KR20230157983A - 당사슬 및 당사슬을 포함하는 의약품의 제조 방법 - Google Patents

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류세이 이토
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다이이찌 산쿄 가부시키가이샤
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Abstract

(과제) 본 발명의 과제는, 수율, 선택성, 효율성이 우수한, 비환원 말단에 α2,6-시알산 구조를 갖는 2 분기형 N-글리칸의 신규 순화학적 제조 방법, 당해 방법에 있어서 유용한, 신규한 단당 또는 올리고당의 제조 방법이나 중간체 등, 및, 당해 방법을 이용한 당단백질 등의 신규 제조 방법을 제공하는 것이다.
(해결 수단) 인접기 관여를 이용한 직접적인 구축이 곤란한 글리코시드 결합에 대해서는, 이당 블록으로서 개별적으로 생성시킨 후, 타당 블록과 입체 선택적으로 연결한다는 합성 스킴을 사용한, 비환원 말단에 α2,6-시알산 구조를 갖는 2 분기형 N-글리칸의 신규 순화학적 제조 방법, 당해 방법에 있어서 유용한 신규한 단당 또는 올리고당의 제조 방법이나 중간체 등, 및, 당해 방법을 이용한 당단백질 등의 신규 제조 방법을 제공한다.

Description

당사슬 및 당사슬을 포함하는 의약품의 제조 방법
본 발명은, 비환원 말단에 α2,6-시알산 구조를 갖는 2 분기형 N-글리칸의 신규 순화학적 제조 방법에 관한 것이다. 또, 당해 N-글리칸의 순화학적 제조 방법에 있어서 유용한, 신규한 단당 또는 올리고당의 제조 방법이나 중간체, 및 당해 제조 방법을 포함하는 당해 N-글리칸의 신규 제조 방법에 관한 것이다. 또한, 당해 N-글리칸의 신규 순화학적 제조 방법 등을 이용한, 당단백질 등 (특히, 당사슬 리모델링 항체 혹은 그 Fc 영역 함유 분자, 또는 항체 약물 콘주게이트) 의 신규 제조 방법에 관한 것이다.
단백질의 당사슬 부가 (글리코실화) 는, 단백질의 기능 및 구조에 큰 영향을 주는 것이 알려져 있다. 그 중에서도 N-결합형 당사슬은 단백질의 생리 활성에 깊게 관련되어 있고, 그 중에서, 비환원 말단에 α2,6-시알산 구조를 갖는 2 분기형 N-글리칸은, 항체 의존성 세포 상해 활성 (ADCC 활성), 보체 의존성 세포 상해 활성 (CDC 활성) 을 높이는 데 있어서 최적의 구조인 것이 보고되어 있다 (비특허문헌 1).
당사슬을 이용한 의약품을 개발, 상용화하는 데 있어서, 고순도의 당사슬을 안정적으로 대량으로 또한 산업상 이용할 수 있는 가격으로 제조할 수 있는 것이 요망된다. 지금까지 보고되어 있는 α2,6-시아릴 당사슬의 합성은, 1) 천연 추출물의 정제 및 효소 화학 변환에 의한 반화학 합성법, 2) 순화학 합성법, 의 2 가지 방법으로 대별된다.
예를 들어, 반화학 합성법으로는, 계란의 노른자로부터, 효소를 사용한 수법과 화학적 수법을 조합함으로써, N 결합형 당사슬을 취득할 수 있는 것이 보고되어 있다 (비특허문헌 2). 이들 수법은, 순화학 합성에 비해 적은 공정수로 목적으로 하는 당사슬을 합성할 수 있는 한편으로, 대량의 노른자의 조달이 필요해지고, 그 후의 노른자로부터의 단리 정제, 화학 변환 후의 수용성 무보호 당사슬의 정제에도 특수한 기술, 정제 장치가 필요해지는 경우가 많다 (특허문헌 1 ∼ 4).
한편, α2,6-시아릴 당사슬의 순화학 합성법으로는, 하기의 보고예가 있다.
(1) α2,6-시아릴 부위를 갖는 복합형 11 당 글리칸의 전합성 (비특허문헌 3)
(2) α2,6-시아릴 부위를 갖는 면역글로불린 G13 당 펩티드의 전합성 (비특허문헌 4)
(3) 코어 푸코오스를 포함하는 α2,6-시아릴 12 당 N 결합형 당사슬의 전합성 (비특허문헌 5)
(4) 3 위치가 불소화된 α2,6-시아릴 10 당 N 결합형 당사슬의 전합성 (비특허문헌 6)
당사슬의 순화학 합성은, 견고한 제조법을 확립한 경우, 통상적인 저분자 화합물과 마찬가지로 단당으로부터의 유도를 실시함으로써, 제조 수량의 자유도는 극히 높은 것으로 생각된다. 또, 보호기로 수식된 당의 변환을 실시하기 때문에, 대부분의 정제 조작은 비수용성 화합물의 취급이 되어, 작업의 번잡함, 작업 공정수는 반화학 합성법에 비해, 유의하게 경감되는 것을 기대할 수 있다.
한편, 상기에 기재한 과거의 보고예에서는, 1) β-만노시드부, α-시아릴부의 구축 등의 난이도가 높은 당 파트의 변환, 또, 그들의 연결 공정에 있어서, 저선택성, 저수율의 공정이 존재하고 있는 것, 2) 당 파트 변환 및 연결 공정 중 어느 것에 있어서도, 스케일 업에 부적합한 실리카 겔 칼럼 크로마토 정제를 공정마다 다용하고 있어, 반응에서 부생되는 이성체, 불순물의 제거를 목적으로 하여, 많은 공정에서의 크로마토 정밀 분취 정제 조작이 필수인 것, 의 2 점을 합성상 큰 과제로서 들 수 있다.
이상과 같이, 당사슬의 순화학 합성법은, 대량 합성을 지향하는 데 있어서 반화학 합성법에 비해 잠재적인 장점을 가지고 있지만, 수율, 선택성, 효율성, 비용의 관점에서 충분히 기술 개발이 진행되어 있는 상태라고는 말하기 어려우며, 실제 대량 합성법으로서 채용된 예는 매우 적다.
국제 공개 제2011/027868호 국제 공개 제96/02255호 국제 공개 제2014/208742호 국제 공개 제2017/110984호
Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2015, 112, 10611 Beilstein J. Org. Chem. 2018, 14, 416 Tetrahedron Lett. 1986, 27, 5739 J. Am. Chem. Soc. 2009, 131, 16669 J. Am. Chem. Soc. 2019, 141, 6484
본 발명의 과제의 하나는, 수율, 선택성, 효율성이 우수한, 비환원 말단에 α2,6-시알산 구조를 갖는 2 분기형 N-글리칸의 신규 순화학적 제조 방법을 제공하는 것이다. 본 발명의 과제의 다른 하나는, 당해 N-글리칸의 순화학적 제조 방법에 있어서 유용한, 신규한 단당 또는 올리고당의 제조 방법이나 중간체, 및 당해 제조 방법을 포함하는 당해 N-글리칸의 신규 제조 방법을 제공하는 것이다. 본 발명의 과제의 또 다른 하나는, 당해 N-글리칸의 신규 순화학적 제조 방법 등을 이용한, 당단백질 등 (특히, 당사슬 리모델링 항체 혹은 그 Fc 영역 함유 분자, 또는 항체 약물 콘주게이트) 의 신규 제조 방법을 제공하는 것이다.
본 발명자들은 상기 과제를 해결하기 위해 예의 검토한 결과, 인접기 관여를 이용한 직접적인 구축이 곤란한 글리코시드 결합에 대해서는, 이당 블록으로서 개별적으로 생성시킨 후, 타당 블록과 입체 선택적으로 연결한다는 합성 스킴을 사용한, 비환원 말단에 α2,6-시알산 구조를 갖는 2 분기형 N-글리칸의 신규 순화학적 제조 방법을 알아내고, 또한 당해 N-글리칸의 순화학적 제조 방법에 있어서 유용한 신규한 단당 또는 올리고당의 제조 방법이나 중간체, 및 당해 제조 방법을 포함하는 당해 N-글리칸의 신규 제조 방법, 그리고, 당해 N-글리칸의 신규 순화학적 제조 방법 등을 이용한, 당단백질 등 (특히, 당사슬 리모델링 항체 혹은 그 Fc 영역 함유 분자, 또는 항체 약물 콘주게이트) 의 신규 제조 방법을 알아냄으로써, 본 발명을 완성시킨 것이다.
즉 본원 발명은 이하에 관한 것이지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.
[1]
이하의 식 XI :
[화학식 1]
Figure pct00001
로 나타내는 올리고당의 제조 방법으로서,
(공정 1) 이하의 식 III-3 :
[화학식 2]
Figure pct00002
으로 나타내는 화합물을 트리플루오로메탄술포닐옥시기, 노나플루오로부탄술포닐옥시기, 2-니트로벤젠술포닐옥시기 및 4-니트로벤젠술포닐옥시기로 이루어지는 군에서 선택되는 탈리기를 부여하는 화합물과 반응시킴으로써, 이하의 식 III-4 :
[화학식 3]
Figure pct00003
(식 중, X1 은, 트리플루오로메탄술포닐기, 노나플루오로부탄술포닐기, 2-니트로벤젠술포닐기 및 4-니트로벤젠술포닐기로 이루어지는 군에서 선택되는 치환기를 나타낸다) 로 나타내는 화합물을 생성시키고, 이어서, 식 III-4 로 나타내는 화합물을 아세트산세슘 또는 테트라부틸암모늄아세테이트와 반응시킴으로써, 이하의 식 III-5 :
[화학식 4]
Figure pct00004
(식 중, X2 는, 아세틸기이다) 로 나타내는 화합물을 생성시키거나, 또는, 식 III-4 로 나타내는 화합물을 벤조산테트라부틸암모늄과 반응시킴으로써, 이하의 식 III-5 :
[화학식 5]
Figure pct00005
(식 중, X2 는, 벤조일기이다) 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 이하의 식 III-11 :
[화학식 6]
Figure pct00006
로 나타내는 화합물, 또는 이하의 식 III-13 :
[화학식 7]
Figure pct00007
으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정,
(공정 2) 식 III-13 으로 나타내는 화합물과, 이하의 식 IV-3 :
[화학식 8]
Figure pct00008
으로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써, 이하의 식 V-1 :
[화학식 9]
Figure pct00009
로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 이하의 식 V-3 :
[화학식 10]
Figure pct00010
으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정, 또는,
식 III-11 로 나타내는 화합물과, 이하의 식 IV-3 :
[화학식 11]
Figure pct00011
으로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써, 이하의 식 V-4 :
[화학식 12]
Figure pct00012
로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 이하의 식 V-5 :
[화학식 13]
Figure pct00013
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정,
(공정 3) 식 V-3 으로 나타내는 화합물과, 이하의 식 II-6 :
[화학식 14]
Figure pct00014
으로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써, 이하의 식 VI-1 :
[화학식 15]
Figure pct00015
로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 이하의 식 VI-3 :
[화학식 16]
Figure pct00016
으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정, 또는, 식 V-5 로 나타내는 화합물과, 이하의 식 II-9 :
[화학식 17]
Figure pct00017
로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써, 이하의 식 VI-4 :
[화학식 18]
Figure pct00018
로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 이하의 식 VI-3 :
[화학식 19]
Figure pct00019
으로 나타내는 화합물, 또는, 이하의 식 VI-6 :
[화학식 20]
Figure pct00020
으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정,
(공정 4) 이하의 식 VIII-5 :
[화학식 21]
Figure pct00021
로 나타내는 화합물과, 이하의 식 VII-3 :
[화학식 22]
Figure pct00022
으로 나타내는 화합물을, α-2,6-글리코시드 결합시킴으로써, 이하의 식 IX-1 :
[화학식 23]
Figure pct00023
로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 이하의 식 IX-5 :
[화학식 24]
Figure pct00024
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정, 그리고
(공정 5) 식 VI-3 으로 나타내는 화합물과 식 IX-5 로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써, 이하의 식 X-1 :
[화학식 25]
Figure pct00025
로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정, 또는
식 VI-6 으로 나타내는 화합물과 식 IX-5 로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써, 이하의 식 X-3 :
[화학식 26]
Figure pct00026
으로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 식 XI 로 나타내는 올리고당을 제조하는 공정을 포함하는, 방법.
[2]
공정 1 이, 이하의 식 III-1 :
[화학식 27]
Figure pct00027
로 나타내는 화합물을, 트리플루오로아세트산메틸의 존재하에서, 알콕시드계의 강염기와 반응시킴으로써, 이하의 식 III-2 :
[화학식 28]
Figure pct00028
로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, [1] 에 기재된 방법.
[3]
알콕시드계의 강염기가, C1∼C5 알콕시드의 나트륨염, 리튬염, 칼륨염 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, [2] 에 기재된 방법.
[4]
이하의 식 XI :
[화학식 29]
Figure pct00029
로 나타내는 올리고당의 제조 방법으로서,
(공정 1) 이하의 식 III-3 :
[화학식 30]
Figure pct00030
으로 나타내는 화합물에 있어서, D-글루코피라노시드의 2 위치를 산화함으로써, 이하의 식 III-7 :
[화학식 31]
Figure pct00031
로 나타내는 화합물을 생성시키고, 이어서, 식 III-7 로 나타내는 화합물에 있어서, 2-케토-D-글루코피라노시드의 2 위치의 탄소에 결합되어 있는 옥소기를 환원함으로써, 이하의 식 III-8 :
[화학식 32]
Figure pct00032
로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 이하의 식 III-11 :
[화학식 33]
Figure pct00033
로 나타내는 화합물, 또는 이하의 식 III-13 :
[화학식 34]
Figure pct00034
으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정,
(공정 2) 식 III-13 으로 나타내는 화합물과, 이하의 식 IV-3 :
[화학식 35]
Figure pct00035
으로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써, 이하의 식 V-1 :
[화학식 36]
Figure pct00036
로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 이하의 식 V-3 :
[화학식 37]
Figure pct00037
으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정, 또는,
식 III-11 로 나타내는 화합물과, 이하의 식 IV-3 :
[화학식 38]
Figure pct00038
으로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써, 이하의 식 V-4 :
[화학식 39]
Figure pct00039
로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 이하의 식 V-5 :
[화학식 40]
Figure pct00040
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정,
(공정 3) 식 V-3 으로 나타내는 화합물과, 이하의 식 II-6 :
[화학식 41]
Figure pct00041
으로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써, 이하의 식 VI-1 :
[화학식 42]
Figure pct00042
로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 이하의 식 VI-3 :
[화학식 43]
Figure pct00043
으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정, 또는, 식 V-5 로 나타내는 화합물과 이하의 식 II-9 :
[화학식 44]
Figure pct00044
로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써, 이하의 식 VI-4 :
[화학식 45]
Figure pct00045
로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 이하의 식 VI-3 :
[화학식 46]
Figure pct00046
으로 나타내는 화합물, 또는, 이하의 식 VI-6 :
[화학식 47]
Figure pct00047
으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정,
(공정 4) 이하의 식 VIII-5 :
[화학식 48]
Figure pct00048
로 나타내는 화합물과, 이하의 식 VII-3 :
[화학식 49]
Figure pct00049
으로 나타내는 화합물을, α-2,6-글리코시드 결합시킴으로써, 이하의 식 IX-1 :
[화학식 50]
Figure pct00050
로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 이하의 식 IX-5 :
[화학식 51]
Figure pct00051
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정, 그리고
(공정 5) 식 VI-3 으로 나타내는 화합물과 식 IX-5 로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써, 이하의 식 X-1 :
[화학식 52]
Figure pct00052
로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정, 또는
식 VI-6 으로 나타내는 화합물과 식 IX-5 로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써, 이하의 식 X-3 :
[화학식 53]
Figure pct00053
으로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 식 XI 로 나타내는 올리고당을 제조하는 공정을 포함하는, 방법.
[5]
공정 1 이, 이하의 식 III-1 :
[화학식 54]
Figure pct00054
로 나타내는 화합물을, 트리플루오로아세트산메틸의 존재하에서, 알콕시드계의 강염기와 반응시킴으로써, 이하의 식 III-2 :
[화학식 55]
Figure pct00055
로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, [4] 에 기재된 방법.
[6]
알콕시드계의 강염기가, C1∼C5 알콕시드의 나트륨염, 리튬염, 칼륨염 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, [5] 에 기재된 방법.
[7]
공정 1 에 있어서, L-셀렉트리드, LS-셀렉트리드, 리튬디이소부틸-tert-부톡시알루미늄하이드리드 (LDBBA), 이하의 식 A :
[화학식 56]
Figure pct00056
(식 중, R3 은, 이하의 식 :
[화학식 57]
Figure pct00057
으로 나타내는 디tert-부틸메틸페녹시드 또는 하이드리드이고, 단, 적어도 2 개의 R3 은, 디tert-부틸메틸페녹시드이다) 로 나타내는 화합물 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 환원제의 존재하에서, 식 III-7 로 나타내는 화합물을 환원하는, [4] ∼ [6] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[8]
공정 1 에 있어서, 이하의 식 A :
[화학식 58]
Figure pct00058
(식 중, R3 은, 이하의 식 :
[화학식 59]
Figure pct00059
으로 나타내는 디tert-부틸메틸페녹시드 또는 하이드리드이고, 단, 적어도 2 개의 R3 은, 디tert-부틸메틸페녹시드이다) 으로 나타내는 화합물인 환원제의 존재하에서, 식 III-7 로 나타내는 화합물을 환원하는, [4] ∼ [7] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[9]
공정 1 이, 이하의 식 III-9 :
[화학식 60]
Figure pct00060
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정을 추가로 포함하고, 식 III-9 로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이, 리튬tert-부톡시드 또는 리튬tert-아목시드의 존재하에서, 이하의 식 III-8 :
[화학식 61]
Figure pct00061
로 나타내는 화합물에 있어서, D-만노피라노시드의 2 위치의 탄소에 결합되어 있는 수산기를 벤질기로 보호함으로써, 식 III-9 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, [1] ∼ [8] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[10]
공정 2 가, 이하의 식 V-5 :
[화학식 62]
Figure pct00062
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정을 추가로 포함하고, 식 V-5 로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이, 이하의 식 V-4 :
[화학식 63]
Figure pct00063
로 나타내는 화합물을, 트리플루오로아세트산메틸의 존재하에서, 알콕시드계의 강염기와 반응시킴으로써, 식 V-5 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, [1] ∼ [9] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[11]
알콕시드계의 강염기가, C1∼C5 알콕시드의 나트륨염, 리튬염, 칼륨염 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, [10] 에 기재된 방법.
[12]
공정 3 이, 식 II-6 으로 나타내는 화합물 또는 식 II-9 로 나타내는 화합물을 제조하는 공정을 추가로 포함하고,
식 II-6 으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이, 플루오러스 알코올 및 수중에서, 이하의 식 II-4 :
[화학식 64]
Figure pct00064
로 나타내는 화합물에 λ3-아이오단을 반응시킴으로써, 이하의 식 II-5 :
[화학식 65]
Figure pct00065
로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하고,
식 II-9 로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이, 플루오러스 알코올 및 수중에서, 이하의 식 II-7 :
[화학식 66]
Figure pct00066
로 나타내는 화합물에 λ3-아이오단을 반응시킴으로써, 이하의 식 II-8 :
[화학식 67]
Figure pct00067
로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, [1] ∼ [11] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[13]
상기 λ3-아이오단이, [비스(트리플루오로아세톡시)요오드]벤젠 (PIFA), [하이드록시(토실옥시)요오드]벤젠 (HTIB), (디아세톡시요오드)벤젠 (PIDA), [비스(트리플루오로아세톡시)요오드]펜타플루오로벤젠, [하이드록시(메탄술포닐옥시)요오드]벤젠, 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, [12] 에 기재된 방법.
[14]
상기 플루오러스 알코올이, 헥사플루오로2-프로판올 (HFIP), 2,2,2-트리플루오로에탄올 (TFE), 2,2,3,3,4,4,5,5-옥타플루오로-1-펜탄올, 노나플루오로-tert-부틸알코올, 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, [12] 또는 [13] 에 기재된 방법.
[15]
공정 3 이, 식 II-6 으로 나타내는 화합물 또는 식 II-9 로 나타내는 화합물을 제조하는 공정을 추가로 포함하고,
식 II-6 으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이, 이하의 식 II-5 :
[화학식 68]
Figure pct00068
로 나타내는 화합물을, N-메틸이미다졸의 존재하에서, 이하의 식 :
[화학식 69]
Figure pct00069
으로 나타내는 2,2,2-트리플루오로-N-페닐아세트이미도일클로라이드 (TFPC) 와 반응시킴으로써, 식 II-6 으로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하고,
식 II-9 로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이, 이하의 식 II-8 :
[화학식 70]
Figure pct00070
로 나타내는 화합물을, N-메틸이미다졸의 존재하에서, 이하의 식 :
[화학식 71]
Figure pct00071
으로 나타내는 2,2,2-트리플루오로-N-페닐아세트이미도일클로라이드 (TFPC) 와 반응시킴으로써, 식 II-9 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, [1] ∼ [14] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[16]
공정 3 이, 이하의 식 VI-5 :
[화학식 72]
Figure pct00072
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정을 추가로 포함하고, 식 VI-5 로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이, 이하의 식 VI-4 :
[화학식 73]
Figure pct00073
로 나타내는 화합물을, 트리플루오로아세트산메틸의 존재하에서, 알콕시드계의 강염기와 반응시킴으로써, 식 VI-5 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, [1] ∼ [15] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[17]
알콕시드계의 강염기가, C1∼C5 알콕시드의 나트륨염, 리튬염, 칼륨염 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, [16] 에 기재된 방법.
[18]
공정 4 가, 식 VII-3 으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정을 추가로 포함하고, 식 VII-3 으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이, 식 VII-3 으로 나타내는 화합물이 용해되어 있는 용매를 실리카 겔과 접촉시킴으로써, 식 VII-3 으로 나타내는 화합물을 고상 추출하는 공정을 포함하는, [1] ∼ [17] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[19]
식 VII-3 으로 나타내는 화합물이 용해되어 있는 용매가, 톨루엔, 디클로로메탄, 클로로포름 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, [18] 에 기재된 방법.
[20]
공정 4 가, 이하의 식 VIII-3 :
[화학식 74]
Figure pct00074
으로 나타내는 화합물을, N-메틸이미다졸의 존재하에서, 이하의 식 :
[화학식 75]
Figure pct00075
으로 나타내는 2,2,2-트리플루오로-N-페닐아세트이미도일클로라이드 (TFPC) 와 반응시킴으로써, 이하의 식 VIII-4 :
[화학식 76]
Figure pct00076
로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, [1] ∼ [19] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[21]
공정 4 가, 이하의 식 IX-3 :
[화학식 77]
Figure pct00077
으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정을 추가로 포함하고, 식 IX-3 으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이, 식 IX-3 으로 나타내는 화합물이 용해되어 있는 용매를 실리카 겔과 접촉시킴으로써, 식 IX-3 으로 나타내는 화합물을 고상 추출하는 공정을 포함하는, [1] ∼ [20] 중 어느 하나에 기재된 방법.
[22]
식 IX-3 으로 나타내는 화합물이 용해되어 있는 용매가, 톨루엔, 디클로로메탄, 클로로포름 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, [21] 에 기재된 방법.
[23]
이하의 식 III-2 :
[화학식 78]
Figure pct00078
로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 이하의 식 III-1 :
[화학식 79]
Figure pct00079
로 나타내는 화합물을, 트리플루오로아세트산메틸의 존재하에서, 알콕시드계의 강염기와 반응시킴으로써, 식 III-2 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 방법.
[24]
알콕시드계의 강염기가, C1∼C5 알콕시드의 나트륨염, 리튬염, 칼륨염 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, [23] 에 기재된 방법.
[25]
이하의 식 III-5 :
[화학식 80]
Figure pct00080
(식 중, X2 는, 아세틸기이다) 로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 이하의 식 III-4 :
[화학식 81]
Figure pct00081
(식 중, X1 은, 트리플루오로메탄술포닐기, 노나플루오로부탄술포닐기, 2-니트로벤젠술포닐기 및 4-니트로벤젠술포닐기로 이루어지는 군에서 선택되는 치환기를 나타낸다) 로 나타내는 화합물을 아세트산세슘 또는 테트라부틸암모늄아세테이트와 반응시킴으로써, 식 III-5 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 방법.
[26]
이하의 식 III-5 :
[화학식 82]
Figure pct00082
(식 중, X2 는, 벤조일기이다) 로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 이하의 식 III-4 :
[화학식 83]
Figure pct00083
(식 중, X1 은, 트리플루오로메탄술포닐기, 노나플루오로부탄술포닐기, 2-니트로벤젠술포닐기 및 4-니트로벤젠술포닐기로 이루어지는 군에서 선택되는 치환기를 나타낸다) 로 나타내는 화합물을 벤조산테트라부틸암모늄과 반응시킴으로써, 식 III-5 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 방법.
[27]
이하의 식 III-8 :
[화학식 84]
Figure pct00084
로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 이하의 식 III-7 :
[화학식 85]
Figure pct00085
로 나타내는 화합물에 있어서의, 2-케토-D-글루코피라노시드의 2 위치의 탄소에 결합되어 있는 옥소기를 환원함으로써, 식 III-8 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 방법.
[28]
L-셀렉트리드, LS-셀렉트리드, 리튬디이소부틸-tert-부톡시알루미늄하이드리드 (LDBBA), 이하의 식 A :
[화학식 86]
Figure pct00086
(식 중, R3 은, 이하의 식 :
[화학식 87]
Figure pct00087
으로 나타내는 디tert-부틸메틸페녹시드 또는 하이드리드이고, 단, 적어도 2 개의 R3 은, 디tert-부틸메틸페녹시드이다) 로 나타내는 화합물 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 환원제의 존재하에서, 식 III-7 로 나타내는 화합물에 있어서의, 2-케토-D-글루코피라노시드의 2 위치의 탄소에 결합되어 있는 옥소기를 환원하는, [27] 에 기재된 방법.
[29]
이하의 식 A :
[화학식 88]
Figure pct00088
(식 중, R3 은, 이하의 식 :
[화학식 89]
Figure pct00089
으로 나타내는 디tert-부틸메틸페녹시드 또는 하이드리드이고, 단, 적어도 2 개의 R3 은, 디tert-부틸메틸페녹시드이다) 로 나타내는 화합물인 환원제의 존재하에서, 식 III-7 로 나타내는 화합물에 있어서의, 2-케토-D-글루코피라노시드의 2 위치의 탄소에 결합되어 있는 옥소기를 환원하는, [27] 또는 [28] 에 기재된 방법.
[30]
이하의 식 III-9 :
[화학식 90]
Figure pct00090
로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 리튬tert-부톡시드 또는 리튬tert-아목시드의 존재하에서, 이하의 식 III-8 :
[화학식 91]
Figure pct00091
로 나타내는 화합물에 있어서, D-만노피라노시드의 2 위치의 탄소에 결합되어 있는 수산기를 벤질기로 보호함으로써, 식 III-9 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 방법.
[31]
이하의 식 V-5 :
[화학식 92]
Figure pct00092
로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 이하의 식 V-4 :
[화학식 93]
Figure pct00093
로 나타내는 화합물을, 트리플루오로아세트산메틸의 존재하에서, 알콕시드계의 강염기와 반응시킴으로써, 식 V-5 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 방법.
[32]
알콕시드계의 강염기가, C1∼C5 알콕시드의 나트륨염, 리튬염, 칼륨염 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, [31] 에 기재된 방법.
[33]
이하의 식 II-5 :
[화학식 94]
Figure pct00094
로 나타내는 화합물 또는 식 II-8 :
[화학식 95]
Figure pct00095
로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서,
플루오러스 알코올 및 수중에서, 이하의 식 II-4 :
[화학식 96]
Figure pct00096
로 나타내는 화합물 또는 식 II-7 :
[화학식 97]
Figure pct00097
로 나타내는 화합물에, λ3-아이오단을 반응시킴으로써, 식 II-5 로 나타내는 화합물 또는 식 II-8 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 방법.
[34]
상기 λ3-아이오단이, [비스(트리플루오로아세톡시)요오드]벤젠 (PIFA), [하이드록시(토실옥시)요오드]벤젠 (HTIB), (디아세톡시요오드)벤젠 (PIDA), [비스(트리플루오로아세톡시)요오드]펜타플루오로벤젠, [하이드록시(메탄술포닐옥시)요오드]벤젠, 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, [33] 에 기재된 방법.
[35]
상기 플루오러스 알코올이, 헥사플루오로2-프로판올 (HFIP), 2,2,2-트리플루오로에탄올 (TFE), 2,2,3,3,4,4,5,5-옥타플루오로-1-펜탄올, 노나플루오로-tert-부틸알코올, 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, [33] 또는 [34] 에 기재된 방법.
[36]
이하의 식 II-6 :
[화학식 98]
Figure pct00098
으로 나타내는 화합물 또는 이하의 식 II-9 :
[화학식 99]
Figure pct00099
로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 이하의 식 II-5 :
[화학식 100]
Figure pct00100
로 나타내는 화합물 또는 이하의 식 II-8 :
[화학식 101]
Figure pct00101
로 나타내는 화합물을, N-메틸이미다졸의 존재하에서, 이하의 식 :
[화학식 102]
Figure pct00102
로 나타내는 2,2,2-트리플루오로-N-페닐아세트이미도일클로라이드 (TFPC) 와 반응시킴으로써, 식 II-6 으로 나타내는 화합물 또는 식 II-9 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 방법.
[37]
이하의 식 VI-5 :
[화학식 103]
Figure pct00103
로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 이하의 식 VI-4 :
[화학식 104]
Figure pct00104
로 나타내는 화합물을, 트리플루오로아세트산메틸의 존재하에서, 알콕시드계의 강염기와 반응시킴으로써, 식 VI-5 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 방법.
[38]
알콕시드계의 강염기가, C1∼C5 알콕시드의 나트륨염, 리튬염, 칼륨염 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, [37] 에 기재된 방법.
[39]
이하의 식 VII-3 :
[화학식 105]
Figure pct00105
으로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 식 VII-3 으로 나타내는 화합물이 용해되어 있는 용매를 실리카 겔과 접촉시킴으로써, 식 VII-3 으로 나타내는 화합물을 고상 추출하는 공정을 포함하는, 방법.
[40]
이하의 식 VIII-4 :
[화학식 106]
Figure pct00106
로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 이하의 식 VIII-3 :
[화학식 107]
Figure pct00107
으로 나타내는 화합물을, N-메틸이미다졸의 존재하에서, 이하의 식 :
[화학식 108]
Figure pct00108
으로 나타내는 2,2,2-트리플루오로-N-페닐아세트이미도일클로라이드 (TFPC) 와 반응시킴으로써, 식 VIII-4 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 방법.
[41]
이하의 식 IX-1 :
[화학식 109]
Figure pct00109
로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 이하의 식 VIII-5 :
[화학식 110]
Figure pct00110
로 나타내는 화합물과, 이하의 식 VII-3 :
[화학식 111]
Figure pct00111
으로 나타내는 화합물을, α-2,6-글리코시드 결합시킴으로써, 식 IX-1 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 방법.
[42]
이하의 식 IX-1 :
[화학식 112]
Figure pct00112
로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 식 IX-1 로 나타내는 화합물이 용해되어 있는 용매를 실리카 겔과 접촉시킴으로써, 식 IX-1 로 나타내는 화합물을 고상 추출하는 공정을 포함하는, 방법.
[43]
식 IX-1 로 나타내는 화합물이 용해되어 있는 용매가, 톨루엔, 디클로로메탄, 클로로포름 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, [42] 에 기재된 방법.
[44]
이하의 식 IX-3 :
[화학식 113]
Figure pct00113
으로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 식 IX-3 으로 나타내는 화합물이 용해되어 있는 용매를 실리카 겔과 접촉시킴으로써, 식 IX-3 으로 나타내는 화합물을 고상 추출하는 공정을 포함하는, 방법.
[45]
식 IX-3 으로 나타내는 화합물이 용해되어 있는 용매가, 톨루엔, 디클로로메탄, 클로로포름 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, [44] 에 기재된 방법.
[46]
[23] ∼ [45] 중 어느 하나에 기재된 방법을 포함하는, 이하의 식 XI :
[화학식 114]
Figure pct00114
로 나타내는 올리고당의 제조 방법.
[47]
이하의 식 III-6 :
[화학식 115]
Figure pct00115
으로 나타내는 화합물.
[48]
이하의 식 III-10 :
[화학식 116]
Figure pct00116
으로 나타내는 화합물.
[49]
이하의 식 V-1 :
[화학식 117]
Figure pct00117
로 나타내는 화합물.
[50]
이하의 식 V-2 :
[화학식 118]
Figure pct00118
로 나타내는 화합물.
[51]
이하의 식 V-3 :
[화학식 119]
Figure pct00119
으로 나타내는 화합물.
[52]
이하의 식 II-6 :
[화학식 120]
Figure pct00120
으로 나타내는 화합물.
[53]
이하의 식 VI-A :
[화학식 121]
Figure pct00121
(식 중, R1 은,
[화학식 122]
로 이루어지는 군에서 선택되는 기를 나타낸다) 로 나타내는 화합물.
[54]
이하의 식 VI-2 :
[화학식 123]
Figure pct00123
로 나타내는 화합물.
[55]
이하의 식 VI-B :
[화학식 124]
Figure pct00124
(식 중, R2 는,
[화학식 125]
로 이루어지는 군에서 선택되는 기를 나타낸다) 로 나타내는 화합물.
[56]
이하의 식 VIII-5 :
[화학식 126]
Figure pct00126
로 나타내는 화합물.
[57]
이하의 식 X-1 :
[화학식 127]
Figure pct00127
로 나타내는 화합물.
[58]
이하의 식 X-2 :
[화학식 128]
Figure pct00128
로 나타내는 화합물.
[59]
이하의 식 X-3 :
[화학식 129]
Figure pct00129
으로 나타내는 화합물.
[60]
이하의 식 X-4 :
[화학식 130]
Figure pct00130
로 나타내는 화합물.
[61]
이하의 식 X-5 :
[화학식 131]
Figure pct00131
로 나타내는 화합물.
[62]
이하의 식 X-6 :
[화학식 132]
Figure pct00132
으로 나타내는 화합물.
[63]
이하의 식 X-7 :
[화학식 133]
Figure pct00133
로 나타내는 화합물.
[64]
당사슬 리모델링 항체 또는 그 Fc 영역 함유 분자의 제조 방법으로서,
[1] ∼ [22] 및 [46] 중 어느 하나에 기재된 방법을 포함하고,
추가로, 얻어진 식 XI 로 나타내는 올리고당으로부터, 환원 말단이 활성화된 N-아세틸글루코사민 (GlcNAc) 을 포함하는 당사슬 도너 분자를 얻는 공정, 및
상기 당사슬 도너 분자와, N297 결합 당사슬로서 푸코오스가 부가되어 있어도 되는 코어 GlcNAc 를 갖는 항체 또는 그 Fc 영역 함유 분자인 억셉터 분자를 반응시키는 공정을 포함하는, 방법.
[65]
환원 말단이 활성화된 GlcNAc 가, 옥사졸린화된 GlcNAc인, [64] 에 기재된 제조 방법.
[66]
당사슬 도너 분자가, 비환원 말단이 화학 수식되어 있어도 되는 이하의 식 XII :
[화학식 134]
Figure pct00134
로 나타내는 화합물 (「SG(10)-Ox」라고도 부른다) 인, [64] 또는 [65] 에 기재된 제조 방법.
[67]
당사슬 도너 분자가, [N3-PEG(3)]2-SG(10)-Ox 인, [64] ∼ [66] 중 어느 하나에 기재된 제조 방법.
[68]
추가로, 아지드기 (N3-) 에 알킨 구조를 갖는 분자와 반응시키는 공정을 포함하는, [67] 에 기재된 제조 방법.
[69]
알킨 구조를 갖는 분자가, 화학 요법제, 분자 표적약, 면역 활성화제, 독소, 항균제, 항바이러스제, 진단용 약제, 단백질, 펩티드, 아미노산, 핵산, 항원, 비타민 및 호르몬에서 선택되는, [68] 에 기재된 제조 방법.
[70]
[64] ∼ [69] 중 어느 하나에 기재된 제조 방법을 포함하는, 항체 약물 콘주게이트의 제조 방법.
본 발명에 의해, 수율, 선택성, 효율성이 우수한, 비환원 말단에 α2,6-시알산 구조를 갖는 2 분기형 N-글리칸의 신규 순화학적 제조 방법이 제공된다. 또, 본 발명에 의해, 당해 N-글리칸의 순화학적 제조 방법에 있어서 유용한, 신규한 단당 또는 올리고당의 제조 방법이나 중간체, 및 당해 제조 방법을 포함하는 당해 N-글리칸의 신규 제조 방법이 제공된다. 또한, 본 발명에 의해, 당해 N-글리칸의 신규 순화학적 제조 방법 등을 이용한, 당단백질 등 (특히, 당사슬 리모델링 항체 혹은 그 Fc 영역 함유 분자, 또는 항체 약물 콘주게이트) 의 신규 제조 방법이 제공된다.
도 1 은, 본 발명에 있어서 제공되는, 신규 합성 스킴을 사용한, 비환원 말단에 α2,6-시알산 구조를 갖는 2 분기형 N-글리칸의 신규 순화학적 제조 방법을 간략적으로 나타내는 것이다.
이하, 본 발명을 실시하기 위한 바람직한 형태에 대해 설명한다. 또한, 이하에 설명하는 실시형태는, 본 발명의 대표적인 실시형태의 일례를 나타낸 것으로, 이것에 의해 본 발명의 범위가 좁게 해석되지는 않는다.
＜1. 비환원 말단에 α2,6-시알산 구조를 갖는 2 분기형 N-글리칸의 신규 순화학적 제조 방법＞
본 발명의 일 양태에 있어서, 신규 합성 스킴을 사용한, 비환원 말단에 α2,6-시알산 구조를 갖는 2 분기형 N-글리칸의 신규 순화학적 제조 방법이 제공된다. 본 발명에 있어서, 비환원 말단에 α2,6-시알산 구조를 갖는 2 분기형 N-글리칸은, 이하의 식 XI :
[화학식 135]
Figure pct00135
로 나타내는 올리고당을 의미한다.
본 발명에 있어서의 신규 합성 스킴은, 이하의 공정 1 ∼ 5 를 포함한다.
＜공정 1＞
공정 1 은, 이하의 식 III-11 :
[화학식 136]
Figure pct00136
로 나타내는 화합물, 또는, 식 III-13 :
[화학식 137]
Figure pct00137
으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 당해 공정 1 은, 글루코오스 → 만노오스의 입체 반전에 관한 후술하는 소공정 1-9 및 1-10, 또는 소공정 1-13 및 1-14 를 필수의 소공정으로서 포함하는 것이지만, 그것 이외에 대해서는, 단당 또는 올리고당 제조에 있어서의 통상적인 방법을 사용하거나, 또는 이와 같은 통상적인 방법을 응용함으로써 실시할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 공정 1 은, 이하에 나타내는 소공정을 포함한다.
[화학식 138]
Figure pct00138
＜소공정 1-1＞
소공정 1-1 은, 이하의 식 I-1 :
[화학식 139]
Figure pct00139
로 나타내는 화합물의 3 위치의 탄소에 결합되어 있는 수산기를, 2-나프탈레닐메틸 (NAP) 기로 보호함으로써, 이하의 식 I-2 :
[화학식 140]
Figure pct00140
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정의 출발 물질인 식 I-1 로 나타내는
Figure pct00141
합물은 이미 알려진 방법에 의해 제조할 수 있고, 또는, 시판품을 사용할 수 있다. 식 I-1 로 나타내는 화합물의 시판품으로는, 예를 들어, Sigma-Aldrich 사 제조의 1,2:5,6-디-O-이소프로필리덴-α-D-글루코푸라노스를 들 수 있다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 1 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 1-2＞
소공정 1-2 는, 식 I-2 로 나타내는 화합물을, 2 지점의 이소프로필리덴의 산가수분해와 피라노오스 고리 형성에 의해, 이하의 식 I-3 :
[화학식 141]
Figure pct00142
으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 2 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 1-3＞
소공정 1-3 은, 식 I-3 으로 나타내는 화합물 상의 수산기를 아세틸기로 보호함으로써, 이하의 식 I-4 :
[화학식 142]
Figure pct00143
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 3 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 1-4＞
소공정 1-4 는, 식 I-4 로 나타내는 화합물의 1 위치의 탄소에 결합되어 있는 아세틸옥시기에 있어서의 아세틸기만을 선택적으로 탈리시킴으로써, 이하의 식 I-5 :
[화학식 143]
Figure pct00144
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 3 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 1-5＞
소공정 1-5 는, 식 I-5 로 나타내는 화합물을 트리클로로아세토니트릴과 반응시킴으로써, 이하의 식 I-6 :
[화학식 144]
Figure pct00145
으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 4 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 1-6＞
소공정 1-6 은, 식 I-6 으로 나타내는 화합물을, 이하의 식 II-1 :
[화학식 145]
Figure pct00146
로 나타내는 화합물과 반응시킴으로써, 이하의 식 III-1 :
[화학식 146]
Figure pct00147
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 식 II-1 로 나타내는 화합물은, 이미 알려진 방법에 의해 제조할 수 있고, 또는, 시판품을 사용할 수 있다. 식 II-1 로 나타내는 화합물의 시판품으로는, 예를 들어, 도쿄 화성 공업 주식회사 제조의 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-프탈이미드-β-D-글루코피라노시드를 들 수 있다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 5 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 1-7＞
소공정 1-7은, 식 III-1 로 나타내는 화합물로부터, 아세틸기를 탈리시킴으로써, 이하의 식 III-2 :
[화학식 147]
Figure pct00148
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 6또는 16 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 소공정 1-7 은, 식 III-1 로 나타내는 화합물을, 트리플루오로아세트산메틸의 존재하에서, 알콕시드계의 강염기와 반응시킴으로써, 식 III-2 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정이다. 당해 아세틸기의 탈리 반응을, 메탄올 중 나트륨메톡시드를 사용하여 실시하는 것이 보고되어 있지만 (Org. Biomol. Chem. , 2018, 16, 4720-4727), 그 경우, 프탈이미드기의 개환이라는 원하지 않는 부반응도 동시에 발생할 수 있다. 한편, 트리플루오로아세트산메틸의 존재하에서, 알콕시드계의 강염기와 반응시킨다는 수법을 사용함으로써, 프탈이미드기의 개환을 억제하면서, 아세틸기의 탈리를 실시하는 것이 가능해진다.
당해 알콕시드계의 강염기로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, C1∼C5 알콕시드의 나트륨염, 리튬염, 칼륨염 또는 이들의 조합을 들 수 있고, 바람직하게는 리튬메톡시드, 나트륨메톡시드, 칼륨메톡시드, 리튬에톡시드, 나트륨에톡시드, 칼륨에톡시드, 리튬이소프로폭시드, 나트륨이소프로폭시드, 칼륨이소프로폭시드, 리튬tert-부톡시드, 나트륨tert-부톡시드, 칼륨tert-부톡시드, 리튬tert-펜톡시드, 나트륨tert-펜톡시드, 또는 칼륨tert-펜톡시드를 들 수 있고, 특히 바람직하게는 나트륨메톡시드, 리튬tert-부톡시드 또는 칼륨tert-부톡시드를 들 수 있다.
본 공정에 있어서의 용매로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등의 알코올계 용매, 및 테트라하이드로푸란, 아세토니트릴, 시클로펜틸메틸에테르, 톨루엔, 디메틸아세트아미드 등과 알코올 용매의 혼합 용매계를 들 수 있고, 바람직하게는 메탄올, 또는 메탄올과 테트라하이드로푸란의 혼합 용매계를 들 수 있다.
본 공정의 반응 온도는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, -20 ℃ ∼ 80 ℃, 바람직하게는 0 ℃ ∼ 70 ℃, 보다 바람직하게는 20 ℃ ∼ 65 ℃, 특히 바람직하게는 40 ℃ ∼ 60 ℃ 를 들 수 있다.
＜소공정 1-8＞
소공정 1-8 은, 식 III-2 로 나타내는 화합물에 있어서, D-글루코피라노시드의 4 위치 및 6 위치의 탄소에 결합되어 있는 수산기를, 벤즈알데히드디메틸아세탈을 사용하여 선택적으로 보호함으로써, 이하의 식 III-3 :
[화학식 148]
Figure pct00149
으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 7 또는 17 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 1-9＞
소공정 1-9 는, 식 III-3 으로 나타내는 화합물을, 트리플루오로메탄술포닐옥시기, 노나플루오로부탄술포닐옥시기, 2-니트로벤젠술포닐옥시기 및 4-니트로벤젠술포닐옥시기로 이루어지는 군에서 선택되는 탈리기를 부여하는 화합물과 반응시킴으로써, 이하의 식 III-4 :
[화학식 149]
Figure pct00150
(식 중, X1 은, 트리플루오로메탄술포닐기, 노나플루오로부탄술포닐기, 2-니트로벤젠술포닐기 및 4-니트로벤젠술포닐기로 이루어지는 군에서 선택되는 치환기를 나타낸다) 로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 탈리기 부여 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 8 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 공정에 있어서, 「트리플루오로메탄술포닐옥시기, 노나플루오로부탄술포닐옥시기, 2-니트로벤젠술포닐옥시기 및 4-니트로벤젠술포닐옥시기로 이루어지는 군에서 선택되는 탈리기를 부여하는 화합물」로는, 예를 들어, 트리플루오로메탄술폰산 무수물, 노나플루오로-1-부탄술포닐=플루오리드, 비스(노나플루오로-1-부탄술폰산) 무수물, 2-니트로벤젠술포닐클로라이드, 또는 4-니트로벤젠술포닐클로라이드를 들 수 있고, 바람직하게는 트리플루오로메탄술폰산 무수물을 들 수 있다.
본 공정에 있어서의 용매로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 아세트산에틸, 톨루엔, 디클로로메탄, 아세토니트릴, 시클로펜틸메틸에테르, 또는 tert-부틸메틸에테르를 들 수 있고, 바람직하게는 아세트산에틸, 톨루엔 또는 디클로로메탄을 들 수 있다.
본 공정의 반응 온도는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, -40 ℃ ∼ 60 ℃, 바람직하게는 -30 ℃ ∼ 40 ℃, 보다 바람직하게는 -20 ℃ ∼ 10 ℃ 를 들 수 있다.
본 공정은, 바람직하게는 염기의 존재하에서 실시할 수 있다. 본 공정에 사용되는 염기로는, 반응이 진행되는 한 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 1-메틸이미다졸, 피리딘, 4-디메틸아미노피리딘, 피콜린, 루티딘 또는 콜리딘을 들 수 있고, 바람직하게는 1-메틸이미다졸을 들 수 있다.
＜소공정 1-10＞
소공정 1-10 은, 식 III-4 로 나타내는 화합물을, 아세트산세슘 또는 테트라부틸암모늄아세테이트와 반응시킴으로써, 이하의 식 III-5 :
[화학식 150]
Figure pct00151
(식 중, X2 는, 아세틸기이다) 로 나타내는 화합물을 제조하거나, 또는, 식 III-4 로 나타내는 화합물을 벤조산테트라부틸암모늄과 반응시킴으로써, 이하의 식 III-5 :
[화학식 151]
Figure pct00152
(식 중, X2 는, 벤조일기이다) 로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 글루코오스 → 만노오스의 입체 반전은 공지된 변환 반응이 있지만, β-글리코시드 결합으로 연결한 글루코오스-글루코사민 2 당의 D-글루코피라노시드 3 위치의 탄소에 결합하는 수산기의 보호기가 2-나프틸메틸 (Nap) 기인 경우의 변환은 보고되어 있지 않다. 당해 방법을 채용함으로써, 글루코오스 → 만노오스의 입체 반전을 달성할 수 있어, 고수율이면서 또한 고선택적으로 β-글리코시드 결합으로 연결한 만노오스-글루코사민 2 당 골격을 구축할 수 있다.
본 공정에 있어서의 용매로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 디메틸술폭시드, 디메틸포름아미드, 디메틸아세트아미드, N-메틸피롤리돈, N,N-디메틸이미다졸리디논, 술포란, 테트라하이드로푸란 또는 아세토니트릴을 들 수 있고, 바람직하게는 디메틸술폭시드를 들 수 있다.
본 공정의 반응 온도는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 20 ∼ 80 ℃, 바람직하게는 23 ∼ 70 ℃, 보다 바람직하게는 26 ∼ 60 ℃, 특히 바람직하게는 30 ∼ 50 ℃ 를 들 수 있다.
본 공정은 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 9 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 1-11＞
소공정 1-11 은, 식 III-5 로 나타내는 화합물에 있어서, X2 기를 탈리시킴과 함께, 프탈이미드기를 개환시킴으로써, 이하의 식 III-6 :
[화학식 152]
Figure pct00153
으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 가수분해 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 9 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 공정에 있어서, 생성된 식 III-6 으로 나타내는 화합물은, 용매 중에 녹아 있는 것을 다음 공정에 그대로 사용해도 되고, 또는, 재결정화에 의해 단리·정제할 수도 있다. 식 III-6 으로 나타내는 화합물은, 결정화에 의해 단리·정제할 수 있는 점이 큰 이점이며, 결정화에 의해, 칼럼 정제에서는 제거가 어려운 유사 구조를 갖는 불순물을 거의 완전하게 제거할 수 있다. 이 경우, HPLC 순도로 99 ％ 이상의 식 III-6 으로 나타내는 화합물을 취득할 수 있다.
본 공정에 있어서의 재결정화에 의한 단리·정제는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 용매가 녹아 있는 상태로부터 감압 건조 조작에 의해 용매를 완전하게 제거하는 방법, 혹은, 테트라하이드로푸란을 양용매로서 사용하고, 미량의 물 존재하, 빈용매로서 이소프로판올을 적하하는 방법을 들 수 있다.
본 공정에 있어서의 재결정화는, 식 III-6 으로 나타내는 화합물의 종정 (種晶) 을 사용하여 실시할 수도 있다. 종정을 사용하는 경우, 예를 들어, 테트라하이드로푸란을 양용매로서 사용하고, 미량의 물 존재하, 빈용매로서 이소프로판올을 일부 적하, 종정을 첨가 후, 결정 석출을 확인하고, 나머지의 이소프로판올을 적하하는 방법에 의해 결정화를 실시할 수 있다.
＜소공정 1-12＞
소공정 1-12 는, 식 III-6 으로 나타내는 화합물에 있어서의 개환된 프탈이미드기를 탈수 축합에 의해 폐환함으로써, 이하의 식 III-8 :
[화학식 153]
Figure pct00154
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 10 또는 20 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 1-15＞
소공정 1-15 는, 식 III-8 로 나타내는 화합물에 있어서, D-만노피라노시드의 2 위치의 탄소에 결합되어 있는 수산기를 벤질기로 보호함으로써, 이하의 식 III-9 :
[화학식 154]
Figure pct00155
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 11 또는 21 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 소공정 1-15 는, 리튬tert-부톡시드 또는 리튬tert-아목시드의 존재하에, 식 III-8 로 나타내는 화합물에 있어서, D-만노피라노시드의 2 위치의 탄소에 결합되어 있는 수산기를 벤질기로 보호함으로써, 식 III-9 로 나타내는 화합물을 제조하는 공정을 포함한다. 소공정 1-15 를, 리튬tert-부톡시드 또는 리튬tert-아목시드의 존재하에서 실시함으로써, 프탈이미드의 개환을 억제할 수 있다. 또, 수소화나트륨을 사용한 일반적 조건에 비해, 안전하게 실시 가능하며, 스케일 업도 용이해진다.
본 공정에 있어서의 용매로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 디메틸아세트아미드, 디메틸포름아미드, N-메틸피롤리돈, N,N-디메틸이미다졸리디논을 들 수 있고, 바람직하게는 디메틸아세트아미드를 들 수 있다.
본 공정의 반응 온도는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, -20 ∼ 100 ℃, 바람직하게는 -15 ∼ 70 ℃, 특히 바람직하게는 -10 ∼ 50 ℃ 를 들 수 있다.
＜소공정 1-16＞
소공정 1-16 은, 식 III-9 로 나타내는 화합물에 있어서, D-만노피라노시드의 6 위치의 탄소에 결합되어 있는 수산기만 선택적으로 탈보호함으로써, 이하의 식 III-10 :
[화학식 155]
Figure pct00156
으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 12 또는 22 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 공정에 있어서, 생성된 식 III-10 으로 나타내는 화합물은, 용매 중에 녹아 있는 것을 다음 공정에 그대로 사용해도 되고, 또는, 칼럼이나 재결정화에 의해 단리·정제할 수도 있다.
＜소공정 1-17＞
소공정 1-17 은, 식 III-10 으로 나타내는 화합물로부터 NAP 기를 탈리시킴으로써, 이하의 식 III-11 :
[화학식 156]
Figure pct00157
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 13 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 1-18＞
소공정 1-18 은, 식 III-11 로 나타내는 화합물로부터 프탈로일 보호기를 탈리시킴으로써, 이하의 식 III-12 :
[화학식 157]
Figure pct00158
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 14 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 1-19＞
소공정 1-19 는, 식 III-12 로 나타내는 화합물에 있어서의 아미노기를, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐기로 보호함으로써, 이하의 식 III-13 :
[화학식 158]
Figure pct00159
으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 15 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 공정 1 은, 글루코오스 → 만노오스의 입체 반전을, SN2 반응을 이용하여 실행하기 위한 공정을 포함하는 소공정 1-9 ∼ 1-12 대신에, 산화 환원 반응을 이용하여 실행하기 위한 이하에 나타내는 소공정 1-13 및 1-14 를 포함한다.
[화학식 159]
Figure pct00160
＜소공정 1-13＞
소공정 1-13 은, 식 III-3 으로 나타내는 화합물에 있어서, D-글루코피라노시드의 2 위치를 산화함으로써, 이하의 식 III-7 :
[화학식 160]
Figure pct00161
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 18 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 1-14＞
소공정 1-14 는, 식 III-7 로 나타내는 화합물에 있어서, 2-케토-D-글루코피라노시드의 2 위치의 탄소에 결합되어 있는 옥소기를 환원함으로써, 이하의 식 III-8 :
[화학식 161]
Figure pct00162
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 19 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 공정에 있어서의 용매로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 디에틸에테르, 시클로펜틸메틸에테르, tert-부틸메틸에테르, 디이소프로필에테르, 디프로필에테르, 디부틸에테르, 1,4-디옥산을 들 수 있고, 바람직하게는 테트라하이드로푸란을 들 수 있다.
본 공정의 반응 온도는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, -80 ℃ ∼ 20 ℃ 를 들 수 있다. 또한, 이하에 기재하는 바와 같이, 사용하는 환원제에 따라서, 최적의 반응 온도가 상이하다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 식 III-7 로 나타내는 화합물에 있어서의, 2-케토-D-글루코피라노시드의 2 위치의 탄소에 결합되어 있는 옥소기는, L-셀렉트리드, LS-셀렉트리드, 리튬디이소부틸-tert-부톡시알루미늄하이드리드 (LDBBA), 이하의 식 A :
[화학식 162]
Figure pct00163
식 중, R3 은, 이하의 식 :
[화학식 163]
Figure pct00164
으로 나타내는 디tert-부틸메틸페녹시드 또는 하이드리드이고, 단, 적어도 2 개의 R3 은, 디tert-부틸메틸페녹시드이다) 로 나타내는 화합물 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 환원제의 존재하에서 환원된다. 당해 환원 공정에 있어서는, 예를 들어, NaBH4 를 사용한 경우, 입체 선택성이 낮아 (7 : 3 정도), 소기의 Gln → Man 으로의 입체 반전을 효율적으로 얻기가 곤란하였다 (Org. Biomol. Chem., 2018, 16, 4720-4727). 한편, 상기 예시한 환원제를 사용한 경우, NaBH4 를 사용한 경우와 비교하여, Gln → Man 으로의 입체 반전의 선택성이 크게 개선된다 (93.6 : 6.4 ∼ 98.1 : 1.9).
식 A 로 나타내는 화합물 중, 3 개의 R3 이 디tert-부틸메틸페녹시드인 화합물은, 예를 들어, 리튬알루미늄하이드리드 (50.0 mg, 1.32 mmol) 의 테트라하이드로푸란 현탁액 (2 mL) 에, 0 ℃ 에서 디부틸하이드록시톨루엔 (885.41 mg, 4.02 mmol) 을 첨가한 후, 25 ℃ 에서 교반함으로써 얻을 수 있다. 식 A 로 나타내는 화합물 중, 2 개의 R3 이 디tert-부틸메틸페녹시드인 화합물은, 동일한 수법에 있어서, 1 몰 당량의 리튬알루미늄하이드리드에 대해, 2 몰 당량의 디부틸하이드록시톨루엔을 사용함으로써 얻을 수 있다.
상기와 같이, 본 공정의 반응 온도는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 환원제로서 L-셀렉트리드, LS-셀렉트리드 또는 LDBBA 를 사용하는 경우, 반응 온도는, 바람직하게는 -80 ℃ ∼ -20 ℃, 보다 바람직하게는 -80 ℃ ∼ -30 ℃, 더욱 바람직하게는 -80 ℃ ∼ -40 ℃, 특히 바람직하게는 -80 ℃ ∼ -50 ℃ 를 들 수 있고, 환원제로서 식 A 로 나타내는 화합물을 사용하는 경우, 반응 온도는, 바람직하게는 -20 ℃ ∼ 20 ℃, 보다 바람직하게는 -15 ℃ ∼ 15 ℃, 특히 바람직하게는 -10 ℃ ∼ 10 ℃ 를 들 수 있다. 따라서, 보다 취급하기 쉬운 온도에서 반응이 진행된다는 점에 있어서, 본 공정에 사용되는 환원제로서 특히 바람직한 것은, 식 A 로 나타내는 화합물이다.
＜공정 2＞
공정 2 는, 이하의 식 V-3 :
[화학식 164]
Figure pct00165
으로 나타내는 화합물, 또는, 이하의 식 V-5 :
[화학식 165]
Figure pct00166
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 당해 공정 2 는, 1 분자의 이당에 2 분자의 단당을 위치 선택적으로 결합시키는, 후술하는 소공정 2-3 또는 2-6을 필수의 소공정으로서 포함하는 것이지만, 그것 이외에 대해서는, 단당 또는 올리고당 제조에 있어서의 통상적인 방법을 사용하거나, 또는 이와 같은 통상적인 방법을 응용함으로써 실시할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 공정 2 는, 이하에 나타내는 소공정을 포함한다.
[화학식 166]
Figure pct00167
또는
[화학식 167]
Figure pct00168
＜소공정 2-1＞
소공정 2-1 은, 이하의 식 IV-1 :
[화학식 168]
Figure pct00169
로 나타내는 화합물의 오르토에스테르 부위의 가수분해에 의해 생성한 모노아세틸체의 아세틸기를 선택적으로 전이시킴으로써, 이하의 식 IV-2 :
[화학식 169]
Figure pct00170
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정의 출발 물질인 식 IV-1 로 나타내는 화합물은, 이미 알려진 방법에 의해 제조할 수 있으며, 또는, 시판품을 사용할 수 있다. 식 VI-1 로 나타내는 화합물의 시판품으로는, 예를 들어, Combi-blocks 사 제조의 3,4,6-Tri-O-benzyl-beta-D-mannopyranose-1,2-(methyl orthoacetate) 를 들 수 있다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 23 또는 26 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 2-2＞
소공정 2-2 는, 식 IV-2 로 나타내는 화합물을 트리클로로아세토니트릴과 반응시킴으로써, 이하의 식 IV-3 :
[화학식 170]
Figure pct00171
으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 23 또는 27 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 2-3＞
소공정 2-3 은, 식 III-13 으로 나타내는 화합물과 식 IV-3 으로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써, 이하의 식 V-1 :
[화학식 171]
Figure pct00172
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 24 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 공정은, 바람직하게는 루이스산의 존재하에서 실시할 수 있다. 본 공정에 있어서의 루이스산으로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 트리플루오로메탄술폰산트리메틸실릴, 트리플루오로메탄술폰산트리이소프로필실릴, 트리플루오로메탄술폰산tert-부틸디메틸실릴, 또는 삼불화붕소디에틸에테르 착물을 들 수 있고, 바람직하게는 트리플루오로메탄술폰산트리메틸실릴을 들 수 있다.
본 공정에 있어서의 용매로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 디클로로메탄, 톨루엔, 트리플루오로메틸벤젠, 또는 클로로벤젠을 들 수 있고, 바람직하게는 디클로로메탄 또는 톨루엔을 들 수 있다.
본 공정의 반응 온도는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, -60 ℃ ∼ 0 ℃, 바람직하게는 -40 ∼ 0 ℃, 보다 바람직하게는 -30 ∼ 0 ℃, 특히 바람직하게는 -20 ∼ 0 ℃ 를 들 수 있다.
본 공정에 있어서는, 1 당량의 식 III-13 으로 나타내는 화합물에 대해, 2 ∼ 4 당량의 식 IV-3 으로 나타내는 화합물을 투입하는 것이 바람직하고, 1 당량의 식 III-13 으로 나타내는 화합물에 대해, 2.5 ∼ 3 당량의 식 IV-3 으로 나타내는 화합물을 투입하는 것이 보다 바람직하다.
＜소공정 2-4＞
소공정 2-4 는, 식 V-1 로 나타내는 화합물로부터, 아세틸기 및 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐기를 탈리시킴으로써, 이하의 식 V-2 :
[화학식 172]
Figure pct00173
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 25 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 2-5＞
소공정 2-5 는, 식 V-2 로 나타내는 화합물에 있어서의 아미노기를, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐기로 보호함으로써, 이하의 식 V-3 :
[화학식 173]
Figure pct00174
으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 25 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 2-6＞
소공정 2-6 은, 식 III-11 로 나타내는 화합물과 식 IV-3 으로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써, 이하의 식 V-4 :
[화학식 174]
Figure pct00175
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 28 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 공정은, 바람직하게는 루이스산의 존재하에서 실시할 수 있다. 본 공정에 있어서의 루이스산으로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 트리플루오로메탄술폰산트리메틸실릴, 트리플루오로메탄술폰산트리이소프로필실릴, 트리플루오로메탄술폰산tert-부틸디메틸실릴, 또는 삼불화붕소디에틸에테르 착물을 들 수 있고, 바람직하게는 트리플루오로메탄술폰산트리메틸실릴을 들 수 있다.
본 공정에 있어서의 용매로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 디클로로메탄, 톨루엔, 트리플루오로메틸벤젠, 또는 클로로벤젠을 들 수 있고, 바람직하게는 디클로로메탄 또는 톨루엔을 들 수 있다.
본 공정의 반응 온도는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, -60 ℃ ∼ 0 ℃, 바람직하게는 -40 ∼ 0 ℃, 보다 바람직하게는 -30 ∼ 0 ℃, 특히 바람직하게는 -20 ∼ 0 ℃ 를 들 수 있다.
본 공정에 있어서는, 1 당량의 식 III-11 로 나타내는 화합물에 대해, 2 ∼ 4 당량의 식 IV-3 으로 나타내는 화합물을 투입하는 것이 바람직하고, 1 당량의 식 III-11 로 나타내는 화합물에 대해, 2.5 ∼ 3 당량의 식 IV-3 으로 나타내는 화합물을 투입하는 것이 보다 바람직하다.
＜소공정 2-7＞
소공정 2-7 은, 식 V-4 로 나타내는 화합물로부터 아세틸기를 탈리시킴으로써, 이하의 식 V-5 :
[화학식 175]
Figure pct00176
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 29 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 소공정 2-7 은, 식 V-4 로 나타내는 화합물을, 트리플루오로아세트산메틸의 존재하에, 알콕시드계의 강염기와 반응시킴으로써, 식 V-5 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함한다. 일반적으로 아세틸기의 탈보호는, 메탄올 중 나트륨메톡시드를 사용하여 실시하는 것이 알려져 있지만, 그 경우, 프탈이미드기의 개환이라는 원하지 않은 부반응도 동시에 발생할 수 있다. 한편, 트리플루오로아세트산메틸의 존재하에, 알콕시드계의 강염기와 반응시킨다는 수법을 사용함으로써, 프탈이미드기의 개환을 억제하면서, 아세틸기의 탈리를 실시하는 것이 가능해진다.
당해 알콕시드계의 강염기로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, C1∼C5 알콕시드의 나트륨염, 리튬염, 칼륨염 또는 이들의 조합을 들 수 있고, 바람직하게는 리튬메톡시드, 나트륨메톡시드, 칼륨메톡시드, 리튬에톡시드, 나트륨에톡시드, 칼륨에톡시드, 리튬이소프로폭시드, 나트륨이소프로폭시드, 칼륨이소프로폭시드, 리튬tert-부톡시드, 나트륨tert-부톡시드, 칼륨tert-부톡시드, 리튬tert-펜톡시드, 나트륨tert-펜톡시드, 또는 칼륨tert-펜톡시드를 들 수 있고, 특히 바람직하게는 나트륨메톡시드, 리튬tert-부톡시드 또는 칼륨tert-부톡시드를 들 수 있다.
본 공정에 있어서의 용매로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올등의 알코올계 용매, 그리고 테트라하이드로푸란, 아세토니트릴, 시클로펜틸메틸에테르, 톨루엔, 디메틸아세트아미드 등과 알코올 용매와의 혼합 용매계를 들 수 있으며, 바람직하게는 메탄올, 또는 메탄올과 테트라하이드로푸란의 혼합 용매계를 들 수 있다.
본 공정의 반응 온도는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, -20 ℃ ∼ 80 ℃, 바람직하게는 0 ℃ ∼ 70 ℃, 보다 바람직하게는 15 ℃ ∼ 65 ℃, 특히 바람직하게는 30 ℃ ∼ 60 ℃ 를 들 수 있다.
＜공정 3＞
공정 3 은, 이하의 식 VI-3 :
[화학식 176]
Figure pct00177
으로 나타내는 화합물, 또는, 이하의 식 VI-6 :
[화학식 177]
Figure pct00178
으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 당해 공정 3 은, 1 분자의 4 당에 2 분자의 단당을 위치 선택적으로 결합시키는, 후술하는 소공정 3-6 또는 3-12 를 필수의 소공정으로서 포함하는 것이지만, 그것 이외에 대해서는, 단당 또는 올리고당 제조에 있어서의 통상적인 방법을 사용하거나, 또는 이와 같은 통상적인 방법을 응용함으로써 실시할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 공정 3 은, 이하에 나타내는 소공정을 포함한다.
[화학식 178]
Figure pct00179
또는,
[화학식 179]
Figure pct00180
＜소공정 3-1＞
소공정 3-1 은, 이하의 식 II-1 :
[화학식 180]
Figure pct00181
로 나타내는 화합물로부터, 프탈로일 보호기를 탈리시킴으로써, 이하의 식 II-2 :
[화학식 181]
Figure pct00182
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 30 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 3-2＞
소공정 3-2 는, 식 II-2 로 나타내는 화합물에 있어서의 아미노기를, 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐기로 보호함으로써, 이하의 식 II-3 :
[화학식 182]
Figure pct00183
으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 31 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 3-3＞
소공정 3-3 은, 식 II-3 으로 나타내는 화합물상의 수산기를 아세틸기로 보호함으로써, 이하의 식 II-4 :
[화학식 183]
Figure pct00184
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 32 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 3-4＞
소공정 3-4는, 식 II-4 로 나타내는 화합물로부터 4-메톡시페닐기를 탈리시킴으로써, 이하의 식 II-5 :
[화학식 184]
Figure pct00185
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 33 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 본 공정은, 플루오러스 알코올 및 수중에서, 식 II-4 로 나타내는 화합물에 λ3-아이오단을 반응시킴으로써, 식 II-5 로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다.
본 발명에 있어서, 「λ3-아이오단」이란, 3 가의 초원자가 (價) 요오드 화합물을 의미한다. λ3-아이오단을 사용함으로써, 종래의 탈보호법과 비교하여, 식 II-5 로 나타내는 화합물의 수율이 높아질 뿐만 아니라, 온화한 반응 조건에서 실시할 수 있다. 또, 소과잉의 λ3-아이오단에 의해 반응이 진행되기 때문에, 예를 들어 과잉량의 질산암모늄세륨 (IV) 을 사용하는 종래의 탈보호법에 비해, 탈보호체의 정제가 용이해지고, 조작상의 안전성도 높다.
일 실시형태에 있어서, λ3-아이오단은, 식 R4-I(OR5)2 로 나타내는 화합물이다 (식 중, R4 는, 무치환 또는 치환 페닐기이고, R5 는, H, 아세톡시, 트리플루오로아세톡시, 토실옥시, 메탄술포닐옥시, 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택된다). 상기 식에 정의된 바대로, R4 는 「치환 페닐기」여도 되고, 당해 치환기로는, 예를 들어, 직사슬 혹은 분지형 포화 또는 불포화 탄화수소기, 함산소기 (알콕시, 에스테르 등), 함질소기 (시아노, 아지드 등), 할로겐 (예를 들어, 불소, 염소, 브롬, 요오드) 등을 들 수 있지만, 보다 바람직하게는 탄화수소기, 함산소 치환기, 할로겐이다. 이들 치환기가 탄소를 포함하는 경우, 예를 들어, 탄소를 1 ∼ 5 개 갖는 것, 또는 탄소를 1 ∼ 3 개 갖는 것을 바람직하게 사용할 수 있다. λ3-아이오단의 구체예에는, [비스(트리플루오로아세톡시)요오드]벤젠 (PIFA), [하이드록시(토실옥시)요오드]벤젠 (HTIB), (디아세톡시요오드)벤젠 (PIDA), [비스(트리플루오로아세톡시)요오드]펜타플루오로벤젠, 및 [하이드록시(메탄술포닐옥시)요오드]벤젠을 들 수 있지만, 이것으로 한정되는 것은 아니다.
λ3-아이오단의 양은 적절히 설정할 수 있지만, 예를 들어, 식 II-4 로 나타내는 화합물에 대해 약 1 ∼ 10 당량, 약 1 ∼ 7 당량, 또는 약 1 ∼ 5 당량일 수 있고, 바람직하게는 약 1 ∼ 3 당량일 수 있다. 또한, 본 명세서 전체를 통하고, 「약」이라는 용어는, 언급된 값의 ±10 ％ 의 범위를 나타낸다.
본 발명에 있어서, 「플루오러스 알코올」이란, 알코올에 결합되어 있는 탄소를 제외한 모든 탄소가 불소를 갖는 불소 함유 알코올 화합물을 의미한다. 불소 치환이 허용되는 한, 플루오러스 알코올은, 보다 많은 불소를 갖는 것이 바람직하다. 플루오러스 알코올에는, 플루오러스 지방족 알코올이 포함되지만, 이것에 한정되는 것은 아니다. 플루오러스 지방족 알코올 중의 탄화수소 부분은, 포화 또는 불포화여도 되고, 직사슬형 또는 분기형이어도 되며, 고리형이어도 된다. 플루오러스 지방족 알코올은, 예를 들어, 플루오러스 C2∼C8 지방족 알코올이고, 바람직하게는 플루오러스 C2∼C5 지방족 알코올이고, 보다 바람직하게는 플루오러스 C2∼C3 지방족 알코올이다. 플루오러스 알코올의 구체예로는, 헥사플루오로2-프로판올 (HFIP), 2,2,2-트리플루오로에탄올 (TFE), 2,2,3,3,4,4,5,5-옥타플루오로-1-펜탄올, 노나플루오로-tert-부틸알코올, 및 이들의 조합으로 이루어지는 군을 들 수 있지만, 이것들로 한정되는 것은 아니다.
또한, 플루오러스 알코올 및 λ3-아이오단은, 그들의 바람직한 조합에 있어서, 보다 고수율로 탈보호체를 얻을 수 있다. 이와 같은 조합은, 당업자이면 적절히 선택할 수 있지만, 예를 들어 PIFA 는, 헥사플루오로2-프로판올 (HFIP), 2,2,2-트리플루오로에탄올 (TFE), 노나플루오로-tert-부틸알코올 등과의 조합으로 바람직하게 사용되고, HTIB 는, HFIP, TFE, 2,2,3,3,4,4,5,5-옥타플루오로-1-펜탄올 등과의 조합으로 바람직하게 사용되고, [비스(트리플루오로아세톡시)요오드]펜타플루오로벤젠은, 헥사플루오로2-프로판올 (HFIP) 등과의 조합으로 바람직하게 사용되고, [하이드록시(메탄술포닐옥시)요오드]벤젠은, 헥사플루오로2-프로판올 (HFIP) 등과의 조합으로 바람직하게 사용되지만, 이들의 조합의 예로 한정되는 것은 아니다.
플루오러스 알코올의 양은, 생성물의 고수율을 달성하는 관점 등에서 적절히 설정할 수 있지만, 예를 들어, 식 II-4 로 나타내는 화합물에 대해 몰비로 약 1.0 당량 이상, 약 1.5 당량 이상, 약 2.0 당량 이상, 또는 2.5 당량 이상일 수 있고, 또, 식 II-4 로 나타내는 화합물에 대해 체적비로 약 15 이하, 약 10 이하, 약 8 이하, 또는 약 5 이하일 수 있다.
본 공정은, 상기 플루오러스 알코올와 「물」의 공존하에 있어서 실시된다. 물의 양은, 생성물의 고수율을 달성하기 위한 관점 등에서 적절히 설정할 수 있지만, 예를 들어, 식 II-4 로 나타내는 화합물에 대해 몰비로 약 1.0 당량 이상, 약 1.5 당량 이상, 약 2.0 당량 이상, 또는 약 2.5 당량 이상일 수 있고, 또, 식 II-4 로 나타내는 화합물에 대해 체적비로 약 10 이하, 약 8 이하, 약 5 이하, 또는 약 3 이하일 수 있다.
본 공정에서는, 플루오러스 알코올 및 수중에, 추가로 「용매」를 첨가해도 된다. 용매로는, 디클로로메탄, 톨루엔, (트리플루오로메틸)벤젠, 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택할 수 있지만, 이들로 한정되는 것은 아니다. 사용하는 용매의 종류는, 생성물의 고수율을 달성하기 위해서, 사용하는 λ3-아이오단 등에 따라서 적절히 선택할 수 있다. 용매의 양도 또한, 생성물의 고수율을 달성하기 위해 적절히 설정할 수 있으며, 예를 들어, 식 II-4 로 나타내는 화합물에 대해 체적비로 약 0.5 ∼ 50, 약 1 ∼ 20, 또는 약 2 ∼ 10 일 수 있다.
본 공정에서는, 플루오러스 알코올 및 수중에, 추가로 「첨가제」를 첨가해도 된다. 첨가제는, 바람직하게는 인산이수소나트륨, 인산이수소칼륨, 인산수소이나트륨, 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택된다. 탈 4-메톡시페닐화의 반응이 진행되면 산성도가 강해질 수 있으므로, 특히, 강산성의 산이 부생되는 λ3-아이오단 (HTIB 등) 을 사용한 경우에서는 상기 인산이수소칼륨 등의 첨가제를 첨가함으로써, 보다 높은 생성물 수율을 얻을 수 있다. 첨가제의 양도 또한, 생성물의 고수율을 달성하기 위해 적절히 설정할 수 있으며, 예를 들어, 식 II-4 로 나타내는 화합물에 대해 약 0.5 ∼ 8 당량, 약 1 ∼ 6 당량, 또는 약 1.5 ∼ 5 당량일 수 있다.
또, λ3-아이오단으로서 (디아세톡시요오드)벤젠 (PIDA) 을 사용하는 경우, 보다 고수율로 탈보호체를 얻기 위해, 트리플루오로아세트산 (TFA) 을 첨가하는 것이 바람직하다.
본 공정에 있어서는, 플루오러스 알코올 및 물의 공존하에 있어서, 식 II-4 로 나타내는 화합물 중의 4-메톡시페닐 (X 기) 에 대해, λ3-아이오단이 산화제로서 작용함으로써, 식 II-4 로 나타내는 화합물로부터 OX 기가 탈리되고, 그 후, 여기에 물 (H2O) 이 부가되어, 결과적으로, 식 II-4 로 나타내는 화합물로부터 4-메톡시페녹시기 (OX 기) 가 탈리되기 쉬워짐으로써 달성되고 있는 것으로 생각된다. 이와 같은 λ3-아이오단의 작용은, 일반적으로, 플루오러스 알코올 및 수중에 식 II-4 로 나타내는 화합물 및 λ3-아이오단을 함유하는 용액을 교반, 환류 등 함으로써 달성된다. 따라서, 본 공정은 간편하게 실시할 수 있고, 스케일 업도 비교적 용이하게 할 수 있다. 생성물인 식 II-5 로 나타내는 화합물은, 당해 생성물의 결정화나 크로마토그래피 등의 당업자에게 이미 알려진 임의의 정제 방법으로 정제 또는 단리할 수 있다.
식 II-4 로 나타내는 화합물에 λ3-아이오단을 반응시킬 때의 온도는, 약-20 ℃ 내지 플루오러스 알코올의 비점 (예를 들어, 헥사플루오로2-프로판올 (HFIP) 에서는 약 58 ℃, 2,2,2-트리플루오로에탄올 (TFE) 에서는 약 78 ℃) 이하가 바람직하며, 예를 들어, 약 -20 ∼ 60 ℃, 약 0 ℃ ∼ 60 ℃, 또는 약 10 ℃ ∼ 30 ℃ 일 수 있다. 또, 실온 (15 ∼ 30 ℃) 에서도 탈메톡시페닐화 반응이 진행되기 때문에, 냉각 또는 가열을 실시할 필요가 없는 점도 유리하다.
또, 반응 시간은, 생성물을 고수율로 얻기 위해서 적절히 설정할 수 있다.
＜소공정 3-5＞
소공정 3-5 는, 식 II-5 로 나타내는 화합물을, 이하의 식 :
[화학식 185]
Figure pct00186
으로 나타내는 2,2,2-트리플루오로-N-페닐아세트이미도일클로라이드 (TFPC) 와 반응시킴으로써, 이하의 식 II-6 :
[화학식 186]
Figure pct00187
으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 34 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 본 공정은, 식 II-5 로 나타내는 화합물을, N-메틸이미다졸의 존재하에 TFPC 와 반응시킴으로써, 식 II-6 으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 예를 들어, 어느 특정 조건하에 있어서, 본 공정에 있어서의 염기로서 탄산칼륨을 사용한 경우, 수율은 36 ％ 정도가 되지만, N-메틸이미다졸을 사용한 경우, 수율은 76 ％ 정도로 대폭 향상된다. TFPC 는 고가의 시약이기 때문에, 당해 공정의 수율이 향상되는 것은, 상업 생산상 매우 유익하다.
본 공정에 있어서의 용매로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 디클로로메탄, 톨루엔, 아세트산에틸, 아세토니트릴, 또는 테트라하이드로푸란을 들 수 있고, 바람직하게는 디클로로메탄을 들 수 있다.
본 공정의 반응 온도는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 -20 ∼ 40 ℃, 보다 바람직하게는 -10 ∼ 35 ℃, 특히 바람직하게는 0 ∼ 30 ℃ 를 들 수 있다.
본 공정은, 바람직하게는 탈수제의 존재하에서 실시된다. 본 공정에 있어서의 탈수제로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 몰레큘러시브를 들 수 있고, 바람직하게는 분말 입경 10 ㎛ 이하의 몰레큘러시브 4A 분말을 들 수 있다.
본 공정에 있어서, 생성된 식 II-6 으로 나타내는 화합물은, 용매 중에 녹아 있는 것을 다음 공정에 그대로 사용해도 되고, 또는, 칼럼이나 재결정화에 의해 단리·정제할 수도 있다. 칼럼을 사용한 단리·정제로는, 예를 들어, 고정상으로서 실리카 겔, 이동상으로서 디클로로메탄 또는 톨루엔-아세트산에틸 혼합 용매계를 사용한 단리·정제를 들 수 있다. 한편, 재결정화에 의한 단리·정제는, 예를 들어, 디이소프로필에테르, 헵탄의 혼합 용매계로부터의 결정화를 들 수 있다. 또한, 재결정화는, 바람직하게는 식 II-6 으로 나타내는 화합물의 종정을 사용하여 실시할 수 있다. 종정을 사용하는 경우, 예를 들어, 디이소프로필에테르 용액에 종정을 접종하고, 결정의 석출을 확인 후, 헵탄을 적하하는 조작에 의해 취득할 수 있다.
＜소공정 3-6＞
소공정 3-6 은, 식 V-3 으로 나타내는 화합물과 식 II-6 으로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써, 이하의 식 VI-1 :
[화학식 187]
Figure pct00188
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 35 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 공정은, 바람직하게는 루이스산의 존재하에서 실시할 수 있다. 본 공정에 있어서의 루이스산으로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 트리플루오로메탄술폰산트리메틸실릴, 트리플루오로메탄술폰산트리이소프로필실릴, 트리플루오로메탄술폰산tert-부틸디메틸실릴, 또는 삼불화붕소디에틸에테르 착물을 들 수 있고, 바람직하게는 트리플루오로메탄술폰산트리메틸실릴, 트리플루오로메탄술폰산트리이소프로필실릴, 트리플루오로메탄술폰산tert-부틸디메틸실릴을 들 수 있다.
본 공정에 있어서의 용매로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 디클로로메탄, 톨루엔, 트리플루오로메틸벤젠, 또는 클로로벤젠을 들 수 있고, 바람직하게는 디클로로메탄을 들 수 있다.
본 공정의 반응 온도는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, -78 ℃ ∼ 0 ℃, 바람직하게는 -78 ∼ -20 ℃, 보다 바람직하게는 -78 ∼ -30 ℃, 특히 바람직하게는 -78 ∼ -40 ℃ 를 들 수 있다.
본 공정에 있어서는, 1 당량의 식 V-3 으로 나타내는 화합물에 대해, 2 ∼ 5 당량의 식 II-6 으로 나타내는 화합물을 투입하는 것이 바람직하고, 1 당량의 식 V-3 으로 나타내는 화합물에 대해, 3 ∼ 5 당량의 식 II-6 으로 나타내는 화합물을 투입하는 것이 보다 바람직하다.
＜소공정 3-7＞
소공정 3-7 은, 식 VI-1 로 나타내는 화합물로부터 아세틸기 및 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐기를 탈리시킴으로써, 이하의 식 VI-2 :
[화학식 188]
Figure pct00189
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 36 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 3-8＞
소공정 3-8 은, 식 VI-2 로 나타내는 화합물에 있어서의 아미노기를 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐기로 보호함으로써, 이하의 식 VI-3 :
[화학식 189]
Figure pct00190
으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 36 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 3-9＞
소공정 3-9 는, 이하의 식 II-1 :
[화학식 190]
Figure pct00191
로 나타내는 화합물 상의 수산기를 아세틸기로 보호함으로써, 이하의 식 II-7 :
[화학식 191]
Figure pct00192
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 37 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 3-10＞
소공정 3-10 은, 식 II-7 로 나타내는 화합물로부터 4-메톡시페닐기를 탈리시킴으로써, 이하의 식 II-8 :
[화학식 192]
Figure pct00193
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 38 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 본 공정은, 플루오러스 알코올 및 수중에서, 식 II-7 로 나타내는 화합물에 λ3-아이오단을 반응시킴으로써, 식 II-8 로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정의 상세에 대해서는, 본 명세서 중의 소공정 3-4 에 관한 기재에 있어서, 「식 II-4 로 나타내는 화합물」 및 「식 II-5 로 나타내는 화합물」을, 각각 「식 II-7 로 나타내는 화합물」 및 「식 II-8 로 나타내는 화합물」로 바꿔 읽은 후, 준용한다.
＜소공정 3-11＞
소공정 3-11 은, 식 II-8 로 나타내는 화합물을, 이하의 식 :
[화학식 193]
Figure pct00194
으로 나타내는 2,2,2-트리플루오로-N-페닐아세트이미도일클로라이드 (TFPC) 와 반응시킴으로써, 이하의 식 II-9 :
[화학식 194]
Figure pct00195
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 39 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 본 공정은, 식 II-8 로 나타내는 화합물을, N-메틸이미다졸의 존재하에 TFPC 와 반응시킴으로써, 식 II-9 로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 염기로서 N-메틸이미다졸을 사용함으로써, TFPC 의 당량을 삭감하는 것이 가능해져, 그 경우에 있어서도 고수율로 목적물을 얻을 수 있다. TFPC 는 고가의 시약이기 때문에, 당해 공정의 수율이 향상되는 것은, 상업 생산상 매우 유익하다.
본 공정에 있어서의 용매로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 디클로로메탄, 톨루엔, 아세트산에틸, 아세토니트릴, 또는 테트라하이드로푸란을 들 수 있고, 바람직하게는 디클로로메탄을 들 수 있다.
본 공정의 반응 온도는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 -20 ∼ 40 ℃, 보다 바람직하게는 -10 ∼ 35 ℃, 특히 바람직하게는 0 ∼ 30 ℃ 를 들 수 있다.
본 공정은, 바람직하게는 탈수제의 존재하에서 실시된다. 본 공정에 있어서의 탈수제로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 몰레큘러시브를 들 수 있고, 바람직하게는 분말 입경 10 ㎛ 이하의 몰레큘러시브 4A 분말을 들 수 있다.
＜소공정 3-12＞
소공정 3-12 는, 식 V-5 로 나타내는 화합물과 식 II-9 로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써, 이하의 식 VI-4 :
[화학식 195]
Figure pct00196
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 40 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 공정은, 바람직하게는 루이스산의 존재하에서 실시할 수 있다. 본 공정에 있어서의 루이스산으로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 트리플루오로메탄술폰산트리메틸실릴, 트리플루오로메탄술폰산트리이소프로필실릴, 트리플루오로메탄술폰산tert-부틸디메틸실릴, 또는 삼불화붕소디에틸에테르 착물을 들 수 있고, 바람직하게는 트리플루오로메탄술폰산트리메틸실릴, 트리플루오로메탄술폰산트리이소프로필실릴, 트리플루오로메탄술폰산tert-부틸디메틸실릴을 들 수 있다.
본 공정에 있어서의 용매로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 디클로로메탄, 톨루엔, 트리플루오로메틸벤젠, 또는 클로로벤젠을 들 수 있고, 바람직하게는 디클로로메탄을 들 수 있다.
본 공정의 반응 온도는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, -78 ℃ ∼ 0 ℃, 바람직하게는 -78 ∼ -20 ℃, 보다 바람직하게는 -78 ∼ -30 ℃, 특히 바람직하게는 -78 ∼ -40 ℃ 를 들 수 있다.
본 공정에 있어서는, 1 당량의 식 V-5 로 나타내는 화합물에 대해, 2 ∼ 5 당량의 식 II-9 로 나타내는 화합물을 투입하는 것이 바람직하고, 1 당량의 식 V-5 로 나타내는 화합물에 대해, 3 ∼ 5 당량의 식 II-9 로 나타내는 화합물을 투입하는 것이 보다 바람직하다.
＜소공정 3-13＞
소공정 3-13 은, 식 VI-4 로 나타내는 화합물로부터 아세틸기를 탈리시킴으로써, 이하의 식 VI-5 :
[화학식 196]
Figure pct00197
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 41 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 소공정 3-13 은, 식 VI-4 로 나타내는 화합물을, 트리플루오로아세트산메틸의 존재하에 알콕시드계의 강염기와 반응시킴으로써, 식 VI-5 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정이다. 일반적으로 아세틸기의 탈보호는, 메탄올 중 나트륨메톡시드를 사용하여 실시하는 것이 알려져 있지만, 그 경우, 프탈이미드기의 개환이라는 원하지 않은 부반응도 동시에 발생할 수 있다. 한편, 트리플루오로아세트산메틸의 존재하에 알콕시드계의 강염기와 반응시킨다는 수법을 사용함으로써, 프탈이미드기의 개환을 억제하면서, 아세틸기의 탈리를 실시하는 것이 가능해진다.
당해 알콕시드계의 강염기로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, C1∼C5 알콕시드의 나트륨염, 리튬염, 칼륨염 또는 이들의 조합을 들 수 있고, 바람직하게는 리튬메톡시드, 나트륨메톡시드, 칼륨메톡시드, 리튬에톡시드, 나트륨에톡시드, 칼륨에톡시드, 리튬이소프로폭시드, 나트륨이소프로폭시드, 칼륨이소프로폭시드, 리튬tert-부톡시드, 나트륨tert-부톡시드, 칼륨tert-부톡시드, 리튬tert-펜톡시드, 나트륨tert-펜톡시드, 또는 칼륨tert-펜톡시드를 들 수 있으며, 특히 바람직하게는 나트륨메톡시드, 리튬tert-부톡시드 또는 칼륨tert-부톡시드를 들 수 있다.
본 공정에 있어서의 용매로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등의 알코올계 용매, 그리고 테트라하이드로푸란, 아세토니트릴, 시클로펜틸메틸에테르, 톨루엔, 디메틸아세트아미드 등과 알코올 용매와의 혼합 용매계를 들 수 있고, 바람직하게는 메탄올, 또는 메탄올과 테트라하이드로푸란의 혼합 용매계를 들 수 있다.
본 공정의 반응 온도는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, -20 ℃ ∼ 80 ℃, 바람직하게는 0 ℃ ∼ 70 ℃, 보다 바람직하게는 15 ℃ ∼ 65 ℃, 특히 바람직하게는 30 ℃ ∼ 60 ℃ 를 들 수 있다.
＜소공정 3-14＞
소공정 3-14 는, 식 VI-5 로 나타내는 화합물로부터 프탈로일기를 탈리시킴으로써, 이하의 식 VI-2 :
[화학식 197]
Figure pct00198
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 42 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 3-15＞
소공정 3-15 는, 식 VI-2 로 나타내는 화합물에 있어서의 아미노기를 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐기로 보호함으로써, 이하의 식 VI-3 :
[화학식 198]
Figure pct00199
으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 43 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 3-16＞
소공정 3-16 은, 식 VI-2 로 나타내는 화합물에 있어서의 아미노기를 아세틸기로 보호함으로써, 이하의 식 VI-6 :
[화학식 199]
Figure pct00200
으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 44 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜공정 4＞
공정 4 는, 이하의 식 IX-5 :
[화학식 200]
Figure pct00201
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 당해 공정 4 는, 2 분자의 단당을 α-2,6-글리코시드 결합시켜 이당 블록을 합성하는, 후술하는 소공정 4-7 을 필수의 소공정으로서 포함하는 것이지만, 그것 이외에 대해서는, 단당 또는 올리고당 제조에 있어서의 통상적인 방법을 사용하거나, 또는 이와 같은 통상적인 방법을 응용함으로써 실시할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 공정 4 는, 이하에 나타내는 소공정을 포함한다.
[화학식 201]
Figure pct00202
＜소공정 4-1＞
소공정 4-1 은, 이하의 식 VII-1 :
[화학식 202]
Figure pct00203
로 나타내는 화합물 상의 수산기를 벤조일기로 보호함으로써, 이하의 식 VII-2 :
[화학식 203]
Figure pct00204
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정의 출발 물질인 식 VII-1 로 나타내는 화합물은, CAS 번호 100759-10-2 로서 특정되는 화합물이고, 이미 알려진 방법에 의해 제조할 수 있다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 45 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 4-2＞
소공정 4-2 는, 식 VII-2 로 나타내는 화합물로부터 벤질리덴 보호기를 탈리시킴으로써, 이하의 식 VII-3 :
[화학식 204]
Figure pct00205
으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 46 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 본 공정은, 생성한 식 VII-3 으로 나타내는 화합물이 용해되어 있는 용매를 실리카 겔과 접촉시킴으로써, 식 VII-3 으로 나타내는 화합물을 고상 추출하는 공정을 포함한다. 미반응의 식 VII-2 로 나타내는 화합물이나 탈리시킨 벤즈알데히드는 실리카 겔에 흡착되지 않는 점에서, 당해 공정에 의해, 식 VII-3 으로 나타내는 화합물을 효율적으로 정제할 수 있다.
식 VII-3 으로 나타내는 화합물을 용해시키기 위한 용매로는, 예를 들어, 톨루엔, 헵탄, 디클로로메탄, 클로로포름, 또는 이들의 조합을 들 수 있고, 바람직하게는 톨루엔, 디클로로메탄, 클로로포름, 또는 이들의 조합을 들 수 있고, 특히 바람직하게는 톨루엔을 들 수 있지만, 이들로 한정되지 않는다.
본 공정에 있어서의 실리카 겔로는, 예를 들어, 원료에 대해 2 ∼ 5 배량의 실리카 겔을 들 수 있고, 바람직하게는 원료에 대해 2 ∼ 4 배량의 실리카 겔을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 원료에 대해 약 3 배량의 실리카 겔을 들 수 있다.
본 공정에 있어서, 실리카 겔에 흡착된 식 VII-3 으로 나타내는 화합물을 용리시키기 위한 용매로는, 실리카 겔을 용해하지 않고, 목적물을 용출할 수 있는 용매이면 특별히 제한되지 않지만, 예를 들어, 시클로펜틸메틸에테르, 아세트산에틸, 또는 tert-부틸메틸에테르를 들 수 있다.
＜소공정 4-3＞
소공정 4-3 은, 이하의 식 VIII-1 :
[화학식 205]
Figure pct00206
로 나타내는 화합물의 카르복실산을 에스테르화하고, 이어서 물을 부어 첨가함으로써, 이하의 식 VIII-2 :
[화학식 206]
Figure pct00207
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정의 출발 물질인 식 VIII-1 로 나타내는 화합물은, 이미 알려진 방법에 의해 제조할 수 있거나, 또는, 시판품을 사용할 수 있다. 식 VIII-1 로 나타내는 화합물의 시판품으로는, 예를 들어, 도쿄 화성 공업 제조의 N-아세틸뉴라민산을 들 수 있다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 47 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 4-4＞
소공정 4-4 는, 식 VIII-2 로 나타내는 화합물에 있어서, 1 위치의 탄소에 결합되어 있는 수산기 이외의 수산기를 선택적으로 아세틸기로 보호함으로써, 이하의 식 VIII-3 :
[화학식 207]
Figure pct00208
으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 48 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 4-5＞
소공정 4-5 는, 식 VIII-3 으로 나타내는 화합물을 2,2,2-트리플루오로-N-페닐아세트이미도일클로라이드 (TFPC) 와 반응시킴으로써, 이하의 식 VIII-4 :
[화학식 208]
Figure pct00209
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 49 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 본 공정은, 식 VIII-3 으로 나타내는 화합물을, N-메틸이미다졸의 존재하에 TFPC 와 반응시킴으로써, 식 VIII-4 로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정에 있어서의 염기로서 탄산칼륨을 사용한 경우와 비교하여, N-메틸이미다졸을 사용한 경우, TFPC 의 당량을 삭감하는 것이 가능해져, 그 경우에 있어서도 고수율로 목적물을 얻을 수 있다. TFPC 는 고가의 시약이기 때문에, 당해 공정의 수율이 향상되는 것은, 상업 생산상 매우 유익하다.
본 공정에 있어서의 용매로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 디클로로메탄, 톨루엔, 아세트산에틸, 아세토니트릴, 또는 테트라하이드로푸란을 들 수 있고, 바람직하게는 디클로로메탄을 들 수 있다.
본 공정의 반응 온도는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 20 ∼ 40 ℃, 보다 바람직하게는 10 ∼ 35 ℃, 특히 바람직하게는 0 ∼ 30 ℃ 를 들 수 있다.
본 공정은, 바람직하게는 탈수제의 존재하에서 실시된다. 본 공정에 있어서의 탈수제로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 몰레큘러시브를 들 수 있고, 바람직하게는 분말 입경 10 ㎛ 이하의 몰레큘러시브 4A 분말을 들 수 있다.
＜소공정 4-6＞
소공정 4-6 은, 식 VIII-4 로 나타내는 화합물의 아세트아미드기 중의 질소 원자를 tert-부톡시카르보닐기로 보호함으로써, 이하의 식 VIII-5 :
[화학식 209]
Figure pct00210
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 50 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 공정에 있어서, 생성된 식 VIII-5 로 나타내는 화합물은, 용매 중에 녹아 있는 것을 다음 공정에 그대로 사용해도 되고, 또는, 재결정화에 의해 단리·정제할 수도 있다. 식 VIII-5 로 나타내는 화합물은, 결정화에 의해 단리·정제할 수 있는 점이 큰 이점으로, 결정화에 의해 HPLC 순도로 99 ％ 이상의 식 VIII-5 로 나타내는 화합물을 취득할 수 있고, 불순물을 포함하지 않기 때문에, 다음 공정의 글리코실화 반응을 안정적으로 실시하는 것이 가능해진다. 재결정화에 의한 단리·정제는, 예를 들어, 시클로펜틸메틸에테르의 용액에 헵탄을 첨가하여 결정화하는 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 4-7＞
소공정 4-7 은, 식 VIII-5 로 나타내는 화합물과 식 VII-3 으로 나타내는 화합물을 α-2,6-글리코시드 결합시킴으로써, 이하의 식 IX-1 :
[화학식 210]
Figure pct00211
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. N-아세틸뉴라민산 유도체와 갈락토오스 유도체를 α-2,6-글리코시드 결합 선택적으로 결합시키는 것은 곤란하며, 예를 들어, 식 VIII-4 로 나타내는 화합물과 식 VII-3 으로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써 이당을 합성하는 방법이 보고되어 있지만 (J. Org. Chem., 2016, 81, 10600-10616), 반응의 재현이 용이하지 않고, 소기의 수율, 선택성을 얻을 수 없었다. 또, 이 반응에서는, 스케일이 커질수록 선택성이 저하되어, 반응 온도 허용폭도 좁고, 반응열의 영향이 크다는 과제도 있었다. 당해 반응의 원료 화합물의 하나인 식 VIII-4 로 나타내는 화합물은 매우 고가인 점에서, 이 반응에 있어서의 낮은 재현성, 수율, 선택성은, 특히 스케일 업이 요청되는 상업 생산상에서는 큰 문제였다. 한편, 원료 화합물로서 식 VIII-4 로 나타내는 화합물 대신에, tert-부톡시카르보닐기를 부가한 식 VIII-5 로 나타내는 화합물을 사용하면, 재현성이 좋고, α-2,6-글리코시드 결합에 대한 높은 선택성 (α : β = 93 : 7) 을 달성할 수 있으며, 수율도 향상된다. 뿐만 아니라, 온도 허용폭도 넓어지고, 또한, 스케일 업했을 때에도 높은 재현성, 수율, 선택성을 달성할 수 있다. 이것은, 상업 생산상 매우 유익한 효과를 가져오는 것이다.
본 공정은, 바람직하게는 루이스산의 존재하에서 실시할 수 있다. 본 공정에 있어서의 루이스산으로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 트리플루오로메탄술폰산트리메틸실릴, 트리플루오로메탄술폰산트리이소프로필실릴, 트리플루오로메탄술폰산tert-부틸디메틸실릴을 들 수 있고, 바람직하게는 트리플루오로메탄술폰산트리메틸실릴을 들 수 있다.
본 공정에 있어서의 용매로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 디이소프로필에테르, tert-부틸메틸에테르, 디에틸에테르, 디부틸에테르, 디프로필에테르, 1,4-디옥산, 디클로로메탄, 1,2-디클로로에탄, 톨루엔, 클로르벤젠, 트리플루오로메틸벤젠, 프로피오니트릴 또는 아세토니트릴을 들 수 있고, 바람직하게는 시클로펜틸메틸에테르를 들 수 있다.
본 공정의 반응 온도는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, -78 ℃ ∼ 0 ℃, 바람직하게는 -78 ∼ -20 ℃, 보다 바람직하게는 -78 ∼ -30 ℃, 특히 바람직하게는 -78 ∼ -40 ℃ 를 들 수 있다.
본 공정에 있어서는, 1 당량의 식 VIII-5 로 나타내는 화합물에 대해, 1 ∼ 3 당량의 식 VII-3 으로 나타내는 화합물을 투입하는 것이 바람직하고, 1 당량의 식 VIII-5 로 나타내는 화합물에 대해, 1.4 ∼ 2 당량의 식 VII-3 으로 나타내는 화합물을 투입하는 것이 보다 바람직하다.
본 공정은 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 식 VIII-5 로 나타내는 화합물과 식 VII-3 으로 나타내는 화합물의 혼합 용액 (바람직하게는 시클로펜틸메틸에테르 혼합 용액) 을, 루이스산을 함유하는 용액 (바람직하게는 시클로펜틸메틸에테르 용액) 에 장시간 적하하거나, 또는, 식 VIII-5 로 나타내는 화합물의 용액 (바람직하게는 시클로펜틸메틸에테르 용액) 을, 루이스산과 식 VII-3 으로 나타내는 화합물을 함유하는 용액 (바람직하게는 시클로펜틸메틸에테르 용액) 에 장시간 적하함으로써 실시할 수 있고, 바람직하게는 식 VIII-5 로 나타내는 화합물의 용액 (바람직하게는 시클로펜틸메틸에테르 용액) 을, 루이스산과 식 VII-3 으로 나타내는 화합물을 함유하는 용액 (바람직하게는 시클로펜틸메틸에테르 용액) 에 장시간 적하함으로써 실시할 수 있다. 적하 시간은 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 30 분 ∼ 5 시간, 바람직하게는 1 ∼ 4 시간, 보다 바람직하게는 2 ∼ 3.5 시간, 특히 바람직하게는 약 3 시간이다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 본 공정은, 식 IX-1 로 나타내는 화합물이 용해되어 있는 용매를 실리카 겔과 접촉시킴으로써, 식 IX-1 로 나타내는 화합물을 고상 추출하는 공정을 포함한다. 글리코실화 반응에서 부생되는 N-페닐트리플루오로아세트아미드나, 톨루엔 용매 중 실리카 겔에 흡착되지 않는 그 밖의 미량 불순물은, 실리카 겔에 흡착되지 않는 점에서, 당해 공정에 의해, 식 IX-1 로 나타내는 화합물을 효율적으로 정제할 수 있다.
식 IX-1 로 나타내는 화합물을 용해시키기 위한 용매로는, 예를 들어, 톨루엔, 헵탄, 디클로로메탄, 클로로포름, 또는 이들의 조합을 들 수 있고, 바람직하게는 톨루엔, 디클로로메탄, 클로로포름, 또는 이들의 조합을 들 수 있고, 특히 바람직하게는 톨루엔을 들 수 있지만, 이들로 한정되지 않는다.
본 공정에 있어서의 실리카 겔로는, 예를 들어, 원료에 대해, 2 ∼ 5 배량의 실리카 겔을 들 수 있고, 바람직하게는 원료에 대해, 2 ∼ 4 배량의 실리카 겔을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 원료에 대해, 약 3.5 배량의 실리카 겔을 들 수 있다.
본 공정에 있어서, 실리카 겔에 흡착된 식 IX-1 로 나타내는 화합물을 용리시키기 위한 용매로는, 실리카 겔을 용해하지 않고, 목적물을 용출할 수 있는 용매이면 특별히 제한되지 않지만, 예를 들어, 아세트산에틸, 시클로펜틸메틸에테르, 또는 tert-부틸메틸에테르를 들 수 있고, 바람직하게는 아세트산에틸을 들 수 있다.
본 공정은, 예를 들어, 실시예 51 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 4-8＞
소공정 4-8 은, 식 IX-1 로 나타내는 화합물로부터 tert-부톡시카르보닐기를 탈리시킴으로써, 이하의 식 IX-2 :
[화학식 211]
Figure pct00212
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 52 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 4-9＞
소공정 4-9 는, 식 IX-2 로 나타내는 화합물의 수산기, 그리고 아세트아미드기 중의 질소 원자를 아세틸기로 또 다시 보호함으로써, 이하의 식 IX-3 :
[화학식 212]
Figure pct00213
으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 53 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 본 공정은, 식 IX-3 으로 나타내는 화합물이 용해되어 있는 용매를 실리카 겔과 접촉시킴으로써, 식 IX-3 으로 나타내는 화합물을 고상 추출하는 공정을 포함한다. 상류의 글리코실화 반응에서 과잉으로 사용한 식 VII-3 으로 나타내는 화합물이 아세틸화되어 생성한 식 VII-3 으로 나타내는 화합물의 디아세틸체 등의 부생성물은, 실리카 겔에 흡착되지 않는 점에서, 당해 공정에 의해, 식 IX-3 으로 나타내는 화합물을 효율적으로 정제할 수 있다.
식 IX-3 으로 나타내는 화합물을 용해시키기 위한 용매로는, 예를 들어, 톨루엔, 헵탄, 디클로로메탄, 클로로포름, 또는 이들의 조합을 들 수 있고, 바람직하게는 톨루엔, 디클로로메탄, 클로로포름, 또는 이들의 조합을 들 수 있고, 특히 바람직하게는 톨루엔을 들 수 있지만, 이들로 한정되지 않는다.
본 공정에 있어서의 실리카 겔로는, 예를 들어, 원료에 대해 2 ∼ 5 배량의 실리카 겔을 들 수 있고, 바람직하게는 원료에 대해 2 ∼ 4 배량의 실리카 겔을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 원료에 대해 약 3.5 배량의 실리카 겔을 들 수 있다.
본 공정에 있어서, 실리카 겔에 흡착된 식 IX-3 으로 나타내는 화합물을 용리하기 위한 용매로는, 실리카 겔을 용해하지 않고, 목적물을 용출할 수 있는 용매이면 특별히 제한되지 않지만, 예를 들어, 아세트산에틸, 시클로펜틸메틸에테르, 또는 tert-부틸메틸에테르를 들 수 있고, 바람직하게는 아세트산에틸을 들 수 있다.
＜소공정 4-10＞
소공정 4-10 은, 식 IX-3 으로 나타내는 화합물에 있어서, D-갈락토피라노시드의 1 위치의 탄소에 결합되어 있는 알릴기를 탈리시킴으로써, 이하의 식 IX-4 :
[화학식 213]
Figure pct00214
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 54-1 및/또는 실시예 54-2 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 4-11＞
소공정 4-11 은, 식 IX-4 로 나타내는 화합물을 2,2,2-트리플루오로-N-페닐아세트이미도일클로라이드 (TFPC) 와 반응시킴으로써, 이하의 식 IX-5 :
[화학식 214]
Figure pct00215
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 55 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜공정 5＞
공정 5 는, 이하의 식 XI :
[화학식 215]
Figure pct00216
로 나타내는 올리고당을 제조하는 공정이다. 당해 공정 5 는, 1 분자의 6 당에 2 분자의 단당을 결합시키는, 후술하는 소공정 5-1 또는 5-9 를 필수의 소공정으로서 포함하는 것이지만, 그것 이외에 대해서는, 단당 또는 올리고당 제조에 있어서의 통상적인 방법을 사용하거나, 또는 이와 같은 통상적인 방법을 응용함으로써 실시할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 공정 5 는, 이하에 나타내는 소공정을 포함한다.
[화학식 216]
Figure pct00217
[화학식 217]
Figure pct00218
＜소공정 5-1＞
소공정 5-1 은, 식 VI-3 으로 나타내는 화합물과 식 IX-5 로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써, 이하의 식 X-1 :
[화학식 218]
Figure pct00219
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 56 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 공정은, 바람직하게는 루이스산의 존재하에서 실시할 수 있다. 본 공정에 있어서의 루이스산으로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 트리플루오로메탄술폰산트리메틸실릴, 트리플루오로메탄술폰산트리이소프로필실릴, 트리플루오로메탄술폰산tert-부틸디메틸실릴을 들 수 있고, 바람직하게는 트리플루오로메탄술폰산tert-부틸디메틸실릴을 들 수 있다.
본 공정에 있어서의 용매로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 디클로로메탄, 톨루엔, 트리플루오로메틸벤젠, 또는 클로로벤젠을 들 수 있다.
본 공정의 반응 온도는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, -40 ℃ ∼ 20 ℃, 바람직하게는 -30 ∼ 10 ℃, 보다 바람직하게는 -20 ∼ 5 ℃, 특히 바람직하게는 -10 ∼ 0 ℃ 를 들 수 있다.
본 공정에 있어서는, 1 당량의 식 VI-3 으로 나타내는 화합물에 대해, 2 ∼ 5 당량의 식 IX-5 로 나타내는 화합물을 투입하는 것이 바람직하고, 1 당량의 식 VI-3 으로 나타내는 화합물에 대해, 3 ∼ 4 당량의 식 IX-5 로 나타내는 화합물을 투입하는 것이 보다 바람직하다.
＜소공정 5-2＞
소공정 5-2 는, 식 X-1 로 나타내는 화합물로부터 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐기를 탈리시킴으로써, 이하의 식 X-2 :
[화학식 219]
Figure pct00220
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 57 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 5-3＞
소공정 5-3 은, 식 X-2 로 나타내는 화합물에 있어서의 아미노기를 아세틸기로 보호함으로써, 이하의 식 X-3 :
[화학식 220]
Figure pct00221
으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 58 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 5-4＞
소공정 5-4 는, 식 X-3 으로 나타내는 화합물에 있어서, D-갈락토-논-2-우로피라노시드 상의 디아세틸아미노기로부터 아세틸기를 1 개만 탈리시킴으로써, 이하의 식 X-4 :
[화학식 221]
Figure pct00222
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 59 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 5-5＞
소공정 5-5 는, 식 X-4 로 나타내는 화합물로부터 벤질기를 탈리시킴으로써, 이하의 식 X-5 :
[화학식 222]
Figure pct00223
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 60 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 5-6＞
소공정 5-6 은, 식 X-5 로 나타내는 화합물에 있어서, 수산기를 아세틸기로 보호함으로써, 이하의 식 X-6 :
[화학식 223]
Figure pct00224
으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 61 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 5-7＞
소공정 5-7 은, 식 X-6 으로 나타내는 화합물로부터 4-메톡시페닐기를 탈리시킴으로써, 이하의 식 X-7 :
[화학식 224]
Figure pct00225
로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 62 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
＜소공정 5-8＞
소공정 5-8 은, 식 X-7 로 나타내는 화합물에 있어서, 수산기를 보호하고 있는 아세틸기 및 벤조일기를 탈리시키고, 또한, 카르복실산을 보호하고 있는 메틸기를 탈리시킴으로써, 이하의 식 XI :
[화학식 225]
Figure pct00226
로 나타내는 올리고당을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 63 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 공정 5 는, 소공정 5-1 ∼ 5-3 대신에 이하에 나타내는 소공정 5-9 를 포함한다.
[화학식 226]
Figure pct00227
＜소공정 5-9＞
소공정 5-9 는, 식 VI-6 으로 나타내는 화합물과 식 IX-5 로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써, 식 X-3 으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이다. 본 공정은 이미 알려진 방법을 이용 또는 응용함으로써 실시할 수 있지만, 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 64 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 공정은, 바람직하게는 루이스산의 존재하에서 실시할 수 있다. 본 공정에 있어서의 루이스산으로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 트리플루오로메탄술폰산트리메틸실릴, 트리플루오로메탄술폰산트리이소프로필실릴, 트리플루오로메탄술폰산tert-부틸디메틸실릴을 들 수 있고, 바람직하게는 트리플루오로메탄술폰산tert-부틸디메틸실릴을 들 수 있다.
본 공정에 있어서의 용매로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 디클로로메탄, 톨루엔, 트리플루오로메틸벤젠, 또는 클로로벤젠을 들 수 있다.
본 공정의 반응 온도는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, -40 ℃ ∼ 20 ℃, 바람직하게는 -30 ∼ 10 ℃, 보다 바람직하게는 -20 ∼ 5 ℃, 특히 바람직하게는 -10 ∼ 0 ℃ 를 들 수 있다.
본 공정에 있어서는, 1 당량의 식 VI-6 으로 나타내는 화합물에 대해, 2 ∼ 5 당량의 식 IX-5 로 나타내는 화합물을 투입하는 것이 바람직하고, 1 당량의 식 VI-6 으로 나타내는 화합물에 대해, 3 ∼ 4 당량의 식 IX-5 로 나타내는 화합물을 투입하는 것이 보다 바람직하다.
또한, 공정 1 ∼ 공정 5 나, 거기에 포함되는 각 소공정은, 반드시 본 명세서에 기재한 대로의 순서로 실시할 필요는 없다. 예를 들어, 공정 2 에 있어서의 소공정 2-1 및 2-2 를, 공정 1 에 앞서 실시해도 된다. 특히, 공정 4 는, 공정 1 ∼ 3 중 어느 것에 앞서 실시해도 된다.
＜2. 단당 또는 올리고당의 신규 제조 방법＞
본 발명의 일 양태에 있어서, 비환원 말단에 α2,6-시알산 구조를 갖는 2 분기형 N-글리칸의 신규 순화학적 제조 방법에 있어서 유용한, 단당 또는 올리고당의 신규 제조 방법이 제공된다. 본 발명에 있어서, 「올리고당」이란, 2 개 이상의 단당이 글리코시드 결합에 의해 결합된 당류의 올리고머를 의미한다. 또, 본 발명에 있어서, 「단당」 및 「올리고당」은, 각각 특정한 위치에 보호기, 활성화기 등이 도입된 것이어도 된다.
이하에 기재하는 제조 방법은, 상기＜1＞ 에 있어서 상세히 서술한 식 XI 로 나타내는 올리고당의 제조 방법에 있어서 유용하지만, 이 용도에 한정되지 않고, 모든 용도에 적용할 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 있어서의 단당 또는 올리고당의 신규 제조 방법은, 상기에 있어서 상세히 서술한 식 XI 로 나타내는 올리고당의 제조 방법과는 상이한 방법으로, 식 XI 로 나타내는 올리고당을 제조할 때에 이용할 수 있다. 또, 본 발명에 있어서의 단당 또는 올리고당의 신규 제조 방법은, 당해 단당 또는 올리고당 그 자체의 제조 방법으로서 이용할 수 있으며, 또는, 식 XI 로 나타내는 올리고당 이외의 당의 제조에 있어서도 이용할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 이하의 식 III-2 :
[화학식 227]
Figure pct00228
로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 이하의 식 III-1 :
[화학식 228]
Figure pct00229
로 나타내는 화합물을, 트리플루오로아세트산메틸의 존재하에, 알콕시드계의 강염기와 반응시킴으로써, 식 III-2 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는 방법이 제공된다.
당해 아세틸기의 탈리 반응을, 메탄올 중 나트륨메톡시드를 사용하여 실시하는 것이 보고되어 있지만 (Org. Biomol. Chem., 2018, 16, 4720-4727), 그 경우, 프탈이미드기의 개환이라는 원하지 않은 부반응도 동시에 발생할 수 있다. 한편, 트리플루오로아세트산메틸의 존재하에, 알콕시드계의 강염기와 반응시킨다는 수법을 사용함으로써, 프탈이미드기의 개환을 억제하면서, 아세틸기의 탈리를 실시하는 것이 가능해진다.
당해 알콕시드계의 강염기로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, C1∼C5 알콕시드의 나트륨염, 리튬염, 칼륨염 또는 이들의 조합을 들 수 있고, 바람직하게는 리튬메톡시드, 나트륨메톡시드, 칼륨메톡시드, 리튬에톡시드, 나트륨에톡시드, 칼륨에톡시드, 리튬이소프로폭시드, 나트륨이소프로폭시드, 칼륨이소프로폭시드, 리튬tert-부톡시드, 나트륨tert-부톡시드, 칼륨tert-부톡시드, 리튬tert-펜톡시드, 나트륨tert-펜톡시드, 또는 칼륨tert-펜톡시드를 들 수 있으며, 특히 바람직하게는 나트륨메톡시드, 리튬tert-부톡시드 또는 칼륨tert-부톡시드를 들 수 있다.
본 공정에 있어서의 용매로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등의 알코올계 용매, 그리고 테트라하이드로푸란, 아세토니트릴, 시클로펜틸메틸에테르, 톨루엔, 디메틸아세트아미드 등과 알코올 용매와의 혼합 용매계를 들 수 있고, 바람직하게는 메탄올, 또는 메탄올과 테트라하이드로푸란의 혼합 용매계를 들 수 있다.
본 공정의 반응 온도는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, -20 ℃ ∼ 80 ℃, 바람직하게는 0 ℃ ∼ 70 ℃, 보다 바람직하게는 20 ℃ ∼ 65 ℃, 특히 바람직하게는 40 ℃ ∼ 60 ℃ 를 들 수 있다.
본 방법은 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 6 또는 16 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 이하의 식 III-5 :
[화학식 229]
Figure pct00230
(식 중, X2 는, 아세틸기이다) 로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 이하의 식 III-4 :
[화학식 230]
Figure pct00231
(식 중, X1 은, 트리플루오로메탄술포닐기, 노나플루오로부탄술포닐기, 2-니트로벤젠술포닐기 및 4-니트로벤젠술포닐기로 이루어지는 군에서 선택되는 치환기를 나타낸다) 로 나타내는 화합물을 아세트산세슘 또는 테트라부틸암모늄아세테이트와 반응시킴으로써, 식 III-5 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는 방법, 또는, 이하의 식 III-5 :
[화학식 231]
Figure pct00232
(식 중, X2 는, 벤조일기이다) 로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 이하의 식 III-4 :
[화학식 232]
Figure pct00233
(식 중, X1 은, 트리플루오로메탄술포닐기, 노나플루오로부탄술포닐기, 2-니트로벤젠술포닐기 및 4-니트로벤젠술포닐기로 이루어지는 군에서 선택되는 치환기를 나타낸다) 로 나타내는 화합물을 벤조산테트라부틸암모늄과 반응시킴으로써, 식 III-5 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는 방법이 제공된다.
글루코오스 → 만노오스의 입체 반전은 공지된 변환 반응이 있지만,β-글리코시드 결합으로 연결한 글루코오스-글루코사민 2 당의 D-글루코피라노시드 3 위치의 탄소에 결합하는 수산기의 보호기가 2-나프틸메틸 (Nap) 기인 경우의 변환은 보고되어 있지 않다. 당해 방법을 채용함으로써, 글루코오스 → 만노오스의 입체 반전을 달성할 수 있어, 고수율이면서 또한 고선택적으로 β-글리코시드 결합으로 연결한 만노오스-글루코사민 2 당 골격을 구축할 수 있다.
본 공정에 있어서의 용매로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 디메틸술폭시드, 디메틸포름아미드, 디메틸아세트아미드, N-메틸피롤리돈, N,N-디메틸이미다졸리디논, 술포란, 테트라하이드로푸란 또는 아세토니트릴을 들 수 있고, 바람직하게는 디메틸술폭시드를 들 수 있다.
본 공정의 반응 온도는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 20 ∼ 80 ℃, 바람직하게는 23 ∼ 70 ℃, 보다 바람직하게는 26 ∼ 60 ℃, 특히 바람직하게는 30 ∼ 50 ℃ 를 들 수 있다.
본 방법은 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 9 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 이하의 식 III-8 :
[화학식 233]
Figure pct00234
로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 이하의 식 III-7 :
[화학식 234]
Figure pct00235
로 나타내는 화합물에 있어서의, 2-케토-D-글루코피라노시드의 2 위치의 탄소에 결합되어 있는 옥소기를 환원함으로써, 식 III-8 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는 방법이 제공된다.
본 공정에 있어서의 용매로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 디에틸에테르, 시클로펜틸메틸에테르, tert-부틸메틸에테르, 디이소프로필에테르, 디프로필에테르, 디부틸에테르, 1,4-디옥산을 들 수 있고, 바람직하게는 테트라하이드로푸란을 들 수 있다.
본 공정의 반응 온도는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, -80 ℃ ∼ 20 ℃ 를 들 수 있다. 또한, 이하에 기재하는 바와 같이, 사용하는 환원제에 따라서 최적의 반응 온도가 상이하다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 식 III-7 로 나타내는 화합물에 있어서의, 2-케토-D-글루코피라노시드의 2 위치의 탄소에 결합되어 있는 옥소기는, L-셀렉트리드, LS-셀렉트리드, 리튬디이소부틸-tert-부톡시알루미늄하이드리드 (LDBBA), 이하의 식 A :
[화학식 235]
Figure pct00236
(식 중, R3 은, 이하의 식 :
[화학식 236]
Figure pct00237
으로 나타내는 디tert-부틸메틸페녹시드 또는 하이드리드이고, 단, 적어도 2 개의 R3 은, 디tert-부틸메틸페녹시드이다) 로 나타내는 화합물 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 환원제의 존재하에서 환원된다. 당해 환원 공정에 있어서는, 예를 들어, NaBH4 를 사용한 경우, 입체 선택성이 낮아 (7 : 3 정도), 소기의 Gln → Man 으로의 입체 반전을 효율적으로 얻기가 곤란하였다 (Org. Biomol. Chem., 2018, 16, 4720-4727). 한편, 상기 예시한 환원제를 사용한 경우, NaBH4 를 사용한 경우와 비교하여, Gln → Man 으로의 입체 반전의 선택성이 크게 개선된다 (93.6 : 6.4 ∼ 98.1 : 1.9).
식 A 로 나타내는 화합물 중, 3 개의 R3 이 디tert-부틸메틸페녹시드인 화합물은, 예를 들어, 리튬알루미늄하이드리드 (50.0 mg, 1.32 mmol) 의 테트라하이드로푸란 현탁액 (2 mL) 에, 0 ℃ 에서 디부틸하이드록시톨루엔 (885.41 mg, 4.02 mmol) 을 첨가한 후, 25 ℃ 에서 교반함으로써 얻을 수 있다. 식 A 로 나타내는 화합물 중, 2 개의 R3 이 디tert-부틸메틸페녹시드인 화합물은, 동일한 수법에 있어서, 1 몰 당량의 리튬알루미늄하이드리드에 대해, 2 몰 당량의 디부틸하이드록시톨루엔을 사용함으로써 얻을 수 있다.
상기와 같이, 본 공정의 반응 온도는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 환원제로서 L-셀렉트리드, LS-셀렉트리드 또는 LDBBA 를 사용하는 경우, 반응 온도는, 바람직하게는 -80 ℃ ∼ -20 ℃, 보다 바람직하게는 -80 ℃ ∼ -30 ℃, 더욱 바람직하게는 -80 ℃ ∼ -40 ℃, 특히 바람직하게는 -80 ℃ ∼ -50 ℃ 를 들 수 있고, 환원제로서 식 A 로 나타내는 화합물을 사용하는 경우, 반응 온도는, 바람직하게는 -20 ℃ ∼ 20 ℃, 보다 바람직하게는 -15 ℃ ∼ 15 ℃, 특히 바람직하게는 -10 ℃ ∼ 10 ℃ 를 들 수 있다. 따라서, 보다 취급하기 쉬운 온도에서 반응이 진행된다는 점에 있어서, 본 공정에 사용되는 환원제로서 특히 바람직한 것은, 식 A 로 나타내는 화합물이다.
본 방법은 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 19 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 이하의 식 III-9 :
[화학식 237]
Figure pct00238
로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 리튬tert-부톡시드 또는 리튬tert-아목시드의 존재하에서, 이하의 식 III-8 :
[화학식 238]
Figure pct00239
로 나타내는 화합물에 있어서, D-만노피라노시드의 2 위치의 탄소에 결합되어 있는 수산기를 벤질기로 보호함으로써, 식 III-9 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는 방법이 제공된다.
당해 벤질기의 보호를, 리튬tert-부톡시드 또는 리튬tert-아목시드의 존재하에서 실시함으로써, 프탈이미드의 개환을 억제할 수 있다. 또, 수소화나트륨을 사용한 일반적 조건에 비해, 안전하게 실시 가능하고, 스케일 업도 용이해진다.
본 공정에 있어서의 용매로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 디메틸아세트아미드, 디메틸포름아미드, N-메틸피롤리돈, N,N-디메틸이미다졸리디논을 들 수 있고, 바람직하게는 디메틸아세트아미드를 들 수 있다.
본 공정의 반응 온도는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, -20 ∼ 100 ℃, 바람직하게는 -15 ∼ 70 ℃, 특히 바람직하게는 -10 ∼ 50 ℃ 를 들 수 있다.
본 방법은 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 11 또는 21 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 이하의 식 V-5 :
[화학식 239]
Figure pct00240
로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 이하의 식 V-4 :
[화학식 240]
Figure pct00241
로 나타내는 화합물을, 트리플루오로아세트산메틸의 존재하에, 알콕시드계의 강염기와 반응시킴으로써, 식 V-5 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는 방법이 제공된다.
일반적으로 아세틸기의 탈보호는, 메탄올 중 나트륨메톡시드를 사용하여 실시하는 것이 알려져 있지만, 그 경우, 프탈이미드기의 개환이라는 원하지 않은 부반응도 동시에 발생할 수 있다. 한편, 트리플루오로아세트산메틸의 존재하에 알콕시드계의 강염기와 반응시킨다는 수법을 사용함으로써, 프탈이미드기의 개환을 억제하면서, 아세틸기의 탈리를 실시하는 것이 가능해진다.
당해 알콕시드계의 강염기로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, C1∼C5 알콕시드의 나트륨염, 리튬염, 칼륨염 또는 이들의 조합을 들 수 있고, 바람직하게는 리튬메톡시드, 나트륨메톡시드, 칼륨메톡시드, 리튬에톡시드, 나트륨에톡시드, 칼륨에톡시드, 리튬이소프로폭시드, 나트륨이소프로폭시드, 칼륨이소프로폭시드, 리튬tert-부톡시드, 나트륨tert-부톡시드, 칼륨tert-부톡시드, 리튬tert-펜톡시드, 나트륨tert-펜톡시드, 또는 칼륨tert-펜톡시드를 들 수 있고, 특히 바람직하게는 나트륨메톡시드, 리튬tert-부톡시드 또는 칼륨tert-부톡시드를 들 수 있다.
본 공정에 있어서의 용매로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등의 알코올계 용매, 그리고 테트라하이드로푸란, 아세토니트릴, 시클로펜틸메틸에테르, 톨루엔, 디메틸아세트아미드 등과 알코올 용매와의 혼합 용매계를 들 수 있고, 바람직하게는 메탄올, 또는 메탄올과 테트라하이드로푸란의 혼합 용매계를 들 수 있다.
본 공정의 반응 온도는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, -20 ℃ ∼ 80 ℃, 바람직하게는 0 ℃ ∼ 70 ℃, 보다 바람직하게는 15 ℃ ∼ 65 ℃, 특히 바람직하게는 30 ℃ ∼ 60 ℃ 를 들 수 있다.
본 방법은 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 29 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 이하의 식 II-5 :
[화학식 241]
Figure pct00242
로 나타내는 화합물 또는 식 II-8 :
[화학식 242]
Figure pct00243
로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서,
플루오러스 알코올 및 수중에서, 이하의 식 II-4 :
[화학식 243]
Figure pct00244
로 나타내는 화합물 또는 식 II-7 :
[화학식 244]
Figure pct00245
로 나타내는 화합물에 λ3-아이오단을 반응시킴으로써, 식 II-5 로 나타내는 화합물 또는 식 II-8 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는 방법이 제공된다.
본 발명에 있어서, 「λ3-아이오단」이란, 3 가의 초원자가 요오드 화합물을 의미한다. λ3-아이오단을 사용함으로써, 종래의 탈보호법과 비교하여, 식 II-5 로 나타내는 화합물 또는 식 II-8 로 나타내는 화합물의 수율이 높아질 뿐만 아니라, 온화한 반응 조건에서 실시할 수 있다. 또, 소과잉의 λ3-아이오단에 의해 반응이 진행되기 때문에, 예를 들어 과잉량의 질산암모늄세륨 (IV) 을 사용하는 종래의 탈보호법에 비해, 탈보호체의 정제가 용이해지고, 조작상의 안전성도 높다.
일 실시형태에 있어서, λ3-아이오단은, 식 R4-I(OR5)2 로 나타내는 화합물이다 (식 중, R4 는, 무치환 또는 치환 페닐기이고, R5 는, H, 아세톡시, 트리플루오로아세톡시, 토실옥시, 메탄술포닐옥시, 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택된다). 상기 식에 정의된 바대로, R4 는 「치환 페닐기」여도 되고, 당해 치환기로는, 예를 들어, 직사슬 혹은 분지형 포화 또는 불포화 탄화수소기, 함산소기 (알콕시, 에스테르 등), 함질소기 (시아노, 아지드 등), 할로겐 (예를 들어, 불소, 염소, 브롬, 요오드) 등을 들 수 있지만, 보다 바람직하게는 탄화수소기, 함산소 치환기, 할로겐이다. 이들 치환기가 탄소를 포함하는 경우, 예를 들어, 탄소를 1 ∼ 5 개 갖는 것, 또는 탄소를 1 ∼ 3 개 갖는 것을 바람직하게 사용할 수 있다. λ3-아이오단의 구체예에는, [비스(트리플루오로아세톡시)요오드]벤젠 (PIFA), [하이드록시(토실옥시)요오드]벤젠 (HTIB), (디아세톡시요오드)벤젠 (PIDA), [비스(트리플루오로아세톡시)요오드]펜타플루오로벤젠, 및 [하이드록시(메탄술포닐옥시)요오드]벤젠을 들 수 있지만, 이것으로 한정되는 것은 아니다.
λ3-아이오단의 양은 적절히 설정할 수 있지만, 예를 들어, 식 II-4 로 나타내는 화합물 또는 식 II-7 로 나타내는 화합물에 대해 약 0.1 ∼ 10 당량, 약 0.5 ∼ 7 당량, 또는 약 1 ∼ 5 당량일 수 있고, 바람직하게는 약 1 ∼ 3 당량일 수 있다.
본 발명에 있어서, 「플루오러스 알코올」이란, 알코올에 결합하고 있는 탄소를 제외한 모든 탄소가 불소를 갖는 불소 함유 알코올 화합물을 의미한다. 불소 치환이 허용되는 한, 플루오러스 알코올은, 보다 많은 불소를 갖는 것이 바람직하다. 플루오러스 알코올에는, 플루오러스 지방족 알코올이 포함되지만, 이것으로 한정되는 것은 아니다. 플루오러스 지방족 알코올 중의 탄화수소 부분은, 포화 또는 불포화여도 되고, 직사슬형 또는 분기형이어도 되며, 고리형이어도 된다. 플루오러스 지방족 알코올은, 예를 들어, 플루오러스 C2∼C8 지방족 알코올이고, 바람직하게는 플루오러스 C2∼C5 지방족 알코올이고, 보다 바람직하게는 플루오러스 C2∼C3 지방족 알코올이다. 플루오러스 알코올의 구체예로는, 헥사플루오로2-프로판올 (HFIP), 2,2,2-트리플루오로에탄올 (TFE), 2,2,3,3,4,4,5,5-옥타플루오로-1-펜탄올, 노나플루오로-tert-부틸알코올, 및 이들의 조합으로 이루어지는 군을 들 수 있지만, 이들로 한정되는 것은 아니다.
또한, 플루오러스 알코올 및 λ3-아이오단은, 그들의 바람직한 조합에 있어서, 보다 고수율로 탈보호체를 얻을 수 있다. 이와 같은 조합은, 당업자이면 적절히 선택할 수 있지만, 예를 들어 PIFA 는, 헥사플루오로2-프로판올 (HFIP), 2,2,2-트리플루오로에탄올 (TFE), 노나플루오로-tert-부틸알코올 등과의 조합으로 바람직하게 사용되고, HTIB 는, HFIP, TFE, 2,2,3,3,4,4,5,5-옥타플루오로-1-펜탄올 등과의 조합으로 바람직하게 사용되고, [비스(트리플루오로아세톡시)요오드]펜타플루오로벤젠은, 헥사플루오로2-프로판올 (HFIP) 등과의 조합으로 바람직하게 사용되고, [하이드록시(메탄술포닐옥시)요오드]벤젠은, 헥사플루오로2-프로판올 (HFIP) 등과의 조합으로 바람직하게 사용되지만, 이들의 조합의 예로 한정되는 것은 아니다.
플루오러스 알코올의 양은, 생성물의 고수율을 달성하는 관점 등에서 적절히 설정할 수 있지만, 예를 들어, 식 II-4 로 나타내는 화합물 또는 식 II-7 로 나타내는 화합물에 대해 몰비로 약 1.0 당량 이상, 약 1.5 당량 이상, 약 2.0 당량 이상, 또는 2.5 당량 이상일 수 있고, 또, 식 II-4 로 나타내는 화합물 또는 식 II-7 로 나타내는 화합물에 대해 체적비로 약 15 이하, 약 10 이하, 약 8 이하, 또는 약 5 이하일 수 있다.
본 공정은, 상기 플루오러스 알코올와 「물」의 공존하에 있어서 실시된다. 물의 양은, 생성물의 고수율을 달성하기 위한 관점 등에서 적절히 설정할 수 있지만, 예를 들어, 식 II-4 로 나타내는 화합물 또는 식 II-7 로 나타내는 화합물에 대해 몰비로 약 1.0 당량 이상, 약 1.5 당량 이상, 약 2.0 당량 이상, 또는 약 2.5 당량 이상일 수 있고, 또, 식 II-4 로 나타내는 화합물 또는 식 II-7 로 나타내는 화합물에 대해 체적비로 약 10 이하, 약 8 이하, 약 5 이하, 또는 약 3 이하일 수 있다.
본 공정에서는, 플루오러스 알코올 및 수중에, 추가로 「용매」를 첨가해도 된다. 용매로는, 디클로로메탄, 톨루엔, (트리플루오로메틸)벤젠, 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택할 수 있지만, 이들로 한정되는 것은 아니다. 사용하는 용매의 종류는, 생성물의 고수율을 달성하기 위해서, 사용하는 λ3-아이오단 등에 따라서 적절히 선택할 수 있다. 용매의 양도 또한, 생성물의 고수율을 달성하기 위해 적절히 설정할 수 있으며, 예를 들어, 식 II-4 로 나타내는 화합물 또는 식 II-7 로 나타내는 화합물에 대해 체적비로 약 0.5 ∼ 50, 약 1 ∼ 20, 또는 약 2 ∼ 10 일 수 있다.
본 공정에서는, 플루오러스 알코올 및 수중에, 추가로 「첨가제」를 첨가해도 된다. 첨가제는, 바람직하게는 인산이수소나트륨, 인산이수소칼륨, 인산수소이나트륨, 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택된다. 탈 4-메톡시페닐화의 반응이 진행되면 산성도가 강해질 수 있으므로, 특히, 강산성의 산이 부생되는 λ3-아이오단 (HTIB 등) 을 사용한 경우에서는 상기 인산이수소칼륨 등의 첨가제를 첨가함으로써, 보다 높은 생성물 수율을 얻을 수 있다. 첨가제의 양도 또한, 생성물의 고수율을 달성하기 위해 적절히 설정할 수 있으며, 예를 들어, 식 II-4 로 나타내는 화합물 또는 식 II-7 로 나타내는 화합물에 대해 약 0.5 ∼ 8 당량, 약 1 ∼ 6 당량, 또는 약 1.5 ∼ 5 당량일 수 있다.
또, λ3-아이오단으로서 (디아세톡시요오드)벤젠 (PIDA) 을 사용하는 경우, 보다 고수율로 탈보호체를 얻기 위해, 트리플루오로아세트산 (TFA) 을 첨가하는 것이 바람직하다.
본 공정에 있어서는, 플루오러스 알코올 및 물의 공존하에 있어서, 식 II-4 로 나타내는 화합물 또는 식 II-7 로 나타내는 화합물 중의 4-메톡시페닐 (X 기) 에 대해, λ3-아이오단이 산화제로서 작용함으로써, 식 II-4 로 나타내는 화합물 또는 식 II-7 로 나타내는 화합물로부터 OX 기가 탈리되고, 그 후, 여기에 물 (H2O) 이 부가되어, 결과적으로, 식 II-4 로 나타내는 화합물 또는 식 II-7 로 나타내는 화합물로부터 4-메톡시페녹시기 (OX 기) 가 탈리되기 쉬워짐으로써 달성되고 있는 것으로 생각된다. 이와 같은 λ3-아이오단의 작용은, 일반적으로, 플루오러스 알코올 및 수중에 식 II-4 로 나타내는 화합물 또는 식 II-7 로 나타내는 화합물 및 λ3-아이오단을 함유하는 용액을 교반, 환류 등 함으로써 달성된다. 따라서, 본 공정은 간편하게 실시할 수 있고, 스케일 업도 비교적 용이하게 할 수 있다. 생성물인 식 II-5 로 나타내는 화합물 또는 식 II-8 로 나타내는 화합물은, 당해 생성물의 결정화나 크로마토그래피 등의 당업자에게 이미 알려진 임의의 정제 방법으로 정제 또는 단리할 수 있다.
식 II-4 로 나타내는 화합물 또는 식 II-7 로 나타내는 화합물에 λ3-아이오단을 반응시킬 때의 온도는, 약 -20 ℃ 내지 플루오러스 알코올의 비점 (예를 들어, 헥사플루오로2-프로판올 (HFIP) 에서는 약 58 ℃, 2,2,2-트리플루오로에탄올 (TFE) 에서는 약 78 ℃) 이하가 바람직하고, 예를 들어, 약 -20 ∼ 60 ℃, 약 0 ℃ ∼ 60 ℃, 또는 약 10 ℃ ∼ 30 ℃ 일 수 있다. 또, 실온 (15 ∼ 30 ℃) 에서도 탈 메톡시페닐화 반응이 진행되기 때문에, 냉각 또는 가열을 실시할 필요가 없는 점도 유리하다.
또, 반응 시간은, 생성물을 고수율로 얻기 위해서 적절히 설정할 수 있다.
본 방법은 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 33 또는 38 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 이하의 식 II-6 :
[화학식 245]
Figure pct00246
으로 나타내는 화합물 또는 이하의 식 II-9 :
[화학식 246]
Figure pct00247
로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 이하의 식 II-5 :
[화학식 247]
Figure pct00248
로 나타내는 화합물 또는 이하의 식 II-8 :
[화학식 248]
Figure pct00249
로 나타내는 화합물을, N-메틸이미다졸의 존재하에서, 이하의 식 :
[화학식 249]
Figure pct00250
으로 나타내는 2,2,2-트리플루오로-N-페닐아세트이미도일클로라이드 (TFPC) 와 반응시킴으로써, 식 II-6 으로 나타내는 화합물 또는 식 II-9 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는 방법이 제공된다.
본 공정에 있어서의 염기로서 N-메틸이미다졸을 사용함으로써, 수율이 대폭 향상된다. 예를 들어, 식 II-5 로 나타내는 화합물로부터 식 II-6 으로 나타내는 화합물을 제조하는 경우, 어느 특정 조건하에 있어서, 탄산칼륨을 사용한 경우 수율은 36 ％ 정도가 되지만, N-메틸이미다졸을 사용한 경우 수율은 76 ％ 정도로 대폭 향상된다. TFPC 는 고가의 시약이기 때문에, 당해 공정의 수율이 향상되는 것은, 상업 생산상 매우 유익하다.
본 공정에 있어서의 용매로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 디클로로메탄, 톨루엔, 아세트산에틸, 아세토니트릴, 또는 테트라하이드로푸란을 들 수 있고, 바람직하게는 디클로로메탄을 들 수 있다.
본 공정의 반응 온도는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 -20 ∼ 40 ℃, 보다 바람직하게는 -10 ∼ 35 ℃, 특히 바람직하게는 0 ∼ 30 ℃ 를 들 수 있다.
본 공정은, 바람직하게는 탈수제의 존재하에서 실시된다. 본 공정에 있어서의 탈수제로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 몰레큘러시브를 들 수 있고, 바람직하게는 분말 입경 10 ㎛ 이하의 몰레큘러시브 4A 분말을 들 수 있다.
본 방법에 있어서, 생성된 식 II-6 으로 나타내는 화합물은, 칼럼이나 재결정화에 의해 단리·정제할 수 있다. 칼럼을 사용한 단리·정제로는, 예를 들어, 고정상으로서 실리카 겔, 이동상으로서 디클로로메탄 또는 톨루엔-아세트산에틸 혼합 용매계를 사용한 단리·정제를 들 수 있다. 한편, 재결정화에 의한 단리·정제는, 예를 들어, 디이소프로필에테르, 헵탄의 혼합 용매계로부터의 결정화를 들 수 있다. 또한, 재결정화는, 바람직하게는 식 II-6 으로 나타내는 화합물의 종정을 사용하여 실시할 수 있다. 종정을 사용하는 경우, 예를 들어, 디이소프로필에테르 용액에 종정을 접종하고, 결정의 석출을 확인 후, 헵탄을 적하하는 조작에 의해 취득할 수 있다.
본 방법은 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 34 또는 39 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 이하의 식 VI-5 :
[화학식 250]
Figure pct00251
로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 이하의 식 VI-4 :
[화학식 251]
Figure pct00252
로 나타내는 화합물을, 트리플루오로아세트산메틸의 존재하에, 알콕시드계의 강염기와 반응시킴으로써, 식 VI-5 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는 방법이 제공된다.
일반적으로 아세틸기의 탈보호는, 메탄올 중 나트륨메톡시드를 사용하여 실시하는 것이 알려져 있지만, 그 경우, 프탈이미드기의 개환이라는 원하지 않은 부반응도 동시에 발생할 수 있다. 한편, 트리플루오로아세트산메틸의 존재하에 알콕시드계의 강염기와 반응시킨다는 수법을 사용함으로써, 프탈이미드기의 개환을 억제하면서, 아세틸기의 탈리를 실시하는 것이 가능해진다.
당해 알콕시드계의 강염기로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, C1∼C5 알콕시드의 나트륨염, 리튬염, 칼륨염 또는 이들의 조합을 들 수 있고, 바람직하게는 리튬메톡시드, 나트륨메톡시드, 칼륨메톡시드, 리튬에톡시드, 나트륨에톡시드, 칼륨에톡시드, 리튬이소프로폭시드, 나트륨이소프로폭시드, 칼륨이소프로폭시드, 리튬tert-부톡시드, 나트륨tert-부톡시드, 칼륨tert-부톡시드, 리튬tert-펜톡시드, 나트륨tert-펜톡시드, 또는 칼륨tert-펜톡시드를 들 수 있고, 특히 바람직하게는 나트륨메톡시드, 리튬tert-부톡시드 또는 칼륨tert-부톡시드를 들 수 있다.
본 공정에 있어서의 용매로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올등의 알코올계 용매, 그리고 테트라하이드로푸란, 아세토니트릴, 시클로펜틸메틸에테르, 톨루엔, 디메틸아세트아미드 등과 알코올 용매와의 혼합 용매계를 들 수 있고, 바람직하게는 메탄올, 또는 메탄올과 테트라하이드로푸란의 혼합 용매계를 들 수 있다.
본 공정의 반응 온도는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, -20 ℃ ∼ 80 ℃, 바람직하게는 0 ℃ ∼ 70 ℃, 보다 바람직하게는 15 ℃ ∼ 65 ℃, 특히 바람직하게는 30 ℃ ∼ 60 ℃ 를 들 수 있다.
본 방법은 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 41 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 이하의 식 VII-3 :
[화학식 252]
Figure pct00253
으로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 식 VII-3 으로 나타내는 화합물이 용해되어 있는 용매를 실리카 겔과 접촉시킴으로써, 식 VII-3 으로 나타내는 화합물을 고상 추출하는 공정을 포함하는 방법이 제공된다.
식 VII-3 으로 나타내는 화합물을 제조할 때의 원재료로서 이용될 수 있는 미반응의 식 VII-2 로 나타내는 화합물이나, 탈리된 벤즈알데히드는, 실리카 겔에 흡착되지 않는 점에서, 당해 공정에 의해, 식 VII-3 으로 나타내는 화합물을 효율적으로 정제할 수 있다.
식 VII-3 으로 나타내는 화합물을 용해시키기 위한 용매로는, 예를 들어, 톨루엔, 헵탄, 디클로로메탄, 클로로포름, 또는 이들의 조합을 들 수 있고, 바람직하게는 톨루엔, 디클로로메탄, 클로로포름, 또는 이들의 조합을 들 수 있고, 특히 바람직하게는 톨루엔을 들 수 있지만, 이들로 한정되지 않는다.
본 공정에 있어서의 실리카 겔로는, 예를 들어, 원료에 대해 2 ∼ 5 배량의 실리카 겔을 들 수 있고, 바람직하게는 원료에 대해 2 ∼ 4 배량의 실리카 겔을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 원료에 대해 약 3 배량의 실리카 겔을 들 수 있다.
본 공정에 있어서, 실리카 겔에 흡착된 식 VII-3 으로 나타내는 화합물을 용리하기 위한 용매로는, 실리카 겔을 용해하지 않고, 목적물을 용출할 수 있는 용매이면 특별히 제한되지 않지만, 예를 들어, 시클로펜틸메틸에테르, 아세트산에틸, 또는 tert-부틸메틸에테르를 들 수 있다.
본 방법은 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 46 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 이하의 식 VIII-4 :
[화학식 253]
Figure pct00254
로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 이하의 식 VIII-3 :
[화학식 254]
Figure pct00255
으로 나타내는 화합물을, N-메틸이미다졸의 존재하에서, 이하의 식 :
[화학식 255]
Figure pct00256
으로 나타내는 2,2,2-트리플루오로-N-페닐아세트이미도일클로라이드 (TFPC) 와 반응시킴으로써, 식 VIII-4 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는 방법이 제공된다.
본 공정에 있어서의 염기로서 탄산칼륨을 사용한 경우와 비교하여, N-메틸이미다졸을 사용한 경우, TFPC 의 당량을 삭감하는 것이 가능해져, 그 경우에 있어서도 고수율로 목적물을 얻을 수 있다. TFPC 는 고가의 시약이기 때문에, 당해 공정의 수율이 향상되는 것은, 상업 생산상 매우 유익하다.
본 공정에 있어서의 용매로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 디클로로메탄, 톨루엔, 아세트산에틸, 아세토니트릴, 또는 테트라하이드로푸란을 들 수 있고, 바람직하게는 디클로로메탄을 들 수 있다.
본 공정의 반응 온도는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 바람직하게는 -20 ∼ 40 ℃, 보다 바람직하게는 -10 ∼ 35 ℃, 특히 바람직하게는 0 ∼ 30 ℃ 를 들 수 있다.
본 공정은, 바람직하게는 탈수제의 존재하에서 실시된다. 본 공정에 있어서의 탈수제로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 몰레큘러시브를 들 수 있고, 바람직하게는 분말 입경 10 ㎛ 이하의 몰레큘러시브 4A 분말을 들 수 있다.
본 공정은 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 49 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 이하의 식 IX-1 :
[화학식 256]
Figure pct00257
로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 이하의 식 VIII-5 :
[화학식 257]
Figure pct00258
로 나타내는 화합물과, 이하의 식 VII-3 :
[화학식 258]
Figure pct00259
로 나타내는 화합물을 α-2,6-글리코시드 결합시킴으로써, 식 IX-1 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는 방법이 제공된다.
N-아세틸뉴라민산 유도체와 갈락토오스 유도체를 α-2,6-글리코시드 결합 선택적으로 결합시키는 것은 곤란하여, 예를 들어, 식 VIII-4 로 나타내는 화합물과 식 VII-3 으로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써 이당을 합성하는 방법이 보고되어 있지만 (J. Org. Chem., 2016, 81, 10600-10616), 반응의 재현이 용이하지 않고, 소기의 수율, 선택성을 얻을 수 없었다. 또, 이 반응에서는, 스케일이 커질수록 선택성이 저하되어, 반응 온도 허용폭도 좁고, 반응열의 영향이 크다는 과제도 있었다. 당해 반응의 원료 화합물의 하나인 식 VIII-4 로 나타내는 화합물은 매우 고가인 점에서, 이 반응에 있어서의 낮은 재현성, 수율, 선택성은, 특히 스케일 업이 요청되는 상업 생산상에서는 큰 문제였다. 한편, 원료 화합물로서 식 VIII-4 로 나타내는 화합물 대신에, tert-부톡시카르보닐기를 부가한 식 VIII-5 로 나타내는 화합물을 사용하면, 재현성이 좋고, α-2,6-글리코시드 결합에 대한 높은 선택성 (α : β = 93 : 7) 을 달성할 수 있으며, 수율도 향상된다. 뿐만 아니라, 온도 허용폭도 넓어지고, 또한, 스케일 업했을 때에도 높은 재현성, 수율, 선택성을 달성할 수 있다. 이것은, 상업 생산상 매우 유익한 효과를 가져오는 것이다.
본 공정은, 바람직하게는 루이스산의 존재하에서 실시할 수 있다. 본 공정에 있어서의 루이스산으로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 트리플루오로메탄술폰산트리메틸실릴, 트리플루오로메탄술폰산트리이소프로필실릴, 트리플루오로메탄술폰산tert-부틸디메틸실릴을 들 수 있고, 바람직하게는 트리플루오로메탄술폰산트리메틸실릴을 들 수 있다.
본 공정에 있어서의 용매로는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 디이소프로필에테르, tert-부틸메틸에테르, 디에틸에테르, 디부틸에테르, 디프로필에테르, 1,4-디옥산, 디클로로메탄, 1,2-디클로로에탄, 톨루엔, 클로르 벤젠, 트리플루오로메틸벤젠, 프로피오니트릴 또는 아세토니트릴을 들 수 있고, 바람직하게는 시클로펜틸메틸에테르를 들 수 있다.
본 공정의 반응 온도는 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, -78 ℃ ∼ 0 ℃, 바람직하게는 -78 ∼ -20 ℃, 보다 바람직하게는 -78 ∼ -30 ℃, 특히 바람직하게는 -78 ∼ -40 ℃ 를 들 수 있다.
본 공정에 있어서는, 1 당량의 식 VIII-5 로 나타내는 화합물에 대해, 1 ∼ 3 당량의 식 VII-3 으로 나타내는 화합물을 투입하는 것이 바람직하고, 1 당량의 식 VIII-5 로 나타내는 화합물에 대해, 1.4 ∼ 2 당량의 식 VII-3 으로 나타내는 화합물을 투입하는 것이 보다 바람직하다.
본 공정은 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 식 VIII-5 로 나타내는 화합물과 식 VII-3 으로 나타내는 화합물의 혼합 용액 (바람직하게는 시클로펜틸메틸에테르 혼합 용액) 을, 루이스산을 함유하는 용액 (바람직하게는 시클로펜틸메틸에테르 용액) 에 장시간 적하하거나, 또는, 식 VIII-5 로 나타내는 화합물의 용액 (바람직하게는 시클로펜틸메틸에테르 용액) 을, 루이스산과 식 VII-3 으로 나타내는 화합물을 함유하는 용액 (바람직하게는 시클로펜틸메틸에테르 용액) 에 장시간 적하함으로써 실시할 수 있고, 바람직하게는 식 VIII-5 로 나타내는 화합물의 용액 (바람직하게는 시클로펜틸메틸에테르 용액) 을, 루이스산과 식 VII-3 으로 나타내는 화합물을 함유하는 용액 (바람직하게는 시클로펜틸메틸에테르 용액) 에 장시간 적하함으로써 실시할 수 있다. 적하 시간은 반응이 진행되는 한 제한되지 않지만, 예를 들어, 30 분 ∼ 5 시간, 바람직하게는 1 ∼ 4 시간, 보다 바람직하게는 2 ∼ 3.5 시간, 특히 바람직하게는 약 3 시간이다.
본 방법은 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 51 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 이하의 식 IX-1 :
[화학식 259]
Figure pct00260
로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 식 IX-1 로 나타내는 화합물이 용해되어 있는 용매를 실리카 겔과 접촉시킴으로써, 식 IX-1 로 나타내는 화합물을 고상 추출하는 공정을 포함하는 방법이 제공된다.
식 IX-1 로 나타내는 화합물의 제조 공정에 있어서, 글리코실화 반응에서 부생되는 N-페닐트리플루오로아세트아미드나, 톨루엔 용매 중, 실리카 겔에 흡착되지 않는 그 밖의 미량 불순물은, 실리카 겔에 흡착되지 않는 점에서, 당해 공정에 의해, 식 IX-1 로 나타내는 화합물을 효율적으로 정제할 수 있다.
식 IX-1 로 나타내는 화합물을 용해시키기 위한 용매로는, 예를 들어, 톨루엔, 헵탄, 디클로로메탄, 클로로포름, 또는 이들의 조합을 들 수 있고, 바람직하게는 톨루엔, 디클로로메탄, 클로로포름, 또는 이들의 조합을 들 수 있고, 특히 바람직하게는 톨루엔을 들 수 있지만, 이들로 한정되지 않는다.
본 공정에 있어서의 실리카 겔로는, 예를 들어, 원료에 대해 2 ∼ 5 배량의 실리카 겔을 들 수 있고, 바람직하게는 원료에 대해 2 ∼ 4 배량의 실리카 겔을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 원료에 대해 약 3.5 배량의 실리카 겔을 들 수 있다.
본 공정에 있어서, 실리카 겔에 흡착된 식 IX-1 로 나타내는 화합물을 용리하기 위한 용매로는, 실리카 겔을 용해하지 않고, 목적물을 용출할 수 있는 용매이면 특별히 제한되지 않지만, 예를 들어, 아세트산에틸, 시클로펜틸메틸에테르, 또는 tert-부틸메틸에테르를 들 수 있고, 바람직하게는 아세트산에틸을 들 수 있다.
본 방법은 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 51 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 이하의 식 IX-3 :
[화학식 260]
Figure pct00261
으로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 식 IX-3 으로 나타내는 화합물이 용해되어 있는 용매를 실리카 겔과 접촉시킴으로써, 식 IX-3 으로 나타내는 화합물을 고상 추출하는 공정을 포함하는 방법이 제공된다.
식 IX-3 으로 나타내는 화합물의 제조 공정의 일 양태에 있어서, 상류의 글리코실화 반응에서 과잉으로 사용한 식 VII-3 으로 나타내는 화합물이 아세틸화되어 생성된 식 VII-3 으로 나타내는 화합물의 디아세틸체 등의 부생성물은, 실리카 겔에 흡착되지 않는 점에서, 당해 공정에 의해, 식 IX-3 으로 나타내는 화합물을 효율적으로 정제할 수 있다.
식 IX-3 으로 나타내는 화합물을 용해시키기 위한 용매로는, 예를 들어, 톨루엔, 헵탄, 디클로로메탄, 클로로포름, 또는 이들의 조합을 들 수 있고, 바람직하게는 톨루엔, 디클로로메탄, 클로로포름, 또는 이들의 조합을 들 수 있고, 특히 바람직하게는 톨루엔을 들 수 있지만, 이들로 한정되지 않는다.
본 공정에 있어서의 실리카 겔로는, 예를 들어, 원료에 대해 2 ∼ 5 배량의 실리카 겔을 들 수 있고, 바람직하게는 원료에 대해 2 ∼ 4 배량의 실리카 겔을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 원료에 대해 약 3.5 배량의 실리카 겔을 들 수 있다.
본 공정에 있어서, 실리카 겔에 흡착된 식 IX-3 으로 나타내는 화합물을 용리하기 위한 용매로는, 실리카 겔을 용해하지 않고, 목적물을 용출할 수 있는 용매이면 특별히 제한되지 않지만, 예를 들어, 아세트산에틸, 시클로펜틸메틸에테르, 또는 tert-부틸메틸에테르를 들 수 있고, 바람직하게는 아세트산에틸을 들 수 있다.
본 방법은 바람직하게는, 예를 들어, 실시예 53 에 나타낸 방법에 의해 실시할 수 있다.
상기에 있어서 설명한 단당 또는 올리고당의 각 신규 제조 방법은, 식 XI 로 나타내는 올리고당의 제조 방법에 있어서 사용할 수 있다. 따라서, 본 발명의 일 양태에 있어서, 상기 단당 또는 올리고당의 신규 제조 방법을 포함하는, 식 XI 로 나타내는 올리고당의 제조 방법이 제공된다. 이 문맥에 있어서, 식 XI 로 나타내는 올리고당의 제조 방법은, 본 명세서의 ＜1＞ 에 있어서 상세히 서술한 방법과 동일해도 되고 상이한 것이어도 된다. 식 XI 로 나타내는 올리고당의 제조 방법이, 본 명세서의 ＜1＞ 에 있어서 상세히 서술한 방법과 상이한 경우, 당해 방법은, 상기 단당 또는 올리고당의 각 신규 제조 방법에 더하여, 식 XI 로 나타내는 올리고당의 이미 알려진 제조 방법을 이용 또는 응용함으로써, 단당 또는 올리고당 제조에 있어서의 통상적인 방법을 사용하거나, 또는 이와 같은 통상적인 방법을 응용함으로써, 및/또는, 본 명세서의 ＜1＞ 에 있어서 상세히 서술한 방법을 부분적으로 이용 또는 응용함으로써, 실시할 수 있다.
＜3. 신규 중간체＞
본 발명의 일 양태에 있어서, 비환원 말단에 α2,6-시알산 구조를 갖는 2 분기형 N-글리칸의 신규 순화학적 제조 방법에 있어서 유용한, 신규 중간체가 제공된다. 이하에 기재하는 중간체는, 상기에 있어서 상세히 서술한 식 XI 로 나타내는 올리고당의 제조에 있어서 유용하지만, 이 용도에 한정되지 않고, 모든 용도에 적용하는 것이 가능하다. 예를 들어, 본 발명에 있어서의 신규 중간체는, 식 XI 로 나타내는 올리고당 이외의 당의 제조에 있어서도 이용할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 이하의 식 III-6 :
[화학식 261]
Figure pct00262
으로 나타내는 화합물이 제공된다. 당해 화합물은, ＜1＞ 에 있어서 기재한 방법으로 제조할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 이하의 식 III-10 :
[화학식 262]
Figure pct00263
으로 나타내는 화합물이 제공된다. 당해 화합물은, ＜1＞ 에 있어서 기재한 방법으로 제조할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 이하의 식 V-1 :
[화학식 263]
Figure pct00264
로 나타내는 화합물이 제공된다. 당해 화합물은, ＜1＞ 에 있어서 기재한 방법으로 제조할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 이하의 식 V-2 :
[화학식 264]
Figure pct00265
로 나타내는 화합물이 제공된다. 당해 화합물은, ＜1＞ 에 있어서 기재한 방법으로 제조할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 이하의 식 V-3 :
[화학식 265]
Figure pct00266
으로 나타내는 화합물이 제공된다. 당해 화합물은, ＜1＞ 에 있어서 기재한 방법으로 제조할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 이하의 식 II-6 :
[화학식 266]
Figure pct00267
으로 나타내는 화합물이 제공된다. 당해 화합물은, ＜1＞ 에 있어서 기재한 방법으로 제조할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 이하의 식 VI-A :
[화학식 267]
Figure pct00268
(식 중, R1 은,
[화학식 268]
로 이루어지는 군에서 선택되는 기를 나타낸다) 로 나타내는 화합물이 제공된다. R1 이 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐아미노기인 화합물은, ＜1＞ 에 있어서 언급한 식 VI-1 로 나타내는 화합물에 대응하는 것이고, R1 이 프탈이미드기인 화합물은, ＜1＞ 에 있어서 언급한 식 VI-4 로 나타내는 화합물에 대응하는 것이다. 이들 화합물은, ＜1＞ 에 있어서 기재한 방법으로 제조할 수 있다. 한편, R1 이 NHAc 인 화합물은, 예를 들어, 실시예 44 에 있어서, 식 VI-6 으로 나타내는 화합물을 제조할 때의 중간체 (식 VI-7 로 나타내는 화합물) 로서 얻을 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 이하의 식 VI-2 :
[화학식 269]
Figure pct00270
로 나타내는 화합물이 제공된다. 당해 화합물은, ＜1＞ 에 있어서 기재한 방법으로 제조할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 이하의 식 VI-B :
[화학식 270]
Figure pct00271
(식 중, R2 는,
[화학식 271]
로 이루어지는 군에서 선택되는 기를 나타낸다) 로 나타내는 화합물이 제공된다. R2 가 2,2,2-트리클로로에톡시카르보닐아미노기인 화합물은, ＜1＞ 에 있어서 언급한 식 VI-3 으로 나타내는 화합물에 대응하는 것이고, R1 이 프탈이미드기인 화합물은, ＜1＞ 에 있어서 언급한 식 VI-5 로 나타내는 화합물에 대응하는 것이고, 및, R1 이 아세틸아미노기인 화합물은, ＜1＞ 에 있어서 언급한 식 VI-6 으로 나타내는 화합물에 대응하는 것이다. 이들 화합물은, ＜1＞ 에 있어서 기재한 방법으로 제조할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 이하의 식 VIII-5 :
[화학식 272]
Figure pct00273
로 나타내는 화합물이 제공된다. 당해 화합물은, ＜1＞ 에 있어서 기재한 방법으로 제조할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 이하의 식 X-1 :
[화학식 273]
Figure pct00274
로 나타내는 화합물이 제공된다. 당해 화합물은, ＜1＞ 에 있어서 기재한 방법으로 제조할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 이하의 식 X-2 :
[화학식 274]
Figure pct00275
로 나타내는 화합물이 제공된다. 당해 화합물은, ＜1＞ 에 있어서 기재한 방법으로 제조할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 이하의 식 X-3 :
[화학식 275]
Figure pct00276
으로 나타내는 화합물이 제공된다. 당해 화합물은, ＜1＞ 에 있어서 기재한 방법으로 제조할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 이하의 식 X-4 :
[화학식 276]
Figure pct00277
로 나타내는 화합물이 제공된다. 당해 화합물은, ＜1＞ 에 있어서 기재한 방법으로 제조할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 이하의 식 X-5 :
[화학식 277]
Figure pct00278
로 나타내는 화합물이 제공된다. 당해 화합물은, ＜1＞ 에 있어서 기재한 방법으로 제조할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 이하의 식 X-6 :
[화학식 278]
Figure pct00279
으로 나타내는 화합물이 제공된다. 당해 화합물은, ＜1＞ 에 있어서 기재한 방법으로 제조할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 이하의 식 X-7 :
[화학식 279]
Figure pct00280
로 나타내는 화합물이 제공된다. 당해 화합물은, ＜1＞ 에 있어서 기재한 방법으로 제조할 수 있다.
＜4. 당단백질 등의 신규 제조 방법＞
본 발명의 일 양태에 있어서, 비환원 말단에 α2,6-시알산 구조를 갖는 2 분기형 N-글리칸 (즉, 식 XI 로 나타내는 올리고당) 의 신규 순화학적 제조 방법, 또는, 단당 또는 올리고당의 신규 제조 방법을 포함하는 당해 N-글리칸의 신규 제조 방법을 이용한, 당단백질 등 (특히, 당사슬 리모델링 항체 혹은 그 Fc 영역 함유 분자, 또는 항체 약물 콘주게이트) 의 신규 제조 방법이 제공된다. 이하에 상세히 서술하는 바와 같이, 본 발명의 제조 방법에 의해 얻어진 식 XI 로 나타내는 올리고당은, 당단백질 (특히, 당사슬 리모델링 항체 혹은 Fc 영역 함유 분자, 또는 항체 약물 콘주게이트) 의 제조를 위해서 사용할 수 있지만 (WO2019/065964, WO2020/050406 등), 이것으로 한정되지 않고, 그 밖의 용도를 위해서 사용할 수도 있다.
최근, 불균일한 항체의 당사슬을, 효소 반응에 의해 리모델링하고, 관능기를 갖는 당사슬을 균일하게 도입하는 방법이 보고되어 있다 (ACS Chem. Biol. 2012, 7, 110-122, ACS Med. Chem. Lett. 2016, 7, 1005-1008). 이 당사슬 리모델링 기술을 사용하여, 부위 특이적으로 약물을 도입하고, 균일한 항체 약물 콘주게이트 (ADC) 를 합성하는 시도도 이루어져 있다 (Bioconjugate Chem. 2015, 26, 2233-2242, Angew. Chem. Int. Ed. 2016, 55, 2361-2367, US2016361436).
당사슬의 리모델링에서는, 먼저 가수분해 효소를 이용하여, 단백질 (항체 등) 에 부가되어 있는 불균일한 당사슬을 말단의 N-아세틸글루코사민 (GlcNAc) 만 남기고 절제하여, GlcNAc 가 부가된 균일한 단백질 부분을 조제한다 (이하, 「억셉터 분자」라고 한다). 다음으로, 별도 조제한 임의의 당사슬을 준비하고 (이하, 「도너 분자」라고 한다), 이 억셉터 분자와 도너 분자를, 당전이 효소를 사용하여 연결한다. 이로써, 임의의 당사슬 구조를 가진 균일한 당단백질을 합성할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 본 발명에 있어서의 신규 제조 방법을 이용하여 제조된 식 XI 로 나타내는 올리고당은, 그 말단 구조를 활성화함으로써, 상기 균일한 당단백질 (특히, 당사슬 리모델링 항체 또는 그 Fc 영역 함유 분자) 을 합성할 때의 도너 분자로서 사용할 수 있다.
본 발명에 있어서, 「당사슬」이란, 2 개 이상의 단당이 글리코시드 결합에 의해 결합된 구조 단위를 의미한다. 구체적인 단당이나 당사슬을, 예를 들어"GlcNAc-", "SG-" 와 같이 약호로서 표기하는 경우가 있다. 구조식 중에서 이들 약호로 기재한 경우, 환원 말단에서 다른 구조 단위와의 글리코시드 결합에 귀속되는 산소 원자 또는 질소 원자는, 특별한 정의가 있는 경우를 제외하고, 당해 당사슬을 나타내는 약호에는 포함되지 않는 것으로서 표시된다.
본 발명에 있어서 당사슬의 기본 단위가 되는 단당의 기재는, 따로 정하는 경우를 제외하고, 편의상, 그 고리 구조에 있어서 고리를 구성하는 산소 원자에 결합하고, 또한, 하이드록시기 (또는 글리코시드 결합에 귀속되는 산소 원자) 와 직접 결합한 탄소 원자를 1 위치 (시알산에 있어서만 2 위치) 로서 표기한다. 실시예 화합물의 명칭은, 화학 구조 전체로서 부가된 것으로, 이 룰은 반드시 적용되지는 않는다.
본 발명에 있어서, 당사슬을 기호 (예를 들어, SG, GlcNAc 등) 로서 기재하는 경우, 별도로 정의되는 경우를 제외하고, 환원 말단의 탄소까지를 당해 기호에 포함하는 것으로 하고, N- 또는 O-글리코시드 결합에 귀속되는 N 또는 O 는, 당해 기호에는 포함되지 않는 것으로 한다.
SGP (α2,6-SGP) 는, Sialylglycopeptide 의 약어로, N 결합형 당펩티드의 대표적인 것이다. 본 명세서에 있어서, SGP 의 당사슬 부분을 SG 로 표기하고, SG 의 환원 말단의 GlcNAc 가 하나 결손된 당사슬을 SG(10) 으로 표기한다. SG(10) 은, 식 XI 로 나타내는 올리고당과 동일한 의미이다.
본 발명에 있어서, 「당단백질」이란, 단백질을 구성하는 아미노산의 일부에 당사슬이 결합한 것을 의미한다. 본 발명에 있어서 「당단백질」은, 예를 들어, 당사슬 리모델링 항체 또는 그 Fc 영역 함유 분자이지만, 이들로 한정되지 않는다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 「당단백질」은, 당사슬 리모델링 항체 또는 그 Fc 영역 함유 분자이다. 따라서, 본 발명의 일 양태에 있어서, 본 발명에 있어서의 신규 제조 방법을 포함하고, 또한 얻어진 식 XI 로 나타내는 올리고당으로부터, 환원 말단이 활성화된 N-아세틸글루코사민 (GlcNAc) 을 포함하는 당사슬 도너 분자를 얻는 공정, 및, 상기 당사슬 도너 분자와, N297 결합 당사슬로서 푸코오스가 부가되어 있어도 되는 코어 GlcNAc 를 갖는 항체 또는 그 Fc 영역 함유 분자인 억셉터 분자를 반응시키는 공정을 포함하는, 당사슬 리모델링 항체 또는 그 Fc 영역 함유 분자의 제조 방법이 제공된다. 본 발명에 있어서, 「코어 GlcNAc」란, N297 결합 당사슬의 환원 말단의 GlcNAc 이다.
본 발명에 있어서, 「당사슬 도너 분자」란, 억셉터 분자에 당사슬을 부여하는 역할을 담당하는 분자를 의미한다.
본 발명에 있어서, 「환원 말단이 활성화된 GlcNAc」란, 환원 말단이 우수한 탈리기를 갖는 GlcNAc 를 의미한다. 「환원 말단이 활성화된 GlcNAc」로는, 예를 들어, 옥사졸린화된 GlcNAc, 할로겐화된 GlcNAc, 페닐화된 GlcNAc, 파라니트로페닐화된 GlcNAc, 아노머 위치가 디메톡시트리아진화된 GlcNAc (4,6-디메톡시-1,3,5-트리아진-2-일글리코시드 (DMT 당)) 를 들 수 있고, 바람직하게는 옥사졸린화된 GlcNAc, 불소화된 GlcNAc 를 들 수 있다. 예를 들어, 옥사졸린화된 GlcNAc 를 포함하는 당사슬 도너 분자는, 이하의 식 XII :
[화학식 280]
Figure pct00281
로 나타내는 화합물 (「SG(10)-Ox」라고도 한다) 이다.
본 발명에 있어서, 「당사슬 도너 분자」의 비환원 말단은 화학 수식되어 있어도 된다. 화학 수식에 의해 부가되는 기나, 화학 수식에 관여하는 화학 반응, 화학 수식되는 당사슬 도너 상의 관능기 등은, 그 목적에 따라서 적절히 선택할 수 있다. 본 발명의 일 양태에 있어서, 당사슬 도너 분자는, 그 비환원 말단에 위치하는 시알산의 2 위치의 카르복실기를, 말단에 아미노기를 갖는 화합물과 반응시켜, 아미드 결합을 생성시킴으로써 화학 수식되어 있어도 된다. 말단에 아미노기를 갖는 화합물로는 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어, 다른 일방의 말단에 아지드기를 갖는 화합물을 들 수 있고, 바람직하게는 이하의 식 :
[화학식 281]
Figure pct00282
으로 나타내는 11-아지드-3,6,9-트리옥사운데칸-1-아민을 들 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 「당사슬 도너 분자」는, 환원 말단이 옥사졸린화되고, 비환원 말단에 아지드기 함유기가 부가된 아지드 당사슬 옥사졸린체이다. 아지드 당사슬 옥사졸린체는 WO2018/003983 에 기재된 방법으로 준하여 합성할 수 있다. 일례로서 [N3-PEG(3)]2-SG(10)-Ox (WO2018/003983 에 기재된 화합물 1-10) 의 합성 방법을 다음 식에 나타낸다.
[화학식 282]
Figure pct00283
본 발명에 있어서, 「억셉터 분자」는, 당사슬 도너 분자로부터 당사슬을 수취하는 분자를 의미한다. 「억셉터 분자」는, 당사슬 도너 분자로부터 당사슬을 수취하는 것이 가능한 분자이면 특별히 한정되지 않지만, 바람직하게는 항체로부터 당사슬의 대부분을 절단한 당사슬 절단 항체 또는 그 Fc 영역 함유 분자를 들 수 있고, 보다 바람직하게는 코어 GlcNAc 를 갖는 항체 또는 그 Fc 영역 함유 분자를 들 수 있다. 당사슬 절단 항체에 있어서 부분적으로 절단되는 당사슬은, N 결합형 당사슬이나 O 결합형 당사슬이고, 바람직하게는 N 결합형 당사슬이다.
N 결합형 당사슬은 N 글리코시드 결합, O 결합형 당사슬은 O 글리코시드 결합에 의해, 항체의 아미노산 측사슬과 결합하고 있다.
「억셉터 분자」로서의 항체는, 바람직하게는 IgG 이고, 더욱 바람직하게는 IgG1, IgG2 또는 IgG4 이다.
IgG 는 그 중사슬의 Fc 영역에 있어서의 297 번째의 아스파라긴 잔기 (이하, 「Asn297 또는 N297」라고 한다) 에 잘 보존된 N 결합형 당사슬 (이하, 「Asn297 결합 당사슬 또는 N297 결합 당사슬」이라고 한다) 을 가지고 있고, 항체 분자의 활성이나 동태 등에 기여하는 것이 알려져 있다 (Eon-Duval, A. et al, Biotechnol. Prog. 2012, 28, 608-622, Sanglier-Cianferani, S., Anal. Chem. 2013, 85, 715-736).
IgG 의 정상 영역에 있어서의 아미노산 서열은 잘 보존되어 있고, Edelman 외의 보고 (Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 63, 78-85, (1969)) 에 있어서, 각각의 아미노산이 EU 번호 (EU INDEX) 로 특정되어 있다. 예를 들어, Fc 영역에 있어서 N 결합형 당사슬이 부가되는 Asn297 은, EU 번호에 있어서 297 위에 상당하는 것으로, 분자의 단편화나 영역 결손에 의해 실제의 아미노산 위치가 변동된 경우라도 EU 번호로 표시함으로써 아미노산이 일의적으로 특정된다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 「억셉터 분자」는, N297 결합 당사슬로서 코어 GlcNAc 를 갖는 항체 또는 그 Fc 영역 함유 분자이다. N297 결합 당사슬로서의 코어 GlcNAc 에는, 그 밖의 단당 또는 당사슬이 부가되어 있어도 되고, 예를 들어, 푸코오스가 부가되어 있어도 된다. 따라서, 본 발명의 일 양태에 있어서 「억셉터 분자」는, N297 결합 당사슬로서 푸코오스가 부가되어 있어도 되는 코어 GlcNAc 를 갖는 항체 또는 그 Fc 영역 함유 분자이다.
당사슬 도너 분자와 N297 결합 당사슬로서 푸코오스가 부가되어 있어도 되는 코어 GlcNAc 를 갖는 항체 또는 그 Fc 영역 함유 분자인 억셉터 분자를 반응시키는 공정은, 반응이 진행되는 한, 모든 반응 방법이나 반응 조건을 사용할 수 있다.
본 발명에 있어서, 당사슬 리모델링 항체 또는 그 Fc 영역 함유 분자는, 예를 들어, WO2018/003983 등에 기재된 방법에 준하여, 다음 식에 나타내는 방법으로 제조할 수 있다.
[화학식 283]
(D-1 공정)
본 공정은, 목적으로 하는 항체에 대해, 공지된 효소 반응을 사용하여 항체의 아미노산 서열 297 번째의 아스파라긴에 결합하는 N 결합형 당사슬 (N297 결합 당사슬) 의 환원 말단 키토비오스 구조의 GlcNAcβ1-4 GlcNAc 간의 글리코시드 결합을 가수분해에 의해 절단하여, 당사슬 절단 항체를 제조하는 공정이다. 목적으로 하는 항체 (1d) (10 mg/mL) 를 완충액 (인산 완충액 등) 중, 0 ℃ 내지 40 ℃까지에 있어서, 야생형 EndoS 효소 등의 가수분해 효소를 사용하여 환원 말단의 키토비오스 구조의 GlcNAcβ1 과 4 GlcNAc 사이의 글리코시드 결합의 가수분해 반응을 실시한다. 반응 시간은 10 분 내지 72 시간, 바람직하게는 1 시간 내지 6 시간이다. 야생형 EndoS 효소는 항체 (1d) 100 mg 에 대해, 0.1 mg 내지 10 mg, 바람직하게는 0.1 mg 내지 3 mg 을 사용한다. 반응 종료 후, 어피니티 크로마토그래피 (HiTrap rProtein A FF (5 ml) (GE 헬스케어 제조)) 및/또는 하이드록시아파타이트 칼럼 (Bio-Scale Mini CHT Type I 카트리지 (5 ml) (BIO-RAD 제조)) 으로 정제하여, (Fucα1,6)GlcNAc 항체 (2d) 를 얻는다.
(D-2 공정)
본 공정은, D-1 공정에서 얻어진 (Fucα1,6)GlcNAc 항체 (2d) 에 대해, 공지된 효소 반응을 사용하여 아지드기를 포함하는 PEG 링커를 갖는 SG 형 당사슬 옥사졸린체 (「[N3-PEG(3)]2-SG(10)-Ox」) 를 결합시켜, 당사슬 리모델링 항체 (3d) 를 제조하는 공정이다. 또한, 아지드기를 포함하는 PEG 링커를 갖는 SG 형 당사슬 옥사졸린체 (「[N3-PEG(3)]2-SG(10)-Ox」) 는, 상기와 같이, WO2018/003983 에 기재된 화합물 1-10 의 합성 방법에 준하여 합성할 수 있다.
항체 (2d) 를 완충액 (인산 완충액 등) 중, 0 ℃ 내지 40 ℃ 까지에 있어서, EndoS (D233Q/Q303L) 등의 당전이 효소 존재하, 아지드기를 포함하는 PEG 링커를 갖는 SG 형 당사슬 옥사졸린체 (「[N3-PEG(3)]2-SG(10)-Ox」) 와 반응시킴으로써, 당사슬 전이 반응을 실시한다. 반응 시간은 10 분 내지 72 시간, 바람직하게는 1 시간 내지 6 시간이다. EndoS 효소 (D233Q/Q303L) 는 항체 100 mg 에 대해, 1 mg 내지 10 mg, 바람직하게는 1 mg 내지 3 mg 을 사용하고, 아지드기를 포함하는 PEG 링커를 갖는 SG 형 당사슬 옥사졸린체 (「[N3-PEG(3)]2-SG(10)-Ox」) 는 2 당량 내지 과잉 당량, 바람직하게는 4 당량 내지 20 당량 사용한다. 반응 종료 후, 어피니티 크로마토그래피 (HiTrap rProtein A FF (5 ml) (GE 헬스케어 제조)) 및 하이드록시아파타이트 칼럼 (Bio-Scale Mini CHT Type I 카트리지 (5 ml) (BIO-RAD 제조)) 으로 정제하여, 당사슬 리모델링 항체 (3d) 를 얻는다.
상기 당사슬 리모델링 항체의 조제에 있어서, 항체 수용액의 농축, 농도 측정, 그리고 버퍼 교환은, WO2020/050406 에 기재된 공통 조작 A 에서 C 에 준하여 실시할 수 있다.
상기와 같이, 본 발명에 있어서의 「당사슬 도너 분자」의 비환원 말단에 아지드기 함유 수식기가 부가되어 있는 경우, 본 발명에 있어서의 당사슬 리모델링 항체 또는 그 Fc 영역 함유 분자의 제조 방법은, 추가로, 아지드기 (N3-) 에 알킨 구조를 갖는 분자와 반응시키는 공정을 포함하고 있어도 된다. 당해 반응 공정은, 당사슬 도너 분자와 억셉터 분자를 반응시키는 공정의 전후 어디에서 실시해도 된다. 본 발명에 있어서, 상기 「알킨 구조를 갖는 분자」는, 알킨 구조를 갖는 한 어떠한 분자여도 되지만, 예를 들어, 화학 요법제, 분자 표적약, 면역 활성화제, 독소, 항균제, 항바이러스제, 진단용 약제, 단백질, 펩티드, 아미노산, 핵산, 항원, 비타민 및 호르몬을 들 수 있다. 본 발명에 있어서, 「아지드기 (N3-) 에 알킨 구조를 갖는 분자와 반응시키는 공정」은, 반응이 진행되는 한, 모든 반응 방법이나 반응 조건을 사용할 수 있고, 예를 들어, 공지된 방법 (WO2019/065964, WO2020/050406 등) 에 준하여 실행할 수 있다. 예를 들어, 「아지드기 (N3-) 에 알킨 구조를 갖는 분자와 반응시키는 공정」은, 상기 D-2 공정에서 얻어진 당사슬 리모델링 항체 (3d) 와 알킨 구조를 갖는 분자를 SPAAC (strain-promoted azide-alkyne cycloaddition : J. Am. Chem. Soc. 2004, 126, 15046-15047) 반응에 의해 결합시킴으로써, 실행할 수 있다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 또한, 상기 당사슬 리모델링 항체 또는 그 Fc 영역 함유 분자의 제조 방법을 포함하는, 항체 약물 콘주게이트의 제조 방법이 제공된다. 본 발명에 있어서, 「항체 약물 콘주게이트」에 포함되는 항체 및 약물은, 소기의 효과를 발휘한다 한 한정되지 않고, 목적에 따라서 어떠한 것도 사용할 수 있다. 본 발명에 있어서, 항체 약물 콘주게이트의 제조 방법으로는, 예를 들어, 상기 D-1 공정, D-2 공정, 및 SPAAC 반응을 포함하는 제조 방법을 들 수 있지만, 이것으로 한정되지 않는다.
본 발명에 있어서, 「항체 약물 콘주게이트」란, 항체에, 약물을, 링커를 개재하여 결합시킨 복합체를 말한다. 본 발명의 방법을 사용함으로써, 부위 특이적으로 약물을 도입하여, 균일한 항체 약물 콘주게이트를 합성할 수 있다.
본 발명에 있어서, 「항체 약물 콘주게이트」는, 다음 식 (XIII) :
[화학식 284]
Figure pct00285
으로 나타낸다. m1 은 1 내지 10 의 범위이고, 항체 약물 콘주게이트에 있어서의 항체 1 분자 당 약물 결합수를 나타낸다. Ab 는, 항체 또는 그 항체의 기능성 단편을 나타내고, L 은, Ab 와 D 를 연결하는 링커를 나타내고, D 는 약물을 나타낸다.
본 발명에 있어서 사용되는 항체로는, 풀 보디, 항체의 기능성 단편을 들 수 있다. 「항체의 기능성 단편」이란, 「항체의 항원 결합 단편」이라고도 불리고, 항원과의 결합 활성을 갖는 항체의 부분 단편을 의미하고 있으며, Fab, F(ab')2, Fv, scFv, diabody, 선상 항체 및 항체 단편으로부터 형성된 다특이성 항체 등을 포함한다. 또, F(ab')2 를 환원 조건하에서 처리한 항체의 가변 영역의 1 가의 단편인 Fab' 도 항체의 항원 결합 단편에 포함된다. 단, 항원과의 결합능을 가지고 있는 한 이들 분자로 한정되지 않는다. 또, 이들 항원 결합 단편에는, 항체 단백질의 전장 분자를 적당한 효소로 처리한 것 뿐만 아니라, 유전자 공학적으로 개편된 항체 유전자를 사용하여 적당한 숙주 세포에 있어서 산생된 단백질도 포함된다.
본 발명에 있어서, 항체는, 어느 종에서 유래해도 되지만, 바람직하게는 인간, 래트, 마우스 및 토끼를 예시할 수 있다. 인간 이외의 종에서 유래하는 경우에는, 주지된 기술을 사용하여, 키메라화 또는 인간화하는 것이 바람직하다. 또, 본 발명에 있어서, 항체는 폴리클로날 항체여도, 모노클로날 항체여도 되지만, 모노클로날 항체가 바람직하다. 모노클로날 항체에는, 래트 항체, 마우스 항체, 토끼 항체 등의 비인간 동물 유래의 모노클로날 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 그들의 기능성 단편, 또는 그들의 수식체가 포함된다.
본 발명에 있어서 사용되는 항체로는, 소기의 효과를 발휘하는 한 한정되지 않지만, 예를 들어, 항 HER2 항체, 항 HER3 항체, 항 DLL3 항체, 항 FAP 항체, 항 CDH11 항체, 항 CDH6 항체, 항 A33 항체, 항 CanAg 항체, 항 CD19 항체, 항 CD20 항체, 항 CD22 항체, 항 CD30 항체, 항 CD33 항체, 항 CD56 항체, 항 CD70 항체, 항 CD98 항체, 항 TROP2 항체, 항 CEA 항체, 항 Cripto 항체, 항 EphA2 항체, 항 G250 항체, 항 MUC1 항체, 항 GPNMB 항체, 항 Integrin 항체, 항 PSMA 항체, 항 Tenascin-C 항체, 항 SLC44A4 항체, 항 Mesothelin 항체, 항 ENPP3 항체, 항 CD47 항체, 항 EGFR 항체, 항 GPR20 항체 또는 항 DR5 항체를 들 수 있다.
본 발명의 항체 약물 콘주게이트의 제조에 사용되는 항체는, 이 분야에서 통상 실시되는 방법을 사용하여, 항원이 되는 폴리펩티드를 동물에 면역시키고, 생체내에 산생되는 항체를 채취, 정제함으로써 얻을 수 있다. 항원의 유래는 인간으로 한정되지 않고, 마우스, 래트 등의 인간 이외의 동물에서 유래하는 항원을 동물에 면역시킬 수도 있다. 이 경우에는, 취득된 이종 항원에 결합하는 항체와 인간 항원의 교차성을 시험함으로써, 인간의 질환에 적용 가능한 항체를 선별할 수 있다.
또, 공지된 방법 (예를 들어, Kohler and Milstein, Nature (1975) 256, p.495-497, Kennett, R. ed., Monoclonal Antibodies, p.365-367, Plenum Press, N.Y. (1980)) 에 따라서, 항원에 대한 항체를 산생하는 항체 산생 세포와 골수종 세포를 융합시키는 것에 의해 하이브리도마를 수립하고, 모노클로날 항체를 얻을 수도 있다.
또한, 항원은 항원 단백질을 코드하는 유전자를 유전자 조작에 의해 숙주 세포에 산생시키는 것에 의해 얻을 수 있다.
본 발명의 항체 약물 콘주게이트의 제조에 사용되는 인간화 항체는 공지된 방법 (예를 들어, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 81, 6851-6855, (1984), Nature (1986) 321, p.522-525, WO90/07861) 에 따라서 취득할 수 있다.
예를 들어, 항 HER2 항체 (US5821337, WO2004/008099, WO2020/050406 등), 항 CD33 항체 (WO2014/057687, WO2020/050406 등), 항 EphA2 항체 (WO2009/028639, WO2020/050406 등), 항 CDH6 항체 (WO2018/212136, WO2020/050406 등), 항 CD70 항체 (WO2004/073656, WO2007/038637 등), 항 TROP2 항체 (WO2015/098099 등), 항 EGFR 항체 (WO1998/050433, WO2002/092771 등) 는, 공지된 수단에 의해 취득할 수 있다.
본 발명에 있어서 사용되는 약물로는, 소기의 효과를 발휘한다 한 한정되지 않지만, 약학적으로 활성인 화합물, 예를 들어, 화학 요법제, 분자 표적약, 면역 활성화제, 독소, 항균제, 항바이러스제, 진단용 약제, 단백질, 펩티드, 아미노산, 핵산, 항원, 비타민, 호르몬 등을 들 수 있다.
약물 D 는, 예를 들어, 다음 식 :
[화학식 285]
(식 중, 아스테리스크는 링커 L 과 결합하고 있는 것을 나타낸다) 으로 나타낸다.
본 발명에 있어서, 항체 Ab 와 약물 D 를 연결하는 링커 L 은, 다음의 식 :
-Lb-La-Lp-Lc-*
(여기서, 아스테리스크는, 약물 D 와 결합하고 있는 것을 나타낸다) 으로 나타낸다.
Lp 는, 표적 세포에 있어서 절단 가능한 아미노산 서열로 이루어지는 링커를 나타내거나 또는 존재하지 않고, 그 구체예로는, 예를 들어, -GGFG-, -GGPI-, -GGVA-, -GGFM-, -GGVCit-, -GGFCit-, -GGICit-, -GGPL-, -GGAQ- 또는 -GGPP- 를 들 수 있다.
La 는,
-C(=O)-(CH2CH2)n2-C(=O)-,
-C(=O)-(CH2CH2)n2-CH2-C(=O)-,
-C(=O)-(CH2CH2)n2-C(=O)-NH-(CH2CH2)n3-C(=O)-,
-C(=O)-(CH2CH2)n2-C(=O)-NH-(CH2CH2)n3-CH2-C(=O)-,
-C(=O)-(CH2CH2)n2-C(=O)-NH-(CH2CH2O)n3-CH2-C(=O)-,
-(CH2)n4-O-C(=O)-, 또는
-(CH2)n9-C(=O)-
(여기서, n2 는 1 ∼ 3 의 정수를 나타내고, n3 은 1 ∼ 5 의 정수를 나타내고, n4 는 0 ∼ 2 의 정수를 나타내고, n9 는 2 ∼ 7 의 정수를 나타낸다) 에서 선택되는 어느 하나를 나타낸다.
Lb 는, La 와 Ab 의 당사슬 또는 리모델링된 당사슬을 결합하는 스페이서를 나타내고, 그 구체예로는, 예를 들어,
[화학식 286]
또는
[화학식 287]
(상기에서 나타내는 Lb 의 구조식에 있어서, 아스테리스크는 La 와 결합하고 있는 것을 나타내고, 파선은 Ab 의 당사슬 또는 리모델링된 당사슬과 결합하고 있는 것을 나타낸다) 을 들 수 있다.
Lc 는, -NH-CH2-, -NH-B-CH2-O(C=O)- 를 나타내거나 또는 존재하지 않는다. 여기서, B 는, 1,4-페닐기, 2,5-피리딜기, 3,6-피리딜기, 2,5-피리미딜기 또는 2,5-티에닐기이다.
이하 본 발명을 실시예에서 설명하지만, 본 발명은 이들로 한정되는 것은 아니다. 또한, 이하에 있어서, 「화합물 I-1」 또는 합성 스킴 중의 「I-1」은, 「식 I-1 로 나타내는 화합물」에 대응하는 것을 나타내고, 그 이후의 화합물 번호에 대해서도 동일하다.
실시예
이하의 실시예에 있어서, 실온은 15 ℃ 내지 35 ℃ 를 나타낸다. 실리카 겔 크로마토그래피는 Biotage Sfar HC D (20 ㎛, Biotage 제조), 역상 칼럼 크로마토그래피는 Universal Column ODS Premium 30 ㎛ L 사이즈 (야마젠 주식회사 제조) 와 Inject column ODS L 사이즈 (야마젠 주식회사 제조), 분취 HPLC 는 Agilent Preparative HPLC System (Agilent Technology 제조) 를 사용하여 실시하였다. 분취 칼럼은, XBridge Prep OBD (5 ㎛, C18, 130 Å, 250×30 mm, Waters 제조) 를 사용하였다.
각종 스펙트럼 데이터의 측정에는 이하의 기기를 사용하였다. 1H-NMR 및 13C-NMR 스펙트럼은, JEOL 제 ECZ500R 및 ECX400P 를 사용하여 측정하였다. 매스 스펙트럼은 Shimadzu LCMS-2010 및 LCMS-2020 (시마즈 제작소 제조), XEVO Q-Tof MS (Waters), Q-Exactive (Thermo Fisher) 를 사용하여 측정하였다.
＜화합물 III-13 의 합성＞
화합물 III-13 을, 이하의 합성 스킴 1A 에 따라서 합성하였다.
[합성 스킴 1A]
[화학식 288]
Figure pct00289
실시예 1 :
1,2:5,6-비스-O-(1-메틸에틸리덴)-3-O-(2-나프탈레닐메틸)-α-D-글루코푸라노스 (화합물 I-2)
[화학식 289]
Figure pct00290
(소공정 1-1)
수소화나트륨 (55.32 g, 1.38 mol, 함량 : 50-72 ％) 의 테트라하이드로푸란 (900 mL) 용액을 0 ℃ 로 냉각 후, 1,2:5,6-비스-O-(1-메틸에틸리덴)-α-D-글루코푸라노스 (화합물 I-1) (300.00 g, 1.15 mol) 의 테트라하이드로푸란 (1.05 L) 용액을 1 시간에 걸쳐 적하하였다. 그 후, 25 ℃ 로 승온하여, 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논 (150 mL), 2-브로모메틸나프탈렌 (280.31 g, 1.27 mol) 을 첨가하였다. 25 ℃ 에서 6 시간 교반 후, HPLC 로 반응의 종료를 확인하고, 에틸렌디아민 (무수) (13.85 g, 230.52 mmol) 을 첨가하고, 추가로 1 시간 교반하였다. 이 용액을 0 ℃ 로 냉각하고, 10 ％ 시트르산 수용액 (1.2 L) 를 1 시간에 걸쳐 첨가하였다. 반응액을 헵탄 (3 L) 으로 희석하고, 유기층과 수층으로 분리하였다. 유기층을 물 (900 mL) 로 세정 후, 감압 조건하, 액량이 900 mL 에 도달할 때까지 농축하였다. 추가로 아세토니트릴 (3 L) 을 첨가하고, 재차 액량이 900 mL 에 도달할 때까지 농축하여, 조체 (粗體) 의 1,2:5,6-비스-O-(1-메틸에틸리덴)-3-O-(2-나프탈레닐메틸)-α-D-글루코푸라노스 (화합물 I-2) 를 아세토니트릴 용액으로서 얻었다. 이것을 다음 공정에 그대로 사용하였다.
실시예 2 :
3-O-(2-나프탈레닐메틸)-D-글루코피라노오스 (화합물 I-3)
[화학식 290]
Figure pct00291
(소공정 1-2)
실시예 1 에서 얻어진 조체의 화합물 I-2 의 용액에 아세토니트릴 (1.5 L), 물 (600 mL), 농염산 (17.51 g, 172.89 mmol) 을 첨가하고, 55 ℃ 에서 18.5 시간 교반하였다. HPLC 로 반응의 종료를 확인 후, 반응액을 0 ℃ 로 냉각하고, 4 규정 수산화나트륨 수용액 (43.22 mL) 으로 계내의 pH 를 6.25 로 조정하였다. 반응액을 헵탄 (900 mL) 으로 희석하고, 아세토니트릴층과 헵탄층으로 분리하였다. 아세토니트릴층에 아세트산에틸 (2.4 L), 물 (600 mL) 를 첨가하고 분액하여, 유기층 1 과 수층을 얻었다. 수층에 재차, 아세트산에틸 (1.5 L), 테트라하이드로푸란 (1.5 L) 혼합 용액을 첨가하고 분액하여, 유기층 2 와 수층을 얻었다. 유기층 1 과 2 를 혼합하여, 포화 식염수 (600 mL) 로 세정 후, 감압 조건하, 액량이 1.5 L 에 도달할 때까지 농축하였다 (농축 단계에서 결정의 석출을 확인). 추가로 아세트산에틸 (4.5 L) 을 첨가하고, 재차 액량이 3 L 에 도달할 때까지 농축하였다. 이 현탁액에 아세트산에틸 (1.5 L), 시클로펜틸메틸에테르 (1.5 L) 를 첨가하고, 55 ℃ 에서 1 시간 교반하였다. 헵탄 (3 L) 을 1.5 시간에 걸쳐 적하하고, 1 시간 교반 후, 0 ℃ 로 냉각하였다. 그 후, 석출된 결정을 여과하고, 결정을 0 ℃ 로 냉각한 아세트산에틸 (1.2 L), 헵탄 (600 mL) 혼합 용액으로 세정하였다. 얻어진 결정을 감압하 40 ℃ 에서 건조하여, 3-O-(2-나프탈레닐메틸)-D-글루코피라노오스 (화합물 I-3) (356.95 g, 수율 96.7 ％, HPLC 면적 : 98.47 ％) 를 얻었다.
Figure pct00292
실시예 3 :
2,4,6-트리-O-아세틸-3-O-(2-나프탈레닐메틸)-D-글루코피라노오스 (화합물 I-5)
[화학식 291]
Figure pct00293
(소공정 1-3 ＆ 1-4)
3-O-(2-나프탈레닐메틸)-D-글루코피라노오스 (화합물 I-3) (150.00 g, 468.25 mmol) 의 테트라하이드로푸란 (675 mL) 용액에, 트리에틸아민 (236.92 g, 2.34 mol), 4-디메틸아미노피리딘 (0.29 g, 2.34 mmol) 을 첨가하고 0 ℃ 로 냉각 후, 무수 아세트산 (195.99 g, 1.92 mol) 을 30 분에 걸쳐 적하하였다. 그 후, 25 ℃ 로 승온하여, 3 시간 교반 후, HPLC로, 1, 2,4,6-테트라-O-아세틸-3-O-(2-나프탈레닐메틸)-D-글루코피라노오스 (화합물 I-4) 가 생성된 것을 확인하였다. 반응액을 10 ℃ 로 냉각하고, 1-메틸피페라진 (60.97 g, 608.73 mmol) 을 첨가하였다. 35 ℃ 에서 18 시간 교반 후, HPLC 로 반응의 종료를 확인하고, 0 ℃ 로 냉각하였다. 6 규정 염산 수용액 (480 mL) 으로 pH 를 6.36 으로 조정 후, 헵탄 (375 mL) 으로 희석하여, 유기층과 수층을 분리하였다. 유기층을 포화 중조수 (450 mL), 물 (450 mL) 로 세정 후, 감압 조건하, 액량이 450 mL 에 도달할 때까지 농축하였다. 아세트산에틸 (2.25 L) 을 첨가하고, 재차 액량이 450 mL 에 도달할 때까지 농축, 추가로 또 한번 동일한 조작을 반복하였다. 이 용액에 디클로로메탄 (2.25 L) 을 첨가하고, 액량이 450 mL 에 도달할 때까지 농축, 추가로 또 한번 동일한 조작을 반복하여, 조체의 2,4,6-트리-O-아세틸-3-O-(2-나프탈레닐메틸)-D-글루코피라노오스 (화합물 I-5) 를 디클로로메탄 용액으로서 얻었다. 이것을 다음 공정에 그대로 사용하였다.
실시예 4 :
2,4,6-트리-O-아세틸-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-1-O-(2,2,2-트리클로로에탄이미도일)-D-글리세로-헥소피라노스 (화합물 I-6)
[화학식 292]
Figure pct00294
(소공정 1-5)
실시예 3 에서 얻어진 조체의 2,4,6-트리-O-아세틸-3-O-(2-나프탈레닐메틸)-D-글루코피라노오스 (화합물 I-5) 의 용액에, 디클로로메탄 (450 mL), 트리클로로아세토니트릴 (338.03 g, 2.34 mol) 을 첨가하고 0 ℃ 로 냉각 후, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센 (5.70 g, 37.46 mmol) 을 적하하였다. 0 ℃ 에서 14.5 시간 교반 후, HPLC 로 반응의 종료를 확인하고, 아세트산 (2.25 g, 37.46 mmol) 을 첨가하였다. 이 용액에 실리카 겔 60N (구상, 중성) (150 g) 을 첨가하고 1.5 시간 교반한 후, 여과하였다. 실리카 겔을 디클로로메탄 (1.5 L) 로 세정하고, 여과액을 감압 조건하, 액량이 450 mL 에 도달할 때까지 농축하였다. 추가로 디클로로메탄 (1.5 L) 를 첨가하고, 액량이 450 mL 에 도달할 때까지 농축하여, 조체의 2,4,6-트리-O-아세틸-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-1-O-(2,2,2-트리클로로에탄이미도일)-D-글리세로-헥소피라노스 (화합물 I-6) 를 디클로로메탄 용액으로서 얻었다. 이것을 다음 공정에 그대로 사용하였다.
실시예 5 :
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-4-O-{2,4,6-트리-O-아세틸-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-글루코피라노실}-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-1)
[화학식 293]
Figure pct00295
(소공정 1-6)
실시예 4 에서 얻어진 조체의 2,4,6-트리-O-아세틸-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-1-O-(2,2,2-트리클로로에탄이미도일)-D-글리세로-헥소피라노스 (화합물 I-6) 의 용액에, 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 II-1) (276.66 g, 468.25 mmol), 디클로로메탄 (4.2 L), 몰레큘러시브 4A (83.00 g) 을 첨가하고, -5 ℃ 로 냉각하였다. 이 현탁액에 트리플루오로메탄술폰산트리메틸실릴 (10.41 g, 46.83 mmol) 을 20 분에 걸쳐 적하한 후, 3 시간 교반하였다. HPLC 로 반응의 종료를 확인 후, 트리에틸아민 (23.69 g, 234.13 mmol) 을 첨가하였다. 현탁액을 여과 후, 아세트산에틸 (2.8 L) 로 세정하고, 여과액을 감압 조건하, 액량이 1.4 L 에 도달할 때까지 농축하였다. 추가로 아세트산에틸 (4.2 L) 를 첨가하고, 액량이 1.4 L 에 도달할 때까지 농축, 추가로 또 한번 동일한 조작을 반복하였다. 이 용액에 아세트산에틸 (2.8 L) 를 첨가하고, 포화 중조수 (830 mL), 물 (830 mL) 로 세정하고, 유기층을 감압 조건하, 액량이 830 mL 에 도달할 때까지 농축하였다. 추가로 2-프로판올 (4.2 L) 를 첨가하고, 액량이 1.4 L 에 도달할 때까지 농축 후, 현탁액을 65 ℃ 로 온도 조정하였다. 아세트산에틸 (830 mL) 를 첨가하여 65 ℃ 에서 2 시간 교반한 후, 2-프로판올 (5.53 L) 를 2 시간에 걸쳐 적하하였다. 이 현탁액을 0 ℃ 로 냉각한 후, 결정을 여과하고, 결정을 0 ℃ 로 냉각한 2-프로판올 (1.4 L) 로 세정하였다. 얻어진 결정을 감압하 40 ℃ 에서 건조하여, 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-4-O-{2,4,6-트리-O-아세틸-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-글루코피라노실}-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-1) (355.34 g, 수율 90.5 ％, HPLC 면적 : 94.46 ％) 의 조체를 얻었다.
얻어진 조체의 화합물 III-1 (350.00 g) 에 메틸이소부틸케톤 (2.1 L) 를 첨가하고, 50 ℃ 에서 용해한 후, 에틸시클로헥산 (1.4 L) 를 1 시간에 걸쳐 적하하였다. 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-4-O-{2,4,6-트리-O-아세틸-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-글루코피라노실}-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-1) 의 종정 (70.00 mg) 을 첨가하여 1 시간 교반하고, 결정의 석출을 확인 후, 에틸시클로헥산 (4.9 L) 를 2 시간에 걸쳐 적하하였다. 현탁액을 실온으로 냉각하고, 14.5 시간 교반 후, 석출된 결정을 여과하고, 결정을 메틸이소부틸케톤 (350 mL), 에틸시클로헥산 (1.4 L) 의 혼합 용액으로 세정하였다. 얻어진 결정을 감압하 40 ℃ 에서 건조하여, 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-4-O-{2,4,6-트리-O-아세틸-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-글루코피라노실}-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-1) (331.74 g, 수율 94.8 ％, HPLC 면적 : 98.07 ％) 를 얻었다.
Figure pct00296
얻어진 화합물에 대해, 하기 문헌과 스펙트럼의 일치를 확인하였다 : 문헌 1) Org. Biomol. Chem., 2018, 16, 4720-4727.
실시예 6 :
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-4-O-{3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-글루코피라노실}-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-2)
[화학식 294]
Figure pct00297
(소공정 1-7)
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-4-O-{2,4,6-트리-O-아세틸-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-글루코피라노실}-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-1) (30.00 g, 29.29 mmol) 의 테트라하이드로푸란 (150 mL) 용액에, 메탄올 (90 mL), 트리플루오로아세트산메틸 (3.75 g, 29.29 mmol) 을 첨가하고 25 ℃ 에서 10 분 교반 후, 칼륨tert-부톡시드 (1 mol/L 의 테트라하이드로푸란 용액) (14.7 mL, 14.65 mmol) 을 첨가하였다. 그 후, 55 ℃ 로 승온하여, 2 시간 교반 후, HPLC 로 반응의 종료를 확인하였다. 반응액을 25 ℃ 로 냉각하고, 아세트산 (1.76 g, 29.29 mmol), 아세트산에틸 (300 mL) 의 순으로 첨가하였다. 이 용액을 1 ％ 식염수 (300 mL) 로 2 번 세정 후, 감압 조건하, 액량이 90 mL 에 도달할 때까지 농축하였다. 아세트산에틸 (450 mL) 를 첨가하고, 재차 액량이 90 mL 에 도달할 때까지 농축, 추가로 아세토니트릴 (450 mL) 를 첨가하고, 액량이 90 mL 에 도달할 때까지 농축하여, 조체의 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-4-O-{3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-글루코피라노실}-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-2) 를 아세토니트릴 용액으로서 얻었다. 이것을 다음 공정에 그대로 사용하였다.
실시예 7 :
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-글루코피라노실}-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-3)
[화학식 295]
Figure pct00298
(소공정 1-8)
실시예 6 에서 얻어진 조체의 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-4-O-{3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-글루코피라노실}-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-2) 의 용액에, 아세토니트릴 (210 mL), 벤즈알데히드디메틸아세탈 (5.13 g, 33.69 mmol), p-톨루엔술폰산 1 수화물 (0.17 g, 0.88 mmol) 을 첨가하고, 25 ℃ 에서 30 분간 교반하였다. 이 용액에 톨루엔 (600 mL) 를 첨가하고, 액량이 300 mL 에 도달할 때까지 농축, 이 시점에서 HPLC 에 의해 반응의 종료를 확인하였다. 추가로 1-메틸이미다졸 (12.03 g, 146.47 mmol) 을 첨가하고, 액량이 90 mL 에 도달할 때까지 농축하여, 조체의 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-글루코피라노실}-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-3) 를 1-메틸이미다졸 함유의 톨루엔 용액으로서 얻었다. 이것을 다음 공정에 그대로 사용하였다.
실시예 8 :
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-2-O-(트리플루오로메탄술포닐)-β-D-글루코피라노실}-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-4, X1 = 트리플루오로메탄술포닐기)
[화학식 296]
Figure pct00299
(소공정 1-9)
실시예 7 에서 얻어진 조체의 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-글루코피라노실}-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-3) 의 용액 (1-메틸이미다졸 함유) 에 아세트산에틸 (210 mL) 를 첨가하고, 0 ℃ 로 냉각하였다. 이 용액에, 트리플루오로메탄술폰산 무수물 (16.53 g, 58.59 mmol) 을 1 시간에 걸쳐 적하하고, 그 후 30 분간 교반하였다. HPLC 에 의해 반응의 종료를 확인 후, 물 (300 mL) 를 첨가하고, 유기층과 수층으로 분리하였다. 유기층을 물 (300 mL) 로 2 번, 포화 식염수 (150 mL) 로 1 번 세정 후, 감압 조건하, 액량이 90 mL 에 도달할 때까지 농축하였다. 아세트산에틸 (300 mL) 를 첨가하고, 재차 액량이 90 mL 에 도달할 때까지 농축하여, 조체의 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-2-O-(트리플루오로메탄술포닐)-β-D-글루코피라노실}-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-4, X1 = 트리플루오로메탄술포닐기) 를 아세트산에틸 용액으로서 얻었다. 이것을 다음 공정에 그대로 사용하였다.
실시예 9 :
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-만노피라노실}-2-(2-카르복시벤즈아미드)-2-데옥시-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-6)
[화학식 297]
Figure pct00300
(소공정 1-10 ＆ 1-11)
실시예 8 에서 얻어진 조체의 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-2-O-(트리플루오로메탄술포닐)-β-D-글루코피라노실}-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-4, X1 = 트리플루오로메탄술포닐기) 의 용액에 디메틸술폭시드 (150 mL), 아세트산테트라부틸암모늄 (17.67 g, 58.59 mmol) 을 첨가하고, 30 ℃ 로 승온하여, 17 시간 교반 후, HPLC 에 의해, 4-메톡시페닐 4-O-{2-O-아세틸-4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-만노피라노실}-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-5, X2 = 아세틸기) 가 생성되어 있는 것을 확인하였다. 이 반응액에 톨루엔 (150 mL) 를 첨가하고, 감압 조건하, 액량이 165 mL 에 도달할 때까지 농축하였다. 메탄올 (45 mL), 50 ％ 수산화나트륨 수용액 (3.52 g, 87.88 mmol) 을 첨가하고, 25 ℃ 에서 1.5 시간 교반하였다. HPLC 에 의해 반응의 종료를 확인 후, 아세트산에틸 (450 mL), 물 (300 mL) 를 첨가하여 분액하였다. 유기층에 물 (300 mL) 를 첨가하고, 0 ℃ 로 냉각하고, 강한 교반하, 6 규정 염산으로 pH 2.73 으로 조정하였다. 분액한 유기층에 테트라하이드로푸란 (300 mL) 를 첨가하고, 감압 조건하, 액량이 150 mL 에 도달할 때까지 농축하였다. 테트라하이드로푸란 (300 mL) 를 첨가하고, 재차 액량이 90 mL 에 도달할 때까지 농축하여, 내온 45 ℃ 로 온도 조정하였다. 테트라하이드로푸란 (60 mL) 를 첨가한 후, 25 ℃ 로 냉각하고, 2-프로판올 (150 mL), 물 (15 mL) 를 첨가하고, 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-만노피라노실}-2-(2-카르복시벤즈아미드)-2-데옥시-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-6) (30 mg) 의 종정을 접종하였다. 25 ℃ 에서 14 시간 교반하고, 결정의 석출을 확인한 후, 2-프로판올 (210 mL) 를 1 시간에 걸쳐 적하하고, 0 ℃ 로 냉각하였다. 2 시간 교반 후, 석출된 결정을 여과하고, 결정을 0 ℃ 로 냉각한 2-프로판올 (150 mL) 로 세정하였다. 얻어진 결정을 감압하 40 ℃ 에서 건조하여, 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-만노피라노실}-2-(2-카르복시벤즈아미드)-2-데옥시-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-6) (27.74 g, 수율 94.3 ％, HPLC 면적 : 97.85 ％) 를 얻었다.
또한, 화합물 III-4 (X1 = 트리플루오로메탄술포닐기) → 화합물 III-5 (X2 = 아세틸기) 에 대한 변환은, 아세트산세슘 (3 당량), 디메틸술폭시드, 50 ℃, 24 시간의 조건에 있어서도 실시 가능하다. 그 후, 동일한 반응 (화합물 III-5 (X2 = 아세틸기) → 화합물 III-6), 후처리를 실시함으로써, 화합물 III-6 을 취득할 수 있다.
Figure pct00301
실시예 10 :
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-만노피라노실}-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-8)
[화학식 298]
Figure pct00302
(소공정 1-12)
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-만노피라노실}-2-(2-카르복시벤즈아미드)-2-데옥시-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-6) (3.00 g, 2.99 mmol) 의 디클로로메탄 (30 mL) 용액에, 1-하이드록시벤조트리아졸 1 수화물 (91.8 mg, 0.60 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민 (0.42 g, 3.29 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드염산염 (0.63 g, 3.29 mmol) 을 첨가하고, 40 ℃ 로 승온하여, 24 시간 교반하였다. HPLC 에 의해 반응의 종료를 확인 후, 반응 용액을 25 ℃ 로 냉각, 물 (30 mL) 로 분액, 유기층을 포화 식염수 (15 mL) 로 세정하였다. 이 용액을 감압 조건하, 농축 건조 고화하여, 조체의 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-만노피라노실}-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-8) 를 얻었다. 이것을 다음 공정에 그대로 사용하였다.
실시예 11 :
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{2-O-벤질-4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-만노피라노실}-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-9)
[화학식 299]
Figure pct00303
(소공정 1-15)
실시예 10 에서 얻어진 조체의 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-만노피라노실}-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-8) 에, N,N-디메틸아세트아미드 (30 mL), 벤질브로마이드 (0.77 g, 4.48 mmol), 몰레큘러시브 4A (900 mg) 을 첨가하여 0 ℃ 로 냉각하고, 수소화나트륨 (0.16 g, 3.88 mmol, 함량 : 50-72 ％) 를 첨가하여 3 시간 교반하였다. HPLC 에 의해 반응의 종료를 확인 후, 반응 용액을 25 ℃ 로 냉각하고, 에틸렌디아민 (무수) (0.18 g, 2.99 mmol) 을 첨가하고, 추가로 1 시간 교반하였다. 이 용액을 0 ℃ 로 냉각하고, 아세트산 (0.36 g, 5.98 mmol) 을 첨가하고, 여과하였다. N,N-디메틸아세트아미드 (15 mL) 로 몰레큘러시브 4A 를 세정 후, 아세트산에틸 (60 mL), 물 (30 mL) 를 첨가하여, 분액하였다. 유기층을 물 (30 mL) 로 2 회, 포화 식염수 (15 mL) 로 1 회 세정하였다. 이 용액을 감압 조건하, 농축 건조 고화하여, 톨루엔 (30 mL), 실리카 겔 60N (구상) (3 g) 을 첨가하고 25 ℃ 에서 30 분 교반하였다. 현탁액을 여과, 실리카 겔을 톨루엔 (82 mL), 아세트산에틸 (8 mL) 의 혼합 용액으로 세정하였다. 여과액을 감압 조건하, 농축 건조 고화하여, 조체의 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{2-O-벤질-4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-만노피라노실}-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-9) 를 얻었다.
실시예 12 :
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-4-O-{2,4-디-O-벤질-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-만노피라노실}-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-10)
[화학식 300]
Figure pct00304
(소공정 1-16)
실시예 11 에서 얻어진 조체의 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{2-O-벤질-4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-만노피라노실}-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-9) 에, 디클로로메탄 (30 mL), 몰레큘러시브 4A (300 mg) 을 첨가하여 0 ℃ 로 냉각하고, 보란-테트라하이드로푸란 착물 (0.91 mol/L 의 테트라하이드로푸란 용액) (16.42 mL, 14.94 mmol), 트리플루오로메탄술폰산구리 (II) (0.16 g, 0.45 mmol) 을 첨가하여 6 시간 교반하였다. HPLC 에 의해 반응의 종료를 확인 후, 메탄올 (3 mL) 를 첨가하고, 추가로 1 시간 교반하였다. 이 용액을 여과하고, 아세트산에틸 (30 mL) 로 몰레큘러시브 4A 를 세정 후, 유기층을 0.5 규정 염산 (30 mL) 으로 2 회, 포화 식염수 (15 mL) 로 1 회 세정하였다. 이 용액을 감압하, 액량이 6 mL 에 도달할 때까지 농축하였다. 톨루엔 (15 mL) 를 첨가하고, 재차 액량이 6 mL 에 도달할 때까지 농축하여, 조체의 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-4-O-{2,4-디-O-벤질-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-만노피라노실}-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-10) 의 톨루엔 용액을 얻었다.
실시예 13 :
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-4-O-{2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실}-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-11)
[화학식 301]
Figure pct00305
(소공정 1-17)
조체의 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-4-O-{2,4-디-O-벤질-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-만노피라노실}-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-10) 의 용액에 디클로로메탄 (30 mL), 물 (1.5 mL), 인산이수소칼륨 (0.81 g, 5.98 mmol) 을 첨가하고, 0 ℃ 로 냉각하여, 2,3-디클로로-5,6-디시아노-1,4-벤조퀴논 (0.81 g, 3.59 mmol) 을 첨가하였다. 25 ℃ 로 승온하여, 8 시간 교반한 후, HPLC 로 반응의 종료를 확인하였다. 반응 용액을 0 ℃ 로 냉각, 아세트산에틸 (60 mL), 5 ％ 아황산나트륨 수용액 (30 mL) 를 첨가하여 분액하였다. 유기층을 5 ％ 아황산나트륨 수용액 (30 mL) 으로 2 회, 포화 식염수 (15 mL) 로 1 회 세정한 후, 감압 조건하, 농축 건조 고화하였다. 이것을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔 300 g, 헥산 : 아세트산에틸 = 50 : 50 → 30 : 70) 에 의해 정제하여, 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-4-O-{2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실}-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-11) (2.15 g, 수율 76.7 ％, HPLC 면적 : 98.67 ％) 를 얻었다.
Figure pct00306
얻어진 화합물에 대해, 하기 문헌과 스펙트럼의 일치를 확인하였다 : 문헌 1) Org. Biomol. Chem., 2018, 16, 4720-4727.
실시예 14 :
4-메톡시페닐 2-아미노-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-4-O-(2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-12)
[화학식 302]
Figure pct00307
(소공정 1-18)
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-4-O-{2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실}-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-11) (700 mg, 0.75 mmol) 의 2-메틸테트라하이드로푸란 (3.5 mL) 와 노르말부탄올 (3.5 mL) 의 혼합 용액에 무수 에틸렌디아민 (0.25 mL, 3.73 mmol) 을 첨가한 후, 80 ℃ 로 승온하여, 16.5 시간 교반하였다. HPLC 로 반응의 종료를 확인한 후, 실온으로 냉각하고, 시클로펜틸메틸에테르 (7 mL) 와 10 ％ 메탄올 수용액 (2.8 mL) 를 첨가하였다. 수층을 분리하여 얻어지는 유기층을 10 ％ 메탄올 수용액 (2.8 mL) 로 2 회 세정한 후, 감압 조건하, 농축 건조 고화하여, 4-메톡시페닐 2-아미노-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-4-O-(2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-12) 의 조체를 얻었다.
실시예 15 :
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-4-O-(2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실)2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-13)
[화학식 303]
Figure pct00308
(소공정 1-19)
조체의 4-메톡시페닐 2-아미노-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-4-O-(2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-12) 에 테트라하이드로푸란 (5.6 mL) 와 물 (0.7 mL) 를 첨가한 후, 탄산수소나트륨 (125.4 mg, 1.49 mmol) 과 클로로포름산 2,2,2-트리클로로에틸 (189.7 mg, 0.90 mmol) 을 첨가하였다. 25 ℃ 에서 2 시간 교반한 후, 얻어진 현탁액에 물 (2.8 mL) 와 시클로펜틸메틸에테르 (7 mL) 를 첨가하였다. 수층을 제거한 후, 감압 조건하, 농축 건조 고화한 조체를 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (아세트산에틸/헥산 20 ％ → 65 ％) 로 정제하여, 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-4-O-(2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실)2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-13) (702.6 mg, 수율 96 ％) 를 얻었다.
Figure pct00309
＜화합물 III-8 의 합성＞
화합물 III-8 을, 이하의 합성 스킴 1B 에 따라서 합성하였다.
[합성 스킴 1B]
[화학식 304]
Figure pct00310
실시예 16 :
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-4-O-{3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-글루코피라노실}-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-2)
[화학식 305]
Figure pct00311
(소공정 1-7)
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-4-O-{2,4,6-트리-O-아세틸-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-글루코피라노실}-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-1) (50.00 g, 48.82 mmol) 의 테트라하이드로푸란 (250 mL) 용액에, 메탄올 (75 mL), 트리플루오로아세트산메틸 (6.25 g, 48.82 mmol) 을 첨가하여 25 ℃ 에서 30 분 교반 후, 칼륨tert-부톡시드 (1 mol/L 의 테트라하이드로푸란 용액) (24.41 mL, 24.41 mmol) 을 첨가하였다. 그 후, 55 ℃ 로 승온하여, 3.5 시간 교반 후, HPLC 로 반응의 종료를 확인하였다. 반응액을 25 ℃ 로 냉각하고, 아세트산 (2.93 g, 48.82 mmol) 을 첨가하여, 감압 조건하, 액량이 150 mL 가 될 때까지 농축하였다. 그 후, 아세트산에틸 (500 mL), 물 (150 mL) 를 첨가하고 분액하여, 유기층을 감압 조건하, 액량이 150 mL 에 도달할 때까지 농축하였다. 아세토니트릴 (750 mL) 를 첨가하고, 재차 액량이 150 mL 에 도달할 때까지 농축, 다시 아세토니트릴 (500 mL) 를 첨가하고, 액량이 250 mL 에 도달할 때까지 농축하여, 조체의 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-4-O-{3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-글루코피라노실}-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-2) 를 아세토니트릴 용액으로서 얻었다. 이것을 다음 공정에 그대로 사용하였다.
실시예 17 :
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-글루코피라노실}-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-3)
[화학식 306]
Figure pct00312
(소공정 1-8)
실시예 16 에서 얻어진 조체의 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-4-O-{3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-글루코피라노실}-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-2) 의 용액에, 아세토니트릴 (250 mL), 벤즈알데히드디메틸아세탈 (14.86 g, 97.65 mmol), p-톨루엔술폰산 1 수화물 (0.46 g, 2.44 mmol) 을 첨가하고, 25 ℃ 에서 30 분간 교반하였다. 반응 용액을 액량이 150 mL 에 도달할 때까지 농축, 이 시점에서 HPLC 에 의해 반응의 종료를 확인하였다. 이 용액에 트리에틸아민 (1.48 g, 14.65 mmol), 아세트산에틸 (500 mL), 포화 중조수 (150 mL) 를 첨가하여 분액하였다. 유기층을 2 규정 염산 (150 mL) 으로 세정하고, 분리한 유기층을 감압 조건하, 액량이 150 mL 에 도달할 때까지 농축하였다. 추가로 아세트산에틸 (500 mL) 를 첨가하고, 재차 액량이 250 mL 에 도달할 때까지 농축하여, 조체의 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-글루코피라노실}-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-3) 을 아세트산에틸 용액으로서 얻었다. 이것을 다음 공정에 그대로 사용하였다.
실시예 18 :
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]헥소피라노실-2-우로스}-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-7)
[화학식 307]
Figure pct00313
(소공정 1-13)
조체의 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-글루코피라노실}-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-3) 의 용액에, 디클로로메탄 (150 mL), 요오드벤젠디아세테이트 (18.87 g, 58.59 mmol) 을 첨가하고, 0 ℃ 로 냉각하였다. 이 용액에 9-아자노르아다만탄 N-옥실 (0.67 g, 4.88 mmol) 을 첨가 후, 25 ℃ 로 승온하여, 5 시간 교반하였다. HPLC 에 의해 반응의 종료를 확인 후, 반응액을 0 ℃ 로 냉각, 아세트산에틸 (600 mL), 10 ％ 아황산나트륨 수용액 (250 mL) 를 첨가하여, 분액하였다. 유기층을 2 규정 염산 (150 mL), 포화 식염수 (100 mL) 로 세정하고, 감압 조건하, 액량이 150 mL 가 될 때까지 농축하였다. 내온을 50 ℃ 로 조정하고, 2-프로판올 (1 L) 을 1 시간에 걸쳐 적하하였다. 그 후, 현탁액을 0 ℃ 까지 냉각하고, 3 시간 교반 후, 석출된 결정을 여과하고, 결정을 0 ℃ 로 냉각한 2-프로판올 (200 mL), 아세트산에틸 (50 mL) 의 혼합 용매로 세정하였다. 얻어진 결정을 감압하 50 ℃ 에서 건조하여, 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]헥소피라노실-2-우로스}-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-7) (41.61 g, 수율 86.6 ％, HPLC 면적 : 99.20 ％) 를 얻었다.
Figure pct00314
Figure pct00315
실시예 19 :
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-만노피라노실}-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-8)
[화학식 308]
Figure pct00316
(공정 1-14)
(조건 1 : L-셀렉트리드)
화합물 III-7 (1.50 g, 1.52 mmol) 의 테트라하이드로푸란 용액 (22.5 mL)를 -50 ℃ 로 냉각하였다. 50 분 교반 후, L-셀렉트리드의 테트라하이드로푸란 용액 (1.0M, 1.68 mL, 1.68 mmol) 을 5 분에 걸쳐 첨가하였다. 1 시간 교반 후, 아세트산 (0.18 mL, 3.05 mmol) 을 첨가하고, 실온까지 승온하였다 (화합물 III-7 : 2.41 ％ PA, 화합물 III-8 : 76 ％ PA＠220 ㎚, dr = 96.5 : 3.5). 얻어진 반응액에 아세트산에틸 (15 mL) 를 첨가한 후, 5 ％ 시트르산수 (6 mL) 를 첨가하여 10 분 교반하였다. 헵탄 (4 mL) 를 첨가한 후에 수층을 제거하고, 얻어진 유기층을 물 (3 mL) 로 세정하였다. 취득한 유기층을 농축 건조 고화한 후, 실리카 겔 크로마토그래피 (아세트산에틸/헥산 20 ％ → 55 ％) 로 정제하여, 화합물 III-8 (1.15 g, 수율 77 ％) 를 얻었다.
(조건 2 : LS-셀렉트리드)
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]헥소피라노실-2-우로스}-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-7) (5.00 g, 5.08 mmol) 의 테트라하이드로푸란 용액 (50 mL) 에 몰레큘러시브 4A (500 mg) 을 첨가 후, -45 ℃ 로 냉각하였다. 이 용액을 15 분 교반한 후, LS-셀렉트리드의 테트라하이드로푸란 용액 (1.0M, 5.59 mL, 5.59 mmol) 을 20 분에 걸쳐 적하하였다. 2 시간 교반 후, HPLC 에 의해 반응의 종료를 확인하고, 아세트산 (0.38 mL, 6.61 mmol) 을 첨가하고, 25 ℃ 까지 승온하였다 (화합물 III-8 : 87 ％ PA＠220 ㎚, dr = 98.1 : 1.9). 몰레큘러시브 4A 를 여과하고, 테트라하이드로푸란 (10 mL) 으로 세정하였다. 얻어진 용액에 아세트산에틸 (60 mL) 를 첨가한 후, 5 ％ 시트르산 수용액 (20 mL) 를 첨가하여 10 분 교반하였다. 수층을 제거한 후, 얻어진 유기층을 물 (10 mL), 5 ％ 중조 수용액 (20 mL), 물 (15 mL) 로 세정하였다. 취득한 유기층을 감압 조건하, 농축 건조 고화한 후, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (아세트산에틸/헥산 20 ％ → 55 ％) 로 정제하여, 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-만노피라노실}-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-8) (4.07 g, 수율 81 ％) 를 얻었다.
(조건 3 : 리튬디이소부틸-tert-부톡시알루미늄하이드리드 : LDBBA)
화합물 III-7 (30.0 mg, 30.5 μmol) 과 몰레큘러시브 4A (3 mg, 0.1 wt) 의 테트라하이드로푸란 현탁액 (0.45 mL) 에 대해 -50 ℃ 에서 LDBBA 의 테트라하이드로푸란/헥산 용액 (0.25M, 134.2 μL, 33.6 μmol) 첨가하였다. 1 시간 교반 후, HPLC 로 반응액을 분석하여, 반응이 진행되어 있는 것을 확인하였다 (화합물 III-7 : 5.7 ％ PA, 화합물 III-8 : 83.49 ％ PA＠220 ㎚, dr = 93.6 : 6.4).
(조건 4 : 식 A 로 나타내는 화합물에 있어서, 3 개의 R3 = 디tert-부틸메틸페녹시드인 화합물, 이하 「시약 A」라고 부른다)
리튬알루미늄하이드리드 (50.0 mg, 1.32 mmol) 의 테트라하이드로푸란 현탁액 (2 mL) 에, 0 ℃ 에서 디부틸하이드록시톨루엔 (885.41 mg, 4.02 mmol) 을 첨가한 후, 25 ℃ 에서 교반함으로써, 이하의 식 :
[화학식 309]
Figure pct00317
으로 나타내는 시약 A 를 조제하였다. 이 시약 A 를 포함하는 조제한 용액 (80 μL) 을 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]헥소피라노실-2-우로스}-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-7) (30.0 mg, 30.5 μmol) 과 몰레큘러시브 4A (3.0 mg) 의 테트라하이드로푸란 현탁액 (0.45 mL) 에 대해 0 ℃ 에서 첨가하여, 1 시간 교반하였다. 이 반응액을 HPLC 로 분석하여, 반응이 진행되어 있는 것을 확인하였다 (화합물 III-7 : 미검출, 화합물 III-8 : 92.3 ％ PA＠220 ㎚ (BHT 를 제외한다), dr = 97.8 : 2.2).
(조건 5 : 수소화디이소부틸알루미늄 : DIBALH)
화합물 III-7 (50.0 mg, 50.8 μmol) 과 몰레큘러시브 4A (5 mg, 0.1 wt) 의 테트라하이드로푸란 현탁액 (0.75 mL) 에 대해 -80 ℃ 에서 DIBALH 의 톨루엔 용액 (1.5M, 37 μL, 55.5 μmol) 을 첨가하였다. 밤새 교반한 후, -60 ℃ 에서 90 분, -40 ℃ 에서 30 분 교반하고, HPLC 로 반응이 진행되어 있는 것을 확인하였다 (화합물 III-7 : N.D., 화합물 III-8 : 40.92 ％ PA＠220 ㎚ (톨루엔을 제외한다), dr = 41.9 : 58.1).
Figure pct00318
Figure pct00319
＜화합물 III-10 의 합성＞
화합물 III-10 을, 이하의 합성 스킴 1C 에 따라서 합성하였다.
[합성 스킴 1C]
[화학식 310]
Figure pct00320
실시예 20 :
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-만노피라노실}-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-8)
[화학식 311]
Figure pct00321
(소공정 1-12)
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-만노피라노실}-2-(2-카르복시벤즈아미드)-2-데옥시-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-6) (6.00 g, 5.98 mmol) 의 디클로로메탄 (30 mL) 용액에, 1-하이드록시벤조트리아졸 1 수화물 (0.18 g, 1.20 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민 (0.85 g, 6.57 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드염산염 (1.26 g, 6.57 mmol) 을 첨가하고 40 ℃ 로 승온하여, 31 시간 교반하였다. HPLC 에 의해 반응의 종료를 확인 후, 반응 용액을 0 ℃ 로 냉각 후, 아세트산에틸 (90 mL), 물 (60 mL) 를 첨가하고, 강한 교반하에 6 규정 염산을 pH 7 이 될 때까지 첨가하였다. 유기층과 수층을 분리 후, 유기층을 물 (60 mL), 포화 식염수 (30 mL) 로 세정하였다. 이 용액을 감압 조건하, 액량이 12 mL 에 도달할 때까지 농축하였다. 테트라하이드로푸란 (60 mL) 를 첨가하고, 재차 액량이 9 mL 에 도달할 때까지 농축하여, 조체의 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-만노피라노실}-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-8) 의 테트라하이드로푸란 용액을 얻었다. 이것을 다음 공정에 그대로 사용하였다.
실시예 21 :
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{2-O-벤질-4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-만노피라노실}-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-9)
[화학식 312]
Figure pct00322
(소공정 1-15)
조체의 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-만노피라노실}-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-8) 의 용액에, N,N-디메틸아세트아미드 (60 mL), 벤질브로마이드 (1.53 g, 8.96 mmol), 트리플루오로아세트산메틸 (0.15 g, 1.20 mmol), 몰레큘러시브 4A (1.8 g) 을 첨가하여 0 ℃ 로 냉각하고, 리튬tert-부톡시드의 테트라하이드로푸란 용액 (2-메틸-2-프로판올 (0.66 g, 8.96 mmol), 테트라하이드로푸란 (2.4 mL) 의 혼합 용액을 0 ℃ 로 냉각하고, 노르말 부틸리튬의 헥산 용액 (1.55 mol/L) (5.78 mL, 8.96 mmol) 을 첨가하여 30 분 교반 한 것을 사용) 을 첨가하여 3 시간 교반하였다. HPLC 에 의해 반응의 종료를 확인 후, 에틸렌디아민 (무수) (0.18 g, 2.99 mmol) 을 첨가하고, 추가로 1 시간 교반하였다. 이 용액에 아세트산 (0.72 g, 11.95 mmol) 을 첨가하고, 여과하였다. 아세트산에틸 (90 mL) 로 몰레큘러시브 4A 를 세정 후, 물 (60 mL) 를 첨가하여, 분액하였다. 유기층을 물 (60 mL) 로 2 번 세정 후, 감압 조건하, 액량이 12 mL 에 도달할 때까지 농축하였다. 톨루엔 (30 mL) 를 첨가하고, 재차 액량이 12 mL 에 도달할 때까지 농축, 톨루엔 (18 mL), 실리카 겔 60N (구상) (9 g) 을 첨가하고 25 ℃ 에서 30 분 교반하였다. 현탁액을 여과, 실리카 겔을 톨루엔 (191 mL), 아세트산에틸 (19 mL) 의 혼합 용액으로 세정하였다. 여과액을 감압 조건하, 액량이 9 mL 에 도달할 때까지 농축하여, 조체의 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{2-O-벤질-4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-만노피라노실}-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-9) 의 톨루엔 용액을 얻었다.
실시예 22 :
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-4-O-{2,4-디-O-벤질-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-만노피라노실}-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-10)
[화학식 313]
Figure pct00323
(소공정 1-16)
실시예 21 에서 얻어진 조체의 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-4-O-{2-O-벤질-4,6-O-벤질리덴-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-만노피라노실}-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-9) 의 용액 (화합물 III-8 기준으로 5.50 g (5.48 mmol) 분을 사용) 에, 디클로로메탄 (16.5 mL), 몰레큘러시브 4A (550 mg) 을 첨가하여 0 ℃ 로 냉각하고, 보란-테트라하이드로푸란 착물 (0.91 mol/L 의 테트라하이드로푸란 용액) (18.06 mL, 16.43 mmol), 트리플루오로메탄술폰산구리 (II) (0.59 g, 1.64 mmol) 을 첨가하여 3 시간 교반하였다. HPLC 에 의해 반응의 종료를 확인 후, 메탄올 (5.5 mL) 를 첨가하고, 추가로 30 분 교반하였다. 이 용액을 여과하고, 아세트산에틸 (110 mL) 로 몰레큘러시브 4A 를 세정 후, 0.5 규정 염산 (55 mL) 를 첨가하고, 30 분 교반하였다. 유기층과 수층을 분리 후, 유기층을 0.5 규정 염산 (55 mL), 포화 식염수 (27.5 mL) 로 세정하고, 이 용액을 감압하, 농축 건조 고화하였다. 이것을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔 300 g, 헥산 : 아세트산에틸 = 55 : 45 → 30 : 70) 에 의해 정제하여, 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-4-O-{2,4-디-O-벤질-3-O-[(나프탈렌-2-일)메틸]-β-D-만노피라노실}-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-10) (4.94 g, 수율 83.6 ％, HPLC 면적 : 98.54 ％) 를 얻었다.
Figure pct00324
＜화합물 V-3 의 합성＞
화합물 V-3 을, 이하의 합성 스킴 2A 에 따라서 합성하였다.
[합성 스킴 2A]
[화학식 314]
Figure pct00325
실시예 23 :
2-O-아세틸-3,4,6-트리-O-벤질-1-O-(2,2,2-트리클로로에탄이미도일)-D-만노피라노스 (화합물 IV-3)
[화학식 315]
Figure pct00326
(소공정 2-1 ＆ 2-2)
3,4,6-트리-O-벤질-1,2-O-(1-메톡시에틸리덴)-β-D-만노피라노스 (화합물 IV-1) (3.00 g, 5.92 mmol) 의 디클로로메탄 용액 (30 mL) 에 대해, p-톨루엔술폰산 1 수화물 (5.63 mg, 29.6 μmol) 과 물 (0.3 mL) 를 실온에서 첨가하고, 동온도에서 90 분 교반하였다. 반응 후, 트리에틸아민 (0.30 g, 2.96 mmol) 을 첨가하였다. 실온에서 2 시간 교반한 후, 톨루엔 (60 mL) 를 첨가한 후, 농축 건조 고화된 조체에 톨루엔 (15 mL) 을 첨가하고, 2-O-아세틸-3,4,6-트리-O-벤질-D-만노피라노스 (화합물 IV-2) 를 톨루엔 용액으로서 취득하였다. 취득한 화합물 IV-2 의 톨루엔 (15 mL) 과 2,2,2-트리클로로아세토니트릴 (4.27 g, 29.6 mmol) 의 혼합액에 대해, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]-7-운데센 (7.1 μL, 47 μmol) 을 실온에서 30 분에 걸쳐 첨가하였다. 동온도에서 1 시간 교반한 후, 반응액을 농축 건조 고화하였다. 얻어진 조체를 실리카 겔 크로마토그래피 (Wakogel 9 g, 아세트산에틸/헥산 20 ％) 로 정제하여, 2-O-아세틸-3,4,6-트리-O-벤질-1-O-(2,2,2-트리클로로에탄이미도일)-D-만노피라노스 (화합물 IV-3) (3.75 g, 수율 99 ％) 를 취득하여, 다음 공정에서 사용하였다.
실시예 24 :
4-메톡시페닐 2-O-아세틸-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[2-O-아세틸-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노시드 (화합물 V-1)
[화학식 316]
Figure pct00327
(소공정 2-3)
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-4-O-(2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실)2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-13) (50 mg, 0.02 mmol) 과 화합물 IV-3 (113.4 mg, 0.18 mmol) 의 디클로로메탄 용액 (0.8 mL) 에 몰레큘러시브 4A (10 mg, 0.2 wt) 를 첨가 후, -20 ℃ 로 냉각하였다. 15 분 교반 후, 트리플루오로메탄술폰산트리메틸실릴의 디클로로메탄 용액 (0.17 M, 30 μL, 5.0 μmol) 을 첨가하였다. 90 분간 교반 후, 트리에틸아민 (5 μL, 0.04 mmol) 을 첨가하고, 실온까지 승온하였다 (반응 용액 1).
화합물 III-13 (650 mg, 0.71 mmol) 과 화합물 IV-3 (1.59 g, 2.49 mmol) 의 디클로로메탄 용액 (21 mL) 에 몰레큘러시브 4A (140 mg, 0.2 wt) 를 첨가 후, -20 ℃ 로 냉각하였다. 20 분 교반 후, 트리플루오로메탄술폰산트리메틸실릴의 디클로로메탄 용액 (0.28 M, 239 μL, 0.07 mmol) 을 첨가하고, 3 시간 후에 트리플루오로메탄술폰산트리메틸실릴 (3 μL, 0.02 mmol) 을 첨가하였다. 45 분간 교반 후, 트리에틸아민 (30 μL, 0.21 mmol) 을 첨가하고, 실온까지 승온하였다 (반응 용액 2).
반응 용액 1 및 2 모두에 있어서 반응의 진행을 확인한 후, 양 반응 현탁액을 혼합하고, 몰레큘러시브를 여과 제거하여, 디클로로메탄 (4 mL) 으로 세정하였다. 얻어진 용액을 농축 건조 고화한 후, 얻어진 조체 (2.71 g) 을 실리카 겔 크로마토그래피 (아세트산에틸/헥산 20 ％ → 55 ％ 및 아세트산에틸/디클로로메탄 0 ％ → 20 ％) 로 정제하여, 화합물 V-1 (1.16 g, 수율 85 ％) 를 얻었다.
Figure pct00328
Figure pct00329
실시예 25 :
4-메톡시페닐 3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노시드 (화합물 V-3)
[화학식 317]
Figure pct00330
(소공정 2-4 ＆ 2-5)
화합물 V-1 (50 mg, 0.03 mmol) 의 테트라하이드로푸란 (0.4 mL) 용액에 물 (0.05 mL) 와 50 ％ 수산화나트륨 수용액 (16.6 mg, 0.21 mmol) 을 첨가한 후, 50 ℃ 에서 27 시간 교반하였다. 계속해서, 메탄올 (0.05 mL) 를 첨가하고, 50 ℃ 에서 18 시간 교반한 후, 실온으로 냉각하고, 아세트산 (8.9 μL, 0.16 mmol) 을 첨가함으로써, 4-메톡시페닐 3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-2-아미노-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-β-D-글루코피라노시드 (화합물 V-2) 를 포함하는 용액이 생성되었다. 얻어진 용액을 농축 건조 고화한 후, 테트라하이드로푸란 (0.4 mL), 물 (0.05 mL), 탄산수소나트륨 (8.7 mg, 0.10 mmol), 클로로포름산2,2,2-트리클로로에틸 (6.6 mg, 0.03 mmol) 을 첨가하였다. 실온에서 1 시간 교반한 후, 얻어진 현탁액에 물 (2 mL), 아세트산에틸 (5 mL) 를 첨가하였다. 수층을 제거한 후, 농축 건조 고화한 조체를 실리카 겔 크로마토그래피 (아세트산에틸/헥산 20 ％ → 55 ％ 및 아세트산에틸/디클로로메탄 0 ％ → 20 ％) 로 정제하여, 화합물 V-3 (43.2 mg, 수율 90 ％) 를 얻었다. 유사한 방법으로, 화합물 V-1 (1.05 g, 0.54 mmol) 로부터 화합물 V-3 (821.6 mg, 수율 82 ％) 를 취득하였다.
MS(ESI)(m/z) : 1864 ([M＋NH4]＋).
＜화합물 V-5 의 합성＞
화합물 V-5 를, 이하의 합성 스킴 2B 에 따라서 합성하였다.
[합성 스킴 2B]
[화학식 318]
Figure pct00331
실시예 26 :
2-O-아세틸-3,4,6-트리-O-벤질-D-만노피라노스 (화합물 IV-2)
[화학식 319]
Figure pct00332
(소공정 2-1)
3,4,6-트리-O-벤질-1,2-O-(1-메톡시에틸리덴)-β-D-만노피라노스 (화합물 IV-1) (30.0 g, 59.2 mmol) 을 1 L 가지형 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄 (300 mL) 를 첨가하였다. 질소하, 실온에서 톨루엔술폰산 1 수화물 (23.0 mg, 0.118 mmol) 및 물 (3.0 mL) 를 첨가하고, 동온에서 3.5 시간 교반하였다. HPLC 에 의해 반응 종료를 확인 후, 트리에틸아민 (4.13 mL, 29.6 mmol) 을 첨가하고, 동온에서 1.5 시간 교반하였다. HPLC 에 의해 Ac 기의 전이 반응의 종료를 확인 후, 반응액에 아세트산에틸 (450 mL) 를 첨가하고, 5 ％ 중조수 (300 mL) 로 분액하였다. 유기층에 20 ％ 식염수 (150 mL) 를 첨가하여 분액하였다. 유기층을 액량 60 mL 까지 감압 농축하고, 톨루엔 (450 mL) 를 첨가하여 액량 60 mL 까지 감압 농축하였다. 탈수 디클로로메탄 (150 mL) 를 첨가하고, 2-O-아세틸-3,4,6-트리-O-벤질-D-만노피라노스 (화합물 IV-2) 의 톨루엔, 디클로로메탄 용액을 무색 용액으로서 취득하였다. 본 용액을 그대로 다음 공정에 사용하였다.
실시예 27 :
2-O-아세틸-3,4,6-트리-O-벤질-1-O-(2,2,2-트리클로로에탄이미도일)-D-만노피라노스 (화합물 IV-3)
[화학식 320]
Figure pct00333
(소공정 2-2)
2-O-아세틸-3,4,6-트리-O-벤질-D-만노피라노스 (화합물 IV-2) 의 톨루엔, 디클로로메탄 용액 (59.2 mmol) 을 1 L 가지형 플라스크에 첨가하고, 트리클로로아세토니트릴 (9.03 mL, 89.0 mmol) 및 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데카-7-엔 (89.0 μL, 0.592 mmol) 을 첨가하였다. 질소하, 0 ℃ 에서 3 시간 교반하였다. 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데카-7-엔 (44.5 μL, 0.296 mmol) 을 첨가하고, 0 ℃에서 2.5 시간 교반하였다. 또한, 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데카-7-엔 (44.5 μL, 0.296 mmol) 을 첨가하고, 0 ℃ 에서 1 시간 교반한 후, 반응액을 밤새 냉장 보관하였다. HPLC 에 의해 반응 종료를 확인 후, 0 ℃ 에서 반응액에 아세트산 (68 μL, 1.18 mmol) 을 첨가하여, 2-O-아세틸-3,4,6-트리-O-벤질-1-O-(2,2,2-트리클로로에탄이미도일)-D-만노피라노스 (화합물 IV-3) 의 디클로로메탄 용액 (59.2 mmol) 을 갈색 용액으로서 취득하였다. 본 용액을 그대로 다음 공정에 사용하였다.
실시예 28 :
4-메톡시페닐 2-O-아세틸-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[2-O-아세틸-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 V-4)
[화학식 321]
Figure pct00334
(소공정 2-6)
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-4-O-(2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실)-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 III-11) (8.70 g, 9.27 mmol) 및 2-O-아세틸-3,4,6-트리-O-벤질-1-O-(2,2,2-트리클로로에탄이미도일)-D-만노피라노스 (화합물 IV-3) 의 디클로로메탄 용액 (32.5 mmol) 을 300 mL 3 구 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄 (15 mL, 반응액으로서 합계 131 mL) 및 몰레큘러시브 4A 분말 (1.31 g) 을 첨가하였다. 질소하, -20 ℃ 에서 트리플루오로메탄술폰산트리메틸실릴 (0.335 mL, 1.86 mmol) 을 10 분간에 걸쳐 적하하고, 동온에서 3 시간 교반하였다. HPLC 에 의해 반응 종료를 확인 후, 트리에틸아민 (520 μL, 3.73 mmol) 을 첨가하고, 실온에서 30 분간 교반하였다. 반응액을 셀라이트 여과하고, 디클로로메탄 (43.5 mL) 으로 세정하였다. 여과액을 농축하여, 농축 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카량 : 650 g, 전개 용매 : 톨루엔/아세트산에틸 = 1/0 내지 4/1) 로 정제하였다. 주류 (主留) 를 감압 농축함으로써, 4-메톡시페닐 2-O-아세틸-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[2-O-아세틸-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 V-4) (16.2 g, 단리 수율 93.0 ％) 를 백색 아모르퍼스로서 얻었다.
Figure pct00335
실시예 29 :
4-메톡시페닐 3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 V-5)
[화학식 322]
Figure pct00336
(소공정 2-7)
4-메톡시페닐 2-O-아세틸-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[2-O-아세틸-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 V-4) (1.0 g, 0.53 mmol) 을 30 mL 2 구 플라스크에 첨가하고, 테트라하이드로푸란 (5 mL), 메탄올 (3 mL) 및 트리플루오로아세트산메틸 (53 μL, 0.53 mmol) 을 첨가하였다. 질소하, 실온에서 15 분간 교반한 후, tert-부톡시칼륨의 1M 테트라하이드로푸란 용액 (0.265 mL, 0.265 mmol) 을 적하하고, 50 ℃ 에서 1 시간 교반하였다. HPLC 에 의해 반응 종료를 확인 후, 실온까지 냉각하였다. 아세트산 (30.3 μL, 0.53 mmol) 을 첨가하였다. 아세트산에틸 (10 mL) 를 첨가한 후, 5 ％ 식염수 (10 mL) 로 3 회 분액하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조한 후, 여과 분리 후, 농축하였다. 농축 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카량 : 20 g, 전개 용매 : 톨루엔/아세트산에틸 = 9/1 내지 7/3) 로 정제하여, 주류를 감압 농축함으로써, 4-메톡시페닐 3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 V-5) (900 mg, 단리 수율 94 ％) 를 백색 아모르퍼스로서 얻었다.
Figure pct00337
＜화합물 VI-3 의 합성＞
화합물 VI-3 을, 이하의 합성 스킴 3A 에 따라서 합성하였다.
[합성 스킴 3A]
[화학식 323]
Figure pct00338
실시예 30 :
4-메톡시페닐 2-아미노-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-β-D-글루코피라노시드 (화합물 II-2)
[화학식 324]
Figure pct00339
(소공정 3-1)
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 II-1) (20.0 g, 33.58 mmol) 의 n-부탄올 (80 mL) 용액에, 에틸렌디아민 (10.09 g, 167.87 mmol) 을 첨가하고, 90 ℃ 로 가열하여, 동온에서 4 시간 교반하였다. 반응 종료를 HPLC 로 확인 후, 30 ℃ 로 냉각하고, 시클로펜틸메틸에테르 (300 mL) 를 부어 첨가한 후, 동온에서 12 시간 교반하였다. 프탈로일기 유래의 불용물을 여과하고, 시클로펜틸메틸에테르 (60 mL) 로 세정하였다. 얻어진 여과액을 25 ％ 메탄올수 (300 mL) 로 3 회 세정하고, 유기층을 40 mL 까지 감압 농축하였다. 농축액에 이소프로판올 (400 mL) 를 첨가하고, 160 mL 까지 감압 농축하였다. 농축액에 이소프로판올 (20 mL) 및 물 (130 mL) 를 첨가하고, 20 ℃ 로 온도 조정하였다. 화합물 II-2 의 종정을 첨가하여, 동온에서 1 시간 교반하고, 결정의 석출을 확인 후, 물 (230 mL) 를 1 시간에 걸쳐 적하하였다. 얻어진 슬러리액을 0-5 ℃ 로 냉각 후, 동온에서 1 시간 교반하고, 석출된 결정을 여과, 여과 분리한 결정을 0-5 ℃ 의 이소프로판올과 물의 혼합액 (40/80 mL) 으로 세정하고, 40 ℃ 에서 감압 건조하여, 4-메톡시페닐 2-아미노-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-β-D-글루코피라노시드 (화합물 II-2) (14.4 g, 수율 92 ％) 를 백색 결정으로서 얻었다.
Figure pct00340
실시예 31 :
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노시드 (화합물 II-3)
[화학식 325]
Figure pct00341
(소공정 3-2)
4-메톡시페닐 2-아미노-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-β-D-글루코피라노시드 (화합물 II-2) (10.0 g, 21.48 mmol) 의 테트라하이드로푸란 (100 mL) 용액에, 탄산수소나트륨 (2.71 g, 32.26 mmol) 을 용해한 물 (50 mL) 를 첨가하고, 25 ℃ 이하에서 클로로포름산 2,2,2-트리클로로에틸 (5.01 g, 23.65 mmol) 을 적하하고, 동온에서 30 분 교반하였다. 반응 종료를 HPLC 에 의해 확인 후, 아세트산에틸 (100 mL), 물 (100 mL) 를 부어 첨가하고, 분액하여, 유기층을 얻었다. 얻어진 유기층을 물 (100 mL) 로 재차 세정하고, 추가로 20 ％ 식염수 (50 mL) 로 세정하였다. 얻어진 유기층을 30 mL 까지 감압 농축하여, 아세트산에틸 (150 mL) 를 첨가하고, 50 mL 까지 감압 농축하였다. 농축액에 헵탄 (15 mL) 를 첨가하고, 화합물 II-3 의 종정을 첨가하고, 20 ℃ 에서 12 시간 교반하였다. 결정의 석출을 확인 후, 헵탄 (150 mL) 를 1 시간에 걸쳐 적하하고, 얻어진 슬러리액을 0-5 ℃ 로 냉각 후, 동온에서 1 시간 교반하고, 석출된 결정을 여과하였다. 여과 분리한 결정을 0-5 ℃ 의 아세트산에틸과 헵탄의 혼합액 (10/40 mL) 으로 세정하고, 40 ℃ 에서 감압 건조하여, 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노시드 (화합물 II-3) (12.9 g, 수율 94 ％) 를 백색 결정으로서 얻었다.
Figure pct00342
실시예 32 :
4-메톡시페닐 4-O-아세틸-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노시드 (화합물 II-4)
[화학식 326]
Figure pct00343
(소공정 3-3)
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노시드 (화합물 II-3) (10.0 g, 15.60 mmol) 의 피리딘 (40 mL) 용액에 디메틸아미노피리딘 (0.30 g, 2.46 mmol) 및 무수 아세트산 (2.41 g, 23.61 mmol) 을 첨가하고, 20 ℃ 에서 4 시간 교반하였다. 반응 종료를 HPLC 에 의해 확인 후, 50 ℃ 로 가열하여, 에탄올 (40 mL) 를 적하하고, 동온에서 30 분 교반하였다. 결정의 석출을 확인 후, 에탄올 (60 mL) 를 50 ℃ 에서 30 분에 걸쳐 적하하고, 동온에서 1 시간 교반하였다. 슬러리액을 25 ℃ 로 냉각하고, 물 (100 mL) 를 1 시간에 걸쳐 적하하였다. 슬러리액을 0-5 ℃ 로 냉각하고, 동온에서 1 시간 교반하였다. 석출된 결정을 여과하고, 여과 분리한 결정을 0-5 ℃ 의 에탄올과 물의 혼합액 (25/25 mL) 으로 세정하고, 40 ℃ 에서 감압 건조하여, 4-메톡시페닐 4-O-아세틸-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노시드 (화합물 II-4) (10.4 g, 수율 98 ％) 를 백색 결정으로서 얻었다.
Figure pct00344
실시예 33 :
4-O-아세틸-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-D-글루코피라노시드 (화합물 II-5)
[화학식 327]
Figure pct00345
(소공정 3-4)
4-메톡시페닐 4-O-아세틸-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노시드 (화합물 II-4) (10.0 g, 14.64 mmol) 의 디클로로메탄 (80 mL), 헥사플루오로2-프로판올 (50 mL) 및 물 (5 mL) 의 용액에, 25 ℃ 이하에서 [비스(트리플루오로아세톡시)요오드]벤젠 (8.82 g, 20.51 mmol) 을 첨가하고, 동온에서 4 시간 교반하였다. 반응 종료를 HPLC 에 의해 확인 후, 아세트산에틸 (250 mL) 를 첨가하고, 빙랭한 후, 탄산수소나트륨 (5 g) 및 아황산나트륨 (5 g) 을 용해한 물 (100 mL) 를 부어 첨가하고, 분액하여, 유기층을 얻었다. 얻어진 유기층을 탄산수소나트륨 (5 g) 및 아황산나트륨 (5 g) 을 용해한 물 (100 mL) 로 재차 세정하고, 추가로 20 ％ 식염수 (50 mL) 로 세정하였다. 얻어진 유기층을 100 mL 까지 감압 농축하고 (농축 중에 결정의 석출을 확인하였다), 헵탄 (150 mL) 를 적하하였다. 얻어진 슬러리액을 0-5 ℃ 로 냉각 후, 동온에서 1 시간 교반하고, 석출된 결정을 여과하였다. 여과 분리한 결정을 0-5 ℃ 의 아세트산에틸과 헵탄의 혼합액 (8/24 mL) 으로 세정하고, 40 ℃ 에서 감압 건조하여, 4-O-아세틸-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-D-글루코피라노시드 (화합물 II-5) (7.6 g, 수율 90 ％) 를 백색 결정으로서 얻었다.
Figure pct00346
실시예 34 :
4-O-아세틸-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-1-O-[2,2,2-트리플루오로-N-페닐에탄이미도일]-β-D-글루코피라노시드 (화합물 II-6)
[화학식 328]
Figure pct00347
(소공정 3-5)
4-O-아세틸-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-D-글루코피라노시드 (화합물 II-5) (3.0 g, 5.20 mmol) 및 몰레큘러시브 4A 분말 (분말 입경 10 ㎛ 이하) (1.5 g) 의 디클로로메탄 (75 mL) 용액을 0 ℃ 로 냉각하고, 2,2,2-트리플루오로-N-페닐아세트이미도일클로라이드 (1.40 g, 6.74 mmol) 및 N-메틸이미다졸 (0.68 g, 8.28 mmol) 을 적하하였다. 동온에서 15 시간 교반하고, 반응 종료를 HPLC 에 의해 확인 후, 반응액을 여과하고, 디클로로메탄 (15 mL) 으로 세정하고, 여과액을 얻었다. 0-5 ℃ 로 냉각한 여과액을 0-5 ℃ 의 5 ％ 식염수 (45 mL) 로 2 회 세정 후, 추가로 20 ％ 식염수 (15 mL) 로 세정하였다. 얻어진 유기층을 9 mL 까지 감압 농축하여, 톨루엔 (60 mL) 를 첨가하고, 30 mL 까지 감압 농축하였다. 농축액에 톨루엔 (30 mL) 를 첨가하고, 재차, 30 mL 까지 감압 농축하였다. 농축액을 0-5 ℃ 로 냉각하고, 0-5 ℃ 로 냉각한 중성 실리카 겔 (실리카 겔 60N, 40-50 ㎛, 3 g) 의 톨루엔 (15 mL) 슬러리액을 첨가하고, 동온에서 30 분 교반하여, 여과하였다. 여과 분리한 실리카 겔을 1 ％ 아세트산에틸 함유 톨루엔 용액 (75 mL) 으로 세정하였다. 얻어진 여과액을 7.5 mL 까지 감압 농축하여, 이소프로필에테르 (45 mL) 를 첨가하고, 화합물 II-6 의 종정을 접종하여, 20 ℃ 에서 1 시간 교반하였다. 결정의 석출을 확인 후, 헵탄 (45 mL) 를 적하하고, 15 시간 교반하였다. 슬러리액을 0-5 ℃ 로 냉각하고, 동온에서 1 시간 교반 후, 결정을 여과하였다. 여과 분리한 결정을 0-5 ℃ 의 이소프로필에테르와 헵탄의 혼합액 (3/6 mL) 으로 세정하고, 40 ℃ 에서 감압 건조하여, 4-O-아세틸-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-1-O-[2,2,2-트리플루오로-N-페닐에탄이미도일]-β-D-글루코피라노시드 (화합물 II-6) (3.2 g, 수율 76 ％) 를 백색 결정으로서 얻었다.
Figure pct00348
실시예 35 :
4-메톡시페닐 4-O-아세틸-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[4-O-아세틸-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노시드 (화합물 VI-1)
[화학식 329]
Figure pct00349
(소공정 3-6)
화합물 V-3 (10 mg, 5.41 μmol) 과 화합물 II-6 (16.2 mg, 0.02 mmol) 의 디클로로메탄 용액 (0.4 mL) 에 몰레큘러시브 4A (1 mg, 0.1 wt) 를 첨가 후, -40 ℃ 로 냉각하였다. 15 분 교반 후, 트리플루오로메탄술폰산t-부틸디메틸실릴의 디클로로메탄 용액 (0.16 M, 10 μL, 1.62 μmol) 을 첨가하였다. 2 시간 교반 후, 트리에틸아민 (10 μL, 0.08 mmol) 을 첨가하고, 실온에서 몰레큘러시브를 여과 제거하여, 디클로로메탄 (2 mL) 으로 세정하였다 (반응 용액 1).
화합물 V-3 (650 mg, 0.35 mmol) 과 화합물 II-6 (1.05 g, 1.41 mmol) 의 디클로로메탄 용액 (26 mL) 에 몰레큘러시브 4A (65 mg, 0.1 wt) 를 첨가 후, -40 ℃ 로 냉각하였다. 30 분 교반 후, 트리플루오로메탄술폰산t-부틸디메틸실릴의 디클로로메탄 용액 (0.4 M, 100 μL, 0.04 mmol) 을 첨가하였다. 3.5 시간 교반 후, 트리에틸아민 (14.7 μL, 0.11 mmol) 을 첨가하고, 실온에서 몰레큘러시브를 여과 제거하여, 디클로로메탄 (2.6 mL) 로 세정하였다 (반응 용액 2).
반응 용액 1 및 2 의 모두에 있어서 반응의 진행을 확인한 후, 양 용액을 혼합하고, 농축 건조 고화한 조체를 실리카 겔 크로마토그래피 (아세트산에틸/헥산 20 ％ → 40 ％) 로 정제하였다. 목적물을 포함하는 프랙션을 농축 건조 고화한 혼합물에 t-부틸메틸에테르 (8.5 mL) 를 첨가하고, 석출된 불용물을 여과 분리한 후, 여과 케이크를 t-부틸메틸에테르로 세정하였다. 얻어진 용액을 농축 건조 고화하고, 분취 HPLC (아세토니트릴/물 90 ％ → 100 ％) 로 정제하여, 화합물 VI-1 (860 mg, 수율 81 ％) 을 얻었다.
Figure pct00350
실시예 36 :
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노시드 (화합물 VI-3)
[화학식 330]
Figure pct00351
(소공정 3-7 ＆ 3-8)
화합물 VI-1 (860 mg, 0.29 mmol) 의 테트라하이드로푸란 (8.6 mL) 용액에 물 (0.9 mL) 와 50 ％ 수산화나트륨 수용액 (186 mg, 2.3 mmol) 을 첨가한 후, 50 ℃ 에서 26 시간 교반하였다. 계속해서, 50 ％ 수산화나트륨 수용액 (46 mg, 0.6 mmol) 을 첨가하여 18 시간 교반한 후, 메탄올 (0.86 mL) 를 첨가하였다. 4 시간 교반 후, 0 ℃ 로 냉각한 후, 4N 염산을 첨가하여 반응액의 pH 를 10 으로 조정하고, 4-메톡시페닐 2-아미노-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[2-아미노-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-2-아미노-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-β-D-글루코피라노시드 (화합물 VI-2) 를 포함하는 용액을 얻었다. 얻어진 용액을 농축 건조 고화한 후, 테트라하이드로푸란 (8.6 mL), 물 (0.9 mL), 탄산수소나트륨 (121.8 mg, 1.45 mmol), 클로로포름산 2,2,2-트리클로로에틸 (202.7 mg, 0.96 mmol) 을 첨가하였다. 실온에서 1 시간 교반한 후, 얻어진 현탁액에 물 (4.3 mL), 아세트산에틸 (8.6 mL) 를 첨가하였다. 수층을 제거한 후, 얻어진 유기층을 20 ％ 식염수로 2 회 세정하였다. 농축 건조 고화하여 얻어진 조체를 실리카 겔 크로마토그래피 (아세트산에틸/헥산 15 ％ → 55 ％) 로 정제하여, 화합물 VI-3 (593.7 mg, 수율 71 ％) 를 얻었다.
MS(ESI)(m/z) : 1458 ([M＋2NH4]2＋).
＜화합물 VI-3 또는 화합물 VI-6 의 합성＞
화합물 VI-3 또는 화합물 VI- 6을, 이하의 합성 스킴 3B 에 따라서 합성하였다.
[합성 스킴 3B]
[화학식 331]
Figure pct00352
실시예 37 :
4-메톡시페닐 4-O-아세틸-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 II-7)
[화학식 332]
Figure pct00353
(소공정 3-9)
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 II-1) (50.0 g, 83.94 mmol) 의 아세트산에틸 (200 mL) 용액에 트리에틸아민 (11.04 g, 109.12 mmol), 디메틸아미노피리딘 (0.31 g, 2.52 mmol) 및 무수 아세트산 (11.10 g, 109.12 mmol) 을 첨가하고, 20 ℃ 에서 4 시간 교반하였다. 반응 종료를 HPLC 에 의해 확인 후, 에탄올 (500 mL) 및 물 (150 mL) 를 적하하였다. 슬러리액을 1 시간 교반하고, 석출된 결정을 여과하고, 여과 분리한 결정을 에탄올과 물의 혼합액 (150/50 mL) 으로 세정하고, 40 ℃ 에서 감압 건조하여, 4-메톡시페닐 4-O-아세틸-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 II-7) (49.0 g, 수율 91 ％) 를 백색 결정으로서 얻었다.
Figure pct00354
실시예 38 :
4-O-아세틸-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-D-글루코피라노시드 (화합물 II-8)
[화학식 333]
Figure pct00355
(소공정 3-10)
4-메톡시페닐 4-O-아세틸-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 II-7) (49.0 g, 76.84 mmol) 의 디클로로메탄 (392 mL), 헥사플루오로2-프로판올 (245 mL) 및 물 (25 mL) 의 용액에, 25 ℃ 이하에서 [비스(트리플루오로아세톡시)요오드]벤젠 (46.3 g, 107.58 mmol) 을 첨가하고, 동온에서 4 시간 교반하였다. 반응 종료를 HPLC 에 의해 확인 후, 아세트산에틸 (1225 mL) 를 첨가하고, 빙랭한 후, 탄산수소나트륨 (24.5 g) 및 아황산나트륨 (24.5 g) 을 용해한 물 (490 mL) 를 부어 첨가하고, 분액하여, 유기층을 얻었다. 얻어진 유기층을 탄산수소나트륨 (24.5 g) 및 아황산나트륨 (24.5 g) 을 용해한 물 (490 mL) 로 재차 세정하고, 추가로 20 ％ 식염수 (245 g) 로 세정하였다. 얻어진 유기층을 490 mL 까지 감압 농축하고 (농축 중에 결정의 석출을 확인하였다), 헵탄 (735 mL) 를 적하하였다. 얻어진 슬러리액을 0-5 ℃ 로 냉각 후, 동온에서 1 시간 교반하고, 석출된 결정을 여과하였다. 여과 분리한 결정을 0-5 ℃ 의 아세트산에틸과 헵탄의 혼합액 (39/118 mL) 으로 세정하고, 40 ℃ 에서 감압 건조하여, 4-O-아세틸-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-D-글루코피라노시드 (화합물 II-8) (37.5 g, 수율 92 ％) 를 백색 결정으로서 얻었다.
Figure pct00356
실시예 39 :
4-O-아세틸-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-O-[2,2,2-트리플루오로-N-페닐에탄이미도일]-β-D-글루코피라노시드 (화합물 II-9)
[화학식 334]
Figure pct00357
(소공정 3-11)
4-O-아세틸-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-D-글루코피라노시드 (화합물 II-8) (5.0 g, 9.41 mmol) 및 몰레큘러시브 4A 분말 (분말 입경 10 ㎛ 이하) (2.5 g) 의 디클로로메탄 (125 mL) 용액을 0 ℃ 로 냉각하고, 2,2,2-트리플루오로-N-페닐아세트이미도일클로라이드 (1.95 g, 9.41 mmol) 및 N-메틸이미다졸 (0.85 g, 10.35 mmol) 을 적하하였다. 동온에서 15 시간 교반하고, 반응 종료를 HPLC 에 의해 확인 후, 0-5 ℃ 의 반응액을 중성 실리카 겔 (실리카 겔 60N, 40-50 ㎛, 15 g) 을 디클로로메탄으로 충전한 칼럼에 통액 여과하고, 디클로로메탄 (125 mL) 으로 세정하였다. 얻어진 여과액을 농축 건조 고화하여, 4-O-아세틸-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-O-[2,2,2-트리플루오로-N-페닐에탄이미도일]-β-D-글루코피라노시드 (화합물 II-9) (6.0 g, 수율 90 ％) 를 유상 화합물로서 얻었다.
Figure pct00358
실시예 40 :
4-메톡시페닐 4-O-아세틸-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[4-O-아세틸-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 VI-4)
[화학식 335]
Figure pct00359
(소공정 3-12)
4-메톡시페닐 3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 V-5) (410 mg, 0.227 mmol) 및 4-O-아세틸-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-O-[2,2,2-트리플루오로-N-페닐에탄이미도일]-β-D-글루코피라노시드 (화합물 II-9) (800 mg, 1.14 mmol) 을 30 mL 2 구 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄 (8.2 mL) 및 몰레큘러시브 4A 분말 (61.5 mg) 을 첨가하였다. 질소하, -65 ℃ 에서 트리플루오로메탄술폰산 tert-부틸디메틸실릴 (10.4 μL, 45 μmol) 을 5 분간에 걸쳐 적하하고, 동온에서 1 시간 교반하였다. HPLC 에 의해 반응 종료를 확인 후, 트리에틸아민 (12.6 μL, 90 μmol) 을 첨가하고 실온에서 1 시간 교반하였다. 반응액을 셀라이트 여과하고, 디클로로메탄 (2.1 mL) 으로 세정하였다. 여과액을 물 (4.1 mL) 로 2 회 분액하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조 후, 여과 분리하여, 농축하였다. 농축 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카량 : 20 g, 전개 용매 : 톨루엔/아세트산에틸 = 9/1 내지 8/2) 로 정제하고, 주류를 감압 농축함으로써, 4-메톡시페닐 4-O-아세틸-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[4-O-아세틸-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 VI-4) (534 mg, 단리 수율 83 ％) 를 백색 아모르퍼스로서 얻었다.
Figure pct00360
Figure pct00361
실시예 41 :
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 VI-5)
[화학식 336]
Figure pct00362
(소공정 3-13)
4-메톡시페닐 4-O-아세틸-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[4-O-아세틸-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 VI-4) (530 mg, 0.187 mmol) 을 30 mL 2 구 플라스크에 첨가하고, 테트라하이드로푸란 (2.1 mL), 메탄올 (1.1 mL) 및 트리플루오로아세트산메틸 (19 μL, 0.187 mmol) 을 첨가하였다. 질소하, 실온에서 20 분간 교반한 후, tert-부톡시칼륨의 1M 테트라하이드로푸란 용액 (94 μL, 94 μmol) 을 적하하고, 50 ℃에서 3 시간 교반하였다. HPLC 에 의해 반응 종료를 확인 후, 실온까지 냉각하였다. 아세트산 (11 μL, 0.187 mmol) 을 첨가하였다. 아세트산에틸 (10.3 mL) 를 첨가한 후, 5 ％ 식염수 (10 mL) 로 2 회 분액하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조 후, 여과 분리하여, 농축함으로써, 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 VI-5) (460 mg, 단리 수율 90 ％) 를 백색 아모르퍼스로서 얻었다. 본품은 정제를 실시하지 않고, 그대로 다음 공정에 사용하였다.
Figure pct00363
실시예 42 :
4-메톡시페닐 2-아미노-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[2-아미노-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-2-아미노-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-β-D-글루코피라노시드 (화합물 VI-2)
[화학식 337]
Figure pct00364
(소공정 3-14)
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(1,3-디옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 VI-5) (460 mg, 0.168 mmol) 의 톨루엔 용액 (920 μL) 을 30 mL 가지형 플라스크에 첨가하고, 1-부탄올 (1.2 mL) 및 에틸렌디아민 (224 μL) 을 첨가하였다. 질소하, 80 ℃에서 22 시간 교반하였다. HPLC 에 의해 반응 종료를 확인 후, 실온까지 냉각하였다. 시클로펜틸메틸에테르 (6.9 mL) 를 첨가하고 17 시간 교반하였다. 석출물을 여과 분리 후, 여과액을 25 ％ 메탄올 수용액 (6.9 mL) 으로 3 회 분액하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조 후, 여과 분리하여, 농축함으로써, 4-메톡시페닐 2-아미노-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[2-아미노-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-2-아미노-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-β-D-글루코피라노시드 (화합물 VI-2) (360 mg, 단리 수율 92 ％) 를 백색 아모르퍼스로서 얻었다. 본품은 정제를 실시하지 않고, 그대로 다음 공정에 사용하였다.
Figure pct00365
실시예 43 :
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노시드 (화합물 VI-3)
[화학식 338]
Figure pct00366
(소공정 3-15)
4-메톡시페닐 2-아미노-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[2-아미노-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-2-아미노-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-β-D-글루코피라노시드 (화합물 VI-2) (300 mg, 0.127 mmol) 의 시클로펜틸메틸 용액 (600 μL) 을 30 mL 가지형 플라스크에 첨가하고, 테트라하이드로푸란 (3 mL), 물 (1.5 mL) 및 탄산수소나트륨 (53 mg, 0.635 mmol) 을 첨가하였다. 클로로포름산 2,2,2-트리클로로에틸 (58 μL, 0.419 mmol) 을 10 분간에 걸쳐 적하한 후, 3 시간 교반하였다. HPLC 에 의해 반응 종료를 확인 후, 아세트산에틸 (3 mL) 를 첨가한 후, 물 (3 mL) 로 2 회 분액하였다. 유기층을 20 ％ 식염수 (1.5 mL) 로 세정하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조 후, 여과 분리하여, 농축하였다. 농축 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카량 : 20 g, 전개 용매 : 톨루엔/아세트산에틸 = 9/1 내지 8/2) 로 정제하여, 주류를 감압 농축함으로써, 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노시드 (화합물 VI-3) (279 mg, 단리 수율 76 ％) 를 백색 아모르퍼스로서 얻었다.
Figure pct00367
다른 루트에 있어서 합성한 화합물 VI-3 과 1H-NMR 의 일치를 확인하였다.
실시예 44 :
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-아세틸아미노-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-아세틸아미노-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-아세틸아미노-β-D-글루코피라노시드 (화합물 VI-6)
[화학식 339]
Figure pct00368
(소공정 3-16)
4-메톡시페닐 2-아미노-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[2-아미노-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-2-아미노-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-β-D-글루코피라노시드 (화합물 VI-2) (360 mg, 0.153 mmol) 의 시클로펜틸메틸 용액 (720 μL) 을 50 mL 가지형 플라스크에 첨가하고, 테트라하이드로푸란 (3.6 mL), 트리에틸아민 (0.192 mL, 1.37 mmol) 및 디메틸아미노피리딘 (3.7 mg, 31 μmol) 을 첨가하였다. 무수 아세트산 (101 μL, 1.07 mmol) 을 첨가한 후, 2 시간 교반하였다. HPLC 에 의해, 이하의 식 VI-7 :
[화학식 340]
Figure pct00369
로 나타내는 화합물이 생성된 것을 확인 후, 아세트산에틸 (5.4 mL) 를 첨가하고, 물 (3.6 mL) 로 분액하였다. 유기층에 5 ％ 탄산수소나트륨 수용액 (3.6 mL) 를 첨가하여 분액하였다. 유기층에 물 (3.6 mL) 를 첨가하여 분액하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조 후, 여과 분리하여, 농축하였다. 농축 잔류물 (410 mg) 의 메탄올 (5.4 mL) 용액을 50 mL 가지형 플라스크에 첨가하였다. 28 ％ 나트륨메톡시드의 메탄올 용액 (74 μL, 0.306 mmol) 을 첨가하고, 3 시간 교반하였다. HPLC 에 의해 반응 종료를 확인 후, 아세트산 (22 μL, 0.383 mmol) 을 첨가하고, 농축하였다. 농축 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카량 : 20 g, 전개 용매 : 톨루엔/아세트산에틸 = 3/1 내지 1/1) 로 정제하고, 주류를 감압 농축함으로써, 4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-아세틸아미노-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-아세틸아미노-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-아세틸아미노-β-D-글루코피라노시드 (화합물 VI-6) (250 mg, 단리 수율 66 ％) 를 백색 아모르퍼스로서 얻었다.
Figure pct00370
Figure pct00371
＜화합물 IX-5 의 합성＞
화합물 IX-5 를, 이하의 합성 스킴 4 에 따라서 합성하였다.
[합성 스킴 4]
[화학식 341]
Figure pct00372
실시예 45 :
프로프-2-엔-1-일 2,3-디-О-벤조일-4,6-О-벤질리덴-α-D-갈락토피라노시드 (화합물 VII-2)
[화학식 342]
Figure pct00373
(소공정 4-1)
프로프-2-엔-1-일 4,6-О-벤질리덴-α-D-갈락토피라노시드 (화합물 VII-1) (30.0 g, 97.30 mmol) 의 피리딘 (150 mL) 용액에, 염화벤조일 (47.87 g, 340.54 mmol) 을 40 ℃ 이하에서 적하하고, 동온에서 2 시간 교반하였다. 반응 종료를 HPLC 로 확인 후, 20-30 ℃ 로 냉각하고, 에탄올 (450 mL) 를 부어 첨가한 후, 물 (300 mL) 를 30 분에 걸쳐 적하하였다. 슬러리액을 20-30 ℃ 에서 1 시간 교반 후, 석출된 결정을 여과하고, 여과 분리한 결정을 에탄올과 물의 혼합액 (75/75 mL) 으로 세정하고, 40 ℃ 에서 감압 건조하여, 프로프-2-엔-1-일 2,3-디-О-벤조일-4,6-О-벤질리덴-α-D-갈락토피라노시드 (화합물 VII-2) (47.9 g, 수율 95 ％) 를 백색 결정으로서 얻었다.
Figure pct00374
실시예 46 :
프로프-2-엔-1-일 2,3-디-О-벤조일-α-D-갈락토피라노시드 (화합물 VII-3)
[화학식 343]
Figure pct00375
(소공정 4-2)
프로프-2-엔-1-일 2,3-디-О-벤조일-4,6-О-벤질리덴-α-D-갈락토피라노시드 (화합물 VII-2) (47.1 g, 91.18 mmol) 의 아세토니트릴 (377 mL) 용액을 45 ℃ 로 가온하고, 물 (24 mL), 농염산 (9.2 g, 91.18 mmol) 을 첨가하고, 동온에서 30 분 교반하였다. 물 (353 mL) 를 45-50 ℃ 에서 3 시간에 걸쳐 적하 후, 추가로 30 분 교반하였다. 반응 종료를 HPLC 에 의해 확인 후, 아세트산나트륨 (11.22 g, 136.78 mmol) 을 첨가하고, 아세트산에틸 (942 mL), 물 (471 mL) 를 부어 첨가하고, 25 ℃ 이하로 냉각 후, 분액하여, 유기층을 얻었다. 얻어진 유기층을 물 (471 mL) 로 2 회 세정 후, 20 ％ 식염수 (236 mL) 로 추가로 세정하였다. 유기층을 141 mL 까지 감압 농축하여, 톨루엔 (707 mL) 를 첨가하고, 재차, 141 mL 까지 감압 농축하였다. 얻어진 농축액에 톨루엔 (236 mL) 를 첨가하고, 141 mL 까지 감압 농축하였다. 농축액을 0-5 ℃ 로 냉각 후, 0-5 ℃ 로 냉각한 중성 실리카 겔 (실리카 겔 60N, 40-50 ㎛, 141 g) 을 포함하는 톨루엔 (330 mL) 슬러리액을 부어 첨가하고, 동온에서 15 분 교반하여 생성물을 실리카 겔에 흡착시킨 후, 여과하였다. 생성물을 포함하는 실리카 겔 고상을 0-5 ℃ 의 톨루엔 (942 mL) 으로 세정 후 (톨루엔 세정시의 여과액은 폐기), 시클로펜틸메틸에테르 (707 mL) 에 의해 목적물을 실리카 겔로부터 탈착시켜, 프로프-2-엔-1-일 2,3-디-О-벤조일-α-D-갈락토피라노시드 (화합물 VII-3) 의 시클로펜틸메틸에테르 용액 (정량치 36.2 g, 정량 수율 93 ％) 를 얻었다. 본 용액을 다음 공정에 사용하였다.
실시예 47 :
메틸 5-아세트아미드-3,5-디데옥시-D-글리세로-D-갈락토-논-2-우로피라노소네이트 1 수화물 (화합물 VIII-2)
[화학식 344]
Figure pct00376
(소공정 4-3)
5-아세트아미드-3,5-디데옥시-D-글리세로-D-갈락토-논-2-우로피라노소닉산 (화합물 VIII-1) (40.1 g, 129.66 mmol) 및 오르토포름산메틸 (15.60 mL, 142.59 mmol) 의 메탄올 (321 mL) 용액에 황산 (1.0 g, 10.20 mmol) 을 첨가하고, 40 ℃ 로 가온하여, 3 시간 교반하였다. 반응 종료를 HPLC 에 의해 확인 후, 25 ℃ 로 냉각하고, 디메틸아세트아미드 (40 mL) 를 첨가하고, 160 mL 까지 감압 농축하였다. 얻어진 농축액을 15 ℃ 로 온도 조정하고, 물 (20 mL) 및 아세트산에틸 (722 mL) 를 부어 첨가하고, 25 ℃ 에서 1 시간 교반 후, 슬러리액을 0-5 ℃ 로 냉각하고, 동온에서 2 시간 교반하였다. 석출된 결정을 여과하고, 여과 분리한 결정을 0-5 ℃ 의 아세트산에틸 (80 mL) 로 세정하고, 40 ℃ 에서 감압 건조하여, 메틸 5-아세트아미드-3,5-디데옥시-D-글리세로-D-갈락토-논-2-우로피라노소네이트 1 수화물 (화합물 VIII-2) (41.1 g, 수율 93 ％) 를 백색 결정으로서 얻었다.
Figure pct00377
실시예 48 :
메틸 5-아세트아미드-4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-D-글리세로-D-갈락토-논-2-우로피라노소네이트 (화합물 VIII-3)
[화학식 345]
Figure pct00378
(소공정 4-4)
메틸 5-아세트아미드-3,5-디데옥시-D-글리세로-D-갈락토-논-2-우로피라노소네이트 1 수화물 (화합물 VIII-2) (40.3 g, 118.07 mmol) 의 아세토니트릴 (403 mL) 슬러리액을 25 ℃ 로 온도 조정하고, 무수 아세트산 (60.27 g, 590.36 mmol) 및 파라톨루엔술폰산 1 수화물 (1.12 g, 5.89 mmol) 을 첨가하고, 25 ℃ 에서 24 시간 교반하였다. 그 후, 반응액을 15 ℃ 로 냉각하고, 무수 아세트산 (12.05 g, 118.03 mmol) 을 첨가하고, 동온에서 47 시간 교반하였다. HPLC 에 의해 반응 종료를 확인 후, 메탄올 (40 mL) 를 첨가하고, 25 ℃ 로 온도 조정하고, 동온에서 2 시간 교반하였다. 다음으로, 아세트산나트륨 (0.97 g, 11.82 mmol) 을 첨가하고, 추가로 동온에서 1 시간 교반하였다. 반응액을 120 mL 까지 감압 농축하여, 0-5 ℃ 로 냉각 후, 아세트산에틸 (403 mL) 및 물 (161 mL) 를 부어 첨가하고, 0-5 ℃ 교반하, 트리에틸아민을 첨가하고, pH 를 7.0 으로 조정하였다. 분액에 의해 얻어진 유기층을 10 ％ 식염수 (121 mL) 로 2 회 세정하고, 200 mL 까지 감압 농축하였다. 농축액에 아세트산에틸 (605 mL) 를 첨가하고, 재차, 200 mL 까지 감압 농축하였다. 농축액에 아세트산에틸 (40 mL) 를 첨가하고, 종정을 접종하여, 25 ℃ 에서 4 시간 교반 후, 헵탄 (302 mL) 를 30 분에 걸쳐 적하하였다. 슬러리액을 25 ℃ 에서 2 시간 교반 후, 석출된 결정을 여과하고, 여과 분리한 결정을 아세트산에틸과 헵탄의 혼합액 (67/135 mL) 으로 세정하고, 35 ℃ 에서 감압 건조하여, 메틸 5-아세트아미드-4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-D-글리세로-D-갈락토-논-2-우로피라노소네이트 (화합물 VIII-3) (44.1 g, 수율 76 ％) 를 백색 결정으로서 얻었다.
Figure pct00379
실시예 49 :
메틸 5-아세트아미드-4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-2-O-(2,2,2-트리플루오로-N-페닐에탄이미도일)-D-글리세로-β-D-갈락토-논-2-우로피라노소네이트 (화합물 VIII-4)
[화학식 346]
Figure pct00380
(소공정 4-5)
메틸 5-아세트아미드-4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-D-글리세로-D-갈락토-논-2-우로피라노소네이트 (화합물 VIII-3) (44.0 g, 89.53 mmol) 및 몰레큘러시브 4A 분말 (분말 입경 10 ㎛ 이하) (22 g) 의 디클로로메탄 (352 mL) 슬러리액을 20 ℃ 로 온도 조정하고, 동온에서 30 분 교반 후, 2,2,2-트리플루오로-N-페닐아세트이미도일클로라이드 (26.02 g, 125.35 mmol) 을 첨가하였다. 계속해서, N-메틸이미다졸 (11.03 g, 134.33 mmol) 을 적하하고, 20 ℃ 에서 7.5 시간 교반하였다. HPLC 에 의해 반응 종료를 확인 후, 반응액을 여과하고, 디클로로메탄 (88 mL) 으로 세정하고, 여과액을 얻었다. 얻어진 여과액을 0 ℃ 로 냉각하고, 냉수 (440 mL) 를 첨가하고, 0-5 ℃ 교반하, 트리에틸아민을 첨가하고, pH 를 7.5 로 조정하였다. 0-5 ℃ 에서 30 분 교반 후, 분액하고, 얻어진 유기층을 냉수 (440 mL) 로 2 회, 냉각한 20 ％ 식염수 (220 mL) 로 세정하고, 88 mL 까지 감압 농축하였다. 농축액에 아세트산에틸 (440 mL) 를 첨가하고, 재차, 88 mL 까지 감압 농축하였다. 농축액에 t-부틸메틸에테르 (308 mL) 를 첨가하고, 종정을 접종하여, 20 ℃ 에서 4 시간 교반하였다. 얻어진 슬러리액에 헵탄 (264 mL) 를 1 시간에 걸쳐 적하하고, 동온에서 2 시간 교반 후, 석출된 결정을 여과하고, 여과 분리한 결정을 t-부틸메틸에테르와 헵탄의 혼합액 (132/88 mL) 으로 세정하고, 35 ℃ 에서 감압 건조하여, 메틸 5-아세트아미드-4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-2-O-(2,2,2-트리플루오로-N-페닐에탄이미도일)-D-글리세로-β-D-갈락토-논-2-우로피라노소네이트 (화합물 VIII-4) (39.5 g, 수율 67 ％) 를 백색 결정으로서 얻었다.
Figure pct00381
실시예 50 :
메틸 4,7,8,9-테트라-O-아세틸-5-[아세틸(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3,5-디데옥시-2-O-(2,2,2-트리플루오로-N-페닐에탄이미도일)-D-글리세로-β-D-갈락토-논-2-우로피라노소네이트 (화합물 VIII-5)
[화학식 347]
Figure pct00382
(소공정 4-6)
메틸 5-아세트아미드-4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-2-O-(2,2,2-트리플루오로-N-페닐에탄이미도일)-D-글리세로-β-D-갈락토-논-2-우로피라노소네이트 (화합물 VIII-4) (39.0 g, 58.86 mmol) 의 테트라하이드로푸란 (390 mL) 용액에 2 탄산디tert-부틸 (27.05 g, 123.94 mmol) 및 디메틸아미노피리딘 (1.80 g, 14.73 mmol) 을 첨가하고, 환류 온도까지 가온하였다. 환류하에서 30 분 교반 후, HPLC 에 의해 반응 종료를 확인하고, 반응액을 117 mL 까지 감압 농축하였다. 농축액에 톨루엔 (195 mL) 를 첨가하고, 재차, 117 mL 까지 감압 농축하였다. 농축액을 실리카 겔 충전한 깔때기 (실리카 겔 60N, 40-50 ㎛, 117 g, 톨루엔 습식 충전) 를 사용하여, 여과하고, 톨루엔·아세트산에틸 혼액 (8/2) (975 mL) 으로 세정하고, 여과액을 얻었다. 얻어진 여과액을 감압 농축하고 (중량 59 g 이 될 때까지), 시클로펜틸메틸에테르 (23 mL) 를 첨가하였다. 용액을 20 ℃ 로 온도 조정하고, 헵탄 (156 mL) 를 15 분에 걸쳐 적하하고, 동온에서 1 시간 교반하였다. 결정의 석출을 확인 후, 헵탄 (312 mL) 를 1 시간에 걸쳐 적하하고, 석출된 결정을 여과하고, 여과 분리한 결정을 헵탄 (78 mL) 으로 세정하고, 35 ℃ 에서 감압 건조하여, 메틸 4,7,8,9-테트라-O-아세틸-5-[아세틸(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3,5-디데옥시-2-O-(2,2,2-트리플루오로-N-페닐에탄이미도일)-D-글리세로-β-D-갈락토-논-2-우로피라노소네이트 (화합물 VIII-5) (37.0 g, 수율 82 ％) 를 백색 결정으로서 얻었다.
1H-NMR (500 MHz, CDCl3)
주) ca. 1/4 이성체 혼합물로서 검출되었다.
Figure pct00383
실시예 51 :
프로프-2-엔-1-일 2,3-디-O-벤조일-6-O-{4,7,8,9-테트라-O-아세틸-5-[아세틸(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3,5-디데옥시-1-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실}-α-D-갈락토피라노시드 (화합물 IX-1)
[화학식 348]
Figure pct00384
(소공정 4-7)
프로프-2-엔-1-일 2,3-디-О-벤조일-α-D-갈락토피라노시드 (화합물 VII-3) 의 시클로펜틸메틸에테르 용액 (정량치 31.46 g, 73.43 mmol) 을 105 mL 까지 감압 농축한 후, 메틸 4,7,8,9-테트라-O-아세틸-5-[아세틸(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3,5-디데옥시-2-O-(2,2,2-트리플루오로-N-페닐에탄이미도일)-D-글리세로-β-D-갈락토-논-2-우로피라노소네이트 (화합물 III-5) (35.0 g, 45.89 mmol) 의 시클로펜틸메틸에테르 (175 mL) 용액에 첨가하였다. 다음으로, 얻어진 혼합 용액에 시클로펜틸메틸에테르를 첨가하고, 전체량을 350 mL 로 조정하였다 (화합물 VII-3및 화합물 III-5 의 시클로펜틸메틸에테르 혼합 용액). 별도 용기에 시클로펜틸메틸에테르 (525 mL) 및 몰레큘러시브 4A 분말 (분말 입경 10 ㎛ 이하) (17.5 g) 을 첨가하고, -60 ℃ 로 냉각 후, 트리플루오로메탄술폰산트리메틸실릴 (4.2 mL, 23.24 mmol) 을 첨가하였다. 이 용액에 대해, -60 ℃, 강한 교반하에, 화합물 VII-3 및 화합물 III-5 의 시클로펜틸메틸에테르 혼합 용액을 4.5 시간에 걸쳐 적하하고, 동온에서 2 시간 교반하였다. HPLC 에 의해 반응 종료를 확인한 후, 트리에틸아민 (4.5 mL, 32.12 mmol) 을 첨가하고, 반응액을 0 ℃ 까지 승온하였다. 그 후, 셀라이트 545 (35.00 g) 을 첨가한 후, 반응액을 여과하고, 시클로펜틸메틸에테르 (175 mL) 로 세정하였다. 여과액에 물 (350 mL) 를 첨가하여 분액하였다. 다음으로, 유기층에 0.5N 염산수 (350 mL) 를 첨가하고, 20 ℃ 에서 2 시간 교반하였다. HPLC 에 의해 부생성물의 분해를 확인한 후, 분액하여 유기층을 얻었다. 유기층을 물 (350 mL), 20 ％ 식염수 (175 mL) 로 세정 후, 70 mL 까지 감압 농축하였다. 농축액에 톨루엔 (700 mL) 를 첨가하고, 70 mL 까지 감압 농축하였다. 재차, 농축액에 톨루엔 (700 mL), 중성 실리카 겔 (실리카 겔 60N, 40-50 ㎛, 158 g) 을 첨가하고, 20 ℃ 에서 30 분 교반하였다. 생성물을 실리카 겔에 흡착시킨 후, 여과하고, 생성물을 포함하는 실리카 겔 고상을 톨루엔 (1575 mL) 으로 세정 후 (톨루엔 세정시의 여과액은 폐기), 아세트산에틸 (875 mL) 에 의해 목적물을 실리카 겔로부터 탈착시켰다. 얻어진 아세트산에틸 용액을 70 mL 까지 감압 농축하여, 톨루엔 (175 mL) 를 첨가하고, 재차, 70 mL 까지 감압 농축하여, 프로프-2-엔-1-일 2,3-디-O-벤조일-6-O-{4,7,8,9-테트라-O-아세틸-5-[아세틸(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3,5-디데옥시-1-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실}-α-D-갈락토피라노시드 (화합물 IX-1) 의 톨루엔 용액을 얻었다. 본 용액을 다음 공정에 사용하였다.
실시예 52 :
프로프-2-엔-1-일 6-O-{5-아세트아미드-4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-1-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실}-2,3-디-O-벤조일-α-D-갈락토피라노시드 (화합물 IX-2)
[화학식 349]
Figure pct00385
(소공정 4-8)
상기 서술한 바와 같이 취득한 프로프-2-엔-1-일 2,3-디-O-벤조일-6-O-{4,7,8,9-테트라-O-아세틸-5-[아세틸(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3,5-디데옥시-1-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실}-α-D-갈락토피라노시드 (화합물 IX-1) 의 톨루엔 용액에, 디클로로메탄 (525 mL) 및 트리플루오로메탄술폰산구리 (II) (8.30 g, 22.95 mmol) 을 첨가하고, 40 ℃ 로 승온하여, 동온에서 2 시간 교반하였다. HPLC 에 의해 반응 종료를 확인한 후, 25 ℃ 로 냉각하고, 70 mL 까지 감압 농축하였다. 농축액에 아세트산에틸 (525 mL) 를 첨가하고, 5 ％ 식염수 (350 mL) 로 3 회 세정 후, 유기층에 헵탄 (263 mL) 를 첨가하고, 20 ％ 메탄올수 (525 mL) 로 4 회 세정하였다. HPLC 에 의해, 글리코실화 반응에서 부생된 화합물 8 의 β 탈리체 유래의 불순물이 수층에 제거되어 있는 것을 확인 후, 유기층을 70 mL 까지 감압 농축하였다. 농축액에 아세트산이소프로페닐 (525 mL) 를 첨가하고, 350 mL 까지 감압 농축하여, 프로프-2-엔-1-일 6-O-{5-아세트아미드-4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-1-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실}-2,3-디-O-벤조일-α-D-갈락토피라노시드 (화합물 IX-2) 의 아세트산이소프로페닐 용액을 얻었다. 본 용액을 다음 공정에 사용하였다.
실시예 53 :
프로프-2-엔-1-일 4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-6-O-[4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(디아세틸아미노)-1-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실]-α-D-갈락토피라노시드 (화합물 IX-3)
[화학식 350]
Figure pct00386
(소공정 4-9)
상기 서술한 바와 같이 취득한 프로프-2-엔-1-일 6-O-{5-아세트아미드-4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-1-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실}-2,3-디-O-벤조일-α-D-갈락토피라노시드 (화합물 IX-2) 의 아세트산이소프로페닐 용액에, 파라톨루엔술폰산 1 수화물 (0.88 g, 4.62 mmol) 을 첨가하고, 환류 온도까지 승온하여 (내온 90 ℃ 부근), 동온에서 3 시간 교반하였다. HPLC 에 의해 반응 종료를 확인한 후, 25 ℃ 로 냉각하고, 트리에틸아민 (0.95 mL, 6.85 mmol) 을 첨가하고, 70 mL 까지 감압 농축하였다. 농축액에 톨루엔 (350 mL) 를 첨가하고, 재차, 70 mL 까지 감압 농축하였다. 농축액에 톨루엔 (630 mL) 를 첨가하고, 중성 실리카 겔 (실리카 겔 60N, 40-50 ㎛, 123 g) 을 첨가하고, 동온에서 30 분 교반하여 생성물을 실리카 겔에 흡착시킨 후, 여과하였다. 생성물을 포함하는 실리카 겔 고상을 톨루엔 (1925 mL) 및 톨루엔, 아세트산에틸 혼액 (97/3, 1400 mL) 으로 세정 후 (세정시의 여과액은 폐기), 생성물을 포함하는 실리카 겔 고상으로부터 아세트산에틸 (1050 mL) 에 의해 목적물을 탈착시키고, 얻어진 아세트산에틸 용액을 감압 농축함으로써, 프로프-2-엔-1-일 4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-6-O-[4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(디아세틸아미노)-1-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실]-α-D-갈락토피라노시드 (화합물 IX-3) (30.1 g, 수율 67 ％ (화합물 VIII-5 기준)) 를 백색 포말 고체로서 얻었다 (0.42 당량의 톨루엔 (약 4 중량％) 을 포함한다).
Figure pct00387
얻어진 화합물에 대해, 하기 문헌과 스펙트럼의 일치를 확인하였다 : 문헌 4) J. Org. Chem. 2016, 81, 10600-10616.
실시예 54-1 :
4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-6-O-[4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(디아세틸아미노)-1-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실]-D-갈락토피라노스 (화합물 IX-4)
[화학식 351]
Figure pct00388
(소공정 4-10)
프로프-2-엔-1-일 4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-6-O-[4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(디아세틸아미노)-1-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실]-α-D-갈락토피라노시드 (화합물 IX-3) (29.00 g, 29.41 mmol), 1,3-디메틸바르비투르산 (9.19 g, 58.86 mmol), 및 트리페닐포스핀 (2.31 g, 8.81 mmol) 의 메탄올 용액 (290 mL) 를 감압, 질소 치환을 5 회 반복하고, 탈기 조작을 실시한 후, 아세트산팔라듐 (II) (0.66 g, 2.94 mmol) 을 첨가하고, 40 ℃ 에서 12 시간 교반하였다. HPLC 에 의해 반응 종료를 확인한 후, 톨루엔 (580 mL) 및 물 (1015 mL) 를 첨가하고, 분액하여, 유기층을 얻었다. 유기층을 20 ％ 메탄올 물 (580 mL) 로 4 회 세정하고, 1,3-디메틸바르비투르산을 수층으로 제거한 후, 58 mL 까지 감압 농축하여, 톨루엔 (435 mL) 를 첨가하고, 재차, 58 mL 까지 감압 농축하였다. 농축액에 톨루엔 (383 mL), 클로로포름 (197 mL), 및 중성 실리카 겔 (실리카 겔 60N, 40-50 ㎛, 145 g) 을 첨가하고, 30 분 교반하여 생성물을 실리카 겔에 흡착시킨 후, 여과하였다. 생성물을 포함하는 실리카 겔 고상을 톨루엔, 클로로포름 혼액 (2/1, 4350 mL) 으로 세정 후 (세정시의 여과액은 폐기), 생성물을 포함하는 실리카 겔 고상으로부터 아세트산에틸 (870 mL) 에 의해 목적물을 탈착시켰다. 얻어진 아세트산에틸 용액에 SH 실리카 겔 (29.00 g) 을 첨가하고, 30 분 교반 후, 여과하고, 아세트산에틸 (145 mL) 로 세정하여, 목적물을 포함하는 아세트산에틸 용액을 얻었다. 얻어진 용액을 58 mL 까지 감압 농축하여, 톨루엔 (145 mL) 를 첨가하고, 재차 58 mL 까지 감압 농축하였다. 농축액을 실리카 겔 칼럼 정제하고 (실리카 겔 60N, 40-50 ㎛, 290 g, 이동상 헥산/아세트산에틸 50/50 ∼ 30/70), 선정한 프랙션을 29 mL 까지 감압 농축하였다. 농축액에, 아세트산에틸 (290 mL) 및 활성탄 (백로 (白鷺) A, 14.5 g) 을 첨가하고 30 분 교반 후, 여과하고, 아세트산에틸 (87 mL) 로 세정하여, 목적물을 포함하는 정제 아세트산에틸 용액을 얻었다. 얻어진 용액을 감압 농축하여, 4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-6-O-[4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(디아세틸아미노)-1-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실]-D-갈락토피라노스 (화합물 IX-4) (18.70 g, 수율 67 ％) 를 백색 포말 고체로서 얻었다
Figure pct00389
실시예 54-2 :
4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-6-O-[4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(디아세틸아미노)-1-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실]-D-갈락토피라노스 (화합물 IX-4) 의 결정화에 의한 정제법
[화학식 352]
Figure pct00390
4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-6-O-[4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(디아세틸아미노)-1-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실]-D-갈락토피라노스 (화합물 IX-4) (3.00 g, 3.17 mmol, 시아릴부 α/β 비 = 95.7/4.3) 을 아세트산에틸 (4 mL) 로 용해 후, 2-프로판올 (60 mL) 를 첨가하고, 25 ℃ 에서 교반한 후, 18 mL 까지 감압 농축하였다. 슬러리액을 0 ℃ 에서 3 시간 교반하고, 석출된 결정을 여과하였다. 여과 분리한 결정을 냉(冷) 2-프로판올 (9 mL) 로 세정하고, 40 ℃ 에서 감압 건조하여, 4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-6-O-[4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(디아세틸아미노)-1-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실]-D-갈락토피라노스 (화합물 IX-4) (2.66 g, 수율 88.7 ％, 시아릴부 α/β 비 = ＞99.9/N.D.) 를 백색 결정으로서 얻었다.
[분석 조건]
칼럼 : CAPCELL PAK ADME φ4.6×150 ㎜, 막두께 3 ㎛
파장 : 220 ㎚
오븐 : 40 ℃
용리액 : (A) 0.1 ％ 트리플루오로아세트산 수용액, (B) 아세토니트릴
그래디언트 : 0-150 min (B) conc. 40 ％
150.1 min (B) conc. 95 ％
155 min (B) conc. 95 ％
155.1 min (B) conc. 40 ％
160 min (B) conc. 40 ％
유속 : 1 mL/min
인젝션 : 5 μL
시아릴부 α 체 : 131.0 min, 시아릴부 β 체 : 126.2 min
실시예 55 :
4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-6-O-[4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(디아세틸아미노)-1-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실]-1-O-(2,2,2-트리플루오로-N-페닐에탄이미도일)-D-갈락토피라노스 (화합물 IX-5)
[화학식 353]
Figure pct00391
(소공정 4-11)
4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-6-O-[4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(디아세틸아미노)-1-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실]-D-갈락토피라노스 (화합물 IX-4) (42.9 g, 45.4 mmol) 의 아세톤 용액 (500 mL) 에, 2,2,2-트리플루오로-N-페닐아세트이미도일클로라이드 (19.0 g, 91.5 mmol) 및 탄산칼륨 (19.0 g, 137 mmol) 을 첨가하고, 실온에서 18 시간 교반하였다. 슬러리액을 여과 후, 소량의 아세톤으로 세정하고, 감압 농축하였다. 농축액을 실리카 겔 칼럼 정제하고 (실리카 겔 60N, 40-50 ㎛, 400 g, 이동상 헥산/아세트산에틸 75/25 ∼ 30/70), 선정한 프랙션을 감압 농축하여, 4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-6-O-[4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(디아세틸아미노)-1-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실]-1-O-(2,2,2-트리플루오로-N-페닐에탄이미도일)-D-갈락토피라노스 (화합물 IX-5) (49.5 g, 수율 98 ％) 를 백색 포말 고체로서 얻었다.
Figure pct00392
얻어진 화합물에 대해, 하기 문헌과 스펙트럼의 일치를 확인하였다 : 문헌 4) J. Org. Chem. 2016, 81, 10600-10616.
＜화합물 XI의 합성＞
화합물 XI 을, 이하의 합성 스킴 5A 에 따라서 합성하였다.
[합성 스킴 5A]
[화학식 354]
Figure pct00393
[화학식 355]
Figure pct00394
실시예 56 :
4-메톡시페닐 4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(N,N-디아세틸아미노)-1-O-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실-(2→6)-4-O-아세틸-2,3-디-O-4-메톡시페닐 4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(디아세틸아미노)-1-O-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실-(2→6)-4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-β-D-갈락토피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(디아세틸아미노)-1-O-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실-(2→6)-4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-β-D-갈락토피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노시드 (화합물 X-1)
[화학식 356]
Figure pct00395
(소공정 5-1A)
화합물 VI-3 (556 mg, 0.19 mmol) 과 화합물 IX-5 (646.0 mg, 0.58 mmol) 의 디클로로메탄 용액 (17 mL) 에 몰레큘러시브 4A (111.1 mg, 0.2 wt) 를 첨가 후, 0 ℃ 로 냉각하였다. 1 시간 교반 후, 트리플루오로메탄술폰산t-부틸디메틸실릴의 디클로로메탄 용액 (0.3M, 100 μL, 0.03 mmol) 을 첨가하였다. 60 분간 교반 후, 트리플루오로메탄술폰산t-부틸디메틸실릴의 디클로로메탄 용액 (0.3M, 33 μL, 0.01 mmol) 을 첨가하고, 추가로 20 분 후에 트리플루오로메탄술폰산t-부틸디메틸실릴의 디클로로메탄 용액 (0.3M, 33 μL, 0.01 mmol) 을 첨가하였다. 얻어진 반응액에 대해, 화합물 IX-5 (43.1 mg, 0.04 mmol) 과 트리플루오로메탄술폰산t-부틸디메틸실릴의 디클로로메탄 용액 (0.3M, 33 μL, 0.01 mmol) 을 첨가하고, 3 시간 교반한 후, 트리에틸아민 (27 μL, 0.19 mmol) 을 첨가하고, 실온까지 승온하였다. 반응액으로부터 몰레큘러시브 4A 를 여과 제거하고, 디클로로메탄 (2.2 mL) 으로 세정하여 얻어진 용액을 농축 건조 고화한 후, 조체를 역상 크로마토그래피 (아세토니트릴/물 93 ％ → 100 ％) 로 정제하여, 화합물 X-1 (836.2 mg, 수율 92 ％) 를 얻었다.
Figure pct00396
Figure pct00397
(소공정 5-1B)
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노시드 (화합물 VI-3) (279 mg, 97 μmol) 및 4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-6-O-[4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(디아세틸아미노)-1-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실]-1-O-(2,2,2-트리플루오로-N-페닐에탄이미도일)-D-갈락토피라노스 (화합물 IX-5) (320 mg, 0.291 mmol) 을 30 mL 가지형 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄 (4.2 mL) 및 몰레큘러시브 4A 분말 (42 mg) 을 첨가하였다. 질소하, -20 ℃ 에서 트리플루오로메탄술폰산 tert-부틸디메틸실릴 (4.5 μL, 19 μmol) 을 5 분간에 걸쳐 적하하고, -20 ∼ 0 ℃ 에서 1 시간 교반하였다. HPLC 에 의해 반응 종료를 확인 후, 트리에틸아민 (5.4 μL, 38 μmol) 을 첨가하고, 실온에서 1 시간 교반하였다. 반응액을 셀라이트 여과하고, 디클로로메탄 (1.4 mL) 으로 세정하였다. 여과액을 물 (2.8 mL) 에서 2 회 분액하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조 후, 여과 분리하여, 농축하였다. 농축 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카량 : 10 g, 전개 용매 : 톨루엔/아세트산에틸 = 9/1 내지 3/1) 로 정제하고, 주류를 감압 농축함으로써, 4-메톡시페닐 4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-6-O-[4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(디아세틸아미노)-1-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실]-β-D-갈락토피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-6-O-[4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(디아세틸아미노)-1-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실]-β-D-갈락토피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-{[(2,2,2-트리클로로에톡시)카르보닐]아미노}-β-D-글루코피라노시드 (화합물 X-1) (450 mg, 단리 수율 98 ％) 를 백색 아모르퍼스로서 얻었다.
Figure pct00398
다른 루트에 있어서 합성한 화합물 X-1 과 1H-NMR 의 일치를 확인하였다.
실시예 57 :
4-메톡시페닐 4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(디아세틸아미노)-1-O-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실-(2→6)-4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-β-D-갈락토피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-아미노-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(디아세틸아미노)-1-O-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실-(2→6)-4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-β-D-갈락토피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-아미노-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-아미노-β-D-글루코피라노시드 (화합물 X-2)
[화학식 357]
Figure pct00399
(소공정 5-2)
화합물 X-1 (80 mg, 16.9 μmol) 의 테트라하이드로푸란/아세트산 용액 (1 : 1, 1.9 mL) 에 아연 분말 (33.1 mg, 0.51 mmol) 을 첨가하였다. 24 시간 교반 후, 불용물을 여과 제거하여, 테트라하이드로푸란 (3 mL) 으로 세정하고 얻어지는 용액을 농축 건조 고화하여, 화합물 X-2 를 조체로서 취득하였다.
화합물 X-2 : MS(ESI)(m/z) : 1404 ([M＋3H]3＋)
실시예 58 :
4-메톡시페닐 4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(디아세틸아미노)-1-O-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실-(2→6)-4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-β-D-갈락토피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(아세틸아미노)-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(디아세틸아미노)-1-O-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실-(2→6)-4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-β-D-갈락토피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(아세틸아미노)-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(아세틸아미노)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 X-3)
[화학식 358]
Figure pct00400
(소공정 5-3)
조체 화합물 X-2 에 테트라하이드로푸란 (0.8 mL), 트리에틸아민 (28.8 μL, 0.20 mmol), 무수 아세트산 (16.0 μL, 0.17 mmol) 을 순차 첨가하였다. 2 시간 교반 후, 아세트산에틸 (5 mL) 과 물 (3 mL) 를 첨가하였다. 수층을 제거한 후, 얻어진 유기층을 5 ％ 중조수 (3 mL) 로 2 회 세정하고, 다시 물 (3 mL) 로 세정하고, 유기층을 농축 건조 고화하여, 조체의 화합물 X-3 (91.2 mg) 을 얻었다. 본 시료 28.5 mg (화합물 X-1 : 25 mg 상당) 을 사용하여, 다음 공정에 사용하였다.
실시예 59 :
4-메톡시페닐 4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(아세틸아미노)-1-O-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실-(2→6)-4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-β-D-갈락토피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(아세틸아미노)-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(아세틸아미노)-1-O-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실-(2→6)-4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-β-D-갈락토피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(아세틸아미노)-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(아세틸아미노)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 X-4)
[화학식 359]
Figure pct00401
(소공정 5-4)
조체 화합물 X-3 (28.5 mg, 5.3 μmol) 의 테트라하이드로푸란 (0.25 mL) 용액에 대해, 0 ℃ 에서 불화테트라부틸암모늄의 테트라하이드로푸란 용액 (1.0M, 15.9 μL, 15.9 μmol) 을 첨가하였다. 실온으로 승온하여 2 시간 교반 후, 불화테트라부틸암모늄의 테트라하이드로푸란 용액 (1.0M, 26.5 μL, 26.5 μmol) 을 첨가하고, 추가로 3 시간 교반하였다. 계속해서, 아세트산 (2 μL), 트리에틸아민 (5 μL), 무수 아세트산 (2 μL) 을 순차 첨가하고, 실온에서 1.5 시간 교반하였다. 얻어진 반응액에 아세트산에틸 (5 mL) 과 물 (2 mL) 를 첨가한 후, 수층을 제거하였다. 취득한 유기층을 5 ％ 중조수 (3 mL) 와 물 (3 mL) 로 순차 세정 후, 유기층을 농축 건조 고화하였다. 조체를 분취 HPLC (아세토니트릴/물 80 ％ → 100 ％) 로 정제하여, 화합물 X-4 (17.7 mg, 수율 77 ％) 를 얻었다.
MS(ESI)(m/z) : 2128 ([M＋2H]2＋).
실시예 60 :
4-메톡시페닐 4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(아세틸아미노)-1-O-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실-(2→6)-4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-β-D-갈락토피라노실-(1→4)-2-데옥시-2-(아세틸아미노)-β-D-글루코피라노실-(1→2)-α-D-만노피라노실-(1→3)-[4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(아세틸아미노)-1-O-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실-(2→6)-4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-β-D-갈락토피라노실-(1→4)-2-데옥시-2-(아세틸아미노)-β-D-글루코피라노실-(1→2)-α-D-만노피라노실-(1→6)]-β-D-만노피라노실-(1→4)-2-데옥시-2-(아세틸아미노)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 X-5)
[화학식 360]
Figure pct00402
(소공정 5-5)
화합물 X-4 (15.2 mg, 3.57 μmol) 의 테트라하이드로푸란 용액 (0.46 mL) 에 팔라듐탄소 (30.4 mg, 2.0 Wt) 와 아세트산 (18.5 μL) 를 첨가하였다. 실온에서 교반 후, 수소 가압하 (＋0.4 MPa) 에 5 일간 교반하고, 화합물 X-5 가 생성되어 있는 것을 HPLC 분석에 의해 확인하였다 (화합물 X-5 : 34 PA ％, 58 ％ PA 의 Bz 기 부분이 핵 환원되었다고 생각되는 과잉 환원체를 포함한다).
화합물 X-5 : MS(ESI)(m/z) : 1496 ([M＋2H]2＋).
과잉 환원체 : MS(ESI)(m/z) : 1499 ([M＋2H]2＋, MS(ESI)(m/z) : 1502 ([M＋2H]2＋).
실시예 61 :
4-메톡시페닐 4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(아세틸아미노)-1-O-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실-(2→6)-4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-β-D-갈락토피라노실-(1→4)-3,6-디-O-아세틸-2-데옥시-2-(아세틸아미노)-β-D-글루코피라노실-(1→2)-α-3,4,6-트리-O-아세틸-D-만노피라노실-(1→3)-[4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(아세틸아미노)-1-O-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실-(2→6)-4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-β-D-갈락토피라노실-(1→4)-3,6-디-O-아세틸-2-데옥시-2-(아세틸아미노)-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-아세틸-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-아세틸-β-D-만노피라노실-(1→4)-3,6-디-O-아세틸-2-데옥시-2-(아세틸아미노)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 X-6)
[화학식 361]
Figure pct00403
(소공정 5-6)
화합물 X-5 를 포함하는 반응액을 질소 치환한 후, 얻어진 현탁액에 0 ℃ 에서 트리에틸아민 (30 μL, 0.21 mmol) 과 무수 아세트산 (10 μL, 0.11 mmol), 디메틸아미노피리딘 (0.1 mg) 을 첨가하였다. 실온으로 승온하여 19 시간 교반 후, 트리에틸아민 (200 μL) 과 무수 아세트산 (150 μL) 을 첨가하고, 추가로 7 시간 교반하였다. 불용물을 여과 제거한 후, 아세트산에틸 (8 mL) 로 세정하고 얻어지는 용액에, 5 ％ 중조수 (5 mL) 를 첨가하였다. 수층을 제거한 후, 유기층을 물 (2 mL), 10 ％ 염화암모늄 수용액 (3 mL), 물 (2 mL) 로 순차 세정하고, 얻어진 유기층을 농축 건조 고화하였다. 조체를 분취 HPLC (아세토니트릴/물 80 ％ → 100 ％) 로 정제하여, 화합물 X-6 (11.8 mg (35 ％PA, 65 ％PA 의 Bz 기 부분이 핵환원되었다고 생각되는 과잉 환원체를 포함한다) 를 얻었다.
화합물 X-6 : MS(ESI)(m/z) : 1790 ([M＋2H]2＋).
과잉 환원체 : MS(ESI)(m/z) : 1793 ([M＋2H]2＋), MS(ESI)(m/z) : 1796 ([M＋2H]2＋).
실시예 62 :
4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(아세틸아미노)-1-O-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실-(2→6)-4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-β-D-갈락토피라노실-(1→4)-3,6-디-O-아세틸-2-데옥시-2-(아세틸아미노)-β-D-글루코피라노실-(1→2)-α-3,4,6-트리-O-아세틸-D-만노피라노실-(1→3)-[4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(아세틸아미노)-1-O-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실-(2→6)-4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-β-D-갈락토피라노실-(1→4)-3,6-디-O-아세틸-2-데옥시-2-(아세틸아미노)-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-아세틸-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-아세틸-β-D-만노피라노실-(1→4)-3,6-디-O-아세틸-2-데옥시-2-(아세틸아미노)-D-글루코피라노시드 (화합물 X-7)
[화학식 362]
Figure pct00404
(소공정 5-7)
화합물 X-6 (11.8 mg) 의 아세토니트릴/수용액 (20 : 1, 0.71 mL) 에 대해, 0 ℃ 에서 질산암모늄세륨 (15.2 mg, 3.57 μmol) 을 첨가하였다. 2 시간 교반 후, 아세트산에틸 (5 mL) 과 물 (2 mL) 를 첨가하였다. 수층을 제거한 후, 유기층을 물 (2 mL) 로 2 회, 5 ％ 아황산나트륨 (2 mL) 으로 2 회, 물 (2 mL) 로 1 회 세정하였다. 얻어진 유기층을 농축 건조 고화하여 얻어진 조체의 화합물 X-7 을 얻었다. 본 시료를 사용하여, 다음 공정의 반응을 실시하였다.
실시예 63 :
O-(N-아세틸-α-뉴라미노실)-(2→6)-O-β-D-갈락토피라노실-(1→4)-O-2-(아세틸아미노)-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→2)-O-α-D-만노피라노실-(1→3)-O-[O-(N-아세틸-α-뉴라미노실)-(2→6)-O-β-D-갈락토피라노실-(1→4)-O-2-(아세틸아미노)-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→2)-α-D-만노피라노실-(1→6)]-O-β-D-만노피라노실-(1→4)-2-(아세틸아미노)-2-데옥시-D-글루코오스 (화합물 XI)
[화학식 363]
Figure pct00405
(소공정 5-8)
실시예 62 에서 얻어진 조체 화합물 X-7 의 메탄올 (0.5 mL) 용액에 대해, 28 ％ 나트륨메톡시드의 메탄올 용액 (8.6 μL) 를 첨가하였다. 실온에서 13 시간 교반한 후, 반응액을 농축 건조 고화하고, 취득한 조체를 물 (0.2 mL) 로 용해하였다. 본 용액을 HitrapTM Desalting 5 mL (물 100 ％) 로 정제하였다. 얻어진 프랙션에 수산화나트륨 수용액 (4M, 3.3 μL, 13.2 μmol) 과 메탄올 (3 mL) 를 첨가한 후, 25 ℃ 이하에서 농축 건조 고화하여, 화합물 XI (5.41 mg, 수율 92 ％) 를 얻었다.
Figure pct00406
얻어진 생성물에 관해서는, 표준품 (디시아릴 옥타사카라이드 (TCI, D4065)) 를 같은 조건에서 1H-NMR (500 MHz) 를 측정하여, 일치하는 것을 확인하였다.
＜화합물 X-3 의 합성＞
화합물 X-3 을, 이하의 합성 스킴 5B 에 따라서 합성하였다.
[합성 스킴 5B]
[화학식 364]
Figure pct00407
실시예 64 :
4-메톡시페닐 4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(디아세틸아미노)-1-O-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실-(2→6)-4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-β-D-갈락토피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(아세틸아미노)-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(디아세틸아미노)-1-O-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실-(2→6)-4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-β-D-갈락토피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(아세틸아미노)-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-(아세틸아미노)-β-D-글루코피라노시드 (화합물 X-3)
[화학식 365]
Figure pct00408
(소공정 5-9)
4-메톡시페닐 3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-아세틸아미노-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-아세틸아미노-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-2-아세틸아미노-β-D-글루코피라노시드 (화합물 VI-6) (50 mg, 20.2 μmol) 및 4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-6-O-[4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(디아세틸아미노)-1-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실]-1-O-(2,2,2-트리플루오로-N-페닐에탄이미도일)-D-갈락토피라노스 (화합물 IX-5) (90 mg, 80.8 μmol) 을 30 mL 가지형 플라스크에 첨가하고, 디클로로메탄 (0.15 mL) 및 몰레큘러시브 4A 분말 (7.5 mg) 을 첨가하였다. 질소하, 0 ℃ 에서 트리플루오로메탄술폰산 tert-부틸디메틸실릴 (4.6 μL, 20.2 μmol) 을 5 분간에 걸쳐 적하하고, 0 ℃ 에서 3 시간 교반하였다. HPLC 에 의해 반응 종료를 확인할 수 없었기 때문에, 트리플루오로메탄술폰산tert-부틸디메틸실릴 (2.3 μL, 10.1 μmol) 을 5 분간에 걸쳐 적하하고, 0 ℃ 에서 19 시간 교반하였다. HPLC 에 의해 반응 종료를 확인 후, 트리에틸아민 (13.8 μL, 101 μmol) 을 첨가하고, 실온에서 1 시간 교반하였다. 반응액을 셀라이트 여과하고, 디클로로메탄 (0.25 mL) 으로 세정하였다. 여과액을 물 (0.5 mL) 로 2 회 분액하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조 후, 여과 분리하여, 농축하였다. 농축 잔류물을 분취 박층 크로마토그래피 (Merck 사 제조 PLC 실리카 겔 60F254, 전개 용매 : 헵탄/아세트산에틸 = 1/4, 3 번 전개) 로 정제하고, 주류를 감압 농축함으로써, 4-메톡시페닐 4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-6-O-[4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(아세틸아미노)-1-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실]-β-D-갈락토피라노실-(1→4)-2-(아세틸아미노)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→3)-[4-O-아세틸-2,3-디-O-벤조일-6-O-[4,7,8,9-테트라-O-아세틸-3,5-디데옥시-5-(아세틸아미노)-1-메틸-D-글리세로-α-D-갈락토-논-2-우로피라노실]-β-D-갈락토피라노실-(1→4)-2-(아세틸아미노)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→2)-3,4,6-트리-O-벤질-α-D-만노피라노실-(1→6)]-2,4-디-O-벤질-β-D-만노피라노실-(1→4)-2-(아세틸아미노)-3,6-디-O-벤질-2-데옥시-β-D-글루코피라노시드 (화합물 X-3) (30.7 mg, 단리 수율 35.2 ％) 를 백색 아모르퍼스로서 얻었다.
Figure pct00409
Figure pct00410

Claims (70)

  1. 이하의 식 XI :
    Figure pct00411

    로 나타내는 올리고당의 제조 방법으로서,
    (공정 1) 이하의 식 III-3 :
    Figure pct00412

    으로 나타내는 화합물을 트리플루오로메탄술포닐옥시기, 노나플루오로부탄술포닐옥시기, 2-니트로벤젠술포닐옥시기 및 4-니트로벤젠술포닐옥시기로 이루어지는 군에서 선택되는 탈리기를 부여하는 화합물과 반응시킴으로써, 이하의 식 III-4 :
    Figure pct00413

    (식 중, X1 은, 트리플루오로메탄술포닐기, 노나플루오로부탄술포닐기, 2-니트로벤젠술포닐기 및 4-니트로벤젠술포닐기로 이루어지는 군에서 선택되는 치환기를 나타낸다) 로 나타내는 화합물을 생성시키고, 이어서, 식 III-4 로 나타내는 화합물을 아세트산세슘 또는 테트라부틸암모늄아세테이트와 반응시킴으로써, 이하의 식 III-5 :
    Figure pct00414

    (식 중, X2 는, 아세틸기이다) 로 나타내는 화합물을 생성시키거나, 또는, 식 III-4 로 나타내는 화합물을 벤조산테트라부틸암모늄과 반응시킴으로써, 이하의 식 III-5 :
    Figure pct00415

    (식 중, X2 는, 벤조일기이다) 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 이하의 식 III-11 :
    Figure pct00416

    로 나타내는 화합물, 또는 이하의 식 III-13 :
    Figure pct00417

    으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정,
    (공정 2) 식 III-13 으로 나타내는 화합물과, 이하의 식 IV-3 :
    Figure pct00418

    으로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써, 이하의 식 V-1 :
    Figure pct00419

    로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 이하의 식 V-3 :
    Figure pct00420

    으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정, 또는,
    식 III-11 로 나타내는 화합물과, 이하의 식 IV-3 :
    Figure pct00421

    으로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써, 이하의 식 V-4 :
    Figure pct00422

    로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 이하의 식 V-5 :
    Figure pct00423

    로 나타내는 화합물을 제조하는 공정,
    (공정 3) 식 V-3 으로 나타내는 화합물과, 이하의 식 II-6 :
    Figure pct00424

    으로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써, 이하의 식 VI-1 :
    Figure pct00425

    로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 이하의 식 VI-3 :
    Figure pct00426

    으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정, 또는, 식 V-5 로 나타내는 화합물과, 이하의 식 II-9 :
    Figure pct00427

    로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써, 이하의 식 VI-4 :
    Figure pct00428

    로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 이하의 식 VI-3 :
    Figure pct00429

    으로 나타내는 화합물, 또는, 이하의 식 VI-6 :
    Figure pct00430

    으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정,
    (공정 4) 이하의 식 VIII-5 :
    Figure pct00431

    로 나타내는 화합물과, 이하의 식 VII-3 :
    Figure pct00432

    으로 나타내는 화합물을, α-2,6-글리코시드 결합시킴으로써, 이하의 식 IX-1 :
    Figure pct00433

    로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 이하의 식 IX-5 :
    Figure pct00434

    로 나타내는 화합물을 제조하는 공정, 그리고
    (공정 5) 식 VI-3 으로 나타내는 화합물과 식 IX-5 로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써, 이하의 식 X-1 :
    Figure pct00435

    로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정, 또는
    식 VI-6 으로 나타내는 화합물과 식 IX-5 로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써, 이하의 식 X-3 :
    Figure pct00436

    으로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 식 XI 로 나타내는 올리고당을 제조하는 공정을 포함하는, 방법.
  2. 제 1 항에 있어서,
    공정 1 이, 이하의 식 III-1 :
    Figure pct00437

    로 나타내는 화합물을, 트리플루오로아세트산메틸의 존재하에서, 알콕시드계의 강염기와 반응시킴으로써, 이하의 식 III-2 :
    Figure pct00438

    로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 방법.
  3. 제 2 항에 있어서,
    알콕시드계의 강염기가, C1∼C5 알콕시드의 나트륨염, 리튬염, 칼륨염 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, 방법.
  4. 이하의 식 XI :
    Figure pct00439

    로 나타내는 올리고당의 제조 방법으로서,
    (공정 1) 이하의 식 III-3 :
    Figure pct00440

    으로 나타내는 화합물에 있어서, D-글루코피라노시드의 2 위치를 산화함으로써, 이하의 식 III-7 :
    Figure pct00441

    로 나타내는 화합물을 생성시키고, 이어서, 식 III-7 로 나타내는 화합물에 있어서, 2-케토-D-글루코피라노시드의 2 위치의 탄소에 결합되어 있는 옥소기를 환원함으로써, 이하의 식 III-8 :
    Figure pct00442

    로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 이하의 식 III-11 :
    Figure pct00443

    로 나타내는 화합물, 또는 이하의 식 III-13 :
    Figure pct00444

    으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정,
    (공정 2) 식 III-13 으로 나타내는 화합물과, 이하의 식 IV-3 :
    Figure pct00445

    으로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써, 이하의 식 V-1 :
    Figure pct00446

    로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 이하의 식 V-3 :
    Figure pct00447

    으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정, 또는,
    식 III-11 로 나타내는 화합물과, 이하의 식 IV-3 :
    Figure pct00448

    으로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써, 이하의 식 V-4 :
    Figure pct00449

    로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 이하의 식 V-5 :
    Figure pct00450

    로 나타내는 화합물을 제조하는 공정,
    (공정 3) 식 V-3 으로 나타내는 화합물과, 이하의 식 II-6 :
    Figure pct00451

    으로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써, 이하의 식 VI-1 :
    Figure pct00452

    로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 이하의 식 VI-3 :
    Figure pct00453

    으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정, 또는, 식 V-5 로 나타내는 화합물과, 이하의 식 II-9 :
    Figure pct00454

    로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써, 이하의 식 VI-4 :
    Figure pct00455

    로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 이하의 식 VI-3 :
    Figure pct00456

    으로 나타내는 화합물, 또는, 이하의 식 VI-6 :
    Figure pct00457

    으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정,
    (공정 4) 이하의 식 VIII-5 :
    Figure pct00458

    로 나타내는 화합물과, 이하의 식 VII-3 :
    Figure pct00459

    으로 나타내는 화합물을, α-2,6-글리코시드 결합시킴으로써, 이하의 식 IX-1 :
    Figure pct00460

    로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 이하의 식 IX-5 :
    Figure pct00461

    로 나타내는 화합물을 제조하는 공정, 그리고
    (공정 5) 식 VI-3 으로 나타내는 화합물과 식 IX-5 로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써, 이하의 식 X-1 :
    Figure pct00462

    로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정, 또는
    식 VI-6 으로 나타내는 화합물과 식 IX-5 로 나타내는 화합물을 반응시킴으로써, 이하의 식 X-3 :
    Figure pct00463

    으로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 식 XI 로 나타내는 올리고당을 제조하는 공정을 포함하는, 방법.
  5. 제 4 항에 있어서,
    공정 1 이, 이하의 식 III-1 :
    Figure pct00464

    로 나타내는 화합물을, 트리플루오로아세트산메틸의 존재하에서, 알콕시드계의 강염기와 반응시킴으로써, 이하의 식 III-2 :
    Figure pct00465

    로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 방법.
  6. 제 5 항에 있어서,
    알콕시드계의 강염기가, C1∼C5 알콕시드의 나트륨염, 리튬염, 칼륨염 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, 방법.
  7. 제 4 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    공정 1 에 있어서, L-셀렉트리드, LS-셀렉트리드, 리튬디이소부틸-tert-부톡시알루미늄하이드리드 (LDBBA), 이하의 식 A :
    Figure pct00466

    (식 중, R3 은, 이하의 식 :
    Figure pct00467

    으로 나타내는 디tert-부틸메틸페녹시드 또는 하이드리드이고, 단, 적어도 2 개의 R3 은, 디tert-부틸메틸페녹시드이다) 로 나타내는 화합물 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 환원제의 존재하에서, 식 III-7 로 나타내는 화합물을 환원하는, 방법.
  8. 제 4 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
    공정 1 에 있어서, 이하의 식 A :
    Figure pct00468

    (식 중, R3 은, 이하의 식 :
    Figure pct00469

    으로 나타내는 디tert-부틸메틸페녹시드 또는 하이드리드이고, 단, 적어도 2 개의 R3 은, 디tert-부틸메틸페녹시드이다) 로 나타내는 화합물인 환원제의 존재하에서, 식 III-7 로 나타내는 화합물을 환원하는, 방법.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
    공정 1 이, 이하의 식 III-9 :
    Figure pct00470

    로 나타내는 화합물을 제조하는 공정을 추가로 포함하고, 식 III-9 로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이, 리튬tert-부톡시드 또는 리튬tert-아목시드의 존재하에서, 이하의 식 III-8 :
    Figure pct00471

    로 나타내는 화합물에 있어서, D-만노피라노시드의 2 위치의 탄소에 결합되어 있는 수산기를 벤질기로 보호함으로써, 식 III-9 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 방법.
  10. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서,
    공정 2 가, 이하의 식 V-5 :
    Figure pct00472

    로 나타내는 화합물을 제조하는 공정을 추가로 포함하고, 식 V-5 로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이, 이하의 식 V-4 :
    Figure pct00473

    로 나타내는 화합물을, 트리플루오로아세트산메틸의 존재하에서, 알콕시드계의 강염기와 반응시킴으로써, 식 V-5 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 방법.
  11. 제 10 항에 있어서,
    알콕시드계의 강염기가, C1∼C5 알콕시드의 나트륨염, 리튬염, 칼륨염 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, 방법.
  12. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서,
    공정 3 이, 식 II-6 으로 나타내는 화합물 또는 식 II-9 로 나타내는 화합물을 제조하는 공정을 추가로 포함하고,
    식 II-6 으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이, 플루오러스 알코올 및 수중에서, 이하의 식 II-4 :
    Figure pct00474

    로 나타내는 화합물에 λ3-아이오단을 반응시킴으로써, 이하의 식 II-5 :
    Figure pct00475

    로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하고,
    식 II-9 로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이, 플루오러스 알코올 및 수중에서, 이하의 식 II-7 :
    Figure pct00476

    로 나타내는 화합물에 λ3-아이오단을 반응시킴으로써, 이하의 식 II-8 :
    Figure pct00477

    로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 방법.
  13. 제 12 항에 있어서,
    상기 λ3-아이오단이, [비스(트리플루오로아세톡시)요오드]벤젠 (PIFA), [하이드록시(토실옥시)요오드]벤젠 (HTIB), (디아세톡시요오드)벤젠 (PIDA), [비스(트리플루오로아세톡시)요오드]펜타플루오로벤젠, [하이드록시(메탄술포닐옥시)요오드]벤젠, 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, 방법.
  14. 제 12 항 또는 제 13 항에 있어서,
    상기 플루오러스 알코올이, 헥사플루오로2-프로판올 (HFIP), 2,2,2-트리플루오로에탄올 (TFE), 2,2,3,3,4,4,5,5-옥타플루오로-1-펜탄올, 노나플루오로-tert-부틸알코올, 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, 방법.
  15. 제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서,
    공정 3 이, 식 II-6 으로 나타내는 화합물 또는 식 II-9 로 나타내는 화합물을 제조하는 공정을 추가로 포함하고,
    식 II-6 으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이, 이하의 식 II-5 :
    Figure pct00478

    로 나타내는 화합물을, N-메틸이미다졸의 존재하에서, 이하의 식 :
    Figure pct00479

    으로 나타내는 2,2,2-트리플루오로-N-페닐아세트이미도일클로라이드 (TFPC) 와 반응시킴으로써, 식 II-6 으로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하고,
    식 II-9 로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이, 이하의 식 II-8 :
    Figure pct00480

    로 나타내는 화합물을, N-메틸이미다졸의 존재하에서, 이하의 식 :
    Figure pct00481

    으로 나타내는 2,2,2-트리플루오로-N-페닐아세트이미도일클로라이드 (TFPC) 와 반응시킴으로써, 식 II-9 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 방법.
  16. 제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서,
    공정 3 이, 이하의 식 VI-5 :
    Figure pct00482

    로 나타내는 화합물을 제조하는 공정을 추가로 포함하고, 식 VI-5 로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이, 이하의 식 VI-4 :
    Figure pct00483

    로 나타내는 화합물을, 트리플루오로아세트산메틸의 존재하에서, 알콕시드계의 강염기와 반응시킴으로써, 식 VI-5 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 방법.
  17. 제 16 항에 있어서,
    알콕시드계의 강염기가, C1∼C5 알콕시드의 나트륨염, 리튬염, 칼륨염 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, 방법.
  18. 제 1 항 내지 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서,
    공정 4 가, 식 VII-3 으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정을 추가로 포함하고, 식 VII-3 으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이, 식 VII-3 으로 나타내는 화합물이 용해되어 있는 용매를 실리카 겔과 접촉시킴으로써, 식 VII-3 으로 나타내는 화합물을 고상 추출하는 공정을 포함하는, 방법.
  19. 제 18 항에 있어서,
    식 VII-3 으로 나타내는 화합물이 용해되어 있는 용매가, 톨루엔, 디클로로메탄, 클로로포름 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, 방법.
  20. 제 1 항 내지 제 19 항 중 어느 한 항에 있어서,
    공정 4 가, 이하의 식 VIII-3 :
    Figure pct00484

    으로 나타내는 화합물을, N-메틸이미다졸의 존재하에서, 이하의 식 :
    Figure pct00485

    으로 나타내는 2,2,2-트리플루오로-N-페닐아세트이미도일클로라이드 (TFPC) 와 반응시킴으로써, 이하의 식 VIII-4 :
    Figure pct00486

    로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 방법.
  21. 제 1 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항에 있어서,
    공정 4 가, 이하의 식 IX-3 :
    Figure pct00487

    으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정을 추가로 포함하고, 식 IX-3 으로 나타내는 화합물을 제조하는 공정이, 식 IX-3 으로 나타내는 화합물이 용해되어 있는 용매를 실리카 겔과 접촉시킴으로써, 식 IX-3 으로 나타내는 화합물을 고상 추출하는 공정을 포함하는, 방법.
  22. 제 21 항에 있어서,
    식 IX-3 으로 나타내는 화합물이 용해되어 있는 용매가, 톨루엔, 디클로로메탄, 클로로포름 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, 방법.
  23. 이하의 식 III-2 :
    Figure pct00488

    로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 이하의 식 III-1 :
    Figure pct00489

    로 나타내는 화합물을, 트리플루오로아세트산메틸의 존재하에서, 알콕시드계의 강염기와 반응시킴으로써, 식 III-2 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 방법.
  24. 제 23 항에 있어서,
    알콕시드계의 강염기가, C1∼C5 알콕시드의 나트륨염, 리튬염, 칼륨염 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, 방법.
  25. 이하의 식 III-5 :
    Figure pct00490

    (식 중, X2 는, 아세틸기이다) 로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 이하의 식 III-4 :
    Figure pct00491

    (식 중, X1 은, 트리플루오로메탄술포닐기, 노나플루오로부탄술포닐기, 2-니트로벤젠술포닐기 및 4-니트로벤젠술포닐기로 이루어지는 군에서 선택되는 치환기를 나타낸다) 로 나타내는 화합물을 아세트산세슘 또는 테트라부틸암모늄아세테이트와 반응시킴으로써, 식 III-5 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 방법.
  26. 이하의 식 III-5 :
    Figure pct00492

    (식 중, X2 는, 벤조일기이다) 로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 이하의 식 III-4 :
    Figure pct00493

    (식 중, X1 은, 트리플루오로메탄술포닐기, 노나플루오로부탄술포닐기, 2-니트로벤젠술포닐기 및 4-니트로벤젠술포닐기로 이루어지는 군에서 선택되는 치환기를 나타낸다) 로 나타내는 화합물을 벤조산테트라부틸암모늄과 반응시킴으로써, 식 III-5 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 방법.
  27. 이하의 식 III-8 :
    Figure pct00494

    로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 이하의 식 III-7 :
    Figure pct00495

    로 나타내는 화합물에 있어서의, 2-케토-D-글루코피라노시드의 2 위치의 탄소에 결합되어 있는 옥소기를 환원함으로써, 식 III-8 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 방법.
  28. 제 27 항에 있어서,
    L-셀렉트리드, LS-셀렉트리드, 리튬디이소부틸-tert-부톡시알루미늄하이드리드 (LDBBA), 이하의 식 A :
    Figure pct00496

    (식 중, R3 은, 이하의 식 :
    Figure pct00497

    으로 나타내는 디tert-부틸메틸페녹시드 또는 하이드리드이고, 단, 적어도 2 개의 R3 은, 디tert-부틸메틸페녹시드이다) 로 나타내는 화합물 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는 환원제의 존재하에서, 식 III-7 로 나타내는 화합물에 있어서의, 2-케토-D-글루코피라노시드의 2 위치의 탄소에 결합되어 있는 옥소기를 환원하는, 방법.
  29. 제 27 항 또는 제 28 항에 있어서,
    이하의 식 A :
    Figure pct00498

    (식 중, R3 은, 이하의 식 :
    Figure pct00499

    으로 나타내는 디tert-부틸메틸페녹시드 또는 하이드리드이고, 단, 적어도 2 개의 R3 은, 디tert-부틸메틸페녹시드이다) 로 나타내는 화합물인 환원제의 존재하에서, 식 III-7 로 나타내는 화합물에 있어서의, 2-케토-D-글루코피라노시드의 2 위치의 탄소에 결합되어 있는 옥소기를 환원하는, 방법.
  30. 이하의 식 III-9 :
    [화학식 90]
    Figure pct00500

    로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 리튬tert-부톡시드 또는 리튬tert-아목시드의 존재하에서, 이하의 식 III-8 :
    Figure pct00501

    로 나타내는 화합물에 있어서, D-만노피라노시드의 2 위치의 탄소에 결합되어 있는 수산기를 벤질기로 보호함으로써, 식 III-9 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 방법.
  31. 이하의 식 V-5 :
    Figure pct00502

    로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 이하의 식 V-4 :
    Figure pct00503

    로 나타내는 화합물을, 트리플루오로아세트산메틸의 존재하에서, 알콕시드계의 강염기와 반응시킴으로써, 식 V-5 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 방법.
  32. 제 31 항에 있어서,
    알콕시드계의 강염기가, C1∼C5 알콕시드의 나트륨염, 리튬염, 칼륨염 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, 방법.
  33. 이하의 식 II-5 :
    Figure pct00504

    로 나타내는 화합물 또는 식 II-8 :
    Figure pct00505

    로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서,
    플루오러스 알코올 및 수중에서, 이하의 식 II-4 :
    Figure pct00506

    로 나타내는 화합물 또는 식 II-7 :
    Figure pct00507

    로 나타내는 화합물에, λ3-아이오단을 반응시킴으로써, 식 II-5 로 나타내는 화합물 또는 식 II-8 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 방법.
  34. 제 33 항에 있어서,
    상기 λ3-아이오단이, [비스(트리플루오로아세톡시)요오드]벤젠 (PIFA), [하이드록시(토실옥시)요오드]벤젠 (HTIB), (디아세톡시요오드)벤젠 (PIDA), [비스(트리플루오로아세톡시)요오드]펜타플루오로벤젠, [하이드록시(메탄술포닐옥시)요오드]벤젠, 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, 방법.
  35. 제 33 항 또는 제 34 항에 있어서,
    상기 플루오러스 알코올이, 헥사플루오로2-프로판올 (HFIP), 2,2,2-트리플루오로에탄올 (TFE), 2,2,3,3,4,4,5,5-옥타플루오로-1-펜탄올, 노나플루오로-tert-부틸알코올, 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, 방법.
  36. 이하의 식 II-6 :
    Figure pct00508

    으로 나타내는 화합물 또는 이하의 식 II-9 :
    Figure pct00509

    로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 이하의 식 II-5 :
    Figure pct00510

    로 나타내는 화합물 또는 이하의 식 II-8 :
    Figure pct00511

    로 나타내는 화합물을, N-메틸이미다졸의 존재하에서, 이하의 식 :
    Figure pct00512

    으로 나타내는 2,2,2-트리플루오로-N-페닐아세트이미도일클로라이드 (TFPC) 와 반응시킴으로써, 식 II-6 으로 나타내는 화합물 또는 식 II-9 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 방법.
  37. 이하의 식 VI-5 :
    Figure pct00513

    로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 이하의 식 VI-4 :
    Figure pct00514

    로 나타내는 화합물을, 트리플루오로아세트산메틸의 존재하에서, 알콕시드계의 강염기와 반응시킴으로써, 식 VI-5 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 방법.
  38. 제 37 항에 있어서,
    알콕시드계의 강염기가, C1∼C5 알콕시드의 나트륨염, 리튬염, 칼륨염 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, 방법.
  39. 이하의 식 VII-3 :
    Figure pct00515

    으로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 식 VII-3 으로 나타내는 화합물이 용해되어 있는 용매를 실리카 겔과 접촉시킴으로써, 식 VII-3 으로 나타내는 화합물을 고상 추출하는 공정을 포함하는, 방법.
  40. 이하의 식 VIII-4 :
    Figure pct00516

    로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 이하의 식 VIII-3 :
    Figure pct00517

    으로 나타내는 화합물을, N-메틸이미다졸의 존재하에서, 이하의 식 :
    Figure pct00518

    으로 나타내는 2,2,2-트리플루오로-N-페닐아세트이미도일클로라이드 (TFPC) 와 반응시킴으로써, 식 VIII-4 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 방법.
  41. 이하의 식 IX-1 :
    Figure pct00519

    로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 이하의 식 VIII-5 :
    Figure pct00520

    로 나타내는 화합물과, 이하의 식 VII-3 :
    Figure pct00521

    으로 나타내는 화합물을, α-2,6-글리코시드 결합시킴으로써, 식 IX-1 로 나타내는 화합물을 생성시키는 공정을 포함하는, 방법.
  42. 이하의 식 IX-1 :
    Figure pct00522

    로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 식 IX-1 로 나타내는 화합물이 용해되어 있는 용매를 실리카 겔과 접촉시킴으로써, 식 IX-1 로 나타내는 화합물을 고상 추출하는 공정을 포함하는, 방법.
  43. 제 42 항에 있어서,
    식 IX-1 로 나타내는 화합물이 용해되어 있는 용매가, 톨루엔, 디클로로메탄, 클로로포름 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, 방법.
  44. 이하의 식 IX-3 :
    Figure pct00523

    으로 나타내는 화합물의 제조 방법으로서, 식 IX-3 으로 나타내는 화합물이 용해되어 있는 용매를 실리카 겔과 접촉시킴으로써, 식 IX-3 으로 나타내는 화합물을 고상 추출하는 공정을 포함하는, 방법.
  45. 제 44 항에 있어서,
    식 IX-3 으로 나타내는 화합물이 용해되어 있는 용매가, 톨루엔, 디클로로메탄, 클로로포름 및 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, 방법.
  46. 제 23 항 내지 제 45 항 중 어느 한 항에 기재된 방법을 포함하는, 이하의 식 XI :
    Figure pct00524

    로 나타내는 올리고당의 제조 방법.
  47. 이하의 식 III-6 :
    Figure pct00525

    으로 나타내는 화합물.
  48. 이하의 식 III-10 :
    Figure pct00526

    으로 나타내는 화합물.
  49. 이하의 식 V-1 :
    Figure pct00527

    로 나타내는 화합물.
  50. 이하의 식 V-2 :
    Figure pct00528

    로 나타내는 화합물.
  51. 이하의 식 V-3 :
    Figure pct00529

    으로 나타내는 화합물.
  52. 이하의 식 II-6 :
    Figure pct00530

    으로 나타내는 화합물.
  53. 이하의 식 VI-A :
    Figure pct00531

    (식 중, R1 은,

    로 이루어지는 군에서 선택되는 기를 나타낸다) 로 나타내는 화합물.
  54. 이하의 식 VI-2 :
    Figure pct00533

    로 나타내는 화합물.
  55. 이하의 식 VI-B :
    Figure pct00534

    (식 중, R2 는,

    로 이루어지는 군에서 선택되는 기를 나타낸다) 로 나타내는 화합물.
  56. 이하의 식 VIII-5 :
    Figure pct00536

    로 나타내는 화합물.
  57. 이하의 식 X-1 :
    Figure pct00537

    로 나타내는 화합물.
  58. 이하의 식 X-2 :
    Figure pct00538

    로 나타내는 화합물.
  59. 이하의 식 X-3 :
    Figure pct00539

    으로 나타내는 화합물.
  60. 이하의 식 X-4 :
    Figure pct00540

    로 나타내는 화합물.
  61. 이하의 식 X-5 :
    Figure pct00541

    로 나타내는 화합물.
  62. 이하의 식 X-6 :
    Figure pct00542

    으로 나타내는 화합물.
  63. 이하의 식 X-7 :
    Figure pct00543

    로 나타내는 화합물.
  64. 당사슬 리모델링 항체 또는 그 Fc 영역 함유 분자의 제조 방법으로서,
    제 1 항 내지 제 22 항 및 제 46 항 중 어느 한 항에 기재된 방법을 포함하고,
    추가로, 얻어진 식 XI 로 나타내는 올리고당으로부터, 환원 말단이 활성화된 N-아세틸글루코사민 (GlcNAc) 을 포함하는 당사슬 도너 분자를 얻는 공정, 및
    상기 당사슬 도너 분자와, N297 결합 당사슬로서 푸코오스가 부가되어 있어도 되는 코어 GlcNAc 를 갖는 항체 또는 그 Fc 영역 함유 분자인 억셉터 분자를 반응시키는 공정을 포함하는, 방법.
  65. 제 64 항에 있어서,
    환원 말단이 활성화된 GlcNAc 가, 옥사졸린화된 GlcNAc 인, 제조 방법.
  66. 제 64 항 또는 제 65 항에 있어서,
    당사슬 도너 분자가, 비환원 말단이 화학 수식되어 있어도 되는 이하의 식 XII :
    Figure pct00544

    로 나타내는 화합물 (「SG(10)-Ox」라고도 부른다) 인, 제조 방법.
  67. 제 64 항 내지 제 66 항 중 어느 한 항에 있어서,
    당사슬 도너 분자가, [N3-PEG(3)]2-SG(10)-Ox 인, 제조 방법.
  68. 제 67 항에 있어서,
    추가로, 아지드기 (N3-) 에 알킨 구조를 갖는 분자와 반응시키는 공정을 포함하는, 제조 방법.
  69. 제 68 항에 있어서,
    알킨 구조를 갖는 분자가, 화학 요법제, 분자 표적약, 면역 활성화제, 독소, 항균제, 항바이러스제, 진단용 약제, 단백질, 펩티드, 아미노산, 핵산, 항원, 비타민 및 호르몬에서 선택되는, 제조 방법.
  70. 제 64 항 내지 제 69 항 중 어느 한 항에 기재된 제조 방법을 포함하는, 항체 약물 콘주게이트의 제조 방법.
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