KR20230166221A - 중동호흡기증후군 코로나바이러스 및 이의 용도 - Google Patents

중동호흡기증후군 코로나바이러스 및 이의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 중동호흡기증후군 코로나바이러스(Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus) 및 이의 용도에 관한 것으로, 구체적으로 EMC 표준주 및 국내분리주(KNIH-002)에 대한 4종의 중화항체를 이용하여 선택압(selective pressure) 방법 및 20회 계대배양에 의해 제조된 메르스 바이러스 및 이를 포함하는 백신 조성물에 관한 것이다.

Description

중동호흡기증후군 코로나바이러스 및 이의 용도{Middle East Respiratory Syndrome coronavirus and uses thereof}
본 발명은 중동호흡기증후군 코로나바이러스(메르스 바이러스, MERS virus, Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus) 및 이의 용도에 관한 것이다.
메르스 코로나바이러스(Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus, MERS-CoV)는 beta-coronavirus 속(genus)에 속하며, 여기에는 사스바이러스(SARS-CoV), 인간 코로나바이러스(HCoV-HKU1), 그리고 박쥐에서 발견되는 여러 코로나바이러스가 포함되어 있다. Single stranded positive-sense RNA 바이러스로 전체유전자 크기는 약 28-30 kb이며 4개의 구조단백질인 Spike (S), Nucleocapsid (N), Membrane (M), Envelope (E) 단백질과 ORF3, ORF4a, ORF4b, ORF5, ORF8a의 accessory 단백질로 구성되어 있다. 이 중 Spike (S) 단백질은 S1과 S2로 나뉘어지며 S1 부위에는 종 특이적인 숙주세포의 DPP4 (Dipeptidyl peptidase 4, CD26) 수용체와 결합하는 RBD (Receptor Binding Domain) 부위가 존재한다. 따라서 일반 마우스(C57BL/6, BALB/c)에는 감수성이 없고, 인간 DPP4를 발현하는 형질전환 마우스에서만 감염 감수성이 있다. MERS-CoV의 Accessory 단백질(ORF3, 4a, 4b 그리고 5)이 감염과 병원성에 중요한 역할을 한다고 보고되었다.
국외 확진자 검체중에 ORF4a와 ORF3의 일부가 결손(deletion)된 변이주와 국내 확진자 검체중에도 RBD 부위의 특정 아미노산이 바뀐 변이주가 분리되었지만 아직까지 변이들에 대한 분석은 미비한 상황이다.
2012년 사우디아라비아에서 처음 발생한 중동호흡기증후군은 이후 중동 지역 중심으로 현재 27개국으로 확산되어, 전 세계적으로 2,578명 확진자와 888명의 사망자를 일으킨 치명율이 약 35%(WHO, 2021년 8월 기준)에 이른다. 현재까지도 지속적으로 중동지역에서 메르스 바이러스가 발생('21년 12명 발생, '21.10.6 기준)하고 있어 국내 재유입 가능성이 높다.
2015년 5월 국내 첫 메르스 환자 발생이후 종결까지 약 두 달간 총 186명의 확진자와 38명의 사망자(치명율 20.4%)가 발생하여 사우디아라비아 다음으로 가장 많은 환자 발생을 보였다. 또한 확진자의 접촉자로 분류된 1만6693명이 격리되는 등 전 국민의 공중 보건을 위협할 뿐만 아니라 국가 경제에도 큰 피해를 주었다. 국내 메르스 유행은 병원내 감염뿐 아니라 병원에서 병원으로 전파하는 양상을 보인 것이 특징이었으며, 2018년 9월에는 중동여행자 1명이 발생하였다.
백신개발 연구는 재조합 S 단백질, S 단백질을 발현하는 DNA 백신 및 재조합 바이러스(adenovirus, vaccinia)등 다양한 플랫폼을 기반으로 한 동물연구가 진행되고 있으나, 현재까지 상용화된 백신은 없는 상황이다. 영국과 독일에서는 각각 침팬지 아데노 바이러스와 백시니아 바이러스 플랫폼으로 임상1상이 진행중이다. 국내 진원생명과학과 미국(Inovio, Walter Reed Army Institute of Research) 이 공동으로 개발한 DNA 백신(GLS-5300) 플랫폼이 미국에서 임상1상이 완료된 상황이며 현재는 국내 1/2a 임상시험이 허가된 상황이다. 그 외에도 불활성화된 바이러스, 단백질 subunit, 나노파티클, 바이러스 유사입자 (Virus-like particle, VLP), mRNA 플랫폼으로 다양하게 메르스 바이러스 백신 물질들을 동물실험까지 활발히 진행 중이다.
한국등록특허 제2005685호 한국등록특허 제2047072호
Scientific Reports. (2022)12:1260. Plos One. (2020) 15(5):e0232757.
상기의 문제점을 해결하기 위해, 본 발명은 약독화된 메르스 바이러스를 이용한 백신후보물질을 개발하는 것을 목적으로 한다.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 서열번호 3의 유전자를 포함하는 중동호흡기증후군 코로나바이러스를 제공한다.
본 발명의 일 예에서, 상기 바이러스는 중동호흡기증후군 코로나바이러스에 대한 중화항체를 이용하여 선택압(selective pressure) 방법으로 제조되는 것일 수 있고, 상기 중화항체는 중동호흡기증후군 코로나바이러스의 스파이크 단백질에 대한 단클론 항체인 것일 수 있으며, 바람직하게 상기 중화항체는 중동호흡기증후군 코로나바이러스의 스파이크 단백질에 대한 90B2 단클론 항체인 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 다른 예에서, 상기 중동호흡기증후군 코로나바이러스는 Vero세포에서 20회 계대배양으로 제조되는 것일 수 있다.
또한, 본 발명은 국내분리주(KNIH-002)에 중동호흡기증후군 코로나바이러스에 대한 중화항체를 선택압(selective pressure)을 조건을 충족할 수 있는 농도로 처리하는 단계; Vero 세포에 감염시키는 단계; 및 계대배양하는 단계;를 포함하고, 서열번호 3의 유전자를 포함하는 중동호흡기증후군 코로나바이러스를 제조하는 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 예에서, 상기 농도는 1 ㎍인 것일 수 있고, 상기 계대배양은 20회인 것일 수 있다.
본 발명은 상기 중동호흡기증후군 코로나바이러스를 포함하는 백신 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 예에서, 상기 백신 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 추가로 포함하는 것일 수 있다. 백신에 적합한 담체는 기술 분야의 당업자에게 공지되어 있으며, 단백질, 당 등을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기의 담체는 수용액 또는 비-수용액, 현탁액 또는 에멀젼일 수 있다. 비-수용액 담체의 예로는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식용유 예컨대 올리브 오일 및 주사 가능한 유기 에스테르 예컨대 에틸올리에이트를 들 수 있다. 수용액 담체는 식염수 및 완충배지를 포함하는 물, 알코올/수용액, 에멀젼 또는 현탁액을 포함한다. 비경구 담체는 염화나트륨 용액, 링거 덱스트로오스, 덱스트로오스 및 염화나트륨, 유산처리 링거 또는 고정 오일을 포함한다. 정맥주사용 담체는 예컨대 링거 덱스트로오스를 기본으로 하는 것과 같은 전해질 보충제, 액체 및 영양 보충제 등을 포함한다. 방부제 및 기타 첨가제는 예컨대 항미생물제제, 항산화제, 킬레이트제, 불활성 가스 등과 같은 것을 포함할 수 있다. 바람직한 방부제는 포르말린, 티메로살, 네오마이신, 폴리믹신 B 및 암포테리신 B를 포함한다.
또한, 상기 백신 조성물은 희석액의 형태로 어주번트(adjuvant, 면역조성제, 면역증강제)를 추가로 포함할 수 있다.
상기 어주번트는 면역반응의 향상 및/또는 접종 후 흡수 속도를 촉진하는 화합물 또는 혼합물을 칭하는 것으로 임의의 흡수-촉진제를 포함한다. 허용가능한 어주번트로는 프로인트 완전 어주번트, 프로인트 불완전 어주번트, 사포닌, 미네랄 겔, 예컨대 수산화 알루미늄, 계면활성제 예컨대 리소레시틴, 플루론 폴리올, 다중음이온, 펩타이드, 오일 또는 탄화수소 에멀젼, 키홀림펫 헤모시아닌, 디니트로페놀 등을 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다. 바람직한 어주번트는 SEPPIC 사의 MONTANIDE IMS1313 어주번트이다.
본 발명의 목적을 위한 백신 조성물의 투여량은 투여대상의 상태, 투여 경로 및 투여 형태에 따라 조절될 수 있어 한정되지 않으며 증상에 따라 본 발명의 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 자명하게 다양한 범위 내에서 사용할 수 있으나, 통상적으로 본 발명에서는 실험적인 유효량으로 투여대상의 체중 1kg 당 001 내지 1㎖(105.0 TCID50/㎖ 이상), 바람직하게는 체중 1kg당 001 ~ 003㎖을 하루에 연속적 또는 간헐적으로 투여가 가능할 것으로 판단된다.
본 발명의 백신 조성물은 경구, 근육, 피하, 복강, 정맥, 진피, 안구, 뇌내 등의 투여경로를 통해 투여될 수 있으나 이에 한정되지 않으며, 바람직하게는 근육 투여경로를 통해 투여될 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 백신 조성물을 비인간 동물에게 투여하는 단계를 포함하는 중동호흡기증후군 코로나바이러스에 대한 예방 접종 방법을 제공한다.
본 발명의 약독화된 메르스 바이러스주는 지속적인 계대배양에도 비병원성을 유지하여 약독화 백신후보주로서의 가능성을 보여주었으며, 유전자 분석 결과 등을 통해 추후 메르스 바이러스의 병원성 분석 등에 활용할 수 있을 것이다.
도 1은 hDDP4 형질전환 마우스에서의 세포계대주(A)와 항체회피주(B) 감염에 따른 생존율을 나타낸 것이다.
도 2는 계대배양주(20회) 5종에 대한 비병원성 유지 실험 결과(몸무게 및 생존율)를 나타낸 것이다.
도 3은 계대배양주(20회) 5종에 대한 감염방어능 확인 동물실험 모식도를 나타낸 것이다.
도 4는 계대배양주(20회) 5종에 대한 감염방어능 확인 결과(몸무게 및 생존율)를 나타낸 것이다.
도 5는 계대배양주(20회) 5종에 대한 감염방어능 확인 결과(중화항체역가)를 나타낸 것이다.
도 6은 계대배양주(20회) 5종에 대한 감염방어능 확인 결과(Spike 단백질 특이 항체가)를 나타낸 것이다.
도 7은 계대배양주(20회) 3종에 대한 접종량 안전성 평가결과(체중변화 및 생존율)를 나타낸 것이다.
도 8은 계대배양주(20회) 5종에 대한 국내분리주와의 유전자 변이 비교 결과(SNP)를 나타낸 것이다. * Blue: synonymous, Red: non-synonymous
도 9는 계대배양주(20회) 5종에 대한 국내분리주와의 유전자 변이 비교 결과(삽입/결손)를 나타낸 것이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명한다. 다만, 하기의 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로서 본 발명의 범위가 하기의 실시예에 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 메르스 비병원성 바이러스 확보
가. 메르스 세포계대주 및 항체회피주 확보 및 특성 확인
1) 메르스 세포계대주(ORF5-del) 제작
- 선행연구를 통해 Vero 세포에서 국내분리주(KNIH-002)의 지속적인 세포계대(P5, P10) 배양을 통해 메르스 세포계대주(ORF5-del) 1종을 확보하였고, 본 발명에서는 P10을 사용하였음. 구체적인 제조방법은 하기와 같음.
- 메르스 바이러스의 유전자 변이 양상을 예측하고 관련 특성을 조사하기 위하여 국내 분리주(KNIH_002)를 온도(33℃, 37℃) 및 감수성 세포(Vero, Vero E6, Huh-7)에서 지속적으로 계대배양을 실시하였다.
- 국내 분리주의 세포병변효과를 비교한 결과, 온도조건에 따른 세포병변효과는 차이가 없었으나, Huh-7 감염 세포에서는 Vero 및 Vero E6 세포와 달리 syncytium이 관찰되었다(결과미제출).
- 배양 온도 및 감수성 세포주 별로 다양한 조건에서 5번째와 10번째 계대 배양한 바이러스의 전장 유전자 염기서열을 확보한 후, CLC Main Workbench 7.6.4를 이용하여 wild type 바이러스 (accession number: KT029139)의 염기 및 아미노산 서열을 이용하여 세대별 유전자 변이를 비교하였다.
- 그 결과, 바이러스에 감수성을 지닌 세포(Vero, Vero E6 및 Huh-7) 및 온도(33℃, 37℃) 조건에서 다양한 변이가 발생할 수 있음이 확인되었다. 세포주별로는 Huh-7 세포와 비교 시 Vero 및 Vero E6 세포에서 배양한 바이러스에서 유전자 deletion 변이가 많이 나타났다. 온도별로는 낮은 배양 온도에서 메르스 바이러스 유전자 ORF3부터 ORF5 사이의 유전자 deletion이 많이 확인되었다. 유전자별로 보면, ORF1a 유전자에서는 10개, ORF1b 3개, S 8개, ORF4a 2개, ORF5 4개, E 2개 및 M 1개의 변이가 확인되었다(결과미제출).
- 반면, 아미노산 수준에서는 ORF1a 유전자에서는 7개, ORF1b 1개, S 4개, ORF5 3개, E 2개 및 M 1개의 변이가 발생하였다. 특히, Vero 세포, 33℃에서 계대배양(P5, P10)한 바이러스는 ORF5 부위에 2개의 염기가 결핍되었고, Vero E6 세포, 37℃에서 계대배양(P5, P10)한 바이러스는 ORF3 말단부위의 12개 염기부터 ORF5 시작부위의 15개 염기까지 총 1,023개의 염기가 결핍되어 ORF4ab 유전자 전체가 결핍된 것이 확인되었다. 이 유전자 결핍 변이주들은 20 계대배양까지도 동일한 유전자 결핍(deletion) 양상을 보였다(결과미제출).
2) 메르스 중화항체 회피주 제작
- 선행연구를 통해 EMC 표준주와 국내분리주(KNIH-002) 바이러스에 대한 4종의 중화항체를 이용하여 Selective pressure 방법에 의해 중화항체를 회피하는 항체회피주 12종을 확보하였다. 상기 중화항체는 한국 등록특허 제1895228호에 구체적인 정보가 포함되어 있다. 이들 바이러스의 spike 유전자를 분석한 결과, RBD (Receptor Binding Domain) 부위 뿐만 아니라 Non-RBD 부위에서도 유전자 변이가 나타남을 확인하였다. 항체회피주는 B항체(90B2)에 대해 국내분리주(KNIH-002) 이용하여 제작된 6번, 7번(아미노산 변이 표에서 확인가능), D항체(90F2)에 대해 국내분리주(동일) 이용하여 제작된 9번이다. 구체적인 제조방법은 하기와 같다.
- 메르스 바이러스 유전자는 동물세포에서의 계대배양 이외에도 다양한 조건들에 의해 변이가 생성될 수 있다. 그 중 본 발명에서의 중화항체를 이용한 치료제 적용 시에도 이를 회피하려는 변이주가 생성될 가능성을 고려하여, 중화항체를 치료제로 적용 시 발생 가능한 변이 여부를 조사하고자 하였다.
- 본 발명의 이전 연구에서 개발된 메르스 바이러스에 대한 중화능이 우수한 4개의 A, B, C 및 D 단클론 항체를 293T 세포에서 transfection하여 발현 및 정제한 후 SDS-PAGE를 통해 항체가 잘 발현됨을 확인하였다(결과미제출).
- A, B, C, D 항체에 대한 회피 변이주를 유도하기 위해 국내 분리주 및 표준주(EMC)를 이용하여 선택압 조건을 충족할 수 있는 항체 농도를 선정하고자 하였다. 이를 위하여 1X105 PFU의 바이러스에 4종류의 항체를 다양한 농도로 각각 혼합하여 Vero 세포에 감염시킨 후 24시간 간격으로 세포병변효과를 관찰하였다.
- 항체 농도 및 배양기간을 고려하여, A 항체는 국내 분리주 및 표준주 각각에서의 최적 항체처리농도를 0.1 ㎍으로 선정하였고, B 및 C 항체의 경우 1 ㎍으로 선정하였으며, D 항체는 10 ㎍으로 선정하였다.
- 국내 분리주 및 표준주에 각 항체들을 선정된 농도로 처리하여 연속적으로 계대배양한 결과, 4~5 계대배양 후 고농도 항체를 처리하였음에도 불구하고 감염 후 2~3일에 90% 이상의 세포병변효과가 관찰되었다(결과미제출). 따라서 각 항체들에 회피하는 변이가 발생하였을 것으로 예상되어 plaque assay를 이용하여 각 조건별 7~8개의 plaque를 순수 분리배양하였다.
- 각 항체들과 함께 계대 배양된 표준주 및 국내 분리주에서 순수 분리된 바이러스의 Spike 1 (S1) 아미노산 변이를 분석하였다. 바이러스 RNA를 추출한 후 superscript IV를 이용하여 cDNA를 제작하였고, 이를 주형으로 PCR을 통해 증폭된 PCR 산물을 정제한 후 sequencing을 통해 염기 및 아미노산 서열을 분석하였다.
- 그 결과, A 항체에 대하여 순수 분리된 국내 유행주 8개 바이러스(항체회피주 4번) 모두 RBD 부위의 506번 아미노산 Leucin (L)이 Histidine (H)으로, 530번 아미노산 leucine이 valine으로 치환되었다(002-1EM). 그 이외 다른 S1 위치에서의 변이는 확인되지 않았다.
- 반면, 국내 분리주의 변이 양상과 달리 표준주의 경우, 순수 분리된 8개 바이러스에서 총 3종류의 변이주가 나타났다. 첫번째 유형은 (EMC-1EM) 506번 아미노산 Leucine (L)이 phenylalanine (F)으로, 512번 threonine (T)이 isoleucine (I)으로, 513번 glutamate (E)가 alanine (A)으로 치환되었다. 두번째 유형에서는 (EMC-4EM) 506번 Leucine (L)이 phenylalanine으로, 511번 arginine (R)이 leucine (L)으로, 513번 glutamate (E)가 alanine (A)으로 치환되었다. 세번째 변이주(EMC-6EM)는 511번 arginine (R)이 serine (S)으로, 512번 threonine (T)이 alanine (A)으로 치환되었다(결과미제출).
- B 항체에 대하여 순수 분리된 8개의 국내 분리주는 아미노산 변이 분석한 결과 2종류의 변이주가 발생하였다. 항체회피주 7번은 RBD에 속하는 463번 proline (P)이 leucine (L)으로 치환되었고, 530번 leucine (L)이 valine (V)으로 치환되었다. 또한 RBD 이외의 S1(NTD)에서는 32번, 94번 lysine (K), glycine (G)이 각각 glutamic acid (E) 및 arginine (R)으로 치환되었다.
- 항체회피주 6번은 S1(NTD)에서 32번, 94번 lysine (K), glycine (G)이 각각 glutamic acid (E) 및 arginine (R)으로 치환되었다. 그리고 표준주의 경우 순수 분리된 8개의 바이러스 모두 RBD에서 463번 proline (P)이 leucine (L)으로 치환되었으며, S1(NTD)에서는 65번 및 137번 serine (S)이 각각 phenylalanine (F) 및 arginine (R)으로 치환되었다.
- C 항체에 대하여 순수 분리된 국내 분리주 8개의 아미노산 분석시에도, 2종류의 변이주가 발생하였다. 항체회피주 9번은 RBD에 속하는 506번 leucine (L)이 Phenylalanine (F)으로 치환되었고 S1(NTD)에서는 65번 Serine (S)이 Phenylalanine (F)으로 치환되었다.
- 두 번째 변이주는 RBD에서 463번 및 506번 Proline (P)과 leucine (L)이 각각 leucine (L)과 Phenylalanine (F)으로 치환되었고 S1(NTD)에서는 128번 Glycine (G)이 leucine (L)으로 치환되었다. 그리고 표준주의 경우, 순수 분리된 8개의 바이러스 모두 RBD에서 575번 Valine (V)이 Phenylalanine (F)으로 치환되었다.
- D 항체에 대하여 순수 분리된 국내 분리주의 아미노산 분석 결과, 8개 모두 S1(NTD)에서 128번, 272번, 314번 Glycine (G), Aspartic acid (D), Tyrosine (Y)이 각각 Aspartic acid (D), Glycine (G), Histidine (H)으로 치환되었다. 그리고 표준주 또한, 순수 분리된 8개 바이러스 모두 S1(NTD)에서 141번 Arginine (R)이 leucine (L)으로 치환되었다.
- 반면, 항체 처리 없이 계대배양된 표준주 및 국내 분리주에서의 S1 아미노산 변이는 나타나지 않았다.
나. 세포계대주 및 항체회피주 병원성 여부 조사
- 확보된 세포계대주 및 항체회피주의 병원성 여부를 확인하기 위해 국내분리주(KNIH-002, wild type)를 양성대조로 하여 DPP4 형질전환 마우스에 1X104 pfu 역가로 intranasal (비강) 감염 후 2주 동안 매일 체중변화와 생존율을 측정하였다.
- 그 결과 국내분리주 접종군에서는 감염후 7일부터 체중이 감소하기 시작하면서 11일 안에 100% 폐사하였으나, 세포계대주 및 항체회피주 4종(Escape mutant-4, Escape mutant-6, Escape mutant-7, Escape mutant-9) 접종군에서는 체중변화도 크게 감소하지 않았고 100% 생존함으로써 병원성을 보이지 않았다(도 1).
<실시예 2> 메르스 비병원성 바이러스의 지속배양에 의한 안전성 확인
- hDDP4 형질전환 마우스에서 비병원성으로 확인된 세포계대주 1종(ORF5-del) 및 항체회피주 4종(4,6,7,9번)의 안전성을 확인하기 위하여 각각의 바이러스를 Vero 세포에서 20번 계대배양하였다.
- 20번 계대배양된 바이러스의 안전성 확인을 위해 hDPP4 형질전환 마우스에 1X104 pfu 역가(KNIH-002/wild-type주 대비 10LD50)로 비강감염후 2주 동안 매일 체중변화와 생존율을 측정하였다.
- 국내분리주(KNIH-002, wild type) 접종군에서는 감염 후 7일부터 체중이 감소하기 시작하면서 11일 안에 100% 폐사하였지만, 항체회피 계대배양주(20회) 3종(6,7,9번)에서는 100%, 항체회피 계대배양주(20회) 1종(4번)과 ORF-5del 계대배양주에서는 80% 생존율을 보였다(도 2).
- 실험결과 항체회피주 3종(6,7,9번)의 경우 20번 계대배양 후에도 비병원성이 유지됨을 확인하였다.
<실시예 3> 메르스 계대배양주(20번)의 감염 방어능 확인
- 계대배양주(20번) 5종(4,6,7,9,Orf5-del)의 감염 방어능 평가를 위해 메르스 바이러스(KNIH-002, wilde type) 대비 10LD50 (104 pfu/30 ㎕)의 농도로 비강 접종하여 면역시켰음. 2주 뒤에 메르스 바이러스(KNIH-002)를 100LD50 (105 pfu/30 ㎕)의 농도로 공격 접종하고 2주 동안 매일 체중변화 및 생존율을 측정하였다(도 3).
1) 체중변화 및 생존율
- 계대배양주(20번)로 면역하지 않은 그룹(G7, positive)에서는 메르스 바이러스 공격 접종후 4일부터 체중이 감소하다가 9일 이내에 모두 폐사하였고, 계대배양주로 면역한 그룹에서는 체중이 거의 감소하지 않고 100% 생존율을 보였다(도 4).
2) 중화항체역가 비교
가) 바이러스 중화항체역가(Virus Neutralization Titer) 측정
- 중화항체역가를 측정하기 위하여 바이러스 공격접종 전 안와채혈로 혈액을 확보하고 혈청은 분리하여 56℃에서 30분 비동화 시킨후 중화시험에 사용하였다.
- 혈청은 1/10부터 2단계 희석한 뒤 동량의 메르스 바이러스(100 TCID50)를 넣고 37℃에서 1시간 반응시킴. 그 후 바이러스와 혈청 혼합물을 Vero 세포에 넣어주고 37℃ 5% CO2 배양기에서 3~4일간 배양한 후 세포병변효과를 확인하여 중화항체역가를 측정하였다.
나) 측정결과 비교
- 계대배양주(20번) 5종 비교결과 4번>ORF5-del>9번>6번>7번 순으로 중화항체가가 높았다(도 5).
3) Spike 단백질에 대한 항체역가 비교
가) ELISA 항체가 측정
- Spike 단백질에 특이적인 항체가를 측정하기 위하여 바이러스 공격접종전 안와채혈로 혈액 확보하였음. 이후 혈청을 분리하여 1/1000부터 1/3씩 단계 희석하여 ELISA를 측정하였다.
나) 측정결과 비교
- 계대배양주(20번) 5종 비교결과 중화항체가 결과와 동일하게 4번>ORF5-del>9번>6번>7번 순으로 spike 단백질 특이적인 항체가가 높았다(도 6).
<실시예 4> 메르스 계대배양주(20번)의 접종량 안전성 확인
- 계대배양주(20번) 5종 중 10LD50 (104 pfu/30 ㎕)의 농도로 비강 접종시 100% 생존율을 보였던 6번, 7번 및 9번에 대해 접종량에 따른 안전성 확인을 위해, 메르스 바이러스(KNIH-002, wild type) 대비 100LD50 (105 pfu/30 ㎕)의 농도로 비강 접종하여 안전성을 평가하였다(표 1).
Groups Mouse number Remarks
G1 (6번) 5
- mice : hDPP4-Tg (6w, female)
- Virus dose : 105 pfu/30ul/mice
- Infection route : I.N
G2 (7번) 5
G3 (9번) 5
Gr (NIH002)
-infection positive
5
- 그 결과, 메르스 바이러스(KNIH-002, wild type)을 감염한 그룹(G4, positive)의 경우 6일째부터 체중이 감소하다가 9일이내에 모두 폐사하였고 계대배양주(20번) 9번으로 면역시킨 그룹(G3, 9번)의 경우 7일째부터 체중이 감소하다 10일째에 5마리중 4마리(80%)가 폐사하였다.
- 계대배양주(20번) 6번, 7번으로 면역시킨 그룹(G1/2, 6번/7번)의 경우 10%이상 체중감소 없이 100% 생존하였다(도 7).
<실시예 5> 메르스 계대배양주(20번) 전장 유전자분석
1) 전장 유전자 분석법
- 계대배양주(20번) 5종(세포배양주 1종(ORF5-del), 항체회피주 4종(4번,6번,7번,9번))에 대한 유전자 특성 분석을 위해 차세대염기서열분석방법(Next Generation Sequencing: NGS)을 이용하여 실시하였다.
2) 전장 유전자 분석
- 계대배양주(20번) 5종에 대한 NGS 유전자 분석결과 30,112bp~30,118bp의 유전자 전장서열을 완성하였다(표 2).
유래 계대배양주(20번) 전장 유전자(bp)
메르스 항체회피주 4번 30,118
6번 30,112
7번 30,118
9번 30,118
메르스 세포배양주 ORF 5-del 30,115
- 전장유전체 서열(4번, 서열번호 1)
GATTTAAGTGAATAGCTTGGCTATCTCACTTCCCCTCGTTCTCTTGCAGAACTTTGATTTTAACGAACTTAAATAAAAGCCCTGTTGTTTAGCGTATTGTTGCACTTGTCTGGTGGGATTGTGGCATTAATTTGCCTGCTCATCTAGGCAGTGGACATATGCTCAACACTGGGTATAATTCTAATTGAATACTATTTTTCAGTTAGAGCGTCGTGTCTCTTGTACGTCTCGGTCACAATATACGGTTTCGTCCGGTGCGTGGCAATTCGGGGCACATCATGTCTTTCGTGGCTGGTGTGATCGCGCAAGGTGCGCGCGGTACGTATCGAGCAGCGCTCAACTCTGAAAAACATCAAGACCATGTGTCTCTAACTGTGCCACTCTGTGGTTCAGGAAACCTGGTTGAAAAACTTTCACCATGGTTCATGGATGGCGAAAATGCCTATGAAGTGGTGAAGGCCATGTTACTTAAAAAAGAGCCACTTCTCTATGTGCCCATCCGGCTGGCTGGACACACTAGACACCTCCCAGGTCCTCGTGTGTACCTGGTTGAGAGGCTCATTGCTTGTGAAAATCCATTCATGGTTAACCAATTGGCTTATAGCTCTAGTGCAAATGGCAGCCTGGTTGGCACAACTTTGCAGGGCAAGCCTATTGGTATGTTCTTCCCTTATGACATCGAACTTGTCACAGGAAAGCAAAATATTCTCCTGCGCAAGTATGGCCGTGGTGGTTATCACTACACCCCAGTCCACTATGAGCGAGACAACACCTCTTGCCCTGAGTGGATGGACGATTTTGAGGCGGATCCTAAAGGCAAATATGCCCAGAATCTGCTTAAGAAGTTGATTGGCGGTGATGTCACTCCAGTTGACCAATACATGTGTGGCGTTGATGGAAAACCCATTAGTGCCTACGCATTTTTAATGGCCAAGGATGGAATAACCAAACTGGCTGATGTTGAAGCGGACGTCGCAGCACGTGCTGATGACGAAGGCTTCATCACATTAAAGAACAATCTATATAGATTGGTTTGGCATGTTGAGCGTAAAGACGTTCCATATCCTAAGCAATCTATTTTTACTATTAATAGTGTGGTCCAAAAGGATGGTGTTGAAAACACTCCTCCTCACTATTTTACTCTTGGATGCAAAATTTTAACGCTCACCCCACGCAACAAGTGGAGTGGCGTTTCTGACTTGTCCCTCAAACAAAAACTCCTTTACACCTTCTATGGTAAGGAGTCACTTGAGAACCCAACCTACATTTACCACTCCGCATTCATTGAGTGTGGAAGTTGTGGTAATGATTCCTGGCTTACAGGGAATGCTATCCAAGGGTTTGCCTGTGGATGTGGGGCATCATATACAGCTAATGATGTCGAAGTCCAATCATCTGGCATGATTAAGCCAAATGCTCTTCTTTGTGCTACTTGCCCCTTTGCTAAGGGTGACAGCTGTTCTTCTAATTGCAAACATTCAGTTGCTCAGTTGGTTAGTTACCTTTCTGAACGCTGTAATGTTATTGCTGATTCTAAGTCCTTCACACTTATCTTTGGTGGCGTAGCTTACGCCTACTTTGGATGTGAGGAAGGTACTATGTACTTTGTGCCTAGAGCTAAGTCTGTTGTCTCAAGGATTGGAGACTCCATCTTTACAGGCTGTACTGGCTCTTGGAACAAGGTCACTCAAATTGCTAACATGTTCTTGGAACAGACTCAGCATTCCCTTAACTTTGTGGGAGAGTTCGTTGTCAACGATGTTGTCCTCGCAATTCTCTCTGGAACCACAACTAATGTTGACAAAATACGCCAGCTTCTCAAAGGTGTCACCATTGACAAGTTGCGTGATTATTTAGCTGACTATGACGTAGCAGTCACTGCCGGCCCATTCATGGATAATGCTATTAATGTTGGTGGTACAGGATTACAGTATGCCGCCATTACTGCACCTTATGTAGTTCTCACTGGCTTAGGTGAGTCCTTTAAGAAAGTTGCAACCATACCGTACAAGGTTTGCAACTCTGTTAAGGATACTCTGACTTATTATGCTCACAGCGTGTTGTACAGAGTTTTTCCTTATGACATGGATTCTGGTGTGTCATCCTTTAGTGAACTACTTTTTGATTGCGTTGATCTTTCAGTAGCTTCTACCTATTTTTTAGTCCGCCTCTTGCAAGATAAGACTGGCGACTTTATGTCTACAATTATTACTTCCTGCCAAACTGCTGTTAGTAAGCTTCTAGATACATGTTTTGAAGCTACAGAAGCAACATTTAACTTCTTGTTAGATTTGGCAGGATTGTTCAGAATCTTTCTTCGCAATGCCTATGTGTACACTTCACAAGGGTTTGTGGTGGTCAATGGCAAAGTTTCTACACTTGTCAAACAAGTGTTAGACTTGCTTAATAAGGGTATGCAACTTTTGCATACAAAGGTCTCCTGGGCTGGTTCTAATATCAGTGCTGTTATCTACAGCGGCAGGGAGTCTCTAATATTCCCATCGGGAACCTATTACTGTGTCACCACTAAGGCTAAGTCCGTTCAACAAGATCTTGACGTTATTTTGCCTGGTGAGTTTTCCAAGAAGCAGTTAGGACTGCTCCAACCTACTGACAATTCTACAACTGTTAGTGTTACTGTATCCAGTAACATGGTTGAAACTGTTGTGGGTCAACTTGAGCAAACTAATATGCATAGTCCTGATGTTATAGTAGGTGACTATGTCATTATTAGTGAAAAATTGTTTGTGCGTAGTAAGGAAGAAGACGGATTCGCCTTCTACCCTGCTTGCACTAATGGTCATGCTGTACCGACTCTCTTTAGACTTAAGGGAGGTGCACCTGTAAAAAAAGTAGCCTTTGGCGGTGATCAAGTACATGAGGTTGCTGCTGTAAGAAGTGTTACTGTCGAGTACAACATTCATGCTGTATTAGACACACTACTTGCTTCTTCTAGTCTTAGAACCTTTGTTGTAGATAAGTCTTTGTCAATTGAGGAGTTTGCTGACGTAGTAAAGGAACAAGTCTCAGACTTGCTTGTTAAATTACTGCGTGGAATGCCGATTCCAGATTTTGATTTAGACGATTTTATTGACGCACCATGCTATTGCTTTAACGCTGAGGGTGATGCATCTTGGTCTTCTACTATGATCTTCTCTCTTCACCCCGTCGAGTGTGACGAGGAGTGTTCTGAAGTAGAGGCTTCAGGTTTAGAAGAAGGTGAATCAGAGTGCATTTCTGAGACTTCAACTGAACAAGTTGACGTTTCTCATGAGGTTTCTGACGACGAGTGGGCTGCTGCAGTTGATGAAGCGTTCCCCCTCGATGAAGCAGAAGATGTTACTGAATCTGTGCAAGAAGAAGCACAACCAGTAGAAGTACCTGTTGAAGATATTGCGCAGGTTGTCATAGCTGACACCTTACAGGAAACTCCTGTTGTGTCTGATACTGTTGAAGTCCCACCGCAAGTGGTGAAACTTCCGTCTGAACCTCAGACTATCCAGCCCGAGGTAAAAGAAGTTGCACCTGTCTATGAGGCTGATACCGAACAGACACAGAGTGTTACTGTTAAACCTAAGAGGTTACGCAAAAAGCGTAATGTTGACCCTTTGTCCAATTTTGAACATAAGGTTATTACAGAGTGCGTTACCATAGTTTTAGGTGACGCAATTCAAGTAGCCAAGTGCTATGGGGAGTCTGTGTTAGTTAATGCTGCTAACACACATCTTAAGCATGGCGGTGGTATCGCTGGTGCTATTAATGCGGCTTCAAAAGGGGCTGTCCAAAAAGAGTCAGATGAGTATATTCTGGCTAAAGGGCCGTTACAAGTAGGAGATTCAGTTCTCTTGCAAGGCCATTCTCTAGCTAAGAATATCCTGCATGTCGTAGGCCCAGATGCCCGCGCTAAACAGGATGTTTCTCTCCTTAGTAAGTGCTATAAGGCTATGAATGCATATCCTCTTGTAGTCACTCCTCTTGTTTCAACAGGCATATTTGGTGTAAAACCAGCTGTGTCTTTTGATTATCTTATTAGAGAGGCTAAGACTAGAGTTTTAGTCGTCGTTAATTCCCAAGATGTCTATAAGAGTCTTACCATAGTTGACATTCCACAGAGTTTGACTTTTTCATATGATGGGTTACGTGGCGCAATACGTAAAGCTAAAGATTATGGTTTTACTGTTTTTGTGTGCACAGACAACTCTGCTAACACTAAAGTTCTTAGGAACAAGGGTGTTGATTATACTAAGAAGTTTCTTACAGTTGACGGTGTGCAATATTATTGCTACACGTCTAAGGACACTTTAGATGATATCTTACAACAGGCTAATAAGTCTGTTGGTATTATATCTATGCCTTTGGGATATGTGTCTCATGGTTTAGACTTAATTCAAGCAGGGAGTGTCGTGCGTAGAGTTAACGTGCCCTACGTGTGTCTCCTAGCTAATAAAGAGCAAGAAGCTATTTTGATGTCTGAAGACGTTAAGTTAAACCCTTCAGAAGATTTTATAAAGCACGTCCGCACTAATGGTGGTTACAATTCTTGGCATTTAGTCGAGGGTGAACTATTGGTGCAAGACTTACGCTTAAATAAGCTCCTGCATTGGTCTGATCAAACCATATGCTACAAGGATAGTGTGTTTTATGTTGTAAAGAATAGTACAGCTTTTCCATTTGAAACACTTTCAGCATGTCGTGCGTATTTGGATTCACGCACGACACAGCAGTTAACAATCGAAGTCTTAGTGACTGTCGATGGTGTAAATTTTAGAACAGTCGTTCTAAATAATAAGAACACTTATAGATCACAGCTTGGATGCGTTTTCTTTAATGGTGCTGATATTTCTGATACCATTCCTGATGAGAAACAGAATGGTCACAGTTTATATCTAGCAGACAATTTGACTGCTGATGAAACAAAGGCGCTTAAAGAGTTATATGGCCCCGTTGATCCTACTTTCTTACACAGATTCTATTCACTTAAGGCTGCAGTCCATAAGTGG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CTGCGTGATTGCAAGTGAACAGTGCCCCCCGGGAAGAGCTCTACAGTGTGAAATGTAAATAAAAATAGCTATTATTCAATTAGATTAGGCTAATTAGATGATTTGCAAAAAAAAAAAA
- 전장유전체 서열(6번, 서열번호 2)
GATTTAAGTGAATAGCTTGGCTATCTCACCTCCCCTCGTTCTCTTGCAGAACTTTGATTTTAACGAACTTAAATAAAAGCCCTGTTGTTTAGCGTATTGTTGCACTTGTCTGGTGGGATTGTGGCATTAAGTTGCCTGCTCATCTAGGCAGTGGACATATGCTCAACACTGGGTATAATTCTAATTGAATACTATTTTTCAGTTAGAGCGTCGTGTCTCTTGTACGTCTCGGTCACAATATACGGTTTCGTCCGGTGCGTGGCAATTCGGGGCACATCATGTCTTTCGTGGCTGGTGTGATCGCGCAAGGTGCGCGCGGTACGTATCGAGCAGCGCTCAACTCTGAAAAACATCAAGACCATGTGTCTCTAACTGTGCCACTCTGTGGTTCAGGAAACCTGGTTGAAAAACTTTCACCATGGTTCATGGATGGCGAAAATGCCTATGAAGTGGTGAAGGCCATGTTACTTAAAAAAGAGCCACTTCTCTATGTGCCCATCCGGCTGGCTGGACACACTAGACACCTCCCAGGTCCTCGTGTGTACCTGGTTGAGAGGCTCATTGCTTGTGAAAATCCATTCATGGTTAACCAATTGGCTTATAGCTCTAGTGCAAATGGCAGCCTGGTTGGCACAACTTTGCAGGGCAAGCCTATTGGTATGTTCTTCCCTTATGACATCGAACTTGTCACAGGAAAGCAAAATATTCTCCTGCGCAAGTATGGCCGTGGTGGTTATCACTACACCCCAGTCCACTATGAGCGAGACAACACCTCTTGCCCTGAGTGGATGGACGATTTTGAGGCGGATCCTAAAGGCAAATATGCCCAGAATCTGCTTAAGAAGTTGATTGGCGGTGATGTCACTCCAGTTGACCAATACATGTGTGGCGTTGATGGAAAACCCATTAGTGCCTACGCATTTTTAATGGCCAAGGATGGAATAACCAAACTGGCTGATGTTGAAGCGGACGTCGCAGCACGTGCTGATGACGAAGGCTTCATCACATTAAAGAACAATCTATATAGATTGGTTTGGCATGTTGAGCGTAAAGACGTTCCATATCCTAAGCAATCTATTTTTACTATTAATAGTGTGGTCCAAAAGGATGGTGTTGAAAACACTCCTCCTCACTATTTTACTCTTGGATGCAAAATTTTAACGCTCACCCCACGCAACAAGTGGAGTGGCGTTTCTGACTTGTCCCTCAAACAAAAACTCCTTTACACCTTCTATGGTAAGGAGTCACTTGAGAACCCAACCTACATTTACCACTCCGCATTCATTGAGTGTGGAAGTTGTGGTAATGATTCCTGGCTTACAGGGAATGCTATCCAAGGGTTTGCCTGTGGATGTGGGGCATCATATACAGCTAATGATGTCGAAGTCCAATCATCTGGCATGATTAAGCCAAATGCTCTTCTTTGTGCTACTTGCCCCTTTGCTAAGGGTGACAGCTGTTCTTCTAATTGCAAACATTCAGTTGCTCAGTTGGTTAGTTACCTTTCTGAACGCTGTAATGTTATTGCTGATTCTAAGTCCTTCACACTTATCTTTGGTGGCGTAGCTTACGCCTACTTTGGATGTGAGGAAGGTACTATGTACTTTGTGCCTAGAGCTAAGTCTGTTGTCTCAAGGATTGGAGACTCCATCTTTACAGGCTGTACTGGCTCTTGGAACAAGGTCACTCAAATTGCTAACATGTTCTTGGAACAGACTCAGCATTCCCTTAACTTTGTGGGAGAGTTCGTTGTCAACGATGTTGTCCTCGCAATTCTCTCTGGAACCACAACTAATGTTGACAAAATACGCCAGCTTCTCAAAGGTGTCACCATTGACAAGTTGCGTGATTATTTAGCTGACTATGACGTAGCAGTCACTGCCGGCCCATTCATGGATAATGCTATTAATGTTGGTGGTACAGGATTACAGTATGCCGCCATTACTGCACCTTATGTAGTTCTCACTGGCTTAGGTGAGTCCTTTAAGAAAGTTGCAACCATACCGTACAAGGTTTGCAACTCTGTTAAGGATACTCTGACTTATTATGCTCACAGCGTGTTGTACAGAGTTTTTCCTTATGACATGGATTCTGGTGTGTCATCCTTTAGTGAACTACTTTTTGATTGCGTTGATCTTTCAGTAGCTTCTACCTATTTTTTAGTCCGCCTCTTGCAAGATAAGACTGGCGACTTTATGTCTACAATTATTACTTCCTGCCAAACTGCTGTTAGTAAGCTTCTAGATACATGTTTTGAAGCTACAGAAGCAACATTTAACTTCTTGTTAGATTTGGCAGGATTGTTCAGAATCTTTCTTCGCAATGCCTATGTGTACACTTCACAAGGGTTTGTGGTGGTCAATGGCAAAGTTTCTACACTTGTCAAACAAGTGTTAGACTTGCTTAATAAGGGTATGCAACTTTTGCATACAAAGGTCTCCTGGGCTGGTTCTAATATCAGTGCTGTTATCTACAGCGGCAGGGAGTCTCTAATATTCCCATCGGGAACCTATTACTGTGTCACCACTAAGGCTAAGTCCGTTCAACAAGATCTTGACGTTATTTTGCCTGGTGAGTTTTCCAAGAAGCAGTTAGGACTGCTCCAACCTACTGACAATTCTACAACTGTTAGTGTTACTGTATCCAGTAACATGGTTGAAACTGTTGTGGGTCAACTTGAGCAAACTAATATGCATAGTCCTGATGTTATAGTAGGTGACTATGTCATTATTAGTGAAAAATTGTTTGTGCGTAGTAAGGAAGAAGACGGATTCGCCTTCTACCCTGCTTGCACTAATGGTCATGCTGTACCGACTCTCTTTAGACTTAAGGGAGGTGCACCTGTAAAAAAAGTAGCCTTTGGCGGTGATCAAGTACATGAGGTTGCTGCTGTAAGAAGTGTTACTGTCGAGTACAACATTCATGCTGTATTAGACACACTACTTGCTTCTTCTAGTCTTAGAACCTTTGTTGTAGATAAGTCTTTGTCAATTGAGGAGTTTGCTGACGTAGTAAAGGAACAAGTCTCAGACTTGCTTGTTAAATTACTGCGTGGAATGCCGATTCCAGATTTTGATTTAGACGATTTTATTGACGCACCATGCTATTGCTTTAACGCTGAGGGTGATGCATCTTGGTCTTCTACTATGATCTTCTCTCTTCACCCCGTCGAGTGTGACGAGGAGTGTTCTGAAGTAGAGGCTTCAGGTTTAGAAGAAGGTGAATCAGAGTGCATTTCTGAGACTTCAACTGAACAAGTTGACGTTTCTCATGAGGTTTCTGACGACGAGTGGGCTGCTGCAGTTGATGAAGCGTTCCCCCTCGATGAAGCAGAAGATGTTACTGAATCTGTGCAAGAAGAAGCACAACCAGTAGAAGTACCTGTTGAAGATATTGCGCAGGTTGTCATAGCTGACACCTTACAGGAAACTCCTGTTGTGTCTGATACTGTTGAAGTCCCACCGCAAGTGGTGAAACTTCCGTCTGAACCTCAGACTATCCAGCCCGAGGTAAAAGAAGTTGCACCTGTCTATGAGGCTGATACCGAACAGACACAGAGTGTTACTGTTAAACCTAAGAGGTTACGCAAAAAGCGTAATGTTGACCCTTTGTCCAATTTTGAACATAAGGTTATTACAGAGTGCGTTACCATAGTTTTAGGTGACGCAATTCAAGTAGCCAAGTGCTATGGGGAGTCTGTGTTAGTTAATGCTGCTAACACACATCTTAAGCATGGCGGTGGTATCGCTGGTGCTATTAATGCGGCTTCAAAAGGGGCTGTCCAAAAAGAGTCAGATGAGTATATTCTGGCTAAAGGGCCGTTACAAGTAGGAGATTCAGTTCTCTTGCAAGGCCATTCTCTAGCTAAGAATATCCTGCATGTCGTAGGCCCAGATGCCCGCGCTAAACAGGATGTTTCTCTCCTTAGTAAGTGCTATAAGGCTATGAATGCATATCCTCTTGTAGTCACTCCTCTTGTTTCAACAGGCATATTTGGTGTAAAACCAGCTGTGTCTTTTGATTATCTTATTAGAGAGGCTAAGACTAGAGTTTTAGTCGTCGTTAATTCCCAAGATGTCTATAAGAGTCTTACCATAGTTGACATTCCACAGAGTTTGACTTTTTCATATGATGGGTTACGTGGCGCAATACGTAAAGCTAAAGATTATGGTTTTACTGTTTTTGTGTGCACAGACAACTCTGCTAACACTAAAGTTCTTAGGAACAAGGGTGTTGATTATACTAAGAAGTTTCTTACAGTTGACGGTGTGCAATATTATTGCTACACGTCTAAGGACACTTTAGATGATATCTTACAACAGGCTAATAAGTCTGTTGGTATTATATCTATGCCTTTGGGATATGTGTCTCATGGTTTAGACTTAATTCAAGCAGGGAGTGTCGTGCGTAGAGTTAACGTGCCCTACGTGTGTCTCCTAGCTAATAAAGAGCAAGAAGCTATTTTGATGTCTGAAGACGTTAAGTTAAACCCTTCAGAAGATTTTATAAAGCACGTCCGCACTAATGGTGGTTACAATTCTTGGCATTTAGTCGAGGGTGAACTATTGGTGCAAGACTTACGCTTAAATAAGCTCCTGCATTGGTCTGATCAAACCATATGCTACAAGGATAGTGTGTTTTATGTTGTAAAGAATAGTACAGCTTTTCCATTTGAAACACTTTCAGCATGTCGTGCGTATTTGGATTCACGCACGACACAGCAGTTAACAATCGAAGTCTTAGTGACTGTCGATGGTGTAAATTTTAGAACAGTCGTTCTAAATAATAAGAACACTTATAGATCACAGCTTGGATGCGTTTTCTTTAATGGTGCTGATATTTCTGATACCATTCCTGATGAGAAACAGAATGGTCACAGTTTATATCTAGCAGACAATTTGACTGCTGATGAAACAAAGGCGCTTAAAGAGTTATATGGCCCCGTTGATCCTACTTTCTTACACAGATTCTATTCACTTAAGGCTGCAGTCCATAAGTGG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GATTGCAAGTGAACAGTGCCCCCCGGGAAGAGCTCTACAGTGTGAAATGTAAATAAAAATAGCTATTATTCAATTAGATTAGGCTAATTAGATGATTTGCAAAAAAAAAAAA
- 전장유전체 서열(7번, 서열번호 3)
GATTTAAGTGAATAGCTTGGCTATCTCACCTCCCCTCGTTCTCTTGCAGAACTTTGATTTTAACGAACTTAAATAAAAGCCCTGTTGTTTAGCGTATTGTTGCACTTGTCTGGTGGGATTGTGGCATTAATTTGCCTGCTCATCTAGGCAGTGGACATATGCTCAACACTGGGTATAATTCTAATTGAATACTATTTTTCAGTTAGAGCGTCGTGTCTCTTGTACGTCTCGGTCACAATATACGGTTTCGTCCGGTGCGTGGCAATTCGGGGCACATCATGTCTTTCGTGGCTGGTGTGATCGCGCAAGGTGCGCGCGGTACGTATCGAGCAGCGCTCAACTCTGAAAAACATCAAGACCATGTGTCTCTAACTGTGCCACTCTGTGGTTCAGGAAACCTGGTTGAAAAACTTTCACCATGGTTCATGGATGGCGAAAATGCCTATGAAGTGGTGAAGGCCATGTTACTTAAAAAAGAGCCACTTCTCTATGTGCCCATCCGGCTGGCTGGACACACTAGACACCTCCCAGGTCCTCGTGTGTACCTGGTTGAGAGGCTCATTGCTTGTGAAAATCCATTCATGGTTAACCAATTGGCTTATAGCTCTAGTGCAAATGGCAGCCTGGTTGGCACAACTTTGCAGGGCAAGCCTATTGGTATGTTCTTCCCTTATGACATCGAACTTGTCACAGGAAAGCAAAATATTCTCCTGCGCAAGTATGGCCGTGGTGGTTATCACTACACCCCAGTCCACTATGAGCGAGACAACACCTCTTGCCCTGAGTGGATGGACGATTTTGAGGCGGATCCTAAAGGCAAATATGCCCAGAATCTGCTTAAGAAGTTGATTGGCGGTGATGTCACTCCAGTTGACCAATACATGTGTGGCGTTGATGGAAAACCCATTAGTGCCTACGCATTTTTAATGGCCAAGGATGGAATAACCAAACTGGCTGATGTTGAAGCGGACGTCGCAGCACGTGCTGATGACGAAGGCTTCATCACATTAAAGAACAATCTATATAGATTGGTTTGGCATGTTGAGCGTAAAGACGTTCCATATCCTAAGCAATCTATTTTTACTATTAATAGTGTGGTCCAAAAGGATGGTGTTGAAAACACTCCTCCTCACTATTTTACTCTTGGATGCAAAATTTTAACGCTCACCCCACGCAACAAGTGGAGTGGCGTTTCTGACTTGTCCCTCAAACAAAAACTCCTTTACACCTTCTATGGTAAGGAGTCACTTGAGAACCCAACCTACATTTACCACTCCGCATTCATTGAGTGTGGAAGTTGTGGTAATGATTCCTGGCTTACAGGGAATGCTATCCAAGGGTTTGCCTGTGGATGTGGGGCATCATATACAGCTAATGATGTCGAAGTCCAATCATCTGGCATGATTAAGCCAAATGCTCTTCTTTGTGCTACTTGCCCCTTTGCTAAGGGTGACAGCTGTTCTTCTAATTGCAAACATTCAGTTGCTCAGTTGGTTAGTTACCTTTCTGAACGCTGTAATGTTATTGCTGATTCTAAGTCCTTCACACTTATCTTTGGTGGCGTAGCTTACGCCTACTTTGGATGTGAGGAAGGTACTATGTACTTTGTGCCTAGAGCTAAGTCTGTTGTCTCAAGGATTGGAGACTCCATCTTTACAGGCTGTACTGGCTCTTGGAACAAGGTCACTCAAATTGCTAACATGTTCTTGGAACAGACTCAGCATTCCCTTAACTTTGTGGGAGAGTTCGTTGTCAACGATGTTGTCCTCGCAATTCTCTCTGGAACCACAACTAATGTTGACAAAATACGCCAGCTTCTCAAAGGTGTCACCATTGACAAGTTGCGTGATTATTTAGCTGACTATGACGTAGCAGTCACTGCCGGCCCATTCATGGATAATGCTATTAATGTTGGTGGTACAGGATTACAGTATGCCGCCATTACTGCACCTTATGTAGTTCTCACTGGCTTAGGTGAGTCCTTTAAGAAAGTTGCAACCATACCGTACAAGGTTTGCAACTCTGTTAAGGATACTCTGACTTATTATGCTCACAGCGTGTTGTACAGAGTTTTTCCTTATGACATGGATTCTGGTGTGTCATCCTTTAGTGAACTACTTTTTGATTGCGTTGATCTTTCAGTAGCTTCTACCTATTTTTTAGTCCGCCTCTTGCAAGATAAGACTGGCGACTTTATGTCTACAATTATTACTTCCTGCCAAACTGCTGTTAGTAAGCTTCTAGATACATGTTTTGAAGCTACAGAAGCAACATTTAACTTCTTGTTAGATTTGGCAGGATTGTTCAGAATCTTTCTTCGCAATGCCTATGTGTACACTTCACAAGGGTTTGTGGTGGTCAATGGCAAAGTTTCTACACTTGTCAAACAAGTGTTAGACTTGCTTAATAAGGGTATGCAACTTTTGCATACAAAGGTCTCCTGGGCTGGTTCTAATATCAGTGCTGTTATCTACAGCGGCAGGGAGTCTCTAATATTCCCATCGGGAACCTATTACTGTGTCACCACTAAGGCTAAGTCCGTTCAACAAGATCTTGACGTTATTTTGCCTGGTGAGTTTTCCAAGAAGCAGTTAGGACTGCTCCAACCTACTGACAATTCTACAACTGTTAGTGTTACTGTATCCAGTAACATGGTTGAAACTGTTGTGGGTCAACTTGAGCAAACTAATATGCATAGTCCTGATGTTATAGTAGGTGACTATGTCATTATTAGTGAAAAATTGTTTGTGCGTAGTAAGGAAGAAGACGGATTCGCCTTCTACCCTGCTTGCACTAATGGTCATGCTGTACCGACTCTCTTTAGACTTAAGGGAGGTGCACCTGTAAAAAAAGTAGCCTTTGGCGGTGATCAAGTACATGAGGTTGCTGCTGTAAGAAGTGTTACTGTCGAGTACAACATTCATGCTGTATTAGACACACTACTTGCTTCTTCTAGTCTTAGAACCTTTGTTGTAGATAAGTCTTTGTCAATTGAGGAGTTTGCTGACGTAGTAAAGGAACAAGTCTCAGACTTGCTTGTTAAATTACTGCGTGGAATGCCGATTCCAGATTTTGATTTAGACGATTTTATTGACGCACCATGCTATTGCTTTAACGCTGAGGGTGATGCATCTTGGTCTTCTACTATGATCTTCTCTCTTCACCCCGTCGAGTGTGACGAGGAGTGTTCTGAAGTAGAGGCTTCAGGTTTAGAAGAAGGTGAATCAGAGTGCATTTCTGAGACTTCAACTGAACAAGTTGACGTTTCTCATGAGGTTTCTGACGACGAGTGGGCTGCTGCAGTTGATGAAGCGTTCCCCCTCGATGAAGCAGAAGATGTTACTGAATCTGTGCAAGAAGAAGCACAACCAGTAGAAGTACCTGTTGAAGATATTGCGCAGGTTGTCATAGCTGACACCTTACAGGAAACTCCTGTTGTGTCTGATACTGTTGAAGTCCCACCGCAAGTGGTGAAACTTCCGTCTGAACCTCAGACTATCCAGCCCGAGGTAAAAGAAGTTGCACCTGTCTATGAGGCTGATACCGAACAGACACAGAGTGTTACTGTTAAACCTAAGAGGTTACGCAAAAAGCGTAATGTTGACCCTTTGTCCAATTTTGAACATAAGGTTATTACAGAGTGCGTTACCATAGTTTTAGGTGACGCAATTCAAGTAGCCAAGTGCTATGGGGAGTCTGTGTTAGTTAATGCTGCTAACACACATCTTAAGCATGGCGGTGGTATCGCTGGTGCTATTAATGCGGCTTCAAAAGGGGCTGTCCAAAAAGAGTCAGATGAGTATATTCTGGCTAAAGGGCCGTTACAAGTAGGAGATTCAGTTCTCTTGCAAGGCCATTCTCTAGCTAAGAATATCCTGCATGTCGTAGGCCCAGATGCCCGCGCTAAACAGGATGTTTCTCTCCTTAGTAAGTGCTATAAGGCTATGAATGCATATCCTCTTGTAGTCACTCCTCTTGTTTCAACAGGCATATTTGGTGTAAAACCAGCTGTGTCTTTTGATTATCTTATTAGAGAGGCTAAGACTAGAGTTTTAGTCGTCGTTAATTCCCAAGATGTCTATAAGAGTCTTACCATAGTTGACATTCCACAGAGTTTGACTTTTTCATATGATGGGTTACGTGGCGCAATACGTAAAGCTAAAGATTATGGTTTTACTGTTTTTGTGTGCACAGACAACTCTGCTAACACTAAAGTTCTTAGGAACAAGGGTGTTGATTATACTAAGAAGTTTCTTACAGTTGACGGTGTGCAATATTATTGCTACACGTCTAAGGACACTTTAGATGATATCTTACAACAGGCTAATAAGTCTGTTGGTATTATATCTATGCCTTTGGGATATGTGTCTCATGGTTTAGACTTAATTCAAGCAGGGAGTGTCGTGCGTAGAGTTAACGTGCCCTACGTGTGTCTCCTAGCTAATAAAGAGCAAGAAGCTATTTTGATGTCTGAAGACGTTAAGTTAAACCCTTCAGAAGATTTTATAAAGCACGTCCGCACTAATGGTGGTTACAATTCTTGGCATTTAGTCGAGGGTGAACTATTGGTGCAAGACTTACGCTTAAATAAGCTCCTGCATTGGTCTGATCAAACCATATGCTACAAGGATAGTGTGTTTTATGTTGTAAAGAATAGTACAGCTTTTCCATTTGAAACACTTTCAGCATGTCGTGCGTATTTGGATTCACGCACGACACAGCAGTTAACAATCGAAGTCTTAGTGACTGTCGATGGTGTAAATTTTAGAACAGTCGTTCTAAATAATAAGAACACTTATAGATCACAGCTTGGATGCGTTTTCTTTAATGGTGCTGATATTTCTGATACCATTCCTGATGAGAAACAGAATGGTCACAGTTTATATCTAGCAGACAATTTGACTGCTGATGAAACAAAGGCGCTTAAAGAGTTATATGGCCCCGTTGATCCTACTTTCTTACACAGATTCTATTCACTTAAGGCTGCAGTCCATAAGTGG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CTGCGTGATTGCAAGTGAACAGTGCCCCCCGGGAAGAGCTCTACAGTGTGAAATGTAAATAAAAATAGCTATTATTCAATTAGATTAGGCTAATTAGATGATTTGCAAAAAAAAAAAA
- 전장유전체 서열(9번, 서열번호 4)
GATTTAAGTGAATAGCTTGGCTATCTCACTTCCCCTCGTTCTCTTGCAGAACTTTGATTTTAACGAACTTAAATAAAAGCCCTGTTGTTTAGCGTATTGTTGCACTTGTCTGGTGGGATTGTGGCATTAATTTGCCTGCTCATCTAGGCAGTGGACATATGCTCAACACTGGGTATAATTCTAATTGAATACTATTTTTCAGTTAGAGCGTCGTGTCTCTTGTACGTCTCGGTCACAATATACGGTTTCGTCCGGTGCGTGGCAATTCGGGGCACATCATGTCTTTCGTGGCTGGTGTGATCGCGCAAGGTGCGCGCGGTACGTATCGAGCAGCGCTCAACTCTGAAAAACATCAAGACCATGTGTCTCTAACTGTGCCACTCTGTGGTTCAGGAAACCTGGTTGAAAAACTTTCACCATGGTTCATGGATGGCGAAAATGCCTATGAAGTGGTGAAGGCCATGTTACTTAAAAAAGAGCCACTTCTCTATGTGCCCATCCGGCTGGCTGGACACACTAGACACCTCCCAGGTCCTCGTGTGTACCTGGTTGAGAGGCTCATTGCTTGTGAAAATCCATTCATGGTTAACCAATTGGCTTATAGCTCTAGTGCAAATGGCAGCCTGGTTGGCACAACTTTGCAGGGCAAGCCTATTGGTATGTTCTTCCCTTATGACATCGAACTTGTCACAGGAAAGCAAAATATTCTCCTGCGCAAGTATGGCCGTGGTGGTTATCACTACACCCCAGTCCACTATGAGCGAGACAACACCTCTTGCCCTGAGTGGATGGACGATTTTGAGGCGGATCCTAAAGGCAAATATGCCCAGAATCTGCTTAAGAAGTTGATTGGCGGTGATGTCACTCCAGTTGACCAATACATGTGTGGCGTTGATGGAAAACCCATTAGTGCCTACGCATTTTTAATGGCCAAGGATGGAATAACCAAACTGGCTGATGTTGAAGCGGACGTCGCAGCACGTGCTGATGACGAAGGCTTCATCACATTAAAGAACAATCTATATAGATTGGTTTGGCATGTTGAGCGTAAAGACGTTCCATATCCTAAGCAATCTATTTTTACTATTAATAGTGTGGTCCAAAAGGATGGTGTTGAAAACACTCCTCCTCACTATTTTACTCTTGGATGCAAAATTTTAACGCTCACCCCACGCAACAAGTGGAGTGGCGTTTCTGACTTGTCCCTCAAACAAAAACTCCTTTACACCTTCTATGGTAAGGAGTCACTTGAGAACCCAACCTACATTTACCACTCCGCATTCATTGAGTGTGGAAGTTGTGGTAATGATTCCTGGCTTACAGGGAATGCTATCCAAGGGTTTGCCTGTGGATGTGGGGCATCATATACAGCTAATGATGTCGAAGTCCAATCATCTGGCATGATTAAGCCAAATGCTCTTCTTTGTGCTACTTGCCCCTTTGCTAAGGGTGACAGCTGTTCTTCTAATTGCAAACATTCAGTTGCTCAGTTGGTTAGTTACCTTTCTGAACGCTGTAATGTTATTGCTGATTCTAAGTCCTTCACACTTATCTTTGGTGGCGTAGCTTACGCCTACTTTGGATGTGAGGAAGGTACTATGTACTTTGTGCCTAGAGCTAAGTCTGTTGTCTCAAGGATTGGAGACTCCATCTTTACAGGCTGTACTGGCTCTTGGAACAAGGTCACTCAAATTGCTAACATGTTCTTGGAACAGACTCAGCATTCCCTTAACTTTGTGGGAGAGTTCGTTGTCAACGATGTTGTCCTCGCAATTCTCTCTGGAACCACAACTAATGTTGACAAAATACGCCAGCTTCTCAAAGGTGTCACCATTGACAAGTTGCGTGATTATTTAGCTGACTATGACGTAGCAGTCACTGCCGGCCCATTCATGGATAATGCTATTAATGTTGGTGGTACAGGATTACAGTATGCCGCCATTACTGCACCTTATGTAGTTCTCACTGGCTTAGGTGAGTCCTTTAAGAAAGTTGCAACCATACCGTACAAGGTTTGCAACTCTGTTAAGGATACTCTGACTTATTATGCTCACAGCGTGTTGTACAGAGTTTTTCCTTATGACATGGATTCTGGTGTGTCATCCTTTAGTGAACTACTTTTTGATTGCGTTGATCTTTCAGTAGCTTCTACCTATTTTTTAGTCCGCCTCTTGCAAGATAAGACTGGCGACTTTATGTCTACAATTATTACTTCCTGCCAAACTGCTGTTAGTAAGCTTCTAGATACATGTTTTGAAGCTACAGAAGCAACATTTAACTTCTTGTTAGATTTGGCAGGATTGTTCAGAATCTTTCTTCGCAATGCCTATGTGTACACTTCACAAGGGTTTGTGGTGGTCAATGGCAAAGTTTCTACACTTGTCAAACAAGTGTTAGACTTGCTTAATAAGGGTATGCAACTTTTGCATACAAAGGTCTCCTGGGCTGGTTCTAATATCAGTGCTGTTATCTACAGCGGCAGGGAGTCTCTAATATTCCCATCGGGAACCTATTACTGTGTCACCACTAAGGCTAAGTCCGTTCAACAAGATCTTGACGTTATTTTGCCTGGTGAGTTTTCCAAGAAGCAGTTAGGACTGCTCCAACCTACTGACAATTCTACAACTGTTAGTGTTACTGTATCCAGTAACATGGTTGAAACTGTTGTGGGTCAACTTGAGCAAACTAATATGCATAGTCCTGATGTTATAGTAGGTGACTATGTCATTATTAGTGAAAAATTGTTTGTGCGTAGTAAGGAAGAAGACGGATTCGCCTTCTACCCTGCTTGCACTAATGGTCATGCTGTACCGACTCTCTTTAGACTTAAGGGAGGTGCACCTGTAAAAAAAGTAGCCTTTGGCGGTGATCAAGTACATGAGGTTGCTGCTGTAAGAAGTGTTACTGTCGAGTACAACATTCATGCTGTATTAGACACACTACTTGCTTCTTCTAGTCTTAGAACCTTTGTTGTAGATAAGTCTTTGTCAATTGAGGAGTTTGCTGACGTAGTAAAGGAACAAGTCTCAGACTTGCTTGTTAAATTACTGCGTGGAATGCCGATTCCAGATTTTGATTTAGACGATTTTATTGACGCACCATGCTATTGCTTTAACGCTGAGGGTGATGCATCTTGGTCTTCTACTATGATCTTCTCTCTTCACCCCGTCGAGTGTGACGAGGAGTGTTCTGAAGTAGAGGCTTCAGGTTTAGAAGAAGGTGAATCAGAGTGCATTTCTGAGACTTCAACTGAACAAGTTGACGTTTCTCATGAGGTTTCTGACGACGAGTGGGCTGCTGCAGTTGATGAAGCGTTCCCCCTCGATGAAGCAGAAGATGTTACTGAATCTGTGCAAGAAGAAGCACAACCAGTAGAAGTACCTGTTGAAGATATTGCGCAGGTTGTCATAGCTGACACCTTACAGGAAACTCCTGTTGTGTCTGATACTGTTGAAGTCCCACCGCAAGTGGTGAAACTTCCGTCTGAACCTCAGACTATCCAGCCCGAGGTAAAAGAAGTTGCACCTGTCTATGAGGCTGATACCGAACAGACACAGAGTGTTACTGTTAAACCTAAGAGGTTACGCAAAAAGCGTAATGTTGACCCTTTGTCCAATTTTGAACATAAGGTTATTACAGAGTGCGTTACCATAGTTTTAGGTGACGCAATTCAAGTAGCCAAGTGCTATGGGGAGTCTGTGTTAGTTAATGCTGCTAACACACATCTTAAGCATGGCGGTGGCATCGCTGGTGCTATTAATGCGGCTTCAAAAGGGGCTGTCCAAAAAGAGTCAGATGAGTATATTCTGGCTAAAGGGCCGTTACAAGTAGGAGATTCAGTTCTCTTGCAAGGCCATTCTCTAGCTAAGAATATCCTGCATGTCGTAGGCCCAGATGCCCGCGCTAAACAGGATGTTTCTCTCCTTAGTAAGTGCTATAAGGCTATGAATGCATATCCTCTTGTAGTCACTCCTCTTGTTTCAACAGGCATATTTGGTGTAAAACCAGCTGTGTCTTTTGATTATCTTATTAGAGAGGCTAAGACTAGAGTTTTAGTCGTCGTTAATTCCCAAGATGTCTATAAGAGTCTTACCATAGTTGACATTCCACAGAGTTTGACTTTTTCATATGATGGGTTACGTGGCGCAATACGTAAAGCTAAAGATTATGGTTTTACTGTTTTTGTGTGCACAGACAACTCTGCTAACACTAAAGTTCTTAGGAACAAGGGTGTTGATTATACTAAGAAGTTTCTTACAGTTGACGGTGTGCAATATTATTGCTACACGTCTAAGGACACTTTAGATGATATCTTACAACAGGCTAATAAGTCTGTTGGTATTATATCTATGCCTTTGGGATATGTGTCTCATGGTTTAGACTTAATTCAAGCAGGGAGTGTCGTGCGTAGAGTTAACGTGCCCTACGTGTGTCTCCTAGCTAATAAAGAGCAAGAAGCTATTTTGATGTCTGAAGACGTTAAGTTAAACCCTTCAGAAGATTTTATAAAGCACGTCCGCACTAATGGTGGTTACAATTCTTGGCATTTAGTCGAGGGTGAACTATTGGTGCAAGACTTACGCTTAAATAAGCTCCTGCATTGGTCTGATCAAACCATATGCTACAAGGATAGTGTGTTTTATGTTGTAAAGAATAGTACAGCTTTTCCATTTGAAACACTTTCAGCATGTCGTGCGTATTTGGATTCACGCACGACACAGCAGTTAACAATCGAAGTCTTAGTGACTGTCGATGGTGTAAATTTTAGAACAGTCGTTCTAAATAATAAGAACACTTATAGATCACAGCTTGGATGCGTTTTCTTTAATGGTGCTGATATTTCTGATACCATTCCTGATGAGAAACAGAATGGTCACAGTTTATATCTAGCAGACAATTTGACTGCTGATGAAACAAAGGCGCTTAAAGAGTTATATGGCCCCGTTGATCCTACTTTCTTACACAGATTCTATTCACTTAAGGCTGCAGTCCATAAGTGG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- 전장유전체 서열(ORF 5-del, 서열번호 5)
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3) 계대배양주(20번)와 국내분리주의 유전자 변이 비교 분석
- 계대배양주(20번) 5종의 유전자 특성 분석을 위해 국내분리 바이러스(KNIH-002)와의 염기 및 아미노산 서열을 비교한 결과, SNP (Single nucleotide polymorphism) 31개, InDel 2개로 총 33개의 유전자 변이 부위를 확인하였음(도 8).
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
<110> KDCA <120> MERS virus and uses thereof <130> M22-0000 <160> 6 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 30118 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 4_P20 <400> 1 gatttaagtg aatagcttgg ctatctcact tcccctcgtt ctcttgcaga actttgattt 60 taacgaactt aaataaaagc cctgttgttt agcgtattgt tgcacttgtc tggtgggatt 120 gtggcattaa tttgcctgct catctaggca gtggacatat gctcaacact gggtataatt 180 ctaattgaat actatttttc agttagagcg tcgtgtctct tgtacgtctc ggtcacaata 240 tacggtttcg tccggtgcgt ggcaattcgg ggcacatcat gtctttcgtg gctggtgtga 300 tcgcgcaagg tgcgcgcggt acgtatcgag cagcgctcaa ctctgaaaaa catcaagacc 360 atgtgtctct aactgtgcca ctctgtggtt caggaaacct ggttgaaaaa ctttcaccat 420 ggttcatgga tggcgaaaat gcctatgaag tggtgaaggc catgttactt aaaaaagagc 480 cacttctcta tgtgcccatc cggctggctg gacacactag acacctccca ggtcctcgtg 540 tgtacctggt tgagaggctc attgcttgtg aaaatccatt catggttaac caattggctt 600 atagctctag tgcaaatggc agcctggttg gcacaacttt gcagggcaag cctattggta 660 tgttcttccc ttatgacatc gaacttgtca caggaaagca aaatattctc 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Claims (13)

  1. 서열번호 3의 유전자를 포함하는 중동호흡기증후군 코로나바이러스.
  2. 제1항에 있어서, 상기 바이러스는 중동호흡기증후군 코로나바이러스에 대한 중화항체를 이용하여 선택압(selective pressure) 방법으로 제조되는 것을 특징으로 하는 중동호흡기증후군 코로나바이러스.
  3. 제2항에 있어서, 상기 중화항체는 중동호흡기증후군 코로나바이러스의 스파이크 단백질에 대한 단클론 항체인 것을 특징으로 하는 중동호흡기증후군 코로나바이러스.
  4. 제2항에 있어서, 상기 중화항체는 중동호흡기증후군 코로나바이러스의 스파이크 단백질에 대한 90B2 단클론 항체인 것을 특징으로 하는 중동호흡기증후군 코로나바이러스.
  5. 제1항에 있어서, 상기 중동호흡기증후군 코로나바이러스는 Vero세포에서 20회 계대배양으로 제조되는 것을 특징으로 하는 중동호흡기증후군 코로나바이러스.
  6. 국내분리주(KNIH-002)에 중동호흡기증후군 코로나바이러스에 대한 중화항체를 선택압(selective pressure)을 조건을 충족할 수 있는 농도로 처리하는 단계;
    Vero 세포에 감염시키는 단계; 및
    계대배양하는 단계;를 포함하고, 서열번호 3의 유전자를 포함하는 중동호흡기증후군 코로나바이러스를 제조하는 방법
  7. 제6항에 있어서, 상기 중화항체는 중동호흡기증후군 코로나바이러스의 스파이크 단백질에 대한 단클론 항체인 것을 특징으로 하는, 서열번호 3의 유전자를 포함하는 중동호흡기증후군 코로나바이러스를 제조하는 방법
  8. 제6항에 있어서, 상기 중화항체는 중동호흡기증후군 코로나바이러스의 스파이크 단백질에 대한 90B2 단클론 항체인 것을 특징으로 하는, 서열번호 3의 유전자를 포함하는 중동호흡기증후군 코로나바이러스를 제조하는 방법
  9. 제6항에 있어서, 상기 농도는 1 ㎍인 것을 특징으로 하는, 서열번호 3의 유전자를 포함하는 중동호흡기증후군 코로나바이러스를 제조하는 방법
  10. 제6항에 있어서, 상기 계대배양은 20회인 것을 특징으로 하는, 서열번호 3의 유전자를 포함하는 중동호흡기증후군 코로나바이러스를 제조하는 방법
  11. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 중동호흡기증후군 코로나바이러스를 포함하는 백신 조성물
  12. 제11항에 있어서, 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 백신 조성물
  13. 제11항의 백신 조성물을 비인간 동물에게 투여하는 단계를 포함하는 중동호흡기증후군 코로나바이러스에 대한 예방 접종 방법
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