이고, 또는,

R¹ 및 R²는, 그들이 결합하는 탄소 원자와 함께, 환 구조를 형성하며, 그리고 경우에 따라 치환되어 있는 방향족 아미노이고,

더욱 바람직하게는, R¹ 및 R²는, 디메틸아미노이며, R³은, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일) 또는 O-(벤조트리아졸-1-일)이고, 또는

R¹은, 디메틸아미노이며, R²는, 모르폴리노이고, 그리고 R³은, 1-시아노-2-에톡시-2-옥소에틸리덴아미노옥시이다]의 화합물이고, 바람직하게는, HATU, COMU, HBTU, BOI, DMINTP로부터 선택되는 하나이며, 더욱 바람직하게는 BOI이다.

＜공정 (1)의 염기＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 염기는, 1급 아민, 2급 아민, 3급 아민, 환상 아민, 및 방향족 아민으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나이고, 예를 들면, 디이소프로필에틸아민, 트리에틸아민, N-에틸모르폴린, 피리딘, 루티딘, 콜리딘, N-메틸이미다졸, N,N-디메틸이미다졸 또는 1-벤질이미다졸이며, 바람직하게는, 디이소프로필에틸아민, 피리딘, N-메틸이미다졸, 또는 1-벤질이미다졸이고, 더욱 바람직하게는, 피리딘 또는 N-메틸이미다졸이다.

＜공정 (1)의 축합제와 염기의 조합＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 축합제와 상기 염기의 조합은, 특별히 한정되지 않지만, 예를 들면, 클로로 인산 디페닐과 피리딘, 클로로 인산 디페닐과 N-메틸이미다졸, 클로로 인산 비스(2,6-디메틸페닐)과 피리딘, 클로로 인산 비스(2,6-디메틸페닐)과 N-메틸이미다졸, PyBroP와 피리딘, PyBroP와 N-메틸이미다졸, PyBroP와 디이소프로필에틸아민, 및 BOI와 디이소프로필에틸아민이고, 바람직하게는, 클로로 인산 디페닐과 피리딘, 클로로 인산 디페닐과 N-메틸이미다졸, 클로로 인산 비스(2,6-디메틸페닐)과 피리딘, 클로로 인산 비스(2,6-디메틸페닐)과 N-메틸이미다졸, PyBroP와 피리딘, PyBroP와 N-메틸이미다졸, PyBroP와 디이소프로필에틸아민, 더욱 바람직하게는, 클로로 인산 디페닐과 피리딘, 클로로 인산 디페닐과 N-메틸이미다졸, 클로로 인산 비스(2,6-디메틸페닐)과 N-메틸이미다졸, PyBroP와 N-메틸이미다졸, PyBroP와 디이소프로필에틸아민이다.

＜공정 (1)의 축합제의 사용량＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 축합제를, 상기 식 [B-1]의 화합물에 대해, 예를 들면, 0.5∼100 몰 당량, 바람직하게는, 1∼50 몰 당량, 더욱 바람직하게는, 2∼20 몰 당량의 범위 내에서 사용할 수 있다.

＜공정 (1)의 염기의 사용량＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 염기를, 상기 식 [A-1]의 화합물에 대해, 예를 들면, 1∼100 몰 당량, 바람직하게는, 2∼50 몰 당량, 더욱 바람직하게는, 2∼40 몰 당량의 범위 내에서 사용할 수 있다.

＜공정 (1)의 반응 용매＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 공정 (1)에 있어서 사용되는 용매는, 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, 디클로로메탄, 클로로포름, 1,2-디클로로에탄, 테트라히드로푸란, 톨루엔, 아세토니트릴, 초산 에틸로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나를 사용할 수 있다.

＜공정 (1)의 반응 온도＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 공정 (1)의 반응 온도는, 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, -10∼80℃, 바람직하게는, 0∼60℃, 더욱 바람직하게는, 10∼40℃이다.

＜공정 (1)의 반응 시간＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 공정 (1)의 반응 시간은, 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, 1분∼12시간, 바람직하게는, 2분∼4시간, 더욱 바람직하게는, 5분∼2시간이다.

＜(2): 산화적 아미노화＞

＜공정 (2)의 산화제＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 산화제는, 인 원자를 산화할 수 있으면, 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, 요오드, 사염화탄소이고, 바람직하게는, 요오드의 디클로로메탄 용액, 요오드의 클로로포름 용액, 요오드의 테트라히드로푸란 용액이며, 더욱 바람직하게는, 요오드의 테트라히드로푸란 용액이다.

＜공정 (2)의 산화제의 사용량＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 축합제를, 상기 식 [B-1]의 화합물에 대해, 예를 들면, 0.5∼100 몰 당량, 바람직하게는, 1∼50 몰 당량, 더욱 바람직하게는, 2∼10 몰 당량의 범위 내에서 사용할 수 있다.

＜공정 (2)의 유기 아민＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 유기 아민은, 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, 1급 아민, 2급 아민, 3급 아민, 환상 아민, 및 방향족 아민으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나이고, 예를 들면, 디메틸아민, 디이소프로필아민, 피페리딘, 피롤리딘, N-메틸피페라진, 또는 모르폴린이며, 바람직하게는, 디메틸아민, 디이소프로필아민, 피페리딘, 피롤리딘이고, 더욱 바람직하게는, 디메틸아민이다.

＜공정 (2)의 유기 아민의 사용량＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 유기 아민을, 상기 식 [B-1]의 화합물에 대해, 예를 들면, 1∼200 몰 당량, 바람직하게는, 2∼100 몰 당량, 더욱 바람직하게는, 2∼50 몰 당량의 범위 내에서 사용할 수 있다.

＜공정 (2)의 반응 용매＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 공정 (2)에 있어서 사용되는 용매는, 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, 디클로로메탄, 클로로포름, 1,2-디클로로에탄, 테트라히드로푸란, 톨루엔, 아세토니트릴, 초산 에틸로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나를 사용할 수 있다.

＜공정 (2)의 반응 온도＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 공정 (2)의 반응 온도는, 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, -10∼80℃, 바람직하게는, 0∼60℃, 더욱 바람직하게는, 0∼40℃이다.

＜공정 (2)의 반응 시간＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 공정 (1)의 반응 시간은, 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, 1분∼4시간, 바람직하게는 2분∼2시간, 더욱 바람직하게는 2분∼1시간이다.

＜식 [A-1]의 화합물＞

＜식 [A-1]의 화합물의 합성＞

본 발명의 일 양태는, 식 [A-1-0]의 화합물로부터, 식 [A-1]의 화합물을 얻는 방법:

[화학식 36]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, G, T, 및 n은, 상기와 동의인 상기한 바와 같고, 그리고

n은, 1∼50의 정수, 바람직하게는 1∼30의 정수, 더욱 바람직하게는 1∼25의 정수, 가장 바람직하게는 1∼15의 정수이다]을 포함한다.

식 [A-1-0]의 화합물은, 당해 기술 분야에서 공지의 방법을 사용하여 합성해도 된다.

＜식 [B-1]의 화합물＞

본 발명의 일 양태는, p＝1인, 식 [B-1]:

[화학식 37]

의 화합물, 예를 들면, 이하의 표 1에 기재한 화합물을 포함한다.

＜식 [B-1]의 화합물을 얻는 방법＞

본 발명의 일 양태는, 식 [B-1-0]의 화합물로부터, 식 [B-1]의 화합물을 얻는 방법:

[화학식 38]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, L', 및 p는, 상기와 동의이다]

이고, 그리고

공정 (1): 포스포네이트화

공정 (2): 가수분해, 및

경우에 따라 공정 (3): 이온 교환을 포함할 수 있다.

식 [B-1-0]의 화합물은, 당해 기술 분야에서 공지의 방법을 사용하여 합성해도 된다.

p＝1인, 식 [B-1-0]의 화합물의 구체예로는, 예를 들면, 이하의 표 3에 기재한 화합물을 들 수 있다.

＜공정 (1): 포스포네이트화＞

본 발명의 일 양태는,

식 [B-1-0]:

[화학식 39]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, 및 p는, 상기와 동의이다]

의 화합물을,

식 [P-1]:

[화학식 40]

[식 중, W는, 산소 원자 또는 유황 원자이며, 그리고 R¹ 및 R²는, 동일 또는 다르고, H, 경우에 따라 치환되어 있는 C_1-6 알킬, 경우에 따라 치환되어 있는 페닐, PH(＝O)-OH로 이루어지는 군으로부터 선택된다]

의 화합물 및 염기로 처리하여,

식 [B-1'-0]:

[화학식 41]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, R¹, 및 p는, 상기와 동의이다]

의 화합물로 하는 공정을 포함한다.

＜공정 (1)의 포스포닐화 시약＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 식 [P-1]:

[화학식 42]

[식 중, W는, 상기와 같으며, 그리고 R¹ 및 R²는, 동일 또는 다르고, H, 경우에 따라 치환되어 있는 C_1-6 알킬, 경우에 따라 치환되어 있는 페닐, PH(＝O)-OH로 이루어지는 군으로부터 선택되며, 바람직하게는, R¹은, H, 경우에 따라 치환되어 있는 C_1-6 알킬, 또는 경우에 따라 치환되어 있는 페닐이고, R²는, 경우에 따라 치환되어 있는 C_1-6 알킬, 또는 경우에 따라 치환되어 있는 페닐, 또는 PH(＝O)-OH이며, 더욱 바람직하게는 R¹ 및 R²는 페닐이다.]

의 화합물은, 바람직하게는, 아인산 디페닐, 아인산, 비스(1,1,1,3,3,3-헥사플루오로프로판-2-일)포스포네이트, 또는 디포스폰산이고, 더욱 바람직하게는 아인산 디페닐이다.

＜공정 (1)의 염기＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 염기는, 1급 아민, 2급 아민, 3급 아민, 환상 아민, 및 방향족 아민으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나이고, 예를 들면, N-에틸모르폴린, 피리딘, 트리에틸아민, N-메틸이미다졸이며, 바람직하게는 N-에틸모르폴린 또는 피리딘이고, 더욱 바람직하게는 N-에틸모르폴린이다.

＜공정 (1)의 포스포닐화 시약과 염기의 조합＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 포스포닐화 시약과 상기 염기의 조합은, 특별히 한정되지 않지만, 예를 들면, 아인산 디페닐과 N-에틸모르폴린, 아인산 디페닐과 피리딘, 아인산 디페닐과 N-메틸이미다졸, 아인산과 피리딘이고, 바람직하게는 아인산 디페닐과 N-에틸모르폴린, 아인산 디페닐과 피리딘이며, 더욱 바람직하게는 아인산 디페닐과 N-에틸모르폴린이다.

＜공정 (1)의 포스포닐화 시약의 사용량＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 식 [P-1]의 화합물을, 상기 식 [B-1-0]의 화합물에 대해, 예를 들면, 1∼100 몰 당량, 바람직하게는, 1∼40 몰 당량, 더욱 바람직하게는, 2∼20 몰 당량의 범위 내에서 사용할 수 있다.

＜공정 (1)의 염기의 사용량＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 염기를, 상기 식 [B-1-0]의 화합물에 대해, 예를 들면, 1∼100 몰 당량, 바람직하게는, 1∼40 몰 당량, 더욱 바람직하게는 4∼40 몰 당량의 범위 내에서 사용할 수 있다.

＜공정 (1)의 반응 용매＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 공정 (1)에 있어서 사용되는 용매는, 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, 디클로로메탄, 클로로포름, 1,2-디클로로에탄, 테트라히드로푸란, 톨루엔, 초산 에틸로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나를 사용할 수 있다.

＜공정 (1)의 반응 온도＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 공정 (1)의 반응 온도는, 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, -10∼60℃, 바람직하게는 0∼50℃, 더욱 바람직하게는 20∼50℃이다.

＜공정 (1)의 반응 시간＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 공정 (1)의 반응 시간은, 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, 5분∼24시간, 바람직하게는 10분∼18시간, 더욱 바람직하게는 30분∼12시간이다.

＜공정 (2): 가수분해＞

본 발명의 일 양태는,

식 [B-1'-0]:

[화학식 43]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, R¹, 및 p는, 상기와 동의이다]

의 화합물을,

가수분해 용액으로 처리하여,

식 [B-1]:

[화학식 44]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, 및 p는, 상기와 동의이고, L'는, OH, -O^-N^＋H(지방족 아민), -O^-N^＋H(환상 아민), 또는 -O^-N^＋H(방향족 아민)이다]

의 화합물을 얻는 공정을 포함한다.

본 발명의 일 양태에 있어서, 식 [B-1] 중, B^P, Q¹, W, X, 및 p는, 상기와 동의이고, L'가, -O^-N^＋H(지방족 아민), -O^-N^＋H(환상 아민), 또는 -O^-N^＋H(방향족 아민)일 때, 식 [B-1]의 화합물은, 그 지방족 아민염, 환상 아민염, 또는 방향족 아민염이며, 예를 들면, 식 [B-1]의 화합물[여기에서, B^P, Q¹, W, X, 및 p는, 상기와 동의이고, L'가 -OH이다]이, 지방족 아민, 환상 아민, 또는 방향족 아민과 형성하는 염이다.

본 발명의 일 양태에 있어서, 식 [B-1] 중, B^P, Q¹, W, X, 및 p는, 상기와 동의이고, L'는, 바람직하게는 -O^-N^＋H(C_1-6 알킬)₃ 또는 -O^-N^＋H(환상 아민)이며, -O^-N^＋H(C_1-6 알킬)₃은, 예를 들면 -O^-N^＋H(CH₂CH₃)₃이고, -O^-N^＋H(환상 아민)는, 예를 들면 -O^-(HDBU)^＋이며, DBU는, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데카-7-엔이다.

＜공정 (2)의 가수분해 용액＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 가수분해 용액은, 예를 들면, 지방족 아민(1급 아민, 2급 아민, 3급 아민), 환상 아민, 및 방향족 아민으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 염기를 포함하는 수용액이다. 여기에서, 지방족 아민은, 예를 들면, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민 등을 들 수 있고, 환상 아민은, 예를 들면, 디아자비시클로운데센(DBU: 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데카-7-엔), 피페리딘, 피페라진, 모르폴린, N-메틸모르폴린 등을 들 수 있으며, 방향족 아민은, 예를 들면, 피리딘, 이미다졸, N-메틸이미다졸 등을 들 수 있다.

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 가수분해 용액은, 예를 들면, 트리에틸아민, 디아자비시클로운데센, N-메틸이미다졸, N-메틸모르폴린으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 염기를 포함하는 수용액이고, 바람직하게는 상기 염기 및 이산화탄소가 용해된 수용액이며, 더욱 바람직하게는 탄산수소 트리에틸암모늄 수용액 또는 탄산수소 디아자비시클로운데센 수용액이다.

＜공정 (2)의 가수분해 용액의 사용량＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 가수분해 용액은, 상기 식 [B-1'-0]의 화합물에 대해, 예를 들면, 1∼100 몰 당량, 바람직하게는 1∼50 몰 당량, 더욱 바람직하게는 2∼20 몰 당량의 범위 내에서 사용할 수 있다.

＜공정 (2)의 반응 용매＞

＜공정 (2)의 반응 온도＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 공정 (2)의 반응 온도는, 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, -10∼60℃, 바람직하게는 0∼40℃, 더욱 바람직하게는 0∼30℃이다.

＜공정 (2)의 반응 시간＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 공정 (2)의 반응 시간은, 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, 1분∼24시간, 바람직하게는 10분∼12시간, 더욱 바람직하게는 10분∼2시간이다.

＜공정 (3): 이온 교환＞

본 발명의 일 양태는,

식 [B-1'-0]:

[화학식 45]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, R¹, 및 p는, 상기와 동의이다]

의 화합물을, 가수분해 용액으로 처리하고,

식 [B-1']:

[화학식 46]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, 및 p는, 상기와 동의이며, L''는, O^-N^＋H(C_1-6 알킬)₃이다]

의 화합물을, 추가로, 가수분해 용액으로 처리하여,

식 [B-1]:

[화학식 47]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, 및 p는, 상기와 동의이고, L'는, -O^-N^＋H(환상 아민)이며, -O^-N^＋H(환상 아민)는, 예를 들면 -O^-(HDBU)^＋이다]

의 화합물을 얻는 공정을 포함한다.

＜공정 (3)의 가수분해 용액＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 가수분해 용액은, 예를 들면, 환상 아민을 포함하는 수용액이고, 바람직하게는 환상 아민 및 이산화탄소가 용해된 수용액이며, 더욱 바람직하게는 탄산수소 디아자비시클로운데센 수용액이다.

＜공정 (3)의 가수분해 용액의 사용량＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 가수분해 용액은, 상기 식 [B-1'-0]의 화합물 또는 상기 식 [B-1']의 화합물에 대해, 예를 들면, 바람직하게는 1∼50 몰 당량, 더욱 바람직하게는 2∼20 몰 당량의 범위 내에서 사용할 수 있다.

＜공정 (3)의 반응 용매＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 공정 (3)에 있어서 사용되는 용매는, 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, 디클로로메탄, 클로로포름, 1,2-디클로로에탄, 테트라히드로푸란, 톨루엔, 초산 에틸로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나를 사용할 수 있다.

＜공정 (3)의 반응 온도＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 공정 (3)의 반응 온도는, 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, -10∼60℃, 바람직하게는 0∼40℃, 더욱 바람직하게는 0∼30℃이다.

＜공정 (3)의 반응 시간＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 공정 (3)의 반응 시간은, 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, 1분∼24시간, 바람직하게는 10분∼12시간, 더욱 바람직하게는 10분∼2시간이다.

＜화합물 [C-1]의 분자 내의 Q¹의 제거 방법＞

본 발명의 일 양태는, 식 [C-1]의 화합물로부터, Q¹을 제거하여, 식 [C-0-1]의 화합물을 얻는 방법:

[화학식 48]

[식 중, B^P, W, X, G, T, n, 및 p는, 상기와 동의이고, Q¹은 산성 조건하에서 탈리 가능한 기이며, 바람직하게는, 트리틸, 모노메톡시트리틸, 또는 디메톡시트리틸이고, 더욱 바람직하게는, 트리틸 또는 디메톡시트리틸이며, 가장 바람직하게는, 트리틸이다]을 포함한다.

본 발명의 일 양태는, 식 [C-1]:

[화학식 49]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, G, T, n, 및 p는, 상기와 동의이다]

의 화합물을, 산만, 또는 산 및 스캐빈저로 처리하여,

식 [C-0-1]:

[화학식 50]

[식 중, B^P, W, X, G, T, n, 및 p는, 상기와 동의이다]

의 화합물을 얻는 공정을 포함한다.

＜상기의 산: Q¹ 제거 시약＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기의 산은, 당해 기술 분야에 있어서 통상 사용되는 산이면 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, 트리플루오로초산, 시아노피리딘 트리플루오로초산염, 트리에틸아민 트리플루오로초산염, 시아노초산, 트리클로로초산, 인산, 메탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 염산을 들 수 있다. 이들 산을 사용할 때에는, 염기(예를 들면, 트리에틸아민)와 조합해, 산성도를 조정하여 사용해도 된다.

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기의 산은, 예를 들면, 시판의 핵산 합성용의 디블록 용액[예를 들면, 디블로킹 용액-1,3 w/v％ 트리클로로초산/디클로로메탄 용액(후지필름 와코 준야쿠 가부시키가이샤 제조), Deblocking Mix 3％ 디클로로초산/디클로로메탄 용액(글렌 리서치사 제조)]을 사용할 수 있다.

＜상기의 산: Q¹ 제거 시약의 사용량＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 산은, 상기 식 [C-1]의 화합물에 대해, 예를 들면, 1∼500 몰 당량, 바람직하게는 2∼200 몰 당량, 더욱 바람직하게는 2∼50 몰 당량의 범위 내에서 사용할 수 있다.

＜상기의 산: Q¹ 제거 시약의 사용량＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 산은, 반응 용매를 이용하여, 예를 들면, 1％∼80％의 범위 내의 농도가 되도록 희석하는 것이 적당하고, 2％∼50％의 범위 내의 농도가 되도록 희석하는 것이 바람직하다.

＜상기의 Q¹ 제거의 반응 용매＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 ＜Q¹ 제거＞에서 사용되는 용매는, 당해 기술 분야에 있어서 통상 사용되는 용매이면 특별히 한정되지 않고, 용매를 단일로 사용해도 되며, 또 2개 이상의 용매를 혼합하여 사용해도 된다.

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 ＜Q¹ 제거＞에서 사용되는 용매는, 예를 들면, 벤젠, 톨루엔, 크실렌, 메시틸렌 등의 방향족계 용매; 초산 에틸, 초산 이소프로필 등의 에스테르계 용매; 헥산, 펜탄, 헵탄, 옥탄, 노난, 시클로헥산 등의 지방족계 용매, 할로겐계 용매 등을 들 수 있다. 이들 용매는 혼합하여 사용해도 된다.

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 ＜Q¹ 제거＞에서 사용되는 용매는, 예를 들면, 클로로포름, 디클로로메탄, 1,1-디클로로에탄, 1,2-디클로로에탄, 1,1,2-트리클로로에탄, 1,2-디클로로에틸렌, 2,2,2-트리플루오로에탄올 또는 그들의 혼합 용매이고, 바람직하게는, 클로로포름, 디클로로메탄, 및 2,2,2-트리플루오로에탄올로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나이다.

＜상기의 스캐빈저: Q¹ 제거 시약＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 스캐빈저는, 예를 들면, 에탄올, 트리이소프로필실란, 1-히드록시벤조트리아졸, 피롤, 인돌, 2,2,2-트리플루오로에탄올, 메탄올, 아니솔, 메르캅토에탄올, 티오아니솔을 들 수 있고, 바람직하게는, 에탄올, 트리이소프로필실란, 및 2,2,2-트리플루오로에탄올로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나이다.

＜상기의 스캐빈저: Q¹ 제거 시약의 사용량＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 스캐빈저는, 상기 식 [C-1]의 화합물에 대해, 예를 들면, 1∼100 몰 당량, 바람직하게는 1∼50 몰 당량, 더욱 바람직하게는 1∼20 몰 당량의 범위 내에서 사용할 수 있다.

＜상기 Q¹ 제거의 반응 온도＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 ＜Q¹ 제거＞의 반응 온도는, 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, -10∼40℃, 바람직하게는 0∼30℃, 더욱 바람직하게는 0∼25℃이다.

＜상기 Q¹ 제거의 반응 시간＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 ＜Q¹ 제거＞의 반응 시간은, 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, 1분∼24시간, 바람직하게는 10분∼6시간, 더욱 바람직하게는 10분∼2시간이다.

본 발명의 일 양태에 있어서, 화합물 [C-0-1]을 제조하는 방법에 있어서, 화합물 [A-1]과 화합물 [B-1]을 축합 반응에 붙임으로써 제조되는 화합물 [C-1]을 포함하는 반응 혼합물에 산을 포함하는 용액을 첨가함으로써, Q¹의 탈리 반응을 동일계 내에서 본 연속 반응으로서 실시할 수 있다.

본 발명의 일 양태에 있어서, 본 연속 반응에 있어서 사용할 수 있는 용매는, 당해 기술 분야에서 통상 사용되는 용매이면 특별히 한정되지 않고, 용매를 단일로 사용해도 되며, 또 2개 이상의 용매를 혼합하여 사용해도 된다.

본 발명의 일 양태에 있어서, 본 연속 반응에 있어서 사용할 수 있는 용매는, 예를 들면, 벤젠, 톨루엔, 크실렌, 메시틸렌 등의 방향족계 용매; 초산 에틸, 초산 이소프로필 등의 에스테르계 용매; 헥산, 펜탄, 헵탄, 옥탄, 노난, 시클로헥산 등의 지방족계 용매, 할로겐계 용매 등을 들 수 있다. 이들 용매는 혼합하여 사용해도 된다.

본 발명의 일 양태는, 식 [A-0]의 화합물로부터, Q¹을 제거하여, 식 [A-1]의 화합물을 얻는 방법:

[화학식 51]

[식 중, B^P, W, X, G, T, n, 및 p는, 상기와 동의이고, Q¹은 산성 조건하에서 탈리 가능한 기이며, 바람직하게는 트리틸, 모노메톡시트리틸, 또는 디메톡시트리틸이고, 더욱 바람직하게는 트리틸 또는 디메톡시트리틸이며, 가장 바람직하게는 트리틸이다]을 포함한다.

본 발명의 일 양태는, 식 [A-0]:

[화학식 52]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, G, T, 및 n은, 상기와 동의이다]

의 화합물을, 산만, 또는 산 및 스캐빈저로 처리하여,

식 [A-1]:

[화학식 53]

[식 중, B^P, W, X, G, T, 및 n은, 상기와 동의이다]

의 화합물을 얻는 공정을 포함한다.

본 발명의 일 양태에 있어서, 식 [A-0]의 화합물로부터 Q¹을 제거하여, 식 [A-1]의 화합물을 얻는 공정은, 상기 「화합물 [C-1]의 분자 내의 Q¹의 제거 방법」에 기재한 「산」, 「산의 사용량」, 「스캐빈저」, 「스캐빈저의 사용량」, 「반응 용매」, 「반응 시간」, 「반응 온도」와 동일한 것을 사용할 수 있다.

＜수산기의 보호기의 제거＞

본 발명의 일 양태는, 식 [C-1]의 화합물로부터, G-T를 제거하여, 식 [C-0-2]의 화합물을 얻는 방법:

[화학식 54]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, G, T, n, 및 p는, 상기와 동의이다]

을 포함한다.

본 발명의 일 양태는, 식 [C-1]:

[화학식 55]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, 및 p는, 상기와 동의이고,

G는,

(1) 규소 치환기,

(2) 경우에 따라 치환되어 있는 C_1-18 알킬-카르보닐, 경우에 따라 치환되어 있는 C_1-18 알콕시-카르보닐, 장쇄 알킬-카르보닐, 또는 장쇄 알콕시-카르보닐,

(4) 다음의 일반식 [7]:

[화학식 56]

(식 중,

＊는 T와의 결합 위치를 나타내며;

Z는

(1) (유기 용매에 용해하는 가용성 폴리머)-옥시,

(2) (유기 용매에 용해하는 가용성 폴리머)-아미노,

(4) 고상 담체, 또는

(5) 다음의 일반식 [8A]∼[8N]:

[화학식 57]

(식 중,

＊는 L과의 결합 위치를 나타내고;

j는 0∼4의 정수를 나타내며;

k는 0∼5의 정수를 나타내고;

R^8a는 수소 원자 또는 C_1-6 알킬을 나타내며;

R^8b는, 각각 동일 또는 다르고, 장쇄 알킬을 나타내며;

R^8c는, 각각 동일 또는 다르고, 다음 일반식 [9A]∼[9E]:

[화학식 58]

(식 중,

＊는 결합 위치를 나타내고; 및

R⁹는 장쇄 알킬 및/또는 장쇄 알케닐을 나타낸다.)

로 표시되는 치환기를 나타내며;

R^8d는, 각각 동일 또는 다르고, 수소 원자, 할로겐, 1개∼13개의 할로겐으로 치환되어 있어도 되는 장쇄 알킬 또는 1개∼13개의 할로겐으로 치환되어 있어도 되는 장쇄 알킬옥시를 나타내며;

R^8e는

(1) 장쇄 알킬,

(2) 장쇄 알킬-카르보닐 또는

(3) 1개∼5개의, 장쇄 알킬옥시 및/또는 장쇄 알케닐옥시로 치환되어 있는 벤조일을 나타내고; 및

R^8f는,

(1) 장쇄 알킬,

(2) 장쇄 알킬-카르보닐 또는

(3) 장쇄 알케닐-카르보닐을 나타낸다.)

으로 표시되는 치환기를 나타내며; 및

L은 일반식 [10]:

[화학식 59]

(식 중,

＊는 Z와의 결합 위치를 나타내고;

＊＊는 T와의 결합 위치를 나타내며; 및

L¹은 치환되어 있어도 되는 C_2-10 알킬렌 또는 치환되어 있어도 되는 C_6-10 아릴렌을 나타낸다), 또는 일반식 [10-1]:

[화학식 60]

(식 중,

＊는 Z와의 결합 위치를 나타내고;

＊＊는 T와의 결합 위치를 나타내며; 및

L¹은 치환되어 있어도 되는 C_1-10 알킬렌 또는 치환되어 있어도 되는 C_6-10 아릴렌을 나타낸다.)

로 표시되는 치환기를 나타낸다.)

으로 표시되는 치환기를 나타내고;

n은, 1∼50의 정수를 나타내며; 및

T는, 단결합 또는 다음의 일반식 [11]:

[화학식 61]

(식 중,

X 및 W는, 상기와 동의이고;

＊는 상기 일반식 [4a]∼[4d]의 **O, *O 또는 *N과의 결합 위치를 나타내며;

＊＊는 G와의 결합 위치를 나타내고; 및

q는 0∼10의 정수를 나타낸다.)

로 표시되는 치환기를 나타내지만, G가 규소 치환기인 경우, T는 단결합이다.]

의 화합물을, 수산기의 보호기의 제거 조건으로 처리하여,

식 [C-0-2]:

[화학식 62]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, n, 및 p는, 상기와 동의이다]

의 화합물을 얻는 공정을 포함한다.

본 발명의 일 양태에 있어서, 식 [C-1]:

[화학식 63]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, 및 p는, 상기와 동의이고,

G는,

(1) 규소 치환기,

(2) 경우에 따라 치환되어 있는 C_1-18 알킬-카르보닐, 경우에 따라 치환되어 있는 C_1-18 알콕시-카르보닐, 장쇄 알킬-카르보닐, 또는 장쇄 알콕시-카르보닐, 또는

(3) 1개∼5개의, 장쇄 알킬옥시 및/또는 장쇄 알케닐옥시로 치환되어 있는 벤조일이며,

n은, 1∼50의 정수를 나타내고; 및

T는, 단결합이다.]

의 화합물이다.

본 발명의 일 양태에 있어서, 식 [C-1]:

[화학식 64]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, 및 p는, 상기와 동의이고,

G는,

(4) 다음의 일반식 [7]:

[화학식 65]

(식 중,

＊는 T와의 결합 위치를 나타내며;

Z는

(4) 고상 담체, 또는

(5) 다음의 일반식 [8A], [8B], [8E], [8F]:

[화학식 66]

(식 중,

＊는 L과의 결합 위치를 나타내고;

R^8a는 수소 원자 또는 C_1-6 알킬을 나타내며;

R^8b는, 각각 동일 또는 다르고, 장쇄 알킬을 나타내며;

R^8e는

(1) 장쇄 알킬,

(2) 장쇄 알킬-카르보닐 또는

(3) 1개∼5개의, 장쇄 알킬옥시 및/또는 장쇄 알케닐옥시로 치환되어 있는 벤조일을 나타낸다.)

로 표시되는 치환기를 나타내고; 및

L은 일반식 [10]:

[화학식 67]

(식 중,

＊는 Z와의 결합 위치를 나타내며;

＊＊는 T와의 결합 위치를 나타내고; 및

[화학식 68]

(식 중,

＊는 Z와의 결합 위치를 나타내며;

＊＊는 T와의 결합 위치를 나타내고; 및

로 표시되는 치환기를 나타낸다.)

으로 표시되는 치환기를 나타내며;

n은, 1∼50의 정수를 나타내고; 및

T는, 단결합 또는 다음의 일반식 [11]:

[화학식 69]

(식 중,

X 및 W는, 상기와 동의이며;

＊는 상기 일반식 [4a]∼[4d]의 **O, *O 또는 *N과의 결합 위치를 나타내고;

＊＊는 G와의 결합 위치를 나타내며; 및

q는 0∼10의 정수를 나타낸다.)

의 화합물이다.

본 발명의 일 양태에 있어서, 식 [C-1]:

[화학식 70]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, n, 및 p는, 상기와 동의이고,

G는, 하기의 식:

[화학식 71]

[식 중,

＊는 T와의 결합 위치를 나타낸다.]으로 이루어지는 군으로부터 선택되며;

T가 단결합이다.]

의 화합물이다.

＜상기의 수산기의 보호기의 제거 조건＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 수산기의 보호기의 제거 조건은, 상기 식 [C-1]의 화합물 중의 보호기의 종류 또는 성질에 따라 선택할 수 있고, 수산기의 보호기의 제거에 의해, 상기 식 [C-0-2]의 화합물을 얻을 수 있다.

본 발명의 일 양태에 있어서, 수산기의 보호기의 제거 조건은, 예를 들면, 「Green's PROTECTIVE GROUPS in ORGANIC SYNTHESIS, 제4판, 2006년」에 기재되어 있는 수산기의 보호기의 탈보호 조건이다.

본 발명의 일 양태에 있어서, 수산기의 보호기는, G가, (1) 상기 규소 치환기이고, 그리고 T가 단결합인 경우이며, 해당 수산기의 보호기의 제거 조건은, 예를 들면, 테트라부틸암모늄 플루오리드로 처리하는 것이다.

본 발명의 일 양태에 있어서, 수산기의 보호기는, G가,

(2) 경우에 따라 치환되어 있는 C_1-18 알킬-카르보닐, 경우에 따라 치환되어 있는 C_1-18 알콕시-카르보닐, 장쇄 알킬-카르보닐, 또는 장쇄 알콕시-카르보닐이거나, 또는

(3) 1개∼5개의 장쇄 알킬옥시 및/또는 장쇄 알케닐옥시로 치환되어 있는 벤조일이고, 그리고 T가 단결합인 경우이며, 해당 수산기의 보호기의 제거 조건은, 예를 들면, 나트륨 메톡시드로 처리하는 것이다.

본 발명의 일 양태에 있어서, G가,

(4) 상기 일반식 [7]:

[화학식 72]

(식 중, Z, L, 및 *는 상기와 같다)의 치환기이고, 그리고 T가 단결합인 경우, 수산기의 보호기의 제거 조건은, 예를 들면, (1) 암모니아수, (2) 암모니아수/에탄올 또는 (3) 암모니아수와 메틸아민 수용액의 혼합 용액으로 처리하는 것이다.

＜상기의 수산기의 보호기의 제거 조건: 시약의 사용량＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 시약은, 상기 식 [C-1]의 화합물에 대해, 예를 들면, 1∼200 몰 당량, 바람직하게는 2∼100 몰 당량, 더욱 바람직하게는 2∼50 몰 당량의 범위 내에서 사용할 수 있다.

＜상기의 수산기의 보호기의 제거 조건: 반응 용매＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 ＜수산기의 보호기의 제거＞에 있어서 사용되는 용매는, 당해 기술 분야에 있어서 통상 사용되는 용매이면 특별히 한정되지 않고, 용매를 단일로 사용해도 되며, 또 2개 이상의 용매를 혼합하여 사용해도 된다.

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 ＜수산기의 보호기의 제거＞에 있어서 사용되는 용매는, 예를 들면, 벤젠, 톨루엔, 크실렌, 메시틸렌 등의 방향족계 용매;초산 에틸, 초산 이소프로필 등의 에스테르계 용매; 헥산, 펜탄, 헵탄, 옥탄, 노난, 시클로헥산 등의 지방족계 용매, 할로겐계 용매 등을 들 수 있다. 이들 용매는 혼합하여 사용해도 된다.

＜상기의 수산기의 보호기의 제거 조건: 반응 온도＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 ＜수산기의 보호기의 제거＞의 반응 온도는, 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, 0∼80℃, 바람직하게는 10∼60℃, 더욱 바람직하게는 20∼40℃이다.

＜상기의 수산기의 보호기의 제거 조건: 반응 시간＞

본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 ＜Q¹ 제거＞의 반응 시간은, 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, 10분∼24시간, 바람직하게는 10분∼12시간, 더욱 바람직하게는 30분∼6시간이다.

＜최종 탈보호, 핵산 화합물의 단리 공정에 대하여＞

화합물 [C-1]이 그 분자 내에 보호기를 갖는 경우에는, 보호기의 종류 또는 성질에 따른 탈보호 처리를 실시함으로써, 모든 보호기가 탈리된 화합물을 제조할 수 있다. 예를 들면, 「Green's PROTECTIVE GROUPS in ORGANIC SYNTHESIS, 제4판, 2006년」에 기재되어 있는 탈보호 방법에 따라, 화합물이 갖는 모든 보호기를 제거할 수 있다. 구체적으로는, 예를 들면, (1) 암모니아수, (2) 암모니아수/에탄올 또는 (3) 암모니아수와 메틸아민 수용액의 혼합 용액으로 처리함으로써, 화합물 [C-1]이 그 분자 내에 갖는 치환기 [6] 및 핵산 염기의 아미노기 또는 수산기의 보호기를 제거할 수 있다.

또, 예를 들면, 상기 「화합물 [C-1]의 분자 내의 Q¹의 탈리 방법」에 기재한 「산」과 동일한 것, 또는 염산 또는 초산을 적당한 용매로 희석한 용액으로 처리함으로써, 화합물 [C-1]의 3' 말단측의 뉴클레오시드의 3'번 위치의 아미노기의 보호기에 치환되어 있는 산성 조건하에서 제거 가능한 기를 제거할 수 있다.

＜정제 분리 공정에 대하여＞

화합물 [C-1]이 갖는 모든 보호기가 제거된 화합물은, 반응 혼합물로부터 통상의 분리 정제 수단, 예를 들면, 추출, 농축, 중화, 여과, 원심분리, 재결정, C₈부터 C₁₈의 역상(逆相) 컬럼 크로마토그래피, 양이온 교환 컬럼 크로마토그래피, 음이온 교환 컬럼 크로마토그래피, 겔 여과 컬럼 크로마토그래피, 고속 액체 크로마토그래피, 투석, 한계 여과 등의 수단을 단독 또는 조합하여 이용함으로써 단리할 수 있다(예를 들면, 국제공개공보 제1991/09033 A1을 참조.).

역상 크로마토그래피를 이용하여 원하는 화합물을 정제하는 경우에는, 용출 용매로서, 예를 들면 20mM의 트리에틸아민/초산 완충액과 아세토니트릴의 혼합 용액을 사용할 수 있다.

또, 이온 교환 크로마토그래피를 이용하여 원하는 화합물을 정제하는 경우에는, 예를 들면, 1M의 식염수와 10mM의 수산화나트륨 수용액의 혼합 용액 또는 50mM의 인산 완충액의 0.3M의 식염수를 사용할 수 있다.

실시예

이하에, 참고예, 참고예, 비교예 및 시험예를 들어 본 발명을 더욱 상세하게 설명하지만, 본 발명은 이들로 한정되지 않는다. 화합물명은 소프트웨어(ChemDraw 또는 BIOVIA Draw)를 사용하여 발생시켰다.

또한, 「변환 수율(％)」이란 원료가 목적물로 변환된 비율을 의미하고, {고속 액체 크로마토그래피(이하, 「HPLC」라고 한다.)로 검출된 목적물에 대응하는 피크 면적(％)}÷{HPLC로 검출된 원료에 대응하는 피크 면적(％)＋HPLC로 검출된 목적물에 대응하는 피크 면적(％)}×100으로 산출된다.

HPLC의 조건:

생성물은 0.5mg을 아세토니트릴 또는 20％ 물/아세토니트릴에 용해하고, 이하의 조건에서 HPLC 분석을 행하고, 변환 효율은, HPLC로 UV＝264nm에서의 흡수에 의해 얻어지는 피크 면적의 적분치를 이용함으로써 산출했다.

＜ODS 조건 1＞

Column: Waters XBridge C18(2.5㎛, 4.6×50mm), 60℃

검출 파장: 264nm

이동상 A: 20mM AcONH4aq.

이동상 B: MeCN

유속: 0.75mL/min

구배(gradient): 40-95％B(0-15min) 95％B(15-24min) 40％B(24-30min)

＜ODS 조건 2＞

Column: Waters XBridge C8(5㎛, 4.6×75mm), 60℃

검출 파장: 264nm

이동상 A: 50mM TEAAaq

이동상 B: MeOH

유속: 0.75mL/min

구배: 70-95％B(0-20min) 95％B(20-26min) 75％B(26-35min)

＜LC/MS 조건 1＞

사용 기기 초고속 유체 크로마토그래프 ACQUITY UPLC(waters)

사중극 비행시간형 질량 분석계 SYNAPT-MS(waters)

Column: ACQUITY UPLC BEH C18 1.7㎛, 2.1×50mm(waters)

온도: 50℃

유속: 0.2mL/min

이동상 A: 10mM 암모니아수

이동상 B: MeCN

구배: 50-95％B(4min)

검출기 1: UV264nm

검출기 2: 사중극 비행시간형 질량 분석계

이온화법: ESI＋

측정 범위: 100-2000m/z

＜LC/MS 조건 2＞

사용 기기 초고속 유체 크로마토그래프 ACQUITY UPLC(waters)

사중극 비행시간형 질량 분석계 SYNAPT-MS(waters)

Column: ACQUITY UPLC BEH C18 1.7㎛, 2.1×50mm(waters)

온도: 50℃

유속: 0.2mL/min

이동상 A: 10mM 암모니아수

이동상 B: MeOH

구배: 70-95％B(4min)

검출기 1: UV264nm

검출기 2: 사중극 비행시간형 질량 분석계

이온화법: ESI＋

측정 범위: 100-2000m/z

＜LC/MS 조건 3＞

사용 기기 Agilent6100 시리즈 싱글 사중극 LC/MS 시스템(Agilent)

Column: Waters XBridge C18(3.5㎛, 4.6×150mm)

온도: 35℃

유속: 1.0mL/min

이동상 A: 20mM 초산 암모늄 수용액

이동상 B: MeCN

구배: 20-99％B(15min)

검출기 1: UV264nm

검출기 2: 사중극 비행시간형 질량 분석계

이온화법: ESI＋

측정 범위: 250-3000m/z

참고예 1

4-(옥타데실아미노)-4-옥소부탄산[(2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일]메틸(이하, 「G1-suc-morT-OFF」라고 한다.)

공정 1 4-(옥타데실아미노)-4-옥소부탄산(이하, 「G1-suc」라고 한다.)의 제조

옥타데칸-1-아민(21.94g)의 디클로로메탄(500mL) 용액 중에, 무수호박산(8.96g, 1.1eq)과 트리에틸아민(17mL, 1.5eq.)을 첨가하여, 실온에서 7시간 교반했다. 감압 농축하고, 잔사(殘渣)에 아세톤 150mL 첨가하여, 16시간 교반했다. 침전물을 흡인 여과하고, 아세톤으로 세정(400mL) 후, 30℃에서 3시간 감압 건조하여, G1-suc(29.1g, 96.6％)를 백색 분체로서 얻었다.

공정 2 4-(옥타데실아미노)-4-옥소부탄산[(2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일]메틸(이하, 「G1-suc-morT-OFF」라고 한다.)의 제조

G1-suc(14.4g)의 테트라히드로푸란(150mL) 용액에, 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 염산염(8.56g, 1.2eq.)을 첨가하여 실온에서 교반했다. 그 후, 1-((2R,6S)-6-(히드록시메틸)-4-트리틸모르폴린-2-일)-5-메틸피리미딘-2,4(1H,3H)-디온(이하, 「morT-OH」라고 한다.)(18g, 1.0eq.) 및 4-(N,N-디메틸아미노)피리딘 4.57g을 첨가하여, 70℃ 탕욕(湯浴)상에서 1시간 교반했다. 실온까지 냉각한 후, 0.1M의 인산 이수소나트륨 수용액을 첨가하여 잠시 교반한 후, 수층(水層)을 제거하고, 유기층을 0.1M의 인산 이수소나트륨 수용액 및 물로 2배 희석한 포화 식염수로 1회씩 세정했다. 수층을 하나로 모아서 디클로로메탄으로 추출하고, 유기층을 합쳐 무수황산나트륨으로 건조했다. 여과한 후, 용매를 증류 제거(溜去)하고, 감압 건조하여 4-(옥타데실아미노)-4-옥소부탄산[(2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일]메틸(이하, 「G1-suc-morT-ON」이라고 한다.)(백색 아몰퍼스, 28.1g, 89.5％)을 얻었다. 이것을 디클로로메탄 140mL에 녹여 빙욕(氷浴)상에서 교반하면서 2,2,2-트리플루오로에탄올 20mL 및 트리이소프로필실란 10.3mL를 첨가하여 잠시 교반한 후, 트리플루오로초산 5.1mL를 적하(滴下)했다. 적하 종료로부터 1시간 후에, 포화 중탄산나트륨 수용액 100mL에 얼음을 첨가하여 냉각한 액체에 교반하면서 반응액을 주입했다. 수층이 pH 7∼8인 것을 확인 후, 디클로로메탄을 이용하여 수층으로부터 추출했다. 유기층을 합쳐 무수황산나트륨으로 건조한 후, 여과하여 농축했다. 디클로로메탄-메탄올 혼액을 이동상으로서 이용하여 실리카겔로 컬럼 크로마토 정제를 행하고, 감압 건조함으로써, G1-suc-morT-OFF를 분말로서 19.89g 얻었다.

ESI-MS(＋): 593.36(M＋H)(LC/MS 조건 1)

참고예 1-1

참고예 1과 마찬가지의 방법으로,

(1) ＜4-(옥타데실아미노)-4-옥소부탄산[(2S,6R)-6-(6-벤즈아미드-9H-푸린-9-일)-4-트리틸모르폴린-2-일]메틸＞(G1-suc-morA-ON), ＜4-(옥타데실아미노)-4-옥소부탄산[(2S,6R)-6-(6-벤즈아미드-9H-푸린-9-일)모르폴린-2-일]메틸＞(G1-suc-morA-OFF)

(2) ＜4-(옥타데실아미노)-4-옥소부탄산[(2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일]메틸＞(G1-suc-morC-ON), ＜4-(옥타데실아미노)-4-옥소부탄산[(2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일]메틸＞(G1-suc-morC-OFF)

(3) ＜4-(옥타데실아미노)-4-옥소부탄산[(2S,6R)-6-(6-(2-시아노에톡시)-2-(페녹시아세트아미드)-9H-푸린-9-일)-4-트리틸모르폴린-2-일]메틸＞(G1-suc-morG-ON), ＜4-(옥타데실아미노)-4-옥소부탄산[(2S,6R)-6-(6-(2-시아노에톡시)-2-(페녹시아세트아미드)-9H-푸린-9-일)모르폴린-2-일]메틸＞(G1-suc-morG-OFF)

를 제조했다.

참고예 2 호박산{[(2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1-일)모르폴린-2-일]메틸}{2-옥타데카노일옥시-1-[(옥타데카노일옥시메틸)에틸]}(이하, 「G2-suc-morT-OFF」라고 한다.)

공정 1 4-((1,3-비스(스테아로일옥시)프로판-2-일)옥시)-4-옥소부탄산(이하, 「G2-suc」라고 한다.)의 제조

2-히드록시프로판-1,3-디일 디스테아레이트 1g(1.60mmol)에 디클로로메탄(8mL)을 첨가하고, 이어서 무수호박산 176mg(1.76mmol), 4-(N,N-디메틸아미노)피리딘 293mg(2.40mmol)을 첨가하여, 실온에서 16시간 교반했다. 반응 종료 후, 반응액에 1M의 인산 이수소나트륨 수용액을 첨가하고, 디클로로메탄으로 추출, 황산나트륨으로 건조, 용매 증류 제거하여, G2-suc를 얻었다(1.40g).

공정 2 호박산{[(2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1-일)-4-트리틸-모르폴린-2-일]메틸}{2-옥타데카노일옥시-1-[(옥타데카노일옥시메틸)에틸]}(이하, 「G2-suc-morT-ON」이라고 한다.)의 제조

G2-suc(900mg, 1.24mmol)와 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 염산염 277mg(1.45mmol)에 디클로로메탄(5.2mL)을 첨가하고, 이어서 morT-OH 500mg(1.03mmol), 4-(N,N-디메틸아미노)피리딘 132mg(1.09mmol)을 첨가하여, 실온에서 16시간 교반했다. 반응 종료 후, 반응액에 0.1M의 인산 이수소나트륨 수용액을 첨가하고, 디클로로메탄으로 추출, 황산나트륨으로 건조, 용매 증류 제거했다. 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여, G2-suc-morT-ON을 얻었다(1.09g, 89％).

공정 3 G2-suc-morT-OFF의 제조

G2-suc-morT-ON에 디클로로메탄(4.2mL)을 첨가하여, 0℃에서 교반했다. 이어서 트리이소프로필실란 127μL(0.62mmol), 트리플루오로초산 64μL(0.82mmol)를 0℃에서 첨가하여, 실온에서 1시간 교반했다. 반응 종료 후, 반응액에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하고, 디클로로메탄으로 추출, 황산나트륨으로 건조, 용매 증류 제거했다. 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여, G2-suc-morT-OFF를 얻었다(373mg, 95％).

참고예 3 [{(2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일}메틸]호박산 1,3-비스(올레오일옥시)프로판-2-일(이하, 「G3-suc-morT-OFF」라고 한다.)

공정 1 [{(2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일}메틸]호박산 1,3-비스(올레오일옥시)프로판-2-일(이하, 「G3-suc-morT-ON」이라고 한다.)의 제조

2-히드록시프로판-1,3-디일 디올레이트를 원료로, 참고예 2의 공정 1과 마찬가지의 방법으로 4-((1,3-비스(올레오일옥시)프로판-2-일)옥시)-4-옥소부탄산(이하, 「G3-suc」라고 한다.)을 제조했다. 이어서 참고예 2 공정 2와 마찬가지의 방법으로 G3-suc-morT-ON을 제조했다.

공정 2 G3-suc-morT-OFF의 제조

참고예 2 공정 3과 마찬가지의 방법으로 제조했다.

참고예 4 4-옥소-4-(4-스테아로일피페라진-1-일)부탄산{(2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일}메틸(이하, 「G4-suc-morT-OFF」라고 한다.)

공정 1 4-옥소-4-(4-스테아로일피페라진-1-일)부탄산(이하, 「G4-suc」라고 한다.)의 제조

스테아린산 1.68g(5.91mmol), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 염산염 1.13g(5.91mmol), 1-히드록시벤조트리아졸 0.79g(5.91mmol)에 테트라히드로푸란 26mL를 첨가하고, 이어서 트리에틸아민 1.45mL(10.7mmol), 피페라진-1-카르복시산 tert-부틸 1g(5.37mmol)을 첨가하여, 실온에서 16시간 교반했다. 반응 종료 후, 반응액에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하고, 디클로로메탄으로 추출, 황산나트륨으로 건조, 용매 증류 제거했다. 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여, 4-스테아로일피페라진-1-카르복시산 tert-부틸을 얻었다(1.64g; 67％). 이것에 디클로로메탄 18mL를 첨가하여 0℃에서 교반하고, 트리플루오로초산 2.77mL(36.2mmol)를 0℃에서 첨가하여, 실온에서 2시간 교반했다. 반응 종료 후, 반응액에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하고, 디클로로메탄으로 추출, 황산나트륨으로 건조, 용매 증류 제거하여, 1-(피페라진-1-일)옥타데칸-1-온을 얻었다(1.30g). 조체(粗體) 1.3g(3.70mmol)에 디클로로메탄 18mL를 첨가하고, 이어서 무수호박산 0.41g(4.10mmol), 트리에틸아민 0.77mL(5.50mmol)를 첨가하여 실온에서 2시간 교반했다. 반응 종료 후, 반응액을 증류 제거, 잔사에 아세톤을 첨가하여 실온에서 16시간 슬러리 세정했다. 불용물(不溶物)을 흡인 여과로 모아, 아세톤으로 세정, 건조하여, G4-suc를 얻었다(1.20g).

공정 2 4-옥소-4-(4-스테아로일피페라진-1-일)부탄산{(2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일}메틸(이하, 「G4-suc-morT-ON」이라고 한다.)의 제조

G4-suc(982mg, 2.17mmol)와 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 염산염 555mg(2.90mmol)에 테트라히드로푸란(10mL)을 첨가하여 70℃에서 교반했다. 이어서 morT-OH(1g, 2.07mmol), 4-(N,N-디메틸아미노)피리딘 265mg(2.17mmol)을 첨가하여, 70℃에서 30분 교반했다. 반응 종료 후, 실온으로 방랭(放冷)하고, 반응액에 0.1M의 인산 이수소나트륨 수용액을 첨가하여, 디클로로메탄으로 추출, 황산나트륨으로 건조, 용매 증류 제거했다. 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여, G4-suc-morT-ON을 얻었다(1.68g, 89％).

공정 3 G4-suc-morT-OFF의 제조

참고예 2의 공정 3과 마찬가지의 방법으로 제조했다.

참고예 5 4-(옥타데실카르바모일)안식향산[(2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일]메틸(이하, 「G5-tpa-morT-OFF」라고 한다.)

공정 1 4-(옥타데실카르바모일)안식향산[(2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일]메틸(이하, 「G5-tpa-morT-ON」이라고 한다.)의 제조

4-(옥타데실카르바모일)안식향산을 이용하여, 참고예 2의 공정 2와 마찬가지의 방법으로 제조했다.

공정 2 G5-tpa-morT-OFF의 제조

참고예 2의 공정 3과 마찬가지의 방법으로 제조했다.

참고예 6 4-(4-(4-(옥타데실카르바모일)벤조일)피페라진-1-일)-4-옥소부탄산{(2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일}메틸(이하, 「G6-suc-morT-OFF」라고 한다.)

공정 1 4-(4-(4-(옥타데실카르바모일)벤조일)피페라진-1-일)-4-옥소부탄산(이하, 「G6-suc」라고 한다.)의 제조

스테아린산 대신에 4-(옥타데실카르바모일)안식향산을 이용하여, 참고예 4의 공정 1과 마찬가지의 방법으로 제조했다.

공정 2 4-[4-{4-(옥타데실카르바모일)벤조일}피페라진-1-일]-4-옥소부탄산{(2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일}메틸(이하, 「G6-suc-morT-ON」이라고 한다.)의 제조

참고예 2의 공정 2와 마찬가지의 방법으로 제조했다.

공정 3 G6-suc-morT-OFF의 제조

G6-suc-morT-ON 493mg(0.47mmol)에 디클로로메탄 4.6mL, 2,2,2-트리플루오로에탄올 0.4mL를 첨가하여, 0℃에서 교반했다. 이어서 트리이소프로필실란 145μL(0.70mmol), 트리플루오로초산 53μL(0.70mmol)를 0℃에서 첨가하여, 실온에서 1시간 교반했다. 반응 종료 후, 반응액에 포화 탄산수소나트륨 수용액을 첨가하고, 디클로로메탄으로 추출, 황산나트륨으로 건조, 용매 증류 제거했다. 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여, G6-suc-morT-OFF를 얻었다(372mg; 98％).

참고예 7 3,4,5-트리스(옥타데실옥시)안식향산{(2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일}메틸(이하, 「G7-morT-OFF」라고 한다.)

공정 1 3,4,5-트리스(옥타데실옥시)안식향산{(2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸-모르폴린-2-일}메틸(이하, 「G7-morT-ON」이라고 한다.)의 제조

3,4,5-트리옥타데콕시 안식향산을 이용하여, 참고예 2의 공정 2와 마찬가지의 방법으로 제조했다.

공정 2 G7-morT-OFF의 제조

참고예 2의 공정 3과 마찬가지의 방법으로 제조했다.

참고예 8 호박산{(2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일}메틸 (2-[{3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일옥시}옥시]에틸)(이하, 「G8-suc-morT-OFF」라고 한다.)

공정 1 3,4,5-트리옥타데실옥시 안식향산 2-히드록시에틸의 제조

3,4,5-트리옥타데실옥시 안식향산 1.5g(1.60mmol), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 염산염 370mg(1.90mmol), 4-(N,N-디메틸아미노)피리딘 240mg(1.90mmol)에 클로로포름 8.1mL를 첨가하고, 이어서 에틸렌 글리콜 120mg(1.90mmol)을 첨가하여, 실온에서 3시간 교반했다. 반응 종료 후, 반응액에 1M의 인산 이수소나트륨 수용액을 첨가하고, 디클로로메탄으로 추출, 황산나트륨으로 건조, 용매 증류 제거했다. 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여, 3,4,5-트리옥타데실옥시 안식향산 2-히드록시에틸을 얻었다(882mg; 56％).

공정 2 호박산{(2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일}메틸 (2-[{3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일옥시}옥시]에틸)(이하, 「G8-suc-morT-ON」이라고 한다.)의 제조

참고예 2의 공정 1과 마찬가지의 방법으로, 4-옥소-4-(2-[{3,4,5-트리스(옥타데실옥시)벤조일}옥시]에톡시)부탄산(이하, 「G8-suc」라고 한다.)을 얻은 후, 참고예 2의 공정 2와 마찬가지의 방법으로 G8-suc-morT-ON을 얻었다.

공정 3 G8-suc-morT-OFF의 제조

참고예 2의 공정 3과 마찬가지의 방법으로 G8-suc-morT-OFF를 얻었다.

참고예 9 4-(디옥타데실아미노)-4-옥소부탄산{(2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일}메틸(이하, 「G9-suc-morT-OFF」라고 한다.)

공정 1 4-(디옥타데실아미노)-4-옥소부탄산{(2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일}메틸(이하, 「G9-suc-morT-ON」이라고 한다.)의 제조

N-옥타데실옥타데칸-1-아민을 원료로, 참고예 2의 공정 1과 마찬가지의 방법으로 4-(디옥타데실아미노)-4-옥소부탄산(이하, 「G9-suc」라고 한다.)을 제조했다. 이어서 참고예 2의 공정 2와 마찬가지의 방법으로 G9-suc-morT-ON을 제조했다.

공정 2 G9-suc-morT-OFF의 제조

참고예 2의 공정 3과 마찬가지의 방법으로 제조했다.

참고예 10 4-[{1-(옥타데실아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일}아미노]-4-옥소부탄산{(2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일}메틸(이하, 「G10-suc-morT-OFF」라고 한다.)

공정 1 4-[{1-(옥타데실아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일}아미노]-4-옥소부탄산{(2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일}메틸(이하, 「G10-suc-morT-ON」이라고 한다.)의 제조

2-tert-부톡시카르보닐아미노-3-페닐-프로판산 500mg(1.88mmol)에 테트라히드로푸란 9.4mL를 첨가하고, 이어서 N-에틸-N-이소프로필-프로판-2-아민 652μL(3.77mmol), 4-(N,N-디메틸아미노)피리딘 46mg(0.38mmol), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 염산염 505mg(2.64mmol), 옥타데칸-1-아민을 첨가하여, 실온에서 5시간 교반했다. 반응 종료 후, 반응액에 1M의 인산 이수소나트륨 수용액을 첨가하고, 디클로로메탄으로 추출, 황산나트륨으로 건조, 용매 증류 제거했다. 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여, tert-부톡시카르보닐아미노-N-옥타데실-3-페닐-프로판아미드를 얻었다(779mg, 80％).

tert-부톡시카르보닐아미노-N-옥타데실-3-페닐-프로판아미드 779mg(1.51mmol)에 디클로로메탄 15mL를 첨가하고, 이어서 트리플루오로초산 1.74mL(22.61mmol)를 첨가하여, 실온에서 3시간 교반했다. 반응 종료 후, 용매를 증류 제거하고, 2-아미노-N-옥타데실-3-페닐-프로판아미드를 얻었다(620mg). 조(粗)생성물인 채로 참고예 2의 공정 1과 마찬가지의 반응을 행하여 G10-suc를 제조했다. 이어서 참고예 2의 공정 2와 마찬가지의 반응을 행하여, G10-suc-morT-ON을 제조했다.

공정 2 G10-suc-morT-OFF의 제조

참고예 2의 공정 3과 마찬가지의 방법으로 목적물을 얻었다.

이하, 상기 참고예 1∼참고예 10에 기재한 화합물의 화학 구조식을 표 3에 나타낸다.

실시예 1: H-포스포네이트모노머의 제조

실시예 1-1: 트리에틸암모늄[(2S,6R)-6-(6-벤즈아미드-9H-푸린-9-일)-4-트리틸모르폴린-2-일]메틸포스포네이트(H-포스포네이트-PMO[A^Bz]-ON(트리에틸아민염)) 및 디아자비시클로운데세늄[(2S,6R)-6-(6-벤즈아미드-9H-푸린-9-일)-4-트리틸모르폴린-2-일]메틸포스포네이트(H-포스포네이트-PMO[A^Bz]-ON(DBU 염))의 제조

[화학식 73]

N-(9-((2R,6S)-6-(히드록시메틸)-4-트리틸모르폴린-2-일)-9H-푸린-6-일)벤즈아미드 600mg(1.06mmol)과 N-에틸모르폴린 1.3mL(10.06mmol)를 디클로로메탄 10mL에 용해했다. 이 용액에 아인산 디페닐 481μL(2.51mmol)를 첨가하여 실온에서 2시간 교반했다. 2시간 후, 1M 탄산수소 트리에틸암모늄 용액 100mL 첨가하여 실온에서 교반했다. 1시간 후, 유기층을 분리, 황산나트륨으로 건조, 용매 증류 제거했다. 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여, H-포스포네이트-PMO[A^Bz]-ON(트리에틸아민염)을 얻었다(720mg, 94％).

ESI-MS(＋): 660.2(LC/MS 조건 1)

얻어진 H-포스포네이트-PMO[A^Bz]-ON(트리에틸아민염) 500mg을 클로로포름 5mL에 용해하고, 0.2M 탄산수소 디아자비시클로운데센 용액 20mL 첨가하여 실온에서 10분 교반했다. 10분 후, 유기층을 분리, 황산나트륨으로 건조, 용매 증류 제거함으로써 H-포스포네이트-PMO[A^Bz]-ON(DBU 염) 490mg을 얻었다.

실시예 1-2:

실시예 1-1과 마찬가지의 방법으로 트리에틸암모늄[(2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일]메틸포스포네이트(H-포스포네이트-PMO[C^Bz]-ON), 트리에틸암모늄[(2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일]메틸포스포네이트(H-포스포네이트-PMO[T]-ON)을 제조했다.

실시예 2: H-포스포네이트올리고머의 제조

실시예 2-1: H-포스포네이트-PMO[C^Bz-A^Bz]-ON의 제조

[화학식 74]

[화학식 75]

HO-PMO[C^Bz-A^Bz]-ON은 AcO-PMO[C^Bz]-ON으로부터 공지의 방법으로 얻었다. AcO-PMO[C^Bz-A^Bz]-ON 3.9g(3.7mmol)을 테트라히드로푸란 50mL에 현탁했다. 이 용액에 5M 나트륨 메톡시드/메탄올 용액 148μL(0.739mmol)를 5분마다 10회 첨가 후, 5M 나트륨 메톡시드/메탄올 용액 740μL(3.70mmol) 첨가했다(합계 11.09mmol). 최종 첨가 5분 후, 초산을 첨가하고, 포화 식염수, 포화 중조수(重曹水)로 세정, 유기층을 황산나트륨으로 건조, 용매 증류 제거했다. 얻어진 잔사를 디클로로메탄에 용해하고, 디이소프로필에테르를 첨가해 재침전하여, HO-PMO[C^Bz-A^Bz]-ON을 얻었다(3.67g, 96％). HO-PMO[C^Bz-A^Bz]-ON 1.5g(1.5mmol)과 N-에틸모르폴린 1.9mL(15mmol)를 디클로로메탄 15mL에 용해했다. 이 용액에 아인산 디페닐 1.1mL(5.9mmol)를 첨가하여 40℃에서 밤새 교반했다. 밤새 교반 후, 1M 탄산수소 트리에틸암모늄 용액 100mL 첨가하여 실온에서 교반했다. 1시간 후, 유기층을 분리, 황산나트륨으로 건조, 용매 증류 제거했다. 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여, H-포스포네이트-PMO[C^Bz-A^Bz]-ON(트리에틸아민염)을 얻었다(1.65g, 95％).

ESI-MS(＋): 1079.4(LC/MS 조건 1)

실시예 2-2: H-포스포네이트-PMO[C^Bz-A^Bz-T-C^Bz-T]-ON의 제조

[화학식 76]

AcO-PMO[C^Bz-A^Bz-T-C^Bz-T]-ON은 AcO-PMO[C^Bz]-ON으로부터 공지의 방법으로 얻었다. AcO-PMO[C^Bz-A^Bz-T-C^Bz-T]-ON 4g(1.88mmol)을 테트라히드로푸란 38mL에 현탁했다. 이 용액에 5M 나트륨 메톡시드/메탄올 용액 450μL(2.26mmol)를 30분마다 6회 첨가했다(합계 13.56mmol). 최종 추가 30분 후, 초산을 첨가하고, 포화 식염수로 세정, 유기층을 황산나트륨으로 건조, 용매 증류 제거했다. 얻어진 잔사를 디클로로메탄에 용해하고, 디이소프로필에테르를 첨가해 재침전하여, HO-PMO[C^Bz-A^Bz-T-C^Bz-T]-ON을 얻었다(3.92g, 99％).

HO-PMO[C^Bz-A^Bz-T-C^Bz-T]-ON 6.2g(3.0mmol)과 N-에틸모르폴린 7.4mL(60mmol)를 디클로로메탄 30mL에 용해했다. 이 용액에 아인산 디페닐 4.6mL(24mmol)를 첨가하여 40℃에서 밤새 교반했다. 밤새 교반 후, 1M 탄산수소 트리에틸암모늄 용액 300mL 첨가하여 실온에서 교반했다. 1시간 후, 유기층을 분리, 황산나트륨으로 건조, 용매 증류 제거했다. 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여, H-포스포네이트-PMO[C^Bz-A^Bz-T-C^Bz-T]-ON(트리에틸아민염)을 얻었다(6.56g, 98％).

얻어진 생성물 1g을 클로로포름 5mL에 용해하고, 0.2M 탄산수소 디아자비시클로운데센 용액 20mL를 첨가하여 실온에서 10분 교반했다. 10분 후, 유기층을 분리, 황산나트륨으로 건조, 용매 증류 제거함으로써 H-포스포네이트-PMO[C^Bz-A^Bz-T-C^Bz-T]-ON(DBU 염) 960mg을 얻었다.

ESI-MS(＋): 2158.7(LC/MS 조건 2)

실시예 2-3: H-포스포네이트-PMO[C^Bz-G^CE,Pac-A^Bz-A^Bz-G^CE,Pac]-ON의 제조

TBDPSO-PMO[C^Bz-G^CE,Pac-A^Bz-A^Bz-G^CE,Pac]-ON은 TBDPSO-PMO[C^Bz]-ON으로부터 공지의 방법으로 얻었다. TBDPSO-PMO[C^Bz-G^CE,Pac-A^Bz-A^Bz-G^CE,Pac]-ON 19g(7.07mmol)과 초산 3.0mL(53.0mmol)를 테트라히드로푸란 140mL에 현탁했다. 이 용액에 테트라부틸암모늄 플루오라이드 3수화물 14.1g(35.4mmol)을 첨가하여, 실온에서 교반했다. 1시간 후, 물을 첨가하여, 디클로로메탄으로 추출, 황산나트륨으로 건조, 용매 증류 제거했다. 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여, HO-PMO[C^Bz-G^CE,Pac-A^Bz-A^Bz-G^CE,Pac]-ON을 얻었다(10.7g, 62％). HO-PMO[C^Bz-G^CE,Pac-A^Bz-A^Bz-G^CE,Pac]-ON 1g(0.408mmol)과 N-에틸모르폴린 1.0mL(8.15mmol)를 디클로로메탄 4.0mL에 용해했다. 이 용액에 아인산 디페닐 937μL(4.89mmol)를 첨가하여 실온에서 교반했다. 1시간 후, 1M 탄산수소 트리에틸암모늄 용액 40mL를 첨가하여 실온에서 교반했다. 10분 후, 유기층을 분리, 황산나트륨으로 건조, 용매 증류 제거했다. 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여, H-포스포네이트-PMO[C^Bz-G^CE,Pac-A^Bz-A^Bz-G^CE,Pac]-ON(트리에틸아민염)을 얻었다(870mg, 85％). 얻어진 생성물 500mg을 클로로포름 5mL에 용해하고, 0.2M 탄산수소 디아자비시클로운데센 용액 20mL를 첨가하여 실온에서 교반했다. 10분 후, 유기층을 분리, 황산나트륨으로 건조, 용매 증류 제거함으로써 H-포스포네이트-PMO[C^Bz-G^CE,Pac-A^Bz-A^Bz-G^CE,Pac]-ON(DBU 염) 490mg을 얻었다.

ESI-MS(＋): 2606.9(LC/MS 조건 2)

실시예 2-4: H-포스포네이트-PMO[G^CE,Pac-G^CE,Pac-T-T-C^Bz]-ON의 제조

[화학식 77]

TrocO-PMO[G^CE,Pac-G^CE,Pac-T-T-C^Bz]-ON 1g(0.40mmol)을 테트라히드로푸란 6.0mL에 용해했다. 이 용액에 초산 230μL(4.01mmol), 아연 분말 262mg(4.01mmol)을 첨가하여 실온에서 교반했다. 1시간 후, 추가로 초산 115μL(2.01mmol), 아연 분말 131mg(4.01mmol)을 추가하여 1시간 교반했다. 1시간 후, 반응액을 세라이트 여과하고, 여액(濾液)을 용매 증류 제거했다. 얻어진 잔사를 역상 정제로 정제하여, HO-PMO[G^CE,Pac-G^CE,Pac-T-T-C^Bz]-ON을 얻었다(591.16mg, 64％).

HO-PMO[G^CE,Pac-G^CE,Pac-T-T-C^Bz]-ON 441mg(0.19mmol)과 N-에틸모르폴린 241μL(1.90mmol)를 디클로로메탄 1.9mL에 용해했다. 이 용액에 아인산 디페닐 145μL(0.76mmol)를 첨가하여 40℃에서 1시간 교반했다. 1시간 후, 트리에틸아민 398μL를 첨가했다. 그 후, 반응액을 2％의 트리에틸아민을 포함하는 디이소프로필에테르 4.5mL 중에 적하했다. 적하 종료 후 발생한 백색 침전물을 흡인 여과하여, 감압 건조했다. 얻어진 백색 분말을 역상 정제에 의해 정제하여, H-포스포네이트-PMO[G^CE,Pac-G^CE,Pac-T-T-C^Bz]-ON을 얻었다(211mg, 45％).

ESI-MS(＋): 2382.8(M＋H)(LC/MS 조건 3)

실시예 2-5:

마찬가지의 방법으로 이하에 나타내는 H-포스포네이트체를 제조했다.

실시예 3: PMO 올리고머 제조

실시예 3-1: G1-suc-PMO[C^Bz-A^Bz]-ON의 제조

[화학식 78]

G1-suc-PMO[C^Bz]-OFF 17mg(0.025mmol)과 H-포스포네이트-PMO[A^Bz]-ON(트리에틸아민염) 29mg(0.0375mmol)을 20％ 피리딘/디클로로메탄 500μL에 용해시켰다. 이 용액에 클로로 인산 디페닐 12μL(0.0563mmol)를 첨가한 후, 실온에서 교반했다. 10분 후, 반응액 100μL를 산화액(0.1M 요오드, 2M 디메틸아민/THF 용액) 100μL와 혼합하여, 실온에서 10분간 교반했다. 반응 종료 후, 반응액에 10％ 티오황산 나트륨 수용액을 첨가하여, 유기층과 수층을 분리 후, 유기층을 80％ 아세토니트릴 수용액에 의해 20배 희석하여 HPLC로 분석했다(원료 Rt: 11.4min, 목적물 Rt: 17.2min, 변환 수율 92.1％, ODS 조건 1).

ESI-MS(＋): 1367.8(M＋H)(LC/MS 조건 1)

실시예 3-2: G1-suc-PMO[C^Bz-A^Bz]-ON의 제조

[화학식 79]

유속 0.25mL/분으로 송액(送液)된 하기에 나타내는 a액 2mL와 유속 0.25mL/분으로 송액된 하기에 나타내는 b액 2mL를 혼합한 후에 5mL 튜브 리액터 중에서 60℃로 10분간 반응을 행하였다. 얻어진 용액 100μL를 산화액(0.1M 요오드, 2M 디메틸아민/THF 용액) 100μL와 혼합하여, 실온에서 10분간 교반했다. 반응 종료 후, 반응액에 10％ 티오황산 나트륨 수용액을 첨가하여, 유기층과 수층을 분리 후, 유기층을 80％ 아세토니트릴 수용액에 의해 20배 희석하여 HPLC로 분석했다(원료 Rt: 14.44min, 목적물 Rt: 17.28min, 변환 수율 95.6％, ODS 조건 1).

a액: 클로로 인산 디페닐 82μL(0.394mmol)를 무수디클로로메탄 2.5mL에 용해시켰다.

b액: H-포스포네이트-PMO[A^Bz]-ON 200mg(0.263mmol) 및 G1-suc-PMO[C^Bz]-OFF 119mg(0.175mmol)을 40％ 무수피리딘/60％ 무수디클로로메탄 용액 2.5mL에 용해시켰다.

실시예 3-3: AcO-PMO[C^Bz-C^Bz]-ON의 제조

[화학식 80]

AcO-PMO[C^Bz]-OFF 9mg(0.025mmol)과 H-포스포네이트-PMO[C^Bz]-ON(트리에틸아민염) 29mg(0.0375mmol)을 20％ 피리딘/디클로로메탄 500μL에 용해시켰다. 이 용액에 클로로 인산 디페닐 12μL(0.0563mmol)를 첨가한 후, 실온에서 교반했다. 10분 후, 반응액 100μL를 산화액(0.1M 요오드, 2M 디메틸아민/THF 용액) 100μL와 혼합하여, 실온에서 5분간 교반했다. 반응 종료 후, 반응액에 10％ 티오황산 나트륨 수용액을 첨가하여, 유기층과 수층을 분리 후, 유기층을 80％ 아세토니트릴 수용액에 의해 20배 희석하여 HPLC로 분석했다(원료 Rt: 5.3min, 목적물 Rt: 11.7, 11.8min, 변환 수율 99.7％, ODS 조건 1).

ESI-MS(＋): 1056.2(M＋Na)(LC/MS 조건 1)

실시예 3-4: TBSO-PMO[C^Bz-C^Bz]-ON의 제조

[화학식 81]

TBSO-PMO[C^Bz]-OFF 11mg(0.025mmol)과 H-포스포네이트-PMO[C^Bz]-ON(트리에틸아민염) 29mg(0.0375mmol)을 20％ 피리딘/디클로로메탄 500μL에 용해시켰다. 이 용액에 클로로 인산 디페닐 12μL(0.0563mmol)를 첨가한 후, 실온에서 교반했다. 10분 후, 반응액 100μL를 산화액(0.1M 요오드, 2M 디메틸아민/THF 용액) 100μL와 혼합하여, 실온에서 5분간 교반했다. 반응 종료 후, 반응액에 10％ 티오황산 나트륨 수용액을 첨가하여, 유기층과 수층을 분리 후, 유기층을 80％ 아세토니트릴 수용액에 의해 20배 희석하여 HPLC로 분석했다(원료 Rt: 10.7min, 목적물 Rt: 14.9, 15.0min, 변환 수율 97.7％, ODS 조건 1).

ESI-MS(＋): 1106.4(M＋H)(LC/MS 조건 1)

실시예 3-5: G1-suc-PMO[T-G^CE,Pac-A^Bz]-ON의 제조

[화학식 82]

G1-suc-PMO[T-G^CE,Pac]-OFF 17mg(0.0123mmol)과 H-포스포네이트-PMO[A^Bz]-ON(트리에틸아민염) 14mg(0.0185mmol)과 N-메틸이미다졸 20μL(0.247mmol)를 디클로로메탄 250μL에 용해시켰다. 이 용액에 클로로 인산 디페닐 25μL(0.123mmol)를 첨가한 후, 40℃에서 교반했다. 10분 후, 반응액 100μL를 산화액(0.1M 요오드, 2M 디메틸아민/THF 용액) 100μL와 혼합하고, 실온에서 10분간 교반했다. 반응 종료 후, 반응액에 10％ 티오황산 나트륨 수용액을 첨가하여, 유기층과 수층을 분리 후, 유기층을 80％ 아세토니트릴 수용액에 의해 20배 희석하여 HPLC로 분석했다(원료 Rt: 12.9min, 목적물 Rt: 18.4, 19.1min, 변환 수율 89.5％, ODS 조건 2).

ESI-MS(＋): 1819.9(LC/MS 조건 2)

실시예 3-6: G1-suc-PMO[T-G^{CE Pac}-G^CE,Pac-A^Bz]-ON의 제조

[화학식 83]

G1-suc-PMO[T-G^CE,Pac-G^CE,Pac]-OFF 21mg(0.0125mmol)과 H-포스포네이트-PMO[A^Bz]-ON(트리에틸아민염) 14mg(0.0188mmol)과 N-메틸이미다졸 20μL(0.250mmol)를 디클로로메탄 250μL에 용해시켰다. 이 용액에 클로로 인산 디페닐 25μL(0.125mmol)를 첨가한 후, 40℃에서 교반했다. 10분 후, 반응액 100μL를 산화액(0.1M 요오드, 2M 디메틸아민/THF 용액) 100μL와 혼합하여, 실온에서 10분간 교반했다. 반응 종료 후, 반응액에 10％ 티오황산 나트륨 수용액을 첨가하여, 유기층과 수층을 분리 후, 유기층을 80％ 아세토니트릴 수용액에 의해 20배 희석하여 HPLC로 분석했다(원료 Rt: 13.6min, 목적물 Rt: 19.5min, 변환 수율 91.6％, ODS 조건 2).

ESI-MS(＋): 2362.0(LC/MS 조건 2)

실시예 3-7: G1-suc-PMO[T-G^CE,Pac-G^CE,Pac-G^CE,Pac-A^Bz-A^Bz]-ON의 제조

G1-suc-PMO[T-G^CE,Pac-G^CE,Pac-G^CE,Pac-A^Bz]-OFF 67mg(0.0251mmol)과 H-포스포네이트-PMO[A^Bz]-ON(트리에틸아민염) 29mg(0.0377mmol)과 N-메틸이미다졸 10μL(0.126mmol)를 디클로로메탄 250μL에 용해시켰다. 이 용액에 클로로 인산 디페닐 12μL(0.0566mmol)를 첨가한 후, 40℃에서 교반했다. 10분 후, 반응액 100μL를 산화액(0.1M 요오드, 2M 디메틸아민/THF 용액) 100μL와 혼합하여, 실온에서 10분간 교반했다. 반응 종료 후, 반응액에 10％ 티오황산 나트륨 수용액을 첨가하여, 유기층과 수층을 분리 후, 유기층을 80％ 아세토니트릴 수용액에 의해 20배 희석하여 HPLC로 분석했다(원료 Rt: 14.4min, 목적물 Rt: 19.0, 19.2min, 변환 수율 97.9％, ODS 조건 2).

ESI-MS(＋): 3347.4(LC/MS 조건 2)

실시예 3-8: G1-suc-PMO[C^Bz-C^Bz-T-C^Bz-C^Bz-G^CE,Pac-G^CE,Pac-T-T-C^Bz-A^Bz]-ON의 제조(축합제로서 클로로 인산 디페닐을 사용)

G1-suc-PMO[C^Bz-C^Bz-T-C^Bz-C^Bz-G^CE,Pac-G^CE,Pac-T-T-C^Bz]-OFF 28mg(0.00631mmol)과 H-포스포네이트-PMO[A^Bz]-ON(트리에틸아민염) 9.5mg(0.0126mmol)과 N-메틸이미다졸 10μL(0.126mmol)를 디클로로메탄 250μL에 용해시켰다. 이 용액에 클로로 인산 디페닐 13μL(0.0631mmol)를 첨가한 후, 40℃에서 교반했다. 10분 후, 반응액 100μL를 산화액(0.1M 요오드, 2M 디메틸아민/THF 용액) 100μL와 혼합하여, 실온에서 5분간 교반했다. 반응 종료 후, 반응액에 10％ 티오황산 나트륨 수용액을 첨가하여, 유기층과 수층을 분리 후, 유기층을 80％ 아세토니트릴 수용액에 의해 20배 희석하여 HPLC로 분석했다(원료 Rt: 16.1min, 목적물 Rt: 19.5min, 변환 수율 94.4％, ODS 조건 2).

ESI-MS(＋): 5117.9(LC/MS 조건 2)

실시예 3-9: G1-suc-PMO[C^Bz-C^Bz-T-C^Bz-C^Bz-G^CE,Pac-G^CE,Pac-T-T-C^Bz-A^Bz]-ON의 제조(축합제로서 브로모트리피롤리디노포스포늄＝헥사플루오로 인산염을 사용)

G1-suc-PMO[C^Bz-C^Bz-T-C^Bz-C^Bz-G^CE,Pac-G^CE,Pac-T-T-C^Bz]-OFF 28mg(0.00631mmol)과 H-포스포네이트-PMO[A^Bz]-ON(트리에틸아민염) 9.5mg(0.0126mmol)과 N-메틸이미다졸 10μL(0.126mmol)를 디클로로메탄 250μL에 용해시켰다. 이 용액에 브로모트리피롤리디노포스포늄＝헥사플루오로 인산염 29mg(0.0631mmol)을 첨가한 후, 40℃에서 교반했다. 10분 후, 반응액 100μL를 산화액(0.1M 요오드, 2M 디메틸아민/THF 용액) 100μL와 혼합하여, 실온에서 5분간 교반했다. 반응 종료 후, 반응액에 10％ 티오황산 나트륨 수용액을 첨가하여, 유기층과 수층을 분리 후, 유기층을 80％ 아세토니트릴 수용액에 의해 20배 희석하여 HPLC로 분석했다(원료 Rt: 16.1min, 목적물 Rt: 19.5min, 변환 수율 94.0％, ODS 조건 2).

실시예 3-10: G1-suc-PMO[C^Bz-C^Bz-T-C^Bz-C^Bz-G^CE,Pac-G^CE,Pac-T-T-C^Bz-A^Bz]-ON의 제조(축합제로서 클로로 인산 디페닐 비스(2,6-디메틸페닐)을 사용)

G1-suc-PMO[C^Bz-C^Bz-T-C^Bz-C^Bz-G^CE,Pac-G^CE,Pac-T-T-C^Bz]-OFF 28mg(0.00631mmol)과 H-포스포네이트-PMO[A^Bz]-ON(트리에틸아민염) 9.5mg(0.0126mmol)과 N-메틸이미다졸 10μL(0.126mmol)를 디클로로메탄 250μL에 용해시켰다. 이 용액에 클로로 인산 디페닐 비스(2,6-디메틸페닐) 21mg(0.0631mmol)을 첨가한 후, 40℃에서 교반했다. 10분 후, 반응액 100μL를 산화액(0.1M 요오드, 2M 디메틸아민/THF 용액) 100μL와 혼합하여, 실온에서 5분간 교반했다. 반응 종료 후, 반응액에 10％ 티오황산 나트륨 수용액을 첨가하여, 유기층과 수층을 분리 후, 유기층을 80％ 아세토니트릴 수용액에 의해 20배 희석하여 HPLC로 분석했다(원료 Rt: 16.1min, 목적물 Rt: 19.5min, 변환 수율 97.0％, ODS 조건 2).

실시예 3-11: G1-suc-PMO[C^Bz-C^Bz-T-C^Bz-C^Bz-G^CE,Pac-G^CE,Pac-T-T-C^Bz-A^Bz]-ON의 제조(축합제로서 비스(2-옥소-3-옥사졸리디닐)포스핀산 클로리드를 사용)

G1-suc-PMO[C^Bz-C^Bz-T-C^Bz-C^Bz-G^CE,Pac-G^CE,Pac-T-T-C^Bz]-OFF 28mg(0.00631mmol)과 H-포스포네이트-PMO[A^Bz]-ON(트리에틸아민염) 9.5mg(0.0126mmol)과 N-메틸이미다졸 10μL(0.126mmol)를 디클로로메탄 250μL에 용해시켰다. 이 용액에 비스(2-옥소-3-옥사졸리디닐)포스핀산 클로리드 16mg(0.0631mmol)을 첨가한 후, 40℃에서 교반했다. 10분 후, 반응액 100μL를 산화액(0.1M 요오드, 2M 디메틸아민/THF 용액) 100μL와 혼합하여, 실온에서 5분간 교반했다. 반응 종료 후, 반응액에 10％ 티오황산 나트륨 수용액을 첨가하여, 유기층과 수층을 분리 후, 유기층을 80％ 아세토니트릴 수용액에 의해 20배 희석하여 HPLC로 분석했다(원료 Rt: 16.1min, 목적물 Rt: 19.5min, 변환 수율 95.9％, ODS 조건 2).

실시예 3-12: G1-suc-PMO[T-A^Bz]-ON(산화액의 디메틸아민 대신에 피페리딘 사용)의 제조

[화학식 84]

G1-suc-PMO[T]-OFF 15mg(0.025mmol)과 H-포스포네이트-PMO[A^Bz]-ON(트리에틸아민염) 29mg(0.0375mmol), N-메틸이미다졸 20μL(0.253mmol)를 디클로로메탄 500μL에 용해시켰다. 이 용액에 클로로 인산 디페닐 26μL(0.127mmol)를 첨가한 후, 실온에서 교반했다. 10분 후, 반응액 100μL를 산화액(0.1M 요오드, 2M 피페리딘/THF 용액) 100μL와 혼합하여, 실온에서 10분간 교반했다. 반응 종료 후, 반응액에 10％ 티오황산 나트륨 수용액을 첨가하여, 유기층과 수층을 분리 후, 유기층을 80％ 아세토니트릴 수용액에 의해 20배 희석하여 HPLC로 분석했다(원료 Rt: 12.0min, 목적물 Rt: 19.6, 20.1min, 변환 수율 98.9％, ODS 조건 2).

ESI-MS(＋): 1317.7(LC/MS 조건 2)

실시예 3-13:

마찬가지의 방법으로 이하에 나타내는 올리고머를 제조했다.

실시예 4: PMO 올리고머의 제조

실시예 4-1: G1-suc-PMO[A^Bz-C^Bz-T-T]-ON의 제조

[화학식 85]

G1-suc-PMO[A^Bz-C^Bz]-OFF 28mg(0.025mmol)과 H-포스포네이트-PMO[T-T]-ON(트리에틸아민염) 37mg(0.0375mmol)을 20％ 피리딘/디클로로메탄 500μL에 용해시켰다. 이 용액에 클로로 인산 디페닐 12μL(0.0563mmol)를 첨가한 후, 실온에서 교반했다. 10분 후, 반응액 100μL를 산화액(0.1M 요오드, 2M 디메틸아민/THF 용액) 100μL와 혼합하여, 실온에서 10분간 교반했다. 반응 종료 후, 반응액에 10％ 티오황산 나트륨 수용액을 첨가하여, 유기층과 수층을 분리 후, 유기층을 80％ 아세토니트릴 수용액에 의해 20배 희석하여 HPLC로 분석했다(원료 Rt: 13.8min, 목적물 Rt: 15.3min, 변환 수율 97.2％, ODS 조건 1).

ESI-MS(＋): 2026.9(LC/MS 조건 2)

실시예 4-2: G1-suc-PMO[A^Bz-C^Bz-T-T]-ON의 제조

[화학식 86]

유속 0.2mL/분으로 송액된 하기에 나타내는 a액 2mL와 유속 0.2mL/분으로 송액된 하기에 나타내는 b액 2mL를 혼합한 후에 5mL 튜브 리액터 중에서 60℃로 12.5분간 반응을 행하였다. 얻어진 용액 100μL를 산화액(0.1M 요오드, 2M 디메틸아민/THF 용액) 100μL와 혼합하여, 실온에서 10분간 교반했다. 반응 종료 후, 반응액에 10％ 티오황산 나트륨 수용액을 첨가하여, 유기층과 수층을 분리 후, 유기층을 80％ 아세토니트릴 수용액에 의해 20배 희석하여 HPLC로 분석했다(원료 Rt: 13.79min, 목적물 Rt: 15.27min, 변환 수율 95.0％, ODS 조건 1).

b액: H-포스포네이트-PMO[T-T]-ON 257mg(0.263mmol) 및 G1-suc-PMO[A^Bz-C^Bz]-OFF 197mg(0.175mmol)을 40％ 무수피리딘/60％ 무수디클로로메탄 용액 2.5mL에 용해시켰다.

실시예 4-3: G1-suc-PMO[T-T-A^Bz-T-T]-ON의 제조

[화학식 87]

G1-suc-PMO[T-T-A^Bz]-OFF 34mg(0.025mmol)과 H-포스포네이트-PMO[T-T]-ON(트리에틸아민염) 37mg(0.0375mmol)을 20％ 피리딘/디클로로메탄 500μL에 용해시켰다. 이 용액에 클로로 인산 디페닐 12μL(0.0563mmol)를 첨가한 후, 실온에서 교반했다. 10분 후, 반응액 100μL를 산화액(0.1M 요오드, 2M 디메틸아민/THF 용액) 100μL와 혼합하여, 실온에서 10분간 교반했다. 반응 종료 후, 반응액에 10％ 티오황산 나트륨 수용액을 첨가하여, 유기층과 수층을 분리 후, 유기층을 80％ 아세토니트릴 수용액에 의해 20배 희석하여 HPLC로 분석했다(원료 Rt: 12.4min, 목적물 Rt: 14.2min, 변환 수율 88.9％, ODS 조건 1).

ESI-MS(＋): 2268.0(LC/MS 조건 2)

실시예 4-4: G1-suc-PMO[T-T-A^Bz-T-T]-ON의 제조

[화학식 88]

유속 0.2mL/분으로 송액된 하기에 나타내는 a액 2mL와 유속 0.2mL/분으로 송액된 하기에 나타내는 b액 2mL를 혼합한 후에 5mL 튜브 리액터 중에서 60℃로 12.5분간 반응을 행하였다. 얻어진 용액 100μL를 산화액(0.1M 요오드, 2M 디메틸아민/THF 용액) 100μL와 혼합하여, 실온에서 10분간 교반했다. 반응 종료 후, 반응액에 10％ 티오황산 나트륨 수용액을 첨가하여, 유기층과 수층을 분리 후, 유기층을 80％ 아세토니트릴 수용액에 의해 20배 희석하여 HPLC로 분석했다(원료 Rt: 12.42min, 목적물 Rt: 14.24min, 변환 수율 94.1％, ODS 조건 1).

b액: H-포스포네이트-PMO[T-T]-ON 257mg(0.263mmol) 및 G1-suc-PMO[T-T-A^Bz]-OFF 239mg(0.175mmol)을 40％ 무수피리딘/60％ 무수디클로로메탄 용액 2.5mL에 용해시켰다.

실시예 4-5: G1-suc-PMO[T-G^CE,Pac-G^CE,Pac-G^CE,Pac-A^Bz-C^Bz-A^Bz-T-C^Bz-T]-ON의 제조(H-포스포네이트의 트리에틸아민염 사용)

G1-suc-PMO[T-G^CE,Pac-G^CE,Pac-G^CE,Pac-A^Bz]-OFF 33mg(0.0123mmol)과 H-포스포네이트-PMO[C^Bz-A^Bz-T-C^Bz-T]-ON(트리에틸아민염) 40mg(0.0185mmol)과 N-메틸이미다졸 20μL(0.247mmol)를 디클로로메탄 250μL에 용해시켰다. 이 용액에 클로로 인산 디페닐 26μL(0.124mmol)를 첨가한 후, 40℃에서 교반했다. 10분 후, 반응액 100μL를 산화액(0.1M 요오드, 2M 디메틸아민/THF 용액) 100μL와 혼합하여, 실온에서 5분간 교반했다. 반응 종료 후, 반응액에 10％ 티오황산 나트륨 수용액을 첨가하여, 유기층과 수층을 분리 후, 유기층을 80％ 아세토니트릴 수용액에 의해 20배 희석하여 HPLC로 분석했다(원료 Rt: 14.4min, 목적물 Rt: 18.6min, 변환 수율 84.7％, 목적물 순도 23.4％, ODS 조건 2).

ESI-MS(＋): 4845.8(LC/MS 조건 2)

실시예 4-6: G1-suc-PMO[T-G^CE,Pac-G^CE,Pac-G^CE,Pac-A^Bz-C^Bz-A^Bz-T-C^Bz-T]-ON의 제조(H-포스포네이트의 DBU 염 사용)

G1-suc-PMO[T-G^CE,Pac-G^CE,Pac-G^CE,Pac-A^Bz]-OFF 33mg(0.0123mmol)과 H-포스포네이트-PMO[C^Bz-A^Bz-T-C^Bz-T]-ON(DBU 염) 40mg(0.0185mmol)과 N-메틸이미다졸 20μL(0.247mmol)를 디클로로메탄 250μL에 용해시켰다. 이 용액에 클로로 인산 디페닐 26μL(0.124mmol)를 첨가한 후, 40℃에서 교반했다. 10분 후, 반응액 100μL를 산화액(0.1M 요오드, 2M 디메틸아민/THF 용액) 100μL와 혼합하여, 실온에서 5분간 교반했다. 반응 종료 후, 반응액에 10％ 티오황산 나트륨 수용액을 첨가하여, 유기층과 수층을 분리 후, 유기층을 80％ 아세토니트릴 수용액에 의해 20배 희석하여 HPLC로 분석했다(원료 Rt: 14.4min, 목적물 Rt: 18.6min, 변환 수율 95.8％, 목적물 순도 53.1％, ODS 조건 2).

실시예 4-7: G1-suc-PMO[C^Bz-C^Bz-T-C^Bz-C^Bz-G^CE,Pac-G^CE,Pac-T-T-C^Bz-C^Bz-G^CE,Pac-A^Bz-A^Bz-G^CE,Pac]-ON의 제조

G1-suc-PMO[C^Bz-C^Bz-T-C^Bz-C^Bz-G^CE,Pac-G^CE,Pac-T-T-C^Bz]-OFF 28mg(0.00631mmol)과 H-포스포네이트-PMO[C^Bz-G^CE,Pac-A^Bz-A^Bz-G^CE,Pac]-ON(DBU 염) 32mg(0.0126mmol)과 N-메틸이미다졸 16μL(0.126mmol)를 디클로로메탄 250μL에 용해시켰다. 이 용액에 클로로 인산 디페닐 13μL(0.0631mmol)를 첨가한 후, 40℃에서 교반했다. 10분 후, 반응액 100μL를 산화액(0.1M 요오드, 2M 디메틸아민/THF 용액) 100μL와 혼합하여, 실온에서 5분간 교반했다. 반응 종료 후, 반응액에 10％ 티오황산 나트륨 수용액을 첨가하여, 유기층과 수층을 분리 후, 유기층을 80％ 아세토니트릴 수용액에 의해 20배 희석하여 HPLC로 분석했다(원료 Rt: 16.1min, 목적물 Rt: 19.8min, 변환 수율 91.5％, ODS 조건 2).

ESI-MS(＋): 7064.4(LC/MS 조건 2)

실시예 4-8:

실시예 5: G1-suc-PMO[C^Bz-C^Bz-T-C^Bz-C^Bz-G^CE,Pac-G^CE,Pac-T-T-C^Bz-T-G^CE,Pac-A^Bz-A^Bz-G^CE,Pac-G^CE,Pac-T-G^CE,Pac-T-T]-ON의 제조

[화학식 89]

G1-suc-PMO[C^Bz-C^Bz-T-C^Bz-C^Bz-G^CE,Pac-G^CE,Pac-T-T-C^Bz]-OFF 28mg(0.00631mmol)과 H-포스포네이트-PMO[T-G^CE,Pac-A^Bz-A^Bz-G^CE,Pac-G^CE,Pac-T-G^CE,Pac-T-T]-ON(DBU 염) 43mg(0.00947mmol)과 N-메틸이미다졸 16μL(0.126mmol)를 디클로로메탄 250μL에 용해시켰다. 이 용액에 클로로 인산 디페닐 13μL(0.0631mmol)를 첨가한 후, 40℃에서 교반했다. 10분 후, 반응액 100μL를 산화액(0.1M 요오드, 2M 디메틸아민/THF 용액) 100μL와 혼합하여, 실온에서 5분간 교반했다. 반응 종료 후, 반응액에 10％ 티오황산 나트륨 수용액을 첨가하여, 유기층과 수층을 분리 후, 유기층을 80％ 아세토니트릴수(水)에 의해 20배 희석하여 HPLC로 분석했다(원료 Rt: 15.2분, 목적물 Rt: 17.6분, 변환 수율 91.0％, ODS 조건 2). 반응액 10μL에 암모니아수:에탄올＝3:1 혼합액 190μL를 첨가하여 55℃에서 18시간 교반했다. 반응액을 여과하고, 여액을 20％ 아세토니트릴수에 의해 50배 희석해 MS 측정을 행하여, 목적물의 생성을 확인했다.

ESI-MS(＋): 6848.4(LC/MS 조건 1)

Claims

식 [A-1]:
[화학식 1]

[식 중,
B^P는, 각각 동일 또는 다르고, 보호되어 있어도 되는 핵산 염기이며;
n은, 1∼50의 정수이고;
W는, 각각 동일 또는 다르고, 산소 원자 또는 유황 원자이며; 그리고
X는, 각각 동일 또는 다르고, 중성 조건하에서 탈리 가능한 기로 치환되어 있는 수산기, 1,1,3,3-테트라(C_1-6 알킬)구아니딜, C_1-6 알콕시, 디(C_1-6 알킬)아미노, 모노(염기성 조건하에서 탈리 가능한 기로 치환되어 있는 아미노-C_1-6 알킬)아미노, 디(염기성 조건하에서 탈리 가능한 기로 치환되어 있는 아미노-C_1-6 알킬)아미노, 또는 일반식 [2]:
[화학식 2]

(식 중,
＊는, P와의 결합 위치이며;
a는, 0∼2의 정수이고;
E는, CH₂, CH-A¹ 또는 N-A²이며;
A¹은, C_1-6 알킬, 염기성 조건하에서 제거 가능한 기로 치환되어 있는 모노(C_1-6 알킬)아미노-C_1-6 알킬, 디(C_1-6 알킬)아미노-C_1-6 알킬, 트리(C_1-6 알킬)암모니오-C_1-6 알킬, 염기성 조건하에서 제거 가능한 기로 치환되어 있는 아미노, 염기성 조건하에서 제거 가능한 기로 치환되어 있는 모노(C_1-6 알킬)아미노, 디(C_1-6 알킬)아미노, 트리(C_1-6 알킬)암모니오, 염기성 조건하에서 제거 가능한 기로 치환되어 있는 아미디노로 치환되어 있는 아미노, 또는 일반식 [3]:
[화학식 3]

(식 중,
＊는, E와의 결합 위치이고;
b는, 0∼2의 정수이며;
c는, 0 또는 1이고;
R¹¹은, C_1-6 알킬이며; 그리고
M은, CH₂, 산소 원자, 유황 원자 또는 N-(염기성 조건하에서 제거 가능한 기)이다)으로 표시되는 치환기이고; 그리고
A²는, C_1-6 알킬, 염기성 조건하에서 제거 가능한 기로 치환되어 있는 모노(C_1-6 알킬)아미노-C_1-6 알킬, 디(C_1-6 알킬)아미노-C_1-6 알킬, 트리(C_1-6 알킬)암모니오-C_1-6 알킬, 염기성 조건하에서 제거 가능한 기, 아릴 또는 헤테로아릴이다)
로 표시되는 치환기이며;
G는,
(1) 규소 치환기,
(2) 경우에 따라 치환되어 있는 C_1-18 알킬-카르보닐, 경우에 따라 치환되어 있는 C_1-18 알콕시-카르보닐, 장쇄(長鎖) 알킬-카르보닐, 또는 장쇄 알콕시-카르보닐,
(3) 1개∼5개의, 장쇄 알킬옥시 및/또는 장쇄 알케닐옥시로 치환되어 있는 벤조일, 또는
(4) 일반식 [7]:
[화학식 4]

(식 중,
＊는, T와의 결합 위치이고;
Z는,
(1) (유기 용매에 용해하는 가용성 폴리머)-옥시,
(2) (유기 용매에 용해하는 가용성 폴리머)-아미노,
(3) 장쇄 알킬옥시, 1개∼5개의 장쇄 알킬옥시 및/또는 장쇄 알케닐옥시로 치환되어 있는 벤조일, 또는 1개∼5개의 장쇄 알킬옥시 및/또는 장쇄 알케닐옥시로 치환되어 있는 벤질,
(4) 고상(固相) 담체, 또는
(5) 다음의 일반식 [8A]∼[8N]:
[화학식 5]

(식 중,
＊는, L과의 결합 위치이며;
j는, 0∼4의 정수이고;
k는, 0∼5의 정수이며;
R^8a는, 수소 원자 또는 C_1-6 알킬이고;
R^8b는, 각각 동일 또는 다르고, 장쇄 알킬이며;
R^8c는, 각각 동일 또는 다르고, 일반식 [9A]∼[9E]:
[화학식 6]

(식 중,
＊는, 결합 위치이고; 및
R⁹는 장쇄 알킬 및/또는 장쇄 알케닐이다)
로 표시되는 치환기이며;
R^8d는, 각각 동일 또는 다르고, 수소 원자, 할로겐, 1개∼13개의 할로겐으로 치환되어 있어도 되는 장쇄 알킬 또는 1개∼13개의 할로겐으로 치환되어 있어도 되는 장쇄 알킬옥시이며;
R^8e는
(1) 장쇄 알킬,
(2) 장쇄 알킬-카르보닐, 또는
(3) 1개∼5개의, 장쇄 알킬옥시 및/또는 장쇄 알케닐옥시로 치환되어 있는 벤조일이고; 그리고
R^8f는,
(1) 장쇄 알킬,
(2) 장쇄 알킬-카르보닐, 또는
(3) 장쇄 알케닐-카르보닐이다)
로 표시되는 치환기이며; 그리고
L은, 일반식 [10]:
[화학식 7]

(식 중,
＊는, Z와의 결합 위치이고;
＊＊는, T와의 결합 위치이며; 그리고
L¹은, 치환되어 있어도 되는 C_2-10 알킬렌 또는 치환되어 있어도 되는 C_6-10 아릴렌이다), 또는 일반식 [10-1]:
[화학식 8]

(식 중,
＊는, Z와의 결합 위치이고;
＊＊는, T와의 결합 위치이며; 그리고
L¹은, 치환되어 있어도 되는 C_1-10 알킬렌 또는 치환되어 있어도 되는 C_6-10 아릴렌이다)
로 표시되는 치환기이다)
로 표시되는 치환기이고; 그리고
T는, 단(單)결합 또는 일반식 [11]:
[화학식 9]

(식 중,
X 및 W는, 상기와 동의(同義)이며;
＊는, 상기 일반식 [4a]∼[4d]의 **O, *O 또는 *N과의 결합 위치이고;
＊＊는, G와의 결합 위치이며; 그리고
q는, 0∼10의 정수이다)
로 표시되는 치환기이지만, G가 규소 치환기인 경우, T는 단결합이다]의 화합물과, 식 [B-1]:
[화학식 10]

[식 중,
B^P, W, 및 X는, 상기와 동의이고, 그리고
p는, 1∼50의 정수이며;
L'는, OH, -O^-N^＋H(지방족 아민), -O^-N^＋H(환상 아민), 또는 -O^-N^＋H(방향족 아민)이고;
Q¹은, 산성 조건하에서 제거 가능한 기이다]
의 화합물을,
(1) 염기의 존재하, 인 시약 1, 인 시약 2, 및 오늄 시약으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 축합제로 처리하고, 그리고
(2) 산화제 및 유기 아민으로 처리하여
식 [C-1]:
[화학식 11]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, G, T, n, 및 p는, 상기와 동의이다]
의 화합물을 얻는 방법.
제 1 항에 있어서,
추가로, 식 [C-1]:
[화학식 12]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, G, T, n, 및 p는, 상기와 동의이다]
의 화합물을, 산, 또는 산 및 스캐빈저로 처리하여,
식 [C-0-1]:
[화학식 13]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, G, T, n, 및 p는, 상기와 동의이다]
의 화합물로 하고, 그리고
상기 식 [C-0-1]의 화합물과, 식 [B-0-1]:
[화학식 14]

[식 중, B^P, Q¹, W, 및 L'는, 상기와 동의이다]
의 화합물을,
(1) 염기의 존재하, 인 시약 1, 인 시약 2, 및 오늄 시약으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 축합제로 처리하며, 그리고 이어서
(2) 산화제 및 유기 아민으로 처리하여,
식 [C-1-1]:
[화학식 15]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, G, T, n, 및 p는, 상기와 동의이다]
의 화합물을 얻는 것을 포함하는, 방법.
제 1 항에 있어서,
추가로, 식 [C-1]:
[화학식 16]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, G, T, n, 및 p는, 상기와 동의이다]
의 화합물을, 수산기의 보호기의 제거 조건으로 처리하여,
식 [C-0-2]:
[화학식 17]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, n, 및 p는, 상기와 동의이다]
의 화합물을 얻고,
(1) 식 [P-1]:
[화학식 18]

[식 중, W는, 산소 원자 또는 유황 원자이며, 그리고 R¹ 및 R²는, 각각 동일 또는 다르고, H, 경우에 따라 치환되어 있는 C_1-6 알킬, 경우에 따라 치환되어 있는 페닐, 및 PH(＝O)-OH로 이루어지는 군으로부터 선택된다]
의 화합물 및 염기로 처리하며, 그리고 이어서
(2) 가수분해 용액으로 처리하여,
식 [C-0-2-1]:
[화학식 19]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, L', n, 및 p는, 상기와 동의이다]
의 화합물을 얻는 것을 포함하는, 방법.
제 3 항에 있어서,
추가로, 식 [C-0-2-1]:
[화학식 20]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, L', n, 및 p는, 상기와 동의이다]
의 화합물과, 식 [A-0-1]:
[화학식 21]

[식 중, B^P, G, 및 T는, 상기와 동의이다]
의 화합물을,
(1) 염기의 존재하, 인 시약 1, 인 시약 2, 및 오늄 시약으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 축합제로 처리하고, 그리고 이어서
(2) 산화제 및 유기 아민으로 처리하여,
식 [C-1-2]:
[화학식 22]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, G, T, n, 및 p는, 상기와 동의이다]
의 화합물을 얻는 것을 포함하는, 방법.
제 1 항에 있어서,
추가로, 식 [B-1-0]:
[화학식 23]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, 및 p는, 상기와 동의이다]
의 화합물을,
(1) 식 [P-1]:
[화학식 24]

[식 중, W, R¹, 및 R²는, 상기와 동의이다]
의 화합물 및 염기로 처리하고, 그리고 이어서
(2) 가수분해 용액으로 처리하여,
식 [B-1]:
[화학식 25]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, L', 및 p는, 상기와 동의이다]
의 화합물을 얻는 것을 포함하는, 방법.
제 1 항에 있어서,
추가로, 식 [A-0]:
[화학식 26]

[식 중, B^P, Q¹, W, X, G, T, 및 n은, 상기와 동의이다]
의 화합물을, 산, 또는 산 및 스캐빈저로 처리하여,
식 [A-1]:
[화학식 27]

[식 중, B^P, W, X, G, T, 및 n은, 상기와 동의이다]
의 화합물을 얻는 것을 포함하는, 방법.
제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
G가, 하기의 식:
[화학식 28]

[식 중, *는 T와의 결합 위치를 나타낸다.]
으로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
T가 단결합인, 방법.
식 [B-1]
[화학식 29]

[식 중,
B^P가, 각각 동일 또는 다르고, 보호되어 있어도 되는 핵산 염기이며,
Q¹이, 트리틸 또는 디메톡시트리틸이고,
L'가, -O^-N^＋H(CH₂CH₃)₃, 또는 -O^-(HDBU)^＋이며,
W가, O이고, 그리고
p가, 2∼20의 정수이다]로 표시되는 화합물.
제 8 항에 있어서,
((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-((((2S,6R)-6-(6-벤즈아미드-9H-푸린-9-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트,
트리에틸암모늄((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-((((2S,6R)-6-(6-벤즈아미드-9H-푸린-9-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트,
((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-((((2S,6R)-4-((((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-((디메틸아미노)(((2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)포스포릴)모르폴린-2-일)(디메틸아미노)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일)메톡시)포스포릴)-6-(6-벤즈아미드-9H-푸린-9-일)모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트,
트리에틸암모늄((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-((((2S,6R)-4-((((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-((디메틸아미노)(((2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)포스포릴)모르폴린-2-일)(디메틸아미노)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일)메톡시)포스포릴)-6-(6-벤즈아미드-9H-푸린-9-일)모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트,
((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-((((2S,6R)-4-((((2S,6R)-6-(6-벤즈아미드-9H-푸린-9-일)-4-((((2S,6R)-6-(6-벤즈아미드-9H-푸린-9-일)-4-((((2S,6R)-6-((2-시아노에톡시)-2-(2-페녹시아세트아미드)-9H-푸린-9-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)-6-((2-시아노에톡시)-2-(2-페녹시아세트아미드)-9H-푸린-9-일)모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트,
트리에틸암모늄((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-((((2S,6R)-4-((((2S,6R)-6-(6-벤즈아미드-9H-푸린-9-일)-4-((((2S,6R)-6-(6-벤즈아미드-9H-푸린-9-일)-4-((((2S,6R)-6-((2-시아노에톡시)-2-(2-페녹시아세트아미드)-9H-푸린-9-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)-6-((2-시아노에톡시)-2-(2-페녹시아세트아미드)-9H-푸린-9-일)모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트,
((2S,6R)-4-((((2S,6R)-4-((((2S,6R)-4-((((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)-6-((2-시아노에톡시)-2-(2-페녹시아세트아미드)-9H-푸린-9-일)모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)-6-((2-시아노에톡시)-2-(2-페녹시아세트아미드)-9H-푸린-9-일)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트,
트리에틸암모늄((2S,6R)-4-((((2S,6R)-4-((((2S,6R)-4-((((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)-6-((2-시아노에톡시)-2-(2-페녹시아세트아미드)-9H-푸린-9-일)모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)-6-((2-시아노에톡시)-2-(2-페녹시아세트아미드)-9H-푸린-9-일)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트,
((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-((((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트,
트리에틸암모늄((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-((((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트,
((2S,6R)-4-((디메틸아미노)(((2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트,
트리에틸암모늄(2S,6R)-4-((디메틸아미노)(((2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트,
((2S,6R)-4-((디메틸아미노)(((2S,6R)-4-((디메틸아미노)(((2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)메톡시)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트,
트리에틸암모늄((2S,6R)-4-((디메틸아미노)(((2S,6R)-4-((디메틸아미노)(((2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)메톡시)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트,
((2S,6R)-4-((디메틸아미노)(((2S,6R)-4-((디메틸아미노)(((2S,6R)-4-((디메틸아미노)((((2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)메톡시)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)메톡시)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트,
트리에틸암모늄((2S,6R)-4-((디메틸아미노)(((2S,6R)-4-((디메틸아미노)(((2S,6R)-4-((디메틸아미노)((((2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)메톡시)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)메톡시)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트,
1,8-디아자비시클로(5.4.0)-7-운데세늄((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-((((2S,6R)-4-((((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-((디메틸아미노)(((2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메톡시)포스포릴)모르폴린-2-일)(디메틸아미노)포스포릴)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)모르폴린-2-일)메톡시)포스포릴)-6-(6-벤즈아미드-9H-푸린-9-일)모르폴린-2-일)메톡시)(디메틸아미노)포스포릴)모르폴린-2-일)메틸포스포네이트, 및
식 [B-0-1]:
[화학식 30]

[식 중,
B^P가, 보호되어 있어도 되는 핵산 염기이고,
Q¹이, 트리틸 또는 디메톡시트리틸이며,
L'가, -O^-(HDBU)^＋이고, 그리고
W가, O이다.]
의 화합물.
제 10 항에 있어서,
1,8-디아자비시클로(5.4.0)-7-운데세늄((2S,6R)-6-(6-벤즈아미드-9H-푸린-9-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메틸포스포네이트,
1,8-디아자비시클로(5.4.0)-7-운데세늄((2S,6R)-6-(4-벤즈아미드-2-옥소피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메틸포스포네이트,
1,8-디아자비시클로(5.4.0)-7-운데세늄((2S,6R)-6-(5-메틸-2,4-디옥소-3,4-디히드로피리미딘-1(2H)-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메틸포스포네이트,
1,8-디아자비시클로(5.4.0)-7-운데세늄((2S,6R)-6-((2-시아노에톡시)-2-(2-페녹시아세트아미드)-9H-푸린-9-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메틸포스포네이트, 및
1,8-디아자비시클로(5.4.0)-7-운데세늄((2S,6R)-6-(2-(2-페닐아세트아미드)-6-((4-(피발로일옥시)벤질)옥시)-9H-푸린-9-일)-4-트리틸모르폴린-2-일)메틸포스포네이트로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 식 [B-0-1]의 화합물.