KR20230146578A - Bcma, gprc5d, 및 cd3을 표적화하는 삼중특이적 항체 - Google Patents
Bcma, gprc5d, 및 cd3을 표적화하는 삼중특이적 항체 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20230146578A KR20230146578A KR1020237031153A KR20237031153A KR20230146578A KR 20230146578 A KR20230146578 A KR 20230146578A KR 1020237031153 A KR1020237031153 A KR 1020237031153A KR 20237031153 A KR20237031153 A KR 20237031153A KR 20230146578 A KR20230146578 A KR 20230146578A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- antigen
- antibody
- seq
- bcma
- binding
- Prior art date
Links
- 102000006942 B-Cell Maturation Antigen Human genes 0.000 title claims abstract description 502
- 108010008014 B-Cell Maturation Antigen Proteins 0.000 title claims abstract description 502
- 101001040713 Homo sapiens G-protein coupled receptor family C group 5 member D Proteins 0.000 title claims abstract description 25
- 102100021197 G-protein coupled receptor family C group 5 member D Human genes 0.000 title claims abstract description 23
- BGFTWECWAICPDG-UHFFFAOYSA-N 2-[bis(4-chlorophenyl)methyl]-4-n-[3-[bis(4-chlorophenyl)methyl]-4-(dimethylamino)phenyl]-1-n,1-n-dimethylbenzene-1,4-diamine Chemical compound C1=C(C(C=2C=CC(Cl)=CC=2)C=2C=CC(Cl)=CC=2)C(N(C)C)=CC=C1NC(C=1)=CC=C(N(C)C)C=1C(C=1C=CC(Cl)=CC=1)C1=CC=C(Cl)C=C1 BGFTWECWAICPDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 title abstract 7
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 title abstract 2
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 title abstract 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 title description 15
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 859
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 511
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 508
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 508
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 371
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 156
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 33
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 33
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 32
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 212
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 180
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 148
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 128
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 120
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 99
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 74
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 70
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 56
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 49
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 49
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 45
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 40
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 38
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 34
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 31
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 29
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 claims description 27
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 27
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 18
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 17
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 17
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 16
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 12
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 claims description 12
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 12
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 101000946860 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain Proteins 0.000 claims description 10
- 229940076838 Immune checkpoint inhibitor Drugs 0.000 claims description 10
- 102000037984 Inhibitory immune checkpoint proteins Human genes 0.000 claims description 10
- 108091008026 Inhibitory immune checkpoint proteins Proteins 0.000 claims description 10
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 claims description 10
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 10
- 102100035794 T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain Human genes 0.000 claims description 10
- 150000003949 imides Chemical class 0.000 claims description 10
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 claims description 10
- 239000012274 immune-checkpoint protein inhibitor Substances 0.000 claims description 10
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 10
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims description 10
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 8
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 8
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 claims description 7
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 claims description 7
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 claims description 7
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 claims description 7
- 239000003540 gamma secretase inhibitor Substances 0.000 claims description 7
- 229940125373 Gamma-Secretase Inhibitor Drugs 0.000 claims description 6
- 239000012829 chemotherapy agent Substances 0.000 claims description 6
- 238000005734 heterodimerization reaction Methods 0.000 claims description 6
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 claims description 6
- UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N Cytarabine Chemical group O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N 0.000 claims description 5
- 101710174800 G-protein coupled receptor family C group 5 member D Proteins 0.000 claims description 5
- 229940045799 anthracyclines and related substance Drugs 0.000 claims description 5
- 229960000684 cytarabine Drugs 0.000 claims description 5
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 claims description 5
- 229960004931 histamine dihydrochloride Drugs 0.000 claims description 5
- PPZMYIBUHIPZOS-UHFFFAOYSA-N histamine dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.NCCC1=CN=CN1 PPZMYIBUHIPZOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229940079156 Proteasome inhibitor Drugs 0.000 claims description 4
- 230000011748 cell maturation Effects 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 239000003207 proteasome inhibitor Substances 0.000 claims description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 229940124622 immune-modulator drug Drugs 0.000 claims description 3
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims description 2
- 102100031585 ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Human genes 0.000 claims 2
- 101000777636 Homo sapiens ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Proteins 0.000 claims 2
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 claims 2
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 claims 2
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 claims 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims 2
- UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N Sulphide Chemical compound [S-2] UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 claims 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 abstract description 35
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 71
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 67
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 43
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 35
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 28
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 28
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 26
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 26
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 26
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 26
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 25
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 25
- 230000006870 function Effects 0.000 description 23
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 21
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 20
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 20
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 20
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 19
- 108010021472 Fc gamma receptor IIB Proteins 0.000 description 18
- 102100029205 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Human genes 0.000 description 18
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 18
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 18
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 18
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 17
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 17
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 16
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 16
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 16
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 16
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 16
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 15
- 208000004346 Smoldering Multiple Myeloma Diseases 0.000 description 15
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 15
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 15
- 101000801255 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 17 Proteins 0.000 description 13
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 13
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 13
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 13
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 13
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 13
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 13
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 12
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 12
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 12
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 11
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 241000894007 species Species 0.000 description 11
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 11
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 10
- 101000642536 Apis mellifera Venom serine protease 34 Proteins 0.000 description 10
- 102100029193 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Human genes 0.000 description 10
- 101710099301 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 10
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 102100036922 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 13B Human genes 0.000 description 10
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 10
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 10
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 10
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 229940121623 teclistamab Drugs 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108010021468 Fc gamma receptor IIA Proteins 0.000 description 9
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 9
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 9
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 9
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 9
- 102100029204 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Human genes 0.000 description 9
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 9
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 9
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 9
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 9
- 239000000306 component Substances 0.000 description 9
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 9
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 9
- 102000046935 human TNFRSF17 Human genes 0.000 description 9
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 9
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 9
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 9
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 9
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 9
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 9
- 239000013074 reference sample Substances 0.000 description 9
- 208000010721 smoldering plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 8
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 8
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 7
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 7
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 7
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 7
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 7
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 7
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 7
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 7
- 102000044456 human GPRC5D Human genes 0.000 description 7
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 6
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 6
- 229940020037 talquetamab Drugs 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 5
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 5
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 5
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 5
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 5
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 5
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 5
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 5
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 5
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 5
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 5
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 5
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 5
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 5
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 4
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 description 4
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 description 4
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 4
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 4
- 101000795167 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13B Proteins 0.000 description 4
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 4
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 4
- 102000018251 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 4
- 108010091358 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 4
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 4
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 4
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 4
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 4
- 102100029675 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13B Human genes 0.000 description 4
- 102100033726 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 17 Human genes 0.000 description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004436 artificial bacterial chromosome Anatomy 0.000 description 4
- 210000001106 artificial yeast chromosome Anatomy 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N creatine Chemical compound NC(=[NH2+])N(C)CC([O-])=O CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N cysteamine Chemical compound NCCS UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 4
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 4
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 4
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 4
- 229960003151 mercaptamine Drugs 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 4
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 4
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 4
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 4
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 4
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 4
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 4
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 4
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 4
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 4
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 3
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 3
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 3
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 3
- 108010028006 B-Cell Activating Factor Proteins 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 208000005443 Circulating Neoplastic Cells Diseases 0.000 description 3
- 206010010099 Combined immunodeficiency Diseases 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 3
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 3
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 3
- 101000831007 Homo sapiens T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains Proteins 0.000 description 3
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 3
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 3
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 3
- 102000012745 Immunoglobulin Subunits Human genes 0.000 description 3
- 108010079585 Immunoglobulin Subunits Proteins 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N N,N-bis{2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl}glycine Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(=O)O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KJTLSVCANCCWHF-UHFFFAOYSA-N Ruthenium Chemical compound [Ru] KJTLSVCANCCWHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 3
- 102100024834 T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains Human genes 0.000 description 3
- PZBFGYYEXUXCOF-UHFFFAOYSA-N TCEP Chemical compound OC(=O)CCP(CCC(O)=O)CCC(O)=O PZBFGYYEXUXCOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 3
- 206010002022 amyloidosis Diseases 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 3
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 3
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 3
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 3
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 3
- 210000003040 circulating cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 3
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 3
- 229960002204 daratumumab Drugs 0.000 description 3
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 3
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 3
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 230000003463 hyperproliferative effect Effects 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 3
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 3
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 3
- 229960004942 lenalidomide Drugs 0.000 description 3
- GOTYRUGSSMKFNF-UHFFFAOYSA-N lenalidomide Chemical compound C1C=2C(N)=CC=CC=2C(=O)N1C1CCC(=O)NC1=O GOTYRUGSSMKFNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 3
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 3
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 3
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 3
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 229960000688 pomalidomide Drugs 0.000 description 3
- UVSMNLNDYGZFPF-UHFFFAOYSA-N pomalidomide Chemical compound O=C1C=2C(N)=CC=CC=2C(=O)N1C1CCC(=O)NC1=O UVSMNLNDYGZFPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 210000004986 primary T-cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 229910052707 ruthenium Inorganic materials 0.000 description 3
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 3
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 3
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 3
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 3
- 102000007445 2',5'-Oligoadenylate Synthetase Human genes 0.000 description 2
- 108010086241 2',5'-Oligoadenylate Synthetase Proteins 0.000 description 2
- SYMHUEFSSMBHJA-UHFFFAOYSA-N 6-methylpurine Chemical compound CC1=NC=NC2=C1NC=N2 SYMHUEFSSMBHJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150101112 7 gene Proteins 0.000 description 2
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 2
- 241000581364 Clinitrachus argentatus Species 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 102100029791 Double-stranded RNA-specific adenosine deaminase Human genes 0.000 description 2
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 2
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 2
- 108020000311 Glutamate Synthase Proteins 0.000 description 2
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 2
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 2
- 101000865408 Homo sapiens Double-stranded RNA-specific adenosine deaminase Proteins 0.000 description 2
- 101000830600 Homo sapiens Tumor necrosis factor ligand superfamily member 13 Proteins 0.000 description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 102100034170 Interferon-induced, double-stranded RNA-activated protein kinase Human genes 0.000 description 2
- 101710089751 Interferon-induced, double-stranded RNA-activated protein kinase Proteins 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- 108020004684 Internal Ribosome Entry Sites Proteins 0.000 description 2
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 2
- 241000270322 Lepidosauria Species 0.000 description 2
- -1 Leu Chemical compound 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 208000010190 Monoclonal Gammopathy of Undetermined Significance Diseases 0.000 description 2
- 241000713333 Mouse mammary tumor virus Species 0.000 description 2
- 102000003505 Myosin Human genes 0.000 description 2
- 108060008487 Myosin Proteins 0.000 description 2
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 101710101148 Probable 6-oxopurine nucleoside phosphorylase Proteins 0.000 description 2
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 2
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 208000007660 Residual Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 108091027981 Response element Proteins 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 2
- 102000007000 Tenascin Human genes 0.000 description 2
- 108010008125 Tenascin Proteins 0.000 description 2
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 2
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 2
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 2
- 102100024585 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 13 Human genes 0.000 description 2
- 102100029690 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13C Human genes 0.000 description 2
- 101710178300 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13C Proteins 0.000 description 2
- 206010054094 Tumour necrosis Diseases 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 102000025171 antigen binding proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091000831 antigen binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 150000001483 arginine derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 229930189065 blasticidin Natural products 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002725 brachytherapy Methods 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 2
- 229960003624 creatine Drugs 0.000 description 2
- 239000006046 creatine Substances 0.000 description 2
- 206010052015 cytokine release syndrome Diseases 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 2
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 238000000375 direct analysis in real time Methods 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-ZXZARUISSA-N dithioerythritol Chemical compound SC[C@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-ZXZARUISSA-N 0.000 description 2
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 2
- 238000012063 dual-affinity re-targeting Methods 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 229960002963 ganciclovir Drugs 0.000 description 2
- IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N ganciclovir Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2COC(CO)CO IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 2
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 2
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 2
- 239000003701 inert diluent Substances 0.000 description 2
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 2
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 2
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 2
- 230000033607 mismatch repair Effects 0.000 description 2
- 201000005328 monoclonal gammopathy of uncertain significance Diseases 0.000 description 2
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 2
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 2
- AEMBWNDIEFEPTH-UHFFFAOYSA-N n-tert-butyl-n-ethylnitrous amide Chemical compound CCN(N=O)C(C)(C)C AEMBWNDIEFEPTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 229960003330 pentetic acid Drugs 0.000 description 2
- 101150028395 perC gene Proteins 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- RDOWQLZANAYVLL-UHFFFAOYSA-N phenanthridine Chemical compound C1=CC=C2C3=CC=CC=C3C=NC2=C1 RDOWQLZANAYVLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 2
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 2
- 208000031223 plasma cell leukemia Diseases 0.000 description 2
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 2
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 2
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 2
- 208000037922 refractory disease Diseases 0.000 description 2
- 102200082402 rs751610198 Human genes 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 2
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 2
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 2
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 2
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 2
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- APJYDQYYACXCRM-UHFFFAOYSA-N tryptamine Chemical compound C1=CC=C2C(CCN)=CNC2=C1 APJYDQYYACXCRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- 238000012447 xenograft mouse model Methods 0.000 description 2
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- BCHZICNRHXRCHY-UHFFFAOYSA-N 2h-oxazine Chemical compound N1OC=CC=C1 BCHZICNRHXRCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710169336 5'-deoxyadenosine deaminase Proteins 0.000 description 1
- 102000055025 Adenosine deaminases Human genes 0.000 description 1
- 239000012099 Alexa Fluor family Substances 0.000 description 1
- 229940086568 Alpha mannosidase I inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102100021266 Alpha-(1,6)-fucosyltransferase Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 102100021761 Alpha-mannosidase 2 Human genes 0.000 description 1
- 241000024188 Andala Species 0.000 description 1
- 244000303258 Annona diversifolia Species 0.000 description 1
- 235000002198 Annona diversifolia Nutrition 0.000 description 1
- 102100021569 Apoptosis regulator Bcl-2 Human genes 0.000 description 1
- 101100208110 Arabidopsis thaliana TRX4 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000051485 Bcl-2 family Human genes 0.000 description 1
- 108700038897 Bcl-2 family Proteins 0.000 description 1
- 102100026596 Bcl-2-like protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- 101100476210 Caenorhabditis elegans rnt-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282832 Camelidae Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000938605 Crocodylia Species 0.000 description 1
- 101100425276 Dictyostelium discoideum trxD gene Proteins 0.000 description 1
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000000579 Epigen Human genes 0.000 description 1
- 108010016906 Epigen Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 108091092566 Extrachromosomal DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 102000002090 Fibronectin type III Human genes 0.000 description 1
- 108050009401 Fibronectin type III Proteins 0.000 description 1
- 208000034951 Genetic Translocation Diseases 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 206010066476 Haematological malignancy Diseases 0.000 description 1
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 101000819490 Homo sapiens Alpha-(1,6)-fucosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 101000971171 Homo sapiens Apoptosis regulator Bcl-2 Proteins 0.000 description 1
- 101100005713 Homo sapiens CD4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101001056180 Homo sapiens Induced myeloid leukemia cell differentiation protein Mcl-1 Proteins 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 1
- 102100026539 Induced myeloid leukemia cell differentiation protein Mcl-1 Human genes 0.000 description 1
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- YINZYTTZHLPWBO-UHFFFAOYSA-N Kifunensine Natural products COC1C(O)C(O)C(O)C2NC(=O)C(=O)N12 YINZYTTZHLPWBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 description 1
- 235000013878 L-cysteine Nutrition 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000288147 Meleagris gallopavo Species 0.000 description 1
- 241001436793 Meru Species 0.000 description 1
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 101100154863 Mus musculus Txndc2 gene Proteins 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 1
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 208000021161 Plasma cell disease Diseases 0.000 description 1
- 208000007452 Plasmacytoma Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000013009 Pyruvate Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020005115 Pyruvate Kinase Proteins 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 241000239226 Scorpiones Species 0.000 description 1
- WBAXJMCUFIXCNI-WDSKDSINSA-N Ser-Pro Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O WBAXJMCUFIXCNI-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- GKLVYJBZJHMRIY-OUBTZVSYSA-N Technetium-99 Chemical compound [99Tc] GKLVYJBZJHMRIY-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 1
- 108091005906 Type I transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000000999 acridine dye Substances 0.000 description 1
- QQINRWTZWGJFDB-YPZZEJLDSA-N actinium-225 Chemical compound [225Ac] QQINRWTZWGJFDB-YPZZEJLDSA-N 0.000 description 1
- 229940125666 actinium-225 Drugs 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000008484 agonism Effects 0.000 description 1
- LXQXZNRPTYVCNG-YPZZEJLDSA-N americium-241 Chemical compound [241Am] LXQXZNRPTYVCNG-YPZZEJLDSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003466 anti-cipated effect Effects 0.000 description 1
- 230000003302 anti-idiotype Effects 0.000 description 1
- 230000009830 antibody antigen interaction Effects 0.000 description 1
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 108010021331 carfilzomib Proteins 0.000 description 1
- 229960002438 carfilzomib Drugs 0.000 description 1
- BLMPQMFVWMYDKT-NZTKNTHTSA-N carfilzomib Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)[C@]1(C)OC1)NC(=O)CN1CCOCC1)CC1=CC=CC=C1 BLMPQMFVWMYDKT-NZTKNTHTSA-N 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 210000003756 cervix mucus Anatomy 0.000 description 1
- TVFDJXOCXUVLDH-RNFDNDRNSA-N cesium-137 Chemical compound [137Cs] TVFDJXOCXUVLDH-RNFDNDRNSA-N 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-YPZZEJLDSA-N cobalt-57 Chemical compound [57Co] GUTLYIVDDKVIGB-YPZZEJLDSA-N 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-AKLPVKDBSA-N copper-67 Chemical compound [67Cu] RYGMFSIKBFXOCR-AKLPVKDBSA-N 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 231100000050 cytotoxic potential Toxicity 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 229910003460 diamond Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 1
- CEJLBZWIKQJOAT-UHFFFAOYSA-N dichloroisocyanuric acid Chemical compound ClN1C(=O)NC(=O)N(Cl)C1=O CEJLBZWIKQJOAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 230000001516 effect on protein Effects 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 1
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 238000013213 extrapolation Methods 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 239000001021 fluorone dye Substances 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 235000019410 glycyrrhizin Nutrition 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-OUBTZVSYSA-N gold-198 Chemical compound [198Au] PCHJSUWPFVWCPO-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000003917 human chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-AHCXROLUSA-M iodine-123(1-) Chemical compound [123I-] XMBWDFGMSWQBCA-AHCXROLUSA-M 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-RNFDNDRNSA-M iodine-131(1-) Chemical compound [131I-] XMBWDFGMSWQBCA-RNFDNDRNSA-M 0.000 description 1
- GKOZUEZYRPOHIO-IGMARMGPSA-N iridium-192 Chemical compound [192Ir] GKOZUEZYRPOHIO-IGMARMGPSA-N 0.000 description 1
- 229960003648 ixazomib Drugs 0.000 description 1
- MXAYKZJJDUDWDS-LBPRGKRZSA-N ixazomib Chemical compound CC(C)C[C@@H](B(O)O)NC(=O)CNC(=O)C1=CC(Cl)=CC=C1Cl MXAYKZJJDUDWDS-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- OIURYJWYVIAOCW-VFUOTHLCSA-N kifunensine Chemical compound OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]2NC(=O)C(=O)N12 OIURYJWYVIAOCW-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 238000009115 maintenance therapy Methods 0.000 description 1
- 108010083819 mannosyl-oligosaccharide 1,3 - 1,6-alpha-mannosidase Proteins 0.000 description 1
- 229950002736 marizomib Drugs 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 1
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 238000007837 multiplex assay Methods 0.000 description 1
- 229960003816 muromonab-cd3 Drugs 0.000 description 1
- 101150008049 mx gene Proteins 0.000 description 1
- 238000010984 neurological examination Methods 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229950002610 otelixizumab Drugs 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 229940076788 pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012217 radiopharmaceutical Substances 0.000 description 1
- 229940121896 radiopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000002799 radiopharmaceutical effect Effects 0.000 description 1
- 229910052705 radium Inorganic materials 0.000 description 1
- HCWPIIXVSYCSAN-UHFFFAOYSA-N radium atom Chemical compound [Ra] HCWPIIXVSYCSAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000001022 rhodamine dye Substances 0.000 description 1
- NGWSFRIPKNWYAO-SHTIJGAHSA-N salinosporamide A Chemical compound C([C@@H]1[C@H](O)[C@]23C(=O)O[C@]2([C@H](C(=O)N3)CCCl)C)CCC=C1 NGWSFRIPKNWYAO-SHTIJGAHSA-N 0.000 description 1
- NGWSFRIPKNWYAO-UHFFFAOYSA-N salinosporamide A Natural products N1C(=O)C(CCCl)C2(C)OC(=O)C21C(O)C1CCCC=C1 NGWSFRIPKNWYAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 239000008299 semisolid dosage form Substances 0.000 description 1
- 210000004911 serous fluid Anatomy 0.000 description 1
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000007940 sugar coated tablet Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000001138 tear Anatomy 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 229950010127 teplizumab Drugs 0.000 description 1
- 230000004797 therapeutic response Effects 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M thionine Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC2=[S+]C3=CC(N)=CC=C3N=C21 ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000012876 topography Methods 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 238000013389 whole blood assay Methods 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/567—Framework region [FR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Abstract
BCMA, GPRC5D, 및 CD3에 결합하는 다중특이적 항체 및 이의 다중특이적 항원-결합 단편이 본 명세서에 제공된다. 또한, 제공된 다중특이적 항체 또는 다중특이적 항원-결합 단편을 인코딩할 수 있는 관련 폴리뉴클레오티드, 제공된 다중특이적 항체 또는 다중특이적 항원-결합 단편을 발현하는 세포뿐만 아니라, 관련 벡터 및 검출가능하게 표지화된 다중특이적 항체 또는 다중특이적 항원-결합 단편이 기재된다. 또한, 제공된 다중특이적 항체 및 다중특이적 항원-결합 단편의 생성 및 사용 방법이 기재된다. BCMA에 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편이 본 명세서에 추가로 제공된다. 또한, 제공된 BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편을 인코딩할 수 있는 관련 폴리뉴클레오티드, 제공된 BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편을 발현하는 세포뿐만 아니라, 관련 벡터 및 검출가능하게 표지화된 BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편이 기재된다. 또한, 제공된 BCMA-특이적 항체 및 항원-결합 단편의 생성 및 사용 방법이 기재된다.
Description
관련 출원과의 상호 참조
본 출원은 2021년 2월 16일자로 출원된 미국 가출원 제63/149,921호의 이익을 주장한다. 상기 언급된 출원의 전체 내용은 본 명세서에 전체적으로 참고로 포함된다.
기술분야
본 명세서에 제공된 개시내용은 B-세포 성숙 항원(BCMA), G-단백질 커플링된 수용체, 클래스 C, 군 5, 구성원 D(GPRC5D), 및 클러스터 결정기 3(CD3)에 결합하는 다중특이적 항체, BCMA에 결합하는 단일클론 항체, 및 기재된 항체의 생성 및 사용 방법에 관한 것이다.
다발성 골수종(MM)은 두 번째로 가장 흔한 혈액성 악성 종양이며, 모든 암 사망의 2%를 차지한다. MM은 불균질한 질환이며, 염색체 전좌, 특히 t(11; 14),t(4; 14),t(8;14),del(13),del(17)에 의해 주로 야기된다(문헌[Drach et al., (1998) Blood 92(3):802-809]; 문헌[Gertz et al., (2005) Blood 106(8):2837-2840]; 문헌Facon et al., (2001) Blood 97(6): 1566-1571]). MM에 걸린 환자는 골수 침윤, 골 파괴, 신부전, 면역결핍, 및 암 진단의 심리 사회적 부담으로 인해 다양한 질환 관련 증상을 겪을 수 있다. 2006년 현재, MM의 경우 5년의 상대 생존율은 약 34%이며, 이는 MM이 현재 치료 옵션이 없는 치료가 어려운 질환임을 강조한 것이다.
BCMA, CD269, TNFRSF17(UniProt Q02223)로도 알려진 B-세포 성숙 항원은 분화된 형질 세포에서 우선적으로 발현되는 종양 괴사 수용체 수퍼패밀리의 구성원이다[문헌[Laabi et al. (1992) EMBO J 11(11):3897-3904]; 문헌[Madry et al. (1998) Int Immunol 10(11):1693-1702]]. BCMA는 B 세포 성숙, 성장, 및 생존에 관여하는 비-글리코실화 유형 I 막관통 단백질이다. BCMA는 TNF 슈퍼패밀리의 하기 2개의 리간드에 대한 수용체이다: BCMA에 대한 고-친화도 리간드인 APRIL(증식-유도 리간드, CD256, TNFSF13), 및 BCMA에 대한 저-친화도 리간드인 B 세포 활성화 인자 BAFF(THANK, BlyS, B 림프구 자극제, TALL-1 및 zTNF4). APRIL 및 BAFF는 구조적 유사성 및 중첩되지만 별개인 수용체 결합 특이성을 나타낸다. 음성 조절자 TACI가 또한 BAFF 및 APRIL 둘 모두에 결합한다. BCMA 및/또는 TACI에 대한 APRIL 및 BAFF의 배위 결합은 전사 인자 NF-κB를 활성화하고 생존-촉진 Bcl-2 패밀리 구성원(예를 들어, Bcl-2, Bcl-xL, Bcl-w, Mcl-1, A1)의 발현을 증가시키고 세포자멸-촉진 인자(예를 들어, Bid, Bad, Bik, Bim 등)의 발현을 하향 조절하여, 세포자멸을 억제하고 생존을 촉진한다. 이러한 조합된 작용은 B 세포 분화, 증식, 생존, 및 항체 생성을 촉진한다(문헌[Rickert RC et al., Immunol Rev (2011) 244 (1): 115-133]에 검토된 바와 같음). 이러한 발견과 일치하여, BCMA는 또한 다발성 골수종(MM) 세포를 포함하는 악성 인간 B 세포의 성장 및 생존을 지원한다. 노박(Novak) 등은 MM 세포주 및 새로 단리된 MM 세포가 이들의 세포 표면 상에 BCMA 및 TACI 단백질을 발현하고 이들의 세포 표면 상에 BAFF-R 단백질의 가변적인 발현을 갖는다는 것을 발견하였다(문헌[Novak et al., (2004) Blood 103(2):689-694]).
림프종 및 다발성 골수종의 치료를 위한 항-BCMA 항체의 사용은 WO2002066516 및 WO2010104949에 언급되어 있다. BCMA에 대한 항체는 예를 들어 문헌[Gras M-P. et al. Int Immunol. 7 (1995) 1093-1106], WO200124811, 및 WO200124812에 기재되어 있다. 그럼에도 불구하고, BCMA, BAFF-R, 및 TACI, 즉, TNF 수용체 수퍼패밀리에 속하는 B 세포 수용체, 및 이들의 리간드 BAFF 및 APRIL에 암에 맞서 싸우는 요법이 적용된다는 사실에도 불구하고, 그러한 의학적 병태의 치료를 위한 추가의 옵션이 필요하다.
G-단백질 커플링된 수용체, 클래스 C, 군 5, 구성원 D(GPRC5D)는 2001년에 최초로 확인된 희소(orphan) 비정형 클래스 C GPCR이다(문헌[
et al. Biochim Biophys Acta. 1518(3):237-248, 2001]). GPRC5D 및 다른 그룹 5 GPCR은 클래스 C 수용체의 비정상적으로 짧은 아미노 말단 도메인을 가지며, 따라서 클래스 A 수용체와 구조적으로 유사할 것으로 예측된다. 이와 관련하여, 이들은 독특하며, 클래스 C GPCR에 대한 서열 상동성 및 예측된 구조 토폴로지가 클래스 A 수용체에 비교할 만하다. GPRC5D 활성화의 기능적 결과는 설명되지 않았으며, 리간드는 알려져 있지 않다. 유전자는 3개의 엑손을 가지며, 인간의 염색체 12p13.3 상에 위치한다. GPRC5D 수용체는 다양한 종들 사이에서 고도로 보존되어 있으며, 사이노몰거스 원숭이(cynomolgus monkey) GPRC5D와 92%의 동일성을 공유한다.
다발성 골수종의 치료를 위한 항-GPRC5D 항체의 사용은 WO2016090329, WO2018017786, WO2018147245, 및 WO2019154890에 언급되어 있다. 그럼에도 불구하고, GPRC5D에 암에 맞서 싸우는 요법이 적용된다는 사실에도 불구하고, 그러한 의학적 병태의 치료를 위한 추가의 옵션이 필요하다.
GPRC5D mRNA는 주로 MM 환자로부터의 모든 악성 형질 세포에서 발현된다(문헌[Atamaniuk JA et al. Eur J Clin Invest 42(9) 953-960; 2012]; 문헌[Frigyesi-blood and Cohen, et al. Hematology 18(6): 348-35; 2013]). GPRC5D 발현은 환자들 사이에서 가변적이며, 형질 세포 부담 및 유전자 이상, 예컨대 Rb-1 결실과 상당히 관련되어 있다(문헌[Atamaniuk JA et al. Eur J Clin Invest 42(9) 953-960; 2012]).
클론 저항성은 재발 불응성 골수종에서 일반적인 기전이다. 하나 초과의 골수종 종양 항원을 표적화하고 T-세포에 결합하는 것은 악성 형질 세포의 효율적인 사멸 및 최소 잔류 질환(MRD) 음성으로 이어질 수 있다. 이중 BCMA 및 GPRC5D 표적화는 항체 결합력 및 효력을 향상시키고, 불균질한 세포 집단의 존재 하에 종양 퇴치를 최대화하고, 종양 항원 탈출을 방지하고(예를 들어, 충분한 BCMA 또는 GPRC5D를 단독으로 발현하지 않는 MM 세포를 포획함), 종양 효능을 개선하고, 사이토카인 방출 증후군(CRS)에 대한 잠재력을 완화할 수 있다. 따라서, 다발성 골수종 및/또는 관련된 의학적 병태의 치료를 위해 BCMA 및 GPRC5D 둘 모두를 표적화하는 치료용 항체에 대한 필요성이 존재한다.
일 태양에서 본 명세서에는, BCMA, GPRC5D, 및 CD3에 결합하거나 특이적으로 결합하는 다중특이적 항체 및 이의 다중특이적 항원-결합 단편이 제공된다. 일부 실시 형태에서 본 명세서에는, BCMA, GPRC5D, 및 CD3에 결합하거나 특이적으로 결합하는 삼중특이적 항체 및 이의 삼중특이적 항원-결합 단편이 제공된다. 또한, 제공된 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 또는 다중특이적 항원-결합 단편을 인코딩할 수 있는 관련 폴리뉴클레오티드, 제공된 항체 또는 다중특이적 항원-결합 단편을 발현하는 세포뿐만 아니라, 관련 벡터 및 검출가능하게 표지화된 다중특이적 항체 또는 다중특이적 항원-결합 단편이 기재된다. 게다가, 제공된 다중특이성 항체의 사용 방법이 기재된다. 예를 들어, BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 및 다중특이적 항원-결합 단편을 사용하여 암(예를 들어, BCMA 및/또는 GPRC5D-발현 암)을 치료할 수 있으며; GPRC5D-발현 암의 진행, 퇴행, 또는 안정성을 진단 또는 모니터링하거나; 환자가 암 치료를 받아야 하는지의 여부를 결정하거나; 대상체가 BCMA 및/또는 GPRC5D-발현 암을 앓고 있고, 따라서 BCMA 및/또는 GPRC5D-특이적 항암 치료제, 예컨대 본 명세서에 기재된 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체를 이용한 치료에 순응할 수 있는지의 여부를 결정하기 위해 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체를 사용할 수 있다.
BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체
BCMA, GPRC5D, 및 CD3에 결합하는 단리된 다중특이적 항체("BCMA x GPRC5D x CD3 다중특이적 항체") 및 이의 다중특이적 항원-결합 단편이 본 명세서에 기재된다.
바람직한 실시 형태에서, BCMA x GPRC5D x CD3 다중특이적 항체 또는 항원-결합 단편은 삼중특이적 항체 또는 항원-결합 단편이다. 일부 실시 형태에서, 단리된 BCMA x GPRC5D x CD3 삼중특이적 항체 또는 이의 삼중특이적 결합 단편은 (a) 제1 중쇄 가변 도메인(VH1) 및 제1 경쇄 가변 도메인(VL1)을 포함하는 제1 항원-결합 아암; (b) 제2 중쇄 가변 도메인(VH2) 및 제2 경쇄 가변 도메인(VL2)을 포함하는 제2 항원-결합 아암; 및 (c) 제3 중쇄 가변 도메인(VH3) 및 제3 경쇄 가변 도메인(VL3)을 포함하는 제3 항원-결합 아암을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 항원-결합 아암은 CD3 상의 에피토프에 결합하고, 제2 항원-결합 아암은 GPRC5D 상의 에피토프에 결합하고, 제3 항원-결합 아암은 BCMA 상의 에피토프에 결합한다.
일부 실시 형태에서, 삼중특이적 항체의 제1 항원-결합 아암, 또는 이의 삼중특이적 결합 단편은 VH1을 포함하는 제1 중쇄 부분(HC1) 및 VL1을 포함하는 경쇄 부분을 포함한다. VH1 및 VL1은 제1 항원에 결합하는 제1 항원-결합 도메인을 형성한다. 삼중특이적 항체 또는 이의 삼중특이적 결합 단편의 제2 항원-결합 아암은 VH2를 포함하는 제2 중쇄 부분(HC2)을 포함한다. HC2의 VH2는 제2 항원에 결합하는 제2 항원-결합 도메인을 형성한다. HC1 또는 HC2는 제3 항원에 결합하는 제3 항원-결합 도메인을 형성하는 VH3을 포함하는 제3 항원-결합 아암에 추가로 커플링된다. HC1 및 HC2는 각각 임의로 단편 결정화가능(Fc) 도메인을 포함하며, 여기서 Fc 도메인은 불변 중쇄 영역 2(CH2) 및 CH3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 항원은 분화 클러스터 3(CD3) 이고, 제2 항원은 B 세포 성숙 항원(BCMA)이고, 제3 항원은 G-단백질 커플링된 수용체 패밀리 C 군 5 구성원 D(GPRC5D)이다. 일부 실시 형태에서, 제1 항원은 분화 클러스터 3(CD3)이고, 제2 항원은 G-단백질 커플링된 수용체 패밀리 C 군 5 구성원 D(GPRC5D)이고, 제3 항원은 B 세포 성숙 항원(BCMA)이다. BCMA x GPRC5D x CD3 삼중특이적 항체 또는 이의 삼중특이적 결합 단편의 일부 태양은 하기 상세한 설명 및 실시예 섹션에 추가로 기재되어 있다.
일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 인간 BCMA에 결합하지만, 사이노몰거스 원숭이 BCMA에는 결합하지 않는다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 BCMA 세포외 도메인(ECD)으로부터의 하나 이상의 잔기를 포함하는 에피토프에 결합한다. 일부 실시 형태에서, BCMA x GPRC5D x CD3 다중특이적 항체의 BCMA-결합 아암(또는 "BCMA-특이적 아암")은 본 명세서에 기재된 BCMA 항체로부터(예를 들어, 표 1에 열거된 CDR 서열을 갖는 항체로부터) 유래된다.
일부 실시 형태에서, 다중특이적 항체의 GPRC5D-특이적 아암은 인간 GPRC5D에 결합하지만 사이노몰거스 원숭이 GPRC5D에는 결합하지 않는다. 일부 실시 형태에서, BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 또는 항원-결합 단편의 GPRC5D-특이적 아암은 인간 GPRC5D의 세포외 도메인에 결합한다. 일부 실시 형태에서, BCMA x GPRC5D x CD3 다중특이적 항체의 GPRC5D-결합 아암(또는 "GPRC5D-특이적 아암")은 본 명세서에 기재된 GPRC5D 항체로부터(예를 들어, 표 2에 열거된 CDR 서열을 갖는 항체로부터) 유래된다.
TCR/CD3 복합체를 통한 BCMA 및/또는 GPRC5D를 발현하는 MM 세포로의 T-림프구의 방향전환은 매력적인 대안적 접근법을 제시한다. T-림프구의 TCR/CD3 복합체는 감마(γ), 델타(δ), 엡실론(ε), 제타(ζ), 및 에타(η)로 표지화된 CD3의 불변성 서브유닛과 함께 세포 표면에서 공발현되는 TCR 알파(α)/베타(β) 또는 TCR 감마(γ)/델타(δ) 이종이량체로 이루어진다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이적 항체 또는 다중특이적 항원-결합 단편은 CD3ε에 결합한다. 일부 실시 형태에서, BCMA x GPRC5D x CD3 다중특이적 항체의 CD3-결합 아암(또는 "CD3-특이적 아암")은 단일클론 항체 CD3B376으로부터 유래된다. 일부 실시 형태에서, BCMA x GPRC5D x CD3 다중특이적 항체의 CD3-결합 아암(또는 "CD3-특이적 아암")은 마우스 IgG3/람다 동종형인 단일클론 항체 SP34로부터 유래된다. (문헌[K.R. Abhinandan and A. C. Martin, 2008. Mol. Immunol. 45, 3832-3839]). 일부 실시 형태에서, BCMA x GPRC5D x CD3 다중특이적 항체의 CD3-결합 아암은 표 3에 기재된 중쇄 CDR 및/또는 경쇄 CDR, 또는 표 3으로부터 선택된 임의의 하나의 VH 도메인 및/또는 임의의 하나의 VL 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 또는 항원-결합 단편의 BCMA-, GPRC5D-, 및/또는 CD3-특이적 아암은 IgG 또는 이의 유도체이다. IgG 부류는 인간에서 하기의 4가지 동종형으로 분류된다: IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4. 이들은 Fc 영역의 아미노산 서열에서 95% 초과의 상동성을 공유하지만, 힌지 영역의 아미노산 조성 및 구조에서 큰 차이를 나타낸다. Fc 영역은 이펙터 기능, 예컨대 항체-의존성 세포성 세포독성(ADCC) 및 보체-의존성 세포독성(CDC)을 매개한다. ADCC에서는, 항체의 Fc 영역이 자연 살해세포 및 대식세포와 같은 면역 이펙터 세포의 표면 상의 Fc 수용체(FcγR)에 결합하여, 표적화된 세포의 식세포작용 또는 용해로 이어진다. CDC에서는, 항체가 세포 표면에서 보체 캐스케이드를 촉발시킴으로써 표적화된 세포를 사멸시킨다.
치료적 항체의 많은 응용에 있어서, Fc-매개 이펙터 기능은 작용 기전의 일부가 아니다. 이들 Fc-매개 이펙터 기능은 탈기전 독성을 야기함으로써 유해할 수 있고 잠재적으로 안전성 위험을 제기할 수 있다. Fc 영역을 조작하여 FcγR 또는 보체 인자에 대한 이들의 결합을 감소시킴으로써 이펙터 기능의 변형이 달성될 수 있다. 활성화 FcγR(FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIIa, 및 FcγRIIIb) 및 억제성 FcγR(FcγRIIb) 또는 제1 보체 성분(C1q)에 대한 IgG의 결합은 힌지 영역 및 CH2 도메인에 위치된 잔기에 의존한다. Fc 기능성을 감소 또는 침묵시키기 위해 돌연변이가 IgG1, IgG2 및 IgG4에 도입되어 왔다.
일 실시 형태에서, 항체는 하기 특성 중 하나 이상을 갖는 Fc 영역을 포함한다: (a) 모 Fc와 비교할 때 감소된 이펙터 기능; (b) FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb, FcγRIIIb, 및/또는 FcγRIIIa에 대한 감소된 친화도, (c) FcγRI에 대한 감소된 친화도, (d) FcγRIIa에 대한 감소된 친화도, (e) FcγRIIb에 대한 감소된 친화도, (f) FcγRIIIb에 대한 감소된 친화도, 또는 (g) FcγRIIIa에 대한 감소된 친화도.
일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 CD3 특이적 아암의 유래가 되는 CD3 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 IgG 또는 이의 유도체이다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 CD3 특이적 아암의 유래가 되는 CD3 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 IgG1 또는 이의 유도체이다. 일부 실시 형태에서, 예를 들어, CD3 결합 아암의 유래가 되는 CD3 특이적 IgG1 항체의 Fc 영역은 그의 Fc 영역 내에 L234A, L235A, 및 D265S 치환을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 CD3 특이적 아암의 유래가 되는 CD3 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 IgG4 또는 이의 유도체이다. 일부 실시 형태에서, 예를 들어, CD3 결합 아암의 유래가 되는 CD3 특이적 IgG4 항체의 Fc 영역은 그의 Fc 영역 내에 S228P, L234A, L235A, F405L, 및 R409K 치환을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 CD3 특이적 아암의 유래가 되는 CD3 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 1차 인간 T 세포 및/또는 1차 사이노몰거스 T 세포 상의 CD3ε과 결합한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체의 CD3 특이적 아암의 유래가 되는 CD3 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 1차 인간 CD4+ T 세포 및/또는 1차 사이노몰거스 CD4+ T 세포를 활성화한다.
기재된 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체에 더하여, 기재된 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체를 인코딩할 수 있는 폴리뉴클레오티드 서열이 또한 제공된다. 일부 실시 형태에서, BCMA x GPRC5D x CD3 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편의 각각의 항원-결합 아암의 중쇄 가변 도메인의 하나 이상의 CDR 및/또는 경쇄 가변 도메인의 하나 이상의 CDR을 인코딩하는 단리된 합성 폴리뉴클레오티드가 제공된다. 일부 실시 형태에서, BCMA x GPRC5D x CD3 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편의 하나 이상의 중쇄 가변 도메인 및/또는 하나 이상의 경쇄 가변 도메인을 인코딩하는 단리된 합성 폴리뉴클레오티드가 제공된다. 일부 실시 형태에서, BCMA x GPRC5D x CD3 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편의 제1, 제2, 및/또는 제3 항원-결합 아암의 하나 이상의 폴리펩티드 사슬을 인코딩하는 단리된 합성 폴리뉴클레오티드가 제공된다. 기재된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터가 또한 제공되며, BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체를 발현하는 세포도 본 명세서에 제공된다. 다른 실시 형태에서, 다중특이적 항체 또는 다중특이적 결합 단편을 발현하는 단리된 세포가 제공된다. 개시된 벡터를 발현할 수 있는 세포가 또한 기재된다. 이들 세포는 포유류 세포(예컨대, 293 세포, 293F 세포, CHO 세포), 곤충 세포(예컨대, Sf7 세포), 효모 세포, 식물 세포, 또는 세균 세포(예컨대, E. 콜라이(E. coli))일 수 있다. 기재된 항체는 또한 하이브리도마 세포에 의해 생성될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 세포를 배양함으로써 BCMA x GPRC5D x CD3 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편을 생성하기 위한 방법이 제공된다.
BCMA x GPRC5D x CD3 다중특이적 항체 또는 항원-결합 단편 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물이 본 명세서에 추가로 제공된다.
BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체의 사용 방법
기재된 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 및 이의 다중특이적 항원-결합 단편의 사용 방법이 또한 개시된다. 예를 들어, BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 및 이의 다중특이적 항원-결합 단편은 GPRC5D 및/또는 BCMA-발현 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 GPRC5D 및/또는 BCMA-발현 암의 치료에 유용할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 및/또는 BCMA-발현 암은 림프종, 예컨대 무증상 다발성 골수종(SMM)을 포함하는 다발성 골수종이다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 및/또는 BCMA-발현 암은 림프종의 재발성 또는 불응성 형태, 예컨대 다발성 골수종의 재발성 또는 불응성 형태이다.
GPRC5D 및/또는 BCMA-발현 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 GPRC5D 및/또는 BCMA-발현 암을 치료하는 기재된 방법은 기재된 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 또는 이의 다중특이적 항원-결합 단편의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 대상은 포유동물, 바람직하게는 인간이다. 바람직한 실시 형태에는, 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 암의 치료를 필요로 하는 환자에게 BCMA x GPRC5D x CD3 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 항원-결합 단편의 치료적 유효량을 투여하는 단계에 의해 암을 갖는 대상체를 치료하기 위한 방법이 제공된다.
BCMA x GPRC5D x CD3 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편의 치료적 유효량을 투여하여 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하는 단계에 의해 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하기 위한 방법이 본 명세서에 추가로 제공된다.
BCMA x GPRC5D x CD3 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편의 치료적 유효량을 투여하여 T 세포를 암으로 방향전환시키는 단계에 의해 T 세포를 GPRC5D 및/또는 BCMA-발현 암 세포로 방향전환시키는 방법이 또한 본 명세서에 제공된다.
당업자는 기재된 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 및 이의 다중특이적 항원-결합 단편을 사용하는 방법이, 예를 들어 본 명세서에 정의된 바와 같은 질환, 특히 암의 치료에 사용하기 위한 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 및 다중특이적 항원-결합 단편의 형태로, 의료 용도 형식으로 명시될 수 있음을 이해할 것이다. 이러한 당업자는 또한 기재된 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 및 이의 다중특이적 항원-결합 단편을 사용하는 방법이, 예를 들어, 본 명세서에 정의된 바와 같은 질환, 특히 암의 치료를 위한 의약의 제조를 위한 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 및 다중특이적 항원-결합 단편의 사용의 형태로, 소위 Swiss 형태로 명시될 수 있음을 이해할 것이다. 이는 본 개시내용 전체에 걸쳐 적용된다.
BCMA x GPRC5D x CD3-특이적 항체 키트
개시된 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체를 포함하는 키트가 본 명세서에 기재된다. 기재된 키트는 본 명세서에 제공된 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체를 사용하는 방법, 또는 당업자에게 알려진 다른 방법을 실행하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 기재된 키트는 GPRC5D 및/또는 BCMA-발현 암을 치료하는 데 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 항체 및 시약을 포함할 수 있다. 따라서, 기재된 키트는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 다중특이성 항체 또는 이의 다중특이성 항원 결합 단편(들), 및 사용 중이 아닐 때 항체 또는 단편을 담기 위한 용기, 및/또는 항체 또는 단편, 고체 지지체에 부착된 항체 또는 단편, 및/또는 항체 또는 단편의 검출가능하게 표지된 형태의 사용설명서를 포함할 수 있으며, 이는 본 명세서에 기재된 바와 같다.
BCMA-특이적 항체
BCMA에 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편이 또한 본 명세서에 제공된다. 또한, 제공된 BCMA-특이적 항체 및 항원-결합 단편을 인코딩할 수 있는 관련 폴리뉴클레오티드, 제공된 항체 및 항원-결합 단편을 발현하는 세포뿐만 아니라, 관련 벡터 및 검출가능하게 표지화된 항체 및 항원-결합 단편이 또한 기재된다. 게다가, 제공된 항체 및 항원-결합 단편의 사용 방법이 기재된다. 예를 들어, BCMA-특이적 항체 및 항원-결합 단편을 사용하여 암(예를 들어, BCMA-발현 암)을 치료할 수 있으며; BCMA-발현 암의 진행, 퇴행, 또는 안정성을 진단 또는 모니터링하여; 환자가 암 치료를 받아야 하는지의 여부를 결정하거나; 대상체가 BCMA-발현 암을 앓고 있고, 따라서 BCMA-특이적 항암 치료제, 예컨대 본 명세서에 기재된 BCMA 및 CD3에 대한 다중특이적 항체를 이용한 치료에 순응할 수 있는지의 여부를 결정하기 위해 BCMA-특이적 항체 및 항원-결합 단편을 사용할 수 있다. BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편의 일부 태양은 하기 상세한 설명 및 실시예 섹션에 추가로 기재되어 있다.
BCMA-특이적 항체의 사용 방법
기재된 BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편의 사용 방법이 또한 개시된다. 이 섹션에서 논의되는 방법에 사용하기 위한 특정 항체는 표 1에서의 항체들에 대해 기재된 CDR들의 세트를 갖는 것들을 포함한다(예를 들어, BCMB519). 예를 들어, 이들 항체 또는 항원-결합 단편은 BCMA-수용체 상호작용을 방해하거나, 항체가 독소에 접합되는 경우, 이에 따라 독소가 BCMA-발현 암을 표적으로 하게 됨으로써, 암을 치료하는 데 유용할 수 있다. 추가로, 이들 항체 또는 항원-결합 단편은 혈액 또는 혈청과 같은 생물학적 샘플 내의 BCMA의 존재를 검출하기 위해; 혈액 또는 혈청과 같은 생물학적 샘플에서 BCMA의 양을 정량화하기 위해; BCMA-발현 암을 진단하기 위해; 암을 앓고 있는 대상체를 치료하는 방법을 결정하거나; 대상체에서 BCMA-발현 암의 진행을 모니터링하기 위해 유용할 수 있다. 일부 실시 형태에서, BCMA-발현 암은 림프종, 예컨대 무증상 다발성 골수종(SMM)을 포함하는 다발성 골수종(MM)일 수 있다. 일부 실시 형태에서, BCMA-발현 암은 림프종의 재발성 또는 불응성 형태, 예컨대 다발성 골수종의 재발성 또는 불응성 형태이다. 기재된 방법은 대상체가 BCMA-발현 암에 대한 치료, 예컨대 BCMA 및 CD3에 대한 다중특이적 항체를 이용한 치료를 받기 전에 실행될 수 있다. 추가로, 기재된 방법은 대상체가 BCMA-발현 암의 치료, 예컨대 본 명세서에 기재된 BCMA 및 CD3에 대한 다중특이적 항체를 이용한 치료를 받은 후에 실행될 수 있다.
생물학적 샘플에서 BCMA를 검출하는 기재된 방법은 생물학적 샘플을 본 명세서에 기재된 BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편 중 하나 이상에 노출시키는 단계를 포함한다.
대상체에서 BCMA-발현 암을 진단하는 기재된 방법은 또한 생물학적 샘플을 본 명세서에 기재된 BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편 중 하나 이상에 노출시키는 단계를 포함하지만; 본 방법은 또한 샘플 내에 존재하는 BCMA의 양을 정량화하는 단계; 샘플 내에 존재하는 BCMA의 양을 알려진 표준 또는 참조 샘플과 비교하는 단계; 및 대상체의 BCMA 수준이 암과 관련된 BCMA의 수준 내에 있는지의 여부를 결정하는 단계를 포함한다.
대상체에서 BCMA-발현 암을 모니터링하는 방법이 또한 본 명세서에 기재된다. 기재된 방법은 생물학적 샘플을 본 명세서에 기재된 하나 이상의 BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편 중 하나 이상에 노출시키는 단계; 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의해 결합된 샘플 내에 존재하는 BCMA의 양을 정량화하는 단계; 샘플 내에 존재하는 BCMA의 양을 알려진 표준 또는 참조 샘플 또는 대상체로부터 이전에 얻어진 유사한 샘플 내의 BCMA의 양과 비교하는 단계; 및 비교된 샘플들 내의 BCMA의 양의 차이에 기초하여 대상체의 BCMA 수준이 암의 진행, 퇴행, 또는 안정적인 질환을 나타내는지의 여부를 결정하는 단계를 포함한다.
대상으로부터 획득되거나 유래된 샘플은 소변, 혈액, 혈청, 혈장, 타액, 복수(ascites), 순환 세포, 순환 종양 세포, 조직과 관련되지 않은 세포, 조직, 외과적으로 절제된 종양 조직, 생검, 미세 바늘 흡인 샘플 또는 조직 프레파라트와 같은 생물학적 샘플이다.
기재된 BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편은 기재된 방법, 또는 당업자에게 알려진 다른 방법과 함께 사용하기 위해 표지화될 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 방사성표지, 형광 표지, 에피토프 태그, 비오틴, 발색단 표지, ECL 표지, 효소, 루테늄, 111In-DOTA, 111In-다이에틸렌트라이아민펜타아세트산(DTPA), 서양고추냉이 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제 및 베타-갈락토시다제, 또는 폴리-히스티딘 또는 당업계에 알려진 유사한 그러한 표지로 표지화될 수 있다.
BCMA-특이적 항체 키트
개시된 BCMA-특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 키트가 본 명세서에 기재된다. 기재된 키트는 본 명세서에 제공된 BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편을 사용하는 방법, 또는 당업자에게 알려진 다른 방법을 수행하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 기재된 키트는 본 명세서에 기재된 항체 또는 항원-결합 단편 및 생물학적 샘플에서 BCMA의 존재를 검출하는 데 사용하기 위한 시약을 포함할 수 있다. 따라서, 기재된 키트는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 항체 또는 이의 항원-결합 단편(들), 및 사용 중이 아닐 때 항체 또는 단편을 담기 위한 용기, 항체 또는 단편, 고체 지지체에 부착된 항체 또는 단편, 및/또는 항체 또는 단편의 검출가능하게 표지화된 형태의 사용에 대한 설명서를 포함할 수 있으며, 이는 본 명세서에 기재된 바와 같다.
도 1a 및 도 1b. BGCB463 삼중특이적 항체(도 1a) 및 제안된 작용 모드(도 1b)의 도시.
도 2a 내지 도 2d. BGCB463(원) 또는 음성 대조군 B23B251(삼각형)을 모두 1 시간 동안 37℃에서 2 μM의 시작 농도로 H929 야생형(WT)(도 2a), H929-GPRC5D 녹아웃(KO)(도 2b), H929-BCMA KO(도 2c), 및 H929-GPRC5D/BCMA KO(도2d) 세포와 함께 인큐베이션하였다. AF647-표지화된 재료를 이용한 2차 검출 후에, MFI 신호를 분석하여 EC50 및 EC90을 생성하였다. 곡선은 5회의 독립적인 실험을 대표한다. EC50 또는 EC90 값은 이들의 평균이다.
도 3a 내지 도 3d. BGCB463(원) 또는 음성 대조군 B23B251(삼각형)을 모두 1 시간 동안 37℃에서 2 μM의 시작 농도로 MM.1R WT(도 3a), MM.1R -GPRC5D KO(도 3b), MM.1R -BCMA KO(도 3c), 및 MM.1R -GPRC5D/BCMA KO(도 3d) 세포와 함께 인큐베이션하였다. AF647-표지화된 재료를 이용한 2차 검출 후에, MFI 신호를 분석하여 EC50 및 EC90을 생성하였다. 곡선은 5회의 독립적인 실험을 대표한다.
도 4a 내지 도 4c. BGCB463(원) 또는 음성 대조군 B23B251(삼각형)을 모두 1 시간 동안 37℃에서 2 μM의 시작 농도로 Pan T 세포(3명의 무작위 공여자, 도 4a 내지 도 4c)와 함께 인큐베이션하였다. AF647-표지화된 재료를 이용한 2차 검출 후에, MFI 신호를 분석하여 EC50 및 EC90을 생성하였다. 데이터는 2회의 개별 전개(둘 모두 3명의 공여자를 가짐)를 대표한다.
도 5a 내지 도 5c. BGCB463을 1 시간 동안 4℃(원) 또는 37℃(삼각형)에서 2 μM의 시작 농도로 Pan T 세포(3명의 무작위 공여자, 도 5a, 도 5b, 및 도 5c)와 함께 인큐베이션하였다. AF647-표지화된 재료를 이용한 2차 검출 후에, MFI 신호를 분석하여 EC50을 생성하였다.
도 6a 내지 도 6c. BGCB463.003(원), BGCB463.004(정사각형), 및 음성 대조군 B23B251(삼각형)을 H929(도 6a), MM.1R(도 6b), 및 3명의 공여자로부터의 Pan T(도 6c) 세포로 시험하였다. 37℃에서 1 시간 동안 2 μM의 시작 농도로 분자를 인큐베이션하였다. AF647-표지화된 재료를 이용한 2차 검출 후에, MFI 신호를 분석하였다.
도 7a 내지 도 7d. H929(도 7a), H929-GPRC5D KO(도 7b), H929-BCMA KO(도 7c), 및 H929-GPRC5D/BCMA KO(도 7d) 세포를 모두 1 시간, 3 시간, 5 시간, 및 24 시간 동안 BGCB463의 3가지 최적화된 농도로 37℃에서 인큐베이션하였다. 이어서 세포를 세척하고, AF647-항-인간 IgG와 함께 얼음 상에서 30 분 동안 인큐베이션하였다. 판독은 AF647 신호의 MFI이다.
도 8a 내지 도 8d. MM.1R WT(도 8a), MM.1R -GPRC5D KO(도 8b), MM.1R -BCMA KO(도 8c), 및 MM.1R -GPRC5D/BCMA KO(도 8d) 세포를 모두 1 시간, 3 시간, 5 시간, 및 24 시간 동안 BGCB463의 3가지 최적화된 농도로 37℃에서 인큐베이션하였다. 이어서 세포를 세척하고, AF647-항-인간 IgG와 함께 얼음 상에서 30 분 동안 인큐베이션하였다. 판독은 AF647 신호의 MFI이다.
도 9a 내지 도 9e. BGCB463(원) 또는 음성 대조군 B23B251(삼각형)을 모두 1 시간 동안 37℃에서 2 μM의 시작 농도로 인간 GPRC5D(도 9a), 인간 BCMA(도 9b), 사이노몰거스 GPRC5D(도 9c), 또는 사이노몰거스 BCMA(도 9d)를 발현하는 K562 세포와 함께 인큐베이션하였다. AF647-항-인간 IgG를 이용한 2차 검출 후에, MFI 신호를 분석하여 EC50 및 EC90을 생성하였다(도 9e). 데이터는 두 개의 독립적인 실험을 나타낸다.
도 10a 및 도 10b. BGCB463(원) 또는 음성 대조군 B23B251(삼각형)을 10 nM의 시작 농도에서 인간 또는 사이노몰거스 GPRC5D를 발현하는 K562 세포와 함께 인큐베이션하였다(또는 표적 세포로서 인간/사이노몰거스 BCMA를 발현하는 K562의 경우에 100 nM). 도 10a에서의 인간 활성화 및 세포독성. 도 10b에서의 사이노몰거스 활성화 및 세포독성. 인간 Pan T 세포(1명의 공여자)를 3:1의 이펙터 대 표적(E:T) 비로 첨가하고 37℃에서 72 시간 동안 인큐베이션하였다. live/dead 고정가능한 염료를 사용하여 세포독성을 결정하고, BV421-접합된 항-CD25를 사용하여 CD25를 측정하였다.
도 11. H929 세포를 증가하는 농도의 BGCB463 또는 음성 대조군 B23B251과 함께 1 시간 동안 37℃에서 배지(10% FBS를 함유하는 RPMI) 또는 90% 인간 혈청을 함유하는 RPMI의 존재 하에 AF647- 항-인간 IgG와 함께 인큐베이션하였다. BGCB463 결합은 혈청의 존재에 의해 영향을 받지 않는다.
도 12. T 세포를 증가하는 농도의 BGCB463 또는 음성 대조군 B23B251과 함께 1 시간 동안 37℃에서 배지(10% FBS를 함유하는 RPMI) 또는 90% 인간 혈청을 함유하는 RPMI의 존재 하에 AF647-항-인간 IgG와 함께 인큐베이션하였다. 데이터는 2회 실험에서 시험된 3명의 공여자를 대표한다. BGCB463 결합은 혈청의 존재에 의해 영향을 받지 않는다.
도 13a 및 도 13b. H929-GFP 세포를 BGCB463 및 3명의 공여자로부터의 인간 Pan T 세포와 함께 3:1의 E:T 비로T 세포 활성화를 추적하기 위해 첨가된 항-CD25-AF647과 함께 인큐베이션하였다(도 13a). 처리된 웰 대 미처리 웰에서의 GFP 신호에 기초하여 퍼센트 세포용해를 계산하였다(도 13b). 인큐베이션은 약 140 시간 지속되었으며 이미지는 3 시간마다 획득되었다.
도 14a 내지 도 14f. H929-GFP 세포를 BGCB463 또는 B23B251(동종형 대조군) 분자 및 4명의 공여자로부터의 인간 Pan T 세포와 함께 1:1 및 5:1의 E:T 비로T 세포 활성화를 추적하기 위해 첨가된 항-CD25-AF647과 함께 인큐베이션하였다. 처리된 웰 대 미처리 웰에서의 GFP 신호에 기초하여 퍼센트 세포용해를 계산하였다. 인큐베이션은 약 140 시간 지속되었으며 이미지는 3 시간마다 획득되었다. BGCB463, 1:1 비, 세포용해(도 14a). BGCB463, 1:1 비, 총 적분 강도(도 14b). BGCB463, 5:1 비, 세포용해(도 14c). BGCB463, 5:1 비, 총 적분 강도(도 14d). B23B251, 5:1 비, 세포용해(도 14e). B23B251, 5:1 비, 총 적분 강도(도 14f).
도 15a 내지 도 15d. 환자 혈청을 사용하는 가용성 BCMA 간섭의 결정. 공여자 1(도 15a); 공여자 2(도 15b); 공여자 3(도 15c); 및 정상 혈청(도 15d). 알려진 수준의 sBCMA를 갖는 환자 혈청을 직접 표지화된 BGCB463-AF647 및 B23B251-AF647 동종형 대조군과 함께 H929 세포 상에서 37℃에서 1 시간 동안 인큐베이션하였다(90% 혈청 내지 10% 배지). 50% 및 10% 환자 혈청을 각각 50% 및 10%의 최종 농도로 정상 혈청으로 희석하였다.
도 16. BGCB491 삼중특이적 항체의 도시.
도 17a 및 도 17b. BGCB463, BGCB491, 및 3개의 대조군(BGCB482(CD3xNullxNull), BGCB483(CD3xNullxBCMA), BGCB484(CD3xGPRC5DxNull))을 BCMA+ GPRC5D+ 세포(도 17a) 및 BCMA- GPRC5D- 세포(도 17b)에 대해 시험하였다. 3:1의 이펙터 대 표적(E:T) 비; n=1 T-세포 공여자, 72 시간 인큐베이션, 최고 농도 53 nM, 1 내지 5 희석. 세포독성 및 T-세포 활성화 둘 모두에 대해 시험을 수행하였다.
도 18a 및 도 18b. BGCB463 및 BGCB491은 1차 인큐베이션 후 72 및 96 시간 둘 모두에 H929 WT, GPRC5D KO, 및 BCMA KO 세포주를 고갈시켰다(도 18a). E:T 비는 3:1이었음, n=5 T-세포 공여자; 72(5) 및 96(4) 시간 인큐베이션; 최고 농도 532 mM, 1 내지 5 희석 구배. 둘 모두의 항체가 상기와 동일한 H929 WT, GPRC5D KO, 및 BCMA KO 세포에서 72 및 96 시간 둘 모두에 증가된 T-세포 활성화를 나타낸다(도 18b).
도 19. 세포독성 및 T-세포 활성화 검정에서 H929, RAMOS, 및 GRANTA-519 세포주로 BGCB463 및 BGCB491을 시험하였다. E:T는 5:1 이었음, n=1 T-세포 공여자; 72 시간 인큐베이션 단독; 53 nM의 최고 농도; 및 1 내지 5 희석.
도 20. 세포독성 및 T-세포 활성화 전혈 검정에서 H292 세포로 BGCB463 및 BGCB491을 시험하였다. E:T는 5:1이었음, n=2 전혈 공여자; 48 시간 인큐베이션; 532 nM의 최고 농도; 및 1 내지 5 희석.
도 21a 및 도 21b. BGCB463은 충분히 높은 하기 용량으로 주어진 경우에 MM.1S 및 RPMI 8226 이종이식 마우스 모델에서 종양 성장을 퇴행시키는 것으로 나타났다: MM.1S 모델에서 2 ug 또는 10 ug(도 21a) 또는 RPMI 8226 모델에서 5 ug 또는 10 ug(도 21b).
도 22. BGCB463 및 BGCB491은 H929 예방적 이종이식 마우스 모델에서 종양 성장을 퇴행시키는 것으로 나타났다. PBS 대조군과 비교하여, 0.5 ug 및 5 ug 용량 둘 모두는 H929-BCMA KO 및 H929-GPRC5D KO 모델 둘 모두에서 종양 성장을 지연시켰으며, 더 높은 5 ug 농도는 더 많은 효과를 나타냈다.
도 23. BGCB463 및 BGCB491을 1 시간, 37℃ DRC Pan-T 결합 검정에서 시험하였다. 2명의 인간 Pan-T 세포 공여자를 사용하였고, 시험 분자는 1:3 희석 및 11점 DRC로 2 uM 시작 농도를 가졌다.
도 24a 내지 도 24d. BGCB463, BGCB491, 및 null 대조군을 H929 WT(도 24a), H929-BCMA KO(도 24b), H929-GPRC5D KO(도 24c), 및 H929-BCMA/GPRC5D 이중 KO(도 24d) 세포에 대해 1 시간, 37℃ DRC 스위트 결합 검정에서 시험하였다.
도 25. 1 시간 37℃ 인큐베이션 후 H929 WT, H929-BCMA KO 세포, H929-GPRC5D KO 세포, 및/또는 H929-BCMA/GPRC5D 이중 KO 세포에 대한 BGCB491의 대표적인 결합 프로파일. BGCB491은
로 표시되고 음성 대조군 CD3xNullxNull BGCB510은 
으로 표시된다. 곡선은 5회의 독립적인 실험을 대표한다. H929-GPRC5D-KO 클론 H15는 30% 및 61% 분포의 2 카피의 유전자를 갖는 이형접합성 KO 라인이다. H929-BCMA-KO 클론 J8은 동일한 50% 분포의 2 카피의 유전자를 갖는 이형접합성 KO 라인이다.
도 26. 37℃에서 1 시간 인큐베이션 후에 7명의 공여자 세포 제제에 대한 BGCB491의 1차 T 세포 결합 프로파일. MFI: 평균 형광 강도.
도 27. CD3B376xNull 대조군 항체(GCDB381)를 이용하는 대표적인 생물정보학 결합 곡선 외삽.
도 28a 및 도 28b. BCMA-GPRC5D-이중-양성 및 BCMA-GPRC5D-이중-음성 세포주의 BGCB491-매개 (도 28a) 세포 세포독성 및 (도 28b) T 세포 활성화. 6명의 건강한 공여자(공여자 ID: 20063323, 20063309, 20062062, 20063310, 20062105, 및 20061963)로부터의 pan T 세포 및 Fc 차단제(2 mg/mL)의 존재 하에 BGCB491, BCMAxGPRC5DxNull, 및 CD3xNullxNull을 다양한 농도(0.00005 내지 533.33 nM, X 축)로 첨가하고 72 시간 동안 인큐베이션하였다. 3:1의 최적 E:T 비를 이들 연구에서 시험하였다(E:T 비 평가에 대해서는 도 33a 및 도 33b를 참조한다). 별도의 4PL 모델을 관찰된 데이터에 피팅함으로써 Prism 8을 사용하여 플롯을 생성하였다. 생성된 피팅 곡선을 따라 데이터 점들이 조밀하게 정렬되었고 T 세포 공여자들 사이에서 가변성이 거의 관찰되지 않았다(6명의 공여자 평균이 플롯팅됨). 도 28a에서, 표적 세포 사멸을 측정하고 Y 축 상에 퍼센트 세포독성으로서 표현하였다. 도 28b에서, T 세포 활성화를 퍼센트 CD25+CD3+ T 세포로서 측정하였다.
도 29. BGCB491-매개 H929 CRISPR KO 클론 세포 세포독성 및 T 세포 활성화. 4명의 건강한 공여자(공여자 ID: 20063323, 20063309, 20062062, 및 20063310)로부터의 pan T 세포 및 Fc 차단제(2 mg/mL)의 존재 하에 BGCB491, BCMAxGPRC5DxNull, 및 CD3xNullxNull을 다양한 농도(0.00005 내지 533.33 nM, X 축)로 첨가하고 72 시간 동안 인큐베이션하였다. 3:1의 E:T 비를이들 연구에서 시험하였다. 별도의 4PL 모델을 관찰된 데이터에 피팅함으로써 Prism 8을 사용하여 플롯을 생성하였다. 생성된 피팅 곡선을 따라 데이터 점들이 조밀하게 정렬되었고 T 세포 공여자들 사이에서 가변성이 거의 관찰되지 않았다(4명의 공여자 평균이 플롯팅됨). 표적 세포 사멸을 측정하고 퍼센트 세포독성으로서 상단 행에 표현하였고, 퍼센트 CD25 발현 CD3+ 양성 세포로서 측정된 T 세포 활성화는 하단 행에 나타냈다(Y 축).
도 30. H929 MM 세포로 스파이킹된 전혈에서의 BGCB491-매개 표적 세포 세포독성(MABEL 검정). MABEL, 최소 예상 생물학적 효과 수준(minimum anticipated biological effect level) BGCB491, BCMAxGPRC5DxNull, 및 CD3xNullxNull을 다양한 농도(0.00005 내지 533.33 nM, X 축)로 7명의 건강한 공여자(공여자 ID: 10145, 10403, 10420, 10083, 10463, 10493, 및 10145; T 세포 공급원)로부터의 전혈에 H929 표적 골수종 세포의 존재 하에 5:1의 조정된 E:T 비로 48 시간 동안 첨가하였다. 별도의 4PL 모델을 관찰된 데이터에 피팅함으로써 Prism 8을 사용하여 플롯을 생성하였다. 생성된 피팅 곡선을 따라 데이터 점들이 조밀하게 정렬되었고 T 세포 공여자들 사이에서 가변성이 거의 관찰되지 않았다(7명의 공여자 평균이 플롯팅됨). 표적 세포 사멸을 측정하고 퍼센트 세포독성으로서 표현하였고, T 세포 활성화는 퍼센트 CD25+CD3+ 세포로서 측정되었다. 이 실험에서 테클리스타맙 및 탈쿠에타맙을 양성 대조군으로서 시험하였다.
도 31. MABEL 검정으로부터의 BGCB491의 사이토카인 프로파일. MSD, Meso Scale Discovery. BGCB491, BCMAxGPRC5DxNull, 및 CD3xNullxNull을 다양한 농도(0.00005 내지 533.33 nM, X 축)로 3명의 건강한 공여자로부터의 전혈에 첨가하였다. 상기 세포독성 실험으로부터의 H929 세포 상청액(도 7; 3명의 T 세포 공여자; 공여자 ID: 10083, 10463, 및 10493)을 수집하고, MSD-기반 멀티플렉스 검정(Cat #: K15049D)을 사용하여 사이토카인 수준에 대해 분석하였다. 사이토카인 수준은 pg/mL로서 측정하였다. 별도의 4PL 모델을 관찰된 데이터에 피팅함으로써 Prism 8을 사용하여 플롯을 생성하였다. 생성된 피팅 곡선을 따라 데이터 점들이 조밀하게 정렬되었고 T 세포 공여자들 사이에서 가변성이 거의 관찰되지 않았다(3명의 공여자 평균이 플롯팅됨). 이 실험에서 테클리스타맙 및 탈쿠에타맙을 양성 대조군으로서 시험하였다.
도 32. 인간 1차 MM CD138+ 세포에 대한 BGCB491의 세포독성 효력. MNC, 단핵 세포. 4명의 상이한 골수종 환자로부터의 냉동 골수-유래 단핵 세포(MM BM MNC-626, 649, 652, 및 653)를 사용하여 BGCB491 형질 세포 고갈(상단 행) 및 T 세포 활성화(하단 행) 잠재력을 평가하였다. 정상적인 건강한 공여자(공여자 ID: 20063309)로부터의 T 세포를 환자 BM MNC 샘플에 외인성으로 첨가하고(1:1의 E:T 비) BGCB491, CD3xNullxNull, 테클리스타맙, 또는 탈쿠에타맙(0.00005 내지 533.33 nM, X 축)과 함께 48 시간 동안 인큐베이션하였다. BGCB491 치료에 반응한 T 세포 상의 CD25의 동시 상향조절 및 생존 형질 세포(CD138+)의 손실이 관찰된다. 공여자들 사이에서 총 초기 형질 세포 카운트의 가변성이 관찰되었다. 개별 표적 수용체 밀도 값 및 백분율 표적-양성 집단이 열거되어 있다.
도 33a 및 도 33b. 다양한 E:T 비 및 인큐베이션 시간에서의 BGCB491 세포독성 잠재력(H929 세포주). (도 33a) BGCB491, BCMAxGPRC5DxNull, 및 CD3xNullxNull을 1명의 건강한 공여자(공여자 ID: 20063323)로부터의 pan T 세포의 존재 하에 4가지의 상이한 E:T 비(5:1, 3:1, 1:1, 및 0.5:1)로 72 시간 동안 시험하였다. (도 33b) BGCB491을 3:1 및 1:1의 E:T 비로 4명의 상이한 T 세포 공여자(공여자 ID: 20062105, 20063309, 20061963, 및 20063310)를 사용하여 다양한 시점(24 시간-원, 48 시간-상향 삼각형, 72 시간-하향 삼각형, 96 시간-육각형, 120 시간-다이아몬드, 144 시간-스타, 및 168 시간-정사각형)에 대해 시험하였다. 표적 세포 사멸 및 T 세포 활성화를 측정하고 퍼센트 세포독성 및 퍼센트 CD25+CD3+ T 세포로서 표현하였다. 별도의 4PL 모델을 관찰된 데이터에 피팅함으로써 Prism 8을 사용하여 플롯을 생성하였다. 생성된 피팅 곡선을 따라 데이터 점들이 조밀하게 정렬되었고 T 세포 공여자들 사이에서 가변성이 거의 관찰되지 않았다: (도 33a) 1명 및 (도 33b) 4명의 공여자 평균이 플롯팅됨.
도 34a 내지 도 34c. 표적 세포의 부재 하의 T 세포 활성화에 대한 BGCB491 효과. T 세포 활성화 검정은 (도 34a) 6명의 정상적인 건강한 공여자 T 세포(공여자 ID: 20063323, 20063309, 20062062, 20063310, 20062105, 및 20061963) 또는 (도 34b) 6명의 정상적인 공여자 전혈 샘플(공여체 ID: 10274, 10402, 10427, 10470, 10500, 및 10509)을 사용하여 수행하였다. (도 34c) 다양한 서브세트에 대해 비-특이적 세포독성을 측정하였다. BGCB491, BCMAxGPRC5DxNull, 및 CD3xNullxNull을 (도 34a) 72 시간 및 (도 34b, 34c) 48 시간에 대해 다양한 농도(0.00005 내지 533.33 nM, X 축)로 첨가하였다.
도 35. T 세포-인간화 NSG 마우스에서 피하(SC) RPMI 8226 이종이식편에서의 BGCB491, 테클리스타맙, 및 탈쿠에타맙의 항종양 효능(연구 A). KO, 녹아웃; NSG, 비-비만 당뇨병(NOD) 중증 복합 면역결핍(scid) 감마 또는 NNOD.Cg Prkdc scid Il2rg tm1Wjl /SzJ; PBS, 인산염-완충 식염수; SEM: 평균의 표준 오차. 확립된 SC RPMI 8226 종양을 보유하는 T 세포-인간화 NSG 마우스에 BGCB491을 0.1, 0.4, 1, 및 2.5 mg/kg으로 복강내(IP) 투여하였다. 테클리스타맙은 0.4, 1, 및 2.5 mg/kg으로 IP 투여하였다. 탈쿠에타맙은 2.5 mg/kg으로 IP 투여하였다. 처리는 제19일, 제21일, 제25일, 제28일, 제31일, 제34일, 제38일, 및 제41일에 투여하였다(X축 아래에서 흑색 선에 의해 표시됨). 종양 부피를 매주 2회 측정하였으며, 결과는 각각의 군에 대해 평균 종양 부피 ± SEM으로서 제시되었다. 동물의 70% 이상이 연구에 잔류하는 각각의 군에 대해 데이터를 그래프로 제시하였다.
도 36. T 세포-인간화 NSG 마우스에서 피하(SC) H929-BCMA-KO 및 H929-GPRC5D-KO 이종이식편에서의 BGCB491, 테클리스타맙, 및 탈쿠에타맙의 항종양 효능(연구 B). KO, 녹아웃; NSG, 비-비만 당뇨병(NOD) 중증 복합 면역결핍(scid) 감마 또는 NNOD.Cg Prkdc scid Il2rg tm1Wjl /SzJ; PBS, 인산염-완충 식염수; SEM: 평균의 표준 오차. H929-BCMA-KO(좌측 옆구리) 및 H929-GPRC5D-KO(우측 옆구리) 종양을 보유하는 T 세포 인간화 NSG 마우스에 BGCB491을 0.025, 0.1, 0.25, 및 0.5 mg/kg으로 복강내(IP) 투여하였다. 테클리스타맙 및 탈쿠에타맙은 0.1 및 0.25 mg/kg으로 IP 투여하였다. 처리는 제1일, 제5일, 제9일, 제13일, 제16일, 제19일, 및 제22일에 투여하였다(X축 아래에서 흑색 선에 의해 표시됨). 종양 부피를 매주 2회 측정하였으며, 결과는 각각의 군에 대해 평균 종양 부피 ± SEM으로서 제시되었다. 동물의 70% 이상이 연구에 잔류하는 각각의 군에 대해 데이터를 그래프로 제시하였다.
도 37 및 도 38. 자성 사이노몰거스 원숭이에서 단일 정맥내(IV) 0.5 mg/kg 용량 후의 개별 BGCB491 혈청 농도 ― 시간 프로파일(도 37) 및 예측 모델(도 38). BQL, 정량 한계 미만; 최저 정량화가능한 농도 미만의 농도를 갖는 데이터 점은 그래프에 나타내지 않는다.
도 39a 및 도 39b. 웅성 미니돼지에서의 BGCB491의 단일 용량 후의 평균(SD) BGCB491 농도 ― 시간 프로파일 및 모델 예측. BQL, 정량 한계 미만; SD, 표준 편차. 최저 정량화가능한 농도 미만의 농도를 갖는 데이터 점은 그래프에 나타내지 않는다. 군 1: 용량 = 0.01 mg/kg, 피하(SC) 투여. 군 2: 용량 = 0.1 mg/kg, SC. 군 3: 용량 = 0.1 mg/kg, IV.
도 40. 24 시간 37℃ 인큐베이션 전체에 걸쳐 H929 WT 및 MM.1R WT 세포주 상의 BGCB463의 동력학적 결합 프로파일. MFI: 평균 형광 강도.
도 41. 내인성 BCMA-GPRC5D-발현 세포주에 대한 BGCB491 결합. Geo, 기하. BGCB491, BCMAxGPRC5DxNull, 및 CD3xNullxNull을 다양한 농도(0.096 내지 1,000 nM, X 축)로 첨가하고 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 별도의 4PL 모델을 관찰된 데이터에 피팅함으로써 Prism 8을 사용하여 플롯을 생성하였다. 기하 평균으로 표현된 결합 강도(Y 축).
도 42. (도 42a) 1:1 및 (도 42b) 1:3의 E:T 비로 3명의 T-세포 공여자로부터의 T 세포를 사용하는 BGCB491 및 CD3B2271(null 대조군)의 동력학적 세포독성 및 T-세포 활성화. Incucyte 상의 CD25 측정값은 T 세포 카운트 및 CD25 발현(총 적분 강도)의 척도이다. CD25는, 전형적으로 활성화 후 24 시간에 검출가능하고 약 96 시간에 피크를 이루는, T 세포 활성화의 후기 마커이다. 그것은 타이밍과 관련하여 세포독성과 반드시 일치하는 것은 아니다. 처리된 웰 대 미처리 웰에서의 녹색 형광 단백질(GFP) 신호에 기초하여 퍼센트 세포용해를 계산하였다.
도 43. 1:1의 이펙터-대-표적(E:T) 비로 72-, 93-, 및120-시간 시점에서의 BGCB491 및 CD3B2271(null 대조군)의 퍼센트 세포용해 및 T-세포 활성화.
도 44. 1:3의 E:T 비로 72-, 93-, 및120-시간 시점에서의 BGCB491 및 CD3B2271(null 대조군)의 퍼센트 세포용해 및 T-세포 활성화.
도 45. T 세포-인간화 NSG 마우스에서 피하 MM.1S 이종이식편에서의 JNJ-79635322, 테클리스타맙, 및 탈쿠에타맙의 항종양 효능(연구 C). NSG, 비-비만 당뇨병(NOD) 중증 복합 면역결핍(scid) 감마 또는 NOD.Cg-Prkdc scid Il2rg tm1Wjl /SzJ; PBS, 인산염-완충 식염수; SEM: 평균의 표준 오차. 확립된 SC MM.1S 종양을 보유하는 T 세포-인간화 NSG 마우스에 BGCB491을 0.025, 0.1, 0.5, 및 1 mg/kg으로 IP 투여하였다. 탈쿠에타맙은 0.025 및 0.1 mg/kg으로 IP 투여하였다. 테클리스타맙은 0.1 및 0.5 mg/kg으로 IP 투여되었고, 처리는 제15일, 제19일, 제22일, 제26일, 제30일, 제34일, 및 제37일에 투여하였다(X축 아래에서 흑색 선에 의해 표시됨). 종양 부피를 매주 2회 측정하였으며, 결과는 각각의 군에 대해 평균 종양 부피 ± SEM으로서 제시되었다. 동물의 70% 이상이 연구에 잔류하는 각각의 군에 대해 데이터를 그래프로 제시하였다. 치료 후에 이식편-대-숙주 질환(GvHD)-관련 이환의 징후가 나타날 때까지 동물을 모니터링하였으며, 이 시점에 동물을 안락사시켰고 연구는 제51일에 결론을 내렸다.
도 46a 및 도 46b. 선도 BCMA(BCMB519)는 이상적인 scFv 생물물리학적 특성을 갖는 테클리스타맙과 유사한 결합 및 세포독성을 입증한다.
도 47. 선도 GPRC5d(GC5B680)는 이상적인 scFv 생물물리학적 특성을 갖는 탈쿠에타맙과 비교하여 특이적이고 개선된 결합을 입증한다.
도 2a 내지 도 2d. BGCB463(원) 또는 음성 대조군 B23B251(삼각형)을 모두 1 시간 동안 37℃에서 2 μM의 시작 농도로 H929 야생형(WT)(도 2a), H929-GPRC5D 녹아웃(KO)(도 2b), H929-BCMA KO(도 2c), 및 H929-GPRC5D/BCMA KO(도2d) 세포와 함께 인큐베이션하였다. AF647-표지화된 재료를 이용한 2차 검출 후에, MFI 신호를 분석하여 EC50 및 EC90을 생성하였다. 곡선은 5회의 독립적인 실험을 대표한다. EC50 또는 EC90 값은 이들의 평균이다.
도 3a 내지 도 3d. BGCB463(원) 또는 음성 대조군 B23B251(삼각형)을 모두 1 시간 동안 37℃에서 2 μM의 시작 농도로 MM.1R WT(도 3a), MM.1R -GPRC5D KO(도 3b), MM.1R -BCMA KO(도 3c), 및 MM.1R -GPRC5D/BCMA KO(도 3d) 세포와 함께 인큐베이션하였다. AF647-표지화된 재료를 이용한 2차 검출 후에, MFI 신호를 분석하여 EC50 및 EC90을 생성하였다. 곡선은 5회의 독립적인 실험을 대표한다.
도 4a 내지 도 4c. BGCB463(원) 또는 음성 대조군 B23B251(삼각형)을 모두 1 시간 동안 37℃에서 2 μM의 시작 농도로 Pan T 세포(3명의 무작위 공여자, 도 4a 내지 도 4c)와 함께 인큐베이션하였다. AF647-표지화된 재료를 이용한 2차 검출 후에, MFI 신호를 분석하여 EC50 및 EC90을 생성하였다. 데이터는 2회의 개별 전개(둘 모두 3명의 공여자를 가짐)를 대표한다.
도 5a 내지 도 5c. BGCB463을 1 시간 동안 4℃(원) 또는 37℃(삼각형)에서 2 μM의 시작 농도로 Pan T 세포(3명의 무작위 공여자, 도 5a, 도 5b, 및 도 5c)와 함께 인큐베이션하였다. AF647-표지화된 재료를 이용한 2차 검출 후에, MFI 신호를 분석하여 EC50을 생성하였다.
도 6a 내지 도 6c. BGCB463.003(원), BGCB463.004(정사각형), 및 음성 대조군 B23B251(삼각형)을 H929(도 6a), MM.1R(도 6b), 및 3명의 공여자로부터의 Pan T(도 6c) 세포로 시험하였다. 37℃에서 1 시간 동안 2 μM의 시작 농도로 분자를 인큐베이션하였다. AF647-표지화된 재료를 이용한 2차 검출 후에, MFI 신호를 분석하였다.
도 7a 내지 도 7d. H929(도 7a), H929-GPRC5D KO(도 7b), H929-BCMA KO(도 7c), 및 H929-GPRC5D/BCMA KO(도 7d) 세포를 모두 1 시간, 3 시간, 5 시간, 및 24 시간 동안 BGCB463의 3가지 최적화된 농도로 37℃에서 인큐베이션하였다. 이어서 세포를 세척하고, AF647-항-인간 IgG와 함께 얼음 상에서 30 분 동안 인큐베이션하였다. 판독은 AF647 신호의 MFI이다.
도 8a 내지 도 8d. MM.1R WT(도 8a), MM.1R -GPRC5D KO(도 8b), MM.1R -BCMA KO(도 8c), 및 MM.1R -GPRC5D/BCMA KO(도 8d) 세포를 모두 1 시간, 3 시간, 5 시간, 및 24 시간 동안 BGCB463의 3가지 최적화된 농도로 37℃에서 인큐베이션하였다. 이어서 세포를 세척하고, AF647-항-인간 IgG와 함께 얼음 상에서 30 분 동안 인큐베이션하였다. 판독은 AF647 신호의 MFI이다.
도 9a 내지 도 9e. BGCB463(원) 또는 음성 대조군 B23B251(삼각형)을 모두 1 시간 동안 37℃에서 2 μM의 시작 농도로 인간 GPRC5D(도 9a), 인간 BCMA(도 9b), 사이노몰거스 GPRC5D(도 9c), 또는 사이노몰거스 BCMA(도 9d)를 발현하는 K562 세포와 함께 인큐베이션하였다. AF647-항-인간 IgG를 이용한 2차 검출 후에, MFI 신호를 분석하여 EC50 및 EC90을 생성하였다(도 9e). 데이터는 두 개의 독립적인 실험을 나타낸다.
도 10a 및 도 10b. BGCB463(원) 또는 음성 대조군 B23B251(삼각형)을 10 nM의 시작 농도에서 인간 또는 사이노몰거스 GPRC5D를 발현하는 K562 세포와 함께 인큐베이션하였다(또는 표적 세포로서 인간/사이노몰거스 BCMA를 발현하는 K562의 경우에 100 nM). 도 10a에서의 인간 활성화 및 세포독성. 도 10b에서의 사이노몰거스 활성화 및 세포독성. 인간 Pan T 세포(1명의 공여자)를 3:1의 이펙터 대 표적(E:T) 비로 첨가하고 37℃에서 72 시간 동안 인큐베이션하였다. live/dead 고정가능한 염료를 사용하여 세포독성을 결정하고, BV421-접합된 항-CD25를 사용하여 CD25를 측정하였다.
도 11. H929 세포를 증가하는 농도의 BGCB463 또는 음성 대조군 B23B251과 함께 1 시간 동안 37℃에서 배지(10% FBS를 함유하는 RPMI) 또는 90% 인간 혈청을 함유하는 RPMI의 존재 하에 AF647- 항-인간 IgG와 함께 인큐베이션하였다. BGCB463 결합은 혈청의 존재에 의해 영향을 받지 않는다.
도 12. T 세포를 증가하는 농도의 BGCB463 또는 음성 대조군 B23B251과 함께 1 시간 동안 37℃에서 배지(10% FBS를 함유하는 RPMI) 또는 90% 인간 혈청을 함유하는 RPMI의 존재 하에 AF647-항-인간 IgG와 함께 인큐베이션하였다. 데이터는 2회 실험에서 시험된 3명의 공여자를 대표한다. BGCB463 결합은 혈청의 존재에 의해 영향을 받지 않는다.
도 13a 및 도 13b. H929-GFP 세포를 BGCB463 및 3명의 공여자로부터의 인간 Pan T 세포와 함께 3:1의 E:T 비로T 세포 활성화를 추적하기 위해 첨가된 항-CD25-AF647과 함께 인큐베이션하였다(도 13a). 처리된 웰 대 미처리 웰에서의 GFP 신호에 기초하여 퍼센트 세포용해를 계산하였다(도 13b). 인큐베이션은 약 140 시간 지속되었으며 이미지는 3 시간마다 획득되었다.
도 14a 내지 도 14f. H929-GFP 세포를 BGCB463 또는 B23B251(동종형 대조군) 분자 및 4명의 공여자로부터의 인간 Pan T 세포와 함께 1:1 및 5:1의 E:T 비로T 세포 활성화를 추적하기 위해 첨가된 항-CD25-AF647과 함께 인큐베이션하였다. 처리된 웰 대 미처리 웰에서의 GFP 신호에 기초하여 퍼센트 세포용해를 계산하였다. 인큐베이션은 약 140 시간 지속되었으며 이미지는 3 시간마다 획득되었다. BGCB463, 1:1 비, 세포용해(도 14a). BGCB463, 1:1 비, 총 적분 강도(도 14b). BGCB463, 5:1 비, 세포용해(도 14c). BGCB463, 5:1 비, 총 적분 강도(도 14d). B23B251, 5:1 비, 세포용해(도 14e). B23B251, 5:1 비, 총 적분 강도(도 14f).
도 15a 내지 도 15d. 환자 혈청을 사용하는 가용성 BCMA 간섭의 결정. 공여자 1(도 15a); 공여자 2(도 15b); 공여자 3(도 15c); 및 정상 혈청(도 15d). 알려진 수준의 sBCMA를 갖는 환자 혈청을 직접 표지화된 BGCB463-AF647 및 B23B251-AF647 동종형 대조군과 함께 H929 세포 상에서 37℃에서 1 시간 동안 인큐베이션하였다(90% 혈청 내지 10% 배지). 50% 및 10% 환자 혈청을 각각 50% 및 10%의 최종 농도로 정상 혈청으로 희석하였다.
도 16. BGCB491 삼중특이적 항체의 도시.
도 17a 및 도 17b. BGCB463, BGCB491, 및 3개의 대조군(BGCB482(CD3xNullxNull), BGCB483(CD3xNullxBCMA), BGCB484(CD3xGPRC5DxNull))을 BCMA+ GPRC5D+ 세포(도 17a) 및 BCMA- GPRC5D- 세포(도 17b)에 대해 시험하였다. 3:1의 이펙터 대 표적(E:T) 비; n=1 T-세포 공여자, 72 시간 인큐베이션, 최고 농도 53 nM, 1 내지 5 희석. 세포독성 및 T-세포 활성화 둘 모두에 대해 시험을 수행하였다.
도 18a 및 도 18b. BGCB463 및 BGCB491은 1차 인큐베이션 후 72 및 96 시간 둘 모두에 H929 WT, GPRC5D KO, 및 BCMA KO 세포주를 고갈시켰다(도 18a). E:T 비는 3:1이었음, n=5 T-세포 공여자; 72(5) 및 96(4) 시간 인큐베이션; 최고 농도 532 mM, 1 내지 5 희석 구배. 둘 모두의 항체가 상기와 동일한 H929 WT, GPRC5D KO, 및 BCMA KO 세포에서 72 및 96 시간 둘 모두에 증가된 T-세포 활성화를 나타낸다(도 18b).
도 19. 세포독성 및 T-세포 활성화 검정에서 H929, RAMOS, 및 GRANTA-519 세포주로 BGCB463 및 BGCB491을 시험하였다. E:T는 5:1 이었음, n=1 T-세포 공여자; 72 시간 인큐베이션 단독; 53 nM의 최고 농도; 및 1 내지 5 희석.
도 20. 세포독성 및 T-세포 활성화 전혈 검정에서 H292 세포로 BGCB463 및 BGCB491을 시험하였다. E:T는 5:1이었음, n=2 전혈 공여자; 48 시간 인큐베이션; 532 nM의 최고 농도; 및 1 내지 5 희석.
도 21a 및 도 21b. BGCB463은 충분히 높은 하기 용량으로 주어진 경우에 MM.1S 및 RPMI 8226 이종이식 마우스 모델에서 종양 성장을 퇴행시키는 것으로 나타났다: MM.1S 모델에서 2 ug 또는 10 ug(도 21a) 또는 RPMI 8226 모델에서 5 ug 또는 10 ug(도 21b).
도 22. BGCB463 및 BGCB491은 H929 예방적 이종이식 마우스 모델에서 종양 성장을 퇴행시키는 것으로 나타났다. PBS 대조군과 비교하여, 0.5 ug 및 5 ug 용량 둘 모두는 H929-BCMA KO 및 H929-GPRC5D KO 모델 둘 모두에서 종양 성장을 지연시켰으며, 더 높은 5 ug 농도는 더 많은 효과를 나타냈다.
도 23. BGCB463 및 BGCB491을 1 시간, 37℃ DRC Pan-T 결합 검정에서 시험하였다. 2명의 인간 Pan-T 세포 공여자를 사용하였고, 시험 분자는 1:3 희석 및 11점 DRC로 2 uM 시작 농도를 가졌다.
도 24a 내지 도 24d. BGCB463, BGCB491, 및 null 대조군을 H929 WT(도 24a), H929-BCMA KO(도 24b), H929-GPRC5D KO(도 24c), 및 H929-BCMA/GPRC5D 이중 KO(도 24d) 세포에 대해 1 시간, 37℃ DRC 스위트 결합 검정에서 시험하였다.
도 25. 1 시간 37℃ 인큐베이션 후 H929 WT, H929-BCMA KO 세포, H929-GPRC5D KO 세포, 및/또는 H929-BCMA/GPRC5D 이중 KO 세포에 대한 BGCB491의 대표적인 결합 프로파일. BGCB491은
도 26. 37℃에서 1 시간 인큐베이션 후에 7명의 공여자 세포 제제에 대한 BGCB491의 1차 T 세포 결합 프로파일. MFI: 평균 형광 강도.
도 27. CD3B376xNull 대조군 항체(GCDB381)를 이용하는 대표적인 생물정보학 결합 곡선 외삽.
도 28a 및 도 28b. BCMA-GPRC5D-이중-양성 및 BCMA-GPRC5D-이중-음성 세포주의 BGCB491-매개 (도 28a) 세포 세포독성 및 (도 28b) T 세포 활성화. 6명의 건강한 공여자(공여자 ID: 20063323, 20063309, 20062062, 20063310, 20062105, 및 20061963)로부터의 pan T 세포 및 Fc 차단제(2 mg/mL)의 존재 하에 BGCB491, BCMAxGPRC5DxNull, 및 CD3xNullxNull을 다양한 농도(0.00005 내지 533.33 nM, X 축)로 첨가하고 72 시간 동안 인큐베이션하였다. 3:1의 최적 E:T 비를 이들 연구에서 시험하였다(E:T 비 평가에 대해서는 도 33a 및 도 33b를 참조한다). 별도의 4PL 모델을 관찰된 데이터에 피팅함으로써 Prism 8을 사용하여 플롯을 생성하였다. 생성된 피팅 곡선을 따라 데이터 점들이 조밀하게 정렬되었고 T 세포 공여자들 사이에서 가변성이 거의 관찰되지 않았다(6명의 공여자 평균이 플롯팅됨). 도 28a에서, 표적 세포 사멸을 측정하고 Y 축 상에 퍼센트 세포독성으로서 표현하였다. 도 28b에서, T 세포 활성화를 퍼센트 CD25+CD3+ T 세포로서 측정하였다.
도 29. BGCB491-매개 H929 CRISPR KO 클론 세포 세포독성 및 T 세포 활성화. 4명의 건강한 공여자(공여자 ID: 20063323, 20063309, 20062062, 및 20063310)로부터의 pan T 세포 및 Fc 차단제(2 mg/mL)의 존재 하에 BGCB491, BCMAxGPRC5DxNull, 및 CD3xNullxNull을 다양한 농도(0.00005 내지 533.33 nM, X 축)로 첨가하고 72 시간 동안 인큐베이션하였다. 3:1의 E:T 비를이들 연구에서 시험하였다. 별도의 4PL 모델을 관찰된 데이터에 피팅함으로써 Prism 8을 사용하여 플롯을 생성하였다. 생성된 피팅 곡선을 따라 데이터 점들이 조밀하게 정렬되었고 T 세포 공여자들 사이에서 가변성이 거의 관찰되지 않았다(4명의 공여자 평균이 플롯팅됨). 표적 세포 사멸을 측정하고 퍼센트 세포독성으로서 상단 행에 표현하였고, 퍼센트 CD25 발현 CD3+ 양성 세포로서 측정된 T 세포 활성화는 하단 행에 나타냈다(Y 축).
도 30. H929 MM 세포로 스파이킹된 전혈에서의 BGCB491-매개 표적 세포 세포독성(MABEL 검정). MABEL, 최소 예상 생물학적 효과 수준(minimum anticipated biological effect level) BGCB491, BCMAxGPRC5DxNull, 및 CD3xNullxNull을 다양한 농도(0.00005 내지 533.33 nM, X 축)로 7명의 건강한 공여자(공여자 ID: 10145, 10403, 10420, 10083, 10463, 10493, 및 10145; T 세포 공급원)로부터의 전혈에 H929 표적 골수종 세포의 존재 하에 5:1의 조정된 E:T 비로 48 시간 동안 첨가하였다. 별도의 4PL 모델을 관찰된 데이터에 피팅함으로써 Prism 8을 사용하여 플롯을 생성하였다. 생성된 피팅 곡선을 따라 데이터 점들이 조밀하게 정렬되었고 T 세포 공여자들 사이에서 가변성이 거의 관찰되지 않았다(7명의 공여자 평균이 플롯팅됨). 표적 세포 사멸을 측정하고 퍼센트 세포독성으로서 표현하였고, T 세포 활성화는 퍼센트 CD25+CD3+ 세포로서 측정되었다. 이 실험에서 테클리스타맙 및 탈쿠에타맙을 양성 대조군으로서 시험하였다.
도 31. MABEL 검정으로부터의 BGCB491의 사이토카인 프로파일. MSD, Meso Scale Discovery. BGCB491, BCMAxGPRC5DxNull, 및 CD3xNullxNull을 다양한 농도(0.00005 내지 533.33 nM, X 축)로 3명의 건강한 공여자로부터의 전혈에 첨가하였다. 상기 세포독성 실험으로부터의 H929 세포 상청액(도 7; 3명의 T 세포 공여자; 공여자 ID: 10083, 10463, 및 10493)을 수집하고, MSD-기반 멀티플렉스 검정(Cat #: K15049D)을 사용하여 사이토카인 수준에 대해 분석하였다. 사이토카인 수준은 pg/mL로서 측정하였다. 별도의 4PL 모델을 관찰된 데이터에 피팅함으로써 Prism 8을 사용하여 플롯을 생성하였다. 생성된 피팅 곡선을 따라 데이터 점들이 조밀하게 정렬되었고 T 세포 공여자들 사이에서 가변성이 거의 관찰되지 않았다(3명의 공여자 평균이 플롯팅됨). 이 실험에서 테클리스타맙 및 탈쿠에타맙을 양성 대조군으로서 시험하였다.
도 32. 인간 1차 MM CD138+ 세포에 대한 BGCB491의 세포독성 효력. MNC, 단핵 세포. 4명의 상이한 골수종 환자로부터의 냉동 골수-유래 단핵 세포(MM BM MNC-626, 649, 652, 및 653)를 사용하여 BGCB491 형질 세포 고갈(상단 행) 및 T 세포 활성화(하단 행) 잠재력을 평가하였다. 정상적인 건강한 공여자(공여자 ID: 20063309)로부터의 T 세포를 환자 BM MNC 샘플에 외인성으로 첨가하고(1:1의 E:T 비) BGCB491, CD3xNullxNull, 테클리스타맙, 또는 탈쿠에타맙(0.00005 내지 533.33 nM, X 축)과 함께 48 시간 동안 인큐베이션하였다. BGCB491 치료에 반응한 T 세포 상의 CD25의 동시 상향조절 및 생존 형질 세포(CD138+)의 손실이 관찰된다. 공여자들 사이에서 총 초기 형질 세포 카운트의 가변성이 관찰되었다. 개별 표적 수용체 밀도 값 및 백분율 표적-양성 집단이 열거되어 있다.
도 33a 및 도 33b. 다양한 E:T 비 및 인큐베이션 시간에서의 BGCB491 세포독성 잠재력(H929 세포주). (도 33a) BGCB491, BCMAxGPRC5DxNull, 및 CD3xNullxNull을 1명의 건강한 공여자(공여자 ID: 20063323)로부터의 pan T 세포의 존재 하에 4가지의 상이한 E:T 비(5:1, 3:1, 1:1, 및 0.5:1)로 72 시간 동안 시험하였다. (도 33b) BGCB491을 3:1 및 1:1의 E:T 비로 4명의 상이한 T 세포 공여자(공여자 ID: 20062105, 20063309, 20061963, 및 20063310)를 사용하여 다양한 시점(24 시간-원, 48 시간-상향 삼각형, 72 시간-하향 삼각형, 96 시간-육각형, 120 시간-다이아몬드, 144 시간-스타, 및 168 시간-정사각형)에 대해 시험하였다. 표적 세포 사멸 및 T 세포 활성화를 측정하고 퍼센트 세포독성 및 퍼센트 CD25+CD3+ T 세포로서 표현하였다. 별도의 4PL 모델을 관찰된 데이터에 피팅함으로써 Prism 8을 사용하여 플롯을 생성하였다. 생성된 피팅 곡선을 따라 데이터 점들이 조밀하게 정렬되었고 T 세포 공여자들 사이에서 가변성이 거의 관찰되지 않았다: (도 33a) 1명 및 (도 33b) 4명의 공여자 평균이 플롯팅됨.
도 34a 내지 도 34c. 표적 세포의 부재 하의 T 세포 활성화에 대한 BGCB491 효과. T 세포 활성화 검정은 (도 34a) 6명의 정상적인 건강한 공여자 T 세포(공여자 ID: 20063323, 20063309, 20062062, 20063310, 20062105, 및 20061963) 또는 (도 34b) 6명의 정상적인 공여자 전혈 샘플(공여체 ID: 10274, 10402, 10427, 10470, 10500, 및 10509)을 사용하여 수행하였다. (도 34c) 다양한 서브세트에 대해 비-특이적 세포독성을 측정하였다. BGCB491, BCMAxGPRC5DxNull, 및 CD3xNullxNull을 (도 34a) 72 시간 및 (도 34b, 34c) 48 시간에 대해 다양한 농도(0.00005 내지 533.33 nM, X 축)로 첨가하였다.
도 35. T 세포-인간화 NSG 마우스에서 피하(SC) RPMI 8226 이종이식편에서의 BGCB491, 테클리스타맙, 및 탈쿠에타맙의 항종양 효능(연구 A). KO, 녹아웃; NSG, 비-비만 당뇨병(NOD) 중증 복합 면역결핍(scid) 감마 또는 NNOD.Cg Prkdc scid Il2rg tm1Wjl /SzJ; PBS, 인산염-완충 식염수; SEM: 평균의 표준 오차. 확립된 SC RPMI 8226 종양을 보유하는 T 세포-인간화 NSG 마우스에 BGCB491을 0.1, 0.4, 1, 및 2.5 mg/kg으로 복강내(IP) 투여하였다. 테클리스타맙은 0.4, 1, 및 2.5 mg/kg으로 IP 투여하였다. 탈쿠에타맙은 2.5 mg/kg으로 IP 투여하였다. 처리는 제19일, 제21일, 제25일, 제28일, 제31일, 제34일, 제38일, 및 제41일에 투여하였다(X축 아래에서 흑색 선에 의해 표시됨). 종양 부피를 매주 2회 측정하였으며, 결과는 각각의 군에 대해 평균 종양 부피 ± SEM으로서 제시되었다. 동물의 70% 이상이 연구에 잔류하는 각각의 군에 대해 데이터를 그래프로 제시하였다.
도 36. T 세포-인간화 NSG 마우스에서 피하(SC) H929-BCMA-KO 및 H929-GPRC5D-KO 이종이식편에서의 BGCB491, 테클리스타맙, 및 탈쿠에타맙의 항종양 효능(연구 B). KO, 녹아웃; NSG, 비-비만 당뇨병(NOD) 중증 복합 면역결핍(scid) 감마 또는 NNOD.Cg Prkdc scid Il2rg tm1Wjl /SzJ; PBS, 인산염-완충 식염수; SEM: 평균의 표준 오차. H929-BCMA-KO(좌측 옆구리) 및 H929-GPRC5D-KO(우측 옆구리) 종양을 보유하는 T 세포 인간화 NSG 마우스에 BGCB491을 0.025, 0.1, 0.25, 및 0.5 mg/kg으로 복강내(IP) 투여하였다. 테클리스타맙 및 탈쿠에타맙은 0.1 및 0.25 mg/kg으로 IP 투여하였다. 처리는 제1일, 제5일, 제9일, 제13일, 제16일, 제19일, 및 제22일에 투여하였다(X축 아래에서 흑색 선에 의해 표시됨). 종양 부피를 매주 2회 측정하였으며, 결과는 각각의 군에 대해 평균 종양 부피 ± SEM으로서 제시되었다. 동물의 70% 이상이 연구에 잔류하는 각각의 군에 대해 데이터를 그래프로 제시하였다.
도 37 및 도 38. 자성 사이노몰거스 원숭이에서 단일 정맥내(IV) 0.5 mg/kg 용량 후의 개별 BGCB491 혈청 농도 ― 시간 프로파일(도 37) 및 예측 모델(도 38). BQL, 정량 한계 미만; 최저 정량화가능한 농도 미만의 농도를 갖는 데이터 점은 그래프에 나타내지 않는다.
도 39a 및 도 39b. 웅성 미니돼지에서의 BGCB491의 단일 용량 후의 평균(SD) BGCB491 농도 ― 시간 프로파일 및 모델 예측. BQL, 정량 한계 미만; SD, 표준 편차. 최저 정량화가능한 농도 미만의 농도를 갖는 데이터 점은 그래프에 나타내지 않는다. 군 1: 용량 = 0.01 mg/kg, 피하(SC) 투여. 군 2: 용량 = 0.1 mg/kg, SC. 군 3: 용량 = 0.1 mg/kg, IV.
도 40. 24 시간 37℃ 인큐베이션 전체에 걸쳐 H929 WT 및 MM.1R WT 세포주 상의 BGCB463의 동력학적 결합 프로파일. MFI: 평균 형광 강도.
도 41. 내인성 BCMA-GPRC5D-발현 세포주에 대한 BGCB491 결합. Geo, 기하. BGCB491, BCMAxGPRC5DxNull, 및 CD3xNullxNull을 다양한 농도(0.096 내지 1,000 nM, X 축)로 첨가하고 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 별도의 4PL 모델을 관찰된 데이터에 피팅함으로써 Prism 8을 사용하여 플롯을 생성하였다. 기하 평균으로 표현된 결합 강도(Y 축).
도 42. (도 42a) 1:1 및 (도 42b) 1:3의 E:T 비로 3명의 T-세포 공여자로부터의 T 세포를 사용하는 BGCB491 및 CD3B2271(null 대조군)의 동력학적 세포독성 및 T-세포 활성화. Incucyte 상의 CD25 측정값은 T 세포 카운트 및 CD25 발현(총 적분 강도)의 척도이다. CD25는, 전형적으로 활성화 후 24 시간에 검출가능하고 약 96 시간에 피크를 이루는, T 세포 활성화의 후기 마커이다. 그것은 타이밍과 관련하여 세포독성과 반드시 일치하는 것은 아니다. 처리된 웰 대 미처리 웰에서의 녹색 형광 단백질(GFP) 신호에 기초하여 퍼센트 세포용해를 계산하였다.
도 43. 1:1의 이펙터-대-표적(E:T) 비로 72-, 93-, 및120-시간 시점에서의 BGCB491 및 CD3B2271(null 대조군)의 퍼센트 세포용해 및 T-세포 활성화.
도 44. 1:3의 E:T 비로 72-, 93-, 및120-시간 시점에서의 BGCB491 및 CD3B2271(null 대조군)의 퍼센트 세포용해 및 T-세포 활성화.
도 45. T 세포-인간화 NSG 마우스에서 피하 MM.1S 이종이식편에서의 JNJ-79635322, 테클리스타맙, 및 탈쿠에타맙의 항종양 효능(연구 C). NSG, 비-비만 당뇨병(NOD) 중증 복합 면역결핍(scid) 감마 또는 NOD.Cg-Prkdc scid Il2rg tm1Wjl /SzJ; PBS, 인산염-완충 식염수; SEM: 평균의 표준 오차. 확립된 SC MM.1S 종양을 보유하는 T 세포-인간화 NSG 마우스에 BGCB491을 0.025, 0.1, 0.5, 및 1 mg/kg으로 IP 투여하였다. 탈쿠에타맙은 0.025 및 0.1 mg/kg으로 IP 투여하였다. 테클리스타맙은 0.1 및 0.5 mg/kg으로 IP 투여되었고, 처리는 제15일, 제19일, 제22일, 제26일, 제30일, 제34일, 및 제37일에 투여하였다(X축 아래에서 흑색 선에 의해 표시됨). 종양 부피를 매주 2회 측정하였으며, 결과는 각각의 군에 대해 평균 종양 부피 ± SEM으로서 제시되었다. 동물의 70% 이상이 연구에 잔류하는 각각의 군에 대해 데이터를 그래프로 제시하였다. 치료 후에 이식편-대-숙주 질환(GvHD)-관련 이환의 징후가 나타날 때까지 동물을 모니터링하였으며, 이 시점에 동물을 안락사시켰고 연구는 제51일에 결론을 내렸다.
도 46a 및 도 46b. 선도 BCMA(BCMB519)는 이상적인 scFv 생물물리학적 특성을 갖는 테클리스타맙과 유사한 결합 및 세포독성을 입증한다.
도 47. 선도 GPRC5d(GC5B680)는 이상적인 scFv 생물물리학적 특성을 갖는 탈쿠에타맙과 비교하여 특이적이고 개선된 결합을 입증한다.
정의
상세한 설명의 양태와 관련된 다양한 용어가 본 명세서 및 청구범위 전체에 걸쳐 사용된다. 이 같은 용어는 달리 지시되지 않는 한 당해 기술분야에서의 이의 통상적인 의미로 주어져야 한다. 기타 구체적으로 정의된 용어는 본원에 제공된 정의와 일치하는 방식으로 해석되어야 한다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에 사용된 단수형태의 표현은, 문맥상 달리 명백하게 지시되지 않는 한, 복수의 언급대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어, "세포"에 대한 언급은 2개 이상의 세포의 조합 등을 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 측정가능한 값, 예컨대 양, 시간적 지속기간 등을 지칭할 때 용어 "약"은 명시된 값으로부터 최대 ±10%의 변동을 포함하고자 하며, 이는 그러한 변동은 개시된 방법을 수행하기에 적절하기 때문이다. 달리 지시되지 않는 한, 본 명세서 및 청구범위에 사용되는 성분의 양, 특성, 예컨대 분자량, 반응 조건 등을 표현하는 모든 수는 모든 경우에 용어 "약"에 의해 수식된 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 반대로 나타내지 않는 한, 하기의 명세서 및 첨부된 청구범위에 기재된 수치 파라미터는 근사치로, 이는 본 발명에 의해 얻고자 하는 원하는 특성에 따라 변동될 수 있다. 최소한으로, 그리고 청구범위의 범주에 대한 균등론의 적용을 제한하려는 시도로서가 아니라, 각각의 수치 파라미터는 적어도 보고된 유효숫자의 개수의 관점에서 그리고 보통의 반올림 기법을 적용함으로써 해석되어야 한다.
본 발명의 넓은 범주를 나타내는 수치 범위 및 파라미터가 근사치임에도 불구하고, 구체적인 실시예에 기재된 수치들은 가능한 한 정확하게 기록하였다. 그러나, 임의의 수치 값은 본질적으로 그의 각자의 시험 측정치에서 발견되는 표준 편차로부터 필연적으로 유래하는 소정의 오차를 포함한다.
"단리된"은 생물학적 성분(예컨대, 핵산, 펩티드 또는 단백질)이, 그러한 성분이 천연 발생하는 유기체의 다른 생물학적 성분들, 즉 다른 염색체 및 염색체외 DNA 및 RNA, 및 단백질로부터 실질적으로 분리되거나, 따로 생성되거나, 또는 따로 정제되었음을 의미한다. 따라서, "단리된" 핵산, 펩티드 및 단백질은 표준 정제 방법에 의해 정제된 핵산 및 단백질을 포함한다. "단리된" 핵산, 펩티드 및 단백질은 조성물의 일부일 수 있고, 그러한 조성물이 핵산, 펩티드, 또는 단백질의 천연 환경의 일부가 아닌 경우 여전히 단리될 수 있다. 이 용어는 또한 숙주 세포에서의 재조합 발현에 의해 제조된 핵산, 펩티드 및 단백질뿐만 아니라 화학적으로 합성된 핵산도 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "단리된" 항체 또는 항원-결합 단편은 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체 또는 항원-결합 단편이 실질적으로 없는 항체 또는 항원-결합 단편을 지칭하고자 한다(예를 들어, BCMA에 특이적으로 결합하는 단리된 항체에는 BCMA 이외의 항원에 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 없다). 그러나, BCMA 또는 GPRC5D의 에피토프, 아이소형 또는 변이체에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는, 예를 들어 다른 종으로부터의 다른 관련 항원(예컨대, BCMA 또는 GPRC5D 종 상동체)에 대한 교차 반응성을 가질 수 있다.
동의어로서 "핵산 분자", "뉴클레오티드", 또는 "핵산"으로 지칭되는 "폴리뉴클레오티드"는 임의의 폴리리보뉴클레오티드 또는 폴리데옥시리보뉴클레오티드를 지칭하며, 이는 비변형된 RNA 또는 DNA 또는 변형된 RNA 또는 DNA일 수 있다. "폴리뉴클레오티드"는, 제한 없이, 단일- 및 이중-가닥 DNA, 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물인 DNA, 단일- 및 이중-가닥 RNA, 및 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물인 RNA, 단일-가닥, 또는 더 전형적으로는 이중-가닥일 수 있는 DNA 및 RNA를 포함하거나 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물을 포함하는 하이브리드 분자를 포함한다. 게다가, "폴리뉴클레오티드"는 RNA, 또는 DNA, 또는 RNA 및 DNA 둘 모두를 포함하는 삼중-가닥 영역을 지칭한다. 용어 폴리뉴클레오티드는 또한 하나 이상의 변형된 염기를 함유하는 DNA 또는 RNA, 및 안정성 또는 다른 이유로 골격이 변형된 DNA 또는 RNA를 포함한다. "변형된" 염기는, 예를 들어 트리틸화(tritylated) 염기 및 통상이 아닌 염기, 예컨대 이노신을 포함한다. DNA 및 RNA에 대해 다양한 변형이 실행될 수 있으며; 따라서, "폴리뉴클레오티드"는 천연에서 전형적으로 발견되는 바와 같은 폴리뉴클레오티드의 화학적으로, 효소적으로, 또는 대사적으로 변형된 형태뿐만 아니라, 바이러스 및 세포에 특징적인 DNA 및 RNA의 화학적 형태도 포함한다. "폴리뉴클레오티드"는 또한, 종종 올리고뉴클레오티드로 지칭되는 비교적 짧은 핵산 사슬을 포함한다.
"실질적으로 동일한"이라는 의미는 그 용어가 사용되는 문맥에 따라 상이할 수 있다. 중쇄 및 경쇄, 그리고 그들을 인코딩하는 유전자 중에서 존재할 가능성이 높은 천연 서열 변이로 인해, 본 명세서에 기재된 항체 또는 항원 결합 단편을 인코딩하는 유전자 또는 아미노산 서열 내에는 이들의 고유 결합 특성(예를 들어, 특이성 및 친화도)에 대해 거의 또는 전혀 영향을 주지 않는 약간의 변이 레벨이 발견될 것으로 예측된다. 그러한 예측은 유전자 코드의 축퇴성뿐만 아니라, 보존적 아미노산 서열 변이의 진화적 성공에도 부분적으로 기인되는데, 이들은 인코딩된 단백질의 성질을 크게 변경시키지 않는다. 따라서, 핵산 서열과 관련하여, "실질적으로 동일한"은 2개 이상의 서열들 사이의 적어도 65% 동일성을 의미한다. 바람직하게는, 이 용어는 2개 이상의 서열들 사이의 적어도 70% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 75% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 80% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 85% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 90% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 91% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 92% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 93% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 94% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 95% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 96% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 97% 동일성, 더 바람직하게는 적어도 98% 동일성, 그리고 더 바람직하게는 적어도 99% 또는 그 이상의 동일성을 지칭한다. 두 서열 사이의 % 동일성은 서열에 의해 공유되는 동일한 위치의 수의 함수(즉, % 상동성 = 동일한 위치의 수/위치의 총수 × 100)이며, 이는 두 서열의 최적 정렬을 위해 도입되어야 하는 갭(gap)의 수 및 각 갭의 길이를 고려한다. 2개의 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열 사이의 퍼센트 동일성은, 예를 들어, PAM120 가중 잔기 표, 12의 갭 길이 페널티, 및 4의 갭 페널티를 사용하는, ALIGN 프로그램(버전 2.0)에 포함된, 문헌[E. Meyers and W. Miller, Comput. Appl. Biosci 4, 11-17 (1988)]의 알고리즘을 사용하여 결정할 수 있다. 게다가, 2개의 아미노산 서열들 사이의 % 동일성은 문헌[Needleman and Wunsch, J. Mol. Biol. 48, 444-453 (1970)]의 알고리즘을 사용하여 측정될 수 있다.
단백질 기능에 대해 실질적인 영향을 주지 않고서 단백질의 아미노산 서열 내에서 일어날 수 있는 변이의 정도는 핵산 서열의 변이의 정도보다 훨씬 더 낮은데, 동일한 축퇴성 원리가 아미노산 서열에는 적용되지 않기 때문이다. 따라서, 항체 또는 항원 결합 단편과 관련하여, "실질적으로 동일한"은 기재된 항체 또는 항원 결합 단편과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 항체 또는 항원 결합 단편을 의미한다. 다른 실시 형태는, 본 명세서에 기재된 항체 및 항원-결합 단편과 유의한 동일성을 공유하지 않지만, 본 명세서에 기재된 그러한 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 결합을 부여하기 위해 필요한 하나 이상의 CDR 또는 다른 서열을 포함하는 프레임워크, 스캐폴드, 또는 다른 비-결합 영역을 갖는, 항체 또는 항원-결합 단편을 포함한다.
"클론"은 단세포 또는 공통된 조상으로부터 유사분열에 의해 유래된 세포들의 집단이다. "세포주"는 많은 세대 동안 시험관내에서 안정한 성장이 가능한 1차 세포의 클론이다. 본 명세서에 제공된 일부 예에서는, 세포를 DNA로 형질감염시킴으로써 세포가 형질전환된다.
용어 "발현하다" 및 "생성하다"는 본 명세서에서 동의어로 사용되고, 유전자 산물의 생합성을 지칭한다. 이들 용어는 RNA로의 유전자의 전사를 포함한다. 이들 용어는 또한 하나 이상의 폴리펩티드로의 RNA의 번역을 포함하고, 모든 천연 발생 전사 후 및 번역 후 변형을 추가로 포함한다. 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 발현 또는 생성은 세포의 세포질 내에서 행해지거나, 또는 세포외 환경, 예컨대 세포 배양의 성장 배지 내로 행해질 수 있다.
용어 "치료하는" 또는 "치료"는 손상, 병리 또는 상태의 약화 또는 개선의 임의의 성공 또는 성공 징후를 지칭하는 것으로, 이에는 증상의 감퇴, 관해, 감소와 같은, 또는 상태를 환자가 더 참을 수 있게 하거나, 퇴화 또는 저하 속도를 늦추거나, 퇴화의 최종점을 덜 쇠약하게 하거나, 대상체의 신체적 또는 정신적 웰빙(well-being)을 개선하거나, 생존 기간을 연장시키는, 임의의 객관적 또는 주관적 파라미터가 포함된다. 처리는 객관적 또는 주관적 파라미터에 의해 평가될 수 있으며; 이는 신체 검사, 신경학적 검사, 또는 정신과 평가의 결과를 포함한다.
"유효량" 또는 "치료적 유효량"은 필요한 투여량에서 그리고 필요한 기간 동안 원하는 치료 결과를 달성하는 데 유효한 양을 지칭한다. BCMA x GPRC5D x CD3 항체의 치료적 유효량은 개체의 질환 상태, 연령, 성별, 및 체중, 및 항체가 개체에서 원하는 반응을 유도하는 능력과 같은 인자들에 따라 변동될 수 있다. 또한, 치료적 유효량은 항체 또는 항체 부분의 임의의 독성 효과 또는 유해 효과보다 치료적으로 유익한 효과가 더 큰 것이다.
"항체"는, 달리 명시되지 않는 한, 다양한 단량체 형태, 중합체 형태 및 키메라 형태를 포함한 면역글로불린의 모든 동종형(IgG, IgA, IgE, IgM, IgD, 및 IgY)을 지칭한다. 구체적으로, 용어 "항체"에는 다중클론 항체, 단일클론 항체(mAb), 및 항체-유사 폴리펩티드, 예컨대 키메라 항체 및 인간화 항체가 포함된다.
용어 "항원-결합 아암"은 항원(예를 들어, BCMA, GPRC5D, 또는 CD3)에 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하고, 임의로 하나 이상의 다른 항체 영역(예를 들어, fc 도메인)을 포함하는 항체의 일부를 지칭한다.
용어 "항원-결합 단편"은 항원-결합 도메인을 함유하는 항원-결합 아암의 단편을 지칭한다. 항원-결합 단편은 임의의 알려진 기법, 예컨대 효소적 절단, 펩티드 합성, 및 재조합 기법에 의해 제공된 것들을 포함한다. 일부 항원-결합 단편은 모 항체 분자의 항원-결합 특이성을 보유하는 온전한 항체의 일부분으로 구성된다. 예를 들어, 항원-결합 단편은 특정 항원과 결합하는 것으로 알려진 항체의 적어도 하나의 가변 영역(중쇄 또는 경쇄 가변 영역) 또는 하나 이상의 CDR을 포함할 수 있다. 적합한 항원-결합 단편의 예는, 제한 없이, 다이아바디(diabody) 및 단일쇄 분자뿐만 아니라 Fab, F(ab')2, Fc, Fabc, 및 Fv 분자, 단일쇄(Sc) 항체, 개별 항체 경쇄, 개별 항체 중쇄, 항체 사슬 또는 CDR과 다른 단백질 사이의 키메라 융합체, 단백질 스캐폴드, 중쇄 단량체 또는 이량체, 경쇄 단량체 또는 이량체, 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄로 이루어진 이량체, VL, VH, CL, 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편, 또는 WO2007059782에 기재된 1가 항체, 힌지 영역에서 다이설파이드 가교에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편, 본질적으로 VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편; 본질적으로 항체의 단일 아암의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편, dAb 단편(문헌[Ward et al., Nature 341, 544-546 (1989)])(이는 본질적으로 VH 도메인으로 이루어지고 도메인 항체로도 불림(문헌[Holt et al; Trends Biotechnol. 2003 Nov.; 21(11):484-90])); 낙타과 또는 나노바디(문헌[Revets et al; Expert Opin Biol Ther. 2005 Jan.; 5(1):111-24]); 단리된 상보성 결정 영역(CDR) 등; 및 항체 단편으로부터 형성된 삼중특이적 항체를 포함한다. 모든 항체 아이소타입이 항원 결합 단편을 생성하는 데 사용될 수 있다. 추가적으로, 항원-결합 단편은 주어진 관심 항원에 대해 친화성을 부여하는 배향으로 폴리펩티드 절편(segment)을 성공적으로 도입시킬 수 있는 비항체 단백질성 프레임워크, 예컨대 단백질 스캐폴드를 포함할 수 있다. 항원 결합 단편은 재조합 기술에 의해 생성되거나 손상되지 않은 항체의 효소적 또는 화학적 절단에 의해 생성될 수 있다. 어구 "항체 또는 이의 항원 결합 단편"은 주어진 항원 결합 단편이 이 어구에 언급된 항체의 하나 이상의 아미노산 세그먼트를 포함함을 나타내기 위해 사용될 수 있다.
용어 "항원-결합 도메인"은 특정 항원에 대한 결합 친화도를 나타내는 항원-결합 아암의 단백질성 구조를 지칭한다. 이러한 단백질성 구조는 항원-결합 도메인의 상보성 결정 영역(CDR)에 의해 매개된다.
용어 "CDR" 및 이의 복수 "CDRs"는 3개가 경쇄 가변 영역(CDRL1, CDRL2 및 CDRL3)의 결합 특성을 구성하고, 3개가 중쇄 가변 영역(CDRH1, CDRH2 및 CDRH3)의 결합 특성을 구성하는 상보성 결정 영역(CDR)을 말한다. CDR은 항체 분자의 기능 활성에 기여하며, 스캐폴딩 또는 프레임워크 영역을 포함하는 아미노산 서열에 의해 분리된다. 정확한 정의의 CDR 경계 및 길이는 다양한 분류 및 넘버링 시스템에 따른다. 따라서, CDR은 본 명세서에서 카밧(Kabat), 초티아(Chothia), AbM, contact, 또는 임의의 다른 경계 정의에 의해 지칭될 수 있다. 상이한 경계에도 불구하고, 이들 시스템 각각은 가변 서열 내에서 소위 "초가변 영역"을 구성하는 부분에서 어느 정도 중첩된다. 따라서, 이들 시스템에 따른 CDR 정의는 인접한 프레임워크 영역에 대하여 길이 및 경계 영역이 상이할 수 있다. 예를 들어 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed. NIH Publication No. 91-3242 (1991)]; 문헌[Chothia et al., "Canonical Structures For the Hypervariable Regions of Immunoglobulins," J. Mol. Biol. 196:901 (1987)]; 및 문헌[MacCallum et al., "Antibody-Antigen Interactions: Contact Analysis and Binding Site Topography," J. Mol. Biol. 262:732 (1996)]을 참조하며, 이들 각각은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
전형적으로, CDR은 표준 구조(canonical structure)로서 분류될 수 있는 루프 구조를 형성한다. 용어 "표준 구조"는 항원 결합(CDR) 루프에 의해 채택되는 주쇄 형태를 지칭한다. 비교 구조 연구로부터, 6개의 항원 결합 루프 중 5개가 이용가능한 형태의 제한된 레퍼토리만을 갖는 것으로 밝혀졌다. 각각의 표준 구조는 폴리펩티드 골격의 비틀림각으로 특징지어질 수 있다. 따라서, 루프의 대부분의 부분에서의 높은 아미노산 서열 가변성에도 불구하고, 항체들 사이의 상응하는 루프는 매우 유사한 3차원 구조를 가질 수 있다(문헌[Chothia et al., "Canonical Structures For the Hypervariable Regions of Immunoglobulins," J. Mol. Biol. 196:901 (1987)]; 문헌[Chothia et al., "Conformations of Immunoglobulin Hypervariable Regions," I 342:877 (1989)]; 문헌[Martin and Thornton, "Structural Families in Loops of Homologous Proteins: Automatic Classification, Modelling and Application to Antibodies," J. Mol. Biol. 263:800 (1996)], 이들 각각은 전체적으로 참고로 포함됨). 또한, 채택된 루프 구조와 이를 둘러싸는 아미노산 서열 사이에는 관계가 있다. 특정 표준 클래스의 형태는 루프의 길이와, 루프 내 뿐만 아니라 보존된 프레임워크(즉, 루프 외부) 내의 주요 위치에 존재하는 아미노산 잔기에 의해 결정된다. 따라서, 특정 표준 클래스에 대한 할당은 이러한 주요 아미노산 잔기의 존재에 기초하여 이루어질 수 있다.
용어 "폴리펩티드"는 용어 "단백질"과 상호교환적으로 사용되며, 이의 가장 넓은 의미에서는 둘 이상의 서브유닛 아미노산, 아미노산 유사체 또는 펩티드 모방체(peptidomimetic)의 화합물을 말한다. 서브유닛은 펩티드 결합에 의해 연결될 수 있다. 다른 실시 형태에서, 서브유닛은 다른 결합, 예를 들어 에스테르, 에테르 등에 의해 연결될 수 있다. 본 명세서에 사용되는 용어 "아미노산"은 글리신과 D 및 L 광학 이성질체를 포함하는 천연 및/또는 비천연 또는 합성 아미노산, 아미노산 유사체 및 펩티드 모방체를 지칭한다. 3개 이상의 아미노산의 펩티드는 펩티드 쇄가 짧은 경우 올리고펩티드로 통상 불린다. 펩티드 쇄가 긴 경우, 펩티드는 통상 폴리펩티드 또는 단백질로 불린다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "Fc"는 2개의 불변 중쇄(CH) 영역, CH2 및 CH3을 포함하는 항체의 단편 결정화가능 도메인을 지칭한다. 본 명세서에서, Fc 영역의 아미노산 잔기는 전형적으로 EU 넘버링 체계에 따라 넘버링된다(문헌[Edelman, G.M. et al., Proc. Natl. Acad. USA, 63, 78-85 (1969). PMID: 5257969]). 당업자에 의해 용이하게 이해될 바와 같이, 이들 잔기는 IMGT 및 카밧(문헌[Kabat, E.A. et al., Sequences of proteins of immunological interest. 5th Edition - US Department of Health and Human Services, NIH publication n° 91-3242, pp 662,680,689 (1991)]) 넘버링과 같은 대안적인 넘버링 체계에 따라 용이하게 배정될 수 있다. 예를 들어, EU 넘버링에 따른 L234는 또한 카밧에 따른 L247로서 제시될 수 있다.
항체 또는 항체 단편과 관련하여 사용될 때, "특이적으로 결합하는" 또는 "특이적으로 결합한다" 또는 이들의 파생어는, 혼합된 분자 집단을 함유하는 샘플 중의 다른 분자에 우선적으로 결합하지 않고서, 면역글로불린 유전자 또는 면역글로불린 유전자의 단편에 의해 인코딩된 도메인을 통한 관심 단백질의 하나 이상의 에피토프에 대한 결합을 나타낸다. 전형적으로, 항체는 표면 플라즈몬 공명 검정 또는 세포 결합 검정에 의해 측정될 때 약 1×10-8 M 미만의 Kd로 동종 항원에 결합한다. "[항원]-특이적" 항체(예를 들어, BCMA-특이적 항체)와 같은 어구는 언급된 항체가 언급된 항원에 특이적으로 결합함을 나타내고자 한다. 용어 "결합"이 본 명세서에 사용되는 경우, 이는 "특이적으로 결합하다"를 포함하고 이 용어들은 원하는 대로 상호교환될 수 있도록 의도된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "키메라"는 비인간 포유동물, 설치류, 또는 파충류의 항체 아미노산 서열로부터 유래되는 적어도 하나의 가변 도메인의 적어도 일부분을 갖는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 지칭하며, 한편 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 나머지 부분은 인간으로부터 유래된다.
"벡터"는 레플리콘, 예컨대 플라스미드, 파지, 코스미드, 또는 바이러스이며, 이것 내에 다른 핵산 절편이 작동가능하게 삽입되어 절편의 복제 또는 발현을 일으키도록 할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 용어 "숙주 세포"는 임의의 유형의 세포, 예를 들어 초대 세포, 배양 세포 또는 세포주 유래 세포일 수 있다. 특정 실시 형태에서, 용어 "숙주 세포"는 핵산 분자로 트랜스펙션된 세포 및 이러한 세포의 자손 또는 잠재적 자손을 지칭한다. 이러한 세포의 자손은 예를 들어, 후속 세대에서 발생할 수 있는 돌연변이 또는 환경적 영향 또는 숙주 세포 게놈으로의 핵산 분자의 통합으로 인해 핵산 분자로 트랜스펙션된 모세포와 동일하지 않을 수 있다. 용어 "발현" 및 "생성"은 본 명세서에서 동의어로 사용되고, 유전자 산물의 생합성을 지칭한다. 이들 용어는 RNA로의 유전자의 전사를 포함한다. 이들 용어는 또한 하나 이상의 폴리펩티드로의 RNA의 번역을 포함하고, 모든 천연 발생 전사 후 및 번역 후 변형을 추가로 포함한다.
용어 "대상"은 인간 및 비인간 동물을 지칭하며, 모든 척추동물, 예를 들어 포유동물 및 비포유동물, 예컨대 비인간 영장류, 마우스, 토끼, 양, 개, 고양이, 말, 소, 닭, 양서류, 및 파충류가 포함된다. 기재된 방법의 많은 실시 형태에서, 대상은 인간이다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "방향전환시키다" 또는 "방향전환"은, BCMA x GPRC5D x CD3 항체가 그의 고유 동종 특이성으로부터 GPRC5D 및/또는 BCMA-발현 세포에 대한 반응성을 향해, T 세포의 활성을 효과적으로 수송하는 능력을 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 용어 "샘플"은 대상으로부터 단리된, 유사한 체액, 세포, 또는 조직(예를 들어, 외과적으로 절제된 종양 조직, 생검 - 미세 바늘 흡인물을 포함함)의 수집물뿐만 아니라, 대상 내에 존재하는 체액, 세포, 또는 조직도 지칭한다. 일부 실시 형태에서, 샘플은 체액이다. 체액은 전형적으로 생리적 온도에서 액체이고, 대상 또는 생물학적 공급원에 존재하거나, 그로부터 적출되거나, 발현되거나 달리 추출되는 천연 유래 체액을 포함할 수 있다. 소정의 체액은 특정 조직, 기관 또는 국부 영역으로부터 유래되고, 소정의 다른 체액은 대상 또는 생물학적 공급원 내에 더 전체적으로 또는 전신적으로 위치될 수 있다. 체액의 예에는 혈액, 혈청 및 장막액(serosal fluid), 혈장, 림프, 소변, 타액, 낭액(cystic fluid), 눈물, 대변, 가래, 분비성 조직 및 기관의 점막 분비물, 질 분비물, 복수, 예컨대 비고형 종양과 관련된 것들, 흉막액, 심막액, 복막액, 복부액 및 기타 체강액, 기관지 세척에 의해 수집된 체액 등이 포함된다. 체액은 또한 대상 또는 생물학적 공급원과 접촉된 용액, 예를 들어, 세포 및 기관 배양 배지 - 세포 또는 기관 컨디셔닝된 배지를 포함함 -, 세척액 등을 포함할 수 있다. 본 명세서에 사용되는 용어 "샘플"은 대상으로부터 적출된 물질 또는 대상에 존재하는 물질을 포함한다. 본 발명의 관련 태양은 필요에 따라 단리된 샘플에 기초하여 시험관내에서 수행될 수 있다.
"알려진 표준물"은 알려진 양 또는 농도의 GPRC5D 및/또는 BCMA를 갖는 용액일 수 있으며, 여기서 용액은 자연 발생 용액, 예컨대 초기, 중기, 말기, 진행성, 또는 정지(static) 암을 갖는 것으로 알려진 환자로부터의 샘플일 수 있거나, 용액은 합성 용액, 예컨대 그 안에 희석된 알려진 양의 GPRC5D 및/또는 BCMA를 갖는 완충수일 수 있다. 본 명세서에 기재된 알려진 표준물은 대상체로부터 단리된 GPRC5D 및/또는 BCMA, 재조합 또는 정제된 GPRC5D 및/또는 BCMA 단백질, 또는 질환 상태와 관련된 GPRC5D 및/또는 BCMA 농도의 값을 포함할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "B-세포 성숙 항원" 및 "BCMA"는 분화된 형질 세포에서 우선적으로 발현되는 종양 괴사 수용체 수퍼패밀리의 구성원인, BCMA, CD269, 및 TNFRSF17(UniProt Q02223)로도 알려진 인간 B 세포 성숙 항원을 포함한다. 인간 BCMA의 세포외 도메인은, UniProt에 따라, 아미노산 1 내지 54(또는 5 내지 51)로 이루어진다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "BCMA에 대한 항체, 항-BCMA 항체"는 BCMA에 특이적으로 결합하는 항체에 관한 것이다.
용어 "G-단백질 커플링된 수용체 패밀리 C 군 5 구성원 D" 및 "GPRC5D"는 구체적으로, 예를 들어 GenBank 수탁 번호 BC069341, NCBI 참조 서열: NP_061124.1, 및 UniProtKB/Swiss-Prot 수탁 번호 Q9NZD1에 기재된 바와 같은 인간 GPRC5D 단백질을 포함한다(또한 문헌[Brauner-Osborne, H. et al. 2001, Biochim. Biophys. Acta 1518, 237-248] 참조).
용어 "클러스터 결정기 3" 및 "CD3"은 인간 CD3 단백질 다중-서브유닛 복합체를 포함한다. CD3 단백질 멀티서브유닛 복합체는 6개의 독특한 폴리펩티드 쇄로 구성된다. 이들은 CD3γ 쇄(SwissProt P09693), CD3δ 쇄(SwissProt P04234), 2개의 CD3ε 쇄(SwissProt P07766), 및 하나의 CD3ζ 쇄 동종이량체(SwissProt 20963) - 그리고 이는 T 세포 수용체 α 및 β 쇄와 관련됨 - 를 포함한다. 달리 기재되지 않는 한, 용어 "CD3"는 임의의 CD3 변이체, 아이소형(isoform) 및 종 상동체(species homolog)를 포함하는데, 이는 세포(T 세포를 포함함)에 의해 천연 발현되거나, 이러한 폴리펩티드를 인코딩하는 유전자 또는 cDNA로 형질감염된 세포 상에서 발현될 수 있다.
"BCMA x GPRC5D x CD3 항체"는 다중특이적 항체, 임의로 삼중특이적 항체이며, 이는 3개의 상이한 항원-결합 아암을 포함하는데, 이들 중 하나는 항원 BCMA에 결합하고, 이들 중 하나는 항원 GPRC5D에 결합하고, 이들 중 하나는 CD3에 결합한다. "BCMA x CD3 항체"는 다중특이적 항체, 임의로 이중특이적 항체이며, 이는 2개의 상이한 항원-결합 아암을 포함하는데, 이들 중 하나는 항원 BCMA에 결합하고, 이들 중 하나는 CD3에 결합한다. "GPRC5D x CD3 항체"는 다중특이적 항체, 임의로 이중특이적 항체이며, 이는 2개의 상이한 항원-결합 아암을 포함하는데, 이들 중 하나는 항원 GPRC5D에 결합하고, 이들 중 하나는 CD3에 결합한다. 용어 "다중특이적 항체"는 본 명세서에서 가장 넓은 의미로 사용되며, 구체적으로 폴리에피토프 특이성을 갖는 항체를 망라한다. 다중특이적 항체는, 중쇄 가변 도메인(VH) 및 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하며, 여기서 VHVL 단위는 폴리에피토프 특이성을 갖는 항체, 2개 이상의 VL 및 VH 도메인을 가지며, 여기서 각각의 VHVL 단위는 상이한 에피토프에 결합하는 항체, 2개 이상의 단일 가변 도메인을 가지며, 각각의 단일 가변 도메인은 상이한 에피토프에 결합하는 항체, 전장 항체, 및 하나 이상의 항체 단편을 포함하는 항체뿐만 아니라 공유적으로 연결되거나 비-공유적으로 연결된 항체 단편을 포함하는 항체를 포함하지만 이로 제한되지 않는다.
다중특이적 항체는 이중특이적 항체, 삼중특이적 항체, 다이아바디, 또는 유사한 분자일 수 있다(예를 들어, 다이아바디에 대한 설명에 관해서는 문헌[PNAS USA 90(14), 6444-8 (1993)]을 참조한다). 본 명세서에 제공된 이중특이적 항체, 삼중특이적 항체, 다이아바디 등은 BCMA 또는 GPRC5D의 일부에 더하여 임의의 적합한 표적에 결합할 수 있다. 용어 "이중특이적 항체"는 상이한 항체 서열에 의해 정의된 2개의 상이한 항원-결합 아암을 갖는 항체로서 이해되어야 한다. 용어 "삼중특이적 항체"는 상이한 항체 서열에 의해 정의된 3개의 상이한 항원-결합 아암을 갖는 항체로서 이해되어야 한다. 이는 상이한 표적 결합으로서 이해될 수 있지만, 하나의 표적 내의 상이한 에피토프들에 대한 결합도 마찬가지로 포함한다.
"참조 샘플"은 다른 샘플, 예컨대 시험 샘플과 대비될 수 있는 샘플인데, 이러한 대비는 비교된 샘플의 특성화를 가능하게 한다. 참조 샘플은 시험 샘플과의 비교를 위한 기초로서의 역할을 하는 일부 특성화된 특성을 가질 것이다. 예를 들어, 참조 샘플은 암을 갖는 대상체를 나타내는 GPRC5D 또는 BCMA 수준에 대한 벤치마크로서 사용될 수 있다. 참조 샘플은 반드시 시험 샘플과 병행하여 분석되어야 하는 것은 아니며, 따라서 일부 경우에 참조 샘플은 주어진 병태를 특성화하도록 이전에 결정된 수치 값 또는 범위, 예컨대 대상체에서 암을 나타내는 GPRC5D 또는 BCMA 수준일 수 있다. 이 용어는 또한 생리적 상태 또는 질환 상태, 예컨대 GPRC5D- 또는 BCMA-발현 암과 관련된 것으로 알려져 있지만 미지량의 GPRC5D 또는 BCMA를 갖는, 비교 목적으로 사용되는 샘플을 포함한다.
"재발된"은 치료제로의 선행 치료 후의 개선 기간 후, 질환, 또는 질환의 징후 및 증상의 재발을 지칭한다.
"불응성"은 치료에 반응하지 않는 질환을 지칭한다. 불응성 질병은 치료 전 또는 치료 시작 시점에서 치료에 대해 저항성일 수 있거나, 또는 불응성 질병은 치료 동안 저항성이 될 수 있다.
GPRC5D 및/또는 BCMA-발현 암의 진행과 관련하여 사용되는 바와 같이, 용어 "진행"은 덜 중증인 상태로부터 더 중증인 상태로의 암의 변화를 포함한다. 이는 종양의 수 또는 중증도, 전이 정도, 암이 성장하거나 퍼지는 속도 등의 증가를 포함할 수 있다. 예를 들어, "결장암의 진행"은 덜 심각한 상태로부터 더 심각한 상태로의 그러한 암의 진행, 예컨대 I 기로부터 II 기로의 진행, II 기로부터 III 기로의 진행 등을 포함한다.
GPRC5D 및/또는 BCMA-발현 암의 퇴행과 관련하여 사용되는 바와 같이, 용어 "퇴행"은 더 중증인 상태로부터 덜 중증인 상태로의 암의 변화를 포함한다. 이는 종양의 수 또는 중증도, 전이 정도, 암이 성장하거나 퍼지는 속도 등의 감소를 포함할 수 있다. 예를 들어, "결장암의 퇴행"은 더 심각한 상태로부터 덜 심각한 상태로의 그러한 암의 퇴행, 예컨대 III 기로부터 II 기로의 진행, II 기로부터 I 기로의 진행 등을 포함한다.
안정적인 GPRC5D 및/또는 BCMA-발현 암과 관련하여 사용되는 바와 같이, 용어 "안정적인"은 진행성 암 또는 퇴행성 암인 것으로 간주되기까지 임상적으로 관련된 기간에 걸쳐 충분히 유의하게 변화하지 않거나 변화해 오지 않은 질환 상태를 기재하고자 한다.
본 명세서에 기재된 실시 형태는 특정 방법, 시약, 화합물, 조성물 또는 생물학적 시스템으로 제한되지 않으며, 이들은 물론 다양할 수 있다.
다중특이성 항체
BCMA, GPRC5D, 및 CD3, 및 이들의 삼중특이적 결합 단편에 결합하는 다중특이적 항체가 본 명세서에 제공된다. 그러한 항체 또는 항체 단편은 이들 표적 중 1 또는 2개만을 표적화하는 항체와 비교하여 세포의 특정 서브세트에 대한 더 특이적인 표적화를 가능하게 할 수 있다.
예를 들어, CD3에 결합하는 제1 항원-결합 아암, GPRC5D에 결합하는 제2 항원-결합 아암, 및 BCMA에 결합하는 제3 항원-결합 아암을 포함하는 분자를 제조함으로써 이를 달성할 수 있다. 항원-결합 아암은 표적의 특이적 인식을 가능하게 하는 임의의 형태를 취할 수 있으며, 예를 들어 결합 아암은 중쇄 가변 도메인, Fv(중쇄 가변 도메인과 경쇄 가변 도메인의 조합), 단일쇄 Fv(scFv), Fab, 피브로넥틴 III형 도메인에 기초하는 결합 도메인(예컨대, 피브로넥틴으로부터의 것 또는 피브로넥틴으로부터의 III형 도메인의 공통에 기초하는 것, 또는 테나신으로부터의 것 또는 테나신으로부터의 III형 도메인의 공통에 기초하는 것, 예컨대 Janssen Biotech, Inc.로부터의 센티린 분자, 예를 들어 WO2010/051274 및 WO2010/093627 참조)일 수 있거나 이들을 포함할 수 있다. 소정 실시 형태에서, 삼중특이적 항체는 3개의 항원-결합 아암을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 삼중특이적 항체는, 예를 들어 단일쇄 가변 도메인 형태의 추가의 항원-결합 아암이, 예를 들어 항체의 중쇄 중 하나 또는 경쇄 중 하나의 N 또는 C-말단에 융합된 (예를 들어, IgG 형식의) 항체로 구성된다.
따라서, BCMA, GPRC5D, 및 CD3에 각각 결합하는 3개의 상이한 항원-결합 아암을 포함하는 삼중특이적 분자가 제공된다.
일부 실시 형태에서, BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체는
(a) 제1 중쇄 가변 도메인(VH1) 및 제1 경쇄 가변 도메인(VL1)을 포함하는 제1 항원-결합 아암;
(b) 제2 중쇄 가변 도메인(VH2) 및 제2 경쇄 가변 도메인(VL2)을 포함하는 제2 항원-결합 아암; 및
(c) 제3 중쇄 가변 도메인(VH3) 및 제3 경쇄 가변 도메인(VL3)을 포함하는 제3 항원-결합 아암을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 항원-결합 아암은 CD3 상의 에피토프에 결합하고, 제2 항원-결합 아암은 GPRC5D 상의 에피토프에 결합하고, 제3 항원-결합 아암은 BCMA 상의 에피토프에 결합한다.
일부 실시 형태에서, CD3에 결합하는 제1 항원-결합 아암은 서열 번호 8의 VH1의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, CD3에 결합하는 제1 항원-결합 아암은 서열 번호 7의 VL1의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, CD3에 결합하는 제1 항원-결합 아암은 GDSVFNNNAAWS(서열 번호 4)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, RTYYRSKWLYD(서열 번호 5)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 GYSSSFDY(서열 번호 6)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, CD3에 결합하는 제1 항원-결합 아암은 TGTSSNIGTYKFVS(서열 번호 1)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, EVSKRPS(서열 번호 2)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 VSYAGSGTLL(서열 번호 3)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, CD3에 결합하는 제1 항원-결합 아암은 서열 번호 8의 VH1을 포함한다. 일부 실시 형태에서, CD3에 결합하는 제1 항원-결합 아암은 서열 번호 7의 VL1을 포함한다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D에 결합하는 제2 항원-결합 아암은 서열 번호 16의 VH2의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D에 결합하는 제2 항원-결합 아암은 서열 번호 15의 VL2의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D에 결합하는 제2 항원-결합 아암은 GFSLTNIRMSVS(서열 번호 12)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HIFSNDEKS(서열 번호 13)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 MRLPYGMDV(서열 번호 14)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D에 결합하는 제2 항원-결합 아암은 RSSQSLVHSDGNTYLS(서열 번호 9)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, KISNRFF(서열 번호 10)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 MQATQFPHT(서열 번호 11)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D에 결합하는 제2 항원-결합 아암은 서열 번호 16의 VH1을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D에 결합하는 제2 항원-결합 아암은 서열 번호 15의 VL1을 포함한다.
일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제3 항원-결합 아암은 서열 번호 24의 VH3의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제3 항원-결합 아암은 서열 번호 23의 VL3의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제3 항원-결합 아암은 GFTFSSYAMS(서열 번호 20)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, AISGSGGSTY(서열 번호 21)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 DEGYSSGHYYGMDV(서열 번호 22)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; 및 RASQSISSSFLT(서열 번호 17)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1을 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제3 항원-결합 아암은 GASSRAT(서열 번호 18)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 QHYGSSPMYT(서열 번호 19)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제3 항원-결합 아암은 서열 번호 24의 VH1을 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA에 결합하는 제3 항원-결합 아암은 서열 번호 23의 VL1을 포함한다.
일부 실시 형태에서, CD3 에피토프에 결합하는 항원-결합 아암의 VH1 및 VL1은 다이아바디, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv, Fd, 다이설파이드 안정화 Fv 단편(dsFv), 또는 다이설파이드 안정화 다이아바디(ds 다이아바디) 내에 존재한다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D 에피토프에 결합하는 항원-결합 아암의 VH2 및 VL2는 다이아바디, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv, Fd, 다이설파이드 안정화 Fv 단편(dsFv), 또는 다이설파이드 안정화 다이아바디(ds 다이아바디) 내에 존재한다.
일부 실시 형태에서, BCMA 에피토프에 결합하는 항원-결합 아암의 VH3 및 VL3은 다이아바디, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv, Fd, 다이설파이드 안정화 Fv 단편(dsFv), 또는 다이설파이드 안정화 다이아바디(ds 다이아바디) 내에 존재한다.
일부 실시 형태에서, BCMA x GPRC5D x CD3 다중특이적 항체의 제1 항원-결합 아암은 VH1을 포함하는 제1 중쇄 부분(HC1) 및 VL1을 포함하는 경쇄 부분(LC)을 포함하며, 여기서 VH1 및 VL1은 쌍을 이루어 제1 항원에 결합하는 제1 항원-결합 도메인을 형성한다. 일부 실시 형태에서, HC1은, N에서 C-말단으로, VH1, 제1 중쇄 불변 도메인(CH1), 및 제1 Fc 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, HC1의 VH1 및 CH1은 LC와 함께 단편 항원 결합(Fab) 도메인을 형성한다.
일부 실시 형태에서, 제1 항원-결합 아암의 VH1은 제1 Fc 도메인을 통해 제3 항원-결합 아암의 VH3에 커플링된다. 일부 실시 형태에서, 제1 항원-결합 아암의 제1 Fc 도메인은 제1 링커(L1)를 통해 제3 항원-결합 아암에 커플링됨으로써, 커플링된 제1 및 제3 항원-결합 아암을 형성한다. 커플링된 제1 및 제3 항원-결합 아암은, N에서 C-말단으로, VH1, CH1 도메인, 및 제1 항원-결합 아암의 Fc 도메인, 제1 링커, 및 제3 항원-결합 아암을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 제3 항원-결합 아암은 제3-항원-결합 아암의 VH3 및 VL3으로부터 형성된 단일쇄 가변 단편(scFv) 이다.
일부 실시 형태에서, BCMA x GPRC5D x CD3 다중특이적 항체의 제2 항원-결합 아암은 제2 항원에 결합하는 제2 항원-결합 도메인을 형성하는 제2 중쇄 가변 도메인(VH2)을 포함하는 제2 중쇄 부분(HC2)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 결합 아암은 N에서 C-말단으로, VH2 및 VL2로부터 형성된 단일쇄 가변 단편(scFv), 및 제2 Fc 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제2 항원-결합 아암의 VH2는 제2 Fc 도메인을 통해 제3 항원-결합 아암의 VH3에 커플링된다. 일부 실시 형태에서, 제2 항원-결합 아암의 제2 Fc 도메인은 링커를 통해 제3 항원-결합 아암에 커플링됨으로써, 커플링된 제2 및 제3 항원-결합 아암을 형성한다. 커플링된 제2 및 제3 항원-결합 아암은, N에서 C-말단으로, 제2 항원-결합 도메인, 제2 Fc 도메인, 제1 링커, 및 제3 항원-결합 아암을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 제3 항원-결합 아암은 제3-항원-결합 아암의 VH3 및 VL3으로부터 형성된 단일쇄 가변 단편(scFv) 이다.
바람직한 실시 형태에서, BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체는 VH1을 포함하는 제1 중쇄 부분(HC1) 및 VL1을 포함하는 경쇄 부분(LC)을 포함하는 CD3-특이적 아암을 포함하는 삼중특이적 항체이다. VH1 및 VL1 도메인은 쌍을 이루어 CD3에 결합하는 제1 항원-결합 도메인을 형성한다. 삼중특이적 항체의 제2 항원-결합 아암은 제2 항원에 결합하는 제2 항원-결합 도메인을 형성하는 VH2를 갖는 제2 중쇄 부분(HC2)을 포함한다. CD3-특이적 결합 아암의 HC1 또는 제2 항원-결합 아암의 HC2는 VH3 도메인을 포함하는 제3 항원-결합 아암에 커플링되며, 이는 제3 항원에 결합하는 제3 항원-결합 도메인을 형성한다. 일부 실시 형태에서, 제2 항원은 BCMA이고, 제3 항원은 GPRC5D이다. 일부 실시 형태에서, 제2 항원은 GPRC5D이고, 제3 항원은 BCMA이다.
일 실시 형태에서, BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체는 VH1을 갖는 HC1 및 VL1을 갖는 LC를 포함하는 CD3-특이적 결합 아암을 포함하는 삼중특이적 항체이다. VH1 및 VL1은 쌍을 이루어 CD3에 결합하는 제1 CD3-특이적 항원-결합 도메인을 형성한다. 제2 항원-결합 아암은 GPRC5D에 결합하는 제2 항원-결합 도메인을 형성하는 VH2 및 VL2를 포함한다. 제3 항원-결합 아암은 제2 항원-결합 아암에 커플링되고, BCMA에 결합하는 제3 항원-결합 도메인을 형성하는 VH3 및 VL3을 포함한다.
일 실시 형태에서, BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체는 VH1을 갖는 HC1 및 VL1을 갖는 LC를 포함하는 CD3-특이적 결합 아암을 포함하는 삼중특이적 항체이다. VH1 및 VL1은 쌍을 이루어 CD3에 결합하는 제1 CD3-특이적 항원-결합 도메인을 형성한다. 제2 항원-결합 아암은 BCMA에 결합하는 제2 항원-결합 도메인을 형성하는 VH2 및 VL2를 포함한다. 제3 항원-결합 아암은 제2 항원-결합 아암에 커플링되고, GPRC5D에 결합하는 제3 항원-결합 도메인을 형성하는 VH3 및 VL3을 포함한다.
일 실시 형태에서, BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체는 VH1을 갖는 HC1 및 VL1을 갖는 LC를 포함하는 CD3-특이적 결합 아암을 포함하는 삼중특이적 항체이다. VH1 및 VL1은 쌍을 이루어 CD3에 결합하는 제1 CD3-특이적 항원-결합 도메인을 형성한다. 제2 항원-결합 아암은 GPRC5D에 결합하는 제2 항원-결합 도메인을 형성하는 VH2 및 VL2를 포함한다. 제3 항원-결합 아암은 제1 CD3-특이적 항원-결합 아암에 커플링되고, BCMA에 결합하는 제3 항원-결합 도메인을 형성하는 VH3 및 VL3을 포함한다.
일 실시 형태에서, BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체는 VH1을 갖는 HC1 및 VL1을 갖는 LC를 포함하는 CD3-특이적 결합 아암을 포함하는 삼중특이적 항체이다. VH1 및 VL1은 쌍을 이루어 CD3에 결합하는 제1 CD3-특이적 항원-결합 도메인을 형성한다. 제2 항원-결합 아암은 BCMA에 결합하는 제2 항원-결합 도메인을 형성하는 VH2 및 VL2를 포함한다. 제3 항원-결합 아암은 제1 CD3-특이적 항원-결합 아암에 커플링되고, GPRC5D에 결합하는 제3 항원-결합 도메인을 형성하는 VH3 및 VL3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 항원-결합 아암의 VH1을 갖는 HC1 및 VL1 도메인을 갖는 LC는 제1 항원-결합 도메인을 포함하는 항원-결합 단편(Fab)을 형성한다. 일부 실시 형태에서, 제2 항원-결합 아암의 VH2 및 VL2는 제2 항원-결합 도메인을 포함하는 단일쇄 가변 단편(scFv)을 형성한다. 일부 실시 형태에서, 제3 항원-결합 아암의 VH3 및 VL3은 제3 항원-결합 도메인을 포함하는 단일쇄 가변 단편(scFv)을 형성한다.
일 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 항원-결합 단편(Fab)을 포함하고, BCMA-결합 아암은 단일쇄 가변 단편(scFv)을 포함하고, GPRC5D-결합 아암은 단일쇄 가변 단편(scFv)을 포함한다.
일 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 단일쇄 가변 단편(scFv)을 포함하고, BCMA-결합 아암은 항원-결합 단편(Fab)을 포함하고, GPRC5D-결합 아암은 단일쇄 가변 단편(scFv)을 포함한다.
일 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 단일쇄 가변 단편(scFv)을 포함하고, BCMA-결합 아암은 단일쇄 가변 단편(scFv)을 포함하고, GPRC5D-결합 아암은 항원-결합 단편(Fab)을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 삼중특이적 항체의 CD3-결합 아암은 HC1 및 LC를 포함한다. HC1은 불변 중쇄 영역(CH1, CH2, 및 CH3) 및 VH1을 포함할 수 있다. LC는 VL1을 포함할 수 있다. VH1 및 VL1은 조합되어 CD3 항원 결합 도메인을 형성한다.
일부 실시 형태에서, 삼중특이적 항체의 GPRC5D-결합 아암은 HC2를 포함한다. HC2는 불변 중쇄 영역(CH2 및 CH3), 및 CH2 영역의 N-말단에 부착된 단일쇄 가변 단편(scFv)을 포함할 수 있으며, 여기서 scFv는 GPRC5D 항원 결합 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 삼중특이적 항체는 GPRC5D-결합 아암의 CH3 영역의 C-말단에 부착된 BCMA 항원-결합 아암을 추가로 포함하여 GPRC5D/BCMA 결합 아암을 형성한다. 일부 실시 형태에서, BCMA 항원-결합 아암은 제2 단일쇄 가변 단편(scFv)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D/BCMA 아암은 GPRC5D 결합 도메인을 함유하는 scFv, CH2 및 CH3 영역, BCMA 결합 도메인을 함유하는 scFv의 구조를 가질 수 있다.
일부 실시 형태에서, 삼중특이적 항체의 CD3-결합 아암은 HC1 및 LC를 포함한다. HC1은 불변 중쇄 영역(CH1, CH2, 및 CH3) 및 VH1을 포함할 수 있다. LC는 VL1을 포함할 수 있다. VH1 및 VL1은 조합되어 CD3 항원 결합 도메인을 형성한다.
일부 실시 형태에서, 삼중특이적 항체의 BCMA-결합 아암은 HC2를 포함한다. HC2는 불변 중쇄 영역(CH2 및 CH3), 및 CH2 영역의 N-말단에 부착된 단일쇄 가변 단편(scFv)을 포함할 수 있으며, 여기서 scFv는 BCMA 항원 결합 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 삼중특이적 항체는 CD3-결합 아암의 CH3 영역의 C-말단에 부착된 GPRC5D 항원-결합 아암을 추가로 포함하여 CD3/GPRC5D 결합 아암을 형성한다. 일부 실시 형태에서, BCMA 항원-결합 아암은 제2 단일쇄 가변 단편(scFv)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, CD3/GPRC5D 아암은 CD3 결합 도메인을 함유하는 Fab, CH2 및 CH3 영역, GPRC5D 결합 도메인을 함유하는 scFv의 구조를 가질 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 다중특이적 항체는 전장 항체 구조를 갖는 항체를 포함한다. 본 명세서에 사용되는 "전장 항체"는 2개의 전장 항체 중쇄 및 2개의 전장 항체 경쇄를 갖는 항체를 지칭한다. 전장 항체 중쇄(HC)는 중쇄 가변 및 불변 도메인 VH, CH1, CH2 및 CH3를 포함한다. 전장 항체 경쇄(LC)는 경쇄 가변 및 불변 도메인 VL 및 CL을 포함한다. 전장 항체는 어느 하나 또는 둘 모두의 중쇄에 C-말단 라이신(K)이 결여되어 있을 수 있다. 용어 "Fab-아암" 또는 "하프 분자(half molecule)"는 항원에 결합하는 하나의 중쇄-경쇄 쌍을 지칭한다. 일부 실시 형태에서, 항원 결합 도메인들 중 하나는 비항체 기반 결합 도메인, 예를 들어 피브로넥틴 3형 도메인을 기반으로 한 결합 도메인, 예를 들어 센티린이다.
BCMA-결합 아암
본 명세서에 기재된 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체는 BCMA에 특이적인 항원-결합 아암을 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 인간 BCMA에 결합한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 인간 BCMA 및 사이노몰거스 원숭이 BCMA에 결합한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 인간 BCMA에 결합하지만, 사이노몰거스 원숭이 BCMA에는 결합하지 않는다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 BCMA 세포외 도메인(ECD)으로부터의 하나 이상의 잔기를 포함하는 에피토프에 결합한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 BCMA BCMW37 사슬의 잔기 17 내지 26(LLHACIPCQL(서열 번호 162))에 결합한다.
BCMA-결합 아암은 5×10-7 M 이하, 예컨대 1×10-7 M 이하, 5×10-8 M 이하, 1×10-8 M 이하, 5×10-9 M 이하, 1×10-9 M, 또는 5×10-10 M 이하의 친화도로 BCMA에 결합할 수 있다. 일 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 약 1 ×10-10 M 내지 1 ×10-7 M의 친화도로 BCMA에 결합한다. 일 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 약 1 ×10-10 M, 약 2 ×10-10 M, 약 3 ×10-10 M, 약 4 ×10-10 M, 약 5 ×10-10 M, 약 6 ×10-10 M, 약 7 ×10-10 M, 약 8 ×10-10 M, 약 9×10-10 M, 약 1×10-9 M, 약 2 ×10-9 M, 약 3 ×10-9 M, 약 4 ×10-9 M, 약 5 ×10-9 M, 약 6 ×10-9 M, 약 7 ×10-9 M, 약 8 ×10-9 M, 또는 약 9×10-9 M의 친화도로 BCMA에 결합한다. 일 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 약 1×10-10 내지 5×10-10 M, 약 1×10-10 내지 8×10-10 M, 약 2×10-10 내지 9×10-10 M, 약 3×10-10 내지 10×10-10 M, 약 4×10-10 내지 10×10-10 M, 또는 약 5×10-10 내지 10×10-10 M의 친화도로 BCMA에 결합한다. 일 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 표면 플라즈몬 공명(SPR) 검정에 의해 결정되는 바와 같이 약 8.4 ×10-10 M의 친화도로 BCMA에 결합한다. 일 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 표면 플라즈몬 공명(SPR) 검정에 의해 결정되는 바와 같이 약 2.1 ×10-10 M의 친화도로 BCMA에 결합한다.
표 1는 본 명세서에 기재된 일부 BCMA-특이적 항체의 예에 대한 요약을 제공한다:
[표 1]
일부 BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편의 특징은, 예를 들어, 미국 특허 제10,072,088호에서 확인할 수 있으며, 그 내용은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 표 1에 기재된 항체 중 어느 하나의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 표 1에 기재된 항체 중 어느 하나의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 표 1에 기재된 항체 중 어느 하나의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 표 1에 기재된 항체 중 어느 하나의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 표 1에 기재된 항체 중 어느 하나의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 중쇄 및 표 1에 기재된 항체 중 어느 하나의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 또는 항원-결합과 BCMA에 대한 결합에 대해 경쟁한다.
일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 표 1에 기재된 항체 중 어느 하나의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 표 1에 기재된 항체 중 어느 하나의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 표 1에 기재된 항체들 중 어느 하나의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 중쇄 및 표 1에 기재된 항체들 중 어느 하나의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 클론 BCMB519, BCMB69, BCMB117, BCMB123, BCMB128, BCMB129, BCMB176, 또는 BCMB177의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 클론 BCMB519, BCMB69, BCMB117, BCMB123, BCMB128, BCMB129, BCMB176, 또는 BCMB177의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함한다. 일 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 클론 BCMB519의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 표 1에 기재된 바와 같은 항체 클론으로부터 유래된 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 예시적인 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 표 1에 기재된 바와 같은 항체 클론으로부터 유래된 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 예시적인 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 클론 BCMB519, BCMB69, BCMB117, BCMB123, BCMB128, BCMB129, BCMB176, 또는 BCMB177의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 클론 BCMB519의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 20을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 21을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 22를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 20을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 21을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 22를 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 17을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 18을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 19를 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다. BCMA-결합 아암은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 24와 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 24와 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 23과 동일하거나 실질적으로 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 32를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 33을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 34를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 32를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 33을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 34를 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 39를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 40을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 41을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다. BCMA-결합 아암은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 42와 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 42와 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 48과 동일하거나 실질적으로 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 38을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 33을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 34를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 38을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 33을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 34를 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 39를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 40을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 41을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다. BCMA-결합 아암은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 43과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 43과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 48과 동일하거나 실질적으로 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 32를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 33을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 37을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 32를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 33을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 37을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 39를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 40을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 41을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다. BCMA-결합 아암은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 44와 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 44와 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 48과 동일하거나 실질적으로 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 32를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 36을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 34를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 32를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 36을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 34를 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 39를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 40을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 41을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다. BCMA-결합 아암은 인간 프레임워크 서열을 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 45와 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 45와 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 48과 동일하거나 실질적으로 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 38을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 33을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 37을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 38을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 33을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 37을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 39를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 40을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 41을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다. BCMA-결합 아암은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 46과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 46과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 48과 동일하거나 실질적으로 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 38을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 164를 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 37을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 38을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 164를 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 37을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 39를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 40을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 41을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다. BCMA-결합 아암은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 47과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 47과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 48과 동일하거나 실질적으로 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
BCMA-결합 아암은 재조합 수단에 의해 임의의 종으로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, BCMA-결합 아암은 마우스, 래트, 염소, 말, 돼지, 소, 닭, 토끼, 낙타과, 당나귀, 인간, 또는 이들의 키메라 버전으로부터 유래될 수 있다. 인간에 대한 투여에 사용하기 위하여, 비-인간 유래 항원-결합 단편은 인간 환자에게 투여 시 더 적은 항원성을 나타내도록 유전적으로 또는 구조적으로 변경될 수 있다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 키메라인 항원-결합 단편을 포함한다.
일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 인간화 항원-결합 단편을 포함한다. 인간화 항원-결합 단편은 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소한의 서열을 함유하는 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 사슬 또는 이들의 단편(예컨대, Fv, Fab, Fab', F(ab')2, 또는 항체의 다른 항원-결합 하위서열)으로부터 유래될 수 있다. 대부분의 경우, 인간화 항체 또는 항원-결합 단편은, 수용자의 상보성-결정 영역(CDR)으로부터의 잔기가 원하는 특이성, 친화도, 및 능력을 갖는 비-인간 종, 예컨대 마우스, 래트, 또는 토끼의 CDR(공여자 항체)로부터의 잔기에 의해 대체된 인간 면역글로불린(수용자 항체) 또는 항원-결합 단편이다. 일반적으로, 인간화 항체 항원-결합 단편은 하나 이상, 그리고 전형적으로는 2개의 가변 도메인의 실질적으로 전부를 포함할 것이며, 여기서 CDR 영역의 전부 또는 실질적으로 전부는 비-인간 면역글로불린의 것들에 상응하고, 프레임워크 영역의 전부 또는 실질적으로 전부는 인간 면역글로불린 서열의 것들이다. 인간화 항체 항원-결합 단편은 면역글로불린 불변 영역(Fc), 전형적으로는 인간 면역글로불린의 것의 적어도 일부를 포함할 수 있다.
GPRC5D-결합 아암
본 명세서에 기재된 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체는 GPRC5D에 특이적인 항원-결합 아암을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 인간 GPRC5D에 결합한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 인간 GPRC5D 및 사이노몰거스 원숭이 GPRC5D, 바람직하게는 이들의 세포외 도메인에 결합한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 인간 GPRC5D에 결합하지만, 사이노몰거스 원숭이 GPRC5D에는 결합하지 않는다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 116의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드의 하나 이상의 잔기에 결합한다.
표 2는 본 명세서에 기재된 일부 GPRC5D-특이적 항체의 예에 대한 요약을 제공한다:
[표 2]
일부 GPRC5D-특이적 항체 또는 항원-결합 단편의 특징은, 예를 들어, 미국 특허 제10,562,968호, 미국 특허 출원 공개 US2020/0231686호에서 확인할 수 있으며, 이들 각각의 내용은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 표 2에 기재된 항체 중 어느 하나의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 표 2에 기재된 항체 중 어느 하나의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 표 2에 기재된 항체 중 어느 하나의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 표 2에 기재된 항체 중 어느 하나의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 표 2에 기재된 항체 중 어느 하나의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 중쇄 및 표 2에 기재된 항체 중 어느 하나의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 또는 항원-결합과 GPRC5D에 대한 결합에 대해 경쟁한다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 표 2에 기재된 항체 중 어느 하나의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 표 2에 기재된 항체 중 어느 하나의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 표 2에 기재된 항체 중 어느 하나의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 중쇄 및 표 2에 기재된 항체 중 어느 하나의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 표 2에 기재된 바와 같은 항체 클론으로부터 유래된 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 표 2에 기재된 바와 같은 항체 클론으로부터 유래된 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 표 2에 기재된 바와 같은 항체 클론으로부터 유래된 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 클론 GC5B680, GC5B81, GC5B465, GS5B483, GC5B596, GC5B382, GC5B379, GC5B373, GC5B376, GC5B385, GC5B370, GC5B602, GC5B603, GC5B599, GC5B601, GC5B598, 또는 GC5B597의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 클론 GC5B680, GC5B81, GC5B465, GS5B483, GC5B596, GC5B382, GC5B379, GC5B373, GC5B376, GC5B385, GC5B370, GC5B602, GC5B603, GC5B599, GC5B601, GC5B598, 또는 GC5B597의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함한다. 일 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 클론 GC5B680의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함한다.
일부 예시적인 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 표 2에 기재된 바와 같은 항체 클론으로부터 유래된 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 예시적인 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 표 2에 기재된 바와 같은 항체 클론으로부터 유래된 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 예시적인 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 클론 GC5B680, GC5B81, GC5B465, GS5B483, GC5B596, GC5B382, GC5B379, GC5B373, GC5B376, GC5B385, GC5B370, GC5B602, GC5B603, GC5B599, GC5B601, GC5B598, 또는 GC5B597의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 클론 GC5B680의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-특이적 항체 클론은 28 nM 이하의 EC50으로 시험관내에서 ADCC를 유도할 수 있다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 12를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 13을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 14를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 12를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 13을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 14를 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 9를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 10을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 11을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다. GPRC5D-결합 아암은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 16과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 16과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 15와 동일하거나 실질적으로 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 49를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 53을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 57을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 49를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 53을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 57을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 61을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 64를 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 67을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다. GPRC5D-결합 아암은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 97과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 97과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 101과 동일하거나 실질적으로 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 50을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 54를 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 58을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 50을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 54를 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 58을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 61을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 64를 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 67을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다. GPRC5D-결합 아암은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 98과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 98과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 101과 동일하거나 실질적으로 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 51을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 55를 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 59를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 51을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 55를 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 59를 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 62를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 65를 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 68을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다. GPRC5D-결합 아암은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 99와 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 99와 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 102와 동일하거나 실질적으로 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 52를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 56을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 60을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 52를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 56을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 60을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 63을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 66을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 69를 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다. GPRC5D-결합 아암은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 100과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 100과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 103과 동일하거나 실질적으로 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 70을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 77을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 84를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 70을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 77을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 84를 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 91을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 93을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 95를 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다. GPRC5D-결합 아암은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 104와 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 104와 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 113과 동일하거나 실질적으로 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 50을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 78을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 85를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 50을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 78을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 85를 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 61을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 64를 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 67을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다. GPRC5D-결합 아암은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 105와 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 105와 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 101과 동일하거나 실질적으로 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 71을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 79를 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 86을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 71을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 79를 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 86을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 62를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 65를 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 68을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다. GPRC5D-결합 아암은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 106과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 106과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 102와 동일하거나 실질적으로 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 71을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 79를 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 59를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 71을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 79를 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 59를 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 62를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 65를 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 68을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다. GPRC5D-결합 아암은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 107과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 107과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 102와 동일하거나 실질적으로 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 72를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 80을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 87을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 72를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 80을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 87을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 62를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 65를 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 68을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다. GPRC5D-결합 아암은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 108과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 108과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 102와 동일하거나 실질적으로 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 73을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 81을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 88을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 73을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 81을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 88을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 91을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 93을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 95를 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다. GPRC5D-결합 아암은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 109와 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 109와 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 113과 동일하거나 실질적으로 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 74를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 82를 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 60을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 74를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 82를 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 60을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 63을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 66을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 69를 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다. GPRC5D-결합 아암은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 110과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 110과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 103과 동일하거나 실질적으로 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 75를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 80을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 89를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 75를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 80을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 89를 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 92를 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 94를 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 96을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다. GPRC5D-결합 아암은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 111과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 111과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 114와 동일하거나 실질적으로 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 76을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 83을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 90을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 76을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 83을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 90을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 63을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 66을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 69를 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다. GPRC5D-결합 아암은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 112와 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 서열 번호 112와 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 115와 동일하거나 실질적으로 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
GPRC5D-결합 아암은 재조합 수단에 의해 임의의 종으로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, GPRC5D-항원 결합 아암은 마우스, 래트, 염소, 말, 돼지, 소, 닭, 토끼, 낙타과, 당나귀, 인간, 또는 이들의 키메라 버전으로부터 유래될 수 있다. 인간에 대한 투여에 사용하기 위하여, 비-인간 유래 항원-결합 단편은 인간 환자에게 투여 시 더 적은 항원성을 나타내도록 유전적으로 또는 구조적으로 변경될 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 키메라인 항원-결합 단편을 포함한다.
일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 인간화 항원-결합 단편을 포함한다. 인간화 항원-결합 단편은 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소한의 서열을 함유하는 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 사슬 또는 이들의 단편(예컨대, Fv, Fab, Fab', F(ab')2, 또는 항체의 다른 항원-결합 하위서열)으로부터 유래될 수 있다. 대부분의 경우, 인간화 항체 또는 항원-결합 단편은, 수용자의 상보성-결정 영역(CDR)으로부터의 잔기가 원하는 특이성, 친화도, 및 능력을 갖는 비-인간 종, 예컨대 마우스, 래트, 또는 토끼의 CDR(공여자 항체)로부터의 잔기에 의해 대체된 인간 면역글로불린(수용자 항체) 또는 항원-결합 단편이다. 일반적으로, 인간화 항체 항원-결합 단편은 하나 이상, 그리고 전형적으로는 2개의 가변 도메인의 실질적으로 전부를 포함할 것이며, 여기서 CDR 영역의 전부 또는 실질적으로 전부는 비-인간 면역글로불린의 것들에 상응하고, 프레임워크 영역의 전부 또는 실질적으로 전부는 인간 면역글로불린 서열의 것들이다. 인간화 항체 항원-결합 단편은 면역글로불린 불변 영역(Fc), 전형적으로는 인간 면역글로불린의 것의 적어도 일부를 포함할 수 있다.
CD3-결합 아암
본 명세서에 기재된 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체는 CD3에 결합하는 항원-결합 아암을 포함한다. 일부 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 인간 CD3에 결합한다. 일부 바람직한 실시 형태에서, BCMA x GPRC5D x CD3 다중특이성 항체의 CD3-특이적 아암은 인간 1차 T 세포 및/또는 사이노몰거스 원숭이 1차 T 세포와 결합하고 이들을 활성화하는 CD3-특이적 항체로부터 유래된다. 일부 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 CD3ε의 N-말단에 있는 에피토프에 결합한다. 일부 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 CD3εδ 사슬의 잔기 22 내지 35(QDGNEEMGGITQTP(서열 번호 161)에 결합한다.
그러한 CD3-결합 아암은 5×10-7 M 이하, 예컨대 1×10-7 M 이하, 5×10-8 M 이하, 1×10-8 M 이하, 5×10-9 M 이하, 또는 1×10-9 M 이하의 친화도로 CD3에 결합할 수 있다. 일부 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 약 1 ×10-8 M, 약 2 ×10-8 M, 약 3 ×10-8 M, 약 4 ×10-8 M, 약 5 ×10-8 M, 약 6 ×10-8 M, 약 7 ×10-8 M, 약 8 ×10-8 M, 약 9×10-8 M, 또는 약 1×10-8 M의 친화도로 CD3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 약 1 ×10-8 M 내지 약 3 ×10-8 M, 약 2 ×10-8 M 내지 약 4 ×10-8 M, 약 1 ×10-8 M 내지 약 5 ×10-8 M, 약 2 ×10-8 M 내지 약 6 ×10-8 M, 또는 약 3 ×10-8 M 내지 약 8 ×10-8 M의 친화도로 CD3에 결합한다. 일 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 약 2.5 ×10-8 M의 친화도로 CD3에 결합한다. 일 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 약 3.1 ×10-8 M의 친화도로 CD3에 결합한다. 일부 실시 형태에서, CD3-결합 친화도는 표면 플라즈몬 공명(SPR) 검정에 의해 결정된다.
인간 CD3ε은 UniProt P07766(CD3E_HUMAN) 하에 기재되어 있다. 선행 기술에 기재된 항 CD3ε 항체는 SP34이다(문헌[Yang SJ, The Journal of Immunology (1986) 137; 1097-1100]). SP34는 영장류 및 인간 CD3 둘 모두와 반응한다. SP34는 파밍겐(Pharmingen)으로부터 입수가능하다. 선행 기술에 기재된 추가의 항 CD3 항체는 UCHT-1이다(WO2000041474 참조). 선행 기술에 기재된 추가의 항-CD3 항체는 BC-3이다(문헌[Fred Hutchinson Cancer Research Institute; GvHD의 I/II 상 시험에 사용됨, 문헌[Anasetti et al., Transplantation 54: 844(1992)]). SP-34는 오로지 CD3의 ε 사슬 상에 존재하는 에피토프만을 인식하는 반면에(문헌[Salmeron et al., (1991) J. Immunol. 147: 3047] 참조), UCHT-1 및 BC-3은 ε 사슬 및 γ 사슬 둘 모두에 의해 기여되는 에피토프를 인식한다는 점에서, SP34는 UCHT-1 및 BC-3과는 상이하다. 항체 SP34와 동일한 서열을 갖는 항체의 서열이 국제 특허 출원 공개 WO2008119565호, WO2008119566호, WO2008119567호, WO2010037836호, WO2010037837호 및 WO2010037838호에 언급되어 있다. 항체 SP34의 VH와 96% 동일한 서열이 미국 특허 제8236308호(국제 특허 출원 공개 WO2007042261호)에 언급되어 있다.
일부 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 CD3ε의 6개의 N-말단 아미노산을 포함하는 에피토프에 접촉한다. 일부 실시 형태에서, 다중특이적 항체의 CD3-특이적 결합 아암은 마우스 IgG3/람다 동종형인 마우스 단일클론 항체 SP34로부터 유래된다. 일부 실시 형태에서, CD3 결합 아암은 항체 SP34의 CDR을 포함한다. 이러한 CD3 결합 아암은 5×10-7 M 이하, 예컨대 1×10-7 M 이하, 5×10-8 M 이하, 1×10-8 M 이하, 5×10-9 M 이하, 또는 1×10-9 M 이하의 친화도로 CD3에 결합할 수 있다. CD3 특이적 결합 아암은 마우스 단일클론 항체 SP34의 아암의 인간화 버전일 수 있다. CD3 특이적 아암의 유래가 되는 항 CD3 항체를 인간화하기 위해 인간 프레임워크 적응(Human framework adaptation; HFA)이 사용될 수 있다.
표 3은 본 명세서에 기재된 일부 CD3-특이적 항체의 예의 요약을 제공한다:
[표 3]
일부 CD3-특이적 항체 또는 항원-결합 단편의 특징은, 예를 들어, 미국 특허 제10,562,968호 및 제10,072,088호, 미국 특허 출원 공개 US2019/0382481 호에서 확인할 수 있으며, 이들 각각의 내용은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
일부 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 표 3에 기재된 항체 중 어느 하나의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 표 3에 기재된 항체 중 어느 하나의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 표 3에 기재된 항체 중 어느 하나의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 표 3에 기재된 항체 중 어느 하나의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 표 3에 기재된 항체 중 어느 하나의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 중쇄 및 표 3에 기재된 항체 중 어느 하나의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체 또는 항원-결합과 CD3에 대한 결합에 대해 경쟁한다.
일부 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 표 3에 기재된 항체 중 어느 하나의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 표 3에 기재된 항체 중 어느 하나의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 표 3에 기재된 항체 중 어느 하나의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 중쇄 및 표 3에 기재된 항체 중 어느 하나의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 표 3에 기재된 항체 중 어느 하나의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 표 3에 기재된 항체 중 어느 하나의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 표 3에 기재된 항체 중 어느 하나의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 중쇄 및 표 3에 기재된 항체 중 어느 하나의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 경쇄를 포함한다. 다중특이적 항체의 일부 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 표 3으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄 쌍을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 클론 CD3B376의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D-결합 아암은 클론 CD3B219의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 서열 번호 4를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 5를 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 6을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 서열 번호 4를 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 5를 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 6을 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 1을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 2를 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 3을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다. CD3-결합 아암은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 서열 번호 8과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 서열 번호 8과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 7과 동일하거나 실질적으로 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 서열 번호 26과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 서열 번호 26과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 및 서열 번호 27과 동일하거나 실질적으로 동일한 경쇄를 포함한다.
일부 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 서열 번호 117을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 118을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 119를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 서열 번호 117을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 118을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 119를 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 123을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 124를 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 125를 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다. CD3-결합 아암은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 서열 번호 120과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 서열 번호 120과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 125와 동일하거나 실질적으로 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 서열 번호 121과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, CD3-결합 아암은 서열 번호 121과 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 및 서열 번호 126과 동일하거나 실질적으로 동일한 경쇄를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 중쇄 및/또는 경쇄의 CDR은, 예를 들어, 무로모납-CD3(OKT3), 오텔릭시주맙(TRX4), 테플리주맙(MGA031), 비실리주맙(Nuvion), TR-66 또는 X35-3, VIT3, BMA030(BW264/56), CLB-T3/3, CRIS7, YTH12.5, Fl 11-409, CLB-T3.4.2, TR-66, WT32, SPv-T3b, 11D8, XIII-141, XIII-46, XIII-87, 12F6, T3/RW2-8C8, T3/RW2-4B6, OKT3D, M-T301, SMC2, F101.01, UCHT-l, 및 WT-31과 같은, 알려진 항-CD3 항체로부터 유래된다.
일부 실시 형태에서, CD3 결합 아암은 IgG 또는 이의 유도체이다. 일부 실시 형태에서, CD3 결합 아암은 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4이다. CD3 결합 아암이 IgG4 동종형을 갖는 일부 실시 형태에서, 그것은 그의 Fc 영역 내에 S228P, L234A, L235A, F405L, 및 R409K 치환(들)을 함유한다. 일부 실시 형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 1차 인간 T 세포 상의 CD3ε과 결합한다. 일부 실시 형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 1차 사이노몰거스 T 세포 상의 CD3ε과 결합한다. 일부 실시 형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 1차 인간 및 사이노몰거스 T 세포 상의 CD3ε과 결합한다. 일부 실시 형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 1차 인간 CD3+ T 세포를 활성화한다. 일부 실시 형태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 1차 사이노몰거스 CD4+ T 세포를 활성화한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 삼중특이적 항체는 삼중특이적 항체에 대해 당업계에 기재된 임의의 형식을 채택할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 삼중특이적 항체는 이중특이적 항체 형식에 기초하여 작제된다. 이는 이중특이적 항체에 제3 항원-결합 아암을 첨가함으로써 달성될 수 있다. 상이한 포맷의 이중특이성 항체들이 기재되어 왔고, 최근에는 문헌[Chames and Baty (2009) Curr Opin Drug Disc Dev 12: 276]에 의해 검토되었다. 일부 실시 형태에서, 삼중특이적 항체는 다이아바디, 크로스-바디(cross-body), 또는 본 개시내용에 기재된 것들로서의 제어된 Fab 아암 교환을 통해 얻어진 이중특이적 항체인 이중특이적 항체를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 삼중특이적 항체는 이종이량체화를 강제하는 상보적 CH3 도메인을 갖는 IgG-유사 분자; 재조합 IgG 유사 이중 표적화 분자(여기서, 상기 분자의 양측은 각각 2개 이상의 상이한 항체의 Fab 단편 또는 Fab 단편의 부분을 포함함); IgG 융합 분자(여기서, 전장 IgG 항체가 추가의 Fab 단편 또는 Fab 단편의 부분에 융합됨); Fc 융합 분자(여기서, 단일쇄 Fv 분자 또는 안정화된 다이아바디가 중쇄 불변 도메인, Fc 영역 또는 이들의 부분에 융합됨); Fab 융합 분자(여기서, 상이한 Fab 단편이 함께 융합됨); ScFv- 및 다이아바디-기반 및 중쇄 항체(예를 들어, 도메인 항체, 나노바디) - 여기서, 상이한 단일쇄 Fv 분자 또는 상이한 다이아바디 또는 상이한 중쇄 항체(예를 들어, 도메인 항체, 나노바디)가 서로 또는 다른 단백질 또는 담체 분자에 융합됨 - 를 포함한다.
일부 실시형태에서, 상보적 CH3 도메인 분자를 갖는 IgG-유사 분자는 Triomab/Quadroma(Trion Pharma/Fresenius Biotech), 노브-인투-홀(Knob-into-Hole)(Genentech), CrossMAb(Roche) 및 정전기적-매칭(electrostatically-matched)(Amgen), LUZ-Y(Genentech), 가닥 교환 조작된 도메인 바디(Strand Exchange Engineered Domain body)(SEEDbody)(EMD Serono), Biclonic(Merus), DuoBody(Genmab A/S), 및 다른 비대칭 돌연변이(예를 들어, Zymeworks)를 포함한다.
일부 실시형태에서, 재조합 IgG-유사 이중 표적화 분자는 이중 표적화(Dual Targeting)(DT)-Ig (GSK/Domantis), 투-인-원 항체(Two-in-one Antibody) (Genentech), 가교결합된(Cross-linked) Mab (Karmanos Cancer Center), mAb2 (F-Star) 및 CovX-바디 (CovX/Pfizer)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, IgG 융합 분자는 이중 가변 도메인(Dual Variable Domain, DVD)-Ig (Abbott), IgG-유사 이중특이체 (InnClone/Eli Lilly), Ts2Ab (MedImmune/AZ) 및 BsAb (Zymogenetics), HERCULES (Biogen Idec) 및 TvAb (Roche)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, Fc 융합 분자는 ScFv/Fc 융합체 (Academic Institution), SCORPION (Emergent BioSolutions/Trubion, Zymogenetics/BMS), 이중 친화성 재표적화 기술(Dual Affinity Retargeting Technology)(Fc-DART) (MacroGenics) 및 이중(Dual)(ScFv)2-Fab (National Research Center for Antibody Medicine--China)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, Fab 융합 이중특이성 항체는 F(ab)2 (Medarex/AMGEN), 이중-작용체(Dual-Action) 또는 Bis-Fab (Genentech), 독-앤드-록(Dock-and-Lock, DNL) (ImmunoMedics), 2가 이중특이체(Bivalent Bispecific) (Biotecnol) 및 Fab-Fv (UCB-Celltech)를 포함한다. ScFv-, 다이아바디-기반 및 도메인 항체는 이중특이성 T 세포 인게이저(Bispecific T Cell Engager)(BiTE) (Micromet), 탠덤 다이아바디(Tandem Diabody)(Tandab) (Affimed), 이중 친화성 재표적화 기술(DART) (MacroGenics), 단일쇄 다이아바디(Single-chain Diabody) (Academic), TCR 유사 항체(TCR-like Antibody) (AIT, ReceptorLogics), 인간 혈청 알부민 ScFv 융합체(Human Serum Albumin ScFv Fusion) (Merrimack) 및 COMBODY (Epigen Biotech), 이중 표적화 나노바디(dual targeting nanobody) (Ablynx), 이중 표적화 중쇄 단독 도메인 항체를 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
본 개시내용의 전장 삼중특이적 항체는, 공발현을 사용하거나 무세포 환경에서의 시험관내에서 각각의 하프 분자 내의 중쇄 CH3 계면에 치환을 도입하여 별개의 특이성을 갖는 2개의 항체 하프 분자의 이종이량체 형성을 유리하게 함으로써, 예를 들어 2개의 단일특이적 2가 항체들 사이의 Fab 아암 교환(또는 하프 분자 교환)을 사용하여 생성할 수 있다. Fab 아암 교환 반응은 이황화-결합 이성질화 반응 및 CH3 도메인의 해리-회합의 결과이다. 모 단일특이성 항체의 힌지 영역 내의 중쇄 이황화물 결합은 환원된다. 모 단일특이성 항체들 중 하나의, 생성된 유리 시스테인은, 제2 모 단일특이성 항체 분자의 시스테인 잔기와 중쇄간 이황화물 결합을 형성하고, 동시에 모 항체의 CH3 도메인이 해리-회합에 의해 방출 및 재형성된다. Fab 아암의 CH3 도메인은 동종이량체화에 비하여 이종이량체화에 유리하도록 조작될 수 있다. 생성되는 생성물은, 별개의 에피토프, 예를 들어, BCMA(또는 GPRC5D) 상의 에피토프 및 CD3 상의 에피토프에 각각 결합하는 2개의 Fab 아암 또는 하프 분자를 갖는 이중특이적 항체이다. 이어서, 제3 항원-결합 아암을 이중특이적 항체에, 예를 들어, 제1 중쇄 또는 제2 중쇄의 C-말단에 도입할 수 있으며, 이는 제3 에피토프, 예를 들어, GPRC5D(또는 BCMA)에 결합할 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "동종이량체화"는 동일한 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄의 상호작용을 지칭한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "동종이량체"는 동일한 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄를 갖는 항체를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "이종이량체화"는 동일하지 않은 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄의 상호작용을 지칭한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "이종이량체"는 동일하지 않은 CH3 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄를 갖는 항체를 지칭한다.
"노브-인-홀" 전략(예를 들어, PCT 국제 출원 공개 WO 2006/028936호 참조)을 사용하여 전장 이중특이적 항체를 생성할 수 있다. 간략하게 말해서, 인간 IgG 내에 CH3 도메인의 계면을 형성하는 선택된 아미노산이 CH3 도메인 상호작용에 영향을 주는 위치에서 돌연변이화되어 이종이량체 형성을 촉진할 수 있다. 작은 측쇄를 갖는 아미노산(홀)이 제1 항원에 결합하는 항체의 중쇄 내로 도입되고, 큰 측쇄를 갖는 아미노산(노브)이 제2 항원에 결합하는 항체의 중쇄 내로 도입된다. 2개의 항체의 공발현 후에, "홀"을 갖는 중쇄와 "노브"를 갖는 중쇄의 우선적인 상호작용의 결과로서 이종이량체가 형성된다. 노브와 홀을 형성하는 예시적인 CH3 치환 쌍은 다음과 같다(제1 중쇄의 제1 CH3 도메인 내의 변형된 위치/제2 중쇄의 제2 CH3 도메인 내의 변형된 위치로서 표현됨): T366Y/F405A, T366W/ F405W, F405W/Y407A, T394W/Y407T, T394S/Y407A, T366W/T394S, F405W/T394S, 및 T366W/T366S_L368A_Y407V.
본 명세서에 기재된 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편의 일부 실시 형태에서, Fc 도메인 중 하나는 돌연변이 T366S, L368A, 및 Y407V를 포함하고 다른 Fc 도메인은 돌연변이 T366W를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 항원 결합 아암(예를 들어, CD3 결합 아암)의 제1 중쇄 부분(HC1)의 Fc 도메인은 돌연변이 T366S, L368A, 및 Y407V를 포함하고, 제2 항원 결합 아암 및/또는 제3 항원-결합 아암의 제2 중쇄 부분(HC2)의 Fc 도메인(예를 들어, GPRC5D/BCMA 결합 아암 또는 BCMA 결합 아암)은 돌연변이 T366W를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 항원-결합 아암 및/또는 제3 항원-결합 아암(예를 들어, GPRC5D/BCMA 결합 아암 또는 BCMA 결합 아암)의 HC2의 Fc 도메인은 돌연변이 T366S, L368A, 및 Y407V를 포함하고, 제1 항원-결합 아암(예를 들어, CD3 결합 아암)의 HC1의 Fc 도메인은 돌연변이 T366W를 포함한다.
하나의 CH3 표면에서 양성 하전된 잔기 및 제2의 CH3 표면에서 음성 하전된 잔기를 치환함으로써 정전기 상호작용을 사용하여 중쇄 이종이량체화를 촉진하는 것과 같은 다른 전략이 사용될 수 있으며, 이는 미국 특허 출원 공개 US2010/0015133호; 미국 특허 출원 공개 US2009/0182127호; 미국 특허 출원 공개 US2010/028637호, 또는 미국 특허 출원 공개 US2011/0123532호에 기재된 바와 같다. 다른 전략에서는, 미국 특허 출원 공개 US2012/0149876호 또는 미국 특허 출원 공개 US2013/0195849호(Zymeworks)에 기재된 바와 같이 하기 치환(제1 중쇄의 제1 CH3 도메인 내의 변형된 위치/제2 중쇄의 제2 CH3 도메인 내의 변형된 위치로서 표현됨)에 의해 이종이량체화가 촉진될 수 있다: L351Y_F405AY407V/T394W, T366I_K392M_T394W/F405A_Y407V, T366L_K392M_T394W/F405A_Y407V, L351Y_Y407A/T366A_K409F, L351Y_Y407A/T366V K409F Y407A/T366A_K409F, 또는 T350V_L351Y_F405A Y407V/T350V_T366L_K392L_T394W.
상기 기재된 방법에 더하여, 본 발명의 삼중특이적 항체는, 국제 특허 출원 공개 W02011/131746호에 기재된 방법에 따라, 2개의 단일특이적 동종이량체성 항체의 CH3 영역 내에 비대칭 돌연변이를 도입시키는 단계 및 이황화물 결합 이성질화를 가능하게 하는 환원성 조건에서 2개의 모 단일특이적 동종이량체성 항체로부터 삼중특이적 이종이량체성 항체를 형성하는 단계에 의해 무세포 환경에서 시험관내에서 생성될 수 있다. 상기 방법에서, 제1 단일특이성 2가 항체(예를 들어, 항 GPRC5D 항체) 및 제2 단일특이성 2가 항체(예를 들어, 항 CD3 항체)는 이종이량체 안정성을 촉진하는 CH3 도메인에서 특정 치환을 갖도록 조작되며; 항체는 힌지 영역의 시스테인이 이황화물 결합 이성질화를 거치기에 충분한 환원 조건 하에서 함께 인큐베이션되어; 이로써 Fab 아암 교환에 의해 삼중특이적 항체를 생성한다. 인큐베이션 조건은 비환원성 조건으로 최적으로 회복될 수 있다. 사용될 수 있는 예시적인 환원제는 2-메르캅토에틸아민(2-MEA), 다이티오트레이톨(DTT), 다이티오에리트리톨(DTE), 글루타티온, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀(TCEP), L-시스테인 및 베타-메르캅토에탄올이며, 바람직하게는 환원제는 2-메르캅토에틸아민, 다이티오트레이톨 및 트리스(2-카르복시에틸)포스핀으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 예를 들어, pH 5 내지 8에서, 예를 들어 pH 7.0에서 또는 pH 7.4에서 적어도 25 mM 2-MEA의 존재 하에서 또는 적어도 0.5 mM 다이티오트레이톨의 존재 하에서 20℃ 이상의 온도에서 90분 이상 동안의 인큐베이션이 사용될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 삼중특이적 항체 또는 항원-결합 단편은 IgG 또는 이의 유도체이다. IgG 부류는 인간에서 하기의 4가지 동종형으로 분류된다: IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4. 이들은 Fc 영역의 아미노산 서열에서 95% 초과의 상동성을 공유하지만, 힌지 영역의 아미노산 조성 및 구조에서 큰 차이를 나타낸다. Fc 영역은 이펙터 기능, 예컨대 항체-의존성 세포성 세포독성(ADCC) 및 보체-의존성 세포독성(CDC)을 매개한다. ADCC에서는, 항체의 Fc 영역이 자연 살해세포 및 대식세포와 같은 면역 이펙터 세포의 표면 상의 Fc 수용체(FcγR)에 결합하여, 표적화된 세포의 식세포작용 또는 용해로 이어진다. CDC에서는, 항체가 세포 표면에서 보체 캐스케이드를 촉발시킴으로써 표적화된 세포를 사멸시킨다. 본 명세서에 기재된 항체는, 상이한 이펙터 기능들을 달성하도록 Fc 서열이 변형되어 있는 변형된 버전을 포함한, IgG 동종형들 중 임의의 것과 조합된 가변 도메인의 기재된 특징을 갖는 항체를 포함한다.
치료적 항체의 많은 응용에 있어서, Fc-매개 이펙터 기능은 작용 기전의 일부가 아니다. 이들 Fc-매개 이펙터 기능은 탈기전 독성을 야기함으로써 유해할 수 있고 잠재적으로 안전성 위험을 제기할 수 있다. Fc 영역을 조작하여 FcγR 또는 보체 인자에 대한 이들의 결합을 감소시킴으로써 이펙터 기능의 변형이 달성될 수 있다. 활성화 FcγR(FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIIa, 및 FcγRIIIb) 및 억제성 FcγR(FcγRIIb) 또는 제1 보체 성분(C1q)에 대한 IgG의 결합은 힌지 영역 및 CH2 도메인에 위치된 잔기에 의존한다. Fc 기능성을 감소 또는 침묵시키기 위해 돌연변이가 IgG1, IgG2 및 IgG4에 도입되어 왔다. 본 명세서에 기재된 항체는 이들 변형을 포함할 수 있다.
일 실시 형태에서, 항체는 하기 특성 중 하나 이상을 갖는 Fc 영역을 포함한다: (a) 모 Fc와 비교할 때 감소된 이펙터 기능; (b) FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb, FcγRIIIb, 및/또는 FcγRIIIa에 대한 감소된 친화도, (c) FcγRI에 대한 감소된 친화도, (d) FcγRIIa에 대한 감소된 친화도, (e) FcγRIIb에 대한 감소된 친화도, (f) FcγRIIIb에 대한 감소된 친화도, 또는 (g) FcγRIIIa에 대한 감소된 친화도.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 IgG 또는 이의 유도체, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4 동종형이다. 항체가 IgG1 동종형을 갖는 일부 실시 형태에서, 항체는 그의 Fc 영역 내에 L234A, L235A, D265S, 및/또는 K409R 치환(들)을 함유한다. 항체가 IgG4 동종형을 갖는 일부 실시 형태에서, 항체는 이의 Fc 영역 내에 S228P, L234A, 및 L235A 치환을 함유한다. 본 명세서에 기재된 항체는 이들 변형을 포함할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이적 항체의 Fc 도메인은 L234A, L235A, 및 D265S로부터 선택된 하나 이상의 돌연변이를 각각 포함한다. 일부 실시 형태에서, HC1 및 HC2의 Fc 도메인은 돌연변이 L234A, L235A, 및 D265S를 각각 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이적 항체의 중쇄 부분 중 하나의 Fc 도메인은 단백질 A에 대한 Fc 결합을 감소시키는 하나 이상의 돌연변이를 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 중쇄 부분 중 하나의 Fc 도메인은 돌연변이 H435R 및/또는 Y436F를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 항원-결합 아암 및/또는 제3 항원-결합 아암(예를 들어, GPRC5D/BCMA 결합 아암 또는 BCMA 결합 아암)의 HC2의 Fc 도메인은 돌연변이 H435R 및/또는 Y436F를 포함한다.
다양한 실시 형태에서, 제3 항원-결합 아암은 링커를 통해 제1 항원-결합 아암 또는 제2 항원-결합 아암의 Fc 도메인에 작동적으로 연결된다. 일부 실시 형태에서, 링커는 펩티드 링커이고, 임의의 자연 발생 아미노산을 포함할 수 있다. 링커 내로 포함될 수 있는 예시적인 아미노산은 Gly, Ser Pro, Thr, Glu, Lys, Arg, Ile, Leu, His 및 The이다. 링커는 제3 항원(예를 들어, BCMA 또는 GPRC5D)에 대한 결합과 같은 원하는 활성을 보유하도록 서로에 대해 정확한 입체배좌를 형성하는 방식으로 제3 항원-결합 아암 및 제1 항원-결합 아암 또는 제2 항원-결합 아암을 연결하기에 적절한 길이를 가져야 한다.
본 명세서에 기재된 삼중특이적 항체의 일부 실시 형태에서, HC1은 N-말단에서 C-말단으로, 제1 항원-결합 아암의 VH1, CH1 도메인, Fc 도메인, 링커, 및 제3 항원-결합 아암을 포함한다.
본 명세서에 기재된 삼중특이적 항체의 일부 실시 형태에서, HC2는 N-말단에서 C-말단으로, 제2 항원-결합 아암, Fc 도메인, 링커, 및 제3 항원-결합 아암을 포함한다.
다양한 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 다중특이적 항체에 사용되는 scFv는 N-말단에서 C-말단으로, VH, 링커, 및 VL(VH-L-VL) 또는 VL, 링커, 및 VH(VL-L-VH)를 포함한다. 일부 실시 형태에서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로, VL, 링커, 및 VH(VL-L-VH)를 포함한다. 일부 실시 형태에서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로, VH, 링커, 및 VL(VH-L-VL)을 포함한다.
링커는 약 5 내지 50개의 아미노산 길이일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 링커는 약 10 내지 40개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 약 10 내지 35개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 약 10 내지 30개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 약 10 내지 25개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 약 10 내지 20개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 약 15 내지 20개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 6개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 7개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 8개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 9개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 10개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 11개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 12개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 13개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 14개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 15개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 16개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 17개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 18개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 19개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 20개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 21개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 22개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 23개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 24개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 25개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 26개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 27개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 28개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 29개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 30개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 31개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 32개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 33개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 34개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 35개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 36개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 37개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 38개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 39개의 아미노산 길이이다. 일부 실시 형태에서, 링커는 40개의 아미노산 길이이다. 사용될 수 있는 예시적인 링커는 Gly 풍부 링커, Gly 및 Ser 함유 링커, Gly 및 Ala 함유 링커, Ala 및 Ser 함유 링커, 및 기타 가요성 링커이다.
다른 링커 서열은 임의의 면역글로불린 중쇄 또는 경쇄 동종형으로부터 유래되는 면역글로불린 힌지 영역, CL 또는 CH1의 부분들을 포함할 수 있다. 사용될 수 있는 예시적인 링커를 표 4에 나타낸다. 추가의 링커는, 예를 들어 국제 특허 출원 공개 WO2019/060695호에 기재되어 있다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 163의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 127의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 128의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 129의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 130의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 131의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 132의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 133의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 134의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 135의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 136의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 137의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 138의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 139의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 140의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 141의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 142의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 143의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 144의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 148의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 149의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 150의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 151의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 152의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 153의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 154의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 155의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 156의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 157의 아미노산 서열을 포함한다.
[표 4]
일 실시 형태에서, BCMA x GPRC5D x CD3 삼중특이적 항체의 HC1은 서열 번호 26과 동일하거나 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일 실시 형태에서, BCMA x GPRC5D x CD3 삼중특이적 항체의 LC는 서열 번호 27과 동일하거나 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일 실시 형태에서, BCMA x GPRC5D x CD3 삼중특이적 항체의 GPRC5D/BCMA 결합 아암은 서열 번호 28과 동일하거나 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일 실시 형태에서, BCMA x GPRC5D x CD3 삼중특이적 항체의 CD3/GPRC5D 커플링된 HC1은 서열 번호 29와 동일하거나 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일 실시 형태에서, BCMA x GPRC5D x CD3 삼중특이적 항체의 LC는 서열 번호 30과 동일하거나 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일 실시 형태에서, BCMA 결합 아암은 서열 번호 31과 동일하거나 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일 실시 형태에서, 본 명세서에는
a) 중쇄(HC1) 및 경쇄(LC)를 포함하는 CD3 결합 아암; 및
b) GPRC5D/BCMA 결합 아암을 포함하며,
여기서 HC1은 서열 번호 26과 동일하거나 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하고, LC는 서열 번호 27과 동일하거나 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하고, GPRC5D/BCMA 결합 아암은 서열 번호 28과 동일하거나 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 삼중특이적 항체 또는 이의 삼중특이적 결합 단편이 제공된다.
일 실시 형태에서, 본 명세서에는
a) 중쇄(HC1) 및 경쇄(LC)를 포함하는 CD3 결합 아암; 및
b) GPRC5D/BCMA 결합 아암을 포함하며,
여기서 HC1은 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하고, LC는 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하고, GPRC5D/BCMA 결합 아암은 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 삼중특이적 항체 또는 이의 삼중특이적 결합 단편이 제공된다.
일 실시 형태에서, 본 명세서에는
a) 중쇄(HC1) 및 경쇄(LC)를 포함하며, 여기서 HC1은 GPRC5D 결합 아암을 추가로 포함하는 CD3 결합 아암; 및
b) BCMA 결합 아암을 포함하며,
여기서 HC1은 서열 번호 29와 동일하거나 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하고, LC는 서열 번호 30과 동일하거나 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하고, BCMA 결합 아암은 서열 번호 31과 동일하거나 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 삼중특이적 항체 또는 이의 삼중특이적 결합 단편이 제공된다.
일 실시 형태에서, 본 명세서에는
a) 중쇄(HC1) 및 경쇄(LC)를 포함하며, 여기서 HC1은 GPRC5D 결합 아암을 추가로 포함하는 CD3 결합 아암; 및
b) BCMA 결합 아암을 포함하며,
여기서 HC1은 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하고, LC는 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함하고, BCMA 결합 아암은 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하는, 단리된 삼중특이적 항체 또는 이의 삼중특이적 결합 단편이 제공된다.
일 실시 형태에서, BCMA x GPRC5D x CD3 삼중특이적 항체는 BGCB463이다.
일 실시 형태에서, BCMA x GPRC5D x CD3 삼중특이적 항체는 BGCB491이다.
기재된 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 또는 항원-결합 단편에 더하여, 기재된 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 또는 항원-결합 단편을 인코딩할 수 있는 폴리뉴클레오티드 서열이 또한 제공된다. 기재된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터가 또한 제공되며, BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 또는 항원-결합 단편을 발현하는 세포도 본 명세서에 제공된다. 개시된 벡터를 발현할 수 있는 세포가 또한 기재된다. 이들 세포는 포유류 세포(예컨대, 293F 세포, CHO 세포), 곤충 세포(예컨대, Sf7 세포), 효모 세포, 식물 세포, 또는 세균 세포(예컨대, E. 콜라이(E. coli))일 수 있다. 기재된 항체는 또한 하이브리도마 세포에 의해 생성될 수 있다. 기재된 항체는 또한 재조합적으로 생성될 수 있다.
재조합 항원-결합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 또한 본 발명의 범주 내에 있다. 일부 실시 형태에서, 기재된 폴리뉴클레오티드(및 이것이 인코딩하는 펩티드)는 리더(leader) 서열을 포함한다. 당업계에 알려진 임의의 리더 서열이 사용될 수 있다. 리더 서열은 제한 부위 또는 번역 개시 부위를 포함할 수 있지만 이로 한정되지 않는다.
본 명세서에 기재된 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 또는 항원-결합 단편은 기재된 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 또는 항원-결합 단편의 생물학적 특성(예를 들어, 결합 친화도 또는 면역 이펙터 활성)을 보유하는 단일 또는 다중 아미노산 치환, 결실, 또는 부가를 갖는 변이체를 포함한다. 본 발명과 관련하여, 달리 지시되지 않는 한, 돌연변이를 기재하기 위해 하기 표기법이 사용된다; i) 주어진 위치에서의 아미노산의 치환은, 예를 들어 K409R로 표기되며, 이는 위치 409에서 라이신이 아르기닌으로 치환됨을 의미하고; ii) 특이적 변이체의 경우, 임의의 아미노산 잔기를 나타내기 위해 코드 Xaa 및 X를 포함하는 특이적 3-문자 또는 1-문자 코드가 사용된다. 따라서, 위치 409에서의 라이신 대신 아르기닌의 치환은 K409R로 표기되거나, 또는 위치 409에서의 라이신 대신 임의의 아미노산 잔기의 치환은 K409X로 표시된다. 위치 409에서 라이신이 결실된 경우에, 그것은 K409*로 나타낸다. 당업자는 단일 또는 다수의 아미노산 치환, 결실, 또는 부가를 갖는 변이체를 생성할 수 있다.
이들 변이체는 하기를 포함할 수 있다: (a) 하나 이상의 아미노산 잔기가 보존적 또는 비보존적 아미노산으로 치환된 변이체, (b) 하나 이상의 아미노산이 폴리펩티드에 부가되거나 그로부터 결실된 변이체, (c) 하나 이상의 아미노산이 치환기를 포함하는 변이체, 및 (d) 폴리펩티드가, 그 폴리펩티드에 유용한 특성을 부여할 수 있는 다른 펩티드 또는 폴리펩티드, 예컨대 융합 파트너, 단백질 태그 또는 다른 화학적 모이어티(moiety), 예컨대 항체에 대한 에피토프, 폴리히스티딘 서열, 비오틴 모이어티 등과 융합된 변이체. 본 명세서에 기재된 항체 또는 항원-결합 단편은, 하나의 종으로부터의 아미노산 잔기가, 보존 또는 비보존된 위치에서, 다른 종에서의 상응하는 잔기 대신 치환된 변이체를 포함할 수 있다. 다른 실시 형태에서, 비보존된 위치에서의 아미노산 잔기가 보존 또는 비보존된 잔기로 치환된다. 유전자적(결실, 돌연변이 등), 화학적, 및 효소적 기법을 포함한 이들 변이체를 얻기 위한 기법은 당업자에게 알려져 있다.
본 명세서에 기재된 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 또는 항원-결합 단편은 몇몇 항체 동종형, 예컨대 IgM, IgD, IgG, IgA, 및 IgE를 구현할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 항체 동종형은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 동종형, 바람직하게는 IgG1 또는 IgG4 동종형이다. 항체 또는 이의 항원-결합 단편 특이성은 CDR의 아미노산 서열, 및 배열에 의해 대체로 결정된다. 따라서, 하나의 동종형의 CDR은 항원 특이성을 변경시키지 않고서 다른 동종형으로 전달될 수 있다. 대안적으로, 하이브리도마가 항원 특이성을 변경시키지 않고서 하나의 항체 동종형을 생성하는 것으로부터 다른 항체 동종형으로 전환(동종형 전환)되게 하기 위한 기법이 확립되어 왔다. 따라서, 그러한 항체 동종형들은 기재된 항체 또는 항원-결합 단편의 범주 내에 있다.
본 명세서에 기재된 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 또는 항원-결합 단편은 APRIL 결합에 대해 5.9 nM 이상의 IC50 값을 가질 수 있다. 기재된 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 또는 항원-결합 단편의 IC50은 ELISA-기반 방법 또는 유세포 분석(FACS)과 같은 당업계에 알려진 다양한 방법에 의해 결정될 수 있다. ELISA에 의해 IC50을 측정하기 위한 검정은, BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 또는 항원-결합 단편의 존재 및 부재 하에 플레이트-결합된 BCMA를 가지며, 다양한 농도의 APRIL이 사용된다. BCMA에 대한 APRIL의 결합을 차단하는 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 또는 항원-결합 단편은 "ELISA에 의해 측정되는 바와 같이 APRIL을 차단한다".
본 명세서에 기재된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터가 또한 제공된다. 벡터는 발현 벡터일 수 있다. 따라서, 관심 폴리펩티드를 인코딩하는 서열을 함유하는 재조합 발현 벡터는 본 발명의 범주 내에 있는 것으로 고려된다. 발현 벡터는 조절 서열(예를 들어, 프로모터, 인핸서), 선택 마커, 및 폴리아데닐화 신호와 같은 그러나 이로 한정되지 않는 하나 이상의 추가의 서열을 함유할 수 있다. 매우 다양한 숙주 세포를 형질전환시키기 위한 벡터는 잘 알려져 있으며, 플라스미드, 파지미드, 코스미드, 배큘로바이러스, 박미드(bacmid), 세균 인공 염색체(BAC), 효모 인공 염색체(YAC)뿐만 아니라, 다른 세균, 효모 및 바이러스 벡터를 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
본 발명의 범주 내의 재조합 발현 벡터는 적합한 조절 요소에 작동가능하게 연결될 수 있는 적어도 하나의 재조합 단백질을 인코딩하는 합성, 게놈, 또는 cDNA-유래 핵산 단편을 포함한다. 그러한 조절 요소는 전사 프로모터, 적합한 mRNA 리보솜 결합 부위를 인코딩하는 서열, 및 전사 및 번역의 종결을 제어하는 서열을 포함할 수 있다. 발현 벡터, 특히 포유류 발현 벡터는 또한 하나 이상의 비전사 요소, 예컨대 복제 기점, 발현시키고자 하는 유전자에 연결된 적합한 프로모터 및 인핸서, 다른 5' 또는 3' 플랭킹(flanking) 비전사 서열, 5' 또는 3' 비번역 서열(예컨대, 필요한 리보솜 결합 부위), 폴리아데닐화 부위, 스플라이스 도너 및 억셉터 부위, 또는 전사 종결 서열을 포함할 수 있다. 숙주에서 복제하는 능력을 부여하는 복제 기점이 또한 포함될 수 있다.
척추동물 세포를 형질전환시키는 데 사용되는 발현 벡터에서의 전사 및 번역 제어 서열은 바이러스 공급원에 의해 제공될 수 있다. 예시적인 벡터는 문헌[Okayama and Berg, 3 Mol. Cell. Biol. 280 (1983)]에 의해 기재된 바와 같이 작제될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 다중특이적 항체- 또는 항원-결합 단편-코딩 서열은 강력한 구성적 프로모터, 예컨대 하기 유전자에 대한 프로모터의 제어 하에 놓여 있다: 하이포잔틴 포스포리보실 트랜스퍼라제(HPRT), 아데노신 데아미나제, 피루베이트 키나제, 베타-액틴, 인간 미오신, 인간 헤모글로빈, 인간 근육 크레아틴 등. 게다가, 많은 바이러스성 프로모터가 진핵 세포에서 구성적으로 기능하고, 기재된 실시 형태와 함께 사용하기에 적합하다. 그러한 바이러스성 프로모터는, 제한 없이, 거대세포바이러스(CMV) 극초기 프로모터, SV40의 초기 및 후기 프로모터, 마우스 유선 종양 바이러스(MMTV) 프로모터, 말로니(Maloney) 백혈병 바이러스의 긴 말단 반복부(LTR), 인간 면역결핍 바이러스(HIV), 엡스타인 바 바이러스(Epstein Barr Virus, EBV), 라우스 육종 바이러스(Rous Sarcoma Virus, RSV), 및 다른 레트로바이러스, 및 단순 헤르페스 바이러스의 티미딘 키나제 프로모터를 포함한다. 일 실시 형태에서, BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편 코딩 서열은 유도성 프로모터, 예컨대 메탈로티오네인 프로모터, 테트라사이클린-유도성 프로모터, 독시사이클린-유도성 프로모터, 하나 이상의 인터페론-자극 반응 요소(ISRE)를 함유하는 프로모터, 예컨대 단백질 키나제 R 2',5'-올리고아데닐레이트 신테타제, Mx 유전자, ADAR1 등의 제어 하에 놓여 있다.
본 명세서에 기재된 벡터는 하나 이상의 내부 리보솜 침입 부위(들)(IRES)를 함유할 수 있다. 융합 벡터 내로의 IRES 서열의 포함은 일부 단백질의 발현을 향상시키는 데 유익할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 벡터 시스템은 하나 이상의 폴리아데닐화 부위(예를 들어, SV40)를 포함할 것이며, 이는 상기 언급된 핵산 서열들 중 임의의 것의 상류 또는 하류에 있을 수 있다. 벡터 성분들은 (즉, ORF들 사이에의 "스페이서" 뉴클레오티드의 도입에 의해) 유전자 산물을 발현시키기 위한 최적의 간격을 제공하는 방식으로 인접하게 연결 또는 배열될 수 있거나, 또는 다른 방식으로 위치될 수 있다. 조절 요소, 예컨대 IRES 모티프는 또한 발현을 위한 최적의 간격을 제공하도록 배열될 수 있다.
벡터는 선택 마커를 포함할 수 있으며, 선택 마커는 당업계에 잘 알려져 있다. 선택 마커는 양성 및 음성 선택 마커, 예를 들어, 항생제 저항성 유전자(예를 들어, 네오마이신 저항성 유전자, 하이그로마이신 저항성 유전자, 카나마이신 저항성 유전자, 테트라사이클린 저항성 유전자, 페니실린 저항성 유전자, 퓨로마이신 저항성 유전자, 블라스티사이딘 저항성 유전자), 글루타메이트 신타제 유전자, 간시클로비르 선택을 위한 HSV-TK, HSV-TK 유도체, 또는 6-메틸퓨린 선택을 위한 세균성 퓨린 뉴클레오시드 포스포릴라제 유전자를 포함한다(문헌[Gadi et al., 7 Gene Ther. 1738-1743 (2000)]). 선택 마커 또는 클로닝 부위를 인코딩하는 핵산 서열은 관심 폴리펩티드 또는 클로닝 부위를 인코딩하는 핵산 서열의 상류 또는 하류에 있을 수 있다.
본 명세서에 기재된 벡터는 다양한 세포를 기재된 항체 또는 항원-결합 단편을 인코딩하는 유전자로 형질전환시키는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 벡터는 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 또는 항원-결합 단편-생성 세포를 생성하기 위해 사용될 수 있다. 따라서, 다른 태양은 BCMA, GPRC5D, 및 CD3에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 예컨대 본 명세서에 기재되고 예시된 항체 또는 항원-결합 단편을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 벡터로 형질전환된 숙주 세포를 특징으로 한다.
세포 내로의 외래 유전자의 도입을 위한 다수의 기법이 당업계에 알려져 있고, 본 명세서에 기재되고 예시된 다양한 실시 형태에 따라, 기재된 방법을 수행하려는 목적을 위하여 재조합 세포를 작제하는 데 사용될 수 있다. 사용되는 기법은 숙주 세포로의 이종 유전자 서열의 안정한 전달을 제공하여, 이종 유전자 서열이 세포의 자손에 의해 상속가능하고 발현가능하도록, 그리고 수령 세포의 필요한 발달 및 생리학적 기능이 파괴되지 않도록 해야 한다. 사용될 수 있는 기술은 염색체 전달(예를 들어, 세포 융합, 염색체 매개 유전자 전달, 마이크로 세포 매개 유전자 전달), 물리적 방법(예를 들어, 형질감염, 스페로플라스트(spheroplast) 융합, 미세주사(microinjection), 전기천공, 리포솜 담체), 바이러스 벡터 전달(예를 들어, 재조합 DNA 바이러스, 재조합 RNA 바이러스) 등(문헌[Cline, 29 Pharmac. Ther. 69-92(1985)]에 기재됨)을 포함하지만 이로 제한되지 않는다. 인산칼슘 침전 및 세균 프로토플라스트(bacterial protoplast)와 포유류 세포의 폴리에틸렌 글리콜(PEG)-유도 융합이 또한 세포를 형질전환시키는 데 사용될 수 있다.
본 명세서에 기재된 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 또는 항원-결합 단편의 발현에 사용하기에 적합한 세포는 바람직하게는 진핵 세포, 더욱 바람직하게는 식물, 설치류, 또는 인간 기원의 세포, 비제한적인 예를 들어, 특히 NSO, CHO, CHOK1, perC.6, Tk-ts13, BHK, HEK293 세포, COS-7, T98G, CV-1/EBNA, L 세포, C127, 3T3, HeLa, NS1, Sp2/0 골수종 세포, 및 BHK 세포주이다. 게다가, 항체의 발현은 하이브리도마 세포를 사용하여 달성될 수 있다. 하이브리도마를 생성하기 위한 방법이 당업계에 잘 확립되어 있다.
본 명세서에 기재된 발현 벡터로 형질전환된 세포는 본 명세서에 기재된 항체 또는 항원-결합 단편의 재조합 발현을 위해 선택되거나 스크리닝될 수 있다. 재조합-양성 세포는 원하는 표현형, 예컨대 고수준 발현, 향상된 성장 특성, 또는, 예를 들어 단백질 변형 또는 변경된 번역 후 변형으로 인해 원하는 생화학적 특성을 갖는 단백질을 산출하는 능력을 나타내는 하위클론을 위해 증폭 및 스크리닝된다. 이들 표현형은 주어진 하위클론의 고유 특성에 기인하거나 돌연변이에 기인할 수 있다. 돌연변이는 화학물질, UV-파장 광, 방사선, 바이러스, 삽입 돌연변이원, DNA 불일치 수복의 억제, 또는 그러한 방법들의 조합의 사용을 통해 달성될 수 있다.
다중특이성 항체 및 이의 다중특이성 항원 결합 단편을 사용하는 치료적 조성물 및 치료 방법
상기 논의된 다중특이적 항체, 예를 들어 상기 논의된 BCMA x GPRC5D x CD3 삼중특이적 항체는 요법에 유용하다. 특히, 다중특이적 항체는 암을 치료하는 데 유용하다. 또한, 포유동물에서 과다증식성 장애의 치료를 위한 치료적 조성물이 본 명세서에 제공되며, 본 치료적 조성물은 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체 또는 다중특이성 항원 결합 단편의 치료적 유효량 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 바람직한 실시 형태에서, 다중특이적 항체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 또는 이의 다중특이적 항원-결합 단편, 더욱 바람직하게는 본 명세서에 기재된 바와 같은 BCMA x GPRC5D x CD3-삼중특이적 항체 또는 이의 BCMA x GPRC5D x CD3-삼중특이적 항원-결합 단편이다. 일 실시 형태에서, 상기 약제학적 조성물은 하기의 것들을 포함하는(그러나 이로 제한되지 않음) GPRC5D 및/또는 BCMA-발현 암의 치료를 위한 것이다: GPRC5D 및/또는 BCMA-발현 B 세포암, 예컨대 무증상 다발성 골수종(SMM)을 포함하는 다발성 골수종(MM); 및 GPRC5D 및/또는 BCMA가 발현되는 아직 결정되지 않은 다른 암. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 및/또는 BCMA-발현 암은 림프종의 재발성 또는 불응성 형태, 예컨대 다발성 골수종의 재발성 또는 불응성 형태이다. 상기 논의된 특이적 암을 포함하는 암, 예컨대 혈액암을 치료하기 위해 사용될 수 있는 특정 삼중특이적 항체는 항체 BGCB463 및 BGCB491을 포함한다.
일부 실시 형태에서, BCMA x GPRC5D x CD3 삼중특이적 항체 또는 이의 결합 단편은 R/R 다발성 골수종의 치료에 이용된다.
일부 실시 형태에서, BCMA x GPRC5D x CD3 삼중특이적 항체 또는 이의 결합 단편을 받는 대상체는 이전 치료를 받은 적이 있다. 예를 들어, 다발성 골수종을 치료하기 위해, 대상체는 프로테아좀 억제제(PI)(예를 들어, 마리조밉(살리노스포로아미드 A), 카르필조밉, 익사조밉), 면역조절 약물(IMiD), 이중특이적 제제, CAR-T 요법, 및/또는 항-CD38 항체와 같은 하나 이상의 치료제를 받았을 수 있다.
본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 a) 본 발명의 다중특이성 항체 또는 항체 단편의 유효량, 및 b) 약제학적으로 허용되는 담체 - 이는 불활성이거나 생리학적으로 활성일 수 있음 - 를 포함한다. 바람직한 실시 형태에서, 다중특이적 항체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 또는 이의 다중특이적 항원-결합 단편, 더욱 바람직하게는 본 명세서에 기재된 바와 같은 BCMA x GPRC5D x CD3-삼중특이적 항체 또는 이의 BCMA x GPRC5D x CD3-삼중특이적 항원-결합 단편이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "약제학적으로 허용되는 담체"는 생리학적으로 적합한 임의의 그리고 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 항세균제 및 항진균제 등을 포함한다. 적합한 담체, 희석제 및/또는 부형제의 예에는 물, 식염수, 인산염 완충 식염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 등뿐만 아니라, 이들의 임의의 조합 중 하나 이상을 포함한다. 많은 경우에, 조성물 중에 등장제, 예컨대 당류, 폴리알코올, 또는 염화나트륨을 포함하는 것이 바람직할 것이다. 특히, 적합한 담체의 관련 예는 (1) 약 1 mg/mL 내지 25 mg/mL의 인간 혈청 알부민을 함유하거나 함유하지 않는 둘베코 인산염 완충 식염수(pH 약 7.4), (2) 0.9% 식염수(0.9% w/v 염화나트륨(NaCl)), 및 (3) 5%(w/v) 덱스트로스를 포함하며; 또한 산화방지제, 예컨대 트립타민 및 안정화제, 예컨대 Tween 20®을 함유할 수 있다.
본 발명에서의 조성물은 또한, 특정 장애를 치료하는 데 필요하다면, 추가의 치료제를 함유할 수 있다. 바람직하게는, 다중특이성 항체 또는 항체 단편과 보충적 활성 화합물은 서로에게 불리한 영향을 주지 않는 상보적 활성을 가질 것이다. 일부 실시 형태에서, 추가의 치료제는 시타라빈, 안트라사이클린, 히스타민 다이하이드로클로라이드, 또는 인터류킨 2이다. 일부 실시 형태에서, 추가의 치료제는 화학요법제, 항-CD38 제제, 면역조절 이미드 약물(IMiD), 면역 체크포인트 억제제, 면역 공동자극제, 감마 세크레타제 억제제, T-세포 인핸서, 또는 이들의 임의의 조합이다. 일부 실시 형태에서, 추가의 치료제는 항-CD38 항체(예를 들어, 다라투무맙) 와 같은 항-CD38 제제이다. 일부 실시 형태에서, 추가의 치료제는 면역조절 이미드 약물(IMiD), 예컨대 레날리도미드, 및 포말리도미드이다. 일부 실시 형태에서, 추가의 치료제는 Ig 및 ITIM 도메인(TIGIT)을 갖는 항 T 세포 면역수용체 및 항-PD-1과 같은 면역 체크포인트 억제제이다. 일부 실시 형태에서, 추가의 치료제는 면역 공동자극제, 예컨대 CD137을 표적화하는 제제(예를 들어, CD137 공동자극 이중특이적 항체)이다. 일부 실시 형태에서, 추가의 치료제는 T-세포 인핸서, 예컨대 IL-2 첨가이다.
본 발명의 조성물은 다양한 형태일 수 있다. 이들은, 예를 들어 액체, 반고체, 및 고체 투여형을 포함하지만, 바람직한 형태는 의도된 투여 방식 및 치료적 응용에 좌우된다. 전형적인 바람직한 조성물은 주사가능 또는 주입가능 용액의 형태이다. 바람직한 투여 방식은 비경구(예를 들어, 정맥내, 근육내, 복막내, 피하) 투여이다. 바람직한 실시 형태에서, 본 발명의 조성물은 일정 시간에 걸쳐 연속 주입에 의해 또는 볼루스(bolus)로서 정맥내 투여된다. 다른 바람직한 실시 형태에서, 이들은 국부뿐만 아니라 전신 치료적 효과를 발휘하도록 근육내, 피하, 관절내, 골액낭내, 종양내, 종양 주변, 병변내, 또는 병변 주변 경로에 의해 주사된다.
본 발명의 항체, 항체 단편 또는 항체 복합체를 적절한 용매 중에 필요한 양으로 혼입시킨 후, 미세여과에 의해 멸균함으로써 비경구 투여를 위한 멸균 조성물이 제조될 수 있다. 용매 또는 비히클로서, 물, 식염수, 인산염 완충 식염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 등뿐만 아니라 이들의 조합도 사용될 수 있다. 많은 경우에, 조성물 중에 등장화제, 예컨대 당류, 다가알코올 또는 염화나트륨을 포함하는 것이 바람직할 것이다. 이들 조성물은 또한 애쥬번트(adjuvant), 특히 습윤제, 등장제, 유화제, 분산제 및 안정제를 함유할 수 있다. 비경구 투여를 위한 멸균 조성물은 또한 멸균 고체 조성물 형태로 제조될 수 있는데, 이것은 멸균수 또는 임의의 다른 주사가능 멸균 매질 중에서 사용 시에 용해될 수 있다.
다중특이성 항체 또는 항체 단편은 또한 경구 투여될 수 있다. 경구 투여를 위한 고체 조성물로서, 정제, 환제, 분말(젤라틴 캡슐, 샤세(sachet)) 또는 과립이 사용될 수 있다. 이들 조성물에서, 본 발명에 따른 활성 성분은 아르곤 스트림 하에서 하나 이상의 불활성 희석제, 예컨대 전분, 셀룰로스, 수크로스, 락토스 또는 실리카와 혼합된다. 이들 조성물은 또한 희석제 이외의 물질, 예를 들어 하나 이상의 윤활제, 예컨대 마그네슘 스테아레이트 또는 활석, 착색제, 코팅(당-코팅 정제) 또는 글레이즈를 포함할 수 있다.
경구 투여를 위한 액체 조성물로서, 불활성 희석제, 예컨대 물, 에탄올, 글리세롤, 식물성 오일 또는 파라핀유를 함유하는 약제학적으로 허용되는 용액, 현탁액, 에멀젼, 시럽 및 엘릭서(elixir)가 사용될 수 있다. 이들 조성물은 희석제 이외의 물질, 예를 들어 습윤, 감미, 증점, 향미 또는 안정화 제품을 포함할 수 있다.
용량은 원하는 효과, 치료의 지속기간, 및 사용되는 투여 경로에 따라 달라지며; 이들은 일반적으로 성인에 대해 5 mg 내지 1000 mg/일이며, 단위 용량은 1 mg 내지 250 mg의 활성 물질의 범위이다. 일반적으로, 의사는 치료를 받는 대상의 연령, 체중 및 그에 특이적인 임의의 다른 인자에 따라 적절한 투여량을 결정할 것이다.
GPRC5D 및/또는 BCMA + 세포의 사멸화를 필요로 하는 환자에게, 상기 GPRC5D 및/또는 BCMA에 결합하고 T 세포를 동원하여 상기 GPRC5D 및/또는 BCMA + 세포를 사멸시킬 수 있는(즉, T 세포 방향전환) 다중특이적 항체를 투여하는 단계에 의해 GPRC5D 및/또는 BCMA + 세포를 사멸시키기 위한 방법이 또한 본 명세서에 제공된다. 본 발명의 다중특이성 항체 또는 항체 단편 중 임의의 것이 치료적으로 사용될 수 있다. 예를 들어, 일 실시 형태에서 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체는 대상체에서 암을 치료하기 위해 치료적으로 사용될 수 있다.
바람직한 실시 형태에서, 본 발명의 다중특이성 항체 또는 항체 단편은 포유동물에서의 과다증식성 장애의 치료에 사용된다. 더 바람직한 실시 형태에서, 상기에 개시되고 본 발명의 다중특이성 항체 또는 항체 단편을 함유하는 약제학적 조성물들 중 하나가 포유동물에서의 과다증식성 장애의 치료에 사용된다. 일 실시 형태에서, 장애는 암이다. 특히, 암은 하기의 것들을 포함하는(그러나 이로 제한되지 않음) GPRC5D 및/또는 BCMA-발현 암이다: GPRC5D 및/또는 BCMA-발현 B 세포암, 예컨대 무증상 다발성 골수종(SMM)을 포함하는 다발성 골수종(MM); 및 GPRC5D 및/또는 BCMA가 발현되는 아직 결정되지 않은 다른 암. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 및/또는 BCMA-발현 암은 림프종의 재발성 또는 불응성 형태, 예컨대 다발성 골수종의 재발성 또는 불응성 형태이다. 바람직한 실시 형태에서, 다중특이적 항체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 또는 이의 다중특이적 항원-결합 단편, 더욱 바람직하게는 본 명세서에 기재된 바와 같은 BCMA x GPRC5D x CD3-삼중특이적 항체 또는 이의 BCMA x GPRC5D x CD3-삼중특이적 항원-결합 단편이다.
따라서, 본 발명의 약제학적 조성물은 하기의 것들을 포함하는(그러나 이로 제한되지 않음) 다양한 암 또는 장애의 치료 또는 예방에 유용하다: 하기의 것들을 포함하는(그러나 이로 제한되지 않음) GPRC5D 및/또는 BCMA-발현 암: GPRC5D 및/또는 BCMA-발현 B/형질 세포암, 예컨대 급성 다발성 골수종(MM) 또는 전암성(premalignant) 골수종, 예컨대 MGUS(의미불명의 단일클론 고감마글로불린혈증(Monoclonal Gammopathy of Undetermined Significance)) 및 SMM(무증상 다발성 골수종(Smoldering Multiple myeloma)) 및 형질 세포종; 및 GPRC5D 및/또는 BCMA가 발현되는 아직 결정되지 않은 다른 암, 또는 다른 형질 세포 장애, 예컨대 아밀로이드증 및 루프스. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 및/또는 BCMA-발현 암은 림프종의 재발성 또는 불응성 형태, 예컨대 다발성 골수종의 재발성 또는 불응성 형태이다.
유사하게, GPRC5D 및/또는 BCMA-발현 표적 세포, 또는 그러한 표적 세포를 함유하는 조직을, 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 존재 하에, 단독으로 또는 다른 세포독성제 또는 치료제와 조합하여, 본 발명의 다중특이적 항체 또는 항체 단편의 유효량과 접촉시키는 단계를 포함하는, 선택된 세포 집단의 성장을 억제하기 위한 방법이 본 명세서에 추가로 제공된다. BCMA 및 GPRC5D에 대한 리간드(APIL, BAFF 등)의 결합을 차단하는 BCMAxGPRC5DxCD3 항체는 BCMA- 및 GPRC5D- 매개 신호전달을 차단하고 표적 세포의 억제 또는 세포 사멸로 이어질 수 있다. 바람직한 실시 형태에서, 다중특이적 항체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 또는 이의 다중특이적 항원-결합 단편, 더욱 바람직하게는 본 명세서에 기재된 바와 같은 BCMA x GPRC5D x CD3-삼중특이적 항체 또는 이의 BCMA x GPRC5D x CD3-삼중특이적 항원-결합 단편이다.
일부 실시 형태에서, 다중특이적 항체 또는 이를 포함하는 약제학적 조성물의 투여를 포함하는 본 명세서에 기재된 방법은 다른 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 적합한 다른 치료제는 항-CD38 제제, 면역조절 이미드 약물(IMiD), 면역 체크포인트 억제제, 면역 공동자극제, 감마 세크레타제 억제제, T-세포 인핸서(예를 들어, IL-2 첨가), 토실리주맙, 또는 이들의 임의의 조합을 제한 없이 포함한다. 일부 실시 형태에서, 추가의 치료제는 항-CD38 항체(예를 들어, 다라투무맙) 와 같은 항-CD38 제제이다. 일부 실시 형태에서, 추가의 치료제는 면역조절 이미드 약물(IMiD), 예컨대 레날리도미드, 및 포말리도미드이다. 일부 실시 형태에서, 추가의 치료제는 Ig 및 ITIM 도메인(TIGIT)을 갖는 항-T 세포 면역수용체 및 항-PD-1과 같은 면역 체크포인트 억제제이다. 일부 실시 형태에서, 추가의 치료제는 면역 공동자극제, 예컨대 CD137을 표적화하는 제제(예를 들어, CD137 공동자극 이중특이적 항체)이다. 본 명세서에 기재된 BCMA x GPRC5D x CD3 삼중특이적 항체와 같은 T 세포-방향전환 항체의 존재 하에 조건부 효능작용을 갖는 저-친화도 CD137 결합제의 사용은 항종양 활성을 향상시키고, 잠재적으로 T 세포 지속성을 개선할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 추가의 치료제는 시타라빈, 안트라사이클린, 히스타민 다이하이드로클로라이드, 또는 인터류킨 2이다. 바람직한 실시 형태에서, 추가의 치료제는 화학요법제이다. 선택된 세포 집단의 성장을 억제하기 위한 방법은 시험관내, 생체내(in vivo), 또는 생체외(ex vivo)에서 실시될 수 있다.
시험관내 사용의 예는, 병든 세포 또는 악성 세포를 사멸시키고; 이식편-대-숙주-질환(GVHD)을 방지하기 위한 동일한 환자 내로의 이식 전의 자가유래 골수의 처리; 표적 항원을 발현하지 않는 원하는 변이체를 제외한 모든 세포를 사멸시키거나; 원하지 않는 항원을 발현하는 변이체를 사멸시키기 위한 세포 배양물의 처리를 포함한다. 비임상적 시험관내 사용의 조건은 당업자에 의해 용이하게 결정된다.
임상적 생체외 사용의 예는 암 치료에서 자가 이식 전에 골수로부터 종양 세포를 제거하기 위한 것이다. 치료는 하기와 같이 수행될 수 있다. 골수가 환자 또는 다른 개체로부터 수집되고, 이어서 본 발명의 세포독성제가 첨가된 혈청을 함유하는 배지 중에서 인큐베이션된다. 농도는 약 37℃에서 약 30 분 내지 약 48 시간 동안 약 10 μM 내지 1 μM의 범위이다. 인큐베이션의 시간 및 농도의 정확한 조건, 즉 용량은 당업자에 의해 용이하게 결정된다. 인큐베이션 후에, 골수 세포를 혈청을 함유하는 배지로 세척하고, 알려진 방법에 따라 i.v. 주입에 의해 환자에게 반환시킨다. 환자가 골수 채취 시간과 치료된 세포의 재주입의 시간 사이에 다른 치료, 예컨대 일련의 절제 화학요법 또는 전신 방사선 조사를 받는 상황이라면, 치료된 골수 세포는 표준 의료 장비를 사용하여 액체 질소 중에 동결 상태로 저장된다.
임상적 생체내 사용을 위하여, 다중특이성 항체 또는 항원 결합 단편의 치료적 유효량이 이를 필요로 하는 대상에게 투여된다. 예를 들어, BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 및 이의 다중특이적 항원-결합 단편은 GPRC5D 및/또는 BCMA-발현 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 GPRC5D 및/또는 BCMA-발현 암의 치료에 유용할 수 있다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 및/또는 BCMA-발현 암은 B-세포 암, 예컨대 무증상 다발성 골수종(SMM)을 포함하는 다발성 골수종(MM)이다. 일부 실시 형태에서, GPRC5D 및/또는 BCMA-발현 암은 림프종의 재발성 또는 불응성 형태, 예컨대 다발성 골수종의 재발성 또는 불응성 형태이다. 바람직한 실시 형태에서, 다중특이적 항체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 또는 이의 다중특이적 항원-결합 단편, 더욱 바람직하게는 본 명세서에 기재된 바와 같은 BCMA x GPRC5D x CD3-삼중특이적 항체 또는 이의 BCMA x GPRC5D x CD3-삼중특이적 항원-결합 단편이다. 일부 실시 형태에서, 대상은 포유동물, 바람직하게는 인간이다. 일부 실시 형태에서, 다중특이성 항체 또는 항원 결합 단편은 멸균성에 대해 시험된 용액으로서 투여될 것이다.
상기의 치료 및 사용 방법에서의 투여 계획은 최적의 원하는 반응(예를 들어, 치료 반응)을 제공하도록 조정된다. 예를 들어, 단일 볼루스가 투여될 수 있거나, 수회 분할 용량이 시간 경과에 따라 투여될 수 있거나, 용량은 치료 상황의 위급성에 따라 비례하여 감소되거나 증가될 수 있다. 비경구 조성물을 투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위하여 투여 단위 형태로 제형화할 수 있다.
다중특이성 항체 및 단편에 대한 효율적인 투여량 및 투여 계획은 치료하고자 하는 질병 또는 질환에 좌우되고, 당업자에 의해 결정될 수 있다. 본 발명의 화합물의 치료적 유효량에 대한 예시적인 비제한적인 범위는 약 0.001 내지 10 mg/kg, 예컨대 약 0.001 내지 5 mg/kg, 예를 들어 약 0.001 내지 2 mg/kg, 예컨대 약 0.001 내지 1 mg/kg, 예를 들어 약 0.001, 약 0.01, 약 0.1, 약 1 또는 약 10 mg/kg이다.
본 기술분야에서 통상의 기술을 가진 의사, 약사, 또는 수의사는 필요한 약제학적 조성물의 유효량을 용이하게 결정하고 처방할 수 있다. 예를 들어, 의사 또는 수의사는 약제학적 조성물에 사용되는 다중특이성 항체 또는 단편의 용량을 원하는 치료적 효과를 달성하기 위해 필요한 수준보다 더 낮은 수준에서 시작해서 원하는 효과가 달성될 때까지 투여량을 점차적으로 증가시킬 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 다중특이적 항체의 적합한 일일 용량은 치료적 효과를 생성하기에 유효한 최저 용량인 화합물의 양일 것이다. 투여는, 예를 들어, 비경구, 예컨대 정맥내, 근육내, 종양내(예를 들어, 골수), 또는 피하 투여일 수 있다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 항체 또는 단편은 mg/m2로 계산된 매주 투여량으로 주입에 의해 투여될 수 있다. 그러한 투여량은, 예를 들어, 하기에 따라 상기 제공된 mg/kg 투여량에 기초할 수 있다: 용량(mg/kg) x 체중(예를 들어, 50 내지 100 kg). 그러한 투여는, 예를 들어 1 내지 8회, 예컨대 3 내지 5회 반복될 수 있다. 투여는 2 내지 24시간, 예컨대 2 내지 12시간의 기간에 걸쳐 연속 주입에 의해 수행될 수 있다. 일 실시 형태에서, 다중특이성 항체 또는 단편은 독성 부작용을 감소시키기 위해 장기간, 예컨대 24시간 초과에 걸쳐 느린 연속 주입에 의해 투여될 수 있다.
일 실시 형태에서, 다중특이성 항체 또는 단편은 주 1회 제공될 때 최대 8회, 예컨대 4 내지 6회 동안 고정 용량으로서 계산된 매주 투여량으로 투여될 수 있다. 그러한 계획은, 예를 들어 6개월 또는 12개월 후에, 필요하다면 1회 이상 반복될 수 있다. 그러한 고정 투여량은, 예를 들어, 50 내지 100 kg의 체중 추산치로, 상기 제공된 mg/kg 투여량에 기초할 수 있다. 투여 시에 혈액 중의 본 발명의 다중특이적 항체의 양을 측정함으로써, 예를 들어 생물학적 샘플을 취하고 본 발명의 다중특이적 항체의 GPRC5D 및/또는 BCMA 항원 결합 아암을 표적화하는 항-이디오타입(anti-idiotypic) 항체를 사용함으로써, 투여량을 결정하거나 조정할 수 있다.
일 실시 형태에서, 다중특이성 항체 또는 단편은 유지 요법(maintenance therapy)에 의해, 예를 들어 6개월 이상의 기간 동안 주 1회 투여될 수 있다.
다중특이성 항체 또는 단편은 또한 암 발생 위험을 감소시키고/시키거나, 암 진행에서의 사건의 발생의 개시를 지연시키고/시키거나, 암이 관해기에 있을 때 재발 위험을 감소시키기 위하여 예방적으로 투여될 수 있다.
본 명세서에 기재된 바와 같은 다중특이성 항체 및 이의 단편은 또한 병용 요법으로 투여될 수 있는데, 즉 치료하고자 하는 질병 또는 질환에 대해 관련된 다른 치료제와 병용되어 투여될 수 있다. 따라서, 일 실시 형태에서, 항체-함유 의약은 하나 이상의 추가의 치료제, 예컨대 화학요법제 항-CD38 제제, 면역조절 이미드 약물(IMiD), 면역 체크포인트 억제제, 면역 공동자극제, 감마 세크레타제 억제제, T-세포 인핸서(예를 들어, IL-2 첨가), 또는 이들의 임의의 조합과의 조합을 위한 것이다. 일부 실시 형태에서, 추가의 치료제는 항-CD38 항체(예를 들어, 다라투무맙) 와 같은 항-CD38 제제이다. 일부 실시 형태에서, 추가의 치료제는 면역조절 이미드 약물(IMiD), 예컨대 레날리도미드, 및 포말리도미드이다. 일부 실시 형태에서, 추가의 치료제는 Ig 및 ITIM 도메인(TIGIT)을 갖는 항-T 세포 면역수용체 및 항-PD-1과 같은 면역 체크포인트 억제제이다. 일부 실시 형태에서, 추가의 치료제는 면역 공동자극제, 예컨대 CD137을 표적화하는 제제(예를 들어, CD137 공동자극 이중특이적 항체)이다. 일부 실시 형태에서, 다른 치료제는 시타라빈, 안트라사이클린, 히스타민 다이하이드로클로라이드 또는 인터류킨 2이다. 그러한 병용 투여는 동시적, 개별적 또는 순차적 - 임의의 순서임 - 일 수 있다. 동시적 투여의 경우, 작용제들은, 필요에 따라, 하나의 조성물로서 또는 개별 조성물들로서 투여될 수 있다.
일 실시 형태에는, 대상체에서 GPRC5D 및/또는 BCMA를 발현하는 세포를 수반하는 장애를 치료하기 위한 방법이 제공되며, 이 방법은 이를 필요로 하는 대상체에 대한 다중특이적 항체 또는 단편, 예컨대 본 명세서에 기재된 BCMA x GPRC5D x CD3 다중특이적 항체의 치료적 유효량의 투여 및 방사선요법을 포함한다. 일 실시 형태에는, 암을 치료 또는 예방하기 위한 방법이 제공되며, 이 방법은 이를 필요로 하는 대상체에 대한 다중특이적 항체 또는 단편, 예컨대 본 명세서에 기재된 BCMA x GPRC5D x CD3 항체의 치료적 유효량의 투여 및 방사선요법을 포함한다. 방사선요법은 방사선을 포함할 수 있거나, 또는 환자에 대한 방사성 의약품의 관련 투여가 제공된다. 방사선의 공급원은 치료되는 환자에 대해 외부 또는 내부에 있을 수 있다(방사선 치료는, 예를 들어 외부 빔 방사선 요법(EBRT) 또는 근접방사선요법(brachytherapy, BT)의 형태일 수 있다). 그러한 방법을 실시하는 데 사용될 수 있는 방사성 원소는, 예를 들어 라듐, 세슘-137, 이리듐-192, 아메리슘-241, 금-198, 코발트-57, 구리-67, 테크네튬-99, 요오다이드-123, 요오다이드-131, 악티늄-225, 및 이리듐-111을 포함한다.
키트
본 명세서에는 키트가 또한 제공되며, 본 키트는, 예를 들어 기재된 다중특이성 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 특정 세포 종류의 사멸을 위한 상기 항체 또는 단편의 사용설명서를 포함한다. 바람직한 실시 형태에서, 다중특이적 항체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 또는 이의 다중특이적 항원-결합 단편, 더욱 바람직하게는 본 명세서에 기재된 바와 같은 BCMA x GPRC5D x CD3-삼중특이적 항체 또는 이의 BCMA x GPRC5D x CD3-삼중특이적 항원-결합 단편이다. 설명서는 시험관내, 생체내, 또는 생체외에서 다중특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 사용하는 것에 대한 지시사항을 포함할 수 있다.
전형적으로, 키트는 다중특이성 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 담긴 구획을 가질 것이다. 다중특이성 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 동결건조된 형태, 액체 형태, 또는 키트에 포함되기에 적합한 다른 형태일 수 있다. 키트는 또한 키트 내의 설명서에 기재된 방법을 실시하는데 필요한 추가 요소들, 예컨대 동결건조된 분말을 재구성하기 위한 멸균 용액, 환자에게 투여하기 전에 다중특이성 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 병용하기 위한 추가 작용제, 및 다중특이성 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 환자에게 투여하는데 도움이 되는 도구를 수용할 수 있다.
진단적 용도
본 명세서에 기재된 다중특이성 항체 및 단편은 또한 진단 목적으로 사용될 수 있다. 따라서, 또한, 본 명세서에 정의된 바와 같은 다중특이성 항체 또는 단편을 포함하는 진단용 조성물이 제공되고, 그의 용도에 대해 제공된다. 바람직한 실시 형태에서, 다중특이적 항체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 BCMA x GPRC5D x CD3-다중특이적 항체 또는 이의 다중특이적 항원-결합 단편, 더욱 바람직하게는 본 명세서에 기재된 바와 같은 BCMA x GPRC5D x CD3-삼중특이적 항체 또는 이의 BCMA x GPRC5D x CD3-삼중특이적 항원-결합 단편이다. 일 실시 형태에서, 본 발명은 BCMA x GPRC5D x CD3 삼중특이적 항체, 및 GPRC5D 및/또는 BCMA에 대한 항체의 결합을 검출하기 위한 하나 이상의 시약을 포함하는 용기를 포함하는 암 진단용 키트를 제공한다. 시약은 예를 들어, 형광 태그, 효소 태그 또는 다른 검출가능한 태그를 포함할 수 있다. 시약은 또한 효소적 반응을 위한 2차 또는 3차 항체 또는 시약을 포함할 수 있으며, 여기서 효소적 반응은 시각화될 수 있는 생성물을 생성한다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 다중특이성 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 방사성표지, 형광 표지, 에피토프 태그, 비오틴, 발색단 표지, ECL 표지, 효소, 루테늄, 111In-DOTA, 111In-다이에틸렌트라이아민펜타아세트산(DTPA), 서양고추냉이 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제 및 베타-갈락토시다제, 또는 폴리-히스티딘 또는 당업계에 알려진 유사한 그러한 표지로 표지화될 수 있다.
BCMA-특이적 항체
BCMA에 특이적인 단리된 항체 및 항원-결합 단편이 본 명세서에 기재된다. 일부 실시 형태에서, BCMA-특이적 항체 및 항원-결합 단편은 인간 BCMA에 결합한다. BCMA-특이적 항체 분자의 일반적 구조는, 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항원 결합 도메인, 및 보체 결합(complement fixation) 및 항체 수용체에 대한 결합을 포함하는 다양한 기능을 제공하는 Fc 도메인을 포함할 수 있다.
일부 실시 형태에서는, 표 1에 기재된 항체(예를 들어, BCMB519) 중 어느 하나의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 중쇄를 포함하는 BCMA-특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 제공된다. 일부 실시 형태에서는, 표 1에 기재된 항체(예를 들어, BCMB519) 중 어느 하나의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 중쇄 및 표 1에 기재된 항체(예를 들어, BCMB519) 중 어느 하나의 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 경쇄를 포함하는 BCMA-특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 제공된다.
일부 실시 형태에서, BCMA-특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 20을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 21을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 서열 번호 22를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 20을 포함하는 중쇄 CDR1, 서열 번호 21을 포함하는 중쇄 CDR2, 서열 번호 22를 포함하는 중쇄 CDR3, 서열 번호 17을 포함하는 경쇄 CDR1, 서열 번호 18을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 서열 번호 19를 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다. BCMA-결합 아암은 인간 프레임워크 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 24와 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 서열 번호 24와 동일하거나 실질적으로 동일한 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 23과 동일하거나 실질적으로 동일한 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 본 단락에서 논의된 항체의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인은 하나의 아암이 항-BCMA 아암인 다중특이적(예를 들어, 이중특이적 또는 삼중특이적) 작제물에 포함시키기에 적합하다. 본 단락에서 논의된 BCMA-특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 예시적인 삼중특이적 작제물이 본 명세서에 제공된다.
일부 실시 형태에서, BCMA-특이적 항체 및 항원-결합 단편은 인간 BCMA 및 사이노몰거스 원숭이 BCMA에 결합한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-특이적 항체 및 항원-결합 단편은 인간 BCMA에 결합하지만 사이노몰거스 원숭이 BCMA에는 결합하지 않는다. 일부 실시 형태에서, BCMA-특이적 항체 및 항원-결합 단편은 BCMA 세포외 도메인(ECD)으로부터의 하나 이상의 잔기를 포함하는 에피토프에 결합한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편은 BCMA BCMW37 사슬의 잔기 17 내지 26(LLHACIPCQL(서열 번호 162))에 결합한다. 그러한 BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편은 5×10-7 M 이하, 예컨대 1×10-7 M 이하, 5×10-8 M 이하, 1×10-8 M 이하, 5×10-9 M 이하, 1×10-9 M, 또는 5×10-10 M 이하의 친화도로 BCMA에 결합할 수 있다. 일 실시 형태에서, BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편은 약 1 ×10-10 M 내지 1 ×10-9 M의 친화도로 BCMA에 결합한다. 일 실시 형태에서, BCMA-결합 아암은 약 1 ×10-10 M, 약 2 ×10-10 M, 약 3 ×10-10 M, 약 4 ×10-10 M, 약 5 ×10-10 M, 약 6 ×10-10 M, 약 7 ×10-10 M, 약 8 ×10-10 M, 약 9×10-10 M, 또는 약 1×10-9 M의 친화도로 BCMA에 결합한다. 일 실시 형태에서, BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편은 표면 플라즈몬 공명(SPR) 검정에 의해 결정되는 바와 같이 약 8.4 ×10-10 M의 친화도로 BCMA에 결합한다. 일 실시 형태에서, BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편은 표면 플라즈몬 공명(SPR) 검정에 의해 결정되는 바와 같이 약 2.1 ×10-10 M의 친화도로 BCMA에 결합한다.
IgG 부류는 인간에서 하기의 4가지 동종형으로 분류된다: IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4. 이들은 Fc 영역의 아미노산 서열에서 95% 초과의 상동성을 공유하지만, 힌지 영역의 아미노산 조성 및 구조에서 큰 차이를 나타낸다. Fc 영역은 이펙터 기능, 예컨대 항체-의존성 세포성 세포독성(ADCC) 및 보체-의존성 세포독성(CDC)을 매개한다. ADCC에서는, 항체의 Fc 영역이 자연 살해세포 및 대식세포와 같은 면역 이펙터 세포의 표면 상의 Fc 수용체(FcγR)에 결합하여, 표적화된 세포의 식세포작용 또는 용해로 이어진다. CDC에서는, 항체가 세포 표면에서 보체 캐스케이드를 촉발시킴으로써 표적화된 세포를 사멸시킨다. 본 명세서에 기재된 항체는, 상이한 이펙터 기능들을 달성하도록 Fc 서열이 변형되어 있는 변형된 버전을 포함한, IgG 동종형들 중 임의의 것과 조합된 가변 도메인의 기재된 특징을 갖는 항체를 포함한다.
치료적 항체의 많은 응용에 있어서, Fc-매개 이펙터 기능은 작용 기전의 일부가 아니다. 이들 Fc-매개 이펙터 기능은 탈기전 독성을 야기함으로써 유해할 수 있고 잠재적으로 안전성 위험을 제기할 수 있다. Fc 영역을 조작하여 FcγR 또는 보체 인자에 대한 이들의 결합을 감소시킴으로써 이펙터 기능의 변형이 달성될 수 있다. 활성화 FcγR(FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIIa, 및 FcγRIIIb) 및 억제성 FcγR(FcγRIIb) 또는 제1 보체 성분(C1q)에 대한 IgG의 결합은 힌지 영역 및 CH2 도메인에 위치된 잔기에 의존한다. Fc 기능성을 감소 또는 침묵시키기 위해 돌연변이가 IgG1, IgG2 및 IgG4에 도입되어 왔다. 본 명세서에 기재된 항체는 이들 변형을 포함할 수 있다.
일 실시 형태에서, 항체는 하기 특성 중 하나 이상을 갖는 Fc 영역을 포함한다: (a) 모 Fc와 비교할 때 감소된 이펙터 기능; (b) FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb, FcγRIIIb, 및/또는 FcγRIIIa에 대한 감소된 친화도, (c) FcγRI에 대한 감소된 친화도, (d) FcγRIIa에 대한 감소된 친화도, (e) FcγRIIb에 대한 감소된 친화도, (f) FcγRIIIb에 대한 감소된 친화도, 또는 (g) FcγRIIIa에 대한 감소된 친화도.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 IgG 또는 이의 유도체, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4 동종형이다. 항체가 IgG1 동종형을 갖는 일부 실시 형태에서, 항체는 그의 Fc 영역 내에 L234A, L235A, D265S, 및/또는 K409R 치환을 함유한다. 항체가 IgG4 동종형을 갖는 일부 실시 형태에서, 항체는 그의 Fc 영역 내에 K409R, S228P, L234A, 및 L235A 치환을 함유한다. 본 명세서에 기재된 항체는 이들 변형을 포함할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 기재된 항체는 ELISA에 의해 측정되는 바와 같이 낮은 나노몰 농도의 IC50으로 APRIL 결합을 억제할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 기재된 항체는 ELISA에 의해 측정되는 바와 같이 낮은 마이크로몰 농도의 IC50으로 BAFF 결합을 억제할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 기재된 항체는 BCMA-양성 다발성 골수종 세포주에 결합한다.
기재된 BCMA-특이적 항체 및 항원-결합 단편에 더하여, 기재된 항체 및 항원-결합 단편을 인코딩할 수 있는 폴리뉴클레오티드 서열이 또한 제공된다. 기재된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터가 또한 제공되며, 마찬가지로 BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편을 발현하는 세포도 본 명세서에 제공된다. 개시된 벡터를 발현할 수 있는 세포가 또한 기재된다. 이들 세포는 포유류 세포(예컨대, 293 세포, 293F 세포, CHO 세포), 곤충 세포(예컨대, Sf7 세포), 효모 세포, 식물 세포, 또는 세균 세포(예컨대, E. 콜라이(E. coli))일 수 있다. 기재된 항체는 또한 하이브리도마 세포에 의해 생성될 수 있다.
기재된 BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편은 모든 동종형, IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM, 및 4-쇄 면역글로불린 구조의 합성 다량체를 포함한다. 기재된 항체 또는 항원-결합 단편은 또한 암탉 또는 칠면조 혈청 및 암탉 또는 칠면조 난황에서 대체로 발견되는 IgY 동종형을 포함한다.
BCMA-특이적 항체 및 항원-결합 단편은 재조합 수단에 의해 임의의 종으로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, 항체 또는 항원-결합 단편은 마우스, 래트, 염소, 말, 돼지, 소, 닭, 토끼, 낙타과, 당나귀, 라마, 인간, 또는 이들의 키메라 버전일 수 있다. 인간에 대한 투여에 사용하기 위하여, 비인간 유래 항체 또는 항원-결합 단편은 인간 환자에게 투여 시 더 적은 항원성을 나타내도록 유전자적으로 또는 구조적으로 변경될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 키메라 항체 또는 항원-결합 단편이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "키메라"는 비인간 포유동물, 설치류, 또는 파충류의 항체 아미노산 서열로부터 유래되는 적어도 하나의 가변 도메인의 적어도 일부분을 갖는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 지칭하며, 한편 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 나머지 부분은 인간으로부터 유래된다.
일부 실시 형태에서, 항체는 인간화 항체이다. 인간화 항체는 비인간 면역글로불린으로부터 유래되는 최소한의 서열을 함유하는 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 쇄 또는 이들의 단편(예컨대, Fv, Fab, Fab', F(ab')2 또는 항체의 다른 항원-결합 하위서열)일 수 있다. 대부분, 인간화 항체는, 수용자의 상보성 결정 영역(CDR)으로부터의 잔기가 원하는 특이성, 친화도, 및 결합능(capacity)을 갖는 비인간 종(공여자 항체), 예컨대 마우스, 래트 또는 토끼의 CDR로부터의 잔기에 의해 대체된 인간 면역글로불린(수용자 항체)이다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 하나, 그리고 전형적으로는 2개의, 실질적으로 모든 가변 도메인을 포함할 것이며, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 영역은 비인간 면역글로불린의 것들에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 프레임워크 영역은 인간 면역글로불린 서열의 것들이다. 인간화 항체는 면역글로불린 불변 영역(Fc), 전형적으로는 인간 면역글로불린의 것의 적어도 일부분을 포함할 수 있다.
본 명세서에 기재된 항체 또는 항원-결합 단편은 다양한 형태로 발생할 수 있지만, 표 1에 나타낸 항체 CDR(예를 들어, BCMB519) 중 하나 이상을 포함할 것이다.
BCMA에 결합하는 재조합 항체 및 항원-결합 단편이 본 명세서에 기재된다. 일부 실시 형태에서, BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편은 인간 IgG 또는 이의 유도체이다. 본 명세서에 예시된 BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편은 인간 항체 또는 항원-결합 단편이지만, 예시된 항체 또는 항원-결합 단편은 키메라화될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 IgG 또는 이의 유도체, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4 동종형이다. 항체가 IgG1 동종형을 갖는 일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 Fc 영역을 포함한다(서열 번호 158).
서열 번호 158
Astkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
항체가 IgG1 동종형을 갖는 일부 실시 형태에서, 항체는 그의 Fc 영역 내에 L234A, L235A, 및 D265S 치환(밑줄)을 포함한다(서열 번호 159).
서열 번호 159
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
항체가 IgG4 동종형을 갖는 일부 실시 형태에서, 항체는 그의 Fc 영역 내에 S228P, L234A, 및 L235A 치환(밑줄)을 포함한다(서열 번호 160).
서열 번호 160
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
상기 단락들에서 논의된 CDR 및/또는 가변 도메인 서열에 의해 정의된 BCMA 특이적 항체는 이들 IgG Fc 영역을 포함할 수 있다.
BCMA에 결합하는 항체 또는 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 합성 폴리뉴클레오티드가 또한 개시된다. 본 명세서에 제공된 가변 도메인 절편을 인코딩할 수 있는 단리된 폴리뉴클레오티드는 동일한 또는 상이한 벡터 상에 포함되어 항체 또는 항원-결합 단편을 생성할 수 있다.
재조합 항원-결합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 또한 본 발명의 범주 내에 있다. 일부 실시 형태에서, 기재된 폴리뉴클레오티드(및 이것이 인코딩하는 펩티드)는 리더(leader) 서열을 포함한다. 당업계에 알려진 임의의 리더 서열이 사용될 수 있다. 리더 서열은 제한 부위 또는 번역 개시 부위를 포함할 수 있지만 이로 한정되지 않는다.
본 명세서에 기재된 BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편은 기재된 BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편의 생물학적 특성(예를 들어, 결합 친화성 또는 면역 이펙터 활성)을 보유하는 단일 또는 다수의 아미노산 치환, 결실, 또는 부가를 갖는 변이체를 포함한다. 본 발명과 관련하여, 달리 지시되지 않는 한, 돌연변이를 기재하기 위해 하기 표기법이 사용된다; i) 주어진 위치에서의 아미노산의 치환은, 예를 들어 K409R로 표기되며, 이는 위치 409에서 라이신이 아르기닌으로 치환됨을 의미하고; ii) 특이적 변이체의 경우, 임의의 아미노산 잔기를 나타내기 위해 코드 Xaa 및 X를 포함하는 특이적 3-문자 또는 1-문자 코드가 사용된다. 따라서, 위치 409에서의 라이신 대신 아르기닌의 치환은 K409R로 표기되거나, 또는 위치 409에서의 라이신 대신 임의의 아미노산 잔기의 치환은 K409X로 표시된다. 위치 409에서 라이신이 결실된 경우에, 그것은 K409*로 나타낸다. 당업자는 단일 또는 다수의 아미노산 치환, 결실, 또는 부가를 갖는 변이체를 생성할 수 있다.
이들 변이체는 하기를 포함할 수 있다: (a) 하나 이상의 아미노산 잔기가 보존적 또는 비보존적 아미노산으로 치환된 변이체, (b) 하나 이상의 아미노산이 폴리펩티드에 부가되거나 그로부터 결실된 변이체, (c) 하나 이상의 아미노산이 치환기를 포함하는 변이체, 및 (d) 폴리펩티드가, 그 폴리펩티드에 유용한 특성을 부여할 수 있는 다른 펩티드 또는 폴리펩티드, 예컨대 융합 파트너, 단백질 태그 또는 다른 화학적 모이어티(moiety), 예컨대 항체에 대한 에피토프, 폴리히스티딘 서열, 비오틴 모이어티 등과 융합된 변이체. 본 명세서에 기재된 항체 또는 항원-결합 단편은, 하나의 종으로부터의 아미노산 잔기가, 보존 또는 비보존된 위치에서, 다른 종에서의 상응하는 잔기 대신 치환된 변이체를 포함할 수 있다. 다른 실시 형태에서, 비보존된 위치에서의 아미노산 잔기가 보존 또는 비보존된 잔기로 치환된다. 유전자적(결실, 돌연변이 등), 화학적, 및 효소적 기법을 포함한 이들 변이체를 얻기 위한 기법은 당업자에게 알려져 있다.
본 명세서에 기재된 BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편은 몇몇 항체 동종형, 예컨대 IgM, IgD, IgG, IgA 및 IgE를 구현할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 항체 동종형은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 동종형, 바람직하게는 IgG1 또는 IgG4 동종형이다. 항체 또는 이의 항원-결합 단편 특이성은 CDR의 아미노산 서열, 및 배열에 의해 대체로 결정된다. 따라서, 하나의 동종형의 CDR은 항원 특이성을 변경시키지 않고서 다른 동종형으로 전달될 수 있다. 대안적으로, 하이브리도마가 항원 특이성을 변경시키지 않고서 하나의 항체 동종형을 생성하는 것으로부터 다른 항체 동종형으로 전환(동종형 전환)되게 하기 위한 기법이 확립되어 왔다. 따라서, 그러한 항체 동종형들은 기재된 항체 또는 항원-결합 단편의 범주 내에 있다.
본 명세서에 기재된 BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편은 APRIL 결합에 대해 낮은 나노몰 농도의 IC50 값을 가질 수 있다. 기재된 BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편의 IC50은 ELISA-기반 방법 또는 유세포 분석(FACS)과 같은 당업계에 알려진 다양한 방법에 의해 결정될 수 있다. ELISA에 의해 IC50을 측정하기 위한 검정은, BCMA 특이적 항체의 존재 및 부재 하에 플레이트-결합된 BCMA를 가지며, 다양한 농도의 APRIL이 사용된다. BCMA에 대한 APRIL의 결합을 차단하는 BCMA 항체는 "ELISA에 의해 측정되는 바와 같이 APRIL을 차단"하는 것이다.
본 명세서에 기재된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터가 또한 제공된다. 벡터는 발현 벡터일 수 있다. 따라서, 관심 폴리펩티드를 인코딩하는 서열을 함유하는 재조합 발현 벡터는 본 발명의 범주 내에 있는 것으로 고려된다. 발현 벡터는 조절 서열(예를 들어, 프로모터, 인핸서), 선택 마커, 및 폴리아데닐화 신호와 같은 그러나 이로 한정되지 않는 하나 이상의 추가의 서열을 함유할 수 있다. 매우 다양한 숙주 세포를 형질전환시키기 위한 벡터는 잘 알려져 있으며, 플라스미드, 파지미드, 코스미드, 배큘로바이러스, 박미드(bacmid), 세균 인공 염색체(BAC), 효모 인공 염색체(YAC)뿐만 아니라, 다른 세균, 효모 및 바이러스 벡터를 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
본 발명의 범주 내의 재조합 발현 벡터는 적합한 조절 요소에 작동가능하게 연결될 수 있는 적어도 하나의 재조합 단백질을 인코딩하는 합성, 게놈, 또는 cDNA-유래 핵산 단편을 포함한다. 그러한 조절 요소는 전사 프로모터, 적합한 mRNA 리보솜 결합 부위를 인코딩하는 서열, 및 전사 및 번역의 종결을 제어하는 서열을 포함할 수 있다. 발현 벡터, 특히 포유류 발현 벡터는 또한 하나 이상의 비전사 요소, 예컨대 복제 기점, 발현시키고자 하는 유전자에 연결된 적합한 프로모터 및 인핸서, 다른 5' 또는 3' 플랭킹(flanking) 비전사 서열, 5' 또는 3' 비번역 서열(예컨대, 필요한 리보솜 결합 부위), 폴리아데닐화 부위, 스플라이스 도너 및 억셉터 부위, 또는 전사 종결 서열을 포함할 수 있다. 숙주에서 복제하는 능력을 부여하는 복제 기점이 또한 포함될 수 있다.
척추동물 세포를 형질전환시키는 데 사용되는 발현 벡터에서의 전사 및 번역 제어 서열은 바이러스 공급원에 의해 제공될 수 있다. 예시적인 벡터는 문헌[Okayama and Berg, 3 Mol. Cell. Biol. 280 (1983)]에 의해 기재된 바와 같이 작제될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 항체- 또는 항원-결합 단편-코딩 서열은 강력한 구성적 프로모터, 예컨대 하기 유전자에 대한 프로모터의 제어 하에 놓여 있다: 하이포잔틴 포스포리보실 트랜스퍼라제(HPRT), 아데노신 데아미나제, 피루베이트 키나제, 베타-액틴, 인간 미오신, 인간 헤모글로빈, 인간 근육 크레아틴, 및 기타. 게다가, 많은 바이러스성 프로모터가 진핵 세포에서 구성적으로 기능하고, 기재된 실시 형태와 함께 사용하기에 적합하다. 그러한 바이러스성 프로모터는, 제한 없이, 거대세포바이러스(CMV) 극초기 프로모터, SV40의 초기 및 후기 프로모터, 마우스 유선 종양 바이러스(MMTV) 프로모터, 말로니(Maloney) 백혈병 바이러스의 긴 말단 반복부(LTR), 인간 면역결핍 바이러스(HIV), 엡스타인 바 바이러스(Epstein Barr Virus, EBV), 라우스 육종 바이러스(Rous Sarcoma Virus, RSV), 및 다른 레트로바이러스, 및 단순 헤르페스 바이러스의 티미딘 키나제 프로모터를 포함한다. 일 실시 형태에서, BCMA-특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편 코딩 서열은 유도성 프로모터, 예컨대 메탈로티오네인 프로모터, 테트라사이클린-유도성 프로모터, 독시사이클린-유도성 프로모터, 하나 이상의 인터페론-자극 반응 요소(ISRE)를 함유하는 프로모터, 예컨대 단백질 키나제 R 2',5'-올리고아데닐레이트 신테타제, Mx 유전자, ADAR1 등의 제어 하에 놓여 있다.
본 명세서에 기재된 벡터는 하나 이상의 내부 리보솜 침입 부위(들)(IRES)를 함유할 수 있다. 융합 벡터 내로의 IRES 서열의 포함은 일부 단백질의 발현을 향상시키는 데 유익할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 벡터 시스템은 하나 이상의 폴리아데닐화 부위(예를 들어, SV40)를 포함할 것이며, 이는 상기 언급된 핵산 서열들 중 임의의 것의 상류 또는 하류에 있을 수 있다. 벡터 성분들은 (즉, ORF들 사이에의 "스페이서" 뉴클레오티드의 도입에 의해) 유전자 산물을 발현시키기 위한 최적의 간격을 제공하는 방식으로 인접하게 연결 또는 배열될 수 있거나, 또는 다른 방식으로 위치될 수 있다. 조절 요소, 예컨대 IRES 모티프는 또한 발현을 위한 최적의 간격을 제공하도록 배열될 수 있다.
벡터는 선택 마커를 포함할 수 있으며, 선택 마커는 당업계에 잘 알려져 있다. 선택 마커는 양성 및 음성 선택 마커, 예를 들어, 항생제 저항성 유전자(예를 들어, 네오마이신 저항성 유전자, 하이그로마이신 저항성 유전자, 카나마이신 저항성 유전자, 테트라사이클린 저항성 유전자, 페니실린 저항성 유전자, 퓨로마이신 저항성 유전자, 블라스티사이딘 저항성 유전자), 글루타메이트 신타제 유전자, 간시클로비르 선택을 위한 HSV-TK, HSV-TK 유도체, 또는 6-메틸퓨린 선택을 위한 세균성 퓨린 뉴클레오시드 포스포릴라제 유전자를 포함한다(문헌[Gadi et al., 7 Gene Ther. 1738-1743 (2000)]). 선택 마커 또는 클로닝 부위를 인코딩하는 핵산 서열은 관심 폴리펩티드 또는 클로닝 부위를 인코딩하는 핵산 서열의 상류 또는 하류에 있을 수 있다.
본 명세서에 기재된 벡터는 다양한 세포를 기재된 항체 또는 항원-결합 단편을 인코딩하는 유전자로 형질전환시키는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 벡터는 BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편-생성 세포를 생성하기 위해 사용될 수 있다. 따라서, 다른 태양은 BCMA에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 예컨대 본 명세서에 기재되고 예시된 항체 또는 항원-결합 단편을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 벡터로 형질전환된 숙주 세포를 특징으로 한다.
세포 내로의 외래 유전자의 도입을 위한 다수의 기법이 당업계에 알려져 있고, 본 명세서에 기재되고 예시된 다양한 실시 형태에 따라, 기재된 방법을 수행하려는 목적을 위하여 재조합 세포를 작제하는 데 사용될 수 있다. 사용되는 기법은 숙주 세포로의 이종 유전자 서열의 안정한 전달을 제공하여, 이종 유전자 서열이 세포의 자손에 의해 상속가능하고 발현가능하도록, 그리고 수령 세포의 필요한 발달 및 생리학적 기능이 파괴되지 않도록 해야 한다. 사용될 수 있는 기술은 염색체 전달(예를 들어, 세포 융합, 염색체 매개 유전자 전달, 마이크로 세포 매개 유전자 전달), 물리적 방법(예를 들어, 형질감염, 스페로플라스트(spheroplast) 융합, 미세주사(microinjection), 전기천공, 리포솜 담체), 바이러스 벡터 전달(예를 들어, 재조합 DNA 바이러스, 재조합 RNA 바이러스) 등(문헌[Cline, 29 Pharmac. Ther. 69-92(1985)]에 기재됨)을 포함하지만 이로 제한되지 않는다. 인산칼슘 침전 및 세균 프로토플라스트(bacterial protoplast)와 포유류 세포의 폴리에틸렌 글리콜(PEG)-유도 융합이 또한 세포를 형질전환시키는 데 사용될 수 있다.
본 명세서에 기재된 BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편의 발현에 사용하기에 적합한 세포는 바람직하게는 진핵 세포, 더 바람직하게는 식물, 설치류, 또는 인간 기원의 세포, 예를 들어, 그러나 제한 없이, 특히 NSO, CHO, CHOK1, perC.6, Tk-ts13, BHK, HEK293 세포, COS-7, T98G, CV-1/EBNA, L 세포, C127, 3T3, HeLa, NS1, Sp2/0 골수종 세포, 및 BHK 세포주이다. 게다가, 항체의 발현은 하이브리도마 세포를 사용하여 달성될 수 있다. 하이브리도마를 생성하기 위한 방법이 당업계에 잘 확립되어 있다.
본 명세서에 기재된 발현 벡터로 형질전환된 세포는 본 명세서에 기재된 항체 또는 항원-결합 단편의 재조합 발현을 위해 선택되거나 스크리닝될 수 있다. 재조합-양성 세포는 원하는 표현형, 예컨대 고수준 발현, 향상된 성장 특성, 또는, 예를 들어 단백질 변형 또는 변경된 번역 후 변형으로 인해 원하는 생화학적 특성을 갖는 단백질을 산출하는 능력을 나타내는 하위클론을 위해 증폭 및 스크리닝된다. 이들 표현형은 주어진 하위클론의 고유 특성에 기인하거나 돌연변이에 기인할 수 있다. 돌연변이는 화학물질, UV-파장 광, 방사선, 바이러스, 삽입 돌연변이원, DNA 불일치 수복의 억제, 또는 그러한 방법들의 조합의 사용을 통해 달성될 수 있다.
치료를 위해 BCMA-특이적 항체를 사용하는 방법
요법에 사용하기 위한 BCMA-특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 본 명세서에 제공된다. 특히, 이들 항체 또는 항원-결합 단편은 암, 예컨대 BCMA-발현 암, 또는 다른 BCMA-발현 장애를 치료하는 데 유용할 수 있다. 따라서, 본 발명은 본 명세서에 기재된 바와 같은 항체, 예컨대 BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편을 투여하는 단계를 포함하는 암의 치료 방법을 제공한다. 예를 들어, 이러한 용도는 BCMA-수용체 상호작용을 방해하는 단계, 또는 항체가 독소에 접합되는 경우, 이에 따라 독소를 BCMA-발현 암에 대해 표적화하는 단계에 의한 것일 수 있다. 일부 실시 형태에서, BCMA-발현 암 또는 장애는 림프종, 예컨대 무증상 다발성 골수종(SMM)을 포함하는 다발성 골수종(MM), 또는 아밀로이드증, 혈장 세포 백혈병 및 루푸스를 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-발현 암은 림프종의 재발성 또는 불응성 형태, 예컨대 다발성 골수종의 재발성 또는 불응성 형태이다. 이들 방법에 사용하기 위한 항체는 본 명세서에서 전술된 것들, 예를 들어 표 1에 기재된 특징부, 예를 들어 CDR 또는 가변 도메인 서열을 갖는 BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편(예를 들어, BCMB519), 및 이들 항체의 추가의 논의에 기재된 것들을 포함한다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, BCMA-특이적 항체의 면역 이펙터 특성은 당업자에게 알려지고 본 명세서에 기재된 기술에 의해 Fc 변형을 통해 향상되거나 침묵될 수 있다. 예를 들어, Fc 이펙터 기능, 예컨대 Clq 결합, 보체 의존성 세포독성(CDC), 항체-의존성 세포-매개 세포독성(ADCC), 항체-의존성 세포-매개 식세포작용(ADCP), 세포 표면 수용체(예를 들어, B 세포 수용체; BCR)의 하향 조절 등이, 이들 활성을 담당하는 Fc 내의 잔기를 변형함으로써 제공되고/되거나 제어될 수 있다.
"항체 의존성 세포 매개 세포독성" 또는 "ADCC"는 Fc 수용체(FcR)를 발현하는 비특이적 세포독성 세포(예를 들어, 천연 살해(NK) 세포, 호중구, 및 대식세포)가 표적 세포 상에 결합된 항체를 인식하고 후속적으로 표적 세포의 용해를 야기하는 세포 매개 반응을 지칭한다.
ADCC를 유도하는 단일클론 항체의 능력은 그의 올리고당 성분을 조작함으로써 향상될 수 있다. 인간 IgG1 또는 IgG3은 잘 알려진 바이안테나리(biantennary) G0, G0F, G1, G1F, G2 또는 G2F 형태의 글리칸의 대부분에 의해 Asn297에서 N-글리코실화된다. 조작되지 않은 CHO 세포에 의해 생성된 항체는 전형적으로 적어도 약 85%의 글리칸 푸코스 함량을 갖는다. Fc 영역에 부착된 바이안테나리 복합형 올리고당으로부터의 코어(core) 푸코스의 제거는, 항원 결합 또는 CDC 활성을 변경시키지 않고서, 개선된 FcγRIIIa 결합을 통해 항체의 ADCC를 향상시킨다. 그러한 mAb는 바이안테나리 복합형의 Fc 올리고당을 보유하는 비교적 높은 탈푸코실화 항체의 성공적인 발현으로 이어지는 것으로 보고된 상이한 방법, 예컨대 배양 삼투압의 제어(문헌[Konno et al., Cytotechnology 64:249-65, 2012]), 숙주 세포주로서의 변이체 CHO 세포주 Lec13의 적용(문헌[Shields et al., J Biol Chem 277:26733-26740, 2002]), 숙주 세포주로서의 변이체 CHO 세포주 EB66의 적용(문헌[Olivier et al., MAbs; 2(4), 2010; Epub ahead of print; PMID:20562582]), 숙주 세포주로서 래트 하이브리도마 세포주 YB2/0의 적용(문헌[Shinkawa et al., J Biol Chem 278:3466-3473, 2003]), .알파. 1,6-푸코실트랜스퍼라제(FUT8) 유전자에 대해 특이적으로 작은 간섭 RNA의 도입(문헌[Mori et al., Biotechnol Bioeng 88:901-908, 2004]), 또는 β-1,4-N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제 III 및 골지 α-만노시다제 II의 동시발현 또는 강력한 알파-만노시다제 I 억제제인 키푸넨신(문헌[Ferrara et al., J Biol Chem 281:5032-5036, 2006], 문헌[Ferrara et al., Biotechnol Bioeng 93:851-861, 2006]; 문헌[Xhou et al., Biotechnol Bioeng 99:652-65, 2008])을 사용하여 달성할 수 있다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, BCMA 항체에 의해 유도되는 ADCC가 또한 항체 Fc 내에서의 소정의 치환에 의해 향상될 수 있다. 예시적인 치환은, 예를 들어 미국 특허 제6,737,056호에 기재된 바와 같은 아미노산 위치 256, 290, 298, 312, 356, 330, 333, 334, 360, 378 또는 430(잔기 번호 부여는 EU 인덱스에 따름)에서의 치환이다.
BCMA를 검출하는 방법
샘플을 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계에 의해 생물학적 샘플에서 BCMA를 검출하기 위한 방법이 본 명세서에 제공된다. 본 명세서에 기재된 바와 같이, 샘플은 소변, 혈액, 혈청, 혈장, 타액, 복수, 순환 세포, 순환 종양 세포, 조직과 회합되지 않은 세포(즉, 유리 세포), 조직(예를 들어, 외과적으로 절제된 종양 조직, 생검 - 미세 바늘 흡인물을 포함함), 조직 프레파라트 등으로부터 유래될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 기재된 방법은 샘플을 본 명세서에 기재된 BCMA-특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편 중 임의의 것과 접촉시킴으로써 생물학적 샘플에서 BCMA를 검출하는 단계를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 샘플은 본 명세서에 기재된 BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편 중 하나 초과와 접촉될 수 있다. 예를 들어, 샘플은 제1 BCMA-특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉되고, 이어서 제2 BCMA-특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉될 수 있으며, 여기서 제1 항체 또는 항원-결합 단편 및 제2 항체 또는 항원-결합 단편은 동일한 항체 또는 항원-결합 단편이 아니다. 일부 실시 형태에서, 제1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 샘플과 접촉시키기 전에 표면, 예컨대 멀티웰 플레이트, 칩, 또는 유사한 기재에 부착될 수 있다. 다른 실시 형태에서, 제1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 샘플과 접촉시키기 전에 어떠한 것에도 전혀 고정 또는 부착되지 않을 수 있다.
기재된 BCMA-특이적 항체 및 항원-결합 단편은 검출가능하게 표지화될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 표지화된 항체 및 항원-결합 단편이 본 명세서에 기재된 방법을 통해 BCMA의 검출을 촉진시킬 수 있다. 많은 그러한 표지가 당업자에게 용이하게 알려져 있다. 예를 들어, 적절한 표지는 방사선 표지, 형광 표지, 에피토프 태그, 비오틴, 발색단 표지, ECL 표지, 또는 효소를 포함하지만 이로 한정되는 것으로 여겨져서는 안된다. 더 구체적으로는, 기재된 표지는 루테늄, 111In-DOTA, 111In-다이에틸렌트라이아민펜타아세트산(DTPA), 서양고추냉이 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제 및 베타-갈락토시다제, 폴리-히스티딘(HIS 태그), 아크리딘 염료, 시아닌 염료, 플루오론 염료, 옥사진 염료, 페난트리딘 염료, 로다민 염료, Alexafluor® 염료 등을 포함한다.
기재된 BCMA-특이적 항체 및 항원-결합 단편은 생물학적 샘플에서 BCMA를 검출하기 위한 다양한 검정에 사용될 수 있다. 일부 적합한 검정은 웨스턴 블롯(Western blot) 분석, 방사면역검정, 표면 플라즈몬 공명, 면역형광측정(immunofluorimetry), 면역침강, 평형 투석, 면역확산, 전기화학발광(ECL) 면역검정, 면역조직화학, 형광 활성화 세포 분류(FACS) 또는 ELISA 검정을 포함하지만 이로 한정되는 것으로 여겨져서는 안 된다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 대상체가 BCMA에 대해 유도된 치료제로 치료될 수 있는지를 결정하기 위하여 대상체에서의 BCMA-발현 암 세포의 검출이 사용될 수 있다.
BCMA는 혈액 및 혈청 샘플 내에 검출가능한 수준으로 존재한다. 따라서, 샘플을 BCMA에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계에 의해, 혈액으로부터 유래된 샘플, 예컨대 혈청 샘플에서 BCMA를 검출하기 위한 방법이 본 명세서에 제공된다. 혈액 샘플 또는 이의 유도체는, 기재된 방법이 수행될 수 있는 샘플을 산출하도록 희석, 분획화, 또는 달리 처리될 수 있다. 일부 실시 형태에서, BCMA는 웨스턴 블롯 분석, 방사면역검정, 표면 플라즈몬 공명, 면역형광측정, 면역침강, 평형 투석, 면역확산, 전기화학발광(ECL) 면역검정, 면역조직화학, 형광-활성화 세포 분류(FACS), 또는 ELISA 검정과 같으나 이로 제한되지 않는 당업계에 알려진 다수의 검정에 의해 혈액 샘플 또는 이의 유도체에서 검출될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 방법은 시험관내 방법이다.
암 또는 장애의 진단 방법
대상체에서 BCMA-발현 암 또는 장애를 진단하기 위한 방법이 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, BCMA-발현 암 또는 장애는 림프종, 예컨대 무증상 다발성 골수종(SMM)을 포함하는 다발성 골수종(MM), 또는 아밀로이드증, 혈장 세포 백혈병, 및 루푸스를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 상기 기재된 바와 같이, 생물학적 샘플, 예컨대 혈액 샘플 또는 혈청 샘플에서 BCMA를 검출하는 단계는 샘플이 얻어진 대상체에서 암을 진단하는 능력을 제공한다. 대안적으로, 일부 실시 형태에서, 다른 샘플, 예컨대 조직학적 샘플, 미세 바늘 흡인 샘플, 절제된 종양 조직, 순환 세포, 순환 종양 세포 등이 또한 샘플이 획득된 대상이 암을 앓고 있는지의 여부를 평가하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 샘플이 얻어진 대상체가 암을 갖는다는 것이 이미 알려져 있을 수 있지만, 대상체가 앓고 있는 암의 유형은 아직 진단되지 않았을 수 있거나, 예비 진단이 불명확할 수 있으며, 따라서 대상체로부터 얻어진 생물학적 샘플에서 BCMA를 검출하는 단계는 암의 진단을 가능하게 하거나 명확하게 할 수 있다. 예를 들어, 대상체는 암을 갖는 것으로 알려져 있을 수 있지만, 대상체의 암이 BCMA-발현 암인지의 여부는 알려져 있지 않을 수 있거나, 불명확할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 기재된 방법은 대상체로부터 유래된 생물학적 샘플 내에 존재하는 BCMA의 양을 결정함으로써 대상체가 BCMA-발현 암 또는 장애를 앓고 있는지의 여부를 평가하는 단계; 및 관찰된 BCMA의 양을 대조군 샘플 또는 참조 샘플 내의 BCMA의 양과 비교하는 단계를 포함하며, 여기서 대상체로부터 유래된 샘플 내의 BCMA의 양과 대조군 샘플 또는 참조 샘플 내의 BCMA의 양 사이의 차이는 대상체가 BCMA-발현 암 또는 장애를 앓고 있음을 나타내는 지표이다. 다른 실시 형태에서, 대상체로부터 얻어진 생물학적 샘플에서 관찰되는 BCMA의 양을 소정의 형태 또는 단계의 암과 관련된 것으로 알려진 BCMA의 수준과 비교하여, 대상체의 암의 형태 또는 단계를 결정할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 대상체로부터 유래된 샘플 내의 BCMA의 양은 샘플을 BCMA에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 예컨대 본 명세서에 기재된 BCMA-특이적 항체와 접촉시키는 단계에 의해 평가된다. BCMA의 존재에 대해 평가되는 샘플은 소변, 혈액, 혈청, 혈장, 타액, 복수, 순환 세포, 순환 종양 세포, 조직과 회합되지 않은 세포(즉, 유리 세포), 조직(예를 들어, 외과적으로 절제된 종양 조직, 생검, 미세 바늘 흡인물을 포함함), 조직 프레파라트 등으로부터 유래될 수 있다. 일부 실시 형태에서, BCMA-발현 암 또는 장애는 혈액암, 예컨대 무증상 다발성 골수종(SMM)을 포함하는 다발성 골수종(MM), 또는 아밀로이드증, 혈장 세포 백혈병 및 루푸스를 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-발현 암은 림프종의 재발성 또는 불응성 형태, 예컨대 다발성 골수종의 재발성 또는 불응성 형태이다. 일부 실시 형태에서, 대상은 인간이다.
일부 실시 형태에서, BCMA-발현 암 또는 장애의 진단 방법은, 대상체의 생물학적 샘플을 BCMA-특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편(예컨대, 표 1에 제공된 항체 및 단편으로부터 유래될 수 있는 것들(예를 들어, BCMB519))과 접촉시키는 단계, 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의해 결합된 샘플 내에 존재하는 BCMA의 양을 정량화하는 단계, 샘플 내에 존재하는 BCMA의 양을 알려진 표준 또는 참조 샘플과 비교하는 단계; 및 대상체의 BCMA 수준이 암 또는 장애와 관련된 BCMA의 수준 내에 있는지의 여부를 결정하는 단계를 포함할 것이다. 추가의 실시 형태에서, 진단 방법 이후에는 BCMA 특이적 치료를 투여 또는 처방하는 추가의 단계가 이어질 수 있다. 다른 실시 형태에서, 진단 방법 이후에는 결정의 결과를 전송하여 암 또는 장애의 치료를 촉진시키는 추가의 단계가 이어질 수 있다. 일부 실시 형태에서는, 본 명세서에 기재된 BCMA x CD3 다중특이적 항체와 같은, BCMA 특이적 치료가 BCMA-발현 암 또는 장애에 대해 유도될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 기재된 방법은 대상체로부터 얻어진 혈액 또는 혈청 샘플 내에 존재하는 BCMA의 양을 결정함으로써 대상체가 BCMA-발현 암 또는 장애를 앓고 있는지의 여부를 평가하는 단계; 및 관찰된 BCMA의 양을 대조군 샘플 또는 참조 샘플 내의 BCMA의 양과 비교하는 단계를 포함하며, 여기서 대상체로부터 유래된 샘플 내의 BCMA의 양과 대조군 샘플 또는 참조 샘플 내의 BCMA의 양 사이의 차이는 대상체가 BCMA-발현 암 또는 장애를 앓고 있음을 나타내는 지표이다.
일부 실시 형태에서, 대조군 샘플 또는 참조 샘플은 BCMA-발현 암 또는 장애를 앓고 있지 않은 대상체로부터 유래될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 대조군 샘플 또는 참조 샘플은 BCMA-발현 암 또는 장애를 앓고 있는 대상체로부터 유래될 수 있다. 대조군 샘플 또는 참조 샘플이 BCMA-발현 암 또는 장애를 앓고 있지 않은 대상체로부터 유래되는 일부 실시 형태에서, 대조군 샘플 또는 참조 샘플에 대해 관찰된 양과 대비하여, 시험 샘플 내에 존재하는 BCMA의 양의 관찰된 증가는, 평가되는 대상체가 BCMA-발현 암 또는 장애를 앓고 있음을 나타내는 지표이다. 대조군 샘플이 BCMA-발현 암 또는 장애를 앓고 있지 않은 대상체로부터 유래되는 일부 실시 형태에서, 대조군 샘플 또는 참조 샘플에 대해 관찰된 양과 대비하여, 시험 샘플 내에 존재하는 BCMA의 양의 관찰된 감소 또는 유사도는, 평가되는 대상체가 BCMA-발현 암 또는 장애를 앓고 있지 않음을 나타내는 지표이다. 대조군 샘플 또는 참조 샘플이 BCMA-발현 암 또는 장애를 앓고 있는 대상체로부터 유래되는 일부 실시 형태에서, 대조군 샘플 또는 참조 샘플에 대해 관찰된 양과 대비하여, 시험 샘플 내에 존재하는 BCMA의 양의 관찰된 유사도는, 평가되는 대상체가 BCMA-발현 암 또는 장애를 앓고 있음을 나타내는 지표이다. 대조군 샘플 또는 참조 샘플이 BCMA-발현 암 또는 장애를 앓고 있는 대상체로부터 유래되는 일부 실시 형태에서, 대조군 샘플 또는 참조 샘플에 대해 관찰된 양과 대비하여, 시험 샘플 내에 존재하는 BCMA의 양의 관찰된 감소는, 평가되는 대상체가 BCMA-발현 암 또는 장애를 앓고 있지 않음을 나타내는 지표이다.
일부 실시 형태에서, 대상체로부터 유래된 샘플 내의 BCMA의 양은 샘플을 BCMA에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 예컨대 본 명세서에 기재된 항체와 접촉시키는 단계에 의해 평가된다. BCMA의 존재에 대해 평가되는 샘플은 혈액 샘플, 혈청 샘플, 순환 세포, 순환 종양 세포, 조직과 회합되지 않은 세포(즉, 유리 세포), 조직(예를 들어, 외과적으로 절제된 종양 조직, 생검, 미세 바늘 흡인물을 포함함), 조직 프레파라트 등으로부터 유래될 수 있다.
다양한 태양에서, BCMA의 양은 샘플을 BCMA에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계에 의해 결정된다. 일부 실시 형태에서, 샘플은 BCMA에 결합하는 1개 초과의 유형의 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의해 접촉될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 샘플은 BCMA에 결합하는 제1 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의해 접촉되고, 이어서 BCMA에 결합하는 제2 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의해 접촉될 수 있다. BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편, 예컨대 본 명세서에 기재된 것들은 이러한 능력에 사용될 수 있다.
BCMA-특이적 항체 및 항원-결합 단편의 다양한 조합이 기재된 진단 방법을 실행하도록 "제1" 및 "제2" 항체 또는 항원-결합 단편을 제공하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, BCMA-발현 암 또는 장애는 무증상 다발성 골수종(SMM)을 포함하는 다발성 골수종(MM)과 같은 림프종을 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-발현 암은 림프종의 재발성 또는 불응성 형태, 예컨대 다발성 골수종의 재발성 또는 불응성 형태이다.
소정 실시 형태에서, BCMA의 양은 웨스턴 블롯 분석, 방사면역검정, 면역형광측정, 면역침강, 평형 투석, 면역확산, 전기화학발광(ECL) 면역검정, 면역조직화학, 형광-활성화 세포 분류(FACS), 또는 ELISA 검정에 의해 결정된다.
기재된 진단 방법의 다양한 실시 형태에서, 대조군 샘플 또는 참조 샘플이 사용된다. 이러한 샘플은 사용된 검정이 적절하게 작동함을 보장하는 양성 또는 음성 검정 대조군일 수 있으며; 예를 들어, 이러한 성질의 검정 대조군은 면역조직화학 검정에 일반적으로 사용될 수 있다. 대안적으로, 샘플은 건강한 대상체로부터의 생물학적 샘플 내의 BCMA의 양에 대한 표준화된 참조일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 시험된 대상체의 관찰된 BCMA 수준은 BCMA-발현 암 또는 장애를 갖는 것으로 알려진 대상체로부터의 샘플에서 관찰된 BCMA 수준과 비교될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 대조군 대상체는 특정 관심 암 또는 장애를 앓고 있을 수 있다. 일부 실시 형태에서, 대조군 대상체는 초기 암을 갖는 것으로 알려져 있으며, 이는 BCMA-발현 암일 수 있거나 그렇지 않을 수 있다. 일부 실시 형태에서, 대조군 대상체는 중기 암을 갖는 것으로 알려져 있으며, 이는 BCMA-발현 암일 수 있거나 그렇지 않을 수 있다. 일부 실시 형태에서, 대조군 대상체는 말기를 갖는 것으로 알려져 있으며, 이는 BCMA-발현 암일 수 있거나 그렇지 않을 수 있다.
일부 실시 형태에서, 암 또는 장애를 진단하기 위한 방법은 시험관내 방법이다.
암 또는 장애의 모니터링 방법
대상체에서 BCMA-발현 암 또는 장애를 모니터링 하기 위한 방법이 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, BCMA-발현 암 또는 장애는 림프종, 예컨대 무증상 다발성 골수종(SMM)을 포함하는 다발성 골수종(MM), 또는 아밀로이드증, 혈장 세포 백혈병 및 루푸스를 포함한다. 일부 실시 형태에서, BCMA-발현 암은 림프종의 재발성 또는 불응성 형태, 예컨대 다발성 골수종의 재발성 또는 불응성 형태이다. 일부 실시 형태에서, 기재된 방법은 대상체로부터 유래된 시험 샘플 내에 존재하는 BCMA의 양을 결정함으로써 BCMA-발현 암 또는 장애가 진행 중인지, 퇴행 중인지, 또는 안정적으로 유지되고 있는지의 여부를 평가하는 단계; 및 관찰된 BCMA의 양을, 초기 시점에 대상체로부터 유사한 방식으로 얻어진 생물학적 샘플 내의 BCMA의 양과 비교하는 단계를 포함하며, 여기서 시험 샘플 및 초기 샘플 내의 BCMA의 양 사이의 차이는 암이 진행 중인지, 퇴행 중인지, 또는 안정적으로 유지되고 있는지의 여부의 지표를 제공한다. 이와 관련하여, 초기 샘플에 대해 관찰된 양과 대비하여 증가된 BCMA의 양을 갖는 시험 샘플은 BCMA-발현 암 또는 장애의 진행을 나타낼 수 있다. 역으로, 초기 샘플에 대해 관찰된 양과 대비하여 감소된 BCMA의 양을 갖는 시험 샘플은 BCMA-발현 암 또는 장애의 퇴행을 나타낼 수 있다.
따라서, 초기 샘플에 대해 관찰된 양과 대비하여 BCMA의 양의 유의하지 않은 차이를 갖는 시험 샘플은 BCMA-발현 암 또는 장애에 대한 안정적인 질환의 상태를 나타낼 수 있다. 일부 실시 형태에서, 대상체로부터 유래된 생물학적 샘플 내의 BCMA의 양은 샘플을 BCMA에 결합하는 항체 또는 이의 항체 단편, 예컨대 본 명세서에 기재된 항체와 접촉시키는 단계에 의해 평가된다. BCMA의 존재에 대해 평가되는 샘플은 소변, 혈액, 혈청, 혈장, 타액, 복수, 순환 세포, 순환 종양 세포, 조직과 회합되지 않은 세포(즉, 유리 세포), 조직(예를 들어, 외과적으로 절제된 종양 조직, 생검, 미세 바늘 흡인물을 포함함), 조직 프레파라트 등으로부터 유래될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 대상은 인간이다.
일부 실시 형태에서, BCMA-발현 암 또는 장애의 모니터링 방법은 대상체의 생물학적 샘플을 BCMA-특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편(예컨대, 표 1에 제공된 항체 및 단편(예를 들어, BCMB519)으로부터 유도가능한 것들)과 접촉시키는 단계, 샘플 내에 존재하는 BCMA의 양을 정량화하는 단계, 샘플 내에 존재하는 BCMA의 양을, 초기 시점에 동일한 대상체로부터 유사한 방식으로 얻어진 생물학적 샘플 내에 있는 것으로 결정된 BCMA의 양과 비교하는 단계; 및 대상체의 BCMA 수준이 시간 경과에 따라 변화되었는지의 여부를 결정하는 단계를 포함할 것이다. 초기 샘플에 대해 관찰된 양과 대비하여 증가된 BCMA의 양을 갖는 시험 샘플은 암의 진행을 나타낼 수 있다. 역으로, 초기 샘플에 대해 관찰된 양과 대비하여 감소된 BCMA의 양을 갖는 시험 샘플은 BCMA-발현 암 또는 장애의 퇴행을 나타낼 수 있다. 따라서, 초기 샘플에 대해 관찰된 양과 대비하여 BCMA의 양의 유의하지 않은 차이를 갖는 시험 샘플은 BCMA-발현 암 또는 장애에 대한 안정적인 질환의 상태를 나타낼 수 있다. 일부 실시 형태에서, 샘플의 BCMA 수준은, 단독으로 또는 초기 시점에 평가된 샘플에 대해 관찰된 BCMA 수준에 더하여, 알려진 표준 샘플 또는 참조 샘플과 비교할 수 있다. 추가의 실시 형태에서, 진단 방법 이후에는 BCMA-특이적 치료를 투여하는 추가의 단계가 이어질 수 있다. 일부 실시 형태에서는, 본 명세서에 기재된 BCMA x CD3 다중특이적 항체와 같은, BCMA-특이적 치료가 BCMA-발현 암 또는 장애에 대해 유도될 수 있다.
다양한 태양에서, BCMA의 양은 샘플을 BCMA에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계에 의해 결정된다. 일부 실시 형태에서, 샘플은 BCMA에 결합하는 1개 초과의 유형의 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의해 접촉될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 샘플은 BCMA에 결합하는 제1 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의해 접촉되고, 이어서 BCMA에 결합하는 제2 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의해 접촉될 수 있다. 항체, 예컨대 본 명세서에 기재된 것들은 이러한 능력에 사용될 수 있다.
표 1에 기재된 항체 및 항원 결합 단편의 다양한 조합이 기재된 모니터링 방법을 수행하도록 "제1" 및 "제2" 항체 또는 항원 결합 단편을 제공하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, BCMA-발현 암 또는 장애는 혈액암, 예컨대 급성 골수성 백혈병(AML) 또는 림프종(예를 들어, 다발성 골수종(MM), 무증상 다발성 골수종(SMM)), 또는 아밀로이드증, 형질 세포 백혈병, 및 루푸스를 포함한다.
소정 실시 형태에서, BCMA의 양은 웨스턴 블롯 분석, 방사면역검정, 면역형광측정, 면역침강, 평형 투석, 면역확산, 전기화학발광(ECL) 면역검정, 면역조직화학, 형광-활성화 세포 분류(FACS), 또는 ELISA 검정에 의해 결정된다. 일부 실시 형태에서, 본 방법은 시험관내 방법이다.
BCMA를 검출하기 위한 키트
생물학적 샘플에서 BCMA를 검출하기 위한 키트가 본 명세서에 제공된다. 이러한 키트는 본 명세서에 기재된 하나 이상의 BCMA-특이적 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 키트의 사용설명서를 포함한다.
제공된 BCMA-특이적 항체 또는 항원-결합 단편은 용액 상태일 수 있거나; 동결건조될 수 있거나; 기재, 캐리어 또는 플레이트에 부착될 수 있거나; 검출가능하게 표지될 수 있다.
기재된 키트는 또한 본 명세서에 기재된 방법을 수행하기에 유용한 추가 성분을 포함할 수 있다. 예로서, 키트는 대상으로부터 샘플을 획득하기 위한 수단, 대조군 샘플 또는 참조 샘플, 예를 들어 느리게 진행되는 암을 갖는 대상 및/또는 암을 갖지 않는 대상으로부터의 샘플, 하나 이상의 샘플 구획, 및/또는 본 발명의 방법의 수행 및 조직 특이적 대조물 또는 표준물을 설명한 교육용 자료를 포함할 수 있다.
BCMA의 수준을 결정하기 위한 수단은, 예를 들어, BCMA의 수준을 결정하기 위한 검정에 사용하기 위한 완충액 또는 다른 시약을 추가로 포함할 수 있다. 설명서는, 예를 들어, 검정을 수행하기 위한 인쇄된 설명서 및/또는 BCMA의 발현 수준을 평가하기 위한 설명서일 수 있다.
기재된 키트는 또한 대상으로부터 샘플을 분리하기 위한 수단을 포함할 수 있다. 이러한 수단은 대상으로부터 체액 또는 조직을 획득하기 위해 사용될 수 있는 시약 또는 장비 중 하나 이상의 아이템을 포함할 수 있다. 대상으로부터 샘플을 획득하기 위한 수단은 또한 혈액 샘플로부터 혈액 성분, 예컨대 혈청을 분리하기 위한 수단을 포함할 수 있다. 바람직하게는, 키트는 인간 대상에서의 사용을 위해 설계된다.
실시형태
본 명세서에 제공된 본 발명은 또한 하기의 비제한적인 실시 형태를 제공한다.
실시 형태 1.
(a) 제1 중쇄 가변 도메인(VH1) 및 제1 경쇄 가변 도메인(VL1)을 포함하는 제1 항원-결합 아암;
(b) 제2 중쇄 가변 도메인(VH2) 및 제2 경쇄 가변 도메인(VL2)을 포함하는 제2 항원-결합 아암;
(c) 제3 중쇄 가변 도메인(VH3) 및 제3 경쇄 가변 도메인(VL3)을 포함하는 제3 항원-결합 아암을 포함하며,
여기서 제1 항원-결합 아암은 분화 클러스터 3(CD3) 상의 에피토프에 결합하고, 제2 항원-결합 아암은 G-단백질 커플링된 수용체 패밀리 C 군 5 구성원 D(GPRC5D) 상의 에피토프에 결합하고, 제3 항원-결합 아암은 B 세포 성숙 항원(BCMA) 상의 에피토프에 결합하는, 삼중특이적 항체 또는 이의 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 2. 실시 형태 1에 있어서, 제1 항원-결합 아암의 VH1 및 VL1은 다이아바디, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv, Fd, 다이설파이드 안정화 Fv 단편(dsFv), 또는 다이설파이드 안정화 다이아바디(ds 다이아바디), 임의로 Fab 내에 존재하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 3. 실시 형태 1 또는 실시 형태 2에 있어서, 제2 항원-결합 아암의 VH2 및 VL2는 다이아바디, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv, Fv, Fd, 다이설파이드 안정화 Fv 단편(dsFv), 또는 다이설파이드 안정화 다이아바디(ds 다이아바디), 임의로 scFv 내에 존재하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 4. 실시 형태 1 내지 실시 형태 3 중 어느 하나에 있어서, 제3 항원-결합 아암의 VH3 및 VL3은 항체 단편, 다이아바디, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv, Fd, 다이설파이드 안정화 Fv 단편(dsFv), 또는 다이설파이드 안정화 다이아바디(ds 다이아바디), 임의로 scFv 내에 존재하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 5. 실시 형태 1 내지 실시 형태 4 중 어느 하나에 있어서, CD3에 결합하는 제1 항원-결합 아암은 서열 번호 8의 중쇄 가변 도메인(VH1)의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) 1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열 번호 7의 경쇄 가변 도메인(VL1)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR) 1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 6. 실시 형태 1 내지 실시 형태 5 중 어느 하나에 있어서, CD3에 결합하는 제1 항원-결합 아암은 GDSVFNNNAAWS(서열 번호 4)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, RTYYRSKWLYD(서열 번호 5)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 GYSSSFDY(서열 번호 6)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; 및 TGTSSNIGTYKFVS(서열 번호 1)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, EVSKRPS(서열 번호 2)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 VSYAGSGTLL(서열 번호 3)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 7. 실시 형태 1 내지 실시 형태 6 중 어느 하나에 있어서, CD3에 결합하는 제1 항원-결합 아암은 서열 번호 8의 VH1 및 서열 번호 7의 VL1을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 8. 실시 형태 1 내지 실시 형태 7 중 어느 하나에 있어서, GPRC5D에 결합하는 제2 항원-결합 아암은 서열 번호 16의 중쇄 가변 도메인(VH2)의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) 1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열 번호 15의 경쇄 가변 도메인(VL2)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR) 1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 9. 실시 형태 1 내지 실시 형태 8 중 어느 하나에 있어서, GPRC5D에 결합하는 제2 항원-결합 아암은 GFSLTNIRMSVS(서열 번호 12)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HIFSNDEKS(서열 번호 13)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 MRLPYGMDV(서열 번호 14)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; 및 RSSQSLVHSDGNTYLS(서열 번호 9)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, KISNRFF(서열 번호 10)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 MQATQFPHT(서열 번호 11)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 10. 실시 형태 1 내지 실시 형태 9 중 어느 하나에 있어서, GPRC5D에 결합하는 제2 항원-결합 아암은 서열 번호 16의 VH2 및 서열 번호 15의 VL2를 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 11. 실시 형태 1 내지 실시 형태 10 중 어느 하나에 있어서, BCMA에 결합하는 제3 항원-결합 아암은 서열 번호 24의 중쇄 가변 도메인(VH3)의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) 1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열 번호 23의 경쇄 가변 도메인(VL3)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR) 1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 12. 실시 형태 1 내지 실시 형태 11 중 어느 하나에 있어서, BCMA에 결합하는 제3 항원-결합 아암은 GFTFSSYAMS(서열 번호 20)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, AISGSGGSTY(서열 번호 21)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 DEGYSSGHYYGMDV(서열 번호 22)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; 및 RASQSISSSFLT(서열 번호 17)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, GASSRAT(서열 번호 18)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 QHYGSSPMYT(서열 번호 19)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 13. 실시 형태 1 내지 실시 형태 12 중 어느 하나에 있어서, BCMA에 결합하는 제3 항원-결합 아암은 서열 번호 24의 VH3 및 서열 번호 23의 VL3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 14. 실시 형태 1 내지 실시 형태 4 중 어느 하나에 있어서, CD3에 결합하는 제1 항원-결합 아암은 서열 번호 8의 VH1의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열 번호 7의 VL1의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고;
GPRC5D에 결합하는 제2 항원-결합 아암은 서열 번호 16의 VH2의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열 번호 15의 VL2의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고;
BCMA에 결합하는 제3 항원-결합 아암은 서열 번호 24의 VH3의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열 번호 23의 VL3의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 15. 실시 형태 1 내지 실시 형태 4 및 실시 형태 14 중 어느 하나에 있어서, CD3에 결합하는 제1 항원-결합 아암은 각각 서열 번호 4, 5, 6, 1, 2, 3의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고;
GPRC5D에 결합하는 제2 항원-결합 아암은 각각 서열 번호 12, 13, 14, 9, 10, 및 11의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고;
BCMA에 결합하는 제3 항원-결합 아암은 각각 서열 번호 20, 21, 22, 17, 18, 및 19의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 16. 실시 형태 1 내지 실시 형태 4, 실시 형태 14, 및 실시 형태 15 중 어느 하나에 있어서, CD3에 결합하는 제1 항원-결합 아암은 서열 번호 8의 VH1 및 서열 번호 7의 VL1을 포함하고;
GPRC5D에 결합하는 제2 항원-결합 아암은 서열 번호 16의 VH2 및 서열 번호 15의 VL2를 포함하고;
BCMA에 결합하는 제3 항원-결합 아암은 서열 번호 24의 VH3 및 서열 번호 23의 VL3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 17. 실시 형태 1 내지 실시 형태 16 중 어느 하나에 있어서, 제1 항원-결합 아암은 단편 결정화가능(Fc) 도메인을 포함하고, 제2 항원-결합 아암 또는 제3 항원-결합 아암은 Fc 도메인을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 이의 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 18. 실시 형태 17에 있어서, Fc 도메인은 Fc 도메인의 이종이량체화를 촉진하는 하나 이상의 돌연변이를 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 이의 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 19. 실시 형태 18에 있어서, 돌연변이는 T366S, L368A, T366W, 및 Y407V(EU 넘버링)로부터 선택되는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 20. 실시 형태 17 내지 실시 형태 19 중 어느 하나에 있어서, Fc 도메인은 Fcγ 수용체에 대한 Fc 결합을 감소시키는 하나 이상의 돌연변이를 추가로 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 21. 실시 형태 20에 있어서, Fcγ 수용체는 FcyRI, FcyRIIA, FcyRIIB, FcyRIIIA, 및/또는 FcyRIIIB인, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 22. 실시 형태 20 또는 실시 형태 21에 있어서, Fc 도메인은 L234A, L235A, 및 D265S(EU 넘버링)로부터 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 23. 실시 형태 17 내지 실시 형태 22 중 어느 하나에 있어서, Fc 도메인은 단백질 A에 대한 Fc 결합을 감소시키는 하나 이상의 돌연변이를 추가로 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 24. 실시 형태 23에 있어서, Fc 도메인은 돌연변이 H435R 및/또는 Y436F(EU 넘버링)를 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 25. 실시 형태 1 내지 실시 형태 24 중 어느 하나에 있어서, 제1 항원-결합 아암은 CD3ε 사슬의 잔기 22 내지 35(QDGNEEMGGITQTP(서열 번호 161))에 특이적으로 결합하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 26. 실시 형태 1 내지 실시 형태 25 중 어느 하나에 있어서, 제1 항원-결합 아암은 약 1 ×10-8 내지 1 ×10-7 M의 친화도로 CD3에 특이적으로 결합하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 27. 실시 형태 26에 있어서, 제1 항원-결합 아암은 약 2 ×10-8 내지 4 x 10-8 M의 친화도로 CD3에 특이적으로 결합하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 28. 실시 형태 1 내지 실시 형태 27 중 어느 하나에 있어서, 제3 항원-결합 아암은 BCMA BCMW37 사슬의 잔기 17 내지 26(LLHACIPCQL(서열 번호 162))에 특이적으로 결합하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 29. 실시 형태 1 내지 실시 형태 28 중 어느 하나에 있어서, 제3 항원-결합 아암은 약 1 ×10-10 내지 1 x 10-7 M의 친화도로 BCMA에 특이적으로 결합하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 30. 실시 형태 29에 있어서, 제3 항원-결합 아암은 약 2 ×10-10 내지 9 ×10-10 M의 친화도로 BCMA에 특이적으로 결합하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 31. 분화 클러스터 3(CD3) 상의 에피토프에 결합하는 제1 항원-결합 아암, G-단백질 커플링된 수용체 패밀리 C 군 5 구성원 D(GPRC5D) 상의 에피토프에 결합하는 제2 항원-결합 아암, 및 B 세포 성숙 항원(BCMA) 상의 에피토프에 결합하는 제3 항원-결합 아암을 포함하며,
여기서 제1 항원-결합 아암은 중쇄(HC1) 폴리펩티드 및 경쇄(LC) 폴리펩티드를 포함하고;
제2 항원-결합 아암 및 제3 항원-결합 아암을 포함하는 단일 폴리펩티드를 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 32. 실시 형태 31에 있어서, 제1 항원-결합 아암의 HC1은 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 33. 실시 형태 32에 있어서, 제1 항원-결합 아암의 LC는 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 34. 실시 형태 32 또는 실시 형태 33에 있어서, 제2 항원-결합 아암 및 제3 항원-결합 아암을 포함하는 폴리펩티드는 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 35. 실시 형태 31에 있어서, 제1 항원-결합 아암은 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 HC1, 및 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하고, 제2 항원-결합 아암 및 제3 항원-결합 아암을 포함하는 폴리펩티드는 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 36. 분화 클러스터 3(CD3) 상의 에피토프에 결합하는 제1 항원-결합 아암, G-단백질 커플링된 수용체 패밀리 C 군 5 구성원 D(GPRC5D) 상의 에피토프에 결합하는 제2 항원-결합 아암, 및 B 세포 성숙 항원(BCMA) 상의 에피토프에 결합하는 제3 항원-결합 아암을 포함하며,
여기서 제1 항원-결합 아암은 중쇄(HC1) 폴리펩티드 및 경쇄(LC) 폴리펩티드를 포함하고, 여기서 중쇄(HC1) 폴리펩티드는 제2 항원-결합 아암을 추가로 포함하며,
제3 항원-결합 아암을 포함하는 단일 폴리펩티드를 추가로 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 37. 실시 형태 36에 있어서, 제1 항원-결합 아암의 HC1은 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 38. 실시 형태 36 또는 실시 형태 37에 있어서, 제1 항원-결합 아암의 LC는 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 39. 실시 형태 36 내지 실시 형태 38 중 어느 하나에 있어서, 제3 항원-결합 아암을 포함하는 단일 폴리펩티드는 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 40. 실시 형태 36에 있어서, 제1 항원-결합 아암은 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HC1, 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하고, 제3 항원-결합 아암을 포함하는 단일 폴리펩티드는 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 41. 실시 형태 1 내지 실시 형태 40 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 동종형인, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 42. 실시 형태 1 내지 실시 형태 41 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG1 동종형인, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 43. 실시 형태 1 내지 실시 형태 42 중 어느 하나의 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편을 인코딩하는, 합성 폴리뉴클레오티드.
실시 형태 44. 실시 형태 1 내지 실시 형태 42 중 어느 하나의 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는, 약제학적 조성물.
실시 형태 45. 실시 형태 44에 있어서, 제2 치료제를 추가로 포함하는, 약제학적 조성물.
실시 형태 46. 실시 형태 45에 있어서, 제2 치료제는 항-CD38 제제, 면역조절 이미드 약물(IMiD), 면역 체크포인트 억제제, 면역 공동자극제, 감마 세크레타제 억제제, T-세포 인핸서, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는, 약제학적 조성물.
실시 형태 47. 실시 형태 1 내지 실시 형태 42 중 어느 하나의 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편을 발현하는, 세포.
실시 형태 48. 실시 형태 47에 있어서, 하이브리도마인, 세포.
실시 형태 49. 실시 형태 47에 있어서, 삼중특이적 항체는 재조합적으로 생성되는, 세포.
실시 형태 50. 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하기 위한 방법으로서, 실시 형태 1 내지 실시 형태 42 중 어느 하나의 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편 또는 실시 형태 43 내지 실시 형태 46 중 어느 하나의 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
실시 형태 51. 실시 형태 50에 있어서, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편 또는 약제학적 조성물은 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 투여되는, 방법.
실시 형태 52. 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하기 위한 방법으로서, 실시 형태 1 내지 실시 형태 42 중 어느 하나의 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편 또는 실시 형태 43 내지 실시 형태 46 중 어느 하나의 약제학적 조성물의 유효량을 상기 세포에 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 상기 유효량은 상기 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하기에 충분한, 방법.
실시 형태 53. 실시 형태 52에 있어서, 상기 암 세포는 대상체 내에 존재하며, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편 또는 약제학적 조성물은 대상체에게 투여되는, 방법.
실시 형태 54. 실시 형태 52에 있어서, 상기 투여는 생체외에서 수행되는, 방법.
실시 형태 55. T 세포를 BCMA 및/또는 GPRC5D-발현 암 세포로 방향전환시키는 것을 필요로 하는 대상체에서 T 세포를 BCMA 및/또는 GPRC5D-발현 암 세포로 방향전환시키는 방법으로서, 실시 형태 1 내지 실시 형태 42 중 어느 하나의 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편 또는 실시 형태 43 내지 실시 형태 46 중 어느 하나의 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
실시 형태 56. 실시 형태 55에 있어서, 상기 치료적 유효량은 상기 T 세포 반응을 상기 암 세포로 유도하기에 충분한, 방법.
실시 형태 57. 실시 형태 50 내지 실시 형태 56 중 어느 하나에 있어서, 암은 혈액암인, 방법.
실시 형태 58. 실시 형태 57에 있어서, 혈액암은 BCMA 및/또는 GPRC5D-발현 B 세포 암인, 방법.
실시 형태 59. 실시 형태 58에 있어서, BCMA 및/또는 GPRC5D-발현 B 세포 암은 다발성 골수종인, 방법.
실시 형태 60. 실시 형태 59에 있어서, BCMA 및/또는 GPRC5D-발현 B 세포 암은 무증상 다발성 골수종(SMM)인, 방법.
실시 형태 61. 실시 형태 50 내지 실시 형태 60 중 어느 하나에 있어서, 암은 재발성, 불응성, 또는 악성 암, 또는 이들의 임의의 조합인, 방법.
실시 형태 62. 실시 형태 50, 실시 형태 51, 실시 형태 53, 및 실시 형태 55 내지 실시 형태 61 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 이전 치료를 받은 적이 있는, 방법.
실시 형태 63. 실시 형태 62에 있어서, 이전 치료는 프로테아좀 억제제, 면역조절 약물, CD38 항체, 이중특이적 제제, CAR-T 요법, 또는 이들의 조합을 포함하는, 방법.
실시 형태 64. 실시 형태 50 내지 실시 형태 63 중 어느 하나에 있어서, 제2 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
실시 형태 65. 실시 형태 64에 있어서, 제2 치료제는 화학요법제 또는 표적화 항암 요법인, 방법.
실시 형태 66. 실시 형태 65에 있어서, 화학요법제는 시타라빈, 안트라사이클린, 히스타민 다이하이드로클로라이드, 또는 인터류킨 2(IL-2)인, 방법.
실시 형태 67. 실시 형태 64에 있어서, 제2 치료제는 항-CD38 제제, 면역조절 이미드 약물(IMiD), 면역 체크포인트 억제제, 면역 공동자극제, 감마 세크레타제 억제제, T-세포 인핸서, 또는 이들의 임의의 조합인, 방법.
실시 형태 68. 실시 형태 50, 실시 형태 51, 실시 형태 53, 및 실시 형태 55 내지 실시 형태 67 중 어느 하나에 있어서, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편, 또는 약제학적 조성물은 대상체에게 정맥내, 근육내, 복강내, 및/또는 피하 투여되는, 방법.
실시 형태 69. 실시 형태 50, 실시 형태 51, 실시 형태 53, 및 실시 형태 55 내지 실시 형태 68 중 어느 하나에 있어서, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편, 또는 약제학적 조성물은 대상체에게 피하 투여되는, 방법.
실시 형태 70. 실시 형태 1 내지 실시 형태 42 중 어느 하나의 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편을 생성하기 위한 방법으로서, 실시 형태 47 내지 실시 형태 49 중 어느 하나의 세포를 배양하는 단계 및 상기 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편을 단리하는 단계를 포함하는, 방법.
실시 형태 71. (i) 실시 형태 1 내지 실시 형태 42 중 어느 하나의 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편 및/또는 실시 형태 43의 폴리뉴클레오티드 및 (ii) 이를 위한 패키징을 포함하는, 키트.
실시 형태 72. GFTFSSYAMS(서열 번호 20)의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR1), AISGSGGSTY(서열 번호 21)의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2, 및 DEGYSSGHYYGMDV(서열 번호 22)의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3을 포함하는, BCMA에 결합하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
실시 형태 73. 실시 형태 72에 있어서, RASQSISSSFLT(서열 번호 17)의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR1), GASSRAT(서열 번호 18)의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2, 및 QHYGSSPMYT(서열 번호 19)의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3을 추가로 포함하는, 항체 또는 항원-결합 단편.
실시 형태 74. 실시 형태 72 또는 실시 형태 73에 있어서, 서열 번호 24의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하는, 항체 또는 항원-결합 단편.
실시 형태 75. 실시 형태 72 내지 실시 형태 74 중 어느 하나에 있어서, 서열 번호 23의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는, 항체 또는 항원-결합 단편.
실시 형태 76. 실시 형태 72 내지 실시 형태 75 중 어느 하나에 있어서, BCMA BCMW37 사슬의 잔기 17 내지 26(LLHACIPCQL(서열 번호 162))에 특이적으로 결합하는, 항체 또는 항원-결합 단편.
실시 형태 77. 실시 형태 72 내지 실시 형태 76 중 어느 하나에 있어서, 약 1 ×10-10 내지 1 × 10-7 M의 친화도로 BCMA에 특이적으로 결합하는, 항체 또는 항원-결합 단편.
실시 형태 78. 실시 형태 77에 있어서, 약 2 ×10-10 내지 9 ×10-10 M의 친화도로 BCMA에 특이적으로 결합하는, 항체 또는 항원-결합 단편.
실시 형태 79. 실시 형태 72 내지 실시 형태 78 중 어느 하나에 있어서, 인간 항체 또는 항원-결합 단편인, 항체 또는 항원-결합 단편.
실시 형태 80. 실시 형태 72 내지 실시 형태 79 중 어느 하나에 있어서, 재조합체인, 항체 또는 항원-결합 단편.
실시 형태 81. 실시 형태 72 내지 실시 형태 80 중 어느 하나에 있어서, Fab 단편, Fab2 단편, 또는 단일쇄 항체인, 항원 결합 단편.
실시 형태 82. 실시 형태 72 내지 실시 형태 81 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 동종형인, 항체 또는 항원-결합 단편.
실시 형태 83. 실시 형태 72 내지 실시 형태 82 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 동종형인, 항체 또는 항원-결합 단편.
실시 형태 84. 실시 형태 72 내지 실시 형태 83 중 어느 하나의 항체 또는 항원-결합 단편 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는, 약제학적 조성물.
실시 형태 85. 실시 형태 84에 있어서, 제2 치료제를 추가로 포함하는, 약제학적 조성물.
실시 형태 86. 실시 형태 85에 있어서, 제2 치료제는 항-CD38 제제, 면역조절 이미드 약물(IMiD), 면역 체크포인트 억제제, 면역 공동자극제, 감마 세크레타제 억제제, T-세포 인핸서, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는, 약제학적 조성물.
실시 형태 87. 실시 형태 72 내지 실시 형태 83 중 어느 하나의 항체 또는 항원-결합 단편을 발현하는 세포.
실시 형태 88. 실시 형태 87에 있어서, 하이브리도마인, 세포.
실시 형태 89. 실시 형태 87에 있어서, 항체는 재조합적으로 생성되는, 세포.
실시 형태 90. 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하기 위한 방법으로서, 실시 형태 72 내지 실시 형태 83 중 어느 하나의 항체 또는 항원-결합 단편 또는 실시 형태 84 내지 실시 형태 86 중 어느 하나의 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
실시 형태 91. 실시 형태 90에 있어서, 항체 또는 항원-결합 단편 또는 약제학적 조성물은 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 투여되는, 방법.
실시 형태 92. 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하기 위한 방법으로서, 실시 형태 72 내지 실시 형태 83 중 어느 하나의 항체 또는 항원-결합 단편 또는 실시 형태 84 내지 실시 형태 86 중 어느 하나의 약제학적 조성물의 유효량을 상기 세포에 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 상기 유효량은 상기 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하기에 충분한, 방법.
실시 형태 93. 실시 형태 92에 있어서, 상기 암 세포는 대상체 내에 존재하며, 항체 또는 항원-결합 단편 또는 약제학적 조성물은 대상체에게 투여되는, 방법.
실시 형태 94. 실시 형태 92에 있어서, 상기 투여는 생체외에서 수행되는, 방법.
실시 형태 95. 실시 형태 90 내지 실시 형태 94 중 어느 하나에 있어서, 암은 혈액암인, 방법.
실시 형태 96. 실시 형태 95에 있어서, 혈액암은 BCMA-발현 B 세포 암인, 방법.
실시 형태 97. 실시 형태 96에 있어서, BCMA-발현 B 세포 암은 다발성 골수종인, 방법.
실시 형태 98. 실시 형태 97에 있어서, BCMA-발현 B 세포 암은 무증상 다발성 골수종(SMM)인, 방법.
실시 형태 99. 실시 형태 90 내지 실시 형태 98 중 어느 하나에 있어서, 암은 재발성, 불응성, 또는 악성 암, 또는 이들의 임의의 조합인, 방법.
실시 형태 100. 실시 형태 90, 실시 형태 91, 실시 형태 93, 및 실시 형태 95 내지 실시 형태 99 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 이전 치료를 받은 적이 있는, 방법.
실시 형태 101. 실시 형태 100에 있어서, 이전 치료는 프로테아좀 억제제, 면역조절 약물, CD38 항체, 이중특이적 제제, CAR-T 요법, 또는 이들의 조합을 포함하는, 방법.
실시 형태 102. 실시 형태 90 내지 실시 형태 101 중 어느 하나에 있어서, 제2 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
실시 형태 103. 실시 형태 102에 있어서, 제2 치료제는 화학요법제 또는 표적화 항암 요법인, 방법.
실시 형태 104. 실시 형태 103에 있어서, 화학요법제는 시타라빈, 안트라사이클린, 히스타민 다이하이드로클로라이드, 또는 인터류킨 2(IL-2)인, 방법.
실시 형태 105. 실시 형태 104에 있어서, 제2 치료제는 항-CD38 제제, 면역조절 이미드 약물(IMiD), 면역 체크포인트 억제제, 면역 공동자극제, 감마 세크레타제 억제제, T-세포 인핸서, 또는 이들의 임의의 조합인, 방법.
실시 형태 106. 실시 형태 90, 실시 형태 91, 실시 형태 93, 및 실시 형태 95 내지 실시 형태 105 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 항원-결합 단편 또는 약제학적 조성물은 대상체에게 정맥내, 근육내, 복강내, 및/또는 피하 투여되는, 방법.
실시 형태 107. 실시 형태 90, 실시 형태 91, 실시 형태 93, 및 실시 형태 95 내지 실시 형태 106 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 항원-결합 단편, 또는 약제학적 조성물은 대상체에게 피하 투여되는, 방법.
실시 형태 108. 실시 형태 72 내지 실시 형태 83 중 어느 하나의 항체 또는 항원-결합 단편을 생성하기 위한 방법으로서, 실시 형태 87 내지 실시 형태 89 중 어느 하나의 세포를 배양하는 단계 및 상기 항체 또는 항원-결합 단편을 단리하는 단계를 포함하는, 방법.
실시 형태 109. 실시 형태 72 내지 실시 형태 83 중 어느 하나의 항체 또는 항원-결합 단편을 인코딩하는, 합성 폴리뉴클레오티드.
실시 형태 110. (i) 실시 형태 72 내지 실시 형태 83 중 어느 하나의 항체 또는 항원-결합 단편 및/또는 실시 형태 109의 폴리뉴클레오티드 및 (ii) 이를 위한 패키징을 포함하는, 키트.
실시 형태 111.
a) 제1 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하는 제1 중쇄 부분(HC1);
b) 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는 경쇄 부분(LC); 및
c) 제2 VH 도메인을 포함하는 제2 중쇄 부분(HC2)을 포함하며,
여기서,
(i) HC1 VH 및 LC VL 도메인은 제1 항원에 결합하는 제1 항원-결합 부위를 형성하고,
(ii) HC2 VH 도메인은 제2 항원에 결합하는 제2 항원-결합 부위를 형성하고,
(iii) HC1 또는 HC2는 제3 항원에 결합하는 제3 항원-결합 부위를 형성하는 제3 VH 도메인을 추가로 포함하고,
(iv) HC1 및 HC2는 각각 CH2-CH3 도메인을 포함하는 단편 결정화가능(Fc) 도메인을 임의로 포함하며;
여기서 제1 항원은 분화 클러스터 3(CD3)이고,
(v) 제2 항원은 B 세포 성숙 항원(BCMA)이고, 제3 항원은 G-단백질 커플링된 수용체 패밀리 C 군 5 구성원 D(GPRC5D)이거나;
(vi) 제2 항원은 G-단백질 커플링된 수용체 패밀리 C 군 5 구성원 D(GPRC5D)이고, 제3 항원은 B 세포 성숙 항원(BCMA)인, 삼중특이적 항체 또는 이의 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 112. 실시 형태 111에 있어서, HC2는 제3 항원에 결합하는 제3 항원-결합 부위를 형성하는 제3 VH 도메인을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 113. 실시 형태 112에 있어서, HC2는 N에서 C-말단으로, 제2 항원-결합 부위를 형성하는 제2 VH 도메인, Fc 도메인, 제1 링커(L1), 및 제3 항원-결합 부위를 형성하는 제3 VH 도메인을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 114. 실시 형태 111 내지 실시 형태 113 중 어느 하나에 있어서, HC2는 GPRC5D에 결합하는 제2 항원-결합 부위를 형성하는 제2 VH 도메인을 포함하고, HC2는 BCMA에 결합하는 제3 항원-결합 부위를 형성하는 제3 VH 도메인을 추가로 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 115. 실시 형태 111에 있어서, HC1은 제3 항원에 결합하는 제3 항원-결합 부위를 형성하는 제3 VH 도메인을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 116. 실시 형태 115에 있어서, HC1은 N에서 C-말단으로, 제1 항원-결합 부위를 형성하는 제1 VH, CH1 도메인, Fc 도메인, 제1 링커(L1), 및 제3 항원-결합 부위를 형성하는 제3 VH를 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 117. 실시 형태 111, 실시 형태 115, 및 실시 형태 116 중 어느 하나에 있어서, HC2는 BCMA에 결합하는 제2 항원-결합 부위를 형성하는 제2 VH 도메인을 포함하고, HC1은 GPRC5D에 결합하는 제3 항원-결합 부위를 형성하는 제3 VH 도메인을 추가로 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 118. 실시 형태 111 내지 실시 형태 117 중 어느 하나에 있어서, HC1 VH 및 LC VL은 제1 항원-결합 부위를 포함하는 항원-결합 단편(Fab)을 포함하는 제1 항원-결합 부위를 형성하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 119. 실시 형태 111 내지 실시 형태 118 중 어느 하나에 있어서, HC2 VH는 제2 항원-결합 부위를 포함하는 단일쇄 가변 단편(scFv)을 형성하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 120. 실시 형태 111 내지 실시 형태 119 중 어느 하나에 있어서, 제3 VH는 제3 항원-결합 부위를 포함하는 단일쇄 가변 단편(scFv)을 형성하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 121. 실시 형태 111 내지 실시 형태 120 중 어느 하나에 있어서, HC1 및 HC2의 Fc 도메인은 이종이량체화를 촉진하는 하나 이상의 상이한 돌연변이를 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 122. 실시 형태 121에 있어서, HC1의 Fc 도메인은 돌연변이 T366S, L368A, 및 Y407V(EU 넘버링)를 포함하고 HC2의 Fc 도메인은 돌연변이 T366W(EU 넘버링)를 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 123. 실시 형태 121에 있어서, HC2의 Fc 도메인은 돌연변이 T366S, L368A, 및 Y407V(EU 넘버링)를 포함하고 HC1의 Fc 도메인은 돌연변이 T366W(EU 넘버링)를 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 124. 실시 형태 111 내지 실시 형태 123 중 어느 하나에 있어서, HC1 및/또는 HC2의 Fc 도메인은 Fcγ 수용체에 대한 Fc 결합을 감소시키는 하나 이상의 돌연변이를 추가로 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 125. 실시 형태 124에 있어서, Fcγ 수용체는 FcyRI, FcyRIIA, FcyRIIB, FcyRIIIA, 및/또는 FcyRIIIB인, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 126. 실시 형태 124 또는 실시 형태 125에 있어서, HC1 및/또는 HC2의 Fc 도메인은 L234A, L235A, 및 D265S(EU 넘버링)로부터 선택된 하나 이상의 돌연변이를 각각 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 127. 실시 형태 126에 있어서, HC1 및 HC2의 Fc 도메인은 돌연변이 L234A, L235A, 및 D265S(EU 넘버링)를 각각 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 128. 실시 형태 111 내지 실시 형태 127 중 어느 하나에 있어서, HC1 또는 HC2의 Fc 도메인은 단백질 A에 대한 Fc 결합을 감소시키는 하나 이상의 돌연변이를 추가로 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 129. 실시 형태 128에 있어서, HC1 또는 HC2의 Fc 도메인은 돌연변이 H435R 및/또는 Y436F(EU 넘버링)를 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 130. 실시 형태 129에 있어서, HC1의 Fc 도메인은 돌연변이 H435R 및 Y436F(EU 넘버링)를 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 131. 실시 형태 113, 실시 형태 114, 및 실시 형태 116 내지 실시 형태 130 중 어느 하나에 있어서, 제1 링커(L1)는 서열 번호 25, 127 내지 157, 및 163의 아미노산 서열 중 어느 하나를 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 132. 실시 형태 131에 있어서, 제1 링커(L1)는 GGSEGKSSGSGSESKSTGGS(서열 번호 25) 또는 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS((G4S)4, 서열 번호 163)의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 133. 실시 형태 111 내지 실시 형태 132 중 어느 하나에 있어서, CD3에 결합하는 제1 항원-결합 부위는 GDSVFNNNAAWS(서열 번호 4)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR1), RTYYRSKWLYD(서열 번호 5)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 GYSSSFDY(서열 번호 6)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 134. 실시 형태 111 내지 실시 형태 133 중 어느 하나에 있어서, CD3에 결합하는 제1 항원-결합 부위는 TGTSSNIGTYKFVS(서열 번호 1)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR1), EVSKRPS(서열 번호 2)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 VSYAGSGTLL(서열 번호 3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 135. 실시 형태 111 내지 실시 형태 134 중 어느 하나에 있어서, CD3에 결합하는 제1 항원-결합 부위는 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 136. 실시 형태 111 내지 실시 형태 135 중 어느 하나에 있어서, CD3에 결합하는 제1 항원-결합 부위는 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 137. 실시 형태 111 내지 실시 형태 136 중 어느 하나에 있어서, GPRC5D에 결합하는 제2 또는 제3 항원-결합 부위는 GFSLTNIRMSVS(서열 번호 12)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR1), HIFSNDEKS(서열 번호 13)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 MRLPYGMDV(서열 번호 14)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 138. 실시 형태 111 내지 실시 형태 137 중 어느 하나에 있어서, GPRC5D에 결합하는 제2 또는 제3 항원-결합 부위는 RSSQSLVHSDGNTYLS(서열 번호 9)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR1), KISNRFF(서열 번호 10)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 MQATQFPHT(서열 번호 11)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 139. 실시 형태 111 내지 실시 형태 138 중 어느 하나에 있어서, GPRC5D에 결합하는 제2 또는 제3 항원-결합 부위는 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 140. 실시 형태 111 내지 실시 형태 139 중 어느 하나에 있어서, GPRC5D에 결합하는 제2 또는 제3 항원-결합 부위는 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 141. 실시 형태 111 내지 실시 형태 140 중 어느 하나에 있어서, BCMA에 결합하는 제2 또는 제3 항원-결합 부위는 GFTFSSYAMS(서열 번호 20)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR1), AISGSGGSTY(서열 번호 21)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 DEGYSSGHYYGMDV(서열 번호 22)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 142. 실시 형태 111 내지 실시 형태 141 중 어느 하나에 있어서, BCMA에 결합하는 제2 또는 제3 항원-결합 부위는 RASQSISSSFLT(서열 번호 17)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR1), GASSRAT(서열 번호 18)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 QHYGSSPMYT(서열 번호 19)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 143. 실시 형태 111 내지 실시 형태 142 중 어느 하나에 있어서, BCMA에 결합하는 제2 또는 제3 항원-결합 부위는 서열 번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 144. 실시 형태 111 내지 실시 형태 143 중 어느 하나에 있어서, BCMA에 결합하는 제2 또는 제3 항원-결합 부위는 서열 번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 145. 실시 형태 119 내지 실시 형태 144 중 어느 하나에 있어서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로, VH, 제2 링커(L2), 및 VL(VH-L2-VL); 또는 VL, L2, 및 VH(VL-L2-VH)를 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 146. 실시 형태 119 내지 실시 형태 145 중 어느 하나에 있어서, scFv는 N-말단에서 C-말단으로, VL, L2, 및 VH(VL-L2-VH)를 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 147. 실시 형태 145 또는 실시 형태 146에 있어서, 제2 링커(L2)는 서열 번호 25, 127 내지 157, 및 163의 아미노산 서열 중 어느 하나를 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 148. 실시 형태 145 내지 실시 형태 147 중 어느 하나에 있어서, L2는 GGSEGKSSGSGSESKSTGGS(서열 번호 25)의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 149. 실시 형태 111 내지 실시 형태 148 중 어느 하나에 있어서, 제1 항원-결합 부위는 CD3ε 사슬의 잔기 22 내지 35(QDGNEEMGGITQTP(서열 번호 161))에 특이적으로 결합하는, 항체 또는 항원-결합 단편.
실시 형태 150. 실시 형태 111 내지 실시 형태 149 중 어느 하나에 있어서, 제1 항원-결합 부위는 약 1 ×10-8 내지 1 ×10-7 M의 친화도로 CD3에 특이적으로 결합하는, 항체 또는 항원-결합 단편.
실시 형태 151. 실시 형태 150에 있어서, 제1 항원-결합 부위는 약 2 ×10-8 내지 4 × 10-8 M의 친화도로 CD3에 특이적으로 결합하는, 항체 또는 항원-결합 단편.
실시 형태 152. 실시 형태 111 내지 실시 형태 151 중 어느 하나에 있어서, 제2 또는 제3 항원-결합 부위는 BCMA BCMW37 사슬의 잔기 17 내지 26(LLHACIPCQL(서열 번호 162))에 특이적으로 결합하는, 항체 또는 항원-결합 단편.
실시 형태 153. 실시 형태 152에 있어서, 제2 또는 제3 항원-결합 부위는 약 1 ×10-10 내지 1 × 10-7 M의 친화도로 BCMA에 특이적으로 결합하는, 항체 또는 항원-결합 단편.
실시 형태 154. 실시 형태 153에 있어서, 제2 또는 제3 항원-결합 부위는 약 2 ×10-10 내지 9 ×10-10 M의 친화도로 BCMA에 특이적으로 결합하는, 항체 또는 항원-결합 단편.
실시 형태 155. 실시 형태 111 내지 실시 형태 154 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 동종형인, 항체 또는 항원-결합 단편.
실시 형태 156. 실시 형태 111 내지 실시 형태 155 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG1 동종형인, 항체 또는 항원-결합 단편.
실시 형태 157. 실시 형태 111에 있어서, HC1은 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 158. 실시 형태 111 또는 실시 형태 157에 있어서, LC는 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 159. 실시 형태 111, 실시 형태 157, 또는 실시 형태 158에 있어서, HC2는 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 160. 실시 형태 111에 있어서, HC1은 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 161. 실시 형태 111 또는 실시 형태 160에 있어서, LC는 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
실시 형태 162. 실시 형태 111, 실시 형태 160, 또는 실시 형태 161에 있어서, HC2는 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
본 발명은 또한 하기 넘버링된 항목에 의해 정의될 수 있다.
항목 1.
a) 제1 중쇄(HC1);
b) 경쇄(LC); 및
c) 제2 중쇄(HC2)를 포함하며,
여기서,
(i) HC1 및 LC는 제1 항원에 특이적으로 결합하는 제1 항원-결합 부위를 형성하고,
(ii) HC2는 제2 항원에 특이적으로 결합하는 제2 항원-결합 부위를 포함하고,
(iii) HC1 또는 HC2는 제3 항원에 특이적으로 결합하는 제3 항원-결합 부위를 추가로 포함하고,
(iv) HC1 및 HC2는 각각 CH2-CH3 도메인을 포함하는 단편 결정화가능(Fc) 도메인을 포함하며;
여기서 제1 항원은 분화 클러스터 3(CD3)이고,
(v) 제2 항원은 B 세포 성숙 항원(BCMA)이고, 제3 항원은 G-단백질 커플링된 수용체 패밀리 C 군 5 구성원 D(GPRC5D)이거나;
(vi) 제2 항원은 G-단백질 커플링된 수용체 패밀리 C 군 5 구성원 D(GPRC5D)이고, 제3 항원은 B 세포 성숙 항원(BCMA)인, 삼중특이적 항체 또는 이의 삼중특이적 결합 단편.
항목 2. 항목 1에 있어서, HC2는 제3 항원에 특이적으로 결합하는 제3 항원-결합 부위를 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 3. 항목 2에 있어서, HC2는 N에서 C-말단으로, 제2 항원-결합 부위, Fc 도메인, 링커, 및 제3 항원-결합 부위를 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 4. 항목 1 내지 항목 3 중 어느 하나에 있어서, HC2는 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 제2 항원-결합 부위를 포함하며, HC2는 BCMA에 특이적으로 결합하는 제3 항원-결합 부위를 추가로 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 5. 항목 1에 있어서, HC1은 제3 항원에 특이적으로 결합하는 제3 항원-결합 부위를 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 6. 항목 5에 있어서, HC1은 N에서 C-말단으로, 제1 항원-결합 부위와 회합된 중쇄 가변 도메인(VH), CH1 도메인, Fc 도메인, 링커, 및 제3 항원-결합 부위를 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 7. 항목 1, 항목 5, 및 항목 6 중 어느 하나에 있어서, HC2는 BCMA에 특이적으로 결합하는 제2 항원-결합 부위를 포함하고, HC1은 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 제3 항원-결합 부위를 추가로 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 8. 항목 1 내지 항목 7 중 어느 하나에 있어서, 제1 항원-결합 부위는 항원-결합 단편(Fab)을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 9. 항목 1 내지 항목 8 중 어느 하나에 있어서, 제2 항원-결합 부위는 단일쇄 가변 단편(scFv)을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 10. 항목 1 내지 항목 9 중 어느 하나에 있어서, 제3 항원-결합 부위는 단일쇄 가변 단편(scFv)을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 11. 항목 1 내지 항목 10 중 어느 하나에 있어서, HC1 및 HC2의 Fc 도메인은 이종이량체화를 촉진하는 하나 이상의 상이한 돌연변이를 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 12. 항목 11에 있어서, HC1의 Fc 도메인은 돌연변이 T366S, L368A, 및 Y407V(EU 넘버링)를 포함하고 HC2의 Fc 도메인은 돌연변이 T366W(EU 넘버링)를 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 13. 항목 11에 있어서, HC2의 Fc 도메인은 돌연변이 T366S, L368A, 및 Y407V(EU 넘버링)를 포함하고 HC1의 Fc 도메인은 돌연변이 T366W(EU 넘버링)를 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 14. 항목 1 내지 항목 13 중 어느 하나에 있어서, HC1 및/또는 HC2의 Fc 도메인은 Fcγ 수용체에 대한 Fc 결합을 감소시키는 하나 이상의 돌연변이를 추가로 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 15. 항목 14에 있어서, Fcγ 수용체는 FcyRI, FcyRIIA, FcyRIIB, FcyRIIIA, 및/또는 FcyRIIIB인, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 16. 항목 14 또는 항목 15에 있어서, HC1 및/또는 HC2의 Fc 도메인은 L234A, L235A, 및 D265S(EU 넘버링)로부터 선택된 하나 이상의 돌연변이를 각각 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 17. 항목 16에 있어서, HC1 및 HC2의 Fc 도메인은 돌연변이 L234A, L235A, 및 D265S(EU 넘버링)를 각각 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 18. 항목 1 내지 항목 17 중 어느 하나에 있어서, HC1 또는 HC2의 Fc 도메인은 단백질 A에 대한 Fc 결합을 감소시키는 하나 이상의 돌연변이를 추가로 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 19. 항목 18에 있어서, HC1 또는 HC2의 Fc 도메인은 돌연변이 H435R 및/또는 Y436F(EU 넘버링)를 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 20. 항목 19에 있어서, HC1의 Fc 도메인은 돌연변이 H435R 및 Y436F(EU 넘버링)를 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 21. 항목 3 및 항목 5 내지 항목 18 중 어느 하나에 있어서, 링커는 GGSEGKSSGSGSESKSTGGS(서열 번호 25) 또는 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS((G4S)4, 서열 번호 163)의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 22. 항목 1 내지 항목 21 중 어느 하나에 있어서, CD3에 특이적으로 결합하는 제1 항원-결합 부위는 GDSVFNNNAAWS(서열 번호 4)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR1), RTYYRSKWLYD(서열 번호 5)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 GYSSSFDY(서열 번호 6)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 23. 항목 1 내지 항목 22 중 어느 하나에 있어서, CD3에 특이적으로 결합하는 제1 항원-결합 부위는 TGTSSNIGTYKFVS(서열 번호 1)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR1), EVSKRPS(서열 번호 2)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 VSYAGSGTLL(서열 번호 3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 24. 항목 1 내지 항목 23 중 어느 하나에 있어서, CD3에 특이적으로 결합하는 제1 항원-결합 부위는 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 25. 항목 1 내지 항목 24 중 어느 하나에 있어서, CD3에 특이적으로 결합하는 제1 항원-결합 부위는 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 26. 항목 1 내지 항목 25 중 어느 하나에 있어서, GPRC5D에 특이적으로 결합하는 제2 또는 제3 항원-결합 부위는 GFSLTNIRMSVS(서열 번호 12)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR1), HIFSNDEKS(서열 번호 13)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 MRLPYGMDV(서열 번호 14)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 27. 항목 1 내지 항목 26 중 어느 하나에 있어서, GPRC5D에 특이적으로 결합하는 제2 또는 제3 항원-결합 부위는 RSSQSLVHSDGNTYLS(서열 번호 9)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR1), KISNRFF(서열 번호 10)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 MQATQFPHT(서열 번호 11)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 28. 항목 1 내지 항목 27 중 어느 하나에 있어서, GPRC5D에 특이적으로 결합하는 제2 또는 제3 항원-결합 부위는 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 29. 항목 1 내지 항목 28 중 어느 하나에 있어서, GPRC5D에 특이적으로 결합하는 제2 또는 제3 항원-결합 부위는 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 30. 항목 1 내지 항목 29 중 어느 하나에 있어서, BCMA에 특이적으로 결합하는 제2 또는 제3 항원-결합 부위는 GFTFSSYAMS(서열 번호 20)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR1), AISGSGGSTY(서열 번호 21)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 DEGYSSGHYYGMDV(서열 번호 22)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 31. 항목 1 내지 항목 30 중 어느 하나에 있어서, BCMA에 특이적으로 결합하는 제2 또는 제3 항원-결합 부위는 RASQSISSSFLT(서열 번호 17)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR1), GASSRAT(서열 번호 18)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 QHYGSSPMYT(서열 번호 19)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 32. 항목 1 내지 항목 31 중 어느 하나에 있어서, BCMA에 특이적으로 결합하는 제2 또는 제3 항원-결합 부위는 서열 번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 33. 항목 1 내지 항목 32 중 어느 하나에 있어서, BCMA에 특이적으로 결합하는 제2 또는 제3 항원-결합 부위는 서열 번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 34. 항목 1 내지 항목 33 중 어느 하나에 있어서, 제1 항원-결합 부위는 CD3ε 사슬의 잔기 22 내지 35(QDGNEEMGGITQTP(서열 번호 160))에 특이적으로 결합하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 35. 항목 34에 있어서, 제1 항원-결합 부위는 약 2.5 ×10-8 M의 친화도로 CD3에 특이적으로 결합하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 36. 항목 34에 있어서, 제1 항원-결합 부위는 약 3.1 ×10-8 M의 친화도로 CD3에 특이적으로 결합하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 37. 항목 1 내지 항목 36 중 어느 하나에 있어서, 제2 또는 제3 항원-결합 부위는 BCMA BCMW37 사슬의 잔기 17 내지 26(LLHACIPCQL(서열 번호 161))에 특이적으로 결합하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 38. 항목 37에 있어서, 제2 또는 제3 항원-결합 부위는 약 2.1 ×10-10 M의 친화도로 BCMA에 특이적으로 결합하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 39. 항목 37에 있어서, 제2 또는 제3 항원-결합 부위는 약 8.4 ×10-10 M의 친화도로 BCMA에 특이적으로 결합하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 40. 항목 1 내지 항목 39 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 동종형의 것인, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 41. 항목 1 내지 항목 40 중 어느 하나에 있어서, IgG1 동종형인, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 42. 항목 1에 있어서, HC1은 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 43. 항목 1 또는 항목 42에 있어서, LC는 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 44. 항목 1, 항목 42, 또는 항목 43에 있어서, HC2는 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 45. 항목 1에 있어서, HC1은 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 46. 항목 1 또는 항목 45에 있어서, LC는 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 47. 항목 1, 항목 45, 또는 항목 46에 있어서, HC2는 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 48.
a) CD3에 특이적으로 결합하는 제1 항원-결합 부위,
b) GPRC5D에 특이적으로 결합하는 제2 항원-결합 부위, 및
c) BCMA에 특이적으로 결합하는 제3 항원-결합 부위를 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 이의 삼중특이적 결합 단편.
항목 49. 항목 48에 있어서, CD3에 특이적으로 결합하는 제1 항원-결합 부위는 GDSVFNNNAAWS(서열 번호 4)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR1), RTYYRSKWLYD(서열 번호 5)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 GYSSSFDY(서열 번호 6)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 50. 항목 48 또는 항목 49에 있어서, CD3에 특이적으로 결합하는 제1 항원-결합 부위는 TGTSSNIGTYKFVS(서열 번호 1)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR1), EVSKRPS(서열 번호 2)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 VSYAGSGTLL(서열 번호 3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 51. 항목 48 내지 항목 50 중 어느 하나에 있어서, CD3에 특이적으로 결합하는 제1 항원-결합 부위는 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 52. 항목 48 내지 항목 51 중 어느 하나에 있어서, CD3에 특이적으로 결합하는 제1 항원-결합 부위는 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 53. 항목 48 내지 항목 52 중 어느 하나에 있어서, GPRC5D에 특이적으로 결합하는 제2 항원-결합 부위는 GFSLTNIRMSVS(서열 번호 12)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR1), HIFSNDEKS(서열 번호 13)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 MRLPYGMDV(서열 번호 14)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 54. 항목 48 내지 항목 53 중 어느 하나에 있어서, GPRC5D에 특이적으로 결합하는 제2 항원-결합 부위는 RSSQSLVHSDGNTYLS(서열 번호 9)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR1), KISNRFF(서열 번호 10)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 MQATQFPHT(서열 번호 11)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 55. 항목 48 내지 항목 54 중 어느 하나에 있어서, GPRC5D에 특이적으로 결합하는 제2 항원-결합 부위는 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 56. 항목 48 내지 항목 55 중 어느 하나에 있어서, GPRC5D에 특이적으로 결합하는 제2 항원-결합 부위는 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 57. 항목 48 내지 항목 56 중 어느 하나에 있어서, BCMA에 특이적으로 결합하는 제3 항원-결합 부위는 GFTFSSYAMS(서열 번호 20)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR1), AISGSGGSTY(서열 번호 21)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR2, 및 DEGYSSGHYYGMDV(서열 번호 22)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 58. 항목 48 내지 항목 57 중 어느 하나에 있어서, BCMA에 특이적으로 결합하는 제3 항원-결합 부위는 RASQSISSSFLT(서열 번호 17)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR1), GASSRAT(서열 번호 18)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR2, 및 QHYGSSPMYT(서열 번호 19)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 59. 항목 48 내지 항목 58 중 어느 하나에 있어서, BCMA에 특이적으로 결합하는 제3 항원-결합 부위는 서열 번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 60. 항목 48 내지 항목 59 중 어느 하나에 있어서, BCMA에 특이적으로 결합하는 제3 항원-결합 부위는 서열 번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 61. 항목 48 내지 항목 60 중 어느 하나에 있어서, 제1 항원-결합 부위는 CD3ε 사슬의 잔기 22 내지 35(QDGNEEMGGITQTP(서열 번호 160))에 특이적으로 결합하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 62. 항목 61에 있어서, 제1 항원-결합 부위는 약 2.5 ×10-8 M의 친화도로 CD3에 특이적으로 결합하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 63. 항목 61에 있어서, 제1 항원-결합 부위는 약 3.1 ×10-8 M의 친화도로 CD3에 특이적으로 결합하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 64. 항목 48 내지 항목 63 중 어느 하나에 있어서, 제3 항원-결합 부위는 BCMA BCMW37 사슬의 잔기 17 내지 26(LLHACIPCQL(서열 번호 161))에 특이적으로 결합하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 65. 항목 64에 있어서, 제3 항원-결합 부위는 약 2.1 ×10-10 M의 친화도로 BCMA에 특이적으로 결합하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 66. 항목 64에 있어서, 제3 항원-결합 부위는 약 8.4 ×10-10 M의 친화도로 BCMA에 특이적으로 결합하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 67. 항목 48 내지 항목 66 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 동종형의 것인, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 68. 항목 48 내지 항목 67 중 어느 하나에 있어서, IgG1 동종형인, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
항목 69.
a) 제1 중쇄(HC1);
b) 경쇄(LC); 및
c) 제2 중쇄(HC2)를 포함하며,
여기서 HC1은 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하고, LC는 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하고, HC2는 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 이의 삼중특이적 결합 단편.
항목 70.
a) 제1 중쇄(HC1);
b) 경쇄(LC); 및
c) 제2 중쇄(HC2)를 포함하며,
여기서 HC1은 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하고, LC는 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함하고, HC2는 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 이의 삼중특이적 결합 단편.
항목 71. 항목 1 내지 항목 70 중 어느 하나의 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는, 약제학적 조성물.
항목 72. 항목 1 내지 항목 70 중 어느 하나의 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편을 발현하는, 세포.
항목 73. 항목 72에 있어서, 하이브리도마인, 세포.
항목 74. 항목 72에 있어서, 삼중특이적 항체는 재조합적으로 생성되는, 세포.
항목 75. 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하기 위한 방법으로서, 항목 1 내지 항목 70 중 어느 하나의 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편 또는 항목 71의 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
항목 76. 항목 75에 있어서, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편 또는 약제학적 조성물은 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 투여되는, 방법.
항목 77. 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하기 위한 방법으로서, 항목 1 내지 항목 70 중 어느 하나의 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편 또는 항목 71의 약제학적 조성물의 유효량을 상기 세포에 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 상기 유효량은 상기 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하기에 충분한, 방법.
항목 78. 항목 77에 있어서, 상기 암 세포는 대상체 내에 존재하며, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편 또는 약제학적 조성물은 대상체에게 투여되는, 방법.
항목 79. 항목 77에 있어서, 상기 투여는 생체외에서 수행되는, 방법.
항목 80. T 세포를 BCMA 및/또는 GPRC5D-발현 암 세포로 방향전환시키는 것을 필요로 하는 대상체에서 T 세포를 BCMA 및/또는 GPRC5D-발현 암 세포로 방향전환시키는 방법으로서, 항목 1 내지 항목 70 중 어느 하나의 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편 또는 항목 71의 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
항목 81. 항목 80에 있어서, 상기 치료적 유효량은 상기 T 세포 반응을 상기 암 세포로 유도하기에 충분한, 방법.
항목 82. 항목 75 내지 항목 81 중 어느 하나에 있어서, 암은 혈액암인, 방법.
항목 83. 항목 82에 있어서, 혈액암은 BCMA 및/또는 GPRC5D-발현 B 세포 암인, 방법.
항목 84. 항목 83에 있어서, BCMA 및/또는 GPRC5D-발현 B 세포 암은 다발성 골수종인, 방법.
항목 85. 항목 75 내지 항목 84 중 어느 하나에 있어서, 제2 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
항목 86. 항목 85에 있어서, 제2 치료제는 화학요법제 또는 표적화 항암 요법인, 방법.
항목 87. 항목 86에 있어서, 화학요법제는 시타라빈, 안트라사이클린, 히스타민 다이하이드로클로라이드, 또는 인터류킨 2(IL-2)인, 방법.
항목 88. 항목 1 내지 항목 70 중 어느 하나의 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편을 생성하기 위한 방법으로서, 항목 72 내지 항목 74 중 어느 하나의 세포를 배양하는 단계 및 상기 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편을 단리하는 단계를 포함하는, 방법.
항목 89. 항목 1 내지 항목 70 중 어느 하나의 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편의 HC1, LC, 및/또는 HC2를 인코딩하는, 합성 폴리뉴클레오티드.
항목 90. (i) 항목 1 내지 항목 70 중 어느 하나의 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편 및/또는 항목 89의 폴리뉴클레오티드 및 (ii) 이를 위한 패키징을 포함하는, 키트.
항목 91. GFTFSSYAMS(서열 번호 20)의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR1), AISGSGGSTY(서열 번호 21)의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2, 및 DEGYSSGHYYGMDV(서열 번호 22)의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3을 포함하는, BCMA에 특이적으로 결합하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
항목 92. 항목 91에 있어서, RASQSISSSFLT(서열 번호 17)의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR1), GASSRAT(서열 번호 18)의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2, 및 QHYGSSPMYT(서열 번호 19)의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3을 추가로 포함하는, 항체 또는 항원-결합 단편.
항목 93. 항목 91 또는 항목 92에 있어서, 서열 번호 24의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하는, 항체 또는 항원-결합 단편.
항목 94. 항목 91 내지 항목 93 중 어느 하나에 있어서, 서열 번호 23의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는, 항체 또는 항원-결합 단편.
항목 95. 항목 91 내지 항목 94 중 어느 하나에 있어서, BCMA BCMW37 사슬의 잔기 17 내지 26(LLHACIPCQL(서열 번호 161))에 특이적으로 결합하는, 항체 또는 항원-결합 단편.
항목 96. 항목 95에 있어서, 약 2.1 ×10-10 M의 친화도로 BCMA에 특이적으로 결합하는, 항체 또는 항원-결합 단편.
항목 97. 항목 95에 있어서, 약 8.4 ×10-10 M의 친화도로 BCMA에 특이적으로 결합하는, 항체 또는 항원-결합 단편.
항목 98. 항목 91 내지 항목 97 중 어느 하나에 있어서, 인간 항체 또는 항원-결합 단편인, 항체 또는 항원-결합 단편.
항목 99. 항목 91 내지 항목 98 중 어느 하나에 있어서, 재조합체인, 항체 또는 항원-결합 단편.
항목 100. 항목 91 내지 항목 99 중 어느 하나에 있어서, Fab 단편, Fab2 단편, 또는 단일쇄 항체인, 항원 결합 단편.
항목 101. 항목 91 내지 항목 100 중 어느 하나에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 동종형의 것인, 항체 또는 항원-결합 단편.
항목 102. 항목 91 내지 항목 101 중 어느 하나에 있어서, IgG1 또는 IgG4 동종형인, 항체 또는 항원-결합 단편.
항목 103. 항목 91 내지 항목 102 중 어느 하나의 항체 또는 항원-결합 단편 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는, 약제학적 조성물.
항목 104. 항목 91 내지 항목 102 중 어느 하나의 항체 또는 항원-결합 단편을 발현하는, 세포.
항목 105. 항목 104에 있어서, 하이브리도마인, 세포.
항목 106. 항목 104에 있어서, 항체는 재조합적으로 생성되는, 세포.
항목 107. 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하기 위한 방법으로서, 항목 91 내지 항목 102 중 어느 하나의 항체 또는 항원-결합 단편 또는 항목 103의 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
항목 108. 항목 107에 있어서, 항체 또는 항원-결합 단편 또는 약제학적 조성물은 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 투여되는, 방법.
항목 109. 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하기 위한 방법으로서, 항목 91 내지 항목 102 중 어느 하나의 항체 또는 항원-결합 단편 또는 항목 103의 약제학적 조성물의 유효량을 상기 세포에 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 상기 유효량은 상기 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하기에 충분한, 방법.
항목 110. 항목 109에 있어서, 상기 암 세포는 대상체 내에 존재하며, 항체 또는 항원-결합 단편 또는 약제학적 조성물은 대상체에게 투여되는, 방법.
항목 111. 항목 109에 있어서, 상기 투여는 생체외에서 수행되는, 방법.
항목 112. 항목 107 내지 항목 111 중 어느 하나에 있어서, 암은 혈액암인, 방법.
항목 113. 항목 112에 있어서, 혈액암은 BCMA-발현 B 세포 암인, 방법.
항목 114. 항목 113에 있어서, BCMA-발현 B 세포 암은 다발성 골수종인, 방법.
항목 115. 항목 107 내지 항목 114 중 어느 하나에 있어서, 제2 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
항목 116. 항목 115에 있어서, 제2 치료제는 화학요법제 또는 표적화 항암 요법인, 방법.
항목 117. 항목 116에 있어서, 화학요법제는 시타라빈, 안트라사이클린, 히스타민 다이하이드로클로라이드, 또는 인터류킨 2(IL-2)인, 방법.
항목 118. 항목 91 내지 항목 102 중 어느 하나의 항체 또는 항원-결합 단편을 생성하기 위한 방법으로서, 항목 104 내지 항목 106 중 어느 하나의 세포를 배양하는 단계 및 상기 항체 또는 항원-결합 단편을 단리하는 단계를 포함하는, 방법.
항목 119. 항목 91 내지 항목 102 중 어느 하나의 항체 또는 항원-결합 단편을 인코딩하는, 합성 폴리뉴클레오티드.
항목 120. (i) 항목 91 내지 항목 102 중 어느 하나의 항체 또는 항원-결합 단편 및/또는 항목 119의 폴리뉴클레오티드 및 (ii) 이를 위한 패키징을 포함하는, 키트.
실시예
하기의 실시예는 앞서의 개시내용을 보충하기 위해 그리고 본 명세서에 기재된 발명 요지에 대한 보다 나은 이해를 주기 위해 제공된다. 이들 실시예는 기재된 발명 요지를 한정하는 것으로 여겨져서는 안 된다. 본 명세서에 기재된 실시예 및 실시 형태는 단지 예시적인 목적을 위한 것이고, 그에 비추어 다양한 변형 또는 변화가 당업자에게 명백할 것이고, 이는 본 발명의 진정한 범주 내에 포함되어야 하고 그로부터 벗어나지 않고서 이루어질 수 있음이 이해된다.
실시예 1: 표적 검증
BCMA x GPRC5D x CD3 삼중특이적 항체의 개발에 대한 과학적 근거는 MM 환자의 골수 및 다른 기관으로부터 악성 클론 형질 세포를 효율적으로 근절하는 것이다. 이는 이펙터 T 세포 상에서 발현되는 TCR 공동-수용체 CD3ε에, 그리고 B-세포 계통 세포, 대부분 형질 모세포 및 성숙 형질 세포 상에서 발현되는 표적 단백질, GPRC5D 및 BCMA에 동시에 결합할 수 있는 삼중특이적 항체의 투여를 통해 달성되어야 한다(8). T 세포와 암 세포를 근접시킴으로써, BCMA x GPRC5D x CD3 삼중특이적 항체는 T 세포의 활성화를 촉진하며, CTL의 분비 소포에 저장된 분비된 퍼포린 및 다양한 그랜자임에 의해 후속의 암 세포 용해가 매개된다(도 1b).
이러한 접근법의 기전적 이점은 활성화를 위해 항원-제시 세포의 표면 상의 주요 조직적합성 복합체(MHC) 클래스 I 분자에 대한 TCR 특이성 또는 의존성에 관계없이 형질 세포에 근접하게 CD3+ T 세포를 유도하는 능력을 포함하며, 이는 MHC 클래스 분자의 하향-조절을 통해 T 세포-기반 요법에 대한 알려진 MoR을 회피한다.
표적 선택/검증
T-세포-매개 치료적 접근법의 잠재적인 성공은 종양 세포의 표면 상에서 특이적으로 발견되는 항원의 존재에 의존한다. 가장 일반적인 형질 세포 마커 중에서, BCMA 및 GPRC5D는 선택적 발현 패턴을 나타냈으며, 둘 모두의 표적에 대해 임상적 개념 증명(PoC)이 확립되었다.
BCMA(CD269로도 알려져 있음; 유전자 명칭 TNFRSF17)는 B-세포 계통 세포 상에서 배타적으로 발현되는 20 kDa 유형 I 막 단백질이며, B-세포 성숙에서 중요한 역할을 하고, 형질 세포 분화 중에 선택적으로 유도된다(9,10). BCMA는 하기 2개의 리간드에 결합한다: APRIL(CD256) 및 BAFF(CD257; 11). BCMA 수용체는 54개 아미노산의 세포외 도메인을 갖는 184개 아미노산의 단백질이다. 세포 표면 상에서의 발현에 더하여, BCMA는 막관통 도메인에서 감마 세크레타제 활성에 의해 절단되어, 약 6 kDa 가용성 BCMA 단백질 단편(12)을 생성한다. MM 환자 혈청 샘플에서 고수준의 가용성 BCMA가 측정되었으며(13), 이는 형질 세포 카운트와 상관관계가 있었다(14). 감마 세크레타제의 억제는 인간 1차 B 세포(12) 및 MM 세포주 및 골수 단핵 세포(13)에서 BCMA 표면 단백질 발현의 유의한 증가를 유발한다. 몇몇 승인된 치료제에 의해 BCMA는 MM에서의 검증된 표적으로서 확립되었다(15-17).
GPRC5D는 서열 상동성 점수에 기초하여 유형 C G-단백질-커플링된 수용체(GPCR)로 분류되는 7-막관통 수용체 단백질이다. GPRC5D는 그의 리간드 및 신호전달 기전이 아직 확인되지 않는 희소 수용체이다. GPRC5D 수용체는 다른 패밀리 구성원과는 달리 짧은 27개 아미노산의 N-말단을 갖는 전형적인 7-막관통 구조를 갖는 354개 아미노산의 단백질이다(18). GPRC5D mRNA는 형질 세포 표현형을 갖는 세포에서 주로 발현되며, 또한 MM을 갖는 대상체로부터의 모든 악성 형질 세포에서 발현된다(19-23). MM을 갖는 대상체에서 GPRC5D 발현의 수준은 형질 세포 부담 및 유전자 이상, 예컨대 Rb-1 결실과 상당히 관련되어 있었다(19).
표적 발현
BCMA 및 GPRC5D mRNA 및 단백질 발현은 제한된 세포 유형으로 한정된다. BCMA는 성숙 B 세포 및 형질 세포 상에서 발현되는 반면, GPRC5D 발현은 면역 세포 상의 형질 세포 표현형으로만 추가로 제한된다. 면역 세포 발현에 더하여, GPRC5D mRNA는 경질 각질화 조직에서 발현된다. 골수종 환자로부터의 골수 CD138+ 세포 상의 GPRC5D mRNA 수준은 정상적인 건강한 대상체 CD138+ 세포와 비교하여 상승되었으며, BCMA의 높은 mRNA 수준은 대부분 형질 세포를 포함하는 성숙 B 세포로 한정되었다(10,13,19,21-26). 정상 조직에서의 BCMA(13,25) 및 GPRC5D(19,21,22) 단백질 발현은 면역조직화학(IHC) 염색에 의해 형질 세포에서 주로 발견되었다. 또한, 모낭과 같은 경질 각질화 조직에서 GPRC5D 발현이 또한 검출되었다(27). MM 환자 골수 단핵 세포는 BCMA 및 GPRC5D 발현의 관점에서 클론 불균질성을 나타냈다(21,22). 상세한 표적 발현 프로파일은 실시예 2에 기재되어 있다.
중요하게는, MM 기원의 CD138+ 골수 세포 상의 BCMA 및 GPRC5D의 선택적 발현 및 표적-내/종양-외 독성에 대한 이들의 낮은 위험은 T-세포-매개 치료제에 대한 잠재적인 표적으로서 이들을 지정한다(10,13,20-22).
실시예 2: BGCB463 삼중특이적 항체의 분자 설계, 서열, 및 구조
BGCB463은 T 림프구(T 세포)에 대한 분화 클러스터 3 수용체 복합체(CD3ε)의 엡실론 서브유닛에, 그리고 GPRC5D(G-단백질 커플링된 수용체 패밀리 C 군 5 구성원 D)에, 그리고 종양 세포 상의 BCMA(B 세포 성숙 항원, TNFRSF17)에 동시에 또는 개별적으로 결합할 수 있는 면역글로불린(Ig) G1 삼중특이적 항체이다. 항체는 Fc 수용체와의 상호작용을 제거하기 위해 불변 영역(Fc) 내에 L234A, L235A, 및 D265S(EU 넘버링에 따름)의 돌연변이를 가지며, 노브-인투-홀 플랫폼 돌연변이를 사용하여 이종이량체화가 향상되었다. 단량체 및 동종이량체화된 홀 사슬의 단백질 A 결합을 방해하기 위해 항-CD3ε "홀" 사슬은 또한 "RF" 돌연변이(H435R, Y436F; EU 넘버링에 따름)를 포함한다. 분자는 "홀, RF" 사슬 상의 항-CD3ε Fab 영역 및 "노브" 사슬 상의 항-GPRC5D scFv v-영역을 포함한다. T 세포 방향전환을 위해 GPRC5D 및 BCMA 및 CD3을 이중 종양 표적화하는 것의 치료적 잠재력을 평가하기 위해 삼중특이적 항체를 개발하였다. BGCB463의 예시가 도 1a에 도시되어 있다.
삼중특이적 BGCB463 항체는 항-GPRC5D, 항-BCMA 중쇄 B와 항-CD3 중쇄(HC) A 및 경쇄(LC)의 공발현에 의해 생성되었다. 항-CD3 가변 영역은 재조합 CD3ε 단백질로 유전자도입 인간화 래트[OmniRat (OMT™)]를 면역화함으로써 발견되었다. BGCB463에서 특징적인 항-GPRC5D 가변 영역(VR000038761)은 mAb GC5B680으로부터 유래되며, GPRC5D를 인코딩하는 DNA로 유전자도입 인간화 마우스[Ablexis]를 면역화함으로써 발견된다. 모 v-영역(VR000029832)은 HC 프레임워크 3 영역 내에 "NSS" 모티프를 함유하였으며, 이는 N-연결된 글리코실화에 대한 위험을 제시하고 IGHV2-26*01 생식계열로부터의 돌연변이를 나타냈다. 부위를 생식계열 서열 "STS"로 역돌연변이시켜 N-연결된 글리코실화에 대한 위험을 제거하였으며, 이러한 변화는 최종 가변 영역 VR000038761을 유발하였다. BGCB463에서 특징적인 항-BCMA 가변 영역(VR000003260)은 mAb BCMB519으로부터 유래되며, 재조합 BCMA 단백질로 유전자도입 인간화 마우스[Ablexis]를 면역화함으로써 발견된다. 이러한 v-영역에 대해 추가 변형이 이루어지지 않았다. 항-GPRC5D 및 항-BCMA v-영역 둘 모두를 최종 분자에서 단일쇄 단편 가변(scFv)으로서 형식화하였다.
BGCB463 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열은 BGCB463의 cDNA 서열로부터 추론되고 펩티드 맵핑 및 질량 분석에 의해 확인된 바와 같이 하기에 나타낸다(표 5). 각각의 사슬에서 ABM 넘버링에 따라 정의된 3개의 상보성-결정 영역(CDR)은 굵은체이고 밑줄이 그어져 있다. BGCB463 중쇄 1의 위치 1에서의 Gln 잔기, BGCB463 경쇄의 위치 1에서의 Gln 잔기, 및 BGCB463 중쇄 2의 위치 1에서의 Asp는 성숙 사슬의 N-말단을 구성한다. BGCB463 IgG1 AAS를 포함하는 중쇄 둘 모두는 하기 점 돌연변이를 갖는다: L234A, L235A, 및 D265S. BGCB463으로부터의 중쇄 1은 "홀" 돌연변이: T366S, L368A, Y407V 및 RF 돌연변이: H435R, Y436F를 특징으로 하는 반면, 중쇄 2는 "노브" 돌연변이: T366W를 특징으로 한다. 노브-인투-홀 돌연변이는 Fc의 이종이량체화를 촉진한다. "RF" 돌연변이는 단백질 A에 대한 결합을 방해한다. FcγR 수용체 침묵(AAS)을 위한 돌연변이 및 노브-인투-홀 돌연변이는 하기 서열에서 밑줄이 그어져 있다.
[표 5]
실시예 3: BGCB463 삼중특이적 항체의 면역원성 위험 평가
EpiVax Epimatrix 컴퓨터내 면역원성 예측 프로그램으로부터의 T-조절(Treg) 조정된 점수를 사용하여 잠재적인 면역원성에 대해 삼중특이적 항체 서열을 분석하였다(표 6). EpiVax 프로그램은 각각의 "수퍼유형" 내의 가장 일반적인 HLA 분자에 대한 결합 잠재력을 컴퓨터 상에서 계산한다. 보고서는 각각의 일배체형을 개별적으로 시험할 필요 없이 전세계 인간 집단의 90% 초과를 대표하는 결과를 제공한다. EpiVax 점수는 주어진 단백질 서열 내에 함유된 모든 예측 T-세포 에피토프의 EpiMatrix 점수를 종합하고, 예상 T-세포 에피토프 함량 및 단백질 길이에 대해 조정함으로써 계산된다. EpiVax 점수 해석은 하기와 같다: -20 미만의 EpiVax 점수는 "이상적"이고; -20 내지 +20의 EpiVax 점수는 "허용가능"하고; +20 초과의 EpiVax 점수는 "허용불가능"하다.
[표 6]
실시예 4: BGCB463 삼중특이적 항체의 결합 특성화
파트 1. 물질 및 방법
세포주
GPRC5D 및 BCMA 결합 특성화에 대해 평가된 세포주는 다발성 골수종 유래 H929 및 MM.1R이었다. 또한, CRISPR 녹아웃(H929-GPRC5D-KO 단일클론 라인 D11), H929-BCMA-KO 및 H929-GPRC5D/BCMA-KO의 H929 스위트를 생성하였다. GPRC5D 및 BCMA 결합을 평가하기 위해 유사한 MM.1R 녹아웃이 또한 개발되었다. 모든 라인은 (ABS)로부터 공급되었고, 완전 RPMI 배지를 이용하여 배양되었으며, 이는 RPMI 1640 배지, GlutaMAX™ 보충제, HEPES, 열-불활성화(HI) FBS, 비-필수 아미노산(NEAA), 소듐 피루베이트, 및 2-ME(모두 ThermoFisher)로 구성되었다.
인간 GPRC5D(단일클론 H1B5) 및 인간 BCMA(단일클론 H1/B5)를 과발현하는 K562 단일클론 세포주를 이용하였다. 또한, 사이노몰거스 GPRC5D(단일클론 M1C11) 및 사이노몰거스 BCMA를 발현하는 K562-Fluc-GFP 세포를 사용하였다. 둘 모두의 세포주를 IMDM, 10% FBS, 2 mM 글루타민, 및 2 mg/mL G418(모두 ThermoFisher) 중에 유지하였다.
FACS에 의한 세포 결합
BGCB463.003 및 BGCB463.004, 또는 B23B251(IgG1-AAS에 대한 동종형 대조군)은 비표지화된 분자로서 사용되거나 Alexa Fluor 647에 직접 접합되었다. BGCB463.003은 일시적 형질감염에 의해 발현되는 반면, BGCB463.004는 안정적인 형질감염 풀로부터 발현되었다.
인간 및 사이노몰거스 Pan T 세포에 대한 BGCB463의 결합을 위해, 3명의 인간 공여자(Hemacare)를 선택하고, 신속하게 해동시키고, 재현탁하고, 1×106 세포/mL로 96-웰 플레이트에 분취하였다. 이어서, 세포를 세척하고, 필요한 경우에 Fc를 차단하고(Innovex), 생존력 염료(Invitrogen)로 염색하였다. BGCB463 및 그의 상응하는 동종형(B23B251)을 완전 배지 중에 2 μM의 초기 농도로 희석하고 용량-반응 곡선을 위해 이중실험으로 1:3 연속 희석을 수행하였다. 4℃ 또는 37℃에서 1 시간 동안 분자와 함께 세포를 인큐베이션하였다. 필요한 경우, 상기 기재된 바와 같이 90% 인간 혈청(Sigma)과의 인큐베이션을 또한 수행하였다.
가용성 BCMA(sBCMA)로부터의 잠재적인 간섭을 결정하기 위해, 알려진 농도를 갖는 환자 혈청을 BDS(1 풀)로부터 얻고 BGCB463 및 H929 세포와 함께 인큐베이션하였다. 인큐베이션을 위해, 환자 혈청을 정상 혈청으로 희석하여 90% 총 인간 혈청을 유지하면서 sBCMA를 검정하였다.
ForeCyt 소프트웨어를 이용하여, 단일항-생존 집단을 게이팅하고, AlexaFluor 647 채널의 중위 형광 강도(MFI)를 각각의 샘플에 대해 계산하였다. 원시 데이터를 Excel(Office 365, Microsoft)로 내보내고, 여기서 이중실험을 평균하고, Prism 소프트웨어(v. 8.0, Graphpad)에서 추가로 분석하였다. 필요한 경우, 동종형 배경을 차감하였다. 본 명세서에서는, 각각의 공여자에 대해 각각의 분자에 대해 용량-반응 곡선 그래프 및 EC50을 계산하였다. 마지막으로, 종에 대한 평균 EC50을 얻기 위해 각각의 종의 3명의 공여자 모두의 평균을 계산하였다.
시간 경과 결합
GPRC5D 및 BCMA 시간 경과 동역학적 결합에 대해 평가된 세포주는 상기 언급된 H929 및 MM.1R KO 스위트였다. 농도 중 하나 이상이 EC50에 근접하도록, 상기 세포주에 결합하는 BGCB463의 FACS 분석을 1 시간 37℃ 결합의 용량-반응 곡선에 기초하여 다양한 최종 농도에서 실행하였다. 3 개의 최종 농도를 5-배 차이로 선택하였고, 모두 1 시간, 3 시간, 5 시간, 및 24 시간 인큐베이션을 갖는다. 완전 RPMI 중에 37℃에서 BGCB463 결합을 평가하였다.
BGCB463 또는 수반되는 B23B251 동종형 대조군을 먼저 2X 농도로 완전 RPMI에 희석하고 37℃에서 인큐베이션하였다. 그 다음에, 세포를 수확하고 Vi-Cell XR(Beckman Coulter)을 사용하여 계수한 후에 마스터 딥 웰 플레이트에 첨가하여 시점당 약 1E5 세포를 수득하였다. 각각의 시점에, 세포를 제거하고 저온 FACS 완충액(0.2% BSA(BD) + 2 mM EDTA(ThermoFisher)을 함유하는 염색 완충액)을 함유하는 둥근 바닥 96-웰 플레이트에 이전하였다. 그 다음에 플레이트를 원심분리(1200 RPM, 5 분)에 이어서 완충액 흡인에 의해 3 내지 4회 세척하였다. FACS 완충액으로 2회 더 세척한 후, 세포를 얼음 상에서 30 분 동안 Alexa Fluor 647 염소 항-인간 IgG1(H+L)(Jackson Immuno)로 염색하였다. 인큐베이션 후, 세포를 저온 FACS 완충액으로 3회 더 세척하고, 이어서 Sytox Green을 함유하는 FACS 완충액에 재현탁시켜 모든 사멸 세포를 표지화하였다(ThermoFisher). 이어서, 염색 후 3 시간 이내에 Intellicyt iQue Screener Plus(Sartorius) 상에서 플레이트를 전개하였다.
Incucyte 생존 세포 이미징을 사용하는 T 세포 활성화 및 사멸화 검정
T 세포 활성화 및 종양 세포의 사멸화 잠재력에 대한 시험 분자의 효과를 결정하기 위해, incucyte 생존 이미징 시스템(Sartorious)을 이용하였다. 사내 생성된 H929-Fluc-GFP 세포주는 인간 공여자 Pan T 세포(Hemacare)에 대한 표적 세포로서 작용하였다. 몇몇 실험에 걸쳐 1:1, 3:1, 및 5:1의 T 세포 대 표적 비로 96-웰 플레이트 내에 검정을 설정하였다. 시험 분자(BGCB463 및 B23B251)를 40 nM 또는 10 nM의 시작 농도로 첨가하고 완전 배지에 1:4로 연속 희석하였다. 모든 분자를 최소한 이중실험으로 시험하였다. T 세포 활성화 상태의 검출을 항-인간 CD25-Alexa Fluor 647(Biolegend)로 모니터링하였다. 플레이트 내의 세포를 온도에 대해 정규화한 후에 37℃ 인큐베이터 내에 포함된 Incucyte(모델 S3) 생존 세포 이미징 시스템에 넣었다. 대략 5일 동안 매 3 시간마다 상, 녹색, 및 적색 채널에서 웰당 4개의 이미지를 포획하였다. 샘플 이미지를 사용하여, incucyte 분석 소프트웨어(Sartorious, v.2019B Rev2)에서 분석 정의를 생성하여 녹색(표적 세포)에서의 물체의 카운트 및 적색(활성화된 T 세포) 채널의 카운트 또는 총 적분 강도를 생성하였다.
Incucyte 소프트웨어 분석으로부터 생성된 녹색 채널(표적 세포)로부터의 원시 카운트를 사용하여, 각각의 농도 및 시점에서 표적의 퍼센트 세포용해를 Excel(Microsoft, Office 365)로 내보내진 원시 데이터에 대해 하기 수학식을 사용하여 상응하는 플레이트 상의 모든 미처리 웰의 평균에 대해 계산하였다: (100-(GPRC5D 시험 농도/미처리 평균) × 100). 이를 자동화하기 위해, Data Sciences에 의해 개발된 Shiny Application을 사용하여 원시 데이터를 변환 및 전달하여 데이터를 신속하게 계산하고 Prism 소프트웨어에 전달하였으며, 여기에서 데이터의 그래픽 표현이 제시된다. 일단 Prism 소프트웨어(Graphpad Software, v.8.0.0)로 전달되면, 데이터는 그래프화되었고, 시간 곡선에 걸쳐 평균 및 세포용해 및 T 세포 활성화의 표준 오차가 계산되었다. T 세포 활성화의 경우, 적색 채널(CD25-AF647) 반복실험으로부터의 원시 카운트 또는 총 적분 강도를 사용하고, Prism 소프트웨어에서 추가로 그래프화하여 용량-반응 및 활성화 그래프를 생성하였다.
파트 2. 결과
T 세포 및 세포주 용량 반응성 결합
먼저, 삼중특이적 분자의 GPRC5D 및 BCMA 결합 아암에 대한 FACS-기반 결합은 37℃에서 1 시간 동안 4-파라미터 피팅을 사용하여 용량-반응 곡선으로부터 유효 농도(EC) 범위를 측정함으로써 결정되었다. 세포의 H929 스위트 (WT, GPRC5D-KO, BCMA-KO, 및 GPRC5D/BCMA KO), 및 유사한 MM.1R 스위트를 사용하여 이를 평가하였다. 세포 기반 EC50은 WT H929에 대해 대략 13 nM이고(도 2a 내지 도 2d, 표 7) WT MM.1R에 대해 2.4 nM이다(도 3a 내지 도 3d, 표 8). 표적 결합 아암의 1가 결합을 시험하는 GPRC5D-KO 및 BCMA-KO 라인에서 EC50 및 Bmax가 둘 모두 감소됨에 따라 명확한 결합력 효과가 관찰된다(표 7). 그 다음에, 3명의 무작위 공여자로부터의 정제된 Pan T 세포를 사용하여 CD3-결합 Fab 아암에 대해 세포-기반 EC50을 결정하였다. 도 4a 내지 도 4c에서 입증된 바와 같이, CD3B376(BGCB463) 아암에 대한 세포-기반 EC50은 대략 329 nM이었다(표 9). 그 다음에, 4℃에서 용량 반응성 결합을 평가하여 임의의 잠재적인 생물학적 효과를 제거하였다. 도 5a 내지 도 5c에 나타낸 바와 같이, 37℃에 비교하여 4℃에서 결합이 더 강하며(50 내지 100 nM), 이는 내재화를 나타낼 수 있다. 또한, BGCB463의 2개의 발현 로트(일시적 형질감염으로부터의 BGCB463.003 및 안정적인 형질감염 풀로부터의 BGCB463.004)를 H929, MM.1R, 및 Pan T 세포에 대한 결합과 직접 비교하였으며, 차이는 관찰되지 않았다(도 6a 내지 도 6c).
[표 7]
[표 8]
[표 9]
시간 경과 결합
그 다음에, H929 및 MM.1R 세포 스위트 상의 시간 경과 동역학적 FACS 결합을 평가함으로써 BGCB463의 표면 안정성을 결정하였다. 도 7a 내지 도 7d에 입증된 바와 같이, 결합 동역학은 24-시간의 기간에 걸쳐 H929 세포 상에서 안정적이다. 또한, 삼중특이적 분자의 2가 결합은 상기와 같이 예상되는 결합력 효과와 일치하는 단일 KO에서 평가된 1가 결합 아암과 비교하여 더 강한 신호를 갖는다. 이러한 결과는 MM.1R 스위트에서 반복된다(도 8a 내지 도 8d).
종/이종상동체 교차 반응성
37℃에서 1 시간 동안의 FACS-기반 세포 결합을 사용하여 둘 모두의 표적 결합 scFv 아암에 대해 사이노몰거스 원숭이에 대한 교차 반응성을 또한 프로파일링하였다. 이 목적을 위해, 인간 및 사이노몰거스 GPRC5D 또는 BCMA를 안정적으로 발현하는 K562 세포를 이용하였다. 도 9a 내지 도 9e에 언급된 바와 같이, GC5B680 scFv 아암에 대한 세포 기반 EC50은, 인간 GPRC5D에 대해 대략 30 nM이고, 사이노몰거스 GPRC5D에 대해 약 400 nM로 약 10-배 더 약하다. 대조적으로, BCMB519 scFv 아암에 대한 세포 기반 EC50은 인간 BCMA에 대해 대략 145 nM인 반면, 2 μM까지 사이노몰거스 BCMA에 대한 검출가능한 결합은 없었다.
사이노몰거스 교차-반응성을 추가로 결정하기 위해, 결합에 사용된 K562 세포를 또한 인간 Pan T 세포에 의한 세포독성에 이용하였다. 도 10a 및 도 10b에 입증된 바와 같이, 인간 GPRC5D와 비교하여 사이노몰거스 GPRC5D에 대한 더 약한 결합은 더 약한 세포독성 및 사이노 GPRC5D를 발현하는 K562에 의한 상응하는 더 낮은 T 세포 활성화와 상관관계가 있다. 그러나, 유사한 패턴이 인간 및 사이노 BCMA에서 관찰되지만, 본질적으로 사이노몰거스 BCMA에 대한 T 세포 반응은 없다.
90% 인간 혈청에서의 결합
생체내에서의 결합을 더 잘 이해하기 위해, 90% 인간 혈청의 존재 하에 37℃에서 1 시간 동안 결합을 평가하였다. GPRC5D 및 BCMA 결합 scFv 아암은 H929 세포로 시험한 반면(도 11), CD3 결합 Fab는 인간 pan-T 세포로 시험하였다(도 12). 둘 모두의 세포 유형에서, BGCB463 결합은 혈청의 존재에 의해 영향을 받지 않는다.
시간 경과 세포독성
시험관내 사멸화 동역학을 평가하기 위해, 이미지-기반 플랫폼인 Incucyte를 이용하여 동역학적 사멸화 데이터를 획득하였다. 시간 경과에 따라 표적 세포 사멸화 및 T 세포 활성화를 추적하는 것은 표준 FACS-기반 종점 검정과 비교하여 세포독성 활성의 더 상세하고 정성적인 판독을 제공한다. 도 13a 및 도 13b에 나타낸 바와 같이, BGCB463은 3:1 E:T 비에서 최저 시험 농도(1 pM)를 제외하고는 모든 농도에서 약 72 시간에 주목할만한 최대 사멸화에 도달하였다. 이들 데이터에 대해 부연하기 위해, 5:1 E:T 및 1:1 E:T 비를 또한 시험하였다(도 14a 내지 도 14f). 5:1 E:T에서는, 시험된 모든 농도가 48 내지 72시간에 최대 사멸화에 도달하였고, 여기서 최대 사멸화까지의 시간은 농도와 역으로 상관관계가 있다. 1:1 E:T에서는, 모든 농도가 또한 최대 사멸화를 얻지만, 이후의 시점에서, 동일한 농도 의존성을 갖는다.
환자 혈청을 사용하는 sBCMA 결합 간섭
모델링 및 MABEL 용량 추정(dose projection)을 지원하기 위해 가용성 BCMA(sBCMA)와의 잠재적인 간섭의 평가가 필요하다. 환자 혈청을 가용성 BCMA의 생리학적 공급원으로서 선택하고, 정상 혈청 중의 희석에 의해 검정하였다. 도 15a 내지 도 15d에 입증된 바와 같이, 심지어 613 ng/mL의 최고 수준도 H929 세포에 대한 BGCB463의 결합에 영향을 미치지 않는다. 이는 다양한 수준의 sBCMA를 갖는 모든 환자 혈청에서 그러하다.
파트 3. 논의 및 결론
주어진 패널에 대한 시간경과 결합의 목적은 분자가 주어진 시간에 걸쳐 세포의 표면 상에서 안정적인지 여부를 결정하는 것이며, 이러한 방법은 표면 염색에 대비하여 내재화를 식별할 수 없다는 통고를 용인한다. BGCB463은 H929 및 MM.1R KO 세포 스위트 상에서 시험된 모든 농도에서 안정적이거나 증가하는 신호를 유지한다. 따라서, BGCB463은 혈액학적 세포 표적의 표면 상에 안정적으로 제시된다.
사이노몰거스 BCMA 및 GPRC5D에 대한 교차 반응성을 또한 BGCB463에 대해 측정하였다. GPRC5D 결합은 인간과 비교하여 사이노에 대해 약 10-배 더 약했으며, 이는 세포독성과 상응하였다. 반면에, BCMA 결합은 2 μM까지 교차 반응성이 아니었으며, 이는 기능적 활성이 없는 관찰과 상관관계가 있었다.
시간 경과 세포독성을 이용하여 사멸화 동역학을 평가하고 BGCB463이 T 세포 방향전환을 매개하는 방법에 대한 더 상세한 견해를 제공하였다. 분자의 농도 및 E:T 비 둘 모두에 의존하는 타이밍으로 최대 세포용해에 근접하는 사멸화가 관찰되었다
BCMA는 가용성 형태로 존재하고 그것이 환자에서 상승되므로, 다양한 수준의 sBCMA를 갖는 환자 혈청의 존재 하에 결합을 평가하는 것이 중요하였다. 데이터는 sBCMA가 H929 세포 상의 표면 BCMA에 대한 BGCB463 결합을 방해하지 않음을 입증하였다.
실시예 5: BGCB463 삼중특이적 항체에 대한 생물물리학적 평가
결합, 단백질 특성화, 2-주 고농도 안정성, 및 화학적 및 물리적 안정성을 포함하는, BGCB463에 대한 다양한 생물물리학적 평가를 수행하였다. 평가의 목록 및 이들의 결과를 표 10에 나타낸다.
[표 10]
실시예 6: BGCB491 삼중특이적 항체의 분자 설계, 서열, 및 구조
BGCB491은 T 림프구(T 세포)에 대한 분화 클러스터 3 수용체 복합체(CD3ε)(Uniprot ID: P07766)의 엡실론 서브유닛에, 그리고 GPRC5D(G-단백질 커플링된 수용체 패밀리 C 군 5 구성원 D, Uniprot ID: Q9NZD1)에, 그리고 종양 세포 상의 BCMA(B 세포 성숙 항원, TNFRSF17, Uniprot ID: Q02223)에 동시에 또는 독립적으로 결합할 수 있는 면역글로불린(Ig) G1 삼중특이적 항체이다. 항체는 Fc 수용체와의 상호작용을 제거하기 위한 불변 영역(Fc) 내의 L234A, L235A, 및 D265S의 돌연변이를 특징으로 하며, 노브-인투-홀 플랫폼 돌연변이를 사용하여 이종이량체화가 향상된다 1. 항-CD3ε "홀" 사슬은 또한 단량체 및 동종이량체화 홀 사슬의 단백질 A 결합을 방해하기 위한 "RF" 돌연변이(H435R, Y436F)를 특징으로 하였다 2. 분자는 "홀, RF" 사슬 상의 항-CD3ε Fab 영역 및 C-말단 상에 융합된 항-GPRC5D scFv v-영역을 포함한다. "노브" 사슬은 항-BCMA scFv를 특징으로 한다. T 세포 방향전환을 위해 GPRC5D 및 BCMA 및 CD3을 이중 종양 표적화하는 것의 치료적 잠재력을 평가하기 위해 삼중특이적 항체를 개발하였다. BGCB491의 예시가 도 16에 도시되어 있다.
삼중특이적 BGCB491 항체는 C-말단 항-GPRC5D scFv에 융합된 항-CD3 중쇄(HC) A 및 중쇄 B를 함유하는 "노브"에 융합된 항-BCMA scFv를 갖는 항-CD3 경쇄(LC)의 공발현에 의해 생성되었다. 항-CD3 가변 영역(VR000017350)은 재조합 CD3ε 단백질로 유전자도입 인간화 래트[OmniRat(OMT™)]를 면역화함으로써 발견되었다. BGCB491에서 특징적인 항-GPRC5d 가변 영역(VR000038761)은 mAb GC5B680으로부터 유래되며, GPRC5d를 인코딩하는 DNA로 유전자도입 인간화 마우스[Ablexis]를 면역화함으로써 발견된다. 모 v-영역(VR000029832)은 HC 프레임워크 3 영역 내에 "NSS" 모티프를 함유하였으며, 이는 N-연결된 글리코실화에 대한 위험을 제시하고 IGHV2-26*01 생식계열로부터의 돌연변이를 나타냈다. 부위를 생식계열 서열 "STS"로 역돌연변이시켜 N-연결된 글리코실화에 대한 위험을 제거하였으며, 이러한 변화는 최종 가변 영역 VR000038761을 유발하였다. BGCB491에서 특징적인 항-BCMA 가변 영역(VR000003260)은 mAb BCMB519으로부터 유래되며, 재조합 BCMA 단백질로 유전자도입 인간화 마우스[Ablexis]를 면역화함으로써 발견된다. 이러한 v-영역에 대해 추가 변형이 이루어지지 않았다. 항-GPRC5D 및 항-BCMA v-영역 둘 모두를 최종 분자에서 단일쇄 단편 가변(scFv)으로서 형식화하였다.
BGCB491 중쇄 및 경쇄에 대한 아미노산 서열은 BGCB491의 cDNA 서열(서열 번호 165, 166, 및 167)로부터 추론되고 펩티드 맵핑 및 질량 분석에 의해 확인되는 바와 같이 하기에 나타낸다(표 11). 각각의 사슬에서 ABM 넘버링에 따라 정의된 3개의 상보성-결정 영역(CDR)은 굵은체이고 밑줄이 그어져 있다. BGCB491 중쇄 1의 위치 1에서의 Gln 잔기, BGCB491 경쇄의 위치 1에서의 Gln 잔기, 및 BGCB491 중쇄 2의 위치 1에서의 Gln 잔기는 성숙 사슬의 N-말단을 구성한다. BGCB491 IgG1 AAS를 포함하는 중쇄 둘 모두는 하기 점 돌연변이를 갖는다: L234A, L235A, 및 D265S. BGCB491으로부터의 중쇄 1은 "홀" 돌연변이: T366S, L368A, Y407V 및 RF 돌연변이: H435R, Y436F를 특징으로 하는 반면, 중쇄 2는 "노브" 돌연변이: T366W를 특징으로 한다. 노브-인투-홀 돌연변이는 Fc의 이종이량체화를 촉진한다 3. "RF" 돌연변이는 단백질 A에 대한 결합을 방해한다. FcγR 수용체 침묵(AAS)을 위한 돌연변이 및 노브-인투-홀 돌연변이는 하기 서열에서 밑줄이 그어져 있다.
[표 11]
실시예 7: BGCB491 삼중특이적 항체의 면역원성 위험 평가
EpiVax Epimatrix 컴퓨터내 면역원성 예측 프로그램으로부터의 T-조절(Treg) 조정된 점수를 사용하여 잠재적인 면역원성에 대해 삼중특이적 항체 서열을 분석하였다4(표 12). EpiVax 프로그램은 각각의 "수퍼유형" 내의 가장 일반적인 HLA 분자에 대한 결합 잠재력을 컴퓨터 상에서 계산한다. 보고서는 각각의 일배체형을 개별적으로 시험할 필요 없이 전세계 인간 집단의 90% 초과를 대표하는 결과를 제공한다. EpiVax 점수는 주어진 단백질 서열 내에 함유된 모든 예측 T-세포 에피토프의 EpiMatrix 점수를 종합하고, 예상 T-세포 에피토프 함량 및 단백질 길이에 대해 조정함으로써 계산된다. EpiVax 점수 해석은 하기와 같다: -20 미만의 EpiVax 점수는 "이상적"이고; -20 내지 +20의 EpiVax 점수는 "허용가능"하고; +20 초과의 EpiVax 점수는 "허용불가능"하다.
[표 12]
실시예 8: 삼중특이적 항체 비교 연구
상기 기재된 바와 같이 BGCB463 및 BGCB491을 일련의 하기 연구에서 시험하였다.
삼중특이적 항체는 표적 양성 세포만의 사멸화를 매개한다
BGCB463, BGCB491, 및 3개의 대조군(BGCB4821(CD3xNullxNull), BGCB483(CD3xNullxBCMA), BGCB484(CD3xGPRC5DxNull))을 BCMA+ GPRC5D+ 세포(도 17a) 및 BCMA- GPRC5D- 세포(도 17b)에 대해 시험하였다. 3:1의 이펙터 대 표적(E:T) 비; n=1 T-세포 공여자, 72 시간 인큐베이션, 최고 농도 53 nM, 1 내지 5 희석. 세포독성 및 T-세포 활성화 둘 모두에 대해 시험을 수행하였다. 결과는 BGCB463 및 BGCB491이 BCMA+ GPRC5D+ 세포만의 사멸화를 매개하는 반면에(도 17a에 나타낸 바와 같음) BCMA- GPRC5D- 세포는 영향을 받지 않았음(도 17b에 나타낸 바와 같음)을 나타낸다.
삼중특이적 항체는 클론(CRISPR) 세포주를 고갈시킴에 있어서 활성이다
BGCB463 및 BGCB491은 1차 인큐베이션 후 72 및 96 시간 둘 모두에 H929 WT, GPRC5D KO, 및 BCMA KO 세포주를 고갈시켰다(도 18a). E:T 비는 3:1이었음, n=5 T-세포 공여자; 72(5) 및 96(4) 시간 인큐베이션; 최고 농도 532 mM, 1 내지 5 희석 구배. EC50 값은 하기 표 13에 나타낸다.
[표 13]
BGCB463 및 BGCB491은 또한 CRISPR 세포를 고갈시키면서 T-세포 활성화를 촉발한다. 둘 모두의 항체가 상기와 동일한 H929 WT, GPRC5D KO, 및 BCMA KO 세포에서 72 및 96 시간 후에 증가된 T-세포 활성화를 나타낸다(도 18b 및 표 14).
[표 14]
삼중특이적 항체는 림프종(BCMA 단독) 세포주를 고갈시킬 수 있다
세포독성 및 T-세포 활성화 검정에서 H929, RAMOS, 및 GRANTA-519 세포주로 BGCB463 및 BGCB491을 시험하였다. 결과는 둘 모두의 항체가 RAMOS 및 GRANTA-519 라인을 고갈시켰지만, 둘 모두의 항체의 더 높은 농도가 필요하였음을 나타낸다(도 19, 표 15의 EC50 값으로). E:T는 5:1 이었음, n=1 T-세포 공여자; 72 시간 인큐베이션 단독; 53 nM의 최고 농도; 및 1 내지 5 희석.
[표 15]
삼중특이적 항체는 전혈 검정에서 표적 양성 세포를 고갈시킨다
H292 세포를 이용하는 세포독성 및 T-세포 활성화 전혈 검정에서 BGCB463 및 BGCB491을 시험하였다. 결과는 세포독성 및 T-세포 활성화를 나타낸다(도 20 및 표 16의 EC50 값). E:T는 5:1이었음, n=2 전혈 공여자; 48 시간 인큐베이션; 532 nM의 최고 농도; 및 1 내지 5 희석.
[표 16]
삼중특이적 항체는 마우스에서 종양 성장을 퇴행시킨다
BGCB463은 충분히 높은 하기 용량으로 주어진 경우에 MM.1S 및 RPMI 8226 이종이식 마우스 모델에서 종양 성장을 퇴행시키는 것으로 나타났다: MM.1S 모델에서 2 μg 또는 10 μg(도 21a) 또는 RPMI 8226 모델에서 5 μg 또는 10 μg(도 21b). 종양은 성장을 중단하거나 대조군 조건과 비교하여 성장의 감소를 나타냈다.
또한, BGCB463 및 BGCB491 둘 모두는 H929 예방적 이종이식 마우스 모델에서 종양 성장을 퇴행시키는 것으로 나타났다. PBS 대조군과 비교하여, 0.5 μg 및 5 μg 용량 둘 모두는 H929-BCMA KO 및 H929-GPRC5D KO 모델 둘 모두에서 종양 성장을 지연시켰으며, 더 높은 5 μg 농도는 더 많은 효과를 나타냈다(도 22).
DRC Pan-T 결합
BGCB463 및 BGCB491을 1 시간, 37℃ DRC Pan-T 결합 검정에서 시험하였다. 2명의 인간 Pan-T 세포 공여자를 사용하였고, 시험 분자는 1:3 희석 및 11점 DRC로 2 uM 시작 농도를 가졌다. Alexa Fluor® 647 AffiniPure 염소 항-인간 IgG(H+L)를 통한 이차 검출. Intellicyte Ique Screener plus를 사용하여 FACS를 수행하였다. 결과는 도 23에 나타내며, BGCB491은 0.1903의 EC50 및 188194의 최고값을 갖고, BGCB463은 0.1258의 EC50 및 303269의 최고값을 갖는다. 입증된 EC50 값은 CD3 결합 아암에 대한 예상 파라미터 내에 있다.
DRC H929 스위트 결합
BGCB463 및 BGCB491을 H929 WT, H929 BCMA-KO, H929 GPRC5D-KO, 및 H929 BCMA/GPRC5D 이중 KO 세포에 대해 1 시간 37℃ DRC 스위트 결합 검정에서 시험하였다. 도 24a 내지 도 24d에 나타낸 결과는 모두 null 대조군(BGCB510)을 갖는다. EC 값은 표 17에 나타낸다. 결과는 BGCB491이 BGCB463과 비교하여 BCMA-매개 결합을 증가시키고 GPRC5D-매개 결합을 감소시켰음을 나타냈다.
[표 17]
삼중특이적 항체 분석 연구
하기 표 18은 BGCB463 및 BGCB491에 대한 다양한 분석을 제공한다.
[표 18]
실시예 9: BGCB491 삼중특이적 항체의 생물물리학적 평가
표 19A는 BGCB491의 재조합 항원 결합, 종 교차-반응성, 에피토프 확인, Fc 수용체 결합, 및 생물물리학적 고유 특성 속성을 제공한다. 표 19B는 BGCB491에 대한 추가의 특징을 제공한다.
[표 19A]
[표 19B]
실시예 10: BGCB491의 표적 아암 및 CD3 아암 결합 특성화
BGCB491의 내인성 종양 세포주 결합
유세포 분석을 사용하여 시험관내에서 BGCB491의 BCMA와 GPRC5D 아암 결합을 평가하였다. 1-시간 37℃ 인큐베이션 후에 H929-WT, H929-BCMA-KO, H929-GPRC5D-KO, 및 H929-BCMA/GPRC5D-KO 세포주의 패널 상에서 BGCB491 및 동종형 대조군을 시험하였다.
BGCB491은 WT뿐만 아니라 각각의 녹-아웃(KO) 라인 상에서 특이적 결합을 나타냈으며, 이는 각각의 개별 표적-결합 아암의 결합을 검증한다(도 25, 표 20).
[표 20]
삼중특이적 항체 BGCB491에 대해 24-시간 동역학적 결합 실험을 수행하였다. 유세포 분석을 사용하여 24-시간 37℃ 인큐베이션 전체에 걸쳐 50, 10, 2 nM에서 H929 WT 및 MM.1R WT 세포주 상에서 결합 동역학을 평가하였다(도 40 참조). 도 40에서 입증된 바와 같이, 24-시간의 기간에 걸쳐 둘 모두의 세포주 상에서 안정적인 결합 프로파일이 관찰되었다.
BGCB491의 1차 T-세포 결합
7명의 상이한 건강한 인간으로부터의 CD3+ pan T 세포에 대한 BGCB491의 CD3 아암(즉, CD3B376) 결합을 평가하기 위해 유세포 분석을 사용하였다. CD3B376에 대한 세포-기반 EC50은 1 시간에서의 포화 동역학의 결여로 인해 결정될 수 없었다(도 26). CD3B376xNull 대조 항체(즉, GCDB381) 분자를 사용하여 생물정보학 외삽을 수행하였으며(도 27), 이는 2 μM 최고 농도 용량-반응 내에서 포화되어 비-선형 회귀 곡선의 상부를 제한하여 ECx 값의 추정을 가능하게 하는 전체 곡선을 생성한다(표 21).
[표 21]
120 시간에 걸쳐 3명의 pan T-세포 공여자에 걸쳐 Incucyte 상에서 수행된 동역학적 세포독성 검정에서, 약한 CD3-결합 아암의 사용에도 불구하고, BGCB491은 1:1 및 1:3의 E:T 비 둘 모두에서 최대 세포독성을 갖는 피코몰 농도 이하의 강건한 효력을 나타냈다. 시간-경과 세포독성 검정에서, Incucyte S3을 사용하여 120 시간에 걸쳐 3명의 pan T 세포 공여자에 걸쳐 H929-GFP 세포에서 BGCB491의 동역학적 표적 세포독성 및 T-세포 활성화 프로파일을 평가하였다. BGCB491은 1:3 E:T 비에서 최저 시험 농도(10 pM)를 제외하고는 모든 농도에서 약 72 시간에 주목할만한 최대 세포독성에 도달하였다(도 42). 동역학적 플롯으로부터, 1:1 E:T 비(도 43) 및 1:3 E:T 비(도 44)에 대해 72-, 93-, 및 120-시간 시점에서의 퍼센트 세포용해 및 T-세포 활성화에 대한 정보를 추출하였다. BGCB491은 둘 모두의 E:T 비에서 피코몰 농도 이하의 강건한 사멸화 효력을 나타냈다(표 22). 더 상세한 세포독성 특성화가 실시예 12에 예시되어 있다.
[표 22]
요약하면, BGCB491은 1개의 결합 아암을 갖는 TCR CD3 및 나머지 2개의 결합 도메인을 갖는 종양 세포 표면 항원 BCMA 또는 GPRC5D를 표적화하는 완전 인간 삼중특이적 mAb이다. BGCB491은 허용가능한 고유 생물물리학적 특성을 나타냈고, 시험된 모든 BCMA-, GPRC5D-, 및 이중 BCMA-GPRC5D-발현 세포주에 결합되었다.
실시예 11: 치료적 약리학
파트 1. 시험관내 연구
시험 세포주에서 BCMA 및 GPRC5D 수용체 단백질 표면 발현 및 밀도
피코에리트린(PE)-표지화된 시판 BCMA 항체 및 사내 GPRC5D 항체를 사용하는 형광-활성화 세포 분류(FACS)에 의해, 4개의 이중 표적(즉, BCMA-GPRC5D) 양성 세포주(즉, MM.1S, H929, JIM-3, 및 OPM-2) 및 2개의 이중-표적-음성 세포주(즉, MV-4-11 및 OCI-AML-3)의 서브세트를 단백질 발현에 대해 특성화하였다. 모든 표적-양성 세포주는 동종형 대조군과 비교하여 발현 패턴의 유의한 이동을 가진 반면, 표적-음성 세포주는 임의의 발현을 나타내지 못했다(표 23). 표면 상에 다양한 수준의 표적 단백질 발현을 갖는 이들 6개의 세포주가 추가의 시험관내 및 생체내 기능적 검정을 위해 선택되었다.
[표 23]
내인성 BCMA-GPRC5D-발현 세포주에 대한 BGCB491 결합
그 다음에, BGCB491(BCMAxGPRC5DxCD3 삼중특이적 mAb) 결합 프로파일을 유세포 분석 방법을 적용함으로써 결정하였다. BGCB491 및 BCMAxGPRC5DxNull 대조군 항체는 BCMA-GPRC5D-발현 MM 세포에 용량-의존적 방식으로 결합한 반면에(EC50 값: MM.1S, 33.39 nM; H929, 185.50 nM; JIM-3, 78.45 nM; OPM-2, 10.07 nM; 도 41) CD3xNullxNull 대조군 항체는 이들 세포 상에서 유의한 결합을 나타내지 않았다. 시험된 항체 중 어느 것도 이중-표적-음성 세포주 MV-4-11 및 OCI-AML-3에 결합되지 않았으며, 이는 BGCB491 특이성을 나타낸다.
MM 세포주의 BGCB491-매개 T-세포-의존적 세포독성 및 T-세포 활성화
FACS-기반 접근법을 사용하여 BGCB491의 시험관내 세포독성 및 T-세포 활성화 잠재력을 평가하기 위해 T-세포-매개 세포독성 검정을 사용하였다. 6명의 건강한 공여자로부터의 pan T 세포(CD3+)를 사용하여 다양한 세포주(BCMA-GPRC5D 이중 양성: MM.1S, H929, JIM-3, OPM-2; 및 BCMA-GPRC5D 이중 음성: MV-4-11 및 OCI-AML-3) 상에서 BGCB491을 시험하였다. 시험된 세포 중 일부 상에 Fc 수용체가 발현되기 때문에, 2 mg/mL의 Fc 차단제를 검정에 첨가하였다. 또한, BCMAxGPRC5DxNull 및 CD3xNullxNull을 음성 대조군으로서 사용하였다. BGCB491은 72 시간의 인큐베이션 후에 시험관내에서 BCMA-GPRC5D-이중 양성 세포주를 강력하게 사멸시켰다(도 28a, 표 24). 모든 이중-표적-양성 세포주에 걸쳐 CD3+CD25+ 생존 T 세포에 의해 측정되는 바와 같이, BGCB491은 세포독성에 대해 0.002 내지 0.312 nM 및 T-세포 활성화에 대해 0.008 내지 1.070 nM의 EC50 값 범위를 갖는 강력한 삼중특이적 항체인 것으로 확인되었다. 예상된 바와 같이 이중-표적-양성 세포에 의해서만 동시 T-세포 활성화가 관찰되었다(도 28b, 표 24). BGCB491은 이중-표적-음성 세포주 MV-4-11 및 OCI-AML-3으로 시험될 때 세포독성 또는 T-세포 활성화를 유도하지 않았으며, 이는 세포독성 특이성을 입증한다. CD3xNullxNull 항체가 고농도(100 nM 초과)에서 일부 활성을 나타낸 MM.1S 세포주를 제외하고는, BCMAxGPRC5DxNull 및 CD3xNullxNull 대조군은 유의한 세포독성을 나타내지 않았다.
[표 24]
H929 CRISPR 녹아웃 세포 생성 및 표적 발현
CRISPR 녹아웃 H929 세포주에서의 BCMA 및 GPRC5D 수용체 단백질 발현 및 밀도
그 다음에, 단일-표적-발현 세포를 사멸시키는 BGCB491 잠재력을 평가하기 위해, H929 클러스터링된 규칙적으로 이격된 짧은 회문식 반복부(CRISPR) KO 세포주(즉, H929-BCMA-KO 및 H929-GPRC5D-KO)를 세포독성 검정에 사용하였다. 도 25의 범례에 기재된 바와 같이 이들 세포를 서열 확인하고, PE-표지화된 시판 BCMA 항체 및 사내 PE-표지화된 GPRC5D 항체를 사용하여 FACS에 의해 단백질 발현에 대해 특성화하였다. 발현 프로파일은 H929-BCMA-KO 세포주에서의 BCMA 발현 및 H929-GPRC5D-KO 세포주에서의 GPRC5D 발현의 완전한 녹아웃을 나타냈다.
H929 CRISPR KO 클론 세포주의 BGCB491-매개 세포독성 및 T-세포 활성화
그 다음에, 4명의 건강한 공여자로부터의 pan T 세포(CD3+)를 사용하여 CRISPR KO 및 야생형(WT) 세포주(즉, H929-WT, H929-GPRC5D-KO, 및 H929-BCMA-KO) 상에서 BGCB491 항체를 시험하여, FACS-기반 프로토콜을 사용하여 그의 클론 고갈 잠재력을 평가하였다. 또한, BCMAxGPRC5DxNull 및 CD3xNullxNull을 음성 대조군으로서 사용하였다. BGCB491은 72 시간의 인큐베이션 후에 시험관내에서 3개의 세포주 모두(즉, H929-WT, H929-GPRC5D-KO, 및 H929-BCMA-KO) 및 활성화된 T 세포를 강력하게 사멸시켰다(도 29). BGCB491은 결합력으로 인해 단일-표적-발현 CRISPR KO 세포주와 비교하여 이중-표적-발현 H929-WT 세포에서 유의한 효력을 나타냈다. BCMAxGPRC5DxNull 및 CD3xNullxNull은 유의한 세포독성 또는 T-세포 활성화를 나타내지 않았다. 4명의 상이한 건강한 T-세포 공여자를 사용하는 평균 EC50 값이 표 25A에 정리되어 있다. 테클리스타맙(BCMAxCD3 이중특이적 항체) 및 탈쿠에타맙(GPRC5DxCD3 이중특이적 항체)를 양성 대조군으로서 사용하였으며, 예상된 바와 같이 거동하였다. 표 25B는 H929 세포의 세포당 수용체 밀도 값을 나타낸다.
[표 25A]
[표 25B]
건강한 인간 전혈(MABEL 검정)에서 스파이킹된 이중-표적-양성 H929 세포에 대한 BGCB491의 세포독성 및 T-세포 활성화 잠재력
MABEL 검정을 사용하여 더 생리학적으로 관련된 환경에서 BGCB491의 효과를 특성화하였다. 여기서, 이중-표적-양성 H929 세포를 인간 건강한 전혈에 첨가하여 세포독성, T-세포 활성화, 및 사이토카인 파라미터를 확립하였다. H929-세포주는 48 시간 동안 인간 전혈 환경에서의 그의 상용성에 기초하여 선택하였다. BGCB491은 48 시간의 인큐베이션 후에 이러한 공배양된 전혈 검정에서 이중-표적-양성 H929 세포를 강력하게 사멸시키고 T 세포를 활성화시켰다(도 30). 7명의 상이한 건강한 공여자로부터의 전혈을 사용하여 시험할 때, BGCB491은 세포독성에 대해 0.274 nM 및 CD3+ T-세포 활성화에 대해 0.376 nM의 평균 EC50 값을 가졌다(표 26). BCMAxGPRC5DxNull 및 CD3xNullxNull은 유의한 세포독성 또는 T-세포 활성화를 나타내지 않았다. 10-plex Meso Scale Discovery(MSD)-기반 프로토콜을 사용하여 3명의 상이한 전혈 공여자로부터 사이토카인을 정량화하였다(도 31, 표 27). 양성 대조군 테클리스타맙 및 탈쿠에타맙은 특이적 활성을 나타냈다.
[표 26]
[표 27]
MM 환자 골수 CD138+ 세포의 BGCB491-매개 세포독성
MM 환자로부터의 1차 샘플에서 BGCB491의 효력을 평가하기 위해, 4명의 상이한 MM 환자로부터의 냉동 골수 단핵 세포 및 건강한 공여자로부터의 T 세포를 사용하는 세포독성 검정에서 이러한 삼중특이적 mAb를 시험하였다. 동일한 수의 외인성 T 세포 및 골수 단핵 세포(즉, 100,000; E:T 비=1:1)를 혼합하고 BGCB491, CD3xNullxNull, 테클리스타맙, 또는 탈쿠에타맙과 함께 48 시간 동안 인큐베이션하였다. 유세포 분석-기반 접근법을 사용하여 항체-매개 형질 세포 고갈 및 T-세포 활성화 잠재력을 측정하였다. 건강한 정상 T 세포와의 48 시간의 공배양 후에 BGCB491은 모든 환자 샘플의 CD138+ 형질 세포 고갈을 용량-의존적 방식으로 유도하였다(도 32). T-세포 활성화 데이터는 예상된 바와 같이 세포독성 데이터와 잘 상관되었다. 이 데이터는 BGCB491이 생체외 공배양 검정에서 1차 MM 골수 세포에 대해 세포독성임을 확인한다. 형질 세포 고갈 및 T-세포 활성화에 대한 공여자-특이적 ECx 값이 표 28에 열거되어 있다. CD3xNullxNull 대조군 항체를 4개의 분자 모두에 대해 충분한 세포를 가진 3개의 샘플에서 시험하였으며, 더 높은 농도(1 nM 초과)에서 일부 최소 비-특이적 형질 세포 고갈 및 T-세포 활성화를 나타냈다. 테클리스타맙 및 탈쿠에타맙을 양성 대조군으로서 사용하였으며, 예상된 바와 같이 거동하였다.
[표 28]
다양한 E:T 비 및 인큐베이션 시간에서의 BGCB491 세포독성 잠재력
추가로, 몇몇 E:T 비 및 상이한 인큐베이션 시간을 갖는 T-세포-매개 세포독성 검정을 사용하여 BGCB491 표적 세포 세포독성 잠재력을 시험하여 임상 환경에서 골수종 세포를 고갈시키는 그의 능력을 이해하였다. 시험 세포주로서, 5:1, 3:1, 1:1, 및 0.5:1의 E:T 비를 얻기 위해 BGCB491, BCMAxGPRC5DxNull, 및 CD3xNullxNull의 존재 하에 H929 세포를 T 세포(공여자 ID: 20063323)와 혼합하고,72 시간 동안 인큐베이션을 수행하였다. 시간-경과 실험을 위해, 3:1 및 1:1의 E:T 비를 24, 48, 72, 96, 120, 144, 및 168 시간의 인큐베이션에서의 시험을 위해 선택하였다. H929 세포에서 BCMA 및 GPRC5D에 대한 세포당 수용체 밀도는 각각 5381 및 1574이다. BGCB491은 시험된 모든 E:T 비에서 세포독성 및 T-세포 활성화에 대한 유사한 EC50 값으로 H929 세포를 강력하게 사멸시켰다(도 33a, 표 29). BGCB491은 시험된 가장 빠른 시점(24 시간)부터 표적 세포 세포독성을 개시하였고, 그의 효력 및 효능은 72 시간의 인큐베이션까지 시간 경과에 따라 증가하였으며, 여기서 그것은 평탄역에 거의 도달하였다(도 33b). BGCB491은 시험된 모든 시점에 세포독성에 대해 0.001 내지 0.022 nM 및 T-세포 활성화에 대해 0.005 내지 0.067 nM 범위의 EC50 값으로 H929 세포를 강력하게 사멸시켰다(3:1의 E:T 비). 1:1 E:T 비 검정의 경우, EC50 값은 세포독성에 대해 0.004 내지 0.025 nM 및 T-세포 활성화에 대해 0.006 내지 0.083 nM의 범위였다(도 33b, 표 30). 이 데이터는 삼중특이적 mAb BGCB491이 매우 효율적이며 T-세포 카운트가 제한되는 상황에서 유익할 수 있음을 나타낸다. 그러나, 0.5:1의 더 낮은 E:T 비에서는 최대 세포독성 백분율이 다른 시험된 조건에서보다 72-시간 인큐베이션 검정에서 훨씬 더 낮았다(약 20%). 더 긴 인큐베이션 시간이 이러한 더 낮은 T-세포 카운트에서 최대 세포독성을 개선할 수 있는지 여부를 관찰하는 것은 흥미로울 것이다. 별도의 연구에서, BGCB491은 1:1 및 1:3의 E:T 비 둘 모두에서(도 43, 도 44) H929 세포의 강건한 세포독성을 갖는 다중의 공여자(도 26)로부터 CD3을 발현하는 1차 인간 T 세포에 대한 측정가능한 저-친화도 결합을 나타냈다.
[표 29]
[표 30]
표적 세포의 부재 하에 T-세포 활성화에 대한 BGCB491의 효과
표적 결합의 부재 하에 BGCB491이 원치 않는 T-세포 활성화를 촉진하는지 여부를 평가하기 위해, T-세포 활성화 검정에서 BGCB491의 효과를 시험하였다. 첫 번째 연구에서는, 6명의 정상적인 건강한 공여자 T-세포 샘플을 다양한 농도의 BGCB491의 존재 하에 72 시간 동안 인큐베이션하였다(도 34a). 두 번째 연구에서는, BCMA-GPRC5D-양성 세포가 건강한 인간 전혈 중에 부재하는 더 생리학적으로 관련된 검정 형식을 사용하였으며, 여기서 BGCB491은 48 시간 동안 다양한 농도로 6명의 정상적인 건강한 공여자 전혈 샘플에 첨가되었다(도 34b). 이어서, 유세포 분석에 의해 CD25-양성 CD3+, CD4+, 및 CD8+ T 세포 또는 다양한 혈구(도 34c; 호중구, 단핵구, B 세포, NK 세포, 형질모세포)의 퍼센트 세포 사멸을 채점함으로써 T-세포 활성화 및 세포독성 효과를 측정하였다. BGCB491은 BCMA-GPRC5D-발현 표적 세포의 부재 하에 T 세포의 활성화 또는 비-특이적 세포 사멸에 유의한 영향을 갖지 않았다(도 34b 및 도 34c). 최소 T-세포 활성화가 10 nM 초과의 농도에서 관찰되었다.
파트 2. 생체내 연구
BGCB491의 항종양 효능을 RPMI 8226(연구 A) 및 H929-CRISPR-KO(연구 B) 인간 MM 이종이식편에서 평가하였다. 인간 종양 및 인간 T 세포를 생착시키기 위한 적합한 숙주를 제공하기 위해, 자성 NSG(즉, 비-비만 당뇨병[NOD] 중증 복합 면역결핍[scid] 감마 또는 NOD.Cg-Prkdc scid Il2rg tm1Wjl /SzJ) 마우스를 둘 모두의 연구에 사용하였다.
연구 A에서는, 제0일에 RPMI 8226 세포를 마우스에 SC 이식하였다. 종양 세포 생착 후 제18일에 인간 pan T 세포를 복강내(IP) 생착시켰다. 비히클, BGCB491, 테클리스타맙, 또는 탈쿠에타맙을 이용하는 처리를 제19일에 시작하여 IP 투여하고 총 8회 처리를 위해 매주 2회 계속하였다. 연구 B는 제-1일에 인간 확장된 pan T 세포를 IP 주사하는 예방 연구로서 수행되었다. H929-BCMA-KO 세포는 NSG 마우스의 좌측 옆구리에 SC 이식한 반면, H929-GPRC5D-KO 세포는 제0일에 우측 옆구리에 SC 이식하였다. 비히클(즉, 포스페이트-완충 식염수[PBS]), BGCB491, 테클리스타맙, 및 탈쿠에타맙을 이용하는 처리를 제1일에 개시하고, 7회 처리를 위해 매주 2회 투여하였다.
연구 A(회귀 모델)에서는, 비히클-처리된 대조군 동물의 70% 초과가 연구 상에 잔류하는 경우에, RPMI 8226 이종이식편의 퍼센트 Δ 종양 성장 억제(TGI)를 제38일에 계산하였다. RPMI 8226 세포에서 BCMA 및 GPRC5D에 대한 세포당 수용체 밀도는 각각 2317 및 486이다. 통계적으로 유의한 ΔTGI가 BGCB491에 의해 0.4 mg/kg(20-그램 마우스의 경우에 대략 8 μg과 등가임), 1 mg/kg(20 μg/마우스), 및 2.5 mg/kg(50 μg/마우스)에서 관찰되었으며, 이는 각각 90.5%, 106.2%, 및 111.2%의 ΔTGI 값을 유발하였다(비히클 대조군에 대비하여 모든 군 대해 p<0.05)(도 35). 0.1 mg/kg(2 μg/마우스)의 최저 용량은 38.4% ΔTGI(p = 0.035)를 유발하였으며, 이는 효능이 없는 것으로 간주되었다. 테클리스타맙은 PBS-처리된 대조군 마우스와 비교하여 0.4 mg/kg에서 85% ΔTGI, 1 mg/kg에서 105.6% ΔTGI, 및 2.5 mg/kg에서 111.9% ΔTGI로 각각 종양 성장을 억제한 반면, 2.5 mg/kg으로 투여된 탈쿠에타맙은 77.2% ΔTGI로 RPMI 8226 종양 성장을 억제하였다(PBS-처리 대조군에 대비하여 모든 군에 대해 p<0.05).
RPMI 8226 모델에서, BGCB491-매개 종양 퇴행은 치료 중단 후 2주 초과 동안 계속 관찰되었다. 제60일에 초기 종양 부담과 비교하여 퍼센트 종양 퇴행(TR)을 평가하였으며, 이는 마지막 용량 후 19 일이었다. 종양 퇴행은 1 및 2.5 mg/kg에서 BGCB491에 의해 관찰되었으며, 이는 80.27%(p<0.0001) 및 100%(p<0.0001)의 TR 값을 각각 유발하였다. 0.4 mg/kg 용량은 제60일에 28.7% TR을 가졌지만 통계적으로 유의하지 않았다. 마찬가지로, 테클리스타맙은 1 mg/kg에서 68.88%(p=0.0025) 및 2.5 mg/kg에서 100%(p<0.0001)로 TR을 유도하였다. 72-시간 인큐베이션 검정에서 RPMI 8226 세포를 사용하는 시험관내 시험에서, BGCB491은 개별적으로 테클리스타맙 또는 탈쿠에타맙과 비교하여 상가적 효과가 없는 유사한 세포독성 프로파일을 나타냈다.
연구 B(예방적 모델)에서, 동물의 70% 초과가 연구 상에 잔류하는 경우, 종양 이식 후 제22일에 퍼센트 TGI를 계산하였다. BGCB491에 의해 0.1, 0.25, 및 0.5 mg/kg에서 BCMA-KO에 대해 통계적으로 유의한 TGI가 관찰되었으며, 이는 PBS-처리 대조군과 비교하여 각각 89.2%, 91.1%, 및 83.6% TGI를 유발하였다(모든 p-값<0.05: 도 36). 테클리스타맙은 시험된 둘 모두의 용량 수준에서 효능이 없었지만(0.1 mg/kg, 17.2% TGI; 및 0.25 mg/kg, 19.9% TGI), 탈쿠에타맙은 0.1 및 0.25 mg/kg 용량 수준 둘 모두에서 종양 성장을 100% 억제하였다(p<0.05). GPRC5D-KO 종양에 대해, BGCB491 처리는 0.1, 0.25, 및 0.5 mg/kg 용량 수준에서 100% TGI로 유의한 효능을 유발하였다(모든 군에 대해 p<0.05). 0.025 mg/kg 용량은 22.09% TGI의 부수적인 효과를 가졌으며, 이는 생물학적으로 유의한 것으로 간주되지 않았다(34). 테클리스타맙은 0.1 및 0.25 mg/kg 용량 수준 둘 모두에서 100% TGI로 H929-GPRC5D-KO 종양 성장을 억제하였고(p<0.05), 탈쿠에타맙은 효과가 없었다. H929 BCMA-KO 세포에서 BCMA 및 GPRC5D에 대한 세포당 수용체 밀도는 각각 1 및 957이다. H929 GPRC5D-KO 세포에서 BCMA 및 GPRC5D에 대한 세포당 수용체 밀도는 각각 3926 및 19이다.
치료 후에 이식편-대-숙주 질환(GvHD)-관련 이환의 징후가 나타날 때까지 동물을 모니터링하였으며, 이 시점에 동물을 안락사시켰고 연구는 결론을 내렸다.
요약하면, 삼중특이적 mAb BGCB491은 다수의 MM 세포주에서 효능을 나타냈고, 단일 표적 또는 이중 표적을 발현하는 클론 집단을 고갈시킬 수 있었다. BGCB491은 또한 전혈 검정과 같이 더 생리학적인 환경에서 표적-발현 세포를 사멸시킬 수 있었다. 중요하게는, BGCB491은 용량-의존적 방식으로 MM 환자 형질 세포를 고갈시킬 수 있었다. BGCB491 효능은 또한 생체내 마우스 이종이식 모델에서 종양 성장의 유의한 감소로 반영되었다. 마지막으로, 표적-음성 세포의 비-특이적 T-세포 활성화 또는 세포독성은 없었다. 이러한 결과는 BGCB491이 MM 환자를 치료함에 있어서 유의한 치료적 잠재력을 가질 수 있음을 나타낸다.
추가의 생체내 연구에서는, MM.1S(연구 C) 인간 MM 이종이식편에서 BGCB491의 항종양 효능을 평가하였다. 인간 종양 및 인간 T 세포를 생착시키기 위한 적합한 숙주를 제공하기 위해, 자성 NSG(즉, 비-비만 당뇨병[NOD] 중증 복합 면역결핍[scid] 감마 또는 NOD.Cg-Prkdc scid Il2rg tm1Wjl /SzJ) 마우스를 연구에 사용하였다.
연구 C에서는, 제0일에 MM.1S 세포를 마우스에 SC 이식하였다. 종양 세포 생착 후 제13일에 인간 확장된 pan T 세포를 복강내(IP) 생착시키고, 비히클, BGCB491, 테클리스타맙, 또는 탈쿠에타맙을 이용하는 처리를 제15일에 시작하여 IP 투여하고 총 7회 처리를 위해 매주 2회 계속하였다.
동물의 70% 초과가 연구 상에 잔류하는 경우, 종양 이식 후 제34일에 퍼센트 종양 성장 억제(TGI)를 계산하였다. BGCB491에 의해 0.025, 0.1, 0.5, 및 1 mg/kg에서 MM.1S에 대해 통계적으로 유의한 TGI가 관찰되었으며, 이는 PBS-처리 대조군과 비교하여 각각 66.9%, 91.2%, 99.7%, 및 100% TGI를 유발하였다(모든 p-값<0.05: 도 45). 테클리스타맙은 시험된 둘 모두의 용량 수준에서 종양 성장을 억제하였다(0.1 mg/kg, 73.7% TGI; 및 0.5 mg/kg, 92.3% TGI(p p<0.05). 탈쿠에타맙은 0.025 mg/kg에서 90.9% TGI 및 0.1 mg/kg에서 99.4%로 효능이 있었다(p<0.05).
치료 중단 후 2 주 동안의 BGCB491-매개 종양 퇴행. 마지막 용량 후 14 일인 제51일에 초기 종양 부담과 비교하여 퍼센트 종양 퇴행(TR)을 평가하였다. 종양 퇴행은 0.5 및 1 mg/kg에서 BGCB491에 의해 관찰되었으며, 이는 각각 100%(확립된 종양의 8개 중 8개의 완전 퇴행)의 TR 값을 유발하였다. 0.4 mg/kg 용량은 제60일에 28.7% TR을 가졌지만 통계적으로 유의하지 않았다. 테클리스타맙은 임의의 종양 퇴행을 유도하지 않았지만, 탈쿠에타맙은 0.1 mg/kg에서 확립된 MM.1S 종양의 100% TR을 유발하였다.
실시예 12: 인간 및 다른 종에 대한 치료제의 친화도
CD3-결합 아암(즉, CD3B376)은 사이노몰거스 원숭이 CD3에 결합한다. 약술하면, 인간 및 사이노몰거스 원숭이 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 GCDB381(즉, 2가 IgG1-AAS 항체에서 CD3B376 Fab), CD3B891(즉, CD3B376xNull, IgG1-AAS 이중특이적 항체), 또는 null 대조군과 함께 인큐베이션한 후에 유세포 분석에 의해 결합을 측정하였다.
BCMA(BCMB601, BCMB519 scFv를 함유함) 결합 아암은 사이노몰거스 원숭이 BCMA에 결합하지 않았다(표 19A).
GPRC5D(즉, GC5B680) 및 BCMA 결합 아암을 BGCB491과 동일한 결합 아암을 사용하는 BGCB463 분자의 일부로서 사이노몰거스 원숭이에 대한 교차-반응성에 대해 평가하였다. 사이노몰거스 원숭이에 대한 교차 반응성은 인간 또는 사이노몰거스 원숭이 GPRC5D 또는 BCMA를 안정적으로 발현하는 K562와 함께 37℃에서 1 시간 동안 FACS-기반 세포 결합을 사용하여 둘 모두의 표적-결합 scFv 아암에 대해 프로파일링되었다. GC5B680 scFv 아암에 대한 세포-기반 EC50 값은 인간 GPRC5D-발현 세포에 대해 대략 30 nM이었고 사이노몰거스 원숭이 GPRC5D-발현 세포에 대해 약 10-배 더 약했다(대략 400 nM). 대조적으로, BCMB519 scFv 아암에 대한 세포-기반 EC50 값은 인간 BCMA에 대해 대략 145 nM인 반면, 2 μM까지 사이노몰거스 BCMA에 대한 검출가능한 결합은 없었다.
실시예 13: 표적-외 독성 평가
종양-항원-결합 아암과 관련된 표적외 결합 또는 기능적 활성으로 인한 위험에 대한 가능성은 각각 Retrogenix™ 세포 마이크로어레이(표적-외 취약성이 관찰되지 않음) 및 기능적 선택성 TAA― 세포주 검정을 사용하여 평가되었다.
BGCB491의 CD3 아암의 선택성은 표적-발현 세포의 부재 하에 세포독성 및 T-세포 활성화의 결여에 의해 입증되었다(도 34a 내지 도 34c; 실시예 12 참조).
GPRC5D 표적-외 결합 평가
5,868개의 전장 인간 원형질막 및 세포-표면-결찰 인간 분비 단백질(모든 알려진 G-단백질-커플링된 수용체 패밀리 C 군 5[GPRC5] 패밀리 구성원을 포함함) 및 371개의 이종이량체의 라이브러리를 개별적으로 발현하는 고정 HEK293 세포에 대한 결합에 대해 스크리닝할 경우에 GPRC5D 결합제(GC5B1257.001, 항-GPRC5D GC5B680 scFv-Fc)는 그의 1차 표적인 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 것으로 결정되었다. 표적-외 상호작용은 확인되지 않았으며, 이는 BGCB491에 함유된 GPRC5D-결합 도메인의 표적 특이성을 입증한다.
BCMA 표적-외 결합 평가
5,475개의 전장 인간 원형질막 및 세포-표면-결찰 인간 분비 단백질 및 371개의 이종이량체의 라이브러리를 개별적으로 발현하는 고정 HEK293 세포에 대한 결합에 대해 스크리닝할 경우에 BCMA 결합제(BCMB601.001, 항-BCMA BCMB519 scFv-Fc)는 그의 1차 표적인 BCMA(TNFRSF17)에 특이적으로 결합하는 것으로 결정되었다. 표적-외 상호작용은 확인되지 않았으며, 이는 BGCB491에 함유된 BCMA-결합 도메인의 표적 특이성을 입증한다.
종양-관련 항원-음성 세포주에서의 기능적 선택성
BGCB491의 항원 특이성은, GPRC5D, BCMA, 및 CD3의 발현이 결여되지만, 알려진 세포 표면 단백질의 50% 초과를 발현할 것으로 전사체학에 의해 예측되는, 5개의 암 세포주(유세포 분석에 의해 확인된 바와 같음)의 패널을 사용하는 시험관내 기능적 검정에서 추가로 특성화된다. 건강한 공여자-유래 T 세포를 이용하는 공배양 연구에서, GPRC5D 및 BCMA를 발현하는 표적 세포(즉, H929 세포)와의 공동배양에 첨가될 때 그랜자임 B, 인터페론(IFN)-γ, 종양 괴사 인자(TNF)-α, 및 인터류킨(IL)-2의 항체-의존적, T-세포-매개 사이토카인 방출의 유도에 대해 BGCB491을 평가한다. 이들 데이터는 GPRC 및 BCMA에 대한 BGCB491의 항원 특이성을 지원할 수 있다.
실시예 14: 국소 내성
각각 0.05 및 0.5 mg/mL에서 2 내지 2.5 mL 중의 0.1 또는 0.01 mg/kg BGCB491 SC로 처리된 미니피그의 PK 연구에서 피부 반응을 평가하였다(실시예 16의 
미니피그 약동학 참조). 피부 반응은 관찰되지 않았다.
실시예 15: 전임상 종에서의 약동학
마우스 약동학적 특성
BGCB491의 혈청 및 종양 PK 특성은 0.5 및 0.1 mg/kg에서 단일 IV 주사 후에 NSG MM.1S 이종이식 마우스 모델에서 특성화된다.
사이노몰거스 원숭이 약동학
BGCB491의 PK 특성을 자성 사이노몰거스 원숭이(n=3)에서 단일-용량 비-GLP PK 연구에 따라 특성화하였다. BGCB491을 0.5 mg/kg(10 mM 히스티딘, pH 6.5)의 용량 수준으로 사이노몰거스 원숭이에 IV 투여하였다. MSD로부터의 적격 전기화학발광 면역검정(ECLIA)을 사용하여 총 BGCB491의 농도를 정량화하였다. 최대 혈청 농도(Cmax)에 의해 평가된 BGCB491 전신 약물 노출 및 1회 용량 간격의 혈청 농도 대 시간 곡선하 면적(AUC)을 표 31에 나타내고, BGCB491 혈청 농도는 도 37에 예시한다.
[표 31]
BGCB491의 PK 특성을 웅성 
미니피그(n=4/군)에서 단일-용량 비-GLP PK 연구에 따라 특성화하였다. BGCB491은 0.1 mg/kg의 용량 수준으로 미니피그에 IV 투여되거나 0.1 또는 0.01 mg/kg(10 mM 히스티딘, pH 6.5)의 용량 수준으로 SC 투여되었다. MSD로부터의 적격 ECLIA를 사용하여 총 BGCB491의 농도를 정량화하였다. 미니피그 PK 연구를 사용하여 BGCB491에 대한 흡수 속도(ka) 및 SC 생체이용률(F) 파라미터를 추정하였다. 약물 노출(Cmax 및 AUCinf)은 0.01 내지 0.1 mg/kg의 용량 범위에서 대략 용량-비례적인 방식으로 용량과 함께 증가하였다. 1 용량 간격의 Cmax 및 AUC에 의해 평가된 BGCB491 전신 약물 노출은 표 32에 나타내며, BGCB491 혈청 농도는 도 39a에 예시된다.
[표 32]
참고문헌
1
Ridgway, J. B., Presta, L. G. & Carter, P. 'Knobs-into-holes' engineering of antibody CH3 domains for heavy chain heterodimerization. Protein Eng 9, 617-621, doi:10.1093/protein/9.7.617 (1996).
2
Tustian, A. D., Endicott, C., Adams, B., Mattila, J. & Bak, H. Development of purification processes for fully human bispecific antibodies based upon modification of protein A binding avidity. MAbs 8, 828-838, doi:10.1080/19420862.2016.1160192 (2016).
3
Von Kreudenstein, T. S. et al. Improving biophysical properties of a bispecific antibody scaffold to aid developability: quality by molecular design. MAbs 5, 646-654, doi:10.4161/mabs.25632 (2013).
4
De Groot, A. S. & Martin, W. Reducing risk, improving outcomes: bioengineering less immunogenic protein therapeutics. Clinical immunology 131, 189-201, doi:10.1016/j.clim.2009.01.009 (2009).
5.
Usmani SZ, Berdeja JG, Truppel-Hartmann A, et al. KarMMa-4: Idecabtagene vicleucel (ide-cel, bb2121), a BCMA-directed CAR T-cell therapy in high-risk newly diagnosed multiple myeloma. J Clin Oncol. 2021;39(15_suppl):TPS8053. doi: 10.1200/JCO.2021.39.15_suppl.TPS8053
6.
Berdeja JG, Krishnan AY, Oriol A, et al. Updated results of a phase 1, first-in-human study of talquetamab, a G protein-coupled receptor family C group 5 member D (GPRC5D) x CD3 bispecific antibody, in relapsed/refractory multiple myeloma (MM). J Clin Oncol. 2021;39(15_suppl):8008. doi: 10.1200/JCO.2021.39.15_suppl.8008
7.
Usmani SZ, Berdeja JG, Madduri D, et al. Ciltacabtagene autoleucel, a B-cell maturation antigen (BCMA)-directed chimeric antigen receptor T-cell (CAR-T) therapy, in relapsed/refractory multiple myeloma (R/R MM): updated results from CARTITUDE-1. J Clin Oncol. 2021;39(15_suppl):8005. doi: 10.1200/JCO.2021.39.15_suppl.8005
8.
Maus MV, June CH. Zoom Zoom: racing CARs for multiple myeloma. Clin Cancer Res. 2013;19(8):1917-1919. doi:10.1158/1078-0432.CCR-13-0168
9.
Darce JR, Arendt BK, Chang SK, Jelinek DF. Divergent effects of BAFF on human memory B cell differentiation into Ig-secreting cells. J Immunol. 2007;178(9):5612-5622. doi:10.4049/jimmunol.178.9.5612
10.
Tai YT, Anderson KC. Targeting B-cell maturation antigen in multiple myeloma. Immunotherapy. 2015;7(11):1187-1199. doi:10.2217/imt.15.77
11.
Patel DR, Wallweber HJ, Yin J, et al. Engineering an APRIL-specific B cell maturation antigen. J Biol Chem. 2004;279(16):16727-16735. doi:10.1074/jbc.M312316200
12.
Laurent SA, Hoffmann FS, Kuhn PH, et al. γ-Secretase directly sheds the survival receptor BCMA from plasma cells. Nat Commun. 2015;6:7333. Published 2015 Jun 11. doi:10.1038/ncomms8333
13.
Pillarisetti K, Powers G, Luistro L, et al. Teclistamab is an active T cell-redirecting bispecific antibody against B-cell maturation antigen for multiple myeloma. Blood Adv. 2020;4(18):4538-4549. doi:10.1182/bloodadvances.2020002393
14.
Sanchez E, Li M, Kitto A, et al. Serum B-cell maturation antigen is elevated in multiple myeloma and correlates with disease status and survival. Br J Haematol. 2012;158(6):727-738. doi:10.1111/j.1365-2141.2012.09241.x
15.
Huehls AM, Coupet TA, Sentman CL. Bispecific T-cell engagers for cancer immunotherapy. Immunol Cell Biol. 2015;93(3):290-296. doi:10.1038/icb.2014.93
16.
Strohl WR, Naso M. Bispecific T-cell redirection versus chimeric antigen receptor (CAR)-T cells as approaches to kill cancer cells. Antibodies (Basel). 2019;8(3):41. Published 2019 Jul 3. doi:10.3390/antib8030041
17.
Shah N, Chari A, Scott E, Mezzi K, Usmani SZ. B-cell maturation antigen (BCMA) in multiple myeloma: rationale for targeting and current therapeutic approaches. Leukemia. 2020;34(4):985-1005. doi:10.1038/s41375-020-0734-z
18.
Jensen AA, Sheppard PO, Brodin B, Krogsgaard-Larsen P, O'Hara P. Cloning and characterization of a human orphan family C G-protein coupled receptor GPRC5D. Biochim Biophys Acta. 2001;1518(3):237-248. doi:10.1016/s0167-4781(01)00197-x
19.
Atamaniuk J, Gleiss A, Porpaczy E, et al. Overexpression of G protein-coupled receptor 5D in the bone marrow is associated with poor prognosis in patients with multiple myeloma. Eur J Clin Invest. 2012;42(9):953-960. doi:10.1111/j.1365-2362.2012.02679.x
20.
Frigyesi I, Adolfsson J, Ali M, et al. Robust isolation of malignant plasma cells in multiple myeloma. Blood. 2014;123(9):1336-1340. doi:10.1182/blood-2013-09-529800
21.
Smith EL, Harrington K, Staehr M, et al. GPRC5D is a target for the immunotherapy of multiple myeloma with rationally designed CAR T cells. Sci Transl Med. 2019;11(485):eaau7746. doi:10.1126/scitranslmed.aau7746
22.
Pillarisetti K, Edavettal S, Mendonㅷa M, et al. A T-cell-redirecting bispecific G-protein-coupled receptor class 5 member D x CD3 antibody to treat multiple myeloma. Blood. 2020;135(15):1232-1243. doi:10.1182/blood.2019003342
23.
Verkleij CPM, Broekmans MEC, van Duin M, et al. Preclinical activity and determinants of response of the GPRC5DxCD3 bispecific antibody talquetamab in multiple myeloma. Blood Adv. 2021;5(8):2196-2215. doi:10.1182/bloodadvances.2020003805
24.
Kodama T, Kochi Y, Nakai W, et al. Anti-GPRC5D/CD3 bispecific T-cell-redirecting antibody for the treatment of multiple myeloma. Mol Cancer Ther. 2019;18(9):1555-1564. doi:10.1158/1535-7163.MCT-18-1216
25.
Carpenter RO, Evbuomwan MO, Pittaluga S, et al. B-cell maturation antigen is a promising target for adoptive T-cell therapy of multiple myeloma. Clin Cancer Res. 2013;19(8):2048-2060. doi:10.1158/1078-0432.CCR-12-2422
26.
Seckinger A, Delgado JA, Moser S, et al. Target Expression, Generation, Preclinical Activity, and Pharmacokinetics of the BCMA-T Cell Bispecific Antibody EM801 for Multiple Myeloma Treatment. Cancer Cell. 2017;31(3):396-410. doi:10.1016/j.ccell.2017.02.002
27.
Inoue S, Nambu T, Shimomura T. The RAIG family member, GPRC5D, is associated with hard-keratinized structures. J Invest Dermatol. 2004;122(3):565-573. doi:10.1046/j.0022-202X.2004.12628.x
28.
Rajkumar SV, Harousseau JL, Durie B, et al. Consensus recommendations for the uniform reporting of clinical trials: report of the International Myeloma Workshop Consensus Panel 1. Blood. 2011;117(18):4691-4695. doi:10.1182/blood-2010-10-299487
29.
Rodriguez-Abreu D, Bordoni A, Zucca E. Epidemiology of hematological malignancies. Ann Oncol. 2007;18 Suppl 1:i3-i8. doi:10.1093/annonc/mdl443
30.
Michels TC, Petersen KE. Multiple myeloma: diagnosis and treatment. Am Fam Physician. 2017;95(6):373-383.
31.
Gandhi UH, Cornell RF, Lakshman A, et al. Outcomes of patients with multiple myeloma refractory to CD38-targeted monoclonal antibody therapy. Leukemia. 2019;33(9):2266-2275. doi:10.1038/s41375-019-0435-7
32.
Dimopoulos MA, San-Miguel J, Belch A, et al. Daratumumab plus lenalidomide and dexamethasone versus lenalidomide and dexamethasone in relapsed or refractory multiple myeloma: updated analysis of POLLUX. Haematologica. 2018;103(12):2088-2096. doi:10.3324/haematol.2018.194282
33.
Kumar SK, Callander NS, Adekola K, et al. Multiple Myeloma, Version 3.2021, NCCN clinical practice guidelines in oncology. J Natl Compr Canc Netw. 2020;18(12):1685-1717. Published 2020 Dec 2. doi:10.6004/jnccn.2020.0057
34.
Johnson JI, Decker S, Zaharevitz D, et al. Relationships between drug activity in NCI preclinical in vitro and in vivo models and early clinical trials. Br J Cancer. 2001;84(10):1424-1431. doi:10.1054/bjoc.2001.1796
35.
Chiu A, Xu W, He B, et al. Hodgkin lymphoma cells express TACI and BCMA receptors and generate survival and proliferation signals in response to BAFF and APRIL. Blood. 2007;109(2):729-739. doi:10.1182/blood-2006-04-015958
36.
Avery DT, Kalled SL, Ellyard JI, et al. BAFF selectively enhances the survival of plasmablasts generated from human memory B cells [published correction appears in J Clin Invest. 2004 Apr;113(7):1069]. J Clin Invest. 2003;112(2):286-297. doi:10.1172/JCI18025
37.
O'Connor BP, Raman VS, Erickson LD, et al. BCMA is essential for the survival of long-lived bone marrow plasma cells. J Exp Med. 2004;199(1):91-98. doi:10.1084/jem.20031330
38.
Bu DX, Singh R, Choi EE, et al. Pre-clinical validation of B cell maturation antigen (BCMA) as a target for T cell immunotherapy of multiple myeloma. Oncotarget. 2018;9(40):25764-25780. Published 2018 May 25. doi:10.18632/oncotarget.25359
39.
Carpenter RO, Evbuomwan MO, Pittaluga S, et al. B-cell maturation antigen is a promising target for adoptive T-cell therapy of multiple myeloma. Clin Cancer Res. 2013;19(8):2048-2060. doi:10.1158/1078-0432.CCR-12-2422
40.
Laㅲbi Y, Gras MP, Carbonnel F, et al. A new gene, BCM, on chromosome 16 is fused to the interleukin 2 gene by a t(4;16)(q26;p13) translocation in a malignant T cell lymphoma. EMBO J. 1992;11(11):3897-3904.
41.
Laabi Y, Gras MP, Brouet JC, Berger R, Larsen CJ, Tsapis A. The BCMA gene, preferentially expressed during B lymphoid maturation, is bidirectionally transcribed. Nucleic Acids Res. 1994;22(7):1147-1154. doi:10.1093/nar/22.7.1147
42.
Kalled SL. The role of BAFF in immune function and implications for autoimmunity. Immunol Rev. 2005;204:43-54. doi:10.1111/j.0105-2896.2005.00219.x
43.
Ng LG, Sutherland AP, Newton R, et al. B cell-activating factor belonging to the TNF family (BAFF)-R is the principal BAFF receptor facilitating BAFF costimulation of circulating T and B cells. J Immunol. 2004;173(2):807-817. doi:10.4049/jimmunol.173.2.807
44.
Venkateshaiah SU, Bam R, Li X, Khan S, Ling W, Randal SS, Yaccoby S. GPRC5D is a cell surface plasma cell marker whose expression is high in myeloma cells and reduced following coculture with osteoclasts. Blood. 2013;122(21):3099. doi: 10.1182/blood.V122.21.3099.3099
45.
Kamperschroer C, Shenton J, Lebrec H, Leighton JK, Moore PA, Thomas O. Summary of a workshop on preclinical and translational safety assessment of CD3 bispecifics. J Immunotoxicol. 2020;17(1):67-85. doi:10.1080/1547691X.2020.1729902
46.
Li J, Piskol R, Ybarra R, et al. CD3 bispecific antibody-induced cytokine release is dispensable for cytotoxic T cell activity. Sci Transl Med. 2019;11(508):eaax8861. doi:10.1126/scitranslmed.aax8861
47.
Leong SR, Sukumaran S, Hristopoulos M, et al. An anti-CD3/anti-CLL-1 bispecific antibody for the treatment of acute myeloid leukemia. Blood. 2017;129(5):609-618. doi:10.1182/blood-2016-08-735365
48.
Singh A, Dees S, Grewal IS. Overcoming the challenges associated with CD3+ T-cell redirection in cancer. Br J Cancer. 2021;124(6):1037-1048. doi:10.1038/s41416-020-01225-5
49.
Jain T, Litzow MR. Management of toxicities associated with novel immunotherapy agents in acute lymphoblastic leukemia. Ther Adv Hematol. 2020;11:2040620719899897. Published 2020 Jan 20. doi:10.1177/2040620719899897
50.
Ling J, Zhou H, Jiao Q, Davis HM. Interspecies scaling of therapeutic monoclonal antibodies: initial look. J Clin Pharmacol. 2009;49(12):1382-1402. doi:10.1177/0091270009337134
51.
Woo S, Jusko WJ. Interspecies comparisons of pharmacokinetics and pharmacodynamics of recombinant human erythropoietin. Drug Metab Dispos. 2007;35(9):1672-1678. doi:10.1124/dmd.107.015248
52.
Li J, Stagg NJ, Johnston J, et al. Membrane-proximal epitope facilitates efficient T cell synapse formation by anti-FcRH5/CD3 and is a requirement for myeloma cell killing. Cancer Cell. 2017;31(3):383-395. doi:10.1016/j.ccell.2017.02.001
53.
ClinicalTrials.gov. NCT02879695: Blinatumomab and nivolumab with or without ipilimumab in treating patients with poor-risk relapsed or refractory CD19+ precursor B-lymphoblastic leukemia. https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02879695. Accessed: 23 June 2021.
54.
Guillerey C, Nakamura K, Pichler AC, et al. Chemotherapy followed by anti-CD137 mAb immunotherapy improves disease control in a mouse myeloma model. JCI Insight. 2019;5(14):e125932. Published 2019 Jun 13. doi:10.1172/jci.insight.125932
본 명세서에 인용된 모든 특허, 공개된 출원 및 참고문헌의 교시 내용은 전체적으로 참고로 포함된다.
예시적인 실시 형태가 구체적으로 제시되어 있고 기재되어 있지만, 첨부된 청구범위에 의해 포함되는 실시 형태의 범주로부터 벗어남이 없이 형태 및 세부 사항에 있어서의 다양한 변화들이 예시적인 실시 형태 내에서 이루어질 수 있음이 당업자에 의해 이해될 것이다.
서열 목록
서열 번호 1 CD3B376 LCDR1
TGTSSNIGTYKFVS
서열 번호 2 CD3B376 LCDR2
EVSKRPS
서열 번호 3 CD3B376 LCDR3
VSYAGSGTLL
서열 번호 4 CD3B376 HCDR1
GDSVFNNNAAWS
서열 번호 5 CD3B376 HCDR2
RTYYRSKWLYD
서열 번호 6 CD3B376 HCDR3
GYSSSFDY
서열 번호 7 CD3B376 VL
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSNIGTYKFVSWYQQHPDKAPKVLLYEVSKRPSGVSSRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDQADYHCVSYAGSGTLLFGGGTKLTVL
서열 번호 8 CD3B376 VH
QVQLQQSGPRLVRPSQTLSLTCAISGDSVFNNNAAWSWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWLYDYAVSVKSRITVNPDTSRNQFTLQLNSVTPEDTALYYCARGYSSSFDYWGQGTLVTVSS
서열 번호 9 GC5B680 LCDR1
RSSQSLVHSDGNTYLS
서열 번호 10 GC5B680 LCDR2
KISNRFF
서열 번호 11 GC5B680 LCDR3
MQATQFPHT
서열 번호 12 GC5B680 HCDR1
GFSLTNIRMSVS
서열 번호 13 GC5B680 HCDR2
HIFSNDEKS
서열 번호 14 GC5B680 HCDR3
MRLPYGMDV
서열 번호 15 GC5B680 VL
DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSQSLVHSDGNTYLSWLQQRPGQPPRLLIYKISNRFFGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQATQFPHTFGQGTKLEIK
서열 번호 16 GC5B680 VH
QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLTNIRMSVSWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTISRDTSKSQVVLTLTNVDPVDTATYYCARMRLPYGMDVWGQGTTVTVSS
서열 번호 17 BCMB519 LCDR1
RASQSISSSFLT
서열 번호 18 BCMB519 LCDR2
GASSRAT
서열 번호 19 BCMB519 LCDR3
QHYGSSPMYT
서열 번호 20 BCMB519 HCDR1
GFTFSSYAMS
서열 번호 21 BCMB519 HCDR2
AISGSGGSTY
서열 번호 22 BCMB519 HCDR3
DEGYSSGHYYGMDV
서열 번호 23 BCMB519 VL
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSISSSFLTWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGGGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQHYGSSPMYTFGQGTKLEIK
서열 번호 24 BCMB519 VH
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDEGYSSGHYYGMDVWGQGTTVTVSS
서열 번호 25 링커
GGSEGKSSGSGSESKSTGGS
서열 번호 26 BGCB463 중쇄 1
QVQLQQSGPRLVRPSQTLSLTCAISGDSVFNNNAAWSWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWLYDYAVSVKSRITVNPDTSRNQFTLQLNSVTPEDTALYYCARGYSSSFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK
서열 번호 27 BGCB463 경쇄 1
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSNIGTYKFVSWYQQHPDKAPKVLLYEVSKRPSGVSSRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDQADYHCVSYAGSGTLLFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
서열 번호 28 BGCB463 중쇄 2
DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSQSLVHSDGNTYLSWLQQRPGQPPRLLIYKISNRFFGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQATQFPHTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLTNIRMSVSWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTISRDTSKSQVVLTLTNVDPVDTATYYCARMRLPYGMDVWGQGTTVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSISSSFLTWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGGGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQHYGSSPMYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDEGYSSGHYYGMDVWGQGTTVTVSS
서열 번호 29 BGCB491 중쇄 1
QVQLQQSGPRLVRPSQTLSLTCAISGDSVFNNNAAWSWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWLYDYAVSVKSRITVNPDTSRNQFTLQLNSVTPEDTALYYCARGYSSSFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSQSLVHSDGNTYLSWLQQRPGQPPRLLIYKISNRFFGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQATQFPHTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSQVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLTNIRMSVSWIRQPPGKALEWLAHIFSNDEKSYSTSLKSRLTISRDTSKSQVVLTLTNVDPVDTATYYCARMRLPYGMDVWGQGTTVTVSS
서열 번호 30 BGCB491 경쇄
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSNIGTYKFVSWYQQHPDKAPKVLLYEVSKRPSGVSSRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDQADYHCVSYAGSGTLLFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
서열 번호 31 BGCB491 중쇄 2
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSISSSFLTWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGGGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQHYGSSPMYTFGQGTKLEIKGGSEGKSSGSGSESKSTGGSEVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDEGYSSGHYYGMDVWGQGTTVTVSSEPKSSDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열 번호 32 BCMA CDR
SGSYFWG
서열 번호 33 BCMA CDR
SIYYSGITYYNPSLKS
서열 번호 34 BCMA CDR
HDGAVAGLFDY
서열 번호 35 BCMA CDR
SSSYYWG
서열 번호 36 BCMA CDR
SIYYSGSTYYNPSLKS
서열 번호 37 BCMA CDR
HDGATAGLFDY
서열 번호 38 BCMA CDR
SSSYFWG
서열 번호 39 BCMA CDR
GGNNIGSKSVH
서열 번호 40 BCMA CDR
DDSDRPS
서열 번호 41 BCMA CDR
QVWDSSSDHVV
서열 번호 42 BCMA VH
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSGSYFWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGITYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARHDGAVAGLFDYWGQGTLVTVSSA
서열 번호 43 BCMA VH
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYFWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGITYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARHDGAVAGLFDYWGQGTLVTVSSA
서열 번호 44 BCMA VH
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSGSYFWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGITYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARHDGATAGLFDYWGQGTLVTVSSA
서열 번호 45 BCMA VH
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSGSYFWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARHDGAVAGLFDYWGQGTLVTVSSA
서열 번호 46 BCMA VH
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYFWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGITYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARHDGATAGLFDYWGQGTLVTVSSA
서열 번호 47 BCMA VH
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYFWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGRTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARHDGATAGLFDYWGQGTLVTVSSA
서열 번호 48 BCMA VL
SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSKSVHWYQQPPGQAPVVVVYDDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEAVYYCQVWDSSSDHVVFGGGTKLTVL
서열 번호 49 GPRC5D CDR
SYAIS
서열 번호 50 GPRC5D CDR
NYWMS
서열 번호 51 GPRC5D CDR
SYFIG
서열 번호 52 GPRC5D CDR
GYTMN
서열 번호 53 GPRC5D CDR
GIIPIFGTANYAQKFQG
서열 번호 54 GPRC5D CDR
GISYSGGSKYYASSVKG
서열 번호 55 GPRC5D CDR
IIYPGKSDTRYSPSFQG
서열 번호 56 GPRC5D CDR
LINPYNSDTNYAQKLQG
서열 번호 57 GPRC5D CDR
ESRWRGYKLD
서열 번호 58 GPRC5D CDR
AAFDFGRRAVRLD
서열 번호 59 GPRC5D CDR
VYSFGGRHKALFDY
서열 번호 60 GPRC5D CDR
VALRVALDY
서열 번호 61 GPRC5D CDR
RASQSISSYLN
서열 번호 62 GPRC5D CDR
RASQSVSSYLA
서열 번호 63 GPRC5D CDR
KASQNVATHVG
서열 번호 64 GPRC5D CDR
AASSLQS
서열 번호 65 GPRC5D CDR
DASNRAT
서열 번호 66 GPRC5D CDR
SASYRYS
서열 번호 67 GPRC5D CDR
QQSYSTPLT
서열 번호 68 GPRC5D CDR
QQRSNWPLT
서열 번호 69 GPRC5D CDR
QQYNRYPYT
서열 번호 70 GPRC5D CDR
DYGMH
서열 번호 71 GPRC5D CDR
SYWIG
서열 번호 72 GPRC5D CDR
GYAMS
서열 번호 73 GPRC5D CDR
SYGIS
서열 번호 74 GPRC5D CDR
GYSFTGYTMN
서열 번호 75 GPRC5D CDR
SYAMS
서열 번호 76 GPRC5D CDR
GFSLTSYNVH
서열 번호 77 GPRC5D CDR
AIKYSGGSTYYADSVKG
서열 번호 78 GPRC5D CDR
GISYSGGSKYYADSVKG
서열 번호 79 GPRC5D CDR
IIYPGDSDTRYSPSFQG
서열 번호 80 GPRC5D CDR
AISGSGGSTYYADSVKG
서열 번호 81 GPRC5D CDR
GIIPIFGNINYAQKFQG
서열 번호 82 GPRC5D CDR
LINPYNGDTN
서열 번호 83 GPRC5D CDR
VIWAGGSTNYNSALMS
서열 번호 84 GPRC5D CDR
RAESGPGLDY
서열 번호 85 GPRC5D CDR
AAWDFGRRAVRLDY
서열 번호 86 GPRC5D CDR
IGFYGRSFRIFDY
서열 번호 87 GPRC5D CDR
VDRSFGRSRYTLDY
서열 번호 88 GPRC5D CDR
VSRRFKRFAYYFDY
서열 번호 89 GPRC5D CDR
SNFLPVVFDY
서열 번호 90 GPRC5D CDR
DGIRLRFAY
서열 번호 91 GPRC5D CDR
KSSQSVLYSSNNKNYLA
서열 번호 92 GPRC5D CDR
RASQSVRKSLA
서열 번호 93 GPRC5D CDR
WASTRES
서열 번호 94 GPRC5D CDR
TASNRAT
서열 번호 95 GPRC5D CDR
QQYYSTPLT
서열 번호 96 GPRC5D CDR
QQYFRAPIT
서열 번호 97 GPRC5D VH
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARESRWRGYKLDYWGQGTLVTVSS
서열 번호 98 GPRC5D VH
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMSWVRQAPGKGLEWVSGISYSGGSKYYASSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKAAFDFGRRAVRLDYWGQGTLVTVSS
서열 번호 99 GPRC5D VH
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYFIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGKSDTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARVYSFGGRHKALFDYWGQGTLVTVSS
서열 번호 100 GPRC5D VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYTMNWVRQAPGQGLEWMGLINPYNSDTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARVALRVALDYWGQGTLVTVSS
서열 번호 101 GPRC5D VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPLTFGQGTKVEIK
서열 번호 102 GPRC5D VL
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFGQGTKVEIK
서열 번호 103 GPRC5D VL
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVATHVGWYQQKPGKAPKRLIYSASYRYSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISNLQPEDFATYYCQQYNRYPYTFGQGTKLEIK
서열 번호 104 GPRC5D VH
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYGMHWVRQAPGKGLEWVSAIKYSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKRAESGPGLDYWGQGTLVTVSS
서열 번호 105 GPRC5D VH
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYWMSWVRQAPGKGLEWVSGISYSGGSKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKAAWDFGRRAVRLDYWGQGTLVTVSS
서열 번호 106 GPRC5D VH
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARIGFYGRSFRIFDYWGQGTLVTVSS
서열 번호 107 GPRC5D VH
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARVYSFGGRHKALFDYWGQGTLVTVSS
서열 번호 108 GPRC5D VH
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSGYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVDRSFGRSRYTLDYWGQGTLVTVSS
서열 번호 109 GPRC5D VH
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYGISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGNINYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARVSRRFKRFAYYFDYWGQGTLVTVSS
서열 번호 110 GPRC5D VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTGYTMNWVRQAPGQGLEWMGLINPYNGDTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARVALRVALDYWGQGTLVTVSS
서열 번호 111 GPRC5D VH
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSNFLPVVFDYWGQGTLVTVSS
서열 번호 112 GPRC5D VH
QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLTSYNVHWIRQPPGKALEWLAVIWAGGSTNYNSALMSRLTISKDTSKSQVVLTMTNMRAEDTATYYCARDGIRLRFAYWGQGTLVTVSS
서열 번호 113 GPRC5D VL
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPLTFGQGTKVEIK
서열 번호 114 GPRC5D VL
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVRKSLAWYQQKPGQAPRLLIYTASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQYFRAPITFGQGTKVEIKK
서열 번호 115 GPRC5D VL
EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCKASQNVATHVGWYQQKPGQAPRLLIYSASYRYSGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNRYPYTFGQGTKLEIK
서열 번호 116 GPRC5D
MYKDCIESTGDYFLLCDAEGPWGIILESLAILGIVVTILLLLAFLFLMRKIQDCSQWNVLPTQLLFLLSVLGLFGLAFAFIIELNQQTAPVRYFLFGVLFALCFSCLLAHASNLVKLVRGCVSFSWTTILCIAIGCSLLQIIIATEYVTLIMTRGMMFVNMTPCQLNVDFVVLLVYVLFLMALTFFVSKATFCGPCENWKQHGRLIFITVLFSIIIWVVWISMLLRGNPQFQRQPQWDDPVVCIALVTNAWVFLLLYIVPELCILYRSCRQECPLQGNACPVTAYQHSFQVENQELSRARDSDGAEEDVALTSYGTPIQPQTVDPTQECFIPQAKLSPQQDAGGV
서열 번호 117 CD3 CDR 1
TYAMN
서열 번호 118 CD3 CDR 2
RIRSKYNNYATYYAASVKG
서열 번호 119 CD3 CDR 3
HGNFGNSYVSWFAY
서열 번호 120 CD3 VH
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYAASVKGRFTISRDDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCARHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSS
서열 번호 121 CD3 중쇄
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYAASVKGRFTISRDDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCARHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFLLYSKLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
서열 번호 122 CD3 CDR 1
RSSTGAVTTSNYAN
서열 번호 123 CD3 CDR 2
GTNKRAP
서열 번호 124 CD3 CDR 3
ALWYSNLWV
서열 번호 125 CD3 VL
QTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQQKPGQAPRGLIGGTNKRAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCALWYSNLWVFGGGTKLTVL
서열 번호 126 CD3 경쇄
QTVVTQEPSLTVSPGGTVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQQKPGQAPRGLIGGTNKRAPGTPARFSGSLLGGKAALTLSGVQPEDEAEYYCALWYSNLWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
서열 번호 127 링커
GGGSGGGS
서열 번호 128 링커
GGGSGGGSGGGS
서열 번호 129 링커
GGGSGGGSGGGSGGGS
서열 번호 130 링커
GGGSGGGSGGGSGGGSGGGS
서열 번호 131 링커
GGGGSGGGGSGGGGS
서열 번호 132 링커
GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
서열 번호 133 링커
GSTSGSGKPGSGEGSTKG
서열 번호 134 링커
IRPRAIGGSKPRVA
서열 번호 135 링커
GKGGSGKGGSGKGGS
서열 번호 136 링커
GGKGSGGKGSGGKGS
서열 번호 137 링커
GGGKSGGGKSGGGKS
서열 번호 138 링커
GKGKSGKGKSGKGKS
서열 번호 139 링커
GGGKSGGKGSGKGGS
서열 번호 140 링커
GKPGSGKPGSGKPGS
서열 번호 141 링커
GKPGSGKPGSGKPGSGKPGS
서열 번호 142 링커
GKGKSGKGKSGKGKSGKGKS
서열 번호 143 링커
STAGDTHLGGEDFD
서열 번호 144 링커
GEGGSGEGGSGEGGS
서열 번호 145 링커
GGEGSGGEGSGGEGS
서열 번호 146 링커
GEGESGEGESGEGES
서열 번호 147 링커
GGGESGGEGSGEGGS
서열 번호 148 링커
GEGESGEGESGEGESGEGES
서열 번호 149 링커
GSTSGSGKPGSGEGSTKG
서열 번호 150 링커
PRGASKSGSASQTGSAPGS
서열 번호 151 링커
GTAAAGAGAAGGAAAGAAG
서열 번호 152 링커
GTSGSSGSGSGGSGSGGGG
서열 번호 153 링커
GKPGSGKPGSGKPGSGKPGS
서열 번호 154 링커
GSGS
서열 번호 155 링커
APAPAPAPAP
서열 번호 156 링커
APAPAPAPAPAPAPAPAPAP
서열 번호 157 링커
AEAAAKEAAAKEAAAAKEAAAAKEAAAAKAAA
서열 번호 158 Ig1
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열 번호 159 Ig1
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열 번호 160 Ig4
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
서열 번호 161 CD3 에피토프
QDGNEEMGGITQTP
서열 번호 162 BCMA 에피토프
LLHACIPCQL
서열 번호 163 링커
GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
서열 번호 164 BCMA CDR
SIYYSGRTYYNPSLKS
서열번호 165 밑줄이 그어진 신호 펩티드 코딩 영역을 갖는 BGCB491 중쇄 1 유전자의 뉴클레오티드 서열
ATGGCCAGGAAGTCCGCTCTGCTCGCTCTGGCACTTCTGCTTCTGGGATTTGGACCTGCTTGGGCTCAGGTGCAGCTGCAGCAGTCTGGCCCTAGACTCGTGCGGCCTTCCCAGACCCTGTCTCTGACCTGTGCCATCTCCGGCGACTCCGTGTTCAACAACAACGCCGCCTGGTCCTGGATCCGGCAGTCTCCATCTCGCGGTCTGGAGTGGCTCGGTCGCACCTACTACCGCTCTAAATGGCTGTACGACTACGCCGTGTCCGTGAAGTCCCGGATCACCGTGAACCCTGACACCTCCCGGAACCAGTTCACCCTGCAGCTGAACTCCGTGACCCCTGAGGACACCGCCCTGTACTACTGCGCCAGAGGCTACTCCTCCTCCTTCGACTATTGGGGCCAAGGCACCCTCGTGACCGTGTCCTCTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCCGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCGAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGTCCTGCGCCGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCGTGAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCGGTTCACGCAGAAGTCTCTCTCCCTGTCTCCGGGAAAAGGAGGCGGAGGATCTGGCGGAGGTGGAAGTGGCGGAGGCGGTTCTGGTGGTGGTGGATCTGACATCGTGATGACCCAGACACCTCTGAGCAGCCCCGTTACATTGGGCCAGCCTGCCTCCATCTCCTGCAGATCCTCTCAGTCCCTGGTGCACTCTGACGGCAACACCTACCTCTCTTGGCTGCAGCAGAGGCCTGGACAGCCTCCTAGACTGCTGATCTACAAGATCTCCAACCGGTTCTTCGGCGTGCCCGACAGATTTTCTGGATCTGGCGCTGGCACCGACTTCACCCTGAAGATTTCCAGAGTGGAAGCCGAGGACGTGGGCGTGTACTACTGTATGCAGGCCACACAGTTCCCTCACACCTTTGGCCAGGGCACCAAGCTGGAAATCAAGGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCCAAGTGACCCTGAAAGAAAGCGGCCCTGTGCTGGTCAAGCCCACCGAAACACTGACCCTGACCTGTACCGTGTCCGGCTTCTCCCTGACCAATATCCGGATGTCCGTGTCCTGGATCAGACAGCCTCCTGGCAAGGCTCTGGAATGGCTGGCCCACATCTTCTCCAACGACGAGAAGTCCTACTCCACCAGCCTGAAGTCCCGGCTGACCATCTCCAGAGACACCTCCAAGTCTCAGGTGGTGCTGACACTGACCAACGTGGACCCTGTGGATACCGCCACCTACTACTGCGCCAGAATGAGACTGCCCTACGGCATGGATGTGTGGGGCCAGGGAACAACCGTGACCGTTTCTTCT
서열번호 166 밑줄이 그어진 신호 펩티드 코딩 영역을 갖는 BGCB491 경쇄 유전자의 뉴클레오티드 서열
ATGGCTAGATCCGCACTGCTCATTCTGGCTCTGCTTCTGCTTGGACTGTTCTCTCCTGGAGCATGGGGACAGTCTGCTCTGACCCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGCTCTCCCGGCCAGTCCATCACCATCAGCTGTACCGGCACCTCCTCCAACATCGGCACCTACAAGTTCGTGTCCTGGTATCAGCAACACCCCGACAAGGCCCCCAAAGTGCTGCTGTACGAGGTGTCCAAGCGGCCCTCTGGCGTGTCCTCCAGATTCTCCGGCTCCAAGTCTGGCAACACCGCCTCCCTGACCATCAGCGGACTGCAGGCTGAGGACCAGGCCGACTACCACTGTGTGTCCTACGCTGGCTCTGGCACCCTGCTGTTTGGCGGAGGCACCAAGCTGACTGTCCTGGGTCAGCCCAAGGCTGCACCCAGTGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCCGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTCGAAACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCA
서열번호 167 밑줄이 그어진 신호 펩티드 코딩 영역을 갖는 BGCB491 중쇄 2 유전자의 뉴클레오티드 서열
ATGGCCAGGAAGTCCGCTCTGCTCGCTCTGGCACTTCTGCTTCTGGGATTTGGACCTGCTTGGGCTGAGATCGTGCTGACCCAGTCTCCTGGCACACTGTCACTGTCTCCAGGCGAGAGAGCTACCCTGTCCTGTAGAGCCAGCCAGTCTATCTCCTCCTCCTTCCTGACCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGACAGGCCCCTCGGCTGTTGATCTACGGTGCTTCTTCCAGAGCCACAGGCATCCCTGACAGATTCTCTGGCGGCGGATCTGGCACCGACTTCACCCTGACAATCTCCCGGCTGGAACCTGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCACTACGGCAGCAGCCCCATGTACACATTTGGCCAGGGCACCAAGCTGGAAATCAAGGGCGGATCTGAGGGAAAGTCCAGCGGCTCCGGCAGCGAAAGCAAGTCCACCGGCGGAAGCGAGGTTCAGCTGCTGGAATCTGGCGGAGGATTGGTTCAGCCTGGCGGTTCTCTGAGACTGTCTTGTGCCGCTTCCGGCTTCACCTTCTCCAGCTACGCTATGTCCTGGGTCCGACAGGCTCCTGGCAAAGGACTGGAATGGGTGTCCGCCATCTCTGGCTCTGGCGGCAGCACCTACTACGCCGATTCTGTGAAGGGCAGATTCACCATCAGCCGGGACAACTCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCTAAGGACGAGGGCTACTCCTCCGGCCACTACTACGGAATGGATGTGTGGGGCCAGGGCACCACAGTGACAGTCTCTTCTGAGCCCAAATCTAGCGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCCGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGAGCGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTGTCGAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGTGGTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGTCTCTCTCCCTGTCTCCGGGAAAA
SEQUENCE LISTING
<110> JANSSEN PHARMACEUTICA NV
<120> TRISPECIFIC ANTIBODY TARGETING BCMA, GPRC5D, AND CD3
<130> PRD4124WOPCT1
<140>
<141>
<150> 63/149,921
<151> 2021-02-16
<160> 167
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 1
Thr Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Thr Tyr Lys Phe Val Ser
1 5 10
<210> 2
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 2
Glu Val Ser Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> 3
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 3
Val Ser Tyr Ala Gly Ser Gly Thr Leu Leu
1 5 10
<210> 4
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 4
Gly Asp Ser Val Phe Asn Asn Asn Ala Ala Trp Ser
1 5 10
<210> 5
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 5
Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Leu Tyr Asp
1 5 10
<210> 6
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 6
Gly Tyr Ser Ser Ser Phe Asp Tyr
1 5
<210> 7
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 7
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Thr Tyr
20 25 30
Lys Phe Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Asp Lys Ala Pro Lys Val
35 40 45
Leu Leu Tyr Glu Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Gln Ala Asp Tyr His Cys Val Ser Tyr Ala Gly Ser
85 90 95
Gly Thr Leu Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 8
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 8
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Arg Leu Val Arg Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Phe Asn Asn
20 25 30
Asn Ala Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Leu Tyr Asp Tyr Ala
50 55 60
Val Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Val Asn Pro Asp Thr Ser Arg Asn
65 70 75 80
Gln Phe Thr Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Leu
85 90 95
Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Tyr Ser Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 9
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 9
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Ser
1 5 10 15
<210> 10
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 10
Lys Ile Ser Asn Arg Phe Phe
1 5
<210> 11
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 11
Met Gln Ala Thr Gln Phe Pro His Thr
1 5
<210> 12
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 12
Gly Phe Ser Leu Thr Asn Ile Arg Met Ser Val Ser
1 5 10
<210> 13
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 13
His Ile Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser
1 5
<210> 14
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 14
Met Arg Leu Pro Tyr Gly Met Asp Val
1 5
<210> 15
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 15
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Ile Ser Asn Arg Phe Phe Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Thr Gln Phe Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 16
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 16
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asn Ile
20 25 30
Arg Met Ser Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala His Ile Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val
65 70 75 80
Val Leu Thr Leu Thr Asn Val Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Met Arg Leu Pro Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 17
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 17
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ser Phe Leu Thr
1 5 10
<210> 18
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 18
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
<210> 19
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 19
Gln His Tyr Gly Ser Ser Pro Met Tyr Thr
1 5 10
<210> 20
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 20
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser
1 5 10
<210> 21
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 21
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr
1 5 10
<210> 22
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 22
Asp Glu Gly Tyr Ser Ser Gly His Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 23
<211> 109
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 23
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Met Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 24
<211> 123
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 24
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Glu Gly Tyr Ser Ser Gly His Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 25
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 25
Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser
1 5 10 15
Thr Gly Gly Ser
20
<210> 26
<211> 450
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 26
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Arg Leu Val Arg Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Phe Asn Asn
20 25 30
Asn Ala Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Leu Tyr Asp Tyr Ala
50 55 60
Val Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Val Asn Pro Asp Thr Ser Arg Asn
65 70 75 80
Gln Phe Thr Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Leu
85 90 95
Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Tyr Ser Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 27
<211> 216
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 27
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Thr Tyr
20 25 30
Lys Phe Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Asp Lys Ala Pro Lys Val
35 40 45
Leu Leu Tyr Glu Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Gln Ala Asp Tyr His Cys Val Ser Tyr Ala Gly Ser
85 90 95
Gly Thr Leu Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 28
<211> 755
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 28
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Ile Ser Asn Arg Phe Phe Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Thr Gln Phe Pro His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser
115 120 125
Thr Gly Gly Ser Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val
130 135 140
Lys Pro Thr Glu Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser
145 150 155 160
Leu Thr Asn Ile Arg Met Ser Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly
165 170 175
Lys Ala Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser
180 185 190
Tyr Ser Thr Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser
195 200 205
Lys Ser Gln Val Val Leu Thr Leu Thr Asn Val Asp Pro Val Asp Thr
210 215 220
Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Met Arg Leu Pro Tyr Gly Met Asp Val
225 230 235 240
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ser
245 250 255
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
260 265 270
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
275 280 285
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His
290 295 300
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
305 310 315 320
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
325 330 335
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
340 345 350
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
355 360 365
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
370 375 380
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
385 390 395 400
Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
405 410 415
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
420 425 430
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
435 440 445
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
450 455 460
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
465 470 475 480
Pro Gly Lys Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu
485 490 495
Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly
500 505 510
Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala
515 520 525
Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ser Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
530 535 540
Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
545 550 555 560
Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
565 570 575
Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
580 585 590
Gln His Tyr Gly Ser Ser Pro Met Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys
595 600 605
Leu Glu Ile Lys Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser
610 615 620
Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly
625 630 635 640
Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala
645 650 655
Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala
660 665 670
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly
675 680 685
Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg
690 695 700
Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala
705 710 715 720
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp Glu Gly Tyr Ser Ser
725 730 735
Gly His Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
740 745 750
Val Ser Ser
755
<210> 29
<211> 721
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 29
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Arg Leu Val Arg Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Phe Asn Asn
20 25 30
Asn Ala Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Leu Tyr Asp Tyr Ala
50 55 60
Val Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Val Asn Pro Asp Thr Ser Arg Asn
65 70 75 80
Gln Phe Thr Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Leu
85 90 95
Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Tyr Ser Ser Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
450 455 460
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser
465 470 475 480
Ser Pro Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser
485 490 495
Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Leu Gln
500 505 510
Gln Arg Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Ile Ser Asn
515 520 525
Arg Phe Phe Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr
530 535 540
Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val
545 550 555 560
Tyr Tyr Cys Met Gln Ala Thr Gln Phe Pro His Thr Phe Gly Gln Gly
565 570 575
Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Ser Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser
580 585 590
Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly Ser Gln Val Thr Leu Lys Glu
595 600 605
Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu Thr Leu Thr Leu Thr Cys
610 615 620
Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asn Ile Arg Met Ser Val Ser Trp
625 630 635 640
Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Phe
645 650 655
Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser Leu Lys Ser Arg Leu Thr
660 665 670
Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu Thr Leu Thr Asn
675 680 685
Val Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Met Arg Leu
690 695 700
Pro Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
705 710 715 720
Ser
<210> 30
<211> 216
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 30
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Thr Tyr
20 25 30
Lys Phe Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Asp Lys Ala Pro Lys Val
35 40 45
Leu Leu Tyr Glu Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Gln Ala Asp Tyr His Cys Val Ser Tyr Ala Gly Ser
85 90 95
Gly Thr Leu Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 31
<211> 484
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 31
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Met Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Ser
100 105 110
Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Gly Gly
115 120 125
Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
130 135 140
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser
145 150 155 160
Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
165 170 175
Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser
180 185 190
Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu
195 200 205
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
210 215 220
Cys Ala Lys Asp Glu Gly Tyr Ser Ser Gly His Tyr Tyr Gly Met Asp
225 230 235 240
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser
245 250 255
Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala
260 265 270
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
275 280 285
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser
290 295 300
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
305 310 315 320
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
325 330 335
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
340 345 350
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
355 360 365
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
370 375 380
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
385 390 395 400
Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
405 410 415
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
420 425 430
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
435 440 445
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
450 455 460
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
465 470 475 480
Ser Pro Gly Lys
<210> 32
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 32
Ser Gly Ser Tyr Phe Trp Gly
1 5
<210> 33
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 33
Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ile Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 34
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 34
His Asp Gly Ala Val Ala Gly Leu Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 35
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 35
Ser Ser Ser Tyr Tyr Trp Gly
1 5
<210> 36
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 36
Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 37
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 37
His Asp Gly Ala Thr Ala Gly Leu Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 38
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 38
Ser Ser Ser Tyr Phe Trp Gly
1 5
<210> 39
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 39
Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val His
1 5 10
<210> 40
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 40
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser
1 5
<210> 41
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 41
Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His Val Val
1 5 10
<210> 42
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 42
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30
Ser Tyr Phe Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ile Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg His Asp Gly Ala Val Ala Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120
<210> 43
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 43
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Ser Tyr Phe Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ile Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg His Asp Gly Ala Val Ala Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120
<210> 44
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 44
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30
Ser Tyr Phe Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ile Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg His Asp Gly Ala Thr Ala Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120
<210> 45
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 45
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly
20 25 30
Ser Tyr Phe Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg His Asp Gly Ala Val Ala Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120
<210> 46
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 46
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Ser Tyr Phe Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Ile Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg His Asp Gly Ala Thr Ala Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120
<210> 47
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 47
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Ser Tyr Phe Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Arg Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg His Asp Gly Ala Thr Ala Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120
<210> 48
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 48
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Pro Pro Gly Gln Ala Pro Val Val Val Val Tyr
35 40 45
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His
85 90 95
Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 49
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 49
Ser Tyr Ala Ile Ser
1 5
<210> 50
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 50
Asn Tyr Trp Met Ser
1 5
<210> 51
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 51
Ser Tyr Phe Ile Gly
1 5
<210> 52
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 52
Gly Tyr Thr Met Asn
1 5
<210> 53
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 53
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 54
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 54
Gly Ile Ser Tyr Ser Gly Gly Ser Lys Tyr Tyr Ala Ser Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 55
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 55
Ile Ile Tyr Pro Gly Lys Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 56
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 56
Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Ser Asp Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 57
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 57
Glu Ser Arg Trp Arg Gly Tyr Lys Leu Asp
1 5 10
<210> 58
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 58
Ala Ala Phe Asp Phe Gly Arg Arg Ala Val Arg Leu Asp
1 5 10
<210> 59
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 59
Val Tyr Ser Phe Gly Gly Arg His Lys Ala Leu Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 60
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 60
Val Ala Leu Arg Val Ala Leu Asp Tyr
1 5
<210> 61
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 61
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 62
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 62
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 63
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 63
Lys Ala Ser Gln Asn Val Ala Thr His Val Gly
1 5 10
<210> 64
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 64
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 65
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 65
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1 5
<210> 66
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 66
Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser
1 5
<210> 67
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 67
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 68
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 68
Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu Thr
1 5
<210> 69
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 69
Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 70
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 70
Asp Tyr Gly Met His
1 5
<210> 71
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 71
Ser Tyr Trp Ile Gly
1 5
<210> 72
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 72
Gly Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 73
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 73
Ser Tyr Gly Ile Ser
1 5
<210> 74
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 74
Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Thr Met Asn
1 5 10
<210> 75
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 75
Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 76
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 76
Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr Asn Val His
1 5 10
<210> 77
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 77
Ala Ile Lys Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 78
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 78
Gly Ile Ser Tyr Ser Gly Gly Ser Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 79
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 79
Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 80
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 80
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 81
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 81
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Asn Ile Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 82
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 82
Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Asn
1 5 10
<210> 83
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 83
Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met Ser
1 5 10 15
<210> 84
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 84
Arg Ala Glu Ser Gly Pro Gly Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 85
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 85
Ala Ala Trp Asp Phe Gly Arg Arg Ala Val Arg Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 86
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 86
Ile Gly Phe Tyr Gly Arg Ser Phe Arg Ile Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 87
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 87
Val Asp Arg Ser Phe Gly Arg Ser Arg Tyr Thr Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 88
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 88
Val Ser Arg Arg Phe Lys Arg Phe Ala Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 89
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 89
Ser Asn Phe Leu Pro Val Val Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 90
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 90
Asp Gly Ile Arg Leu Arg Phe Ala Tyr
1 5
<210> 91
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 91
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 92
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 92
Arg Ala Ser Gln Ser Val Arg Lys Ser Leu Ala
1 5 10
<210> 93
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 93
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 94
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 94
Thr Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1 5
<210> 95
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 95
Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 96
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 96
Gln Gln Tyr Phe Arg Ala Pro Ile Thr
1 5
<210> 97
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 97
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ser Arg Trp Arg Gly Tyr Lys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 98
<211> 123
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 98
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Tyr Ser Gly Gly Ser Lys Tyr Tyr Ala Ser Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ala Ala Phe Asp Phe Gly Arg Arg Ala Val Arg Leu Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 99
<211> 123
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 99
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Phe Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Lys Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Tyr Ser Phe Gly Gly Arg His Lys Ala Leu Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 100
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 100
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Ser Asp Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Ala Leu Arg Val Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 101
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 101
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 102
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 102
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 103
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 103
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Ala Thr His
20 25 30
Val Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 104
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 104
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Lys Tyr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Arg Ala Glu Ser Gly Pro Gly Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 105
<211> 123
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 105
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Tyr Ser Gly Gly Ser Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ala Ala Trp Asp Phe Gly Arg Arg Ala Val Arg Leu Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 106
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 106
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Gly Phe Tyr Gly Arg Ser Phe Arg Ile Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 107
<211> 123
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 107
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Tyr Ser Phe Gly Gly Arg His Lys Ala Leu Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 108
<211> 123
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 108
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Asp Arg Ser Phe Gly Arg Ser Arg Tyr Thr Leu Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 109
<211> 123
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 109
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Asn Ile Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Ser Arg Arg Phe Lys Arg Phe Ala Tyr Tyr Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 110
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 110
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Ala Leu Arg Val Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 111
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 111
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ser Asn Phe Leu Pro Val Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 112
<211> 117
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 112
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Asn Val His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Ala Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Val Leu
65 70 75 80
Thr Met Thr Asn Met Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Gly Ile Arg Leu Arg Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 113
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 113
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 114
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 114
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Arg Lys Ser
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Thr Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Phe Arg Ala Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Lys
100 105
<210> 115
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 115
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Ala Thr His
20 25 30
Val Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 116
<211> 345
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 116
Met Tyr Lys Asp Cys Ile Glu Ser Thr Gly Asp Tyr Phe Leu Leu Cys
1 5 10 15
Asp Ala Glu Gly Pro Trp Gly Ile Ile Leu Glu Ser Leu Ala Ile Leu
20 25 30
Gly Ile Val Val Thr Ile Leu Leu Leu Leu Ala Phe Leu Phe Leu Met
35 40 45
Arg Lys Ile Gln Asp Cys Ser Gln Trp Asn Val Leu Pro Thr Gln Leu
50 55 60
Leu Phe Leu Leu Ser Val Leu Gly Leu Phe Gly Leu Ala Phe Ala Phe
65 70 75 80
Ile Ile Glu Leu Asn Gln Gln Thr Ala Pro Val Arg Tyr Phe Leu Phe
85 90 95
Gly Val Leu Phe Ala Leu Cys Phe Ser Cys Leu Leu Ala His Ala Ser
100 105 110
Asn Leu Val Lys Leu Val Arg Gly Cys Val Ser Phe Ser Trp Thr Thr
115 120 125
Ile Leu Cys Ile Ala Ile Gly Cys Ser Leu Leu Gln Ile Ile Ile Ala
130 135 140
Thr Glu Tyr Val Thr Leu Ile Met Thr Arg Gly Met Met Phe Val Asn
145 150 155 160
Met Thr Pro Cys Gln Leu Asn Val Asp Phe Val Val Leu Leu Val Tyr
165 170 175
Val Leu Phe Leu Met Ala Leu Thr Phe Phe Val Ser Lys Ala Thr Phe
180 185 190
Cys Gly Pro Cys Glu Asn Trp Lys Gln His Gly Arg Leu Ile Phe Ile
195 200 205
Thr Val Leu Phe Ser Ile Ile Ile Trp Val Val Trp Ile Ser Met Leu
210 215 220
Leu Arg Gly Asn Pro Gln Phe Gln Arg Gln Pro Gln Trp Asp Asp Pro
225 230 235 240
Val Val Cys Ile Ala Leu Val Thr Asn Ala Trp Val Phe Leu Leu Leu
245 250 255
Tyr Ile Val Pro Glu Leu Cys Ile Leu Tyr Arg Ser Cys Arg Gln Glu
260 265 270
Cys Pro Leu Gln Gly Asn Ala Cys Pro Val Thr Ala Tyr Gln His Ser
275 280 285
Phe Gln Val Glu Asn Gln Glu Leu Ser Arg Ala Arg Asp Ser Asp Gly
290 295 300
Ala Glu Glu Asp Val Ala Leu Thr Ser Tyr Gly Thr Pro Ile Gln Pro
305 310 315 320
Gln Thr Val Asp Pro Thr Gln Glu Cys Phe Ile Pro Gln Ala Lys Leu
325 330 335
Ser Pro Gln Gln Asp Ala Gly Gly Val
340 345
<210> 117
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 117
Thr Tyr Ala Met Asn
1 5
<210> 118
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 118
Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 119
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 119
His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 120
<211> 125
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 120
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 121
<211> 452
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 121
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser
130 135 140
Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys
195 200 205
Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
210 215 220
Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Leu Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Gly Lys
450
<210> 122
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 122
Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn
1 5 10
<210> 123
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 123
Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro
1 5
<210> 124
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 124
Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val
1 5
<210> 125
<211> 109
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 125
Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Val
65 70 75 80
Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 126
<211> 215
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 126
Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Val
65 70 75 80
Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro
100 105 110
Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu
115 120 125
Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro
130 135 140
Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala
145 150 155 160
Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala
165 170 175
Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg
180 185 190
Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr
195 200 205
Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 127
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 127
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 128
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 128
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
1 5 10
<210> 129
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 129
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 130
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 130
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 131
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 131
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 132
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 132
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25
<210> 133
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 133
Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 134
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 134
Ile Arg Pro Arg Ala Ile Gly Gly Ser Lys Pro Arg Val Ala
1 5 10
<210> 135
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 135
Gly Lys Gly Gly Ser Gly Lys Gly Gly Ser Gly Lys Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 136
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 136
Gly Gly Lys Gly Ser Gly Gly Lys Gly Ser Gly Gly Lys Gly Ser
1 5 10 15
<210> 137
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 137
Gly Gly Gly Lys Ser Gly Gly Gly Lys Ser Gly Gly Gly Lys Ser
1 5 10 15
<210> 138
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 138
Gly Lys Gly Lys Ser Gly Lys Gly Lys Ser Gly Lys Gly Lys Ser
1 5 10 15
<210> 139
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 139
Gly Gly Gly Lys Ser Gly Gly Lys Gly Ser Gly Lys Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 140
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 140
Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
<210> 141
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 141
Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly
1 5 10 15
Lys Pro Gly Ser
20
<210> 142
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 142
Gly Lys Gly Lys Ser Gly Lys Gly Lys Ser Gly Lys Gly Lys Ser Gly
1 5 10 15
Lys Gly Lys Ser
20
<210> 143
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 143
Ser Thr Ala Gly Asp Thr His Leu Gly Gly Glu Asp Phe Asp
1 5 10
<210> 144
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 144
Gly Glu Gly Gly Ser Gly Glu Gly Gly Ser Gly Glu Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 145
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 145
Gly Gly Glu Gly Ser Gly Gly Glu Gly Ser Gly Gly Glu Gly Ser
1 5 10 15
<210> 146
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 146
Gly Glu Gly Glu Ser Gly Glu Gly Glu Ser Gly Glu Gly Glu Ser
1 5 10 15
<210> 147
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 147
Gly Gly Gly Glu Ser Gly Gly Glu Gly Ser Gly Glu Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 148
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 148
Gly Glu Gly Glu Ser Gly Glu Gly Glu Ser Gly Glu Gly Glu Ser Gly
1 5 10 15
Glu Gly Glu Ser
20
<210> 149
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 149
Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 150
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 150
Pro Arg Gly Ala Ser Lys Ser Gly Ser Ala Ser Gln Thr Gly Ser Ala
1 5 10 15
Pro Gly Ser
<210> 151
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 151
Gly Thr Ala Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Gly Gly Ala Ala Ala Gly
1 5 10 15
Ala Ala Gly
<210> 152
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 152
Gly Thr Ser Gly Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly
<210> 153
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 153
Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly
1 5 10 15
Lys Pro Gly Ser
20
<210> 154
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 154
Gly Ser Gly Ser
1
<210> 155
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 155
Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro
1 5 10
<210> 156
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 156
Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro
1 5 10 15
Ala Pro Ala Pro
20
<210> 157
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 157
Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Ala
1 5 10 15
Lys Glu Ala Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Ala Lys Ala Ala Ala
20 25 30
<210> 158
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 158
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 159
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 159
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 160
<211> 327
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 160
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 161
<211> 14
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 161
Gln Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Gly Ile Thr Gln Thr Pro
1 5 10
<210> 162
<211> 10
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 162
Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu
1 5 10
<210> 163
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 163
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 164
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide"
<400> 164
Ser Ile Tyr Tyr Ser Gly Arg Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 165
<211> 2229
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 165
atggccagga agtccgctct gctcgctctg gcacttctgc ttctgggatt tggacctgct 60
tgggctcagg tgcagctgca gcagtctggc cctagactcg tgcggccttc ccagaccctg 120
tctctgacct gtgccatctc cggcgactcc gtgttcaaca acaacgccgc ctggtcctgg 180
atccggcagt ctccatctcg cggtctggag tggctcggtc gcacctacta ccgctctaaa 240
tggctgtacg actacgccgt gtccgtgaag tcccggatca ccgtgaaccc tgacacctcc 300
cggaaccagt tcaccctgca gctgaactcc gtgacccctg aggacaccgc cctgtactac 360
tgcgccagag gctactcctc ctccttcgac tattggggcc aaggcaccct cgtgaccgtg 420
tcctctgcct ccaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 480
tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 540
gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 600
tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc 660
cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagaaagtt 720
gagcccaaat cttgtgacaa aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc tgaagccgcc 780
gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 840
acccctgagg tcacatgcgt ggtggtgagc gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 900
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 960
tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 1020
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtgtcgaac aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc 1080
atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1140
gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg tcctgcgccg tcaaaggctt ctatcccagc 1200
gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 1260
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctcgtgagca agctcaccgt ggacaagagc 1320
agatggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccgg 1380
ttcacgcaga agtctctctc cctgtctccg ggaaaaggag gcggaggatc tggcggaggt 1440
ggaagtggcg gaggcggttc tggtggtggt ggatctgaca tcgtgatgac ccagacacct 1500
ctgagcagcc ccgttacatt gggccagcct gcctccatct cctgcagatc ctctcagtcc 1560
ctggtgcact ctgacggcaa cacctacctc tcttggctgc agcagaggcc tggacagcct 1620
cctagactgc tgatctacaa gatctccaac cggttcttcg gcgtgcccga cagattttct 1680
ggatctggcg ctggcaccga cttcaccctg aagatttcca gagtggaagc cgaggacgtg 1740
ggcgtgtact actgtatgca ggccacacag ttccctcaca cctttggcca gggcaccaag 1800
ctggaaatca agggcggatc tgagggaaag tccagcggct ccggcagcga aagcaagtcc 1860
accggcggaa gccaagtgac cctgaaagaa agcggccctg tgctggtcaa gcccaccgaa 1920
acactgaccc tgacctgtac cgtgtccggc ttctccctga ccaatatccg gatgtccgtg 1980
tcctggatca gacagcctcc tggcaaggct ctggaatggc tggcccacat cttctccaac 2040
gacgagaagt cctactccac cagcctgaag tcccggctga ccatctccag agacacctcc 2100
aagtctcagg tggtgctgac actgaccaac gtggaccctg tggataccgc cacctactac 2160
tgcgccagaa tgagactgcc ctacggcatg gatgtgtggg gccagggaac aaccgtgacc 2220
gtttcttct 2229
<210> 166
<211> 717
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 166
atggctagat ccgcactgct cattctggct ctgcttctgc ttggactgtt ctctcctgga 60
gcatggggac agtctgctct gacccagcct gcctccgtgt ctggctctcc cggccagtcc 120
atcaccatca gctgtaccgg cacctcctcc aacatcggca cctacaagtt cgtgtcctgg 180
tatcagcaac accccgacaa ggcccccaaa gtgctgctgt acgaggtgtc caagcggccc 240
tctggcgtgt cctccagatt ctccggctcc aagtctggca acaccgcctc cctgaccatc 300
agcggactgc aggctgagga ccaggccgac taccactgtg tgtcctacgc tggctctggc 360
accctgctgt ttggcggagg caccaagctg actgtcctgg gtcagcccaa ggctgcaccc 420
agtgtcactc tgttcccgcc ctcctctgag gagcttcaag ccaacaaggc cacactggtg 480
tgtctcataa gtgacttcta cccgggagcc gtgacagtgg cctggaaggc cgatagcagc 540
cccgtcaagg cgggagtcga aaccaccaca ccctccaaac aaagcaacaa caagtacgcg 600
gccagcagct atctgagcct gacgcctgag cagtggaagt cccacagaag ctacagctgc 660
caggtcacgc atgaagggag caccgtggag aagacagtgg cccctacaga atgttca 717
<210> 167
<211> 1518
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 167
atggccagga agtccgctct gctcgctctg gcacttctgc ttctgggatt tggacctgct 60
tgggctgaga tcgtgctgac ccagtctcct ggcacactgt cactgtctcc aggcgagaga 120
gctaccctgt cctgtagagc cagccagtct atctcctcct ccttcctgac ctggtatcag 180
cagaagcctg gacaggcccc tcggctgttg atctacggtg cttcttccag agccacaggc 240
atccctgaca gattctctgg cggcggatct ggcaccgact tcaccctgac aatctcccgg 300
ctggaacctg aggacttcgc cgtgtactac tgccagcact acggcagcag ccccatgtac 360
acatttggcc agggcaccaa gctggaaatc aagggcggat ctgagggaaa gtccagcggc 420
tccggcagcg aaagcaagtc caccggcgga agcgaggttc agctgctgga atctggcgga 480
ggattggttc agcctggcgg ttctctgaga ctgtcttgtg ccgcttccgg cttcaccttc 540
tccagctacg ctatgtcctg ggtccgacag gctcctggca aaggactgga atgggtgtcc 600
gccatctctg gctctggcgg cagcacctac tacgccgatt ctgtgaaggg cagattcacc 660
atcagccggg acaactccaa gaacaccctg tacctgcaga tgaactccct gagagccgag 720
gacaccgccg tgtactactg tgctaaggac gagggctact cctccggcca ctactacgga 780
atggatgtgt ggggccaggg caccacagtg acagtctctt ctgagcccaa atctagcgac 840
aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg ccgggggacc gtcagtcttc 900
ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 960
gtggtggtga gcgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 1020
gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 1080
gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 1140
aaggtgtcga acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1200
cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggaggagat gaccaagaac 1260
caggtcagcc tgtggtgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1320
gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1380
ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcagatggca gcaggggaac 1440
gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagtctctc 1500
tccctgtctc cgggaaaa 1518
Claims (110)
- (a) 제1 중쇄 가변 도메인(VH1) 및 제1 경쇄 가변 도메인(VL1)을 포함하는 제1 항원-결합 아암;
(b) 제2 중쇄 가변 도메인(VH2) 및 제2 경쇄 가변 도메인(VL2)을 포함하는 제2 항원-결합 아암;
(c) 제3 중쇄 가변 도메인(VH3) 및 제3 경쇄 가변 도메인(VL3)을 포함하는 제3 항원-결합 아암을 포함하며,
여기서 제1 항원-결합 아암은 분화 클러스터 3(CD3) 상의 에피토프에 결합하고, 제2 항원-결합 아암은 G-단백질 커플링된 수용체 패밀리 C 군 5 구성원 D(GPRC5D) 상의 에피토프에 결합하고, 제3 항원-결합 아암은 B 세포 성숙 항원(BCMA) 상의 에피토프에 결합하는, 삼중특이적 항체 또는 이의 삼중특이적 결합 단편. - 제1항에 있어서, 제1 항원-결합 아암의 VH1 및 VL1은 다이아바디, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv, Fd, 다이설파이드 안정화 Fv 단편(dsFv), 또는 다이설파이드 안정화 다이아바디(ds 다이아바디), 임의로 Fab 내에 존재하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 제2 항원-결합 아암의 VH2 및 VL2는 다이아바디, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv, Fv, Fd, 다이설파이드 안정화 Fv 단편(dsFv), 또는 다이설파이드 안정화 다이아바디(ds 다이아바디), 임의로 scFv 내에 존재하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 제3 항원-결합 아암의 VH3 및 VL3은 항체 단편, 다이아바디, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv, Fd, 다이설파이드 안정화 Fv 단편(dsFv), 또는 다이설파이드 안정화 다이아바디(ds 다이아바디), 임의로 scFv 내에 존재하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, CD3에 결합하는 제1 항원-결합 아암은 서열 번호 8의 중쇄 가변 도메인(VH1)의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) 1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열 번호 7의 경쇄 가변 도메인(VL1)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR) 1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, CD3에 결합하는 제1 항원-결합 아암은 GDSVFNNNAAWS(서열 번호 4)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, RTYYRSKWLYD(서열 번호 5)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 GYSSSFDY(서열 번호 6)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; 및 TGTSSNIGTYKFVS(서열 번호 1)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, EVSKRPS(서열 번호 2)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 VSYAGSGTLL(서열 번호 3)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, CD3에 결합하는 제1 항원-결합 아암은 서열 번호 8의 VH1 및 서열 번호 7의 VL1을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, GPRC5D에 결합하는 제2 항원-결합 아암은 서열 번호 16의 중쇄 가변 도메인(VH2)의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) 1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열 번호 15의 경쇄 가변 도메인(VL2)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR) 1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, GPRC5D에 결합하는 제2 항원-결합 아암은 GFSLTNIRMSVS(서열 번호 12)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, HIFSNDEKS(서열 번호 13)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 MRLPYGMDV(서열 번호 14)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; 및 RSSQSLVHSDGNTYLS(서열 번호 9)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, KISNRFF(서열 번호 10)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 MQATQFPHT(서열 번호 11)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, GPRC5D에 결합하는 제2 항원-결합 아암은 서열 번호 16의 VH2 및 서열 번호 15의 VL2를 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, BCMA에 결합하는 제3 항원-결합 아암은 서열 번호 24의 중쇄 가변 도메인(VH3)의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) 1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열 번호 23의 경쇄 가변 도메인(VL3)의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR) 1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, BCMA에 결합하는 제3 항원-결합 아암은 GFTFSSYAMS(서열 번호 20)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, AISGSGGSTY(서열 번호 21)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 및 DEGYSSGHYYGMDV(서열 번호 22)의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3; 및 RASQSISSSFLT(서열 번호 17)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, GASSRAT(서열 번호 18)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 QHYGSSPMYT(서열 번호 19)의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, BCMA에 결합하는 제3 항원-결합 아암은 서열 번호 24의 VH3 및 서열 번호 23의 VL3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, CD3에 결합하는 제1 항원-결합 아암은 서열 번호 8의 VH1의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열 번호 7의 VL1의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고;
GPRC5D에 결합하는 제2 항원-결합 아암은 서열 번호 16의 VH2의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열 번호 15의 VL2의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고;
BCMA에 결합하는 제3 항원-결합 아암은 서열 번호 24의 VH3의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 및 서열 번호 23의 VL3의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편. - 제1항 내지 제4항 및 제14항 중 어느 한 항에 있어서, CD3에 결합하는 제1 항원-결합 아암은 각각 서열 번호 4, 5, 6, 1, 2, 3의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고;
GPRC5D에 결합하는 제2 항원-결합 아암은 각각 서열 번호 12, 13, 14, 9, 10, 및 11의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고;
BCMA에 결합하는 제3 항원-결합 아암은 각각 서열 번호 20, 21, 22, 17, 18, 및 19의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편. - 제1항 내지 제4항, 제14항, 및 제15항 중 어느 한 항에 있어서, CD3에 결합하는 제1 항원-결합 아암은 서열 번호 8의 VH1 및 서열 번호 7의 VL1을 포함하고;
GPRC5D에 결합하는 제2 항원-결합 아암은 서열 번호 16의 VH2 및 서열 번호 15의 VL2를 포함하고;
BCMA에 결합하는 제3 항원-결합 아암은 서열 번호 24의 VH3 및 서열 번호 23의 VL3을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편. - 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 항원-결합 아암은 단편 결정화가능(Fc) 도메인을 포함하고, 제2 항원-결합 아암 또는 제3 항원-결합 아암은 Fc 도메인을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 이의 삼중특이적 결합 단편.
- 제17항에 있어서, Fc 도메인은 Fc 도메인의 이종이량체화를 촉진하는 하나 이상의 돌연변이를 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 이의 삼중특이적 결합 단편.
- 제18항에 있어서, 돌연변이는 T366S, L368A, T366W, 및 Y407V(EU 넘버링)로부터 선택되는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제17항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, Fc 도메인은 Fcγ 수용체에 대한 Fc 결합을 감소시키는 하나 이상의 돌연변이를 추가로 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제20항에 있어서, Fcγ 수용체는 FcyRI, FcyRIIA, FcyRIIB, FcyRIIIA, 및/또는 FcyRIIIB인, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제20항 또는 제21항에 있어서, Fc 도메인은 L234A, L235A, 및 D265S(EU 넘버링)로부터 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제17항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, Fc 도메인은 단백질 A에 대한 Fc 결합을 감소시키는 하나 이상의 돌연변이를 추가로 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제23항에 있어서, Fc 도메인은 돌연변이 H435R 및/또는 Y436F(EU 넘버링)를 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 항원-결합 아암은 CD3ε 사슬의 잔기 22 내지 35(QDGNEEMGGITQTP(서열 번호 161))에 특이적으로 결합하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 항원-결합 아암은 약 1 × 10-8 내지 1 × 10-7 M의 친화도로 CD3에 특이적으로 결합하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제26항에 있어서, 제1 항원-결합 아암은 약 2 × 10-8 내지 4 × 10-8 M의 친화도로 CD3에 특이적으로 결합하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 제3 항원-결합 아암은 BCMA BCMW37 사슬의 잔기 17 내지 26(LLHACIPCQL(서열 번호 162))에 특이적으로 결합하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 제3 항원-결합 아암은 약 1 × 10-10 내지 1 × 10-7 M의 친화도로 BCMA에 특이적으로 결합하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제29항에 있어서, 제3 항원-결합 아암은 약 2 × 10-10 내지 9 × 10-10 M의 친화도로 BCMA에 특이적으로 결합하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 분화 클러스터 3(CD3) 상의 에피토프에 결합하는 제1 항원-결합 아암, G-단백질 커플링된 수용체 패밀리 C 군 5 구성원 D(GPRC5D) 상의 에피토프에 결합하는 제2 항원-결합 아암, 및 B 세포 성숙 항원(BCMA) 상의 에피토프에 결합하는 제3 항원-결합 아암을 포함하며,
여기서 제1 항원-결합 아암은 중쇄(HC1) 폴리펩티드 및 경쇄(LC) 폴리펩티드를 포함하고;
제2 항원-결합 아암 및 제3 항원-결합 아암을 포함하는 단일 폴리펩티드를 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 이의 삼중특이적 결합 단편. - 제31항에 있어서, 제1 항원-결합 아암의 HC1은 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제32항 또는 제33항에 있어서, 제1 항원-결합 아암의 LC는 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제31항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 항원-결합 아암 및 제3 항원-결합 아암을 포함하는 폴리펩티드는 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제31항에 있어서, 제1 항원-결합 아암은 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 HC1, 및 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하고, 제2 항원-결합 아암 및 제3 항원-결합 아암을 포함하는 폴리펩티드는 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 분화 클러스터 3(CD3) 상의 에피토프에 결합하는 제1 항원-결합 아암, G-단백질 커플링된 수용체 패밀리 C 군 5 구성원 D(GPRC5D) 상의 에피토프에 결합하는 제2 항원-결합 아암, 및 B 세포 성숙 항원(BCMA) 상의 에피토프에 결합하는 제3 항원-결합 아암을 포함하며,
여기서 제1 항원-결합 아암은 중쇄(HC1) 폴리펩티드 및 경쇄(LC) 폴리펩티드를 포함하고, 여기서 중쇄(HC1) 폴리펩티드는 제2 항원-결합 아암을 추가로 포함하며,
제3 항원-결합 아암을 포함하는 단일 폴리펩티드를 추가로 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 이의 삼중특이적 결합 단편. - 제36항에 있어서, 제1 항원-결합 아암의 HC1은 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제36항 또는 제37항에 있어서, 제1 항원-결합 아암의 LC는 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제36항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 제3 항원-결합 아암을 포함하는 단일 폴리펩티드는 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제36항에 있어서, 제1 항원-결합 아암은 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 HC1, 및 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하고, 제3 항원-결합 아암을 포함하는 단일 폴리펩티드는 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함하는, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 (인간) 동종형인, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 (인간) IgG1 동종형인, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편.
- 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항의 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편을 인코딩하는, 합성 폴리뉴클레오티드.
- 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항의 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는, 약제학적 조성물.
- 제44항에 있어서, 제2 치료제를 추가로 포함하는, 약제학적 조성물.
- 제45항에 있어서, 제2 치료제는 항-CD38 제제, 면역조절 이미드 약물(IMiD), 면역 체크포인트 억제제, 면역 공동자극제, 감마 세크레타제 억제제, T-세포 인핸서, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는, 약제학적 조성물.
- 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항의 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편을 발현하는, 세포.
- 제47항에 있어서, 하이브리도마인, 세포.
- 제47항 또는 제48항에 있어서, 삼중특이적 항체는 재조합적으로 생성되는, 세포.
- 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하기 위한 방법으로서, 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항의 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편 또는 제44항 내지 제46항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 제50항에 있어서, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편 또는 약제학적 조성물은 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 투여되는, 방법.
- 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하기 위한 방법으로서, 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항의 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편 또는 제44항 내지 제46항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물의 유효량을 상기 세포에 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 상기 유효량은 상기 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하기에 충분한, 방법.
- 제52항에 있어서, 상기 암 세포는 대상체 내에 존재하며, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편 또는 약제학적 조성물은 대상체에게 투여되는, 방법.
- 제52항에 있어서, 상기 투여는 생체외에서 수행되는, 방법.
- T 세포를 BCMA 및/또는 GPRC5D-발현 암 세포로 방향전환시키는 것을 필요로 하는 대상체에서 T 세포를 BCMA 및/또는 GPRC5D-발현 암 세포로 방향전환시키는 방법으로서, 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항의 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편 또는 제44항 내지 제46항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 제55항에 있어서, 상기 치료적 유효량은 상기 T 세포 반응을 상기 암 세포로 유도하기에 충분한, 방법.
- 제50항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 혈액암인, 방법.
- 제57항에 있어서, 혈액암은 BCMA 및/또는 GPRC5D-발현 B 세포 암인, 방법.
- 제58항에 있어서, BCMA 및/또는 GPRC5D-발현 B 세포 암은 다발성 골수종인, 방법.
- 제58항 또는 제59항에 있어서, BCMA 및/또는 GPRC5D-발현 B 세포 암은 무증상 다발성 골수종(SMM)인, 방법.
- 제50항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 재발성, 불응성, 또는 악성 암, 또는 이들의 임의의 조합인, 방법.
- 제50항, 제51항, 제53항, 및 제55항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 이전 치료를 받은 적이 있는, 방법.
- 제62항에 있어서, 이전 치료는 프로테아좀 억제제, 면역조절 약물, CD38 항체, 이중특이적 제제, CAR-T 요법, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는, 방법.
- 제50항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
- 제64항에 있어서, 제2 치료제는 화학요법제 또는 표적화 항암 요법인, 방법.
- 제65항에 있어서, 화학요법제는 시타라빈, 안트라사이클린, 히스타민 다이하이드로클로라이드, 또는 인터류킨 2(IL-2)인, 방법.
- 제64항에 있어서, 제2 치료제는 항-CD38 제제, 면역조절 이미드 약물(IMiD), 면역 체크포인트 억제제, 면역 공동자극제, 감마 세크레타제 억제제, T-세포 인핸서, 또는 이들의 임의의 조합인, 방법.
- 제50항, 제51항, 제53항, 및 제55항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편, 또는 약제학적 조성물은 대상체에게 정맥내, 근육내, 복강내, 및/또는 피하 투여되는, 방법.
- 제50항, 제51항, 제53항, 및 제55항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편, 또는 약제학적 조성물은 대상체에게 피하 투여되는, 방법.
- 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항의 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편을 생성하기 위한 방법으로서, 제47항 내지 제49항 중 어느 한 항의 세포를 배양하는 단계 및 상기 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편을 단리하는 단계를 포함하는, 방법.
- (i) 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항의 삼중특이적 항체 또는 삼중특이적 결합 단편 및/또는 제43항의 폴리뉴클레오티드 및 (ii) 이를 위한 패키징을 포함하는, 키트.
- GFTFSSYAMS(서열 번호 20)의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR1), AISGSGGSTY(서열 번호 21)의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR2, 및 DEGYSSGHYYGMDV(서열 번호 22)의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 CDR3을 포함하는, BCMA에 결합하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 제72항에 있어서, RASQSISSSFLT(서열 번호 17)의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR1), GASSRAT(서열 번호 18)의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR2, 및 QHYGSSPMYT(서열 번호 19)의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 CDR3을 추가로 포함하는, 항체 또는 항원-결합 단편.
- 제72항 또는 제73항에 있어서, 서열 번호 24의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하는, 항체 또는 항원-결합 단편.
- 제72항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호 23의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는, 항체 또는 항원-결합 단편.
- 제72항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, BCMA BCMW37 사슬의 잔기 17 내지 26(LLHACIPCQL(서열 번호 162))에 특이적으로 결합하는, 항체 또는 항원-결합 단편.
- 제72항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 약 1 × 10-10 내지 1 × 10-7 M의 친화도로 BCMA에 특이적으로 결합하는, 항체 또는 항원-결합 단편.
- 제77항에 있어서, 약 2 × 10-10 내지 9 × 10-10 M의 친화도로 BCMA에 특이적으로 결합하는, 항체 또는 항원-결합 단편.
- 제72항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 항체 또는 항원-결합 단편인, 항체 또는 항원-결합 단편.
- 제72항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 재조합체인, 항체 또는 항원-결합 단편.
- 제72항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, Fab 단편, Fab2 단편, 또는 단일쇄 항체인, 항원 결합 단편.
- 제72항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 동종형인, 항체 또는 항원-결합 단편.
- 제72항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 IgG1 또는 IgG4 동종형인, 항체 또는 항원-결합 단편.
- 제72항 내지 제83항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원-결합 단편 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는, 약제학적 조성물.
- 제84항에 있어서, 제2 치료제를 추가로 포함하는, 약제학적 조성물.
- 제85항에 있어서, 제2 치료제는 항-CD38 제제, 면역조절 이미드 약물(IMiD), 면역 체크포인트 억제제, 면역 공동자극제, 감마 세크레타제 억제제, T-세포 인핸서, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는, 약제학적 조성물.
- 제72항 내지 제83항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원-결합 단편을 발현하는, 세포.
- 제87항에 있어서, 하이브리도마인, 세포.
- 제87항에 있어서, 항체는 재조합적으로 생성되는, 세포.
- 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하기 위한 방법으로서, 제72항 내지 제83항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원-결합 단편 또는 제84항 내지 제86항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 제90항에 있어서, 항체 또는 항원-결합 단편 또는 약제학적 조성물은 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 투여되는, 방법.
- 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하기 위한 방법으로서, 제72항 내지 제83항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원-결합 단편 또는 제84항 내지 제86항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물의 유효량을 상기 세포에 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 상기 유효량은 상기 암 세포의 성장 또는 증식을 억제하기에 충분한, 방법.
- 제92항에 있어서, 상기 암 세포는 대상체 내에 존재하며, 항체 또는 항원-결합 단편 또는 약제학적 조성물은 대상체에게 투여되는, 방법.
- 제92항에 있어서, 상기 투여는 생체외에서 수행되는, 방법.
- 제90항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 혈액암인, 방법.
- 제95항에 있어서, 혈액암은 BCMA-발현 B 세포 암인, 방법.
- 제96항에 있어서, BCMA-발현 B 세포 암은 다발성 골수종인, 방법.
- 제97항에 있어서, BCMA-발현 B 세포 암은 무증상 다발성 골수종(SMM)인, 방법.
- 제90항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 재발성, 불응성, 또는 악성 암, 또는 이들의 임의의 조합인, 방법.
- 제90항, 제91항, 제93항, 및 제95항 내지 제99항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 이전 치료를 받은 적이 있는, 방법.
- 제100항에 있어서, 이전 치료는 프로테아좀 억제제, 면역조절 약물, CD38 항체, 이중특이적 제제, CAR-T 요법, 또는 이들의 조합을 포함하는, 방법.
- 제90항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
- 제102항에 있어서, 제2 치료제는 화학요법제 또는 표적화 항암 요법인, 방법.
- 제103항에 있어서, 화학요법제는 시타라빈, 안트라사이클린, 히스타민 다이하이드로클로라이드, 또는 인터류킨 2(IL-2)인, 방법.
- 제102항에 있어서, 제2 치료제는 항-CD38 제제, 면역조절 이미드 약물(IMiD), 면역 체크포인트 억제제, 면역 공동자극제, 감마 세크레타제 억제제, T-세포 인핸서, 또는 이들의 임의의 조합인, 방법.
- 제90항, 제91항, 제93항, 및 제95항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원-결합 단편 또는 약제학적 조성물은 대상체에게 정맥내, 근육내, 복강내, 및/또는 피하 투여되는, 방법.
- 제90항, 제91항, 제93항, 및 제95항 내지 제106항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원-결합 단편, 또는 약제학적 조성물은 대상체에게 피하 투여되는, 방법.
- 제72항 내지 제83항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원-결합 단편을 생성하기 위한 방법으로서, 제87항 내지 제89항 중 어느 한 항의 세포를 배양하는 단계 및 상기 항체 또는 항원-결합 단편을 단리하는 단계를 포함하는, 방법.
- 제72항 내지 제83항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원-결합 단편을 인코딩하는, 합성 폴리뉴클레오티드.
- (i) 제72항 내지 제83항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원-결합 단편 및/또는 제109항의 폴리뉴클레오티드 및 (ii) 이를 위한 패키징을 포함하는, 키트.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US202163149921P | 2021-02-16 | 2021-02-16 | |
| US63/149,921 | 2021-02-16 | ||
| PCT/EP2022/053651 WO2022175255A2 (en) | 2021-02-16 | 2022-02-15 | Trispecific antibody targeting bcma, gprc5d, and cd3 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20230146578A true KR20230146578A (ko) | 2023-10-19 |
Family
ID=80445956
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020237031153A KR20230146578A (ko) | 2021-02-16 | 2022-02-15 | Bcma, gprc5d, 및 cd3을 표적화하는 삼중특이적 항체 |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20220267438A1 (ko) |
| EP (1) | EP4294528A2 (ko) |
| JP (1) | JP2024507180A (ko) |
| KR (1) | KR20230146578A (ko) |
| CN (1) | CN117279953A (ko) |
| AR (1) | AR124882A1 (ko) |
| AU (1) | AU2022221884A1 (ko) |
| BR (1) | BR112023016121A2 (ko) |
| CA (1) | CA3211163A1 (ko) |
| CL (1) | CL2023002382A1 (ko) |
| CO (1) | CO2023011907A2 (ko) |
| CR (1) | CR20230398A (ko) |
| DO (1) | DOP2023000158A (ko) |
| EC (1) | ECSP23069904A (ko) |
| IL (1) | IL305144A (ko) |
| TW (1) | TW202302636A (ko) |
| UY (1) | UY39634A (ko) |
| WO (1) | WO2022175255A2 (ko) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2023236889A1 (zh) * | 2022-06-06 | 2023-12-14 | 山东先声生物制药有限公司 | 靶向bcma、gprc5d和t细胞的多特异性抗体及其应用 |
| WO2024050797A1 (zh) * | 2022-09-09 | 2024-03-14 | 北京天广实生物技术股份有限公司 | 结合bcma、gprc5d和cd3的多特异性抗体及其用途 |
| WO2024079015A1 (en) * | 2022-10-10 | 2024-04-18 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Combination therapy of a gprc5d tcb and imids |
Family Cites Families (38)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6737056B1 (en) | 1999-01-15 | 2004-05-18 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants with altered effector function |
| US20020142000A1 (en) | 1999-01-15 | 2002-10-03 | Digan Mary Ellen | Anti-CD3 immunotoxins and therapeutic uses therefor |
| WO2001024812A1 (en) | 1999-10-06 | 2001-04-12 | N.V. Nutricia | USE OF TRANSFORMING GROWTH FACTOR β AND GROWTH FACTORS IN THE TREATMENT AND PREVENTION OF DISEASES OF THE INTESTINAL MUCOSA |
| UA74798C2 (uk) | 1999-10-06 | 2006-02-15 | Байоджен Айдек Ма Інк. | Спосіб лікування раку у ссавця за допомогою поліпептиду, що протидіє взаємодії april з його рецепторами |
| CA2438682A1 (en) | 2001-02-20 | 2002-08-29 | Zymogenetics, Inc. | Antibodies that bind both bcma and taci |
| AU2005282700A1 (en) | 2004-09-02 | 2006-03-16 | Genentech, Inc. | Heteromultimeric molecules |
| AU2006232287B2 (en) | 2005-03-31 | 2011-10-06 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Methods for producing polypeptides by regulating polypeptide association |
| DE102005028778A1 (de) | 2005-06-22 | 2006-12-28 | SUNJÜT Deutschland GmbH | Mehrlagige Folie mit einer Barriere- und einer antistatischen Lage |
| ES2856451T3 (es) | 2005-10-11 | 2021-09-27 | Amgen Res Munich Gmbh | Composiciones que comprenden anticuerpos específicos para diferentes especies, y usos de las mismas |
| US10155816B2 (en) | 2005-11-28 | 2018-12-18 | Genmab A/S | Recombinant monovalent antibodies and methods for production thereof |
| JP2009541275A (ja) | 2006-06-22 | 2009-11-26 | ノボ・ノルデイスク・エー／エス | 二重特異性抗体の生産 |
| EP4059964A1 (en) | 2007-04-03 | 2022-09-21 | Amgen Research (Munich) GmbH | Cross-species-specific binding domain |
| JP2010524851A (ja) | 2007-04-03 | 2010-07-22 | マイクロメット アーゲー | 種間特異的結合ドメイン |
| US20100183615A1 (en) | 2007-04-03 | 2010-07-22 | Micromet Ag | Cross-species-specific bispecific binders |
| CA2738565C (en) | 2008-10-01 | 2023-10-10 | Micromet Ag | Cross-species-specific psmaxcd3 bispecific single chain antibody |
| US10981998B2 (en) | 2008-10-01 | 2021-04-20 | Amgen Research (Munich) Gmbh | Cross-species-specific single domain bispecific single chain antibody |
| PL2352763T5 (pl) | 2008-10-01 | 2023-01-30 | Amgen Research (Munich) Gmbh | Bispecyficzne przeciwciała jednołańcuchowe o specyficzności wobec antygenów docelowych o dużej masie cząsteczkowej |
| AU2009308935B2 (en) | 2008-10-31 | 2015-02-26 | Janssen Biotech, Inc. | Fibronectin type III domain based scaffold compositions, methods and uses |
| EP2396011B1 (en) | 2009-02-12 | 2016-04-13 | Janssen Biotech, Inc. | Fibronectin type iii domain based scaffold compositions, methods and uses |
| NZ612647A (en) | 2009-03-10 | 2015-03-27 | Biogen Idec Inc | Anti-bcma antibodies |
| CN102459346B (zh) | 2009-04-27 | 2016-10-26 | 昂考梅德药品有限公司 | 制造异源多聚体分子的方法 |
| EA201201435A1 (ru) | 2010-04-20 | 2013-04-30 | Генмаб А/С | ГЕТЕРОДИМЕРНЫЕ АНТИТЕЛО-Fc-СОДЕРЖАЩИЕ БЕЛКИ И СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ |
| MX352929B (es) | 2010-11-05 | 2017-12-13 | Zymeworks Inc | DISEÑO DE ANTICUERPOS HETERODIMÉRICOS ESTABLES CON MUTACIONES EN EL DOMINIO Fc. |
| DK2773671T3 (da) | 2011-11-04 | 2021-11-15 | Zymeworks Inc | Udformning af stabilt heterodimert antistof med mutationer i fc-domænet |
| CN107206077B (zh) | 2014-12-05 | 2021-06-08 | 纪念斯隆-凯特琳癌症中心 | 靶向g-蛋白偶联受体的抗体和使用方法 |
| DK3337824T3 (da) | 2015-08-17 | 2020-08-24 | Janssen Pharmaceutica Nv | Anti-bcma-antistoffer, bispecifikke antigen-bindende molekyler, som binder bcma og cd3, og anvendelse deraf |
| TWI781108B (zh) | 2016-07-20 | 2022-10-21 | 比利時商健生藥品公司 | 抗ｇｐｒｃ５ｄ抗體、結合ｇｐｒｃ５ｄ與ｃｄ３之雙特異性抗原結合分子及其用途 |
| KR20190133160A (ko) | 2017-02-07 | 2019-12-02 | 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 | 항-gprc5d 항체 및 항-gprc5d 항체를 포함하는 분자 |
| JP7095078B2 (ja) | 2017-09-22 | 2022-07-04 | カイト ファーマ インコーポレイテッド | キメラポリペプチド及びその使用 |
| TWI829667B (zh) | 2018-02-09 | 2024-01-21 | 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 | 結合gprc5d之抗體 |
| CN112368019A (zh) * | 2018-05-16 | 2021-02-12 | 詹森生物科技公司 | 治疗癌症并增强t细胞重定向治疗剂的功效的方法 |
| CN112384534A (zh) * | 2018-05-21 | 2021-02-19 | 指南针制药有限责任公司 | 用于增强nk细胞对靶细胞的杀死的组合物和方法 |
| JOP20190116A1 (ar) | 2018-05-24 | 2019-11-24 | Janssen Biotech Inc | الأجسام المضادة لتكتل التمايز 33 (cd33)، والأجسام المضادة ثنائية النوعية لتكتل التمايز 33 (cd33)/تكتل التمايز 3 (cd3) واستخداماتها |
| CN113597433A (zh) | 2019-01-18 | 2021-11-02 | 詹森生物科技公司 | Gprc5d嵌合抗原受体以及表达这些受体的细胞 |
| US20210284731A1 (en) * | 2020-03-13 | 2021-09-16 | Janssen Biotech, Inc. | Methods and materials for modulating an immune response |
| EP4211170A1 (en) * | 2020-09-11 | 2023-07-19 | Janssen Biotech, Inc. | Methods and compositions for modulating beta chain mediated immunity |
| KR20230084507A (ko) * | 2020-09-11 | 2023-06-13 | 얀센 바이오테크 인코포레이티드 | 다중-특이적 면역 표적화 분자 및 그의 용도 |
| CN112028996B (zh) * | 2020-10-30 | 2021-01-22 | 南京北恒生物科技有限公司 | 靶向bcma的单域抗体及其用途 |
-
2022
- 2022-02-15 JP JP2023549015A patent/JP2024507180A/ja active Pending
- 2022-02-15 TW TW111105376A patent/TW202302636A/zh unknown
- 2022-02-15 US US17/672,123 patent/US20220267438A1/en active Pending
- 2022-02-15 IL IL305144A patent/IL305144A/en unknown
- 2022-02-15 WO PCT/EP2022/053651 patent/WO2022175255A2/en active Application Filing
- 2022-02-15 CA CA3211163A patent/CA3211163A1/en active Pending
- 2022-02-15 AU AU2022221884A patent/AU2022221884A1/en active Pending
- 2022-02-15 BR BR112023016121A patent/BR112023016121A2/pt unknown
- 2022-02-15 AR ARP220100304A patent/AR124882A1/es unknown
- 2022-02-15 EP EP22705543.1A patent/EP4294528A2/en active Pending
- 2022-02-15 CN CN202280028859.6A patent/CN117279953A/zh active Pending
- 2022-02-15 CR CR20230398A patent/CR20230398A/es unknown
- 2022-02-15 KR KR1020237031153A patent/KR20230146578A/ko unknown
- 2022-02-16 UY UY0001039634A patent/UY39634A/es unknown
-
2023
- 2023-08-11 DO DO2023000158A patent/DOP2023000158A/es unknown
- 2023-08-11 CL CL2023002382A patent/CL2023002382A1/es unknown
- 2023-09-07 CO CONC2023/0011907A patent/CO2023011907A2/es unknown
- 2023-09-15 EC ECSENADI202369904A patent/ECSP23069904A/es unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AR124882A1 (es) | 2023-05-17 |
| CO2023011907A2 (es) | 2023-09-18 |
| EP4294528A2 (en) | 2023-12-27 |
| UY39634A (es) | 2022-08-31 |
| IL305144A (en) | 2023-10-01 |
| TW202302636A (zh) | 2023-01-16 |
| CL2023002382A1 (es) | 2024-03-15 |
| CN117279953A (zh) | 2023-12-22 |
| BR112023016121A2 (pt) | 2023-11-28 |
| CR20230398A (es) | 2023-11-15 |
| WO2022175255A2 (en) | 2022-08-25 |
| WO2022175255A3 (en) | 2022-09-29 |
| DOP2023000158A (es) | 2024-02-29 |
| AU2022221884A1 (en) | 2023-10-05 |
| JP2024507180A (ja) | 2024-02-16 |
| US20220267438A1 (en) | 2022-08-25 |
| CA3211163A1 (en) | 2022-08-25 |
| ECSP23069904A (es) | 2023-10-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7469432B2 (ja) | 抗ｇｐｒｃ５ｄ抗体、ｇｐｒｃ５ｄとｃｄ３を結合する二重特異性抗原結合分子、及びその使用 | |
| EP3189081B1 (en) | Cd123 binding agents and uses thereof | |
| US20190270826A1 (en) | Anti-il1rap antibodies, bispecific antigen binding molecules that bind il1rap and cd3, and uses thereof | |
| KR20180054837A (ko) | 인간 cd40에 특이적으로 결합하는 작용성 항체 및 사용 방법 | |
| CN113248618B (zh) | 抗pd-l1/抗lag3双特异性抗体及其用途 | |
| KR20230146578A (ko) | Bcma, gprc5d, 및 cd3을 표적화하는 삼중특이적 항체 | |
| CN110678484A (zh) | 抗pd-l1/抗lag3双特异性抗体及其用途 | |
| JP2024511115A (ja) | ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２０、及びＣＤ３を標的とする三重特異性抗体 | |
| KR20230160314A (ko) | Cd22 및 cd79b를 표적화하는 항체 |