CN108602841B - 新的铵衍生物、它们的制备方法以及含有它们的药物组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明公开式(I)化合物，在式(I)中，R1、R2、R3、R4、R5、R6和Y如说明书中所定义。本发明还公开药物。
Description
本发明涉及新的铵衍生物、其制备方法以及含有它们的药物组合物。
本发明的化合物是新的并且在细胞凋亡和肿瘤学领域具有非常有价值的药理学特征。
细胞凋亡或程序性细胞死亡是对胚胎发育和组织稳态维持至关重要的生理过程。
凋亡型细胞死亡涉及形态学变化(例如细胞核缩合、DNA片段化)和生化现象，例如半胱天冬酶的激活，其导致细胞关键结构组分的损伤，从而诱导其解体和死亡。细胞凋亡过程的调节是复杂的，涉及多种细胞内信号通路的激活或抑制(Cory等，Nature ReviewCancer 2002,2,647－656)。
细胞凋亡的失调涉及某些病理学。细胞凋亡的增加与神经退行性疾病有关，例如帕金森病、阿尔茨海默病和局部缺血。相反，细胞凋亡实施方面的缺陷在癌症及其化学抗性、自身免疫疾病、炎性疾病和病毒感染的发展中起重要作用。因此，细胞凋亡的缺乏是癌症的表型特征之一(Hanahan等，Cell 2000,100,57－70)。
Bcl-2家族的抗凋亡蛋白与许多病理学相关。Bcl-2家族蛋白参与了多种类型的癌症，例如结肠癌、乳腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、膀胱癌、卵巢癌、前列腺癌、慢性淋巴性白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、急性髓性白血病、胰腺癌等。Bcl-2家族的抗凋亡蛋白的过度表达涉及肿瘤发生、对化疗的抗性和受癌症影响的患者的临床预后。值得注意的是，抗凋亡Bcl-2家族成员Mcl-1在各种类型的癌症中均有过度表达(Beroukhim等，Nature 2010,899－905)。因此，对于能够抑制Bcl-2家族蛋白的抗凋亡活性的化合物存在治疗上的需求。
最近，噻吩并嘧啶衍生物已被描述为可用于治疗癌症的有效的Mcl-1抑制剂(WO2015/097123)。
本发明提供了具有促凋亡特性的新型铵衍生物，使得可将它们用于与细胞凋亡缺陷有关的病理学中，例如，用于治疗癌症以及免疫和自身免疫疾病。此外，本发明化合物具有高溶解性以及显著的和意想不到的药理作用，这可能使其成为非常有价值的肿瘤学候选化合物。
更具体而言，本发明涉及式(I)化合物：
其中：
◆Y代表-NH-基团或氧原子，
◆R1代表直链或支链(C1-C6)烷基、直链或支链(C2-C6)链烯基、直链或支链(C2-C6)炔基、直链或支链(C1-C6)烷氧基、-S-(C1-C6)烷基、直链或支链(C1-C6)多卤代烷基、羟基、羟基(C1-C6)烷基、氰基、-NR9R9’、-Cy1或卤素原子，
◆R2、R3和R4彼此互相独立代表氢原子、卤素原子、直链或支链(C1-C6)烷基、直链或支链(C2-C6)链烯基、直链或支链(C2-C6)炔基、直链或支链(C1-C6)多卤代烷基、羟基、羟基(C1-C6)烷基、直链或支链(C1-C6)烷氧基、-S-(C1-C6)烷基、氰基、硝基、-烷基(C0-C6)-NR9R9’、-O-烷基(C1-C6)-NR9R9’、-C(O)-OR9、-O-C(O)-R9、-C(O)-NR9R9’、-NR9-C(O)-R9’、-NR9-C(O)-OR9’、-烷基(C1-C6)-NR9-C(O)-R9’、-SO2-NR9R9’、-SO2-烷基(C1-C6)，
◆R5代表氢原子，
◆R6代表基团
◆R7代表氢原子或直链或支链(C1-C6)烷基，
◆R8代表-O-P(O)(O-)(O-)基团、-O-P(O)(O-)(OR10)基团、-O-P(O)(OR10)(OR10’)基团、-O-SO2-O-基团、-O-SO2-OR10基团、-Cy2、-O-C(O)-R9基团、-O-C(O)-OR9基团或-O-C(O)-NR9R9’基团，
◆R9和R9’彼此互相独立代表氢原子、直链或支链(C1-C6)烷基或直链或支链氨基(C1-C6)烷基，
◆R10和R10’彼此互相独立代表氢原子、直链或支链(C1-C6)烷基或芳基烷基(C1-C6)基团，
◆Cy1和Cy2彼此互相独立代表环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，
如此定义的铵可能以两性离子形式存在，或者具有单价阴离子平衡离子，应当理解：
-“芳基”是指苯基或萘基，
-“杂芳基”是指由5－10个环成员组成的任何单环或双环基团，其具有至少一个芳族部分并含有1－3个选自氧、硫和氮的杂原子，
-“环烷基”是指含有3－10个环成员的任何单环或双环非芳族碳环基团，
-“杂环烷基”是指任何含有3－10个环成员并含有1－3个选自氧、硫和氮的杂原子的单环或双环非芳族碳环基团，其可以包括稠合、桥接或螺环系统，
如此定义的芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基以及烷基、链烯基、炔基、烷氧基可能被1－4个选自下列的基团取代：直链或支链(C1-C6)烷基、直链或支链(C2-C6)链烯基、直链或支链(C2-C6)炔基、直链或支链(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)烷基-S-、羟基、氧代(或适当的N-氧化物)、硝基、氰基、-C(O)-OR’、-O-C(O)-R’、-C(O)-NR’R”、-NR’R”、-(C＝NR’)-OR”、直链或支链(C1-C6)多卤代烷基、三氟甲氧基或卤素，应当理解R’和R”彼此互相独立代表氢原子或直链或支链(C1-C6)烷基，
它们的对映体、非对映异构体和阻转异构体及其与可药用的酸或碱形成的加成盐。
在可药用的酸中，可以不加任何限定的提及的为：盐酸、氢溴酸、硫酸、膦酸、乙酸、三氟乙酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富马酸、酒石酸、马来酸、柠檬酸、抗坏血酸、草酸、甲磺酸、樟脑酸等。
在可药用的碱中，可以不加任何限定的提及的为：氢氧化钠、氢氧化钾、三乙胺、叔丁胺等。
根据它们的电荷，式(I)化合物可以具有两性离子形式，表示具有正电荷和负电荷的中性分子。对于本发明的化合物而言，两性离子形式的示例可以如下：
根据它们的电荷，式(I)化合物可以含有一种可药用的单价阴离子平衡离子M1 -，其可以选自溴离子、氯离子、碘离子、乙酸根、三氟乙酸根、苯甲酸根、甲磺酸根、甲苯磺酸根、三氟甲磺酸根等。对于本发明的化合物而言，示例可以如下：
根据它们的电荷，式(I)化合物可以含有一种可药用的单价阳离子平衡离子M2 +，其可以选自钠、钾、锂、铵、氨基酸等。对于本发明的化合物而言，示例可以如下：
根据它们的电荷，式(I)化合物可以含有一种可药用的二价阳离子平衡离子M3 2+，其可以选自钙、镁、铝、氨基酸等，或者含有二种可药用的单价阳离子平衡离子M2 +，其可以是相同或不同的。对于本发明的化合物而言，示例可以如下：
Y优选代表氧原子。
优选，至少一个选自R2、R3和R4的基团不代表氢原子。
在本发明的另一个实施方案中，优选的可能性包括式(I-a)化合物：
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6和Y如式(I)所定义。
在优选的本发明化合物中，R1代表直链或支链(C1-C6)烷基或卤素原子。更优选，R1代表甲基、乙基、氯原子或溴原子。甚至更优选，R1表示乙基或溴原子。更特别地，R1表示溴原子。优选，R1表示甲基。
阻转异构体是由于围绕单键的旋转受阻而产生的立体异构体，其中由于空间应变或其它原因引起的能量差异对旋转产生了障碍，该障碍的高度足以使得能够分离单独的构象异构体(Bringmann等，Angew.Chem.Int.Ed.2005,44,5384－5427)。对于本发明的化合物而言，阻转异构体如下：
优选的阻转异构体为(5Sa)。
优选，R2代表卤素原子、羟基、直链或支链(C1-C6)烷氧基。更优选，R2代表氯原子。
优选R3和R4代表氢原子。在一个优选的实施方案中，对(R1,R4)的取代基是相同的，对(R2,R3)的取代基也是相同的。在本发明优选的化合物中，对(R1,R4)的取代基是相同的，代表(C1-C6)烷基，优选甲基，而对(R2,R3)的取代基是相同的，代表氢原子或卤原子，优选氯原子。
优选，R6代表基团
更优选，R6代表基团
在本发明的优选化合物中，R7代表甲基或氢原子。更优选R7代表氢原子。
优选，R8代表-O-P(O)(O-)(OR10)基团，其中优选R10代表氢原子、苄基或甲基。在本发明另一个优选的实施方案中，R8代表-O-SO2-O-基团。优选R8代表5-甲基-2-氧代-1,3-间二氧杂环戊烯-4-基；-O-C(O)-CH3基团；-O-C(O)-tBu基团；-O-C(O)-CH2-NH2基团；-O-C(O)-CH[CH(CH3)2]-NH2基团；-O-C(O)-O-CH2CH3基团；或-O-C(O)-N(CH2CH3)2基团。甚至更优选，R8代表-O-P(O)(O-)(OH)基团。
本发明优选的化合物为：
-{4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐；
-{4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸苄基酯；
-{4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸甲酯；
-{4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-乙基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐；
-{4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐；
-{4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸苄基酯；
-{4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸甲酯；
-N-[(5Sa)-5-{3-氯代-4-[2-(4-{[(羟基次膦酸根合(phosphinato))氧基]甲基}-4-甲基哌嗪-4-
-1-基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯基丙氨酸；
-{4-[2-(4-{4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2,6-二氯代-3,5-二甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐；
-{4-[2-(4-{4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-3,5-二甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐；
-{[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基](二甲基)铵基}甲基磷酸氢盐；
-1-{4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}乙基磷酸氢盐；
-1-{4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}乙基磷酸氢盐；
-{1-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-4-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐；
-{1-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-4-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐；
-{4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基硫酸盐；
-1-[(乙酰基氧基)甲基]-4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
；
-4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-{[(乙氧基羰基)氧基]甲基}-1-甲基哌嗪-1-
；
-4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-{[(二乙基氨基甲酰基)氧基]甲基}-1-甲基哌嗪-1-
；
-4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-[(甘氨酰基氧基)甲基]-1-甲基哌嗪-1-
；
-4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-{1-[(二乙基氨基甲酰基)氧基]乙基}-1-甲基哌嗪-1-
；
-4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-甲基-1-[(5-甲基-2-氧代-1,3-间二氧杂环戊烯-4-基)甲基]哌嗪-1-
；
-4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-甲基-1-[(L-缬氨酰基)甲基]哌嗪-1-
；
-4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-{[(2,2-二甲基丙酰基)氧基]甲基}-1-甲基哌嗪-1-
；
-1-[(乙酰基氧基)甲基]-4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
；
-4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-{[(乙氧基羰基)氧基]甲基}-1-甲基哌嗪-1-
；
-4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-{[(二乙基氨基甲酰基)氧基]甲基}-1-甲基哌嗪-1-
；
-4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-[(甘氨酰基氧基)甲基]-1-甲基哌嗪-1-
；
-4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-{1-[(二乙基氨基甲酰基)氧基]乙基}-1-甲基哌嗪-1-
；
-4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-甲基-1-[(5-甲基-2-氧代-1,3-间二氧杂环戊烯-4-基)甲基]哌嗪-1-
；
-4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-甲基-1-[(L-缬氨酰基)甲基]哌嗪-1-
；
-4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-{[(2,2-二甲基丙酰基)氧基]甲基}-1-甲基哌嗪-1-
。
在本发明优选的化合物中，可以提及的为：
-{4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐；
-{4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸苄基酯；
-{4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸甲酯；
-{4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-乙基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐；
-{4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐；
-{4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸苄基酯；
-{4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸甲酯；
-N-[(5Sa)-5-{3-氯代-4-[2-(4-{[(羟基次膦酸根合)氧基]甲基}-4-甲基哌嗪-4-
-1-基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯基丙氨酸；
-{4-[2-(4-{4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2,6-二氯代-3,5-二甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐；
-{4-[2-(4-{4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-3,5-二甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐；
-{[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基](二甲基)铵基}甲基磷酸氢盐；
-1-{4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}乙基磷酸氢盐；
-1-{4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}乙基磷酸氢盐；
-{1-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-4-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐；
-{1-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-4-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐。
本发明优选的化合物为：
-{4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐；
-{4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐；
-{[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基](二甲基)铵基}甲基磷酸氢盐。
本发明还涉及制备式(I)化合物的方法，该方法特征在于采用式(II)化合物作为原料：
其中R1、R2、R3、R4、R5和Y如式(I)所定义，R6’代表-N(CH3)2基团或4-甲基-哌嗪基，
使得式(II)化合物经过保护羧酸官能团的反应，获得式(III)化合物：
其中R1、R2、R3、R4、R6’和Y如上文所定义，T代表羧酸官能团的保护基团，例如对-甲氧基苄基，
使式(III)化合物与式(IV)化合物偶合：
其中R7和R8如式(I)所定义，
获得式(V)化合物：
其中R1、R2、R3、R4、T和Y如上文所定义，R6如式(I)所定义，
然后使得式(V)化合物进行羧酸官能团的脱保护反应，
获得式(I)化合物，其可根据常规分离技术纯化，如果需要，可以将其转化成与可药用的酸或碱的加成盐，然后根据常规分离技术将其任选分离为其异构体，
应当理解，在上述方法的过程中认为合适的任何时刻，起始原料或合成中间体的某些基团(羟基、氨基......)均可以被保护，随后脱保护和官能团化，这可以根据合成的需要进行。
式(II)和(IV)化合物既可以获自商业，或者也可以由本领域技术人员采用文献中描述的常规化学反应获得。
本发明化合物的药理学研究表明它们具有促凋亡特性。在癌细胞中重新激活凋亡过程的能力对于癌症以及免疫和自身免疫疾病的治疗具有重要的治疗意义。
更特别地是，本发明的化合物可用于治疗化疗或放疗抗性的癌症。
在预期的癌症治疗中，可以不加任何限定地提及对下列癌症的治疗：膀胱癌、脑癌、乳腺癌和子宫癌、慢性淋巴性白血病、结肠癌、食道癌和肝癌、淋巴母细胞白血病、急性髓性白血病、淋巴瘤、黑素瘤、恶性血液病、骨髓瘤、卵巢癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、胰腺癌和小细胞肺癌。
本发明还涉及药物组合物，其包含至少一种式(I)化合物以及与之组合的一种或多种可药用的赋形剂。
在本发明的药物组合物中，可以更具体地提及适用于下列途径给药的那些组合物：口服、肠胃外、鼻腔、经皮或透皮、直肠、舌下、眼部或呼吸道，特别是片剂或糖衣丸、舌下片、小袋、小包(parquets)、胶囊剂、舌下或直肠给药剂型(glossettes)、锭剂、栓剂、霜剂、软膏、皮肤用凝胶以及可饮用或可注射的安瓿。
剂量取决于患者的性别、年龄和体重、给药途径、治疗适应症的性质或任何相关的治疗，在一次或多次给药中剂量范围为每24小时0.01mg至1g。
此外，本发明还涉及式(I)化合物与选自下列抗癌药物的组合产品：基因毒性药物、有丝分裂毒物、抗代谢物、蛋白酶体抑制剂、激酶抑制剂和抗体，还涉及包含该类型组合产品的药物组合物以及它们在生产用于治疗癌症的药物中的用途。
有利地是，本发明涉及式(I)化合物与EGFR抑制剂的组合产品，还涉及包含该类型组合产品的药物组合物。
在另一个实施方案中，本发明涉及式(I)化合物与mTOR/PI3K抑制剂的组合产品，还涉及包含该类型组合的药物组合物。
在一个优选的实施方案中，本发明涉及式(I)化合物与MEK抑制剂的组合产品，还涉及包含该类型组合的药物组合物。
优选，本发明涉及式(I)化合物与HER2抑制剂的组合，还涉及包含该类型组合产品的药物组合物。
有利地，本发明涉及式(I)化合物与RAF抑制剂的组合产品，还涉及包含该类型产品组合的药物组合物。
在另一个实施方案中，本发明涉及式(I)化合物与EGFR/HER2抑制剂的组合产品，还涉及包含该类型组合产品的药物组合物。
在一个优选的实施方案中，本发明涉及式(I)化合物与紫杉烷的组合产品，还涉及包含该类型组合产品的药物组合物。
在另一个实施方案中，本发明涉及式(I)化合物与蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂或烷化剂的组合产品，还涉及包含该类型组合产品的药物组合物。
式(I)化合物与抗癌药物的组合产品可以同时给药或依次给药。给药途径优选是口服途径，相应的药物组合物可以允许活性成分的瞬时或延迟释放。此外，所述组合产品的化合物可以以两种不同的药物组合物的形式给药，每种药物组合物含有一种活性成分，或者可以以单一药物组合物的形式给药，其中活性成分为混合形式。
本发明化合物还可以与放射疗法组合用于治疗癌症。
最后，本发明化合物可以与单克隆抗体或其片段连接或者与支架蛋白连接，所述支架蛋白可以与单克隆抗体相关或不相关。
抗体片段必须被理解为Fv、scFv、Fab、F(ab')2、F(ab')、scFv-Fc型或双抗体的片段，其通常与它们的起源抗体具有相同的结合特异性。根据本发明，本发明的抗体片段可以通过下列方法从抗体开始获得：例如通过酶(胃蛋白酶或木瓜蛋白酶)的消化和/或通过化学还原裂解二硫键的方法。在另一种方式中，本发明中包含的抗体片段可以通过本领域技术人员熟知的基因重组技术获得，或者通过例如自动肽合成仪(例如由company AppliedBiosystems等提供)的方法通过肽合成获得。
可以与单克隆抗体相关或不相关的支架蛋白应当理解为是指含有或不含免疫球蛋白折叠并且产生类似于单克隆抗体的结合能力的蛋白质。本领域技术人员知道如何选择蛋白质支架。更特别地是，当选择时，已知这种支架应当具有如下几个特征(Skerra,J.Mol.Recogn.2000,13,167－187)：系统发育良好保存(phylogenetically goodconservation)，具有众所周知的三维分子组织的强健构架(例如晶体学或NMR)，体积小，没有或仅有较低程度的翻译后修饰，易于生产、表达和纯化。这种蛋白支架可以是但不限于选自下列基团的结构：纤连蛋白并优选第十纤连蛋白III型结构域(FNfn10)、脂质运载蛋白、anticalin(Skerra,J.Biotechnol.2001,74,257－75)、源自葡萄球菌蛋白A的结构域B的蛋白Z衍生物、硫氧还蛋白A或具有重复结构域的任何蛋白，例如“锚定蛋白重复域”(Kohl等，PNAS 2003，100，1700－1705)，“犰狳(armadillo)重复域”、“富含亮氨酸的重复域”或“三角四肽重复域(tetratricopeptide)”。还可以提及的包括源自毒素(例如蝎子、昆虫、植物或软体动物毒素(mollusc toxin))的支架衍生物或神经元一氧化氮合酶(PIN)的蛋白抑制剂。
以下制备和实施例说明了本发明，但不以任何方式限制本发明。
通用方法
所有获自商业途径的试剂均无需进一步纯化。无水溶剂获自商业途径，无需进一步干燥即可使用。
快速色谱在使用预填充硅胶柱(
Rf Gold High Performance)的ISCOCombiFlash Rf 200i进行。
薄层色谱采用涂布Merck Type 60F254硅胶的5×10cm板进行。
微波加热在Anton Parr MonoWave或CEM Discover仪器中进行。
制备型HPLC纯化在Armen Spot液相色谱系统上进行，除非另有说明，该系统采用
10μM C18,250mm×50mm i.d.柱，使用25mM NH4HCO3水溶液和MeCN作为洗脱液，流速为118mL min-1，以UV二极管阵列检测(210－400nm)。
分析型LC-MS：本发明化合物可以通过高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)在使用Agilent 6100四极LC/MS的Agilent HP1200上表征，以正离子或负离子电喷雾离子化模式操作。分子量扫描范围为100至1350。在210nm和254nm处进行平行UV检测。样品以1mM乙腈溶液或四氢呋喃/H2O(1:1)溶液的形式提供，5μL循环注射(loop injection)。LCMS分析在两台仪器上进行，其中一台用碱性洗脱液操作，另一台用酸性洗脱液操作。
碱性LCMS：Gemini-NX,3μm,C18,50mm×3.00mm i.d.柱，温度为23℃，流速为1mLmin-1，使用5mM碳酸氢铵(溶剂A)和乙腈(溶剂B)，梯度从100％溶剂A开始至100％溶剂B结束，持续各种/一定的时间。
酸性LCMS：ZORBAX Eclipse XDB-C18,1.8μm,50mm×4.6mm i.d.柱，温度为40℃，流速为1mL.min-1，采用0.02％v/v甲酸水溶液(溶剂A)和0.02％v/v甲酸乙腈溶液(溶剂B)，梯度从100％溶剂A开始至100％溶剂B结束，持续各种/一定的时间。
1H-NMR分析在Bruker Avance III 500MHz光谱仪和Bruker Avance III 400MHz光谱仪上进行，采用DMSO-d6或CDCl3作为溶剂。1H NMR数据为δ值的形式，表示为百万分之几(ppm)，采用溶剂残留峰(DMSO-d6为2.50ppm，CDCl3为7.26ppm)作为内标。裂解模式指定为：s(单峰)、d(双重峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、quint(五重峰)、m(多重峰)、br s(宽单重峰)、dd(双重双重峰)、td(双峰三重峰)、dt(三重双重峰)、ddd(双重双重双重峰)。
气相色谱和低分辨率质谱的组合在Agilent 6850气相色谱仪和Agilent 5975C质谱仪上进行，使用15m×0.25mm柱，采用0.25μm HP-5MS涂层，氦气作为载气。离子源：EI+，70eV，230℃，四极：150℃，界面：300℃。
HRMS在Shimadzu IT-TOF上测定，离子源温度200℃，ESI+/-，离子化电压：(+/-)4.5kV。质量分辨率min.10000。
元素分析采用Thermo Flash EA 1112元素分析仪进行。
实施例1:{4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐
步骤A：(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸4-甲氧基苄基酯
将1.75g的(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸(2mmol,1eq.；根据WO2015/097123合成)、1.05g三苯膦(4mmol,2eq.)和0.5mL 4-甲氧基苄基醇(4mmol,2eq.)溶于20mL无水甲苯，然后3分钟内加入0.92g偶氮二甲酸二叔丁基酯(4mmol,2eq.)。将获得的混合物于50℃搅拌直到观察不到进一步的转化。将反应混合物直接注入预处理的120g硅胶柱，然后将其通过快速色谱纯化，采用乙酸乙酯/甲醇(含有1.2％NH3)作为洗脱液，获得白色结晶。1H NMR(400MHz,CDCl3)：8.63(d,1H),8.45(s,1H),7.68(dd,1H),7.59(d,1H),7.45(t,1H),7.28(s,1H),7.21-7.13(m,5H),7.10-7.04(m,2H),6.99-6.80(m,7H),6.24(d,1H),5.68(dd,1H),5.25-5.16(m,3H),5.09(d,1H),4.29-4.18(m,2H),3.88(s,3H),3.81(s,3H),3.38(dd,1H),2.96-2.89(m,2H),2.69(br s,4H),2.56(dd,2H),2.46(br s,4H),2.28(s,3H),1.90(s,3H)
步骤B：[4-[2-[2-氯代-4-[6-(4-氟苯基)-4-[(1R)-2-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]-1-[[2-[[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]甲基]-2-氧代-乙氧基]-(5Sa)-噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-3-甲基-苯氧基]乙基]-1-甲基-哌嗪-1-
-1-基]甲基磷酸叔丁基酯
将249mg(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸4-甲氧基苄基酯(0.25mmol,1eq.)、194mg氯代甲基磷酸二-叔丁基酯(0.75mmol,3eq.)、112mg碘化钠(0.75mmol,3eq.)和62mg NaHCO3(0.75mmol,3eq.)在3mL无水丙酮中于室温下搅拌过夜(避光)。向反应混合物中加入2mL水，将其直接注入到RP18柱上，采用乙腈/5mM NH4HCO3作为洗脱液，梯度洗脱。冷冻干燥后，获得白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)：8.64(d,1H),8.46(s,1H),7.68(dd,1H),7.59(d,1H),7.45(t,1H),7.32(d,1H),7.21-7.16(m,5H),7.11-7.05(m,2H),6.98(t,2H),6.89-6.79(m,5H),6.22(d,1H),5.66(dd,1H),5.20(dd,2H),5.15(dd,2H),5.08(d,1H),4.26-4.16(m,2H),3.88(s,3H),3.81(s,3H),3.70-3.65(m,2H),3.38(dd,2H),3.32(br s,1H),3.19-3.09(m,1H),3.15(s,3H),3.00(t,2H),2.98-2.91(m,2H),2.55(dd,1H),1.90(s,3H),1.87(br s,4H),1.46(s,9H)
步骤C：实施例1
向溶于4mL无水二氯甲烷的150mg[4-[2-[2-氯代-4-[6-(4-氟苯基)-4-[(1R)-2-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]-1-[[2-[[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]甲基]-2-氧代-乙氧基]-(5Sa)-噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-3-甲基-苯氧基]乙基]-1-甲基-哌嗪-1-
-1-基]甲基磷酸叔丁基酯(0.13mmol,1eq.)中加入0.5mL三氟乙酸(6.6mmol,50eq.)，将混合物于室温下搅拌直到观察不到进一步的转化。将反应混合物蒸发至干，然后将其通过反相色谱纯化，采用乙腈/5mM NH4HCO3作为洗脱液。冷冻干燥后，获得为白色固体的实施例1。C48H48ClFN6O10PS的HRMS实测值：984.2485；实测值471.1189(M+2H)
实施例2：{4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸苄基酯
步骤A：[4-(2-{2-氯代-4-[6-(4-氟苯基)-4-{[(2R)-1-[(4-甲氧基苄基)氧基]-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)-1-氧代丙-2-基]氧基}-(5Sa)-噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-3-甲基苯氧基}乙基)-1-甲基哌嗪-1-
-1-基]甲基磷酸苄基酯
将995mg(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸4-甲氧基苄基酯(1mmol,1eq.)和392mg氯代甲基磷酸二苄基酯(1.2mmol,1.2eq.)在5mL无水乙腈中于80℃搅拌直到观察不到进一步的转化。将反应混合物直接注入预处理的80g硅胶柱，然后通过快速色谱纯化，采用乙酸乙酯/甲醇(含有1.2％NH3)作为洗脱液。获得为灰白色结晶的产物。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)：8.66(d,1H),8.54(s,1H),7.52(d,1H),7.49(dd,1H),7.45(tm,1H),7.34-7.2(m,5H),7.29(m,2H),7.24(d,1H),7.22(m,2H),7.19(m,1H),7.15(m,2H),7.14(m,1H),7.12(d,1H),7.04(m,1H),7.02(tm,1H),6.88(d,2H),6.74(t,1H),6.21(d,1H),5.55(dd,1H),5.23(d,1H),5.17(d,1H),5.10(d,1H),5.01(d,1H),4.86(d,2H),4.75(d,2H),4.26-4.14(m,2H),3.74(s,3H),3.72(s,3H),3.38-3.22(m,4H),3.22-2.54(m,2H),2.96-2.74(br s,4H),2.93(s,3H),2.87(t,2H),1.84(s,3H)
步骤B：实施例2
将435mg[4-(2-{2-氯代-4-[6-(4-氟苯基)-4-{[(2R)-1-[(4-甲氧基苄基)氧基]-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)-1-氧代丙-2-基]氧基}-(5Sa)-噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-3-甲基苯氧基}乙基)-1-甲基哌嗪-1-
-1-基]甲基磷酸苄基酯(0.36mmol,1eq.)和560μL三氟乙酸(7.28mmol,20eq.)于室温下搅拌直到观察不到进一步的转化。将反应混合物蒸发至干，然后将其通过反相色谱纯化，采用乙腈/5mM NH4HCO3作为洗脱液。冷冻干燥后，获得为白色固体的实施例2。C55H53ClFN6O10PS的HRMS实测值：1074.2954；实测值538.1565(M+2H)
在下面的实施例3和4中，方法如实施例1所述，采用适当的式(IV)的氯化物衍生物和适当的式(II)的噻吩并嘧啶化合物。
实施例3：{4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸甲酯
实施例4：{4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-乙基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐
实施例5：{4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐
步骤A：(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-溴-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸4-甲氧基苄基酯
将1.75g(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-溴-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸(2mmol,1eq.；根据WO2015/097123合成)、1.05g三苯膦(4mmol,2eq.)和0.5mL 4-甲氧基苄基醇(4mmol,2eq.)溶于20mL无水甲苯，然后3分钟内加入0.92g偶氮二甲酸二叔丁基酯(4mmol,2eq.)。将获得的混合物于50℃搅拌直到观察不到进一步的转化。将反应混合物直接注入预处理的120g硅胶柱，然后将其通过快速色谱纯化，采用乙酸乙酯/甲醇(含有1.2％NH3)作为洗脱液，获得白色结晶。1H NMR(400MHz,CDCl3)：8.63(d,1H),8.45(s,1H),7.68(dd,1H),7.59(d,1H),7.45(t,1H),7.28(s,1H),7.21-7.13(m,5H),7.10-7.04(m,2H),6.99-6.80(m,7H),6.24(d,1H),5.68(dd,1H),5.25-5.16(m,3H),5.09(d,1H),4.29-4.18(m,2H),3.88(s,3H),3.81(s,3H),3.38(dd,1H),2.96-2.89(m,2H),2.69(br s,4H),2.56(dd,2H),2.46(br s,4H),2.28(s,3H),1.90(s,3H)
步骤B：[4-[2-[2-溴-4-[6-(4-氟苯基)-4-[(1R)-2-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]-1-[[2-[[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]甲基]-2-氧代-乙氧基]-(5Sa)-噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-3-甲基-苯氧基]乙基]-1-甲基-哌嗪-1-
-1-基]甲基磷酸叔丁基酯
将265mg上面步骤A的化合物(0.25mmol,1eq.)、194mg氯代甲基磷酸二-叔丁基酯(0.75mmol,3eq.)、112mg碘化钠(0.75mmol,3eq.)和62mgNaHCO3(0.75mmol,3eq.)在3mL无水丙酮中于室温下搅拌过夜(避光)。向反应混合物中加入2mL水，将其直接注入到RP18柱上，采用乙腈/5mMNH4HCO3作为洗脱液，梯度洗脱。冷冻干燥后，获得白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)：8.64(d,1H),8.46(s,1H),7.68(dd,1H),7.59(d,1H),7.45(t,1H),7.32(d,1H),7.21-7.16(m,5H),7.11-7.05(m,2H),6.98(t,2H),6.89-6.79(m,5H),6.22(d,1H),5.66(dd,1H),5.20(dd,2H),5.15(dd,2H),5.08(d,1H),4.26-4.16(m,2H),3.88(s,3H),3.81(s,3H),3.70-3.65(m,2H),3.38(dd,2H),3.32(br s,1H),3.19-3.09(m,1H),3.15(s,3H),3.00(t,2H),2.98-2.91(m,2H),2.55(dd,1H),1.90(s,3H),1.87(br s,4H),1.46(s,9H)
步骤C：实施例5
向溶于4mL无水二氯甲烷的150mg上面步骤B的化合物(0.13mmol,1eq.)中加入0.5mL三氟乙酸(6.6mmol,50eq.)，将混合物于室温下搅拌直到观察不到进一步的转化。将反应混合物蒸发至干，然后将其通过反相色谱纯化，采用乙腈/5mM NH4HCO3作为洗脱液。冷冻干燥后，获得实施例5。C47H44ClFN6O10PS的HRMS实测值：1048.1433；实测值525.0791(M+2H)
实施例6：{4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸苄基酯
步骤A：[4-(2-{3-溴-2-氯代-4-[6-(4-氟苯基)-4-{[(2R)-1-[(4-甲氧基苄基)氧基]-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)-1-氧代丙-2-基]氧基}噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]苯氧基}乙基)-1-甲基哌嗪-1-
-1-基]甲基磷酸苄基酯
将318mg实施例5步骤A获得的化合物(0.30mmol,1eq.)和147mg氯代甲基磷酸二苄基酯(0.45mmol,1.5eq)在1.5mL无水乙腈中于70℃搅拌直到观察不到进一步的转化。将反应混合物直接注入预处理的80g硅胶柱，然后将其通过快速色谱纯化，采用乙酸乙酯/甲醇(含有1.2％NH3)作为洗脱液。获得为白色结晶的步骤A产物。MS:M+H＝1260.6
步骤B：实施例6
向275mg上面步骤B的化合物(0.218mmol,1eq.)的3.5mL二氯甲烷溶液中加入334μL三氟乙酸，将反应混合物于室温下搅拌直到观察不到进一步的转化。浓缩反应混合物，粗品产物经快速色谱纯化，采用乙酸乙酯/甲醇(含有1.2％NH3)作为洗脱液。该产物然后通过反相色谱纯化，采用25mM NH4HCO3水溶液和MeCN作为洗脱液。冷冻干燥后，获得为白色固体的实施例6。C54H50BrClFN6O10PS的HRMS实测值：1138.1903；实测值570.1018(M+2H)
实施例7：{4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸甲酯
在实施例7中，方法如实施例1所述，采用适当的式(IV)的氯化物衍生物和适当的式(II)的噻吩并嘧啶化合物。
实施例8：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-4-[2-(4-{[(羟基次膦酸根合)氧基]甲基}-4-甲基哌嗪-4-
-1-基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯基丙氨酸
步骤A：6-碘-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮
向配备机械搅拌、温度计和回流冷凝器的2L圆底烧瓶中加入433mL乙酸、13mL硫酸和87mL水的溶液。将69.3g 3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮(0.46mol)、51.9g高碘酸(0.23mol)和104g碘(0.41mol)加至该搅拌的溶液中，将其加热至60℃1小时。将获得的悬浮液冷却至室温，过滤，采用乙酸和水(5:1)的混合物洗涤，然后用乙醚洗涤。将获得的米黄色结晶固体空气干燥。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:12.57(br s,1H),8.09(s,1H),7.65(s,1H)
步骤B：4-氯代-6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶
向配备机械搅拌、温度计和回流冷凝器以及CaCl2-管的1L圆底烧瓶加入113mL三氯氧磷和35mL N,N-二甲基苯胺(0.29mol)。5分钟内将75.54g上面步骤A的化合物(0.27mol)分次加至该混合物中。将反应混合物于105℃搅拌1小时。将获得的悬浮液冷却至10℃，过滤，用己烷洗涤。将粗品产物加至冰水中，搅拌10分钟，过滤，用冷水、乙醚洗涤，空气干燥。获得米黄色结晶固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.89(s,1H),7.98(s,1H)
步骤C：5-溴-4-氯代-6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶
向配备机械搅拌、温度计和鼓泡器(bubbler)的2L圆底烧瓶中加入600mL乙腈。加入84.9g上面步骤B的化合物(0.29mol)、50.9g N-溴代琥珀酰亚胺(0.29mol)和8.5mL四氟硼酸乙醚复合物。将反应混合物于室温下搅拌16小时。分三次向混合物中加入另一份22.9g(0.12mol)N-溴代琥珀酰亚胺。将悬浮液冷却至0℃并再搅拌1小时后，过滤沉淀物，用乙腈洗涤，空气干燥。获得为米黄色结晶固体的产物。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:8.88(s,1H)
步骤D：5-溴-4-氯代-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶
将75.08g上面步骤C的化合物(200mmol)、53.63g 2-(4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(240mmol)、130g碳酸铯(400mmol)、2.245g Pd(OAc)2(10mmol)和8.50g 2-二-叔丁基膦基-2′,4′,6′-三异丙基联苯(20mmol)置于2L烧瓶中。加入600mL四氢呋喃和200mL水，然后于70℃氩气环境中搅拌过夜。蒸发四氢呋喃，然后通过过滤收集产物。将粗品产物在250mL乙腈中超声处理，再次过滤。然后5-溴-4-氯代-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶在乙醇/四氢呋喃(2:1)中结晶。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.02(s,1H),7.80-7.77(m,2H),7.47-7.43(m,2H)
步骤E：(2R)-2-[[5-溴-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸
将1eq.上面步骤D的化合物、2eq.(2R)-2-氨基-3-(2-羟基苯基)丙酸和3eq.K2CO3在二甲基亚砜(10mL/mmol)中混合，于50℃搅拌直到观察不到进一步的转化。然后将混合物用水稀释，用1M HCl溶液酸化(至pH＝1，或者在碱性氨基存在下至pH＝6)，用乙酸乙酯萃取，或者将酸化后形成的沉淀物通过过滤分离。粗品产物通过制备性反相色谱纯化，采用25mM NH4HCO3水溶液和乙腈作为洗脱液，获得(2R)-2-[[5-溴-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.90(br s,1H),9.65(br s,1H),8.41(s,1H),7.70(m,2H),7.45-7.34(m,3H),7.18(dd,1H),7.04(td,1H),6.80(d,1H),6.72(t,1H),4.96(m,1H),3.31(dd,1H),3.08(dd,1H)
MS(M+H)：488.0
步骤F：(4-溴-2-氯代-苯氧基)-三甲基-硅烷
将20.8g 4-溴-2-氯代-苯酚(100mmol)溶于150mL无水四氢呋喃，然后加入24.2g六甲基二硅氮烷(150mmol)。将反应混合物于85℃氩气环境中搅拌1.5小时，然后减压浓缩。获得的粗品产物无需进一步纯化可以直接使用。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ:7.49(d,1H),7.23(dd,1H),6.75(d,1H),0.26(s,9H)
步骤G：4-溴-2-氯代-3-甲基-苯酚
于-78℃氩气环境中，将48mL正丁基锂溶液(120mmol,2.5M的己烷溶液)滴加至12.1g无水二异丙基胺(120mmol)的250mL无水四氢呋喃溶液中。将混合物于相同的温度下搅拌30分钟，然后滴加28.0g上面步骤F的化合物(100mmol)。2.5小时后，滴加21.3g甲基碘(150mmol)，然后移除冷浴，将混合物搅拌过夜。反应物采用100mL NH4OH溶液和200mL NH4Cl溶液骤冷，然后用乙酸乙酯萃取。有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。将获得的黑色物质用纯己烷回流数次(150-150mL等份)，倒出剩余的黑色焦油物。将合并的有机相减压浓缩，获得19.0g粗品产物，其无需进一步纯化可以直接使用。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ:7.32(d,1H),6.76(d,1H),5.62(s,1H),2.49(s,3H)
步骤H：(4-溴-2-氯代-3-甲基-苯氧基)-三甲基-硅烷
将20.8g六甲基二硅氮烷(129mmol)加至19.0g上面步骤H化合物(86.0mmol)的150mL无水四氢呋喃溶液中。将混合物于85℃氩气环境中搅拌1.5小时，然后减压浓缩。获得的产物无需进一步纯化可以直接使用。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ:7.30(d,1H),6.63(d,1H),2.50(s,3H),0.28(s,9H)
步骤I：2-氯代-3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯酚
将25.2g上面步骤H的化合物(86.0mmol)的250mL无水四氢呋喃溶液在氩气环境中冷却至-78℃，然后滴加38mL正丁基锂溶液(94.6mmol,2.5M的己烷溶液)。5分钟后，滴加19.2g的2-异丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(103mmol)。移除冷浴，将混合物缓慢温热至室温。然后将混合物加至200mL NH4Cl溶液中，用乙酸乙酯萃取。合并的有机层减压浓缩，使其通过硅胶垫，采用己烷和乙酸乙酯作为洗脱液。粗品产物在乙酸乙酯和己烷中重结晶，获得2-氯代-3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯酚。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:10.40(s,1H),7.42(d,1H),6.80(d,1H),2.49(s,3H),1.27(s,12H)
步骤J：1-[2-[2-氯代-3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯氧基]乙基]-4-甲基-哌嗪
将10.0g上面步骤I的化合物(37.2mmol)、8.7g 2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醇(60.3mmol)和15.8g三苯膦(60.3mmol)溶于100mL无水甲苯，然后滴加27mL偶氮二甲酸二乙酯(60.3mmol,40％的甲苯溶液)。将混合物于50℃氩气环境中搅拌直到观察不到进一步的转化。减压蒸发挥发物，加入100mL乙醚。过滤沉淀的白色结晶，用乙醚洗涤。将滤液减压浓缩，通过快速色谱纯化，采用氯仿和甲醇作为洗脱液。将获得的浅棕色油状物在己烷中结晶，获得1-[2-[2-氯代-3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯氧基]乙基]-4-甲基-哌嗪，为灰白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:7.56(d,1H),6.99(d,1H),4.15(t,2H),2.72(t,2H),2.51(s,3H),2.50(br s,4H),2.29(br s,4H),2.13(s,3H),1.29(s,12H)
步骤K：(2R)-2-[[(5Sa)-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸
将1eq.上面步骤E的化合物和3eq.上面步骤J的化合物溶于二氧六环:水2:1的混合物(10mL/mmol)中，然后加入2eq.Cs2CO3、5mol％Pd(OAc)2和0.2eq.三-叔丁基
四氟硼酸盐，将混合物于120℃微波反应器中氮气环境中搅拌直到观察不到进一步的转化。将混合物用1M HCl溶液中和，用二氯甲烷。合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤，滤液真空浓缩。粗品产物通过制备性反相色谱纯化，采用0.1％三氟乙酸水溶液和乙腈作为洗脱液，获得(2R)-2-[[5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸，为非对映异构体化合物。将混合物通过快速色谱分离，采用HILIC作为洗脱液。收集较早洗脱的非对映异构体，为(2R)-2-[[(5Ra)5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸。MS(M+H)：676.2
收集后面洗脱的非对映异构体，为(2R)-2-[[(5Sa)-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸。MS(M+H)：676.2
步骤L：(2R)-2-[[(5Sa)-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸乙酯
将4.51g的(2R)-2-[[(5Sa)-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸(6.67mmol)溶于85mL 1.25M HCl的乙醇溶液中，于40℃搅拌过夜。然后将混合物小心地用NaHCO3溶液稀释，用二氯甲烷萃取。合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用二氯甲烷和甲醇作为洗脱液，获得(2R)-2-[[(5Sa)-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸乙酯。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:9.49(s,1H),8.40(s,1H),7.34(d,1H),7.27-7.21(m,3H),7.20-7.14(m,2H),7.00(td,1H),6.71(dd,1H),6.60(td,1H),6.39(dd,1H),5.03(d,1H),4.92(m,1H),4.26(t,2H),4.03(m,2H),3.03(dd,1H),2.78(t,2H),2.54(br,4H),2.36(dd,1H),2.30(br,4H),2.12(s,3H),1.83(s,3H),1.10(t,3H)
C37H39ClFN5O4S的HRMS实测值:703.2395；实测值704.2450(M+H)
步骤M:(E)-4-(二甲基氨基)-1,1-二甲氧基-丁-3-烯-2-酮
将502.1g的1,1-二甲氧基丙-2-酮(4.25mol)和506.4g的1,1-二甲氧基-N,N-二甲基-甲胺(4.25mol)在2L烧瓶中混合，于105℃搅拌3小时。通过蒸馏持续除去甲醇。当甲醇形成停止(头部温度65℃)。将反应混合物真空蒸馏(缓慢降低压力至30mbar)以除去副产物和未反应的原料。将粗品产物于0.1mbar蒸馏。收集头部温度为107-118℃(浴温160-165℃)的组分，获得黄色油状物。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:7.59(d,1H),5.17(d,1H),4.42(s,1H),3.25(s,6H),3.09(s,3H),2.78(s,3H)
步骤N:4-(二甲氧基甲基)-2-(2-甲氧基苯基)嘧啶
向1.2eq.2-甲氧基苯甲脒乙酸盐和1eq.上面步骤M的化合物的无水甲醇溶液(0.5mL/mmol)中分次加入1.2eq.甲醇钠，将混合物于75℃搅拌直到观察不到进一步的转化。将反应混合物冷却并减压浓缩。向残留物中加入水，用二氯甲烷萃取。合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和乙酸乙酯作为洗脱液，获得4-(二甲氧基甲基)-2-(2-甲氧基苯基)嘧啶。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.93(d,1H),7.55-7.44(m,3H),7.16(d,1H),7.06(m,1H),5.31(s,1H),3.76(s,3H),3.37(s,6H)
步骤O:[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲醇
将261mg上面步骤N的化合物(1.0mmol)溶于2mL 4M HCl溶液(二氧六环)，然后加入2mL水，将该混合物于50℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至0℃，然后分次加入320mgNaOH(8.0mmol)。采用10％K2CO3溶液将pH调节至8，然后加入76mg硼氢化钠(2.0mmol)，将混合物于0℃搅拌30分钟。反应混合物用5mL水稀释，用乙酸乙酯萃取。合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和乙酸乙酯作为洗脱液，获得[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲醇。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:8.84(d,1H),7.50-7.42(m,3H),7.14(d,1H),7.03(m,1H),5.66(t,1H),4.58(d,2H),3.75(s,3H)
步骤P:N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯基丙氨酸
在氮气环境中，将1eq.上面步骤L的化合物、2eq.上面步骤O的化合物和3eq.三苯膦溶于无水甲苯(7L/mmol)，然后于室温下加入3eq.偶氮二甲酸二叔丁基酯。然后将混合物于50℃搅拌直到观察不到进一步的转化。真空除去挥发物，残留物通过快速色谱纯化，采用庚烷和乙酸乙酯作为洗脱液。
将1eq.形成的酯衍生物于室温下溶于四氢呋喃(15mL/mmol)，然后加入10eq.氢氧化锂单水合物和水(15mL/mmol)。将混合物于室温搅拌直到观察不到进一步的转化。采用1MHCl溶液将pH调节至6，然后将混合物用盐水稀释，用二氯甲烷萃取。有机层经硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。粗品产物通过制备性反相色谱纯化，采用25mM NH4HCO3水溶液和乙腈作为洗脱液，得到N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯基丙氨酸。C47H45ClFN7O5S的HRMS实测值:873.2875,实测值:437.6498(M+2H)
步骤Q:N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯基丙氨酸4-甲氧基苄基酯
将1677mg上面步骤P的化合物(1.92mmol,1eq.)、1.51g三苯膦(5.76mmol,3eq.)和796mg的4-甲氧基苄基醇(5.76mmol,3eq.)溶于20mL无水甲苯，然后一次性加入1.33g偶氮二甲酸二(叔)丁基酯(5.76mmol,3eq.)。将获得的混合物于50℃搅拌直到观察不到进一步的转化。浓缩反应混合物，粗品产物通过快速色谱纯化，采用乙酸乙酯/甲醇(含有1.2％NH3)作为洗脱液。获得步骤Q的产物，为灰白色结晶。C55H53ClFN7O6S的HRMS实测值:993.3450；实测值497.6814(M+2H)
步骤R:N-[(5Sa)-5-{4-[2-(4-{[(苄基氧基)次膦酸根合]氧基}-4-甲基哌嗪-4-
-1-基)乙氧基]-3-氯代-2-甲基苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯基丙氨酸4-甲氧基苄基酯
将300mg上面步骤Q的化合物(0.301mmol,1eq.)和148mg氯代甲基磷酸二苄基酯(0.451mmol,1.5eq.)在1.5mL无水乙腈中于40℃搅拌直到观察不到进一步的转化。将反应混合物直接注入预处理的24g硅胶柱上，然后将其通过快速色谱纯化，采用乙酸乙酯/甲醇(含有1.2％NH3)作为洗脱液。获得步骤R的化合物，为灰白色结晶。C63H62ClFN7O10PS的HRMS实测值:1193.3689；实测值597.6928(M+2H)
步骤S:实施例8
向100mg上面步骤R的化合物(0.0837mmol)的840μL二氯甲烷溶液中加入152μL33％HBr的乙酸溶液，将其于0℃搅拌直到观察不到进一步的转化。浓缩反应混合物，通过快速色谱纯化，采用乙酸乙酯/甲醇(含有1.2％NH3)作为洗脱液。然后获得的产物通过反相色谱纯化，采用乙腈/5mM NH4HCO3作为洗脱液。冷冻干燥后，获得为白色固体的实施例8。C48H48BrClFN7O9PS的HRMS实测值:983.2645；实测值492.6377(M+2H)
实施例9:{4-[2-(4-{4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2,6-二氯代-3,5-二甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐
步骤A:4-溴-2,6-二氯代-3,5-二甲基-苯酚
将30.16g 4-溴-3,5-二甲基-苯酚(150mmol)溶于75mL 1,2-二氯乙烷和75mL乙腈的混合物中，然后分次加入40.06g N-氯代琥珀酰亚胺(300mmol,2.0eq.)，将混合物于室温搅拌直到观察不到进一步的转化。将反应混合物减压浓缩，将残留物溶于二氯甲烷，用水和盐水洗涤。有机层经硫酸钠干燥，减压浓缩，无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)：10.10(s,1H),2.46(s,6H)
步骤B:1-溴-3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯
向26.0g上面步骤A的化合物(96.3mmol,1.0eq.)和26.60g K2CO3(192.6mmol,2.0eq.)的300mL乙腈溶液中加入6.6mL甲基碘(105.9mmol,1.1eq.)，将混合物于室温搅拌直到观察不到进一步的转化。滤除固体，将滤液减压浓缩。将粗品产物溶于二氯甲烷，用水和盐水洗涤。有机层经硫酸钠干燥，减压浓缩，无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)：3.78(s,3H),2.49(s,6H)
步骤C:2-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷
在氮气环境中，将10.0g上面步骤B的化合物(35.2mmol,1.0eq.)溶于360m无水四氢呋喃，采用干冰-丙酮将其冷却至-78℃。加入23.2mL正丁基锂(1.6M的己烷溶液)(37.0mmol,1.05eq.)，将混合物搅拌15分钟，然后加入8.6mL的2-异丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(42.24mmol,1.2eq.)，将混合物温热至室温。将其用盐水骤冷，用二氯甲烷萃取，经硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和乙酸乙酯作为洗脱液，获得2-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：3.81(s,3H),2.33(s,6H),1.34(s,12H)
步骤D:4-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)噻吩-3-甲酸乙酯
将3.92g的4-溴代噻吩-3-甲酸乙酯(16.68mmol,1.0eq.)和9.9g上面步骤C的化合物(30.0mmol,1.8eq.)溶于140mL二氧六环，然后加入溶于40mL水的10.87g的Cs2CO3(33.36mmol,2.0eq.)。加入590mg二(二-叔丁基(4-二甲基氨基苯基)膦)二氯化钯(II)(0.83mmol,0.05eq.)，将混合物在氮气环境中回流温度下搅拌直到观察不到进一步的转化。然后将其用二氯甲烷和盐水稀释。相分离后，水相用二氯甲烷萃取。合并有机层，经硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和乙酸乙酯作为洗脱液，获得4-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)噻吩-3-甲酸乙酯。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.53(d,1H),7.47(d,1H),4.02(q,2H),3.83(s,3H),1.95(s,6H),1.00(t,3H)
HRMS(M+NH4)+＝376.0538
步骤E:4-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-2,5-二碘-噻吩-3-甲酸乙酯
将2.65g上面步骤D的化合物(7.38mmol,1.0eq.)溶于75mL乙腈，然后加入2.2mL氟硼酸乙醚复合物(16.23mmol,2.2eq.)和3.65g的N-碘琥珀酰亚胺(16.23mmol,2.2eq.)，将混合物于室温搅拌直到观察不到进一步的转化。将反应混合物减压浓缩，粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和乙酸乙酯作为洗脱液，获得4-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-2,5-二碘-噻吩-3-甲酸乙酯。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：3.98(q,2H),3.84(s,3H),1.92(s,6H),0.84(t,3H)
步骤F:4-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-5-碘-噻吩-3-甲酸乙酯
将5.29g上面步骤E的化合物(8.66mmol,1.0eq.)溶于90mL无水四氢呋喃，然后在氩气环境中冷却至-78℃。加入6.7mL异丙基氯化镁氯化锂复合物(1.3M的四氢呋喃溶液)(8.66mmol,1.0eq.)，将混合物于-78℃搅拌30分钟。然后加入饱和的NH4Cl水溶液，将混合物用乙酸乙酯萃取。有机层经硫酸钠干燥，减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和乙酸乙酯作为洗脱液，获得4-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-5-碘-噻吩-3-甲酸乙酯。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.71(s,1H),4.01(q,2H),3.86(s,3H),1.89(s,6H),0.99(t,3H)
步骤G:4-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-5-(4-氟苯基)-噻吩-3-甲酸乙酯
将4.20g上面步骤F的化合物(8.66mmol,1.0eq.)和1.82g的4-氟苯基硼酸(13.00mmol,1.5eq.)溶于80mL二氧六环，然后加入溶于20mL水的5.64g Cs2CO3(17.32mmol,2.0eq.)。然后加入500mg四(三苯膦)钯(0)(0.43mmol,1.15eq.)，将混合物在氮气环境中于80℃搅拌直到观察不到进一步的转化。然后将其用二氯甲烷和盐水稀释。相分离后，水相用二氯甲烷萃取。合并有机层，经硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和乙酸乙酯作为洗脱液，获得4-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-5-(4-氟苯基)噻吩-3-甲酸乙酯。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.58(s,1H),7.22-7.10(m,4H),4.03(q,2H),3.82(s,3H),1.92(s,6H),1.00(t,3H)
HRMS(M+H)+＝453.0498
步骤H:4-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-5-(4-氟苯基)-2-硝基-噻吩-3-甲酸乙酯
将1.97g上面步骤G的化合物(4.34mmol,1.0eq.)溶于40m无水乙腈，然后加入576mg硝
(nitronium)四氟硼酸盐(4.34mmol,1.0eq.)，将混合物于室温搅拌直到观察不到进一步的转化。然后将其用二氯甲烷和盐水稀释。相分离后，水相用二氯甲烷萃取。合并有机层，经硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和乙酸乙酯作为洗脱液，获得4-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-5-(4-氟苯基)-2-硝基-噻吩-3-甲酸乙酯。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：7.37-7.33(m,2H),7.32-7.26(m,2H),4.14(q,2H),3.82(s,3H),2.06(s,6H),0.88(t,3H)
步骤I:2-氨基-4-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-5-(4-氟苯基)-噻吩-3-甲酸乙酯
将1.85g上面步骤H的化合物(3.71mmol,1.0eq.)溶于90mL乙酸和18mL水的混合物中，然后分次加入2.43g锌屑(37.1mmol,10eq.)，将混合物于室温搅拌直到观察不到进一步的转化。将反应混合物减压浓缩，粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和乙酸乙酯作为洗脱液，获得2-氨基-4-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-5-(4-氟苯基)噻吩-3-甲酸乙酯。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：7.73(s,2H),7.12-7.06(m,2H),7.02-6.97(m,2H),3.86-3.80(m,2H),3.80(s,3H),2.01(s,6H),0.72(t,3H)
HRMS(M+H)+＝456.0598
步骤J:5-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-6-(4-氟苯基)-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮
将1.10g上面步骤I的化合物(2.35mmol,1.0eq.)溶于20mL甲酰胺，将其于150℃搅拌直到观察不到进一步的转化。然后将其倒入水中，过滤收集沉淀的产物，获得5-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-6-(4-氟苯基)-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：12.53(br s,1H),8.18(s,1H),7.23-7.16(m,4H),3.84(s,3H),1.96(s,6H)
HRMS(M+H)+＝449.0289
步骤K:4-氯代-5-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-6-(4-氟苯基)-噻吩并[2,3-d]嘧啶
将700mg上面步骤J的化合物(1.56mmol,1.0eq.)溶于6mL三氯氧磷，将其于90℃搅拌直到观察不到进一步的转化。将反应混合物减压浓缩，然后向粗品产物中加入冰水，将其超声10分钟。通过过滤收集沉淀的产物，获得4-氯代-5-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：9.02(s,1H),7.38-7.26(m,4H),3.86(s,3H),1.99(s,6H)
HRMS(M+H)+＝466.9954
步骤L:2,6-二氯代-4-[4-氯代-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-3,5-二甲基-苯酚和4-[4-溴-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-2,6-二氯代-3,5-二甲基-苯酚
于0℃向搅拌的700mg上面步骤K的化合物(1.50mmol,1.0eq.)的15mL二氯甲烷溶液中加入3.0mL三溴化硼(1M的二氯甲烷溶液)(3.0mmol,2.0eq.)，将混合物温热至室温，将其搅拌直到观察不到进一步的转化。将混合物用饱和的NH4C水溶液骤冷，用二氯甲烷萃取。合并的有机相经硫酸钠干燥，减压浓缩。残留物通过快速色谱纯化，采用庚烷和乙酸乙酯作为洗脱液，获得2,6-二氯代-4-[4-氯代-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-3,5-二甲基-苯酚和4-[4-溴-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-2,6-二氯代-3,5-二甲基-苯酚，为产物的37:63混合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：10.14(br s,1H),9.01(s,1H),7.40-7.23(m,4H),1.95(s,6H)和10.14(br s,1H),8.93(s,1H),7.40-7.23(m,4H),1.93(s,6H)
HRMS(M+H)+＝452.9800和496.9287
步骤M:4-氯代-5-[3,5-二氯代-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶和4-溴-5-[3,5-二氯代-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶
将300mg的2,6-二氯代-4-[4-氯代-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-3,5-二甲基-苯酚和4-[4-溴-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-2,6-二氯代-3,5-二甲基-苯酚(0.62mmol)的混合物、286mg的2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醇(1.98mmol,3.0eq.)和520mg的三苯基膦(1.98mmol,3.0)溶于10mL无水甲苯，然后加入460mg偶氮二甲酸二叔丁基酯(1.98mmol,3.0eq.)。将混合物于50℃氮气环境中搅拌直到观察不到进一步的转化。减压蒸发挥发物，粗品中间体通过快速色谱纯化，采用乙酸乙酯和甲醇作为洗脱液，获得4-氯代-5-[3,5-二氯代-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶和4-溴-5-[3,5-二氯代-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶，为产物的35:65混合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：9.02(s,1H),7.40-7.22(m,4H),4.11(t,2H),2.78(t,2H),2.63-2.20(m,8H),2.17(br s,3H),1.98(s,6H)和8.94(s,1H),7.40-7.22(m,4H),4.11(t,2H),2.78(t,2H),2.63-2.20(m,8H),2.15(br s,3H),1.98(s,6H)
HRMS(M+H)+＝579.0968和623.0455
步骤N:(2R)-2-[5-[3,5-二氯代-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基-3-[2-[[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙酸乙酯
将200mg的4-氯代-5-[3,5-二氯代-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶和4-溴-5-[3,5-二氯代-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶(0.33mmol,1.0eq.)的混合物、211mg的(2R)-2-羟基-3-[2-[[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙酸乙酯(0.52mmol,1.58eq.)和202mg的Cs2CO3(0.62mmol,1.88eq.)溶于5mL叔-丁醇，将混合物于70℃搅拌直到观察不到进一步的转化。将其用乙酸乙酯稀释，然后将其用盐水洗涤。有机层经硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，通过快速色谱纯化，采用乙酸乙酯和甲醇作为洗脱液，获得(2R)-2-[5-[3,5-二氯代-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基-3-[2-[[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙酸乙酯。MS:(M+H)＝951.0
步骤O:(2R)-2-[5-[3,5-二氯代-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基-3-[2-[[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙酸
将200mg上面步骤N的化合物溶于5mL的1:1的二氧六环-水中，加入145mg氢氧化锂单水合物(3.45mmol)。将混合物于室温搅拌直到观察不到进一步的转化。然后将其用盐水稀释，用2M HCl中和，用二氯甲烷萃取，经硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品产物通过制备性反相色谱纯化，采用5mM NH4HCO3水溶液和乙腈洗脱，获得(2R)-2-[5-[3,5-二氯代-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基-3-[2-[[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙酸。C48H45N6O6FSCl2的HRMS实测值:922.2482,实测值:462.1310(M+2H)
步骤P:(2R)-2-[5-[3,5-二氯代-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基-3-[2-[[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙酸(4-甲氧基苯基)甲基酯
将400mg上面步骤O的化合物(0.433mmol,1eq.)、341mg的三苯膦(1.30mmol,3.0eq.)和180mg的4-甲氧基苄基醇(1.30mmol,3.0eq.)溶于5mL无水甲苯，然后一次性加入300mg偶氮二甲酸二(叔)丁基酯(1.30mmol,3.0eq.)。将获得的混合物于50℃搅拌直到观察不到进一步的转化。浓缩反应混合物，粗品产物经快速色谱纯化，采用二氯甲烷/甲醇(含有1.2％NH3)作为洗脱液，获得(2R)-2-[5-[3,5-二氯代-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基-3-[2-[[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙酸(4-甲氧基苯基)甲基酯。MS:(M+H)＝1043.2
步骤Q:[4-[2-[2,6-二氯代-4-[6-(4-氟苯基)-4-[(1R)-2-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]-1-[[2-[[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]甲基]-2-氧代-乙氧基]噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-3,5-二甲基-苯氧基]乙基]-1-甲基-哌嗪-1-
-1-基]甲基磷酸苄基酯
将428mg上面步骤P的化合物(0.62mmol,1.5eq.)在4mL无水乙腈中于40℃搅拌直到观察不到进一步的转化。将反应混合物直接注入预处理的24g硅胶柱，然后将其通过快速色谱纯化，采用乙酸乙酯/甲醇(含有1.2％NH3)作为洗脱液，获得[4-[2-[2,6-二氯代-4-[6-(4-氟苯基)-4-[(1R)-2-[(4-甲氧基苯基)甲氧基]-1-[[2-[[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]甲基]-2-氧代-乙氧基]噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-3,5-二甲基-苯氧基]乙基]-1-甲基-哌嗪-1-
-1-基]甲基磷酸苄基酯。MS:(M+H)＝1243.2
步骤R:实施例9
向230mg上面步骤P的化合物(0.185mmol)的3mL二氯甲烷溶液中加入110μL 33％HBr的乙酸溶液，将其于0℃搅拌直到观察不到进一步的转化。将反应混合物浓缩至干，获得的产物通过反相色谱纯化，采用乙腈/25mM NH4HCO3作为洗脱液。冷冻干燥后，获得为白色固体的实施例9。C49H48Cl2FN6O10PS的HRMS实测值:1032.2251,实测值:517.1213(M+2H)
实施例10:{4-[2-(4-{4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-3,5-二甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐
在实施例10中，方法如实施例1所述，采用适当的式(IV)的氯化物衍生物和适当的式(II)的噻吩并嘧啶化合物。
实施例11:{[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基](二甲基)铵基}甲基磷酸氢盐
步骤A:(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯代-4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸4-甲氧基苄基酯
将928mg的(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯代-4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸(1.13mmol,1eq.；根据WO 2015/097123合成)、889mg的三苯膦(3.39mmol,3eq.)和468mg的4-甲氧基苄基醇(3.39mmol,3eq.)溶于12mL无水甲苯，然后一次性加入781mg偶氮二甲酸二(叔)丁基酯(3.39mmol,3eq.)。将获得的混合物于50℃搅拌直到观察不到进一步的转化。浓缩反应混合物，粗品产物经快速色谱纯化，采用乙酸乙酯/甲醇(含有1.2％NH3)作为洗脱液。获得为灰白色结晶的步骤A的产物。C52H47ClFN5O7S的HRMS实测值:939.2869；实测值470.6511(M+2H)
步骤B:[(2-{2-氯代-4-[6-(4-氟苯基)-4-{[(2R)-1-[(4-甲氧基苄基)氧基]-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)-1-氧代丙-2-基]氧基}-(5Sa)-噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-3-甲基苯氧基}乙基)(二甲基)铵基]甲基磷酸苄基酯
将282mg上面步骤A的化合物(0.300mmol,1eq.)和147mg氯代甲基磷酸二苄基酯(0.450mmol,1.5eq.)在1.5mL无水乙腈中于40℃搅拌直到观察不到进一步的转化。将反应混合物直接注入预处理的24g硅胶柱上，然后将其通过快速色谱纯化，采用乙酸乙酯/甲醇(含有1.2％NH3)作为洗脱液。获得为灰白色结晶的步骤B的化合物。C60H56ClFN5O11PS的HRMS实测值:1139.3107；实测值570.6613(M+2H)
步骤C:实施例11
向110mg上面步骤B的化合物(0.0964mmol)的1mL二氯甲烷溶液中加入175μL 33％HBr的乙酸溶液，将其于0℃搅拌直到观察不到进一步的转化。浓缩反应混合物，通过快速色谱纯化，采用乙酸乙酯/甲醇(含有1.2％NH3)作为洗脱液。然后将获得的产物通过反相色谱纯化，采用乙腈/5mM NH4HCO3作为洗脱液。冷冻干燥后，获得为白色固体的实施例11。C45H42BrClFN5O10PS的HRMS实测值:929.2062；实测值465.6087(M+2H)
在下面实施例12-16中，方法如实施例1所述，采用适当的式(IV)的氯化物衍生物和适当的式(II)的噻吩并嘧啶化合物。
实施例12:1-{4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}乙基磷酸氢盐
实施例13:1-{4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}乙基磷酸氢盐
实施例14:{1-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-4-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐
实施例15:{1-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-4-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐
实施例16:{4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基硫酸盐
实施例17:1-[(乙酰基氧基)甲基]-4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
三氟乙酸盐
步骤A:1-[(乙酰基氧基)甲基]-4-(2-{2-氯代-4-[6-(4-氟苯基)-4-{[(2R)-1-[(4-甲氧基苄基)氧基]-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)-1-氧代丙-2-基]氧基}-(5Sa)-噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-3-甲基苯氧基}乙基)-1-甲基哌嗪-1-
三氟乙酸盐
向149mg实施例1步骤A中获得的化合物(0.150mmol,1eq.)和33mg氯代乙酸甲酯(0.300mmol,2.0eq.)的2mL无水乙腈中加入22mg碘化钠(0.15mmol,1.0eq.)，将反应混合物于70℃搅拌直到观察不到进一步的转化。反应混合物通过反相色谱纯化，采用三氟乙酸/乙腈(0.5mL/L)和三氟乙酸/H2O(0.5mL/L)作为洗脱液。获得步骤A的产物，为三氟乙酸盐。MS:M＝1067.2
步骤B:实施例17
向73mg上面步骤A的化合物(0.062mmol,1eq.)的4mL二氯甲烷溶液中加入300μL三氟乙酸，将反应混合物于室温搅拌直到观察不到进一步的转化。将反应混合物蒸发至干，然后将其通过反相色谱纯化，采用三氟乙酸/乙腈(0.5mL/L)和三氟乙酸/H2O(0.5mL/L)作为洗脱液。冷冻干燥后，获得为白色固体的实施例17。C50H49ClFN6O8S的HRMS实测值:947.3000；实测值947.3001(M)
实施例18:4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-{[(乙氧基羰基)氧基]甲基}-1-甲基哌嗪-1-
步骤A:4-(2-{2-氯代-4-[6-(4-氟苯基)-4-{[(2R)-1-[(4-甲氧基苄基)氧基]-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)-1-氧代丙-2-基]氧基}-(5Sa)-噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-3-甲基苯氧基}乙基)-1-{[(乙氧基羰基)氧基]甲基}-1-甲基哌嗪-1-
三氟乙酸盐
向200mg实施例1步骤A中获得的化合物(0.201mmol,1eq.)和56mg氯代甲基碳酸乙酯(0.402mmol,2.0eq.)的2mL无水乙腈溶液中加入30m碘化钠(0.201mmol,1.0eq.)，将反应混合物于70℃搅拌直到观察不到进一步的转化。反应混合物通过反相色谱纯化，采用三氟乙酸/乙腈(0.5mL/L)和三氟乙酸/H2O(0.5mL/L)作为洗脱液。获得步骤A的化合物，为三氟乙酸盐。C59H59ClFN6O10S的HRMS实测值:1097.3680；实测值1097.3694(M)
步骤B:实施例18
向162mg上面步骤A的化合物(0.134mmol,1eq.)的4mL二氯甲烷溶液中加入300μL三氟乙酸，将反应混合物于室温下搅拌直到观察不到进一步的转化。将反应混合物蒸发至干，然后将其通过反相色谱纯化，采用三氟乙酸/乙腈(0.5mL/L)和三氟乙酸/H2O(0.5mL/L)作为洗脱液。冷冻干燥后，获得为白色固体的实施例18。C51H51ClFN6O9S的HRMS实测值:977.3105；实测值977.3122(M)
实施例19:4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-{[(二乙基氨基甲酰基)氧基]甲基}-1-甲基哌嗪-1-
三氟乙酸盐
步骤A:4-(2-{2-氯代-4-[6-(4-氟苯基)-4-{[(2R)-1-[(4-甲氧基苄基)氧基]-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)-1-氧代丙-2-基]氧基}-(5Sa)-噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-3-甲基苯氧基}乙基)-1-{[(二乙基氨基甲酰基)氧基]甲基}-1-甲基哌嗪-1-
三氟乙酸盐
向200mg实施例1步骤A中获得的化合物(0.201mmol,1eq.)和67mg的N,N-二乙基氨基甲酸氯代甲酯(0.402mmol,2.0eq.)的2mL无水乙腈溶液中加入30mg碘化钠(0.201mmol,1.0eq.)，将反应混合物于70℃搅拌直到观察不到进一步的转化。反应混合物通过反相色谱纯化，采用三氟乙酸/乙腈(0.5mL/L)和三氟乙酸/H2O(0.5mL/L)作为洗脱液。获得步骤A的混合物，为三氟乙酸盐。C61H64ClFN7O9S的HRMS实测值:1124.4153；实测值1124.4209(M)
步骤B:实施例19
向192mg上面步骤A的化合物(0.155mmol,1eq.)的4mL二氯甲烷溶液中加入300μL三氟乙酸，将反应混合物于室温下搅拌直到观察不到进一步的转化。将反应混合物蒸发至干，然后将其通过反相色谱纯化，采用三氟乙酸/乙腈(0.5mL/L)和三氟乙酸/H2O(0.5mL/L)作为洗脱液。冷冻干燥后，获得为白色固体的实施例19。C53H56ClFN7O8S的HRMS实测值:1004.3578；实测值1004.3579(M)
实施例20:4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-[(甘氨酰基氧基)甲基]-1-甲基哌嗪-1-
在实施例20中，方法如实施例1所述，采用适当的式(IV)的氯化物衍生物和适当的式(II)的噻吩并嘧啶化合物。获得的化合物为季铵盐，其中平衡离子可以选自溴离子、氯离子、碘离子、乙酸根、三氟乙酸根、苯甲酸根、甲磺酸根、甲苯磺酸根、三氟甲磺酸根等。
实施例21:4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-{1-[(二乙基氨基甲酰基)氧基]乙基}-1-甲基哌嗪-1-
三氟乙酸盐
步骤A:N,N-二乙基氨基甲酸1-氯代乙基酯
于-78℃向1.828g二乙胺(25mmol,1.0eq.)的四氢呋喃溶液中滴加3.574g的1-氯代乙基氯甲酸酯(25mmol,1.0eq.)，然后于-78℃滴加吡啶。将反应混合物于此温度下搅拌30分钟，然后将其缓慢温热至室温(3小时)，将其搅拌过夜。浓缩反应混合物，粗品产物用70mL二氯甲烷稀释，然后将其用50mL的1N HCl水溶液洗涤，然后用50mL盐水洗涤二次。有机层经硫酸镁干燥，将其过滤，滤液减压浓缩，获得为浅棕色油状物的N,N-二乙基氨基甲酸-氯代乙基酯。1H NMR(400MHz,CDCl3)：6.64(q,1H),3.34(m,4H),1.83(d,3H),1.17(t,6H)。
步骤B:4-(2-{2-氯代-4-[6-(4-氟苯基)-4-{[(2R)-1-[(4-甲氧基苄基)氧基]-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)-1-氧代丙-2-基]氧基}-(5Sa)-噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-3-甲基苯氧基}乙基)-1-{1-[(二乙基氨基甲酰基)氧基]乙基}-1-甲基哌嗪-1-
三氟乙酸盐
向250mg实施例1步骤A中获得的化合物(0.251mmol,1.0eq.)和225mg上面步骤A的化合物(1.26mmol,5.0eq.)的5mL乙腈溶液中加入75mg碘化钠(0.50mmol,2.0eq.)，将其于45℃搅拌45分钟。冷却反应混合物，过滤，然后将其通过反相色谱纯化，采用三氟乙酸/乙腈(0.5mL/L)和三氟乙酸/H2O(0.5mL/L)作为洗脱液。获得步骤B的化合物，为非对映异构体的三氟乙酸盐(非对映异构体未分离)。MS:M＝1138.4
步骤C:实施例21
向81mg上面步骤B的化合物(0.0647mmol,1eq.)的5mL二氯甲烷溶液中加入800μL三氟乙酸，将反应混合物于室温下搅拌直到观察不到进一步的转化。将反应混合物蒸发至干，然后将其通过反相色谱纯化，采用三氟乙酸/乙腈(0.5mL/L)和三氟乙酸/H2O(0.5mL/L)作为洗脱液。冷冻干燥后，获得为白色固体的实施例21(非对映异构体未分离)。C54H58ClFN7O8S的HRMS实测值:1018.3735；实测值509.6925(M+H)2+
实施例22:4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-甲基-1-[(5-甲基-2-氧代-1,3-间二氧杂环戊烯-4-基)甲基]哌嗪-1-
三氟乙酸盐
步骤A:4-(2-{2-氯代-4-[6-(4-氟苯基)-4-{[(2R)-1-[(4-甲氧基苄基)氧基]-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)-1-氧代丙-2-基]氧基}-(5Sa)-噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-3-甲基苯氧基}乙基)-1-甲基-1-[(5-甲基-2-氧代-1,3-间二氧杂环戊烯-4-基)甲基]哌嗪-1-
三氟乙酸盐
向348mg实施例1步骤A中获得的化合物(0.350mmol,1eq.)和104mg的4-(氯代甲基)-5-甲基-1,3-间二氧杂环戊烯-2-酮(0.700mmol,2.0eq.)的2mL无水乙腈溶液中加入52mg碘化钠(0.35mmol,1.0eq.)，将反应混合物于70℃搅拌直到观察不到进一步的转化。反应混合物通过反相色谱纯化，采用三氟乙酸/乙腈(0.5mL/L)和三氟乙酸/H2O(0.5mL/L)作为洗脱液。获得步骤A的化合物，为三氟乙酸盐盐。MS:M＝1107.2
步骤B:实施例22
向250mg上面步骤A的化合物(0.205mmol,1eq.)的8mL二氯甲烷溶液中加入600μL三氟乙酸，将反应混合物于室温下搅拌直到观察不到进一步的转化。将反应混合物蒸发至干，然后将其通过反相色谱纯化，采用三氟乙酸/乙腈(0.5mL/L)和三氟乙酸/H2O(0.5mL/L)作为洗脱液。冷冻干燥后，获得为白色固体的实施例22。C52H49ClFN6O9S的HRMS实测值:987.2949；实测值987.2961(M)
实施例23:4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-甲基-1-[(L-缬氨酰基)甲基]哌嗪-1-
在实施例23中，方法如实施例1所述，采用适当的式(IV)的氯化物衍生物和适当的式(II)的噻吩并嘧啶化合物。获得的化合物为季铵盐，其中平衡离子可以选自溴离子、氯离子、碘离子、乙酸根、三氟乙酸根、苯甲酸根、甲磺酸根、甲苯磺酸根、三氟甲磺酸根等。
实施例24:4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-{[(2,2-二甲基丙酰基)氧基]甲基}-1-甲基哌嗪-1-
三氟乙酸盐
步骤A:4-(2-{2-氯代-4-[6-(4-氟苯基)-4-{[(2R)-1-[(4-甲氧基苄基)氧基]-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)-1-氧代丙-2-基]氧基}-(5Sa)-噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-3-甲基苯氧基}乙基)-1-{[(2,2-二甲基丙酰基)氧基]甲基}-1-甲基哌嗪-1-
三氟乙酸盐
向249mg实施例1步骤A中获得的化合物(0.250mmol,1eq.)和75mg的2,2-二甲基丙酸氯代甲基酯(0.500mmol,2.0eq.)的2mL无水乙腈溶液中加入37mg碘化钠(0.25mmol,1.0eq.)，将反应混合物于70℃搅拌直到观察不到进一步的转化。反应混合物通过反相色谱纯化，采用三氟乙酸/乙腈(0.5mL/L)和三氟乙酸/H2O(0.5mL/L)作为洗脱液。获得步骤A的化合物，为三氟乙酸盐。C61H63ClFN6O9S的HRMS实测值:1109.4044；实测值1109.4040(M)
步骤B:实施例24
向216mg上面步骤A的化合物(0.177mmol,1eq.)的8mL二氯甲烷溶液中加入600μL三氟乙酸，将反应混合物于室温下搅拌直到观察不到进一步的转化。将反应混合物蒸发至干，然后将其通过反相色谱纯化，采用三氟乙酸/乙腈(0.5mL/L)和三氟乙酸/H2O(0.5mL/L)作为洗脱液。冷冻干燥后，获得为白色固体的实施例24。C53H55ClFN6O8S的HRMS实测值:989.3469；实测值989.3480(M)
实施例25:1-[(乙酰基氧基)甲基]-4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
三氟乙酸盐
步骤A:1-[(乙酰基氧基)甲基]-4-(2-{3-溴-2-氯代-4-[6-(4-氟苯基)-4-{[(2R)-1-[(4-甲氧基苄基)氧基]-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)-1-氧代丙-2-基]氧基}-(5Sa)-噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]苯氧基}乙基)-1-甲基哌嗪-1-
三氟乙酸盐
向212mg实施例5步骤A中获得的化合物(0.20mmol,1eq.)和43mg的乙酸氯代甲基酯(0.40mmol,2.0eq.)的2mL无水乙腈溶液中加入30mg碘化钠(0.20mmol,1.0eq.)，将反应混合物于70℃搅拌直到观察不到进一步的转化。反应混合物通过反相色谱纯化，采用三氟乙酸/乙腈(0.5mL/L)和三氟乙酸/H2O(0.5mL/L)作为洗脱液。获得步骤A的化合物，为三氟乙酸盐。MS:M＝1131.0
步骤B:实施例25
向105mg上面步骤A的化合物(0.0842mmol,1eq.)的4mL二氯甲烷溶液中加入300μL三氟乙酸，将反应混合物于室温下搅拌直到观察不到进一步的转化。将反应混合物蒸发至干，然后将其通过反相色谱纯化，采用三氟乙酸/乙腈(0.5mL/L)和三氟乙酸/H2O(0.5mL/L)作为洗脱液。冷冻干燥后，获得为白色固体的实施例25。C49H46BrClFN6O8S的HRMS实测值:1011.1948；实测值1011.1949(M)
实施例26:4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-{[(乙氧基羰基)氧基]甲基}-1-甲基哌嗪-1-
三氟乙酸盐
步骤A:4-(2-{3-溴-2-氯代-4-[6-(4-氟苯基)-4-{[(2R)-1-[(4-甲氧基苄基)氧基]-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)-1-氧代丙-2-基]氧基}-(5Sa)-噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]苯氧基}乙基)-1-{[(乙氧基羰基)氧基]甲基}-1-甲基哌嗪-1-
三氟乙酸盐
向252mg实施例5步骤A中获得的化合物(0.20mmol,1eq.)和55mg氯代甲基碳酸乙酯(0.40mmol,2.0eq.)的2mL无水乙腈溶液中加入30mg碘化钠(0.20mmol,1.0eq.)，将反应混合物于70℃搅拌直到观察不到进一步的转化。反应混合物通过反相色谱纯化，采用三氟乙酸/乙腈(0.5mL/L)和三氟乙酸/H2O(0.5mL/L)作为洗脱液。获得步骤A的化合物，为三氟乙酸盐。C58H56BrClFN6O10S的HRMS实测值:1161.2629实测值1161.2674(M)
步骤B:实施例26
向240mg上面步骤A的化合物(0.188mmol,1eq.)的4mL二氯甲烷溶液中加入300μL三氟乙酸，将反应混合物于室温下搅拌直到观察不到进一步的转化。将反应混合物蒸发至干，然后将其通过反相色谱纯化，采用三氟乙酸/乙腈(0.5mL/L)和三氟乙酸/H2O(0.5mL/L)作为洗脱液。冷冻干燥后，获得为白色固体的实施例26。C50H48BrClFN6O9S的HRMS实测值:1041.2054；实测值1041.2049(M)
实施例27:4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-{[(二乙基氨基甲酰基)氧基]甲基}-1-甲基哌嗪-1-
三氟乙酸盐
步骤A:4-(2-{3-溴-2-氯代-4-[6-(4-氟苯基)-4-{[(2R)-1-[(4-甲氧基苄基)氧基]-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)-1-氧代丙-2-基]氧基}-(5Sa)-噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]苯氧基}乙基)-1-{[(二乙基氨基甲酰基)氧基]甲基}-1-甲基哌嗪-1-
三氟乙酸盐
向212mg实施例5步骤A中获得的化合物(0.20mmol,1eq.)和66mg N,N-二乙基氨基甲酸氯代甲基酯(0.40mmol,2.0eq.)的2mL无水乙腈溶液中加入30mg碘化钠(0.20mmol,1.0eq.)，将反应混合物于70℃搅拌直到观察不到进一步的转化。反应混合物通过反相色谱纯化，采用三氟乙酸/乙腈(0.5mL/L)和三氟乙酸/H2O(0.5mL/L)作为洗脱液。获得步骤A的化合物，为三氟乙酸盐。C60H61BrClFN7O9S的HRMS实测值:1188.3102；实测值1188.3101(M)
步骤B:实施例27
向208mg上面步骤A的化合物(0.160mmol,1eq.)的4mL二氯甲烷溶液中加入300μL三氟乙酸，将反应混合物于室温下搅拌直到观察不到进一步的转化。将反应混合物蒸发至干，然后将其通过反相色谱纯化，采用三氟乙酸/乙腈(0.5mL/L)和三氟乙酸/H2O(0.5mL/L)作为洗脱液。冷冻干燥后，获得为白色固体的实施例27。C52H53BrClFN7O8S的HRMS实测值:1068.2527；实测值1068.2514(M)
实施例28:4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-[(甘氨酰基氧基)甲基]-1-甲基哌嗪-1-
在实施例28中，方法如实施例1所述，采用适当的式(IV)的氯化物衍生物和适当的式(II)的噻吩并嘧啶化合物。获得的化合物为季铵盐，其中平衡离子可以选自溴离子、氯离子、碘离子、乙酸根、三氟乙酸根、苯甲酸根、甲磺酸根、甲苯磺酸根、三氟甲磺酸根等。
实施例29:4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-{1-[(二乙基氨基甲酰基)氧基]乙基}-1-甲基哌嗪-1-
三氟乙酸盐
步骤A:4-(2-{3-溴-2-氯代-4-[6-(4-氟苯基)-4-{[(2R)-1-[(4-甲氧基苄基)氧基]-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)-1-氧代丙-2-基]氧基}-(5Sa)-噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]苯氧基}乙基)-1-{1-[(二乙基氨基甲酰基)氧基]乙基}-1-甲基哌嗪-1-
三氟乙酸盐
向250mg实施例5步骤A中获得的化合物(0.236mmol,1.0eq.)和212mg实施例21步骤A中获得的化合物(1.18mmol,5.0eq.)的5mL乙腈溶液中加入71mg碘化钠(0.471mmol,2.0eq.)，将其于45℃搅拌45分钟。将反应混合物冷却，过滤，然后将其通过反相色谱纯化，采用三氟乙酸/乙腈(0.5mL/L)和三氟乙酸/H2O(0.5mL/L)作为洗脱液。获得步骤A的化合物，为非对映异构体的三氟乙酸盐(非对映异构体未分离)。MS:(M+H)2+＝602.8
步骤B:实施例29
向51mg上面步骤A的化合物(0.0387mmol,1eq.)的5mL二氯甲烷溶液中加入800μL三氟乙酸，将反应混合物于室温下搅拌直到观察不到进一步的转化。将反应混合物蒸发至干，然后将其通过反相色谱纯化，采用三氟乙酸/乙腈(0.5mL/L)和三氟乙酸/H2O(0.5mL/L)作为洗脱液。冷冻干燥后，获得为白色固体的实施例29(非对映异构体未分离)。C53H55BrClFN7O8S的HRMS实测值:1082.2683；实测值541.6396(M+H)2+和541.6389(M+H)2+
实施例30:4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-甲基-1-[(5-甲基-2-氧代-1,3-间二氧杂环戊烯-4-基)甲基]哌嗪-1-
三氟乙酸盐
步骤A:4-(2-{3-溴-2-氯代-4-[6-(4-氟苯基)-4-{[(2R)-1-[(4-甲氧基苄基)氧基]-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)-1-氧代丙-2-基]氧基}-(5Sa)-噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]苯氧基}乙基)-1-甲基-1-[(5-甲基-2-氧代-1,3-间二氧杂环戊烯-4-基)甲基]哌嗪-1-
三氟乙酸盐
向212mg实施例5步骤A中获得的化合物(0.200mmol,1eq.)和59mg的4-(氯代甲基)-5-甲基-1,3-间二氧杂环戊烯-2-酮(0.40mmol,2.0eq.)的2mL无水乙腈溶液中加入30mg碘化钠(0.20mmol,1.0eq.)，将反应混合物于70℃搅拌直到观察不到进一步的转化。反应混合物通过反相色谱纯化，采用三氟乙酸/乙腈(0.5mL/L)和三氟乙酸/H2O(0.5mL/L)作为洗脱液。获得步骤A的化合物，为三氟乙酸盐。C59H54BrClFN6O10S的HRMS实测值:1171.2473；实测值1171.2461(M)
步骤B:实施例30
向225mg上面步骤A的化合物(0.175mmol,1eq.)的8mL二氯甲烷溶液中加入600μL三氟乙酸，将反应混合物于室温下搅拌直到观察不到进一步的转化。将反应混合物蒸发至干，然后将其通过反相色谱纯化，采用三氟乙酸/乙腈(0.5mL/L)和三氟乙酸/H2O(0.5mL/L)作为洗脱液。冷冻干燥后，获得为白色固体的实施例30。C51H46BrClFN6O9S的HRMS实测值:1051.1897；实测值1051.1891(M)
实施例31:4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-甲基-1-[(L-缬氨酰基氧基)甲基]哌嗪-1-
在实施例31中，方法如实施例1所述，采用适当的式(IV)的氯化物衍生物和适当的式(II)的噻吩并嘧啶化合物。获得的化合物为季铵盐，其中平衡离子可以选自溴离子、氯离子、碘离子、乙酸根、三氟乙酸根、苯甲酸根、甲磺酸根、甲苯磺酸根、三氟甲磺酸根等。
实施例32:4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-{[(2,2-二甲基丙酰基)氧基]甲基}-1-甲基哌嗪-1-
三氟乙酸盐
步骤A:4-(2-{3-溴-2-氯代-4-[6-(4-氟苯基)-4-{[(2R)-1-[(4-甲氧基苄基)氧基]-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)-1-氧代丙-2-基]氧基}-(5Sa)-噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]苯氧基}乙基)-1-{[(2,2-二甲基丙酰基)氧基]甲基}-1-甲基哌嗪-1-
三氟乙酸盐
向212mg实施例5步骤A中获得的化合物(0.200mmol,1eq.)和60mg的2,2-二甲基丙酸氯代甲基酯(0.40mmol,2.0eq.)的2mL无水乙腈溶液中加入30mg碘化钠(0.20mmol,1.0eq.)，将反应混合物于70℃搅拌直到观察不到进一步的转化。反应混合物通过反相色谱纯化，采用三氟乙酸/乙腈(0.5mL/L)和三氟乙酸/H2O(0.5mL/L)作为洗脱液。获得步骤A的化合物，为三氟乙酸盐。C60H60BrClFN6O9S的HRMS实测值:1173.2993；实测值1173.2994(M)
步骤B:实施例32
向215mg上面步骤A的化合物(0.167mmol,1eq.)的8mL二氯甲烷溶液中加入600μL三氟乙酸，将反应混合物于室温下搅拌直到观察不到进一步的转化。将反应混合物蒸发至干，然后将其通过反相色谱纯化，采用三氟乙酸/乙腈(0.5mL/L)和三氟乙酸/H2O(0.5mL/L)作为洗脱液。冷冻干燥后，获得为白色固体的实施例32。C52H52BrClFN6O8S的HRMS实测值:1053.2418；实测值1053.2405(M)
根据它们的电荷和溶液的pH，实施例1、4、5和8－15可以以四种离子形式存在(两性离子、双阴离子、阴离子或阳离子)；实施例2、3、6和7可以以三种形式存在(两性离子、阴离子或阳离子)；实施例16－32可以两种形式存在(两性离子或阳离子)。
药理学研究
实施例A：通过荧光偏振技术抑制Mcl-1
通过荧光偏振(FP)确定每种化合物的相对结合效力。该方法使用荧光素标记的配体(荧光素-βAla-Ahx-A-REIGAQLRRMADDLNAQY-OH；mw 2765)，其能够与Mcl-1蛋白结合(从而使得Mcl-1对应于
入藏登记号：Q07820)导致使用读数器以毫极化(mP)单位测定的各向异性增加。添加与配体相同位点竞争性结合的化合物将导致系统中未结合配体的比例更大，由mP单位的减少表示。
在DMSO中制备每种化合物的11点连续稀释液，将2μl转移到平底、低结合的384孔板中(最终DMSO浓度为5％)。然后加入38μl的缓冲液(10mM 4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸[HEPES]，150mM NaCl，0.05％Tween 20，pH 7.4)，其含有荧光素标记的配体(终浓度1nM)和Mcl-蛋白(终浓度5nM)。
将试验板在室温下温育约2小时，然后在Biomek Synergy2读数器上测定FP(Ex.528nm，Em.640nm，截止(Cut off)510nm)，计算mP单位。增加剂量的试验化合物的结合表示为与“仅5％DMSO”和“100％抑制”对照之间建立的窗口相比的mP减少百分比。通过XL-Fit软件，采用4-参数逻辑模型(S形剂量-响应模型)绘制11点剂量响应曲线，测定50％mP降低的抑制浓度(IC50)。结果列于下面表1中。
结果表明，本发明化合物能够抑制Mcl-1蛋白与上文所述的荧光肽之间的相互作用。
实施例B：体外细胞毒性
采用H929多发性骨髓瘤瘤系进行细胞毒性研究。
将细胞分配到微量板上并暴露于试验化合物48小时。然后通过比色测定法(Microculture Tetrazolium Assay(微量培养四氮唑试验))定量测定细胞存活率(Carmichael等，Cancer Res.1987,47,936－942)。
结果以IC50(抑制细胞存活率达50％的化合物浓度)表示，列于下面表1中。
结果表明，本发明化合物具有细胞毒性。
表1：Mcl-1抑制的IC50(荧光偏振试验)和H929细胞的细胞毒性
ND：未测定
实施例C：体内PARP裂解形式的定量测定
通过测定裂解的PARP水平，在AMO-1多发性骨髓瘤细胞的异种移植瘤模型中评估本发明化合物诱导细胞凋亡的能力。
将5.106个AMO-1细胞皮下移植到免疫抑制的小鼠(SCID品系)中。移植后12－14天，通过静脉内途径采用各种化合物处理动物。处理后，回收肿瘤块并裂解，定量测定肿瘤裂解物中裂解形式的PARP。
使用“Meso Scale Discovery(MSD)ELISA平台”试验进行定量测定，该试验可以特异性测定裂解形式的PARP。它以活化因子的形式表达，所述活化因子对应于治疗小鼠的肿瘤中裂解的PARP量除以未治疗小鼠的肿瘤中裂解的PARP的量之间的比率。
结果表明，本发明化合物能够在体内诱导AMO-1肿瘤细胞的凋亡。
实施例D：体内抗肿瘤活性
在AMO-1多发性骨髓瘤细胞的异种移植瘤模型中评估本发明化合物的抗肿瘤活性。
将1×107个AMO-1细胞皮下移植到免疫抑制的小鼠(SCID品系)中。移植后6－8天，当肿瘤块大小到约150mm3时，以日治疗方案(5天治疗)采用各种化合物处理小鼠。从治疗开始每周两次测量肿瘤大小。
采用ΔT/C比(即产品活性的条件(qualification)参数，其定义为处理组的肿瘤体积/未处理对照组的肿瘤体积的比率)获得的结果显示，本发明的化合物能够在治疗期后诱导持续、显著的完全肿瘤消退作用。
实施例E：溶解度试验
方法1：将样品在丙二醇中的溶液(约16.7mg/ml)用水稀释(30％丙二醇)。然后，将样品在室温下振荡72小时。振摇后，将样品离心，然后过滤液相，使用与UV检测结合的HPLC进行分析。为了确定实际浓度，建立了5点校准曲线。
例如，在这些条件下，与WO 2015/097123中公开的(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸的溶解度(63.3μM)相比，实施例1化合物的溶解度显著增加(≥4907μM)。
方法2：将样品(40mg/mL)稀释在用于体内研究的磷酸盐缓冲液(67.7mM，pH调节至7.4)中。将样品在室温下振摇，然后过滤。通过LC-MS-MS分析定量测定溶解的组分。
在这些条件下，实施例1和实施例11的化合物显示出高溶解度(>35mg/mL)，与分别公开于WO 2015/097123的(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸和(2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-氯代-4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氧基}-3-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)丙酸相比，其溶解性更好。
实施例F：药用组合物：片剂
1000片含有剂量5mg的选自实施例1－32的化合物..................5g
小麦淀粉....................................................20g
玉米淀粉....................................................20g
乳糖........................................................30g
硬脂酸镁....................................................2g
二氧化硅....................................................1g
羟丙基纤维素 2g。
Claims (29)
1.式(I)化合物：
其中：
◆Y代表-NH-基团或氧原子，
◆R1代表直链或支链C1-C6烷基、直链或支链C2-C6链烯基、直链或支链C2-C6炔基、直链或支链C1-C6烷氧基、-S-C1-C6烷基、直链或支链C1-C6多卤代烷基、羟基、羟基C1-C6烷基、氰基、-NR9R9’、-Cy1或卤素原子，
◆R2、R3和R4彼此互相独立代表氢原子、卤素原子、直链或支链C1-C6烷基、直链或支链C2-C6链烯基、直链或支链C2-C6炔基、直链或支链C1-C6多卤代烷基、羟基、羟基C1-C6烷基、直链或支链C1-C6烷氧基、-S-C1-C6烷基、氰基、硝基、-C0-C6烷基-NR9R9’、-O-C1-C6烷基-NR9R9’、-C(O)-OR9、-O-C(O)-R9、-C(O)-NR9R9’、-NR9-C(O)-R9’、-NR9-C(O)-OR9’、-C1-C6烷基-NR9-C(O)-R9’、-SO2-NR9R9’、-SO2-C1-C6烷基，
◆R5代表氢原子，
◆R6代表基团
◆R7代表氢原子或直链或支链C1-C6烷基，
◆R8代表-O-P(O)(O-)(O-)基团、-O-P(O)(O-)(OR10)基团、-O-P(O)(OR10)(OR10’)基团、-O-SO2-O-基团、-O-SO2-OR10基团、-Cy2、-O-C(O)-R9基团、-O-C(O)-OR9基团或-O-C(O)-NR9R9’基团；
◆R9和R9’彼此互相独立代表氢原子、直链或支链C1-C6烷基或直链或支链氨基C1-C6烷基，
◆R10和R10’彼此互相独立代表氢原子、直链或支链C1-C6烷基或芳基烷基C1-C6基团，
◆Cy1和Cy2彼此互相独立代表环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，
如此定义的铵可能以两性离子形式存在，或者具有单价阴离子平衡离子，
应当理解：
-“芳基”是指苯基或萘基，
“杂芳基”是指由5－10个环成员组成的任何单环或双环基团，其具有至少一个芳族部分并含有1－3个选自氧、硫和氮的杂原子，
-“环烷基”是指含有3－10个环成员的任何单环或双环非芳族碳环基团，
-“杂环烷基”是指任何含有3－10个环成员并含有1－3个选自氧、硫和氮的杂原子的单环或双环非芳族碳环基团，其可以包括稠合、桥接或螺环系统，
如此定义的芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基以及烷基、链烯基、炔基、烷氧基可能被1－4个选自下列的基团取代：直链或支链C1-C6烷基、直链或支链C2-C6链烯基、直链或支链C2-C6炔基、直链或支链C1-C6烷氧基、C1-C6烷基-S-、羟基、氧代或适当的N-氧化物、硝基、氰基、-C(O)-OR’、-O-C(O)-R’、-C(O)-NR’R”、-NR’R”、-(C＝NR’)-OR”、直链或支链C1-C6多卤代烷基、三氟甲氧基或卤素，应当理解R’和R”彼此互相独立代表氢原子或直链或支链C1-C6烷基，应当理解，前述可能的取代基的一或多个碳原子可以是氘化的，
它们的对映异构体、非对映异构体和阻转异构体及其与可药用的酸或碱的加成盐。
2.权利要求1的式(I)化合物，其中Y代表氧原子。
3.权利要求1的式(I)化合物，其中选自基团R2、R3和R4的至少一个基团不代表氢原子。
4.权利要求1的式(I)化合物，其中R1代表直链或支链C1-C6烷基或卤素原子。
5.权利要求1的式(I)化合物，其中R2代表卤素原子、羟基、直链或支链C1-C6烷氧基。
6.权利要求1的式(I)化合物，其中R3和R4代表氢原子。
7.权利要求1的式(I)化合物，其中对(R1,R4)的取代基是相同的，对(R2,R3)的取代基是相同的。
8.权利要求1的式(I)化合物，其中R6代表基团
9.权利要求1的式(I)化合物，其中R6代表基团
10.权利要求1的式(I)化合物，其中R7代表甲基或氢原子。
11.权利要求1的式(I)化合物，其中R8代表-O-P(O)(O-)(OR10)基团，其中R10代表氢原子、苄基或甲基。
12.权利要求1的式(I)化合物，其中R8代表5-甲基-2-氧代-1,3-间二氧杂环戊烯-4-基；-O-C(O)-CH3基团；-O-C(O)-tBu基团；
-O-C(O)-CH2-NH2基团；-O-C(O)-CH[CH(CH3)2]-NH2基团；
-O-C(O)-O-CH2CH3基团；或-O-C(O)-N(CH2CH3)2基团。
13.权利要求1的化合物，所述化合物为：
-{4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐；
-{4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸苄基酯；
-{4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸甲酯；
-{4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-乙基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐；
-{4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐；
-{4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸苄基酯；
-{4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸甲酯；
-N-[(5Sa)-5-{3-氯代-4-[2-(4-{[(羟基次膦酸根合)氧基]甲基}-4-甲基哌嗪-4-
-1-基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯基丙氨酸；
-{4-[2-(4-{4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2,6-二氯代-3,5-二甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐；
-{4-[2-(4-{4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-3,5-二甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐；
-{[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基](二甲基)铵基}甲基磷酸氢盐；
-1-{4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}乙基磷酸氢盐；
-1-{4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}乙基磷酸氢盐；
-{1-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-4-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐；
-{1-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-4-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐；
-{4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基硫酸盐；
-1-[(乙酰基氧基)甲基]-4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-{[(乙氧基羰基)氧基]甲基}-1-甲基哌嗪-1-
-4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-{[(二乙基氨基甲酰基)氧基]甲基}-1-甲基哌嗪-1-
-4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-[(甘氨酰基氧基)甲基]-1-甲基哌嗪-1-
-4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-{1-[(二乙基氨基甲酰基)氧基]乙基}-1-甲基哌嗪-1-
-4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-甲基-1-[(5-甲基-2-氧代-1,3-间二氧杂环戊烯-4-基)甲基]哌嗪-1-
-4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-甲基-1-[(L-缬氨酰基)甲基]哌嗪-1-
-4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-{[(2,2-二甲基丙酰基)氧基]甲基}-1-甲基哌嗪-1-
-1-[(乙酰基氧基)甲基]-4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-{[(乙氧基羰基)氧基]甲基}-1-甲基哌嗪-1-
-4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-{[(二乙基氨基甲酰基)氧基]甲基}-1-甲基哌嗪-1-
-4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-[(甘氨酰基氧基)甲基]-1-甲基哌嗪-1-
-4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-{1-[(二乙基氨基甲酰基)氧基]乙基}-1-甲基哌嗪-1-
-4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-甲基-1-[(5-甲基-2-氧代-1,3-间二氧杂环戊烯-4-基)甲基]哌嗪-1-
-4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-甲基-1-[(L-缬氨酰基)甲基]哌嗪-1-
-4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-{[(2,2-二甲基丙酰基)氧基]甲基}-1-甲基哌嗪-1-
14.权利要求1的化合物，所述化合物为{4-[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐。
15.权利要求1的化合物，所述化合物为{4-[2-(3-溴-4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代苯氧基)乙基]-1-甲基哌嗪-1-
-1-基}甲基磷酸氢盐。
16.权利要求1的化合物，所述化合物为{[2-(4-{(5Sa)-4-[(1R)-1-羧基-2-(2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯基)乙氧基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基}-2-氯代-3-甲基苯氧基)乙基](二甲基)铵基}甲基磷酸氢盐。
17.制备权利要求1的化合物的方法，其特征在于采用式(II)化合物作为原料：
其中R1、R2、R3、R4、R5和Y如式(I)所定义，R6’代表-N(CH3)2基团或4-甲基-哌嗪基，
使得式(II)化合物经过保护羧酸官能团的反应，获得式(III)化合物：
其中R1、R2、R3、R4、R6’和Y如上文所定义，T代表羧酸官能团的保护基，
将式(III)化合物与式(IV)化合物进行偶合：
其中R7和R8如式(I)所定义，
获得式(V)化合物：
其中R1、R2、R3、R4、T和Y如上文所定义，R6如权利要求1所定义，
然后使其进行羧酸官能团的脱保护反应，
得到式(I)化合物，其可根据常规分离技术纯化，如果需要，将其转化成与可药用的酸或碱的加成盐，然后根据常规分离技术将其任选分离为其异构体，
应当理解，在上述方法的过程中认为合适的任何时刻，起始原料或合成中间体的某些基团均可以被保护，随后脱保护和官能团化，这根据合成的需要进行。
18.药物组合物，其包含权利要求1－16中任一项的式(I)化合物或其与可药用的酸或碱的加成盐以及一或多种可药用的赋形剂。
19.权利要求18的药物组合物在生产用作促凋亡剂的药物中的用途。
20.权利要求18的药物组合物在生产用于治疗癌症以及免疫系统疾病的药物中的用途。
21.权利要求18的药物组合物在生产用于治疗自身免疫疾病的药物中的用途。
22.权利要求18的药物组合物在生产用于治疗下列癌症的药物中的用途：膀胱癌、脑癌、乳腺癌和子宫癌、结肠癌、食道癌和肝癌、淋巴瘤、黑素瘤、恶性血液病、骨髓瘤、卵巢癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、胰腺癌和小细胞肺癌。
23.权利要求18的药物组合物在生产用于治疗下列癌症的药物中的用途：慢性淋巴性白血病、淋巴母细胞白血病和急性髓性白血病。
24.权利要求1－16中任一项的式(I)化合物或其与可药用的酸或碱的加成盐在生产用于治疗下列癌症的药物中的用途：膀胱癌、脑癌、乳腺癌和子宫癌、结肠癌、食道癌和肝癌、淋巴瘤、黑素瘤、恶性血液病、骨髓瘤、卵巢癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、胰腺癌和小细胞肺癌。
25.权利要求1－16中任一项的式(I)化合物或其与可药用的酸或碱的加成盐在生产用于治疗下列癌症的药物中的用途：慢性淋巴性白血病、淋巴母细胞白血病和急性髓性白血病。
26.权利要求1－16中任一项的式(I)化合物与选自下列的抗癌药的组合产品：基因毒性药物、有丝分裂毒物、抗代谢物、蛋白酶体抑制剂、激酶抑制剂和抗体。
27.药物组合物，其包含权利要求26的组合产品以及一或多种可药用的赋形剂。
28.权利要求26的组合产品在生产用于治疗癌症的药物中的用途。
29.权利要求1－16中任一项的式(I)化合物在制备用于治疗需要放疗的癌症的药物中的用途。
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