JP2024507180A - Ｂｃｍａ、ｇｐｒｃ５ｄ、及びｃｄ３を標的とする三重特異的抗体 - Google Patents

Ｂｃｍａ、ｇｐｒｃ５ｄ、及びｃｄ３を標的とする三重特異的抗体 Download PDF

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Abstract

Figure 2024507180000001
本明細書において、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、及びＣＤ３に結合する多重特異的抗体並びにその多重特異的抗原結合フラグメントが提供される。提供される多重特異的抗体又は多重特異的抗原結合フラグメントをコードすることが可能な関連するポリヌクレオチド、提供される多重特異的抗体又は多重特異的抗原結合フラグメントを発現する細胞、並びに関連するベクター及び検出可能に標識された多重特異的抗体又は多重特異的抗原結合フラグメントも記載される。加えて、提供される多重特異的抗体及び多重特異的抗原結合フラグメントを産生及び使用する方法が記載される。本明細書において、ＢＣＭＡに結合する抗体及びその抗原結合フラグメントが更に提供される。提供されるＢＣＭＡ特異的抗体又は抗原結合フラグメントをコードすることが可能な関連するポリヌクレオチド、提供されるＢＣＭＡ特異的抗体又は抗原結合フラグメントを発現する細胞、並びに関連するベクター及び検出可能に標識されたＢＣＭＡ特異的抗体又は抗原結合フラグメントも記載される。加えて、提供されるＢＣＭＡ特異的抗体及び抗原結合フラグメントを産生及び使用する方法が記載される。

Description

（関連出願の相互参照）
本出願は２０２１年２月１６日に出願された米国仮特許出願第６３／１４９，９２１号の優先権を主張するものである。前述の出願の全内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
（技術分野）
本明細書に提供される開示は、Ｂ細胞成熟抗原（B-cell maturation antigen、ＢＣＭＡ）、Ｇタンパク質共役受容体クラスＣグループ５メンバーＤ（G-protein coupled receptor, class C, group 5, member D、ＧＰＲＣ５Ｄ）、及び表面抗原分類３（cluster determinant 3、ＣＤ３）に結合する多重特異的抗体、ＢＣＭＡに結合するモノクローナル抗体、並びに記載される抗体を産生及び使用する方法に関する。
（背景）
多発性骨髄腫（Multiple myeloma、ＭＭ）は、二番目に多い血液系腫瘍であり、がんによる全死亡者の２％を占める。ＭＭは、異種的な疾患であり、主に染色体転位、とりわけｔ（１１；１４）、ｔ（４；１４）、ｔ（８；１４）、ｄｅｌ（１３）、ｄｅｌ（１７）によって引き起こされる（Ｄｒａｃｈ ｅｔ ａｌ．，（１９９８）Ｂｌｏｏｄ ９２（３）：８０２－８０９、Ｇｅｒｔｚ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｂｌｏｏｄ １０６（８）：２８３７－２８４０、Ｆａｃｏｎ ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｂｌｏｏｄ ９７（６）：１５６６－１５７１）。ＭＭに罹患している患者は、骨髄浸潤、骨破壊、腎不全、免疫不全、及びがん診断の心理的負荷に起因する種々の疾患関連症状を受け得る。２００６年の時点で、ＭＭの５年相対生存率は約３４％であり、ＭＭが、現在のところ治療選択肢が存在しない治療の難しい疾患であることが強調されている。
ＢＣＭＡ、ＣＤ２６９、ＴＮＦＲＳＦ１７（ＵｎｉＰｒｏｔ Ｑ０２２２３）としても知られるＢ細胞成熟抗原は、分化した形質細胞において優先的に発現される腫瘍壊死受容体スーパーファミリーのメンバーである［Ｌａａｂｉ ｅｔ ａｌ．（１９９２）ＥＭＢＯ Ｊ １１（１１）：３８９７－３９０４、Ｍａｄｒｙ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｉｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ １０（１１）：１６９３－１７０２］。ＢＣＭＡは、非グリコシル化Ｉ型膜貫通タンパク質であり、Ｂ細胞の成熟、増殖、及び生存に関与する。ＢＣＭＡは、ＢＣＭＡに対する高親和性リガンドであるＡＰＲＩＬ（増殖誘導リガンド、ＣＤ２５６、ＴＮＦＳＦ１３）、及びＢＣＭＡに対する低親和性リガンドであるＢ細胞活性化因子ＢＡＦＦ（ＴＨＡＮＫ、ＢｌｙＳ、Ｂリンパ球刺激因子、ＴＡＬＬ－１、及びｚＴＮＦ４）という、ＴＮＦスーパーファミリーの２つのリガンドに対する受容体である。ＡＰＲＩＬ及びＢＡＦＦは、構造的類似性及び重複するが別個であるレセプター結合特異性を示す。負の調節因子ＴＡＣＩもまた、ＢＡＦＦ及びＡＰＲＩＬの両方に結合する。ＡＰＲＩＬ及びＢＡＦＦのＢＣＭＡ及び／又はＴＡＣＩへの協調的結合は、転写因子ＮＦ－κＢを活性化し、生存促進性Ｂｃｌ－２ファミリーメンバー（例えば、Ｂｃｌ－２、Ｂｃｌ－ｘＬ、Ｂｃｌ－ｗ、Ｍｃｌ－１、Ａ１）の発現を増加させ、アポトーシス促進性因子（例えば、Ｂｉｄ、Ｂａｄ、Ｂｉｋ、Ｂｉｍなど）の発現を下方制御し、したがってアポトーシスを阻害し、生存を促進する。この複合作用は、Ｂ細胞分化、増殖、生存、及び抗体産生を促進する（Ｒｉｃｋｅｒｔ ＲＣ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ（２０１１）２４４（１）：１１５－１３３に概説されているとおり）。この知見と一致して、ＢＣＭＡはまた、多発性骨髄腫（ＭＭ）細胞を含む悪性ヒトＢ細胞の増殖及び生存を支援する。Ｎｏｖａｋらは、ＭＭ細胞系及び新たに単離されたＭＭ細胞が、それらの細胞表面上にＢＣＭＡ及びＴＡＣＩタンパクを発現し、それらの細胞表面上にＢＡＦＦ－Ｒタンパクの様々な発現を有することを見出した（Ｎｏｖａｋ ｅｔ ａｌ．，（２００４）Ｂｌｏｏｄ １０３（２）：６８９－６９４）。
リンパ腫及び多発性骨髄腫の処置のための抗ＢＣＭＡ抗体の使用は、国際公開第２００２０６６５１６号及び同第２０１０１０４９４９号において言及されている。ＢＣＭＡに対する抗体は、例えば、Ｇｒａｓ Ｍ－Ｐ．ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．７（１９９５）１０９３－１１０６、国際公開第２００１２４８１１号及び同第２００１２４８１２号に記載されている。それでも、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーに属するＢＣＭＡ、ＢＡＦＦ－Ｒ、及びＴＡＣＩ、すなわちＢ細胞受容体、並びにそれらのリガンドであるＢＡＦＦ及びＡＰＲＩＬが、がんと闘うための療法の対象であるにもかかわらず、そのような医学的状態の処置のための更なる選択肢が必要とされている。
Ｇタンパク質共役受容体クラスＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）は、２００１年に最初に同定されたオーファン非定型クラスＣのＧＰＣＲである（Ｂｒａｕｎｅｒ－Ｏｓｂｏｒｎｅ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ．１５１８（３）：２３７－２４８，２００１）。ＧＰＲＣ５Ｄ及びグループ５の他のＧＰＣＲ群は、クラスＣ受容体に対する非常に短いアミノ末端ドメインを有し、それゆえクラスＡ受容体と立体構造が類似すると予測される。これに関し、これらは、クラスＣのＧＰＣＲに対する配列相同性を有すること、並びに構造トポロジーがクラスＡ受容体と同等であると予測されることから、ユニークである。ＧＰＲＣ５Ｄ活性化の機能的意義については説明されておらず、リガンドは未だ不明である。ヒトにおいては、この遺伝子は、３つのエキソンを有しており、染色体１２ｐ１３．３に位置する。ＧＰＲＣ５Ｄ受容体は多様な種間で高度に保存されており、カニクイザルＧＰＲＣ５Ｄとは９２％の同一性を共有している。
多発性骨髄腫の処置のための抗ＧＰＲＣ５Ｄ抗体の使用は、国際公開第２０１６０９０３２９号、同第２０１８０１７７８６号、同第２０１８１４７２４５号、及び同第２０１９１５４８９０号において言及されている。それでも、ＧＰＲＣ５Ｄが、がんと闘うための療法の対象であるという事実にもかかわらず、そのような医学的状態の処置のための更なる選択肢が必要とされている。
ＧＰＲＣ５Ｄ ｍＲＮＡは、ＭＭ患者由来の全ての悪性形質細胞で圧倒的に発現されている（Ａｔａｍａｎｉｕｋ ＪＡ ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ ４２（９）９５３－９６０；２０１２、Ｆｒｉｇｙｅｓｉ－ｂｌｏｏｄ ａｎｄ Ｃｏｈｅｎ，ｅｔ ａｌ．Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ １８（６）：３４８－３５；２０１３）。ＧＰＲＣ５Ｄ発現は患者間で様々に異なり、形質細胞負荷及びＲｂ－１欠損などの遺伝子異常とよく相関している（Ａｔａｍａｎｉｕｋ ＪＡ ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ ４２（９）９５３－９６０；２０１２）。
クローン耐性は、再発性難治性骨髄腫における一般的な機構である。２つ以上の骨髄腫腫瘍抗原を標的とし、Ｔ細胞に関与することで、悪性形質細胞の効率的な死滅及び微小残存病変（minimal residual disease、ＭＲＤ）陰性をもたらし得る。ＢＣＭＡ及びＧＰＲＣ５Ｄの二重標的化は、抗体の親和力及び効力を増強し、異種細胞集団の存在下で腫瘍根絶を最大にし、腫瘍抗原逃避を防止し（例えば、十分なＢＣＭＡ又はＧＰＲＣ５Ｄ単独を発現しないＭＭ細胞を捕捉する）、腫瘍有効性を改善し、サイトカイン放出症候群（cytokine release syndrome、ＣＲＳ）の可能性を軽減し得る。
したがって、多発性骨髄腫及び／又は関連する医学的状態の処置のために、ＢＣＭＡ及びＧＰＲＣ５Ｄの両方を標的とする治療用抗体が必要とされている。
（概要）
一態様では、本明細書において、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、及びＣＤ３に特異的に結合する多重特異的抗体及びその多重特異的抗原結合フラグメントが提供される。一部の実施形態では、本明細書において、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、及びＣＤ３に結合、又は特異的に結合する三重特異的抗体及びその三重特異的抗原結合フラグメントが提供される。提供されるＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又は多重特異的抗原結合フラグメントをコードすることが可能な関連するポリヌクレオチド、提供される抗体又は多重特異的抗原結合フラグメントを発現する細胞、並びに関連するベクター及び検出可能に標識された多重特異的抗体又は多重特異的抗原結合フラグメントも記載される。加えて、提供される多重特異的抗体を使用する方法が記載される。例えば、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体及び多重特異的抗原結合フラグメントを使用して、がん（例えば、ＢＣＭＡ及び／又はＧＰＲＣ５Ｄ発現がん）を処置することができ、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体を使用して、ＢＣＭＡ及び／又はＧＰＲＣ５Ｄ発現がんの進行、退行、又は安定性を診断又はモニターすることができ、患者ががんを処置される必要があるか否かを判定すること、あるいは対象がＢＣＭＡ及び／又はＧＰＲＣ５Ｄ発現がんに罹患しており、したがってＢＣＭＡ及び／又はＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗がん治療剤、例えば、本明細書に記載されるＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体による処置に適しているか否かを判定することができる。
ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体
本明細書において、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、及びＣＤ３に結合する、単離された多重特異的抗体（「ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体」）及びその多重特異的抗原結合フラグメントが記載される。
好ましい実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、三重特異的抗体又は抗原結合フラグメントである。一部の実施形態では、単離されたＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメントは、（ａ）第１の重鎖可変ドメイン（first heavy chain variable domain、ＶＨ１）及び第１の軽鎖可変ドメイン（first light chain variable domain、ＶＬ１）を含む第１の抗原結合アームと、（ｂ）第２の重鎖可変ドメイン（second heavy chain variable domain、ＶＨ２）及び第２の軽鎖可変ドメイン（second light chain variable domain、ＶＬ２）を含む第２の抗原結合アームと、（ｃ）第３の重鎖可変ドメイン（third heavy chain variable domain、ＶＨ３）及び第３の軽鎖可変ドメイン（third light chain variable domain、ＶＬ３）を含む第３の抗原結合アームと、を含む。一部の実施形態では、第１の抗原結合アームは、ＣＤ３上のエピトープに結合し、第２の抗原結合アームは、ＧＰＲＣ５Ｄ上のエピトープに結合し、第３の抗原結合アームは、ＢＣＭＡ上のエピトープに結合する。
一部の実施形態では、三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメントの第１の抗原結合アームは、ＶＨ１を含む第１の重鎖部分（first heavy chain portion、ＨＣ１）と、ＶＬ１を含む軽鎖部分とを含む。ＶＨ１及びＶＬ１は、第１の抗原に結合する第１の抗原結合ドメインを形成する。三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメントの第２の抗原結合アームは、ＶＨ２を含む第２の重鎖部分（second heavy chain portion、ＨＣ２）を含む。ＨＣ２のＶＨ２は、第２の抗原に結合する第２の抗原結合ドメインを形成する。ＨＣ１又はＨＣ２は、第３の抗原に結合する第３の抗原結合ドメインを形成するＶＨ３を含む第３の抗原結合アームに更に連結される。ＨＣ１及びＨＣ２は各々、任意選択で、フラグメント結晶化可能（Fragment crystallizable、Ｆｃ）ドメインを含み、Ｆｃドメインは、定常重鎖領域２（constant heavy chain region 2、ＣＨ２）及びＣＨ３を含む。一部の実施形態では、第１の抗原は表面抗原分類３（ＣＤ３）であり、第２の抗原はＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）であり、第３の抗原はＧタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）である。一部の実施形態では、第１の抗原は表面抗原分類３（ＣＤ３）であり、第２の抗原はＧタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）であり、第３の抗原はＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）である。ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメントのいくつかの態様は、以下の発明を実施するための形態及び実施例の節に更に記載されている。
一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、ヒトＢＣＭＡに結合するが、カニクイザルＢＣＭＡには結合しない。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、ＢＣＭＡ細胞外ドメイン（extracellular domain、ＥＣＤ）からの１つ又は２つ以上の残基を含むエピトープに結合する。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体のＢＣＭＡ結合アーム（又は「ＢＣＭＡ特異的アーム」）は、本明細書に記載されるＢＣＭＡ抗体から（例えば、表１で列記されるＣＤＲ配列を有する抗体から）得られる。
一部の実施形態では、多重特異的抗体のＧＰＲＣ５Ｄ特異的アームは、ヒトＧＰＲＣ５Ｄに結合するが、カニクイザルＧＰＲＣ５Ｄには結合しない。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又は抗原結合フラグメントのＧＰＲＣ５Ｄ特異的アームは、ヒトＧＰＲＣ５Ｄの細胞外ドメインに結合する。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体のＧＰＲＣ５Ｄ結合アーム（又は「ＧＰＲＣ５Ｄ特異的アーム」）は、本明細書に記載されるＧＰＲＣ５Ｄ抗体から（例えば、表２で列記されるＣＤＲ配列を有する抗体から）得られる。
ＴＣＲ／ＣＤ３複合体によるＢＣＭＡ及び／又はＧＰＲＣ５Ｄ発現ＭＭ細胞へのＴリンパ球の再指向は、魅力的な代替アプローチを提示する。Ｔリンパ球のＴＣＲ／ＣＤ３複合体は、ガンマ（γ）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ゼータ（ζ）、及びエータ（η）標識されたＣＤ３の不変のサブユニットと細胞表面で共発現した、ＴＣＲアルファ（α）／ベータ（β）又はＴＣＲガンマ（γ）／デルタ（δ）ヘテロ二量体のいずれかからなる。一部の実施形態では、本明細書に記載される多重特異的抗体又は多重特異的抗原結合フラグメントは、ＣＤ３εに結合する。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体のＣＤ３結合アーム（又は「ＣＤ３特異的アーム」）は、モノクローナル抗体ＣＤ３Ｂ３７６に由来する。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体のＣＤ３結合アーム（又は「ＣＤ３特異的アーム」）は、モノクローナル抗体ＳＰ３４、マウスＩｇＧ３／ラムダアイソタイプに由来する。（Ｋ．Ｒ．Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ａ．Ｃ．Ｍａｒｔｉｎ，２００８．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４５，３８３２－３８３９）。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体のＣＤ３結合アームは、表３に記載される重鎖ＣＤＲ及び／若しくは軽鎖ＣＤＲ、又は表３から選択されるいずれか１つのＶＨドメイン及び／若しくはいずれか１つのＶＬドメインを含む。
一部の実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体のＢＣＭＡ－、ＧＰＲＣ５Ｄ－及び／若しくはＣＤ３特異的アーム又は抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ又はその誘導体である。ＩｇＧクラスは、ヒトにおいて、４つのアイソタイプ：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４に分割される。これらは、Ｆｃ領域のアミノ酸配列において９５％を上回る相同性を共有するが、ヒンジ領域のアミノ酸組成及び構造において主な差異を示す。Ｆｃ領域は、エフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞傷害（antibody-dependent cellular cytotoxicity、ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（complement-dependent cytotoxicity、ＣＤＣ）を媒介する。ＡＤＣＣでは、抗体のＦｃ領域は、免疫エフェクター細胞、例えば、ナチュラルキラー及びマクロファージの表面上のＦｃ受容体（ＦｃγＲ）に結合し、標的細胞の貪食又は溶解をもたらす。ＣＤＣでは、抗体は、細胞表面における補体カスケードをトリガーすることによって、標的細胞を死滅させる。
多くの治療用抗体の適用に関し、Ｆｃに媒介されるエフェクター機能は、作用機序を担わない。これらのＦｃに媒介されるエフェクター機能は、機序外の毒性を引き起こすことにより有害となるおそれがあり、かつ安全性リスクを引き起こすおそれがある。エフェクター機能の改変は、Ｆｃ領域を遺伝子操作して、ＦｃγＲ又は補体因子への結合性を低下させることにより達成され得る。活性化（ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａ、及びＦｃγＲＩＩＩｂ）及び阻害性（ＦｃγＲＩＩｂ）ＦｃγＲ又は補体の第１成分（Ｃ１ｑ）へのＩｇＧの結合性は、ヒンジ領域及びＣＨ２ドメイン中に位置する残基により決まる。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４に変異が導入されると、Ｆｃ機能が低下又はサイレンシングする。
一実施形態では、抗体は、下記特性：（ａ）親Ｆｃと比較した場合、低下したエフェクター機能、（ｂ）ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩｂ及び／又はＦｃγＲＩＩＩａに対する低減された親和性、（ｃ）ＦｃγＲＩに対する低減された親和性、（ｄ）ＦｃγＲＩＩａに対する低減された親和性、（ｅ）ＦｃγＲＩＩｂに対する低減された親和性、（ｆ）ＦｃγＲＩＩＩｂに対する低減された親和性又は（ｇ）ＦｃγＲＩＩＩａに対する低減された親和性、の１つ又は２つ以上の特性を有するＦｃ領域を含む。
一部の実施形態では、多重特異的抗体のＣＤ３特異的アームが得られるＣＤ３特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ又はその誘導体である。一部の実施形態では、多重特異的抗体のＣＤ３特異的アームが得られるＣＤ３特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１又はその誘導体である。一部の実施形態では、例えば、ＣＤ３結合アームが得られるＣＤ３特異的ＩｇＧ１抗体のＦｃ領域は、そのＦｃ領域中に、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＤ２６５Ｓ置換を含む。一部の実施形態では、多重特異的抗体のＣＤ３特異的アームが得られるＣＤ３特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ４又はその誘導体である。一部の実施形態では、例えば、ＣＤ３結合アームが得られるＣＤ３特異的ＩｇＧ４抗体のＦｃ領域は、そのＦｃ領域中に、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｆ４０５Ｌ、及びＲ４０９Ｋ置換を含む。一部の実施形態では、多重特異的抗体のＣＤ３特異的アームが得られるＣＤ３特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、初代ヒトＴ細胞及び／又は初代カニクイザルＴ細胞上のＣＤ３εに結合する。一部の実施形態では、多重特異的抗体のＣＤ３特異的アームが得られるＣＤ３特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、初代ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞及び／又は初代カニクイザルＣＤ４＋Ｔ細胞を活性化する。
記載されるＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体に加えて、記載されるＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体をコードすることが可能なポリヌクレオチド配列も提供される。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメントの各抗原結合アームの重鎖可変ドメインの１つ若しくは２つ以上のＣＤＲ及び／又は軽鎖可変ドメインの１つ若しくは２つ以上のＣＤＲをコードする単離合成ポリヌクレオチドが提供される。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメントの１つ若しくは２つ以上の重鎖可変ドメイン及び／又は１つ若しくは２つ以上の軽鎖可変ドメインをコードする単離合成ポリヌクレオチドが提供される。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメントの第１、第２、及び／又は第３の抗原結合アームの１つ若しくは２つ以上又は複数のポリペプチド鎖をコードする単離合成ポリヌクレオチドが提供される。記載されるポリヌクレオチドを含むベクターも提供され、同様に、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体を発現している細胞も本明細書において提供される。別の実施形態では、多重特異的抗体又は多重特異的結合フラグメントを発現する単離された細胞が提供される。また、開示されるベクターを発現することができる細胞もまた、記載される。これらの細胞は、哺乳動物細胞（例えば、２９３細胞、２９３Ｆ細胞、ＣＨＯ細胞）、昆虫細胞（例えば、Ｓｆ７細胞）、酵母細胞、植物細胞、又は細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）とし得る。記載される抗体はまた、ハイブリドーマ細胞により生成することができる。一部の実施形態では、細胞を培養することにより、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメントを生成するための方法が提供される。
本明細書において、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３三重特異的抗体又は抗原結合フラグメントと、医薬的に許容され得る担体とを含む医薬組成物が更に提供される。
ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体を使用する方法
記載されるＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体及びその多重特異的抗原結合フラグメントを使用する方法もまた開示される。例えば、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体及びその多重特異的抗原結合フラグメントは、ＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡ発現がんの処置を必要とする対象における、その処置に有用であり得る。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡ発現がんは、リンパ腫、例えば、くすぶり型多発性骨髄腫（smoldering multiple myeloma、ＳＭＭ）を含む多発性骨髄腫である。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡ発現がんは、リンパ腫の再発性又は難治性形態、例えば、多発性骨髄腫の再発性又は難治性形態である。
ＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡ発現がんの処置を、かかる処置を必要とする対象において行う記載される方法は、この対象に、治療有効量の記載されるＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又はその多重特異的抗原結合フラグメントを投与する工程を含む。一部の実施形態では、対象は、哺乳動物、好ましくは、ヒトである。好ましい実施形態では、治療有効量のＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３三重特異的抗体又は三重特異的抗原結合フラグメントを、処置を必要とする患者に、がんを処置するのに十分な時間投与することにより、がんを有する対象を処置するための方法が提供される。
がん細胞の成長又は増殖を阻害するために、治療有効量のＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３三重特異的抗体又は三重特異的抗原結合フラグメントを投与することにより、がん細胞の成長又は増殖を阻害するための方法が更に提供される。
また、本明細書において、Ｔ細胞をがんに再指向するために、治療有効量のＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３三重特異的抗体又は三重特異的抗原結合フラグメントを投与することにより、Ｔ細胞をＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡ発現がん細胞に再指向する方法もまた提供される。
当業者は、記載されるＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体及びその多重特異的抗原結合フラグメントを使用する方法が、医薬用途形式で、例えば、本明細書で定義される疾患、特にがんの処置において使用するためのＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体及び多重特異的抗原結合フラグメントの形態で規定され得ることを理解するであろう。当業者はまた、記載されるＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体及びその多重特異的抗原結合フラグメントを使用する方法が、いわゆるＳｗｉｓｓ形式で、例えば、本明細書で定義される疾患、特にがんの処置のための医薬を製造するためにＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体及び多重特異的抗原結合フラグメントを使用する形式で規定され得ることを理解するであろう。これは、本開示全体をとおして適用される。
ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３特異的抗体キット
本明細書において、開示されるＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体を含むキットが記載される。記載されるキットを使用して、本明細書で提供されるＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体を使用する方法、又は当業者に既知の他の方法を実施することができる。一部の実施形態では、記載されるキットは、本明細書に記載される抗体と、ＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡ発現がんの処置に使用するための試薬と、を含み得る。したがって、記載されるキットは、本明細書に記載される多重特異的抗体又はその多重特異的抗原結合フラグメントのうち１つ若しくは２つ以上、使用していないときに抗体又はフラグメントを収容するための容器、並びに／又は抗体若しくはフラグメントを使用するための使用説明書、本明細書に記載されるとおりの、固体支持体に固定された抗体若しくはフラグメント及び／若しくは検出可能に標識された形態の抗体若しくはフラグメントと、を含んでもよい。
ＢＣＭＡ特異的抗体
また、本明細書において、ＢＣＭＡに結合する抗体及びその抗原結合フラグメントが提供される。また、提供されるＢＣＭＡ特異的抗体及び抗原結合フラグメントをコードすることが可能な関連するポリヌクレオチド、提供される抗体及び抗原結合フラグメントを発現している細胞、及び関連するベクター、並びに検出可能に標識された抗体及び抗原結合フラグメントが記載される。加えて、提供される抗体及び抗原結合フラグメントを使用する方法が記載されている。例えば、ＢＣＭＡ特異的抗体及び抗原結合フラグメントを使用して、がん（例えばＢＣＭＡ発現がん）を処置することができ、ＢＣＭＡ特異的抗体及び抗原結合フラグメントを使用して、ＢＣＭＡ発現がんの進行、退縮、又は安定性を診断又はモニターすることができ、患者ががんを処置される必要があるか否かを判定すること、あるいは対象がＢＣＭＡ発現がんに罹患しており、したがってＢＣＭＡ特異的抗がん治療剤、例えば、本明細書に記載されるＢＣＭＡ及びＣＤ３に対する多重特異的抗体による処置に適しているか否かを判定することができる。ＢＣＭＡ特異的抗体又は抗原結合フラグメントのいくつかの態様は、以下の詳細な説明及び実施例のセクションにおいて更に記載される。
ＢＣＭＡ特異的抗体を使用する方法
記載されるＢＣＭＡ特異的抗体又は抗原結合フラグメントを使用する方法もまた開示されている。本セクションにおいて検討される方法で使用する特定の抗体には、表１の抗体に対して記載される一連のＣＤＲを有するものが含まれる（例えばＢＣＭＢ５１９）。例えば、これらの抗体又は抗原結合フラグメントは、ＢＣＭＡ受容体相互作用と干渉することにより、又は抗体に毒素がコンジュゲートされる場合、そのようにして毒物にＢＣＭＡ発現がんを標的とさせることで、がん処置において有用となり得る。更に、これらの抗体又は抗原結合フラグメントは、生体サンプル、例えば、血液又は血清中のＢＣＭＡの存在を検出するために、生体サンプル、例えば、血液又は血清中のＢＣＭＡの量を定量するために、ＢＣＭＡ発現がんを診断するために、がんに罹患している対象を処置する方法を決定することに、あるいは対象におけるＢＣＭＡ発現がんの進行をモニターすることに、有用であり得る。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ発現がんは、リンパ腫、例えば、くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）を含む多発性骨髄腫（ＭＭ）であり得る。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ発現がんは、再発性又は難治性形態のリンパ腫、例えば再発性又は難治性形態の多発性骨髄腫である。記載される方法は、対象がＢＣＭＡ発現がんの処置、例えば、ＢＣＭＡ及びＣＤ３に対する多重特異的抗体による処置を受ける前に実施され得る。更に、記載される方法は、対象がＢＣＭＡ発現がんの処置、例えば、本明細書に記載されるＢＣＭＡ及びＣＤ３に対する多重特異的抗体による処置を受けた後に実施され得る。
生体サンプル中のＢＣＭＡを検出する記載される方法は、生体サンプルを、本明細書に記載されるＢＣＭＡ特異的抗体又は抗原結合フラグメントの１つ又は２つ以上に曝露することを含む。
また、対象におけるＢＣＭＡ発現がんを診断する記載される方法は、生体サンプルを、本明細書に記載されるＢＣＭＡ特異的抗体又は抗原結合フラグメントのうち１つ又は２つ以上に曝露することを伴う。但し、この方法は、サンプル中に存在するＢＣＭＡの量を定量することと、サンプル中に存在するＢＣＭＡの量を、既知の標準又は参照サンプルと比較することと、対象のＢＣＭＡレベルががんに関連付けられるＢＣＭＡのレベル内に入るかどうかを判定することと、を含む。
本明細書において、対象中のＢＣＭＡ発現がんをモニターする方法もまた記載されている。記載される方法は、生体サンプルを、本明細書に記載されるＢＣＭＡ特異的抗体又は抗原結合フラグメントのうち１つ又は２つ以上に曝露することと、抗体又はその抗原結合フラグメントに結合したサンプル中に存在するＢＣＭＡの量を定量することと、サンプル中に存在するＢＣＭＡの量を、既知の標準若しくは参照サンプル、又は対象から以前に得られた同様のサンプル中のＢＣＭＡの量のいずれかと比較することと、比較されたサンプル中のＢＣＭＡの量における差異に基づいて、対象のＢＣＭＡレベルががんの進行、退縮、又は安定状態を示すかどうかを判定することと、を含む。
対象から得られた、又は同対象に由来するサンプルは、生体サンプル、例えば、尿、血液、血清、血漿、唾液、腹水、循環細胞、循環している腫瘍細胞、組織会合していない細胞、組織、外科手術的に切除された腫瘍組織、生検、微細針吸引サンプル、又は組織学的調製物である。
記載されるＢＣＭＡ特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、記載される方法又は当業者に既知の他の方法での使用のために標識され得る。例えば、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合フラグメントは、放射線標識、蛍光標識、エピトープタグ、ビオチン、発色団標識、ＥＣＬ標識、酵素、ルテニウム、１１１Ｉｎ－ＤＯＴＡ、１１１Ｉｎ－ジエチレントリアミン五酢酸（diethylenetriaminepentaacetic acid、ＤＴＰＡ）、西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、及びベータ－ガラクトシダーゼ、又はポリヒスチジン若しくは当技術分野において既知の類似するこのような標識で標識されてもよい。
ＢＣＭＡ特異的抗体キット
開示されたＢＣＭＡ特異的抗体又はその抗原結合フラグメントを含むキットが本明細書において記載されている。記載されるキットを使用して、本明細書に提供されるＢＣＭＡ特異的抗体又は抗原結合フラグメントを使用する方法、又は当業者に既知の他の方法を行うことができる。一部の実施形態では、記載されるキットは、本明細書に記載される抗体又は抗原結合フラグメントと、生体サンプル中のＢＣＭＡの存在を検出する際に使用するための試薬と、を含んでもよい。したがって、記載されるキットは、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合フラグメントのうち１つ又は２つ以上と、使用していないときに抗体又はフラグメントを収容するための容器と、抗体又はフラグメントを使用するための使用説明書と、本明細書に記載されるとおり、固体支持体に固定された抗体若しくはフラグメント及び／又は検出可能に標識された形態の抗体若しくはフラグメントと、を含んでもよい。
ＢＧＣＢ４６３三重特異的抗体（図１Ａ）及び提案された作用様式（図１Ｂ）の図である。 ＢＧＣＢ４６３三重特異的抗体（図１Ａ）及び提案された作用様式（図１Ｂ）の図である。 ＢＧＣＢ４６３（丸）又は陰性対照Ｂ２３Ｂ２５１（三角）を全て、Ｈ９２９野生型（ｗｉｌｄ ｔｙｐｅ、ＷＴ）（図２Ａ）、Ｈ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄノックアウト（ｋｎｏｃｋ ｏｕｔ、ＫＯ）（図２Ｂ）、Ｈ９２９－ＢＣＭＡ ＫＯ（図２Ｃ）、及びＨ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ／ＢＣＭＡ ＫＯ（図２Ｄ）細胞とともに、２μＭの開始濃度で、３７℃で１時間インキュベートした。ＡＦ６４７標識物質による二次検出後、ＭＦＩシグナルを分析して、ＥＣ５０及びＥＣ９０を生成した。曲線は、５回の独立した実験を代表するものである。ＥＣ５０又はＥＣ９０値は、これらの平均である。 ＢＧＣＢ４６３（丸）又は陰性対照Ｂ２３Ｂ２５１（三角）を全て、Ｈ９２９野生型（ｗｉｌｄ ｔｙｐｅ、ＷＴ）（図２Ａ）、Ｈ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄノックアウト（ｋｎｏｃｋ ｏｕｔ、ＫＯ）（図２Ｂ）、Ｈ９２９－ＢＣＭＡ ＫＯ（図２Ｃ）、及びＨ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ／ＢＣＭＡ ＫＯ（図２Ｄ）細胞とともに、２μＭの開始濃度で、３７℃で１時間インキュベートした。ＡＦ６４７標識物質による二次検出後、ＭＦＩシグナルを分析して、ＥＣ５０及びＥＣ９０を生成した。曲線は、５回の独立した実験を代表するものである。ＥＣ５０又はＥＣ９０値は、これらの平均である。 ＢＧＣＢ４６３（丸）又は陰性対照Ｂ２３Ｂ２５１（三角）を全て、Ｈ９２９野生型（ｗｉｌｄ ｔｙｐｅ、ＷＴ）（図２Ａ）、Ｈ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄノックアウト（ｋｎｏｃｋ ｏｕｔ、ＫＯ）（図２Ｂ）、Ｈ９２９－ＢＣＭＡ ＫＯ（図２Ｃ）、及びＨ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ／ＢＣＭＡ ＫＯ（図２Ｄ）細胞とともに、２μＭの開始濃度で、３７℃で１時間インキュベートした。ＡＦ６４７標識物質による二次検出後、ＭＦＩシグナルを分析して、ＥＣ５０及びＥＣ９０を生成した。曲線は、５回の独立した実験を代表するものである。ＥＣ５０又はＥＣ９０値は、これらの平均である。 ＢＧＣＢ４６３（丸）又は陰性対照Ｂ２３Ｂ２５１（三角）を全て、Ｈ９２９野生型（ｗｉｌｄ ｔｙｐｅ、ＷＴ）（図２Ａ）、Ｈ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄノックアウト（ｋｎｏｃｋ ｏｕｔ、ＫＯ）（図２Ｂ）、Ｈ９２９－ＢＣＭＡ ＫＯ（図２Ｃ）、及びＨ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ／ＢＣＭＡ ＫＯ（図２Ｄ）細胞とともに、２μＭの開始濃度で、３７℃で１時間インキュベートした。ＡＦ６４７標識物質による二次検出後、ＭＦＩシグナルを分析して、ＥＣ５０及びＥＣ９０を生成した。曲線は、５回の独立した実験を代表するものである。ＥＣ５０又はＥＣ９０値は、これらの平均である。 ＢＧＣＢ４６３（丸）又は陰性対照Ｂ２３Ｂ２５１（三角）を全て、ＭＭ．１Ｒ ＷＴ（図３Ａ）、ＭＭ．１Ｒ－ＧＰＲＣ５Ｄ ＫＯ（図３Ｂ）、ＭＭ．１Ｒ－ＢＣＭＡ ＫＯ（図３Ｃ）、及びＭＭ．１Ｒ－ＧＰＲＣ５Ｄ／ＢＣＭＡ ＫＯ（図３Ｄ）細胞とともに、２μＭの開始濃度で、３７℃で１時間インキュベートした。ＡＦ６４７標識物質による二次検出後、ＭＦＩシグナルを分析して、ＥＣ５０及びＥＣ９０を生成した。曲線は、５回の独立した実験を代表するものである。 ＢＧＣＢ４６３（丸）又は陰性対照Ｂ２３Ｂ２５１（三角）を全て、ＭＭ．１Ｒ ＷＴ（図３Ａ）、ＭＭ．１Ｒ－ＧＰＲＣ５Ｄ ＫＯ（図３Ｂ）、ＭＭ．１Ｒ－ＢＣＭＡ ＫＯ（図３Ｃ）、及びＭＭ．１Ｒ－ＧＰＲＣ５Ｄ／ＢＣＭＡ ＫＯ（図３Ｄ）細胞とともに、２μＭの開始濃度で、３７℃で１時間インキュベートした。ＡＦ６４７標識物質による二次検出後、ＭＦＩシグナルを分析して、ＥＣ５０及びＥＣ９０を生成した。曲線は、５回の独立した実験を代表するものである。 ＢＧＣＢ４６３（丸）又は陰性対照Ｂ２３Ｂ２５１（三角）を全て、ＭＭ．１Ｒ ＷＴ（図３Ａ）、ＭＭ．１Ｒ－ＧＰＲＣ５Ｄ ＫＯ（図３Ｂ）、ＭＭ．１Ｒ－ＢＣＭＡ ＫＯ（図３Ｃ）、及びＭＭ．１Ｒ－ＧＰＲＣ５Ｄ／ＢＣＭＡ ＫＯ（図３Ｄ）細胞とともに、２μＭの開始濃度で、３７℃で１時間インキュベートした。ＡＦ６４７標識物質による二次検出後、ＭＦＩシグナルを分析して、ＥＣ５０及びＥＣ９０を生成した。曲線は、５回の独立した実験を代表するものである。 ＢＧＣＢ４６３（丸）又は陰性対照Ｂ２３Ｂ２５１（三角）を全て、ＭＭ．１Ｒ ＷＴ（図３Ａ）、ＭＭ．１Ｒ－ＧＰＲＣ５Ｄ ＫＯ（図３Ｂ）、ＭＭ．１Ｒ－ＢＣＭＡ ＫＯ（図３Ｃ）、及びＭＭ．１Ｒ－ＧＰＲＣ５Ｄ／ＢＣＭＡ ＫＯ（図３Ｄ）細胞とともに、２μＭの開始濃度で、３７℃で１時間インキュベートした。ＡＦ６４７標識物質による二次検出後、ＭＦＩシグナルを分析して、ＥＣ５０及びＥＣ９０を生成した。曲線は、５回の独立した実験を代表するものである。 ＢＧＣＢ４６３（丸）又は陰性対照Ｂ２３Ｂ２５１（三角）を全て、汎Ｔ細胞（３人の無作為ドナー、図４Ａ～４Ｃ）と、２μＭの開始濃度で、３７℃で１時間インキュベートした。ＡＦ６４７標識物質による二次検出後、ＭＦＩシグナルを分析して、ＥＣ５０及びＥＣ９０を生成した。データは、いずれも３人のドナーによる２回の個々の実行を代表するものである。 ＢＧＣＢ４６３（丸）又は陰性対照Ｂ２３Ｂ２５１（三角）を全て、汎Ｔ細胞（３人の無作為ドナー、図４Ａ～４Ｃ）と、２μＭの開始濃度で、３７℃で１時間インキュベートした。ＡＦ６４７標識物質による二次検出後、ＭＦＩシグナルを分析して、ＥＣ５０及びＥＣ９０を生成した。データは、いずれも３人のドナーによる２回の個々の実行を代表するものである。 ＢＧＣＢ４６３（丸）又は陰性対照Ｂ２３Ｂ２５１（三角）を全て、汎Ｔ細胞（３人の無作為ドナー、図４Ａ～４Ｃ）と、２μＭの開始濃度で、３７℃で１時間インキュベートした。ＡＦ６４７標識物質による二次検出後、ＭＦＩシグナルを分析して、ＥＣ５０及びＥＣ９０を生成した。データは、いずれも３人のドナーによる２回の個々の実行を代表するものである。 ＢＧＣＢ４６３を、汎Ｔ細胞（３人の無作為ドナー、図５Ａ、図５Ｂ、及び図５Ｃ）とともに、２μＭの開始濃度で、４℃（丸）又は３７℃（三角）で１時間インキュベートした。ＡＦ６４７標識物質による二次検出の後、ＭＦＩシグナルを分析してＥＣ５０を生成した。 ＢＧＣＢ４６３を、汎Ｔ細胞（３人の無作為ドナー、図５Ａ、図５Ｂ、及び図５Ｃ）とともに、２μＭの開始濃度で、４℃（丸）又は３７℃（三角）で１時間インキュベートした。ＡＦ６４７標識物質による二次検出の後、ＭＦＩシグナルを分析してＥＣ５０を生成した。 ＢＧＣＢ４６３を、汎Ｔ細胞（３人の無作為ドナー、図５Ａ、図５Ｂ、及び図５Ｃ）とともに、２μＭの開始濃度で、４℃（丸）又は３７℃（三角）で１時間インキュベートした。ＡＦ６４７標識物質による二次検出の後、ＭＦＩシグナルを分析してＥＣ５０を生成した。 ＢＧＣＢ４６３．００３（丸）、ＢＧＣＢ４６３．００４（四角）、及び陰性対照Ｂ２３Ｂ２５１（三角）を、３人のドナーからのＨ９２９（図６Ａ）、ＭＭ．１Ｒ（図６Ｂ）、及び汎Ｔ（図６Ｃ）細胞で試験した。分子を、２μＭの開始濃度で、３７℃で１時間インキュベートした。ＡＦ６４７標識物質による二次検出の後、ＭＦＩシグナルを分析した。 ＢＧＣＢ４６３．００３（丸）、ＢＧＣＢ４６３．００４（四角）、及び陰性対照Ｂ２３Ｂ２５１（三角）を、３人のドナーからのＨ９２９（図６Ａ）、ＭＭ．１Ｒ（図６Ｂ）、及び汎Ｔ（図６Ｃ）細胞で試験した。分子を、２μＭの開始濃度で、３７℃で１時間インキュベートした。ＡＦ６４７標識物質による二次検出の後、ＭＦＩシグナルを分析した。 ＢＧＣＢ４６３．００３（丸）、ＢＧＣＢ４６３．００４（四角）、及び陰性対照Ｂ２３Ｂ２５１（三角）を、３人のドナーからのＨ９２９（図６Ａ）、ＭＭ．１Ｒ（図６Ｂ）、及び汎Ｔ（図６Ｃ）細胞で試験した。分子を、２μＭの開始濃度で、３７℃で１時間インキュベートした。ＡＦ６４７標識物質による二次検出の後、ＭＦＩシグナルを分析した。 Ｈ９２９（図７Ａ）、Ｈ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ ＫＯ（図７Ｂ）、Ｈ９２９－ＢＣＭＡ ＫＯ（図７Ｃ）、及びＨ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ／ＢＣＭＡ ＫＯ（図７Ｄ）細胞を全て、ＢＧＣＢ４６３の３つの最適化された濃度で、３７℃で１時間、３時間、５時間、及び２４時間インキュベートした。次いで、細胞を洗浄し、ＡＦ６４７－抗ヒトＩｇＧとともに氷上で３０分間インキュベートした。読み出しは、ＡＦ６４７シグナルのＭＦＩである。 Ｈ９２９（図７Ａ）、Ｈ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ ＫＯ（図７Ｂ）、Ｈ９２９－ＢＣＭＡ ＫＯ（図７Ｃ）、及びＨ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ／ＢＣＭＡ ＫＯ（図７Ｄ）細胞を全て、ＢＧＣＢ４６３の３つの最適化された濃度で、３７℃で１時間、３時間、５時間、及び２４時間インキュベートした。次いで、細胞を洗浄し、ＡＦ６４７－抗ヒトＩｇＧとともに氷上で３０分間インキュベートした。読み出しは、ＡＦ６４７シグナルのＭＦＩである。 Ｈ９２９（図７Ａ）、Ｈ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ ＫＯ（図７Ｂ）、Ｈ９２９－ＢＣＭＡ ＫＯ（図７Ｃ）、及びＨ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ／ＢＣＭＡ ＫＯ（図７Ｄ）細胞を全て、ＢＧＣＢ４６３の３つの最適化された濃度で、３７℃で１時間、３時間、５時間、及び２４時間インキュベートした。次いで、細胞を洗浄し、ＡＦ６４７－抗ヒトＩｇＧとともに氷上で３０分間インキュベートした。読み出しは、ＡＦ６４７シグナルのＭＦＩである。 Ｈ９２９（図７Ａ）、Ｈ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ ＫＯ（図７Ｂ）、Ｈ９２９－ＢＣＭＡ ＫＯ（図７Ｃ）、及びＨ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ／ＢＣＭＡ ＫＯ（図７Ｄ）細胞を全て、ＢＧＣＢ４６３の３つの最適化された濃度で、３７℃で１時間、３時間、５時間、及び２４時間インキュベートした。次いで、細胞を洗浄し、ＡＦ６４７－抗ヒトＩｇＧとともに氷上で３０分間インキュベートした。読み出しは、ＡＦ６４７シグナルのＭＦＩである。 ＭＭ．１Ｒ ＷＴ（図８Ａ）、ＭＭ．１Ｒ－ＧＰＲＣ５Ｄ ＫＯ（図８Ｂ）、ＭＭ．１Ｒ－ＢＣＭＡ ＫＯ（図８Ｃ）、及びＭＭ．１Ｒ－ＧＰＲＣ５Ｄ／ＢＣＭＡ ＫＯ（図８Ｄ）細胞を全て、ＢＧＣＢ４６３の３つの最適化された濃度で、３７℃で１時間、３時間、５時間、及び２４時間インキュベートした。次いで、細胞を洗浄し、ＡＦ６４７－抗ヒトＩｇＧとともに氷上で３０分間インキュベートした。読み出しは、ＡＦ６４７シグナルのＭＦＩである。 ＭＭ．１Ｒ ＷＴ（図８Ａ）、ＭＭ．１Ｒ－ＧＰＲＣ５Ｄ ＫＯ（図８Ｂ）、ＭＭ．１Ｒ－ＢＣＭＡ ＫＯ（図８Ｃ）、及びＭＭ．１Ｒ－ＧＰＲＣ５Ｄ／ＢＣＭＡ ＫＯ（図８Ｄ）細胞を全て、ＢＧＣＢ４６３の３つの最適化された濃度で、３７℃で１時間、３時間、５時間、及び２４時間インキュベートした。次いで、細胞を洗浄し、ＡＦ６４７－抗ヒトＩｇＧとともに氷上で３０分間インキュベートした。読み出しは、ＡＦ６４７シグナルのＭＦＩである。 ＭＭ．１Ｒ ＷＴ（図８Ａ）、ＭＭ．１Ｒ－ＧＰＲＣ５Ｄ ＫＯ（図８Ｂ）、ＭＭ．１Ｒ－ＢＣＭＡ ＫＯ（図８Ｃ）、及びＭＭ．１Ｒ－ＧＰＲＣ５Ｄ／ＢＣＭＡ ＫＯ（図８Ｄ）細胞を全て、ＢＧＣＢ４６３の３つの最適化された濃度で、３７℃で１時間、３時間、５時間、及び２４時間インキュベートした。次いで、細胞を洗浄し、ＡＦ６４７－抗ヒトＩｇＧとともに氷上で３０分間インキュベートした。読み出しは、ＡＦ６４７シグナルのＭＦＩである。 ＭＭ．１Ｒ ＷＴ（図８Ａ）、ＭＭ．１Ｒ－ＧＰＲＣ５Ｄ ＫＯ（図８Ｂ）、ＭＭ．１Ｒ－ＢＣＭＡ ＫＯ（図８Ｃ）、及びＭＭ．１Ｒ－ＧＰＲＣ５Ｄ／ＢＣＭＡ ＫＯ（図８Ｄ）細胞を全て、ＢＧＣＢ４６３の３つの最適化された濃度で、３７℃で１時間、３時間、５時間、及び２４時間インキュベートした。次いで、細胞を洗浄し、ＡＦ６４７－抗ヒトＩｇＧとともに氷上で３０分間インキュベートした。読み出しは、ＡＦ６４７シグナルのＭＦＩである。 ＢＧＣＢ４６３（丸）又は陰性対照Ｂ２３Ｂ２５１（三角）を全て、ヒトＧＰＲＣ５Ｄ（図９Ａ）、ヒトＢＣＭＡ（図９Ｂ）、カニクイザルＧＰＲＣ５Ｄ（図９Ｃ）又はカニクイザルＢＣＭＡ（図９Ｄ）を発現するＫ５６２細胞とともに、２μＭの開始濃度で、３７℃で１時間インキュベートした。ＡＦ６４７－抗ヒトＩｇＧによる二次検出後、ＭＦＩシグナルを分析して、ＥＣ５０及びＥＣ９０を生成した（図９Ｅ）。データは、２回の独立した実験を代表するものである。 ＢＧＣＢ４６３（丸）又は陰性対照Ｂ２３Ｂ２５１（三角）を全て、ヒトＧＰＲＣ５Ｄ（図９Ａ）、ヒトＢＣＭＡ（図９Ｂ）、カニクイザルＧＰＲＣ５Ｄ（図９Ｃ）又はカニクイザルＢＣＭＡ（図９Ｄ）を発現するＫ５６２細胞とともに、２μＭの開始濃度で、３７℃で１時間インキュベートした。ＡＦ６４７－抗ヒトＩｇＧによる二次検出後、ＭＦＩシグナルを分析して、ＥＣ５０及びＥＣ９０を生成した（図９Ｅ）。データは、２回の独立した実験を代表するものである。 ＢＧＣＢ４６３（丸）又は陰性対照Ｂ２３Ｂ２５１（三角）を全て、ヒトＧＰＲＣ５Ｄ（図９Ａ）、ヒトＢＣＭＡ（図９Ｂ）、カニクイザルＧＰＲＣ５Ｄ（図９Ｃ）又はカニクイザルＢＣＭＡ（図９Ｄ）を発現するＫ５６２細胞とともに、２μＭの開始濃度で、３７℃で１時間インキュベートした。ＡＦ６４７－抗ヒトＩｇＧによる二次検出後、ＭＦＩシグナルを分析して、ＥＣ５０及びＥＣ９０を生成した（図９Ｅ）。データは、２回の独立した実験を代表するものである。 ＢＧＣＢ４６３（丸）又は陰性対照Ｂ２３Ｂ２５１（三角）を全て、ヒトＧＰＲＣ５Ｄ（図９Ａ）、ヒトＢＣＭＡ（図９Ｂ）、カニクイザルＧＰＲＣ５Ｄ（図９Ｃ）又はカニクイザルＢＣＭＡ（図９Ｄ）を発現するＫ５６２細胞とともに、２μＭの開始濃度で、３７℃で１時間インキュベートした。ＡＦ６４７－抗ヒトＩｇＧによる二次検出後、ＭＦＩシグナルを分析して、ＥＣ５０及びＥＣ９０を生成した（図９Ｅ）。データは、２回の独立した実験を代表するものである。 ＢＧＣＢ４６３（丸）又は陰性対照Ｂ２３Ｂ２５１（三角）を全て、ヒトＧＰＲＣ５Ｄ（図９Ａ）、ヒトＢＣＭＡ（図９Ｂ）、カニクイザルＧＰＲＣ５Ｄ（図９Ｃ）又はカニクイザルＢＣＭＡ（図９Ｄ）を発現するＫ５６２細胞とともに、２μＭの開始濃度で、３７℃で１時間インキュベートした。ＡＦ６４７－抗ヒトＩｇＧによる二次検出後、ＭＦＩシグナルを分析して、ＥＣ５０及びＥＣ９０を生成した（図９Ｅ）。データは、２回の独立した実験を代表するものである。 １０ｎＭの開始濃度のＢＧＣＢ４６３（丸）又は陰性対照Ｂ２３Ｂ２５１（三角）を、ヒト若しくはカニクイザルＧＰＲＣ５Ｄを発現するＫ５６２細胞、又は標的細胞としてヒト／カニクイザルＢＣＭＡを発現するＫ５６２については１００ｎＭとともにインキュベートした。図１０Ａではヒト活性化及び細胞傷害性。図１０Ｂではカニクイザル活性化及び細胞傷害性。ヒト汎Ｔ細胞（１ドナー）に対し、エフェクター対標的（effector to target、Ｅ：Ｔ）比３：１で添加し、３７℃で７２時間インキュベートした。生存／死滅固定可能色素を使用して細胞傷害性を決定し、ＢＶ４２１コンジュゲート抗ＣＤ２５を使用してＣＤ２５を測定した。 １０ｎＭの開始濃度のＢＧＣＢ４６３（丸）又は陰性対照Ｂ２３Ｂ２５１（三角）を、ヒト若しくはカニクイザルＧＰＲＣ５Ｄを発現するＫ５６２細胞、又は標的細胞としてヒト／カニクイザルＢＣＭＡを発現するＫ５６２については１００ｎＭとともにインキュベートした。図１０Ａではヒト活性化及び細胞傷害性。図１０Ｂではカニクイザル活性化及び細胞傷害性。ヒト汎Ｔ細胞（１ドナー）に対し、エフェクター対標的（effector to target、Ｅ：Ｔ）比３：１で添加し、３７℃で７２時間インキュベートした。生存／死滅固定可能色素を使用して細胞傷害性を決定し、ＢＶ４２１コンジュゲート抗ＣＤ２５を使用してＣＤ２５を測定した。 Ｈ９２９細胞を、漸増濃度のＢＧＣＢ４６３又は陰性対照Ｂ２３Ｂ２５１とともに３７℃で１時間インキュベートし、その際、培地（１０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ）又は９０％ヒト血清を含有するＲＰＭＩの存在下で、ＡＦ６４７－抗ヒトＩｇＧを共存させた。ＢＧＣＢ４６３結合は、血清の存在によって影響を受けない。 Ｔ細胞を、漸増濃度のＢＧＣＢ４６３又は陰性対照Ｂ２３Ｂ２５１とともに３７℃で１時間インキュベートし、その際、培地（１０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ）又は９０％ヒト血清を含有するＲＰＭＩの存在下で、ＡＦ６４７－抗ヒトＩｇＧを共存させた。データは、２つの実験において試験された３人のドナーを代表するものである。ＢＧＣＢ４６３結合は、血清の存在によって影響を受けない。 Ｈ９２９－ＧＦＰ細胞を、３人のドナーからのＢＧＣＢ４６３及びヒト汎Ｔ細胞とともにインキュベートし、Ｅ：Ｔ比３：１で、抗ＣＤ２５－ＡＦ６４７を添加し、Ｔ細胞活性化を追跡した（図１３Ａ）。細胞溶解パーセントを、処理ウェル対未処理ウェルにおけるＧＦＰシグナルに基づいて計算した（図１３Ｂ）。インキュベーションを約１４０時間続け、画像を３時間毎に取得した。 Ｈ９２９－ＧＦＰ細胞を、３人のドナーからのＢＧＣＢ４６３及びヒト汎Ｔ細胞とともにインキュベートし、Ｅ：Ｔ比３：１で、抗ＣＤ２５－ＡＦ６４７を添加し、Ｔ細胞活性化を追跡した（図１３Ａ）。細胞溶解パーセントを、処理ウェル対未処理ウェルにおけるＧＦＰシグナルに基づいて計算した（図１３Ｂ）。インキュベーションを約１４０時間続け、画像を３時間毎に取得した。 Ｈ９２９－ＧＦＰ細胞を、ＢＧＣＢ４６３又はＢ２３Ｂ２５１（アイソタイプ対照）分子及び４人のドナーからのヒト汎Ｔ細胞とともに、Ｅ：Ｔ比１：１及び５：１で、抗ＣＤ２５－ＡＦ６４７を添加し、Ｔ細胞活性化を追跡した。細胞溶解パーセントを、処理ウェル対未処理ウェルにおけるＧＦＰシグナルに基づいて計算した。インキュベーションを約１４０時間続け、画像を３時間毎に取得した。ＢＧＣＢ４６３、１：１比、細胞溶解（図１４Ａ）。ＢＧＣＢ４６３、１：１比、全積分強度（図１４Ｂ）。ＢＧＣＢ４６３、５：１比、細胞溶解（図１４Ｃ）。ＢＧＣＢ４６３、５：１比、全積分強度（図１４Ｄ）。Ｂ２３Ｂ２５１、５：１比、細胞溶解（図１４Ｅ）。Ｂ２３Ｂ２５１、５：１比、全積分強度（図１４Ｆ）。 Ｈ９２９－ＧＦＰ細胞を、ＢＧＣＢ４６３又はＢ２３Ｂ２５１（アイソタイプ対照）分子及び４人のドナーからのヒト汎Ｔ細胞とともに、Ｅ：Ｔ比１：１及び５：１で、抗ＣＤ２５－ＡＦ６４７を添加し、Ｔ細胞活性化を追跡した。細胞溶解パーセントを、処理ウェル対未処理ウェルにおけるＧＦＰシグナルに基づいて計算した。インキュベーションを約１４０時間続け、画像を３時間毎に取得した。ＢＧＣＢ４６３、１：１比、細胞溶解（図１４Ａ）。ＢＧＣＢ４６３、１：１比、全積分強度（図１４Ｂ）。ＢＧＣＢ４６３、５：１比、細胞溶解（図１４Ｃ）。ＢＧＣＢ４６３、５：１比、全積分強度（図１４Ｄ）。Ｂ２３Ｂ２５１、５：１比、細胞溶解（図１４Ｅ）。Ｂ２３Ｂ２５１、５：１比、全積分強度（図１４Ｆ）。 Ｈ９２９－ＧＦＰ細胞を、ＢＧＣＢ４６３又はＢ２３Ｂ２５１（アイソタイプ対照）分子及び４人のドナーからのヒト汎Ｔ細胞とともに、Ｅ：Ｔ比１：１及び５：１で、抗ＣＤ２５－ＡＦ６４７を添加し、Ｔ細胞活性化を追跡した。細胞溶解パーセントを、処理ウェル対未処理ウェルにおけるＧＦＰシグナルに基づいて計算した。インキュベーションを約１４０時間続け、画像を３時間毎に取得した。ＢＧＣＢ４６３、１：１比、細胞溶解（図１４Ａ）。ＢＧＣＢ４６３、１：１比、全積分強度（図１４Ｂ）。ＢＧＣＢ４６３、５：１比、細胞溶解（図１４Ｃ）。ＢＧＣＢ４６３、５：１比、全積分強度（図１４Ｄ）。Ｂ２３Ｂ２５１、５：１比、細胞溶解（図１４Ｅ）。Ｂ２３Ｂ２５１、５：１比、全積分強度（図１４Ｆ）。 Ｈ９２９－ＧＦＰ細胞を、ＢＧＣＢ４６３又はＢ２３Ｂ２５１（アイソタイプ対照）分子及び４人のドナーからのヒト汎Ｔ細胞とともに、Ｅ：Ｔ比１：１及び５：１で、抗ＣＤ２５－ＡＦ６４７を添加し、Ｔ細胞活性化を追跡した。細胞溶解パーセントを、処理ウェル対未処理ウェルにおけるＧＦＰシグナルに基づいて計算した。インキュベーションを約１４０時間続け、画像を３時間毎に取得した。ＢＧＣＢ４６３、１：１比、細胞溶解（図１４Ａ）。ＢＧＣＢ４６３、１：１比、全積分強度（図１４Ｂ）。ＢＧＣＢ４６３、５：１比、細胞溶解（図１４Ｃ）。ＢＧＣＢ４６３、５：１比、全積分強度（図１４Ｄ）。Ｂ２３Ｂ２５１、５：１比、細胞溶解（図１４Ｅ）。Ｂ２３Ｂ２５１、５：１比、全積分強度（図１４Ｆ）。 Ｈ９２９－ＧＦＰ細胞を、ＢＧＣＢ４６３又はＢ２３Ｂ２５１（アイソタイプ対照）分子及び４人のドナーからのヒト汎Ｔ細胞とともに、Ｅ：Ｔ比１：１及び５：１で、抗ＣＤ２５－ＡＦ６４７を添加し、Ｔ細胞活性化を追跡した。細胞溶解パーセントを、処理ウェル対未処理ウェルにおけるＧＦＰシグナルに基づいて計算した。インキュベーションを約１４０時間続け、画像を３時間毎に取得した。ＢＧＣＢ４６３、１：１比、細胞溶解（図１４Ａ）。ＢＧＣＢ４６３、１：１比、全積分強度（図１４Ｂ）。ＢＧＣＢ４６３、５：１比、細胞溶解（図１４Ｃ）。ＢＧＣＢ４６３、５：１比、全積分強度（図１４Ｄ）。Ｂ２３Ｂ２５１、５：１比、細胞溶解（図１４Ｅ）。Ｂ２３Ｂ２５１、５：１比、全積分強度（図１４Ｆ）。 Ｈ９２９－ＧＦＰ細胞を、ＢＧＣＢ４６３又はＢ２３Ｂ２５１（アイソタイプ対照）分子及び４人のドナーからのヒト汎Ｔ細胞とともに、Ｅ：Ｔ比１：１及び５：１で、抗ＣＤ２５－ＡＦ６４７を添加し、Ｔ細胞活性化を追跡した。細胞溶解パーセントを、処理ウェル対未処理ウェルにおけるＧＦＰシグナルに基づいて計算した。インキュベーションを約１４０時間続け、画像を３時間毎に取得した。ＢＧＣＢ４６３、１：１比、細胞溶解（図１４Ａ）。ＢＧＣＢ４６３、１：１比、全積分強度（図１４Ｂ）。ＢＧＣＢ４６３、５：１比、細胞溶解（図１４Ｃ）。ＢＧＣＢ４６３、５：１比、全積分強度（図１４Ｄ）。Ｂ２３Ｂ２５１、５：１比、細胞溶解（図１４Ｅ）。Ｂ２３Ｂ２５１、５：１比、全積分強度（図１４Ｆ）。 患者血清を使用する可溶性ＢＣＭＡ干渉の決定。ドナー１（図１５Ａ）、ドナー２）（図１５Ｂ）、ドナー３（図１５Ｃ）、及び正常血清（図１５Ｄ）。ｓＢＣＭＡのレベルが分かっている患者血清を、直接標識したＢＧＣＢ４６３－ＡＦ６４７及びＢ２３Ｂ２５１－ＡＦ６４７アイソタイプ対照とともに、Ｈ９２９細胞上３７℃で１時間インキュベートした（９０％血清対１０％培地）。５０％及び１０％患者血清を正常血清で希釈して、それぞれ５０％及び１０％の最終濃度にした。 患者血清を使用する可溶性ＢＣＭＡ干渉の決定。ドナー１（図１５Ａ）、ドナー２）（図１５Ｂ）、ドナー３（図１５Ｃ）、及び正常血清（図１５Ｄ）。ｓＢＣＭＡのレベルが分かっている患者血清を、直接標識したＢＧＣＢ４６３－ＡＦ６４７及びＢ２３Ｂ２５１－ＡＦ６４７アイソタイプ対照とともに、Ｈ９２９細胞上３７℃で１時間インキュベートした（９０％血清対１０％培地）。５０％及び１０％患者血清を正常血清で希釈して、それぞれ５０％及び１０％の最終濃度にした。 患者血清を使用する可溶性ＢＣＭＡ干渉の決定。ドナー１（図１５Ａ）、ドナー２）（図１５Ｂ）、ドナー３（図１５Ｃ）、及び正常血清（図１５Ｄ）。ｓＢＣＭＡのレベルが分かっている患者血清を、直接標識したＢＧＣＢ４６３－ＡＦ６４７及びＢ２３Ｂ２５１－ＡＦ６４７アイソタイプ対照とともに、Ｈ９２９細胞上３７℃で１時間インキュベートした（９０％血清対１０％培地）。５０％及び１０％患者血清を正常血清で希釈して、それぞれ５０％及び１０％の最終濃度にした。 患者血清を使用する可溶性ＢＣＭＡ干渉の決定。ドナー１（図１５Ａ）、ドナー２）（図１５Ｂ）、ドナー３（図１５Ｃ）、及び正常血清（図１５Ｄ）。ｓＢＣＭＡのレベルが分かっている患者血清を、直接標識したＢＧＣＢ４６３－ＡＦ６４７及びＢ２３Ｂ２５１－ＡＦ６４７アイソタイプ対照とともに、Ｈ９２９細胞上３７℃で１時間インキュベートした（９０％血清対１０％培地）。５０％及び１０％患者血清を正常血清で希釈して、それぞれ５０％及び１０％の最終濃度にした。 ＢＧＣＢ４９１三重特異的抗体の図である。 ＢＧＣＢ４６３、ＢＧＣＢ４９１、及び３つの対照（ＢＧＣＢ４８２（ＣＤ３×Ｎｕｌｌ×Ｎｕｌｌ）、ＢＧＣＢ４８３（ＣＤ３×Ｎｕｌｌ×ＢＣＭＡ）、ＢＧＣＢ４８４（ＣＤ３×ＧＰＲＣ５Ｄ×Ｎｕｌｌ））を、ＢＣＭＡ＋ＧＰＲＣ５Ｄ＋細胞（図１７Ａ）及びＢＣＭＡ－ＧＰＲＣ５Ｄ－細胞（図１７Ｂ）に対して試験した。エフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比３：１、ｎ＝１のＴ細胞ドナー、７２時間インキュベーション、最高濃度５３ｎＭ、１～５倍希釈。細胞傷害性及びＴ細胞活性化の両方について試験を行った。 ＢＧＣＢ４６３、ＢＧＣＢ４９１、及び３つの対照（ＢＧＣＢ４８２（ＣＤ３×Ｎｕｌｌ×Ｎｕｌｌ）、ＢＧＣＢ４８３（ＣＤ３×Ｎｕｌｌ×ＢＣＭＡ）、ＢＧＣＢ４８４（ＣＤ３×ＧＰＲＣ５Ｄ×Ｎｕｌｌ））を、ＢＣＭＡ＋ＧＰＲＣ５Ｄ＋細胞（図１７Ａ）及びＢＣＭＡ－ＧＰＲＣ５Ｄ－細胞（図１７Ｂ）に対して試験した。エフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比３：１、ｎ＝１のＴ細胞ドナー、７２時間インキュベーション、最高濃度５３ｎＭ、１～５倍希釈。細胞傷害性及びＴ細胞活性化の両方について試験を行った。 ＢＧＣＢ４６３及びＢＧＣＢ４９１は、一次インキュベーションの７２時間後及び９６時間後の両方で、Ｈ９２９ ＷＴ、ＧＰＲＣ５Ｄ ＫＯ、及びＢＣＭＡ ＫＯ細胞株を枯渇させた（図１８Ａ）。Ｅ：Ｔ比は３：１であり、ｎ＝５のＴ細胞ドナー；７２（５）及び９６（４）時間のインキュベーション、最高濃度５３２ｍＭ、１～５の希釈勾配。いずれの抗体も、上記と同じＨ９２９ ＷＴ、ＧＰＲＣ５Ｄ ＫＯ、及びＢＣＭＡ ＫＯ細胞において７２時間及び９６時間の両方でＴ細胞活性化の増加を示す（図１８Ｂ）。 ＢＧＣＢ４６３及びＢＧＣＢ４９１は、一次インキュベーションの７２時間後及び９６時間後の両方で、Ｈ９２９ ＷＴ、ＧＰＲＣ５Ｄ ＫＯ、及びＢＣＭＡ ＫＯ細胞株を枯渇させた（図１８Ａ）。Ｅ：Ｔ比は３：１であり、ｎ＝５のＴ細胞ドナー；７２（５）及び９６（４）時間のインキュベーション、最高濃度５３２ｍＭ、１～５の希釈勾配。いずれの抗体も、上記と同じＨ９２９ ＷＴ、ＧＰＲＣ５Ｄ ＫＯ、及びＢＣＭＡ ＫＯ細胞において７２時間及び９６時間の両方でＴ細胞活性化の増加を示す（図１８Ｂ）。 ＢＧＣＢ４６３及びＢＧＣＢ４９１を、Ｈ９２９、ＲＡＭＯＳ、及びＧＲＡＮＴＡ－５１９細胞株を用いた細胞傷害性及びＴ細胞活性化アッセイにおいて試験した。Ｅ：Ｔは５：１であり、ｎ＝１のＴ細胞ドナー；７２時間インキュベーションのみ、最高濃度５３ｎＭ；及び１～５倍希釈。 ＢＧＣＢ４６３及びＢＧＣＢ４９１を、Ｈ２９２細胞を用いた細胞傷害性及びＴ細胞活性化全血アッセイにおいて試験した。Ｅ：Ｔは５：１、ｎ＝２の全血ドナー、４８時間インキュベーション、最高濃度５３２ｎＭ；及び１～５倍希釈。 ＢＧＣＢ４６３は、十分に高い用量、つまり、ＭＭ．１Ｓモデルにおいては２ｕｇ若しくは１０ｕｇ（図２１Ａ）又はＲＰＭＩ ８２２６モデルにおいては５ｕｇ若しくは１０ｕｇ（図２１Ｂ）のいずれかで投与された場合、ＭＭ．１Ｓ及びＲＰＭＩ ８２２６異種移植マウスモデルにおいて腫瘍増殖を退行させることが示された。 ＢＧＣＢ４６３は、十分に高い用量、つまり、ＭＭ．１Ｓモデルにおいては２ｕｇ若しくは１０ｕｇ（図２１Ａ）又はＲＰＭＩ ８２２６モデルにおいては５ｕｇ若しくは１０ｕｇ（図２１Ｂ）のいずれかで投与された場合、ＭＭ．１Ｓ及びＲＰＭＩ ８２２６異種移植マウスモデルにおいて腫瘍増殖を退行させることが示された。 ＢＧＣＢ４６３及びＢＧＣＢ４９１は、Ｈ９２９予防異種移植マウスモデルにおいて腫瘍増殖を退行させることが示された。ＰＢＳ対照と比較して、０．５ｕｇ用量及び５ｕｇ用量の両方が、Ｈ９２９－ＢＣＭＡ ＫＯモデル及びＨ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ ＫＯモデルの両方において腫瘍増殖を遅らせ、より高い５ｕｇ濃度がより大きな効果を示した。 ＢＧＣＢ４６３及びＢＧＣＢ４９１を、１時間、３７℃のＤＲＣ汎Ｔ結合アッセイにおいて試験した。２人のヒト汎Ｔ細胞ドナーを使用し、試験分子は、１：３希釈及び１１ポイントＤＲＣで２ｕＭの出発濃度を有した。 ＢＧＣＢ４６３、ＢＧＣＢ４９１、及びｎｕｌｌ対照を、１時間、３７℃のＤＲＣシリーズ結合アッセイにおいて、Ｈ９２９ ＷＴ（図２４Ａ）、Ｈ９２９－ＢＣＭＡ ＫＯ（図２４Ｂ）、Ｈ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ ＫＯ（図２４Ｃ）、及びＨ９２９－ＢＣＭＡ／ＧＰＲＣ５Ｄ二重ＫＯ（図２４Ｄ）細胞に対して試験した。 ＢＧＣＢ４６３、ＢＧＣＢ４９１、及びｎｕｌｌ対照を、１時間、３７℃のＤＲＣシリーズ結合アッセイにおいて、Ｈ９２９ ＷＴ（図２４Ａ）、Ｈ９２９－ＢＣＭＡ ＫＯ（図２４Ｂ）、Ｈ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ ＫＯ（図２４Ｃ）、及びＨ９２９－ＢＣＭＡ／ＧＰＲＣ５Ｄ二重ＫＯ（図２４Ｄ）細胞に対して試験した。 ＢＧＣＢ４６３、ＢＧＣＢ４９１、及びｎｕｌｌ対照を、１時間、３７℃のＤＲＣシリーズ結合アッセイにおいて、Ｈ９２９ ＷＴ（図２４Ａ）、Ｈ９２９－ＢＣＭＡ ＫＯ（図２４Ｂ）、Ｈ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ ＫＯ（図２４Ｃ）、及びＨ９２９－ＢＣＭＡ／ＧＰＲＣ５Ｄ二重ＫＯ（図２４Ｄ）細胞に対して試験した。 ＢＧＣＢ４６３、ＢＧＣＢ４９１、及びｎｕｌｌ対照を、１時間、３７℃のＤＲＣシリーズ結合アッセイにおいて、Ｈ９２９ ＷＴ（図２４Ａ）、Ｈ９２９－ＢＣＭＡ ＫＯ（図２４Ｂ）、Ｈ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ ＫＯ（図２４Ｃ）、及びＨ９２９－ＢＣＭＡ／ＧＰＲＣ５Ｄ二重ＫＯ（図２４Ｄ）細胞に対して試験した。 ３７℃で１時間インキュベートした後のＨ９２９ ＷＴ、Ｈ９２９－ＢＣＭＡ ＫＯ細胞、Ｈ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ ＫＯ細胞、及び／又はＨ９２９－ＢＣＭＡ／ＧＰＲＣ５Ｄ二重ＫＯ細胞に対するＢＧＣＢ４９１の代表的な結合プロファイルである。ＢＧＣＢ４９１を●で示し、陰性対照ＣＤ３×Ｎｕｌｌ×Ｎｕｌｌ ＢＧＣＢ５１０を■で示す。曲線は、５回の独立した実験を代表するものである。Ｈ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ－ＫＯクローンＨ１５は、３０％及び６１％の分布の２コピーの遺伝子を有するヘテロ接合性ＫＯ株である。Ｈ９２９－ＢＣＭＡ－ＫＯクローンＪ８は、等しい５０％分布の２コピーの遺伝子を有するヘテロ接合型ＫＯ株である。 ３７℃で１時間インキュベートした後の７つのドナー調製物に対するＢＧＣＢ４９１の一次Ｔ細胞性結合プロファイルである。ＭＦＩ（mean fluorescence intensity）：平均蛍光強度 ＣＤ３Ｂ３７６×Ｎｕｌｌ対照抗体（ＧＣＤＢ３８１）を用いた代表的なバイオインフォマティクス結合曲線外挿である。 ＢＣＭＡ－ＧＰＲＣ５Ｄ二重陽性及びＢＣＭＡ－ＧＰＲＣ５Ｄ二重陰性細胞株のＢＧＣＢ４９１媒介性（図２８Ａ）細胞傷害性及び（図２８Ｂ）Ｔ細胞活性化である。ＢＧＣＢ４９１、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×Ｎｕｌｌ、及びＣＤ３×Ｎｕｌｌ×Ｎｕｌｌを、６人のドナー（ドナーＩＤ：２００６３３２３、２００６３３０９、２００６２０６２、２００６３３１０、２００６２１０５、及び２００６１９６３）からの汎Ｔ細胞及びＦｃブロッカー（２ｍｇ／ｍＬ）の存在下で、様々な濃度（０．００００５～５３３．３３ｎＭ、Ｘ軸）で添加し、７２時間インキュベートした。最適なＥ：Ｔ比３：１を、これらの研究において試験した（Ｅ：Ｔ比評価については、図３３Ａ～３３Ｂを参照）。Ｐｒｉｓｍ ８を使用して、別個の４ＰＬモデルを観察されたデータにフィットさせることによって、プロットを生成した。データ点は、生成されたフィット曲線に沿って密接に整列し、Ｔ細胞ドナー間で変動性はほとんど観察されなかった（６ドナー平均がプロットされた）。図２８Ａでは、標的細胞死を測定し、Ｙ軸上の細胞傷害性パーセントとして表した。図２８Ｂでは、Ｔ細胞活性化を、ＣＤ２５＋ＣＤ３＋Ｔ細胞パーセントとして測定した。 ＢＣＭＡ－ＧＰＲＣ５Ｄ二重陽性及びＢＣＭＡ－ＧＰＲＣ５Ｄ二重陰性細胞株のＢＧＣＢ４９１媒介性（図２８Ａ）細胞傷害性及び（図２８Ｂ）Ｔ細胞活性化である。ＢＧＣＢ４９１、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×Ｎｕｌｌ、及びＣＤ３×Ｎｕｌｌ×Ｎｕｌｌを、６人のドナー（ドナーＩＤ：２００６３３２３、２００６３３０９、２００６２０６２、２００６３３１０、２００６２１０５、及び２００６１９６３）からの汎Ｔ細胞及びＦｃブロッカー（２ｍｇ／ｍＬ）の存在下で、様々な濃度（０．００００５～５３３．３３ｎＭ、Ｘ軸）で添加し、７２時間インキュベートした。最適なＥ：Ｔ比３：１を、これらの研究において試験した（Ｅ：Ｔ比評価については、図３３Ａ～３３Ｂを参照）。Ｐｒｉｓｍ ８を使用して、別個の４ＰＬモデルを観察されたデータにフィットさせることによって、プロットを生成した。データ点は、生成されたフィット曲線に沿って密接に整列し、Ｔ細胞ドナー間で変動性はほとんど観察されなかった（６ドナー平均がプロットされた）。図２８Ａでは、標的細胞死を測定し、Ｙ軸上の細胞傷害性パーセントとして表した。図２８Ｂでは、Ｔ細胞活性化を、ＣＤ２５＋ＣＤ３＋Ｔ細胞パーセントとして測定した。 ＢＧＣＢ ４９１媒介性Ｈ９２９ ＣＲＩＳＰＲ ＫＯクローン細胞障害活性及びＴ細胞活性化である。ＢＧＣＢ４９１、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×Ｎｕｌｌ及びＣＤ３×Ｎｕｌｌ×Ｎｕｌｌを、様々な濃度（０．００００５～５３３．３３ｎＭ、Ｘ軸）で、４人の健常ドナー由来の汎Ｔ細胞（ドナーＩＤ：２００６３３２３、２００６３３０９、２００６２０６２、及び２００６３３１０）及びＦｃブロッカー（２ｍｇ／ｍＬ）の存在下で添加し、７２時間インキュベートした。Ｅ：Ｔの３：１の比を、これらの研究において試験した。Ｐｒｉｓｍ ８を使用して、別個の４ＰＬモデルを観察されたデータにフィットさせることによって、プロットを生成した。データ点は、生成されたフィット曲線に沿って密接に整列し、Ｔ細胞ドナー間で変動性はほとんど観察されなかった（４ドナー平均がプロットされた）。標的細胞死を測定し、上列に細胞傷害性パーセントとして表し、発現ＣＤ３＋陽性細胞を発現するＣＤ２５パーセントとして測定したＴ細胞活性化を下列に示した（Ｙ軸）。 Ｈ９２９ ＭＭ細胞をスパイクした全血におけるＢＧＣＢ ４９１媒介性標的細胞傷害性（ＭＡＢＥＬアッセイ）。ＭＡＢＥＬ（minimum anticipated biological effect level）、推定最小生物学的レベルＢＧＣＢ４９１、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×Ｎｕｌｌ及びＣＤ３×Ｎｕｌｌ×Ｎｕｌｌを、４８時間、５：１の調整されたＥ：Ｔ比率で、Ｈ９２９標的骨髄腫細胞の存在下で、７人の健常なドナー（ドナーＩＤ：１０１４５、１０４０３、１０４２０、１００８３、１０４６３、１０４９３及び１０１４５；Ｔ細胞源）からの全血に、様々な濃度（０．００００５～５３３．３３ｎＭ、Ｘ軸）で添加した。Ｐｒｉｓｍ ８を使用して、別個の４ＰＬモデルを観察されたデータにフィットさせることによって、プロットを生成した。データ点は、生成されたフィット曲線に沿って密接に整列し、Ｔ細胞ドナー間で変動性はほとんど観察されなかった（７ドナー平均がプロットされている）。標的細胞死を測定し、細胞傷害性パーセントとして表し、Ｔ細胞活性化をＣＤ２５＋ＣＤ３＋細胞パーセントとして測定した。この実験では、テクリスタマブ及びタルケタマブを陽性対照として試験した。 ＭＡＢＥＬアッセイからのＢＧＣＢ４９１のサイトカインプロファイルである。ＭＳＤ、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ。ＢＧＣＢ４９１、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×Ｎｕｌｌ、及びＣＤ３×Ｎｕｌｌ×Ｎｕｌｌを様々な濃度（０．００００５～５３３．３３ｎＭ、Ｘ軸）で３人の健康なドナーからの血液全体に添加した。上記細胞傷害性実験からのＨ９２９細胞上清（図７；３人のＴ細胞ドナー、ドナーＩＤ：１００８３、１０４６３、及び１０４９３）を収集し、ＭＳＤベースのマルチプレックスアッセイ（カタログ番号：Ｋ１５０４９Ｄ）を使用してサイトカインレベルについて分析した。サイトカインレベルをｐｇ／ｍＬとして測定した。Ｐｒｉｓｍ ８を使用して、別個の４ＰＬモデルを観察されたデータにフィットさせることによって、プロットを生成した。データ点は、生成されたフィット曲線に沿って密接に整列し、Ｔ細胞ドナー間で変動性はほとんど観察されなかった（３ドナー平均がプロットされた）。この実験では、テクリスタマブ及びタルケタマブを陽性対照として試験した。 ヒト初代ＭＭ ＣＤ１３８＋細胞に対するＢＧＣＢ４９１の細胞傷害性効力である。ＭＮＣ（mononuclear cell）、単核細胞。４人の異なる骨髄腫患者（ＭＭ ＢＭ ＭＮＣ－６２６、６４９、６５２、及び６５３）からの凍結骨髄由来単核細胞を使用して、ＢＧＣＢ４９１形質細胞枯渇（上段）及びＴ細胞活性化（下段）の可能性を評価した。正常な健常ドナー（ドナーＩＤ：２００６３３０９）由来のＴ細胞を、患者ＢＭ ＭＮＣサンプルに外因的に添加し（Ｅ：Ｔ比１：１）、ＢＧＣＢ４９１、ＣＤ３×Ｎｕｌｌ×Ｎｕｌｌ、テクリスマブ、又はタルケタマブ（０．００００５～５３３．３３ｎＭ、Ｘ軸）と４８時間インキュベートした。ＢＧＣＢ４９１処理に応答した、生きた形質細胞（ＣＤ１３８＋）の喪失及びそれと同時の細胞に対するＣＤ２５上方制御が観察される。全初期形質細胞数の変動性がドナー間で観察された。個々の標的受容体密度値及び標的陽性集団のパーセンテージを列挙する。 様々なＥ：Ｔ比及びインキュベーション時間（Ｈ９２９細胞株）でのＢＧＣＢ４９１細胞傷害性能力である。（図３３Ａ）ＢＧＣＢ４９１、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×Ｎｕｌｌ、及びＣＤ３×Ｎｕｌｌ×Ｎｕｌｌを、１人の健常ドナー（ドナーＩＤ：２００６３３２３）由来の汎Ｔ細胞の存在下で、４つの異なるＥ：Ｔ比（５：１、３：１、１：１、及び０．５：１）で７２時間試験した。（図３３Ｂ）ＢＧＣＢ４９１をＥ：Ｔ比３：１及び１：１で、４つの異なるＴ細胞ドナー（ドナーＩＤ：２００６２１０５、２００６３３０９、２００６１９６３、及び２００６３３１０）を使用して、様々な時点（２４時間－丸、４８時間－上向き三角、７２時間－下向き三角、９６時間－六角形、１２０時間－菱形、１４４時間－星形、及び１６８時間－四角）について試験した。標的細胞死及びＴ細胞活性化を測定し、細胞傷害性パーセント及びＣＤ２５＋ＣＤ３＋Ｔ細胞パーセントとして表した。Ｐｒｉｓｍ ８を使用して、別個の４ＰＬモデルを観察されたデータにフィットさせることによって、プロットを生成した。データ点は、生成されたフィット曲線に沿って密接に整列し、Ｔ細胞ドナー間でほとんど変動性が観察されなかった。（図３３Ａ）では１人、及び（図３３Ｂ）では４人のドナー平均をプロットした。 様々なＥ：Ｔ比及びインキュベーション時間（Ｈ９２９細胞株）でのＢＧＣＢ４９１細胞傷害性能力である。（図３３Ａ）ＢＧＣＢ４９１、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×Ｎｕｌｌ、及びＣＤ３×Ｎｕｌｌ×Ｎｕｌｌを、１人の健常ドナー（ドナーＩＤ：２００６３３２３）由来の汎Ｔ細胞の存在下で、４つの異なるＥ：Ｔ比（５：１、３：１、１：１、及び０．５：１）で７２時間試験した。（図３３Ｂ）ＢＧＣＢ４９１をＥ：Ｔ比３：１及び１：１で、４つの異なるＴ細胞ドナー（ドナーＩＤ：２００６２１０５、２００６３３０９、２００６１９６３、及び２００６３３１０）を使用して、様々な時点（２４時間－丸、４８時間－上向き三角、７２時間－下向き三角、９６時間－六角形、１２０時間－菱形、１４４時間－星形、及び１６８時間－四角）について試験した。標的細胞死及びＴ細胞活性化を測定し、細胞傷害性パーセント及びＣＤ２５＋ＣＤ３＋Ｔ細胞パーセントとして表した。Ｐｒｉｓｍ ８を使用して、別個の４ＰＬモデルを観察されたデータにフィットさせることによって、プロットを生成した。データ点は、生成されたフィット曲線に沿って密接に整列し、Ｔ細胞ドナー間でほとんど変動性が観察されなかった。（図３３Ａ）では１人、及び（図３３Ｂ）では４人のドナー平均をプロットした。 標的細胞の非存在下でのＴ細胞におけるＢＧＣＢ４９１への効果である。（図３４Ａ）６人の正常健常ドナーＴ細胞（ドナーＩＤ：２００６３３２３、２００６３３０９、２００６２０６２、２００６３３１０、２００６２１０５、及び２００６１９６３）又は（図３４Ｂ）６人の正常ドナー全血サンプル（ドナーＩＤ：１０２７４、１０４０２、１０４２７、１０４７０、１０５００、及び１０５０９）を使用して、Ｔ細胞活性化アッセイを行った。（図３４Ｃ）非特異的細胞傷害性を種々のサブセットについて測定した。ＢＧＣＢ４９１、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×Ｎｕｌｌ、及びＣＤ３×Ｎｕｌｌ×Ｎｕｌｌを、様々な濃度（０．００００５～５３３．３３ｎＭ、Ｘ軸）で、（図３４Ａ）７２時間及び（図３４Ｂ、３４Ｃ）４８時間添加した。 標的細胞の非存在下でのＴ細胞におけるＢＧＣＢ４９１への効果である。（図３４Ａ）６人の正常健常ドナーＴ細胞（ドナーＩＤ：２００６３３２３、２００６３３０９、２００６２０６２、２００６３３１０、２００６２１０５、及び２００６１９６３）又は（図３４Ｂ）６人の正常ドナー全血サンプル（ドナーＩＤ：１０２７４、１０４０２、１０４２７、１０４７０、１０５００、及び１０５０９）を使用して、Ｔ細胞活性化アッセイを行った。（図３４Ｃ）非特異的細胞傷害性を種々のサブセットについて測定した。ＢＧＣＢ４９１、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×Ｎｕｌｌ、及びＣＤ３×Ｎｕｌｌ×Ｎｕｌｌを、様々な濃度（０．００００５～５３３．３３ｎＭ、Ｘ軸）で、（図３４Ａ）７２時間及び（図３４Ｂ、３４Ｃ）４８時間添加した。 標的細胞の非存在下でのＴ細胞におけるＢＧＣＢ４９１への効果である。（図３４Ａ）６人の正常健常ドナーＴ細胞（ドナーＩＤ：２００６３３２３、２００６３３０９、２００６２０６２、２００６３３１０、２００６２１０５、及び２００６１９６３）又は（図３４Ｂ）６人の正常ドナー全血サンプル（ドナーＩＤ：１０２７４、１０４０２、１０４２７、１０４７０、１０５００、及び１０５０９）を使用して、Ｔ細胞活性化アッセイを行った。（図３４Ｃ）非特異的細胞傷害性を種々のサブセットについて測定した。ＢＧＣＢ４９１、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×Ｎｕｌｌ、及びＣＤ３×Ｎｕｌｌ×Ｎｕｌｌを、様々な濃度（０．００００５～５３３．３３ｎＭ、Ｘ軸）で、（図３４Ａ）７２時間及び（図３４Ｂ、３４Ｃ）４８時間添加した。 Ｔ細胞ヒト化ＮＳＧマウスの皮下（subcutaneous、ＳＣ）ＲＰＭＩ ８２２６異種移植片におけるＢＧＣＢ４９１、テクリスタマブ、及びタルケタマブの抗がん効果である（研究Ａ）。ＫＯ（knock-out）、ノックアウト；ＮＳＧ、非肥満糖尿病（non-obese diabetic、ＮＯＤ）重症複合免疫不全（severe combined immunodeficiency、ｓｃｉｄ）ガンマ又はＮＯＤ．ＣｇＰｒｋｄｃｓｃｉｄＩｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ；ＰＢＳ（phosphate-buffered saline）、リン酸緩衝生理食塩水；ＳＥＭ（standard error of the mean）、平均値の標準誤差。確立されたＳＣ ＲＰＭＩ ８２２６腫瘍を有するＴ細胞ヒト化ＮＳＧマウスに、ＢＧＣＢ４９１を０．１、０．４、１、及び２．５ｍｇ／ｋｇで腹腔内（intraperitoneally、ＩＰ）投与した。テクリスタマブを０．４、１、及び２．５ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与した。タルケタマブを２．５ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与した。処置は、１９、２１、２５、２８、３１、３４、３８、及び４１日目に施した（Ｘ軸の下の黒線によって示す）。週２回腫瘍体積を測定し、その結果を、各群についての平均腫瘍体積±ＳＥＭとして提示した。データは、少なくとも７０％の動物が研究に残っている各群についてグラフで表した。 Ｔ細胞ヒト化ＮＳＧマウスにおける皮下（ＳＣ）Ｈ９２９－ＢＣＭＡ－ＫＯ及びＨ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ－ＫＯ異種移植片におけるＢＧＣＢ４９１、テクリスタマブ、及びタルケタマブの抗がん効果である（研究Ｂ）。ＫＯ、ノックアウト；ＮＳＧ、非肥満糖尿病（ＮＯＤ）重症複合免疫不全（ｓｃｉｄ）ガンマ又はＮＯＤ．ＣｇＰｒｋｄｃｓｃｉｄＩｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ；ＰＢＳ、リン酸緩衝生理食塩水；ＳＥＭ、平均値の標準誤差。Ｈ９２９－ＢＣＭＡ－ＫＯ（左側腹部）及びＨ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ－ＫＯ（右側腹部）腫瘍を有するＴ細胞ヒト化ＮＳＧマウスに、ＢＧＣＢ４９１を０．０２５、０．１、０．２５、及び０．５ｍｇ／ｋｇで腹腔内（ＩＰ）投与した。テクリスタマブ及びタルケタマブを、０．１及び０．２５ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与した。処置は、１、５、９、１３、１６、１９、及び２２日目に施した（Ｘ軸の下の黒線によって示す）。週２回腫瘍体積を測定し、その結果を、各群についての平均腫瘍体積±ＳＥＭとして提示した。データは、少なくとも７０％の動物が研究に残っている各群についてグラフで表した。 雌カニクイザルにおける単回静脈内（ＩＶ）０．５ｍｇ／ｋｇ投与後の個々のＢＧＣＢ４９１血清中濃度－時間プロファイル（図３７）及び予測モデル（図３８）である。ＢＱＬ（below quantification limit）、定量限界未満。濃度が最も低い定量可能な濃度を下回るデータ点は、グラフに示されていない。 雌カニクイザルにおける単回静脈内（ＩＶ）０．５ｍｇ／ｋｇ投与後の個々のＢＧＣＢ４９１血清中濃度－時間プロファイル（図３７）及び予測モデル（図３８）である。ＢＱＬ（below quantification limit）、定量限界未満。濃度が最も低い定量可能な濃度を下回るデータ点は、グラフに示されていない。 雄ミニブタにおけるＢＧＣＢ４９１の単回投与後の平均（ＳＤ）ＢＧＣＢ４９１濃度－時間プロファイル及びモデル予測である。ＢＱＬ、定量限界未満；ＳＤ（standard deviation）、標準偏差。濃度が最も低い定量可能な濃度を下回るデータ点は、グラフに示されていない。群１：用量＝０．０１ｍｇ／ｋｇ、皮下（ＳＣ）投与。群２：用量＝０．１ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ。群３：用量＝０．１ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ。 雄ミニブタにおけるＢＧＣＢ４９１の単回投与後の平均（ＳＤ）ＢＧＣＢ４９１濃度－時間プロファイル及びモデル予測である。ＢＱＬ、定量限界未満；ＳＤ（standard deviation）、標準偏差。濃度が最も低い定量可能な濃度を下回るデータ点は、グラフに示されていない。群１：用量＝０．０１ｍｇ／ｋｇ、皮下（ＳＣ）投与。群２：用量＝０．１ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ。群３：用量＝０．１ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ。 ３７℃で２４時間のインキュベーションにわたるＨ９２９ ＷＴ及びＭＭ．１Ｒ ＷＴ細胞株に対するＢＧＣＢ４６３の動的結合プロファイルである。ＭＦＩ：平均蛍光強度 内因性ＢＣＭＡ－ＧＰＲＣ５Ｄ発現細胞株へのＢＧＣＢ４９１結合である。Ｇｅｏ、幾何。ＢＧＣＢ４９１、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×Ｎｕｌｌ、及びＣＤ３×Ｎｕｌｌ×Ｎｕｌｌを様々な濃度（０．０９６～１，０００ｎＭ、Ｘ軸）で添加し、３７℃で１時間インキュベートした。Ｐｒｉｓｍ ８を使用して、別個の４ＰＬモデルを観察されたデータにフィットさせることによって、プロットを生成した。幾何平均として表される結合強度（Ｙ軸）。 （図４２Ａ）１：１及び（図４２Ｂ）１：３ Ｅ：Ｔの比で、３人のＴ細胞ドナーからのＴ細胞を使用したＢＧＣＢ４９１及びＣＤ３Ｂ２２７１（ｎｕｌｌ対照）の動的細胞傷害性及びＴ細胞活性化。Ｉｎｃｕｃｙｔｅ上のＣＤ２５測定値は、Ｔ細胞数及びＣＤ２５発現（総積分強度）の尺度である。ＣＤ２５は、Ｔ細胞活性化の後期マーカーであり、典型的には活性化の２４時間後に検出可能であり、約９６時間でピークに達する。それは、タイミングに関して細胞傷害性と必ずしも一致しない。細胞溶解パーセントを、未処理ウェルに対する処理ウェルにおける緑色蛍光タンパク質（green fluorescent protein、ＧＦＰ）シグナルに基づいて計算した。 １：１のエフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比での７２時間、９３時間、及び１２０時間の時点でのＢＧＣＢ４９１及びＣＤ３Ｂ２２７１（ｎｕｌｌ対照）の細胞溶解パーセント及びＴ細胞活性化である。 １：３のＥ：Ｔ比での、７２時間、９３時間及び１２０時間の時点でのＢＧＣＢ４９１及びＣＤ３Ｂ２２７１（ｎｕｌｌ対照）の細胞溶解パーセント及びＴ細胞活性化である。 Ｔ細胞ヒト化ＮＳＧマウスの皮下ＭＭ．１Ｓ異種移植片におけるＪＮＪ－７９６３５３２２、テクリスタマブ、及びタルケタマブの抗がん効果である（研究Ｃ）。ＮＳＧ、非肥満糖尿病（ＮＯＤ）重症複合免疫不全（ｓｃｉｄ）ガンマ又はＮＯＤ．Ｃｇ－ＰｒｋｄｃｓｃｉｄＩｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ；ＰＢＳ、リン酸緩衝生理食塩水；ＳＥＭ、平均値の標準誤差。確立されたＳＣ ＭＭ．１Ｓ腫瘍を有するＴ細胞ヒト化ＮＳＧマウスに、ＢＧＣＢ４９１を０．０２５、０．１、０．５、及び１ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与した。タルケタマブを０．０２５及び０．１ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与した。１５、１９、２２、２６、３０、３４、及び３７日目に、テクリスタマブを０．１ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与し、０．５ｍｇ／ｋｇの処置を施した（Ｘ軸の下の黒線によって示す）。週２回腫瘍体積を測定し、その結果を、各群についての平均腫瘍体積±ＳＥＭとして提示した。データは、少なくとも７０％の動物が研究に残っている各群についてグラフで表した。動物は、移植片対宿主病（graft-versus-host disease、ＧｖＨＤ）関連の病的状態の徴候が現れるまで処置後にモニターし、その時点で動物を安楽死させ、５１日目に試験を終了した。 ＢＣＭＡリード（ＢＣＭＢ５１９）は、理想的なｓｃＦｖ生物物理学的特性を有するテクリスタマブと同等の結合及び細胞傷害性を示す。 ＢＣＭＡリード（ＢＣＭＢ５１９）は、理想的なｓｃＦｖ生物物理学的特性を有するテクリスタマブと同等の結合及び細胞傷害性を示す。 ＧＰＲＣ５ｄリード（ＧＣ５Ｂ６８０）は、理想的なｓｃＦｖ生物物理学的特性を有するタルケタマブと比較して、特異的かつ改善された結合を実証する。
（実施態様の詳細な記述）
定義
本明細書及び特許請求の範囲をとおして本明細書の諸態様に関する様々な用語が使用される。特に指示がない限り、このような用語には、当該技術分野におけるそれらの通常の意味が与えられるものとする。その他の具体的に定義される用語は、本明細書に提供される定義と一致する様式で解釈されるものとする。
本明細書及び添付の「特許請求の範囲」において使用される場合、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」という単数形は、その内容について別途明確に指示されない限り、複数の指示対象を包含する。したがって、例えば、「細胞（a cell）」という言及には、２つ又はそれ以上の細胞の組み合わせなどが含まれる。
本明細書で使用されるとき、測定値、例えば、量、持続時間などに言及する場合の「約」という用語は、指定された値から最大±１０％の偏差を包含することを意味する。同様に、このような偏差は、開示された方法を行うのに適している。別途記載のない限り、本明細書及び特許請求の範囲において使用される、成分の量、並びに分子量及び反応条件などの特性を表わす全ての数字は、全ての事例において「約」という用語により修飾されていると理解されたい。したがって、逆のことが示されない限り、下記明細書及び添付の特許請求の範囲で説明される数値パラメータは、本発明により得ようとする所望の特性に応じて変動する場合がある近似値である。最低でも、特許請求の範囲の範囲に対して均等論の適用を制限することを試みてはならず、各数値パラメータは、報告された有効桁の数字を考慮し、通常の四捨五入の手法を適用することにより、少なくとも解釈されるべきである。
本発明の広い範囲を説明する数値範囲及びパラメータは近似値であるが、特定の実施例に記載される数値は、可能な限り正確に報告される。但し、任意の数値は、各試験測定において見出される標準偏差から必然的に生じる一定の誤差を本質的に含有する。
「単離された」とは、生物学的成分（例えば、核酸、ペプチド、又はタンパク質）が、これらの成分が本来存在する生物の他の生物学的成分、すなわち、他の染色体及び染色体外ＤＮＡ及びＲＮＡ、並びにタンパク質から、実質的に分離され、同他の成分とは別に生成され、又は同他の成分から離して精製されていることを意味する。このため、「単離（された）」核酸、ペプチド、及びタンパク質は、標準的な精製法により精製された核酸及びタンパク質を含む。「単離された」核酸、ペプチド、及びタンパク質は、組成物の一部であることができ、このような組成物が核酸、ペプチド、又はタンパク質の本来の環境の一部ではない場合であっても単離されている。また、この用語は、宿主細胞中での組換え発現により調製された核酸、ペプチド、及びタンパク質、並びに化学合成された核酸も包含する。本明細書で使用されるとき、「単離された」抗体又は抗原結合フラグメントは、種々の抗原特異性を有する他の抗体又は抗原結合フラグメントを実質的に含まない抗体又は抗原結合フラグメントを意味することを意図している（例えば、ＢＣＭＡに特異的に結合する単離された抗体は、ＢＣＭＡ以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。但し、ＢＣＭＡ又はＧＰＲＣ５Ｄのエピトープ、アイソフォーム、又は変異体に特異的に結合する単離された抗体は、例えば、他の種に由来する他の関連する抗原（例えば、ＢＣＭＡ又はＧＰＲＣ５Ｄ種間ホモログ）に対する交差反応性を有してもよい。
同義的に「核酸分子」、「ヌクレオチド」、又は「核酸」と呼ばれる「ポリヌクレオチド」は、任意のポリリボヌクレオチド又はポリデオキシリボヌクレオチドを指し、これは、修飾されていないＲＮＡ若しくはＤＮＡ又は修飾されたＲＮＡ若しくはＤＮＡであってもよい。「ポリヌクレオチド」には、一本鎖及び二本鎖ＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であるＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖ＲＮＡ、並びに一本鎖及び二本鎖の領域の混合物であるＲＮＡ、ＤＮＡ及びＲＮＡを含むハイブリッド分子（一本鎖、又はより典型的には、二本鎖、又は一本鎖及び二本鎖の領域の混合物でもよい）が挙げられるが、これらに限定されない。加えて、「ポリヌクレオチド」は、ＲＮＡ若しくはＤＮＡ又はＲＮＡ及びＤＮＡの両方を含む三本鎖領域を指す。ポリヌクレオチドという用語には、１つ又は２つ以上の修飾された塩基を含有するＤＮＡ又はＲＮＡ、及び安定性又は他の理由により修飾された骨格を有するＤＮＡ又はＲＮＡも含まれる。「修飾された」塩基は、例えば、トリチル化塩基及び異常な塩基、例えば、イノシンを含む。様々な修飾が、ＤＮＡ及びＲＮＡになされてもよい。したがって、「ポリヌクレオチド」は、典型的には天然に認められるポリヌクレオチドの化学的、酵素的又は代謝的に修飾された形態、並びにウイルス及び細胞のＤＮＡ及びＲＮＡの特徴を有する化学的形態を包含する。「ポリヌクレオチド」はまた、比較的短い核酸鎖（多くの場合、オリゴヌクレオチドと称される）も包含する。
「実質的に同じ」の意味は、この用語が使用される文脈に応じて異なる場合がある。重鎖及び軽鎖並びにこれらをコードする遺伝子中には天然の配列バリエーションが存在し得ることから、本明細書に記載されるアミノ酸配列又は抗体若しくは抗原結合フラグメントをコードする遺伝子内には、固有の結合特性（例えば、特異的及び親和性）にはほとんど影響しない、又は影響しない、ある程度のバリエーションが見られることが予測される。このような予測は、部分的には、遺伝暗号の縮重及び保存的アミノ酸配列バリエーションの進化的成功による。同バリエーションは、コードされたタンパク質の性質を認識され得るほどには変化させない。したがって、核酸配列の文脈において、「実質的に同じ」は、２つ又はそれ以上の配列間での少なくとも６５％の同一性を意味する。好ましくは、この用語は、２つ又はそれ以上の配列間での少なくとも７０％の同一性、より好ましくは、少なくとも７５％の同一性、より好ましくは、少なくとも８０％の同一性、より好ましくは、少なくとも８５％の同一性、より好ましくは、少なくとも９０％の同一性、より好ましくは、少なくとも９１％の同一性、より好ましくは、少なくとも９２％の同一性、より好ましくは、少なくとも９３％の同一性、より好ましくは、少なくとも９４％の同一性、より好ましくは、少なくとも９５％の同一性、より好ましくは、少なくとも９６％の同一性、より好ましくは、少なくとも９７％の同一性、より好ましくは、少なくとも９８％の同一性、及びより好ましくは、少なくとも９９％以上の同一性を意味する。２つの配列間の同一性（％）は、ギャップ数及び各ギャップの長さを考慮して、配列により共有される同一の位置の数の関数である（すなわち、相同性の割合（％）＝同一位置数／位置の総数×１００）。同考慮は、２つの配列の最適なアライメントを導くのに必要である。２つのヌクレオチド又はアミノ酸配列間の同一性パーセントは、例えば、Ｅ．Ｍｅｙｅｒｓ ａｎｄ Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ，Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ ４，１１－１７（１９８８）のアルゴリズムを使用して決定されてもよい。同アルゴリズムは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれており、ＰＡＭ１２０重み付け残基テーブル、ギャップ長ペナルティ１２、及びギャップペナルティ４を使用する。加えて、２つのアミノ酸配列間の同一性（％）は、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８，４４４－４５３（１９７０）のアルゴリズムを使用して決定されてもよい。
タンパク質の機能に実質的な影響を有することなく、タンパク質のアミノ酸配列内に生じ得るバリエーションの度合いは、核酸配列のバリエーションの度合いより非常に小さい。これは、同じ縮重原理がアミノ酸配列には当てはまらないためである。したがって、抗体又は抗原結合フラグメントの文脈において、「実質的に同じ」は、記載される抗体又は抗原結合フラグメントに対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有する抗体又は抗原結合フラグメントを意味する。他の実施形態は、本明細書に記載される抗体及び抗原結合フラグメントと有意な同一性を共有しないが、１つ又は２つ以上のＣＤＲ又は結合性を付与するのに必要とされる他の配列を組み込む、フレームワーク、スキャフォールド、又は他の非結合領域を有し、本明細書に記載されるこのような配列に対して、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有する抗体又は抗原結合フラグメントを含む。
「クローン」は、有糸分裂により、単一の細胞又は共通する祖先から得られる細胞集団である。「細胞株」は、インビトロにおいて何代にもわたって安定して成長させることができる初代細胞のクローンである。本明細書で提供される一部の例では、細胞は、細胞をＤＮＡで遺伝子導入することにより、形質転換される。
「発現する」及び「生成する」という用語は、本明細書において同義的に使用され、遺伝子産物の生合成を意味する。これらの用語は、遺伝子のＲＮＡへの転写を包含する。また、これらの用語は、ＲＮＡの１つ又は２つ以上のポリペプチドへの翻訳を包含し、全ての天然の転写後及び翻訳後修飾を更に包含する。抗体又はその抗原結合フラグメントの発現又は生成は、細胞の細胞質内、又は細胞外環境、例えば、細胞培養用の増殖培地内でもよい。
「処置すること」又は「処置」という用語は、損傷、病理、又は病状の減弱又は改善における、何らかの成功又は成功の兆候を指し、これには、寛解、緩解、症状の低減若しくは病状を患者にとってより許容できるものにすること、変性又は低下速度を遅くすること、変性による最終的な衰弱を和らげること、患者の肉体的又は精神的健康を改善すること、あるいは生存期間を延長することなどの、何らかの客観的又は主観的パラメータが含まれる。処置は、客観的又は主観的なパラメータにより評価されてもよい。同パラメータには、身体検査、神経学的検査、又は精神医学評価の結果が挙げられる。
「有効量」又は「治療有効量」は、必要とされる用量及び期間において、所望の治療結果を達成するのに有効な量を意味する。治療有効量のＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３抗体は、個体の病態、年齢、性別、及び体重、並びに個体における所望の応答を引き出す抗体の能力などの要因に従って変動し得る。治療有効量はまた、抗体又は抗体部分の任意の毒性又は有害作用より、治療的に有益な作用が上回る量でもある。
「抗体」は、特に断らない限り、免疫グロブリンの全てのアイソタイプ（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＹ）を指し、様々な単量体形態、ポリマー形態、及びキメラ形態を含む。ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（monoclonal antibody、ｍＡｂ）、及び抗体様ポリペプチド、例えば、キメラ抗体及びヒト化抗体が、「抗体」という用語に具体的に包含される。
「抗原結合アーム」という用語は、抗原（例えば、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、又はＣＤ３）に結合する抗原結合ドメインを含み、１つ又は２つ以上の他の抗体領域（例えば、Ｆｃドメイン）を任意選択で含む、抗体の一部分を指す。
「抗原結合フラグメント」という用語は、抗原結合ドメインを含有する抗原結合アームのフラグメントを指す。抗原結合フラグメントは、任意の既知の手法、例えば、酵素切断、ペプチド合成、及び組換え手法によって得られるものを含む。一部の抗原結合フラグメントは、親抗体分子の抗原結合特異性を保持しているインタクトな抗体の部分から構成される。例えば、抗原結合フラグメントは、特定の抗原に結合することが既知である抗体の、少なくとも１つの可変領域（重鎖若しくは軽鎖の可変領域のいずれか一方）又は１つ若しくは２つ以上のＣＤＲを含んでもよい。好適な抗原結合フラグメントの例には、ダイアボディ及び一本鎖分子、並びにＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｃ、Ｆａｂｃ、及びＦｖ分子、一本鎖（Ｓｃ）抗体、個々の抗体軽鎖、個々の抗体重鎖、抗体鎖若しくはＣＤＲと他のタンパク質との間のキメラ融合体、タンパク質足場、重鎖単量体若しくは二量体、軽鎖単量体若しくは二量体、１本の重鎖と１本の軽鎖とからなる二量体、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインからなる一価フラグメント、又は国際公開第２００７０５９７８２号に記載される一価抗体、ヒンジ領域においてジスルフィド結合により連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント、ＶＨ及びＣＨ１ドメインから本質的になるＦｄフラグメント、抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインから本質的になるＦｖフラグメント、ＶＨドメインから本質的になるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４１：５４４－５４６，１９８９）、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００３ Ｎｏｖ．；２１（１１）：４８４－９０）、ラクダ科動物又はナノボディ（Ｒｅｖｅｔｓ ｅｔ ａｌ；Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ．２００５ Ｊａｎ．；５（１）：１１１－２４）、並びに単離された相補性決定領域（complementarity determining region、ＣＤＲ）など、並びに抗体フラグメントから形成される三重特異的抗体、が挙げられる。全ての抗体アイソタイプが、抗原結合フラグメントを生成するのに使用されてもよい。加えて、抗原結合フラグメントは、対象となる所与の抗原に対する親和性を付与する方向にポリペプチドセグメントをうまく組み込み得る、抗体以外のタンパク質性フレームワーク、例えば、タンパク質スキャフォールドを含んでもよい。抗原結合フラグメントは、組換えにより生成されてもよく、又はインタクトな抗体の酵素分解若しくは化学分解により生成されてもよい。「抗体又はその抗原結合フラグメント」という表現は、所与の抗原結合フラグメントが、この表現内で参照された抗体の１つ又は２つ以上のアミノ酸セグメントを組み込んでいることを示すために使用されてもよい。
「抗原結合ドメイン」という用語は、特定の抗原に対する結合親和性を示す抗原結合アームのタンパク質性構造を指す。このタンパク質性構造は、抗原結合ドメインの相補性決定領域（ＣＤＲ）によって媒介される。
「ＣＤＲ」及びその複数形「ＣＤＲｓ」という用語は、相補性決定領域（ＣＤＲ）であって、そのうちの３つが軽鎖可変領域（ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３）の結合特性を構成し、３つが重鎖可変領域（ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３）の結合特性を構成する、相補性決定領域（ＣＤＲ）を意味する。ＣＤＲは、抗体分子の機能的活性に寄与し、スキャフォールド領域又はフレームワーク領域を含むアミノ酸配列によって分離される。正確な定義上のＣＤＲの境界及び長さは、様々な分類及び番号付けシステムによって異なる。したがって、ＣＤＲは、本明細書ではＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、Ｃｏｎｔａｃｔ定義、又は任意の他の境界定義によって参照され得る。境界が異なるにもかかわらず、これらのシステムの各々は、可変配列内のいわゆる「超可変領域」を構成する要素においてある程度のオーバーラップを有する。したがって、これらのシステムによるＣＤＲの定義は、隣接するフレームワーク領域についての長さ及び境界領域の点で異なることがある。例えば、各々全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ．ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２（１９９１）、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，「Ｃａｎｏｎｉｃａｌ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ Ｆｏｒ ｔｈｅ Ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ Ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，」Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１（１９８７）、及びＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，「Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ａｎｔｉｇｅｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ：Ｃｏｎｔａｃｔ Ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｓｉｔｅ Ｔｏｐｏｇｒａｐｈｙ，」Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２（１９９６））を参照のこと。
典型的には、ＣＤＲは、カノニカル構造として分類され得るループ構造を形成する。「カノニカル構造」という用語は、抗原結合（ＣＤＲ）ループによって採用される主鎖立体構造を意味する。比較構造の研究から、６つの抗原結合ループのうちの５つは利用可能な立体構造のレパートリーがごく限られていることが判明している。各カノニカル構造は、ポリペプチド主鎖のねじれ角によって特徴付けられ得る。したがって抗体間で対応するループは、それらのループの大部分において高度のアミノ酸配列可変性が見られるにもかかわらず、非常によく似た三次元構造を有し得る（各々全体が参照により組み込まれる、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，「Ｃａｎｏｎｉｃａｌ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ Ｆｏｒ ｔｈｅ Ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ Ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，」Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１（１９８７）、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，「Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ Ｒｅｇｉｏｎｓ，」Ｉ ３４２：８７７（１９８９）；Ｍａｒｔｉｎ ａｎｄ Ｔｈｏｒｎｔｏｎ，「Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｆａｍｉｌｉｅｓ ｉｎ Ｌｏｏｐｓ ｏｆ Ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ａｕｔｏｍａｔｉｃ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｍｏｄｅｌｌｉｎｇ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，」Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６３：８００（１９９６））。更に、とられるループ構造とその周囲のアミノ酸配列との間には関係がある。特定のカノニカルクラスの立体構造は、ループの長さと、ループ内の重要な位置並びに保存されたフレームワーク（すなわち、ループの外側）内にあるアミノ酸残基とによって決定される。したがって、これらの重要なアミノ酸残基の存在に基づいて、特定のカノニカルクラスへの割り当てを行うことができる。
「ポリペプチド」という用語は、「タンパク質」という用語と互換的に使用され、その最も広い意味において、２つ又はそれ以上のサブユニットアミノ酸、アミノ酸類似体、又はペプチド模倣体の化合物を指す。サブユニットは、ペプチド結合によって連結されていてもよい。別の実施形態では、サブユニットは、他の結合、例えば、エステル、エーテルなどによって連結されてもよい。本明細書で使用されるとき、「アミノ酸」という用語は、グリシン並びにＤ及びＬ光学異性体の両方と、アミノ酸類似体と、ペプチド模倣体とを含む、天然及び／若しくは非天然アミノ酸又は合成アミノ酸のいずれかを指す。３つ又はそれ以上のアミノ酸のペプチドは、ペプチド鎖が短い場合、一般にオリゴペプチドと称される。ペプチド鎖が長い場合、ペプチドは、一般にポリペプチド又はタンパク質と称される。 本明細書で使用されるとき、「Ｆｃ」という用語は、２つの定常重鎖（ＣＨ）領域ＣＨ２及びＣＨ３を含む、抗体の結晶化可能ドメインフラグメントを指す。本明細書において、Ｆｃ領域のアミノ酸残基は、典型的には、ＥＵ付番スキームに従って付番される（Ｅｄｅｌｍａｎ，Ｇ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ，６３，７８－８５（１９６９）．ＰＭＩＤ：５２５７９６９）。これらの残基は、当業者には容易に理解され得るように、ＩＭＧＴ及びＫａｂａｔ（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ．５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ－ＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ｎ° ９１－３２４２，ｐｐ ６６２，６８０，６８９（１９９１））付番などの代替的な付番スキームに従い容易に指定することができる。例えば、ＥＵ付番によるＬ２３４はまた、ＫａｂａｔによるＬ２４７として表され得る。
抗体又は抗体フラグメントの文脈において使用されるとき、「特異的に結合（Specifically binds）」若しくは「特異的に結合（binds specifically）」又はそれらの派生語は、免疫グロブリン遺伝子又は免疫グロブリン遺伝子のフラグメントによりコードされたドメインを介し、混合された様々な分子を含有するサンプル中で他の分子に優先的に結合することなく対象となるタンパク質の１つ又は２つ以上のエピトープに結合することを表わす。典型的には、抗体は、表面プラズモン共鳴アッセイ又は細胞結合アッセイによって測定された場合、約１×１０－８Ｍ未満のＫｄで、同種抗原に結合する。「［抗原］特異的」抗体（例えば、ＢＣＭＡ特異的抗体）などの表現は、列挙された抗体が列挙された抗原に特異的に結合することを伝達することを意味する。「結合する」という用語が本明細書中で使用される場合はいつでも、これは「特異的に結合する」を包含することが意図され、そしてこれらの用語は、必要に応じて交換され得る。
本明細書で使用されるとき、「キメラ」という用語は、抗体又はその抗原結合フラグメントであって、非ヒト哺乳動物、齧歯動物、又は爬虫類の抗体アミノ酸配列に由来する少なくとも１つの可変ドメインの少なくともいくらかの部分を有するものの、それらの残りの部分はヒトに由来するものである、抗体又はその抗原結合フラグメントを指す。
「ベクター」とは、セグメントの複製又は発現をもたらすように、別の核酸セグメントを操作可能に挿入できるレプリコン、例えば、プラスミド、ファージ、コスミド、又はウイルスのことである。
本明細書で使用されるとき、「宿主細胞」という用語は、例えば、初代細胞、培養中の細胞、又は細胞株由来の細胞といった任意のタイプの細胞であってもよい。特定の実施形態では、「宿主細胞」という用語は、核酸分子を遺伝子導入された細胞、及びそのような細胞の子孫又は可能性のある子孫を指す。このような細胞の子孫は、核酸分子で遺伝子導入された親細胞とは、例えば、宿主細胞ゲノムへの核酸分子の後続の生成又は集積において生じ得る、変異又は環境からの影響により、同一ではないことがある。「発現」及び「生成」という用語は、本明細書において同義的に使用され、遺伝子産物の生合成を意味する。これらの用語は、遺伝子のＲＮＡへの転写を包含する。また、これらの用語は、ＲＮＡの１つ又は２つ以上のポリペプチドへの翻訳を包含し、全ての天然の転写後及び翻訳後修飾を更に包含する。
「対象」という用語は、ヒト及び非ヒト動物を意味し、全ての脊椎動物、例えば、哺乳動物及び非哺乳動物、例えば、非ヒト霊長類、マウス、ウサギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ニワトリ、両生類、及び爬虫類を意味する。記載される方法の多くの実施形態では、対象はヒトである。
本明細書で使用されるとき、「再指向」又は「再指向する」という用語は、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３抗体が、Ｔ細胞の活性を、かかる細胞がもともと備えている同種に特異的なものから、ＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡ発現細胞に対し反応性があるものへと効果的に変換する能力を指す。
本明細書で使用されるとき、「サンプル」という用語は、対象から単離された、類似する流体、細胞、又は組織（例えば、外科手術により切除された腫瘍組織、微細針吸引を含む生検）の収集物、並びに対象内に存在する流体、細胞、又は組織を意味する。一部の実施形態では、サンプルは、体液である。体液は、典型的には、生理学的温度において液体であり、対象又は生物学的資源中に存在し、これらから採取され、これらから外に出され、あるいは抽出された天然に生じる流体を含んでもよい。特定の組織、臓器、又は局所的な領域から得られたある種の体液及びその他のある種の体液は、対象又は生物学的資源において、より全体的に又は全身的に適していてもよい。体液の例としては、血液、血清及び漿膜液、血漿、リンパ、尿、唾液、嚢胞液、涙、糞、痰、分泌組織及び臓器の粘膜分泌物、膣分泌物、腹水液、例えば、非固体腫瘍に関連するもの、胸膜、心膜、腹膜、腹部及び他の体腔の液体、気管支洗浄により収集された液体などが挙げられる。体液はまた、対象又は生体資源と接触した溶液、例えば、細胞又は臓器馴化培地を含む細胞及び臓器培養培地、洗浄液などを含んでもよい。本明細書で使用されるとき、「サンプル」という用語は、対象から取り出された材料又は対象中に存在する材料を包含する。本発明の関連する態様は、必要に応じて単離されたサンプルに基づいてインビトロで実施され得る。
「既知の標準」は、ＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡの量又は濃度が判明している溶液であってもよい。この場合、この溶液は、自然発生する溶液、例えば、初期、中期、後期、進行性、又は静的がんを有することが判明している患者由来のサンプルでもよく、又はこの溶液は、中に希釈されたＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡの量が判明している緩衝水溶液などの合成溶液でもよい。本明細書に記載される既知の標準は、対象から単離されたＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡ、組換え若しくは精製されたＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡタンパク質、あるいは病態に関連するＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡ濃度の値を含んでもよい。
本明細書で使用されるとき、「Ｂ細胞成熟抗原」及び「ＢＣＭＡ」という用語は、分化した形質細胞において優先的に発現される腫瘍壊死受容体スーパーファミリーのメンバーである、ＢＣＭＡ、ＣＤ２６９、及びＴＮＦＲＳＦ１７（ＵｎｉＰｒｏｔ Ｑ０２２２３）としても知られるヒトＢ細胞成熟抗原を含む。ＵｎｉＰｒｏｔによると、ヒトＢＣＭＡの細胞外ドメインは、アミノ酸１～５４（又は５～５１）からなる。本明細書で使用されるとき、「ＢＣＭＡに対する抗体、抗ＢＣＭＡ抗体」という用語は、ＢＣＭＡに特異的に結合する抗体に関する。
「Ｇタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤ」及び「ＧＰＲＣ５Ｄ」という用語は、特に、例えばＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＢＣ０６９３４１、ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿０６１１２４．１及びＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ９ＮＺＤ１に記載のとおりのヒトＧＰＲＣ５Ｄタンパク質を包含する（Ｂｒａｕｎｅｒ－Ｏｓｂｏｒｎｅ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．２００１，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １５１８，２３７－２４８も参照のこと）。
「表面抗原分類３」及び「ＣＤ３」という用語は、ヒトＣＤ３タンパク質マルチサブユニット複合体を含む。ＣＤ３タンパク質マルチサブユニット複合体は、６つの区別できるポリペプチド鎖から構成される。これらは、ＣＤ３γ鎖（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ Ｐ０９６９３）、ＣＤ３δ鎖（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ Ｐ０４２３４）、２つのＣＤ３ε鎖（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ Ｐ０７７６６）、及び１つのＣＤ３ζ鎖ホモ二量体（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ２０９６３）を含み、Ｔ細胞受容体α及びβ鎖と会合する。「ＣＤ３」という用語は、特に断りのない限り、細胞（Ｔ細胞を含む）により本来発現されているか、又はそれらのポリペプチドをコードする遺伝子若しくはｃＤＮＡにより遺伝子導入された細胞上に発現され得る任意のＣＤ３変異体、アイソフォーム、及び種間ホモログを含む。
「ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３抗体」は、多重特異的抗体、任意選択で、三重特異的抗体であり、同三重特異的抗体は、３種類の異なる抗原結合アームを含み、そのうち１つは抗原ＢＣＭＡに結合し、そのうち１つは抗原ＧＰＲＣ５Ｄに結合し、そのうち１つはＣＤ３に結合する。「ＢＣＭＡ×ＣＤ３抗体」は、多重特異的抗体、任意選択で、二重特異的抗体であり、同二重特異的抗体は、２種類の異なる抗原結合アームを含み、そのうち１つは抗原ＢＣＭＡに結合し、そのうち１つはＣＤ３に結合する。「ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３抗体」は、多重特異的抗体、任意選択で、二重特異的抗体であり、同二重特異的抗体は、２種類の異なる抗原結合アームを含み、そのうち１つは抗原ＧＰＲＣ５Ｄに結合し、そのうち１つはＣＤ３に結合する。「多重特異的抗体」という用語は、本明細書において最も広い意味で使用され、具体的にはポリエピトープ特異性を有する抗体を包含する。多重特異的抗体としては、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗体であって、ＶＨＶＬ単位がポリエピトープ特異性を有する抗体、２つ又はそれ以上のＶＬドメイン及びＶＨドメインを有し、各ＶＨＶＬ単位が異なるエピトープに結合する抗体、２つ又はそれ以上の単一可変ドメインを有し、各単一可変ドメインが異なるエピトープに結合する抗体、全長抗体、並びに１つ又は２つ以上の抗体フラグメントを含む抗体並びに共有結合又は非共有結合された抗体フラグメントを含む抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
多重特異的抗体は、二重特異的抗体、三重特異的抗体、ディアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、又は類似する分子であり得る（ディアボディの説明については、例えば、ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９０（１４），６４４４－８（１９９３）を参照のこと）。本明細書で提供される二重特異的抗体、三重特異的抗体、ディアボディなどは、ＢＣＭＡ又はＧＰＲＣ５Ｄの一部分に加えて、任意の好適標的に結合し得る。「二重特異的抗体」という用語は、異なる抗体配列により定義された２種類の異なる抗原結合アームを有する抗体と理解されたい。「三重特異的抗体」という用語は、異なる抗体配列により定義された３種類の異なる抗原結合アームを有する抗体と理解されたい。これは、異なる標的結合と理解され得るが、１つの標的中の異なるエピトープに同様に結合することを含む。
「参照サンプル」は、別のサンプル、例えば、試験サンプルと比較することで、比較されるサンプルの特性を評価できるサンプルである。参照サンプルは、試験サンプルとの比較の際に基準として機能する、特性評価済みの何らかの特性を有する。例えば、参照サンプルは、がんを有する対象を示すＧＰＲＣ５Ｄ又はＢＣＭＡレベルについてのベンチマークとして使用することができる。参照サンプルは、必ずしも試験サンプルと平行して分析されなくてもよい。そのため一部の例では、参照サンプルは、所与の状態を特性評価するために予め設定された数値又は範囲、例えば、対象におけるがんの指標となるＧＰＲＣ５Ｄ又はＢＣＭＡレベルでもよい。この用語はまた、生理学的状態又は病態、例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ又はＢＣＭＡ発現がんに関連することが周知であるが、ＧＰＲＣ５Ｄ又はＢＣＭＡの量が分かっていない、比較目的で使用されるサンプルを含む。
「再発性」とは、治療薬による前処置後の改善期間後に疾患又は疾患の徴候及び症状が再開することを指す。
「難治性」とは、処置に応答しない疾患を指す。難治性疾患は、処置前若しくは処置開始時に処置に抵抗性であり得るか、又は難治性疾患は、処置中に抵抗性疾患となり得る。
ＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡ発現がんの進行の文脈において使用されるとき、「進行」という用語は、より重篤でない状態からより重篤な状態へのがんの変化を含む。これは、腫瘍の数又は重症度、転移の程度、がんが成長又は拡散する速度などの増大を含むことができる。例えば、「結腸がんの進行」には、このようながんの、より重篤でない状態からより重篤な状態への進行、例えば、ステージＩからステージＩＩへ、ステージＩＩからステージＩＩＩへなどの進行が挙げられる。
ＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡ発現がんの退行の文脈において使用されるとき、「退行」という用語は、より重篤な状態からより重篤でない状態へのがんの変化を含む。これは、腫瘍の数又は重症度、転移の程度、がんが成長又は拡散する速度などの低減を含むことができると考えられる。例えば、「結腸がんの退縮」には、このようながんの、より重篤な状態からより重篤でない状態への退縮、例えば、ステージＩＩＩからステージＩＩへ、ステージＩＩからステージＩへなどの回復（progression）が挙げられる。
安定したＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡ発現がんの文脈において使用されるとき、「安定した」という用語は、進行性がん又は退行性がんであるとみなすのに臨床的意義のある期間にわたり有意に十分に変化しない、又は変化していなかった病態を説明することを意図している。
本明細書に記載される実施形態は、特定の方法、試薬、化合物、組成物、又は生物系に限定されるものではなく、当然、様々に変更され得る。
多重特異的抗体
ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、及びＣＤ３に結合する多重特異的抗体、並びにその三重特異的結合フラグメントが本明細書において提供される。このような抗体又は抗体フラグメントは、これらの標的のうちの１つ又は２つのみを標的化する抗体と比較して、細胞の特定のサブセットへのより特異的な標的化を可能にし得る。
これは、例えば、ＣＤ３に結合する第１の抗原結合アーム、ＧＰＲＣ５Ｄに結合する第２の抗原結合アーム、及びＢＣＭＡに結合する第３の抗原結合アームを含む分子を作製することによって達成することができる。抗原結合アームは、標的の特異的な認識を可能にする任意の形態をとることができ、例えば、結合アームは、重鎖可変ドメイン、Ｆｖ（重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインの組み合わせ）、一本鎖Ｆｖ（single-chain Fv、ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、フィブロネクチンＩＩＩ型ドメインに基づいた結合ドメイン（Ｊａｎｓｓｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．のＣｅｎｔｙｒｉｎ分子など、フィブロネクチン由来、若しくはフィブロネクチン由来のＩＩＩ型ドメインのコンセンサスに基づいたもの、又はテネイシン由来、若しくはテネイシン由来のＩＩＩ型ドメインのコンセンサスに基づいたもの、例えば国際公開第２０１０／０５１２７４号及び同第２０１０／０９３６２７号を参照されたい）であっても、これらを含んでいてもよい。特定の実施形態では、三重特異的抗体は、３つの抗原結合アームを含む。一部の実施形態では、三重特異的抗体は、例えば一本鎖可変フラグメントの形態である追加の抗原結合アームが、例えば抗体の重鎖のうちの１つ又は軽鎖のうちの１つのＮ末端又はＣ末端に融合されている抗体（例えば、ＩｇＧフォーマットで）から構成される。
したがって、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、及びＣＤ３にそれぞれに結合する３種類の異なる抗原結合アームを含む三重特異的分子が提供される。
一部の実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体は、
（ａ）第１の重鎖可変ドメイン（ＶＨ１）及び第１の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ１）を含む第１の抗原結合アームと、
（ｂ）第２の重鎖可変ドメイン（ＶＨ２）及び第２の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ２）を含む第２の抗原結合アームと、
（ｃ）第３の重鎖可変ドメイン（ＶＨ３）及び第３の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ３）を含む第３の抗原結合アームと、を含む。
一部の実施形態では、第１の抗原結合アームは、ＣＤ３上のエピトープに結合し、第２の抗原結合アームは、ＧＰＲＣ５Ｄ上のエピトープに結合し、第３の抗原結合アームは、ＢＣＭＡ上のエピトープに結合する。
一部の実施形態では、ＣＤ３に結合する第１の抗原結合アームは、配列番号８のＶＨ１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ３に結合する第１の抗原結合アームは、配列番号７のＶＬ１のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ３に結合する第１の抗原結合アームは、ＧＤＳＶＦＮＮＮＡＡＷＳ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＲＴＹＹＲＳＫＷＬＹＤ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、及びＧＹＳＳＳＦＤＹ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ３に結合する第１の抗原結合アームは、ＴＧＴＳＳＮＩＧＴＹＫＦＶＳ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＥＶＳＫＲＰＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及びＶＳＹＡＧＳＧＴＬＬ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ３に結合する第１の抗原結合アームは、配列番号８のＶＨ１を有する。一部の実施形態では、ＣＤ３に結合する第１の抗原結合アームは、配列番号７のＶＬ１を有する。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄに結合する第２の抗原結合アームは、配列番号１６のＶＨ２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄに結合する第２の抗原結合アームは、配列番号１５のＶＬ２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄに結合する第２の抗原結合アームは、ＧＦＳＬＴＮＩＲＭＳＶＳ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＩＦＳＮＤＥＫＳ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、及びＭＲＬＰＹＧＭＤＶ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄに結合する第２の抗原結合アームは、ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＤＧＮＴＹＬＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＫＩＳＮＲＦＦ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及びＭＱＡＴＱＦＰＨＴ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄに結合する第２の抗原結合アームは、配列番号１６のＶＨ１を有する。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄに結合する第２の抗原結合アームは、配列番号１５のＶＬ１を有する。
一部の実施形態では、ＢＣＭＡに結合する第３の抗原結合アームは、配列番号２４のＶＨ３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡに結合する第３の抗原結合アームは、配列番号２３のＶＬ３のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡに結合する第３の抗原結合アームは、ＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、及びＤＥＧＹＳＳＧＨＹＹＧＭＤＶ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３、並びにＲＡＳＱＳＩＳＳＳＦＬＴ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、を含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡに結合する第３の結合ドメインは、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及びＱＨＹＧＳＳＰＭＹＴ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３、を含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡに結合する第３の抗原結合アームは、配列番号２４のＶＨ１を有する。一部の実施形態では、ＢＣＭＡに結合する第３の抗原結合アームは、配列番号２３のＶＬ１を有する。
一部の実施形態では、ＣＤ３エピトープに結合する抗原結合アームのＶＨ１及びＶＬ１は、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆｄ、ジスルフィド安定化Ｆｖフラグメント（disulfide stabilized Fv、ｄｓＦｖ）、又はジスルフィド安定化ダイアボディ（disulfide stabilized diabody、ｄｓダイアボディ）中に存在する。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄエピトープに結合する抗原結合アームのＶＨ２及びＶＬ２は、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆｄ、ジスルフィド安定化Ｆｖフラグメント（ｄｓＦｖ）、又はジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）中に存在する。
一部の実施形態では、ＢＣＭＡエピトープに結合する抗原結合アームのＶＨ３及びＶＬ３は、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆｄ、ジスルフィド安定化Ｆｖフラグメント（ｄｓＦｖ）、又はジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）中に存在する。
一部の実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体の第１の抗原結合アームは、ＶＨ１を含む第１の重鎖部分（ＨＣ１）及びＶＬ１を含む軽鎖部分（ＬＣ）を含み、ＶＨ１及びＶＬ１は対合して、第１の抗原に結合する第１の抗原結合ドメインを形成する。一部の実施形態では、ＨＣ１は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ１、第１の重鎖定常ドメイン（ＣＨ１）、及び第１のＦｃドメインを含む。一部の実施形態では、ＨＣ１のＶＨ１及びＣＨ１は、ＬＣとともに、フラグメント抗原結合（Ｆａｂ）ドメインを形成する。
一部の実施形態では、第１の抗原結合アームのＶＨ１は、第１のＦｃドメインを介して第３の抗原結合アームのＶＨ３に連結される。一部の実施形態では、第１の抗原結合アームの第１のＦｃドメインは、第１のリンカー（first linker、Ｌ１）を介して第３の抗原結合アームに連結され、それによって、連結された第１及び第３の抗原結合アームを形成する。連結された第１及び第３の抗原結合アームは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、第１の抗原結合アームのＶＨ１、ＣＨ１ドメイン、及びＦｃドメイン、第１のリンカー、並びに第３の抗原結合アームを含み得る。一部の実施形態では、第３の抗原結合アームは、第３の抗原結合アームのＶＨ３及びＶＬ３から形成される一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。
一部の実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体の第２の抗原結合アームは、第２の抗原に結合する第２の抗原結合ドメインを形成する第２の重鎖可変ドメイン（ＶＨ２）を含む第２の重鎖部分（ＨＣ２）を含む。一部の実施形態では、第２の結合アームは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ２及びＶＬ２から形成される一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、並びに第２のＦｃドメインを含む。
一部の実施形態では、第２の抗原結合アームのＶＨ２は、第２のＦｃドメインを介して第３の抗原結合アームのＶＨ３に連結される。一部の実施形態では、第２の抗原結合アームの第２のＦｃドメインは、リンカーを介して第３の抗原結合アームに連結され、それによって、連結された第２及び第３の抗原結合アームを形成する。連結された第２及び第３の抗原結合アームは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、第２の抗原結合ドメイン、第２のＦｃドメイン、第１のリンカー、及び第３の抗原結合アームを含み得る。一部の実施形態では、第３の抗原結合アームは、第３の抗原結合アームのＶＨ３及びＶＬ３から形成される一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。
好ましい実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体は、ＶＨ１を含む第１の重鎖部分（ＨＣ１）と、ＶＬ１を含む軽鎖部分（ＬＣ）とを含むＣＤ３特異的アームを含む三重特異的抗体である。ＶＨ１及びＶＬ１ドメインは対になって、ＣＤ３に結合する第１の抗原結合ドメインを形成する。三重特異的抗体の第２の抗原結合アームは、第２の抗原に結合する第２の抗原結合ドメインを形成するＶＨ２を有する第２の重鎖部分（ＨＣ２）を含む。ＣＤ３特異的結合アームのＨＣ１又は第２の抗原結合アームのＨＣ２は、第３の抗原に結合する第３の抗原結合ドメインを形成するＶＨ３ドメインを含む第３の抗原結合アームに連結される。一部の実施形態では、第２の抗原はＢＣＭＡであり、第３の抗原はＧＰＲＣ５Ｄである。一部の実施形態では、第２の抗原はＧＰＲＣ５Ｄであり、第３の抗原はＢＣＭＡである。
一実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体は、ＶＨ１を有するＨＣ１と、ＶＬ１を有するＬＣとを含むＣＤ３特異的結合アームを含む三重特異的抗体である。ＶＨ１及びＶＬ１は対になって、ＣＤ３に結合する第１のＣＤ３特異的抗原結合ドメインを形成する。第２の抗原結合アームは、ＧＰＲＣ５Ｄに結合する第２の抗原結合ドメインを形成するＶＨ２及びＶＬ２を含む。第３の抗原結合アームは、第２の抗原結合アームに連結され、ＢＣＭＡに結合する第３の抗原結合ドメインを形成するＶＨ３及びＶＬ３を含む。
一実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体は、ＶＨ１を有するＨＣ１と、ＶＬ１を有するＬＣとを含むＣＤ３特異的結合アームを含む三重特異的抗体である。ＶＨ１及びＶＬ１は対になって、ＣＤ３に結合する第１のＣＤ３特異的抗原結合ドメインを形成する。第２の抗原結合アームは、ＢＣＭＡに結合する第２の抗原結合ドメインを形成するＶＨ２及びＶＬ２を含む。第３の抗原結合アームは、第２の抗原結合アームに連結され、ＧＰＲＣ５Ｄに結合する第３の抗原結合ドメインを形成するＶＨ３及びＶＬ３を含む。
一実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体は、ＶＨ１を有するＨＣ１と、ＶＬ１を有するＬＣとを含むＣＤ３特異的結合アームを含む三重特異的抗体である。ＶＨ１及びＶＬ１は対になって、ＣＤ３に結合する第１のＣＤ３特異的抗原結合ドメインを形成する。第２の抗原結合アームは、ＧＰＲＣ５Ｄに結合する第２の抗原結合ドメインを形成するＶＨ２及びＶＬ２を含む。第３の抗原結合アームは、第１のＣＤ３特異的抗原結合アームに連結され、ＢＣＭＡに結合する第３の抗原結合ドメインを形成するＶＨ３及びＶＬ３を含む。
一実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体は、ＶＨ１を有するＨＣ１と、ＶＬ１を有するＬＣとを含むＣＤ３特異的結合アームを含む三重特異的抗体である。ＶＨ１及びＶＬ１は対になって、ＣＤ３に結合する第１のＣＤ３特異的抗原結合ドメインを形成する。第２の抗原結合アームは、ＢＣＭＡに結合する第２の抗原結合ドメインを形成するＶＨ２及びＶＬ２を含む。第３の抗原結合アームは、第１のＣＤ３特異的抗原結合アームに連結され、ＧＰＲＣ５Ｄに結合する第３の抗原結合ドメインを形成するＶＨ３及びＶＬ３を含む。
一部の実施形態では、第１の抗原結合アームのＶＨ１ドメインを有するＨＣ１及びＶＬ１ドメインを有するＬＣは、第１の抗原結合ドメインを含む抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を形成する。一部の実施形態では、第２の抗原結合アームのＶＨ２及びＶＬ２は、第２の抗原結合ドメインを含む一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を形成する。一部の実施形態では、第３の抗原結合アームのＶＨ３及びＶＬ３は、第３の抗原結合ドメインを含む一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を形成する。
一実施形態では、ＣＤ３結合アームは、抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含み、ＢＣＭＡ結合アームは、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含み、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む。
一実施形態では、ＣＤ３結合アームは、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含み、ＢＣＭＡ結合アームは抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含み、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む。
一実施形態では、ＣＤ３結合アームは、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含み、ＢＣＭＡ結合アームは、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含み、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含む。
一部の実施形態では、三重特異的抗体のＣＤ３結合アームは、ＨＣ１及びＬＣを含む。ＨＣ１は、定常重鎖領域（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）及びＶＨ１を含み得る。ＬＣは、ＶＬ１を含み得る。ＶＨ１及びＶＬ１は、結合してＣＤ３抗原結合ドメインを形成する。
一部の実施形態では、三重特異的抗体のＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、ＨＣ２を含む。ＨＣ２は、定常重鎖領域（ＣＨ２及びＣＨ３）と、ＣＨ２領域のＮ末端に結合された一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）とを含み得、ｓｃＦｖは、ＧＰＲＣ５Ｄ抗原結合ドメインを含む。
一部の実施形態では、三重特異的抗体は、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームのＣＨ３領域のＣ末端に結合してＧＰＲＣ５Ｄ／ＢＣＭＡ結合アームを形成するＢＣＭＡ抗原結合アームを更に含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ抗原結合アームは、第２の一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ／ＢＣＭＡアームは、ＧＰＲＣ５Ｄ結合ドメインを含有するｓｃＦｖ、ＣＨ２及びＣＨ３領域、ＢＣＭＡ結合ドメインを含有するｓｃＦｖ、の構造を有し得る。
一部の実施形態では、三重特異的抗体のＣＤ３結合アームは、ＨＣ１及びＬＣを含む。ＨＣ１は、定常重鎖領域（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）及びＶＨ１を含み得る。ＬＣは、ＶＬ１を含み得る。ＶＨ１及びＶＬ１は、結合してＣＤ３抗原結合ドメインを形成する。
一部の実施形態では、三重特異的抗体のＢＣＭＡ結合アームは、ＨＣ２を含む。ＨＣ２は、定常重鎖領域（ＣＨ２及びＣＨ３）と、ＣＨ２領域のＮ末端に結合された一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）とを含み得、ｓｃＦｖは、ＢＣＭＡ抗原結合ドメインを含む。
一部の実施形態では、三重特異的抗体は、ＣＤ３結合アームのＣＨ３領域のＣ末端に結合されてＣＤ３／ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームを形成しているＧＰＲＣ５Ｄ抗原結合アームを更に含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ抗原結合アームは、第２の一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む。一部の実施形態では、ＣＤ３／ＧＰＲＣ５Ｄアームは、ＣＤ３結合ドメインを含有するＦａｂ、ＣＨ２及びＣＨ３領域、ＧＰＲＣ５Ｄ結合ドメインを含有するｓｃＦｖ、の構造を有し得る。
一部の実施形態では、本発明の多重特異的抗体は、完全長の抗体構造を有する抗体を含む。本明細書で使用されるとき、「完全長の抗体」は、２本の完全長の抗体重鎖と２本の完全長の抗体軽鎖とを有する抗体を意味する。完全長の抗体重鎖（ＨＣ）は、重鎖可変ドメイン及び定常ドメイン、ＶＨ、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む。完全長の抗体軽鎖（ＬＣ）は、軽鎖可変ドメイン及び定常ドメイン、ＶＬ及びＣＬを含む。完全長抗体は、一方又は両方の重鎖のいずれかにおいて、Ｃ末端リジン（Ｋ）を欠いていてもよい。「Ｆａｂアーム」又は「半分子」という用語は、抗原に結合する一対の重鎖－軽鎖を意味する。一部の実施形態では、抗原結合ドメインのうちの１つは、非抗体ベースの結合ドメイン、例えば、フィブロネクチン３型ドメイン、例えば、Ｃｅｎｔｙｒｉｎに基づいた結合ドメインである。
ＢＣＭＡ結合アーム
本明細書に記載されるＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体は、ＢＣＭＡに特異的な抗原結合アームを含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、ヒトＢＣＭＡに結合する。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、ヒトＢＣＭＡ及びカニクイザルＢＣＭＡに結合する。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、ヒトＢＣＭＡに結合するが、カニクイザルＢＣＭＡには結合しない。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、ＢＣＭＡ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）からの１つ又は２つ以上の残基を含むエピトープに結合する。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、ＢＣＭＡ ＢＣＭＷ３７鎖の残基１７～２６（ＬＬＨＡＣＩＰＣＱＬ（配列番号１６２））に結合する。
ＢＣＭＡ結合アームは、５×１０－７Ｍ以下、例えば、１×１０－７Ｍ以下、５×１０－８Ｍ以下、１×１０－８Ｍ以下、５×１０－９Ｍ以下、１×１０－９Ｍ、又は５×１０－１０Ｍ以下の親和性でＢＣＭＡに結合し得る。一実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、約１×１０－１０Ｍ～１×１０－７Ｍの親和性でＢＣＭＡに結合する。一実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、約１×１０－１０Ｍ、約２×１０－１０Ｍ、約３×１０－１０Ｍ、約４×１０－１０Ｍ、約５×１０－１０Ｍ、約６×１０－１０Ｍ、約７×１０－１０Ｍ、約８×１０－１０Ｍ、約９×１０－１０Ｍ、約１×１０－９Ｍ、約２×１０－９Ｍ、約３×１０－９Ｍ、約４×１０－９Ｍ、約５×１０－９Ｍ、約６×１０－９Ｍ、約７×１０－９Ｍ、約８×１０－９Ｍ、又は約９×１０－９Ｍの親和性でＢＣＭＡに結合する。一実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、約１×１０－１０～５×１０－１０Ｍ、約１×１０－１０～８×１０－１０Ｍ、約２×１０－１０～９×１０－１０Ｍ、約３×１０－１０～１０×１０－１０Ｍ、約４×１０－１０～１０×１０－１０Ｍ、又は約５×１０－１０～１０×１０－１０Ｍの親和性でＢＣＭＡに結合する。一実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、表面プラズモン共鳴（surface plasmon resonance、ＳＰＲ）アッセイによって決定したとき、約８．４×１０－１０Ｍの親和性でＢＣＭＡに結合する。一実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイによって決定したとき、約２．１×１０－１０Ｍの親和性でＢＣＭＡに結合する。
表１に、本明細書に記載される一部のＢＣＭＡ特異的抗体の例の概要を提供する。
Figure 2024507180000002
いくつかのＢＣＭＡ特異的抗体又は抗原結合フラグメントの特徴は、例えば、米国特許第１０，０７２，０８８号に見出され得、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、表１に記載される抗体のうちのいずれか１つの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、表１に記載される抗体のうちのいずれか１つの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、表１に記載される抗体のうちのいずれか１つの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメインと、表１に記載される抗体のうちのいずれか１つの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、表１に記載される抗体のうちのいずれか１つの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメインと、表１に記載される抗体のうちのいずれか１つの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含む抗体又は抗原結合フラグメントと、ＢＣＭＡに対する結合について競合する。
一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、表１に記載される抗体のうちのいずれか１つの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖を含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、表１に記載される抗体のうちのいずれか１つの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む軽鎖を含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、表１に記載される抗体のうちのいずれか１つの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖と、表１に記載される抗体のうちのいずれか１つの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む軽鎖と、を含む。
一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、クローンＢＣＭＢ５１９、ＢＣＭＢ６９、ＢＣＭＢ１１７、ＢＣＭＢ１２３、ＢＣＭＢ１２８、ＢＣＭＢ１２９、ＢＣＭＢ１７６、又はＢＣＭＢ１７７の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、クローンＢＣＭＢ５１９、ＢＣＭＢ６９、ＢＣＭＢ１１７、ＢＣＭＢ１２３、ＢＣＭＢ１２８、ＢＣＭＢ１２９、ＢＣＭＢ１７６、又はＢＣＭＢ１７７の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３とを含む。一実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、クローンＢＣＭＢ５１９の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３とを含む。
一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、表１に記載されている抗体クローンに由来する重鎖可変ドメインを含む。一部の例示的実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、表１に記載されるとおり抗体クローンから得られた重鎖可変ドメインと、軽鎖可変ドメインとを含む。一部の例示的実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、クローンＢＣＭＢ５１９、ＢＣＭＢ６９、ＢＣＭＢ１１７、ＢＣＭＢ１２３、ＢＣＭＢ１２８、ＢＣＭＢ１２９、ＢＣＭＢ１７６、又はＢＣＭＢ１７７の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含む。一実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、クローンＢＣＭＢ５１９の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含む。
一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号２０を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２１を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号２２を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号２０を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２１を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号２２を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号１７を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１８を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１９を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。ＢＣＭＡ結合アームは、ヒトフレームワーク配列を含み得る。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号２４と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号２４と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号２３と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。
一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号３２を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号３３を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３４を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号３２を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号３３を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号３４を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号３９を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号４０を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号４１を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。ＢＣＭＡ結合アームは、ヒトフレームワーク配列を含み得る。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号４２と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号４２と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号４８と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。
一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号３８を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号３３を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３４を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号３８を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号３３を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号３４を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号３９を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号４０を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号４１を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。ＢＣＭＡ結合アームは、ヒトフレームワーク配列を含み得る。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号４３と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号４３と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号４８と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。
一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号３２を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号３３を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３７を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号３２を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号３３を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号３７を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号３９を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号４０を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号４１を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。ＢＣＭＡ結合アームは、ヒトフレームワーク配列を含み得る。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号４４と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号４４と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号４８と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。
一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号３２を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号３６を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３４を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号３２を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号３６を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号３４を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号３９を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号４０を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号４１を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。ＢＣＭＡ結合アームは、ヒトフレームワーク配列を含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号４５と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号４５と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号４８と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。
一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号３８を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号３３を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３７を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号３８を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号３３を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号３７を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号３９を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号４０を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号４１を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。ＢＣＭＡ結合アームは、ヒトフレームワーク配列を含み得る。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号４６と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号４６と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号４８と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。
一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号３８を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１６４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３７を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号３８を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１６４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号３７を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号３９を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号４０を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号４１を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。ＢＣＭＡ結合アームは、ヒトフレームワーク配列を含み得る。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号４７と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号４７と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号４８と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。
ＢＣＭＡ結合アームは、任意の種から組換え手法により得ることができる。例えば、ＢＣＭＡ結合アームは、マウス、ラット、ヤギ、ウマ、ブタ、ウシ、ニワトリ、ウサギ、ラクダ、ロバ、ヒト、又はそれらのキメラ版に由来し得る。ヒトへの投与に使用するために、非ヒト由来の抗原結合フラグメントは、ヒト患者に投与したときの抗原性がより低くなるよう遺伝的に又は構造的に変化させてもよい。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、キメラである抗原結合フラグメントを含む。
一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、ヒト化抗原結合フラグメントを含む。ヒト化抗原結合フラグメントは、非ヒト免疫グロブリンに由来する最少配列を含む、キメラ免疫グロブリン、その免疫グロブリン鎖、又はフラグメント（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、若しくは抗体の他の抗原結合部分配列）であってもよい。ほとんどの場合、ヒト化抗体又は抗原結合フラグメントは、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が所望の特異性、親和性、及び能力を有する非ヒト種、例えば、マウス、ラット、又はウサギのＣＤＲからの残基（ドナー抗体）により置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）又は抗原結合フラグメントである。概して、ヒト化抗体又は抗原結合フラグメントは、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むこととなる。同可変ドメイン中、全て又は実質的に全てのＣＤＲ領域は、非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応し、全て又は実質的に全てのフレームワーク領域は、ヒト免疫グロブリン配列のフレームワーク領域である。ヒト化抗体抗原結合フラグメントは、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的には、ヒト免疫グロブリンのものを含み得る。
ＧＰＲＣ５Ｄ結合アーム
本明細書に記載されるＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体は、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的な抗原結合アームを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、ＧＰＲＣ５Ｄに結合する。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、ヒトＧＰＲＣ５Ｄ及びカニクイザルＧＰＲＣ５Ｄ、好ましくはその細胞外ドメインに結合する。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、ヒトＧＰＲＣ５Ｄに結合するが、カニクイザルＧＰＲＣ５Ｄには結合しない。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号１１６のアミノ酸配列を有するポリペプチドの１つ又は２つ以上の残基に結合する。
表２に、本明細書に記載される一部のＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体の例の概要を提供する。
Figure 2024507180000003
いくつかのＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体又は抗原結合フラグメントの特徴は、例えば、米国特許第１０，５６２，９６８号、米国特許出願公開第２０２０／０２３１６８６号に見出すことができ、これらの各々の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、表２に記載される抗体のうちのいずれか１つの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、表２に記載されている抗体のいずれか１つの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、表２に記載される抗体のうちのいずれか２つの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメインと、表１に記載される抗体のうちのいずれか１つの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、表２に記載される抗体のうちのいずれか１つの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖と、表２に記載される抗体のうちのいずれか１つの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む軽鎖と、を含む抗体又は抗原結合と、ＧＰＲＣ５Ｄに対する結合について競合する。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、表２に記載される抗体のうちのいずれか１つの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、表２に記載される抗体のうちのいずれか１つの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む軽鎖を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、表２に記載される抗体のうちのいずれか１つの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖と、表２に記載される抗体のうちのいずれか１つの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む軽鎖と、を含む。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、表２に記載されている抗体クローンに由来する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、表２に記載されている抗体クローンに由来する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、表２に記載されている抗体クローンに由来する、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３とを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、クローンＧＣ５Ｂ６８０、ＧＣ５Ｂ８１、ＧＣ５Ｂ４６５、ＧＳ５Ｂ４８３、ＧＣ５Ｂ５９６、ＧＣ５Ｂ３８２、ＧＣ５Ｂ３７９、ＧＣ５Ｂ３７３、ＧＣ５Ｂ３７６、ＧＣ５Ｂ３８５、ＧＣ５Ｂ３７０、ＧＣ５Ｂ６０２、ＧＣ５Ｂ６０３、ＧＣ５Ｂ５９９、ＧＣ５Ｂ６０１、ＧＣ５Ｂ５９８、又はＧＣ５Ｂ５９７の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、クローンＧＣ５Ｂ６８０、ＧＣ５Ｂ８１、ＧＣ５Ｂ４６５、ＧＳ５Ｂ４８３、ＧＣ５Ｂ５９６、ＧＣ５Ｂ３８２、ＧＣ５Ｂ３７９、ＧＣ５Ｂ３７３、ＧＣ５Ｂ３７６、ＧＣ５Ｂ３８５、ＧＣ５Ｂ３７０、ＧＣ５Ｂ６０２、ＧＣ５Ｂ６０３、ＧＣ５Ｂ５９９、ＧＣ５Ｂ６０１、ＧＣ５Ｂ５９８、又はＧＣ５Ｂ５９７の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。一実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、クローンＧＣ５Ｂ６８０の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３とを含む。
一部の例示的実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、表２に記載されている抗体クローンに由来する重鎖可変ドメインを含む。一部の例示的実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、表２に記載されるとおり抗体クローンから得られた重鎖可変ドメインと、軽鎖可変ドメインとを含む。一部の例示的実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、クローンＧＣ５Ｂ６８０、ＧＣ５Ｂ８１、ＧＣ５Ｂ４６５、ＧＳ５Ｂ４８３、ＧＣ５Ｂ５９６、ＧＣ５Ｂ３８２、ＧＣ５Ｂ３７９、ＧＣ５Ｂ３７３、ＧＣ５Ｂ３７６、ＧＣ５Ｂ３８５、ＧＣ５Ｂ３７０、ＧＣ５Ｂ６０２、ＧＣ５Ｂ６０３、ＧＣ５Ｂ５９９、ＧＣ５Ｂ６０１、ＧＣ５Ｂ５９８、又はＧＣ５Ｂ５９７の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含む。一実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、クローンＧＣ５Ｂ６８０の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ特異的抗体クローンは、２８ｎＭ以下のＥＣ５０でＡＤＣＣインビトロを誘導し得る。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号１２を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１３を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１４を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号１２を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１３を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号１４を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号９を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１０を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、ヒトフレームワーク配列を含むことができる。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号１６と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号１６と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１５と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号４９を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号５３を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号５７を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号４９を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号５３を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号５７を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６１を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号６４を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６７を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、ヒトフレームワーク配列を含むことができる。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号９７と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号９７と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１０１と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号５０を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号５４を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号５８を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号５０を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号５４を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号５８を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６１を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号６４を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６７を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、ヒトフレームワーク配列を含むことができる。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号９８と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号９８と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１０１と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号５１を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号５５を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号５９を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号５１を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号５５を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号５９を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６２を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号６５を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６８を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、ヒトフレームワーク配列を含むことができる。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号９９と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号９９と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１０２と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号５２を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号５６を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６０を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号５２を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号５６を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号６０を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６３を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号６６を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６９を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、ヒトフレームワーク配列を含むことができる。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号１００と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号１００と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１０３と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号７０を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号７７を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８４を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号７０を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号７７を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号８４を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号９１を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９３を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９５を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、ヒトフレームワーク配列を含むことができる。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号１０４と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号１０４と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１１３と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号５０を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号７８を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８５を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号５０を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号７８を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号８５を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６１を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号６４を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６７を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、ヒトフレームワーク配列を含むことができる。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号１０５と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号１０５と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１０１と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号７１を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号７９を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８６を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号７１を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号７９を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号８６を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６２を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号６５を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６８を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、ヒトフレームワーク配列を含むことができる。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号１０６と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号１０６と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１０２と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号７１を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号７９を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号５９を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号７１を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号７９を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号５９を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６２を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号６５を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６８を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、ヒトフレームワーク配列を含むことができる。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号１０７と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号１０７と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１０２と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号７２を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号８０を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８７を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号７２を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号８０を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号８７を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６２を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号６５を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６８を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、ヒトフレームワーク配列を含むことができる。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号１０８と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号１０８と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１０２と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号７３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号８１を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８８を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号７３を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号８１を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号８８を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号９１を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９３を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９５を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、ヒトフレームワーク配列を含むことができる。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号１０９と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号１０９と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１１３と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号７４を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号８２を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６０を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号７４を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号８２を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号６０を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６３を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号６６を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６９を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、ヒトフレームワーク配列を含むことができる。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号１１０と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号１１０と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１０３と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号７５を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号８０を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８９を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号７５を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号８０を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号８９を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号９２を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９４を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９６を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、ヒトフレームワーク配列を含むことができる。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号１１１と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号１１１と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１１４と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号７６を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号８３を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９０を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号７６を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号８３を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号９０を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６３を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号６６を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６９を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、ヒトフレームワーク配列を含むことができる。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号１１２と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、配列番号１１２と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１１５と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。
ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、任意の種から組換え手法により得ることができる。例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、マウス、ラット、ヤギ、ウマ、ブタ、ウシ、ニワトリ、ウサギ、ラクダ、ロバ、ヒト、又はそれらのキメラ版に由来し得る。ヒトへの投与に使用するために、非ヒト由来の抗原結合フラグメントは、ヒト患者に投与したときの抗原性がより低くなるよう遺伝的に又は構造的に変化させてもよい。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、キメラである抗原結合フラグメントを含む。
一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、ヒト化抗原結合フラグメントを含む。ヒト化抗原結合フラグメントは、非ヒト免疫グロブリンに由来する最少配列を含む、キメラ免疫グロブリン、その免疫グロブリン鎖、又はフラグメント（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、若しくは抗体の他の抗原結合部分配列）であってもよい。ほとんどの場合、ヒト化抗体又は抗原結合フラグメントは、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が所望の特異性、親和性、及び能力を有する非ヒト種、例えば、マウス、ラット、又はウサギのＣＤＲからの残基（ドナー抗体）により置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）又は抗原結合フラグメントである。概して、ヒト化抗体又は抗原結合フラグメントは、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むこととなる。同可変ドメイン中、全て又は実質的に全てのＣＤＲ領域は、非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応し、全て又は実質的に全てのフレームワーク領域は、ヒト免疫グロブリン配列のフレームワーク領域である。ヒト化抗体抗原結合フラグメントは、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的には、ヒト免疫グロブリンのものを含み得る。
ＣＤ３結合アーム
本明細書に記載されるＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体は、ＣＤ３に結合する抗原結合アームを含む。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、ＣＤ３に結合する。一部の好ましい実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体のＣＤ３特異的アームは、ヒト初代Ｔ細胞及び／又はカニクイザル初代Ｔ細胞に結合し、これらを活性化するＣＤ３特異的抗体から得られる。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、ＣＤ３εのＮ末端において、エピトープに結合する。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、ＣＤＲ３ε鎖の残基２２～３５（ＱＤＧＮＥＥＭＧＧＩＴＱＴＰ（配列番号１６１））に結合する。
ＣＤ３結合アームは、５×１０－７Ｍ以下、例えば、１×１０－７Ｍ以下、５×１０－８Ｍ以下、１×１０－８Ｍ以下、５×１０－９Ｍ以下、又は１×１０－９Ｍ以下の親和性でＣＤ３に結合し得る。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、約１×１０－８Ｍ、約２×１０－８Ｍ、約３×１０－８Ｍ、約４×１０－８Ｍ、約５×１０－８Ｍ、約６×１０－８Ｍ、約７×１０－８Ｍ、約８×１０－８Ｍ、約９×１０－８Ｍ、又は約１×１０－８Ｍの親和性でＣＤ３に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、約１×１０－８Ｍ～約３×１０－８Ｍ、約２×１０－８Ｍ～約４×１０－８Ｍ、約１×１０－８Ｍ～約５×１０－８Ｍ、約２×１０－８Ｍ～約６×１０－８Ｍ、又は約３×１０－８Ｍ～約８×１０－８Ｍの親和性でＣＤ３に結合する。一実施形態では、ＣＤ３結合アームは、約２．５×１０－８Ｍの親和性でＣＤ３に結合する。一実施形態では、ＣＤ３結合アームは、約３．１×１０－８Ｍの親和性でＣＤ３に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ３結合親和性は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイによって決定される。
ヒトＣＤ３εは、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ０７７６６（ＣＤ３Ｅ＿ＨＵＭＡＮ）に記載されている。当該技術分野で報告されている抗ＣＤ３ε抗体は、ＳＰ３４であり（Ｙａｎｇ ＳＪ，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（１９８６）１３７；１０９７－１１００）。ＳＰ３４は霊長類及びヒトの両方のＣＤ３と反応する。ＳＰ３４はＰｈａｒｍｉｎｇｅｎから入手できる。従来技術で記載される更なる抗ＣＤ３抗体は、ＵＣＨＴ－１である（国際公開第２００００４１４７４号を参照されたい）。従来技術で記載される更なる抗ＣＤ３抗体は、ＢＣ－３である（Ｆｒｅｄ Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ；ｕｓｅｄ ｉｎ Ｐｈａｓｅ Ｉ／ＩＩ ｔｒｉａｌｓ ｏｆ ＧｖＨＤ，Ａｎａｓｅｔｔｉ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５４：８４４（１９９２））が挙げられる。ＳＰ３４は、ＳＰ－３４がＣＤ３のε鎖上にのみ存在するエピトープを認識するという点で、ＵＣＨＴ－１及びＢＣ－３とは異なる（Ｓａｌｍｅｒｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：３０４７）が、ＵＣＨＴ－１及びＢＣ－３は、ε鎖及びγ鎖の両方によって寄与されるエピトープを認識する。抗体ＳＰ３４のものと同じ配列を有する抗体の配列は、国際公開第２００８１１９５６５号、同第２００８１１９５６６号、同第２００８１１９５６７号、同第２０１００３７８３６号、同第２０１００３７８３７号、及び同第２０１００３７８３８号に言及されている。抗体ＳＰ３４のＶＨに対して９６％の同一性を有する配列は、米国特許第８２３６３０８号（国際公開第２００７０４２２６１号）に言及されている。
一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、ＣＤ３εの６つのＮ末端アミノ酸を含むエピトープと接触する。一部の実施形態では、多重特異的抗体のＣＤ３特異的結合アームは、マウスモノクローナル抗体ＳＰ３４、マウスＩｇＧ３／ラムダアイソタイプから得られる。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、抗体ＳＰ３４のＣＤＲを含む。かかるＣＤ３結合アームは、５×１０－７Ｍ以下、例えば、１×１０－７Ｍ以下、５×１０－８Ｍ以下、１×１０－８Ｍ以下、５×１０－９Ｍ以下、又は１×１０－９Ｍ以下の親和性でＣＤ３に結合し得る。ＣＤ３特異的結合アームは、マウスモノクローナル抗体ＳＰ３４のヒト化版のアームであってもよい。ヒトフレームワークを用いる適合（Human framework adaptation、ＨＦＡ）を使用して、ＣＤ３特異的アームが得られる抗ＣＤ３抗体をヒト化してもよい。
表３に、本明細書に記載される一部のＣＤ３特異的抗体の例の概要を提供する。
Figure 2024507180000004
いくつかのＣＤ３特異的抗体又は抗原結合フラグメントの特徴は、例えば、米国特許第１０，５６２，９６８号及び同第１０，０７２，０８８号、米国特許出願公開第２０１９／０３８２４８１号に見出すことができ、これらの各々の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、表３に記載される抗体のうちのいずれか１つの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、表３に記載される抗体のうちのいずれか１つの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、表３に記載される抗体のうちのいずれか１つの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメインと、表３に記載される抗体のうちのいずれか１つの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含む。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、表３に記載される抗体のうちのいずれか３つの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメインと、表１に記載される抗体のうちのいずれか１つの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含む抗体又は抗原結合フラグメントと、ＣＤ３に対する結合について競合する。
一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、表３に記載される抗体のうちのいずれか１つの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖を含む。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、表３に記載される抗体のうちのいずれか１つの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む軽鎖を含む。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、表３に記載される抗体のうちのいずれか１つの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖と、表３に記載される抗体のうちのいずれか１つの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む軽鎖と、を含む。
一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、表３に記載される抗体のいずれか１つの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、表３に記載される抗体のいずれか１つの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、表３に記載される抗体のいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖と、表３に記載される抗体のいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む軽鎖と、を含む。多重特異的抗体の一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、表３から選択される重鎖及び軽鎖の対を含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、クローンＣＤ３Ｂ３７６の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３とを含む。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームは、クローンＣＤ３Ｂ２１９の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３とを含む。
一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、配列番号４を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号５を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、配列番号４を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号５を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号６を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号１を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号２を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。ＣＤ３結合アームは、ヒトフレームワーク配列を含み得る。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、配列番号８と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、配列番号８と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号７と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、配列番号２６と実質的に同じか又は同一の重鎖を含む。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、配列番号２６と実質的に同じか又は同一の重鎖と、配列番号２７と実質的に同じか又は同一の軽鎖とを含む。
一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、配列番号１１７を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１１８を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１１９を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、配列番号１１７を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１１８を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号１１９を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号１２３を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１２４を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１２５を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。ＣＤ３結合アームは、ヒトフレームワーク配列を含み得る。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、配列番号１２０と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、配列番号１２０と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号１２５と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、配列番号１２１と実質的に同じか又は同一の重鎖を含む。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、配列番号１２１と実質的に同じか又は同一の重鎖と、配列番号１２６と実質的に同じか又は同一の軽鎖とを含む。
一部の実施形態では、重鎖及び／又は軽鎖のＣＤＲは、例えば、ムロモナブ－ＣＤ３（ＯＫＴ３）、オテリキシズマブ（ＴＲＸ４）、テプリズマブ（ＭＧＡ０３１）、ビシリズマブ（Ｎｕｖｉｏｎ）、ＴＲ－６６又はＸ３５－３、ＶＩＴ３、ＢＭＡ０３０（ＢＷ２６４／５６）、ＣＬＢ－Ｔ３／３、ＣＲＩＳ７、ＹＴＨ１２．５、Ｆｌ １１－４０９、ＣＬＢ－Ｔ３．４．２、ＴＲ－６６、ＷＴ３２、ＳＰｖ－Ｔ３ｂ、１１Ｄ８、ＸＩＩＩ－１４１、ＸＩＩＩ－４６、ＸＩＩＩ－８７、１２Ｆ６、Ｔ３／ＲＷ２－８Ｃ８、Ｔ３／ＲＷ２－４Ｂ６、ＯＫＴ３Ｄ、Ｍ－Ｔ３０１、ＳＭＣ２、Ｆ１０１．０１、ＵＣＨＴ－１、及びＷＴ－３１などの公知の抗ＣＤ３抗体に由来する。
一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、ＩｇＧ又はその誘導体である。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アームは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４である。ＣＤ３結合アームがＩｇＧ４アイソタイプを有する一部の実施形態では、結合アームは、Ｆｃ領域中にＳ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｆ４０５Ｌ、及びＲ４０９Ｋ置換を含有する。一部の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、初代ヒトＴ細胞上のＣＤ３εに結合する。一部の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、初代カニクイザルＴ細胞上のＣＤ３εに結合する。一部の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、初代ヒト及びカニクイザルＴ細胞上のＣＤ３εに結合する。一部の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、初代ヒトＣＤ３＋Ｔ細胞を活性化する。一部の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、初代カニクイザルＣＤ４＋Ｔ細胞を活性化する。
一部の実施形態では、本明細書に記載される三重特異的抗体は、三重特異的抗体について当該技術分野において記載されている任意のフォーマットを採用し得る。一部の実施形態では、本明細書に記載される三重特異的抗体は、二重特異的抗体フォーマットに基づいて構築される。これは、第３の抗原結合アームを二重特異的抗体に付加することによって達成することができる。これまでに種々のフォーマットの二重特異的抗体が記載されており、近年ではＣｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｂａｔｙ（２００９）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃ Ｄｅｖ １２：２７６によりレビューされている。一部の実施形態では、三重特異的抗体は、本開示において記載されるものなどの制御されたＦａｂアーム交換により得られるダイアボディ、クロスボディ、又は二重特異的抗体などの、二重特異的抗体である。
一部の実施形態では、三重特異的抗体には、ヘテロ二量体形成を強制する相補性ＣＨ３ドメインを有するＩｇＧ様分子、組換えＩｇＧ様二重標的化分子（この分子の２つの側面は各々、少なくとも２つの異なる抗体のＦａｂフラグメント又はＦａｂフラグメントの一部を含む）；ＩｇＧ融合分子（完全長ＩｇＧ抗体が、余分のＦａｂフラグメント又はＦａｂフラグメントの一部に融合されている）；Ｆｃ融合分子（一本鎖Ｆｖ分子又は安定化されたダイアボディが、重鎖定常ドメイン、Ｆｃ領域、又はその一部に融合されている）；Ｆａｂ融合分子（異なるＦａｂフラグメントが一緒に融合されている）；ＳｃＦｖ及びダイアボディベース及び重鎖抗体（例えば、ドメイン抗体、ナノボディ）（異なる一本鎖Ｆｖ分子又は異なるダイアボディ又は異なる重鎖抗体（例えば、ドメイン抗体、ナノボディ）が互いに融合されているか、又は別のタンパク質若しくは担体分子に融合されている）が挙げられる。
一部の実施形態では、相補性ＣＨ３ドメイン分子を有するＩｇＧ様分子としては、Ｔｒｉｏｍａｂ／Ｑｕａｄｒｏｍａ（Ｔｒｉｏｎ Ｐｈａｒｍａ／Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、Ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－Ｈｏｌｅｓ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＣｒｏｓｓＭＡｂｓ（Ｒｏｃｈｅ）及び静電的に調整されたもの（Ａｍｇｅｎ）、ＬＵＺ－Ｙ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ストランドを交換し操作したドメインボディ（Strand Exchange Engineered Domain body、ＳＥＥＤｂｏｄｙ）（ＥＭＤ Ｓｅｒｏｎｏ）、Ｂｉｃｌｏｎｉｃ（Ｍｅｒｕｓ）、ＤｕｏＢｏｄｙ（Ｇｅｎｍａｂ Ａ／Ｓ）、及び他の非対称変異体（例えば、Ｚｙｍｅｗｏｒｋｓ）が挙げられる。
一部の実施形態では、組換えＩｇＧ様二重標的化分子としては、Ｄｕａｌ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ（Dual Targeting、ＤＴ）－Ｉｇ（ＧＳＫ／Ｄｏｍａｎｔｉｓ）、Ｔｗｏ－ｉｎ－ｏｎｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｃｒｏｓｓ－ｌｉｎｋｅｄ Ｍａｂｓ（Ｋａｒｍａｎｏｓ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ）、ｍＡｂ２（Ｆ－Ｓｔａｒ）、及びＣｏｖＸ－ｂｏｄｙ（ＣｏｖＸ／Ｐｆｉｚｅｒ）が挙げられる。
一部の実施形態では、ＩｇＧ融合分子としては、Ｄｕａｌ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎ（Dual Variable Domain、ＤＶＤ）－Ｉｇ（Ａｂｂｏｔｔ）、ＩｇＧ－ｌｉｋｅ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ（ＩｎｎＣｌｏｎｅ／Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、Ｔｓ２Ａｂ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ／ＡＺ）、及びＢｓＡｂ（Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＨＥＲＣＵＬＥＳ（Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）、並びにＴｖＡｂ（Ｒｏｃｈｅ）が挙げられる。
一部の実施形態では、Ｆｃ融合分子としては、ＳｃＦｖ／Ｆｃ Ｆｕｓｉｏｎｓ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）、ＳＣＯＲＰＩＯＮ（Ｅｍｅｒｇｅｎｔ ＢｉｏＳｏｌｕｔｉｏｎｓ／Ｔｒｕｂｉｏｎ，Ｚｙｍｏｇｅｎｅｔｉｃｓ／ＢＭＳ）、Ｄｕａｌ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｆｃ－ＤＡＲＴ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）、及びＤｕａｌ（ＳｃＦｖ）．ｓｕｂ．２－Ｆａｂ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ－－Ｃｈｉｎａ）が挙げられる。
一部の実施形態では、Ｆａｂ融合二重特異的抗体としては、Ｆ（ａｂ）２（Ｍｅｄａｒｅｘ／ＡＭＧＥＮ）、Ｄｕａｌ－Ａｃｔｉｏｎ ｏｒ Ｂｉｓ－Ｆａｂ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｄｏｃｋ－ａｎｄ－Ｌｏｃｋ（ＤＮＬ）（ＩｍｍｕｎｏＭｅｄｉｃｓ）、Ｂｉｖａｌｅｎｔ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ（Ｂｉｏｔｅｃｎｏｌ）、及びＦａｂ－Ｆｖ（ＵＣＢ－Ｃｅｌｌｔｅｃｈ）が挙げられる。ＳｃＦｖ－、ダイアボディ－に基づく抗体及びドメイン抗体には、Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｅｎｇａｇｅｒ（Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｅｎｇａｇｅｒ、ＢｉＴＥ）（Ｍｉｃｒｏｍｅｔ）、Ｔａｎｄｅｍ Ｄｉａｂｏｄｙ（Ｔａｎｄａｂ）（Ａｆｆｉｍｅｄ）、Ｄｕａｌ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｄｕａｌ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、ＤＡＲＴ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）、Ｓｉｎｇｌｅ－ｃｈａｉｎ Ｄｉａｂｏｄｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ）、ＴＣＲ－ｌｉｋｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（ＡＩＴ，ＲｅｃｅｐｔｏｒＬｏｇｉｃｓ）、Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｕｍ Ａｌｂｕｍｉｎ ＳｃＦｖ Ｆｕｓｉｏｎ（Ｍｅｒｒｉｍａｃｋ）、及びＣＯＭＢＯＤＹ（Ｅｐｉｇｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、二重標的指向性ナノボディ（ｄｕａｌ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｎａｎｏｂｏｄｙ）（Ａｂｌｙｎｘ）、二重標的指向性の重鎖のみのドメイン抗体（ｄｕａｌ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｈｅａｖｙ ｃｈａｉｎ ｏｎｌｙ ｄｏｍａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ）が挙げられるが、これらに限定されない。
本開示の全長三重特異的抗体は、例えば、２つの単一特異性二価抗体間でのＦａｂアーム交換（又は半分子交換）を用い、無細胞環境下のインビトロ又は共発現使用下のいずれかで、別個の特異性を有する２つの抗体半分子のヘテロ二量体形成に有利になるように各半分子において重鎖ＣＨ３界面に置換を導入することにより生成されてもよい。Ｆａｂアーム交換反応は、ジスルフィド結合異性化反応及びＣＨ３ドメインの解離－会合の結果である。単一特異性親抗体のヒンジ領域における重鎖ジスルフィド結合は、低減される。単一特異性親抗体のうちの１つについて生じる遊離システインは、第２の単一特異性親抗体分子のシステイン残基と重鎖内ジスルフィド結合を形成し、同時に、親抗体のＣＨ３ドメインは、解離－会合により開放及び再形成する。ＦａｂアームのＣＨ３ドメインは、ホモ二量体形成よりもヘテロ二量体形成に有利となるように操作されてもよい。得られた産物は、各々が、異なるエピトープ、例えば、ＢＣＭＡ（又はＧＰＲＣ５Ｄ）上のエピトープ及びＣＤ３上のエピトープに結合する、２つのＦａｂアーム又は半分子を有する二重特異的抗体である。次いで、第３の抗原結合アームを、二重特異的抗体に、例えば、第３のエピトープ、例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ（又はＢＣＭＡ）に結合することができる第１の重鎖又は第２の重鎖のＣ末端に導入することができる。
本明細書で使用されるとき、「ホモ二量体形成」は、同一のＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖の相互作用を意味する。本明細書で使用されるとき、「ホモ二量体」は、同一のＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖を有する抗体を意味する。
本明細書で使用されるとき、「ヘテロ二量体形成」は、同一でないＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖の相互作用を意味する。本明細書で使用されるとき、「ヘテロ二量体」は、同一でないＣＨ３アミノ酸配列を有する２本の重鎖を有する抗体を意味する。
「ノブ・イン・ホール」戦略（例えば、国際公開第２００６／０２８９３６号を参照のこと）が、全長二重特異的抗体を生成するのに使用されてもよい。簡潔に述べると、ヒトＩｇＧにおけるＣＨ３ドメインの界面を形成する選択されたアミノ酸は、ヘテロ二量体形成を促進するように、ＣＨ３ドメイン相互作用に影響を及ぼす位置において変異され得る。小さな側鎖を有するアミノ酸（ホール）が、第１の抗原に結合する抗体の重鎖内に導入され、大きな側鎖を有するアミノ酸（ノブ）が、第２の抗原に結合する抗体の重鎖内に導入される。２つの抗体の共発現後に、ヘテロ二量体が、「ホール」を有する重鎖と「ノブ」を有する重鎖との優先的な相互作用の結果として形成される。ノブ及びホールを形成する例示的なＣＨ３置換の対は、Ｔ３６６Ｙ／Ｆ４０５Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｆ４０５Ｗ、Ｆ４０５Ｗ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３９４Ｗ／Ｙ４０７Ｔ、Ｔ３９４Ｓ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、Ｆ４０５Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、及びＴ３６６Ｗ／Ｔ３６６Ｓ＿Ｌ３６８Ａ＿Ｙ４０７Ｖである（第１の重鎖の第１のＣＨ３ドメインにおける修飾位置／第２の重鎖の第２のＣＨ３ドメインにおける修飾位置として表現）。
本明細書に記載される三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメントの一部の実施形態では、Ｆｃドメインのうちの一方は、変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含み、他方のＦｃドメインは、変異Ｔ３６６Ｗを含む。一部の実施形態では、第１の抗原結合アーム（例えば、ＣＤ３結合アーム）の第１の重鎖部分（ＨＣ１）のＦｃドメインは、変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含み、第２の抗原結合アーム及び／又は第３の抗原結合アーム（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ／ＢＣＭＡ結合アーム、又はＢＣＭＡ結合アーム）の第２の重鎖部分（ＨＣ２）のＦｃドメインは、変異Ｔ３６６Ｗを含む。一部の実施形態では、第２の抗原結合アーム及び／又は第３の抗原結合アーム（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ／ＢＣＭＡ結合アーム又はＢＣＭＡ結合アーム）のＨＣ２のＦｃドメインは、変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含み、第１の抗原結合アーム（例えば、ＣＤ３結合アーム）のＨＣ１のＦｃドメインは、変異Ｔ３６６Ｗを含む。
他の戦略、例えば、１つのＣＨ３表面における正に荷電した残基及び第２のＣＨ３表面における負に荷電した残基を置換することによる静電的相互作用を使用する重鎖ヘテロ二量体形成の促進が、米国特許出願公開第２０１０／００１５１３３号、米国特許出願公開第２００９／０１８２１２７号、米国特許出願公開第２０１０／０２８６３７号、又は米国特許出願公開第２０１１／０１２３５３２号に記載されるように使用されてもよい。他の戦略では、ヘテロ二量体形成は、米国特許出願公開第２０１２／０１４９８７６号又は米国特許出願公開第２０１３／０１９５８４９号に記載されるように、下記置換：Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５ＡＹ４０７Ｖ／Ｔ３９４Ｗ、Ｔ３６６Ｉ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｍ＿Ｔ３９４Ｗ／Ｆ４０５Ａ＿Ｙ４０７Ｖ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、Ｌ３５１Ｙ＿Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ｖ Ｋ４０９Ｆ Ｙ４０７Ａ／Ｔ３６６Ａ＿Ｋ４０９Ｆ、又はＴ３５０Ｖ＿Ｌ３５１Ｙ＿Ｆ４０５Ａ Ｙ４０７Ｖ／Ｔ３５０Ｖ＿Ｔ３６６Ｌ＿Ｋ３９２Ｌ＿Ｔ３９４Ｗ（第１の重鎖の第１のＣＨ３ドメインにおける修飾位置／第２の重鎖の第２のＣＨ３ドメインにおける修飾位置として表現）により促進されてもよい（Ｚｙｍｅｗｏｒｋｓ）。
上記された方法に加えて、本発明の三重特異的抗体は、国際公開第２０１１／１３１７４６号に記載された方法に従って、セルフリー環境でのインビトロにおいて、２つの単特異性ホモ二量体抗体のＣＨ３領域中に非対称な変異を導入し、ジスルフィド結合を異性化させる還元条件下において、２つの親単特異性ホモ二量体抗体から三重特異的ヘテロ二量体抗体を形成することにより生成されてもよい。この方法では、第１の単一特異性二価抗体（例えば、抗ＧＰＲＣ５Ｄ抗体）及び第２の単一特異性二価抗体（例えば、抗ＣＤ３抗体）は、ヘテロ二量体の安定性を促進するＣＨ３ドメインに特定の置換を有するように遺伝子操作され、これらの抗体は、ヒンジ領域におけるシステインがジスルフィド結合を異性化させるために十分な還元条件下においてともにインキュベートされ、それにより、Ｆａｂアーム交換により三重特異的抗体が生成される。インキュベート条件は、最適には、非還元条件に戻されてもよい。使用され得る例示的な還元剤は、２－メルカプトエチルアミン（２－ＭＥＡ）、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、ジチオエリスリトール（ＤＴＥ）、グルタチオン、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、Ｌ－システイン、及びβ－メルカプトエタノールであり、好ましくは、２－メルカプトエチルアミン、ジチオスレイトール、及びトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィンからなる群から選択される還元剤である。例えば、少なくとも２０℃の温度において、少なくとも２５ｍＭの２－ＭＥＡの存在下又は少なくとも０．５ｍＭのジチオスレイトールの存在下で、ｐＨ５～８、例えば、ｐＨ７．０又はｐＨ７．４において、少なくとも９０分のインキュベートが使用されてもよい。
一部の実施形態では、三重特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ又はその誘導体である。ＩｇＧクラスは、ヒトにおいて、４つのアイソタイプ：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４に分割される。これらは、Ｆｃ領域のアミノ酸配列において９５％を上回る相同性を共有するが、ヒンジ領域のアミノ酸組成及び構造において主な差異を示す。Ｆｃ領域は、エフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞傷害（antibody-dependent cellular cytotoxicity、ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（complement-dependent cytotoxicity、ＣＤＣ）を媒介する。ＡＤＣＣでは、抗体のＦｃ領域は、免疫エフェクター細胞、例えば、ナチュラルキラー及びマクロファージの表面上のＦｃ受容体（ＦｃγＲ）に結合し、標的細胞の貪食又は溶解をもたらす。ＣＤＣでは、抗体は、細胞表面における補体カスケードをトリガーすることによって、標的細胞を死滅させる。本明細書に記載される抗体は、異なるエフェクター機能をもたらすようにＦｃ配列が修飾されている修飾版を含むＩｇＧアイソタイプのいずれかとの組み合わせで、可変ドメインの記載される特徴を有する抗体を含む。
多くの治療用抗体の適用に関し、Ｆｃに媒介されるエフェクター機能は、作用機序を担わない。これらのＦｃに媒介されるエフェクター機能は、機序外の毒性を引き起こすことにより有害となるおそれがあり、かつ安全性リスクを引き起こすおそれがある。エフェクター機能の改変は、Ｆｃ領域を遺伝子操作して、ＦｃγＲ又は補体因子への結合性を低下させることにより達成され得る。活性化（ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａ、及びＦｃγＲＩＩＩｂ）及び阻害性（ＦｃγＲＩＩｂ）ＦｃγＲ又は補体の第１成分（Ｃ１ｑ）へのＩｇＧの結合性は、ヒンジ領域及びＣＨ２ドメイン中に位置する残基により決まる。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４に変異が導入されると、Ｆｃ機能が低下又はサイレンシングする。本明細書に記載される抗体は、これらの修飾を含んでもよい。
一実施形態では、抗体は、下記特性：（ａ）親Ｆｃと比較した場合、低下したエフェクター機能、（ｂ）ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩｂ及び／又はＦｃγＲＩＩＩａに対する低減された親和性、（ｃ）ＦｃγＲＩに対する低減された親和性、（ｄ）ＦｃγＲＩＩａに対する低減された親和性、（ｅ）ＦｃγＲＩＩｂに対する低減された親和性、（ｆ）ＦｃγＲＩＩＩｂに対する低減された親和性又は（ｇ）ＦｃγＲＩＩＩａに対する低減された親和性、の１つ又は２つ以上の特性を有するＦｃ領域を含む。
一部の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ又はその誘導体、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４アイソタイプである。抗体がＩｇＧ１アイソタイプを有する一部の実施形態では、抗体は、そのＦｃ領域に、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｄ２６５Ｓ、及び／又はＫ４０９Ｒ置換を含む。抗体がＩｇＧ４アイソタイプを有する一部の実施形態では、抗体は、そのＦｃ領域に、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ置換を含む。本明細書に記載される抗体は、これらの修飾を含んでもよい。
一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異的抗体のＦｃドメインは各々、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＤ２６５Ｓから選択される１つ又は２つ以上の変異を含む。一部の実施形態では、ＨＣ１及びＨＣ２のＦｃドメインは各々、変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＤ２６５Ｓを含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の多重特異的抗体の重鎖部分のうちの１つのＦｃドメインは、プロテインＡへのＦｃ結合を低下させる１つ又は２つ以上の変異を更に含む。一部の実施形態では、重鎖部分のうちの１つのＦｃドメインは、変異Ｈ４３５Ｒ及び／又はＹ４３６Ｆを含む。一部の実施形態では、第２の抗原結合アーム及び／又は第３の抗原結合アーム（例えば、ＧＰＲＣ５Ｄ／ＢＣＭＡ結合アーム、又はＢＣＭＡ結合アーム）のＨＣ２のＦｃドメインは、変異Ｈ４３５Ｒ及び／又はＹ４３６Ｆを含む。
様々な実施形態では、第３の抗原結合アームは、リンカーを介して第１の抗原結合アーム又は第２の抗原結合アームのＦｃドメインに作動可能に連結される。一部の実施形態では、リンカーはペプチドリンカーであり、任意の天然に存在するアミノ酸を含み得る。リンカーに含まれ得る例示的なアミノ酸は、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ Ｐｒｏ、Ｔｈｒ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、及びＴｈｅである。リンカーは、第３の抗原結合アームと第１の抗原結合アーム又は第２の抗原結合アームを、それらが第３の抗原（例えば、ＢＣＭＡ又はＧＰＲＣ５Ｄ）への結合などの所望の活性を保持するように、互いに対して正しい立体構造を形成する様式で連結するのに十分な長さを有するべきである。
本明細書に記載される三重特異的抗体の一部の実施形態では、ＨＣ１は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、第１の抗原結合アームのＶＨ１、ＣＨ１ドメイン、Ｆｃドメイン、リンカー、及び第３の抗原結合アームを含む。
本明細書に記載される三重特異的抗体の一部の実施形態では、ＨＣ２は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、第２の抗原結合アーム、Ｆｃドメイン、リンカー、及び第３の抗原結合アームを含む。
様々な実施形態では、本明細書に記載される多重特異的抗体において使用されるｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ、リンカー及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ－ＶＬ）又はＶＬ、リンカー及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ－ＶＨ）を含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＬ、リンカー、及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ－ＶＨ）を含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨ、リンカー、及びＶＬ（ＶＨ－Ｌ－ＶＬ）を含む。
リンカーは、約５～５０個のアミノ酸長であり得る。一部の実施形態では、リンカーは、約１０～４０個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、約１０～３５個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、約１０～３０個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、約１０～２５個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、約１０～２０個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、約１５～２０個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、６個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、７個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、８個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、９個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、１０個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、１１個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、１２個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、１３個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、１４個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、１５個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、１６個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、１７個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、１８個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、１９個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、２０個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、２１個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、２２個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、２３個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、２４個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、２５個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、２６個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、２７個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、２８個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、２９個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、３０個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、３１個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、３２個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、３３個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、３４個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、３５個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、３６個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、３７個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、３８個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、３９個のアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、４０個のアミノ酸長である。使用され得る例示的なリンカーは、Ｇｌｙリッチリンカー、Ｇｌｙ及びＳｅｒ含有リンカー、Ｇｌｙ及びＡｌａ含有リンカー、Ａｌａ及びＳｅｒ含有リンカー、並びに他の柔軟なリンカーである。
他のリンカー配列は、免疫グロブリン重鎖又は軽鎖アイソタイプに由来する免疫グロブリンヒンジ領域、ＣＬ又はＣＨ１の部分を含み得る。使用され得る例示的なリンカーを表４に示す。追加のリンカーは、例えば、国際公開第２０１９／０６０６９５号に記載されている。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号２５のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１６３のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１２７のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１２８のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１２９のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１３０のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１３１のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１３２のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１３３のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１３４のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１３５のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１３６のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１３７のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１３８のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１３９のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１４０のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１４１のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１４２のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１４３のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１４４のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１４５のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１４６のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１４７のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１４８のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１４９のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１５０のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１５１のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１５２のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１５３のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１５４のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１５５のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１５６のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーは、配列番号１５７のアミノ酸配列を含む。
Figure 2024507180000005
一実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３三重特異的抗体のＨＣ１は、配列番号２６と実質的に同じであるか、又は同一のアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３三重特異的抗体のＬＣは、配列番号２７と実質的に同じであるか、又は同一のアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３三重特異的抗体のＧＰＲＣ５Ｄ／ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号２８と実質的に同じであるか又は同一のアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３三重特異的抗体のＣＤ３／ＧＰＲＣ５Ｄ連結ＨＣ１は、配列番号２９と実質的に同じであるか又は同一であるアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３三重特異的抗体のＬＣは、配列番号３０と実質的に同じであるか、又は同一のアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号３１と実質的に同じであるか、又は同一であるアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、本明細書において、単離された三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメントが提供され、これは、
ａ）重鎖（ＨＣ１）及び軽鎖（ＬＣ）を含むＣＤ３結合アームと、
ｂ）ＧＰＲＣ５Ｄ／ＢＣＭＡ結合アームと、を含み、
ＨＣ１は、配列番号２６と実質的に同じであるか又は同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号２７と実質的に同じであるか又は同一であるアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄ／ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号２８と実質的に同じであるか又は同一であるアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、本明細書において、以下を含む単離された三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメントが提供され、これは、
ａ）重鎖（ＨＣ１）及び軽鎖（ＬＣ）を含むＣＤ３結合アームと、
ｂ）ＧＰＲＣ５Ｄ／ＢＣＭＡ結合アームと、を含み、
ＨＣ１は、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号２７のアミノ酸配列を含み、ＧＰＲＣ５Ｄ／ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号２８のアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、本明細書において、単離された三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメントが提供され、これは、
ａ）重鎖（ＨＣ１）及び軽鎖（ＬＣ）を含むＣＤ３結合アームであって、ＨＣ１が、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームを更に含む、ＣＤ３結合アームと、
ｂ）ＢＣＭＡ結合アームと、を含み、
ＨＣ１は、配列番号２９と実質的に同じであるか又は同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号３０と実質的に同じであるか又は同一であるアミノ酸配列を含み、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号３１と実質的に同じであるか又は同一であるアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、本明細書において、単離された三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメントが提供され、これは、
ａ）重鎖（ＨＣ１）及び軽鎖（ＬＣ）を含むＣＤ３結合アームであって、ＨＣ１が、ＧＰＲＣ５Ｄ結合アームを更に含む、ＣＤ３結合アームと、
ｂ）ＢＣＭＡ結合アームと、を含み、
ＨＣ１は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、ＬＣは、配列番号３０のアミノ酸配列を含み、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号３１のアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３三重特異的抗体は、ＢＧＣＢ４６３である。
一実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３三重特異的抗体は、ＢＧＣＢ４９１である。
記載されるＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又は抗原結合フラグメントに加えて、記載されるＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又は抗原結合フラグメントをコードすることが可能なポリヌクレオチド配列も提供される。記載されるポリヌクレオチドを含むベクターも提供され、同様に、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又は抗原結合フラグメントを発現している細胞も本明細書において提供される。また、開示されるベクターを発現することができる細胞もまた、記載される。これらの細胞は、哺乳動物細胞（例えば、２９３Ｆ細胞、ＣＨＯ細胞）、昆虫細胞（例えば、Ｓｆ７細胞）、酵母細胞、植物細胞、又は細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）でもよい。記載される抗体はまた、ハイブリドーマ細胞により生成することができる。記載される抗体はまた、組換えにより産生され得る。
組換え抗原結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドもまた、本開示の範囲内である。一部の実施形態では、記載されるポリヌクレオチド（及びそれらがコードするペプチド）は、リーダー配列を含む。当該技術分野において既知の任意のリーダー配列を利用することができる。リーダー配列は、制限部位又は翻訳開始部位を含み得るがこれらに限定されない。
本明細書に記載されるＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、記載されるＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又は抗原結合フラグメントの生物学的特性（例えば、結合親和性又は免疫エフェクター活性）を保持している、１つ又は複数のアミノ酸置換、欠失、又は付加を有する変異体を含む。本発明の文脈において、別途記載のない限り、下記注釈が、変異を説明するために使用される。ｉ）所与の位置におけるアミノ酸の置換は、例えば、Ｋ４０９Ｒと記載される。Ｋ４０９Ｒは、４０９位におけるリジンのアルギニンによる置換を意味する。ｉｉ）特定の変異体について、特定の三文字又は一文字コードは、コードＸａａ及びＸを含めて、アミノ酸残基を示すのに使用される。このため、４０９位におけるリジンについてのアルギニンの置換は、Ｋ４０９Ｒと指定され、又は４０９位におけるリジンについての任意のアミノ酸残基の置換は、Ｋ４０９Ｘと指定される。４０９位におけるリジンの欠失の場合には、この欠失は、Ｋ４０９＊により示される。当業者であれば、１つ又は複数のアミノ酸置換、欠失、又は付加を有する変異体を生成することができる。
これらの変異体としては、（ａ）１つ又は２つ以上のアミノ酸残基が保存的又は非保存的アミノ酸により置換されている変異体、（ｂ）１つ又は２つ以上のアミノ酸がポリペプチドに付加されているか又はそれから欠失している変異体、（ｃ）１つ又は２つ以上のアミノ酸が置換基を含む変異体、及び（ｄ）ポリペプチドが、ポリペプチドに有用な特性、例えば、抗体に対するエピトープ、ポリヒスチジン配列、ビオチン部分などを付与し得る別のペプチド又はポリペプチド、例えば、融合パートナー、タンパク質タグ、又は他の化学部分と融合した変異体を挙げることができる。本明細書に記載される抗体又は抗原結合フラグメントは、保存的又は非保存的位置のいずれかにおいて、ある種に由来するアミノ酸残基が別の種における対応する残基に置換されている変異体を含んでもよい。他の実施形態では、非保存的位置におけるアミノ酸残基は、保存的又は非保存的残基により置換される。これらの変異体を得るための手法は、遺伝的（欠失、変異など）、化学的、及び酵素的手法を含め、当業者に既知である。
本明細書に記載のＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、いくつかの抗体アイソタイプ、例えば、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＥを具現化することができる。一部の実施形態では、抗体アイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４のアイソタイプ、好ましくは、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４のアイソタイプである。抗体又はその抗原結合フラグメントの特異性は、ＣＤＲのアミノ酸配列及び配置により主に決定される。したがって、あるアイソタイプのＣＤＲは、抗原特異性を変化させることなく、別のアイソタイプに変更することができる。あるいは、抗原特異性を変化させることなく、ハイブリドーマに、ある抗体アイソタイプを別のものにスイッチさせる技術（アイソタイプスイッチング）が確立されてきた。したがって、このような抗体アイソタイプは、記載される抗体又は抗原結合フラグメントの範囲内にある。
本明細書に記載されるＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、ＡＰＲＩＬ結合について少なくとも５．９ｎＭのＩＣ５０値を有し得る。記載されるＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又は抗原結合フラグメントのＩＣ５０は、ＥＬＩＳＡベースの方法又はフローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）などの当技術分野で公知の様々な方法によって決定することができる。ＥＬＩＳＡによってＩＣ５０を測定するためのアッセイは、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又は抗原結合フラグメントの存在下及び非存在下でプレート結合ＢＣＭＡを有し、様々な濃度のＡＰＲＩＬが使用される。ＡＰＲＩＬのＢＣＭＡへの結合を遮断するＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、「ＥＬＩＳＡによって測定した場合にＡＰＲＩＬを遮断する」ことである。
本明細書に記載されるポリヌクレオチドを含むベクターもまた提供される。ベクターは、発現ベクターであり得る。したがって、目的のポリペプチドをコードする配列を含む組換え発現ベクターは、本開示の範囲内であることが企図される。発現ベクターは、制御配列（例えば、プロモーター、エンハンサー）、選択マーカー、及びポリアデニル化シグナルなどであるがこれらに限定されない、１つ又は２つ以上の追加配列を含んでもよい。広範な宿主細胞を形質転換するためのベクターは周知であり、プラスミド、ファージミド、コスミド、バキュロウイルス、バクミド、細菌人工染色体（bacterial artificial chromosome、ＢＡＣ）、酵母人工染色体（yeast artificial chromosome、ＹＡＣ）、並びに、他の細菌、酵母、及びウイルスのベクターが挙げられるが、これらに限定されない。
本説明の範囲内にある組換え発現ベクターは、好適な調節エレメントに作動可能に連結することができる少なくとも１つの組換えタンパク質をコードする、合成、ゲノム、又はｃＤＮＡ由来の核酸フラグメントを含む。そのような調節エレメントとしては、転写プロモーター、好適なｍＲＮＡリボソーム結合部位をコードする配列、並びに転写及び翻訳の終了を制御する配列を挙げることができる。発現ベクター、特に、哺乳動物の発現ベクターはまた、１つ又は２つ以上の非転写エレメント、例えば、複製の起点、発現させようとする遺伝子に連結されている好適なプロモーター及びエンハンサー、他の５’若しくは３’フランキング非転写配列、５’若しくは３’非翻訳配列（例えば、必須リボソーム結合部位）、ポリアデニル化部位、スプライスドナー及びアクセプター部位、又は転写終了配列を含んでもよい。宿主において複製する能力を付与する複製の起点もまた、組み込まれ得る。
脊椎動物細胞を形質転換するのに使用される発現ベクター中の転写及び翻訳制御配列は、ウイルス源により提供することができる。例示的なベクターは、Ｏｋａｙａｍａ ａｎｄ Ｂｅｒｇ，３ Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２８０（１９８３）によって記載されるように構築され得る。
一部の実施形態では、多重特異的抗体又は抗原結合フラグメントのコーディング配列は、強力な構成的プロモーター、例えば、以下の遺伝子：ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（hypoxanthine phosphoribosyl transferase、ＨＰＲＴ）、アデノシンデアミナーゼ、ピルビン酸キナーゼ、ベータアクチン、ヒトミオシン、ヒトヘモグロビン、ヒト筋クレアチンなどのためのプロモーターの制御下に置かれる。加えて、多くのウイルスプロモーターが、真核細胞中で構成的に機能し、記載される実施形態での使用に好適である。そのようなウイルスプロモーターとしては、サイトメガロウイルス（Cytomegalovirus、ＣＭＶ）最初期プロモーター、ＳＶ４０の初期及び後期プロモーター、マウス乳がんウイルス（Mouse Mammary Tumor Virus、ＭＭＴＶ）プロモーター、モロニー白血病ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（Human Immunodeficiency Virus、ＨＩＶ）、エプスタインバーウイルス（Epstein Barr Virus、ＥＢＶ）、ラウス肉腫ウイルス（Rous Sarcoma Virus、ＲＳＶ）、及び他のレトロウイルスの長端末反復配列（long terminal repeat、ＬＴＲ）、並びに単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼプロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又はその抗原結合フラグメントのコード配列は、誘引性プロモーター、例えば、メタロチオネインプロモーター、テトラサイクリン誘引性プロモーター、ドキシサイクリン誘引性プロモーター、１つ又は２つ以上のインターフェロン刺激応答エレメント（ＩＳＲＥ）、例えば、プロテインキナーゼＲ２’，５’－オリゴアデニレート合成酵素、Ｍｘ遺伝子、ＡＤＡＲ１などを含有するプロモーターの制御下に置かれる。
本明細書に記載されるベクターは、１つ又は２つ以上の内部リボソーム進入部位（Internal Ribosome Entry Site、ＩＲＥＳ）を含み得る。ＩＲＥＳ配列を融合ベクターに含めることは、一部のタンパク質の発現を増強させるのに有益であり得る。一部の実施形態では、ベクター系は、１つ又は２つ以上のポリアデニル化部位（例えば、ＳＶ４０）を含むこととなり、これは、前述の核酸配列のうちいずれかの上流にあっても下流にあってもよい。ベクターの成分は、近接して連結されてもよく、又は遺伝子産物を発現させるのに最適な間隔を提供するように（すなわち、ＯＲＦ間に「スペーサー」ヌクレオチドを導入することにより）配置されてもよく、又は別の方法で位置付けられてもよい。また、調節エレメント、例えば、ＩＲＥＳモチーフが、発現に最適な間隔を提供するように配置されてもよい。
ベクターは、当該技術分野において既知の選択マーカーを含んでもよい。選択マーカーには、陽性及び陰性選択マーカー、例えば、抗生物質耐性遺伝子（例えば、ネオマイシン耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子、カナマイシン耐性遺伝子、テトラサイクリン耐性遺伝子、ペニシリン耐性遺伝子、ピューロマイシン耐性遺伝子、ブラストサイジン耐性遺伝子）、グルタミン酸合成酵素遺伝子、ガンシクロビル選択用のＨＳＶ－ＴＫ、ＨＳＶ－ＴＫ誘導体、又は６－メチルプリン選択用の細菌のプリンヌクレオシドホスホリラーゼ遺伝子（Ｇａｄｉ ｅｔ ａｌ．，７ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１７３８－１７４３（２０００））が挙げられる。選択マーカーをコードする核酸配列又はクローニング部位は、目的のポリペプチドをコードする核酸配列又はクローニング部位の上流にあっても下流にあってもよい。
本明細書に記載されるベクターを使用して、様々な細胞に、記載される抗体又は抗原結合フラグメントをコードする遺伝子を形質転換することができる。例えば、ベクターを使用して、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又は抗原結合フラグメントの生成細胞を生じさせることができる。このため、別の態様は、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、及びＣＤ３に特異的に結合する抗体又はその抗原結合フラグメント、例えば、本明細書に記載され、例示された抗体又は抗原結合フラグメントをコードする核酸配列を含むベクターで形質転換された宿主細胞を特徴とする。
外来遺伝子を細胞内に導入するための数多くの手法が、当該技術分野において既知であり、本明細書に記載され例示される様々な実施形態に従って、記載される方法を行う目的で組換え細胞を作成するのに使用することができる。使用される手法は、異種遺伝子配列が細胞の子孫により遺伝及び発現可能であり、かつレシピエント細胞に必須の成育及び生理学的機能を損なうことのないよう、異種遺伝子配列を宿主細胞に安定して導入するものでなければならない。使用することができる手法としては、染色体導入法（例えば、細胞融合、染色体媒介性遺伝子導入、マイクロ細胞媒介性遺伝子導入）、物理的方法（例えば、トランスフェクション、スフェロプラスト融合、マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、リポソーム担体）、ウイルスベクター導入（例えば、組換えＤＮＡウイルス、組換えＲＮＡウイルス）などが挙げられる（Ｃｌｉｎｅ，２９ Ｐｈａｒｍａｃ．Ｔｈｅｒ．６９－９２（１９８５））。哺乳動物細胞による細菌プロトプラストのリン酸カルシウム沈殿及びポリエチレングリコール（polyethylene glycol、ＰＥＧ）誘導融合を使用しても、細胞を形質転換することができる。
本明細書に記載されるＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又は抗原結合フラグメントの発現に使用するのに適した細胞は、好ましくは、真核細胞、より好ましくは、植物、齧歯動物、又はヒト起源の細胞である。これらの細胞には、例えば、ＮＳＯ、ＣＨＯ、ＣＨＯＫ１、ｐｅｒＣ．６、Ｔｋ－ｔｓ１３、ＢＨＫ、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＯＳ－７、Ｔ９８Ｇ、ＣＶ－１／ＥＢＮＡ、Ｌ細胞、Ｃ１２７、３Ｔ３、ＨｅＬａ、ＮＳ１、Ｓｐ２／０骨髄腫細胞、とりわけＢＨＫ細胞株などが挙げられるが、これらに限定されない。加えて、抗体の発現は、ハイブリドーマ細胞を使用して達成されてもよい。ハイブリドーマを生成するための方法は、当該技術分野において十分確立されている。
本明細書に記載される発現ベクターが形質転換された細胞は、本明細書に記載される抗体又は抗原結合フラグメントの組換え発現について選択され、又はスクリーニングされてもよい。組換え陽性細胞は、例えば、タンパク質修飾又は変化させた翻訳後修飾により、所望の表現型、例えば、高レベルの発現、増強された増殖特性、又は所望の生化学的特性を有するタンパク質を生成する能力を示すサブクローンについて、増殖され、スクリーニングされる。これらの表現型は、所与のサブクローンの本来の特性又は変異によるものであり得る。変異は、化学薬品、ＵＶ波長光、照射、ウイルス、挿入変異源、ＤＮＡミスマッチ修復の阻害、又はこのような方法の組み合わせにより生じ得る。
多重特異的抗体及びその多重特異的抗原結合フラグメントを使用する治療用組成物及び処置方法
上記で検討された多重特異的抗体、例えば、上記で検討されたＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３三重特異的抗体は、治療に有用である。特に、多重特異的抗体は、がんを処置するのに有用である。また、本明細書において、治療有効量の、本明細書に記載される多重特異的抗体又は多重特異的抗原結合フラグメントと、医薬的に許容され得る担体とを含む、哺乳動物における過剰増殖性障害を処置するための治療用組成物が提供される。好ましい実施形態では、多重特異的抗体は、本明細書に記載されるようなＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又はその多重特異的抗原結合フラグメントであり、より好ましくは、本明細書に記載されるようなＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又はそのＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗原結合フラグメントである。一実施形態では、かかる医薬組成物は、ＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡ発現がんの処置のためのものであり、これには、（これらに限定されないが）以下：ＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡ発現Ｂ細胞がん、例えば、くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）を含む多発性骨髄腫（ＭＭ）、及びＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡが発現していると今のところ判定される他のがんが挙げられる（が、これらに限定されない）。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡ発現がんは、リンパ腫の再発性又は難治性形態、例えば、多発性骨髄腫の再発性又は難治性形態である。がん、例えば、上記で検討された特定のがんを含む血液がんを処置するのに使用されてもよい特定の三重特異的抗体としては、抗体ＢＧＣＢ４６３、及びＢＧＣＢ４９１が挙げられる。
一部の実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３三重特異的抗体又はその結合フラグメントは、Ｒ／Ｒ多発性骨髄腫の処置のために利用される。
一部の実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３三重特異的抗体又はその結合フラグメントを受けている対象は、以前の処置を受けている。例えば、対象は、多発性骨髄腫を処置するために、プロテアソーム阻害剤（proteasome inhibitor、ＰＩ）（例えば、マリゾミブ（サリノスポラミドＡ）、カルフィルゾミブ、イキサゾミブ）、免疫調節薬（ＩＭｉＤ）、二重特異性剤、ＣＡＲ－Ｔ療法、及び／又は抗ＣＤ３８抗体などの１つ又は２つ以上の治療薬を受けていてもよい。
本明細書で提供される医薬組成物は、ａ）有効量の本発明の多重特異的抗体又は抗体フラグメントと、ｂ）不活性でも又は生理学的に活性でもよい医薬的に許容され得る担体とを含む。好ましい実施形態では、多重特異的抗体は、本明細書に記載されるようなＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又はその多重特異的抗原結合フラグメントであり、より好ましくは、本明細書に記載されるようなＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又はそのＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗原結合フラグメントである。本明細書で使用されるとき、「医薬的に許容され得る担体」という用語は、生理学的に適合性である、任意かつ全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤、及び抗真菌剤などを含む。好適な担体、希釈剤、及び／又は賦形剤の例としては、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどのうちの１つ又は２つ以上、並びにそれらの任意の組み合わせが挙げられる。多くの場合、等張性剤、例えば、糖、ポリアルコール、又は塩化ナトリウムを組成物中に含めるのが好ましい。特に、好適な担体の関連する例としては、（１）ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ約７．４、約１ｍｇ／ｍＬ～２５ｍｇ／ｍＬのヒト血清アルブミンを含有又は非含有、（２）０．９％の生理食塩水（０．９％重量／体積の塩化ナトリウム（ＮａＣｌ））、及び（３）５％（重量／体積）のデキストロースが挙げられ、抗酸化剤、例えば、トリプタミン、及び安定化剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ２０（登録商標）も含有してもよい。
本明細書における組成物はまた、処置される特定の疾患にとって必要な場合には、更なる治療剤を含有してもよい。好ましくは、多重特異的抗体又は抗体フラグメントと補助的な活性化合物とは、互いに有害に影響を及ぼさない補完的な活性を有することとなる。一部の実施形態では、更なる治療剤は、シタラビン、アントラサイクリン、ヒスタミン二塩酸塩、又はインターロイキン２である。一部の実施形態では、更なる治療剤は、化学療法剤、抗ＣＤ３８剤、免疫調節性イミド薬物（ＩＭｉＤ）、免疫チェックポイント阻害剤、免疫共刺激剤、ガンマセクレターゼ阻害剤、Ｔ細胞エンハンサー、又はそれらの任意の組み合わせである。一部の実施形態では、更なる治療剤は、抗ＣＤ３８抗体（例えば、ダラツムマブ）などの抗ＣＤ３８剤である。一部の実施形態では、更なる治療剤は、レナリドマイド及びポマリドマイドなどの免疫調節性イミド薬（ＩＭｉＤ）である。一部の実施形態では、更なる治療剤は、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有する抗ＰＤ－１及び抗Ｔ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）などの免疫チェックポイント阻害剤である。一部の実施形態では、更なる治療剤は、ＣＤ１３７を標的とする作用物質（例えば、ＣＤ１３７共刺激二重特異的抗体）などの免疫共刺激剤である。一部の実施形態では、更なる治療剤は、ＩＬ－２添加などのＴ細胞エンハンサーである。
本発明の組成物は、様々な形態であってもよい。このような形態としては、例えば、液体、半固体、及び固体の剤形が挙げられるが、好ましい形態は、意図された投与方式及び治療用途により決まる。典型的に好ましい組成物は、注射可能な溶液又は注入可能な溶液の形態である。好ましい投与方式は、非経口（例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下）である。好ましい実施形態では、本発明の組成物は、ボーラス又は一定期間にわたる連続的な注入により静脈投与される。別の好ましい実施形態では、本組成物は、局所並びに全身的な治療効果を発揮するために、筋肉内、皮下、関節内、関節滑液嚢内、腫瘍内、腫瘍周囲、病巣内、又は病巣周囲の経路により注射される。
非経口投与用の無菌組成物が、本発明の抗体、抗体フラグメント、又は抗体コンジュゲートを、必要とされる量で適切な溶媒に包含させ、続けて、マイクロフィルター法により滅菌することにより調製され得る。溶媒又は賦形剤として、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなど、並びにこれらの組み合わせを使用することができる。多くの場合には、等張性剤、例えば、糖、ポリアルコール、又は塩化ナトリウムを組成物中に含むのが好ましい。これらの組成物はまた、補助剤、特に、湿潤剤、等張化剤、乳化剤、分散剤、及び安定化剤を含有してもよい。非経口投与用の無菌組成物はまた、使用時に滅菌水又は任意の他の注射可能な無菌媒体中に溶解することができる、無菌の固体組成物の形態で調製されてもよい。
多重特異的抗体又は抗体フラグメントはまた、経口投与されてもよい。経口投与用の固体組成物として、錠剤、丸剤、粉末剤（ゼラチンカプセル剤、サッシェ剤）、又は顆粒剤が使用されてもよい。これらの組成物において、本発明による活性成分は、１つ又は２つ以上の不活性希釈剤、例えば、デンプン、セルロース、スクロース、ラクトース、又はシリカと、アルゴン流下において混合される。これらの組成物はまた、希釈剤以外の物質、例えば、１つ若しくは２つ以上の滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム若しくはタルク、着色剤、コーティング（糖衣錠）、又はグレーズを含んでもよい。
経口投与用の液体組成物として、不活性希釈剤、例えば、水、エタノール、グリセロール、植物油、又はパラフィンオイルを含有する、医薬的に許容され得る液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、及びエリキシル剤が使用されてもよい。これらの組成物は、希釈剤以外の物質、例えば、湿潤剤、甘味料、増粘剤、着香剤、又は安定化製品を含んでもよい。
用量は、所望の効果、処置の期間、及び使用される投与経路により決まる。用量は、概して、成人では１日あたり経口で５ｍｇ～１０００ｍｇであり、単位用量は、活性物質１ｍｇ～２５０ｍｇの範囲である。概して、医師は、適切な用量を、処置される対象の年齢、体重、及び同対象に固有の任意の他の因子に応じて決定する。
また、本明細書において、ＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡ＋細胞を死滅させるための方法であって、かかる細胞の死滅を必要とする患者に、かかるＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡに結合し、Ｔ細胞を動員して、かかるＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡ＋細胞を死滅させる（すなわち、Ｔ細胞を再指向する）ことが可能な多重特異的抗体を投与することにより、ＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡ＋細胞を死滅させるための方法が提供される。本発明の多重特異的抗体又は抗体フラグメントのいずれかは、治療的に使用されてもよい。例えば、一実施形態では、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体は、対象におけるがんを処置するために治療的に使用され得る。
好ましい実施形態では、本発明の多重特異的抗体又は抗体フラグメントは、哺乳動物における過剰増殖性障害を処置するために使用される。より好ましい実施形態では、本発明の多重特異的抗体又は抗体フラグメントを含有する、上記で開示された医薬組成物のうち１つは、哺乳動物における過剰増殖性障害を処置するために使用される。一実施形態では、この障害は、がんである。特に、がんは、ＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡ発現がんであり、ＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡ発現Ｂ細胞がん、例えば、くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）を含む多発性骨髄腫（ＭＭ）、及びＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡが発現していると今のところ判定される他のがんが挙げられる（が、これらに限定されない）。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡ発現がんは、リンパ腫の再発性又は難治性形態、例えば、多発性骨髄腫の再発性又は難治性形態である。好ましい実施形態では、多重特異的抗体は、本明細書に記載されるようなＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又はその多重特異的抗原結合フラグメントであり、より好ましくは、本明細書に記載されるようなＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又はそのＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗原結合フラグメントである。
したがって、本発明の医薬組成物は、例えば、急性多発性骨髄腫（ＭＭ）又はＭＧＵＳ（意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症）及びＳＭＭ（くすぶり型多発性骨髄腫）などの前がん性骨髄腫、及び形質細胞腫などの、ＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡ発現Ｂ／形質細胞がんを含むＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡ発現がん（但しこれらに限定されない）；並びにＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡを発現しているかの判定がまだなされていないその他のがん、を含む、様々ながん又は障害の処置又は予防に有用である。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡ発現がんは、リンパ腫の再発性又は難治性形態、例えば、多発性骨髄腫の再発性又は難治性形態である。
同様に、本明細書において、選択された細胞集団の成長を阻害するための方法であって、ＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡ発現標的細胞又はこのような標的細胞を含有する組織を、有効量の本発明の多重特異的抗体又は抗体フラグメントと、単独で、又は他の細胞傷害剤若しくは治療剤との組み合わせにおいてのいずれかで、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の存在下で接触させることを含む、方法が更に提供される。ＢＣＭＡ及びＧＰＲＣ５Ｄへのリガンド（ＡＰＩＬ、ＢＡＦＦ及びその他）の結合を遮断するＢＣＭＡｘＧＰＲＣ５ＤｘＣＤ３は、ＢＣＭＡ及びＧＰＲＣ５Ｄの媒介するシグナル伝達を遮断し、標的細胞の阻害又は細胞死をもたらし得る。好ましい実施形態では、多重特異的抗体は、本明細書に記載されるようなＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又はその多重特異的抗原結合フラグメントであり、より好ましくは、本明細書に記載されるようなＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又はそのＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗原結合フラグメントである。
一部の実施形態では、多重特異的抗体又はそれを含む薬学的組成物の投与を含む本明細書に記載の方法は、別の治療剤を投与する段階を更に含む。好適な他の治療剤としては、抗ＣＤ３８剤、免疫調節性イミド薬物（ＩＭｉＤ）、免疫チェックポイント阻害剤、免疫共刺激剤、ガンマセクレターゼ阻害剤、Ｔ細胞エンハンサー（例えば、ＩＬ－２添加）、トシリズマブ、又はこれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、更なる治療剤は、抗ＣＤ３８抗体（例えば、ダラツムマブ）などの抗ＣＤ３８剤である。一部の実施形態では、更なる治療剤は、レナリドマイド及びポマリドマイドなどの免疫調節性イミド薬（ＩＭｉＤ）である。一部の実施形態では、更なる治療剤は、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有する抗ＰＤ－１及び抗Ｔ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）などの免疫チェックポイント阻害剤である。一部の実施形態では、更なる治療剤は、ＣＤ１３７を標的とする作用物質（例えば、ＣＤ１３７共刺激二重特異的抗体）などの免疫共刺激剤である。本明細書に記載されるＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３三重特異的抗体のようなＴ細胞再指向抗体の存在下での、条件的アゴニズムを伴う低親和性ＣＤ１３７バインダーの使用は、抗腫瘍活性を増強し、Ｔ細胞持続性を改善する可能性がある。一部の実施形態では、更なる治療剤は、シタラビン、アントラサイクリン、ヒスタミン二塩酸塩、又はインターロイキン２である。一部の実施形態では、更なる治療剤は、化学療法剤である。選択された細胞集団の成長を阻害するための方法は、インビトロ、インビボ、又はエクスビボにおいて実施され得る。
インビトロでの使用例には、疾患細胞又は悪性細胞を死滅させることを目的とした、同じ患者への移植前の自家骨髄の処理、及び移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、標的抗原を発現していない所望の変異体を除く全ての細胞を死滅させ、又は不要な抗原を発現している変異体を死滅させるための細胞培養物の処理が挙げられる。又は望ましくない抗原を発現する変異体を死滅させるために使用される。非臨床的なインビトロでの使用条件は、当業者により容易に決定される。
臨床的なエクスビボでの使用例は、がん処置における自家移植前に、骨髄から腫瘍細胞を除去することである。処置は、下記のように行われ得る。骨髄を患者又は他の個体から採取し、次いで本発明の細胞傷害剤を添加した血清含有培地中でインキュベートする。濃度は、約３７℃で約３０分～約４８時間の間、３７℃で、約１０μＭ～１μＭの範囲である。インキュベートの濃度及び時間の厳密な条件、すなわち、投与量は、当業者により容易に決定される。インキュベート後、骨髄細胞を、血清含有培地で洗浄し、既知の方法に従って、静脈注射により患者に戻す。患者が他の処置、例えば、一連の骨髄破壊的化学療法又は全身照射を受けている状況において、骨髄の収集時間と処理された細胞の再注入の時間との間、処理された骨髄細胞は、標準的な医療機器を使用して、液体窒素中で凍結保存される。
臨床的なインビボでの使用について、治療有効量の多重特異的抗体又は抗原結合フラグメントが、かかる抗体又はフラグメントを必要とする対象に投与される。例えば、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体及びその多重特異的抗原結合フラグメントは、ＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡ発現がんの処置を必要とする対象における、その処置に有用であり得る。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡ発現がんは、Ｂ細胞がん、例えば、くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）を含む多発性骨髄腫（ＭＭ）である。一部の実施形態では、ＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡ発現がんは、リンパ腫の再発性又は難治性形態、例えば、多発性骨髄腫の再発性又は難治性形態である。好ましい実施形態では、多重特異的抗体は、本明細書に記載されるようなＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又はその多重特異的抗原結合フラグメントであり、より好ましくは、本明細書に記載されるようなＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又はそのＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗原結合フラグメントである。一部の実施形態では、対象は、哺乳動物、好ましくは、ヒトである。一部の実施形態では、多重特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、無菌試験済みの溶液として投与される。
処置及び使用についての上記方法における投与計画は、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように調節される。例えば、単一ボーラスを投与してもよく、いくつかの分割用量を、時間をかけて投与してもよく、又は治療状況の緊急性が示される蔡に、用量を比例的に減少又は増加させてもよい。非経口組成物は、投与しやすくしかつ用量を均一にするために、用量単位の形態に製剤されてもよい。
多重特異的抗体及びフラグメントの効率的な投与及び投与計画は、処置される疾患又は状態により決まり、当業者により決定されてもよい。本発明の化合物の治療有効量の例示的で非限定的な範囲は、約０．００１～１０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．００１～５ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．００１～２ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．００１～１ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．００１、約０．０１、約０．１、約１、又は約１０ｍｇ／ｋｇである。
当該技術分野において通常の技能を有する医師、薬剤師又は獣医師は、必要とされる医薬組成物の有効量を容易に決定し、処方することができる。例えば、医師又は獣医師は、医薬組成物中に利用される多重特異的抗体又はフラグメントの用量を、所望の治療効果を達成するのに必要されるよりも少ないレベルより開始し、かかる用量を、所望の効果が達成されるまで徐々に増大させることができる。概して、本発明の多重特異的抗体の好適な１日量は、治療効果を生じさせるのに有効であるうち最も少ない用量である化合物量である。投与は、例えば、非経口、例えば、静脈内、筋肉内、腫瘍内（例えば、骨髄）、又は皮下でもよい。一実施形態では、多重特異的抗体又はフラグメントは、ｍｇ／ｍ２で算出された毎週投与での注入により投与されてもよい。このような用量は、例えば、下記：用量（ｍｇ／ｋｇ）×体重（例えば５０～１００ｋｇ）に従って、上記で提供されたｍｇ／ｋｇ用量に基づくことができる。このような投与は、例えば、１～８回、例えば、３～５回繰り返されてもよい。投与は、２～２４時間、例えば、２～１２時間の期間にわたる連続的な注入により行われてもよい。一実施形態では、多重特異的抗体又はフラグメントは、毒性の副作用を低減させるために、長期間、例えば、２４時間超にわたるゆっくりとした連続的な注入により投与されてもよい。
一実施形態では、多重特異的抗体又はフラグメントは、１週間に１回で与えられる場合、最大８回、例えば、４～６回の固定用量として算出された毎週投与において投与されてもよい。このような計画は、例えば、６ケ月又は１２ケ月後に、必要に応じて１回又は２回以上繰り返されてもよい。このような固定用量は、例えば、上記で提供されたｍｇ／ｋｇ用量に基づくことができる。ここで、体重は、５０～１００ｋｇと仮定する。用量は、例えば、生体サンプルを採取し、本発明の多重特異的抗体のＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡ抗原結合アームを標的とする抗イディオタイプ抗体を使用することによって、本発明の二重特異的抗体の投与時の血中量を測定することにより、決定又は調節され得る。
一実施形態では、多重特異的抗体又はフラグメントは、維持治療、例えば、６ケ月以上の期間で週１回などにより投与されてもよい。
多重特異的抗体又はフラグメントはまた、がんの進行リスクを低下させ、がんの進行におけるイベントの発生の開始を遅延させ、かつ／又はがんが緩解した際の再発リスクを低下させるために、予防的に投与されてもよい。
本明細書に記載される多重特異的抗体及びそのフラグメントはまた、組み合わせ治療において投与されてもよく、すなわち、処置される疾患又は状態に関連する他の治療剤と組み合わせられてもよい。したがって、一実施形態では、抗体含有医薬は、化学療法剤、抗ＣＤ３８剤、免疫調節性イミド薬物（ＩＭｉＤ）、免疫チェックポイント阻害剤、免疫共刺激剤、ガンマセクレターゼ阻害剤、Ｔ細胞エンハンサー（例えば、ＩＬ－２添加）、又はそれらの任意の組み合わせなどの１つ又は２つ以上の更なる治療剤と組み合わせるためのものである。一部の実施形態では、更なる治療剤は、抗ＣＤ３８抗体（例えば、ダラツムマブ）などの抗ＣＤ３８剤である。一部の実施形態では、更なる治療剤は、レナリドマイド及びポマリドマイドなどの免疫調節性イミド薬（ＩＭｉＤ）である。一部の実施形態では、更なる治療剤は、Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有する抗ＰＤ－１及び抗Ｔ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）などの免疫チェックポイント阻害剤である。一部の実施形態では、更なる治療剤は、ＣＤ１３７を標的とする作用物質（例えば、ＣＤ１３７共刺激二重特異的抗体）などの免疫共刺激剤である。一部の実施形態では、他の治療剤は、シタラビン、アントラサイクリン、ヒスタミン二塩酸塩、又はインターロイキン２である。このような組み合わせ投与は、同時、任意の順序において、別々又は連続的でもよい。同時投与では、薬剤は、必要に応じて、１つの組成物又は別々の組成物として投与されてもよい。
一実施形態では、対象においてＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡを発現している細胞が関与する障害を処置するための方法であって、治療有効量の、本明細書に記載される多重特異的抗体又はフラグメント、例えば、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体と、放射線治療とを、それを必要としている対象に施すことを含む、方法が提供される。一実施形態では、がんを処置又は予防するための方法であって、治療有効量の、本明細書に記載される多重特異的抗体又はフラグメント、例えば、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３抗体と、放射線治療とを、それを必要としている対象に施すことを含む、方法が提供される。放射線治療としては、提供される患者に対する、放射線又は放射性医薬の関連する投与を含んでもよい。放射線源は、処置される患者の外側又は内側のいずれか一方であってもよい（放射線治療は、例えば、外照射療法（external beam radiation therapy、ＥＢＲＴ）又は小線源治療（brachytherapy、ＢＴ）の形態でもよい）。このような方法を実施するのに使用することができる放射性元素には、例えば、ラジウム、セシウム－１３７、イリジウム－１９２、アメリシウム－２４１、金－１９８、コバルト－５７、銅－６７、テクネチウム－９９、ヨウ素－１２３、ヨウ素－１３１、アクチニウム－２２５及びインジウム－１１１が挙げられる。
キット
また、本明細書において、例えば、記載される多重特異的抗体又はその抗原結合フラグメントと、特定の細胞種を死滅させるための抗体又はフラグメントを使用するための使用説明書と、を含むキットも提供される。好ましい実施形態では、多重特異的抗体は、本明細書に記載されるようなＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又はその多重特異的抗原結合フラグメントであり、より好ましくは、本明細書に記載されるようなＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又はそのＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗原結合フラグメントである。使用説明書は、多重特異的抗体又はその抗原結合フラグメントを、インビトロ、インビボ、又はエクスビボにおいて使用するための指示を含んでもよい。
典型的には、キットは、多重特異的抗体又はその抗原結合フラグメントを含有する区画を有する。多重特異的抗体又はその抗原結合フラグメントは、凍結乾燥状態、液状、又はキットに含ませるのに修正可能な他の形態でもよい。キットはまた、キットの使用説明書に記載される方法を実施するのに必要とされる、更なる要素を含有してもよい。同要素は、例えば、凍結乾燥粉末を再構成するための無菌溶液、患者への投与の前に多重特異的抗体又はその抗原結合フラグメントと組み合わせるための更なる薬剤、及び多重特異的抗体又はその抗原結合フラグメントを患者に投与するのを支援するツールである。
診断的使用
本明細書に記載される多重特異的抗体及びフラグメントはまた、診断目的に使用されてもよい。このため、本明細書で定義されたような多重特異的抗体又はフラグメントを含む診断組成物及びその使用もまた提供される。好ましい実施形態では、多重特異的抗体は、本明細書に記載されるようなＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又はその多重特異的抗原結合フラグメントであり、より好ましくは、本明細書に記載されるようなＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗体又はそのＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３多重特異的抗原結合フラグメントである。一実施形態では、本発明は、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３三重特異的抗体と、ＧＰＲＣ５Ｄ及び／又はＢＣＭＡに対する抗体の結合を検出するための１種又は２種以上の試薬と、を含む容器を含む、がんを診断するためのキットを提供する。試薬には、例えば、蛍光タグ、酵素タグ、又は他の検出可能なタグを挙げることができる。試薬はまた、酵素反応のための二次若しくは三次抗体又は試薬を含んでもよい。この場合、酵素反応は、可視化することができる生成物を生じる。例えば、本明細書に記載される多重特異的抗体又はその抗原結合フラグメントは、放射線標識、蛍光標識、エピトープタグ、ビオチン、発色団標識、ＥＣＬ標識、酵素、ルテニウム、１１１Ｉｎ－ＤＯＴＡ、１１１Ｉｎ－ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、及びβガラクトシダーゼ、若しくはポリヒスチジン、又は当技術分野において既知の類似するこのような標識で標識されてもよい。
ＢＣＭＡ特異的抗体
本明細書において、ＢＣＭＡに特異的な単離された抗体及び抗原結合フラグメントが記載されている。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、ヒトＢＣＭＡに結合する。ＢＣＭＡ特異的抗体分子の全体的な構造は、抗原結合ドメインを含み得、同ドメインは、重鎖及び軽鎖並びにＦｃドメインを含み、補体固定及び抗体の結合受容体（binding antibody receptors）を含む各種の機能を果たす。
一部の実施形態では、表１に記載される抗体のうちいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖（例えばＢＣＭＢ５１９）を含む、ＢＣＭＡ特異的抗体又はその抗原結合フラグメントが提供される。一部の実施形態では、表１に記載される抗体のうちいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む重鎖と（例えばＢＣＭＢ５１９）、表１に記載される抗体のうちいずれか１つのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む軽鎖と（例えばＢＣＭＢ５１９）、を含む、ＢＣＭＡ特異的抗体又はその抗原結合フラグメントが提供される。
一部の実施形態では、ＢＣＭＡ特異的抗体及びその抗原結合フラグメントは、配列番号２０を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２１を含む重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号２２を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号２０を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２１を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号２２を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号１７を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１８を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１９を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む。ＢＣＭＡ結合アームは、ヒトフレームワーク配列を含み得る。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号２４と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、配列番号２４と実質的に同じ又は同一の重鎖可変ドメインと、配列番号２３と実質的に同じ又は同一の軽鎖可変ドメインとを含む。この段落において検討された抗体の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、１つのアームが抗ＢＣＭＡアームである、多重特異的（二重特異的又は三重特異的）構築物への包含に適している。本段落で論じられるＢＣＭＡ特異的抗体又はその抗原結合フラグメントを含む例示的な三重特異的構築物が、本明細書に提供される。
一部の実施形態では、ＢＣＭＡ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、ヒトＢＣＭＡ及びカニクイザルＢＣＭＡに結合する。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、ヒトＢＣＭＡに結合するが、カニクイザルＢＣＭＡには結合しない。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、ＢＣＭＡ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）からの１つ又は２つ以上の残基を含むエピトープに結合する。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、ＢＣＭＡ ＢＣＭＷ３７鎖の残基１７～２６（ＬＬＨＡＣＩＰＣＱＬ（配列番号１６２））に結合する。そのようなＢＣＭＡ特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、５×１０－７Ｍ以下、例えば、１×１０－７Ｍ以下、５×１０－８Ｍ以下、１×１０－８Ｍ以下、５×１０－９Ｍ以下、１×１０－９Ｍ、又は５×１０－１０Ｍ以下の親和性でＢＣＭＡに結合し得る。一実施形態では、ＢＣＭＡ特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、約１×１０－１０Ｍ～１×１０－９Ｍの親和性でＢＣＭＡに結合する。一実施形態では、ＢＣＭＡ結合アームは、約１×１０－１０Ｍ、約２×１０－１０Ｍ、約３×１０－１０Ｍ、約４×１０－１０Ｍ、約５×１０－１０Ｍ、約６×１０－１０Ｍ、約７×１０－１０Ｍ、約８×１０－１０Ｍ、約９×１０－１０Ｍ又は約１×１０－９Ｍの親和性でＢＣＭＡに結合する。一実施形態では、ＢＣＭＡ特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイによって決定したとき、約８．４×１０－１０Ｍの親和性でＢＣＭＡに結合する。一実施形態では、ＢＣＭＡ特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイによって決定したとき、約２．１×１０－１０Ｍの親和性でＢＣＭＡに結合する。
ＩｇＧクラスは、ヒトにおいて、４つのアイソタイプ：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４に分割される。これらは、Ｆｃ領域のアミノ酸配列において９５％を上回る相同性を共有するが、ヒンジ領域のアミノ酸組成及び構造において主な差異を示す。Ｆｃ領域は、エフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞傷害（antibody-dependent cellular cytotoxicity、ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（complement-dependent cytotoxicity、ＣＤＣ）を媒介する。ＡＤＣＣでは、抗体のＦｃ領域は、免疫エフェクター細胞、例えば、ナチュラルキラー及びマクロファージの表面上のＦｃ受容体（ＦｃγＲ）に結合し、標的細胞の貪食又は溶解をもたらす。ＣＤＣでは、抗体は、細胞表面における補体カスケードをトリガーすることによって、標的細胞を死滅させる。本明細書に記載される抗体は、異なるエフェクター機能をもたらすようにＦｃ配列が修飾されている修飾版を含むＩｇＧアイソタイプのいずれかとの組み合わせで、可変ドメインの記載される特徴を有する抗体を含む。
多くの治療用抗体の適用に関し、Ｆｃに媒介されるエフェクター機能は、作用機序を担わない。これらのＦｃに媒介されるエフェクター機能は、機序外の毒性を引き起こすことにより有害となるおそれがあり、かつ安全性リスクを引き起こすおそれがある。エフェクター機能の改変は、Ｆｃ領域を遺伝子操作して、ＦｃγＲ又は補体因子への結合性を低下させることにより達成され得る。活性化（ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａ、及びＦｃγＲＩＩＩｂ）及び阻害性（ＦｃγＲＩＩｂ）ＦｃγＲ又は補体の第１成分（Ｃ１ｑ）へのＩｇＧの結合性は、ヒンジ領域及びＣＨ２ドメイン中に位置する残基により決まる。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４に変異が導入されると、Ｆｃ機能が低下又はサイレンシングする。本明細書に記載される抗体は、これらの修飾を含んでもよい。
一実施形態では、抗体は、下記特性：（ａ）親Ｆｃと比較した場合、低下したエフェクター機能、（ｂ）ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩｂ及び／又はＦｃγＲＩＩＩａに対する低減された親和性、（ｃ）ＦｃγＲＩに対する低減された親和性、（ｄ）ＦｃγＲＩＩａに対する低減された親和性、（ｅ）ＦｃγＲＩＩｂに対する低減された親和性、（ｆ）ＦｃγＲＩＩＩｂに対する低減された親和性又は（ｇ）ＦｃγＲＩＩＩａに対する低減された親和性、の１つ又は２つ以上の特性を有するＦｃ領域を含む。
一部の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ又はその誘導体、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４アイソタイプである。抗体がＩｇＧ１アイソタイプを有する一部の実施形態では、抗体は、そのＦｃ領域に、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｄ２６５Ｓ、及び／又はＫ４０９Ｒ置換を含む。抗体がＩｇＧ４アイソタイプを有する一部の実施形態では、抗体は、そのＦｃ領域に、Ｋ４０９Ｒ、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ置換を含む。本明細書に記載される抗体は、これらの修飾を含んでもよい。
一部の実施形態では、記載される抗体は、ＥＬＩＳＡによって測定したとき、低ナノモル濃度のＩＣ５０でＡＰＲＩＬ結合を阻害することが可能であり得る。一部の実施形態では、記載される抗体は、ＥＬＩＳＡによって測定したとき、低マイクロモル濃度のＩＣ５０でＢＡＦＦ結合を阻害することが可能であり得る。
一部の実施形態では、記載される抗体は、ＢＣＭＡ陽性多発性骨髄腫細胞株に結合する。
記載されるＢＣＭＡ特異的抗体及び抗原結合フラグメントに加えて、記載される抗体及び抗原結合フラグメントをコードすることが可能なポリヌクレオチド配列もまた提供される。記載されるポリヌクレオチドを含むベクターもまた提供される。同様に、本明細書で提供されるＢＣＭＡ特異的抗体及び抗原結合フラグメントを発現している細胞が提供される。また、開示されるベクターを発現することができる細胞もまた、記載される。これらの細胞は、哺乳動物細胞（例えば、２９３細胞、２９３Ｆ細胞、ＣＨＯ細胞）、昆虫細胞（例えば、Ｓｆ７細胞）、酵母細胞、植物細胞、又は細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）とし得る。記載される抗体はまた、ハイブリドーマ細胞により生成することができる。
記載されるＢＣＭＡ特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、全てのアイソタイプである、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、並びに４本鎖免疫グロブリン構造の合成多量体を含む。記載される抗体又は抗原結合フラグメントはまた、雌鳥又はシチメンチョウの血清及び雌鳥又はシチメンチョウの卵黄中に一般的に見出されるＩｇＹアイソタイプも含む。
ＢＣＭＡ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、任意の種から組換え手法により得ることができる。例えば、抗体又は抗原結合フラグメントは、マウス、ラット、ヤギ、ウマ、ブタ、ウシ、ニワトリ、ウサギ、ラクダ、ロバ、ラマ、ヒト、又はそれらのキメラ版でもよい。ヒトへの投与に使用するために、非ヒト由来の抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒト患者に投与したときの抗原性がより低くなるよう遺伝的に又は構造的に変化させてもよい。
一部の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、キメラである。本明細書で使用されるとき、「キメラ」という用語は、抗体又はその抗原結合フラグメントであって、非ヒト哺乳動物、齧歯動物、又は爬虫類の抗体アミノ酸配列に由来する少なくとも１つの可変ドメインの少なくともいくらかの部分を有するものの、それらの残りの部分はヒトに由来するものである、抗体又はその抗原結合フラグメントを指す。
一部の実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。ヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最少配列を含む、キメラ免疫グロブリン、その免疫グロブリン鎖、又はフラグメント（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、若しくは抗体の他の抗原結合部分配列）であってもよい。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が所望の特異性、親和性、及び能力を有する非ヒト種、例えば、マウス、ラット、又はウサギのＣＤＲからの残基（ドナー抗体）により置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。概して、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むこととなる。同可変ドメイン中、全て又は実質的に全てのＣＤＲ領域は、非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応し、全て又は実質的に全てのフレームワーク領域は、ヒト免疫グロブリン配列のフレームワーク領域である。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的には、ヒト免疫グロブリンのものを含み得る。
本明細書に記載の抗体又は抗原結合フラグメントは、様々な形態で存在し得るが、表１に示される抗体ＣＤＲのうちの１つ又は２つ以上を含む（例えばＢＣＭＢ５１９）。
本明細書において、ＢＣＭＡに結合する、組換え抗体及び抗原結合フラグメントが記載されている。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトＩｇＧ又はその誘導体である。本明細書で例示されたＢＣＭＡ特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトであるが、例示された抗体又は抗原結合フラグメントは、キメラ化されてもよい。
一部の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ又はその誘導体、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４アイソタイプである。抗体がＩｇＧ１アイソタイプである一部の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１のＦｃ領域（配列番号１５８）を含む。
配列番号１５８
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
抗体がＩｇＧ１アイソタイプである一部の実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域（配列番号１５９）中にＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＤ２６５Ｓ置換を含有する。
配列番号１５９
Figure 2024507180000006
抗体がＩｇＧ４アイソタイプである一部の実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域（配列番号１６０）中にＳ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ、及びＬ２３５Ａ置換を含有する。
配列番号１６０
Figure 2024507180000007
上記段落において検討された、ＣＤＲ及び／又は可変ドメイン配列により定義されたＢＣＭＡ特異的抗体は、これらのＩｇＧ Ｆｃ領域を含んでもよい。
ＢＣＭＡに結合する抗体又は抗原結合フラグメントをコードする単離された合成ポリヌクレオチドもまた開示される。本明細書で提供される可変ドメインセグメントをコードすることが可能な単離されたポリヌクレオチドは、抗体又は抗原結合フラグメントを生成する同一の又は異なるベクターに含まれてもよい。
組換え抗原結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドもまた、本開示の範囲内である。一部の実施形態では、記載されるポリヌクレオチド（及びそれらがコードするペプチド）は、リーダー配列を含む。当該技術分野において既知の任意のリーダー配列を利用することができる。リーダー配列は、制限部位又は翻訳開始部位を含み得るがこれらに限定されない。
本明細書に記載されるＢＣＭＡ特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、記載されるＢＣＭＡ特異的抗体又は抗原結合フラグメントの生物学的特性（例えば、結合親和性又は免疫エフェクター活性）を保持している、１つ又は複数のアミノ酸置換、欠失、又は付加を有する変異体を含む。本発明の文脈において、別途記載のない限り、下記注釈が、変異を説明するために使用される。ｉ）所与の位置におけるアミノ酸の置換は、例えば、Ｋ４０９Ｒと記載される。Ｋ４０９Ｒは、４０９位におけるリジンのアルギニンによる置換を意味する。ｉｉ）特定の変異体について、特定の三文字又は一文字コードは、コードＸａａ及びＸを含めて、アミノ酸残基を示すのに使用される。このため、４０９位におけるリジンについてのアルギニンの置換は、Ｋ４０９Ｒと指定され、又は４０９位におけるリジンについての任意のアミノ酸残基の置換は、Ｋ４０９Ｘと指定される。４０９位におけるリジンの欠失の場合には、この欠失は、Ｋ４０９＊により示される。当業者であれば、１つ又は複数のアミノ酸置換、欠失、又は付加を有する変異体を生成することができる。
これらの変異体としては、（ａ）１つ又は２つ以上のアミノ酸残基が保存的又は非保存的アミノ酸により置換されている変異体、（ｂ）１つ又は２つ以上のアミノ酸がポリペプチドに付加されているか又はそれから欠失している変異体、（ｃ）１つ又は２つ以上のアミノ酸が置換基を含む変異体、及び（ｄ）ポリペプチドが、ポリペプチドに有用な特性、例えば、抗体に対するエピトープ、ポリヒスチジン配列、ビオチン部分などを付与し得る別のペプチド又はポリペプチド、例えば、融合パートナー、タンパク質タグ、又は他の化学部分と融合した変異体を挙げることができる。本明細書に記載される抗体又は抗原結合フラグメントは、保存的又は非保存的位置のいずれかにおいて、ある種に由来するアミノ酸残基が別の種における対応する残基に置換されている変異体を含んでもよい。他の実施形態では、非保存的位置におけるアミノ酸残基は、保存的又は非保存的残基により置換される。これらの変異体を得るための手法は、遺伝的（欠失、変異など）、化学的、及び酵素的手法を含め、当業者に既知である。
本明細書に記載されるＢＣＭＡ特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、複数の抗体アイソタイプ、例えば、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＥを具現化することができる。一部の実施形態では、抗体アイソタイプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４のアイソタイプ、好ましくは、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４のアイソタイプである。抗体又はその抗原結合フラグメントの特異性は、ＣＤＲのアミノ酸配列及び配置により主に決定される。したがって、あるアイソタイプのＣＤＲは、抗原特異性を変化させることなく、別のアイソタイプに変更することができる。あるいは、抗原特異性を変化させることなく、ハイブリドーマに、ある抗体アイソタイプを別のものにスイッチさせる技術（アイソタイプスイッチング）が確立されてきた。したがって、このような抗体アイソタイプは、記載される抗体又は抗原結合フラグメントの範囲内にある。
本明細書に記載されるＢＣＭＡ特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、ＡＰＲＩＬ結合に対して低ナノモルのＩＣ５０値を有し得る。記載されるＢＣＭＡ特異的抗体又は抗原結合フラグメントのＩＣ５０は、ＥＬＩＳＡベースの方法又はフローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）などの当技術分野で公知の様々な方法によって決定することができる。ＥＬＩＳＡによってＩＣ５０を測定するためのアッセイは、ＢＣＭＡ特異的抗体の存在下及び非存在下でプレート結合ＢＣＭＡを有し、様々な濃度のＡＰＲＩＬが使用される。ＢＣＭＡへのＡＰＲＩＬの結合を遮断するＢＣＭＡ抗体は、「ＥＬＩＳＡによって測定されるようにＡＰＲＩＬを遮断する」ことである。
本明細書に記載されるポリヌクレオチドを含むベクターもまた提供される。ベクターは、発現ベクターであり得る。したがって、目的のポリペプチドをコードする配列を含む組換え発現ベクターは、本開示の範囲内であることが企図される。発現ベクターは、制御配列（例えば、プロモーター、エンハンサー）、選択マーカー、及びポリアデニル化シグナルなどであるがこれらに限定されない、１つ又は２つ以上の追加配列を含んでもよい。広範な宿主細胞を形質転換するためのベクターは周知であり、プラスミド、ファージミド、コスミド、バキュロウイルス、バクミド、細菌人工染色体（bacterial artificial chromosome、ＢＡＣ）、酵母人工染色体（yeast artificial chromosome、ＹＡＣ）、並びに、他の細菌、酵母、及びウイルスのベクターが挙げられるが、これらに限定されない。
本説明の範囲内にある組換え発現ベクターは、好適な調節エレメントに作動可能に連結することができる少なくとも１つの組換えタンパク質をコードする、合成、ゲノム、又はｃＤＮＡ由来の核酸フラグメントを含む。そのような調節エレメントとしては、転写プロモーター、好適なｍＲＮＡリボソーム結合部位をコードする配列、並びに転写及び翻訳の終了を制御する配列を挙げることができる。発現ベクター、特に、哺乳動物の発現ベクターはまた、１つ又は２つ以上の非転写エレメント、例えば、複製の起点、発現させようとする遺伝子に連結されている好適なプロモーター及びエンハンサー、他の５’若しくは３’フランキング非転写配列、５’若しくは３’非翻訳配列（例えば、必須リボソーム結合部位）、ポリアデニル化部位、スプライスドナー及びアクセプター部位、又は転写終了配列を含んでもよい。宿主において複製する能力を付与する複製の起点もまた、組み込まれ得る。
脊椎動物細胞を形質転換するのに使用される発現ベクター中の転写及び翻訳制御配列は、ウイルス源により提供することができる。例示的なベクターは、Ｏｋａｙａｍａ ａｎｄ Ｂｅｒｇ，３ Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２８０（１９８３）によって記載されるように構築され得る。
一部の実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントのコーディング配列は、強力な構成的プロモーター、例えば、以下の遺伝子：ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）、アデノシンデアミナーゼ、ピルビン酸キナーゼ、ベータアクチン、ヒトミオシン、ヒトヘモグロビン、ヒト筋クレアチンなどのためのプロモーターの制御下に置かれる。加えて、多くのウイルスプロモーターが、真核細胞中で構成的に機能し、記載される実施形態での使用に好適である。そのようなウイルスプロモーターとしては、サイトメガロウイルス（Cytomegalovirus、ＣＭＶ）最初期プロモーター、ＳＶ４０の初期及び後期プロモーター、マウス乳がんウイルス（Mouse Mammary Tumor Virus、ＭＭＴＶ）プロモーター、モロニー白血病ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（Human Immunodeficiency Virus、ＨＩＶ）、エプスタインバーウイルス（Epstein Barr Virus、ＥＢＶ）、ラウス肉腫ウイルス（Rous Sarcoma Virus、ＲＳＶ）、及び他のレトロウイルスの長端末反復配列（long terminal repeat、ＬＴＲ）、並びに単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼプロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、ＢＣＭＡ特異的抗体又はその抗原結合フラグメントのコード配列は、誘引性プロモーター、例えば、メタロチオネインプロモーター、テトラサイクリン誘引性プロモーター、ドキシサイクリン誘引性プロモーター、１つ又は２つ以上のインターフェロン刺激応答エレメント（ＩＳＲＥ）、例えば、プロテインキナーゼＲ２’，５’－オリゴアデニレート合成酵素、Ｍｘ遺伝子、ＡＤＡＲ１などを含有するプロモーターの制御下に置かれる。
本明細書に記載されるベクターは、１つ又は２つ以上の内部リボソーム進入部位（Internal Ribosome Entry Site、ＩＲＥＳ）を含み得る。ＩＲＥＳ配列を融合ベクターに含めることは、一部のタンパク質の発現を増強させるのに有益であり得る。一部の実施形態では、ベクター系は、１つ又は２つ以上のポリアデニル化部位（例えば、ＳＶ４０）を含むこととなり、これは、前述の核酸配列のうちいずれかの上流にあっても下流にあってもよい。ベクターの成分は、近接して連結されてもよく、又は遺伝子産物を発現させるのに最適な間隔を提供するように（すなわち、ＯＲＦ間に「スペーサー」ヌクレオチドを導入することにより）配置されてもよく、又は別の方法で位置付けられてもよい。また、調節エレメント、例えば、ＩＲＥＳモチーフが、発現に最適な間隔を提供するように配置されてもよい。
ベクターは、当該技術分野において既知の選択マーカーを含んでもよい。選択マーカーには、陽性及び陰性選択マーカー、例えば、抗生物質耐性遺伝子（例えば、ネオマイシン耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子、カナマイシン耐性遺伝子、テトラサイクリン耐性遺伝子、ペニシリン耐性遺伝子、ピューロマイシン耐性遺伝子、ブラストサイジン耐性遺伝子）、グルタミン酸合成酵素遺伝子、ガンシクロビル選択用のＨＳＶ－ＴＫ、ＨＳＶ－ＴＫ誘導体、又は６－メチルプリン選択用の細菌のプリンヌクレオシドホスホリラーゼ遺伝子（Ｇａｄｉ ｅｔ ａｌ．，７ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１７３８－１７４３（２０００））が挙げられる。選択マーカーをコードする核酸配列又はクローニング部位は、目的のポリペプチドをコードする核酸配列又はクローニング部位の上流にあっても下流にあってもよい。
本明細書に記載されるベクターを使用して、様々な細胞に、記載される抗体又は抗原結合フラグメントをコードする遺伝子を形質転換することができる。例えば、ベクターを使用して、ＢＣＭＡ特異的抗体又は抗原結合フラグメントの生成細胞を生じさせることができる。このため、別の態様は、ＢＣＭＡに結合する抗体又はその抗原結合フラグメント、例えば、本明細書に記載され、例示された抗体又は抗原結合フラグメントをコードする核酸配列を含むベクターで形質転換された宿主細胞を特徴とする。
外来遺伝子を細胞内に導入するための数多くの手法が、当該技術分野において既知であり、本明細書に記載され例示される様々な実施形態に従って、記載される方法を行う目的で組換え細胞を作成するのに使用することができる。使用される手法は、異種遺伝子配列が細胞の子孫により遺伝及び発現可能であり、かつレシピエント細胞に必須の成育及び生理学的機能を損なうことのないよう、異種遺伝子配列を宿主細胞に安定して導入するものでなければならない。使用することができる手法としては、染色体導入法（例えば、細胞融合、染色体媒介性遺伝子導入、マイクロ細胞媒介性遺伝子導入）、物理的方法（例えば、トランスフェクション、スフェロプラスト融合、マイクロインジェクション、エレクトロポレーション、リポソーム担体）、ウイルスベクター導入（例えば、組換えＤＮＡウイルス、組換えＲＮＡウイルス）などが挙げられる（Ｃｌｉｎｅ，２９ Ｐｈａｒｍａｃ．Ｔｈｅｒ．６９－９２（１９８５））。哺乳動物細胞による細菌プロトプラストのリン酸カルシウム沈殿及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）誘導融合を使用しても、細胞を形質転換することができる。
本明細書に記載されるＢＣＭＡ特異的抗体又は抗原結合フラグメントの発現に使用するのに適した細胞は、好ましくは、真核細胞、より好ましくは、植物、齧歯動物類、又はヒト起源の細胞である。これらの細胞には、とりわけ、例えば、ＮＳＯ、ＣＨＯ、ＣＨＯＫ１、ｐｅｒＣ．６、Ｔｋ－ｔｓ１３、ＢＨＫ、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＯＳ－７、Ｔ９８Ｇ、ＣＶ－１／ＥＢＮＡ、Ｌ細胞、Ｃ１２７、３Ｔ３、ＨｅＬａ、ＮＳ１、Ｓｐ２／０骨髄腫細胞、及びＢＨＫ細胞株等が挙げられるが、これらに限定されない。加えて、抗体の発現は、ハイブリドーマ細胞を使用して達成されてもよい。ハイブリドーマを生成するための方法は、当該技術分野において十分確立されている。
本明細書に記載される発現ベクターが形質転換された細胞は、本明細書に記載される抗体又は抗原結合フラグメントの組換え発現について選択され、又はスクリーニングされてもよい。組換え陽性細胞は、例えば、タンパク質修飾又は変化させた翻訳後修飾により、所望の表現型、例えば、高レベルの発現、増強された増殖特性、又は所望の生化学的特性を有するタンパク質を生成する能力を示すサブクローンについて、増殖され、スクリーニングされる。これらの表現型は、所与のサブクローンの本来の特性又は変異によるものであり得る。変異は、化学薬品、ＵＶ波長光、照射、ウイルス、挿入変異源、ＤＮＡミスマッチ修復の阻害、又はこのような方法の組み合わせにより生じ得る。
処置のためにＢＣＭＡ特異的抗体を使用する方法
本明細書において、治療に使用するための、ＢＣＭＡ特異的抗体又はその抗原結合フラグメントが提供される。特に、これらの抗体又は抗原結合フラグメントは、がん、例えば、ＢＣＭＡ発現がん、又は他のＢＣＭＡ発現障害を処置するのに有用であり得る。したがって、本発明は、本明細書に記載されるとおりの抗体、例えば、ＢＣＭＡ特異的抗体又は抗原結合フラグメントを投与することを含むがんを処置する方法を提供する。例えば、使用は、ＢＣＭＡ受容体相互作用と干渉することによるもの、又はかかる抗体に毒素がコンジュゲートされる場合、そのようにして毒素にＢＣＭＡ発現がんを標的とさせることによるものであってもよい。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ発現がん又は障害には、くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）を含む多発性骨髄腫（ＭＭ）などのリンパ種、又はアミロイドーシス、形質細胞白血病及び狼瘡が含まれる。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ発現がんは、再発性又は難治性形態のリンパ腫、例えば再発性又は難治性形態の多発性骨髄腫である。これらの方法において使用する抗体には、本明細書に前述したもの、例えば、表１及びこれらの抗体の更なる検討において列記された特徴（ＢＣＭＢ５１９）、例えば、ＣＤＲ又は可変ドメイン配列を有するＢＣＭＡ特異的抗体又は抗原結合フラグメントが含まれる。
本明細書に記載される一部の実施形態では、ＢＣＭＡ特異的抗体の免疫エフェクター特性は、本明細書に記載される当業者に既知の技術によるＦｃ修飾によって増強又はサイレンシングさせることができる。例えば、Ｆｃエフェクター機能、例えば、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞媒介性貪食（antibody-dependent cell-mediated phagocytosis、ＡＤＣＰ）、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体、ＢＣＲ（B cell receptor））の下方制御などのＦｃエフェクター機能は、これらの活性に関与するＦｃの残基を修飾することによって提供及び／又は調節され得る。
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」又は「ＡＤＣＣ」は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現している非特異的細胞傷害細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）が標的細胞上に結合した抗体を認識し、続けて、標的細胞の溶解を引き起こす、細胞媒介性反応を指す。
ＡＤＣＣを誘導するモノクローナル抗体の能力は、そのオリゴ糖成分を操作することにより増強され得る。ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３は、Ａｓｎ２９７においてＮ－グリコシル化される。ここで、グリカンの大部分は、既知の二分岐Ｇ０、Ｇ０Ｆ、Ｇ１、Ｇ１Ｆ、Ｇ２、又はＧ２Ｆの形態である。遺伝子操作されていないＣＨＯ細胞により産生された抗体は、典型的には、少なくとも約８５％のグリカンフコース含量を有する。Ｆｃ領域に付加された二分岐の複合体型オリゴ糖からのコアフコースの除去は、抗原結合又はＣＤＣ活性を変更することなく、ＦｃγＲＩＩＩａ結合の改善によって抗体のＡＤＣＣを増強する。このようなｍＡｂは、二分岐の複雑なタイプのＦｃオリゴ糖を有する、比較的高度に脱フコシル化された抗体の発現を成功させることが報告された種々の方法、例えば、培養浸透圧の制御（Ｋｏｎｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６４：２４９－６５，２０１２）、宿主細胞株としての変異体ＣＨＯ株Ｌｅｃ１３の適用（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７７：２６７３３－２６７４０，２００２）、宿主細胞株としての変異体ＣＨＯ株ＥＢ６６の適用（Ｏｌｉｖｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ；２（４），２０１０、Ｅｐｕｂ ａｈｅａｄ ｏｆ ｐｒｉｎｔ、ＰＭＩＤ：２０５６２５８２）、宿主細胞株としてのラットハイブリドーマ細胞株ＹＢ２／０の適用（Ｓｈｉｎｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７８：３４６６－３４７３，２００３）、．アルファ．１，６－フコシルトランスフェラーゼ（ＦＵＴ８）遺伝子に対して特異的な低分子干渉ＲＮＡの導入（Ｍｏｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ ８８：９０１－９０８，２００４）、又はベータ－１，４－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩとゴルジアルファ－マンノシダーゼＩＩ又は強力なアルファ－マンノシダーゼＩ阻害剤であるキフネンシンとの共発現（Ｆｅｒｒａｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８１：５０３２－５０３６；２００６、Ｆｅｒｒａｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ ９３：８５１－８６１，２００６；Ｘｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ ９９：６５２－６５，２００８）を使用して達成され得る。
本明細書において記載される一部の実施形態では、ＢＣＭＡ抗体により引き出されたＡＤＣＣはまた、抗体Ｆｃ中の特定の置換によって向上され得る。例示的な置換は、例えば、米国特許第６，７３７，０５６号に記載されているように、アミノ酸位置２５６、２９０、２９８、３１２、３５６、３３０、３３３、３３４、３６０、３７８、又は４３０（ＥＵインデックスに従った残基番号付け）における置換である。
ＢＣＭＡを検出する方法
本明細書において、サンプルを、本明細書に記載される抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させることにより、生体サンプル中のＢＣＭＡを検出するための方法が提供される。本明細書に記載されるように、サンプルは、尿、血液、血清、血漿、唾液、腹水、循環細胞、循環腫瘍細胞、組織会合していない細胞（すなわち、遊離細胞）、組織（例えば、外科手術的に切除された腫瘍組織、微細針吸引を含む生検）、組織学的調製物などから得ることができる。一部の実施形態では、記載される方法は、サンプルを、本明細書に記載されるＢＣＭＡ特異的抗体又はその抗原結合フラグメントのいずれかと接触させることにより、生体サンプル中のＢＣＭＡを検出することを含む。
一部の実施形態では、サンプルを、本明細書に記載されるＢＣＭＡ特異的抗体又は抗原結合フラグメントの２つ以上と接触させてもよい。例えば、サンプルを、第１のＢＣＭＡ特異的抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させ、次いで、第２のＢＣＭＡ特異的抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させてもよく、この場合、第１の抗体又は抗原結合フラグメントと第２の抗体又は抗原結合フラグメントとは、同じ抗体又は抗原結合フラグメントではない。一部の実施形態では、第１の抗体又はその抗原結合フラグメントは、サンプルと接触させる前に、表面、例えば、マルチウェルプレート、チップ、又は類似する基材に固定されてもよい。他の実施形態では、第１の抗体又はその抗原結合フラグメントは、サンプルと接触させる前に、何にも固定されない又は付着されない場合がある。
記載されるＢＣＭＡ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、検出可能に標識されてもよい。一部の実施形態では、標識された抗体及び抗原結合フラグメントは、本明細書に記載される方法によるＢＣＭＡの検出を容易にし得る。多くのこのような標識が、当業者に容易に既知である。例えば、好適な標識としては、放射線標識、蛍光標識、エピトープタグ、ビオチン、発色団標識、ＥＣＬ標識、又は酵素が挙げられるが、これらに限定されると考えられるべきではない。より詳細には、記載される標識としては、ルテニウム、１１１Ｉｎ－ＤＯＴＡ、１１１Ｉｎ－ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、西洋わさびペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、及びベータガラクトシダーゼ、ポリヒスチジン（ＨＩＳタグ）、アクリジン染料、シアニン染料、フルオロン染料、オキサジン染料、フェナントリジン染料、ローダミン染料、Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ（登録商標）染料などが挙げられる。
記載されるＢＣＭＡ特異的抗体及び抗原結合フラグメントは、生体サンプル中のＢＣＭＡを検出するための各種のアッセイに使用されてもよい。一部の好適なアッセイには、ウェスタンブロット分析、ラジオイムノアッセイ、表面プラズモン共鳴、免疫蛍光測定法、免疫沈澱法、平衡透析法、免疫拡散法、電気化学発光（electrochemiluminescence、ＥＣＬ）イムノアッセイ、免疫組織化学法、蛍光標識細胞分取（fluorescence-activated cell sorting、ＦＡＣＳ）又はＥＬＩＳＡアッセイが挙げられるが、これらに限定されると考えられるべきではない。
本明細書に記載される一部の実施形態では、対象におけるＢＣＭＡ発現がん細胞の検出を用い、対象がＢＣＭＡを目標とする治療剤により処置され得るかを判定することができる。
ＢＣＭＡは、血液及び血清サンプル中に、検出可能なレベルで存在する。このため、本明細書において、サンプルを、ＢＣＭＡに結合する抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させることにより、血液から得られたサンプル、例えば、血清サンプル中のＢＣＭＡを検出するための方法が提供される。血液サンプル又はその派生物は、希釈され、画分され、又は他の方法で処理されて、記載の方法が実施され得るサンプルを生成することができる。一部の実施形態では、ＢＣＭＡは、当該技術分野において既知の任意の回数のアッセイにより、血液サンプル又はその派生物中で検出することができる。例えば、同アッセイには、ウェスタンブロット分析、ラジオイムノアッセイ、表面プラズモン共鳴、免疫蛍光測定法、免疫沈澱法、平衡透析法、免疫拡散法、電気化学発光（ＥＣＬ）免疫アッセイ、免疫組織化学法、蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）又はＥＬＩＳＡアッセイが挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、方法は、インビトロの方法である。
がん又は障害を診断するための方法
本明細書において、対象におけるＢＣＭＡ発現がん又は障害を診断するための方法が提供される。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ発現がん又は障害には、くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）を含む多発性骨髄腫（ＭＭ）などのリンパ種、又はアミロイドーシス、形質細胞白血病及び狼瘡が含まれる。一部の実施形態では、上記されたように、生体サンプル、例えば、血液サンプル又は血清サンプル中のＢＣＭＡを検出することは、サンプルが得られた対象におけるがんを診断する能力を提供する。あるいは、一部の実施形態では、他のサンプル、例えば、組織学的サンプル、微細針吸引サンプル、切除された腫瘍組織、循環細胞、循環腫瘍細胞などもまた、サンプルが得られた対象ががんを有するかどうかを評価するのに使用されてもよい。一部の実施形態では、サンプルが得られた対象ががんを有することが既に判明している場合もあるが、対象が罹患しているがんの種類は、診断されていない場合、又は予備的診断では不明である場合もあり、そのため、対象から得られた生体サンプル中のＢＣＭＡを検出することにより、がんの診断を可能にする又は明確にすることができる。例えば、対象ががんを有することが判明している場合もあるが、不明である場合、又は対象のがんがＢＣＭＡを発現しているかどうかが不明確である場合もある。
一部の実施形態では、記載される方法は、対象から得られた生体サンプル中に存在するＢＣＭＡの量を決定し、観察されたＢＣＭＡの量を対照又は参照サンプル中のＢＣＭＡの量と比較することにより、対象がＢＣＭＡ発現がんに罹患しているどうかを評価することを含む。この場合、対象から得られたサンプル中のＢＣＭＡの量と対照又は参照サンプル中のＢＣＭＡの量との間の差が、対象がＢＣＭＡ発現がんに罹患していることの指標となる。別の実施形態では、対象から得られた生体サンプル中に観察されたＢＣＭＡの量を、特定の形態又はステージのがんに関連することが既知のＢＣＭＡのレベルと比較して、対象のがんの形態又はステージを求めることができる。一部の実施形態では、対象から得られたサンプル中のＢＣＭＡの量は、サンプルを、ＢＣＭＡに結合する抗体又はその抗原結合フラグメント、例えば、本明細書に記載されるＢＣＭＡ特異的抗体と接触させることにより評価される。ＢＣＭＡの存在について評価されるサンプルは、尿、血液、血清、血漿、唾液、腹水、循環細胞、循環腫瘍細胞、組織会合していない細胞（すなわち、遊離細胞）、組織（例えば、外科手術的に切除された腫瘍組織、微小針吸引を含む生検）、組織学的調製物などから得られてもよい。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ発現がん又は障害には、くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）を含む多発性骨髄腫（ＭＭ）などの血液がん、又はアミロイドーシス、形質細胞白血病及び狼瘡が含まれる。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ発現がんは、再発性又は難治性形態のリンパ腫、例えば再発性又は難治性形態の多発性骨髄腫である。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。
一部の実施形態では、ＢＣＭＡ発現がん又は障害を診断する方法は、対象の生体サンプルを、ＢＣＭＡ特異的抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、表１で提供される抗体及びフラグメントから得られたもの（例えばＢＣＭＢ５１９））と接触させること、抗体又はその抗原結合フラグメントが結合したサンプル中に存在するＢＣＭＡの量を定量すること、サンプル中に存在するＢＣＭＡの量を既知の標準又は参照サンプルと比較すること、及び対象のＢＣＭＡレベルががんに関連するＢＣＭＡのレベル内に入るかどうかを判定することを含む。更なる実施形態では、診断方法は、ＢＣＭＡ特異的治療剤を投与又は処方する更なるステップが続き得る。別の実施形態では、診断方法は、がん又は障害の処置を容易にするために、判定の結果を伝達する更なるステップが続き得る。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ特異的処置は、本明細書に記載されるＢＣＭＡ×ＣＤ３多重特異的抗体などのＢＣＭＡ発現がんを目標とし得る。
一部の実施形態では、記載される方法は、対象から得られた血液又は血清サンプル中に存在するＢＣＭＡの量を決定し、観察されたＢＣＭＡの量を対照又は参照サンプル中のＢＣＭＡの量と比較することにより、対象がＢＣＭＡ発現がんに罹患しているどうかを評価することを含む。この場合、対象から得られたサンプル中のＢＣＭＡの量と対照又は参照サンプル中のＢＣＭＡの量との間の差が、対象がＢＣＭＡ発現がんに罹患していることの指標となる。
一部の実施形態では、対照又は参照サンプルは、ＢＣＭＡ発現がん又は障害に罹患していない対象から得られてもよい。一部の実施形態では、対照又は参照サンプルは、ＢＣＭＡ発現がん又は障害に罹患している対象から得られてもよい。対照又は参照サンプルがＢＣＭＡ発現がん又は障害に罹患していない対象から得られる一部の実施形態では、対照又は参照サンプルについて観察されたＢＣＭＡの量に対して、試験サンプル中に存在するＢＣＭＡの量において観察された増大は、評価される対象がＢＣＭＡ発現がん又は障害に罹患していることの指標である。対照サンプルがＢＣＭＡ発現がん又は障害に罹患していない対象から得られる一部の実施形態では、対照又は参照サンプルについて観察されたＢＣＭＡの量に対して、試験サンプル中に存在するＢＣＭＡの量において観察される減少又は類似性は、評価される対象がＢＣＭＡ発現がん又は障害に罹患していないことの指標である。対照又は参照サンプルがＢＣＭＡ発現がん又は障害に罹患している対象から得られる一部の実施形態では、対照又は参照サンプルについて観察されたＢＣＭＡの量に対して、試験サンプル中に存在するＢＣＭＡの量において観察された増大は、評価される対象がＢＣＭＡ発現がん又は障害に罹患していることの指標である。対照又は参照サンプルがＢＣＭＡ発現がん又は障害に罹患している対象から得られる一部の実施形態では、対照又は参照サンプルについて観察されたＢＣＭＡの量に対して、試験サンプル中に存在するＢＣＭＡの量において観察された増大は、評価される対象がＢＣＭＡ発現がん又は障害に罹患していることの指標である。
一部の実施形態では、対象から得られたサンプル中のＢＣＭＡの量は、サンプルを、ＢＣＭＡに結合する抗体又はその抗原結合フラグメント、例えば、本明細書に記載される抗体と接触させることにより評価される。ＢＣＭＡの存在について評価されるサンプルは、血液サンプル、血清サンプル、循環細胞、循環腫瘍細胞、組織会合していない細胞（すなわち、遊離細胞）、組織（例えば、外科手術的に切除された腫瘍組織、微細針吸引を含む生検）、組織学的調製物などから得られてもよい。
種々の態様において、ＢＣＭＡの量は、サンプルを、ＢＣＭＡに結合する抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させることにより決定される。一部の実施形態では、サンプルを、ＢＣＭＡに結合する２つ以上の種類の抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させてもよい。一部の実施形態では、サンプルを、ＢＣＭＡに結合する第１の抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させ、次いで、ＢＣＭＡに結合する第２の抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させてもよい。本明細書に記載されるものなどのＢＣＭＡ特異的抗体又は抗原結合フラグメントを、この能力範囲において使用してもよい。
ＢＣＭＡ特異的抗体及び抗原結合フラグメントの種々の組み合わせを使用して、記載される診断方法を実施するための「第１」及び「第２」の抗体又は抗原結合フラグメントを提供することができる。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ発現がん又は障害は、リンパ腫、例えば、くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）を含む多発性骨髄腫（ＭＭ）を含む。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ発現がんは、再発性又は難治性形態のリンパ腫、例えば再発性又は難治性形態の多発性骨髄腫である。
特定の実施形態では、ＢＣＭＡの量は、ウェスタンブロット分析、ラジオイムノアッセイ、免疫蛍光測定法、免疫沈殿法、平衡透析法、免疫拡散法、電気化学発光（ＥＣＬ）免疫アッセイ、免疫組織化学法、蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）又はＥＬＩＳＡアッセイにより決定される。
記載される診断方法の種々の実施形態では、対照又は参照サンプルが使用される。このサンプルは、使用されるアッセイが適切に機能していることを保証する陽性又は陰性のアッセイ対照でもよい。例えば、この性質のアッセイ対照は、免疫組織化学アッセイに一般的に使用されてもよい。あるいは、サンプルは、健康な対象からの生体サンプル中のＢＣＭＡの量について標準化された参照であってもよい。一部の実施形態では、試験された対象の観察されたＢＣＭＡレベルは、ＢＣＭＡ発現がんを有することが判明している対象由来のサンプル中に観察されたＢＣＭＡレベルと比較されてもよい。一部の実施形態では、対照群の対象は、標的となる特定のがん又は障害に罹患していてもよい。一部の実施形態では、対照群の対象は、初期ステージのがんを有することが判明しており、かかるがんは、ＢＣＭＡ発現がんである場合もそうでない場合もある。一部の実施形態では、対照群の対象は、中間ステージのがんを有することが判明しており、かかるがんは、ＢＣＭＡ発現がんである場合もそうでない場合もある。一部の実施形態では、対照群の対象は、後期ステージになっていることが判明しており、かかるがんは、ＢＣＭＡ発現がんである場合もそうでない場合もある。一部の実施形態では、がん又は障害を診断するための方法は、インビトロ方法である。
がん又は障害をモニターするための方法
本明細書において、対象におけるＢＣＭＡ発現がん又は障害をモニターするための方法が提供される。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ発現がん又は障害には、くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）を含む多発性骨髄腫（ＭＭ）などのリンパ種、又はアミロイドーシス、形質細胞白血病及び狼瘡が含まれる。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ発現がんは、再発性又は難治性形態のリンパ腫、例えば再発性又は難治性形態の多発性骨髄腫である。一部の実施形態では、記載される方法は、対象から得られた試験サンプル中に存在するＢＣＭＡの量を決定することと、観察されたＢＣＭＡの量をより早い時点で対象から同様にして得られた生体サンプル中のＢＣＭＡの量と比較することと、により、ＢＣＭＡ発現がん又は障害が進行性、退行性、又は安定なままであるかどうかを評価することを含む。この場合、試験サンプル中のＢＣＭＡの量とより早期のサンプル中のＢＣＭＡの量との間の差は、がんが、進行性、退行性、又は安定なままであるかどうかの指標を提供する。これに関して、より早期のサンプルについて観察された量に対して増大した量のＢＣＭＡを含む試験サンプルは、ＢＣＭＡ発現がん又は障害の進行を示し得る。逆に、より早期のサンプルについて観察された量と比較して減少した量のＢＣＭＡを含む試験サンプルは、ＢＣＭＡ発現がん又は障害の退縮を示し得る。
したがって、より早期のサンプルについて観察された量と比較してＢＣＭＡの量においてわずかな差しか有しない試験サンプルは、ＢＣＭＡ発現がん又は障害について安定病態を示し得る。一部の実施形態では、対象から得られた生体サンプル中のＢＣＭＡの量は、サンプルを、ＢＣＭＡに結合する抗体又はその抗原結合フラグメント、例えば、本明細書に記載される抗体と接触させることにより評価される。ＢＣＭＡの存在について評価されるサンプルは、尿、血液、血清、血漿、唾液、腹水、循環細胞、循環腫瘍細胞、組織会合していない細胞（すなわち、遊離細胞）、組織（例えば、外科手術的に切除された腫瘍組織、微小針吸引を含む生検）、組織学的調製物などから得られてもよい。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。
一部の実施形態では、ＢＣＭＡ発現がん又は障害をモニターする方法は、対象の生体サンプルを、ＢＣＭＡ特異的抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、表１で提供される抗体及びフラグメントから得られたもの（例えばＢＣＭＢ５１９））と接触させることと、サンプル中に存在するＢＣＭＡの量を定量することと、サンプル中に存在するＢＣＭＡの量をより早い時点において同じ対象から同様にして得られた生体サンプル中に存在することが決定されているＢＣＭＡの量と比較することと、対象のＢＣＭＡレベルが経時的に変化していたかどうかを判定することと、を含む。より早期のサンプルについて観察された量と比較して増大した量のＢＣＭＡを含む試験サンプルは、がんの進行を示すことができる。逆に、より早期のサンプルについて観察された量と比較して減少した量のＢＣＭＡを含む試験サンプルは、ＢＣＭＡ発現がん又は障害の退縮を示し得る。したがって、より早期のサンプルについて観察された量と比較してＢＣＭＡの量においてわずかな差しか有しない試験サンプルは、ＢＣＭＡ発現がん又は障害について安定病態を示し得る。一部の実施形態では、サンプルのＢＣＭＡレベルは、単独で、又はより早い時点において評価されたサンプルについて観察されたＢＣＭＡレベルに加えて、既知の標準又は参照サンプルと比較されてもよい。更なる実施形態では、診断方法は、ＢＣＭＡ特異的処置を行う更なるステップが続き得る。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ特異的処置は、本明細書に記載されるＢＣＭＡ×ＣＤ３多重特異的抗体などのＢＣＭＡ発現がんを目標とし得る。
種々の態様において、ＢＣＭＡの量は、サンプルを、ＢＣＭＡに結合する抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させることにより決定される。一部の実施形態では、サンプルを、ＢＣＭＡに結合する２つ以上の種類の抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させてもよい。一部の実施形態では、サンプルを、ＢＣＭＡに結合する第１の抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させ、次いで、ＢＣＭＡに結合する第２の抗体又はその抗原結合フラグメントと接触させてもよい。本明細書に記載されるものなどの抗体を、この能力において使用されてもよい。
表１に記載される抗体及び抗原結合フラグメントの種々の組み合わせを使用して、記載されるモニター方法を行うための「第１」及び「第２」の抗体又は抗原結合フラグメントを提供することができる。一部の実施形態では、ＢＣＭＡ発現がん又は障害は、血液がん、例えば、急性骨髄白血病（acute myeloid leukemia、ＡＭＬ）若しくはリンパ腫（例えば、多発性骨髄腫（ＭＭ）、くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ））、又はアミロイドーシス、形質細胞白血病、及び狼瘡を含む。
特定の実施形態では、ＢＣＭＡの量は、ウェスタンブロット分析、ラジオイムノアッセイ、免疫蛍光測定法、免疫沈殿法、平衡透析法、免疫拡散法、電気化学発光（ＥＣＬ）免疫アッセイ、免疫組織化学法、蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）又はＥＬＩＳＡアッセイにより決定される。一部の実施形態では、方法は、インビトロの方法である。
ＢＣＭＡを検出するためのキット
本明細書において、生体サンプル中のＢＣＭＡを検出するためのキットが提供される。これらのキットは、本明細書に記載されるＢＣＭＡ特異的抗体又はその抗原結合フラグメントのうち１つ又は２つ以上と、このキットを使用するための指示書とを含む。
提供されるＢＣＭＡ特異的抗体又は抗原結合フラグメントは、溶液の中に存在してもよく、凍結乾燥されていてもよく、基材、担体、又はプレートに固定されていてもよく、又は検出可能に標識化されていてもよい。
記載されるキットはまた、本明細書に記載される方法を行うのに有用な更なる構成要素を含んでもよい。例として、キットは、対象からサンプルを得るための手段、対照若しくは参照サンプル、例えば、ゆっくり進行するがんを有する対象及び／又はがんを有しない対象からのサンプル、１つ若しくは２つ以上のサンプル区画、及び／又は本発明の方法の実施について説明する指示書、並びに組織特異的な対照若しくは基準物質を含んでもよい。
ＢＣＭＡのレベルを決定するための手段は、例えば、ＢＣＭＡのレベルを決定するためのアッセイで使用するためのバッファ又は他の試薬を更に含み得る。指示書は、例えば、アッセイを行うための印刷された指示書及び／又はＢＣＭＡの発現レベルを評価するための指示書であり得る。
記載されるキットはまた、対象からサンプルを単離するための手段を含んでもよい。これらの手段は、対象から流体又は組織を得るのに使用され得る機器又は試薬のうち１つ又は２つ以上の品目を含み得る。対象からサンプルを得るための手段はまた、血液サンプルから血液成分、例えば、血清を単離するための手段を含んでもよい。好ましくは、キットは、ヒト対象で使用するために設計されている。
実施形態
本明細書で提供される開示は、以下の非限定的実施形態も提供する。
実施形態１．三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメントであって、
（ａ）第１の重鎖可変ドメイン（ＶＨ１）及び第１の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ１）を含む第１の抗原結合アーム、
（ｂ）第２の重鎖可変ドメイン（ＶＨ２）及び第２の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ２）を含む第２の抗原結合アーム、
（ｃ）第３の重鎖可変ドメイン（ＶＨ３）及び第３の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ３）を含む第３の抗原結合アーム、を含み、
第１の抗原結合アームが、表面抗原分類３（ＣＤ３）上のエピトープに結合し、第２の抗原結合アームが、Ｇタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）上のエピトープに結合し、第３の抗原結合アームが、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）上のエピトープに結合する、三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメント。
実施形態２．第１の抗原結合アームのＶＨ１及びＶＬ１が、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆｄ、ジスルフィド安定化Ｆｖフラグメント（ｄｓＦｖ）、又はジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、任意選択でＦａｂ中に存在する、実施形態１に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態３．第２の抗原結合アームのＶＨ２及びＶＬ２が、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆｄ、ジスルフィド安定化Ｆｖフラグメント（ｄｓＦｖ）、又はジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、任意選択でｓｃＦｖ中に存在する、実施形態１又は２に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態４．第３の抗原結合アームのＶＨ３及びＶＬ３が、抗体フラグメント、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆｄ、ジスルフィド安定化Ｆｖフラグメント（ｄｓＦｖ）、又はジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓ ｄｉａｂｏｄｙ）、任意選択でｓｃＦｖ中に存在する、実施形態１～３のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態５．ＣＤ３に結合する第１の抗原結合アームが、配列番号８の重鎖可変ドメイン（ＶＨ１）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３と、配列番号７の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ１）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３と、を含む、実施形態１～４のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態６．ＣＤ３に結合する第１の抗原結合アームが、ＧＤＳＶＦＮＮＮＡＡＷＳ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＲＴＹＹＲＳＫＷＬＹＤ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、及びＧＹＳＳＳＦＤＹ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３と、ＴＧＴＳＳＮＩＧＴＹＫＦＶＳ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＥＶＳＫＲＰＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及びＶＳＹＡＧＳＧＴＬＬ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３と、を含む、実施形態１～５のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態７．ＣＤ３に結合する第１の抗原結合アームが、配列番号８のＶＨ１及び配列番号７のＶＬ１を含む、実施形態１～６のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態８．ＧＰＲＣ５Ｄに結合する第２の抗原結合アームが、配列番号１６の重鎖可変ドメイン（ＶＨ２）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３と、配列番号１５の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ２）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３と、を含む、実施形態１～７のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態９．ＧＰＲＣ５Ｄに結合する第２の抗原結合アームが、ＧＦＳＬＴＮＩＲＭＳＶＳ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＩＦＳＮＤＥＫＳ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、及びＭＲＬＰＹＧＭＤＶ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３と、ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＤＧＮＴＹＬＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＫＩＳＮＲＦＦ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及びＭＱＡＴＱＦＰＨＴ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３と、を含む、実施形態１～８のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１０．ＧＰＲＣ５Ｄに結合する第２の抗原結合アームが、配列番号１６のＶＨ２及び配列番号１５のＶＬ２を含む、実施形態１～９のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１１．ＢＣＭＡに結合する第３の抗原結合アームが、配列番号２４の重鎖可変ドメイン（ＶＨ３）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３と、配列番号２３の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ３）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３と、を含む、実施形態１～１０のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１２．ＢＣＭＡに結合する第３の抗原結合アームが、ＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、及びＤＥＧＹＳＳＧＨＹＹＧＭＤＶ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３と、ＲＡＳＱＳＩＳＳＳＦＬＴ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及びＱＨＹＧＳＳＰＭＹＴ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３と、を含む、実施形態１～１１のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１３．ＢＣＭＡに結合する第３の抗原結合アームが、配列番号２４のＶＨ３及び配列番号２３のＶＬ３を含む、実施形態１～１２のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１４．ＣＤ３に結合する第１の抗原結合アームが、配列番号８のＶＨ１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３と、配列番号７のＶＬ１のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３とを含み、
ＧＰＲＣ５Ｄに結合する第２の抗原結合アームが、配列番号１６のＶＨ２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３と、配列番号１５のＶＬ２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３とを含み、
ＢＣＭＡに結合する第３の抗原結合アームが、配列番号２４のＶＨ３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３と、配列番号２３のＶＬ３のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３とを含む、実施形態１～４のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１５．ＣＤ３に結合する第１の抗原結合アームが、それぞれ配列番号４、５、６、１、２、及び３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
ＧＰＲＣ５Ｄに結合する第２の抗原結合アームが、それぞれ配列番号１２、１３、１４、９、１０、及び１１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
ＢＣＭＡに結合する第３の抗原結合アームが、それぞれ配列番号２０、２１、２２、１７、１８及び１９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、実施形態１～４及び１４のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１６．ＣＤ３に結合する第１の抗原結合アームが、配列番号８のＶＨ１及び配列番号７のＶＬ１を含み、
ＧＰＲＣ５Ｄに結合する第２の抗原結合アームが、配列番号１６のＶＨ２及び配列番号１５のＶＬ２を含み、
ＢＣＭＡに結合する第３の抗原結合アームが、配列番号２４のＶＨ３及び配列番号２３のＶＬ３を含む、実施形態１～４、１４及び１５のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１７．第１の抗原結合アームが、フラグメント結晶化可能（Ｆｃ）ドメインを含み、第２の抗原結合アーム又は第３の抗原結合アームが、Ｆｃドメインを含む、実施形態１～１６のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメント。
実施形態１８．Ｆｃドメインが、Ｆｃドメインのヘテロ二量体化を促進する１つ又は２つ以上の変異を含む、実施形態１７に記載の三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメント。
実施形態１９．変異が、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｔ３６６Ｗ、及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ付番）から選択される、実施形態１８に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態２０．Ｆｃドメインが、Ｆｃγ受容体へのＦｃ結合を低減する１つ又は２つ以上の変異を更に含む、実施形態１７～１９のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態２１．Ｆｃγ受容体が、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩＡ、及び／又はＦｃγＲＩＩＩＢである、実施形態２０に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態２２．Ｆｃドメインが、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＤ２６５Ｓ（ＥＵ付番）から選択される１つ又は２つ以上の変異を含む、実施形態２０又は２１に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態２３．Ｆｃドメインが、プロテインＡへのＦｃ結合を低減する１つ又は２つ以上の変異を更に含む、実施形態１７～２２のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態２４．Ｆｃドメインが、変異Ｈ４３５Ｒ及び／又はＹ４３６Ｆ（ＥＵ付番）を含む、実施形態２３に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態２５．第１の抗原結合アームが、ＣＤ３ε鎖の残基２２～３５（ＱＤＧＮＥＥＭＧＧＩＴＱＴＰ（配列番号１６１））に特異的に結合する、実施形態１～２４のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態２６．約１×１０－８～１×１０－７Ｍの親和性でＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合アーム、実施形態１～２５のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態２７．約２×１０－８～４×１０－８Ｍの親和性でＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合アーム、実施形態２６に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態２８．第３の抗原結合アームが、ＢＣＭＡ ＢＣＭＷ３７鎖の残基１７～２６（ＬＬＨＡＣＩＰＣＱＬ（配列番号１６２））に特異的に結合する、実施形態１～２７のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態２９．第３の抗原結合アームが、約１×１０－１０～１×１０－７Ｍの親和性でＢＣＭＡに特異的に結合する、実施形態１～２８のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態３０．第３の抗原結合アームが、約２×１０－１０～９×１０－１０Ｍの親和性でＢＣＭＡに特異的に結合する、実施形態２９に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態３１．表面抗原分類３（ＣＤ３）上のエピトープに結合する第１の抗原結合アームと、Ｇタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）上のエピトープに結合する第２の抗原結合アームと、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）上のエピトープに結合する第３の抗原結合アームと、を含む、三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメントであって、
第１の抗原結合アームが、重鎖（ＨＣ１）ポリペプチド及び軽鎖（ＬＣ）ポリペプチドを含み、
三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメントが、第２の抗原結合アーム及び第３の抗原結合アームを含む単一ポリペプチドを含む、三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態３２．第１の抗原結合アームのＨＣ１が、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、実施形態３１に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態３３．第１の抗原結合アームのＬＣが、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、実施形態３２に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態３４．第２の抗原結合アーム及び第３の抗原結合アームを含むポリペプチドが、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、実施形態３２又は３３に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態３５．第１の抗原結合アームが、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ１と、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＬＣとを含み、第２の抗原結合アーム及び第３の抗原結合アームを含むポリペプチドが、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、実施形態３１に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態３６．表面抗原分類３（ＣＤ３）上のエピトープに結合する第１の抗原結合アームと、Ｇタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）上のエピトープに結合する第２の抗原結合アームと、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）上のエピトープに結合する第３の抗原結合アームと、を含む、三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメントであって、
第１の抗原結合アームが、重鎖（ＨＣ１）ポリペプチド及び軽鎖（ＬＣ）ポリペプチドを含み、重鎖（ＨＣ１）ポリペプチドが、第２の抗原結合アームを更に含み、
三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメントが、第３の抗原結合アームを含む単一ポリペプチドを更に含む、三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態３７．第１の抗原結合アームのＨＣ１が、配列番号２９のアミノ酸配列を含む、実施形態３６に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態３８．第１の抗原結合アームのＬＣが、配列番号３０のアミノ酸配列を含む、実施形態３６又は３７に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態３９．第３の抗原結合アームを含む単一ポリペプチドが、配列番号３１のアミノ酸配列を含む、実施形態３６～３８のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態４０．第１の抗原結合アームが、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＣ１と、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＬＣとを含み、第３の抗原結合アームを含む単一ポリペプチドが、配列番号３１のアミノ酸配列を含む、実施形態３６に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態４１．抗体又はその抗原結合フラグメントが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプである、実施形態１～４０のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態４２．抗体又はその抗原結合フラグメントが、ＩｇＧ１アイソタイプである、実施形態１～４１のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態４３．実施形態１～４２のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメントをコードする合成ポリヌクレオチド。
実施形態４４．実施形態１～４２のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメントと、医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
実施形態４５．医薬組成物が、第２の治療剤を更に含む、実施形態４４に記載の医薬組成物。
実施形態４６．第２の治療剤が、抗ＣＤ３８剤、免疫調節性イミド薬物（ＩＭｉＤ）、免疫チェックポイント阻害剤、免疫共刺激剤、ガンマセクレターゼ阻害剤、Ｔ細胞エンハンサー、又はそれらの任意の組み合わせを含む、実施形態４５に記載の医薬組成物。
実施形態４７．実施形態１～４２のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメントを発現する細胞。
実施形態４８．細胞が、ハイブリドーマである、実施形態４７に記載の細胞。
実施形態４９．三重特異的抗体が、組換えにより産生される、実施形態４７に記載の細胞。
実施形態５０．がんの治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、対象に、治療有効量の実施形態１～４２のいずれか１つに記載の三重特異的抗体若しくは三重特異的結合フラグメント、又は実施形態４３～４６のいずれか１つに記載の医薬組成物、を投与することを含む、方法。
実施形態５１．三重特異的抗体若しくは三重特異的結合フラグメント、又は医薬組成物が、がんを治療するのに十分な時間投与される、実施形態５０に記載の方法。
実施形態５２．がん細胞の成長又は増殖を阻害するための方法であって、かかる細胞に、有効量の実施形態１～４２のいずれか１つに記載の三重特異的抗体若しくは三重特異的結合フラグメント、又は実施形態４３～４６のいずれか１つに記載の医薬組成物、を投与することを含み、かかる有効量が、かかるがん細胞の成長又は増殖を阻害するのに十分である、方法。
実施形態５３．かかるがん細胞が、対象内にあり、三重特異的抗体若しくは三重特異的結合フラグメント又は医薬組成物が、対象に投与される、実施形態５２に記載の方法。
実施形態５４．かかる投与が、エクスビボで実施される、実施形態５２に記載の方法。
実施形態５５．ＢＣＭＡ及び／又はＧＰＲＣ５Ｄ発現がん細胞に対してＴ細胞を指向することを必要とする対象においてそれを行う方法であって、かかる対象に、治療有効量の実施形態１～４２のいずれか１つに記載の三重特異的抗体若しくは三重特異的結合フラグメント、又は実施形態４３～４６のいずれか１つに記載の医薬組成物、を投与することを含む、方法。
実施形態５６．かかる治療有効量が、かかるがん細胞に対してかかるＴ細胞応答を指向するのに十分である、実施形態５５に記載の方法。
実施形態５７．がんが、血液がんである、実施形態５０～５６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５８．血液がんが、ＢＣＭＡ及び／又はＧＰＲＣ５Ｄ発現Ｂ細胞がんである、実施形態５７に記載の方法。
実施形態５９．ＢＣＭＡ及び／又はＧＰＲＣ５Ｄ発現Ｂ細胞がんが、多発性骨髄腫である、実施形態５８に記載の方法。
実施形態６０．ＢＣＭＡ及び／又はＧＰＲＣ５Ｄ発現Ｂ細胞がんが、くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）である、実施形態５９に記載の方法。
実施形態６１．がんが、再発性、難治性、若しくは悪性のがん、又はそれらの任意の組み合わせである、実施形態５０～６０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６２．対象が、前処置を受けたことがある、実施形態５０～５１、５３、及び５５～６１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６３．前処置が、プロテアソーム阻害剤、免疫調節薬、ＣＤ３８抗体、二重特異性剤、ＣＡＲ－Ｔ療法、又はそれらの任意の組み合わせを含む、実施形態６２に記載の方法。
実施形態６４．第２の治療剤を投与することを更に含む、実施形態５０～６３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６５．第２の治療剤が、化学療法剤又は標的を設定した抗がん治療である、実施形態６４に記載の方法。
実施形態６６．化学療法剤が、シタラビン、アントラサイクリン、ヒスタミン二塩酸塩、又はインターロイキン２（ＩＬ－２）である、実施形態６５に記載の方法。
実施形態６７．第２の治療剤が、抗ＣＤ３８剤、免疫調節性イミド薬物（ＩＭｉＤ）、免疫チェックポイント阻害剤、免疫共刺激剤、ガンマセクレターゼ阻害剤、Ｔ細胞エンハンサー、又はそれらの任意の組み合わせである、実施形態６４に記載の方法。
実施形態６８．三重特異的抗体若しくは三重特異的結合フラグメント、又は医薬組成物が、対象に静脈内、筋肉内、腹腔内、及び／又は皮下投与される、実施形態５０～５１、５３、及び５５～６７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６９．三重特異的抗体若しくは三重特異的結合フラグメント、又は医薬組成物が、対象に皮下投与される、実施形態５０～５１、５３、及び５５～６８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７０．実施形態１～４２のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメントを生成するための方法であって、実施形態４７～４９のいずれか１つに記載の細胞を培養することと、三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメントを単離することとを含む、方法。
実施形態７１．（ｉ）実施形態１～４２のいずれか１つに記載の三重特異的抗体若しくは三重特異的結合フラグメント及び／又は実施形態４３に記載のポリヌクレオチドと、（ｉｉ）それらのためのパッケージングと、を含む、キット。
実施形態７２．ＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号２０）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹ（配列番号２１）のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２と、ＤＥＧＹＳＳＧＨＹＹＧＭＤＶ（配列番号２２）のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３と、を含む、ＢＣＭＡに結合する抗体又はその抗原結合フラグメント。
実施形態７３．ＲＡＳＱＳＩＳＳＳＦＬＴ（配列番号１７）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号１８）のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２と、ＱＨＹＧＳＳＰＭＹＴ（配列番号１９）のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３と、を更に含む、実施形態７２に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
実施形態７４．配列番号２４のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、実施形態７２又は７３に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
実施形態７５．配列番号２３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、実施形態７２～７４のいずれか１つに記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
実施形態７６．抗体又は抗原結合フラグメントが、ＢＣＭＡ ＢＣＭＷ３７鎖の残基１７～２６（ＬＬＨＡＣＩＰＣＱＬ（配列番号１６２））に特異的に結合する、実施形態７２～７５のいずれか１つに記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
実施形態７７．抗体又は抗原結合フラグメントが、約１×１０－１０～１×１０－７Ｍの親和性でＢＣＭＡに特異的に結合する、実施形態７２～７６のいずれか１つに記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
実施形態７８．抗体又は抗原結合フラグメントが、約２×１０－１０～９×１０－１０Ｍの親和性でＢＣＭＡに特異的に結合する、実施形態７７に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
実施形態７９．抗体又は抗原結合フラグメントが、ヒト抗体又は抗原結合フラグメントである、実施形態７２～７８のいずれか１つに記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
実施形態８０．抗体又は抗原結合フラグメントが、組換え体である、実施形態７２～７９のいずれか１つに記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
実施形態８１．抗原結合フラグメントが、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ２フラグメント、又は一本鎖抗体である、実施形態７２～８０のいずれか１つに記載の抗原結合フラグメント。
実施形態８２．抗体又はその抗原結合フラグメントが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４のアイソタイプである、実施形態７２～８１のいずれか１つに記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
実施形態８３．抗体又はその抗原結合フラグメントが、ＩｇＧ又はＩｇＧ４のアイソタイプである、実施形態７２～８２のいずれか１つに記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
実施形態８４．実施形態７２～８３のいずれか１つに記載の抗体又は抗原結合フラグメントと、医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
実施形態８５．医薬組成物が、第２の治療剤を更に含む、実施形態８４に記載の医薬組成物。
実施形態８６．第２の治療剤が、抗ＣＤ３８剤、免疫調節性イミド薬物（ＩＭｉＤ）、免疫チェックポイント阻害剤、免疫共刺激剤、ガンマセクレターゼ阻害剤、Ｔ細胞エンハンサー、又はそれらの任意の組み合わせを含む、実施形態８５に記載の医薬組成物。
実施形態８７．実施形態７２～８３のいずれか１つに記載の抗体又は抗原結合フラグメントを発現する細胞。
実施形態８８．細胞が、ハイブリドーマである、実施形態８７に記載の細胞。
実施形態８９．抗体が、組換えにより産生される、実施形態８７に記載の細胞。
実施形態９０．がんの治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、対象に、治療有効量の実施形態７２～８３のいずれか１つに記載の抗体若しくは抗原結合フラグメント、又は実施形態８４～８６のいずれか１つに記載の医薬組成物、を投与することを含む、方法。
実施形態９１．抗体若しくは抗原結合フラグメント、又は医薬組成物が、がんを治療するのに十分な時間投与される、実施形態９０に記載の方法。
実施形態９２．がん細胞の成長又は増殖を阻害するための方法であって、かかる細胞に、有効量の実施形態７２～８３のいずれか１つに記載の抗体若しくは抗原結合フラグメント、又は実施形態８４～８６のいずれか１つに記載の医薬組成物、を投与することを含み、かかる有効量が、かかるがん細胞の成長又は増殖を阻害するのに十分である、方法。
実施形態９３．かかるがん細胞が対象内にあり、抗体若しくは抗原結合フラグメント又は医薬組成物が、対象に投与される、実施形態９２に記載の方法。
実施形態９４．かかる投与が、エクスビボで実施される、実施形態９２に記載の方法。
実施形態９５．がんが、血液がんである、実施形態９０～９４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９６．血液がんが、ＢＣＭＡ発現Ｂ細胞がんである、実施形態９５に記載の方法。
実施形態９７．ＢＣＭＡ発現Ｂ細胞がんが、多発性骨髄腫である、実施形態９６に記載の方法。
実施形態９８．ＢＣＭＡ発現Ｂ細胞がんが、くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）である、実施形態９７に記載の方法。
実施形態９９．がんが、再発性、難治性、若しくは悪性のがん、又はそれらの任意の組み合わせである、実施形態９０～９８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１００．対象が、前処置を受けたことがある、実施形態９０～９１、９３、及び９５～９９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１０１．前処置が、プロテアソーム阻害剤、免疫調節薬、ＣＤ３８抗体、二重特異性剤、ＣＡＲ－Ｔ療法、又はそれらの任意の組み合わせを含む、実施形態１００に記載の方法。
実施形態１０２．第２の治療剤を投与することを更に含む、実施形態９０～１０１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１０３．第２の治療剤が、化学療法剤又は標的を設定した抗がん治療である、実施形態１０２に記載の方法。
実施形態１０４．化学療法剤が、シタラビン、アントラサイクリン、ヒスタミン二塩酸塩、又はインターロイキン２（ＩＬ－２）である、実施形態１０３に記載の方法。
実施形態１０５．第２の治療剤が、抗ＣＤ３８剤、免疫調節性イミド薬物（ＩＭｉＤ）、免疫チェックポイント阻害剤、免疫共刺激剤、ガンマセクレターゼ阻害剤、Ｔ細胞エンハンサー、又はそれらの任意の組み合わせである、実施形態１０４に記載の方法。
実施形態１０６．抗体若しくは抗原結合フラグメント、又は医薬組成物が、対象に静脈内、筋肉内、腹腔内、及び／又は皮下投与される、実施形態９０～９１、９３、及び９５～１０５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１０７．抗体若しくは抗原結合フラグメント、又は医薬組成物が、対象に皮下投与される、実施形態９０～９１、９３、及び９５～１０６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１０８．実施形態７２～８３のいずれか１つに記載の抗体又は抗原結合フラグメントを生成するための方法であって、実施形態８７～８９のいずれか１つに記載の細胞を培養することと、かかる抗体又は抗原結合フラグメントを単離することと、を含む、方法。
実施形態１０９．実施形態７２～８３いずれか１つに記載の抗体又は抗原結合フラグメントをコードする合成ポリヌクレオチド。
実施形態１１０．（ｉ）実施形態７２～８３のいずれか１つに記載の抗体若しくは抗原結合フラグメント及び／又は実施形態１０９に記載のポリヌクレオチドと、（ｉｉ）それらのためのパッケージングと、を含む、キット。
実施形態１１１．三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメントであって、
ａ）第１の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む第１の重鎖部分（ＨＣ１）、
ｂ）軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む軽鎖部分（ＬＣ）、及び
ｃ）第２のＶＨドメインを含む第２の重鎖部分（ＨＣ２）、を含み、
（ｉ）ＨＣ１ ＶＨ及びＬＣ ＶＬドメインが、第１の抗原に結合する第１の抗原結合部位を形成し、
（ｉｉ）ＨＣ２ ＶＨドメインが、第２の抗原に結合する第２の抗原結合部位を形成し、
（ｉｉｉ）ＨＣ１又はＨＣ２が、第３の抗原に結合する第３の抗原結合部位を形成する第３のＶＨドメインを更に含み、
（ｉｖ）ＨＣ１及びＨＣ２が、各々、任意選択で、ＣＨ２－ＣＨ３ドメインを含むフラグメント結晶化可能（Ｆｃ）ドメインを含み、
第１の抗原が、表面抗原分類３（ＣＤ３）であり、
（ｖ）第２の抗原がＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）であり、第３の抗原がＧタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）であり、あるいは
（ｖｉ）第２の抗原がＧタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）であり、第３の抗原がＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）である、三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメント。
実施形態１１２．ＨＣ２が、第３の抗原に結合する第３の抗原結合部位を形成する第３のＶＨドメインを含む、実施形態１１１に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１１３．ＨＣ２が、Ｎ末端からＣ末端に向かって、第２の抗原結合部位を形成する第２のＶＨドメイン、Ｆｃドメイン、第１のリンカー（Ｌ１）、及び第３の抗原結合部位を形成する第３のＶＨドメインを含む、実施形態１１２に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１１４．ＨＣ２が、ＧＰＲＣ５Ｄに結合する第２の抗原結合部位を形成する第２のＶＨドメインを含み、ＨＣ２が、ＢＣＭＡに結合する第３の抗原結合部位を形成する第３のＶＨドメインを更に含む、実施形態１１１～１１３のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１１５．ＨＣ１が、第３の抗原に結合する第３の抗原結合部位を形成する第３のＶＨドメインを含む、実施形態１１１に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１１６．ＨＣ１が、Ｎ末端からＣ末端に向かって、第１の抗原結合部位を形成する第１のＶＨ、ＣＨ１ドメイン、Ｆｃドメイン、第１のリンカー（Ｌ１）、及び第３の抗原結合部位を形成する第３のＶＨドメインを含む、実施形態１１５に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１１７．ＨＣ２が、ＢＣＭＡに結合する第２の抗原結合部位を形成する第２のＶＨドメインを含み、ＨＣ１が、ＧＰＲＣ５Ｄに結合する第３の抗原結合部位を形成する第３のＶＨドメインを更に含む、実施形態１１１、１１５、及び１１６のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１１８．第１の抗原結合部位を形成するＨＣ１ ＶＨ及びＬＣ ＶＬが、第１の抗原結合部位を含む抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含む、実施形態１１１～１１７のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１１９．ＨＣ２ ＶＨが、第２の抗原結合部位を含む一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を形成する、実施形態１１１～１１８のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１２０．第３のＶＨが、第３の抗原結合部位を含む一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を形成する、実施形態１１１～１１９のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１２１．ＨＣ１及びＨＣ２のＦｃドメインが、ヘテロ二量体化を促進する１つ又は２つ以上の異なる変異を含む、実施形態１１１～１２０のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１２２．ＨＣ１のＦｃドメインが、変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ付番）を含み、ＨＣ２のＦｃドメインが、変異Ｔ３６６Ｗ（ＥＵ付番）を含む、実施形態１２１に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１２３．ＨＣ２のＦｃドメインが、変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ付番）を含み、ＨＣ１のＦｃドメインが、変異Ｔ３６６Ｗ（ＥＵ付番）を含む、実施形態１２１に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１２４．ＨＣ１及び／又はＨＣ２のＦｃドメインが、Ｆｃγ受容体へのＦｃ結合を低減する１つ又は２つ以上の変異を更に含む、実施形態１１１～１２３のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１２５．Ｆｃγ受容体が、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩＡ、及び／又はＦｃγＲＩＩＩＢである、実施形態１２４に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１２６．ＨＣ１及び／又はＨＣ２のＦｃドメインが各々、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＤ２６５Ｓ（ＥＵ付番）から選択される１つ又は２つ以上の変異を含む、実施形態１２４又は１２５に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１２７．ＨＣ１及びＨＣ２のＦｃドメインが各々、変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＤ２６５Ｓ（ＥＵ付番）を含む、実施形態１２６に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１２８．ＨＣ１又はＨＣ２のＦｃドメインが、プロテインＡへのＦｃ結合を低減する１つ又は２つ以上の変異を更に含む、実施形態１１１～１２７のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１２９．ＨＣ１又はＨＣ２のＦｃドメインが、変異Ｈ４３５Ｒ及び／又はＹ４３６Ｆ（ＥＵ付番）を含む、実施形態１２８に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１３０．ＨＣ１のＦｃドメインが、変異Ｈ４３５Ｒ及びＹ４３６Ｆ（ＥＵ付番）を含む、実施形態１２９に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１３１．第１のリンカー（Ｌ１）が、配列番号２５、１２７～１５７、及び１６３のアミノ酸配列のいずれか１つを含む、実施形態１１３～１１４及び１１６～１３０のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１３２．第１のリンカー（Ｌ１）が、ＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳ（配列番号２５）又はＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（（Ｇ４Ｓ）４、配列番号１６３）のアミノ酸を含む、実施形態１３１のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１３３．ＣＤ３に結合する第１の抗原結合部位が、ＧＤＳＶＦＮＮＮＡＡＷＳ（配列番号４）のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＲＴＹＹＲＳＫＷＬＹＤ（配列番号５）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、及びＧＹＳＳＳＦＤＹ（配列番号６）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む、実施形態１１１～１３２のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１３４．ＣＤ３に結合する第１の抗原結合部位が、ＴＧＴＳＳＮＩＧＴＹＫＦＶＳ（配列番号１）のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＥＶＳＫＲＰＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及びＶＳＹＡＧＳＧＴＬＬ（配列番号３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、実施形態１１１～１３３のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１３５．ＣＤ３に結合する第１の抗原結合部位が、配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、実施形態１１１～１３４のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１３６．ＣＤ３に結合する第１の抗原結合部位が、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、実施形態１１１～１３５のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１３７．ＧＰＲＣ５Ｄに結合する第２又は第３の抗原結合部位が、ＧＦＳＬＴＮＩＲＭＳＶＳ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＨＩＦＳＮＤＥＫＳ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、及びＭＲＬＰＹＧＭＤＶ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む、実施形態１１１～１３６のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１３８．ＧＰＲＣ５Ｄに結合する第２又は第３の抗原結合部位が、ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＤＧＮＴＹＬＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＫＩＳＮＲＦＦ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及びＭＱＡＴＱＦＰＨＴ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、実施形態１１１～１３７のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１３９．ＧＰＲＣ５Ｄに結合する第２又は第３の抗原結合部位が、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、実施形態１１１～１３８のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１４０．ＧＰＲＣ５Ｄに結合する第２又は第３の抗原結合部位が、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、実施形態１１１～１３９のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１４１．ＢＣＭＡに結合する第２又は第３の抗原結合部位が、ＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、及びＤＥＧＹＳＳＧＨＹＹＧＭＤＶ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む、実施形態１１１～１４０のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１４２．ＢＣＭＡに結合する第２又は第３の抗原結合部位が、ＲＡＳＱＳＩＳＳＳＦＬＴ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及びＱＨＹＧＳＳＰＭＹＴ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、実施形態１１１～１４１のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１４３．ＢＣＭＡに結合する第２又は第３の抗原結合部位が、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、実施形態１１１～１４２のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１４４．ＢＣＭＡに結合する第２又は第３の抗原結合部位が、配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、実施形態１１１～１４３のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１４５．ｓｃＦｖが、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＨ、第２のリンカー（Ｌ２）、及びＶＬを含むか（ＶＨ－Ｌ２－ＶＬ）、又はＶＬ、Ｌ２、及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ２－ＶＨ）を含む、実施形態１１９～１４４のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１４６．ｓｃＦｖが、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＶＬ、Ｌ２、及びＶＨ（ＶＬ－Ｌ２－ＶＨ）を含む、実施形態１１９～１４５のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１４７．第２のリンカー（Ｌ２）が、配列番号２５、１２７～１５７、及び１６３のアミノ酸配列のいずれか１つを含む、実施形態１４５又は１４６に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１４８．Ｌ２が、ＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳ（配列番号２５）のアミノ酸配列を含む、実施形態１４５～１４７のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１４９．第１の抗原結合部位が、ＣＤ３ε鎖の残基２２～３５（ＱＤＧＮＥＥＭＧＧＩＴＱＴＰ（配列番号１６１））に特異的に結合する、実施形態１１１～１４８のいずれか１つに記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
実施形態１５０．第１の抗原結合部位が、約１×１０－８～１×１０－７Ｍの親和性でＣＤ３に特異的に結合する、実施形態１１１～１４９のいずれか１つに記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
実施形態１５１．第１の抗原結合部位が、約２×１０－８～４×１０－８Ｍの親和性でＣＤ３に特異的に結合する、実施形態１５０に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
実施形態１５２．第２又は第３の抗原結合部位が、ＢＣＭＡ ＢＣＭＷ３７鎖の残基１７～２６（ＬＬＨＡＣＩＰＣＱＬ（配列番号１６２））に特異的に結合する、実施形態１１１～１５１のいずれか１つに記載の抗原結合フラグメント。
実施形態１５３．第２又は第３の抗原結合部位が、約１×１０－１０～１×１０－７Ｍの親和性でＢＣＭＡに特異的に結合する、実施形態１５２に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
実施形態１５４．第２又は第３の抗原結合部位が、約２×１０－１０～９×１０－１０Ｍの親和性でＢＣＭＡに特異的に結合する、実施形態１５３に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
実施形態１５５．抗体又はその抗原結合フラグメントが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４のアイソタイプである、実施形態１１１～１５４のいずれか１つに記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
実施形態１５６．抗体又はその抗原結合フラグメントが、ＩｇＧ１アイソタイプである、実施形態１１１～１５５のいずれか１つに記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
実施形態１５７．ＨＣ１が、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、実施形態１１１に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１５８．ＬＣが、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、実施形態１１１又は１５７に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１５９．ＨＣ２が、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、実施形態１１１、１５７、又は１５８に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１６０．ＨＣ１が、配列番号２９のアミノ酸配列を含む、実施形態１１１に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１６１．ＬＣが、配列番号３０のアミノ酸配列を含む、実施形態１１１又は１６０に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
実施形態１６２．ＨＣ２が、配列番号３１のアミノ酸配列を含む、実施形態１１１、１６０、又は１６１に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
本発明はまた、以下の付番された条項によって定義することができる。
条項１．三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメントであって、
ａ）第１の重鎖（ＨＣ１）と、
ｂ）軽鎖（ＬＣ）と、
ｃ）第２の重鎖（ＨＣ２）と、を含み、
（ｉ）ＨＣ１及びＬＣが、第１の抗原に特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、
（ｉｉ）ＨＣ２が、第２の抗原に特異的に結合する第２の抗原結合部位を含み、
（ｉｉｉ）ＨＣ１又はＨＣ２が、第３の抗原に特異的に結合する第３の抗原結合部位を更に含み、
（ｉｖ）ＨＣ１及びＨＣ２が各々、ＣＨ２－ＣＨ３ドメインを含むフラグメント結晶化可能（Ｆｃ）ドメインを含み、
第１の抗原が、表面抗原分類３（ＣＤ３）であり、
（ｖ）第２の抗原が、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）であり、第３の抗原が、Ｇタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）であり、あるいは
（ｖｉ）第２の抗原が、Ｇタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）であり、第３の抗原が、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）である、三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメント。
条項２．ＨＣ２が、第３の抗原に特異的に結合する第３の抗原結合部位を含む、条項１に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項３．ＨＣ２が、Ｎ末端からＣ末端に向かって、第２の抗原結合部位、Ｆｃドメイン、リンカー、及び第３の抗原結合部位を含む、条項２に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項４．ＨＣ２が、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する第２の抗原結合部位を含み、ＨＣ２が、ＢＣＭＡに特異的に結合する第３の抗原結合部位を更に含む、条項１～３のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項５．ＨＣ１が、第３の抗原に特異的に結合する第３の抗原結合部位を含む、条項１に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項６．ＨＣ１が、Ｎ末端からＣ末端に向かって、第１の抗原結合部位に結合した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、ＣＨ１ドメイン、Ｆｃドメイン、リンカー、及び第３の抗原結合部位を含む、条項５に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項７．ＨＣ２が、ＢＣＭＡに特異的に結合する第２の抗原結合部位を含み、ＨＣ１が、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する第３の抗原結合部位を更に含む、条項１、５、及び６のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項８．第１の抗原結合部位が、抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を含む、条項１～７のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項９．第２の抗原結合部位が、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む、条項１～８のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項１０．第３の抗原結合部位が、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含む、条項１～９のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項１１．ＨＣ１及びＨＣ２のＦｃドメインが、ヘテロ二量体化を促進する１つ又は２つ以上の異なる変異を含む、条項１～１０のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項１２．ＨＣ１のＦｃドメインが、変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ付番）を含み、ＨＣ２のＦｃドメインが、変異Ｔ３６６Ｗ（ＥＵ付番）を含む、条項１１に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項１３．ＨＣ２のＦｃドメインが、変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ付番）を含み、ＨＣ１のＦｃドメインが、変異Ｔ３６６Ｗ（ＥＵ付番）を含む、条項１１に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項１４．ＨＣ１及び／又はＨＣ２のＦｃドメインが、Ｆｃγ受容体へのＦｃ結合を低減する１つ又は２つ以上の変異を更に含む、条項１～１３のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項１５．Ｆｃγ受容体が、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩＡ、及び／又はＦｃγＲＩＩＩＢである、条項１４に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項１６．ＨＣ１及び／又はＨＣ２のＦｃドメインが各々、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＤ２６５Ｓ（ＥＵ付番）から選択される１つ又は２つ以上の変異を含む、条項１４又は１５に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項１７．ＨＣ１及びＨＣ２のＦｃドメインが各々、変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＤ２６５Ｓ（ＥＵ付番）を含む、条項１６に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項１８．ＨＣ１又はＨＣ２のＦｃドメインが、プロテインＡへのＦｃ結合を低減する１つ又は２つ以上の変異を更に含む、条項１～１７のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項１９．ＨＣ１又はＨＣ２のＦｃドメインが、変異Ｈ４３５Ｒ及び／又はＹ４３６Ｆ（ＥＵ付番）を含む、条項１８に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項２０．ＨＣ１のＦｃドメインが、変異Ｈ４３５Ｒ及びＹ４３６Ｆ（ＥＵ付番）を含む、条項１９に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項２１．リンカーが、ＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳ（配列番号２５）又はＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（（Ｇ４Ｓ）４、配列番号１６３）のアミノ酸配列を含む、条項３及び５～１８のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項２２．ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合部位が、ＧＤＳＶＦＮＮＮＡＡＷＳ（配列番号４）のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＲＴＹＹＲＳＫＷＬＹＤ（配列番号５）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、及びＧＹＳＳＳＦＤＹ（配列番号６）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む、条項１～２１のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項２３．ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合部位が、ＴＧＴＳＳＮＩＧＴＹＫＦＶＳ（配列番号１）のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＥＶＳＫＲＰＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及びＶＳＹＡＧＳＧＴＬＬ（配列番号３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、条項１～２２のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項２４．ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合部位が、配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、条項１～２３のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項２５．ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合部位が、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、条項１～２４のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項２６．ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する第２又は第３の抗原結合部位が、ＧＦＳＬＴＮＩＲＭＳＶＳ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＨＩＦＳＮＤＥＫＳ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、及びＭＲＬＰＹＧＭＤＶ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む、条項１～２５のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項２７．ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する第２又は第３の抗原結合部位が、ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＤＧＮＴＹＬＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＫＩＳＮＲＦＦ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及びＭＱＡＴＱＦＰＨＴ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、条項１～２６のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項２８．ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する第２又は第３の抗原結合部位が、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、条項１～２７のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項２９．ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する第２又は第３の抗原結合部位が、配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、条項１～２８のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項３０．ＢＣＭＡに特異的に結合する第２又は第３の抗原結合部位が、ＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、及びＤＥＧＹＳＳＧＨＹＹＧＭＤＶ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む、条項１～２９のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項３１．ＢＣＭＡに特異的に結合する第２又は第３の抗原結合部位が、ＲＡＳＱＳＩＳＳＳＦＬＴ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及びＱＨＹＧＳＳＰＭＹＴ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、条項１～３０のいずれか１つに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項３２．ＢＣＭＡに特異的に結合する第２又は第３の抗原結合部位が、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、条項１～３１のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項３３．ＢＣＭＡに特異的に結合する第２又は第３の抗原結合部位が、配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、条項１～３２のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項３４．ＣＤ３ε鎖の残基２２～３５（ＱＤＧＮＥＥＭＧＧＩＴＱＴＰ（配列番号１６０））に特異的に結合する第１の抗原結合部位、条項１～３３のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項３５．約２．５×１０－８Ｍの親和性でＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合部位、条項３４に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項３６．約３．１×１０－８Ｍの親和性でＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合部位、条項３４に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項３７．第２又は第３の抗原結合部位が、ＢＣＭＡ ＢＣＭＷ３７鎖の残基１７～２６（ＬＬＨＡＣＩＰＣＱＬ（配列番号１６１））に特異的に結合する、条項１～３６のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項３８．第２又は第３の抗原結合部位が、約２．１×１０－１０Ｍの親和性でＢＣＭＡに特異的に結合する、条項３７に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項３９．第２又は第３の抗原結合部位が、約８．４×１０－１０Ｍの親和性でＢＣＭＡに特異的に結合する、条項３７に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項４０．抗体又はその抗原結合フラグメントが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４のアイソタイプである、条項１～３９のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項４１．ＩｇＧ１アイソタイプである、条項１～４０のいずれかに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項４２．ＨＣ１が、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、条項１に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項４３．ＬＣが、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、条項１又は４２に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項４４．ＨＣ２が、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、条項１、４２又は４３に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項４５．ＨＣ１が、配列番号２９のアミノ酸配列を含む、条項１に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項４６．ＬＣが、配列番号３０のアミノ酸配列を含む、条項１又は４５に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項４７．ＨＣ２が、配列番号３１のアミノ酸配列を含む、条項１、４５又は４６に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項４８．三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメントであって、
ａ）ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合部位、
ｂ）ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する第２の抗原結合部位、及び
ｃ）ＢＣＭＡに特異的に結合する第３の抗原結合部位、を含む、三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメント。
条項４９．ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合部位が、ＧＤＳＶＦＮＮＮＡＡＷＳ（配列番号４）のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＲＴＹＹＲＳＫＷＬＹＤ（配列番号５）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、及びＧＹＳＳＳＦＤＹ（配列番号６）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む、条項４８に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項５０．ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合部位が、ＴＧＴＳＳＮＩＧＴＹＫＦＶＳ（配列番号１）のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＥＶＳＫＲＰＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及びＶＳＹＡＧＳＧＴＬＬ（配列番号３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、条項４８又は４９に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項５１．ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合部位が、配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、条項４８～５０のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項５２．ＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合部位が、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、条項４８～５１のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項５３．ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する第２の抗原結合部位が、ＧＦＳＬＴＮＩＲＭＳＶＳ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＨＩＦＳＮＤＥＫＳ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、及びＭＲＬＰＹＧＭＤＶ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む、条項４８～５２のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項５４．ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する第２の抗原結合部位が、ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＤＧＮＴＹＬＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＫＩＳＮＲＦＦ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及びＭＱＡＴＱＦＰＨＴ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、条項４８～５３のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項５５．ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する第２の抗原結合部位が、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、条項４８～５４のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項５６．ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する第２の抗原結合部位が、配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、条項４８～５５のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項５７．ＢＣＭＡに特異的に結合する第３の抗原結合部位が、ＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、及びＤＥＧＹＳＳＧＨＹＹＧＭＤＶ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む、条項４８～５６のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項５８．ＢＣＭＡに特異的に結合する第３の抗原結合部位が、ＲＡＳＱＳＩＳＳＳＦＬＴ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含む軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及びＱＨＹＧＳＳＰＭＹＴ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、条項４８～５７のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項５９．ＢＣＭＡに特異的に結合する第３の抗原結合部位が、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、条項４８～５８のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項６０．ＢＣＭＡに特異的に結合する第３の抗原結合部位が、配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、条項４８～５９のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項６１．第１の抗原結合部位が、ＣＤ３ε鎖の残基２２～３５（ＱＤＧＮＥＥＭＧＧＩＴＱＴＰ（配列番号１６０））に特異的に結合する、条項４８～６０のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項６２．約２．５×１０－８Ｍの親和性でＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合部位、条項６１に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項６３．約３．１×１０－８Ｍの親和性でＣＤ３に特異的に結合する第１の抗原結合部位、条項６１に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項６４．第３の抗原結合部位が、ＢＣＭＡ ＢＣＭＷ３７鎖の残基１７～２６（ＬＬＨＡＣＩＰＣＱＬ（配列番号１６１））に特異的に結合する、条項４８～６３のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項６５．第３の抗原結合部位が、約２．１×１０－１０Ｍの親和性でＢＣＭＡに特異的に結合する、条項６４に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項６６．第３の抗原結合部位が、約８．４×１０－１０Ｍの親和性でＢＣＭＡに特異的に結合する、条項６４に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項６７．抗体又はその抗原結合フラグメントが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４のアイソタイプである、条項４８～６６のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項６８．ＩｇＧ１アイソタイプである、条項４８～６７のいずれかに記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
条項６９．三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメントであって、
ａ）第１の重鎖（ＨＣ１）と、
ｂ）軽鎖（ＬＣ）と、
ｃ）第２の重鎖（ＨＣ２）と、を含み、
ＨＣ１が、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、ＬＣが、配列番号２７のアミノ酸配列を含み、ＨＣ２が、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメント。
条項７０．三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメントであって、
ａ）第１の重鎖（ＨＣ１）と、
ｂ）軽鎖（ＬＣ）と、
ｃ）第２の重鎖（ＨＣ２）と、を含み、
ＨＣ１が、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、ＬＣが、配列番号３０のアミノ酸配列を含み、ＨＣ２が、配列番号３１のアミノ酸配列を含む、三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメント。
条項７１．条項１～７０のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメントと、医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
条項７２．条項１～７０のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメントを発現する細胞。
条項７３．細胞が、ハイブリドーマである、条項７２に記載の細胞。
条項７４．抗体が、組換えにより産生される、条項７２に記載の細胞。
条項７５．がんの治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、対象に、治療有効量の条項１～７０のいずれか一項に記載の三重特異的抗体若しくは三重特異的結合フラグメント、又は条項７１に記載の医薬組成物、を投与することを含む、方法。
条項７６．三重特異的抗体若しくは三重特異的結合フラグメント、又は医薬組成物が、がんを治療するのに十分な時間投与される、条項７５に記載の方法。
条項７７．がん細胞の成長又は増殖を阻害するための方法であって、かかる細胞に、有効量の条項１～７０のいずれか一項に記載の三重特異的抗体若しくは三重特異的結合フラグメント、又は条項７１に記載の医薬組成物、を投与することを含み、かかる有効量が、かかるがん細胞の成長又は増殖を阻害するのに十分である、方法。
条項７８．かかるがん細胞が対象内にあり、三重特異的抗体若しくは三重特異的結合フラグメント又は医薬組成物が対象に投与される、条項７７に記載の方法。
条項７９．かかる投与が、エクスビボで実施される、条項７７に記載の方法。
条項８０．ＢＣＭＡ及び／又はＧＰＲＣ５Ｄ発現がん細胞に対してＴ細胞を指向することを必要とする対象においてそれを行う方法であって、かかる対象に、治療有効量の条項１～７０のいずれか一項に記載の三重特異的抗体若しくは三重特異的結合フラグメント、又は条項７１に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
条項８１．かかる治療有効量が、かかるがん細胞に対するかかるＴ細胞応答を誘導するのに十分である、条項８０に記載の方法。
条項８２．がんが、血液がんである、条項７５～８１のいずれか一項に記載の方法。
条項８３．血液がんが、ＢＣＭＡ及び／又はＧＰＲＣ５Ｄ発現Ｂ細胞がんである、条項８２に記載の方法。
条項８４．ＢＣＭＡ及び／又はＧＰＲＣ５Ｄ発現Ｂ細胞がんが、多発性骨髄腫である、条項８３に記載の方法。
条項８５．第２の治療剤を投与することを更に含む、条項７５～８４のいずれか一項に記載の方法。
条項８６．第２の治療剤が、化学療法剤又は標的を設定した抗がん治療である、条項８５に記載の方法。
条項８７．化学療法剤が、シタラビン、アントラサイクリン、ヒスタミン二塩酸塩、又はインターロイキン２（ＩＬ－２）である、条項８６に記載の方法。
条項８８．条項１～７０のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメントを生成するための方法であって、条項７２～７４のいずれか一項に記載の細胞を培養することと、かかる三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメントを単離することとを含む、方法。
条項８９．条項１～７０のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメントの、ＨＣ１、ＬＣ、及び／又はＨＣ２をコードする、合成ポリヌクレオチド。
条項９０．（ｉ）条項１～７０のいずれか１つに記載の三重特異的抗体若しくは三重特異的結合フラグメント及び／又は条項８９に記載のポリヌクレオチドと、（ｉｉ）それらのためのパッケージングと、を含む、キット。
条項９１．ＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号２０）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹ（配列番号２１）のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２と、ＤＥＧＹＳＳＧＨＹＹＧＭＤＶ（配列番号２２）のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３と、を含む、ＢＣＭＡに結合する抗体又は抗原結合フラグメント。
条項９２．ＲＡＳＱＳＩＳＳＳＦＬＴ（配列番号１７）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号１８）のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２と、ＱＨＹＧＳＳＰＭＹＴ（配列番号１９）のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３と、を更に含む、条項９１に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
条項９３．配列番号２４のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、条項９１又は９２に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
条項９４．配列番号２３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、条項９１～９３のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
条項９５．抗体又は抗原結合フラグメントが、ＢＣＭＡ ＢＣＭＷ３７鎖の残基１７～２６（ＬＬＨＡＣＩＰＣＱＬ（配列番号１６１））に特異的に結合する、条項９１～９４のいずれか１つに記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
条項９６．抗体又は抗原結合フラグメントが、約２．１×１０－１０Ｍの親和性でＢＣＭＡに特異的に結合する、条項９５に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
条項９７．抗体又は抗原結合フラグメントが、約８．４×１０－１０Ｍの親和性でＢＣＭＡに特異的に結合する、条項９５に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
条項９８．抗体又は抗原結合フラグメントが、ヒト抗体又は抗原結合フラグメントである、条項９１～９７のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
条項９９．抗体又は抗原結合フラグメントが、組換え体である、条項９１～９８のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
条項１００．抗原結合フラグメントが、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ２フラグメント、又は一本鎖抗体である、条項９１～９９のいずれか一項に記載の抗原結合フラグメント。
条項１０１．抗体又はその抗原結合フラグメントが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４のアイソタイプである、条項９１～１００のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
条項１０２．ＩｇＧ１又はＩｇＧ４のアイソタイプである、条項９１～１０１のいずれかに記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
条項１０３．条項９１～１０２のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメントと、医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
条項１０４．条項９１～１０２のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメントを発現する組換え細胞。
条項１０５．細胞が、ハイブリドーマである、条項１０４に記載の細胞。
条項１０６．抗体が、組換えにより産生される、条項１０４に記載の細胞。
条項１０７．がんの治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、対象に、治療有効量の条項９１～１０２のいずれか一項に記載の三重特異的抗体若しくは三重特異的結合フラグメント、又は条項１０３に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む方法。
条項１０８．抗体若しくは抗原結合フラグメント、又は医薬組成物が、がんを治療するのに十分な時間投与される、条項１０７に記載の方法。
条項１０９．がん細胞の成長又は増殖を阻害するための方法であって、かかる細胞に、有効量の条項９１～１０２のいずれか一項に記載の三重特異的抗体若しくは三重特異的結合フラグメント、又は条項１０３に記載の医薬組成物、を投与することを含み、かかる有効量が、かかるがん細胞の成長又は増殖を阻害するのに十分である、方法。
条項１１０．かかるがん細胞が、対象内にあり、抗体若しくは抗原結合フラグメント又は医薬組成物が、対象に投与される、条項１０９に記載の方法。
条項１１１．かかる投与が、エクスビボで実施される、条項１０９に記載の方法。
条項１１２．がんが、血液がんである、条項１０７～１１１のいずれか一項に記載の方法。
条項１１３．血液がんが、ＢＣＭＡ発現Ｂ細胞がんである、条項１１２に記載の方法。
条項１１４．ＢＣＭＡ発現Ｂ細胞がんが、多発性骨髄腫である、条項１１３に記載の方法。
条項１１５．第２の治療剤を投与することを更に含む、条項１０７～１１４のいずれか一項に記載の方法。
条項１１６．第２の治療剤が、化学療法剤又は標的を設定した抗がん治療である、条項１１５に記載の方法。
条項１１７．化学療法剤が、シタラビン、アントラサイクリン、ヒスタミン二塩酸塩、又はインターロイキン２（ＩＬ－２）である、条項１１６に記載の方法。
条項１１８．条項９１～１０２のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメントを生成するための方法であって、条項１０４～１０６のいずれか一項に記載の細胞を培養することと、かかる抗体又は抗原結合フラグメントを単離することとを含む、方法。
条項１１９．条項９１～１０２のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメントをコードする合成ポリヌクレオチド。
条項１２０．（ｉ）条項９１～１０２のいずれか１つに記載の抗体若しくは抗原結合フラグメント及び／又は条項１１９に記載のポリヌクレオチドと、（ｉｉ）それらのためのパッケージングと、を含む、キット。
下記実施例は、先の開示を補い、本明細書に記載される主題のより良好な理解を提供するために提供される。これらの実施例は、記載される主題を限定すると解釈されるべきでない。本明細書に記載される実施例及び実施形態は例示のみを目的とするものであり、それらを考慮した種々の改変又は変更は、当業者に明らかであり、また、本発明の真の範囲内に含まれ、かつ本発明の真の範囲から逸脱することなくなされ得ることが理解される。
実施例１：標的の検証
ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３三重特異的抗体の開発の科学的根拠は、ＭＭ患者の骨髄及び他の臓器から悪性クローン形質細胞を効率的に根絶することである。これは、エフェクターＴ細胞上に発現されるＴＣＲ共受容体ＣＤ３εと、Ｂ細胞系統細胞、主に形質芽細胞及び成熟形質細胞上に発現される標的タンパク質ＧＰＲＣ５Ｄ及びＢＣＭＡとに同時に結合することができる三重特異的抗体の投与を介して達成される（８）。Ｔ細胞及びがん細胞を近接させることによって、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３三重特異的抗体は、Ｔ細胞の活性化を促進し、その後、ＣＴＬの分泌小胞に貯蔵された分泌パーフォリン及び様々なグランザイムによって媒介されるがん細胞溶解を伴う（図１Ｂ）。
これらのアプローチの機構的利点は、活性化のために抗原提示細胞の表面上の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）クラスＩ分子に対するＴＣＲ特異性又は依存に関係なく、形質細胞に近接してＣＤ３＋Ｔ細胞を引き寄せるそれらの能力を含み、ＭＨＣクラス分子の下方制御を介してＴ細胞ベースの治療に対する既知のＭｏＲを回避する。
標的の選抜／検証
Ｔ細胞媒介治療的アプローチの成功の可能性は、腫瘍細胞の表面上に特異的に見出される抗原の存在に依存する。最も一般的な形質細胞マーカーのうち、ＢＣＭＡ及びＧＰＲＣ５Ｄは、選択的発現パターンを示し、概念の臨床的証拠（clinical proof of concept、ＰｏＣ）が両方の標的について確立されている。
ＢＣＭＡ（ＣＤ２６９としても知られる；遺伝子名ＴＮＦＲＳＦ１７）は、Ｂ細胞系統細胞上で排他的に発現され、Ｂ細胞成熟において重要な役割を果たし、形質細胞分化中に選択的に誘導される２０ ｋＤａのＩ型膜タンパク質である（９、１０）。ＢＣＭＡは、２つのリガンド：ＡＰＲＩＬ（ＣＤ２５６）及びＢＡＦＦ（ＣＤ２５７；１１）に結合する。ＢＣＭＡ受容体は、５４アミノ酸の細胞外ドメインを有する１８４アミノ酸のタンパク質である。細胞表面上での発現に加えて、ＢＣＭＡは、膜貫通ドメインにおいてガンマセクレターゼ活性によって切断され、約６ ｋＤａの可溶性ＢＣＭＡタンパク質フラグメントを生成する（１２）。高レベルの可溶性ＢＣＭＡが、ＭＭ患者血清サンプルにおいて測定され（１３）、形質細胞数と相関していた（１４）。ガンマセクレターゼの阻害は、ヒト初代Ｂ細胞（１２）並びにＭＭ細胞株及び骨髄単核細胞（１３）におけるＢＣＭＡ表面タンパク質発現の有意な増加をもたらす。ＢＣＭＡは、いくつかの承認された治療薬を用いて、ＭＭにおける有効な標的として確立されている（１５～１７）。
ＧＰＲＣ５Ｄは、配列相同性スコアに基づいてＣ型Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）として分類される７回膜貫通型受容体タンパク質である。ＧＰＲＣ５Ｄは、そのリガンド及びシグナル伝達機構がまだ同定されていないオーファン受容体である。ＧＰＲＣ５Ｄ受容体は、他のファミリーメンバーとは異なり、短い２７アミノ酸のＮ末端を有する典型的な７回膜貫通構造を有する３５４アミノ酸のタンパク質である（１８）。ＧＰＲＣ５Ｄ ｍＲＮＡは、形質細胞表現型を有する細胞において主に発現され、ＭＭを有する対象由来の全ての悪性形質細胞においても発現される（１９～２３）。ＭＭを有する対象におけるＧＰＲＣ５Ｄ発現のレベルは、形質細胞負荷及びＲｂ－１欠失などの遺伝的異常とよく相関していた（１９）。
標的の発現
ＢＣＭＡ及びＧＰＲＣ５Ｄ ｍＲＮＡ及びタンパク質発現は、限定された細胞型に限定される。ＢＣＭＡは成熟Ｂ細胞及び形質細胞上で発現されるが、ＧＰＲＣ５Ｄ発現は更に、免疫細胞上の形質細胞表現型のみに限定される。免疫細胞発現に加えて、ＧＰＲＣ５Ｄ ｍＲＮＡは、硬い角質化組織において発現される。骨髄腫患者由来の骨髄ＣＤ１３８＋細胞上のＧＰＲＣ５Ｄ ｍＲＮＡレベルは、正常健常対象ＣＤ１３８＋細胞と比較して上昇しており、ＢＣＭＡの高ｍＲＮＡレベルは、形質細胞を含む成熟Ｂ細胞に主に限定されていた（１０、１３、１９、２１～２６）。正常組織におけるＢＣＭＡ（１３、２５）及びＧＰＲＣ５Ｄ（１９、２１、２２）タンパク質発現は、免疫組織化学（ＩＨＣ）染色によって主に形質細胞において見出された。更に、ＧＰＲＣ５Ｄ発現は、毛包などの硬い角質化組織においても検出された（２７）。ＭＭ患者の骨髄単核細胞は、ＢＣＭＡ及びＧＰＲＣ５Ｄ発現に関してクローン不均一性を示した（２１、２２）。詳細な標的発現プロファイルを、実施例２に記載する。
重要なことに、ＭＭ起源のＣＤ１３８＋骨髄細胞上でのＢＣＭＡ及びＧＰＲＣ５Ｄの選択的発現、並びにオン標的／オフ腫瘍毒性についてのそれらの低いリスクは、それらがＴ細胞媒介性治療薬の可能性のある標的であることを示す（１０、１３、２０～２２）。
実施例２：ＢＧＣＢ４６３三重特異的抗体の分子設計、配列、及び構造
ＢＧＣＢ４６３は、Ｔリンパ球（Ｔ細胞）上の表面抗原分類３受容体複合体（ＣＤ３ε）のイプシロンサブユニット、並びに腫瘍細胞上のＧＰＲＣ５Ｄ（Ｇタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤ）及びＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原、ＴＮＦＲＳＦ１７）に同時に又は個別に結合することができる免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｇ１三重特異的抗体である。抗体は、定常領域（Ｆｃ）にＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＤ２６５Ｓ（ＥＵ付番による）の変異を有して、Ｆｃ受容体との相互作用を無効にし、ヘテロ二量体化は、ノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂｓ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅｓ）プラットフォーム変異を使用して増強されている。抗ＣＤ３ε「ホール」鎖はまた、「ＲＦ」変異（Ｈ４３５Ｒ、Ｙ４３６Ｆ；ＥＵ付番による）を含み、これにより、単量体及びホモ二量体化されたホール鎖のプロテインＡ結合を破壊する。「ホール、ＲＦ」鎖上に抗ＣＤ３εＦａｂ領域を含み、「ノブ」鎖上に抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ ｖ領域を含む。三重特異的抗体は、Ｔ細胞再指向のための二重腫瘍標的化ＧＰＲＣ５Ｄ並びにＢＣＭＡ及びＣＤ３の治療可能性を評価するために開発された。ＢＧＣＢ４６３の図を図１Ａに示す。
三重特異的ＢＧＣＢ４６３抗体は、抗ＣＤ３重鎖（ＨＣ）Ａ及び抗ＧＰＲＣ５Ｄ（抗ＢＣＭＡ重鎖Ｂ）を有する軽鎖（ＬＣ）の同時発現によって生成させた。組換えＣＤ３εタンパク質を有するトランスジェニックヒト化マウス［ＯｍｎｉＲａｔ（ＯＭＴ（商標））］を免疫することによって、抗ＣＤ３可変領域を発見した。ＢＧＣＢ４６３に特徴付けられる抗ＧＰＲＣ５Ｄ可変領域（ＶＲ００００３８７６１）は、ｍＡｂ ＧＣ５Ｂ６８０に由来し、トランスジェニックヒト化マウス［Ａｂｌｅｘｉｓ］をＧＰＲＣ５ＤをコードするＤＮＡで免疫することによって発見した。親ｖ領域（ＶＲ００００２９８３２）は、Ｎ結合型グリコシル化のリスクを提示し、ＩＧＨＶ２－２６＊０１生殖系列からの変異を表す「ＮＳＳ」モチーフをＨＣフレームワーク３領域中に含有した。この部位を生殖系列配列「ＳＴＳ」に変異させて戻し、Ｎ結合型グリコシル化のリスクを排除し、この変化により最終的な可変領域ＶＲ００００３８７６１が得られた。ＢＧＣＢ４６３に特徴付けられる抗ＢＣＭＡ可変領域（ＶＲ０００００３２６０）は、組換えＢＣＭＡタンパクでトランスジェニックヒト化マウス［Ａｂｌｅｘｉｓ］を免疫することによって発見されたｍＡｂ ＢＣＭＢ５１９に由来する。このｖ領域には更なる修飾は行わなかった。抗ＧＰＲＣ５Ｄ及び抗ＢＣＭＡ ｖ領域の両方を、最終的な分子において一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）としてフォーマットした。
ＢＧＣＢ４６３のｃＤＮＡ配列から推定し、ペプチドマッピング及び質量分析によって確認したＢＧＣＢ４６３重鎖及び軽鎖のアミノ酸の配列を以下に示す（表５）。各鎖における、ＡＢＭ付番に従って定義される３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を、太字及び下線で示す。ＢＧＣＢ４６３重鎖１の１位のＧｌｎ、ＢＧＣＢ４６３軽鎖の１位のＧｌｎ、及びＢＧＣＢ４６３重鎖２の１位のＡｓｐは、成熟鎖のＮ末端を構成する。ＢＧＣＢ４６３ ＩｇＧ１ ＡＡＳを含む両方の重鎖は、以下の点変異を有する：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＤ２６５Ｓ。ＢＧＣＢ４６３由来の重鎖１は、「ホール」変異：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＲＦ変異：Ｈ４３５Ｒ、Ｙ４３６Ｆを特徴とし、一方、重鎖２は、「ノブ」変異：Ｔ３６６Ｗを特徴とする。ノブ・イントゥ・ホール変異は、Ｆｃのヘテロ二量体化を促進する。「ＲＦ」変異は、プロテインＡへの結合を破壊する。ＦｃγＲ受容体サイレンシング（ＡＡＳ）のための変異及びノブ・イントゥ・ホール変異を、以下の配列において下線で示す。
Figure 2024507180000008
Figure 2024507180000009
実施例３：ＢＧＣＢ４６３三重特異的抗体の免疫原性リスクアセスメント
ＥｐｉＶａｘ Ｅｐｉｍａｔｒｉｘインシリコ免疫原性予測プログラムからのＴ調節（Ｔｒｅｇ）調整スコアを使用して、可能性のある免疫原性について三重特異的抗体配列を分析した（表６）。ＥｐｉＶａｘプログラムは、各「スーパータイプ」内の最も一般的なＨＬＡ分子への結合能力を計算する。この報告は、各ハプロタイプを個々に試験する必要なく、世界中のヒト集団の＞９０％を代表する結果を提供する。ＥｐｉＶａｘスコアは、所与のタンパク質配列内に含まれる全ての予測されたＴ細胞エピトープのＥｐｉＭａｔｒｉｘスコアを集計し、予想されるＴ細胞エピトープ含量及びタンパク質長について調整することによって計算される。Ｅｐｉｖａｘスコアの解釈は以下のとおりである：－２０未満のＥｐｉＶａｘスコアは「理想的」であり、－２０～＋２０のＥｐｉＶａｘスコアは「許容可能」であり、＋２０超のＥｐｉＶａｘスコアは「許容不可」である。
Figure 2024507180000010
実施例４：ＢＧＣＢ４６３三重特異的抗体の結合の特徴付け
第１部．材料及び方法
細胞株
ＧＰＲＣ５Ｄ及びＢＣＭＡ結合の特徴付けについて評価した細胞株は、多発性骨髄腫由来のＨ９２９及びＭＭ．１Ｒとした。更に、ＣＲＩＳＰＲノックアウト（Ｈ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ－ＫＯモノクローナル株Ｄ１１）、Ｈ９２９－ＢＣＭＡ－ＫＯ及びＨ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ／ＢＣＭＡ－ＫＯのＨ９２９シリーズを生成させた。同様のＭＭ．１Ｒノックアウトも、ＧＰＲＣ５Ｄ及びＢＣＭＡ結合を評価するために開発した。全ての株は、（ＡＢＳ）内から供給され、ＲＰＭＩ １６４０培地、ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）サプリメント、ＨＥＰＥＳ、熱不活性化（ＨＩ）ＦＢＳ、非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ）、ピルビン酸ナトリウム、及び２－ＭＥから構成された完全ＲＰＭＩ培地（全てＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で培養した。
ヒトＧＰＲＣ５Ｄ（モノクローンＨ１Ｂ５）、及びヒトＢＣＭＡ（モノクローンＨ１／Ｂ５）を過剰発現するＫ５６２モノクローナル細胞株を利用した。更に、カニクイザルＧＰＲＣ５Ｄ（モノクローンＭ１Ｃ１１）及びカニクイザルＢＣＭＡを発現するＫ５６２－Ｆｌｕｃ－ＧＦＰ細胞を使用した。両方の細胞株を、ＩＭＤＭ、１０％ＦＢＳ、２ｍＭグルタミン、及び２ｍｇ／ｍＬ Ｇ４１８（全てＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）中で維持した。
ＦＡＣＳによる細胞結合
ＢＧＣＢ４６３．００３及びＢＧＣＢ４６３．００４、又はＢ２３Ｂ２５１（ＩｇＧ１－ＡＡＳのアイソタイプ対照）を非標識として使用するか、又はＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７に直接結合させた。ＢＧＣＢ４６３．００３は一過性トランスフェクションによって発現させたが、ＢＧＣＢ４６３．００４は安定なトランスフェクションプールから発現させた。
ヒト及びカニクイザル汎Ｔ細胞へのＢＧＣＢ４６３の結合の場合、３人のヒトドナー（Ｈｅｍａｃａｒｅ）を選択し、迅速に解凍し、再懸濁し、９６ウェルプレートに１×１０６細胞／ｍＬで分注した。次いで、細胞を洗浄し、必要に応じてＦｃブロックし（Ｉｎｎｏｖｅｘ）、生存性色素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で染色した。ＢＧＣＢ４６３及びその対応するアイソタイプ（Ｂ２３Ｂ２５１）を完全培地中で２μＭの初期濃度に希釈し、用量反応曲線のために２連で１：３の連続希釈を行った。細胞を分子とともに４℃又は３７℃で１時間インキュベートした。必要であれば、９０％ヒト血清（Ｓｉｇｍａ）とのインキュベーションも上記のように行った。
可溶性ＢＣＭＡ（ｓＢＣＭＡ）からの可能性のある干渉を決定するために、既知の濃度を有する患者血清をＢＤＳ（１プール）から得て、ＢＧＣＢ４６３及びＨ９２９細胞とともにインキュベートした。インキュベーションのために、患者血清を正常血清で希釈して、９０％総ヒト血清を維持しながらｓＢＣＭＡをアッセイした。
ＦｏｒｅＣｙｔソフトウェアを利用して、シングレット－ライブ集団をゲーティングし、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ ６４７チャネルの蛍光強度中央値（ＭＦＩ）を各サンプルについて計算した。生データをＥｘｃｅｌ（Ｏｆｆｉｃｅ ３６５、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ）にエクスポートし、ここで重複を平均し、Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ｖ．８．０、Ｇｒａｐｈｐａｄ）で更に分析した。必要に応じて、アイソタイプバックグラウンドを差し引いた。ここで、用量反応曲線グラフ及びＥＣ５０を、各ドナーの各分子について計算した。最後に、種についての平均ＥＣ５０を得るために、それぞれの種の３人全てのドナーの平均を計算した。
経時的結合
ＧＰＲＣ５Ｄ及びＢＣＭＡの経時的動的結合について評価した細胞株は、上記のＨ９２９及びＭＭ．１Ｒ ＫＯとした。上記細胞株へのＢＧＣＢ４６３結合のＦＡＣＳ分析を、３７℃で１時間の結合の用量反応曲線に基づいて、濃度の少なくとも１つがＥＣ５０に近くなるように、様々な最終濃度で行った。全て１時間、３時間、５時間、及び２４時間のインキュベーションで、５倍の差を有する３つの最終濃度を選択した。ＢＧＣＢ４６３結合を、３７℃で、完全ＲＰＭＩ中で評価した。
ＢＧＣＢ４６３又は付随するＢ２３Ｂ２５１アイソタイプ対照を最初に完全ＲＰＭＩ中で２×濃度に希釈し、３７℃でインキュベートした。次に、細胞を採取し、Ｖｉ－Ｃｅｌｌ ＸＲ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して計数し、次いでマスターディープウェルプレートに添加して、時点当たり約１Ｅ５細胞を得た。各時点で、細胞を取り出し、冷ＦＡＣＳ緩衝液（０．２％ＢＳＡ（ＢＤ）＋２ｍＭ ＥＤＴＡ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を含有する染色緩衝液）を含有する丸底９６ウェルプレートに移した。次に、プレートを遠心分離（１２００ＲＰＭ、５分）により３～４回洗浄し、続いて緩衝液を吸引した。ＦＡＣＳ緩衝液で更に２回洗浄した後、細胞を氷上でＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７ヤギ抗ヒトＩｇＧ１（Ｈ＋Ｌ）（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ）で３０分間染色した。インキュベーション後、細胞を冷ＦＡＣＳ緩衝液で更に３回洗浄し、次いで、Ｓｙｔｏｘ Ｇｒｅｅｎを含有するＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁して、全ての死細胞を標識した（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）。次いで、染色後３時間以内に、プレートをＩｎｔｅｌｌｉｃｙｔ ｉＱｕｅ Ｓｃｒｅｅｎｅｒ Ｐｌｕｓ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）にかけた。
Ｉｎｃｕｃｙｔｅ生細胞イメージングを用いたＴ細胞活性化及び死滅アッセイ
Ｔ細胞活性化及び腫瘍細胞の死滅能力に対する試験分子の効果を決定するために、Ｉｎｃｕｃｙｔｅライブイメージングシステム（Ｓａｒｔｏｒｉｏｕｓ）を利用した。社内で生成されたＨ９２９－Ｆｌｕｃ－ＧＦＰ細胞株を、ヒトドナー汎Ｔ細胞（Ｈｅｍａｃａｒｅ）の標的細胞として機能させた。アッセイを、いくつかの実験にわたって１：１、３：１、及び５：１のＴ細胞対標的比で９６ウェルプレート中に設定した。試験分子（ＢＧＣＢ４６３及びＢ２３Ｂ２５１）を４０ｎＭ又は１０ｎＭの開始濃度で添加し、完全培地中で１：４に連続希釈した。全ての分子を少なくとも二連で試験した。Ｔ細胞活性化状態の検出を、抗ヒトＣＤ２５－Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）でモニターした。プレート中の細胞を温度に対して正規化し、次いで、３７℃インキュベーター内に含まれるＩｎｃｕｃｙｔｅ（Ｍｏｄｅｌ Ｓ３）生細胞イメージングシステムに入れた。フェーズチャネル、緑色チャネル、及び赤色チャネルにおけるウェル当たり４つの画像を、およそ５日間にわたって３時間ごとに取り込んだ。サンプル画像を使用して、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ分析ソフトウェア（Ｓａｒｔｏｒｉｏｕｓ、ｖ．２０１９Ｂ Ｒｅｖ２）において分析定義を作成して、緑色（標的細胞）チャネルにおける物体のカウント及び赤色（活性化Ｔ細胞）チャネルのカウント又は総積分強度を生成させた。
Ｉｎｃｕｃｙｔｅソフトウェア分析から生成された緑色チャネル（標的細胞）からの生カウントを使用して、各濃度及び時点での標的の細胞溶解パーセントを、Ｅｘｃｅｌ（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ、Ｏｆｆｉｃｅ ３６５）にエクスポートされた生データに対して以下の式：１００－（ＧＰＲＣ５Ｄ試験濃度／未処理平均）×１００）を使用して、対応するプレート上の全ての未処理ウェルの平均に対して計算した。これを自動化するために、Ｄａｔａ Ｓｃｉｅｎｃｅｓによって開発されたＳｈｉｎｙ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎを使用して生データを変換及び転送して、データを迅速に計算し、データのグラフ表示が提示されるＰｒｉｓｍソフトウェアにデータを転送した。Ｐｒｉｓｍソフトウェア（Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、ｖ．８．０．０）に移した後、データをグラフ化し、平均の標準誤差並びに時間曲線にわたる細胞溶解及びＴ細胞活性化を計算した。Ｔ細胞活性化のために、赤色チャネル（ＣＤ２５－ＡＦ６４７）レプリケートからの生カウント又は総積分強度を使用し、Ｐｒｉｓｍソフトウェアで更にグラフ化して、用量反応及び活性化グラフを生成させた。
第２部．結果
Ｔ細胞及び細胞株の用量応答性結合
最初に、三重特異的分子のＧＰＲＣ５Ｄ及びＢＣＭＡ結合アームに対するＦＡＣＳベースの結合を、３７℃で１時間の４パラメータフィットを使用して、用量反応曲線から有効濃度（ＥＣ）範囲を測定することによって決定した。これは、細胞のＨ９２９シリーズ（ＷＴ、ＧＰＲＣ５Ｄ－ＫＯ、ＢＣＭＡ－ＫＯ、及びＧＰＲＣ５Ｄ／ＢＣＭＡ ＫＯ）、並びに類似のＭＭ．１Ｒシリーズを使用して評価した。細胞ベースのＥＣ５０は、ＷＴ Ｈ９２９についておよそ１３ｎＭであり（図２Ａ～２Ｄ、表７）、ＷＴ ＭＭ．１Ｒについて２．４ｎＭである（図３Ａ～３Ｄ、表８）。標的結合アームの一価結合を試験するＧＰＲＣ５Ｄ－ＫＯ株及びＢＣＭＡ－ＫＯ株において、ＥＣ５０及びＢｍａｘの両方が減少するため、明らかな親和力の影響が観察される（表７）。次に、３人のランダムドナー由来の精製汎Ｔ細胞を使用して、ＣＤ３結合Ｆａｂアームについて、細胞ベースのＥＣ５０を決定した。図４Ａ～４Ｃに示されるように、ＣＤ３Ｂ３７６（ＢＧＣＢ４６３）アームについての細胞ベースのＥＣ５０は、およそ３２９ｎＭであった（表９）。次に、用量応答性結合を４℃で評価して、あらゆる可能性のある生物学的効果を除去した。図５Ａ～５Ｃに示すように、結合は、３７℃と比較して４℃でより強く（５０～１００ｎＭ）、これは内在化を示し得る。更に、ＢＧＣＢ４６３の２つの発現ロット（一過性トランスフェクションからのＢＧＣＢ４６３．００３及び安定なトランスフェクションプールからのＢＧＣＢ４６３．００４）を、Ｈ９２９、ＭＭ．１Ｒ、及び汎Ｔ細胞への結合と直接比較したところ、差異は認められなかった（図６Ａ～６Ｃ）。
Figure 2024507180000011
Figure 2024507180000012
Figure 2024507180000013
経時的結合
次に、Ｈ９２９及びＭＭ．１Ｒシリーズの細胞に対する経時的動態ＦＡＣＳ結合を評価することによって、ＢＧＣＢ４６３の表面安定度を決定した。図７Ａ～７Ｄに示されるように、結合動態は、２４時間にわたってＨ９２９細胞上で安定である。更に、三重特異的分子の二価結合は、単一ＫＯにおいて評価された一価結合アームと比較してより強いシグナルを有し、これは、上記のように、可能性のある親和力効果と一致する。これらの結果は、ＭＭ．１Ｒシリーズに反映される（図８Ａ～８Ｄ）。
種／オルソログの交差反応性
カニクイザルに対する交差反応性も、３７℃で１時間のＦＡＣＳベースの細胞結合を使用して、両方の標的結合ｓｃＦｖアームについてプロファイリングした。この目的のために、ヒト及びカニクイザルＧＰＲＣ５Ｄ又はＢＣＭＡを安定に発現するＫ５６２細胞を利用した。図９Ａ～９Ｅに示すように、ＧＣ５Ｂ６８０ ｓｃＦｖアームについての細胞ベースのＥＣ５０は、ヒトＧＰＲＣ５Ｄについては約３０ｎＭであり、カニクイザルＧＰＲＣ５Ｄについては約４００ｎＭで約１０倍弱い。対照的に、ＢＣＭＢ５１９ ｓｃＦｖアームの細胞ベースのＥＣ５０は、ヒトＢＣＭＡについて約１４５ｎＭであるが、カニクイザルＢＣＭＡへの結合は２μＭまで検出可能ではなかった。
カニクイザル交差反応性を更に決定するために、結合に使用したＫ５６２細胞をヒト汎Ｔ細胞との細胞傷害性にも利用した。図１０Ａ及び１０Ｂに示されるように、ヒトＧＰＲＣ５Ｄと比較してカニクイザルＧＰＲＣ５Ｄに対するより弱い結合は、カニクイザルＧＰＲＣ５Ｄを発現するＫ５６２によるより弱い細胞傷害性及び対応するより低いＴ細胞活性化と相関する。同様のパターンがヒト及びカニクイザルＢＣＭＡで観察されるが、カニクイザルＢＣＭＡに対するＴ細胞応答は本質的に存在しない。
９０％ヒト血清中での結合
インビボでの結合をよりよく理解するために、結合を、９０％ヒト血清の存在下、３７℃で１時間評価した。ＧＰＲＣ５Ｄ及びＢＣＭＡ結合ｓｃＦｖアームをＨ９２９細胞で試験し（図１１）、一方、ＣＤ３結合Ｆａｂをヒト汎Ｔ細胞で試験した（図１２）。両方の細胞種において、ＢＧＣＢ４６３結合は血清の存在によって影響を受けない。
経時的細胞傷害性
インビトロ死滅動態を評価するために、画像ベースのプラットフォームであるＩｎｃｕｃｙｔｅを利用して、動態死滅データを取得した。標的細胞死滅及びＴ細胞活性化を経時的に追跡することにより、標準的なＦＡＣＳベースのエンドポイントアッセイと比較して、細胞傷害活性のより詳細で定性的な読み出しが得られる。図１３Ａ及び１３Ｂに示されるように、ＢＧＣＢ４６３は、３：１のＥ：Ｔ比で試験された最低濃度（１ ｐＭ）を除いて、全ての濃度で約７２時間で顕著な最大死滅に達した。これらのデータを拡張するために、５：１のＥ：Ｔ及び１：１のＥ：Ｔ比も試験した（図１４Ａ～１４Ｆ）。５：１のＥ：Ｔでは、試験した全ての濃度は４８～７２時間で最大死滅に達し、最大死滅までの時間は濃度と逆相関した。１：１のＥ：Ｔでは、同様に全ての濃度が最大死滅を得るが、より後の時点であり、濃度依存性は同じである。
患者血清を使用するｓＢＣＭＡ結合干渉
可溶性ＢＣＭＡ（ｓＢＣＭＡ）との可能性のある干渉の評価は、モデリング及びＭＡＢＥＬ用量予測を支援するために必要である。患者血清を可溶性ＢＣＭＡの生理学的供給源として選択し、正常血清中での希釈によってアッセイした。図１５Ａ～１５Ｄに示すように、最高レベルの６１３ｎｇ／ｍＬであっても、Ｈ９２９細胞へのＢＧＣＢ４６３の結合に影響を与えない。これは、様々なレベルのｓＢＣＭＡを有する全ての患者血清に当てはまる。
第３部．考察及び結論
所与のパネルについての経時的結合の目的は、この方法が内在化対表面染色を識別することができないということに注意を払って、分子が所与の時間にわたって細胞の表面上で安定であるかどうかを決定することである。ＢＧＣＢ４６３は、細胞のＨ９２９及びＭＭ．１Ｒ ＫＯシリーズに対して試験した全ての濃度で安定な又は増加するシグナルを維持する。したがって、ＢＧＣＢ４６３は、血球標的の表面上に安定して提示される。
カニクイザルＢＣＭＡ及びＧＰＲＣ５Ｄに対する交差反応性もＢＧＣＢ４６３について測定した。ＧＰＲＣ５Ｄ結合は、ヒトと比較してカニクイザルで約１０倍弱く、これは細胞傷害性に対応していた。一方、ＢＣＭＡ結合は、２μＭまで交差反応性ではなく、これは、機能的活性がないという観察と相関した。
経時的細胞傷害性を利用して、死滅動態を評価し、ＢＧＣＢ４６３がどのようにＴ細胞性再指向を媒介するかのより詳細な見解を得た。分子及びＥの両方の濃度に依存するタイミングで最大細胞溶解に近づく死滅が観察された。
ＢＣＭＡは可溶性形態で存在し、患者において上昇するので、様々なレベルのｓＢＣＭＡを有する患者血清の存在下で結合を評価することが重要であった。データは、ｓＢＣＭＡがＨ９２９細胞上の表面ＢＣＭＡへのＢＧＣＢ４６３結合を妨害しないことを実証した。
実施例５：ＢＧＣＢ４６３三重特異的抗体の生物物理学的評価
結合、タンパク特性決定、２週間高濃度安定、並びに化学的及び物理的安定を含む、ＢＧＣＢ４６３についての一連の生物物理学的評価を行った。評価及びその結果の一覧を表１０に示す。
Figure 2024507180000014
Figure 2024507180000015
Figure 2024507180000016
実施例６：ＢＧＣＢ４９１三重特異的抗体の分子設計、配列、及び構造
ＢＧＣＢ４９１は、Ｔリンパ球（Ｔ細胞）上の表面抗原分類３受容体複合（ＣＤ３ε）のイプシロンサブユニット（Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ０７７６６）、並びに腫瘍細胞上のＧＰＲＣ５Ｄ（Ｇタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤ、Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｑ９ＮＺＤ１）及びＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟、ＴＮＦＲＳＦ１７、Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｑ０２２２３）に同時に又は独立して結合することができる免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｇ１三重特異的抗体である。抗体は、Ｆｃ受容体との相互作用を無効にするための定常領域（Ｆｃ）におけるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＤ２６５Ｓの変異を特徴とし、ヘテロ二量体化は、ノブ・イントゥ・ホールプラットフォーム変異を使用して増強される１。抗ＣＤ３ε「ホール」鎖はまた、単量体及びホモ二量体化ホール鎖のプロテインＡ結合を破壊するためのＲＦ変異「Ｈ４３５Ｒ、Ｙ４３６Ｆ」を特徴とした２。抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ ｖ領域は、「ホール、ＲＦ」鎖上の抗ＣＤ３ε Ｆａｂ領域、及びＣ末端に融合されている抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖ ｖ領域を含む。「ノブ」鎖は、抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖを特徴とする。三重特異的抗体は、Ｔ細胞再指向のための二重腫瘍標的化ＧＰＲＣ５Ｄ並びにＢＣＭＡ及びＣＤ３の治療可能性を評価するために開発された。ＢＧＣＢ４９１の図を図１６に示す。
Ｃ末端抗ＧＰＲＣ５Ｄ ｓｃＦｖに融合された抗ＣＤ３重鎖（ＨＣ）Ａ及び抗ＣＤ３軽鎖（ＬＣ）と、「ノブ」含有重鎖Ｂに融合された抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖとの共発現によって、三重特異的ＢＧＣＢ４９１を生成した。組換えＣＤ３εタンパク質を有するトランスジェニックヒト化マウス［ＯｍｎｉＲａｔ（ＯＭＴ（商標））］を免疫することによって、抗ＣＤ３可変領域（ＶＲ００００１７３５０）を発見した。ＢＧＣＢ４９１に特徴付けられる抗ＧＰＲＣ５ｄ可変領域（ＶＲ００００３８７６１）は、ｍＡｂ ＧＣ５Ｂ６８０に由来し、トランスジェニックヒト化マウス［Ａｂｌｅｘｉｓ］をＧＰＲＣ５ｄをコードするＤＮＡで免疫することによって発見した。親ｖ領域（ＶＲ００００２９８３２）は、Ｎ結合型グリコシル化のリスクを提示し、ＩＧＨＶ２－２６＊０１生殖系列からの変異を表す「ＮＳＳ」モチーフをＨＣフレームワーク３領域中に含有した。この部位を生殖系列配列「ＳＴＳ」に変異させて戻し、Ｎ結合型グリコシル化のリスクを排除し、この変化により最終的な可変領域ＶＲ００００３８７６１が得られた。ＢＧＣＢ４９１に特徴付けられる抗ＢＣＭＡ可変領域（ＶＲ０００００３２６０）は、組換えＢＣＭＡタンパクでトランスジェニックヒト化マウス［Ａｂｌｅｘｉｓ］を免疫することによって発見されたｍＡｂ ＢＣＭＢ５１９に由来する。このｖ領域には更なる修飾は行わなかった。抗ＧＰＲＣ５Ｄ及び抗ＢＣＭＡ ｖ領域の両方を、最終的な分子において一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）としてフォーマットした。
ＢＧＣＢ４９１のｃＤＮＡ配列（配列番号１６５、１６６、及び１６７）から推定され、ペプチドマッピング及び質量分析によって確認されたＢＧＣＢ４９１重鎖及び軽鎖のアミノ酸の配列を以下に示す（表１１）。各鎖における、ＡＢＭ付番に従って定義される３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を、太字及び下線で示す。ＢＧＣＢ４９１重鎖１の１位のＧｌｎ、ＢＧＣＢ４９１軽鎖の１位のＧｌｎ、及びＢＧＣＢ４９１重鎖２の１位のＧｌｕ残基は、成熟鎖のＮ末端を構成する。ＢＧＣＢ４９１ ＩｇＧ１ ＡＡＳを含む両方の重鎖は、以下の点変異を有する：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＤ２６５Ｓ。ＢＧＣＢ４９１由来の重鎖１は、「ホール」変異：Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ及びＲＦ変異：Ｈ４３５Ｒ、Ｙ４３６Ｆを特徴とし、一方、重鎖２は、「ノブ」変異：Ｔ３６６Ｗを特徴とする。ノブ・イントゥ・ホール変異は、Ｆｃのヘテロ二量体化を促進する３。「ＲＦ」変異は、プロテインＡへの結合を破壊する。ＦｃγＲ受容体サイレンシング（ＡＡＳ）のための変異及びノブ・イントゥ・ホール変異を、以下の配列において下線で示す。
Figure 2024507180000017
Figure 2024507180000018
実施例７：ＢＧＣＢ４９１三重特異的抗体の免疫原性リスク評価
ＥｐｉＶａｘ Ｅｐｉｍａｔｒｉｘインシリコ免疫原性予測プログラムからのＴ調節（Ｔｒｅｇ）調整スコアを使用して、可能性のある免疫原性について三重特異的抗体配列を分析した４（表１２）。ＥｐｉＶａｘプログラムは、各「スーパータイプ」内の最も一般的なＨＬＡ分子への結合能力を計算する。この報告は、各ハプロタイプを個々に試験する必要なく、世界中のヒト集団の＞９０％を代表する結果を提供する。ＥｐｉＶａｘスコアは、所与のタンパク質配列内に含まれる全ての予測されたＴ細胞エピトープのＥｐｉＭａｔｒｉｘスコアを集計し、予想されるＴ細胞エピトープ含量及びタンパク質長について調整することによって計算される。ＥｐｉＶａｘスコアの解釈は以下のとおりである：－２０未満のＥｐｉＶａｘスコアは「理想的」であり、－２０～＋２０のＥｐｉＶａｘスコアが「許容可能」であり、＋２０超のＥｐｉＶａｘスコアは「許容不可」である。
Figure 2024507180000019
実施例８：三重特異的抗体比較試験
上記のＢＧＣＢ４６３及びＢＧＣＢ４９１を、一連の以下の研究において試験した。
三重特異的抗体は、標的陽性細胞のみの死滅を媒介する
ＢＧＣＢ４６３、ＢＧＣＢ４９１、及び３つの対照（ＢＧＣＢ４８２１（ＣＤ３×Ｎｕｌｌ×Ｎｕｌｌ）、ＢＧＣＢ４８３（ＣＤ３×Ｎｕｌｌ×ＢＣＭＡ）、ＢＧＣＢ４８４（ＣＤ３×ＧＰＲＣ５Ｄ×Ｎｕｌｌ））を、ＢＣＭＡ＋ＧＰＲＣ５Ｄ＋細胞（図１７Ａ）及びＢＣＭＡ－ＧＰＲＣ５Ｄ－細胞（図１７Ｂ）に対して試験した。エフェクター対標的（Ｅ：Ｔ）比３：１でインキュベートした。ｎ＝１ Ｔ細胞ドナー、７２時間インキュベーション、最高濃度５３ｎＭ、１～５倍希釈。細胞傷害性及びＴ細胞活性化の両方について試験を行った。結果は、（図１７Ａに示されるように）ＢＧＣＢ４６３及びＢＧＣＢ４９１のみがＢＣＭＡ＋ＧＰＲＣ５Ｄ＋細胞の死滅を媒介し、一方、（図１７Ｂに示されるように）ＢＣＭＡ－ＧＰＲＣ５Ｄ－細胞は影響を受けなかったことを示す。
三重特異的抗体は、クローン（ＣＲＩＳＰＲ）細胞株の枯渇において活性である
ＢＧＣＢ４６３及びＢＧＣＢ４９１は、一次インキュベーションの７２時間後及び９６時間後の両方で、Ｈ９２９ ＷＴ、ＧＰＲＣ５Ｄ ＫＯ、及びＢＣＭＡ ＫＯ細胞株を枯渇させた（図１８Ａ）。Ｅ：Ｔ比は３：１であり、ｎ＝５のＴ細胞ドナー；７２（５）及び９６（４）時間のインキュベーション、最高濃度５３２ｍＭ、１～５の希釈勾配。ＥＣ５０値を以下の表１３に示す。
Figure 2024507180000020
ＢＧＣＢ４６３及びＢＧＣＢ４９１はまた、ＣＲＩＳＰＲ細胞を枯渇させながらＴ細胞活性化を誘発する。両方の抗体は、上記と同じＨ９２９ ＷＴ、ＧＰＲＣ５Ｄ ＫＯ、及びＢＣＭＡ ＫＯ細胞において、７２時間後及び９６時間後にＴ細胞活性化の増加を示す（図１８Ｂ及び表１４）。
Figure 2024507180000021
三重特異的抗体は、リンパ腫（ＢＣＭＡのみ）細胞株を枯渇させることができる
ＢＧＣＢ４６３及びＢＧＣＢ４９１を、Ｈ９２９、ＲＡＭＯＳ及びＧＲＡＮＴＡ－５１９細胞株を用いた細胞傷害性及びＴ細胞活性化アッセイにおいて試験した。結果は、両方の抗体がＲＡＭＯＳ及びＧＲＡＮＴＡ－５１９株を枯渇させたが、両方の抗体のより高い濃度が必要であったことを示す（図１９、ＥＣ５０値を表１５に示す）。Ｅ：Ｔは５：１であり、ｎ＝１のＴ細胞ドナー、７２時間インキュベーションのみ、最高濃度５３ｎＭ；及び１～５倍希釈。
Figure 2024507180000022
三重特異的抗体は、全血アッセイにおいて標的陽性細胞を枯渇させる
ＢＧＣＢ４６３及びＢＧＣＢ４９１を、Ｈ２９２細胞を用いた細胞傷害性及びＴ細胞活性化全血アッセイにおいて試験した。結果は、細胞傷害性及びＴ細胞活性化を示す（図２０及び表１６中のＥＣ５０値）。Ｅ：Ｔは５：１、ｎ＝２の全血ドナー、４８時間インキュベーション、最高濃度５３２ｎＭ；及び１～５倍希釈。
Figure 2024507180000023
三重特異的抗体は、マウスにおいて腫瘍増殖を退縮させる
ＢＧＣＢ４６３は、十分に高い用量、つまり、ＭＭ．１Ｓモデルにおいては２μｇ若しくは１０μｇ（図２１Ａ）、又はＲＰＭＩ ８２２６モデルにおいては５μｇ若しくは１０μｇ（図２１Ｂ）のいずれかで与えられた場合、ＭＭ．１Ｓ及びＲＰＭＩ ８２２６異種移植マウスモデルにおいて腫瘍成長を退行させることが示された。腫瘍は増殖を停止したか、又は対照条件と比較して増殖の減少を示した。
更に、ＢＧＣＢ４６３及びＢＧＣＢ ４９１の両方が、Ｈ９２９予防異種移植片マウスモデルにおいて腫瘍増殖を退行させることが示された。ＰＢＳ対照と比較して、０．５μｇ及び５μｇ用量の両方が、Ｈ９２９－ＢＣＭＡ ＫＯモデル及びＨ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ ＫＯモデルの両方において腫瘍増殖を遅延させ、より高い５μｇ濃度がより大きな効果を示した（図２２）。
ＤＲＣ汎Ｔ結合
ＢＧＣＢ４６３及びＢＧＣＢ４９１を、１時間、３７℃のＤＲＣ汎Ｔ結合アッセイにおいて試験した。２人のヒト汎Ｔ細胞ドナーを使用し、試験分子は、１：３希釈及び１１ポイントＤＲＣで２ｕＭの出発濃度を有した。Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７ ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）を介した二次検出。ＦＡＣＳは、Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔｅ Ｉｑｕｅ Ｓｃｒｅｅｎｅｒ ｐｌｕｓを用いて行った。結果を図２３に示し、ＢＧＣＢ４９１は、ＥＣ５００．１９０３及びトップ１８８１９４を有し、ＢＧＣＢ４６３は、ＥＣ５００．１２５８及びトップ３０３２６９を有した。実証されたＥＣ５０値は、ＣＤ３結合アームについて予想されるパラメータ内である。
ＤＲＣ Ｈ９２９シリーズ結合
ＢＧＣＢ４６３及びＢＧＣＢ４９１を、１時間、３７℃のＤＲＣシリーズ結合アッセイにおいて、Ｈ９２９ ＷＴ、Ｈ９２９ ＢＣＭＡ－ＫＯ、Ｈ９２９ ＧＰＲＣ５Ｄ－ＫＯ、及びＨ９２９ ＢＣＭＡ／ＧＰＲＣ５Ｄ二重ＫＯ細胞に対して試験した。結果を図２４Ａ～２４Ｄに示し、全てｎｕｌｌ対照（ＢＧＣＢ５１０）を用いた。ＥＣ値を表１７に示す。結果は、ＢＧＣＢ４９１が、ＢＧＣＢ４６３と比較して、増加したＢＣＭＡ媒介性結合及び減少したＧＰＲＣ５Ｄ媒介性結合を有することを示した。
Figure 2024507180000024
三重特異的抗体分析試験
以下の表１８は、ＢＧＣＢ４６３及びＢＧＣＢ４９１に関する様々な分析を提供する。
Figure 2024507180000025
実施例９：ＢＧＣＢ４９１三重特異的抗体の生物物理学的評価
表１９Ａは、ＢＧＣＢ４９１の組換え抗原結合、種交差反応性、エピトープ同定、Ｆｃ受容体結合、及び生物物理学的固有特性属性を提供する。表１９Ｂは、ＢＧＣＢ４９１についての更なる特徴を提供する。
Figure 2024507180000026
Figure 2024507180000027
Figure 2024507180000028
 ＡＡＳ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＤ２６５ＳＡｂ、抗体；ａＨＩＣ、分析用疎水性相互作用クロマトグラフィー；ａＳＥＣ、分析的サイズ排除クロマトグラフィー；ＡＵＣ、分析用超遠心；ｂｔ、ビオチン化；ＣＤＲ、相補性決定領域；Ｃｈｅｍ Ｏｘ、化学的酸化；ｃＩＥＦ、キャピラリー等電点電気泳動；ｃｙ又はｃｙｎｏ、カニクイザル；Ｃｙｓ、システイン；ＤＳＣ、示差走査熱量測定；ＥＣ５０、５０％有効濃度；Ｆａｂ、フラグメント抗原結合；Ｆｃ、フラグメント結晶化可能；ＦｃＲｎ、新生児Ｆｃ受容体；ＦＤＳ、蛍光検出システム；ｇｌｙ、グリコシル化；ｈ、ヒト；ＨＣ、重鎖；ＨＣＤＲ、重鎖相補性決定領域；ＨＤ、ホモ二量体；ＨＤＸ、水素重水素交換；ＨＭＷ、高分子量；Ｉｇ、免疫グロブリン；ｋａ、結合定数；ＫＤ、均衡解離定常；ＬＣ、軽鎖；ＬＣＤＲ、軽鎖相補性決定領域；ｍＡｂ、モノクローナル抗体；Ｍｅｔ、メチオニン；金属Ｏｘ、金属による酸化；ＭＳ、質量分析；Ｎ／Ａ、評価せず；ＮＭＥ、新規分子実体；ＮＲ ＧＸＩＩ、非還元キャピラリー電気泳動；ＰＢＳ、リン酸緩衝生理食塩水；ｐＩ、等電点；ＰＳ２０、ポリソルベート２０；ｒｅｆ、参照；Ｒ ＧＸＩＩ、還元キャピラリー電気泳動；ｓｃＦｖ、一本鎖可変フラグメント；ＳＥＣ、分析的サイズ排除クロマトグラフィー；ＳＰＲ、表面プラズモン共鳴；Ｔｍ、融解温度；ＴＭＰ、標的医薬品；Ｔｒｐ、トリプトファン。
Figure 2024507180000029
 ＊最高試験濃度２μＭでの不飽和結合曲線による固定点外挿に基づいて決定されたＴ細胞：ＥＣ５０
実施例１０：ＢＧＣＢ４９１の標的アーム及びＣＤ３アーム結合特性評価
ＢＧＣＢ４９１の内因性腫瘍細胞株結合
フローサイトメトリーを使用して、インビトロでのＢＧＣＢ４９１のＢＣＭＡ及びＧＰＲＣ５Ｄアーム結合を評価した。ＢＧＣＢ４９１及びアイソタイプ対照を、１時間の３７℃インキュベーション後に、Ｈ９２９－ＷＴ、Ｈ９２９－ＢＣＭＡ－ＫＯ、Ｈ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ－ＫＯ、及びＨ９２９－ＢＣＭＡ／ＧＰＲＣ５Ｄ－ＫＯ細胞株のパネル上で試験した。
ＢＧＣＢ４９１は、ＷＴ並びに各ノックアウト（ＫＯ）株に対して特異的結合を示し、各個々の標的結合アームの結合を検証した（図２５、表２０）。
Figure 2024507180000030
 ＥＣｘ、ｘ％有効濃度；ＫＯ、ノックアウト；Ｍｅｄ、中央値；Ｎ／Ａ、評価せず；ＮＦＣ、完全曲線ではない；ＷＴ、野生型。
三重特異的抗体ＢＧＣＢ４９１で２４時間の動的結合実験が実施されたフローサイトメトリーを使用して、３７℃で２４時間のインキュベーションを通して、５０、１０、２ｎＭでのＨ９２９ ＷＴ及びＭＭ．１Ｒ ＷＴ細胞株に対する結合動態を評価した（図４０参照）。図４０に示されるように、安定な結合プロファイルが、２４時間にわたって両方の細胞株で観察された。
ＢＧＣＢ４９１の一次Ｔ細胞性結合
フローサイトメトリーを使用して、７人の異なる健康なヒト由来のＣＤ３＋汎Ｔ細胞へのＢＧＣＢ４９１のＣＤ３アーム（すなわち、ＣＤ３Ｂ３７６）結合を評価した。ＣＤ３Ｂ３７６についての細胞ベースのＥＣ５０は、１時間での飽和動態の欠如のために決定することができなかった（図２６）。ＣＤ３Ｂ３７６×Ｎｕｌｌ対照抗体（すなわち、ＧＣＤＢ３８１）分子を）分子を使用して実施した（図２７）。これは、２μＭの最高濃度用量反応内で飽和して、非線形回帰曲線の頂点を制約し、ＥＣｘ値の推定を可能にする完全曲線を生成した（表２１）。
Figure 2024507180000031
 ＥＣｘ、ｘ％有効濃度；Ｄ、ドナー。
弱いＣＤ３結合アームの使用にもかかわらず、ＢＧＣＢ４９１は、１２０時間を通して３人の汎Ｔ細胞ドナーにわたってＩｎｃｕｃｙｔｅに対して実施した速度論的細胞傷害性アッセイにおける、１：１及び１：３の両方のＥ：Ｔ比において最大細胞傷害性を有する強いピコモル下濃度の効力を示した。経時的細胞傷害性アッセイにおいて、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ Ｓ３を使用して、１２０時間を通して３人の汎ＴドナーにわたってＨ９２９－ＧＦＰにおけるＢＧＣＢ４９１の動的標的細胞傷害性及びＴ細胞活性化プロファイルを評価した。ＢＧＣＢ４９１は、１：３のＥ：Ｔ比で試験した最低濃度（１０ ｐＭ）を除く全ての濃度で、７２時間付近で顕著な最大細胞傷害性に達した（図４２）。速度論的プロットから、７２時間、９３時間、及び１２０時間の時点での細胞溶解パーセント及びＴ細胞活性化についての情報を、１：１のＥ：Ｔ比（図４３）及び１：３のＥ：Ｔ比で抽出した（図４４）。ＢＧＣＢ４９１は、いずれのＥ：Ｔ比においても強いピコモル下濃度の死滅効力を示した（表２２）。より詳細な細胞傷害性の特徴付けを実施例１２に例示する。
Figure 2024507180000032
 ＥＣｘ、ｘ％有効濃度；Ｅ：Ｔ、エフェクター対標的比、ＧＦＰ、緑色蛍光タンパク質。
要約すると、ＢＧＣＢ４９１は、１つの結合アームを有するＴＣＲ ＣＤ３及び残りの２つの結合ドメインを有する腫瘍表面抗原ＢＣＭＡ又はＧＰＲＣ５Ｄを標的とする完全ヒト三重特異的ｍＡｂである。ＢＧＣＢ４９１は、許容される固有の生物物理学的特性を示し、試験した全てのＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、及び二重ＢＣＭＡ－ＧＰＲＣ５Ｄ発現細胞株に結合した。
実施例１１：治療的薬理学
第１部．インビトロ試験
試験細胞株におけるＢＣＭＡ及びＧＰＲＣ５Ｄ受容体タンパク質の表面発現及び密度
４つの二重標的（すなわち、ＢＣＭＡ－ＧＰＲＣ５Ｄ）陽性細胞株（すなわち、ＭＭ．１Ｓ、Ｈ９２９、ＪＩＭ－３、及びＯＰＭ－２）及び２つの二重標的陰性細胞株（すなわち、ＭＶ－４－１１及びＯＣＩ－ＡＭＬ－３）のサブセットを、フィコエリトリン（ＰＥ）標識された市販のＢＣＭＡ抗体及び社内のＧＰＲＣ５Ｄ抗体を使用する蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）によって、タンパク質発現について特徴付けた。全ての標的陽性細胞株は、アイソタイプ対照と比較して発現パターンの有意なシフトを有したが、標的陰性細胞株は、いかなる発現も示さなかった（表２３）。表面上に様々なレベルの標的タンパク質発現を有するこれらの６つの細胞株を、更なるインビトロ及びインビボ機能アッセイのために選択した。
Figure 2024507180000033
 ＱｕａｎｔｉＢＲＩＴＥキットを用いて標的陽性細胞及び標的陰性細胞で定量した。個々の値及び上に列挙した２つの個々の実験の平均。
内因性ＢＣＭＡ－ＧＰＲＣ５Ｄ発現細胞株へのＢＧＣＢ４９１の結合
次に、ＢＧＣＢ４９１（ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３三重特異的ｍＡｂ）結合プロファイルを、フローサイトメトリー法を適用することによって決定した。ＢＧＣＢ４９１及びＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×Ｎｕｌｌ対照抗体は、用量依存的様式でＢＣＭＡ－ＧＰＲＣ５Ｄ発現ＭＭ細胞に結合した（ＥＣ５０値：ＭＭ．１Ｓ、３３．３９ｎＭ；Ｈ９２９、１８５．５０ｎＭ；ＪＩＭ－３、７８．４５ｎＭ；ＯＰＭ－２、１０．０７ｎＭ；図４１）一方、ＣＤ３×Ｎｕｌｌ×Ｎｕｌｌ対照抗体は、これらの細胞に対して有意な結合を示さなかった。試験した抗体のいずれも、二重標的陰性細胞株ＭＶ－４－１１及びＯＣＩ－ＡＭＬ－３に結合せず、ＢＧＣＢ４９１特異性を示した。
ＢＧＣＢ ４９１により媒介されるＭＭ細胞株のＴ細胞依存性細胞傷害性及びＴ細胞活性化
Ｔ細胞媒介性細胞傷害アッセイを使用して、ＦＡＣＳベースのアプローチを使用してＢＧＣＢ４９１のインビトロ細胞傷害性及びＴ細胞性活性化能を評価した。ＢＧＣＢ４９１を、６人の健康なドナーからの汎Ｔ細胞（ＣＤ３＋）を使用して、様々な細胞株（ＢＣＭＡ－ＧＰＲＣ５Ｄ二重陽性：ＭＭ．１Ｓ、Ｈ９２９、ＪＩＭ－３、ＯＰＭ－２；及びＢＣＭＡ－ＧＰＲＣ５Ｄ二重陰性：ＭＶ－４－１１及びＯＣＩ－ＡＭＬ－３）で試験した。Ｆｃ受容体は試験した細胞の一部で発現されるので、２ｍｇ／ｍＬのＦｃブロッカーをアッセイに添加した。更に、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×Ｎｕｌｌ及びＣＤ３×Ｎｕｌｌ×Ｎｕｌｌを陰性対照として使用した。ＢＧＣＢ４９１は、７２時間のインキュベーション後にインビトロでＢＣＭＡ－ＧＰＲＣ５Ｄ二重陽性細胞株を強力に死滅させた（図２８Ａ、表２４）。ＢＧＣＢ４９１は、ＣＤ３＋ＣＤ２５＋生Ｔ細胞によって測定した場合、全ての二重標的陽性細胞株にわたって、細胞傷害性については、０．００２～０．３１２ｎＭの、Ｔ細胞活性化については０．００８～１．０７０ｎＭの、ＥＣ５０値範囲を有する強力な三重特異的抗体であることが見出された。予想とおり、同時Ｔ細胞活性化は二重標的陽性細胞のみで観察された（図２８Ｂ、表２４）。ＢＧＣＢ４９１は、二重標的陰性細胞株ＭＶ－４－１１及びＯＣＩ－ＡＭＬ－３で試験した場合、細胞傷害性又はＴ細胞活性化を誘導せず、細胞傷害性特異性を実証した。ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×Ｎｕｌｌ及びＣＤ３×Ｎｕｌｌ×Ｎｕｌｌ対照は、ＭＭ．１Ｓ細胞株を除いて有意な細胞傷害性を示さなかったが、ＭＭ．１Ｓ細胞株では、ＣＤ３×Ｎｕｌｌ×Ｎｕｌｌ抗体が高濃度（＞１００ｎＭ）でいくらかの活性を示した。
Figure 2024507180000034
 ＥＣｘ、ｘ％有効濃度；ＮＡ、不活性。
細胞傷害性及びＴ細胞活性化についての６人のＴ細胞ドナーからの平均ＥＣｘ値を、各細胞株について示す。ＥＣｘ値は、無作為効果としてドナーを用いた４ＰＬモデルから事後に推定した。デルタ法を用いて９５％信頼区間を計算した。非線形混合効果Ｒパッケージをモデルフィッティングに使用した。
Ｈ９２９ ＣＲＩＳＰＲノックアウト細胞世代及び標的発現
ＣＲＩＳＰＲノックアウトＨ９２９細胞株におけるＢＣＭＡ及びＧＰＲＣ５Ｄ受容体タンパク質の発現及び密度
次に、ＢＧＣＢ４９１が単一標的発現細胞を死滅させる可能性を評価するために、Ｈ９２９クラスター化等間隔短鎖回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）ＫＯ細胞株（すなわち、Ｈ９２９－ＢＣＭＡ－ＫＯ及びＨ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ－ＫＯ）を細胞傷害性アッセイにおいて使用した。これらの細胞を、図２５の凡例に記載されるように配列確認し、ＰＥ標識された市販のＢＣＭＡ抗体及び社内のＰＥ標識されたＧＰＲＣ５Ｄ抗体を使用するＦＡＣＳによってタンパク質発現について特徴付けた。発現プロファイルは、Ｈ９２９－ＢＣＭＡ－ＫＯ細胞株におけるＢＣＭＡ発現の、及びＨ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ－ＫＯ細胞株におけるＧＰＲＣ５Ｄ発現の完全なノックアウトを示した。
Ｈ９２９ ＣＲＩＳＰＲ ＫＯクローン細胞株のＢＧＣＢ ４９１媒介性細胞傷害性及びＴ細胞活性化
次に、ＢＧＣＢ４９１抗体を、ＣＲＩＳＰＲ ＫＯ及び野生型（ＷＴ）細胞株（すなわち、Ｈ９２９－ＷＴ、Ｈ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ－ＫＯ、及びＨ９２９－ＢＣＭＡ－ＫＯ）に対して、４人の健康なドナーから得た汎Ｔ細胞（ＣＤ３＋）を使用して、ＦＡＣＳベースのプロトコルを使用して試験し、そのクローン枯渇能を評価した。更に、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×Ｎｕｌｌ及びＣＤ３×Ｎｕｌｌ×Ｎｕｌｌを陰性対照として使用した。ＢＧＣＢ４９１は、全ての３つの細胞株（すなわち、Ｈ９２９－ＷＴ、Ｈ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ－ＫＯ、及びＨ９２９－ＢＣＭＡ－ＫＯ）を強力に死滅させ、インキュベーションの７２時間後にインビトロでＴ細胞を活性化した（図２９）。ＢＧＣＢ４９１は、アビディティに起因して、単一標的発現ＣＲＩＳＰＲ ＫＯ細胞株と比較して、二重標的発現Ｈ９２９－ＷＴ細胞において有意な効力を示した。ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×Ｎｕｌｌ及びＣＤ３×Ｎｕｌｌ×Ｎｕｌｌは、有意な細胞障害性又はＴ細胞性活性化を示さなかった。４人の異なる健常Ｔ細胞ドナーを使用した平均ＥＣ５０値を表２５Ａにまとめる。テクリスタマブ（ＢＣＭＡ×ＣＤ３二重特異的抗体）及びタルケタマブ（ＧＰＲＣ５Ｄ×ＣＤ３二重特異的抗体）を陽性対照として使用した結果、予想とおり挙動した。表２５Ｂは、Ｈ９２９細胞の細胞当たりの受容体密度値を示す。
Figure 2024507180000035
 ＣＲＩＳＰＲ クラスター化し規則的に配置された短い回文反復、ＥＣ５０、５０％有効濃度；Ｅ：Ｔ、エフェクター対標的；Ｆｃ、フラグメント結晶化可能；ＫＯ、ノックアウト；ＮＡ、不活性。
各細胞株（Ｈ９２９－ＷＴ、Ｈ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ－ＫＯ、及びＨ９２９－ＢＣＭＡ－ＫＯ）について、細胞傷害性及びＴ細胞活性化についての４人のＴ細胞ドナーからの平均ＥＣ５０値を示す。ＥＣ５０値は、無作為効果としてドナーを用いた４ＰＬモデルから事後に推定した。デルタ法を用いて９５％信頼区間を計算した。非線形混合効果Ｒパッケージをモデルフィッティングに使用した。テクリスタマブ及びタルケタマブを陽性対照として使用した。
Figure 2024507180000036
健康なヒト全血中にスパイクされた二重標的陽性Ｈ９２９細胞に対するＢＧＣＢ４９１の細胞傷害性及びＴ細胞活性化能（ＭＡＢＥＬアッセイ）
ＭＡＢＥＬアッセイを使用して、より生理学的に関連する環境におけるＢＧＣＢ４９１の効果を特徴付けた。ここで、二重標的陽性Ｈ９２９細胞をヒト健常全血に添加して、細胞傷害性、Ｔ細胞活性化、及びサイトカインパラメータを確立した。Ｈ９２９細胞株を、ヒト全血環境における４８時間の適合性に基づいて選択した。ＢＧＣＢ４９１は、この共培養全血アッセイにおいて、４８時間のインキュベーション後に、二重標的陽性Ｈ９２９細胞及び活性化Ｔ細胞を強力に死滅させた（図３０）。ＢＧＣＢ４９１は、７人の異なる健康なドナーからの全血を使用して試験された場合、細胞傷害性について０．２７４ｎＭ及びＣＤ３＋Ｔ細胞活性化について０．３７６ｎＭの平均ＥＣ５０値を有した（表２６）。ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×Ｎｕｌｌ及びＣＤ３×Ｎｕｌｌ×Ｎｕｌｌは、有意な細胞障害性又はＴ細胞性活性化を示さなかった。１０プレックスＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）ベースのプロトコルを使用して、３人の異なる全血ドナーからサイトカインを定量した（図３１、表２７）。陽性対照テクリスタマブ及びタルケタマブは特異的活性を示した。
Figure 2024507180000037
 ＥＣｘ、ｘ％有効濃度；Ｅ：Ｔ、エフェクター対標的；ＭＡＢＥＬ、推定最小生物学的レベル；Ｍａｘ、最大値；ＮＡ、不活性。
ＢＧＣＢ４９１を、標的細胞（Ｈ９２９）の存在下で様々な濃度で全血に添加し、４８時間インキュベートした。標的細胞を最適なＥ：Ｔ比５：１で全血に添加した。７人の健康なヒトドナー全血サンプル（ドナーＩＤ：１０１４５、１０４０３、１０４２０、１００８３、１０４６３、１０４９３、及び１０１４５）を使用して試験を行った。ＥＣｘ値は、無作為効果としてドナーを用いた４ ＰＬモデルから事後に推定した。９５％信頼区間（括弧内に示す）は、デルタ法を用いて計算した。非線形混合効果Ｒパッケージをモデルフィッティングに使用した。最大細胞傷害性／活性化値はパーセンテージである。
Figure 2024507180000038
 ９５％ ＣＩ、９５％信頼区間；ＥＣ５０、５０％有効濃度；ＩＬ、インターロイキン；ＩＦＮ、インターフェロン；ＭＡＢＥＬ、推定最小生物学的レベル；Ｍａｘ、最大濃度；ＭＳＤ、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ；ＴＮＦ、腫瘍壊死因子。
上記細胞傷害性実験（図３０、３ Ｔ細胞ドナー）からのＨ９２９細胞上清を収集し、ＭＳＤベースのマルチプレックスアッセイ（カタログ番号：Ｋ１５０４９Ｄ）を使用してサイトカインレベルについて分析した。最大サイトカインレベルをｐｇ／ｍＬとして表した（括弧内の信頼区間は９５％）。
ＭＭ患者骨髄内ＣＤ１３８＋細胞のＢＧＣＢ ４９１媒介性細胞傷害性
ＭＭ患者由来の一次サンプルにおけるＢＧＣＢ４９１の効力を評価するために、この三重特異的ｍＡｂを、４人の異なるＭＭ患者由来の凍結骨髄単核細胞及び健常ドナー由来のＴ細胞を使用して、細胞傷害性アッセイにおいて試験した。等しい数の外因性Ｔ細胞及び骨髄単核細胞（すなわち、１００，０００；Ｅ：Ｔ比＝１：１）を混合し、ＢＧＣＢ４９１、ＣＤ３×Ｎｕｌｌ×Ｎｕｌｌ、テクリスタマブ、又はタルケタマブとともに４８時間インキュベートした。抗体媒介形質細胞枯渇及びＴ細胞活性化能を、フローサイトメトリーベースのアプローチを使用して測定した。ＢＧＣＢ４９１は、健常な正常Ｔ細胞との共培養の４８時間後に、全ての患者サンプルのＣＤ１３８＋形質細胞枯渇を用量依存的に誘導した（図３２）。Ｔ細胞活性化データは、予想とおり、細胞傷害性データとよく相関した。このデータは、ＢＧＣＢ４９１がｅｘ ｖｉｖｏ共培養アッセイにおいて初代ＭＭ骨髄細胞に対して細胞傷害性であることを確認する。形質細胞枯渇及びＴ細胞活性化についてのドナー特異的ＥＣｘ値を表２８に列挙する。４つの分子全てに対して十分な細胞を有する３つのサンプルにおいてＣＤ３×Ｎｕｌｌ×Ｎｕｌｌ対照抗体を試験したところ、より高い濃度（＞１ｎＭ）で、いくらかの最小限の非特異的形質細胞枯渇及びＴ細胞活性化を示した。テクリスタマブ及びタルケタマブを陽性対照として使用し、予想とおり挙動した。
Figure 2024507180000039
 ＢＭ、骨髄；ＥＣｘ、ｘ％有効濃度；Ｅ：Ｔ、エフェクター対標的；ＭＭ、多発性骨髄腫；ＭＮＣ、単核細胞。
ＢＧＣＢ４９１を、１：１のＥ：Ｔ比での健康なＴ細胞の存在下、様々な濃度でＭＭ ＢＭ ＭＮＣに加え、４８時間インキュベートした。試験は、４ ＭＭ患者骨髄サンプル（ドナーＩＤ：ＭＭ ＢＭ ＭＮＣ－６２６、６４９、６５２、及び６５３）を使用して行った。この実験では、テクリスタマブ及びタルケタマブを陽性対照として使用した。ＥＣｘ値は、無作為効果としてドナーを用いた４ ＰＬモデルから事後に推定した。デルタ法を用いて９５％信頼区間を計算した。非線形混合効果Ｒパッケージをモデルフィッティングに使用した。
様々なＥでのＢＧＣＢ４９１細胞傷害性能力Ｔ比及びインキュベーション時間
更に、いくつかのＥを用いたＴ細胞媒介性細胞傷害アッセイを使用して、ＢＧＣＢ４９１標的細胞性細胞傷害能を試験した。臨床設定において骨髄腫細胞を枯渇させるその能力を理解するためのＴ比及び異なるインキュベーション時間。試験細胞株として、Ｈ９２９細胞をＴ細胞（ドナーＩＤ：２００６３３２３）と混合して、ＢＧＣＢ４９１、ＢＣＭＡ×ＧＰＲＣ５Ｄ×Ｎｕｌｌ、及びＣＤ３×Ｎｕｌｌ×Ｎｕｌｌの存在下で５：１、３：１、１：１、及び０．５：１のＥ：Ｔ比でインキュベーションを７２時間実施した。経時的実験では、３：１及び１：１のＥ：Ｔ比を、２４、４８、７２、９６、１２０、１４４、及び１６８時間のインキュベーションで試験するために選択した。ＢＣＭＡ及びＧＰＲＣ５Ｄについての細胞当たりの受容体密度は、Ｈ９２９細胞においてそれぞれ５３８１及び１５７４である。ＢＧＣＢ４９１は、全てのＥでＨ９２９細胞を強力に死滅させた。試験されたＴ比は、細胞傷害性及びＴ細胞活性化について同等のＥＣ５０値であった（図３３Ａ、表２９）。ＢＧＣＢ４９１は、試験した最も早い時点（２４時間）から標的細胞の細胞傷害性を開始し、その効力及び効力は、インキュベーションの７２時間まで時間とともに増加し、７２時間ではほぼプラトーに達した（図３３Ｂ）。ＢＧＣＢ４９１は、試験した全ての時点でＨ９２９を強力に死滅させ、ＥＣ５０値は、細胞傷害性については０．００１～０．０２２ｎＭの範囲であり、Ｔ細胞活性化については０．００５～０．０６７ｎＭの範囲であった（３：１のＥ：Ｔ比）。１：１のＥ：Ｔ比アッセイでは、ＥＣ５０値は、細胞傷害性については０．００４～０．０２５ｎＭ、Ｔ細胞活性化については０．００６～０．０８３ｎＭの範囲であった（図３３Ｂ、表３０）。このデータは、三重特異的ｍＡｂ ＢＧＣＢ４９１が非常に効率的であり、Ｔ－ｃｅｌｌ数が制限されている状況において有益であり得ることを示す。しかしながら、より低い０．５：１のＥ：Ｔ比では、最大細胞傷害性パーセンテージは、７２時間インキュベーションアッセイにおいて試験した他の条件よりもはるかに低かった（約２０％）。より長いインキュベーション時間が、これらのより低いＴ細胞数で最大細胞傷害性を改善することができるかどうかを見ることは興味深い。別の試験において、ＢＧＣＢ４９１は、１：１及び１：３の両方でＨ９２９細胞の強い細胞傷害性とともに、複数のドナー由来のＣＤ３を発現する初代ヒトＴ細胞に対して測定できるほど低い親和性の結合を示した（図２６）。Ｔ比（図４３、図４４）。
Figure 2024507180000040
 ＣＤ、表面抗原分類；ＥＣｘ、ｘ％有効濃度；Ｅ：Ｔ、エフェクター対標的。
ＢＧＣＢ４９１を、１人の健康なドナー（ドナーＩＤ：２００６３３２３）からの汎Ｔ細胞の存在下で、様々なＥ：Ｔ比（５：１、３：１、１：１、及び０．５：１）で７２時間試験した。標的細胞死及びＴ細胞活性化を測定し、細胞傷害性パーセント及びＣＤ２５＋ＣＤ３＋Ｔ細胞パーセントとして表した。ＥＣｘ値は、無作為効果としてドナーを用いた４ ＰＬモデルから事後に推定した。デルタ法を用いて９５％信頼区間を計算した。非線形混合効果Ｒパッケージをモデルフィッティングに使用した。
Figure 2024507180000041
 ＣＤ、表面抗原分類；ＥＣｘ、ｘ％有効濃度；Ｅ：Ｔ、エフェクター対標的。
経時的アッセイのために、ＢＧＣＢ４９１を、４つの異なるＴ細胞ドナー（ドナーＩＤ：２００６２１０５、２００６３３０９、２００６１９６３、及び２００６３３１０）を使用して、様々な時点（２４、４８、７２、９６、１２０、１４４、及び１６８時間）について３：１及び１：１のＥ：Ｔ比で試験した。標的細胞死及びＴ細胞活性化を測定し、細胞傷害性パーセント及びＣＤ２５＋ＣＤ３＋Ｔ細胞パーセントとして表した。ＥＣｘ値は、無作為効果としてドナーを用いた４ ＰＬモデルから事後に推定した。デルタ法を用いて９５％信頼区間を計算した。非線形混合効果Ｒパッケージをモデルフィッティングに使用した。
標的細胞の非存在下でのＴ細胞活性化に対するＢＧＣＢ４９１の効果
ＢＧＣＢ４９１が標的結合の非存在下で望ましくないＴ細胞性活性化を促進するかどうかを評価するために、Ｔ細胞性活性化アッセイにおけるＢＧＣＢ４９１の効果を試験した。第１の研究では、６つの正常で健康なドナーＴ細胞サンプルを、様々な濃度のＢＧＣＢ４９１の存在中で７２時間インキュベートした（図３４Ａ）。第２の研究では、ＢＣＭＡ－ＧＰＲＣ５Ｄ陽性細胞が健康なヒト全血中に存在しない、より生理学的に関連性のあるアッセイフォーマットを使用し、ここで、ＢＧＣＢ４９１を、６つの正常な健康なドナー全血サンプル中に様々な濃度で４８時間添加した（図３４Ｂ）。次いで、Ｔ細胞活性化及び細胞傷害性効果を、ＣＤ２５陽性ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、及びＣＤ８＋Ｔ細胞又は種々の血液細胞の細胞死パーセントをフローサイトメトリーによってスコア化することによって測定した（図３４Ｃ；好中球、単球、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、形質芽細胞）。ＢＧＣＢ４９１は、ＢＣＭＡ－ＧＰＲＣ５Ｄ発現標的細胞の非存在下で、Ｔ細胞の活性化又は非特異的細胞死に対して有意な影響を及ぼさなかった（図３４Ｂ及びＣ）。最小のＴ細胞活性化が＞１０ｎＭの濃度で観察された。
第２部．インビボ試験
ＢＧＣＢ４９１の抗がん効果を、ＲＰＭＩ ８２２６（試験Ａ）及びＨ９２９－ＣＲＩＳＰＲ－ＫＯ（試験Ｂ）ヒトＭＭ異種移植片において評価した。ヒト腫瘍及びヒトＴ細胞を移植するのに適した宿主を提供するために、雌ＮＳＧ（すなわち、非肥満糖尿病［ＮＯＤ］重症複合免疫不全［ｓｃｉｄ］ガンマ又はＮＯＤ．Ｃｇ－ＰｒｋｄｃｓｃｉｄＩｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ）マウスを両方の試験に使用した。
研究Ａでは、０日目にマウスにＲＰＭＩ ８２２６細胞をＳＣ移植した。ヒト汎Ｔ細胞を、腫瘍細胞移植後１８日目に腹腔内（ＩＰ）移植した。ビヒクル、ＢＧＣＢ４９１、テクリスタマブ、又はタルケタマブによる処置を、１９日目に開始して腹腔内投与し、週２回、合計８回の処置を続けた。試験Ｂは、－１日目にヒト増殖汎Ｔ細胞をＩＰ注射する予防試験として行った。０日目に、Ｈ９２９－ＢＣＭＡ－ＫＯ細胞をＮＳＧマウスの左側腹部にＳＣ移植し、一方、Ｈ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ－ＫＯ細胞を右側腹部にＳＣ移植した。ビヒクル（すなわち、リン酸緩衝生理食塩水［ＰＢＳ］）、ＢＧＣＢ４９１、テクリスタマブ、及びタルケタマブによる処置を１日目に開始し、７回の処置のために週２回投与した。
試験Ａ（回帰モデル）において、ＲＰＭＩ ８２２６異種移植片のΔ腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）パーセントを、ビヒクル処置対照動物の＞７０％が試験に残っている３８日目に計算した。ＢＣＭＡ及びＧＰＲＣ５Ｄの細胞当たりの受容体密度は、ＲＰＭＩ ８２２６細胞において、それぞれ２３１７及び４８６である。統計的に有意なΔＴＧＩは、０．４ｍｇ／ｋｇ（２０グラムのマウスについて約８μｇに相当）、１ｍｇ／ｋｇ（２０μｇ／マウス）、及び２．５ｍｇ／ｋｇ（５０μｇ／マウス）のＢＧＣＢ４９１で観察され、それぞれ９０．５％、１０６．２％、及び１１１．２％のΔＴＧＩ値をもたらした（ビヒクル対照に対して全ての群についてｐ＜０．０５）（図３５）。０．１ｍｇ／ｋｇ（２μｇ／マウス）の最低用量は、３８．４％ΔＴＧＩ（ｐ＝０．０３５）をもたらし、これは有効ではないと考えられた。テクリスタマブは、ＰＢＳ処置対照マウスと比較して、それぞれ０．４ｍｇ／ｋｇで８５％ΔＴＧＩ、１ｍｇ／ｋｇで１０５．６％ΔＴＧＩ、及び２．５ｍｇ／ｋｇで１１１．９％ΔＴＧＩで腫瘍増殖を阻害したが、２．５ｍｇ／ｋｇで投与されたタルケタマブは、ＲＰＭＩ ８２２６腫瘍増殖を７７．２％ΔＴＧＩ阻害した（ＰＢＳ処置対照に対して全ての群についてｐ＜０．０５）。
ＲＰＭＩ ８２２６モデルにおいて、ＢＧＣＢ ４９１媒介性腫瘍退縮は、処置中止後２週間を超えて観察され続けた。最初の全身腫瘍組織量と比較した腫瘍退縮率（ＴＲ）を、最終投与の１９日後である６０日目に評価した。腫瘍の退縮は、１及び２．５ｍｇ／ｋｇのＢＧＣＢ４９１で観察され、それぞれ８０．２７％（ｐ＜０．０００１）及び１００％（ｐ＜０．０００１）のＴＲ値をもたらした。０．４ｍｇ／ｋｇ用量は、６０日目に２８．７％ＴＲを有したが、統計的に有意ではなかった。テクリスタマブは、同様に、１ｍｇ／ｋｇで６８．８８％（ｐ＝０．００２５）及び２．５ｍｇ／ｋｇで１００％（ｐ＜０．０００１）のＴＲを誘発した。７２時間のインキュベーションアッセイにおいてＲＰＭＩ ８２２６細胞を使用するインビトロ試験において、ＢＧＣＢ４９１は、テクリスタマブ又はタルケタマブ個々と比較して相加的効果を有しない同様の細胞傷害性プロファイルを示した。
試験Ｂ（予防モデル）では、＞７０％の動物が試験に残っていた場合、腫瘍移植後２２日目にＴＧＩパーセントを計算した。ＢＣＭＡ－ＫＯ腫瘍に対する統計的に有意なＴＧＩが、０．１、０．２５、及び０．５ｍｇ／ｋｇのＢＧＣＢ４９１で観察され、ＰＢＳ処置対照と比較して、それぞれ、８９．２％、９１．１％、及び８３．６％のＴＧＩをもたらした（全てｐ値＜０．０５；図３６）。テクリスタマブは、試験したいずれの用量レベル（０．１ｍｇ／ｋｇ、１７．２％ＴＧＩ；及び０．２５ｍｇ／ｋｇ、１９．９％ＴＧＩ）で効力を有しなかったが、タルケタマブは、０．１及び０．２５ｍｇ／ｋｇ用量レベルの両方で腫瘍増殖を１００％阻害した（ｐ＜０．０５）。ＧＰＲＣ５Ｄ－ＫＯ腫瘍に対して、ＢＧＣＢ４９１処置は、０．１、０．２５、及び０．５ｍｇ／ｋｇ用量レベルで１００％ＴＧＩの有意な効力をもたらした（全ての群についてｐ＜０．０５）。０．０２５ｍｇ／ｋｇ用量は、生物学的に有意であるとは考えられなかった２２．０９％ＴＧＩの軽微な効果を有した（３４）。テクリスタマブは、Ｈ９２９－ＧＰＲＣ５Ｄ－ＫＯ腫瘍増殖を０．１及び０．２５ｍｇ／ｋｇ用量レベルの両方で１００％ＴＧＩ阻害し（ｐ＜０．０５）、タルケタマブは効果を有しなかった。ＢＣＭＡ及びＧＰＲＣ５Ｄについての細胞当たりの受容体密度は、Ｈ９２９ ＢＣＭＡ－ＫＯ細胞において、それぞれ１及び９５７である。ＢＣＭＡ及びＧＰＲＣ５Ｄについての細胞当たりの受容体密度は、Ｈ９２９ ＧＰＲＣ５Ｄ－ＫＯ細胞においてそれぞれ３９２６及び１９である。
動物は、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）関連の病的状態の徴候が現れるまで処置後にモニターし、その時点で動物を安楽死させ、試験を終了した。
要約すると、三重特異的ｍＡｂ ＢＧＣＢ４９１は、多数のＭＭ細胞株において効力を示し、単一標的又は二重標的のいずれかを発現するクローン集団を枯渇させることができた。ＢＧＣＢ４９１はまた、全血アッセイのようなより生理的な設定において標的発現細胞を死滅させることができた。重要なことに、ＢＧＣＢ４９１は、ＭＭ患者の形質細胞を用量依存的に枯渇させることができた。ＢＧＣＢ４９１の効力はまた、インビボマウス異種移植モデルにおける腫瘍増殖の有意な減少に反映された。最後に、非特異的Ｔ細胞活性化又は標的陰性細胞の細胞傷害性はなかった。これらの結果は、ＢＧＣＢ４９１が、ＭＭ患者の処置において有意な治療可能性を有し得ることを示す。
更なるインビボ研究において、ＢＧＣＢ４９１の抗腫瘍性効力を、ＭＭ．１Ｓ（研究Ｃ）ヒトＭＭ異種移植片において評価した。ヒト腫瘍及びヒトＴ細胞を移植するのに適した宿主を提供するために、雌ＮＳＧ（すなわち、非肥満糖尿病［ＮＯＤ］重症複合免疫不全［ｓｃｉｄ］ガンマ又はＮＯＤ．Ｃｇ－ＰｒｋｄｃｓｃｉｄＩｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ）マウスを試験に使用した。
試験Ｃでは、０日目にマウスにＭＭ．１Ｓ細胞をＳＣ移植した。ヒト増殖汎Ｔ細胞を、腫瘍移植後１３日目に腹腔内に移植し、ビヒクル、ＢＧＣＢ４９１、テクリスタマブ、又はタルケタマブによる処置を、１５日目に開始して腹腔内投与し、週２回、合計７回の処置を続けた。
腫瘍成長阻害率（ＴＧＩ）を、動物の＞７０％が研究に残っている腫瘍移植後３４日目に計算した。ＭＭ．１Ｓ腫瘍に対する統計的に有意なＴＧＩが、０．０２５、０．１、０．５、及び１ｍｇ／ｋｇのＢＧＣＢ４９１で観察され、ＰＢＳ処置対照と比較して、それぞれ６６．９％、９１．２％、９９．７％、及び１００％のＴＧＩをもたらした（全てｐ値＜０．０５、図４５）。テクリスタマブは、試験した両方の用量レベルで腫瘍増殖を阻害した（０．１ｍｇ／ｋｇ、７３．７％ＴＧＩ；及び０．５ｍｇ／ｋｇ、９２．３％ＴＧＩ（ｐ＜０．０５））。タルケタマブは有効であり、ＴＧＩは０．０２５ｍｇ／ｋｇで９０．９％、０．１ｍｇ／ｋｇで９９．４％であった（ｐ＜０．０５）。
処置中止後２週間のＢＧＣＢ ４９１媒介性腫瘍退縮。初期腫瘍負荷と比較した腫瘍退縮（ＴＲ）パーセントを、５１日目、最終投与の１４日後に評価した。腫瘍の退縮は、０．５及び１ｍｇ／ｋｇのＢＧＣＢ４９１で観察され、それぞれ１００％のＴＲ値をもたらした（確立された腫瘍の８つの完全な退縮のうち８つ）。０．４ｍｇ／ｋｇ用量は、６０日目に２８．７％ＴＲを有したが、統計的に有意ではなかった。テクリスタマブはいかなる腫瘍退行も誘発しなかったが、０．１ｍｇ／ｋｇのタルケタマブは、確立されたＭＭ．１Ｓ腫瘍の１００％ＴＲをもたらした。
実施例１２：ヒト及び他の種に対する治療剤の親和性
ＣＤ３結合アーム（すなわち、ＣＤ３Ｂ３７６）は、カニクイザルＣＤ３に結合する。簡潔に述べると、ヒト及びカニクイザル末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をＧＣＤＢ３８１（すなわち、二価ＩｇＧ１－ＡＡＳ抗体中のＣＤ３Ｂ３７６ Ｆａｂ）、ＣＤ３Ｂ８９１（すなわち、ＣＤ３Ｂ３７６×Ｎｕｌｌ、ＩｇＧ１－ＡＡＳ二重特異的抗体）、又はｎｕｌｌ対照とともにインキュベートした後、フローサイトメトリーによって結合を測定した。
ＢＣＭＡ（ＢＣＭＢ６０１ ｓｃＦｖを含有するＢＣＭＢ５１９）結合アームは、カニクイザルＢＣＭＡに結合しなかった（表１９Ａ）。
ＧＰＲＣ５Ｄ（すなわち、ＧＣ５Ｂ６８０）及びＢＣＭＡ結合アームを、ＢＧＣＢ４９１と同一の結合アームを使用するＢＧＣＢ４６３の一部としてのカニクイザルに対する交差反応性について評価した。カニクイザルに対する交差反応性を、ヒト又はカニクイザルＧＰＲＣ５Ｄ又はＢＣＭＡを安定に発現するＫ５６２との３７℃で１時間のＦＡＣＳベースの細胞結合を使用して、両方の標的結合ｓｃＦｖアームについてプロファイリングした。ＧＣ５Ｂ６８０ ｓｃＦｖアームについての細胞ベースのＥＣ５０値は、ヒトＧＰＲＣ５Ｄ発現細胞に対して約３０ｎＭであり、カニクイザルＧＰＲＣ５Ｄ発現細胞では約１０倍弱かった（約４００ｎＭ）。対照的に、ＢＣＭＢ５１９ ｓｃＦｖアームの細胞ベースのＥＣ５０値は、ヒトＢＣＭＡについて約１４５ｎＭであったが、カニクイザルＢＣＭＡへの検出可能な結合は最大２μＭでなかった。
実施例１３：オフターゲット毒性評価
腫瘍抗原結合アームに関連するオフターゲット結合又は機能的活性に起因するリスクの可能性を、それぞれ、Ｒｅｔｒｏｇｅｎｉｘ（商標）細胞マイクロアレイ（オフターゲット傾向は観察されなかった）及び機能選択性ＴＡＡ－細胞株アッセイを使用して評価した。
ＢＧＣＢ４９１のＣＤ３アームの選択性は、標的発現細胞の非存在下での細胞傷害性及びＴ細胞活性化の欠如によって実証された（図３４Ａ～３４Ｃ、実施例１２を参照されたい）。
ＧＰＲＣ５Ｄオフターゲット結合評価
ＧＰＲＣ５Ｄバインダー（ＧＣ５Ｂ１２５７．００１、抗ＧＰＲＣ５Ｄ ＧＣ５Ｂ６８０ ｓｃＦｖ－Ｆｃ）は、３７１の完全長ヒト原形質膜及び表面係留ヒト分泌タンパク（全ての既知のＧタンパク共役受容体ファミリーＣグループ５［ＧＰＲＣ５］ファミリーメンバーを含む）及び５８６８ヘテロダイマーのライブラリを個々に発現する固定ＨＥＫ２９３に対する結合についてスクリーニングした場合、その一次標的であるＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合することが決定された。オフターゲット相互作用は同定されず、ＢＧＣＢ４９１に含まれるＧＰＲＣ５Ｄ結合ドメインの標的特異性が実証された。
ＢＣＭＡオフターゲット結合評価
ＢＣＭＡバインダー（ＢＣＭＢ６０１．００１、抗ＢＣＭＡ ＢＣＭＢ５１９ ｓｃＦｖ－Ｆｃ）は、５，４７５完全長ヒト形質膜及び細胞表面に繋留されたヒト分泌タンパク質及び３７１ヘテロ二量体のライブラリを個々に発現する固定ＨＥＫ２９３細胞に対する結合についてスクリーニングしたとき、その一次標的であるＢＣＭＡ（ＴＮＦＲＳＦ１７）に特異的に結合することが決定された。オフターゲット相互作用は同定されず、ＢＧＣＢ４９１に含まれるＢＣＭＡ結合ドメインの標的特異性が実証された。
腫瘍関連抗原陰性細胞株における機能的選択性
ＢＧＣＢ４９１の抗原の特異性は、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＢＣＭＡ、及びＣＤ３の発現を欠く（フローサイトメトリーによって確認される）５つのがん細胞株のパネルを使用するインビトロ機能アッセイにおいて更に特徴付けられるが、トランスクリプトミクスによって、公知のがん細胞表面タンパク質の＞５０％を発現することが予測される。健常ドナー由来Ｔ細胞との共培養研究において、ＢＧＣＢ４９１を、ＧＰＲＣ５Ｄ及びＢＣＭＡを発現する標的細胞（すなわち、Ｈ９２９細胞）との共培養に添加した場合の、グランザイムＢ、インターフェロン（interferon、ＩＦＮ）－γ、腫瘍壊死因子（tumor necrosis factor、ＴＮＦ）－α、及びインターロイキン（interleukin、ＩＬ）－２の抗体依存性Ｔ細胞性サイトカイン放出の誘導について評価する。これらのデータにより、ＧＰＲＣ５Ｄ及びＢＣＭＡに対するＢＧＣＢ４９１の抗原特異性が支持され得る。
実施例１４：局所的耐性
皮膚反応を、それぞれ０．０５及び０．５ｍｇ／ｍＬで２～２．５ｍＬ中０．１又は０．０１ｍｇ／ｋｇのＢＧＣＢ４９１ ＳＣで処置したミニブタにおけるＰＫ研究において評価した（実施例１６におけるＧｏｔｔｉｎｇｅｎミニブタ薬物動態を参照されたい）。皮膚反応は観察されなかった。
実施例１５：前臨床種における薬物動態
マウスにおける薬物動態
ＢＧＣＢ４９１の血清中及び腫瘍ＰＫ特性は、０．５及び０．１ｍｇ／ｋｇでの単回ＩＶ注射後のＮＳＧ ＭＭ．１Ｓ異種移植マウスモデルにおいて特徴付けられる。
カニクイザルにおける薬物動態
ＢＧＣＢ４９１のＰＫ特性は、雌カニクイザル（ｎ＝３）における単回投与非ＧＬＰ ＰＫ試験に従って特徴付けた。ＢＧＣＢ４９１を、０．５ｍｇ／ｋｇ（１０ｍＭヒスチジン、ｐＨ ６．５）の用量レベルでカニクイザルにＩＶ投与した。ＭＳＤからの認定電気化学発光免疫アッセイ（ＥＣＬＩＡ）を使用して、総ＢＧＣＢ４９１の濃度を定量した。１用量間隔の最大血清中濃度（Ｃｍａｘ）及び血清中濃度対時間曲線下面積（ＡＵＣ）によって評価したＢＧＣＢ４９１全身薬物曝露を表３１に示し、ＢＧＣＢ４９１血清中濃度を図３７に示す。
Figure 2024507180000042
 ＡＵＣｉｎｆ、無限大に外挿された血清濃度－時間曲線下面積；ＡＵＣｌａｓｔ、最後のサンプリング点までの血清濃度－時間曲線下面積；ＣＬ、全身クリアランス；Ｃｍａｘ、最大観察血清中濃度；ＩＶ、静脈内；ＰＫ、薬物動態；ＳＤ、標準偏差；Ｔ１／２、最終フェーズ消失半減期；Ｖｚ、総全身クリアランス。
ゲッティンゲンミニブタにおける薬物動態
ＢＧＣＢ４９１のＰＫ特性は、雄ゲッティンゲンミニブタ（ｎ＝４／群）における単回投与非ＧＬＰ ＰＫ試験に従って特徴付けた。ＢＧＣＢ４９１を、０．１ｍｇ／ｋｇの用量レベルでミニブタにＩＶ投与し、又は０．１若しくは０．０１ｍｇ／ｋｇ（１０ｍＭヒスチジン、ｐＨ ６．５）の用量レベルでＳＣ投与した。ＭＳＤからの適格なＥＣＬＩＡを使用して、総ＢＧＣＢ４９１の濃度を定量した。ミニブタＰＫ研究を使用して、ＢＧＣＢ４９１についての吸収速度（ｋａ）及びＳＣバイオアベイラビリティ（Ｆ）パラメータを推定した。薬物曝露（Ｃｍａｘ及びＡＵＣｉｎｆ）は、０．０１～０．１ｍｇ／ｋｇの用量範囲でほぼ用量比例的に用量とともに増加した。１つの投薬間隔のＣｍａｘ及びＡＵＣによって評価したＢＧＣＢ４９１全身薬物曝露を表３２に示し、ＢＧＣＢ４９１血清中濃度を図３９Ａに示す。
Figure 2024507180000043
 ＡＵＣｉｎｆ、無限大に外挿された血清濃度－時間曲線下面積；ＡＵＣｌａｓｔ、最後のサンプリング点までの血清濃度－時間曲線下面積；ＣＬ、全身クリアランス；Ｃｍａｘ、最大観察血清中濃度；ＩＶ、静脈内；ＰＫ、薬物動態；ＳＤ、標準偏差；Ｔ１／２、最終フェーズ消失半減期；Ｔｍａｘ、最大血清濃度までの時間；Ｖｚ、総全身クリアランス。
外挿ＡＵＣは、全ての動物について＞２０％であった。
ａＴｍａｘの中央値及び範囲を示す。
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５．Ｕｓｍａｎｉ ＳＺ，Ｂｅｒｄｅｊａ ＪＧ，Ｔｒｕｐｐｅｌ－Ｈａｒｔｍａｎｎ Ａ，ｅｔ ａｌ．ＫａｒＭＭａ－４：Ｉｄｅｃａｂｔａｇｅｎｅ ｖｉｃｌｅｕｃｅｌ（ｉｄｅ－ｃｅｌ，ｂｂ２１２１），ａ ＢＣＭＡ－ｄｉｒｅｃｔｅｄ ＣＡＲ Ｔ－ｃｅｌｌ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｈｉｇｈ－ｒｉｓｋ ｎｅｗｌｙ ｄｉａｇｎｏｓｅｄ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．２０２１；３９（１５＿ｓｕｐｐｌ）：ＴＰＳ８０５３．ｄｏｉ：１０．１２００／ＪＣＯ．２０２１．３９．１５＿ｓｕｐｐｌ．ＴＰＳ８０５３
６．Ｂｅｒｄｅｊａ ＪＧ，Ｋｒｉｓｈｎａｎ ＡＹ，Ｏｒｉｏｌ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｕｐｄａｔｅｄ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ａ ｐｈａｓｅ １，ｆｉｒｓｔ－ｉｎ－ｈｕｍａｎ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔａｌｑｕｅｔａｍａｂ，ａ Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆａｍｉｌｙ Ｃ ｇｒｏｕｐ ５ ｍｅｍｂｅｒ Ｄ（ＧＰＲＣ５Ｄ）ｘ ＣＤ３ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ，ｉｎ ｒｅｌａｐｓｅｄ／ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ（ＭＭ）．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．２０２１；３９（１５＿ｓｕｐｐｌ）：８００８．ｄｏｉ：１０．１２００／ＪＣＯ．２０２１．３９．１５＿ｓｕｐｐｌ．８００８
７．Ｕｓｍａｎｉ ＳＺ，Ｂｅｒｄｅｊａ ＪＧ，Ｍａｄｄｕｒｉ Ｄ，ｅｔ ａｌ．Ｃｉｌｔａｃａｂｔａｇｅｎｅ ａｕｔｏｌｅｕｃｅｌ，ａ Ｂ－ｃｅｌｌ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ａｎｔｉｇｅｎ（ＢＣＭＡ）－ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｔ－ｃｅｌｌ（ＣＡＲ－Ｔ）ｔｈｅｒａｐｙ，ｉｎ ｒｅｌａｐｓｅｄ／ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ（Ｒ／Ｒ ＭＭ）：ｕｐｄａｔｅｄ ｒｅｓｕｌｔｓ ｆｒｏｍ ＣＡＲＴＩＴＵＤＥ－１．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．２０２１；３９（１５＿ｓｕｐｐｌ）：８００５．ｄｏｉ：１０．１２００／ＪＣＯ．２０２１．３９．１５＿ｓｕｐｐｌ．８００５
８．Ｍａｕｓ ＭＶ，Ｊｕｎｅ ＣＨ．Ｚｏｏｍ Ｚｏｏｍ：ｒａｃｉｎｇ ＣＡＲｓ ｆｏｒ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１３；１９（８）：１９１７－１９１９．ｄｏｉ：１０．１１５８／１０７８－０４３２．ＣＣＲ－１３－０１６８
９．Ｄａｒｃｅ ＪＲ，Ａｒｅｎｄｔ ＢＫ，Ｃｈａｎｇ ＳＫ，Ｊｅｌｉｎｅｋ ＤＦ．Ｄｉｖｅｒｇｅｎｔ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＢＡＦＦ ｏｎ ｈｕｍａｎ ｍｅｍｏｒｙ Ｂ ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｉｎｔｏ Ｉｇ－ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００７；１７８（９）：５６１２－５６２２．ｄｏｉ：１０．４０４９／ｊｉｍｍｕｎｏｌ．１７８．９．５６１２
１０．Ｔａｉ ＹＴ，Ａｎｄｅｒｓｏｎ ＫＣ．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｂ－ｃｅｌｌ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ａｎｔｉｇｅｎ ｉｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．２０１５；７（１１）：１１８７－１１９９．ｄｏｉ：１０．２２１７／ｉｍｔ．１５．７７
１１．Ｐａｔｅｌ ＤＲ，Ｗａｌｌｗｅｂｅｒ ＨＪ，Ｙｉｎ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎ ＡＰＲＩＬ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｂ ｃｅｌｌ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ａｎｔｉｇｅｎ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００４；２７９（１６）：１６７２７－１６７３５．ｄｏｉ：１０．１０７４／ｊｂｃ．Ｍ３１２３１６２００
１２．Ｌａｕｒｅｎｔ ＳＡ，Ｈｏｆｆｍａｎｎ ＦＳ，Ｋｕｈｎ ＰＨ，ｅｔ ａｌ．γ－Ｓｅｃｒｅｔａｓｅ ｄｉｒｅｃｔｌｙ ｓｈｅｄｓ ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ＢＣＭＡ ｆｒｏｍ ｐｌａｓｍａ ｃｅｌｌｓ．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．２０１５；６：７３３３．Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ２０１５ Ｊｕｎ １１．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｃｏｍｍｓ８３３３
１３．Ｐｉｌｌａｒｉｓｅｔｔｉ Ｋ，Ｐｏｗｅｒｓ Ｇ，Ｌｕｉｓｔｒｏ Ｌ，ｅｔ ａｌ．Ｔｅｃｌｉｓｔａｍａｂ ｉｓ ａｎ ａｃｔｉｖｅ Ｔ ｃｅｌｌ－ｒｅｄｉｒｅｃｔｉｎｇ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｇａｉｎｓｔ Ｂ－ｃｅｌｌ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ａｎｔｉｇｅｎ ｆｏｒ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ．Ｂｌｏｏｄ Ａｄｖ．２０２０；４（１８）：４５３８－４５４９．ｄｏｉ：１０．１１８２／ｂｌｏｏｄａｄｖａｎｃｅｓ．２０２０００２３９３
１４．Ｓａｎｃｈｅｚ Ｅ，Ｌｉ Ｍ，Ｋｉｔｔｏ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｓｅｒｕｍ Ｂ－ｃｅｌｌ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ａｎｔｉｇｅｎ ｉｓ ｅｌｅｖａｔｅｄ ｉｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ ａｎｄ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ ｓｔａｔｕｓ ａｎｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ．Ｂｒ Ｊ Ｈａｅｍａｔｏｌ．２０１２、１５８（６）：７２７－７３８．ｄｏｉ：１０．１１１１／ｊ．１３６５－２１４１．２０１２．０９２４１．ｘ
１５．Ｈｕｅｈｌｓ ＡＭ，Ｃｏｕｐｅｔ ＴＡ，Ｓｅｎｔｍａｎ ＣＬ．Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ－ｃｅｌｌ ｅｎｇａｇｅｒｓ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２０１５；９３（３）：２９０－２９６．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｉｃｂ．２０１４．９３
１６．Ｓｔｒｏｈｌ ＷＲ，Ｎａｓｏ Ｍ．Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ－ｃｅｌｌ ｒｅｄｉｒｅｃｔｉｏｎ ｖｅｒｓｕｓ ｃｈｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＣＡＲ）－Ｔ ｃｅｌｌｓ ａｓ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｔｏ ｋｉｌｌ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ．Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｂａｓｅｌ）．２０１９；８（３）：４１．Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ２０１９ Ｊｕｌ ３．ｄｏｉ：１０．３３９０／ａｎｔｉｂ８０３００４１
１７．Ｓｈａｈ Ｎ，Ｃｈａｒｉ Ａ，Ｓｃｏｔｔ Ｅ，Ｍｅｚｚｉ Ｋ，Ｕｓｍａｎｉ ＳＺ．Ｂ－ｃｅｌｌ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ａｎｔｉｇｅｎ（ＢＣＭＡ）ｉｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ：ｒａｔｉｏｎａｌｅ ｆｏｒ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ａｎｄ ｃｕｒｒｅｎｔ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ．２０２０；３４（４）：９８５－１００５．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓ４１３７５－０２０－０７３４－ｚ
１８．Ｂｒａｕｎｅｒ－Ｏｓｂｏｒｎｅ Ｈ，Ｊｅｎｓｅｎ ＡＡ，Ｓｈｅｐｐａｒｄ ＰＯ，Ｂｒｏｄｉｎ Ｂ，Ｋｒｏｇｓｇａａｒｄ－Ｌａｒｓｅｎ Ｐ，Ｏ’Ｈａｒａ Ｐ．Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｈｕｍａｎ ｏｒｐｈａｎ ｆａｍｉｌｙ Ｃ Ｇ－ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ＧＰＲＣ５Ｄ．Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ．２００１；１５１８（３）：２３７－２４８．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｓ０１６７－４７８１（０１）００１９７－ｘ
１９．Ａｔａｍａｎｉｕｋ Ｊ，Ｇｌｅｉｓｓ Ａ，Ｐｏｒｐａｃｚｙ Ｅ，ｅｔ ａｌ．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ５Ｄ ｉｎ ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐｏｏｒ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ．Ｅｕｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．２０１２、４２（９）：９５３－９６０．ｄｏｉ：１０．１１１１／ｊ．１３６５－２３６２．２０１２．０２６７９．ｘ
２０．Ｆｒｉｇｙｅｓｉ Ｉ，Ａｄｏｌｆｓｓｏｎ Ｊ，Ａｌｉ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｒｏｂｕｓｔ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｐｌａｓｍａ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ．Ｂｌｏｏｄ．２０１４；１２３（９）：１３３６－１３４０．ｄｏｉ：１０．１１８２／ｂｌｏｏｄ－２０１３－０９－５２９８００
２１．Ｓｍｉｔｈ ＥＬ，Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ Ｋ，Ｓｔａｅｈｒ Ｍ，ｅｔ ａｌ．ＧＰＲＣ５Ｄ ｉｓ ａ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ ｗｉｔｈ ｒａｔｉｏｎａｌｌｙ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ＣＡＲ Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．２０１９；１１（４８５）：ｅａａｕ７７４６．ｄｏｉ：１０．１１２６／ｓｃｉｔｒａｎｓｌｍｅｄ．ａａｕ７７４６
２２．Ｐｉｌｌａｒｉｓｅｔｔｉ Ｋ，Ｅｄａｖｅｔｔａｌ Ｓ，Ｍｅｎｄｏｎｃａ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ａ Ｔ－ｃｅｌｌ－ｒｅｄｉｒｅｃｔｉｎｇ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｇ－ｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｌａｓｓ ５ ｍｅｍｂｅｒ Ｄ ｘ ＣＤ３ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｏ ｔｒｅａｔ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ．Ｂｌｏｏｄ．２０２０；１３５（１５）：１２３２－１２４３．ｄｏｉ：１０．１１８２／ｂｌｏｏｄ．２０１９００３３４２
２３．Ｖｅｒｋｌｅｉｊ ＣＰＭ，Ｂｒｏｅｋｍａｎｓ ＭＥＣ，ｖａｎ Ｄｕｉｎ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ ｏｆ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ＧＰＲＣ５ＤｘＣＤ３ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔａｌｑｕｅｔａｍａｂ ｉｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ．Ｂｌｏｏｄ Ａｄｖ．２０２１；５（８）：２１９６－２２１５．ｄｏｉ：１０．１１８２／ｂｌｏｏｄａｄｖａｎｃｅｓ．２０２０００３８０５
２４．Ｋｏｄａｍａ Ｔ，Ｋｏｃｈｉ Ｙ，Ｎａｋａｉ Ｗ，ｅｔ ａｌ．Ａｎｔｉ－ＧＰＲＣ５Ｄ／ＣＤ３ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ－ｃｅｌｌ－ｒｅｄｉｒｅｃｔｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ．Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．２０１９；１８（９）：１５５５－１５６４．ｄｏｉ：１０．１１５８／１５３５－７１６３．ＭＣＴ－１８－１２１６
２５．Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ ＲＯ，Ｅｖｂｕｏｍｗａｎ ＭＯ，Ｐｉｔｔａｌｕｇａ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ｂ－ｃｅｌｌ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ａｎｔｉｇｅｎ ｉｓ ａ ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ａｄｏｐｔｉｖｅ Ｔ－ｃｅｌｌ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１３；１９（８）：２０４８－２０６０．ｄｏｉ：１０．１１５８／１０７８－０４３２．ＣＣＲ－１２－２４２２
２６．Ｓｅｃｋｉｎｇｅｒ Ａ，Ｄｅｌｇａｄｏ ＪＡ，Ｍｏｓｅｒ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ｔａｒｇｅｔ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｙ，ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ＢＣＭＡ－Ｔ Ｃｅｌｌ Ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ＥＭ８０１ ｆｏｒ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｍｙｅｌｏｍａ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ．２０１７；３１（３）：３９６－４１０．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｃｅｌｌ．２０１７．０２．００２
２７．Ｉｎｏｕｅ Ｓ，Ｎａｍｂｕ Ｔ，Ｓｈｉｍｏｍｕｒａ Ｔ．Ｔｈｅ ＲＡＩＧ ｆａｍｉｌｙ ｍｅｍｂｅｒ，ＧＰＲＣ５Ｄ，ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｈａｒｄ－ｋｅｒａｔｉｎｉｚｅｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ．Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２００４；１２２（３）：５６５－５７３．ｄｏｉ：１０．１０４６／ｊ．００２２－２０２Ｘ．２００４．１２６２８．ｘ
２８．Ｒａｊｋｕｍａｒ ＳＶ，Ｈａｒｏｕｓｓｅａｕ ＪＬ，Ｄｕｒｉｅ Ｂ，ｅｔ ａｌ．Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｕｎｉｆｏｒｍ ｒｅｐｏｒｔｉｎｇ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌｓ：ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｍｙｅｌｏｍａ Ｗｏｒｋｓｈｏｐ Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ Ｐａｎｅｌ １．Ｂｌｏｏｄ．２０１１；１１７（１８）：４６９１－４６９５．ｄｏｉ：１０．１１８２／ｂｌｏｏｄ－２０１０－１０－２９９４８７
２９．Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ－Ａｂｒｅｕ Ｄ，Ｂｏｒｄｏｎｉ Ａ，Ｚｕｃｃａ Ｅ．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ．Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌ．２００７；１８ Ｓｕｐｐｌ １：ｉ３－ｉ８．ｄｏｉ：１０．１０９３／ａｎｎｏｎｃ／ｍｄｌ４４３
３０．Ｍｉｃｈｅｌｓ ＴＣ，Ｐｅｔｅｒｓｅｎ ＫＥ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ：ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ａｍ Ｆａｍ Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ．２０１７；９５（６）：３７３－３８３．
３１．Ｇａｎｄｈｉ ＵＨ，Ｃｏｒｎｅｌｌ ＲＦ，Ｌａｋｓｈｍａｎ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｏｕｔｃｏｍｅｓ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ ｔｏ ＣＤ３８－ｔａｒｇｅｔｅｄ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ．２０１９；３３（９）：２２６６－２２７５．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓ４１３７５－０１９－０４３５－７
３２．Ｄｉｍｏｐｏｕｌｏｓ ＭＡ，Ｓａｎ－Ｍｉｇｕｅｌ Ｊ，Ｂｅｌｃｈ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｄａｒａｔｕｍｕｍａｂ ｐｌｕｓ ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ ａｎｄ ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ ｖｅｒｓｕｓ ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ ａｎｄ ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ ｉｎ ｒｅｌａｐｓｅｄ ｏｒ ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ：ｕｐｄａｔｅｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＰＯＬＬＵＸ．Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ．２０１８；１０３（１２）：２０８８－２０９６．ｄｏｉ：１０．３３２４／ｈａｅｍａｔｏｌ．２０１８．１９４２８２
３３．Ｋｕｍａｒ ＳＫ，Ｃａｌｌａｎｄｅｒ ＮＳ，Ａｄｅｋｏｌａ Ｋ，ｅｔ ａｌ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｍｙｅｌｏｍａ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ３．２０２１，ＮＣＣＮ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｐｒａｃｔｉｃｅ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｉｎ ｏｎｃｏｌｏｇｙ．Ｊ Ｎａｔｌ Ｃｏｍｐｒ Ｃａｎｃ Ｎｅｔｗ．２０２０；１８（１２）：１６８５－１７１７．Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ２０２０ Ｄｅｃ ２．ｄｏｉ：１０．６００４／ｊｎｃｃｎ．２０２０．００５７
３４．Ｊｏｈｎｓｏｎ ＪＩ，Ｄｅｃｋｅｒ Ｓ，Ｚａｈａｒｅｖｉｔｚ Ｄ，ｅｔ ａｌ．Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｄｒｕｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ＮＣＩ ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｍｏｄｅｌｓ ａｎｄ ｅａｒｌｙ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌｓ．Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ．２００１；８４（１０）：１４２４－１４３１．ｄｏｉ：１０．１０５４／ｂｊｏｃ．２００１．１７９６
３５．Ｃｈｉｕ Ａ，Ｘｕ Ｗ，Ｈｅ Ｂ，ｅｔ ａｌ．Ｈｏｄｇｋｉｎ ｌｙｍｐｈｏｍａ ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｒｅｓｓ ＴＡＣＩ ａｎｄ ＢＣＭＡ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ ｇｅｎｅｒａｔｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ａｎｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｓｉｇｎａｌｓ ｉｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ＢＡＦＦ ａｎｄ ＡＰＲＩＬ．Ｂｌｏｏｄ．２００７；１０９（２）：７２９－７３９．ｄｏｉ：１０．１１８２／ｂｌｏｏｄ－２００６－０４－０１５９５８
３６．Ａｖｅｒｙ ＤＴ，Ｋａｌｌｅｄ ＳＬ，Ｅｌｌｙａｒｄ ＪＩ，ｅｔ ａｌ．ＢＡＦＦ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ ｐｌａｓｍａｂｌａｓｔｓ ｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ｍｅｍｏｒｙ Ｂ ｃｅｌｌｓ［ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ ａｐｐｅａｒｓ ｉｎ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．２００４ Ａｐｒ；１１３（７）：１０６９］．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．２００３；１１２（２）：２８６－２９７．ｄｏｉ：１０．１１７２／ＪＣＩ１８０２５
３７．Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ ＢＰ，Ｒａｍａｎ ＶＳ，Ｅｒｉｃｋｓｏｎ ＬＤ，ｅｔ ａｌ．ＢＣＭＡ ｉｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ ｌｏｎｇ－ｌｉｖｅｄ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｐｌａｓｍａ ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．２００４；１９９（１）：９１－９８．ｄｏｉ：１０．１０８４／ｊｅｍ．２００３１３３０
３８．Ｂｕ ＤＸ，Ｓｉｎｇｈ Ｒ，Ｃｈｏｉ ＥＥ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｅ－ｃｌｉｎｉｃａｌ ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂ ｃｅｌｌ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ａｎｔｉｇｅｎ（ＢＣＭＡ）ａｓ ａ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ Ｔ ｃｅｌｌ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．２０１８；９（４０）：２５７６４－２５７８０．Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ２０１８ Ｍａｙ ２５．ｄｏｉ：１０．１８６３２／ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．２５３５９
３９．Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ ＲＯ，Ｅｖｂｕｏｍｗａｎ ＭＯ，Ｐｉｔｔａｌｕｇａ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ｂ－ｃｅｌｌ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ａｎｔｉｇｅｎ ｉｓ ａ ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ａｄｏｐｔｉｖｅ Ｔ－ｃｅｌｌ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１３；１９（８）：２０４８－２０６０．ｄｏｉ：１０．１１５８／１０７８－０４３２．ＣＣＲ－１２－２４２２
４０．Ｌａａｂｉ Ｙ，Ｇｒａｓ ＭＰ，Ｃａｒｂｏｎｎｅｌ Ｆ，ｅｔ ａｌ．Ａ ｎｅｗ ｇｅｎｅ，ＢＣＭ，ｏｎ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ １６ ｉｓ ｆｕｓｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ２ ｇｅｎｅ ｂｙ ａ ｔ（４；１６）（ｑ２６；ｐ１３）ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ｉｎ ａ ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｔ ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｍａ．ＥＭＢＯ Ｊ．１９９２；１１（１１）：３８９７－３９０４．
４１．Ｌａａｂｉ Ｙ，Ｇｒａｓ ＭＰ，Ｂｒｏｕｅｔ ＪＣ，Ｂｅｒｇｅｒ Ｒ，Ｌａｒｓｅｎ ＣＪ，Ｔｓａｐｉｓ Ａ．Ｔｈｅ ＢＣＭＡ ｇｅｎｅ，ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｄｕｒｉｎｇ Ｂ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ，ｉｓ ｂｉｄｉｒｅｃｔｉｏｎａｌｌｙ ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９９４；２２（７）：１１４７－１１５４．ｄｏｉ：１０．１０９３／ｎａｒ／２２．７．１１４７
４２．Ｋａｌｌｅｄ ＳＬ．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ＢＡＦＦ ｉｎ ｉｍｍｕｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．２００５；２０４：４３－５４．ｄｏｉ：１０．１１１１／ｊ．０１０５－２８９６．２００５．００２１９．ｘ
４３．Ｎｇ ＬＧ，Ｓｕｔｈｅｒｌａｎｄ ＡＰ，Ｎｅｗｔｏｎ Ｒ，ｅｔ ａｌ．Ｂ ｃｅｌｌ－ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ ｂｅｌｏｎｇｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ＴＮＦ ｆａｍｉｌｙ（ＢＡＦＦ）－Ｒ ｉｓ ｔｈｅ ｐｒｉｎｃｉｐａｌ ＢＡＦＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆａｃｉｌｉｔａｔｉｎｇ ＢＡＦＦ ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ Ｔ ａｎｄ Ｂ ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００４；１７３（２）：８０７－８１７．ｄｏｉ：１０．４０４９／ｊｉｍｍｕｎｏｌ．１７３．２．８０７
４４．Ｖｅｎｋａｔｅｓｈａｉａｈ ＳＵ，Ｂａｍ Ｒ，Ｌｉ Ｘ，Ｋｈａｎ Ｓ，Ｌｉｎｇ Ｗ，Ｒａｎｄａｌ ＳＳ，Ｙａｃｃｏｂｙ Ｓ．ＧＰＲＣ５Ｄ ｉｓ ａ ｃｅｌｌ ｓｕｒｆａｃｅ ｐｌａｓｍａ ｃｅｌｌ ｍａｒｋｅｒ ｗｈｏｓｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｓ ｈｉｇｈ ｉｎ ｍｙｅｌｏｍａ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｒｅｄｕｃｅｄ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｃｏｃｕｌｔｕｒｅ ｗｉｔｈ ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｓ．Ｂｌｏｏｄ．２０１３；１２２（２１）：３０９９．ｄｏｉ：１０．１１８２／ｂｌｏｏｄ．Ｖ１２２．２１．３０９９．３０９９
４５．Ｋａｍｐｅｒｓｃｈｒｏｅｒ Ｃ，Ｓｈｅｎｔｏｎ Ｊ，Ｌｅｂｒｅｃ Ｈ，Ｌｅｉｇｈｔｏｎ ＪＫ，Ｍｏｏｒｅ ＰＡ，Ｔｈｏｍａｓ Ｏ．Ｓｕｍｍａｒｙ ｏｆ ａ ｗｏｒｋｓｈｏｐ ｏｎ ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｓａｆｅｔｙ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ＣＤ３ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃｓ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｃｏｌ．２０２０；１７（１）：６７－８５．ｄｏｉ：１０．１０８０／１５４７６９１Ｘ．２０２０．１７２９９０２
４６．Ｌｉ Ｊ，Ｐｉｓｋｏｌ Ｒ，Ｙｂａｒｒａ Ｒ，ｅｔ ａｌ．ＣＤ３ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｒｅｌｅａｓｅ ｉｓ ｄｉｓｐｅｎｓａｂｌｅ ｆｏｒ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．２０１９；１１（５０８）：ｅａａｘ８８６１．ｄｏｉ：１０．１１２６／ｓｃｉｔｒａｎｓｌｍｅｄ．ａａｘ８８６１
４７．Ｌｅｏｎｇ ＳＲ，Ｓｕｋｕｍａｒａｎ Ｓ，Ｈｒｉｓｔｏｐｏｕｌｏｓ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ａｎ ａｎｔｉ－ＣＤ３／ａｎｔｉ－ＣＬＬ－１ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｂｌｏｏｄ．２０１７；１２９（５）：６０９－６１８．ｄｏｉ：１０．１１８２／ｂｌｏｏｄ－２０１６－０８－７３５３６５
４８．Ｓｉｎｇｈ Ａ，Ｄｅｅｓ Ｓ，Ｇｒｅｗａｌ ＩＳ．Ｏｖｅｒｃｏｍｉｎｇ ｔｈｅ ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＣＤ３＋ Ｔ－ｃｅｌｌ ｒｅｄｉｒｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ．Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ．２０２１；１２４（６）：１０３７－１０４８．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓ４１４１６－０２０－０１２２５－５
４９．Ｊａｉｎ Ｔ，Ｌｉｔｚｏｗ ＭＲ．Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｔｏｘｉｃｉｔｉｅｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｎｏｖｅｌ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ａｇｅｎｔｓ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｔｈｅｒ Ａｄｖ Ｈｅｍａｔｏｌ．２０２０；１１：２０４０６２０７１９８９９８９７．Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ２０２０ Ｊａｎ ２０．ｄｏｉ：１０．１１７７／２０４０６２０７１９８９９８９７
５０．Ｌｉｎｇ Ｊ，Ｚｈｏｕ Ｈ，Ｊｉａｏ Ｑ，Ｄａｖｉｓ ＨＭ．Ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｅｓ ｓｃａｌｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ｉｎｉｔｉａｌ ｌｏｏｋ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００９；４９（１２）：１３８２－１４０２．ｄｏｉ：１０．１１７７／００９１２７０００９３３７１３４
５１．Ｗｏｏ Ｓ，Ｊｕｓｋｏ ＷＪ．Ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｅｓ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ ｏｆ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ．Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂ Ｄｉｓｐｏｓ．２００７；３５（９）：１６７２－１６７８．ｄｏｉ：１０．１１２４／ｄｍｄ．１０７．０１５２４８
５２．Ｌｉ Ｊ，Ｓｔａｇｇ ＮＪ，Ｊｏｈｎｓｔｏｎ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｍｅｍｂｒａｎｅ－ｐｒｏｘｉｍａｌ ｅｐｉｔｏｐｅ ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｓ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ Ｔ ｃｅｌｌ ｓｙｎａｐｓｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｂｙ ａｎｔｉ－ＦｃＲＨ５／ＣＤ３ ａｎｄ ｉｓ ａ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ ｆｏｒ ｍｙｅｌｏｍａ ｃｅｌｌ ｋｉｌｌｉｎｇ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ．２０１７；３１（３）：３８３－３９５．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｃｅｌｌ．２０１７．０２．００１
５３．ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ．ＮＣＴ０２８７９６９５：Ｂｌｉｎａｔｕｍｏｍａｂ ａｎｄ ｎｉｖｏｌｕｍａｂ ｗｉｔｈ ｏｒ ｗｉｔｈｏｕｔ ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ ｉｎ ｔｒｅａｔｉｎｇ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｐｏｏｒ－ｒｉｓｋ ｒｅｌａｐｓｅｄ ｏｒ ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ ＣＤ１９＋ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ Ｂ－ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ．ｈｔｔｐｓ：／／ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ／ｃｔ２／ｓｈｏｗ／ＮＣＴ０２８７９６９５．Ａｃｃｅｓｓｅｄ：２３ Ｊｕｎｅ ２０２１．
５４．Ｇｕｉｌｌｅｒｅｙ Ｃ，Ｎａｋａｍｕｒａ Ｋ，Ｐｉｃｈｌｅｒ ＡＣ，ｅｔ ａｌ．Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ ａｎｔｉ－ＣＤ１３７ ｍＡｂ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｉｎ ａ ｍｏｕｓｅ ｍｙｅｌｏｍａ ｍｏｄｅｌ．ＪＣＩ Ｉｎｓｉｇｈｔ．２０１９；５（１４）：ｅ１２５９３２．Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ２０１９ Ｊｕｎ １３．ｄｏｉ：１０．１１７２／ｊｃｉ．ｉｎｓｉｇｈｔ．１２５９３２
本明細書で引用する全ての特許、公開特許、及び引用文献による教示はその全体が参照により組み込まれる。
例示的実施形態について具体的に示し、記載してきたが、当業者らは、添付の特許請求の範囲に包含される実施形態の範囲から逸脱することなく、形態及び詳細における様々な変更を行い得ることを理解する。
配列のリスト
配列番号１ ＣＤ３Ｂ３７６ ＬＣＤＲ１
ＴＧＴＳＳＮＩＧＴＹＫＦＶＳ
配列番号２ ＣＤ３Ｂ３７６ ＬＣＤＲ２
ＥＶＳＫＲＰＳ
配列番号３ ＣＤ３Ｂ３７６ ＬＣＤＲ３
ＶＳＹＡＧＳＧＴＬＬ
配列番号４ ＣＤ３Ｂ３７６ ＨＣＤＲ１
ＧＤＳＶＦＮＮＮＡＡＷＳ
配列番号５ ＣＤ３Ｂ３７６ ＨＣＤＲ２
ＲＴＹＹＲＳＫＷＬＹＤ
配列番号６ ＣＤ３Ｂ３７６ ＨＣＤＲ３
ＧＹＳＳＳＦＤＹ
配列番号７ ＣＤ３Ｂ３７６ ＶＬ
ＱＳＡＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩＳＣＴＧＴＳＳＮＩＧＴＹＫＦＶＳＷＹＱＱＨＰＤＫＡＰＫＶＬＬＹＥＶＳＫＲＰＳＧＶＳＳＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＱＡＤＹＨＣＶＳＹＡＧＳＧＴＬＬＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号８ ＣＤ３Ｂ３７６ ＶＨ
ＱＶＱＬＱＱＳＧＰＲＬＶＲＰＳＱＴＬＳＬＴＣＡＩＳＧＤＳＶＦＮＮＮＡＡＷＳＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＲＴＹＹＲＳＫＷＬＹＤＹＡＶＳＶＫＳＲＩＴＶＮＰＤＴＳＲＮＱＦＴＬＱＬＮＳＶＴＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＲＧＹＳＳＳＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号９ ＧＣ５Ｂ６８０ ＬＣＤＲ１
ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＤＧＮＴＹＬＳ
配列番号１０ ＧＣ５Ｂ６８０ ＬＣＤＲ２
ＫＩＳＮＲＦＦ
配列番号１１ ＧＣ５Ｂ６８０ ＬＣＤＲ３
ＭＱＡＴＱＦＰＨＴ
配列番号１２ ＧＣ５Ｂ６８０ ＨＣＤＲ１
ＧＦＳＬＴＮＩＲＭＳＶＳ
配列番号１３ ＧＣ５Ｂ６８０ ＨＣＤＲ２
ＨＩＦＳＮＤＥＫＳ
配列番号１４ ＧＣ５Ｂ６８０ ＨＣＤＲ３
ＭＲＬＰＹＧＭＤＶ
配列番号１５ ＧＣ５Ｂ６８０ ＶＬ
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＳＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＳＤＧＮＴＹＬＳＷＬＱＱＲＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＫＩＳＮＲＦＦＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＡＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＡＴＱＦＰＨＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１６ ＧＣ５Ｂ６８０ ＶＨ
ＱＶＴＬＫＥＳＧＰＶＬＶＫＰＴＥＴＬＴＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＮＩＲＭＳＶＳＷＩＲＱＰＰＧＫＡＬＥＷＬＡＨＩＦＳＮＤＥＫＳＹＳＴＳＬＫＳＲＬＴＩＳＲＤＴＳＫＳＱＶＶＬＴＬＴＮＶＤＰＶＤＴＡＴＹＹＣＡＲＭＲＬＰＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号１７ ＢＣＭＢ５１９ ＬＣＤＲ１
ＲＡＳＱＳＩＳＳＳＦＬＴ
配列番号１８ ＢＣＭＢ５１９ ＬＣＤＲ２
ＧＡＳＳＲＡＴ
配列番号１９ ＢＣＭＢ５１９ ＬＣＤＲ３
ＱＨＹＧＳＳＰＭＹＴ
配列番号２０ ＢＣＭＢ５１９ ＨＣＤＲ１
ＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳ
配列番号２１ ＢＣＭＢ５１９ ＨＣＤＲ２
ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹ
配列番号２２ ＢＣＭＢ５１９ ＨＣＤＲ３
ＤＥＧＹＳＳＧＨＹＹＧＭＤＶ
配列番号２３ ＢＣＭＢ５１９ ＶＬ
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＩＳＳＳＦＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＧＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＨＹＧＳＳＰＭＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号２４ ＢＣＭＢ５１９ ＶＨ
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＥＧＹＳＳＧＨＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号２５ リンカー
ＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳ
配列番号２６ ＢＧＣＢ４６３重鎖１
ＱＶＱＬＱＱＳＧＰＲＬＶＲＰＳＱＴＬＳＬＴＣＡＩＳＧＤＳＶＦＮＮＮＡＡＷＳＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＲＴＹＹＲＳＫＷＬＹＤＹＡＶＳＶＫＳＲＩＴＶＮＰＤＴＳＲＮＱＦＴＬＱＬＮＳＶＴＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＲＧＹＳＳＳＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＳＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＲＦＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号２７ ＢＧＣＢ４６３軽鎖１
ＱＳＡＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩＳＣＴＧＴＳＳＮＩＧＴＹＫＦＶＳＷＹＱＱＨＰＤＫＡＰＫＶＬＬＹＥＶＳＫＲＰＳＧＶＳＳＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＱＡＤＹＨＣＶＳＹＡＧＳＧＴＬＬＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ
配列番号２８ ＢＧＣＢ４６３重鎖２
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＳＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＳＤＧＮＴＹＬＳＷＬＱＱＲＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＫＩＳＮＲＦＦＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＡＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＡＴＱＦＰＨＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＱＶＴＬＫＥＳＧＰＶＬＶＫＰＴＥＴＬＴＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＮＩＲＭＳＶＳＷＩＲＱＰＰＧＫＡＬＥＷＬＡＨＩＦＳＮＤＥＫＳＹＳＴＳＬＫＳＲＬＴＩＳＲＤＴＳＫＳＱＶＶＬＴＬＴＮＶＤＰＶＤＴＡＴＹＹＣＡＲＭＲＬＰＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＳＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＩＳＳＳＦＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＧＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＨＹＧＳＳＰＭＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＥＧＹＳＳＧＨＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号２９ ＢＧＣＢ４９１重鎖１
ＱＶＱＬＱＱＳＧＰＲＬＶＲＰＳＱＴＬＳＬＴＣＡＩＳＧＤＳＶＦＮＮＮＡＡＷＳＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＲＴＹＹＲＳＫＷＬＹＤＹＡＶＳＶＫＳＲＩＴＶＮＰＤＴＳＲＮＱＦＴＬＱＬＮＳＶＴＰＥＤＴＡＬＹＹＣＡＲＧＹＳＳＳＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＳＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＳＣＡＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＶＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＲＦＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＳＰＶＴＬＧＱＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＳＤＧＮＴＹＬＳＷＬＱＱＲＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＫＩＳＮＲＦＦＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＡＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＡＴＱＦＰＨＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＱＶＴＬＫＥＳＧＰＶＬＶＫＰＴＥＴＬＴＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＮＩＲＭＳＶＳＷＩＲＱＰＰＧＫＡＬＥＷＬＡＨＩＦＳＮＤＥＫＳＹＳＴＳＬＫＳＲＬＴＩＳＲＤＴＳＫＳＱＶＶＬＴＬＴＮＶＤＰＶＤＴＡＴＹＹＣＡＲＭＲＬＰＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号３０ ＢＧＣＢ４９１軽鎖１
ＱＳＡＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩＳＣＴＧＴＳＳＮＩＧＴＹＫＦＶＳＷＹＱＱＨＰＤＫＡＰＫＶＬＬＹＥＶＳＫＲＰＳＧＶＳＳＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＱＡＤＹＨＣＶＳＹＡＧＳＧＴＬＬＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ
配列番号３１ ＢＧＣＢ４９１重鎖２
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＩＳＳＳＦＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＧＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＨＹＧＳＳＰＭＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＥＧＹＳＳＧＨＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＳＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＷＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号３２ ＢＣＭＡ ＣＤＲ
ＳＧＳＹＦＷＧ
配列番号３３ ＢＣＭＡ ＣＤＲ
ＳＩＹＹＳＧＩＴＹＹＮＰＳＬＫＳ
配列番号３４ ＢＣＭＡ ＣＤＲ
ＨＤＧＡＶＡＧＬＦＤＹ
配列番号３５ ＢＣＭＡ ＣＤＲ
ＳＳＳＹＹＷＧ
配列番号３６ ＢＣＭＡ ＣＤＲ
ＳＩＹＹＳＧＳＴＹＹＮＰＳＬＫＳ
配列番号３７ ＢＣＭＡ ＣＤＲ
ＨＤＧＡＴＡＧＬＦＤＹ
配列番号３８ ＢＣＭＡ ＣＤＲ
ＳＳＳＹＦＷＧ
配列番号３９ ＢＣＭＡ ＣＤＲ
ＧＧＮＮＩＧＳＫＳＶＨ
配列番号４０ ＢＣＭＡ ＣＤＲ
ＤＤＳＤＲＰＳ
配列番号４１ ＢＣＭＡ ＣＤＲ
ＱＶＷＤＳＳＳＤＨＶＶ
配列番号４２ ＢＣＭＡ ＶＨ
ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＧＳＹＦＷＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＹＹＳＧＩＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＨＤＧＡＶＡＧＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡ
配列番号４３ ＢＣＭＡ ＶＨ
ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＳＳＹＦＷＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＹＹＳＧＩＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＨＤＧＡＶＡＧＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡ
配列番号４４ ＢＣＭＡ ＶＨ
ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＧＳＹＦＷＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＹＹＳＧＩＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＨＤＧＡＴＡＧＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡ
配列番号４５ ＢＣＭＡ ＶＨ
ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＧＳＹＦＷＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＹＹＳＧＳＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＨＤＧＡＶＡＧＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡ
配列番号４６ ＢＣＭＡ ＶＨ
ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＳＳＹＦＷＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＹＹＳＧＩＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＨＤＧＡＴＡＧＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡ
配列番号４７ ＢＣＭＡ ＶＨ
ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＳＳＹＦＷＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＹＹＳＧＲＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＨＤＧＡＴＡＧＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡ
配列番号４８ ＢＣＭＡ ＶＬ
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配列番号４９ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＳＹＡＩＳ
配列番号５０ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＮＹＷＭＳ
配列番号５１ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＳＹＦＩＧ
配列番号５２ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＧＹＴＭＮ
配列番号５３ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧ
配列番号５４ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＧＩＳＹＳＧＧＳＫＹＹＡＳＳＶＫＧ
配列番号５５ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＩＩＹＰＧＫＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧ
配列番号５６ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＬＩＮＰＹＮＳＤＴＮＹＡＱＫＬＱＧ
配列番号５７ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＥＳＲＷＲＧＹＫＬＤ
配列番号５８ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＡＡＦＤＦＧＲＲＡＶＲＬＤ
配列番号５９ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＶＹＳＦＧＧＲＨＫＡＬＦＤＹ
配列番号６０ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＶＡＬＲＶＡＬＤＹ
配列番号６１ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ
配列番号６２ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ
配列番号６３ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＫＡＳＱＮＶＡＴＨＶＧ
配列番号６４ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＡＡＳＳＬＱＳ
配列番号６５ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＤＡＳＮＲＡＴ
配列番号６６ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＳＡＳＹＲＹＳ
配列番号６７ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＱＱＳＹＳＴＰＬＴ
配列番号６８ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＱＱＲＳＮＷＰＬＴ
配列番号６９ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＱＱＹＮＲＹＰＹＴ
配列番号７０ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＤＹＧＭＨ
配列番号７１ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＳＹＷＩＧ
配列番号７２ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＧＹＡＭＳ
配列番号７３ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＳＹＧＩＳ
配列番号７４ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＧＹＳＦＴＧＹＴＭＮ
配列番号７５ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＳＹＡＭＳ
配列番号７６ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＧＦＳＬＴＳＹＮＶＨ
配列番号７７ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＡＩＫＹＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ
配列番号７８ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＧＩＳＹＳＧＧＳＫＹＹＡＤＳＶＫＧ
配列番号７９ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧ
配列番号８０ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ
配列番号８１ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＧＩＩＰＩＦＧＮＩＮＹＡＱＫＦＱＧ
配列番号８２ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＬＩＮＰＹＮＧＤＴＮ
配列番号８３ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＶＩＷＡＧＧＳＴＮＹＮＳＡＬＭＳ
配列番号８４ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＲＡＥＳＧＰＧＬＤＹ
配列番号８５ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＡＡＷＤＦＧＲＲＡＶＲＬＤＹ
配列番号８６ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＩＧＦＹＧＲＳＦＲＩＦＤＹ
配列番号８７ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＶＤＲＳＦＧＲＳＲＹＴＬＤＹ
配列番号８８ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＶＳＲＲＦＫＲＦＡＹＹＦＤＹ
配列番号８９ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＳＮＦＬＰＶＶＦＤＹ
配列番号９０ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＤＧＩＲＬＲＦＡＹ
配列番号９１ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＫＳＳＱＳＶＬＹＳＳＮＮＫＮＹＬＡ
配列番号９２ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＲＡＳＱＳＶＲＫＳＬＡ
配列番号９３ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＷＡＳＴＲＥＳ
配列番号９４ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＴＡＳＮＲＡＴ
配列番号９５ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＱＱＹＹＳＴＰＬＴ
配列番号９６ ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＤＲ
ＱＱＹＦＲＡＰＩＴ
配列番号９７ ＧＰＲＣ５Ｄ ＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＳＲＷＲＧＹＫＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号９８ ＧＰＲＣ５Ｄ ＶＨ
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配列番号９９ ＧＰＲＣ５Ｄ ＶＨ
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配列番号１００ ＧＰＲＣ５Ｄ ＶＨ
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配列番号１０１ ＧＰＲＣ５Ｄ ＶＬ
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配列番号１０２ ＧＰＲＣ５Ｄ ＶＬ
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配列番号１０３ ＧＰＲＣ５Ｄ ＶＬ
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配列番号１０４ ＧＰＲＣ５Ｄ ＶＨ
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配列番号１０５ ＧＰＲＣ５Ｄ ＶＨ
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＷＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＹＳＧＧＳＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＡＷＤＦＧＲＲＡＶＲＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１０６ ＧＰＲＣ５Ｄ ＶＨ
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配列番号１０７ ＧＰＲＣ５Ｄ ＶＨ
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＳＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＶＹＳＦＧＧＲＨＫＡＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１０８ ＧＰＲＣ５Ｄ ＶＨ
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＧＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＶＤＲＳＦＧＲＳＲＹＴＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１０９ ＧＰＲＣ５Ｄ ＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＮＩＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＶＳＲＲＦＫＲＦＡＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１１０ ＧＰＲＣ５Ｄ ＶＨ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＧＹＴＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＬＩＮＰＹＮＧＤＴＮＹＡＱＫＬＱＧＲＶＴＭＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＶＡＬＲＶＡＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１１１ ＧＰＲＣ５Ｄ ＶＨ
ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＳＮＦＬＰＶＶＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１１２ ＧＰＲＣ５Ｄ ＶＨ
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配列番号１１３ ＧＰＲＣ５Ｄ ＶＬ
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配列番号１１４ ＧＰＲＣ５Ｄ ＶＬ
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＲＫＳＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＴＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＦＲＡＰＩＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＫ
配列番号１１５ ＧＰＲＣ５Ｄ ＶＬ
ＥＩＶＭＴＱＳＰＡＴＬＳＶＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＫＡＳＱＮＶＡＴＨＶＧＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＳＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＳＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＮＲＹＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
配列番号１１６ ＧＰＲＣ５Ｄ
ＭＹＫＤＣＩＥＳＴＧＤＹＦＬＬＣＤＡＥＧＰＷＧＩＩＬＥＳＬＡＩＬＧＩＶＶＴＩＬＬＬＬＡＦＬＦＬＭＲＫＩＱＤＣＳＱＷＮＶＬＰＴＱＬＬＦＬＬＳＶＬＧＬＦＧＬＡＦＡＦＩＩＥＬＮＱＱＴＡＰＶＲＹＦＬＦＧＶＬＦＡＬＣＦＳＣＬＬＡＨＡＳＮＬＶＫＬＶＲＧＣＶＳＦＳＷＴＴＩＬＣＩＡＩＧＣＳＬＬＱＩＩＩＡＴＥＹＶＴＬＩＭＴＲＧＭＭＦＶＮＭＴＰＣＱＬＮＶＤＦＶＶＬＬＶＹＶＬＦＬＭＡＬＴＦＦＶＳＫＡＴＦＣＧＰＣＥＮＷＫＱＨＧＲＬＩＦＩＴＶＬＦＳＩＩＩＷＶＶＷＩＳＭＬＬＲＧＮＰＱＦＱＲＱＰＱＷＤＤＰＶＶＣＩＡＬＶＴＮＡＷＶＦＬＬＬＹＩＶＰＥＬＣＩＬＹＲＳＣＲＱＥＣＰＬＱＧＮＡＣＰＶＴＡＹＱＨＳＦＱＶＥＮＱＥＬＳＲＡＲＤＳＤＧＡＥＥＤＶＡＬＴＳＹＧＴＰＩＱＰＱＴＶＤＰＴＱＥＣＦＩＰＱＡＫＬＳＰＱＱＤＡＧＧＶ
配列番号１１７ ＣＤ３ ＣＤＲ１
ＴＹＡＭＮ
配列番号１１８ ＣＤ３ ＣＤＲ２
ＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＡＳＶＫＧ
配列番号１１９ ＣＤ３ ＣＤＲ３
ＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹ
配列番号１２０ ＣＤ３ ＶＨ
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１２１ ＣＤ３ 重鎖
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮＴＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＲＩＲＳＫＹＮＮＹＡＴＹＹＡＡＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＨＧＮＦＧＮＳＹＶＳＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＬＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号１２２ ＣＤ３ ＣＤＲ１
ＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮ
配列番号１２３ ＣＤ３ ＣＤＲ２
ＧＴＮＫＲＡＰ
配列番号１２４ ＣＤ３ ＣＤＲ３
ＡＬＷＹＳＮＬＷＶ
配列番号１２５ ＣＤ３ ＶＬ
ＱＴＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮＷＶＱＱＫＰＧＱＡＰＲＧＬＩＧＧＴＮＫＲＡＰＧＴＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＬＳＧＶＱＰＥＤＥＡＥＹＹＣＡＬＷＹＳＮＬＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号１２６ ＣＤ３ 軽鎖
ＱＴＶＶＴＱＥＰＳＬＴＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮＷＶＱＱＫＰＧＱＡＰＲＧＬＩＧＧＴＮＫＲＡＰＧＴＰＡＲＦＳＧＳＬＬＧＧＫＡＡＬＴＬＳＧＶＱＰＥＤＥＡＥＹＹＣＡＬＷＹＳＮＬＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ
配列番号１２７ リンカー
ＧＧＧＳＧＧＧＳ
配列番号１２８ リンカー
ＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ
配列番号１２９ リンカー
ＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ
配列番号１３０ リンカー
ＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ
配列番号１３１ リンカー
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ
配列番号１３２ リンカー
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ
配列番号１３３ リンカー
ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ
配列番号１３４ リンカー
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配列番号１３５ リンカー
ＧＫＧＧＳＧＫＧＧＳＧＫＧＧＳ
配列番号１３６ リンカー
ＧＧＫＧＳＧＧＫＧＳＧＧＫＧＳ
配列番号１３７ リンカー
ＧＧＧＫＳＧＧＧＫＳＧＧＧＫＳ
配列番号１３８ リンカー
ＧＫＧＫＳＧＫＧＫＳＧＫＧＫＳ
配列番号１３９ リンカー
ＧＧＧＫＳＧＧＫＧＳＧＫＧＧＳ
配列番号１４０ リンカー
ＧＫＰＧＳＧＫＰＧＳＧＫＰＧＳ
配列番号１４１ リンカー
ＧＫＰＧＳＧＫＰＧＳＧＫＰＧＳＧＫＰＧＳ
配列番号１４２ リンカー
ＧＫＧＫＳＧＫＧＫＳＧＫＧＫＳＧＫＧＫＳ
配列番号１４３ リンカー
ＳＴＡＧＤＴＨＬＧＧＥＤＦＤ
配列番号１４４ リンカー
ＧＥＧＧＳＧＥＧＧＳＧＥＧＧＳ
配列番号１４５ リンカー
ＧＧＥＧＳＧＧＥＧＳＧＧＥＧＳ
配列番号１４６ リンカー
ＧＥＧＥＳＧＥＧＥＳＧＥＧＥＳ
配列番号１４７ リンカー
ＧＧＧＥＳＧＧＥＧＳＧＥＧＧＳ
配列番号１４８ リンカー
ＧＥＧＥＳＧＥＧＥＳＧＥＧＥＳＧＥＧＥＳ
配列番号１４９ リンカー
ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ
配列番号１５０ リンカー
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配列番号１５１ リンカー
ＧＴＡＡＡＧＡＧＡＡＧＧＡＡＡＧＡＡＧ
配列番号１５２ リンカー
ＧＴＳＧＳＳＧＳＧＳＧＧＳＧＳＧＧＧＧ
配列番号１５３ リンカー
ＧＫＰＧＳＧＫＰＧＳＧＫＰＧＳＧＫＰＧＳ
配列番号１５４ リンカー
ＧＳＧＳ
配列番号１５５ リンカー
ＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰ
配列番号１５６ リンカー
ＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰＡＰ
配列番号１５７ リンカー
ＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＡＫＥＡＡＡＡＫＥＡＡＡＡＫＡＡＡ
配列番号１５８ Ｉｇ１
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１５９ Ｉｇ１
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＳＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１６０ Ｉｇ４
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
配列番号１６１ ＣＤ３エピトープ
ＱＤＧＮＥＥＭＧＧＩＴＱＴＰ
配列番号１６２ ＢＣＭＡエピトープ
ＬＬＨＡＣＩＰＣＱＬ
配列番号１６３ リンカー
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ
配列番号１６４ ＢＣＭＡ ＣＤＲ
ＳＩＹＹＳＧＲＴＹＹＮＰＳＬＫＳ
配列番号１６５ ＢＧＣＢ４９１重鎖１遺伝子のヌクレオチド配列であり、シグナルペプチドコード領域に下線を付す。
Figure 2024507180000044
 配列番号１６６ ＢＧＣＢ４９１軽鎖遺伝子のヌクレオチド配列であり、シグナルペプチドコード領域に下線を付す。
Figure 2024507180000045
 配列番号１６７ ＢＧＣＢ４９１重鎖２遺伝子のヌクレオチド配列であり、シグナルペプチドコード領域に下線を付す。
Figure 2024507180000046

Claims (110)

  1. 三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメントであって、
    （ａ）第１の重鎖可変ドメイン（ＶＨ１）及び第１の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ１）を含む第１の抗原結合アーム、
    （ｂ）第２の重鎖可変ドメイン（ＶＨ２）及び第２の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ２）を含む第２の抗原結合アーム、
    （ｃ）第３の重鎖可変ドメイン（ＶＨ３）及び第３の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ３）を含む第３の抗原結合アーム、を含み、
    第１の抗原結合アームが、表面抗原分類３（ＣＤ３）上のエピトープに結合し、前記第２の抗原結合アームが、Ｇタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）上のエピトープに結合し、前記第３の抗原結合アームが、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）上のエピトープに結合する、三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメント。
  2. 前記第１の抗原結合アームの前記ＶＨ１及び前記ＶＬ１が、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆｄ、ジスルフィド安定化Ｆｖフラグメント（ｄｓＦｖ）、又はジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、任意選択でＦａｂ中に存在する、請求項１に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  3. 前記第２の抗原結合アームの前記ＶＨ２及び前記ＶＬ２が、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆｄ、ジスルフィド安定化Ｆｖフラグメント（ｄｓＦｖ）、又はジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、任意選択でｓｃＦｖ中に存在する、請求項１又は２に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  4. 前記第３の抗原結合アームの前記ＶＨ３及び前記ＶＬ３が、抗体フラグメント、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆｄ、ジスルフィド安定化Ｆｖフラグメント（ｄｓＦｖ）、又はジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、任意選択でｓｃＦｖ中に存在する、請求項１～３のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  5. ＣＤ３に結合する前記第１の抗原結合アームが、配列番号８の重鎖可変ドメイン（ＶＨ１）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３と、配列番号７の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ１）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３と、を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  6. ＣＤ３に結合する前記第１の抗原結合アームが、ＧＤＳＶＦＮＮＮＡＡＷＳ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＲＴＹＹＲＳＫＷＬＹＤ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、及びＧＹＳＳＳＦＤＹ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３と、ＴＧＴＳＳＮＩＧＴＹＫＦＶＳ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＥＶＳＫＲＰＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及びＶＳＹＡＧＳＧＴＬＬ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３と、を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  7. ＣＤ３に結合する前記第１の抗原結合アームが、配列番号８のＶＨ１及び配列番号７のＶＬ１を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  8. ＧＰＲＣ５Ｄに結合する前記第２の抗原結合アームが、配列番号１６の重鎖可変ドメイン（ＶＨ２）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３と、配列番号１５の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ２）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３と、を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  9. ＧＰＲＣ５Ｄに結合する前記第２の抗原結合アームが、ＧＦＳＬＴＮＩＲＭＳＶＳ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＩＦＳＮＤＥＫＳ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、及びＭＲＬＰＹＧＭＤＶ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３と、ＲＳＳＱＳＬＶＨＳＤＧＮＴＹＬＳ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＫＩＳＮＲＦＦ（配列番号１０）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及びＭＱＡＴＱＦＰＨＴ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３と、を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  10. ＧＰＲＣ５Ｄに結合する前記第２の抗原結合アームが、配列番号１６のＶＨ２及び配列番号１５のＶＬ２を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  11. ＢＣＭＡと結合する前記第３の抗原結合アームが、配列番号２４の重鎖可変ドメイン（ＶＨ３）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３と、配列番号２３の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ３）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３と、を含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  12. ＢＣＭＡに結合する前記第３の抗原結合アームが、ＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２、及びＤＥＧＹＳＳＧＨＹＹＧＭＤＶ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３と、ＲＡＳＱＳＩＳＳＳＦＬＴ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２、及びＱＨＹＧＳＳＰＭＹＴ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３と、を含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  13. ＢＣＭＡに結合する前記第３の抗原結合アームが、配列番号２４のＶＨ３及び配列番号２３のＶＬ３を含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  14. ＣＤ３に結合する前記第１の抗原結合アームが、配列番号８のＶＨ１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３と、配列番号７のＶＬ１のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３とを含み、
    ＧＰＲＣ５Ｄに結合する前記第２の抗原結合アームが、配列番号１６のＶＨ２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３と、配列番号１５のＶＬ２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３とを含み、
    ＢＣＭＡに結合する前記第３の抗原結合アームが、配列番号２４のＶＨ３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３と、配列番号２３のＶＬ３のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３とを含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  15. ＣＤ３に結合する前記第１の抗原結合アームが、それぞれ配列番号４、５、６、１、２、３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
    ＧＰＲＣ５Ｄに結合する前記第２の抗原結合アームが、それぞれ配列番号１２、１３、１４、９、１０、及び１１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
    ＢＣＭＡに結合する前記第３の抗原結合アームが、それぞれ配列番号２０、２１、２２、１７、１８、及び１９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含む、請求項１～４及び１４のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  16. ＣＤ３に結合する前記第１の抗原結合アームが、配列番号８のＶＨ１及び配列番号７のＶＬ１を含み、
    ＧＰＲＣ５Ｄに結合する第２の抗原結合アームが、配列番号１６のＶＨ２及び配列番号１５のＶＬ２を含み、
    ＢＣＭＡに結合する前記第３の抗原結合アームが、配列番号２４のＶＨ３及び配列番号２３のＶＬ３を含む、請求項１～４、１４及び１５のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  17. 前記第１の抗原結合アームが、フラグメント結晶化可能（Ｆｃ）ドメインを含み、前記第２の抗原結合アーム又は前記第３の抗原結合アームが、Ｆｃドメインを含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメント。
  18. 前記Ｆｃドメインが、前記Ｆｃドメインのヘテロ二量体化を促進する１つ又は２つ以上の変異を含む、請求項１７に記載の三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメント。
  19. 前記変異が、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｔ３６６Ｗ、及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ付番）から選択される、請求項１８に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  20. 前記Ｆｃドメインが、Ｆｃγ受容体へのＦｃ結合を低減する１つ又は２つ以上の変異を更に含む、請求項１７～１９のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  21. 前記Ｆｃγ受容体が、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩＡ、及び／又はＦｃγＲＩＩＩＢである、請求項２０に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  22. 前記Ｆｃドメインが、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＤ２６５Ｓ（ＥＵ付番）から選択される１つ又は２つ以上の変異を含む、請求項２０又は２１に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  23. 前記Ｆｃドメインが、プロテインＡへのＦｃ結合を低減する１つ又は２つ以上の変異を更に含む、請求項１７～２２のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  24. 前記Ｆｃドメインが、変異Ｈ４３５Ｒ及び／又はＹ４３６Ｆ（ＥＵ付番）を含む、請求項２３に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  25. 前記第１の抗原結合アームが、前記ＣＤ３ε鎖の残基２２～３５（ＱＤＧＮＥＥＭＧＧＩＴＱＴＰ（配列番号１６１））に特異的に結合する、請求項１～２４のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  26. 前記第１の抗原結合アームが、約１×１０－８～１×１０－７Ｍの親和性でＣＤ３に特異的に結合する、請求項１～２５のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  27. 前記第１の抗原結合アームが、約２×１０－８～４×１０－８Ｍの親和性でＣＤ３に特異的に結合する、請求項２６に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  28. 前記第３の抗原結合アームが、ＢＣＭＡ ＢＣＭＷ３７鎖の残基１７～２６（ＬＬＨＡＣＩＰＣＱＬ（配列番号１６２））に特異的に結合する、請求項１～２７のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  29. 前記第３の抗原結合アームが、約１×１０－１０～１×１０－７Ｍの親和性でＢＣＭＡに特異的に結合する、請求項１～２８のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  30. 前記第３の抗原結合アームが、約２×１０－１０～９×１０－１０Ｍの親和性でＢＣＭＡに特異的に結合する、請求項２９に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  31. 表面抗原分類３（ＣＤ３）上のエピトープに結合する第１の抗原結合アームと、Ｇタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）上のエピトープに結合する第２の抗原結合アームと、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）上のエピトープに結合する第３の抗原結合アームと、を含む、三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメントであって、
    前記第１の抗原結合アームが、重鎖（ＨＣ１）ポリペプチド及び軽鎖（ＬＣ）ポリペプチドを含み、
    前記三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメントが、前記第２の抗原結合アーム及び前記第３の抗原結合アームを含む単一ポリペプチドを含む、三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメント。
  32. 前記第１の抗原結合アームの前記ＨＣ１が、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、請求項３１に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  33. 前記第１の抗原結合アームの前記ＬＣが、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、請求項３２又は３３に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  34. 前記第２の抗原結合アーム及び前記第３の抗原結合アームを含む前記ポリペプチドが、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、請求項３１～３３のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  35. 前記第１の抗原結合アームが、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ１と、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＬＣとを含み、前記第２の抗原結合アーム及び前記第３の抗原結合アームを含む前記ポリペプチドが、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、請求項３１に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  36. 表面抗原分類３（ＣＤ３）上のエピトープに結合する第１の抗原結合アームと、Ｇタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）上のエピトープに結合する第２の抗原結合アームと、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）上のエピトープに結合する第３の抗原結合アームと、を含む、三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメントであって、
    前記第１の抗原結合アームが、重鎖（ＨＣ１）ポリペプチド及び軽鎖（ＬＣ）ポリペプチドを含み、前記重鎖（ＨＣ１）ポリペプチドが、前記第２の抗原結合アームを更に含み、
    前記三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメントが、前記第３の抗原結合アームを含む単一ポリペプチドを更に含む、三重特異的抗体又はその三重特異的結合フラグメント。
  37. 前記第１の抗原結合アームの前記ＨＣ１が、配列番号２９のアミノ酸配列を含む、請求項３６に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  38. 前記第１の抗原結合アームの前記ＬＣが、配列番号３０のアミノ酸配列を含む、請求項３６又は３７に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  39. 前記第３の抗原結合アームを含む前記単一ポリペプチドが、配列番号３１のアミノ酸配列を含む、請求項３６～３８のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  40. 前記第１の抗原結合アームが、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＣ１と、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＬＣとを含み、前記第３の抗原結合アームを含む前記単一ポリペプチドが、配列番号３１のアミノ酸配列を含む、請求項３６に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  41. 前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４（ヒト）アイソタイプである、請求項１～４０のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  42. 前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、（ヒト）ＩｇＧ１アイソタイプである、請求項１～４１のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメント。
  43. 請求項１～４２のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメントをコードする合成ポリヌクレオチド。
  44. 請求項１～４２のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメントと、医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
  45. 前記医薬組成物が、第２の治療剤を更に含む、請求項４４に記載の医薬組成物。
  46. 前記第２の治療剤が、抗ＣＤ３８剤、免疫調節性イミド薬物（ＩＭｉＤ）、免疫チェックポイント阻害剤、免疫共刺激剤、ガンマセクレターゼ阻害剤、Ｔ細胞エンハンサー、又はそれらの任意の組み合わせを含む、請求項４５に記載の医薬組成物。
  47. 請求項１～４２のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメントを発現する細胞。
  48. 前記細胞が、ハイブリドーマである、請求項４７に記載の細胞。
  49. 前記三重特異的抗体が、組換えにより産生される、請求項４７又は４８に記載の細胞。
  50. がんの治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、前記対象に、治療有効量の請求項１～４２のいずれか一項に記載の三重特異的抗体若しくは三重特異的結合フラグメント、又は請求項４４～４６のいずれか一項に記載の医薬組成物、を投与することを含む、方法。
  51. 前記三重特異的抗体若しくは三重特異的結合フラグメント、又は前記医薬組成物が、前記がんを治療するのに十分な時間投与される、請求項５０に記載の方法。
  52. がん細胞の成長又は増殖を阻害するための方法であって、前記細胞に、有効量の請求項１～４２のいずれか一項に記載の三重特異的抗体若しくは三重特異的結合フラグメント、又は請求項４４～４６のいずれか一項に記載の医薬組成物、を投与することを含み、前記有効量が、前記がん細胞の成長又は増殖を阻害するのに十分である、方法。
  53. 前記がん細胞が、対象内にあり、前記三重特異的抗体若しくは三重特異的結合フラグメント又は前記医薬組成物が、前記対象に投与される、請求項５２に記載の方法。
  54. 前記投与が、エクスビボで実施される、請求項５２に記載の方法。
  55. ＢＣＭＡ及び／又はＧＰＲＣ５Ｄ発現がん細胞に対してＴ細胞を指向することを必要とする対象においてそれを行う方法であって、前記対象に、治療有効量の請求項１～４２のいずれか一項に記載の三重特異的抗体若しくは三重特異的結合フラグメント、又は請求項４４～４６のいずれか一項に記載の医薬組成物、を投与することを含む、方法。
  56. 前記治療有効量が、前記がん細胞に対して前記Ｔ細胞応答を指向するのに十分である、請求項５５に記載の方法。
  57. 前記がんが、血液がんである、請求項５０～５６のいずれか一項に記載の方法。
  58. 前記血液がんが、ＢＣＭＡ及び／又はＧＰＲＣ５Ｄ発現Ｂ細胞がんである、請求項５７に記載の方法。
  59. 前記ＢＣＭＡ及び／又はＧＰＲＣ５Ｄ発現Ｂ細胞がんが、多発性骨髄腫である、請求項５８に記載の方法。
  60. 前記ＢＣＭＡ及び／又はＧＰＲＣ５Ｄ発現Ｂ細胞がんが、くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）である、請求項５８又は５９に記載の方法。
  61. 前記がんが、再発性、難治性、若しくは悪性のがん、又はそれらの任意の組み合わせである、請求項５０～６０のいずれか一項に記載の方法。
  62. 前記対象が、前処置を受けたことがある、請求項５０～５１、５３、及び５５～６１のいずれか一項に記載の方法。
  63. 前記前処置が、プロテアソーム阻害剤、免疫調節薬、ＣＤ３８抗体、二重特異性剤、ＣＡＲ－Ｔ療法、又はそれらの任意の組み合わせを含む、請求項６２の方法。
  64. 第２の治療剤を投与することを更に含む、請求項５０～６３のいずれか一項に記載の方法。
  65. 前記第２の治療剤が、化学療法剤又は標的を設定した抗がん治療である、請求項６４に記載の方法。
  66. 前記化学療法剤が、シタラビン、アントラサイクリン、ヒスタミン二塩酸塩、又はインターロイキン２（ＩＬ－２）である、請求項６５に記載の方法。
  67. 前記第２の治療剤が、抗ＣＤ３８剤、免疫調節性イミド薬物（ＩＭｉＤ）、免疫チェックポイント阻害剤、免疫共刺激剤、ガンマセクレターゼ阻害剤、Ｔ細胞エンハンサー、又はそれらの任意の組み合わせである、請求項６４に記載の方法。
  68. 前記三重特異的抗体若しくは三重特異的結合フラグメント、又は前記医薬組成物が、前記対象に静脈内、筋肉内、腹腔内、及び／又は皮下投与される、請求項５０～５１、５３、及び５５～６７のいずれか一項に記載の方法。
  69. 前記三重特異的抗体若しくは三重特異的結合フラグメント、又は前記医薬組成物が、前記対象に皮下投与される、請求項５０～５１、５３、及び５５～６８のいずれか一項に記載の方法。
  70. 請求項１～４２のいずれか一項に記載の三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメントを生成するための方法であって、請求項４７～４９のいずれか一項に記載の細胞を培養することと、前記三重特異的抗体又は三重特異的結合フラグメントを単離することと、を含む、方法。
  71. （ｉ）請求項１～４２のいずれか一項に記載の三重特異的抗体若しくは三重特異的結合フラグメント及び／又は請求項４３に記載のポリヌクレオチドと、（ｉｉ）それらのためのパッケージングと、を含む、キット。
  72. ＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳ（配列番号２０）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹ（配列番号２１）のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２と、ＤＥＧＹＳＳＧＨＹＹＧＭＤＶ（配列番号２２）のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３と、を含む、ＢＣＭＡに結合する抗体又はその抗原結合フラグメント。
  73. ＲＡＳＱＳＩＳＳＳＦＬＴ（配列番号１７）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）と、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号１８）のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２と、ＱＨＹＧＳＳＰＭＹＴ（配列番号１９）のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３と、を更に含む、請求項７２に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
  74. 配列番号２４のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む、請求項７２又は７３に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
  75. 配列番号２３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、請求項７２～７４のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
  76. 前記抗体又は抗原結合フラグメントが、ＢＣＭＡ ＢＣＭＷ３７鎖の残基１７～２６（ＬＬＨＡＣＩＰＣＱＬ（配列番号１６２））に特異的に結合する、請求項７２～７５のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
  77. 前記抗体又は抗原結合フラグメントが、約１×１０－１０～１×１０－７Ｍの親和性でＢＣＭＡに特異的に結合する、請求項７２～７６のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
  78. 前記抗体又は抗原結合フラグメントが、約２×１０－１０～９×１０－１０Ｍの親和性でＢＣＭＡに特異的に結合する、請求項７７に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
  79. 前記抗体又は抗原結合フラグメントが、ヒト抗体又は抗原結合フラグメントである、請求項７２～７８のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
  80. 前記抗体又は抗原結合フラグメントが、組換え体である、請求項７２～７９のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
  81. 前記抗原結合フラグメントが、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ２フラグメント、又は一本鎖抗体である、請求項７２～８０のいずれか一項に記載の抗原結合フラグメント。
  82. 前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４アイソタイプである、請求項７２～８１のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
  83. 前記抗体又はその抗原結合フラグメントが、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４アイソタイプである、請求項７２～８２のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント。
  84. 請求項７２～８３のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメントと、医薬的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
  85. 前記医薬組成物が、第２の治療剤を更に含む、請求項８４に記載の医薬組成物。
  86. 前記第２の治療剤が、抗ＣＤ３８剤、免疫調節性イミド薬物（ＩＭｉＤ）、免疫チェックポイント阻害剤、免疫共刺激剤、ガンマセクレターゼ阻害剤、Ｔ細胞エンハンサー、又はそれらの任意の組み合わせを含む、請求項８５に記載の医薬組成物。
  87. 請求項７２～８３のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメントを発現する細胞。
  88. 前記細胞が、ハイブリドーマである、請求項８７に記載の細胞。
  89. 前記抗体が、組換えにより産生される、請求項８７に記載の細胞。
  90. がんの治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、前記対象に、治療有効量の請求項７２～８３のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗原結合フラグメント、又は請求項８４～８６のいずれか一項に記載の医薬組成物、を投与することを含む、方法。
  91. 前記抗体若しくは抗原結合フラグメント、又は前記医薬組成物が、前記がんを治療するのに十分な時間投与される、請求項９０に記載の方法。
  92. がん細胞の成長又は増殖を阻害するための方法であって、前記細胞に、有効量の請求項７２～８３のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗原結合フラグメント、又は請求項８４～８６のいずれか一項に記載の医薬組成物、を投与することを含み、前記有効量が、前記がん細胞の成長又は増殖を阻害するのに十分である、方法。
  93. 前記がん細胞が対象内にあり、前記抗体若しくは抗原結合フラグメント又は前記医薬組成物が、前記対象に投与される、請求項９２に記載の方法。
  94. 前記投与が、エクスビボで実施される、請求項９２に記載の方法。
  95. 前記がんが、血液がんである、請求項９０～９４のいずれか一項に記載の方法。
  96. 前記血液がんが、ＢＣＭＡ発現Ｂ細胞がんである、請求項９５に記載の方法。
  97. 前記ＢＣＭＡ発現Ｂ細胞がんが、多発性骨髄腫である、請求項９６に記載の方法。
  98. 前記ＢＣＭＡ発現Ｂ細胞がんが、くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）である、請求項９７に記載の方法。
  99. 前記がんが、再発性、難治性、若しくは悪性のがん、又はそれらの任意の組み合わせである、請求項９０～９８のいずれか一項に記載の方法。
  100. 前記対象が、前処置を受けたことがある、請求項９０～９１、９３、及び９５～９９のいずれか一項に記載の方法。
  101. 前記前処置が、プロテアソーム阻害剤、免疫調節薬、ＣＤ３８抗体、二重特異性剤、ＣＡＲ－Ｔ療法、又はそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１００に記載の方法。
  102. 第２の治療剤を投与することを更に含む、請求項９０～１０１のいずれか一項に記載の方法。
  103. 前記第２の治療剤が、化学療法剤又は標的を設定した抗がん治療である、請求項１０２に記載の方法。
  104. 前記化学療法剤が、シタラビン、アントラサイクリン、ヒスタミン二塩酸塩、又はインターロイキン２（ＩＬ－２）である、請求項１０３に記載の方法。
  105. 前記第２の治療剤が、抗ＣＤ３８剤、免疫調節性イミド薬物（ＩＭｉＤ）、免疫チェックポイント阻害剤、免疫共刺激剤、ガンマセクレターゼ阻害剤、Ｔ細胞エンハンサー、又はそれらの任意の組み合わせである、請求項１０２に記載の方法。
  106. 前記抗体若しくは抗原結合フラグメント、又は前記医薬組成物が、前記対象に静脈内、筋肉内、腹腔内、及び／又は皮下投与される、請求項９０～９１、９３、及び９５～１０５のいずれか一項に記載の方法。
  107. 前記抗体若しくは抗原結合フラグメント、又は前記医薬組成物が、前記対象に皮下投与される、請求項９０～９１、９３、及び９５～１０６のいずれか一項に記載の方法。
  108. 請求項７２～８３のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメントを生成するための方法であって、請求項８７～８９のいずれか一項に記載の細胞を培養することと、前記抗体又は抗原結合フラグメントを単離することと、を含む、方法。
  109. 請求項７２～８３のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合フラグメントをコードする合成ポリヌクレオチド。
  110. （ｉ）請求項７２～８３のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗原結合フラグメント及び／又は請求項１０９に記載のポリヌクレオチドと、（ｉｉ）それらのためのパッケージングと、を含む、キット。
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