KR20230098915A - 항암제로서 새로운 2' 및/또는 5' 아미노산 에스테르 포스포르아미데이트 3'-디옥시아데노신 유도체 - Google Patents

항암제로서 새로운 2' 및/또는 5' 아미노산 에스테르 포스포르아미데이트 3'-디옥시아데노신 유도체 Download PDF

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크리스토퍼 맥기강
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뉴카나 피엘씨
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Abstract

본 발명은 화합물, 치료 방법, 특히 암의 예방 또는 치료 방법에 사용하기 위한 화합물, 상기 화합물의 제조 방법 및 상기 화합물을 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 상기 화합물은 특히 호모 사피엔스의 백혈병, 림프종 및/또는 고형 종양의 치료에 유용할 수 있다. 상기 화합물은 2' 및/또는 5'-아미노산 에스테르 포스포아미데이트 잔기를 갖는 코르디세핀(3'-디옥시아데노신)의 유도체이다.

Description

항암제로서 새로운 2' 및/또는 5' 아미노산 에스테르 포스포르아미데이트 3'-디옥시아데노신 유도체{NEW 2' AND/OR 5' AMINO-ACID ESTER PHOSPHORAMIDATE 3'-DEOXY ADENOSINE DERIVATIVES AS ANTI-CANCER COMPOUNDS}
본 발명은 화합물, 치료 방법, 특히 암의 예방 또는 치료 방법에 사용하기 위한 화합물, 상기 화합물의 제조 방법 및 상기 화합물을 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.
특히, 이에 제한되는 것은 아니지만, 본 발명은 호모 사피엔스의 백혈병, 림프종 및/또는 고형 종양의 치료에 사용하기 위한 화합물에 관한 것이다.
코르디세핀(Cordycepin)은 3'-디옥시아데노신(3'dA)이다. 이는 리보스 잔기 상에 3'-하이드록시기가 없는 아데노신의 뉴클리오사이드 유사체이다.
코르디세핀(Cordycepin)은 면역 활성제, 노화 방지 및 항종양 효과로 인해 한의학에 사용되는 기생 균류인, 번데기 동충하초(cordyceps militaris)에 의해 생산되는 주요 생체 활성 물질 중 하나이다(Tuli, H. S. et al 3 Biotech(2014)4:1-12).
코르디세핀(Cordycepin)은 아데노신에서 합성적으로 제조될 수 있다. 이러한 합성 방법에 대한 참조로는 Robins, J. R. et al J. Org. Chem. 1995, 60, 7902-7908 and Aman, S. et al Organic Process Research & Development 2000, 4, 601-605이 있다.
코르디세핀(Cordycepin)은 항암제로서 매우 광범위하게 연구되어 왔다.
이의 구조로 인해, 3'dA 및 이의 삼중 인산염 형태는 아데노신 또는 아데노신 트리포스페이트(ATP)각각을 필요로 하는 임의의 과정을 잠재적으로 방해할 수 있다.
그러나 투여 후, 3'dA는 아데노신 디아미나아제(ADA)에 의해 신속하게 탈아 민화되고 신속하게 생체 내에서 비활성 대사 산물인 3'-디옥시이노신으로 대사된다(Tsai, Y-J et al J. Agri. Food Chem. 58 4638-43(2010)).
Glazer, R. et al Cancer Research 38, 2233-2238(1978)에개시된 바와 같이, 코르디세핀(Cordycepin)은 펜토스타틴(pentostatine, 2-deoxycoformicin, dCF)과 같은 아데노신 디아미나아제 억제제와 함께 사용될 때 항암 효과를 나타내는 것으로 나타났다. 코르디세핀(Cordycepin)과 함께 투여할 수 있는 다른 보조제로는 여타 ADA 억제제가 제안되고 있으나, 임상 시험에서 사용된 바로는 3'dA-dCF의 조합이다. 그러나, Wehbe-Janek, H. et al Anticancer Research 27: 3143-3146(2007)에서개시된 바와 같이, 2-디옥시코포마이신은 비교적 독성이 강한 약물로 알려져 있다.
2-플루오로코르디세핀(2-Fluoro코르디세핀, 3'deoxy-2-fluoroadenosine)또한 세포독성이 있는 것으로 알려져 있다(Montgomery et al., J. Med. Chem., 1969, 12(3), 498-504 and Dickinson et al, J. Med. Chem., 1967, 10(6), 1165-1166).
2-클로로코르디세핀(2-Chloro코르디세핀, 3'deoxy-2-fluoroadenosine)은 이의 항 바이러스 활성에 대하여 평가되었다(Rosowsky et al. J. Med. Chem., 1989, 32, 1135-40).
본 발명은 예방 또는 치료 방법, 특히 이에 제한되지 않지만 백혈병, 림프종 및/또는 고형 종양을 치료하기 위한 화학 요법을 포함한 항암 화학 요법에서 코르디세핀(3'-디옥시아데노신)에 의해 예시된 바와 같은, 퓨린계 3'-디옥시뉴클레오사이드의 효능을 증강 시키는 문제에 대한 해결책을 찾는 것을 목적으로 한다.
본 발명의 또 다른 목적은 ADA에 의해 탈아민된 다음 급속하게 비활성 대사 물질로 대사시키는 것에 관한 코르디세핀(3'-디옥시아데노신)에 의해 예시된 바와 같은, 퓨린계 3'-디옥시 뉴클레오사이드의 문제에 대한 해결책을 찾는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 ADA에 의해 탈아민된 다음 급속하게 비활성 대사 물질로 대사시키는 것에 관한 코르디세핀(3'-디옥시아데노신)에 의해 예시된 바와 같은, 퓨린계 3'-디옥시 뉴클레오사이드의 문제에 있어서, 예방 또는 치료 방법, 특히 이에 제한되지 않지만 백혈병, 림프종 및/또는 고형 종양을 치료하기 위한 화학 요법을 포함한 항암 화학 요법에서 사용되는 퓨린계 3'-디옥시 뉴클레오사이드를 사용할 시 ADA 저해제를 공동 투여할 필요성을 완전히 방지하기 위해, 적어도 어느정도 감소 시키키 위한 해결책을 제공하는 것이다.
본 발명의 제1 양태에 따르면, 하기 화학식(Ia)의 화합물, 화학식(Ia)의 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르, 에스테르의 염, 용매화물 또는 전구 약물이 제공된다:
Figure pat00001
여기서:
W1 및 W2는 각각 독립적으로-P(=O)(U)(V) 및 H로 이루어진 군으로부터 선택되며, 단 W1 및 W2 중 적어도 하나는-P(=O)(U)(V)이고,
상기 식에서, 각각 W1 및 W2에 대한 U 및 V는 독립적으로, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
(a)U는-OAr이고, 이와 함께 V가-NR4-CR1R2-C(=O)OR3이고,
여기서, Ar은 C6- 30아릴 및 5- 30헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되며, 이들 각각은 임의로 치환되고;
R1 및 R2는 각각 독립적으로 H, 및 C1- 20알킬, C6- 30아릴C1 - 6알킬, C2- 20알케닐, C1-20알콕시, C1- 20알콕시C1 - 20알킬, C1- 20알콕시C6 - 30아릴, C2- 20알키닐, C3- 20사이클로알킬C6 -30아릴, C6- 30아릴옥시 및 5- 20헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이는 선택적으로 치환될 수 있고;
R3은 H, 및 C1- 20알킬, C6- 30아릴C1 - 6알킬, C2- 20알케닐, C1- 20알콕시C1 - 20알킬, C1- 20알콕시C6 -30아릴, C2- 20알키닐, C3- 20사이클로알킬C6 - 30아릴, 및 5- 20헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이는 선택적으로 치환될 수 있고;
R4는 H, 및 C1- 20알킬, C6- 30아릴C1 - 6알킬, C2- 20알케닐, C1- 20알콕시, C1- 20알콕시C1 -20알킬, C1- 20알콕시C6 - 30아릴, C2- 20알키닐, C3- 20사이클로알킬C6 - 30아릴, C6- 30아릴옥시 및 5-20헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이는 선택적으로 치환될 수 있고;
및
(b)U 및 V 각각 독립적으로-NR5R6로부터 선택되고,
여기서, R5는 H 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, R6은-CR7R8CO2R9이고, 여기서 R7 및 R8은 자연 발생 알파 아미노산의, H를 포함하는 측쇄로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, R9는 H 및 C1- 20알킬, C6- 30아릴C1 - 6알킬, C2-20알케닐, C1- 20알콕시C1 - 20알킬, C1- 20알콕시C6 - 30아릴, C2- 20알키닐, C3- 20사이클로알킬C6 -30아릴 및 5- 20헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이는 선택적으로 치환될 수 있고; 또는
R5 및 R6은 이들이 부착된 N 원자와 함께 5 내지 8 고리 원자를 포함하는 고리 부분을 형성하고;
Q는 O, S 및 CR10R11로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 R10 및 R11은 H, F 및 C1-6 알킬로부터 독립적으로 선택되고;
X 및 Z는 각각 독립적으로 H, OH, F, Cl, Br, I, C1- 6알킬,-NR12R13(여기서, R12 및 R13은 각각 독립적으로 H 및 C1- 6알킬로부터 선택됨), 및-SR14(여기서, R14는 H 및 C1-6알킬로 이루어진 군으로부터 선택됨)로 이루어진 군으로부터 선택되고; 및
Y는 H, OH, F, Cl, Br, I,-OC1- 6알킬, C1- 6알킬, C2- 8알키닐,-NR15R16(여기서 R15 및 R16은 각각 독립적으로 H 및 C1- 6알킬로부터 선택됨), 및-SR17(여기서, R17은 H 및 C1-6알킬로 이루어진 군으로부터 선택됨)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명의 화합물은 뉴클리오사이드의 당 잔기상의 3' 치환체 위치 각각이 H로 점유되는, 퓨린-기반의(퓨린계)3'-디옥시뉴클리오사이드이다.
추가의 실시 양태에서, 본 발명의 화합물은 하기 화학식(Ib)의 화합물, 화학식(Ib)의 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르, 에스테르의 염, 용매화물 또는 전구 약물일 수 있다:
Figure pat00002
여기서:
W1 및 W2는 각각 독립적으로-P(=O)(U)(V) 및 H로 이루어진 군으로부터 선택되며, 단 W1 및 W2 중 적어도 하나는-P(=O)(U)(V)이고,
상기 식에서, 각각 W1 및 W2에 대한 U 및 V는 독립적으로, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
(a)U는-OAr이고, V는-NR4-CR1R2-C(=O)OR3이고,
여기서, Ar은 C6- 30아릴 및 5- 30헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되며, 이들 각각은 임의로 치환되고;
R1 및 R2는 각각 독립적으로 H, 및 C1- 20알킬, C6- 30아릴C1 - 6알킬, C2- 20알케닐, C1-20알콕시, C1- 20알콕시C1 - 20알킬, C1- 20알콕시C6 - 30아릴, C2- 20알키닐, C3- 20사이클로알킬, C6-30아릴, C6- 30아릴옥시 및 5- 20헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이는 선택적으로 치환될 수 있고;
R3은 H, 및 C1- 20알킬, C6- 30아릴C1 - 6알킬, C2- 20알케닐, C1- 20알콕시C1 - 20알킬, C1- 20알콕시C6 -30아릴, C2- 20알키닐, C3- 20사이클로알킬, C6- 30아릴, 및 5- 20헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이는 선택적으로 치환될 수 있고;
R4는 H, 및 C1- 20알킬, C6- 30아릴C1 - 6알킬, C2- 20알케닐, C1- 20알콕시, C1- 20알콕시C1 -20알킬, C1- 20알콕시C6 - 30아릴, C2- 20알키닐, C3- 20사이클로알킬, C6- 30아릴, C6- 30아릴옥시 및 5- 20헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이는 선택적으로 치환될 수 있고;
및
(b)U 및 V는 각각 독립적으로-NR5R6로부터 선택되고,
여기서, R5는 H 및 C1- 6알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, R6은-CR7R8CO2R9이고, 여기서 R7 및 R8은 자연 발생 알파 아미노산의, H를 포함하는 측쇄로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, R9는 H 및 C1- 20알킬, C6- 30아릴C1 - 6알킬, C2- 20알케닐, C1- 20알콕시C1 - 20알킬, C1- 20알콕시C6 - 30아릴, C2- 20알키닐, C3- 20사이클로알킬, C6- 30아릴 및 5- 20헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이는 선택적으로 치환될 수 있고; 또는
R5 및 R6은 이들이 부착된 N 원자와 함께 5 내지 8 고리 원자를 포함하는 고리 부분을 형성하고;
X는 NR12R13(여기서, R12 및 R13은 각각 독립적으로 H 및 C1- 6알킬로부터 선택됨); 및-SR14(여기서, R14는 H 및 C1- 6알킬로 이루어진 군으로부터 선택됨)로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Z는 독립적으로 H, OH, F, Cl, Br, I, C1- 6알킬,-NR12R13, 및-SR14(여기서, R14는 H 및 C1- 6알킬로 이루어진 군으로부터 선택됨)로 이루어진 군으로부터 선택되고; 및
Y는 H, OH, F, Cl, Br, I,-OC1- 6알킬, C1- 6알킬, C2- 8알키닐,-NR15R16(여기서 R15 및 R16은 각각 독립적으로 H 및 C1- 6알킬로부터 선택됨), 및-SR17(여기서, R17은 H 및 C1-6알킬로 이루어진 군으로부터 선택됨)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
상기 화학식(Ib)의 화합물은 하기 화학식(II)의 화합물일 수 있다:
Figure pat00003
여기서, Ar, Y, Z, R2 및 R3은 화학식(Ib)에서 정의한 바와 같고, 및 여기서, X는-NR12R13이다.
상기 화학식(Ib)의 화합물은 하기 화학식(III)의 화합물일 수 있다:
Figure pat00004
여기서, Ar, R2 및 R3은 화학식(Ib)에서 정의한 바와 같고, 및 여기서, Y는 H, F, Cl 및 OMe로부터 선택된다.
하기 서술한 바는 화학식 Ia, Ib 및 II의 화합물에 적용된다. 이 서술은 독립적이며 상호 교환이 가능하다. 즉, 다음 서술 중 하나에 설명된 임의의 형태는(화학적으로 허용되는 경우)아래의 다른 하나 이상의 서술에 설명된 형태와 결합될 수 있다. 특히, 화합물이 본 명세서에서 예시되거나 설명되는 경우, 임의의일반 수준으로 표현된 화합물의 형태(특징)를 설명하는 하기의 서술 중 임의의 2개 이상의 설명이 결합되어, 본 명세서에서 본 발명의개시의일부를 형성하는 것으로 고려되는 주제를 나타낸다.
본 명세서에서, 용어 "자연 발생 알파 아미노산"은 글라이신(글리신), 알라닌, 발린, 류신(루신), 이소루신, 페닐알라닌, 티로신, 트립토판, 세린, 트레오닌, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 아스파라긴산, 글루탐산, 아스파라긴, 글루타민, 시스테인, 및 메티오닌으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 따라서, 본 명세서에서, 자연 발생 알파 아미노산의 측쇄는 H, CH3,-CH(CH3)2,-CH2CH(CH3)2,-CH(CH3)(CH2CH3),-CH2Ph,-CH2Ph-OH,-CH2SH,-CH2CH2SCH3,-CH2OH,-(CH3)(OH),-CH2CH2CH2CH2NH3 +,-CH2CH2CH2NHC(=NH2 +)NH2,-CH2C(O)O-,-CH2CH2C(O)O-,-CH2(O)NH2,-CH2CH2C(O)NH2,
Figure pat00005
로 이루어진 군으로부터 선택되는 것이다.
다음과 같을 수 있다: W1은-P(=O)(U)(V)이고 W2는 H이고, 본 발명의 화합물은 모체 3'-디옥시뉴클리오사이드의 5'-포스포르아미데이트일 수 있다. 특정의 바람직한 실시 양태에서, W1은-P(=O)(U)(V)이고, 여기서 U는-OAr이고, V는-NR4-CR1R2-C(=O)OR3이고, W2는 H이다.
다음과 같을 수 있다: W1은 H이고 W2는-P(=O)(U)(V)이고 본 발명의 화합물은 모체 3'-디옥시뉴클리오사이드의 2'-포스포르아미데이트일 수 있다. 특정의 바람직한 실시 양태에서, W1은 H이고 W2는-P(=O)(U)(V)이고, 여기서 U는-OAr이고, V는-NR4-CR1R2-C(=O)OR3이다.
다음과 같을 수 있다: W1 및 W2는 각각-P(=O)(U)(V)이고 본 발명의 화합물은 모체 3'-디옥시뉴클리오사이드의 2',5'-포스포르아미데이트일 수 있다. 특정 바람직한 실시 양태에서, W1 및 W2 각각이-P(=O)(U)(V)이고, 여기서 U는-OAr이고, V는-NR4-CR1R2-C(=O)OR3이다. 특정 바람직한 실시 양태에서, W1은 W2와 동일하다.
Ar은 비치환일 수 있다. Ar은 치환될 수 있다. Ar이 치환된 경우, 이는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 치환체(치환기)로 치환될 수 있다. 상기 치환체는할로, C1-C4-알킬, C1-C4-알콕시, 니트로 및 시아노로부터 선택될 수 있다.
Ar은, 치환 또는 비치환이든, 페닐, 피리딜, 나프틸 및 퀴놀일로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 특정의 바람직한 실시 양태에서, Ar은 페닐 및 나프틸로 이루어진 군으로부터 선택된다. 추가의 바람직한 실시 양태에서, Ar이 나프틸인 경우,-O-P와의 결합은 나프틸상의 1-위치에 있다. 추가의 바람직한 실시 양태에서, Ar은 비치환된 페닐 또는 비치환된 나프틸이고, 나프틸상의 1-위치에서-O-P에 결합한다.
R1 및 R2는 잔기-CR1R2COO-가 자연 발생 알파 아미노산의 상응하는 부분에 상응하도록 선택될 수 있다.
R1 및 R2는 각각 독리적으로 Me 및 H로부터 선택될 수 있다. 특정의 바람직한 실시 양태에서, R1 및 R2 중 하나는 Me이고, R1 및 R2 중 하나는 H이어서, R1 및 R2를 갖는 C 원자는 L-알라닌과 절대 배열(배치)(absolute configuration)을 갖는다.
R1은 H일 수 있다. R2는 C1-C4 알킬일 수 있다. R2는 메틸일 수 있다. R1과 R2를 지닌 C 원자는 L-알라닌과 동일한 절대 배치를 가질 수 있다.
R1과 R2가 각각 Me일 수 있다. R1 및 R2는 각각 H일 수 있다.
R3은 C6- 30아릴C1 - 6알킬 및 비치환된 C1- 20알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정의 바람직한 실시 양태에서, R3은 벤질(-CH2-Ph), 비치환 메틸(-CH3) 및 비치환 n-펜틸(-n-C5H11)로 이루어진 군에서 선택된다. 추가의 바람직한 실시 양태에서, R3은 벤질이다.
R4는 H일 수 있다.
U 및 V는-NR5R6으로부터 독립적으로 선택될 수 있다. 바람직하게는, U 및 V는 각각 동일하다. 추가의 바람직한 실시 양태에서, R8은 H이고, R7은 H, 메틸, i-프로필,-CH2Ph,-CH2CH(CH3)2 및-CH(CH3)(CH2H5)를 포함하는 군으로부터 선택된다. 추가의 바람직한 실시 양태에서, R7은 메틸이다. 추가의 바람직한 실시 양태에서, R7 및 R8을 갖는 C 원자의 입체 화학은 L-알라닌과 동일한 절대 배치를 갖는다. 또한, R7 및 R8을 갖는 C 원자의 입체 화학은 D-알라닌과 동일한 절대 배치를 가질 수 있다. 특정의 바람직한 실시 양태에서, R9는 분지형 및 비분지형 C1-C13 비환식 알킬, C3-C18사이클릭 알킬 및 C6- 30아릴C1 - 6알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며, 이는 임의로 치환된다. 특정의 바람직한 실시 양태에서, R9는 벤질이다.
특정 실시 양태에서, 본 발명의 화합물은 U 및 V를 포함하며, U 및 V는 각각 독립적으로-NR5R6으로부터 선택되고, 여기서 R5 및 R6은 이들이 부착된 N 원자와 함께 5 내지 8개의 고리 원자를 형성할 수 있다. U와 V는 같을 수 있다.
Q는 O일 수 있다.
다음과 같을 수 있다: W1은-P(=O)(U)(V)이고, 여기서 U는-O-1-나프틸이고, V는-NH-(L)CH(CH3)-C(=O)-O-CH2-Ph이고, W2는 H이고 Q는 O이다.
X, Z 각각은 H, OH, F, Cl, NH2, SH 및-SC1- 6알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, Y는 H, OH, F, Cl,-OC1- 6알킬, NH2, C2- 8알키닐, SH 및-SC1- 6알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다. X는 NR12R13, 예를 들면, NH2이다. 바람직한 구현 예에서, Z는 H이다. 더 바람직한 실시예에서, X는 NH2이고, Z는 H이다. 바람직한 실시예에서, X는 NH2이고, Y는 H이고 및 Z는 H이고; X는 NH2이고, Y는 F이고, Z는 H이고; X는 NH2이고, Y는 Cl이고, Z는 H이고; X는 NH2이고, Y는-OCH3이고, Z는 H이다. 특정 바람직한 구현 예에서, X는 NH2이고 Y는 H이고 Z는 H이고, 코르디세핀(3'dA)의 유도체인 본 발명의 화합물을 제공한다.
특정의 특히 바람직한 실시 양태에서, Ar은 페닐이고, R3는 벤질이고 R2는 메틸이다.
본 발명에 따른 화합물에 있어서, P가 비대칭인 경우, 화합물은 부분 입체 이성질체 Rp, 부분 입체 이성질체 Sp 또는 부분 입체 이성질체 Rp 및 Sp의 혼합물로 구될 수 있다.
본 발명의 바람직한 화합물은 하기를 포함한다:
(2S)-벤질 2-(((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라히드로퓨란-2-일)메톡시)(나프탈렌-1-일옥시)포스포릴)아미노)프로파노에이트;
벤질 2-(((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라히드로퓨란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)아세테이트;
(2S)-펜틸 2-(((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라하이드로퓨란-2-일)메톡시)(나프탈렌-1-일옥시)포스포릴)아미노)-4-메틸펜타노에이트;
메틸 2-(((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라히드로퓨란-2-일)메톡시)(나프탈렌-1-일옥시)포스포릴)아미노)-2-메틸프로파노에이트;
(2S)-벤질 2-(((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라하이드로퓨란-2-일)메톡시)(2-(3-에톡시-3-옥소프로필)페녹시)포스포릴)아미노)프로하노에이트;
(2S)-벤질 2-(((((2R, 3R, 5S)-2-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-5-(하이드록시메틸)테트라히드로퓨란-3-일)옥시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트;
벤질 2-(((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-4-((((1-(벤질옥시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)테트라히드로퓨란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트;
(2S)-벤질 2-(((((2R, 3R, 5S)-2-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-5-(하이드록시메틸)테트라히드로퓨란-3-일)옥시)(나프탈렌-1-일옥시)포스포릴)아미노)프로파노에이트;
벤질 2-[({[5-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시옥소란-2-일]메톡시}({[1-(벤질옥시)-1-옥소프로판-2-일]아미노})포스포릴)아미노]프로파노에이트;
(2S)-벤질 2-((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-2-메톡시-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라하이드로퓨란-2-일)메톡시)(나프탈렌-l-일옥시)포스포릴아미노)프로파노 에이트;
(2S)-벤질 2-((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-2-메톡시-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라히드로퓨란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴아미노)프로파노에이트;
(2S)-벤질 2-(((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-2-플루오로-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라하이드로퓨란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트;
(2S)-헥실 2-(((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-2-플루오로-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라하이드로퓨란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트;
(2R)-벤질 2-((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-2-클로로-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라하이드로퓨란-2-일)메톡시)(나프탈렌-1-일옥시)포스포릴아미노)프로파노에이트;
3'-디옥시아데노신-5'-O-[페닐(벤질옥시-L-알라닌일)]포스페이트;
2-0-메틸-3'-디옥시아데노신-5'-O-[1-나프틸(1-펜틸옥시-L-루신일)]포스페이트;
2-0-메틸-3'-디옥시아데노신-5'-O-[페닐(1-헥실옥시-L-알라닌일)]포스페이트;
2-플루오로-3'-디옥시아데노신-5'-O-[1-나프틸(벤질옥시-L-알라닌일)]포스페이트;
2-플루오로-3'-디옥시아데노신-5'-O-[1-나프틸(1-펜틸옥시-L-루신일)]포스페이트;
2-클로로-3'디옥시아데노신 5'-O-[1-페닐(2,2-디메틸프로폭시-L-알라닌)]포스페이트;
2-클로로-3'디옥시아데노신 5'-O-[1-나프틸(2,2-디메틸프로폭시-L-알라닌)]포스페이트;
2-클로로-3'디옥시아데노신 5'-O-[1-페닐(에톡시-L-알라닌)]포스페이트; 및
(2S)-이소프로필-2-(((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라하이드로퓨란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트.
및 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르, 에스테르의 염, 용매화물 또는 전구 약물(prodrugs)을 포함한다.
특정 실시 양태에서, 본 발명의 화합물은 다음과 같지 않다:
(2S)-이소프로필-2-(((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라하이드로퓨란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트.
본 발명의 두 번째 양태에 따르면, 치료 방법에 사용하기 위한 본 발명의 화합물이 제공된다. 상기 화합물은 암의 예방 또는 치료에 사용될 수 있다.
본 발명의 제3 양태에 따르면, 특히 제한되는 것은 아니지만 암의 예방 또는 치료용 약물의 제조에있어서의 본 발명의 화합물의 용도가 제공된다.
본 발명의 제4 측면에 따르면, 본 발명의 화합물의 유효량을 이러한 치료가 필요한 대상(예, 환자)에게 투여하는 것을 포함하는, 특히 제한되는 것은 아니지만 암의 예방 또는 치료 방법이 제공된다.
상기 암은 백혈병, 림프종, 다발성 골수종, 폐암(비소 세포 폐암 및 소세포 폐암 포함), 간암, 유방암, 방광암, 전립선암, 두경부암, 신경 모세포종, 육종(유잉 육종 포함), 갑상선암, 피부암(흑색종 포함), 구강 편평 세포 암종, 비뇨기 방광암, 라이디그(Leydig)세포 종양, 담관암 또는 담도암과 같은 담관계 암, 췌장암, 대장암, 결장암, 및 난소암과 자궁 내막암을 포함하는 부인과암을 포함한다.
본 발명의 제2, 제3 및 제4 양태 각각에 관하여, 본 발명의 실시 양태는 혈액학 및 고형 종양 중에서 선택된 암을 포함한다. 특히, 암은 백혈병, 다발성 골수종, 간암, 유방암, 두경부암, 신경 아세포종, 갑상선암, 피부암(흑색종 포함), 구강 편평 세포 암종, 방광암, 비뇨기 방광암, 대장암, 폐암(비소 세포 및 소형 세포 폐암), 담관암, 췌장암, 육종, 전립선암, 중추 신경계의 암, 유잉 육종, 장간막 암 및 난소암을 포함한 부인과 암, 자궁암 및 자궁 경부암(상피 자궁 경부암 포함). 바람직한 실시 양태에서, 암은 백혈병 또는 림프종, 예를 들어 다음을 포함한다: 급성 림프구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 급성 전골수성 백혈병, 급성 림프성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 림프성 백혈병, 단핵모구성(monoblastic) 백혈병, 털세포 백혈병, 호지킨 림프종 및 비-호지킨 림프종.
추가의 바람직한 실시 양태에서, 암은 급성 림프구성 백혈병이다.
본 발명의 제2, 제3 및 제4 양태 각각은 다른 암 치료법과 조합하여 사용되는 암을 치료하기 위한 양태를 포함할 수 있다. 다른 암 치료의 예로는 방사선 요법 및/또는 다른 화학 요법이 있다. 이론이나 메커니즘에 제한 없이, 예를 들어 Rovertson, JB et al., Int. J. Radiat. Biol. Relat. Stud. Phys. Chem. Med. 1978 34(5):417-29, Hiraoka, W(Radiat. Res.)(Tokyo)(1990)31(2):156-61]에 기재된 바와 같이, 디옥시아데노신은 X선 유도 DNA 손상의 복구를 억제한다. 본 발명의 제2, 제3 및 제4 양태 각각의 특정 바람직한 구체 예에서, 본 발명의 화합물은 암의 치료 방법에 사용하기 위한 것이고, 암의 치료 방법을 필요로 하는 환자에게 화합물 방사선 요법과 결합된 본 발명의 화합물을 제공한다.
본 발명의 제2, 제3 및 제4 양태 각각에 관하여, 본 발명의 추가의 실시 양태는 골수이형성 증후군의 예방 또는 치료 방법에 사용되거나 사용되는 본 발명의 화합물을 포함한다.
이론 또는 기전에 구속되지 않고: Tuli 등(상기)은 코르디세핀 뿐만 아니라 항종양 활성 및 세포 사멸 활성을 가지고, 항산화제, 항염증제, 말라리아 방지 항진균제, 면역 조절제, 항당뇨병/저혈당증, 스테로이드 생성 및 항노화 활성을 보이고; Vodnala, S.K. et al. J. Med. Chem. 2013, 56, 9861-9873은 코르디세핀과 2-플루오로코르디세핀이 항기생충 활성을 보인다고 보고하였다. Ahn, Y. J. 외, J. Agric. Food Chem. 2000 48(7)2744-8은 코르디세핀이 항 박테리아 활성을 보인다고 보고하였으며 Julian-Ortiz J. V. et al. J. Med. Chem. 1999 42(17)3308-14는 코르디세핀이 항바이러스 활성을 보인다고 보고했다; Sugar et al, Antimicrob. Agents. CHemother. 1998 42(6)1424-7은 코르디세핀이 항진균 활성을 가지고 있음을 보여 주었다. 본 발명의 제2, 제3 및 제4 양태 각각에 관하여, 본 발명의 실시 양태는 항-말라리아, 항-곰팡이, 면역 조절제, 항당뇨병/저혈당증, 스테로이드 생성, 항노화, 항 기생충, 항 박테리아 및 항균제, 항바이러스 활성으로 구성된 군에서 선택된 적어도 1종 이상의 치료가 필요한 질환 또는 증상이 있는 환자의 예방 또는 치료 방법에 사용되거나 사용되는 본 발명의 화합물을 포함한다.
본 발명의 제2, 제3 및 제4 양태 각각에 관하여, 본 발명의 실시 양태는 예방 또는 치료 방법에 사용하기 위한 또는 본 방법의 사용에 사용되는 본 발명의 화합물을 포함하며, 여기서 상기 방법은 아데노신디아미나아제의 억제제인 공동 약물의 투여를 하지 않는다.일반적으로 ADA 억제제와 함께 투여될 필요가 있는 모 화합물(parenty compound 코르디세핀)과는 달리, 본 발명의 화합물은 그러한 공동 투여를 필요로 하지 않을 수 있다.
그러나, ADA 억제제는 원한다면 본 발명의 두번째, 세번째 및 네번째 양태 각각에 대해 공동-약물로서 사용될 수 있다. 본 발명을 구현하는 화합물과 함께 투여하기 위한 적합한 ADA 억제제는 하이드록시우레아 또는 펜타스타틴이다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제와 함께 본 발명의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명의 화합물을 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 또는 부형제와 배합하는 단계를 포함하는 약제 학적 조성물의 제조 방법이 제공된다.
본 발명의 추가의 양태에 따르면, 하기 화학식(Ia)의 화합물을 제조하는 방법이 제공된다:
Figure pat00006
화학식 IV의 화합물과 반응함으로부터:
Figure pat00007
하기와:
(a)화학식 V의 화합물:
Figure pat00008
또는
(b)POCl3, 이어 N+R5R6H2의 염,
여기서, W1, W2, Q, X, Y, Z, Ar, R1, R2, R3, R4, R5 및 R6은 화학식(Ia)에 대해 본원에서개시된 정의를 갖는다.
본 발명을 구현하는 화합물은 놀랍게도, 특히 이의 모체인 퓨린-기반 3'-디옥시뉴클리오사이드(즉, W1 및 W2가 H인)와 비교하여, 특히 백혈병, 림프종 및/또는 고형 종양의 치료에 사용되는 경우 약제 활성, 특히 증강된 항암 활성을 갖는 것으로 밝혀졌다.
ADA를 억제하기 위한 공동 약물의 부재하에서, 투여된 모체 퓨린계 뉴클리오사이드와 비교하여, 아데노신디아미나아제를 억제하기 위한 공동 약물의 투여가 없는 경우에 활성 증가가 발견되었다.
따라서, 본 발명은 예기치 않게 3'-디옥시아데노신의 유도체 또는 3'-디옥시아데노신의 유사체의 유도체를 약제, 특히 항암제로서 사용하여, 이로써 탈아민의 문제점을 완화 시키는 수단을 제공한다. 필요하다면, 비교적 독성이 강한 2-디옥시코포마이신을 포함하는 아데노신데아미나아제의 억제제인 공동-약물의 사용을 완전히 피할 수 있다.
본 발명의 화합물에 의해 제시된 효능, 특히 항암 효능은 임의의 이론에 구속되지 않고, 본 발명의 3'-디옥시뉴클리오사이드 화합물이 세포 내에서 3'-디옥시아데노신트리포스페이트 또는 3'-디옥시아데노신 유사체의 트리포스페이트로 인산화되는 것을 설명한다. 본 발명의 화합물이-P-(=O)(U)(V)로서 W1을 갖는 경우, 세포 내의 U 및 V의 효소 절단은 화합물을 3'-디옥시아데노신 모노포스페이트로 직접 전환시키거나, 트리포스페이트로 인산화되기 전에 3'-디옥시아데노신 유사체의 모노포스페이트를 생성한다.
본 발명의 화합물의 상기 세포 내 활성은 미리 예측될 수 없었다.
상기 이점은 3'-디옥시아데노신 모체 또는 3'-디옥시아데노신 유사체 모체와 비교하여 본 발명의 포스포르아미데이트 뉴클리오사이드의 세포막 투과성이 향상되는 것으로부터 증강되고, 여기서 증강된 세포 투과성은 본 발명 화합물의 포스포르아미데이트 구조에 기여한다. 게다가, 상기 증가된 세포 투과성의 이점은 임의의 뉴클리오사이드의 포스포르아미데이트에 대하여 선험적으로 존재한다고 가정될 수 없는 것이다. 본 발명의 화합물은 이의 3'-디옥시뉴클리오사이드와 비교하여 증강된 항암 효능을 나타내는 3'-디옥시뉴클리오사이드의 포스포르아미데이트의 첫 번째 예라고 믿어진다. 따라서, 본 발명의 화합물에 의한 세포막 투과성 증진의 이점은 놀라운 것이다.
본 발명의 화합물의 바람직한 실시 양태는 조합하여, 본 발명의 화합물의 실시 양태와 관련하여 상술한 특징을 갖는다.
Ar, R1, R2, R3 및 R4는 각각 1, 2, 3, 4 또는 5개의 치환체로 치환될 수 있다.
Ar상의 치환체는 방향족 그룹 상에 오르토-, 메타-, 파라-또는 다른 위치에 존재할 수 있다. Ar상의 치환체는 하이드록시, C1-6 아실, C1-6 아실옥시, 니트로, 아미노, 카르복시, C2-6 에스테르, C1-6 알데히드, 시아노, C1-6 알킬아미노, 디C1 -6 알킬 아미노, 티올, 클로로, 브로모, 플루오로, 아이오도, C1-6 알콕시, C1-6 알킬, C1- 6알콕시C6 -10아릴, C5- 7사이클로알킬, C5- 11사이클로알킬C1 - 6알킬, C5- 7사이클로알케닐, C8- 12사이클로알키닐, C6- 11아릴C1 - 6알킬, C1- 6알킬C6 - 11아릴, C6- 11아릴, C1- 6플루오로알킬, C2-6플루오로알케닐, SO3H, SH 및 SR'(여기서, R'는 화학식 1a에 대해 R1로서 상기 개시된 것과 동일한 그룹으로부터 독립적으로 선택됨)로부터 선택되는 하나 이상의 치환체로 임의로 치환될 수 있다. 각각의 치환체는 임의의 다른 치환기로 치환될 수 있다.
R1, R2, R3 및 R4의 치환기는 하이드록시, C1-6 아실, C1- 6아실옥시, 니트로, 아미노, 아미도, 카르복시, C2- 6에스테르, C1- 6알데히드, 시아노, C1- 6알킬아미노, 디C1 - 6알킬아미노, 티올, 클로로, 브로모, 플루오로, 아이오도, C5- 7사이클로알킬, C5- 7사이클로알케닐, C8- 12사이클로알키닐, C6- 11아릴, C6- 11아릴C1 - 6알킬, 5- 20헤테로사이클릴, SO3H, SH 및 SR'(여기서, R'는 화학식 Ib에 대하여 R1로서 상기 개시된 것과 동일한 그룹으로부터 독립적으로 선택된다)으로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다.
특정의 바람직한 실시 양태에서, R1 및 R2는 독립적으로 H, C1- 10알킬, C6-30 아릴C1 -6알킬, C2- 10알케닐, C2- 10알콕시 C1- 10알킬, C1- 10알콕시C6 - 10아릴, C2- 10알키닐, C3- 20사이클로알킬, C3- 20사이클로알케닐, C8- 20사이클로알카이닐 및 5- 10헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택된다.
*특정 실시 양태에서, R1 및/또는 R2는 L 또는 D 입체 화학을 가질 수 있는 천연 알파 아미노산의 H를 포함하는 측쇄에 상응한다. 따라서, R1 및/또는 R2(예를 들어, 단일 또는 R1 및 R2)가 H, CH3,-CH(CH3)2,-CH2CH(CH3)2,-CH(CH3)(CH2CH3),-CH2Ph,-CH2Ph-OH,-CH2SH,-CH2CH2SCH3,-CH2OH, CH(CH3)(OH),-CH2CH2CH2CH2NH3 +,-CH2CH2CH2NHC(=NH2 +)NH2,-CH2C(O)O-,-CH2CH2C(O)O-,-CH2C(O)NH2,-CH2CH2C(O)NH2,
Figure pat00009
특정의 바람직한 실시 양태에서, R1 및 R2는 독립적으로 H,-CH3 및-CH2CH(CH3)2로 이루어진 군으로부터 선택된다. 추가의 바람직한 실시 양태에서, R1 및 R2는 함께 L 알라닌의 측쇄에 상응한다.
R3은 H, C1- 20알킬, C6- 30아릴C1 - 6알킬, C2- 10알케닐, C1- 10알콕시C1 - 10알킬, C1- 10알콕시C6 -10아릴, C2- 10알키닐, C3- 20사이클로알킬, C3- 20사이클로알케닐, C8- 20사이클로알키닐, 및 5-20헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택된다.
R3은 H, C1- 20알킬, C6- 30아릴C1 - 6알킬, 및 C3- 20사이클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. R3은 C6- 30아릴C1 - 6알킬, 및 비치환된 C1-20 알킬로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 특정의 바람직한 실시 양태에서, R3은 벤질(-CH2Ph), 비치환 메틸(-CH3) 및 비치환 n-펜틸(-n-C5H11)로 이루어진 군에서 선택된다. R3은 벤질일 수 있다.
R4는 C1- 20알킬, C6- 30아릴C1 - 6알킬, C2- 10알케닐, C1- 10알콕시, C1- 10알콕시C1 - 10알킬, C1- 10알콕시C6 - 10아릴, C2- 10알키닐, C3- 20사이클로알킬, C3- 20사이클로알케닐, C8- 20사이클로알키닐, 및 5-20헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택된다.
R4는 H, C1- 18알킬, C6- 30아릴C1 - 6알킬, C3- 20사이클로알킬, 및 5- 20헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. R4는 H, 메틸, 에틸, 프로필, 뷰틸, 펜틸, 헥실, 및 사이클로헥실로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. R4는 H일 수 있다.
본 발명은 암 줄기세포를 표적하기 위한 본 발명의 화합물을 제공한다.
본 발명은 암 줄기세포를 표적하기 위한 의약의 제조에 있어서 본 발명의 화합물의 용도를 제공한다.
본 발명은 암 줄기세포를 표적하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 암 줄기세포의 집단에 상기 암 줄기세포를 표적하기에 충분한 양의 본 발명의 화합물을 제공하는 단계를 포함한다.
본 발명에 언급된 암 줄기세포의 표적화는 암의 예방 또는 치료에 사용될 수 있다. 이러한 실시 양태에서, 암 줄기세포 집단은 상기 표적화를 필요로 하는 환자에서 암 또는 전암성 상태에 있을 수 있으며, 본 방법은 본 발명의 화합물의 치료학적 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함할 수 있다.
본 발명은 항암 줄기세포 약제로서 사용하기 위한 본 발명의 화합물을 제공한다. 본 발명의 화합물의 이러한 용도는 또한 암의 예방 또는 치료에 사용될 수 있다.
본 발명은 암 또는 전암성 증상을 갖는 환자가 본 발명의 화합물로 암의 예방 또는 치료로부터 이익을 얻는 지의 여부를 진단하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 하기를 포한한다:
암 줄기세포의 존재에 대해 환자의 암 또는 전암성 상태를 나타내는 생물학적 샘플을 검정하는 단계; 여기서, 상기 생물학적 샘플 중의 암 줄기세포의 존재는 환자가 본 발명의 화합물로 치료함으로써 이익을 얻는 것을 나타낸다.
본 발명은 암 또는 전암성 증상을 갖는 환자에게 적합한 치료법을 결정하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 하기를 포함한다:
암 줄기세포의 존재에 대해 환자의 암 또는 전암성 상태를 나타내는 생물학적 샘플을 검정하는 단계; 여기서, 상기 생물학적 샘플에서 암 줄기세포의 존재는 적절한 치료법이 본 발명의 화합물로 환자를 치료하는 단계를 포함함을 의미한다.
본 발명은 하기를 포함하는 방법에 의해 하기 치료를 위해 선택된 환자에서 암의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 본 발명의 화합물을 제공한다:
암 줄기세포의 존재에 대해 환자의 암 또는 전암성 상태를 나타내는 생물학적 샘플을 검정하는 단계; 생물학적 샘플 중의 암 줄기세포의 존재는 환자가 본 발명의 화합물로 치료하기에 적합한 것을 나타낸다.
상기개시된 방법은 본 발명의 화합물을 사용하여 암 또는 전암 상태를 예방 또는 치료하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 방법의 적합한 실시 양태에서, 암은 재발성 또는 난치성 암이다. 본 발명의 화합물은 이러한 재발성 또는 난치성 암의 치료에 사용될 수 있다.
본 발명은 대상에서 난치성 암 치료에 사용하기 위한 본 발명의 화합물을 제공한다. 상기 대상은 사람의 환자일 수 있다. 또는 가정용 동물일 수 있고, 포유류일 수 있다.
본 발명은 대상에서 재발성 또는 난치성 암을 치료하기 위한 의약의 제조에있어서의 본 발명의 화합물의 용도를 제공한다. 상기 대상은 가정용 동물일 수 있고, 포유류일 수 있다.
본 발명은 치료학적 유효량의 본 발명의 화합물을 치료가 필요한 대상에게 제공하는 단계를 포함하는, 대상에서 재발성 또는 난치성 암을 치료하는 방법을 제공한다. 상기 대상은 가정용 동물, 포유류일 수 있다.
본 발명은 암의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 화합물을 제공하며, 본 발명의 화합물은 치료의 적어도 하나의 초기 사이클에서 주당 약 25 mg/m2 내지 4000 mg/m2의 용량으로 사용되며, 매주 적어도 하나의 추가 치료주기에서보다 낮은 투여량으로 사용할 수 있다. 암은 재발성 또는 난치성 암일 수 있다.
본 발명의 다양한 측면은 본 발명의 화합물이 암 줄기세포 수를 감소시킬 수 있고 다른 세포 유형에 비해 이들을 우선적으로 감소시킬 수 있다는 발견에 기초한다. 이 발견은 많은 화학 요법제에 내성인 것으로 알려져 있는 암 줄기세포에서 놀라운 것이며, 본 발명의 화합물 또는 코르디세핀 또는 본 발명의 화합물이 유도된 모체 전구 약물 화합물, 2-플루오로 코르디세핀이 암 줄기 세포를 표적화할 수 있다는 제안은 이전에는 없었다. 따라서, 본 발명의 화합물이 암 줄기세포를 표적화하여 그 수를 감소시킬 수 있다는 사실, 발명가가 확인한 발견은 광범위한 암에 걸쳐 적용 가능하며, 광범위한 치료적 적용을 가능하게 하는 놀라운 돌파구를 나타낸 것이다.
이전에 보고되지 않은 본 발명의 화합물에 의해 발휘되는 생물학적 활성은 이들 화합물이 재발성 또는 난치성 암 환자에게 효과적일 수 있는 치료를 제공할 수 있음을 나타낸다. 본 발명의 화합물을 사용하는 이러한 종류의 치료는 종양 크기의 감소 및/또는 임상적으로 관련된 바이오 마커의 감소를 가져올 수 있으며, 그 중 어느 것이 더 유리한 예후와 관련될 수 있다. 또한, 본 발명의 화합물을 사용한 치료는 재발성 또는 난치성 암 환자의 종양 크기의 감소를 유지하는데 도움을 줄 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물을 사용하는 치료는 재발성 또는 난치성 암 환자에서 높은 내구성의 질병통제율(DCR)을 달성할 수 있다.
임의의 가설에 구속되지 않고, 본 발명자들은 암 줄기세포를 표적화 하는 본 발명의 화합물의 능력이 재발성 또는 난치성 암의 치료에서 이들 화합물의 치료적 유용성에 기여한다고 믿는다.
문맥상 달리 요구되는 경우를 제외하고는, 본원에서 본 발명에 따른 본 발명의 화합물의 "용도"에 대한 언급은 본원에 기술된 본 발명의 화합물의 임의의 의학적 용도를 적용하는 것으로 간주될 수 있다. 유사하게, 본 발명의 화합물을 사용하는 본 발명의 "방법"에 대한 언급은 본원에 기재된 본 발명의 방법 중 임의의 것에 적용하는 것으로 간주되어야 한다.
암 줄기세포를 표적화 하는 본 발명의 화합물의 능력은 치료가 가장 어려우며, 기존의 많은 암 치료법의 효과를 제한하는 내성에서 중요한 역할을 하는 것으로 여겨지는 암세포에 대한 새로운 치료법을 제공한다. 이 능력은 또한 암의 발달, 진행, 재발 및 증식과 관련된 것으로 여겨지는 세포를 표적화 하는 방법을 제공한다. 따라서, 본 발명의 화합물의 이러한 항암 줄기세포 활성은 신규하고 유효한 치료법이 오랫동안 추구되어 왔던 상황에서 이익을 가져온다는 것이 인식될 것이다.
암 줄기세포를 표적화 하는 본 발명의 화합물의 기능은 치료가 가장 어려우며, 기존의 많은 암 치료법의 효과를 제한하는 저항에서 중요한 역할을 하는 것으로, 암세포에 대한 새로운 치료법을 제공한다. 이 기능은 또한 암의 발달, 진행, 재발 및 증식과 관련된 것으로 여겨지는 세포를 표적화 하는 방법을 제공한다. 따라서, 이러한 항암 줄기세포에서의 본 발명의 화합물의 활성은 신규하고 유효한 치료법에 목적하는 이익을 가져올 수 있는 효과가 있다.
본 발명은 첨부된 도면을 참조하여 이하에서 더 설명된다.
도 1은 코르디세핀, 화합물 A, 2-F-코르디세핀, 화합물 O, P, Q 및 R에 대한 LD50 값의 비교를 나다내고, 모든 분석은 KG1a 세포를 사용하여 수행했으며 데이터는 5개의 독립적인 실험에 대한 평균값(±SD)이다.
도 2는 코르디세핀과 화합물 A의 백혈병 줄기세포(LSC)에 대한 표적 용량 분석이고, 이전에 생성된 데이터(ii)는 비교를 위해 표시된다. 모든 데이터는 세 번의 독립적인 실험의 평균값(±SD)이다.
도 3은 2-F-코르디세핀과 화합물 O, P, Q 및 R의 LSC 표적 용량의 분석이다. 모든 데이터는 세 번의 독립적인 실험의 평균값(±SD)이다.
도 4는 2-F-코르디세핀과 각 프로타이드(proTide)의 LSC 타겟팅 용량을 비교한 그래프이다. 모든 데이터는 세 번의 독립적인 실험의 평균값(±SD(표준 편차))이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "알킬"은 지시된 바와 같은 탄소 원자 수를 갖는 직쇄 또는 분지쇄의 포화 1가(단, 문맥이 다른 경우를 제외하고는)환상 또는 비환상 탄화수소 라디칼을 의미한다(제한되지 않은 경우, 비고리형(비환상)알킬기는 1 내지 20, 1-18, 1-10, 1-6 또는 1-4개의 탄소 원자를 가질 수 있고, 고리형(환상)알킬기는 3-20, 3-10 또는 3-7개의 탄소 원자를 가질 수 있음)또는 R1, R2, R3 및 R4 상에 존재할 수 있는 치환체에 대해 상기개시된 기로부터 독립적으로 선택된 3개의 치환기를 가질 수 있다. 비한정적인 예로서, 알킬기는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 헥실, 옥틸, 노닐 및 도데실을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "알케닐"은 하나 이상의 C=C 이중 결합을 가지며 지시된 바와 같은 탄소 원자 수를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 불포화 1가(단, 문맥 상 달리 요구되는 경우를 제외하고는)비고리 또는 고리형 탄화수소 라디칼을 의미한다. 비 환상 알케닐 그룹(기, 작용기)은 2 내지 20, 2-10, 2-6 또는 2-4개의 탄소 원자를 가질 수 있고 환형 알케닐 그룹은 3 내지 20 또는 5 내지 7개의 탄소 원자를 가질 수 있고, R1, R2, R3 및 R4 상에 존재할 수 있는 치환체에 대해 상기개시된 기(작용기, 치환기, 또는 그룹)로부터 독립적으로 선택되는 2 또는 3개의 치환기를 가질 수 있다. 비한정적인 예로서, 알케닐 그룹은 비닐, 프로페닐, 부테닐, 펜테닐 및 헥세닐을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "알키닐"은 하나 이상의 C≡C 삼중 결합을 가지며, 지시된 바와 같은 탄소 원자 수를 갖는 직쇄 또는 분지형 불포화 1가(단, 문맥에 달리 요구되는 경우를 제외하고는)비고리 또는 고리형 탄화수소 라디칼을 지칭하고(비 환상 알키닐 기는 2개 내지 20개, 2-10개, 2-6개 또는 2-4개의 탄소 원자를 가질 수 있고, 환식 알키닐 기는 8개 내지 20개의 탄소 원자를 가질 수 있음), 1개, 2개 또는 3개의 치환기 R1, R2, R3 및 R4 상에 존재할 수 있는 치환기에 대해 상기개시된 기로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체로 임의로 치환될 수 있다.
본원에서 사용된 용어 "알콕시"는 알킬이 상기 정의된 바와 같은 알킬-O-기를 지칭하고, 여기서 알킬 잔기는 알킬에 대해 상기개시된 바와 같은 1, 2 또는 3개의 치환기로 선택적으로 치환될 수 있다. 바인딩은-O-를 통해 이루어진다. 비 제한적인 예로, 알콕시 기는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 이소-프로폭시, n-부톡시, tert-부톡시, sec-부톡시, n-펜톡시, n-헥옥시 및 1,2-디메틸부톡시를 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 용어 "아릴옥시"는 아릴-O-기를 지칭하고, 여기서 아릴은 하기에서 정의된 바와 같고 아릴 잔기는 Ar기에 대해 상기개시된 바와 같이 1, 2 또는 3개의 치환체로 선택적으로 치환될 수 있다. 바인딩은-O-를 통해 이루어진다.
본원에서 사용된 용어 "알콕시 알킬"은 알콕시 치환기를 갖는 알킬기를 의미한다. 결합은 알킬기를 통해 이루어진다. 알킬 잔기 및 알콕시 잔기는 각각 알킬 및 알콕시의 정의에 관하여 본원에서 정의된 바와 같다. 알콕시 및 알킬 잔기는 각각 알킬의 정의와 관련하여 전술한 바와 같은 1, 2 또는 3개의 치환기로 치환될 수 있다.
본원에서 사용된 용어 "아릴 알킬"은 아릴 치환체를 갖는 알킬기를 의미한다. 결합은 알킬기를 통해 이루어진다. 아릴 잔기 및 알킬기는 각각 아릴 및 알킬의 정의와 관련하여 본원에서 정의된 바와 같다. 아릴 및 알킬 잔기는 각각 1, 2 또는 3개의 치환체에 의해 치환될 수 있으며, 치환기는 각각 아릴 및 알킬에 관하여 존재할 수 있는 치환기의 정의와 관련하여 정의된 바와 같다. 바람직한 실시 양태에서, 아릴 알킬은 Ph-CH2-인 벤질이다.
본원에 사용된 용어 "알콕시 아릴"은 알콕시 치환체를 갖는 아릴기를 나타낸다. 결합은 아릴 그룹을 통해 이루어진다. 알콕시 잔기 및 아릴 잔기는 각각 알콕시 및 아릴의 정의에 관하여 본원에서 정의된 바와 같다. 알콕시 및 아릴 잔기는 각각 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환될 수 있으며, 치환체는 각각 알콕시 및 아릴에 대해 존재할 수 있는 치환기의 정의에 대해 정의된 바와 같다.
본원에 사용된 용어 "사이클로 알킬 아릴"은 고리형 알킬 치환체를 갖는 아릴기를 나타낸다. 결합은 아릴 그룹을 통해 이루어진다. 사이클로 알킬 잔기 및 아릴 잔기는 각각 사이클로 알킬 및 아릴의 정의와 관련하여 본원에서 정의된 바와 같다.사이클로 알킬 잔기 및 아릴 잔기는 각각 알킬 및 아릴의 정의와 관련하여 본원에서 제시된 바와 같이 각각 1, 2 또는 3개의 치환체로 선택적으로 치환될 수 있다.
본원에서 사용된 "아릴"이란 용어는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 고리를 가지며 지시된 탄소 원자 수를 갖는(또는 기재되지 않은 경우)방향족 카보사이클릭 라디칼을 의미한다. 6 내지 30, 6 내지 12 또는 6 내지 11개의 탄소 원자)를 가질 수 있다. 바람직한 구현 예는 1개, 2개 또는 3개의 고리를 갖는다. 아릴 기는 Ar기 상에 존재할 수 있는 임의의 치환체에 대해 상기 개시된 바와 같이, 1, 2, 3, 4 또는 5개의 치환기로 선택적으로 치환될 수 있다. 바람직한 실시 양태에서, 아릴 기는 6개의 탄소 원자를 함유하는 방향족 모노사이클릭 고리; 7, 8, 9 또는 10개의 탄소 원자를 함유하는 방향족 융합된 바이사이클릭 환 시스템; 또는 10, 11, 12, 13 또는 14개의 탄소 원자를 함유하는 방향족 융합 트리사이클릭 환 시스템을 의미한다. 아릴의 비한정적인 예는 페닐 및 나프틸을 포함한다. 바람직한 실시 양태에서, 아릴 기상의 임의 치환기는 독립적으로 하이드록시, C1-6 아실, C1-6 아실옥시, 니트로, 아미노, 카르복시, 시아노, C1-6 알킬아미노, 디C1 -6 알킬아미노, 티올, 클로로, 브로모, 플루오로, 요오도, SO3H, SH 및 SR'(식 중, R'는 화학식 1a에 대하여 R1과 동일한 기들로부터 독립적으로 선택됨).
본원에 사용된 용어 "5-30 헤테로 아릴"은 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 융합 고리의 형태로 5 내지 30개의 고리 구성원을 갖는 1가(단, 문맥이 다른 경우를 제외하고는)불포화 방향족 헤테로사이클릭 라디칼을 지칭한다 N, O 및 S로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 헤테로 원자를 함유하는 하나 이상의 고리 내에 함유된다. 바람직한 실시 양태는 1, 2 또는 3개의 융합된 고리를 갖는다. 고리 시스템에서 이용 가능한 탄소 원자 및/또는 헤테로 원자는 고리 상에 Ar기 상에 존재할 수 있는 치환기에 대해 상기 개시된 바와 같이 1, 2, 3, 4 또는 5개의 치환체로 치환될 수 있다. 헤테로 아릴 기는 6개의 고리 원을 함유하는 방향족 단일 고리계를 포함할 수 있으며, 이 중 하나 이상의 고리 원은 N, O 또는 S 원자이고 1, 2 또는 3개의 추가 고리 N 원자를 임의로 함유한다. 1, 2 또는 3개의 고리 원이 N 원자 인 6개의 구성원을 갖는 방향족 모노사이클릭 고리; 9개의 구성원을 가지며, 하나 이상의 고리 구성원은 N, O 또는 S 원자이고 임의로 1, 2 또는 3개의 추가의 고리 N 원자를 함유하는 방향족 바이 사이클릭 융합 고리 시스템; 또는 1개, 2개 또는 3개의 고리 구성원이 N 원자인 10개의 고리 구성원을 갖는 방향족 바이사이클릭 융합 고리 시스템이다. 예로는 피리딜 및 퀴놀릴이 포함 되나 이에 제한되지 않는다.
본원에 사용된 용어 "5-20 헤테로 사이클 릴"은 5 내지 20 링 멤버를 갖는 포화 또는 부분적으로 불포화된 헤테로 사이클릭 라디칼을 의미하며, 단 하나의 링 멤버는 N, O 및 S이고, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 융합 고리의 형태이다. 바람직한 실시 양태에서, 라디칼은 1, 2 또는 3개의 고리를 갖는다. 바람직한 실시 양태에서, 라디칼은 5 내지 10개의 고리 구성원을 갖는다. 헤테로 사이클 릴 라디칼은 5개 고리 구성원을 가지며, 하나 이상의 고리 구성원은 N, O 또는 S 원자이고 선택적으로 하나의 추가 고리 O 원자 또는 1,2 또는 3개의 추가 고리 N 원자를 임의로 함유하는 모노사이클릭 고리계; 1, 2 또는 3개의 고리 원이 N 원자이고 임의적으로 O 원자를 포함하는 6개의 고리 원을 갖는 단환식 고리계; 9개의 고리 원을 가지며, 하나 이상의 고리 원이 N, O 또는 S 원자이고 선택적으로 1,2 또는 3개의 추가 고리 N 원자를 함유하는 이중 고리 융합 고리계; 또는 1개, 2개 또는 3개의 고리 구성원이 N 원자인 10개의 고리 구성원을 갖는 비사이클릭 융합 고리 시스템일 수 있다. 예로는 피롤리닐, 피롤리디닐, 1,3-디옥솔라닐, 이미다졸리닐, 이미다졸리디닐, 피라졸리닐, 피라졸리디닐, 피페리딘일, 모르폴리닐 또는 피페라지닐이 포함되나, 이에 한정되지 않는다.
상기 "헤테로 사이클릴"고리 시스템의 이용 가능한 고리 탄소 원자 및/또는 고리 헤테로 원자는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 치환기로 치환될 수 있다. 고리가 하나 이상의 헤테로 원자로 치환되는 경우, 헤테로 원자 치환기는할로겐(F, Cl, Br 및 I) 및 산소, 질소 및 황으로부터 선택되고, 여기서 산소, 질소 또는 황은 치환기의일부를 형성한다 절반. 고리(들)가 하나 이상의 헤테로 원자로 치환되는 경우, 바람직하게는 산소, 질소, 황 및할로겐으로 이루어진 군으로부터 선택된 1, 2, 3 또는 4개의 헤테로 원자 치환체가 존재한다. 헤테로 사이클릭 환 시스템 상에 존재할 수 있는 치환기의 예는 하이드록시, C1-6 아실, C1-6 아실옥시, 니트로, 아미노, 카복실, 시아노, C1-6 알킬 아미노, 다이 C1-6 알킬 아미노, 티올, 클로로, 브로모, 플루오로, 요오도, SO3H, SH 및 SR'(여기서, R'는 화학식 1a에 대해 R1과 동일한 기들로부터 독립적으로 선택됨)로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다.
본원에 사용된 용어 "아실"은 결합이-C(=O)-를 포함하는 직쇄 또는 분지쇄의 포화 또는 불포화, 치환 또는 비치환 1가(단, 문맥 상 달리 요구되는 경우를 제외하고)라디칼을 의미한다-C(=O)-잔기의-C-원자를 포함하고, 지시된 탄소 원자의 수를 가지며(또는 표시되지 않은 경우, 아실 기는 1-6, 또는 1-4 또는 1-2 탄소 원자를 가지며, R1, R2, R3 및 R4 상에 존재할 수 있는 치환기에 대해 상기 개시된 그룹으로부터 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체로 임의로 치환된-C(=O-)비 제한적인 예로, 아실 그룹은 HC(=O)-, CH3C(=O)-, C2H5C(=O)-, C3H7C(=O)-, C4H9C(=O)-및 C5H11C(=O)-를 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "아실 옥시"는 부분-C(=O)-O-를 포함하는 직쇄 또는 분지쇄 포화 또는 불포화, 치환 또는 비치환 1가(임의의 문맥이 필요한 경우를 제외하고)라디칼을 지칭하며, 여기서 결합은-C(=O)-O-잔기의 C 원자를 포함하는 지시된 탄소 원자 수를 가지고(또는 표시되지 않은 경우, 아실 옥시 기가-C(=O)-O)-잔기의 탄소 원자를 포함하는 1-6, 1-4 또는 1 내지 2개의 탄소 원자를 가진다), 선택적으로 R1, R2, R3 및 R4 상에 존재할 수 있는 1개, 2개 또는 3개의 치환체로 치환된다. 비 제한적인 예로, 아실 옥시 그룹은 HC(=O)-O-, CH3C(=O)-O-, C2H5C(=O)-O-, C3H7C(=O)-O-, C4H9C(=O)-O-및 C5H11C(=O)=O-를 포함한다.
본원에서 사용된 용어 "C2-6 에스테르"는 R18C(=O)-O-R19를 포함하는 치환 또는 비치환 1가(단, 문맥 상 달리 요구하는 경우를 제외하고)라디칼을 지칭하고, 여기서 R18은 H 및 C1- 4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, R19는 C1-5 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 해당 최대 탄소 원자수는, 상기 탄소 원자는-C(=O)-O-잔기의 C 원자를 포함하고, R18C(=O)-O-R19의 탄소 원자 수는 6이다. 결합은 R18 또는 R19를 통해 이루어지며, 결합이일어나는 알킬기는 2가이거나 또는 R18이 H일 때-C(=O)-O-잔기의 C를 통과하도록 각각의 그룹의 H는 부재하다. 바람직한 구현 예에서,-C(=O)-O 잔기의 C 원자를 포함하는 C2-6 에스테르는 2-5 탄소 원자를 갖는다. C2-6 에스테르는 R1, R2, R3 및 R4 상에 존재할 수 있는 치환기에 대해 상기 개시된 기로부터 독립적으로 선택된 1, 2 또는 3개의 치환체로 임의로 치환될 수 있다. 비 한정적인 예로서, C2-6 에스테르는-C2H4-C(=O)-O-C2H5일 수 있고,-C2H4 -잔기는-CH2-CH2-이고, 결합은-C2H4-잔기를 통한다.
본원에 사용된 용어 "알데히드"는 HC(=O)-R20-를 포함하는 직쇄 또는 분지쇄 포화 또는 불포화, 치환 또는 비치환 1가(단, 문맥 상 달리 요구되는 경우를 제외하고)라디칼을 지칭하며, 여기서 결합은-R20-을 통하고, 지시되는 탄소 원자의 수는,-C(=O)-잔기의 탄소를 포함하면서(또는 특별하게 지시되지 않으면, 알데히드기는-C(=O)-잔기의 탄소를 포함하면서 1-6, 1-4 또는 1-2 탄소원자를 가지고), 선택적으로 R1, R2, R3 또는 R4 상에 존재할 수 있는 1개, 2개 또는 3개의 치환체로 임의로 치환된다. 비한정적인 예로서, 알데히드 그룹은 HC(=O)-CH2-, HC(=O)-C2H4-, HC(=O)-C3H6-, HC(=O)-C4H8-및 HC(=O)-C5H10-를 포함한다.
본원에서 사용된 "플루오로 알킬"이란 용어는 알킬기가 직쇄 또는 분지쇄 포화 1가(단, 문맥에 따라 달리 요구되는 경우를 제외하고는)지시된 바와 같은 탄소 원자 수를 갖는 사이클릭 또는 비고리 탄화수소 라디칼을 의미한다 표시되어 있지 않은 경우, 1 내지 6개의 F 원자로 치환된 비 사이클릭 알킬기는 1 내지 6 또는 1-4개의 탄소 원자를 가지며 고리형 알킬기는 3 내지 6개의 탄소 원자를 갖는다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "플루오로 알케닐"은 알케닐 그룹이 하나 이상의 C=C 이중 결합을 갖는 직쇄 또는 분지쇄 불포화 1가(단, 문맥에 달리 요구되는 경우를 제외하고는)비 환식 또는 환식 탄화수소 라디칼이고, 1 내지 6개의 F 원자로 치환된 지시된 탄소 원자의 수를 가진다(또는 표시되지 않은 경우, 비 사이클릭 알케닐 기는 2 내지 6 또는 2 내지 4개의 탄소 원자를 가지며 고리형 알케닐 기는 4 내지 6개의 탄소 원자를 갖는다).
화학식 Ia 또는 Ib의 화합물을 제조하는 방법은 바람직하게는 적합한 용매의 존재하에 수행된다.
적합한 용매는 벤젠 및 톨루엔과 같은 탄화수소 용매; 디에틸 에테르, 테트라히드로퓨란, 디페닐 에테르, 아니솔, 디메톡시 벤젠 등의 에테르계 용매;할로겐화 탄화수소 용매, 예컨대 메틸렌 클로라이드, 클로로포름 및 클로로 벤젠; 아세톤, 메틸에틸케톤, 메틸이소부틸케톤 등의 케톤계 용제; 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, n-부틸알코올 및 tert-부틸알코올과 같은 알코올계 용매; 아세토 니트릴, 프로피오니트릴 및 벤조니트릴과 같은 니트릴계 용매; 에틸 아세테이트 및 부틸 아세테이트와 같은 에스테르계 용매; 에틸렌 카보네이트 및 프로필렌 카보네이트와 같은 카보네이트계 용매; 등. 이들은 단독으로 사용할 수도 있고, 2종 이상을 혼합하여 사용할 수도 있다.
바람직하게는 비활성 용매가 본 발명의 방법에서 사용된다. "비활성 용매"란 용어는 예를 들어 벤젠, 톨루엔, 아세토니트릴, 테트라히드로퓨란, 디메틸포름아미드, 클로로포름, 메틸렌 클로라이드(또는 디클로로 메탄), 디에틸 에테르, 에틸 아세테이트 등의 반응 조건 하에서 비활성인 용매를 의미한다. 아세톤, 메틸 에틸 케톤, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, tert-부탄올, 디옥산, 피리딘 등을들 수 있다. 테트라히드로퓨란이 특히 바람직하다.
바람직하게는, 본 발명의 방법은 실질적으로 건조한 조건 하에서 수행된다.
포스포로클로리데이트는 아릴옥시포스포로디클로라이드 및 적절하게 보호된 아미노산 유도체로부터 제조될 수 있다. 또는 인산염 화학 물질을 적합한 축합제와 함께 사용할 수 있다.
바람직하게는, 화학식 Ib의 화합물을 제조하는 방법은 포스포아미데이트가 부착되는 것 이외의 뉴클리오사이드상의 유리 OH기를 보호하는 단계를 포함할 수 있다. 예를 들어, 3'-디옥시 뉴클리오사이드와 t-BuMgCl의 존재하에 목적하는 포스포로클로리데이트의 반응을 수행함으로써 2'-포스포르아미데이트가 제조될 수 있다.
3'-디옥시 뉴클리오사이드를 POCl3와 반응시킨 후 N+R5R6H2의 염을 반응시켜 U 및 V의 각각이-NR5R6인 화합물을 제조할 수 있다. 적합한 염은 클로라이드, 토실레이트, 설포네이트 및 에스테르 염, 예컨대 4-메틸벤젠설포네이트를 포함한다. 이후 디이소프로필 에틸 아민과 같은 염기의 첨가는 공정을 보조할 수 있다.
본원에서 사용된 용어 "입체 이성질체"는 동일한 결합 순서에 의해 결합된 동일 원자로 이루어 지지만 본 발명의 화합물이 보유할 수 있는 상이한 3차원 구조를 갖는 모든 가능한 화합물을 정의한다.
본 발명에 따른 화합물이 하나 이상의 키랄 중심을 갖는 경우, 따라서 이들은 거울상 이성질체로서 존재할 수 있다. 화합물이 2개 이상의 키랄 중심을 보유하는 경우, 이들은 부분 입체 이성질체로서 추가로 존재할 수 있다. 본 발명에 따른 화합물의 제조 방법이 입체 이성질체의 혼합물을 발생시키는 경우, 이들 이성질체는 분취용 크로마토그래피와 같은 통상적인 기술에 의해 분리될 수 있다. 화합물은 입체 화학적으로 혼합된 형태로 제조될 수 있거나 또는 개개의 거울상 이성질체는 당업자에게 공지된 표준 기술, 예를 들어 거울상 이성질체 합성 또는 분할, 광학 활성 산과의 염 형성에 의한 부분 입체 이성질체 쌍 형성, 분별 결정화 및 유리 염기의 재생을 포함한다. 상기 화합물은 또한 부분 입체 이성질체 에스테르 또는 아마이드의 형성, 이어서 크로마토그래피 분리 및 키랄 보조제의 제거에 의해 분해될 수 있다. 다르게는, 화합물은 키랄 HPLC 컬럼을 사용하여 분리될 수 있다. 상기 모든 이성질체 및 이의 혼합물은 모두 본 발명의 범위 내에 포함되는 것으로 이해되어야 한다.
또한, 본 발명의 화합물에서 인산염 중심은 키랄성이며, 화합물은 RP 및 SP 부분 입체 이성질체로서 존재할 수 있음을 이해해야 한다. 화합물의 조성물은 RP 및 SP 또는 하나의 순수한 부분 입체 이성질체와 혼합될 수 있다. 바람직한 실시 양태에서, 화합물은 RP 또는 SP의 실질적으로 순수한 단일 부분 입체 이성질체이다. "실질적으로 순수한 단일 부분 입체 이성질체"는 화합물이 RP 또는 SP 부분 입체 이성질체 중 98% 이상으로 구성되는 것을 의미한다. 다른 구체 예에서, 1:1 RP 내지 SP 부분 입체 이성질체의 혼합물이있을 수 있다. 다르게는, 화합물은 RP 대 SP 부분 입체 이성질체의 RP 대 SP 부분 입체 이성질체의 비가 1:90 내지 90:1, 1:50 내지 50:1, 1:20 내지 20:1, 1:15 내지 15:1, 1:10 내지 10:1, 1:9 내지 9:1, 1:8 내지 8:1, 1:7 내지 7:1, 1:6 내지 6:1, 1:5 내지 5:1, 1:4 내지 4:1, 1:3 내지 3:1 또는 1:2 내지 2:1이다. 바람직한 실시 양태에서, 본 발명의 화합물은 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1보다 큰 RP 대 SP 부분 입체 이성질체의 비율:9, 1:10, 1:15, 1:20, 1:50, 1:90, 1:95 또는 1:99 또는 그 반대이다.
용어 "용매화물"은 본원에서 정의된 바와 같은 화학식 Ia 또는 Ib의 화합물을 의미하며, 적합한 용매의 분자는 결정 격자 내에 혼입된다. 적합한 용매는 투여된 투여량에서 생리 학적으로 허용 가능하다. 적합한 용매의 예는 에탄올, 물 등이다. 물이 용매일 때 분자를 수화물이라고한다.
본 발명의 화합물은 또한 제약 상 허용되는 염의 형태로 존재할 수 있다. 약제에 사용하기 위해, 본 발명의 화합물의 염은 "약학적으로 허용되는 염"을 의미한다. FDA는 약학적으로 허용 가능한 염 형태를 승인했다(참조 문헌:International J. Pharm. 1986, 33, 201-217; J. Pharm. Sci., 1977, Jan, 66(1))에는 약제 학적으로 허용되는 산성/음이온 성 또는 염기성/양이온 성 염이 포함된다.
캠퍼레이트, 클로라이드, 시트레이트, 디하이드로클로라이드, 에데텔레산염, 에데실레이트 산염, 에실산염, 푸마르산 염, 글라이세이트 산염, 글루타르산염, 글루타르산 염, 메틸레이트, 메틸브로마이드, 메틸나이트레이트, 메틸설페이트, 뮤케이트, 나피실레이트, 질산염, 파모에이트, 판토텐산염,포스페이트, 다이포스페이트, 폴리갈락투로 네이트, 폴리 락트산, 스테아레이트, 서브 아세테이트, 석시 네이트, 설페이트, 탄산염, 타르트레이트, 테클레이트, 토실레이트 및 트리에티오사이드를 포함한다.
약학적으로 허용 가능한 염기성/양이온 성 염은 알루미늄, 벤자틴, 칼슘, 클로로프로카인, 콜린, 디에탄올아민, 에틸렌디아민, 리튬, 마그네슘, 칼륨, 프로카인, 나트륨 및 아연을 포함한다.
본 발명은 본 발명의 화합물의 전구 약물을 그 범위 내에 포함한다.일반적으로, 이러한 전구 약물은 생체 내에서 요구되는 화합물로 쉽게 전환될 수 있는 화합물의 기능적 유도체일 것이다. 따라서, 본 발명의 치료 방법에서, 용어 "투여"는 구체적으로개시된 화합물 또는 구체적으로 개시되지 않을 수도 있지만 특정 화합물로 전환되는 화합물로 기재된 다양한 장애의 치료를 포함한다 생체 내에서 대상에게 투여한 후. 적합한 전구 약물 유도체의 선택 및 제조에 대한 통상적인 절차는 예를 들어, "Design of Prodrugs", ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985를 참조한다.
하나 이상의 유리 하이드록시 그룹을 가지는 약학적으로 허용 가능한 에스테르 유도체의 형태로 에스테르화되는 약학적으로 허용 가능한 에스테르 유도체는 생리적 조건 하에서 가용매 분해하여 유리 하이드록시 그룹을 갖는 본 발명의 화합물로 전환될 수 있는 전구 약물 에스테르의 특정 예이다.
본 발명에 따라 사용하기 위한 약학 조성물은 활성 화합물을 약학적으로 사용될 수 있는 제제로 가공하는 것을 용이하게 하는 부형제 및 보조제를 포함하는 하나 이상의 생리 학적으로 허용 가능한 담체를 사용하여 통상적인 방식으로 제제화될 수 있다. 이러한 약제 학적 조성물은 예를 들어 통상적인 혼합, 용해, 과립 화, 당의정, 레비게이팅, 유화, 캡슐화, 포착 또는 동결 건조 방법에 의해 그 자체로 공지된 방식으로 제조될 수 있다. 적절한 제형은 선택된 투여 경로에 의존한다.
본 발명에 따른 화합물 또는 약제 학적 조성물은 임의의 적합한 수단에 의해 호모 사피엔 또는 동물일 수 있는 환자에게 투여될 수 있다.
본 발명에 사용된 약제는 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 피하, 경피, 기도(에어로졸), 직장, 질 및 국소(협측 및 설하 포함)투여를 포함하는 경구 또는 비경 구 경로로 투여될 수 있다.
경구 투여의 경우, 본 발명의 화합물은일반적으로 정제 또는 캡슐 형태, 분말 또는 과립 형태, 또는 수용액 또는 현탁액 형태로 제공될 것이다.
경구용 정제는 비활성 희석제, 붕해제, 결합제, 윤활제, 감미제, 향료, 착색제 및 방부제와 같은 제약상 허용되는 부형제와 혼합된 활성 성분을 포함할 수 있다. 적합한 비활성 희석제는 탄산나트륨 및 탄산칼슘, 인산나트륨 및 인산칼슘 및 락토스를 포함하며, 옥수수 전분 및 알긴산은 적합한 붕 해제이다. 결합제는 전분 및 젤라틴을 포함할 수 있으며, 윤활제는 존재한다면 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 또는 탈크일 것이다. 원한다면, 정제는 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트와 같은 물질로 코팅되어 위장관에서의 흡수를 지연시킬 수 있다.
경구용 캡슐은 활성 성분이 고체 희석제와 혼합된 경질 젤라틴 캡슐 및 활성 성분이 물 또는 땅콩 오일, 액체 파라핀 또는 올리브 오일과 같은 오일과 혼합된 연질 젤라틴 캡슐을 포함한다.
직장 투여용 제제는 예를 들어 코코아 버터 또는 살리실레이트를 포함하는 적합한 염기를 갖는 좌제로서 제공될 수 있다.
질내 투여에 적합한 제형은 당 업계에 적절한 것으로 알려진 담체를 활성 성분 이외에 함유하는 페서리, 탐폰, 크림, 겔, 페이스트, 발포체 또는 스프레이 제형으로 제공될 수 있다.
근육 내, 복강 내, 피하 및 정맥 내 사용을 위해, 본 발명의 화합물은일반적으로 적당한 pH 및 등장성으로 완충된 멸균 수용액 또는 현탁액으로 제공될 것이다. 적합한 수성 비히클은 링거 용액 및 등장성 염화 나트륨을 포함한다. 본 발명에 따른 수성 현탁액은 셀룰로스 유도체, 알긴산 나트륨, 폴리비닐피롤리돈 및 트라가칸트와 같은 현탁제 및 레시틴과 같은 습윤제를 포함할 수 있다. 수성 현탁액에 적합한 방부제는 에틸 및 n-프로필 p-하이드록시 벤조에이트를 포함한다.
본 발명의 화합물은 또한 리포좀 제형으로 제공될 수 있다.
일반적으로, 적합한 투여량은 수령 체중 kg 당 0.1 내지 300 mg/일 범위일 것이다. 보다 적합한 투여량은 1일 당 수령자 체중 kg 당 0.5 mg 내지 150 mg의 범위, 1일 당 수령 체중 kg 당 0.5 내지 100 mg의 범위, 1일당 1 내지 50 mg 범위 1일 당 수령 체중 kg, 또는 1일당 수혜자 체중 kg 당 1 내지 10 mg의 범위이다. 적합한 저용량은 하루에 수령자 체중 kg 당 0.5 mg 또는 하루에 수혈 체중 kg 당 1 mg일 수 있다. 대안적으로, 적합한 투여량은 1일당 수령자의 신체 표면적의 m2 당 1 내지 100 mg 또는 하루 당 수혈자의 신체 표면적의 5 내지 50 mg의 범위일 수 있다. 적절한 투여량은 수령자의 신체 표면적 1 m2 당 6, 12, 24 또는 48 mg일 수 있다. 바람직한 투여량은 1일 1 회 투여량으로 또는 하루 중 적절한 간격으로 투여된 2, 3, 4, 5 또는 6회 또는 그 이상의 서브 투여량으로 제시되고 투여될 수 있다. 투여량은 단위 투여 형태 당 10 내지 1500mg, 바람직하게는 20 내지 1000mg, 가장 바람직하게는 50 내지 700mg의 활성 성분을 함유하는 단위 투여 형태로 투여될 수 있다. 1일 총 복용량은 단일 복용으로 또는 하루 중 어느 간격으로 하위 복용으로 복용 하든지 적절하게 1000 ~ 3000 mg이다.
"암 줄기세포"
때로는 "종양 개시 세포"로 지칭되는 암 줄기세포는 당업자에게 잘 알려져 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "암 줄기세포"는 비대칭 분할을 통해 자체 갱신하고, 종양 형성을개시하며, 종양 형성을 증가시키고 분화에 의해 소생되는 성체 비-줄기세포 암으로 성장하는 능력을 보유하는 세포인, 널리 받아 들여지는 의미에 따라 해석되어야 한다.
암 줄기세포는 암의 발생, 진행, 재발 및 증식에 중요한 역할을 한다. 따라서, 본 발명의 화합물이 암 줄기세포를 표적화 할 수 있고 그로 인해 숫자가 감소한다는 발견은 이러한 활동을 예방하거나 치료하는 치료 가능성을 제공한다.
본 명세서의 다른 부분에서보다 상세히 논의된 바와 같이, 암 줄기세포는 전암성 질환에서 발견되며, 이들의 존재가 암으로의 그러한 상태의 발전에 기여하는 것으로 여겨진다. 따라서, 본 발명의 화합물이 암 줄기세포를 표적화 하는데 사용되는 본 발명의 치료 방법 및 의학적 사용 방법은 전암성 상태(이 명세서에서 고려된 전암성 질환, 예를 들어, 골수 형성 증후군 또는 다른 상태)에서 암 줄기세포 수를 감소 시키는데 사용될 수 있고, 전암성 상태에서 암으로의 진행을 예방하는 것이다.
상기 언급 바와 같이, 암 줄기세포의 비대칭 세포 분화는 분화된 비-줄기세포 암을 야기한다. 따라서 암 줄기세포는 종양의 대부분을 형성하고 유지하는 역할을 한다.
이러한 비-줄기세포 암의 축적은 암의 진행에 중요한 역할을 한다. 본 발명의 화합물에 의한 암 줄기세포의 표적화는 암 줄기세포 수를 감소시킬 수 있고, 이는 차례로 비-줄기세포 암 자손의 수를 감소시킨다. 따라서, 본 발명에 따른 본 발명의 화합물의 치료 방법 및 의학적 용도는 암의 진행을 예방함으로써 암을 치료하는데 유익하다. 이러한 실시예는 본 명세서의 다른 부분에서보다 상세하게 설명된다.
암 줄기세포는 또한 암 세포의 저장기로 작용하여 치료 후 암의 재발을일으킬 수 있다. 환자의 암세포의 대다수가(예를 들어 수술, 방사선 요법 또는 화학 요법으로 단독으로 또는 조합으로)제거되어도 암의 관찰 가능한 징후가 보이지 않는 경우에도 암 줄기세포가 계속 존재하게 되는데,시간이 지남에 따라 암의 재발을일으킬 수 있다. 본 발명의 화합물에 의한 암 줄기세포의 표적화는 암 줄기세포 수가 감소되고 암 줄기세포가 죽는 새로운 방식을 제공한다. 따라서, 명세서의 다른 부분에서보다 상세히 논의된 바와 같이, 적합한 실시 양태에서, 본 발명은 본 발명의 화합물이 암의 재발을 예방하거나 지연시키는 방법 및 의학적 용도를 제공한다.
또한, 암 줄기세포가 암 부위에서 신체 내의 다른 부위로 이동하면 전이를일으켜 암이 증식하는 데 기여할 수 있다. 결과적으로, 암 줄기세포를 표적화 하는 본 발명의 화합물의 능력은 암 전파를 예방하거나 치료하는 새로운 치료 방법 및 의학적 용도를 제공한다.
생물학적 활성 이외에도 암 줄기세포는 특정 세포 표면 지표의 발현에 의해 확인될 수 있다. 혈액 종양에서 확인된 암 줄기세포는 전형적으로 CD34+이며, 고형 종양에서는 CD44+, CD133+ 및 CD90+가 암 줄기세포 마커로 확인되었다. 다음 표는 알려진 암 줄기세포 표면 표현형의 예를 요약한 것이다. 이들 형태의 암 줄기세포는 본 발명에 따른 본 발명의 화합물을 사용하여 표적화될 수 있고, 따라서 본 발명의 화합물을 사용하는 방법 또는 용도는 암 줄기세포와 관련된 암의 예방 또는 치료에 사용될 수 있다 암 줄기세포는 이러한 마커 세트 중 하나를 발현한다.
종양 타입 보고된 암 줄기세포에 대한 세포 표면 마커
고형 종양
유방암 CD44+/CD24-/low /Lineage-/ESA+
CNS(중추신경)암 CD133+
결장(대장)암 CD133+
결장(대장)암 ESAhigh/CD44+ /Lineage-/(CD166+)
유잉(Ewing's)암 CD133+
(Head and Neck)두경부암 CD44+/Lineage-
(Melanoma)흑색종 ABCB5+
(Liver)간암 CD90+/CD45-/(CD44+)
(Cholangiocarinoma)담관암 CD44+/GLI1+(Glioma-associated oncogene homolog-1)
(Ovarian)난소암 CD44+/CD117+
(Pancreas)췌장암 CD44+/CD24+/ESA+
(Pancreas)췌장암 CD133+
비-소세포 폐암
(Non-small-cell lung cancer)		 CD44+/Ber-EP4+
(Bladder cancer)방광암 CD44+/ALDH1A1+
혈액종양
(Haematological tumours)
급성 골수성 백혈병
(Acute myeloid leukaemia)		 Lin-/CD34+/CD38-/CD123+
B-급성 림프구성 백혈병
(B-Acute lymphoblastic leukaemia)		 CD34+/CD10-or CD34+/CD19-
B-급성 림프구성 백혈병
(B-Acute lymphoblastic leukaemia)		 CD34+/CD38-/CD19+
다발성 골수종
(Multiple myeloma)		 CD34-/CD138-
T-급성 림프구성 백혈병
(T-Acute lymphoblastic leukaemia)		 CD34+/CD4-or CD34+/CD7-
실시예에 제시된 데이터는 본 발명의 화합물이 백혈병 줄기세포주, 특히 급성 골수성 백혈병 세포주 KG1a에 존재하는 암 줄기세포의 암 줄기세포를 표적할 수 있음을 입증한다. 이 세포주는 본 발명의 화합물에 의해 표적화되는 뚜렷한 면역 표현형(Lin-/ CD34+/CD38-/ CD123+)을 갖는 소 줄기세포 유사 구획을 나타낸다. 따라서, 본 발명에 따른 본 발명의 화합물의 치료 또는 의학적 용도는 백혈병 또는 이러한 특징적인 마커를 발현하는 암 줄기세포와 관련된 다른 암을 예방 또는 치료하는데 사용될 수 있다.본 발명은 또한 환자의 암을 대표하는 생물학적 샘플에서 암 줄기세포의 존재를 확인하는 것에 기초하여 환자가 본 발명의 화합물을 이용하여 암의 예방 또는 치료를 위해 선택되는 방법 및 의학적 용도를 제공한다 또는 전암성 상태. 상기개시된 마커는 본 발명의 이러한 구체 예에 따라 암 줄기세포의 존재를 확인하는데 사용될 수 있는 적절한 예를 제공한다. 이들 마커의 발현이 생물학적 샘플에서 조사될 수 있는 적합한 기술은 본 명세서의 다른 곳에서 더 고려된다."암 줄기세포의 표적화"
본 발명은 본 발명의 화합물이 암 줄기세포를 표적화 하는데 사용될 수 있다는 첫 번째 징후를 제공한다. 암 줄기세포를 표적화 하는 본 발명의 화합물의 능력은 본 명세서에 개시된 실시예에 예시되어있다.
본 발명의 화합물이 암 줄기세포를 함유하는 암세포의 집단에 제공되는 경우, 이는 암 줄기세포를 표적으로하여 암세포의 총 수를 감소시킴을 알 수 있다. 본 명세서 논의된 바와 같이, 본 발명의 특정 화합물은 벌크 종양 세포와 대조적으로 암 줄기세포를 우선적으로 표적화하며, 이러한 화합물의 활성은 존재하는 암세포의 총 수를 감소시킬 뿐만 아니라, 암 줄기세포의 표현형 마커를 나타내는 전체 암 세포의 비율을 감소시킬 수 있다.
본 발명의 화합물은 암세포에 들어가 세포와 함께 핵산(RNA 및/또는 DNA)에 혼입되는 것으로 여겨진다. 임의의 이론에 구속 됨이 없이, 본 발명의 화합물에 의해 제시된 효능, 특히 항암 효능은 본 발명의 화합물이 코르디세핀 또는 코르디세핀 유도체의 삼인산(예를 들어, 플루오로 코르디세핀 또는 2-Cl-코르디세핀)이 있으며, 세포 내 효소적 절단은 트리포스페이트로의 인산화 전에 본 발명의 화합물을 직접 8-클로로 아데노신 모노포스페이트로 전환시키는 것으로 여겨진다.
또한 본 발명의 화합물은(코르디세핀과 비교하여)세포막 투과성이 증가되어 있고, 이는 이것이 유도된 모체와 비교하여 본 발명의 화합물의 항암 효능을 증강시키는 것으로 생각된다.
임의의 가설에 구속되기를 바라지 않고, 발명자는 암 줄기세포 수가 암 세포 개체군 중에서 암 줄기세포의 표적 사멸의 결과로서 발생한다고 믿는다. 따라서, 본 발명의 화합물은 암 줄기세포의 사멸을 유발할 수 있다. 또한, 본 명세서의 다른 곳에서 설명된 결과는 비-줄기세포의 사멸과 비교하여 본 발명의 특정 화합물이 암 줄기세포를 우선적으로 죽이는 것처럼 보이므로 암 줄기세포의 사멸뿐만 아니라 총 암세포 조직 중 암 줄기세포의 감소 비율을 나타낸다.
발명자들은 암 줄기세포를 우선적으로 표적으로 하는 본 발명의 화합물이 비-줄기세포 암과 비교하여 암 줄기세포를 우선적으로 죽이는 것으로 생각하지만, 다른 기작은 또한 암 줄기세포의 화합물에 의해 야기되는 암 줄기세포의 비율 감소에 기여할 수 있다. 본 발명은 이들 세포를 표적으로한다.
단지 예시로서, 본 발명의 화합물로 치료함으로써 암 줄기세포 분화를 증가시켜 암 줄기세포 수 및 암 줄기세포로 대표되는 전체 암 세포의 비율을 감소시킬 수 있다. 다르게는, 본 발명의 화합물은 암 줄기세포가 줄기세포 표현형을 잃게할 수 있는데, 예를 들어 자가-재생 능력을 상실하여 암 줄기세포 수를 감소시킬 수 있다.
본원에서 암 줄기세포의 표적화에 대한 언급은 이에 따라 해석되어야 한다. 본 발명의 목적 상, 암 줄기세포의 "표적화"는 본 발명의 화합물이 시험 관내 또는 생체 내에서 세포 집단에 존재하는 암 줄기세포의 수를 감소시키는 임의의 메카니즘을 포함하는 것으로 간주될 수 있다. 특히 암 줄기세포의 표적화는 특히 비-줄기세포 암과 비교하여 다른 세포 유형에 비해 암 줄기세포 수가 우대적으로 감소하는 것을 포함하는 것으로 간주될 수 있다. 이 명세서에서 표적화에 대한 언급은 비 줄기세포 암와 비교하여 암 줄기세포의 살상, 선택적으로 우선적인 살상을 포함하는 것으로 간주될 수 있다.
"암의 예방 또는 치료"
본 발명은 본 발명의 화합물이 암의 예방 또는 치료에 사용되는 의학적 용도 및 치료 방법을 제공한다. 본 발명과 관련하여, 암의 "예방"은 암 발병 전에 사용되는 본 발명의 화합물의 예방적 적용 및 암 발생을 막기 위한 목적으로 고려되어야 한다. 한편, 암의 "치료"는 암 세포 증식 및 종양 성장을 늦추거나 중단시킴으로써 암을 개선시키는 관점에서, 암이 발생한 후에 본 발명의 화합물의 용도에 관한 것으로 간주된다. 유리하게 암 치료는 암 세포 수 및 종양 크기의 부분적 또는 전체적인 감소를 유발할 수 있다. 암의 효과적인 치료는 RECIST(고형 종양에서의 반응 평가 기준)지침에 따라 "안정화"또는 "반응"하는 질병을 유발할 수 있다.
하기에서보다 상세하게 설명하는 바와 같이, 본 발명에 따른 암 예방은 암 발병 확률을 증가시키는 전암성 상태를 갖는 환자에게 특히 유익할 수 있다.
"암의 예방"
본 발명에 따른 암의 예방은 본원에 기술된 본 발명의 다양한 양태 또는 실시 양태에 따라 본 발명의 화합물을 사용하여 전암 상태의 치료에 의해 수행될 수 있다.
특히, 본 발명과 관련하여 암의 예방은 본 발명의 화합물이 전암성 상태의 환자에게 제공되는 본 발명의 방법 또는 의학적 용도에 의해 달성될 수 있다. 이 실시 양태에 따른 치료 방법 또는 의학적 사용 방법은 치료된 전암 상태의 암으로의 발달을 방지하여 암의 효과적인 예방을 제공할 수 있다.
본 발명과 관련하여 암 예방에 대한 언급은 또한 본 발명의 화합물의 다른 예방적 적용을 포함할 수 있다. 예를 들어, 암 줄기세포를 표적화하여 암의 발달을 방지하고 및/또는 암의 진행을 예방 및/또는 암의 재발을 방지 및/또는 암의 전이를 예방(방지)한다.
"전암 상태"
암은 그 자체로 암이 아니지만 암 위험 증가와 관련이있는 전암성 질환의 발병이 선행되기도 한다. 유전적 또는 후 발생적 변화의 축적은 이전에 정상적인 세포가 암 줄기세포 표현형을일으킬 수 있다. 따라서, 암 줄기세포는 암 전 상태뿐만 아니라 암 전암 상태에서도 존재할 수 있다.
암세포 증후군에서 암 줄기세포의 존재가 암으로의 이러한 상태의 발전에 기여한다고 믿어진다. 본 발명의 방법 및 의학적 용도는 전암성 상태에 존재하는 암 줄기세포를 표적화하기 위해 사용될 수 있으며, 이로써 상기 조건을 치료할 수 있다. 본 발명의 화합물이 암 줄기세포를 표적으로한다는 신규하고 예기치 않은 발견은 이러한 화합물로 전암성 상태의 치료가 암으로 진행되는 치료된 상태를 예방하는데 사용될 수 있다는 것을 의미한다. 이것은 본 명세서의 다른 곳에서 고려된 바와 같이, 본 발명의 화합물이 암 예방에 의학적으로 사용될 수 있는 방법을 나타낸다.
본 발명에 따라 치료될 수 있는 전암 상태의 예는 광선 각화증, 바렛 식도, 위축성 위염, 선천성 이상 각화증, Sideropenic dysphagia, Lichen planus,(MGUS), 단일 클론 성 B 세포 림프구 증식(MBL), 골수 이형성 증후군(myelodysplastic syndromes), 위축성 위염과 같은 위암의 전암성 병리학 증후군(pre-cancerous condition of the 위장염), 위축성 위염, 위축성 위염, 위축성 위염, 위궤양, 악성 빈혈, 위장 융기, 위 폴립 및 메네 트리에 병. 위에서 언급 한 위암, 위축성 위염, 악성 빈혈, 위 스텀프(stump) 및 특정 유형의 위장 용종 중에서 암으로 발전할 위험이 특히 높다.
전암성 상태는 흔히 이형성 또는 증식 성 세포를 포함하는 병변의 형태를 취한다. 따라서 암 줄기세포에 특징적인 표현형 마커 또는 표현형을 가진 세포의 존재에 대한 대안 또는 증진으로서의 형성 이상 또는 증식의 존재는 전암성 상태의 동정에 사용될 수 있다.
이형성증의 중증도는 여러 가지 전암성 질환 또는시간이 지남에 따라 단일 전암 상태의 발달에 따라 달라질 수 있다.일반적으로 전암성 질환과 관련된 진행성 이형성증은 전암성 질환이 암으로 진행될 가능성이 높다. 이형성증은일반적으로 경증, 중등도 또는 중증으로 분류된다. 중증 이형성증은 대개 치료하지 않으면 암으로 진행된다. 적절하게는, 본 발명의 화합물을 사용하는 치료 방법 또는 의학적 용도는 중증 이형성증과 관련된 전암성 상태의 환자를 치료하는데 사용될 수 있다.
본 발명의 적합한 실시 양태에서, 본 발명의 화합물은 심한 자궁 경부 형성 장애를 가진 환자를 치료하는데 사용된다. 심한 자궁 경부 형성 이상은 smear test로 진단할 수 있다. 본 발명의 또 다른 실시 양태에서, 본 발명의 화합물은 중증 식도 이형성증("Barrett's esophagus")을 치료하는데 사용된다. 중증 식도 이형성증은 조직 생체검사(biopsy)후 진단될 수 있다.
암을 가지고 있는 것으로 알려지지 않은 개인의 세포에서 체세포 돌연변이를 검출함으로써 전 악성 종양을 확인할 수 있다고 최근에 보고되었다. 특히 연령 관련 클론성 조혈 모세포가 전반적인 사멸률 증가 및 심혈관 질환 위험 증가와 관련된 악성 전질환으로 보고되었다. 혈액 세포에서 발견된 돌연변이의 대부분은 DNMT3A, TET2 및 ASXL1의 세 가지 유전자에서 발생했다. 따라서, 암 줄기세포를 표적화 하고, 전-암성 상태를 치료하는 본 발명의 화합물의 사용으로부터 이익을 얻는 환자는 DNMT3A, 및/또는 TET2 및/또는 ASXL1 중 최소한 하나의 전암성 상태를 가르키는 유전자 돌연변이의 존재에 대하여, 혈장을 포함하는 샘플을 분석하는 것으로부터 규명될 수 있다.
암 줄기세포를 표적화하기 위해 본 발명에 따른 본 발명의 화합물로 치료함으로써 이익을 얻을 수 있는 전암성 상태는 또한 표지자의 발현에 기초한 임의의 기술을 참조하여 암 줄기세포의 존재를 결정함으로써 확인될 수 있다 암 줄기세포 또는 암 줄기세포 표현형의 특성을 기술한다.
"암 치료법"
당업자는 암의 "치료"가 평가될 수 있는 많은 측정이 있다는 것을 이해할 것이다. 예를 들어, 암 발달, 암 진행, 암 재발 또는 암 전파의 감소 또는 예방은 암의 효과적인 치료를 나타내는 것으로 간주될 수 있다.
특정 실시 양태에서, 본 발명의 화합물은 암 세포 개체군에서 암 줄기세포의 비율을 감소시키기 위해; 및/또는 종양 성장을 억제하기 위해; 및/또는 종양 원성을 감소시키기 위해; 및/또는 원발성 암의 예방 또는 치료; 및/또는 재발 암 예방 또는 치료; 및/또는 전이성 암 또는 이차성 암을 예방 또는 치료하는 것; 및/또는 전이 또는 재발을 치료, 예방 또는 억제하기 위해; 및/또는 난치성 암 치료 또는 예방하는 데 사용될 수 있다.
종양 크기의 감소를 가져오고, 또한 치료가 투여되는 기간 동안/후에 종양 크기의 감소를 유지하기 위해 본 발명의 화합물을 사용하는 암 치료의 능력은 효과적인 암 치료의 특히 적절한 지표를 나타낸다. 실시예에서 제시된 바와 같이, 본 발명의 치료법 또는 의학적 용도는 이전에 다른 치료법으로 내성이었던 재발성 또는 난치성 암을 대표하는 세포를 사용하는 모델에서도이 측면에서 놀랍게 효과적이라는 것이 증명되었다.
실시예에 제시된 데이터는 본 발명의 화합물에 의한 치료가 암 세포 개체군에서 암 줄기세포의 비율을 감소 시킨다는 것을 예시한다. 암 줄기세포를 식별할 수 있는 특징적인 생물학적 활성 또는 세포 표면 마커는 본 명세서의 다른 곳에서 설명한다. 적절한 양태에서, 본 발명에 따른 암의 치료는 환자의 암에 존재하는 암 줄기세포의 비율을 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 또는 최소 40%. 적절한 양태에서, 본 발명에 따른 암의 치료는 환자의 암에 존재하는 암 줄기세포의 비율을 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70% 또는 적어도 80% 감소시킬 수 있다. . 본 발명에 따른 암 치료는 환자 암에 존재하는 암 줄기세포의 비율을 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95% 감소시킬 수 있다. 실제로, 본 발명에 따른 암의 치료는 환자의 암에 존재하는 암 줄기세포의 비율을 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 심지어 100%(실질적으로 암 줄기세포가 남아 있지 않음)의 감소를 야기할 수 있다.
암 줄기세포의 비대칭 분열은 종양의 성장에 기여한다. 본 발명에 따른 본 발명의 화합물로 암을 치료하면 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30% 또는 적어도 40%의 종양 성장을 억제할 수 있다. 적절하게는, 본 발명에 따른 암의 치료는 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 또는 적어도 80%의 종양 성장의 억제를 야기할 수 있다. 본 발명에 따른 암의 치료는 이렇게 처리된 환자에서 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%의 종양 성장을 억제할 수 있다. 실제로, 본 발명에 따른 암의 치료는 치료된 암에서 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상 또는 100% 이상의 종양 성장을 억제할 수 있다.
종양 성장은 종양의 크기 변화가시간에 따라 평가되는 임의의 적합한 방법에 의해 평가될 수 있다. 적절하게는, 암 치료 전의 종양의 크기는 암 치료 동안 또는 이후에 동일한 종양의 크기와 비교될 수 있다. 종양의 크기를 평가할 수 있는 여러 가지 방법이 알려져 있다. 예를 들어, 종양의 크기는 환자 내에서 원위치로 종양을 영상화함으로써 평가할 수 있다. 이미징 기술과 같은 적절한 기술은 종양의 부피를 측정하고, 종양 부피의 변화를 평가할 수 있게한다.
본 명세서의 실시예에 기재된 결과에 나타난 바와 같이, 본 발명의 화합물의 치료 방법 및 의학적 용도는 종양 성장을 정지시킬 수 있을뿐만 아니라 실제로 종양의 감소를 초래할 수 있다 재발성 또는 난치성 암 환자를 포함한 암 환자의 용량. 적절하게는, 본 발명에 따른 암 치료는 종양 부피의 감소를 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 또는 적어도 40% 증가시킬 수 있다. 적절한 양태에서, 본 발명에 따른 암의 치료는 종양 부피의 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 또는 80% 이상 감소시킬 수 있다. 본 발명에 따른 암 치료는 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%의 종양 부피의 감소를 유발할 수 있다. 실제로, 본 발명에 따른 암의 치료는 종양 부피를 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상, 또는 심지어 100%까지 감소시킬 수 있다.
위에서 설명한 종류의 종양 부피 감소는 적절한 대조군을 참조하여계산할 수 있다. 예를 들어, 적절한 동물 모델에서 시험 관내 또는 생체 내에서 수행된 연구에서, 종양 부피의 감소는 본 발명의 화합물로 처리된 종양의 부피와 대조 종양의 부피 사이의 직접 비교에 의해 결정될 수 있다 치료되지 않거나, 본 발명의 화합물 이외의 치료를받을 수 있다). 종양의 치료 부족을 필요로하는 그러한 모델은 임상 시험 또는 환자의 치료 관리의 맥락에서 윤리적으로 수용 가능하지 않을 수 있으며,이 경우 종양 부피의 감소는 치료된 치료 전에 동일한 종양의 체적을 가진 종양, 또는 종양에 의해 달성되었을 것으로 예상되는 체적을 갖는 종양은 치료를받지 않았다.
본 발명의 화합물의 치료 방법 및 의학적 용도는 암을 나타내는 바이오 마커를 감소시킬 수 있다. 그러한 바이오 마커의 감소는 암의 효과적인 치료가 증명될 수 있는 추가 평가를 제공한다. 이러한 바이오 마커의 적절한 예는 치료할 암의 유형에 기초하여 선택될 수 있다:부인과 암의 경우 CA125는 바이오 마커의 적절한 예를 나타내는 반면, 췌장 또는 담즙 암의 경우 CA19.9는 적절한 바이오 마커의 예, 대장 암의 경우 CEA가 적절한 바이오 마커일 수 있다.
적절하게는, 본 발명에 따른 암의 치료는 암 바이오 마커의 감소를 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30% 또는 적어도 40% 증가시킬 수 있다. 적절한 양태에서, 본 발명에 따른 암의 치료는 암 생체 지표에서 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70% 또는 적어도 80%의 감소를 야기할 수 있다. 본 발명에 따른 암의 치료는 암 생체 지표에서 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95%의 감소를 유발할 수 있다. 실제로, 본 발명에 따른 암의 치료는 암 생체 지표에서 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 심지어 100% 감소시킬 수 있다.
본 발명에 따라 암의 치료에서 관찰되는, 존재하는 암 줄기세포의 비율의 감소, 종양 성장의 감소, 또는 종양 체적 또는 암 바이오 마커의 감소와 같은 유리한 효과는 적어도 1개월 동안 유지될 수 있다. 적합하게는 그러한 유익한 효과는 적어도 2개월, 최소 3개월, 최소 4개월, 최소 5개월 또는 최소 6개월 동안 유지될 수 있다. 실제로, 그러한 유익한 효과는 적어도 12개월, 적어도 18개월, 또는 적어도 24개월 동안 유지될 수 있다. 적절하게 유익한 효과는 최소 3년, 최소 4년, 최소 5년, 최소 6년, 최소 7년, 최소 8년, 최소 9년 또는 10년 이상 유지될 수 있다.
본 발명의 적합한 실시 양태에서, 본 발명의 화합물은 암 줄기세포를 표적화함으로써 암 또는 전 악성 질환을 예방 또는 치료하는 방법에 사용된다. 적합한 실시 양태에서, 본 발명은 하나 이상의 암 줄기세포의 종양 형성을 감소시키는, 암 또는 전 악성 질환을 예방 또는 치료하는 방법에서 본 발명의 화합물의 용도를 제공한다. 적합하게는, 그러한 방법은 암의 진행을 방지하거나 종양 성장을 억제할 수 있다.
본 발명의 화합물이 암의 진행을 예방 또는 치료하기 위해 본 발명의 방법 또는 의학적 용도에 사용되는 경우, 상기 예방 또는 치료는 암 진행을 완전히 늦추거나 지연 시키거나 중단시킬 수 있다.
암의 진행은 전형적으로 암에 단계를 부여함으로써 결정된다. 병기 결정은 대개 I에서 IV까지의 숫자를 암에할당하여 수행된다. 단 한 번의 암으로 IV가 평가 대책의 한계까지 퍼진 암이다. 병의 진행기(병기)결정의 특징은 암마다 다르지만일반적으로 병기는 인접한 기관을 침범했는지, 얼마나 많은 국소(주변)림프절(있는 경우)을 침범했는지, 및 보다 먼 위치에서 나타나는지(전이), 종양(암)의 크기를 고려하여 계산된다.
일반적으로 1 기는 신체일부에 제한되어 있으며 수술적 절제술로 치료할 수 있다(충분히 작은 고형 종양의 경우). II 기는 국소 진행되어 화학 요법, 방사선 요법, 수술 또는 이들의 병합 요법으로 치료할 수 있다. III 단계는일반적으로 "후기"국소 진행으로 받아 들여 지지만 III 단계는 또한 국소적으로 진행되며 2 단계 또는 3 단계의 지정은 특정 유형의 암에 달려 있다. 병기 IV는 종종 두 번째 장기로 전이된다. 본 발명의 방법 또는 의학적 용도에서 본 발명의 화합물을 사용하는 암의 치료는 암 줄기세포를 표적화함으로써 단계 I, II, III 또는 IV 암을 치료하는 데 사용될 수 있다. 본 발명의 화합물로 치료하는 것은 암을 한 단계에서 다음 단계로 진행시키는 것을 방지하는데 사용될 수 있다. 한 실시 양태에서, 본 발명의 화합물로의 치료는 단계 I에서 단계 II 로의 진행을 예방하는데 사용된다. 또 다른 실시 양태에서, 본 발명의 화합물로의 치료는 II 기에서 III기로의 진행을 방지하는데 사용된다. 또 다른 실시 양태에서, 본 발명의 화합물로의 치료는 III 기에서 IV기로의 진행을 예방하는데 사용된다.
암의 진행을 예방하거나 억제하는 것은 특히 암이 국소적으로 진행되는 단계 I에서 단계 II 로의 진행 또는 암이 다른 장기로 전이하는 단계 III에서 단계 IV 로의 진행과 같은 암의 전염을 예방하는 데 특히 중요한다 . 암 줄기세포는 종양 형성(tumourigenic)이있어 암의 전이에 국소적으로나 전이적으로 중요한 역할을한다고 여겨집니다. 따라서, 본 발명의 화합물을 사용하는 본 발명의 치료 방법 또는 의학적 용도는 종양 형성 암 줄기세포를 표적화함으로써 환자의 수를 감소시킴으로써 암의 확산을 예방하는데 사용될 수 있다.
"암"
본 발명의 화합물은 이들이 유래된 부모 뉴클리오사이드와 비교하여 증가된 항암 활성을 나타낸다. 이러한 증가된 항암 활성은 암 줄기세포 및 비 줄기세포 암 둘 다에 대한 증가된 활성의 결과로서 제공되는 것으로 보인다.
암 줄기세포는 광범위한 암의 생물학적 활성에 중요한 역할을한다. 따라서, 본 발명에 따라 예방되거나 치료될 수 있는 광범위한 암이 존재한다.
본 명세서의 다른 곳에서 논의된 바와 같이, 암 줄기세포는 액체 종양(백혈병 및 림프종과 같은 혈액 종양 포함) 및 고형 종양(유방, 폐, 결장, 전립선, 난소, 피부, 방광, 담즙 및 췌장 종양). 따라서, 암 줄기세포를 표적화하기 위한 본 발명의 화합물의 치료 방법 및 의학적 용도는 이러한 암의 예방 또는 치료에 유용할 것으로 기대된다.
적절하게는, 본 발명의 화합물은 백혈병, 림프종, 다발성 골수종, 폐암, 간암, 유방암, 두 경부암, 신경 모세포종, 갑상선암, 갑상선암, 피부암(흑색 종 포함), 구강 편평 세포 암종, 방광암, 라이디히 세포종, 담관암 또는 담관암과 같은 담도계 암, 췌장암, 결장암, 대장 암 및 자궁 경부암(난소 암, 자궁 내막 암, 난관 암, 자궁암 및 자궁 경부암(상피 자궁 경부암 포함). 적절한 양태에서, 암은 백혈병이며, 급성 림프구성(lymphoblastic) 백혈병, 급성 골수성(myelogenous) 백혈병(급성 골수성(myeloid) 백혈병 또는 급성 비-림프성 백혈병으로도 공지됨), 급성 전골수성 백혈병, 급성 림프구성(lymphocytic) 백혈병, 만성 골수성 백혈병(만성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병 또는 만성 과립 백혈병으로도 알려짐), 만성 림프구성 백혈병, 단핵모구성(monoblastic) 백혈병 및 털세포 백혈병이있다. 추가의 바람직한 실시 양태에서, 암은 급성 림프구성(lymphoblastic) 백혈병이다. 특정 실시 양태에서, 백혈병은 난치성 TdT-양성 백혈병이다. 적합한 실시 양태에서, 암은 림프종(Hodgkin's lymphoma; 비호 지킨 림프종; 버킷 림프종; 및 작은 림프성 림프종.
상기 암에서 암 줄기세포를 적합하게 표적화 하는 것은 암의 진행을 예방 또는 치료함으로써, 또는 암의 재발을 예방 또는 치료함으로써, 또는 암의 진행을 예방 또는 암의 증식을 예방 또는 치료함으로써 암의 효과적인 치료를 달성할 수 있다.
적합한 실시 양태에서, 본 발명은 전이성 암의 예방 또는 치료에서 암 줄기세포를 표적화 하는데 사용하기 위한 본 발명의 화합물을 제공한다.
적합한 실시 양태에서, 본 발명은 재발성 또는 불응 성 암 치료에서 암 줄기세포를 표적화 하는데 사용하기 위한 본 발명의 화합물을 제공한다.
적합한 실시 양태에서, 본 발명은 1차 암 치료에서 암 줄기세포를 표적화 하는데 사용하기 위한 본 발명의 화합물을 제공한다. 적절하게 치료된 원발성 암은 제 2의 원발성 암일 수 있다.
본 발명은 이차 암의 치료에서 암 줄기세포를 표적화 하는데 사용하기 위한 본 발명의 화합물을 제공한다. 적합한 실시 양태에서, 2차 암은 전이성 암이다.
적합한 실시 양태에서, 본 발명은 암 줄기세포를 표적화 하는데 사용하기 위한 본 발명의 화합물을 제공하며, 여기서 암 줄기세포의 표적화는(i)암의 재발;(ii)제 2의 원발성 암의 발생; 또는(iii)암의 전이를 예방 또는 저해한다.
본 발명의 화합물이 암 줄기세포를 표적으로하는 능력에 기초하여 사용되는 치료 또는 의학적 용도의 방법은 재발성 또는 난치성 암의 치료에 사용될 수 있다. 그러한 양태에서 재발성 또는 난치성 암에 관한 고려 사항은, 문맥 상 달리 요구되는 경우를 제외하고, 본 발명의 양상과 관련하여 재발성 또는 난치성 암 치료와 동일하다.
"재발성 또는 난치성 암"
전술한 바와 같이, 본 발명의 특정 양상 및 실시 양태는 특히 재발성 또는 난치성 암의 치료에 본 발명의 화합물의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 목적을 위해, 난치성 암은 본 발명의 화합물을 사용하는 것 이외의 항암 요법에 의한 치료에 내성을 나타내는 암으로 간주될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물은 방사선 요법 치료에 내성이 있는 내성 암의 치료에 사용될 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 본 발명의 화합물은 암 치료에 사용되는 생물학적 제제에 내성인 내성암 치료에 사용될 수 있다. 적합한 실시 양태에서, 본 발명의 화합물은 본 발명의 화합물 이외의 화학 요법제를 사용한 치료에 내성이 있는 내성암의 치료에 사용될 수 있다.
특히, 본 발명의 화합물을 사용하는 본 발명의 의학적 용도의 치료 방법으로부터 이익을 얻을 수 있는 내성 암은 코르디세핀 또는 2-플루오로 코르디세핀에 저항 인 암을 포함한다.
재발된 암(또는 재발하는 암)은 암이 발견될 수없는 사후 기간 후에 돌아 오는 암이다. 암 재발은 원암(국소 암 재발)부위, 원발 암(국부 암 재발)또는 원 암(원위 암 재발)과 멀어진 부위에서 발생할 수 있다. 암 줄기세포는 암의 재발에 중요한 역할을한다고 여겨지며, 재발 암의 세포가 생성되는 근원을 제공한다. 따라서, 암 줄기세포의 표적화를 가능하게하는, 본 발명에 따른 본 발명의 화합물의 치료 방법 및 의학적 용도는 재발 암과 관련하여 큰 이점이될 수 있다. 암 줄기세포를 표적화 하는 본 발명의 화합물의 능력은 재발을 야기할 수 있는 그러한 세포의 집단을 제거하여 재발 암의 발병을 예방하는 데 사용될 수 있다. 본 발명의 화합물의 항암 줄기세포 활성은 또한 재발된 암에서 암 줄기세포를 표적화 하는 데 사용될 수 있을 뿐만 아니라 비 줄기세포 암에 세포 독성 효과를 잠재적으로 부여하여 재발 암 치료를 제공할 수 있다.
상기 관점에서, 본 발명의 화합물은 재발성 암의 예방 또는 치료를 위한 본 발명의 방법 또는 용도에 사용될 수 있음을 이해할 것이다. 본 발명의 화합물은 국소 재발 또는 원격 재발 암의 예방 또는 치료를 위해 본 발명의 방법 또는 용도에 사용될 수 있다.
본 발명의 화합물은 적어도 경감(remission)의 2개월, 적어도 6개월, 적어도 12개월, 적어도 18개월, 적어도 24개월, 또는 적어도 30개월을 제공함으로써 암의 재발을 방지(예방)하기 위하여, 본 발명의 방법 또는 용도에 사용될 수 있다. 실제로, 본 발명의 화합물은 적어도 경감(remission)의 4년, 적어도 5년, 적어도 6년, 적어도 7년, 적어도 8년, 적어도 9년, 또는 적어도 10년간 제공함으로써 암의 재발을 방지(예방)하는데 사용될 수 있다.
본 발명의 화합물은 적어도 경감(remission)의 2개월, 적어도 6개월, 적어도 12개월, 적어도 18개월, 적어도 24개월, 또는 적어도 30개월을 제공함으로써 암의 재발을 치료하기 위하여, 본 발명의 방법 또는 용도에 사용될 수 있다. 실제로, 본 발명의 화합물은 적어도 경감(remission)의 4년, 적어도 5년, 적어도 6년, 적어도 7년, 적어도 8년, 적어도 9년, 또는 적어도 10년간 제공함으로써 암의 재발을 치료하는데 사용될 수 있다.
암 줄기세포를 표적화 하는 본 발명의 화합물의 능력은 본 발명의 의학적 용도 또는 치료 방법에 따라 암을 예방 또는 치료하는 능력을 발생시킨다. 그러나, 본 발명의 화합물은 종양의 대부분을 구성하는 비-줄기세포 암에 직접 세포 독성 효과를 발휘한다는 것을 유의해야 한다. 암 줄기세포의 활동이 재발성 또는 난치성 암을 치료하는 것을 어렵게 만드는 내성의 근간을 이루는 반면, 비 줄기세포 암은 재발성 또는 난치성 암의 주성분이기도 하다.
본 발명의 화합물은 본 발명의 화합물이 유도되는 화학 요법 분자인 코르디세핀 또는 2-플루오로 코르디세핀보다 비-줄기세포 암에 대해보다 큰 세포 독성 효과를 나타낸다. 따라서, 본 발명의 화합물이 재발성 또는 난치성 암의 치료에 작용하는 메카니즘은이 화합물의 항암 줄기세포 활성에만 제한되지 않고, 또한 본 발명의 화합물의 작용을 이용할 수 있다. 비 줄기세포 암에 대한 발명. 이러한 용도에서 본 발명의 화합물을 이용한 치료는 암 줄기세포 및 비-줄기세포 암의 총 수를 감소시킬 것이다. 본 발명의 특정 화합물을 사용할 때, 이러한 치료는 치료 후 잔존하는 암 줄기세포의 비율을 우선적으로 감소시킬 것이다.
본 발명의 화합물의 치료 유효량
본 발명의 화합물의 치료 유효량은 암세포의 사멸을 유도하기에 충분한 양일 수 있다. 본 발명의 화합물의 치료 유효량은 암 줄기세포의 죽음을 유도하기에 충분한 양일 수 있다.일부 실시 양태, 특히 재발성 또는 난치성 암 치료에 관한 것에서, 본 발명의 화합물의 치료 학적 유효량은 암 줄기세포의 사멸을 유도하고 또한 비-줄기세포 암의 사멸을 유도하기에 충분한 양일 수 있다.
환자에게 투여될 본 발명의 화합물과 같은 치료 학적으로 효과적인 화합물의 양을계산하고 표현할 수 있는 다양한 방법이 있다. 암의 예방 또는 치료를 위한 제제의 투여량과 특히 관련이 있다고 여겨지는 그러한 방법 중 하나는 환자의 신체 표면적 단위당 투여되는 제제의 양이다. 이러한 투여량은 전형적으로 표면적의 제곱미터(㎡)당 제제의 양(질량으로 측정될 수 있음)으로 표현된다.
암의 예방 또는 치료를 위한 본 발명의 화합물의 용도는 10 mg/m2 내지 1000 mg/m2의 주간 투여량을 사용할 수 있다. 이러한 처리는 예를 들어, 375 mg/m2 내지 900 mg/m2의 매주 투여를 이용할 수 있다. 예를 들어, 약 500 mg/m2 내지 825 mg/m2 범위의 본 발명의 화합물을 환자에게 매주 투여하는 경우, 재발성 또는 난치성 암의 효과적인 치료가 제공될 수 있다.
임의의 가설에 구속되기를 바라지 않고, 본 발명자는 암 줄기세포를 표적화 하는 본 발명의 화합물의 능력이 달리 예상되는 것보다 적은 양의 화합물을 사용하여 치료 효과를 달성할 수 있다고 믿는다. 단지 예시로서, 825 ㎎/㎡, 750 ㎎/㎡, 600 ㎎/㎡ 또는 500 ㎎/㎡ 정도로 낮은 본 발명의 화합물의 주간 투여량은 본 발명의 화합물의 사용 및 방법에서 치료 학적으로 효과적일 수 있다.
본 발명의 화합물의 선택된 매주 투여량은 투여의 단일 발생 빈도 또는일주일 동안 투여의 다중 발생 빈도로 제공될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물의 매주 투여량은 2 회 투여량, 3 회 투여량 이상으로 제공될 수 있다. 따라서 750mg/m2의 주간 투여의 경우 1 주일에 250mg/m2의 3 회 투여 또는 1 주일에 375mg/m2의 2 회 투여에 의해 달성될 수 있다. 유사하게, 600 mg/m2의 주간 투여량의 경우 1 주일에 200 mg/m2의 3 회 투여 또는 1 주일에 300 mg/m2의 2 회 투여로 달성할 수 있다.
일주일에 걸쳐 이 화합물의 요구되는 투여량을 제공하기 위해 치료의 단일 발생으로 투여되는 본 발명의 화합물의 적절한 양은 약 100 mg/m2 내지 300 mg/m2일 수 있다.
제공된 본 발명의 화합물의 주간 투여량은 치료 과정 동안 감소할 수 있다. 예를 들어, 약 1000 mg/m2, 900 mg/m2, 825 mg/m2, 750 mg/m2 또는 725 mg/m2의 주간 투여로 치료가 시작될 수 있으며 치료 과정 동안 필요한 용량이 감소할 수 있다 ~ 750mg/m2(초기 용량이이 양보다 많은 경우), 약 650mg/m2, 약 625mg/m2 또는 심지어 약 500mg/m2 또는 약 375mg/m2의 용량을 갖는다.
물론, 본 발명의 화합물의 투여량은 다른 방식으로 제시될 수 있다. 이것들의 가장 공통적인 것은 단위 체적 당 제공될 활성제의 양이다. 평균적인 인간 환자의 경우 1 mg/m2의 용량은 약 0.025 mg/kg의 체질량에 해당하는 것으로계산되었다. 따라서, 본 데이터는 약 6.25 mg/kg 내지 약 25 mg/kg의 범위의 투여량으로 본 발명의 화합물이 재발성 또는 난치성 암 치료에 효과적이라는 것을 나타낸다. 적합한 투여량은 예를 들어 약 9.5 mg/kg 내지 22.5 mg/kg일 수 있다. 적합한 실시 양태에서, 본 발명의 화합물은 환자에게 약 12.5 mg/kg 내지 20.5 mg/kg 범위의 주간 투여량을 제공하는 경우 재발성 또는 난치성 암의 효과적인 치료를 달성한다.
본 발명의 예방 또는 치료 방법 및 의학적 용도에 사용하기에 적합한 본 발명의 화합물의 제제에 관한 고려 사항은 본 명세서의 다른 부분에 기재되어있다. 본 발명의 화합물의 주사 가능한 제형의 경우, 이들은 정맥 내 투여될 수 있다. 정맥 투여는 임의의 적절한시간 프레임, 예를 들어 10 분 주사 등에서 달성될 수 있다.
치료의 종류
적합한 실시 양태에서, 본 발명의 화합물은 암의 1 차 치료로서 암 줄기세포를 표적화 하는데 사용될 수 있다.
그러나, 본 발명의 화합물이 암 줄기세포를 표적으로하여 재발성 또는 불응 성 암을 치료할 수 있다는 사실은 본 발명의 화합물이 다른 치료법이 효과가 없는 것으로 입증된 상황에서 암의 효과적인 치료를 제공할 수 있음을 보여준다. 따라서, 적합한 실시 양태에서, 본 발명은 암의 제 2라인 치료로서 암 줄기세포를 표적화 하기 위한 본 발명의 화합물을 제공한다. 실제로, 적합한 실시 양태에서, 본 발명은 암 줄기세포 제 3 또는 추가 치료로서 암 줄기세포를 표적화 하기 위한 본 발명의 화합물을 제공한다.
적합한 실시 양태에서, 암의 치료에서 네오아쥬반트로서 사용하기 위한 본 발명의 화합물이 제공된다. 신배증제(neoadjuvant)는 암의 수술적 제거와 같은 "주요" 항암 요법 전에 종양의 크기를 줄이기 위해 환자에게 제공되는 약제이다. 본 발명의 화합물은 암에 대한 외과적 치료 및/또는 암에 대한 방사선 요법을 후속적으로 받을 환자를 위한 신 보조제로서 사용될 수 있다.
다르게, 또는 부가적으로, 본 발명은 암의 치료에서 보조제로서 사용하기 위한 본 발명의 화합물을 제공한다. 보조제는 주 요법 후에 암의 재발을 방지하기 위해 암의 수술적 제거와 같은 "주요" 항암 요법 후에 환자에게 제공되는 약제이다. 본 발명의 화합물은 암의 외과적 치료 및/또는 암에 대한 방사선 요법을 받은 환자를위한 보조제로서 사용될 수 있다.
본 발명의 화합물은 단일 요법에서 본 발명의 방법 또는 용도, 즉 본 발명의 화합물이 예방에 사용되는 치료 활성의 실질적으로 모든 것을 제공하는 예방 또는 치료에 사용될 수 있다.
대안적으로, 본 발명의 방법 또는 용도는 복합 요법에서 본 발명의 화합물을 사용할 수 있다. 이러한 실시 양태에서, 본 발명의 화합물은 적어도 하나의 추가의 암 치료와 함께 사용된다. 추가 암 치료는 수술 및/또는 방사선 요법을 포함할 수 있다. 추가적으로 또는 대안으로, 추가의 암 치료는 달성될 암의 예방 또는 치료에 기여하는 하나 이상의 추가의 치료제의 사용을 포함할 수 있다. 적절하게는, 이러한 제제는 암의 예방 또는 치료에 사용되는 화학 요법 제 또는 생물학적 제제일 수 있다.
병용 요법의 적절한 구체 예에서, 본 발명의 화합물 및 추가의 치료제는 환자에게 동시에 제공될 수 있다. 적합한 예에서, 본 발명의 화합물 및 추가의 치료제는 동일한 약제 학적 조성물의일부로서 제제화될 수 있다. 다르게는, 본 발명의 화합물 및 추가의 치료제는 실질적으로 동시에 환자에게 제공하기 위해 별도로 제형 화될 수 있다.
병용 요법의 다른 적합한 실시 양태에서, 본 발명의 화합물 및 추가의 치료제는 상이한시간에 환자에게 제공될 수 있다. 본 발명의 화합물 및 추가의 치료제는 환자에게 순차적으로 제공될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물은 추가의 치료제를 제공하기 전에 환자에게 제공될 수 있다. 다르게는, 본 발명의 화합물은 추가의 치료제를 제공 한 후에 환자에게 제공될 수 있다.
"추가 치료제"
본 발명의 화합물은 암의 예방 또는 치료를 위한 광범위한 치료제와 함께 사용될 수 있다. 여기에는 생물학적 제제, 면역 요법 제 및 암 예방 또는 치료에 사용될 수 있는 화학 치료제가 포함된다.
적절한 다른 제제의 특정 예가하기 단락에서 고려되지만, 이들은 본 발명의 화합물과 함께 사용하기에 적합한 추가의 치료제의 범위를 제한하는 것으로 간주되어서는 안된다. 실제로, 암 줄기세포를 표적화 하는 본 발명의 화합물의 능력은 암의 예방 또는 치료에 사용된 임의의 추가의 치료제와 함께, 그러한 추가의 약제가 암 줄기세포, 비-줄기세포 암, 또는 발달, 유지, 재발, 증식 또는 암과 관련된 다른 세포 또는 구성 성분을 의미한다.
본 발명의 화합물과 조합하여 사용될 수 있는 추가의 치료제의 예는 다음을 포함한다 :
(a)임의로 항 혈관 신생 제가(i)VEGF 경로의 억제제, 임의로 베바 시주 맙(bevacizumab)인 항-혈관 신생 제;(ii)티로신 키나아제 억제제, 선택적으로 소라 페닙, 수니 티닙 또는 파조 파닙; 또는(iii)mTOR 억제제, 선택적으로 에버리 무스;
(b)알킬화제;
(c)항 대사 물질;
(d)항종양 항생제;
(e)토포 이소머라 제;
(f)유사 분열 억제제;
(g)모노클로 날 항체;
(h)금속제; 또는
(i)능동 또는 수동 면역 요법.
문맥 상 달리 요구되는 경우를 제외하고, 상기 목록에 제시된 추가의 치료제는 상기에서 고려된 본 발명의 화합물과의 병용 요법의 임의의 실시 양태에서의 사용에 적합한 것으로 고려되어야 한다.
환자 선정
본 발명의 화합물이 암 줄기세포를 표적화할 수 있음을 발견한 발명자는 특정 환자가 재발성 또는 난치성 암과 같은 암의 예방 또는 치료에서 본 발명의 화합물을 투여함으로써 이익을 얻는지 여부를 결정할 수 있는 다수의 방법을 가능하게 한다.
따라서, 본 발명은 암 또는 전암성 증상을 갖는 환자가 본 발명의 화합물로 암의 예방 또는 치료로부터 이익을 얻는 지의 여부를 결정하는 방법을 제공하며, 이 방법은 암을 나타내는 생물학적 샘플 또는 사전-암 줄기세포의 존재에 대한 환자의 암 상태; 생물학적 샘플 중의 암 줄기세포의 존재는 환자가 본 발명의 화합물로 치료함으로써 이익을 얻는다는 것을 나타낸다.
본 발명은 암 또는 전암성 상태를 갖는 환자에 대한 적절한 치료법을 결정하는 방법을 추가로 제공하며, 상기 방법은:암 줄기의 존재에 대해 환자의 암 또는 전암성 상태를 나타내는 생물학적 샘플을 검정하는 단계 세포; 생물학적 샘플에서 암 줄기세포의 존재는 적절한 치료법이 본 발명의 화합물로 환자를 치료하는 것을 포함 함을 나타낸다.
또한, 본 발명은 환자의 암 또는 전암성 증상을 나타내는 생물학적 샘플을 존재 여부에 대해 분석하는 방법을 포함하는 방법에 의해 그러한 치료를 위해 선택된 환자에서 암의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 본 발명의 화합물을 제공한다. 암 줄기세포; 생물학적 샘플 중의 암 줄기세포의 존재는 환자가 본 발명의 화합물로 치료하기에 적합한 것을 나타낸다.
적절한 양태에서, 생물학적 샘플 중의 암 줄기세포는 본 출원에서 이전에 논의된 마커의 특징적인 패턴의 발현에 의해 동정될 수 있다.
당업자는 전술 한 바와 같은 본 발명의 구체 예에서 사용될 수 있는 생물학적 샘플의 많은 적합한 예가 있음을 이해할 것이다. 적합하게는, 그러한 샘플은 암 또는 전암성 상태로부터의 세포를 포함할 수 있다. 적합한 생물학적 샘플은 조직 표본, 예를 들어 조직학에서 사용하기 위한 샘플일 수 있다. 그러한 샘플의 세포는 위에서 설명한 것과 같은 암 줄기세포 마커의 발현에 대해 직접 평가할 수 있다.
선택적으로 또는 부가적으로, 적합한 생물학적 샘플은 암 또는 전암성 상태의 세포에 의한 유전자 발현을 나타내는 표적 분자를 포함할 수 있다. 그러한 표적 분자의 예는 발현된 유전자에 의해 코딩되는 단백질 또는 유전자 발현을 대표하는 mRNA와 같은 핵산을 포함한다.
암 줄기세포 마커의 발현을 평가할 수 있는 기술의 적절한 예는 표본 유형을 참조하여 선택될 수 있다. 발현된 마커를 조사하기 위한 기술은(진단 또는 예후 목적과 같은)임상 평가의 맥락에서 자주 사용되며, 이들의 용도는 본 발명의 맥락에서 실용화될 필요가있는 사람들에게 익숙할 것이다. 단지 예로서, 단백질을 함유하는 샘플에서, 암 줄기세포 마커의 존재는 문제의 암 줄기세포 마커와 반응하는 항체를 사용하는 적합한 기술에 의해 평가될 수 있다. 단백질 암 줄기세포 마커를 포함하는 그러한 샘플의 예는 조직학 샘플(적절한 면역 세포 화학 기술에 의해 마커의 존재가 시각화될 수 있음)또는 혈액 순환으로부터 유래된 샘플을 포함한다. 여기에서 순환 암 줄기세포(전이를 통한 암 전파에 기여한다고 여겨지는)의 존재는 유세포 분석과 같은 기술을 사용하여 평가할 수 있다.
암 줄기세포 마커의 발현을 대표하는 핵산을 함유하는 샘플에서, 그러한 발현은 적합한 프라이머를 사용하여 중합 효소 연쇄 반응(PCR)증폭과 같은 적절한 분자 생물학 기술에 의해 평가될 수 있다.
실시예 1-합성 방법
본 발명의 화합물은하기일반 절차 및 예시적인 합성 절차에 따라 또는 유사하게 제조될 수 있다.
일반적인 제조법 1(화합물 A 내지 F 및 L-U에 대해)
무수 THF(2 mL)중 N-메틸이미다졸(1.0 mmol) 및 적절한 포스포로클로리데이트(0.6 mmol)의 용액을 3'-디옥시아데노신(0.20 mmol)또는 치환된 3'-디옥시아데노신의 현탁액에 적가하고, 을 무수 THF(10 mL)에 용해시키고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 컬럼 크로마토그래피 및 예비 TLC로 정제하여 목적하는 화합물을 백색 고체로서 수득하였다. 사용되는 구성 요소의 양은 다를 수 있으며 실제 양은 아래의 예에 나와 있다.
일반적인 제조법 2(화합물 J의 경우)
3'-디옥시아데노신(0.80 mmol)을(CH3O)3PO(5 mL)에 현탁시키고, POCl3(0.80 mmol)을-5℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에 도달시키고 4시간 동안 교반하였다. 무수 CH2Cl2(5 mL)에 용해된 적절한 아미노산 에스테르 염(4.0 mmol)의 용액을 첨가 한 다음,-78℃에서 다이아 이소프로필 에틸 아민(8.0 mmol)을 첨가하였다. 실온에서 20시간 동안 교반 한 후, 물을 첨가하고 층을 분리시켰다. 수 성상을 디클로로 메탄으로 추출하고, 유기 상을 염수로 세척하였다. 합쳐진 유기 층을 Na2SO4상에서 건조시키고 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(CH2Cl2/MeOH = 100/0 내지 93/7의 구배 용리)로 정제하여 목적하는 생성물을 백색 발포체로 수득하였다. 사용되는 구성 요소의 양은 다를 수 있으며 실제 양은 아래의 예에 나와 있다.
일반적인 제조법 3(화합물 G-I)
*3'-디옥시아데노신(0.20 mmol)을 무수 THF(5 mL)에 현탁시키고, tBuMgCl(THF 중 1.0 M 용액, 0.22 mmol)을 실온에서 적가하였다. 무수 THF(2 mL)중의 적절한 포스포로클로리데이트(0.6 mmol)의 용액을 적가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 컬럼 크로마토그래피 및 예비 TLC로 정제하여 목적하는 화합물을 백색 고체로서 수득하였다. 사용되는 성분의 양은 다양할 수 있으며, 실제 양은하기 실시예에서 주어진다.
일반적인 제조법 4(화합물 V의 경우)
적절한 3'-디옥시아데노신 유도체(1 몰/당량)의 무수 DMF 용액에 tert-부틸 디메틸 실릴 클로라이드(3.3 몰/당량) 및 이미다졸 6.6(몰/당량)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다 16-20시간). 이어서, NH4Cl을 혼합물에 첨가하고 에틸 아세테이트로 2 회 세척하였다. 유기 층을 합하고, Na2SO4상에서 건조시키고, 용매를 진공하에 제거하였다. 컬럼 크로마토그래피로 혼합물을 정제하여 중간체 C1을 수득하였다. 이어서, 중간체 C1을 THF/H2O/TFA 4/1/1(6 ml/eq)의 수용액에 용해시키고 0℃에서 4시간 동안 교반하였다. 그 다음, 용액을 NaHCO3의 포화 수용액으로 조심스럽게 중화시키고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 2 회 세척하였다. 유기 층을 합하고, Na2SO4상에서 건조시키고, 용매를 진공하에 제거하였다. 컬럼 크로마토그래피로 혼합물을 정제하여 중간체 C2를 수득하였다. 이어서,일반적인 절차 B를 적용하고, 중간체 C3을 수득하였다. 중간체 C3을 0℃에서 THF/H2O/TFA 1/1/1(6 ml/eq)의 수용액에 용해시키고, 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 크로마토그래피로 정제하여 목적하는 화합물을 백색 고체로서 수득하였다.
일반적인 제조법 5( 실시예에서 사용된 3'-디옥시아데노신 및 3'- 디옥시 -2- 클로로 아데노신의 제조):
무수 CH3CN에서 건조된 아데노신 또는 2-클로로 아데노신의 현탁액에 H2O/CH3CN 1:9와 α-AIBBr(4.0 mol/eq)의 용액을 순차적으로 첨가하고 실온(20℃)에서 교반을계속했다. 1시간 후, NaHCO3의 포화 용액을 조심스럽게 첨가하고, 용액을 EtOAc로 추출하였다. 조합된 유기상을 염수로 세척하였다. 수 성상을 EtOAc로 추출하고 합한 유기상을 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고 증발시켜 백색 검을 수득하였다. 미정 제 혼합물을 무수 MeOH에 용해시키고, 미리 무수 MeOH로 잘 세척 한 Amberlite(2 x OH-)수지로 1시간 동안 교반하였다. 그 후 용액을 여과하고 수지를 무수 메탄올로 조심스럽게 씻어 내었다. 조합된 여액을 증발시켜 2', 3'-디하이드로 아데노신 또는 2', 3'-디하이드로-2-클로로 아데노신을 백색 고체로서 수득하였다.
2', 3'-디하이드로 아데노신 또는 2', 3'-디하이드로-2-클로로 아데노신(1 mol)의 냉(4℃)용액에 LiEt3BH(THF 중 1M 용액 4-4.3 mol/eq)/eq)를 무수 DMSO/THF(1/10)중에서 아르곤 분위기하에 첨가하였다. 4℃에서 1시간 동안 교반하고 실온에서 밤새(16시간)교반을 지속하였다. 반응 혼합물을 신중하게 산성화(5% AcOH/H2O)시키고 N2로 1시간 동안 퓸 후드에서 제거하여 발화성 트리 에틸 보란을 제거하고 증발시켰다. 잔류물을 크로마토그래피하여 3'-디옥시아데노신 또는 3'-디옥시-2-클로로 아데노신을 백색 분말로서 수득하였다.
일반적인 제조법 5:2', 3'-디하이드로 아데노신은 아데노신 10.0 g(37.4 mmol), H2O/CH3CN(1/9)7.5 mL, α-AIBBr 22 mL(149.7 mmol)무수 CH3CN 및 300 mL의 Amberlite(2 x OH-)수지를 400 mL의 건조 메탄올에 녹인다. 2', 3'-디하이드로 아데노신을 백색 고체로서 수득하였다(9.12 g, 98%). 무수 DMSO/THF(1/10, 50 mL)중 2', 3'-디하이드로 아데노신 9.12 g(36.6 mmol) 및 LiEt3BH/THF 1M 159 mL(159 mmol)로부터 3'-디옥시아데노신을 제조하였다. 실리카겔상에서 컬럼 크로마토그래피(용리액 시스템, DCM 중 3-18% MeOH)로 정제하여 3'-디옥시아데노신을 백색 분말로서 수득하였다(7.12 g, 77%).
1H NMR(500 MHz, DMSO-d6)δ 8.37(s, 1H, H8), 8.17(s, 1H, H2), 7.29(br s, 2H, NH2), 5.89(d, J = 2.5 Hz, 1H, H1’), 5.68(d, J = 4.5 Hz, 1H, OH-2’), 5.19(t, J = 6.0 Hz, 1H, OH-5’), 4.63-4.58(m, 1H, H2’), 4.40-4.34(m, 1H, H4’), 3.71(ddd, J = 12.0, 6.0, 3.0 Hz, 1H, H5’), 3.53-3.49(ddd, J = 12.0, 6.0, 4.0 Hz, 1H, H5’), 2.30-2.23(m, 1H, H3’), 1.98-1.90(m, 1H, H3’). 13C NMR(125 MHz, DMSO-d6)δ 156.00(C6), 152.41(C2), 148.82(C4), 139.09(C8), 119.06(C5), 90.79(C1’), 80.66(C4’), 74.56(C2’), 62.61(C5’), 34.02(C3’).
일반적인 제조법 5: 2', 3'-디하이드로-2-클로로 아데노신은 2-클로로 아데노신 5.0 g(16.6 밀리몰), H2O/CH3CN(1/9)3.0 mL, α-AIBBr 38 mL와 무수 메탄올 200 mL 중 Amberlite(2 x OH-)수지 150 mL를 넣는다. 2', 3'-디하이드로-2-클로로 아데노신을 백색 고체로서 수득하였다(3.03 g, 60%). 3'-디옥시-2-클로로 아데노신은 2.18 g(7.68 밀리몰)의 2', 3'-디하이드로-2-클로로 아데노신 및 30.7 mL(30.7 밀리몰)의 LiEt3BH/THF 1M으로부터 무수 DMSO/THF(1/10 mL, 30 mL). 실리카겔상에서 컬럼 크로마토그래피(용리액 시스템 2-20% DCM/DCM)로 정제하여 3'-디옥시-2-클로로 아데노신을 백색 분말로서 수득하였다(1.20 g, 55%).
1H NMR(500 MHz, CD3OD): δH 8.41(s, 1H, H8), 5.93(d, J = 2.5 Hz, 1H, H1’), 4.68-4.66(m, 1H, H2’), 4.56-4.52(m, 1H, H4’), 3.95(dd, J = 3, 12.5 Hz, 1H, H5’), 3.70(dd, J = 3, 12.5 Hz, 1H, H5’), 2.39-2.33(m, 1H, H3’), 2.08-2.03(m, 1H, H3’)13C NMR(125 MHz, CD3OD): δC 158.14(C6), 155.19(C2), 151.15(C4), 141.30(C8), 119.56(C5), 93.58(C1’), 82.80(C4’), 76.81(C2’), 64.01(C5’), 34.33(C3’).
3'-디옥시-2-플루오로 아데노신의 제조 :
무수 CH3CN(50 mL)중의 건조된 2-플루오로 아데노신(2.0 g, 7.01 mmol)의 현탁액에 H2O/CH3CN(1:9; 1.4 mL), 이어서 α-AIBBr(4.10 mL, 28.05 mmol))을 첨가하고 실온(20℃)에서 교반을계속하였다. 1시간 후, NaHCO3의 포화 용액을 조심스럽게 첨가하고, 용액을 EtOAc(2 x 100 mL)로 추출하였다. 조합된 유기상을 염수(1 x 50 mL)로 세척하였다. 수성 상을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하고 합한 유기상을 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고 증발시켜 백색 검을 수득하였다. 미정질의 혼합물을 THF/H2O(4/1, 50 mL)의 혼합물에 용해시키고 60 mL의 Amberlite(2 x OH-)수지(이전에 THF로 잘 씻어 낸)로 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 용액을 여과하고 수지를 THF로 조심스럽게 세척하였다. 합쳐진 여액을 증발시키고 EtOH로부터 잔류물을 결정화시켜 2', 3'-디하이드로-2-플루오로 아데노신을 백색 고체(1.13 g, 60%)로 수득하였다.
LiEt3BH/THF(1M; 18.01 mL, 18.01 mmol)의 용액을 2', 3'-디하이드로-2-플루오로 아데노신(1.13 g, 4.18 mmol)의 냉(4℃, 얼음 조)용액에 무수 DMSO/THF(1/10, 15 mL)의 혼합물에 첨가하였다. 4℃에서 1시간 동안 교반하고 실온에서 밤새(16시간)교반을 지속하였다. 반응 혼합물을 신중하게 산성화(5% AcOH/H2O)시키고 N2로 1시간 동안 퓸 후드에서 제거하여 발화성 트리 에틸 보란을 제거하고 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔(DCM 중 3-18% MeOH)상에서 크로마토그래피하여 3'-디옥시-2-플루오로 아데노신을 백색 분말로서 수득하였다(7.12 g, 77%).
19F NMR(470 MHz, DMSO-d6): δF-52.19. 1H NMR(500 MHz, DMSO-d6)δH 8.34(s, 1H, H8), 7.80(br s, 2H, NH2), 5.78(d, J = 2.25 Hz, 1H, H1’), 5.68(br s, 1H, OH-2’), 5.01(br s, 1H, OH-5’), 4.55-4.51(m, 1H, H2’), 4.39-4.32(m, 1H, H4’), 3.73-3.76(m, 1H, H5’), 3.56-3.50(m, 1H, H5’), 2.26-2.18(m, 1H, H3’), 1.94-1.85(m, 1H, H3’). 13C NMR(125 MHz, DMSO-d6)δC 158.51(d, 1JC-F = 202.7 Hz, C2), 157.55(d, 3JC-F = 21.2 Hz, C6), 150.11(d, 3JC-F = 20.3 Hz, C4), 139.22(d, 6JC-F = 2.2 Hz, C8), 117.37(d, 4JC-F = 4.1 Hz, C5), 90.67(C1’), 80.90(C4’), 74.73(C2’), 62.35(C5’), 33.89(C3’).
3'-디옥시-2-메톡시아데노신의 제조 :
무수 CH3CN(50 mL)중의 건조된 2-플루오로 아데노신(2.0 g, 7.01 mmol)의 현탁액에 H2O/CH3CN(1:9; 1.4 mL),이어서 α-AIBBr(4.10 mL, 28.05 mmol))을 첨가하고 실온(20℃)에서 교반을계속하였다. 1시간 후, NaHCO3의 포화 용액을 조심스럽게 첨가하고, 용액을 EtOAc(2 x 100 mL)로 추출하였다. 조합된 유기상을 염수(1 x 50 mL)로 세척하였다. 수성 상을 EtOAc(2 x 50 mL)로 추출하고 합한 유기상을 Na2SO4상에서 건조시키고, 여과하고 증발시켜 백색 검을 수득하였다. 미정 제 혼합물을 무수 MeOH(50 mL)로 용해시키고, 60 mL의 Amberlite(2 x OH-)수지(이전에 무수 MeOH로 잘 세척 함)로 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 용액을 여과하고 수지를 THF로 조심스럽게 세척하였다. 합쳐진 여액을 증발시키고 EtOH로부터 잔류물을 결정화시켜 2', 3'-디하이드로-2-메톡시아데노신을 백색 고체(1.57 g, 84%)로 수득하였다.
무수 DMSO/헥산 중 2', 3'-디하이드로-2-메톡시아데노신(762 mg, 2.84 mmol)의 냉(4℃)용액에 LiEt3BH(THF 중 1M 용액; 8.53 mL, 8.53 mmol)THF(1/10, 15 mL)의 혼합물에 첨가하였다. 4℃에서 1시간 동안 교반하고 실온에서 밤새(16시간)교반을 지속하였다. 반응 혼합물을 신중하게 산성화(5% AcOH/H2O)시키고 N2로 1시간 동안 퓸 후드에서 제거하여 발화성 트리 에틸 보란을 제거하고 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔(DCM 중 3-17% MeOH)상에서 크로마토그래피하여 3'-디옥시-2-메톡시아데노신을 백색 분말로서 수득하였다(650 mg, 81%).
1H NMR(500 MHz, CD3OD)δH 8.20(s, 1H, H8), 5.90(d, J = 2.4 Hz, 1H, H1’), 4.75-4.71(m, 1H, H2’), 4.54-4.48(m, 1H, H4’), 3.91(dd, J = 12.3, 2.5 Hz, 1H, H5’), 3.69(dd, J = 12.30, 4.0 Hz, 1H, H5’), 3.37(s, 3H, OCH3), 2.43-2.35(m, 1H, H3’), 2.08-2.02(m, 1H, H3’). 13C NMR(125 MHz, CD3OD)δC 163.68(C2), 158.12(C6), 151.94(C4), 139.71(C8), 116.64(C5), 93.36(C1’), 82.53(C4’), 76.59(C2’), 64.24(C5’), 55.29(OCH3), 34.81(C3’).
포스포로클로리데이트는 아릴 포스포로 디클로리데이트 및 아미노산 에스터 하이드로클로라이드로부터 공지된 방법으로 제조하였다.
3'-디옥시아데노신-5'-O-[페닐(벤질옥시-L-알라닐)]포스페이트 A
Figure pat00010
화합물 A는 3'-디옥시아데노신(50mg, 0.20 밀리몰), N-메틸이미다졸(80㎕, 1.0 밀리몰) 및 페닐(벤질옥시-L-알라닐)포스포로클로리데이트(212mg, 0.6 밀리몰)를 사용하여일반 제조법 1에 따라 제조하였다. CH2Cl2/MeOH(100% 내지 95:5%) 및 예비 TLC(1000mM, 용리액 시스템 CH3OH/CH2Cl2 5/95)의 구배를 갖는 컬럼 크로마토그래피(용리액 시스템 CH3OH/CH2Cl2 0/100 내지 7/93)표제 화합물을 백색 고체(31mg, 28%)로 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, CD3OD): δH 8.26(s, 0.5H, H8), 8.24(s, 0.5H, H8), 8.22(s, 0.5H, H2), 8.21(s, 0.5H, H2), 7.34-7.25(m, 7H, Ar), 7.21-7.13(m, 3H, Ar), 6.01(d, J = 2.9 Hz, 1H, H1’), 6.00(d, J = 2.9 Hz, 1H, H1’), 5.15-5.04(m, 2H, OCH2Ph), 4.73-4.63(m, 2H, H2’, H4’), 4.43-4.35(m, 1H, H5’), 4.27-4.20(m, 1H, H5’), 4.03-3.91(m, 1H, CHCH3), 2.35-2.28(m, 1H, H3’), 2.09-2.02(m, 1H, H3’), 1.32(d, J = 7.4 Hz, 1.5 H, CHCH3), 1.28(d, J = 7.4 Hz, 1.5 H, CHCH3).
13C NMR(125 MHz, CD3OD): δC 174.84(d, 3JC-P = 4.5 Hz, C=O), 174.63(d, 3JC-P = 4.5 Hz, C=O), 157.32(C6), 157.31(C6), 153.86(C2), 153.84(C2), 152.13(C4), 152.07(C4), 150.20(C-Ar), 150.18(C-Ar), 140.47(C8), 137.26(C-Ar), 137.19(C-Ar), 130.76(CH-Ar), 130.74(CH-Ar), 129.57(CH-Ar), 129.32(CH-Ar), 129.31(CH-Ar), 129.29(CH-Ar), 129.26(CH-Ar), 126.16(CH-Ar), 126.14(CH-Ar), 121.46(d, 3JC-P = 4.7 Hz, CH-Ar), 121.38(d, 3JC-P = 4.7 Hz, CH-Ar)120.54(C5), 120.53(C5), 93.24(C1’), 93.18(C1’), 80.43(d, 3JC-P = 3.6 Hz, C4’), 80.36(d, 3JC-P = 3.6 Hz, C4’), 76.62(C2’), 68.62(d, 2JC-P = 5.3 Hz, C5’), 68.30(d, 2JC-P = 5.3 Hz, C5’), 67.95(OCH2Ph), 67.92(OCH2Ph), 51.74(CHCH3), 51.60(CHCH3), 34.91(C3’), 34.70(C3’), 20.45(d, 3JC-P = 7.0 Hz, CHCH3), 20.28(d, 3JC-P = 7.0 Hz, CHCH3).
31P NMR(202 MHz, CD3OD): δP 3.9, 3.7.
MS(ES+)m/z: Found: 569.2(M + H+), 591.2(M + Na+), 1159.4(2M + Na+)C26H29N6O7P required:(M)568.2.
H2O/CH3CN으로 100/10 내지 0/100의 30 분, 1ml/분, 1 = 254nm로 용출시키는 역상 HPLC는 부분 입체 이성질체의 피크가 tR 14.02 분 및 tR 14.26 분을 나타내었다.
(2S)- 벤질 2-(((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라하이드로퓨란-2-일)메톡시)(나프탈렌-1-일)피리딘-3-일옥시)포스포릴)아미노))프로하노에이트 B
Figure pat00011
상기 일반 제조법 1을 이용하여, N-메틸이미다졸(240 μL, 3.0 mmol) 및 (2S)-벤질 2-((클로로(나프탈렌-1-일옥시)포스포릴)아미노)프로파노에이트에틸(727 mg, 1.8 mmol)무수 THF 중의 3'-디옥시아데노신(150 mg, 0.6 mmol)의 현탁액에 무수 THF(10 mL)를 적가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 컬럼 크로마토그래피(용리액 시스템 CH3OH/CH2Cl2 0/100 내지 6/94) 및 분취용 TLC(2000 μM, 용리액 CH3OH/CH2Cl2 5/95)로 정제하여 목적하는 화합물을 백색 고체(45 mg, 12%)로 수득하였다.
MS(ES+)m/z: Found: 619.2(M + H+), 641.2(M + Na+), 1259.4(2M + Na+)C30H31N6O7P required:(M)618.58.
31P NMR(202 MHz, CH3OD): δP 4.3(s), 4.1(s).
1H NMR(500 MHz, CH3OD): δH 8.24(s, 0.5H, H8), 8.22(s, 0.5H, H8), 8.20(s, 0.5H, H2), 8.19(s, 0.5H, H2), 8.14-8.09(m, 1H, Ar), 7.89-7.85(m, 1H, Ar), 7.70-7.67(m, 1H, Ar), 7.53-7.42(m, 3H, Ar), 7.39-7.34(m, 1H, Ar), 7.31-7.25(m, 5H, Ar), 5.99(d, J = 2.0 Hz, 0.5H, H1’), 5.98(d, J = 2.0 Hz, 0.5H, H1’), 5.10-5.01(m, 2H, CH2Ph), 4.72-4.61(m, 2H, H2’, H4’), 4.47-4.40(m, 1H, H5’), 4.33-4.24(m, 1H, H5’), 4.09-3.98(m, 1H, CH ala)2.35-2.26(m, 1H, H3’), 2.07-1.98(m, 1H, H3’), 1.30-1.24(m, 3H, CH3).
13C NMR(125 MHz, CH3OD): δC 174.85(d, 3JC-P = 3.7 Hz, C=O), 174.56(d, 3JC-P = 3.7 Hz, C=O), 157.33(C6), 157.31(C6), 153.87(C2), 153.85(C2), 150.24(C4), 150.23(C4), 147.91(d, 3JC-P = 7.5 Hz, ‘ipso’ Nap), 147.95,(d, 3JC-P = 7.5 Hz, ‘ipso’ Nap), 140.56(C8), 140.50(C8), 137.22(C-Ar), 137.17(C-Ar), 136.28(C-Ar), 129.55(CH-Ar), 129.53(CH-Ar), 129.30(CH-Ar), 129.25(CH-Ar), 128.88(CH-Ar), 128.82(CH-Ar), 127.91(d, 2JC-P = 6.25 Hz, C-Ar), 127.83(d, 2JC-P = 6.25 Hz, C-Ar), 127.77(CH-Ar), 127.75(CH-Ar), 127.49(CH-Ar), 127.45(CH-Ar), 126.48(CH-Ar), 126.47(CH-Ar), 126.02(CH-Ar), 125.97(CH-Ar), 122.77(CH-Ar), 122.63(CH-Ar), 120.58(C5), 120.53(C5), 116.35(d, 3JC-P = 3.75 Hz, CH-Ar), 116.15(d, 3JC-P = 3.75 Hz, CH-Ar), 93.22(C1’), 93.20(C1’), 80.30(d, 3JC-P = 2.75 Hz, C4’), 80.24(d, 3JC-P = 2.75 Hz, C4’), 76.51(C2’), 76.44(C2’), 68.87(d, 2JC-P = 5.2 Hz, C5’), 68.64(d, 2JC-P = 5.2 Hz, C5’), 67.93(OCH2Ph), 51.82(CH ala), 51.73(CH ala), 35.01(C-3’), 34.76(C3’), 20.41(d, 3JC-P = 6.7 Hz, CH3 ala), 20.22(d, 3JC-P = 6.7, CH3 ala).
H2O/CH3CN으로 100/10 내지 0/100의 30 분, 1ml/분, 1 = 200nm에서 용리되는 역상 HPLC는 tR 16.36 분 및 tR 16.60 분을 갖는 부분 입체 이성질체의 2개의 피크을 나타냈다.
벤질 2-(((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-4- 하이드록시테트라하이드로퓨란 -2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)아세테이트 C
Figure pat00012
상기 일반 제조법 1을 사용하여, 무수 THF(2 mL)중의 N-메틸 이미다졸(80 μL, 1.0 mmol) 및 벤질 2-((클로로(페녹시)포스포릴)아미노)아세테이트(204 mg, 0.6 mmol)을 무수 THF 중의 3'-디옥시아데노신(50 mg, 0.20 mmol)의 현탁액에 적가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 컬럼 크로마토그래피(용리액 시스템 CH3OH/CH2Cl2 0/100 내지 6/94) 및 분취용 TLC(500μM, 용리액 CH3OH/CH2Cl2 5/95)에 의해 정제하여 목적 화합물을 백색 고체(21mg, 19%)로 수득하였다.
(ES+)m/z, found: 555.2(M + H+), 577.2(M + Na+), 1131.4(2M + Na+). C25H27N6O7P required:(M)554.2.
31P NMR(202 MHz, CH3OD)δ 5.1, 4.9.
1H NMR(500 MHz, CH3OD)δ 8.27(s, 0.5H, H8), 8.24(s, 0.5H, H8), 8.22(s, 0.5H, H2), 8.21 (s, 0.5H, H2), 7.37-7.26(m, 7H, Ph), 7.22-7.13(m, 3H, Ph), 6.02(d, J = 1.8 Hz, 0.5H, H1’), 6.00(d, J = 1.8 Hz, 0.5H, H1’), 5.14-5.11(m, 2H, OCH2Ph), 4.73-4.64(m, 2H, H2’, H4’), 4.50-4.39(m, 1H, H5’), 4.36-4.24(m, 1H, H5’), 3.53-3.71(m, 2H, CH2 gly), 2.39-2.25(m, 1H, H3’), 2.13-2.02(m, 1H, H3’).
13C NMR(125 MHz, CH3OD)δ 172.30(d, 3JC-P = 5.0 Hz, C=O), 172.27(d, 3JC-P = 5.0 Hz, C=O), 157.34(C6), 157.32(C6), 153.88(C2), 153.87(C2), 152.08(d, 3JC-P = 7.5 Hz, C-Ar), 152.05(d, 3JC-P = 7.5 Hz, C-Ar), 150.20(C4), 150.19(C4), 140.52(C8), 140.42(C8), 137.15(C-Ar), 130.79(CH-Ar), 129.57(CH-Ar), 129.55(CH-Ar), 129.35(CH-Ar), 129.34(CH-Ar), 129.33(CH-Ar), 126.22(CH-Ar), 121.44(d, JC-P = 3.7 Hz, CH-Ar), 121.40(d, JC-P = 3.7 Hz, CH-Ar), 120.51(C5), 120.49(C5), 93.19, 93.14(C1’), 80.46(d, 3JC-P = 4.60 Hz, C4’), 80.39(d, 3JC-P = 4.60, C4’), 76.66(C2’), 68.68(d, 2JC-P = 5.42 Hz, C5’), 68.24(d, 2JC-P = 5.42 Hz, C5’), 67.95(OCH2Ph), 67.93(OCH2Ph), 43.90(CH2 gly), 43.83(CH2 gly), 34.83(C3’), 34.54(C3’).
H2O/CH3CN으로 100/10 내지 0/100의 30 분, 1ml/분, 1 = 200nm로 용리되는 역상 HPLC는 tR 13.63 분 및 tR 13.41 분을 갖는 부분 입체 이성질체의 2개의 피크를 나타냈다.
(2S)- 펜틸 2-(((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라하이드로퓨란-2-일)메톡시)(나프탈렌-1-일)피리딘-3-일옥시)포스포릴)아미노)-4-메틸 펜타 노 에이트 D
Figure pat00013
상기 일반 제조법 1을 이용하여, N-메틸이미다졸(76 μL, 0.95 mmol) 및 (2S)-펜틸 2-((클로로(나프탈렌-1-일옥시)포스포릴)아미노)-4-메틸 펜타 노 에이트(250 mg, 0.6 mmol)의 용액을 3시간 동안 무수 THF(5 mL)중의 3'-디옥시아데노신(48 mg, 19 mmol)의 현탁액에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 컬럼 크로마토그래피(용리액 시스템 CH3OH/CH2Cl2 0/100 내지 5/95) 및 분취용 TLC(1000μM, 용리액 시스템 CH3OH/CH2Cl2 4/96)에 의해 정제하여 목적하는 화합물을 백색 고체(27mg, 22%)로 수득하였다.
MS(ES+)m/z: Found: 641.3(M + H+), 663.3(M + Na+), 1303.6(2M + Na+)C31H41N6O7P required:(M)640.3.
31P NMR(202 MHz, CH3OD)δ 4.64, 4.37.
1H NMR(500 MHz, CH3OD)δ 8.28(s, 0.5H, H-8), 8.25(s, 0.5H, H-8), 8.21(s, 0.5H, H-2), 8.20(s, 0.5H, H-2), 8.17-8.12(m, 1H, Nap), 7.88-7.83(m, 1H, Nap), 7.69-7.66(m, 1H, Nap), 7.54-7.42(m, 3H, Nap), 7.40-7.35(m, 1H, Nap), 7.31-7.26(m, 5H, Ar), 6.01(d, J = 2.1 Hz, 0.5H, H1’), 6.00(d, J = 2.1 Hz, 0.5H, H1’), 4.47-4.67(m, 2H, H2’, H4’), 4.55-4.44(m, 1H, H5’), 4.43-4.31(m, 1H, H5’), 4.00-3.87(m, 3H, CH leu, CH2 Pen), 2.44-2.30(m, 1H, H3’), 2.14-2.04(m, 1H, H3’), 1.66-1.39(m, 5H, CH2CH leu, CH2 Pen), 1.1.28-1.21(m, 4H, CH2CH2 Pen), 0.86-0.81(m, 3H, CH3 Pen), 0.81-0.68(m, 6H,(CH3)2 leu).
13C NMR(125 MHz, CH3OD)δ 175.42(d, 3JC-P = 2.5 Hz, C=O), 175.04(d, 3JC-P = 2.5 Hz, C=O), 157.32(C6), 153.87(C2), 153.86(C2), 150.23(C4), 147.97(d, 3JC-P = 6.2 Hz, ‘ipso’ Nap), 140.55(C8), 136.30(C-Ar), 136.29(C-Ar), 128.89(CH-Ar), 128.84(CH-Ar), 127.95(C-Ar), 127.91(C-Ar), 127.84(C-Ar), 127.78(CH-Ar), 127.76(CH-Ar), 127.46(CH-Ar), 126.50(C-Ar), 126.48(C-Ar), 126.46(C-Ar), 126.01(CH-Ar), 125.91(CH-Ar), 122.80(CH-Ar), 122.70(CH-Ar), 120.58(C5), 120.56(C5), 116.40(d, 3JC-P = 3.7 Hz, CH-Ar), 116.01(d, 3JC-P = 3.7 Hz, CH-Ar), 93.31(C1’), 93.27(C1’), 80.35(d, 3JC-P = 3.5 Hz, C4’), 80.29(d, 3JC-P = 3.5 Hz, C4’), 76.54(C2’), 76.50(C2’), 69.07(d, 2JC-P = 5.5 Hz, C5’), 68.85(d, 2JC-P = 5.5 Hz, C5’), 66.33(CH2 Pent), 66.32(CH2 Pent), 54.81(CH leu), 54.71(CH leu), 44.22(d, 3JC-P = 7.6 Hz, CH2 leu), 43.93(d, 3JC-P = 7.6 Hz, CH2 leu), 35.15(C3’), 34.86(C3’), 29.32(CH2 pent), 29.30(CH2 Pent), 29.11(CH2 pent), 25.67(CH leu), 25.45(CH leu), 23.30(CH2 pent), 23.12(CH3 leu), 23.02(CH3 leu), 22.04(CH3 leu), 21.78(CH3 leu), 14.28(CH3 pent).
H2O/CH3CN으로 100/10에서 0/100까지 30 분, 1ml/분, 1 = 200nm로 용리되는 역상 HPLC는 tR 20.84 분을 갖는 2개의 중첩하는 부분 입체 이성질체의 하나의 피크를 나타냈다.
메틸 2-(((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라하이드로퓨란-2-일)-메톡시)(나프탈렌-1-일옥시))아미노)-2-메틸프로파노에이트 E
Figure pat00014
상기 일반 제조법 1을 사용하여, N-메틸이미다졸(24 μL, 3.0 mmol) 및 메틸 2-((클로로(나프탈렌-1-일옥시)포스포릴)아미노)-2-메틸프로파노에이트(612 mg, 1.8 mmol)의 무수 THF(1 mL)를 3시간 동안 무수 THF(15 mL)중의 3'-디옥시아데노신(150 mg, 0.6 mmol)의 현탁액에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 컬럼 크로마토그래피(용리액 시스템 CH3OH/CH2Cl2 0/100 내지 7/93) 및 분취용 TLC(1000μM, 용리액 CH3OH/CH2Cl2 4/96)에 의해 정제하여 백색 고체(20mg, 6%)로서 목적 화합물을 수득하였다.
MS(ES+)m/z: Found: 557.2(M + H+), 579.2(M + Na+), 1135.4(2M + Na+)C25H29N6O7P required:(M)556.51.
*31P NMR(202 MHz, CH3OD)δ 2.73.
1H NMR(500 MHz, CH3OD)δ 8.28(s, 0.5H, H8), 8.25(s, 0.5H, H8), 8.21(s, 0.5H, H2), 8.19(s, 0.5H, H2), 8.18-8.14(m, 1H, Nap), 7.90-7.84(m, 1H, Nap), 7.71-7.66(m, 1H, Nap), 7.53-7.47(m, 3H, Nap), 7.41-7.35(m, 1H, Nap), 6.03(d, J = 2.1 Hz, 0.5H, H1’), 5.99(d, J = 2.1 Hz, 0.5H, H1’), 4.76-4.67(m, 2H, H2’, H4’), 4.52-4.44(m, 1H, H5’), 4.42-4.33(m, 1H, H5’), 3.65(s, 1.5H, OCH3), 3.64(s, 1.5H, OCH3), 2.48-2.41(m, 0.5H, H3’), 2.37-2.30(m, 0.5H, H3’), 2.15-2.09(m, 0.5H, H3’), 2.08-2.02(m, 0.5H, H3’), 1.47-1.44(m, 6H, CH3).
13C NMR(125 MHz, CH3OD)δ 177.25(d, 3JC-P = 3.7 Hz, C=O), 157.53(C6), 157.51(C6), 153.86(C2), 150.28(C4), 150.25(C4), 148.06(d, 3JC-P = 7.5 Hz, ‘ipso’ Nap), 148.04(d, 3JC-P = 7.5, ‘ipso’ Nap), 140.67(C8), 140.60(C8), 136.28(C-Ar), 136.27(C-Ar), 128.82(CH-Ar), 128.80(CH-Ar), 127.93(d, 2JC-P = 6.25 Hz, C-Ar), 127.92(d, 2 JC-P = 6.25 Hz, C-Ar), 127.71(CH-Ar), 127.69(CH-Ar), 127.32(CH-Ar), 126.44(CH-Ar), 125.84(CH-Ar), 122.93(CH-Ar), 120.56(C5), 120.50(C5), 116.38(d, 3JC-P = 3.75 Hz, CH-Ar), 116.36(d, 3JC-P = 3.75 Hz, CH-Ar), 93.25(C1’), 80.40(d, 3JC-P = 8.0 Hz, C4’), 80.33(d, 3JC-P = 8.0 Hz, C4’), 76.57(C2’), 76.43(C2’), 68.99(d, 2JC-P = 5.5 Hz, C5’), 68.84(d, 2JC-P = 5.5 Hz, C5’), 53.01(OCH3), 35.22(C-3’), 34.90(C3’), 27.85(d, 3JC-P = 6.0 Hz, CH3), 27.80(d, 3JC-P = 6.0, CH3), 27.60(d, 3JC-P = 6.0, CH3), 27.56(d, 3JC-P = 6.0, CH3).
H2O/CH3CN으로 100/10 내지 0/100의 30 분, 1ml/분, 1 = 254nm로 용리되는 역상 HPLC는 tR 16.51 분, tR 16.75 분을 갖는 두개의 피크를 나타냈다.
(2S)- 벤질 2-((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라하이드로퓨란-2-일)메톡시)(2-(3-에톡시-3-옥소프로필)페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트 F
Figure pat00015
상기 일반 제조법 1을 사용하여, 무수 THF(2 mL)중의 N-메틸이미다졸(32 μL, 4.2 mmol) 및 (2S)-벤질 2-((클로로(2-에톡시-3-옥소프로필)페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트(1.14g, 2.5 mmol)의 용액을 무수 THF(10 mL)중의 3'-디옥시아데노신(210 mg, 0.84 mmol)의 현탁액에 적가하고, 반응 혼합물을 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 컬럼 크로마토그래피(용리제 시스템 CH3OH/CHCl3 0/100 내지 8/92) 및 분취용 TLC(1000 μM, 용리액 CH3OH/CH2Cl2 5/95)에 의해 정제하여 목적하는 화합물을 백색 고체로서 수득하였다(123 mg, 수율 = 22% ).
MS(ES+)m/z: Found: 669.3(M + H+), 691.3(M + Na+), C31H37N6O9P required:(M)668.63.
31P NMR(202 MHz, CH3OD): δP 3.95, 3.65.
1H NMR(500 MHz, CH3OD): δH 8.25(s, 0.5H, H8), 8.21(s, 1H, H8, H2), 8.20(s, 0.5H, H2), 7.35-7.29(m, 6H, Ph), 7.25-7.21(m, 1H, Ph), 7.16-7.07(m, 2H, Ar), 6.00(d, J = 1.9 Hz, 0.5H, H1’), 5.98(d, J = 1.9 Hz, 0.5H, H1’), 5.17-5.05(m, 2H, OCH2Ph), 4.76-4.73(m, 0.5H, H2’), 4.70-4.59(m, 1.5H, H2’, H4’), 4.45-4.34(m, 1H, H5’), 4.30-4.22(m, 1H, H5’), 4.08-3.96(m, 3H, CH2CH3, CH ala), 2.98-2.92(m, 2H, CH2CH2), 2.62-2.56(m, 2H, CH2CH2), 2.40-2.29(m, 1H, H3’), 2.11-2.03(m, 1H, H3’), 1.36(d, J = 6.9 Hz, 1.5 H, CH3 ala), 1.33(d, J = 6.9 Hz, 1.5 H, CH3 ala), 1.17(t, J = 7.0 Hz, 1.5 H, CH2CH3), 1.16(t, J = 7.0 Hz, 1.5 H, CH2CH3).
13C NMR(125 MHz, CH3OD): δC 174.82(d, 3JC-P = 3.7 Hz, C=O), 174.62(C=O), 174.58(C=O), 174.55(d, 3JC-P = 3.7 Hz, C=O), 157.34(C6), 157.32(C6), 153.86(C2), 153.84(C2), 150.48(d, JC-P = 2.5 Hz, C-Ar), 150.44(C4), 150.22(d, JC-P = 2.5 Hz, C-Ar), 140.49(C8), 137.29(C-Ar), 137.21(C-Ar), 133.09(d, J = 7.5 Hz, C-Ar), 132.94(d, J = 7.5 Hz, C-Ar), 131.62(CH-Ar), 131.59(CH-Ar), 129.58(CH-Ar), 129.34(CH-Ar), 129.31(CH-Ar), 129.28(CH-Ar), 128.70(d, J = 5.0 Hz, CH-Ar), 128.69(d, J = 5.0 Hz, CH-Ar), 126.18(CH-Ar), 121.02(d, J = 2.5 Hz, CH-Ar), 120.49(d, J = 2.5 Hz, CH-Ar), 120.58(C5), 93.28(C1’), 93.24(C1’), 80.32(d, 3JC-P = 8.7 Hz, C4’), 76.57(C2’), 68.86(d, 2JC-P = 5.0 Hz, C5’), 68.53(d, 2JC-P = 5.0 Hz, C5’), 67.98(OCH2Ph), 67.95(OCH2Ph), 61.57(CH2CH3), 51.76(CH ala), 51.65(CH ala), 35.37(CH2CH2), 35.30(CH2CH2), 35.08(C3’), 34.85(C3’), 26.77(CH2CH2), 26.72(CH2CH2), 20.55(d, 3JC-P = 6.2 Hz, CH3 ala), 20.33(d, 3JC-P = 6.2 Hz, CH3 ala), 14.53(CH2CH3).
H2O/CH3CN으로 100/10에서 0/100까지 30 분, 1ml/분, 1 = 245nm로 용리되는 역상 HPLC는 tR 15.99 분을 갖는 하나의 피크를 나타냈다.
(2S)- 벤질 2-((((2R, 3R, 5S)-2-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-5-( 하이드록시메틸 )테트라하이드로퓨란-3-일)옥시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트 G
Figure pat00016
상기 일반 제조법 3을 사용하여, 3'-디옥시아데노신(50mg, 0.20mmol)을 무수 THF(5mL)에 현탁시키고, tBuMgCl(THF 중 1.0M 용액, 0.22mL, 0.22mmol)을 실온에서 적가하였다. 무수 THF(2 mL)중의 (2S)-벤질 2-((클로로(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트(212 mg, 0.6 mmol)의 용액을 적가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 컬럼 크로마토그래피(용리액 시스템 CH3OH/CH2Cl2 0/100 내지 8/92) 및 분취용 TLC(500 μM, 용리액 CH3OH/CH2Cl2 = 5/95)에 의해 정제하여 백색 고체로서 목적 화합물을 수득하였다(6 mg, 5%).
MS(ES+)m/z: Found: 569.2(M + H+), 591.2(M + Na+), 1159.4(2M + Na+)C26H29N6O7P required:(M)568.2.
31P NMR(202 MHz, CH3OD): δP 2.44(s), 2.92(s).
1H NMR(500 MHz, CH3OD): δH 8.41(s, 0.5 H, H8), 8.28(s, 0.5 H, H8), 8.19(s, 0.5H, H2), 8.18(s, 0.5H, H2), 7.39-7.30(m, 4H, Ar), 7.28-7.18(m, 4H, Ar), 7.17-7.11(m, 1H, Ar), 7.08-7.03(m, 1H, Ar), 6.23(d, J = 2.0 Hz, 0.5H, H1’), 6.08(d, J = 3.4 Hz, 0.5H, H1’), 5.52-5.43(m, 1H, C2’), 5.19-5.12(m, 1H, CH2Ph), 5.07-4.95(m, 1H, CH2Ph), 4.48-4.42(m, 1H, H4’), 4.05-3.97(m, 1H, CH ala), 3.95-3.87(m, 1H, H5’), 3.69-3.61(m, 1H, H5’), 2.59-2.45(m, 1H, H3’), 2.31-2.23(m, 1H, H3’), 1.36-1.27(m, 3H, CH3 ala).
13C NMR(125 MHz, CH3OH): δC 174.76(d, 3JC-P = 5.0 Hz, C=O), 174.52(d, 3JC-P = 5.0 Hz, C=O), 157.44(C6), 153.76(C2), 151.93(C4), 150.06(C-Ar), 149.93(C-Ar), 141.38(C8), 141.18(C8), 137.33(C-Ar), 137.10(C-Ar), 130.69(CH-Ar), 130.79(CH-Ar), 129.61(CH-Ar), 129.51(CH-Ar), 129.40(CH-Ar), 129.30(CH-Ar), 129.23(CH-Ar), 126.33(CH-Ar), 126.16(CH-Ar), 121.53(d, 3JC-P = 4.5 Hz, CH-Ar), 121.20(d, 3JC-P = 4.5 H, CH-Ar), 120.76(C5), 91.56(d, 3JC-P = 7.7 Hz, C1’), 91.45(d, 3JC-P = 7.7 Hz, C1’), 82.78(C4’), 82.28(C4’), 81.83(d, 2JC-P = 4.7 Hz, C2’), 80.96(2 x d, 2JC-P = 4.7 Hz, C2’), 67.95(OCH2Ph), 67.92(OCH2Ph), 64.13(C5’), 63.59(C5’), 51.88(CH ala), 51.75(CH ala), 33.75(d, 3JC-P = 3.0 Hz, C3’), 33.59(d, 3JC-P = 3.0 Hz, C3’), 20.33(d, 3JC-P = 7.1 CH3 ala), 20.18(d, 3JC-P = 7.1 CH3 ala).
H2O/CH3OH(90 분의 10에서 0/100까지 30 분, 1ml/분, 1 = 254nm)로 용출시키는 역상 HPLC는 tR 22.16 분 및 tR 22.43 분을 갖는 부분 입체 이성질체의 2개의 피크를 나타냈다.
벤질 2-(((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-4-(((1-(벤질옥시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)테트라히드로퓨란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-아미노)프로파노에이트 H
Figure pat00017
상기 일반 제조법 3을 사용하여, 3'-디옥시아데노신(50mg, 0.20mmol)을 무수 THF(5mL)에 현탁시키고, tBuMgCl(THF 중 1.0M 용액, 0.22mL, 0.22mmol)을 실온에서 적가하였다. 무수 THF(2 mL)중의(2S)-벤질 2-((클로로(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트(212 mg, 0.6 mmol)의 용액을 적가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 컬럼 크로마토그래피(용리액 시스템 CH3OH/CH2Cl2 0/100 내지 8/92) 및 분취용 TLC(500 μM, 용리액 CH3OH/CH2Cl2 5/95)에 의해 정제하여 목적 화합물을 백색 고체로서 수득하였다(19 mg, 수율 = 11% ).
MS(ES+)m/z, found: 886.3(M + H+), 1771.6(2M + H+), 751.2(molecule without nucleobase M). C42H45N7O11P2 required:(M+)885.3.
31P NMR(202 MHz, CH3OD): δP 3.98, 3.88, 3.59, 3.12, 3.05, 2.45, 2.32.
1H NMR(500 MHz, CH3OD): δH 8.24-8.13(m, 2H, H8, H2), 7.39-7.08(m, 20H, Ph), 6.27-6.23(m, 0.5H, H1’), 6.16-6.13(m, 0.5H, H1’), 5.61-5.48(m, 1H, H2’), 5.17-4.91(m, 4H, CH2Ph), 4.57-4.49(m, 1H, H4’), 4.41-4.29(m, 1H, H5’), 4.25-4.15(m, 1H, H5’), 4.10-4.01(m, 1H, CH ala), 3.99-3.89(m, 1H, CH ala), 2.57-2.41(m, 1H, H3’), 2.28-2.17(m, 1H, H3’), 1.38-1.23(m, 6H, CH3 ala).
13C NMR(125 MHz, CH3OD): δC 174.88(C=O), 174.83(C=O), 174.79(C=O), 174.73(C=O), 174.61(C=O), 174.57(C=O), 174.53(C=O), 157.36(C6), 157.34(C6), 157.32(C6), 157.29(C6), 154.04(C2), 154.01(C2), 153.97(C2), 153.94(C2), 152.09(C4), 152.04(C4), 152.02(C4), 151.97(C4), 150.31(C-Ar), 150.29(C-Ar), 150.16(C-Ar), 140.98(C8), 140.91(C8), 140.81(C8), 137.31(C-Ar), 137.28(C-Ar), 137.22(C-Ar), 137.09(C-Ar), 130.86(CH-Ar), 130.78(CH-Ar), 130.77(CH-Ar), 129.65(CH-Ar), 129.61(CH-Ar), 129.58(CH-Ar), 129.55(CH-Ar), 129.44(CH-Ar), 129.42(CH-Ar), 129.38(CH-Ar), 129.34(CH-Ar), 129.32(CH-Ar), 129.30(CH-Ar), 129.28(CH-Ar), 129.23(CH-Ar), 129.21(CH-Ar), 12.42(CH-Ar), 126.23(CH-Ar), 126.20(CH-Ar), 126.17(CH-Ar), 121.65(CH-Ar), 121.63(CH-Ar), 121.61(CH-Ar), 121.59(CH-Ar), 121.52(CH-Ar), 121.50(CH-Ar), 121.47(CH-Ar), 121.46(CH-Ar), 121.40(CH-Ar), 121.39(CH-Ar), 121.36(CH-Ar), 121.35(CH-Ar), 121.30(CH-Ar), 121.28(CH-Ar), 121.26(CH-Ar), 121.24 (CH-Ar), 120.61(C5), 120.57(C5), 120.56(C5), 120.54(C5), 91.56(C1’), 91.51(C1’), 91.45(C1’), 91.25(C1’), 91.20(C1’), 81.84(C2’), 81.82(C2’), 81.79(C2’), 81.27(C2’), 81.22(C2’), 81.18(C2’), 80.49(C4’), 80.43(C4’), 80.06(C4’), 79.99(C4’), 68.29(C5’, OCH2Ph), 68.25(C5’, OCH2Ph), 68.00(C5’, OCH2Ph), 67.96(C5’, OCH2Ph), 67.94(C5’, OCH2Ph), 67.90(C5’, OCH2Ph), 67.71(C5’, OCH2Ph), 67.67(C5’, OCH2Ph), 51.91(CH ala), 51.74(CH ala), 51.70(CH ala), 51.59(CH ala), 34.22(C3’), 34.20(C3’), 34.16(C3’), 33.97(C3’), 33.94(C3’), 33.91(C3’), 20.44(CH3 ala), 20.43(CH3 ala), 20.39(CH3 ala), 20.29(CH3 ala), 20.27(CH3 ala), 20.24(CH3 ala), 20.21(CH3 ala), 20.19(CH3 ala).
H2O/CH3CN으로 100/10 내지 0/100의 30 분, 1ml/분, 1 = 254nm로 용리되는 역상 HPLC는 tR 15.97 분을 갖는 하나의 넓은 피크를 나타냈다.
(2S)- 벤질 2-(((((2R, 3R, 5S)-2-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-5-(하이드록시메틸)테트라하이드로퓨란-3-일)옥시)(나프탈렌-1-일옥시)포스포릴)아미노)프로파노에이트 I
Figure pat00018
상기 일반 제조법 3을 사용하여, 3'-디옥시아데노신(50mg, 0.20mmol)을 무수 THF(5mL)에 현탁시키고, tBuMgCl(THF 중 1.0M 용액, 0.3mL, 0.3mmol)을 실온에서 적가하였다. 무수 THF(2 mL)중(2S)-벤질 2-((클로로(나프탈렌-1-일옥시)포스포릴)아미노)프로파노에이트(323 mg, 0.8 mmol)의 용액을 적가하고, 반응 혼합물을 실 온도 16시간 동안 교반하였다. 컬럼 크로마토그래피(용리제 시스템 CH3OH/CH2Cl2 0/100 내지 6/94) 및 분취용 TLC(500μM, 용리액 CH3OH/CH2Cl2 5/95)에 의해 정제하여 백색 고체(14 mg, 11%)로서 목적 화합물을 수득하였다.
(ES+)m/z, found: 619.2(M + H+), 641.2(M + Na+), 1259.4(2M + Na+). C30H31N6O7P required:(M)618.20.
31P NMR(202 MHz, CH3OD): δP 3.27(s), 2.75(s).
1H NMR(500 MHz, CH3OD): δH 8.37(s, 1H, H8), 8.18(s, 1H, H8), 8.14(s, 1H, H2), 8.13-8.11(m, 0.5 H, Nap)8.11(s, 1H, H2), 7.94-7.90(m, 0.5 H, Ar), 7.90-7.87(m, 0.5 H, Ar), 7.86-7.82(m, 0.5 H, Ar), 7.74-7.70(m, 0.5 H, Ar), 7.66-7.61(m, 0.5 H, Ar), 7.57-7.47(m, 1.5 H, Ar), 7.46-7.37(m, 2.5 H, Ar), 7.34-7.27(m, 4 H, Ar), 7.25-7.17(m, 1 H, Ar), 6.19(d, J = 2.4 Hz, 0.5H, H1’), 6.04(d, J = 2.4 Hz, 0.5H, H1’), 5.60-5.54(m, 0.5H, H2’), 5.50-5.42(m, 0.5H, H2’), 5.16-4.99(m, 2H, OCH2Ph), 4.46-4.40(m, 0.5H, H4’), 4.36-4.30(m, 0.5H, H4’), 4.13-4.04(m, 1H, CH ala), 3.90-3.83(m, 1H, H5’), 3.64-3.56(m, 1H, H5’), 2.61-2.54(m, 0.5H, H3’), 2.49-2.41(m, 0.5H, H3’), 2.35-2.27(m, 0.5H, H3’), 2.22-2.16(m, 0.5H, H3’), 1.35-1.24(m, 3H, CH3 ala).
13C NMR(125 MHz, CH3OH): δC 174.52(C=O), 174.49(C=O), 157.27(C6), 153.58(C2), 149.97(C4), 149.93(C-4), 147.70(d, 3JC-P = 7.5, ‘ipso’ Nap), 147.48(d, 3JC-P = 7.5, ‘ipso’ Nap), 141.36(C8), 141.19(C8), 137.25(C-Ar), 137.05(C-Ar), 136.31(C-Ar), 136.20(C-Ar), 129.58(CH-Ar), 129.48(CH-Ar), 129.37(CH-Ar), 129.26(CH-Ar), 129.22(CH-Ar), 128.88(CH-Ar), 127.84(CH-Ar), 127.75(CH-Ar), 127.49(CH-Ar), 127.44(CH-Ar), 126.48(CH-Ar), 126.39(CH-Ar), 126.26(CH-Ar), 126.05(CH-Ar), 122.76(CH-Ar), 122.38(CH-Ar), 120.68(C5), 120.61(C5), 116.64(d, 3JC-P = 3.75 Hz, CH-Ar), 116.13(d, 3JC-P = 3.75, CH-Ar), 91.60(d, 3JC-P = 7.5 Hz, C1’), 91.43(d, 3JC-P = 7.5 Hz, C1’), 82.74(C4’), 82.27(C4’), 81.99(d, 2JC-P = 5.5 Hz, C2’), 81.12(d, 2JC-P = 5.5 Hz, C2’), 67.97(OCH2Ph), 67.94(OCH2Ph), 64.16(C5’), 63.51(C5’), 51.96(CH ala), 51.89(CH ala), 33.89(d, 3JC-P = 7.5 Hz, CH3 ala), 33.63(d, 3JC-P = 7.5 Hz, CH3 ala).
H2O/CH3OH(100/10 내지 0/100, 30 분, 1ml/분, 1 = 200nm)로 용출시키는 역상 HPLC는 tR 24.84 분 및 tR 25.43 분을 갖는 부분 입체 이성질체의 2개의 피크를 나타냈다.
벤질 2-[({[5-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-4- 하이드록시옥소란 -2-일] 메톡시 }({[1-(벤질옥시)-1-옥소프로판-2-일]아미노})포스포릴)아미노] 프로파노에이트 J
Figure pat00019
상기 일반 제조법 2를 이용하여, 3'-디옥시아데노신(200mg, 0.80mmol)을(CH3)3PO3(5mL)에 현탁시키고,-5℃에서 POCl3(75㎕, 0.80mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에 도달시키고 4시간 동안 교반하였다. 무수 CH2Cl2(5 mL)중에 용해된(S)-1-(벤질옥시)-1-옥소프로판-2-아미 늄 4-메틸벤젠 술포네이트(1.4 g, 4.0 mmol)의 용액을 첨가 한 후, 디이소프로필 에틸 아민(1.4 mL, 8.0 mmol)을-78℃에서 첨가하였다. 실온에서 20시간 동안 교반 한 후, 물을 첨가하고 층을 분리시켰다. 수 성상을 디클로로 메탄으로 추출하고, 유기 상을 염수로 세척하였다. 합쳐진 유기 층을 Na2SO4상에서 건조시키고 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(CH2Cl2/MeOH = 100/0 내지 93/7의 구배 용리)로 정제하여 백색 발포체(256mg, 49%)를 수득하였다.
MS(ES+)m/z: Found: 654.2(M + H+), 676.2(M + Na+), 1329.5(2M + Na+)C30H36N7O8P required:(M)653.62.
31P NMR(202 MHz, CH3OD)δ 13.9.
1H NMR(500 MHz, CH3OD)δ 8.28(s, 1H, H8), 8.22(s, 1H, H2), 7.37-7.26(m, 10H, Ph), 6.00(d, J = 1.9 Hz, 1H, H1’), 5.15-5.05(m, 4H, OCH2Ph), 4.74-4.70(m, 1H, H2’), 4.63-4.56(m, 1H, H4’), 4.24-4.18(m, 1H, H5’), 4.11-4.05(m, 1H, H5’), 3.97-3.87(m, 1H, CH ala), 2.35-2.27(m, 1H, H3’), 2.07-2.01(m, 1H, H3’), 1.34-1.27(m, 3H, CH3 ala).
13C NMR(125 MHz, CH3OD)δ 175.40(d, 3JC-P = 5.0 Hz, C=O), 175.36(d, 3JC-P = 5.0 Hz, C=O), 157.36(C6), 153.91(C2), 150.25(C4), 140.64(C8), 137.33(C-Ar), 137.29(C-Ar), 129.58(CH-Ar), 129.57(CH-Ar), 129.33(CH-Ar), 129.31(CH-Ar), 129.29(CH-Ar), 120.55(C5), 93.18(C1’), 80.67(d, 3JC-P = 8.4 Hz, C4’), 76.59(C2’), 67.90(OCH2Ph), 67.47(d, 2JC-P = 5.2 Hz, C5’), 51.14(d, 2JC-P = 1.7 Hz, CH ala), 51.11(d, 2JC-P = 1.7 Hz, CH ala), 35.08(C3’), 20.77(d, 3JC-P = 6.5 Hz, CH3 ala), 20.59(d, 3JC-P = 6.5 Hz, CH3 ala).
H2O/CH3CN으로 90/10에서 0/100까지 30 분, 1ml/분, 1 = 254nm로 용리되는 역상 HPLC는 tR이 13.87 분인 하나의 피크를 나타냈다.
(2S)- 벤질 2-((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-2-메톡시-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라하이드로퓨란-2-일)메톡시)(나프탈렌피리미딘-4-일옥시)포스포릴아미노)프로파노에이트 K
Figure pat00020
상기 일반 제조법 1을 이용하여, N-메틸 이미다졸(99 μL, 1.24 mmol) 및 (2S)-벤질 2-((클로로(나프탈렌-1-일옥시)포스포릴)아미노)프로파노에이트(303 mg, 0.75 mmol)무수 THF(10 mL)중 2-O-메틸-3'-디옥시아데노신(70 mg, 0.25 mmol)의 현탁액에 무수 THF(5 mL)를 적가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 컬럼 크로마토그래피(용리제 시스템 CH3OH/CH2Cl2 0/100 내지 6/94) 및 분취용 TLC(용리액 시스템 CH3OH/CH2Cl2 5/95)에 의해 정제하여 목적하는 화합물을 백색 고체(96mg, 60%)로 수득하였다.
MS(ES+)m/z: Found: 649.2(M + H+)C31H33N6O8P required: 648.21(M). 31P NMR(202 MHz, CD3OD): δP 4.38(s), 4.08(s). 1H NMR(500 MHz, CD3OD): δH 8.14-8.11(d, J = 8.0Hz, 0.5H, Ar), 8.07(d, J = 8.0Hz, 0.5H, Ar), 8.05(s, 0.5H, H8), 8.02(s, 0.5H, H8), 7.82-7.80(m, 1H, Ar), 7.61(d, J = 7.0Hz, Ar), 7.47-7.44(m, 4H, Ar), 7.35-7.29(m, 2H, Ar), 7.24-7.22(m, 3H, Ar), 5.88(s, 1H, H1’), 4.71-4.68(m, 1H, H4’), 4.65-6.60(m, 1H, H2’), 4.42-4.40(m, 1H, H5’), 4.30-4.27(m, 1H, H5’), 4.08-3.98(m, 1H, CH ala)3.88(s, 1.5H, OCH3), 3.86(s, 1.5H, OCH3), 2.37-2.33(m, 1H, H3’), 2.04-2.01(m, 1H, H3’), 1.27(d J = 7.0 Hz, 1.5H, CH3), 1.24(d J = 7.0 Hz, 1.5H, CH3). 13C NMR(125 MHz, CH3OD): δC 174.83(d, 3JC-P = 3.7 Hz, C=O), 174.60(d, 3JC-P = 3.7 Hz, C=O), 163.70(C-2), 158.10(C6), 151.95(C4), 147.95(d, 3JC-P = 7.5 Hz, ‘ipso’ Nap), 147.91,(d, 3JC-P = 7.5 Hz, ‘ipso’ Nap), 139.39(C8), 139.37(C8), 137.12, 137.17(C-ipso CH2Ph), 136.22(C-Ar), 129.57, 129.54, 129.48, 129.32, 129.27, 129.12, 129.24 128.89, 128.83,(CH-Ar), 127.85(d, 2JC-P = 6.25 Hz, C-Ar), 127.86, 127.76, 127.51, 127.48, 126.49, 126.00, 125.97, 122.73, 122.63(CH-Ar), 116.86(C5), 116.72(C5), 116.29(d, 3JC-P = 3.75 Hz, CH-Ar), 116.22(d, 3JC-P = 3.75 Hz, CH-Ar), 93.33(C1’), 93.31(C1’), 80.24(d, 3JC-P = 2.75 Hz, C4’), 76.29(C2’), 76.26(C2’), 69.09(d, 2JC-P = 5.0 Hz, C5’), 68.16(d, 2JC-P = 8.2 Hz, C5’), 67.95(OCH2Ph), 55.28, 55.32(OCH3), 51.79(CH ala), 51.71(CH ala), 35.40(C-3’), 35.12(C3’), 20.49(d, 3JC-P = 6.7 Hz, CH3 ala), 20.35(d, 3JC-P = 6.7, CH3 ala).
H2O/CH3CN으로 100/10 내지 0/100의 30 분에서 용리되는 역상 HPLC, F = 1ml/분, λ = 280nm, tR 16.22 분 및 tR 16.48 분을 갖는 부분 입체 이성질체의 두개의 피크를 나타내었다.
(2S)- 벤질 2-((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-2-메톡시-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라하이드로퓨란-2-일)메톡시)(나프탈렌피리미딘-4-일옥시)포스포릴아미노)프로파노에이트 L
Figure pat00021
상기 일반 제조법 1을 사용하여, 무수 THF(2 ㎖)중의 N-메틸이미다졸(99 μL, 1.24 mmol) 및 (2S)-벤질 2-((클로로(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트(264 mg, 0.75 mmol)mL)를 2-O-메틸-3'-디옥시아데노신(70 mg, 0.25 mmol)의 무수 THF 현탁액에 적가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 컬럼 크로마토그래피(용리액 시스템 CH3OH/CH2Cl2 0/100 내지 6/94) 및 분취용 TLC(용리액 시스템 CH3OH/CH2Cl2 5/95)로 정제하여 목적하는 화합물을 백색 고체(13 mg, 10%)로 수득하였다.
(ES+)m/z, found: 599.2(M + H+), C27H31N6O8P required: 598.19(M).
31P NMR(202 MHz, CD3OD)δ 3.97, 3.64. 1H NMR(500 MHz, CD3OD)δ 8.06(s, 0.5H, H8), 8.04(s, 0.5H, H8), 7.33-7.28(m, 7H, Ph), 7.20-7.14(m, 3H, Ph), 5.92(d, J = 1.5 Hz, 0.5H, H1’), 5.90(d, J = 1.5 Hz, 0.5H, H1’), 5.14-5.04(m, 2H, OCH2Ph), 4.78-4.76(m, 0.5H, H4’), 4.74-4.72(m, 0.5H, H4’), 4.63-4.59(m, 1H, H2’), 4.10-4.34(m, 1H, H5’a), 4.25-4.20(m, 1H, H5’b), 3.94, 3.95(OCH3), 3.99-3.90(m, 1H, CH ala), 2.40-2.37(m, 1H, H3’), 2.07-2.04(m, 1H, H3’), 1.31(d J =7.0 Hz, CH3), 1.26(d, J = 7.0 Hz, CH3). 13C NMR(125 MHz, CD3OD)δ 174.82(d, 3JC-P = 3.7 Hz, C=O), 174.62(d, 3JC-P = 3.7 Hz, C=O), 163.80(C-2), 158.16, 158.13(C6), 152.15(C4), 152.05(d, 3JC-P = 4.8 Hz, C-ipso Ph), 152.00(d, 3JC-P = 4.8 Hz, C-ipso Ph), 139.39(C8), 137.30, 137.21(C-ipso CH2Ph), 130.72, 129.57, 129.31,129.27, 126.122(CH-Ar), 121.42(d, JC-P = 4.5 Hz, CH-Ar), 121.37(d, JC-P = 4.5 Hz, CH-Ar), 116.72(C5), 116.69(C5), 93.33, 93.24(C1’), 80.26(d, 3JC-P = 8.87, C4’), 80.19(d, 3JC-P = 8.87, C4’), 76.35(C2’), 68.78(d, 2JC-P = 5.0 Hz, C5’), 68.35(d, 2JC-P = 5.0 Hz, C5’), 67.94(OCH2Ph), 67.92(OCH2Ph), 55.25, 55.28(OCH3), 51.69, 51.57(CH ala), 35.23(C3’), 34.96(C3’), 20.38(d, 3JC-P = 6.7, CH3 ala), 20.26(d, 3JC-P = 6.7, CH3 ala).
H2O/CH3CN으로 100/10 내지 0/100의 30 분에서 용리되는 역상 HPLC, F = 1ml/분, λ = 280nm, 부분 입체 이성질체의 피크가 tR 14.22 분 및 tR 14.51 분을 나타내었다.
2-O- 메틸 -3'-디옥시아데노신-5'-O-[1- 나프틸 (1- 펜틸옥시 -L- 류신 )] 포스페이트 M
Figure pat00022
화합물 M은 2-O-메틸-3'-디옥시아데노신(70 mg, 0.25 mmol), N-메틸이미다졸(99 μL, 1.24 mmol) 및 나프틸(펜틸옥시-L-루시닐)포스포로클로리데이트 330 mg, 0.75 mmol)를 사용하여 상기 일반 제조법 1에 따라 제조하였다. 컬럼 크로마토그래피(용리액 시스템 구배 CH3OH/CH2Cl2 0/100 내지 6/94) 및 분취용 TLC(2000 μM, 용리액 CH3OH/CH2Cl2 7/93)에 의해 정제하여 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다(50 mg, 30% ).
31P NMR(202 MHz, CD3OD)δP 4.53, 4.28.
1H NMR(500 MHz, CD3OD)δH 8.04-7.96(m, 1H, H8), 7.77-7.71(m, 1H, Nap), 7.58-7.53(m, 1H, Nap), 7.45-7.17(m, 5H, Nap), 5.83-5.75(m, 1H, H1’), 4.64-4.51(m, 2H, H2’, H4’), 4.40-4.16(m, 2H, H5’), 3.88-3.75(m, 6H, OCH3, O(CH2)4CH3, CHCH2CH(CH3)2), 2.38-2.24(m, 1H, H3’), 2.00-1.91(m, 1H, H3’), 1.53-1.05(m, 11H, O(CH2)4CH3, CHCH2CH(CH3)2), 0.77-0.55(m, 9H, O(CH2)4CH3, CHCH2CH(CH3)2).
13C NMR(125 MHz, CD3OD)δC 175.02(d, 3JC-P = 2.5 Hz, C=O), 174.78(d, 3JC-P = 2.5 Hz, C=O), 163.76(C2), 158.14(C6), 151.03(C4), 147.96(d, 3JC-P = 7.2, ‘ipso’ Nap), 138.96(C8), 136.30(C-Ar), 136.28(C-Ar), 136.22(C-Ar), 128.93(CH-Ar), 128.88(CH-Ar), 128.81(CH-Ar), 128.48(CH-Ar), 127.77(CH-Ar), 127.73(CH-Ar), 127.44(CH-Ar), 127.42(CH-Ar), 127.06(CH-Ar), 126.86(CH-Ar), 126.45(CH-Ar), 126.44(CH-Ar), 126.31(CH-Ar), 125.98(CH-Ar), 125.88(CH-Ar), 123.83(CH-Ar), 123.43(CH-Ar), 123.24(CH-Ar), 122.81(CH-Ar), 122.77(CH-Ar), 122.69(CH-Ar), 116.34(d, 3JC-P = 3.7 Hz, CH-Ar), 116.02(d, 3JC-P = 3.7 Hz, CH-Ar), 115.71(C5), 93.42(C1’), 93.32(C1’), 80.22(d, 3JC-P = 5.3 Hz, C4’), 80.15(d, 3JC-P = 5.3 Hz, C4’), 76.29(C2’), 76.27(C2’), 69.22(d, 2JC-P = 5.2 Hz, C5’), 69.028(d, 2JC-P = 5.2 Hz, C5’), 66.31(O(CH2)4CH3), 66.30(O(CH2)4CH3), 55.29(OCH3), 55.24(OCH3), 54.79(CHCH2CH(CH3)2), 54.68(CHCH2CH(CH3)2), 44.20(d, 3JC-P = 7.25 Hz, CHCH2CH(CH3)2), 43.93(d, 3JC-P = 7.25 Hz, CHCH2CH(CH3)2), 35.49(C3’), 35.17(C3’), 29.31(O(CH2)4CH3), 29.11(O(CH2)4CH3), 25.67(CHCH2CH(CH3)2), 25.44(CHCH2CH(CH3)2), 23.30(O(CH2)4CH3), 23.10(CHCH2CH(CH3)2), 23.00(CHCH2CH(CH3)2), 22.94(CHCH2CH(CH3)2), 22.81(CHCH2CH(CH3)2), 14.27(O(CH2)4CH3).
(ES +)m/z, 실측치:671.3(M + H +), C32H43N6O8P 요구치:670.69(M).
H2O/CH3CN으로 100/10 내지 0/100의 30 분, 1 ml/분, 1 = 254 nm로 용출시키는 역상 HPLC는 tR 20.83 분 및 t R 20.93 분을 갖는 부분 입체 이성질체의 2개의 피크를 나타냈다.
2-O-메틸-3'-디옥시아데노신-5'-O-[페닐(1-헥실옥시-L-알라닐)]포스페이트 N
Figure pat00023
화합물 N은 2-O-메틸-3'-디옥시아데노신(70mg, 0.25 밀리몰), N-메틸이미다 졸(99㎕, 1.24 밀리몰) 및 페닐(헥실옥시-L-알라닐)포스포로클로리데이트(261 mg, 0.75 mmol)를 사용하여 일반 제조법 1에 따라 제조하였다. 컬럼 크로마토그래피(용리액 시스템 구배 CH3OH/CH2Cl2 0/100 내지 6/94) 및 분취용 TLC(1000 μM, 용리액 CH3OH/CH2Cl2 7/93)에 의해 정제하여 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다(26 mg, 18% ).
31P NMR(202 MHz, CD3OD)δP 3.87, 3.65.
1H NMR(500 MHz, CD3OD)δH 8.08(s, 0.5H, H8), 8.07(s, 0.5H, H8), 7.36-7.29(m, 2H, Ph), 7.24-7.14(m, 3H, Ph), 5.94(d, J = 2.0 Hz, 0.5H, H1’), 5.92(d, J = 2.0 Hz, 0.5H, H1’), 4.81-4.76(m, 1H, H2’), 4.71-4.62(m, 1H, H4’), 4.48-4.43(m, 0.5H, H5’), 4.42-4.36(m, 0.5H, H5’), 4.33-4.25(m, 1H, H5’), 4.10-3.83(m, 6H, OCH3, O(CH2)5CH3, CHCH3), 2.48-2.40(m, 1H, H3’), 2.13-2.07(m, 1H, H3’), 1.61-1.51(m, 2H, O(CH2)5CH3), 1.33-1.24(m, 9H, O(CH2)5CH3, CHCH3), 0.89(m, 3H, O(CH2)5CH3).
13C NMR(125 MHz, CD3OD)δC 175.13(d, 3JC-P = 4.3 Hz, C=O), 174.94(d, 3JC-P = 4.3 Hz, C=O), 163.80(C2), 163.78(C2), 158.17(C6), 158.15(C6), 152.17(d, 2JC-P = 6.3 Hz, C-Ar), 152.15(d, 2JC-P = 6.3 Hz, C-Ar), 152.03(C4), 151.99(C4), 139.42(C8), 139.39(C8), 130.75(CH-Ar), 130.74(CH-Ar), 126.13(CH-Ar), 121.43(CH-Ar), 121.41(CH-Ar), 121.39(CH-Ar), 121.37(CH-Ar), 116.74(C5), 116.69(C5), 93.40(C1’), 93.27(C1’), 80.30(C4’), 80.23(C4’), 76.40(C2’), 68.85(d, 2JC-P = 5.2 Hz, C5’), 68.42(d, 2JC-P = 5.2 Hz, C5’), 66.43(O(CH2)5CH3), 55.30(OCH3), 55.26(OCH3), 51.64(CHCH3), 51.54(CHCH3), 35.30(C3’), 35.04(C3’), 32.58(O(CH2)5CH3), 29.67(O(CH2)5CH3), 29.64(O(CH2)5CH3), 26.61(O(CH2)5CH3), 23.59(O(CH2)5CH3), 20.56(d, 3JC-P = 6.4 Hz, CHCH3), 20.41(d, 3JC-P = 6.4 Hz, CHCH3), 14.36(O(CH2)5CH3).
(ES+)m/z, found: 593.3(M + H+), C32H43N6O8P required: 592.58(M).
H2O/CH3CN으로 100/10 내지 0/100의 30 분, 1 ml/분, 1 = 254 nm로 용출시키는 역상 HPLC는 부분 입체 이성질체의 피크가 tR 17.02 분 및 tR 17.23 분을 나타내었다.
2- 플루오로 -3'-디옥시아데노신-5'-O-[1- 나프틸 ( 벤질옥시 -L- 알라닐 )] 포스페이트 O
Figure pat00024
화합물 O는 2-플루오로-3'-디옥시아데노신(50 mg, 0.18 mmol), N-메틸이미다졸(74 μL, 0.93 mmol) 및 페닐(벤질옥시-L-알라닐)포스포로클로리데이트(196 mg , 0.56 mmol)을 사용하여 일반 제조법 1에 따라 제조하였다. 컬럼 크로마토그래피(용리액 시스템 구배 CH3OH/CH2Cl2 0/100 내지 6/94) 및 분취용 TLC(500 μM, 용리액 CH3OH/CH2Cl2 5/95)에 의해 정제하여 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다(5 mg, 4% ).
31P NMR(202 MHz, CD3OD)δP 4.33, 4.08.
1H NMR(500 MHz, CD3OD)δH 8.17(s, 0.5H, H8), 8.14(s, 0.5H, H8), 8.14-8.09(m, 1H, Ar), 7.89-7.85(m, 1H, Ar), 7.70-7.66(m, 1H, Ar), 7.54-7.42(m, 4H, Ar), 7.40-7.24(m, 5H, Ar), 5.89(d, J = 2.3 Hz, 0.5H, H1’), 5.88(d, J = 2.3 Hz, 0.5H, H1’), 5.08-5.01(m, 2H, OCH2Ph), 4.70-4.60(m, 2H, H2’, C4’), 4.46-4.39(m, 1H, C5’), 4.32-4.24(m, 1H, C5’), 4.09-3.97(m, 1H, CHCH3), 2.36-2.25(m, 1H, H3’), 2.06-1.98(m, 1H, H3’), 1.32-1.25(m, 3H, CHCH3).
13C NMR(125 MHz, CD3OD)δC 175.54(CO), 175.22(CO), 161.02(d, 1JC-F = 207.3 Hz, C2), 160.89(d, 1JC-F = 207.3 Hz, C2), 158.45(d, 3JC-F = 18.2 Hz, C6), 158.23(d, 3JC-F = 18.2 Hz, C6), 150.63(d, 3JC-F = 18.4 Hz, C4), 140.67(C8), 136.26(C-Ar), 131.62, 131.54, 129.56(CH-Ar), 129.52(CH-Ar), 129.37(CH-Ar), 129.31(CH-Ar), 129.26(CH-Ar), 128.87(CH-Ar), 128.81(CH-Ar), 128.29(CH-Ar), 128.02(CH-Ar), 127.79(CH-Ar), 127.76(CH-Ar), 127.51(CH-Ar), 127.49(CH-Ar), 127.47(CH-Ar), 126.47(CH-Ar), 126.33(C-Ar), 126.27(C-Ar), 125.97(CH-Ar), 122.78(CH-Ar), 122.74(CH-Ar), 122.64(CH-Ar), 122.62(CH-Ar), 116.35(d, 4JC-F = 3.0 Hz, C5), 116.15 (d, 4JC-F = 3.0 Hz, C5), 93.25(C1’), 93.20(C1’), 80.41(d, 3JC-P = 7.5 Hz, C4’), 80.33(d, 3JC-P = 7.5 Hz, C4’), 76.43(C2’), 76.35(C2’), 68.84(d, 2JC-P = 5.5 Hz, C5’), 68.45(d, 2JC-P = 5.5 Hz, C5’), 67.92(OCH2Ph), 67.92(OCH2Ph), 51.75(CHCH3), 51.52(CHCH3), 34.97(C3’), 34.74(C3’), 20.42(d, 3JC-P = 6.7 Hz, CHCH3), 20.20(d, 3JC-P = 6.7 Hz, CHCH3).
19F NMR(470 MHz, CD3OD)δF-53.14,-53.22.
(ES+)m/z, found: 637.2(M + H+), C30H30FN6O7P required: 636.57(M).
H2O/CH3CN으로 100/10 내지 0/100의 30 분, 1 ml/분, 1 = 254 nm로 용리되는 역상 HPLC는 tR 17.09 분 및 tR 17.34 분을 갖는 부분 입체 이성질체의 2개의 피크를 나타냈다.
(2S)- 벤질 2-(((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-2- 플루오로 -9H-퓨린-9-일)-4- 하이드록시테트라하이드로퓨란 -2-일)페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트 P
Figure pat00025
상기 일반 제조법 1을 사용하여, 무수 THF(2 ㎖)중 N-메틸이미다졸(74 μL, 0.93 mmol) 및 (2S)-벤질 2-((클로로(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트(196 mg, 0.56 mmol)을 무수 THF(5 mL)중의 2-플루오로-3'-디옥시아데노신(50 mg, 0.18 mmol)의 현탁액에 적가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 컬럼 크로마토그래피(용리액 시스템 CH3OH/CH2Cl2 0/100 내지 6/94) 및 분취용 TLC(용리액 시스템 CH3OH/CH2Cl2 5/95)에 의해 정제하여 목적하는 화합물을 백색 고체(5 mg, 7%)로 수득하였다.
(ES+)m/z, found: 587.1(M + H+), C26H28FN6O7P required: 586.17(M). 19F NMR(470 MHz, CD3OD): δF-53.17,-53.23. 31P NMR(202 MHz, CD3OD): δP 3.95(s), 3.67(s). 1H NMR(500 MHz, CDCl3): δH 8.19(s, 0.5H, H8), 8.16(s, 0.5H, H8), 7.36-7.27(m, 7H, Ar), 7.22-7.13(m, 3H, Ar), 5.91(d, J = 1.5 Hz, 0.5H, H1’), 5.89(d, J = 1.7 Hz, 0.5H, H1’), 5.15-5.06(m, 2H, OCH2Ph), 4.73-4.58(m, 2H, H2’, H4’), 4.42-4.34(m, 1H, H5’), 4.02-3.90(m, 1H, H5’), 3.27-3.24(m, 1H, H3’), 2.08-2.00(m, 1H, H3’), 1.33(d, J = 7.1 Hz, 1.5H, CH3 ala), 1.29(d, J = 7.1 Hz, 1.5H, CH3 ala). 13C NMR(125 MHz, CD3OD): δC 175.85(d, 3JC-P = 3.7 Hz, C=O), 174.63(d, 3JC-P = 5.0 Hz, C=O), 160.58(d, 1JC-F = 207.5 Hz, C2), 160.53(d, 1JC-F = 207.5 Hz, C2), 159.06(d, 3JC-F = 18.7 Hz, C6), 159.05(d, 3JC-F = 17.5 Hz, C6), 152.11(d, 2JC-P = 8.75 Hz, C-Ar), 152.08(d, 2JC-P = 8.7 Hz, C-Ar), 151.58(d, 3JC-F = 19.7 Hz, C4), 151.56(d, 3JC-F = 19.5 Hz, C4), 140.63(C8), 137.28(C-Ar), 137.21(C-Ar), 130.78(CH-Ar), 130.75(CH-Ar), 129.58(CH-Ar), 129.38(CH-Ar), 129.34(CH-Ar), 129.32(CH-Ar), 129.28(CH-Ar), 128.3(CH-Ar), 128.02(CH-Ar), 121.16(CH-Ar), 121.18(CH-Ar), 121.47(CH-Ar), 121.51(CH-Ar), 121.42(CH-Ar), 121.39(CH-Ar), 121.36(CH-Ar), 118.75(d, 4JC-F = 3.7 Hz, C5), 118.72(d, 4JC-F = 3.7 Hz, C5), 93.25(C1’), 93.18(C1’), 80.48(d, 3JC-P = 8.3 Hz, C4’), 80.46(d, 3JC-P = 8.1 Hz, C4’), 76.51(C2’), 76.49(C2’), 68.54(d, 2JC-P = 5.2 Hz, C5’), 68.18(d, 2JC-P = 5.6 Hz, C5’), 67.94(CH2 Bn), 67.91(CH2 Bn), 51.71(CH ala), 51.56(CH ala), 34.85(C3’), 34.64(C3’), 20.42(d, 3JC-P = 7.1 Hz, CH3 ala), 20.25(d, 3JC-P = 7.5 Hz, CH3 ala).
H2O/CH3CN으로 100/10 내지 0/100의 30 분, 1 ml/분, 1 = 280 nm로 용리되는 역상 HPLC는 tR 14.98 분 및 tR 15.12 분을 갖는 부분 입체 이성질체의 2개의 피크를 나타냈다.
2- 플루오로 -3'-디옥시아데노신-5'-O-[1- 나프틸 (1- 펜틸옥시 -L- 류신 )] 포스페이트 Q
Figure pat00026
화합물 Q는 2-플루오로-3'-디옥시아데노신(50 mg, 0.18 mmol), N-메틸이미다졸(74 μL, 0.93 mmol) 및 나프틸(펜틸옥시-L-루시닐)포스포로클로리데이트(246 mg , 0.56 mmol)을 사용하여 상기 일반 제조법 1에 따라 제조하였다. 컬럼 크로마토그래피(용리제 시스템 CH3OH/CHCl3 0/100 내지 6/94) 및 분취용 TLC(1000 ㎖, 용리제 CH3OH/CH2Cl2 5/95)에 의해 정제하여 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다(65 mg, 53%).
31P NMR(202 MHz, CD3OD): 4.60, 4.35.
1H NMR(500 MHz, CD3OD): δH 8.23(s, 0.5H, H8), 8.20(s, 0.5H, H8), 8.18-8.12(m, 1H, Ar), 7.92-7.86(m, 1H, Ar), 7.73-7.68(m, 1H, Ar), 7.57-7.46(m, 3H, Ar), 7.42-7.36(m, 1H, Ar), 5.93-5.91(m, 1H, H1’), 4.74-4.62(m, 2H, H2’, H4’), 4.55-4.50(m, 0.5H, H5’), 4.49-4.44(m, 0.5H, H5’), 4.43-4.37(m, 0.5H, H5’), 4.36-4.31(m, 0.5H, H5’), 4.02-3.86(m, 3H, CHCH2CH(CH3)2, O(CH2)4CH3), 2.43-2.29(m, 1H, H3’), 2.12-2.04(m, 1H, H3’), 1.67-1.20(m, 11H, O(CH2)4CH3, CHCH2CH(CH3)2), 0.89-0.67(m, 9H, O(CH2)4CH3, CHCH2CH(CH3)2)
13C NMR(125 MHz, CD3OD): δC 175.03(d, 3JC-P = 2.5 Hz, C=O), 174.93(d, 3JC-P = 2.5 Hz, C=O), 161.45(d, 1JC-F = 205.5 Hz, C2), 160.39(d, 1JC-F = 205.5 Hz, C2), 158.33(C6), 151.60(C4), 147.92(C-Ar), 140.69(C8), 136.30(C-Ar), 128.88(CH-Ar), 128.83(CH-Ar), 127.80(CH-Ar), 127.76(CH-Ar), 127.49(CH-Ar), 127.46(CH-Ar), 126.48(CH-Ar), 126.45(CH-Ar), 126.02(CH-Ar), 125.91(CH-Ar), 123.03(C-Ar), 122.81(CH-Ar), 122.69(CH-Ar), 116.39(d, 3JC-P = 2.9 Hz, CH-Ar), 116.28(C5), 116.26(C5), 115.97(d, 3JC-P = 2.9 Hz, CH-Ar), 93.29(C1’), 93.23(C1’), 80.45(d, 3JC-P = 6.0 Hz, C4’), 80.38(d, 3JC-P = 6.0 Hz, C4’), 76.45(C2’), 76.41(C2’), 68.99(d, 2JC-P = 5.4 Hz, C5’), 68.78(d, 2JC-P = 5.4 Hz, C5’), 66.31(O(CH2)4CH3), 66.29(O(CH2)4CH3), 54.78(CHCH2CH(CH3)2), 54.66(CHCH2CH(CH3)2), 44.16(d, 3JC-P = 7.25 Hz, CHCH2CH(CH3)2), 43.84(d, 3JC-P = 7.3 Hz, CHCH2CH(CH3)2), 35.09(C3’), 34.79(C3’), 29.31(O(CH2)4CH3), 29.12(O(CH2)4CH3), 25.65(CHCH2CH(CH3)2), 25.41(CHCH2CH(CH3)2), 23.33(O(CH2)4CH3), 23.11(CHCH2CH(CH3)2), 23.00(CHCH2CH(CH3)2), 21.95(CHCH2CH(CH3)2), 21.68(CHCH2CH(CH3)2), 14.29(O(CH2)4CH3).
19F NMR(470 MHz, CD3OD): δF-53.15,-53.20.
(ES+)m/z, found: 659.3(M + H+), C31H40FN6O7P required: 658.66(M).
H2O/CH3CN으로 100/10 내지 0/100의 30 분, 1 ml/분, 1 = 254 nm로 용리되는 역상 HPLC는 tR 21.95 분을 갖는 중첩 부분 입체 이성질체의 하나의 피크를 나타냈다.
(2S)- 헥실 2-(((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-2- 플루오로 -9H-퓨린-9-일)-4- 하이드록시테트라하이드로퓨란 -2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트 R
Figure pat00027
상기 일반 제조법 1을 사용하여, 무수 THF(2 ㎖)중 N-메틸이미다졸(74 μL, 0.93mmol) 및 (2S)-헥실 2-((클로로(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트메틸(196 mg, 0.56 mmol)㎖)을 무수 THF(5 mL)중 2-플루오로-3'-디옥시아데닌(50 mg, 0.18 mmol)의 현탁액에 적가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 컬럼 크로마토그래피(용리액 시스템 CH3OH/CH2Cl2 0/100 내지 6/94) 및 분취용 TLC(용리액 시스템 CH3OH/CH2Cl2 5/95)에 의해 정제하여 목적하는 화합물을 백색 고체(5 mg, 7%)로 수득하였다.
(ES+)m/z, found: 587.1(M + H+), C26H28FN6O7P required: 586.17(M). 19F NMR(470 MHz, CD3OD): δF-53.15,-53.20. 31P NMR(202 MHz, CD3OD): 3.91(s), 3.73(s). 1H NMR(500 MHz, CDCl3): δH 8.21(s, 0.5H, H8), 8.20(s, 0.5H, H8), 7.37-7.29(m, 7H, Ar), 7.26-7.13(m, 3H, Ar), 5.94-5.91(m, 1H, H1’), 4.76-4.64(m, 2H, H2’, H4’), 4.49-4.44(m, 0.5H, H5’), 4.43-4.37(m, 0.5H, H5’), 4.33-4.26(m, 1H, H5’), 4.11-3.99(m, 2H, CH2 Hex), 3.97-3.83(m, 1H, CH ala), 2.41-2.32(m, 1H, H3’), 2.13-2.06(m, 1H, H3’), 1.62-1.52(m, 2H, CH2 Hex), 1.37-1.23(m, 9H, CH3 ala, CH2 Hex), 0.92-0.85(m, 3H, CH3 Hex).
13C NMR(125 MHz, CD3OD): δC 175.15(d, 3JC-P = 3.7 Hz, C=O), 174.96(d, 3JC-P = 5.0 Hz, C=O), 160.59(d, 1JC-F = 207.5 Hz, C2), 160.56(d, 1JC-F = 207.5 Hz, C2), 159.09(d, 3JC-F = 21.2 Hz, C6), 159.08(d, 3JC-F = 20.0 Hz, C6), 152.16(d, 2JC-P = 7.5 Hz, C-Ar), 152.14(d, 2JC-P = 6.3 Hz, C-Ar), 151.71(d, 3JC-F = 20.0 Hz, C4), 151.67(d, 3JC-F = 20.0 Hz, C4), 140.70(d, 5JC-F = 2.5 Hz, C8), 140.68(d, 5JC-F = 2.5 Hz, C8), 130.77(CH-Ar), 130.74(CH-Ar), 126.16(CH-Ar), 126.24(CH-Ar), 121.48(CH-Ar), 121.44(CH-Ar), 121.41(CH-Ar), 121.37(CH-Ar), 118.80(d, 4JC-F = 3.7 Hz, C5), 118.77(d, 4JC-F = 3.7 Hz, C5), 93.37(C1’), 93.25(C1’), 80.52(d, 3JC-P = 3.7 Hz, C4’), 80.45(d, 3JC-P = 4.1 Hz, C4’), 76.52(C2’), 76.49(C2’), 68.69(d, 2JC-P = 5.4 Hz, C5’), 68.30(d, 2JC-P = 4.9 Hz, C5’), 66.46(CH2 Hex), 51.68(CH ala), 51.57(CH ala), 35.02(C3’), 34.80(C3’), 32.58(CH2 Hex), 29.65(CH2 Hex), 26.61(CH2 Hex), 23.59(CH2 Hex), 20.60(d, 3JC-P = 7.1 Hz, CH3 ala), 20.43(d, 3JC-P = 7.5 Hz, CH3 ala), 14.35(CH3 Hex).
H2O/CH3CN으로 100/10 내지 0/100의 30 분, 1 ml/분, 1 = 280 nm로 용리되는 역상 HPLC는 부분 입체 이성질체의 피크가 tR 17.83 분 및 tR 18.02 분을 나타내었다.
(2R)- 벤질 2-((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-2-클로로-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라하이드로퓨란-2-일)메톡시)(나프탈렌피리미딘-4-일옥시)포스포릴아미노)프로파노에이트 S
Figure pat00028
무수 THF 10 mL 중 2-클로로-3'-디옥시아데노신(100 mg, 1.0 mol/eq.)의 교반된 용액에 424 mg의(2S)-벤질 2-(클로로(나프탈렌-1-일옥시)포스포릴아미노 )프로파노에이트메틸(3.0 당량/몰)을 적가하였다. 이 반응액에 실온에서 아르곤 분위기하에 NMP(5 몰/당량) 0.14 mL를 적하하였다. 반응 혼합물을 88시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하고, 잔류물을 용리제의 구배(CH3OH/CH2Cl2 0/100 내지 5/95)로 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 목적 생성물을 황색 고체로서 수득하였다(7 mg, 수율 = 3%).
MS(ES+)m/z: Found: 653(M + H+), 675(M + Na+)C30H30ClN6O7P required: 652.16(M); 31P NMR(202 MHz, CD3OD): δP 4.39(s), 4.12(s); 1H NMR(500 MHz, CD3OD): δH 8.10(s, 0.5 H, H8), 8.07(s, 0.5 H, H8), 8.02-7.97(m, 3H, CH2Ph and Naph), 7.43-7.14(m, 9H, CH2Ph and Naph), 5.80-5.81(m, 1H, H1’), 4.89-4.97(m, 2H, CH2Ph)4.49-4.53(m, 2H, H4’and H2’), 4.30-4.35(m, 1H, H5’), 4.15-4.21(m, 1H, H5’), 3.87-3.95(m, 1H, CHCH3), 2.12-2.23(m, 1H, H3’), 1.86-1.93(m, 1H H3’), 1.14-1.17(m, 3H, CHCH3); 13C NMR(125 MHz, CD3OD): δC 174.85(d JCP = 4.0 Hz, C=O), 174.55(d JCP = 4.3 Hz, C=O), 158.07, 158.04(C6), 155.31, 155.28(C2), 151.34, 151.31(C4), 149.69(C-Ar), 147.96(d 3JCP = 7.25 Hz, C-ipso Naph), 147.90(d 3JCP= 7.0 Hz, C-ipso Naph), 140.70(C8), 137.21, 137.16(C-ipso CH2Ph), 136.26(C-Ar), 130.92, 130.80, 129.56, 129.53, 129.31, 129.27, 129.25, 128.88, 128.81(CH-Ar), 127.78(d JCP = 4.7 Hz, CH-Ar), 127.50(d JCP = 6.2 Hz, CH-Ar), 126.48, 126.02, 125.97(CH-Ar), 119.46, 119.42(C5), 116.33(d, JCP = 3.0, CH-Ar), 116.16(d, JCP = 3.4, CH-Ar), 93.30, 93.27(C1’), 80.56(d J = 8.3 Hz, C4’), 80.51(d J = 8.4 Hz, C4’), 76.61, 76.54(C2’), 68.74(d JCP= 5.3 Hz, C5’), 68.54(d JCP= 5.1 Hz, C5’), 67.93, 67.90(CH2Ph), 51.81, 51.70(CHCH3), 34.79, 34.53(C3’), 20.42(d JCP = 6.5 Hz, CHCH3), 20.23(d JCP = 7.7 Hz, CHCH3); 역상 HPLC로 H2O/CH3CN으로 90 분의 90에서 0/100까지 30 분에 용출, F = 1ml/분, 1 = 254nm, tR 18.03 분.
2- 클로로 -3'-디옥시아데노신 5'-O-[1-페닐(2,2- 디메틸프로폭시 -L-알라닌)]포스페이트 T
Figure pat00029
화합물 T는 2-클로로-3'-디옥시아데노신(350 mg, 1.25 mmol), N-메틸이미다졸(490 μL, 6.15 mmol) 및 페닐(2,2-디메틸프로폭시-L-알라닐 )포스포로클로리데이트(1231 mg, 3.69 mmol)를 사용하여 일반 제조법 1에 따라 제조하였다. 컬럼 크로마토그래피(용리제 시스템 CH3OH/CH2Cl2 0/100 내지 5/95) 및 분취용 TLC(1000 ㎖, 용리제 CH3OH/CH2Cl2 4/96)에 의해 정제하여 백색 고체의 상기 표제 화합물(181 mg, 25%)을 수득하였다 .
31P NMR(202 MHz, CD3OD): δP 3.93, 3.72.
1H NMR(500 MHz, CD3OD): δH 8.12(s, 0.5 H, H8), 8.10(s, 0.5 H, H8), 7.19-7.23(m, 2 H, Ph), 7.03-7.12(m, 3 H, Ph), 5.84(d J =2, 0.5 H, H1’), 5.83(d J =2, 0.5 H, H1’), 4.54-4.60(m, 2 H, H4’and H2’), 4.34-4.38(m, 0.5 H, H5’), 4.27-4.31(m, 0.5 H, H5’), 4.16-4.23(m, 1 H, H5’), 3.80-3.90(m, 1 H, CHCH3), 3.57-3.73(m, 2 H OCH2C(CH3)3), 2.18-2.28(m, 1 H, H3’), 1.94-1.99(m, 1 H, H3’), 1.20-1.24(m, 3 H, CHCH3), 0.81(s, 4.5 H OCH2(CH3)3), 0.79(s, 4.5 H OCH2C(CH3)3).
13C NMR(125 MHz, CD3OD): δC 175.09(d 3JCP = 4.75 Hz, C=O), 174.90(d 3JCP = 5.37 Hz, C=O), 158.10,(C6), 155.31, 155.28(C2), 152.14(d 2JCP= 6.37 Hz, C-ipso Ph), 152.13(d 2JCP= 6.25 Hz, C-ipso Ph), 151.33, 151.30(C4), 140.87, 140.76(C8), 130.78, 130.77(CH-Ar), 126.17, 126.42(CH-Ar), 121.45(d 3JCP = 11.75 Hz, CH-Ar), 121.41(d 3JCP = 11.75 Hz, CH-Ar), 119.52, 119.48(C5), 93.49, 93.35(C1’), 80.67(d 3J = 8.62 Hz, C4’), 80.65(d 3J = 8.25 Hz, C4’), 76.70, 76.67(C2’), 75.43,(OCH2C(CH3)3), 68.68(d 2JCP= 5.12 Hz, C5’), 68.42(d 2JCP= 5.12 Hz, C5’), 51.77, 51.60(CHCH3), 34.94, 34.67(C3’), 32.36, 32.32(OCH2C(CH3)3), 26.78, 26.76(OCH2C(CH3)3), 20.83(d JCP = 6.25 Hz, CHCH3), 20.61(d JCP = 7.12 Hz, CHCH3).
MS(ES+)m/z: Found: 583(M + H+), 605(M + Na+)C24H32ClN6O7P required: 582.18(M).
역상 HPLC로 H2O/CH3CN으로 90 분의 90에서 0/100까지 30 분에 용출, F = 1ml/분, 1 = 254nm, tR 16.37, 16.55 분.
2- 클로로 -3'-디옥시아데노신 5'-O-[1- 나프틸 (2,2- 디메틸프로필 -L-알라닌)]포스페이트 U
Figure pat00030
화합물 U는 2-클로로-3'-디옥시아데노신(350 mg, 1.25 mmol), N-메틸이미다졸(490 μL, 6.15 mmol) 및 나프틸(2,2-디메틸프로폭시-L-알라닐 )포스포로클로리데이트(1416 mg, 3.69 mmol)을 사용하여 상기 일반 제조법 1에 따라 제조하였다. 컬럼 크로마토그래피(용리제 시스템 CH3OH/CH2Cl2 0/100 내지 5/95) 및 분취용 TLC(1000 ㎖, 용리제 CH3OH/CH2Cl2 4/96)에 의해 정제하여 백색 고체의 상기 표제 화합물(264 ㎎, 34%)을 수득하였다 .
31P NMR(202 MHz, CD3OD): δP 4.35, 4.20.
1H NMR(500 MHz, CD3OD): δH 8.23(s, 0.5 H, H8), 8.21(s, 0.5 H, H8), 8.11-8.16(m, 1 H, Naph), 7.86-7.89(m, 1 H, Naph), 7.69-7.70(m, 1 H, Naph), 7.54-7.46(m, 3 H, Naph), 7.37-7.41(m, 1 H, Naph), 5.95(d J = 2, 0.5 H, H1’), 5.94(d J = 1.5, 0.5 H, H1’), 4.67-4.73(m, 2 H, H4’and H2’), 4.34-4.55(m, 2 H, H5’), 4.00-4.08(m, 1 H, CHCH3), 3.66-3.81(m, 2 H OCH2C(CH3)3), 2.28-2.41(m, 1 H, H3’), 2.03-2.10(m, 1 H, H3’), 1.31-1.34(m, 3 H, CHCH3), 0.90(s, 4.5 H OCH2C(CH3)3), 0.89(s, 4.5 H CH2(CH3)3).
13C NMR(125 MHz, CD3OD): δC 175.11(d JCP = 4.1 Hz, C=O), 174.85(d JCP = 5.0 Hz, C=O), 158.10, 158.04(C6), 155.32, 155.30(C2), 151.33(C4), 147.96(d 2JCP = 7.25 Hz, C-ipso Naph), 147.93(d 2JCP= 7.25 Hz, C-ipso Naph), 140.84, 140.76(C8), 136.29(C-Ar), 128.87, 128.82(CH-Ar), 127.85(C-Ar), 127.77, 127.74, 127.48, 127.45, 126.47, 125.99, 125.96, 122.74, 122.66(CH-Ar), 119.47(C5), 116.29(d 3JCP = 3.4 Hz, CH-Ar), 116.17(d 3JCP = 2.9 Hz, CH-Ar), 93.42, 93.34(C1’), 80.57(d 3JCP = 8.1 Hz, C4’), 80.53(d 3JCP = 5.1 Hz, C4’), 76.61, 76.53(C2’), 75.41, 75.38(OCH2C(CH3)3), 68.95(d 2JCP= 5.3 Hz, C5’), 68.82(d 2JCP= 5.2 Hz, C5’), 51.84, 51.73(CHCH3), 35.04, 34.75(C3’), 32.29(OCH2C(CH3)3), 26.70(OCH2C(CH3)3), 20.76(d 3JCP = 6.4 Hz, CHCH3), 20.55(d 3JCP = 7.2 Hz, CHCH3).
MS(ES+)m/z: Found: 633(M + H+), 655(M + Na+)C28H34ClN6O7P required: 652.16(M).
H2O/CH3CN으로 90 분의 90에서 0/100까지 30 분에서 용리되는 역상 HPLC, F = 1ml/분, 1 = 254nm, tR 19.16 분.
2-클로로-3'-디옥시아데노신 5'-O-[1-페닐(에톡시-L-알라닌)]포스페이트 V
Figure pat00031
화합물 V는 2-클로로-3'-디옥시아데노신(343 mg, 0.66 mmol), tert-부틸 디메틸 실릴 클로라이드(328 mg, 2.18 mmol)이미다졸(297 mg, 4.36 mmol)을 사용하여일반 제조법 4에 따라 제조하였다. 컬럼 크로마토그래피(용리제 시스템 CH3OH/CH2Cl2 0/100 내지 12/88)로 정제하여 중간체 1을 정량적 수율로 수득하였다. 이어서, 중간체 1(970 mg, 1.89 mmol)을 12 mL의 THF/H2O/TFA 4/1/1 용액과 반응시켰다. 컬럼 크로마토그래피(용리액 시스템 CH3OH/CH2Cl2 0/100 내지 12/88)로 정제하여 중간체 2(544 mg, 72%)를 수득하였다. 이어서, 중간체 2(204mg, 0.51mmol)를 무수 THF(5mL)중 tert-부틸 마그네슘 클로라이드 및 페닐(에틸 옥시-L-알라닐)포스포로클로리데이트(348.56mg, 1.02mmol)의 용액과 반응시켰다. 컬럼 크로마토그래피(용리제 시스템 CH3OH/CH2Cl2 0/100 내지 8/92)로 정제하여 중간체 3(93mg, 28%)을 수득하였다. 마지막으로, 중간체 3(93 mg, 0.14 mmol)을 THF/TFA/H2O 1/1/1(3 mL)의 용액과 반응시켰다. 예비 TLC(2000mM, 용출액 CH3OH/CH2Cl2 4/96)에 의해 정제하여 백색 고체의 표제 화합물(50mg, 66%)을 수득하였다.(총 수율 13%)
31P NMR(202 MHz, CD3OD): δP 3.93, 3.72.
1H NMR(500 MHz, CD3OD): δH 8.12(s, 0.5 H, H8), 8.11(s, 0.5 H, H8), 7.18-7.23(m, 2 H, Ph), 7.03-7.12(m, 3 H, Ph), 5.85(d J =1.5, 0.5 H, H1’), 5.84(d J =2, 0.5 H, H1’), 4.55-4.62(m, 2 H, H4’and H2’), 4.34-4.38(m, 0.5 H, H5’), 4.28-4.32(m, 0.5 H, H5’), 4.16-4.22(m, 1 H, H5’), 3.93-4.03(m, 2 H, OCH2CH3), 3.70-3.84(m, 1 H, CHCH3), 2.20-2.28(m, 1 H, H3’), 1.95-1.99(m, 1 H, H3’), 1.15-1.21(m, 3 H, CHCH3), 1.06-1.11(m, 3 H, OCH2CH3).
13C NMR(125 MHz, CD3OD): δC 173.66(d 3JCP = 4.5 Hz, C=O), 173.65(d 3JCP = 5.3 Hz, C=O), 156.68, 156.70(C6), 153.93, 153.88(C2), 150.72(d 2JCP= 6.7 Hz, C-ipso Ph), 150.71(d 2JCP= 6.5 Hz, C-ipso Ph), 149.89, 149.94(C4), 139.41, 139.35(C8), 129.33(CH-Ar), 124.74, 124.73(CH-Ar), 120.03(d 3JCP = 4.75 Hz, CH-Ar), 119.97(d 3JCP = 4.87 Hz, CH-Ar), 118.07, 118.03(C5), 92.02, 91.88(C1’), 79.26, 79.19(C4’), 75.26, 75.24(C2’), 67.18(d 2JCP= 5.25 Hz, C5’), 66.81(d 2JCP= 5.12 Hz, C5’), 60.96(OCH2CH3), 50.23, 50.12(CHCH3), 33.46, 33.21(C3’), 19.16(d 3JCP = 6.3 Hz, CHCH3), 18.97(d 3JCP = 7.2 Hz, CHCH3), 13.10, 13.07(OCH2CH3).
MS(ES+)m/z: Found: 541(M + H+), 563(M + Na+)C21H26ClN6O7P required: 540(M).
역상 HPLC로 H2O/CH3CN으로 90 분의 90에서 0/100까지 30 분에 용출, F = 1㎖/분, 1 = 254nm, tR 12.41, 12.83 분.
(2S)-이소프로필-2-(((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라하이드로퓨란-2-일)메톡시)(페녹시))아미노)프로파노에이트 W
Figure pat00032
무수 THF(5 mL)중의(2S)-이소프로필 2-((클로로(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트(546 mg, 3 mmol)의 용액을 무수 THF(3 mL)중(2R, 3R, 5S)-2-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-5-(하이드록시메틸)테트라하이드로퓨란-3-올(150 mg, 0.6 mmol))을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 컬럼 크로마토그래피(용리제 시스템 CH3OH/CH2Cl2 0/100 내지 6/94) 및 분취용 TLC(2000 μM, 용리액 CH3OH/CH2Cl2 5/95)로 정제하여 목적하는 화합물을 백색 고체(40 mg, 13%)로 수득하였다.
MS(ES+)m/z: Found: 521.2(M + H+), 543.3(M + Na+), 1063.4(2M + Na+)C31H33N6O8P required: 520.18(M).
31P NMR(202 MHz, CD3OD): δP 3.99(s), 3.82(s).
1H NMR(500 MHz, CD3OD): δH 8.16(s, 0.5H, H8), 8.15(s, 0.5H, H8), 8.11(s, 1H, H-2)7.23-7.20(m, 2H, Ph), 7.11-7.03(m, 3H, Ph), 5.91(d J = 2.0Hz, 0.5H, H1’), 5.90(d J = 2.0Hz, 0.5H, H1’), 4.85-4.79(m, 1H, CH(CH3)2, 4.64-4.63(m, 1H, H4’), 4.60-6.57(m, 1H, H2’), 4.37-4.33(m, 1H, H5’), 4.31-4.28(m, 1H, H5’), 3.74-4.22-4.17(m, 1H, H5’), 3.70(m, 1H, CH ala), 2.02-1.97(m, 1H, H3’), 2.04-2.01(m, 1H, H3’), 1.18-1.14(m, 3H, CH3), 1.24(m,6H, CH(CH3)2)
역상 HPLC는 H2O/CH3CN으로 100/10에서 0/100까지 30 분에서 용출, F = 1ml/min, λ = 200 nm, tR 11.58 분 및 tR 11.92 분을 갖는 부분 입체 이성질체의 2개의 피크를 나타냈다.
용제 및 시약. 다음 무수 용매는 Sigma-Aldrich에서 구입했다:dichloromethane(CH2Cl2), trimethylphosphate((CH3O)3PO). 상업적으로 입수할 수 있는 아미노산 에스테르는 Sigma-Aldrich로부터 구입하였다. 상업적으로 이용 가능한 모든 시약은 추가 정제없이 사용하였다.
박막 크로마토그래피(TLC).
미리 코팅된 알루미늄 배면 판(60 F254, 0.2 mm 두께, 머크)을 장파장 및 장파장 자외선(254 및 366 nm)또는 다음의 TLC 지시기를 사용하여 연소시켜 가시화하였다:(i)몰리브덴 산 암모늄 세륨 술 페이트;(ii)과망간산 칼륨 용액. 제조용 TLC 플레이트(20cm × 20cm, 500-2000㎛)는 Merck에서 구입하였다.
플래시 컬럼 크로마토그래피. 플래쉬 컬럼 크로마토그래피는 피셔(Fisher, 60A, 35-70μm)에 의해 공급된 실리카겔을 사용하여 수행되었다. 유리 컬럼은 적절한 용리액을 사용하여 슬러리로 포장되었으며, 시료는 동일한 용리액에서 농축된 용액으로 채워지거나 실리카겔에 사전 흡착되었다. 생성물을 함유하는 분획을 TLC로 확인하고, 모으고, 용매를 진공에서 제거하였다.
고성능 액체 크로마토그래피(HPLC). I)ThermoSCIENTIFIC, SPECTRA SYSTEM P4000, SPECTRA SYSTEM UV2000, Varian Pursuit XRs 5 C18, 150 x 4.6 mm(분석 컬럼)또는 II)를 사용하는 HPLC 분석으로 최종 화합물의 순도가> 95% Varian Prostar(LC Workstation-Varian Prostar 335 LC 검출기), Thermo SCIENTIFIC Hypersil Gold C18, 5μ, 150 x 4.6mm(분석 컬럼). 용출 방법은 실험 부분을 참조하십시오.
핵 자기 공명(NMR). 25℃에서 Bruker Avance 500MHz 분광기로 1H NMR(500MHz), 13C NMR(125MHz), 31P NMR(202MHz) 및 19F NMR(470MHz)을 기록하였다. 내부 MeOH-d4(δ3.334H-NMR, δ49.8613C-NMR) 및 CHCl3-d4(δ7.26H NMR, δ77.3613C NMR)또는 외부에서의 화학 시프트(ppm)85% H3PO4(δ 0.0031P NMR). 커플 링 상수(J)는 헤르츠 단위로 측정된다. s(단일 선), d(이중 선), t(삼중 항), q(사중주), m(다중 선), bs(광역 단일 선), dd(이중선 이중 선), dt(삼중 항의 doublet), app(겉보기). 1H NMR 및 13C NMR에서 신호의할당은 커플 링 상수 및 추가 2 차원 실험(COSY, HSQC, HMBC, PENDANT)의 분석에 기초하여 수행되었다.
질량 분광법(MS). 저해상도 질량 스펙트럼은 Bruker Daltonics microTof-LC(대기압 이온화, 전자 분무 질량 분광법)에서 양 또는 음 모드로 수행되었다.
최종 화합물의 순도. 모든 최종 화합물의 95% 이상의 순도가 HPLC 분석을 사용하여 확인되었다.
실시예 2-세포 독성
본 발명을 구현하는 예시 화합물을 이의 항암 효능에 대하여, 하기와 같이 수행하여 평가하였다.
체외 생존 분석은 CellTiterGlo(CTG, Promega-G7573)분석을 사용하여 72시간 동안 7개의 선택된 세포주에서 세포 생존능에 대한 화합물의 효과를 평가하기 위해 수행되었다. 시험은 9 점에서 화합물 처리로 72시간 동안 96 웰 플레이트에서 3.16 배 적정으로 수행되었다. 화합물 출발 농도는 198 mM이었다. 96-웰 플레이트에서 CellTiterGlo를 사용하여 세포 생존능 분석을 수행하였다. 화합물 처리는 72시간, 표준 성장 조건 하에서, 그리고 이중으로 수행되었다. 화합물을 해동된 100%로 40mM로 용해시켰다. 화합물을 해동된 DMSO에서 3.16 배로 연속 희석하고, 37℃로 가온 한 후 배지(2μl + 200μl)에 용해시켰다. 화합물이 배지에 용해된 후(배지도 37℃로 가온 됨). 화합물을 함유하는 배지를 배양기에서 37℃로 가온 한 다음, 배지 중 화합물을 세포 플레이트(50㎕ + 50㎕)에 이중으로 첨가하였다. 화합물의 최종 농도는 198M에서 19.9nM이었다. 모든 화합물 용해도를 확인하고 다시 기록한 후 플레이트를 CO2 조직 배양기에 즉시 옮기고 3일간 배양했다. DMSO 최종 농도는 0.5%이다.
초기 스크리닝의 결과는 표 2에 제시되어있다. A는 0.1 내지 5 μM의 상대 IC50을 나타내고, B는 5 μM 초과 및 15 μM 이하의 상대 IC50을 나타내고, C는 15 μM 초과 및 100 μM 이하의 상대 IC50을 나타내고; D는 100 μM 초과의 상대 IC50을 나타낸다.
세포주＼화합물 코르디세핀 A B C D G H I E J F
MOLT-4a IC50 f C A A A A C C C B A A
M.I.%g 52 98 100 93 100 75 100 100 97 100 100
KG-1b IC50 C B B D B C C C C C C
M.I.% 78 92 100 65 100 63 69 93 69 29 98
HL-60c IC50 C B B C B C C C C C C
M.I.% 88 97 100 82 100 57 80 99 74 98 100
CCRF-CEMd IC50 C A A B B C C C C C S
M.I.% 12 100 100 94 100 65 100 99 90 100 99
K562e IC50 C A A B B C C C D C C
M.I.% 88 92 97 92 99 78 89 87 81 97 91
MCF-7h IC50 C A A B A B A B C C B
M.I.% 78 94 99 87 100 97 94 99 78 97 99
HepG2i IC50 C B B C B C B C C C C
M.I.% 66 76 95 59 99 67 55 90 59 55 84
(상기 표 2에 있어서,aMOLT-4:급성 림프 구성 백혈병; bKG-1:급성 골수성 백혈병; cHL-60:급성 전 골수성 백혈병; dCCRF-CEM:급성 림프 구성 백혈병; eK562:만성 골수성 백혈병. fIC50 μM:상대 IC50; gM.I.%:세포 생존률의 최대 백분율 저해. hMCF-7:유방 선암; iHepG2:간세포 암종)이어서, 본 발명의 화합물의 부분 집합(subset)를 다음의 분석을 이용하여 더 다양한 고형 종양 및 혈액학적 악성 종양에서의 세포 독성 활성에 대해 분석하였다.
고형 종양 및 혈액학적 악성 종양 분석
시험 관내 생존능 분석은 셀 테이터 글로(CellTiterGlo, CTG, Promega-G7573)분석을 사용하여 72시간 동안 선택된 세포주에서 세포 생존능에 대한 화합물의 효과를 평가하기 위해 수행되었다. 시험은 9 점에서 화합물 처리로 72시간 동안 96 웰 플레이트에서 3.16 배 적정으로 수행되었다. 화합물 출발 농도는 198 mM이었다. 96-웰 플레이트에서 CellTiterGlo를 사용하여 세포 생존능 분석을 수행하였다. 화합물 처리 72시간, 표준 성장 조건, 복제본. 화합물을 해동된 100%로 40mM로 용해시켰다. 화합물을 해동된 DMSO에서 3.16 배로 연속 희석하고, 37℃로 가온 한 후 배지(2μl + 200μl)에 용해시켰다. 화합물이 배지에 용해된 후, 배양기에서 화합물을 함유하는 배지를 37℃로 가온 한 후 배지 중 화합물을 세포 평판(50μl + 50μl)에 이중으로 첨가하였다. 화합물의 최종 농도는 198M에서 19.9nM이었다. 모든 화합물 용해도를 확인하고 다시 기록한 후 플레이트를 CO2 조직 배양기에 즉시 옮기고 3일간 배양했다. DMSO 최종 농도는 0.5%이다.
하기 세포주를 시험하고하기 표 4에서 언급하였다 :
세포주 종양(Malignancy) 세포주 종양(Malignancy)
MOLT-4 급성 림프구성 백혈병 HEL92.1.7 에리쓰로백혈병(Erythroleukaemia)
CCRFCEM 급성 림프구성 백혈병 HL-60 전 골수성 백혈병
RL 비-호지킨 림프종 MV4-11 이형성 B형 골수 괴사성 백혈병
HS445 호지킨 림프종 HepG2 간세포 암
RPMI8226 인간 다발성 골수종 HT29 결장 선암종
K562 만성 골수성 백혈병 BxPC-3 췌장암
KG-1 급성 골수성 백혈병 MCF-7 유방 선암종
THP-1 급성 단구 백혈병 MiaPaCa2 유방 선암종
Z-138 맨틀 세포 림프종 SW620 결장 선암종
NCI-H929 형질세포종 Jurkat 급성 T 세포 백혈병
추가 스크리닝의 결과는 표 4 내지 표 7에 나타내었다. 표 IV 내지 VI에서, A는 0.1 μM 내지 5 μM의 절대 IC50을 나타내고, B는 5 μM 초과 및 15 μM 이하의 절대 IC50을 나타내고, C는 15 μM 초과 및 100 μM 이하의 절대 IC50을 나타내고; D는 100 μM 이상의 절대 IC50을 나타낸다. 표 7의 경우, A는 0.1 μM 내지 5 μM의 절대 EC50을 나타내고, B는 5 μM 초과 및 15 μM 이하의 절대 EC50을 나타내고, C는 15 μM 초과 및 100 μM 이하의 절대 EC50을 나타내고; D는 100 μM 이상의 절대 EC50을 나타낸다.

Figure pat00033

Figure pat00034

Figure pat00035

Figure pat00036

2-Cl-코르디세핀 화합물. S
EC50 MI% EC50 MI%
BxPC-3-Luc D -1.3 C 82.6
CCRF-CEM C 98.1 B 100
HEL.92.1.7 B 94.3 B 100.4
HepG2 D 31.1 C 84.6
HL-60 C 84.4 B 101.9
HS445 D -1.9 C 105.9
HT29 D 4.4 C 88.1
K562 D 37.6 C 101.4
KG-1 D 4.3 C 99
MCF-7 D -0.9 C 100.9
Mia-Pa-Ca-2 D 17.7 C 98.2
MOLT-4 D 80.4 B 100.1
MV4-11 C 100.2 B 100.9
NCI-H929 B 93.6 B 102.3
RL C 84.1 B 100.2
RPMI-8226 D 29 C 99.6
SW620 D 36.3 C 92.1
THP-1 D 24.1 C 97
Z-138 C 99.5 C 90.2
시험된 모든 화합물은 시험된 세포주에 대해 세포 독성 활성을 나타내었다. 대부분의 경우, 본 발명의 화합물은 모든 세포주에 대한 모핵 뉴클리오사이드보다 더 강력한 효과를 보였다. 실시예 3-세포 독성 및 암 줄기세포 활성의 평가 확장된 용량 범위에서 급성 골수성 백혈병(AML)세포주 KG1a에서 화합물의 독성을 비교 분석한 결과, KG1a 세포 내의 백혈병 줄기세포(Lukaemic stem cell, LSC)구획에 대한 화합물의 상대적 효과를 전체 용량 범위에 걸쳐 평가하였다.
재료 및 방법
KG1a 세포 배양 조건
KG1a 세포주를 100 units/ml 페니실린, 100μg/ml 스트렙토 마이신 및 20% 태아 송아지 혈청을 보충 한 RPMI 배지(Invitrogen, Paisley, UK)에서 유지시켰다. 이어서 세포를 96-웰 플레이트에 분주하고(105 세포/100㎕), 뉴클리오사이드 유사체 및 각각의 proTides의 존재하에 가습된 5% 이산화탄소 대기 하에서 37℃에서 각 시리즈에 대해 실험적으로 결정된 농도로 배양하였다 화합물. 또한, 약물을 첨가하지 않은 대조군 배양을 실시하였다. 이어서, 세포를 원심 분리에 의해 수확하고, 아 넥신 V 분석을 사용하여 유동 세포계측법으로 분석하였다.
시험 관내 세포 사멸의 측정
배양된 세포를 원심 분리에 의해 수확 한 다음 칼슘이 풍부한 완충액 195㎕에 재현 탁시켰다. 이어서, 5 ㎕의 Annexin V(Caltag Medsystems, 영국, Botolph Claydon)를 세포 현탁액에 첨가하고 세포를 세척 전에 10 분 동안 암실에서 배양하였다. 세포를 마침내 propidium iodide 10 ㎕와 함께 칼슘이 풍부한 완충액 190 ㎖에 재현 탁했다. Apoptosis는 이전에 설명한대로 이중 색상 면역 형광(immunofluorescent) 유동 세포계측법에 의해 평가되었다. 이후 LD50 값(배양 물에서 세포의 50%를 죽이기 위해 필요한 용량)을 각 뉴클리오사이드 유사체 및 ProTide(단순 단백질)에 대해 계산하였다.
백혈병 줄기세포 구획의 면역 표현형 동정
KG1a 세포는 분석된 각 화합물의 광범위한 농도의 존재 하에서 72시간 동안 배양되었다. 그 후 세포를 수확하고 항 혈청 항체(PE-cy7), 항-CD34(FITC), 항-CD38(PE) 및 항-CD123(PERCP cy5)의 칵테일로 표지하였다. 이어서, LSC 표현형을 나타내는 하위 집단을 확인하여 배양 물에 남아있는 모든 생존 가능한 세포의 백분율로 나타내었다. 남아있는 줄기세포의 백분율을 복용량-반응 그래프에 그려 넣었고 그 화합물의 효과는 서로, 그리고 모체 뉴클리오사이드와 비교되었다.
통계 분석
이 실험에서 얻어진 데이터는일원 분산 분석(one way ANOVA)을 사용하여 평가되었다. 모든 데이터는 옴니버스 K2 테스트를 사용하여 가우스 또는 가우스 근사치로 확인되었다. LD50 값은 S 자형 용량-반응 곡선의 비선형 회귀 및 최적 적합성 분석으로부터계산되었다. 모든 통계 분석은 Graphpad Prism 6.0 소프트웨어(Graphpad Software Inc., San Diego, CA)를 사용하여 수행하였다.
결과
시험 관내 약물 감수성은 Annexin V/propidium iodide 분석을 사용하여 측정하였다. 화합물 A는 코르 디세핀(P <0.0001)과 비교했을 때 시험관 내 효능이 증가 함을 보였다. 2-F-코르디세핀은 코르디세핀보다 유의하게 강력하였으며(P <0.0001), 시험된 모든 ProTides는 부모 뉴클리오사이드와 비교했을 때 증가된 효능을 보였다(도 1).
이러한 실험은 화합물 A가 1mM 이상의 농도에서 줄기세포 구획에서 증가된 효능의 증거를 나타냄을 확인했다. 도 2에서 알 수 있듯이, 화합물 A는 총 암 줄기세포 수를 줄이는 능력뿐만 아니라 배양 물에 존재하는 암세포 총의 비율과 같은 세포 수를 감소시키는 능력을 입증했다. 이것은 암 줄기세포를 우선적으로 표적으로하는 화합물 A의 능력을 나타냅니다. 시험된 고농도(1mM 이상)에서, 화합물 A의 LSC를 우선적으로 표적하는 능력은 모 화합물의 것보다 유의하게 더 컸다.
2-F-코르디세핀 proTides 화합물 P, Q 및 R은 또한 LSC의 우대 타겟팅을 나타내 었으며, 이는 부모 뉴클리오사이드와 비교했을 때 상당히개선되었다. 대조적으로, 화합물 O는 처리된 세포 집단에 존재하는 LSC의 비율을 감소시킬 수 있었지만(LSC를 표적화할 수 있는 능력을 나타냄), 그 활성은 시험된 임의의 농도에서 2-F-코르디세핀과 유의 한 차이가 없었다 . 도 3은 2-F-코르디세핀과 테스트 한 모든 proTides의 비교를 보여 주며개별 비교는 도 4의 패널에 표시된다.
실시예 4-추가의 세포 독성 평가 및 억제 연구
본 발명의 특정 화합물은 본 발명의 특정 화합물의 세포 독성 활성을 시험하고 또한 4 가지의 혈액학적 암 세포주에 대한 이들의 활성을 측정하기 위한 추가 연구에 사용되었다
● TdT 양성 CEM(Human ALL)
● TdT 음성 K562(인간 CML)
● TdT 음성 Hl-60(인간 ANLL)
● RL(CRL-2261)비 HD 림프종
이들 세포주에서 활성 대사 산물 dATP(코르디세핀 triphosphate)의 농도도 측정되었다.
CEM 및 RL 암 세포주에서 hENT1, 아데노신 키나아제(AK) 및 아데노신 디아 미나제 약리학적 억제제의 존재하에 세포 독성 활성 및 세포 내 3'-dATP 농도를 또한 조사하였다. 상기 억제제는 공지된 암 저항 기전을 모방한다.
방법
세포 배양
HL-60(ATCC® CCL-240 ™), K562(ATCC® CCL-243 ™), CCRF-CEM(ATCC® CRM-CCL-119 ™) 및 RL(ATCC® CRL-2261 ™)백혈병 세포주 미들 섹스(American Type Culture Collection, ATCC)HL-60 및 K562 세포주는 deoxynucleotidyl transferase-negative(TdT-ve)인 반면 CCRF-CEM 세포주는 TdT + ve이다.
HL-60 세포주는 급성 전 골수성 백혈병이다. K562는 CML 세포주이고, CCRF-CEM 세포주는 급성 림프 구성 백혈병(ALL)이다. RL은 비호 지킨 림프종 세포주이다.
세포주의 유지 보수
10% 태아 소 혈청(FBS)(PAA Laboratories), 1% Amphotericin B(5.5(1))를 보충 한 RPMI-1640 배양액(Sigma Aldrich, UK)에서 HL-60, K562, CCRF-CEM 및 RL 세포주를 배양하였다. ml)와 1% 페니실린/스트렙토 마이신(5.5 ml)(PAA Laboratories)을 넣고 5% CO2의 37℃ 배양기에서 플라스크에서 성장시켰다.
아데노신 5'-삼인산(ATP)분석
ATP의 양은 세포 수 및 세포 생존력의 측정으로 사용되었다. ATP ViaLightTM plus assay kit(Lonza, USA:제품 번호 LT07-121)를 사용하여 코르디세핀과 ProTides를 0, 1, 0.1, 0.5, 1, 5 및 10 μM을 첨가 한 후 37℃의 5% CO2 배양기에서 72시간 동안 배양하였다. 억제제 연구를 위해 10 μM의 NBTI 또는 1 μM EHNA 또는 A-134974를 첨가하고 약물을 첨가하기 전에 5 분 동안 방치했다(억제제 세부 사항에 대해서는 5 절 참조).
배양 후, 50μl의 세포 용해 시약을 96 웰 플레이트에 첨가하여 세포 내 ATP를 방출시킨 후, 100 μl의 ATP 모니터링 시약(AMR)을 가했다. 각 웰의 발광 값은 ATP를 루시퍼 라제 효소를 사용하여 빛으로 변환시키는 FLUOstar OPTIMA 마이크로 플레이트 판독기(BMG Labtech)를 사용하여 결정하였다. 따라서, 발광량은 ATP의 양에 직접 비례한다.
세포 치료 및 샘플 추출을 통한 세포 내 삼 인산 분석
5 × 106 세포/ml의 세포주를 사용하였다. 세포를 코르디세핀과 화합물 A, B, D, E 및 F 각각의 50μM 1 μl로 처리하고 5% CO2로 37℃에서 2시간 동안 배양하였다. 인큐베이션 후, 세포를 원심 분리(주위 1200rpm, 5 분)하고, 배양 상등액을 제거하고, 세포 펠렛을 1ml의 PBS로 세척하고 원심 분리하였다(1200rpm, 5 분). 상등액을 제거하였다. 펠렛을 100㎕의 PBS 및 100㎕의 0.8M 과염소산에서 재구성하고 와동 혼합하고 30 분 동안 얼음 위에 유지시켰다. 그런 다음 원심 분리(상온, 1200 rpm, 5 분)하고 180 μl의 상등액을 새로운 튜브로 옮기고 분석할 때까지-80℃에서 보관했다.
분석하는 동안 추출물 90μl를 신선한 튜브로 옮겼다. 1M ammonium acetate 25μl를 추출물에 첨가 한 다음 10% 암모니아 10μl와 탈 이온수 5μl를 첨가하여 중화시킨 다음 LC-MS 바이 얼에 옮기고 10μl를 UPLC-MS/MS 시스템에 주입했다.
억제제 연구
세포주를 상기 한 바와 동일한 방법으로 처리하였으나 약물로 처리하기 전에 다수의 저해제가 첨가되었다 :
1)니트로 벤질 티오 노신(NBTI)(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, 제품 번호 N2255)은 뉴클리오사이드 트랜스 포터
2)EHNA 하이드로클로라이드(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, 제품 번호 E114)는 아데노신 데 아미나 제
3)아데노신 키나제 억제제 A-134974 디히드로클로라이드 수화물(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, 제품 번호 A2846):아데노신 키나아제 차단
세포를 10 μM의 NBTI 또는 1 μM EHNA 또는 A-134974로 처리하고 약물을 첨가하기 전에 5 분간 방치하였다. 그런 다음 세포를 2시간 동안 5% CO2로 37℃에서 배양했다.
LC-MS/MS 분석
Biobasic Ax5μm, 50x2.lmm 컬럼 (Thermo Electron Corporation, Murrieta, CA, USA)이 장착되고, ACNIH20 (30 : 70v / v), pH6.0 (A) 및 ACN / H20 (30 : 70v / v), pH10.5 (B) 중의 1mM NH4Ac의 혼합물로 이루어진 이동상을 사용한 초 고성능 액체 크로마토 그래피 시스템 (Accela UPLC, Thermo Scientific, UK)을 사용하여 분석물을 분석하고, 이동상 구배는 0 내지 0.5 분에 완충액 A = 95 %, 1.25 분에 걸쳐 95 내지 0 %, 1.75 분 동안 0 %로 유지, 0.1 분에 걸쳐 0 내지 95 % 유지, 95% 2.9 분으로 하였고, 모두 유속 500μl/분을 사용하였다.
전자분사 이온원이 장착된 삼중 단 4 중 4 극 유리 질량 분석 시스템(Thermo Scientific, UK)을 사용하여 용리되는 대상 화합물을 검출하였다. 시료는 3000V의 분무 전압에서 다중 반응 모니터링, 음이온 모드로 분석되었다. 질소는 시스 및 보조 기체로서 각각 50 및 20 임의의 단위의 유속으로 사용되었다. 아르곤은 압력 1.5 mTorr의 충돌 가스로 사용되었다. 분석자의 최적 전이 딸이온 질량과 충돌 에너지는 3'ATP 490.1 → 392.1(충돌 에너지 19V)와 내부 표준 ChloroATP 539.9 → 442.2(충돌 에너지 24V)였다.
통계 분석
약물의 세포 독성에 대한 용량-반응 곡선은 세포 생존률 대 농도의 비선형 회귀 분석을 사용하여 결정되었고 EC50 값을 얻었다. 세포 내 분석은 각 조건에 대해 5 반복으로 수행되었다. 세포 내 분석은 3`ATP/ATP 농도의 paired t test(two-tailed)분석을 사용하여 결정하였고 p 값을 얻었다. 모든 분석을 위해 Prism Software 프로그램(GraphPad Software)이 사용되었으며 Microsoft Powerpoint® 2013을 사용하여 결과를 나타냈다.
결과
요약 IC 50 표(μM)

코르디세핀 		A
(FD)
B
(FD) 		D
(FD) 		E
(FD) 		F
(FD)

CEM(TdT +ve ) 		19.5 0.87
(22)		 0.13
(150)		 6.1
(3)		 10.0
(2)		 4.3
(5)

K562 		10.9 2.4
(5)		 0.21
(52)		 4.2
(3)		 13.9
(1)		 6.3
(2)

HL-60 		11.4 4.6
(3)		 2.6
(4)		 5.4
(2)		 10.2
(1)		 8.3
(1)

CRL 		24.5 2.1
(12)		 0.4
(61)		 4.8
(5)		 11.0
(2)		 3.4
(7)
(FD)= 코르디세핀(Cordycepin)과 비교한 배수 차이 = 코르디세핀(Cordycepin)IC50/ProTide IC50
요약 평균 세포 내 3'- dATP 수준( μg /ml)

코르디세핀 		A
(FD)
B
(FD) 		D
(FD) 		E
(FD) 		F
(FD)

CEM 		0.2 3.7
(19)		 11.5
(58)		 2.9
(15)		 0.2
(1)		 1.1
(6)

K562 		1.7 2.6
(13)		 6.2
(4)		 0.9
(0.5)		 0.2
(0.1)		 1.3
(0.8)

HL-60 		1.7 3.2
(16)		 5.1
(3)		 0.7
(0.4)		 0.2
(0.1)		 1.2
(0.7)

CRL 		0.8 6.6
(33)		 10.8
(14)		 1.7
(2)		 1
(1)		 3.4
(4)
(FD)= 코르디세핀(Cordycepin)과 비교한 배수 차이 = Protide 세포 내 TP/코르디세핀 세포 내 TP화합물 A 및 B는 코르디세핀보다 3 내지 150배 우수한 IC50을 갖는 가장 우수한 수행자였다. 화합물 A 및 B는 코르디세핀보다 3 내지 56배 우수한 세포 내 3'-dATP 농도를 생성하였다.
요약 IC 50 표(모두 μM )
CEM
(FD) 		CRL
(FD)

코르디세핀 		Control 11.5 7.3
NBTI 57.7(5) 17.9(2)
EHNA 0.7(-16) 13.2(2)
AK 29.2(3) 28.6(4)

A 		Control 1.4 3.6
NBTI 2.0(1) 2.6(1)
EHNA 3.1(2.2) 2.9(1)
AK 3.6(3) 10.2(3)

B 		Control 0.9 3.1
NBTI 1.4(1) 2.6(1)
EHNA 1.3(1) 5.2(2)
AK 1.3(1) 2.8(1)

E 		Control 9.9 8.2
NBTI 17.1(2) 8.2(1)
EHNA 13.4(1) 5.9(1)
AK 10.3(1) 7.1(1)
(FD)= 대조군과 비교한 배수 차이
요약 평균 세포 내 3'- dATP 수준( μg /ml)
CEM
(FD) 		CRL
(FD)

코르디세핀 		Control 0.24 0.10
NBTI 0.14(1) 0.06(1)
EHNA 9.01(38) 1.85(19)
AK 0.31(1) 0.16(1)

A 		Control 1.30 0.31
NBTI 0.99(1) 0.32(1)
EHNA 1.35(1) 0.27(1)
AK 1.20(1) 0.30(1)

B 		Control 4.07 0.59
NBTI 3.14(1) 0.68(1)
EHNA 3.62(1) 0.67(1)
AK 2.99(1) 0.77(1)

E 		Control 0.32 0.08
NBTI 0.17(1) 0.12(1)
EHNA 0.21(1) 0.07(1)
AK 0.19(1) 0.06(1)
(FD)= 대조군과 비교한 배수 차이NBTI, AK 및 EHNA는 시험된 본 발명의 3가지 화합물에 의해 생성된 세포 내 3'-dATP에 영향을 미치지 않았지만, 이들 억제제가 본 연구에서 사용된 혈액암 세포주에서 본 발명의 화합물이 활성 물질 3'-dATP를 생성시키는 대사를 간섭하지 않는다는 것을 나타낸다. 상기 억제제가 공지된 암 저항 기전을 모방하므로, 이들 결과는 본 발명의 화합물이 코르디세핀(Cordycepin)에 대한 암 내성 기전에 덜 민감 함을 나타낸다.

Claims (31)

  1. 하기 화학식(Ib)의 화합물, 이의 약학적으로 허용되는 염, 에스테르, 에스테르의 염, 용매화물 또는 전구 약물:
    [화학식(Ib)]
    Figure pat00037

    상기 화학식(Ib)에서,
    W1 및 W2는 각각 독립적으로-P(=O)(U)(V) 및 H로 이루어진 군으로부터 선택되며, 단 W1 및 W2 중 적어도 하나는-P(=O)(U)(V)이고,
    U 및 V는 각각 W1 및 W2에 대해 독립적으로, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
    (a)U는-OAr이고, V는-NR4-CR1R2-C(=O)OR3이고,
    여기서, Ar은 C6- 30아릴 및 5-30원 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되며, 이들 각각은 임의로 치환되고;
    R1 및 R2는 각각 독립적으로 H, 및 C1- 20알킬, C6- 30아릴C1 - 6알킬, C2- 20알케닐, C1-20알콕시, C1- 20알콕시C1 - 20알킬, C1- 20알콕시C6 - 30아릴, C2- 20알키닐, C3- 20사이클로알킬C6 -30아릴, C6- 30아릴옥시 및 5-20원 헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이는 선택적으로 치환될 수 있고;
    R3은 H, 및 C1- 20알킬, C6- 30아릴C1 - 6알킬, C2- 20알케닐, C1- 20알콕시C1 - 20알킬, C1- 20알콕시C6 -30아릴, C2- 20알키닐, C3- 20사이클로알킬C6 - 30아릴, 및 5-20원 헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이는 선택적으로 치환될 수 있고;
    R4는 H, 및 C1- 20알킬, C6- 30아릴C1 - 6알킬, C2- 20알케닐, C1- 20알콕시, C1- 20알콕시C1 -20알킬, C1- 20알콕시C6 - 30아릴, C2- 20알키닐, C3- 20사이클로알킬C6 - 30아릴, C6- 30아릴옥시 및 5-20원 헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이는 선택적으로 치환될 수 있고;
    및
    (b)U 및 V 각각 독립적으로-NR5R6로부터 선택되고,
    여기서, R5는 H 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, R6은-CR7R8CO2R9이고, 여기서 R7 및 R8은 자연 발생 알파 아미노산의, H를 포함하는 측쇄로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, R9는 H 및 C1- 20알킬, C6- 30아릴C1 - 6알킬, C2-20알케닐, C1- 20알콕시C1 - 20알킬, C1- 20알콕시C6 - 30아릴, C2- 20알키닐, C3- 20사이클로알킬C6 -30아릴 및 5-20원 헤테로사이클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 이는 선택적으로 치환될 수 있고; 또는
    R5 및 R6은 이들이 부착된 N 원자와 함께 5 내지 8 고리 원자를 포함하는 고리 부분을 형성하고;
    Q는 O, S 및 CR10R11로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 R10 및 R11은 H, F 및 C1-6 알킬로부터 독립적으로 선택되고;
    X 및 Z는 각각 독립적으로 H, OH, F, Cl, Br, I, C1- 6알킬,-NR12R13(여기서, R12 및 R13은 각각 독립적으로 H 및 C1- 6알킬로부터 선택됨), 및-SR14(여기서, R14는 H 및 C1- 6알킬로 이루어진 군으로부터 선택됨)로 이루어진 군으로부터 선택되고; 및
    Y는 H, OH, F, Cl, Br, I,-OC1- 6알킬, C1- 6알킬, C2- 8알키닐,-NR15R16(여기서 R15 및 R16은 각각 독립적으로 H 및 C1- 6알킬로부터 선택됨), 및-SR17(여기서, R17은 H 및 C1-6알킬로 이루어진 군으로부터 선택됨)로 이루어진 군으로부터 선택되며,
    다만, 상기 화합물은 하기 화학식의 화합물은 아니다:
    Figure pat00038
    .
  2. 제1항에 있어서,
    화학식(Ib)의 화합물은 하기 화학식(II)의 화합물인, 화합물, 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르, 에스테르의 염, 용매화물 또는 전구 약물:
    [화학식(II)]
    Figure pat00039

    상기 화학식(II)에서,
    X는 -NR12R13이고,
    Y, Z, Ar, R2, R3, R12 및 R13 은 각각 제1항에서 정의된 바와 같다.
  3. 제1항에 있어서, 상기 화학식 (Ib)의 화합물은 하기 화학식 (III)의 화합물인, 화합물, 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르, 에스테르의 염, 용매화물 또는 전구 약물:
    Figure pat00040
    (III)
    화학식 (III)에 있어서,
    Y는 H, F, Cl 및 OMe로부터 선택되고,
    Ar, R2 및 R3 는 각각 제1항에서 정의된 바와 같다.
  4. 제1항에 있어서,
    Ar은 페닐 및 나프틸로부터 선택되는, 화합물, 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르, 에스테르의 염, 용매화물 또는 전구 약물.
  5. 제4항에 있어서,
    Ar은 비치환된, 화합물, 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르, 에스테르의 염, 용매화물 또는 전구 약물.
  6. 제4항에 있어서,
    Ar은 할로, C1-C4-알킬, C1-C4-알콕시, 니트로 및 시아노로부터 선택되는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 치환체로 치환된, 화합물, 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르, 에스테르의 염, 용매화물 또는 전구 약물.
  7. 제1항에 있어서,
    R2는 C1-C4-알킬인, 화합물, 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르, 에스테르의 염, 용매화물 또는 전구 약물.
  8. 제7항에 있어서,
    R2는 메틸인, 화합물, 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르, 에스테르의 염, 용매화물 또는 전구 약물.
  9. 제8항에 있어서,
    R1 및 R2를 갖는 C 원자는 L-알라닌과 동일한 절대 배치(absolute configuration)를 갖는, 화합물, 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르, 에스테르의 염, 용매화물 또는 전구 약물.
  10. 제1항에 있어서,
    R3는 벤질 및 비치환된 C1- 20알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는, 화합물, 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르, 에스테르의 염, 용매화물 또는 전구 약물.
  11. 제10항에 있어서,
    R3는 벤질, 비치환된 메틸 및 비치환된 n-페닐로 이루어진 군으로부터 선택되는, 화합물, 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르, 에스테르의 염, 용매화물 또는 전구 약물.
  12. 제11항에 있어서,
    R3는 벤질인, 화합물, 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르, 에스테르의 염, 용매화물 또는 전구 약물.
  13. 제1항에 있어서,
    X는 NH2인, 화합물, 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르, 에스테르의 염, 용매화물 또는 전구 약물.
  14. 제1항에 있어서,
    Z는 H인, 화합물, 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르, 에스테르의 염, 용매화물 또는 전구 약물.
  15. 제1항에 있어서,
    X는 NH2, Y는 H, 및 Z는 H인, 화합물, 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르, 에스테르의 염, 용매화물 또는 전구 약물.
  16. 제1항에 있어서,
    X는 NH2, Y는 F, 및 Z는 H인, 화합물, 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르, 에스테르의 염, 용매화물 또는 전구 약물.
  17. 제1항에 있어서,
    X는 NH2, Y는 Cl, 및 Z는 H인, 화합물, 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르, 에스테르의 염, 용매화물 또는 전구 약물.
  18. 제1항에 있어서,
    X는 NH2, Y는 -OCH3, 및 Z는 H인, 화합물, 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르, 에스테르의 염, 용매화물 또는 전구 약물.
  19. 제1항에 있어서,
    상기 화학식(1b)의 화합물은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 화합물, 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르, 에스테르의 염, 용매화물 또는 전구 약물:
    (2S)-벤질 2-(((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라히드로퓨란-2-일)메톡시)(나프탈렌-1-일옥시)포스포릴)아미노)프로파노에이트;
    벤질 2-(((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라히드로퓨란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)아세테이트;
    (2S)-펜틸 2-(((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라하이드로퓨란-2-일)메톡시)(나프탈렌-1-일옥시)포스포릴)아미노)-4-메틸펜타노에이트;
    메틸 2-(((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라히드로퓨란-2-일)메톡시)(나프탈렌-1-일옥시)포스포릴)아미노)-2-메틸프로파노에이트;
    (2S)-벤질 2-(((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라하이드로퓨란-2-일)메톡시)(2-(3-에톡시-3-옥소프로필)페녹시)포스포릴)아미노)프로하노에이트;
    (2S)-벤질 2-(((((2R, 3R, 5S)-2-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-5-(하이드록시메틸)테트라히드로퓨란-3-일)옥시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트;
    벤질 2-(((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-4-((((1-(벤질옥시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)테트라히드로퓨란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트;
    (2S)-벤질 2-(((((2R, 3R, 5S)-2-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-5-(하이드록시메틸)테트라히드로퓨란-3-일)옥시)(나프탈렌-1-일옥시)포스포릴)아미노)프로파노에이트;
    벤질 2-[({[5-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시옥소란-2-일]메톡시}({[1-(벤질옥시)-1-옥소프로판-2-일]아미노})포스포릴)아미노]프로파노에이트;
    (2S)-벤질 2-((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-2-메톡시-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라하이드로퓨란-2-일)메톡시)(나프탈렌-l-일옥시)포스포릴아미노)프로파노 에이트;
    (2S)-벤질 2-((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-2-메톡시-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라히드로퓨란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴아미노)프로파노에이트;
    (2S)-벤질 2-(((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-2-플루오로-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라하이드로퓨란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트;
    (2S)-헥실 2-(((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-2-플루오로-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라하이드로퓨란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트;
    (2R)-벤질 2-((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-2-클로로-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라하이드로퓨란-2-일)메톡시)(나프탈렌-1-일옥시)포스포릴아미노)프로파노에이트;
    2-0-메틸-3'-디옥시아데노신-5'-O-[1-나프틸(1-펜틸옥시-L-루신일)]포스페이트;
    2-0-메틸-3'-디옥시아데노신-5'-O-[페닐(1-헥실옥시-L-알라닌일)]포스페이트;
    2-플루오로-3'-디옥시아데노신-5'-O-[1-나프틸(벤질옥시-L-알라닌일)]포스페이트;
    2-플루오로-3'-디옥시아데노신-5'-O-[1-나프틸(1-펜틸옥시-L-루신일)]포스페이트;
    2-클로로-3'디옥시아데노신 5'-O-[1-페닐(2,2-디메틸프로폭시-L-알라닌)]포스페이트;
    2-클로로-3'디옥시아데노신 5'-O-[1-나프틸(2,2-디메틸프로폭시-L-알라닌)]포스페이트;
    2-클로로-3'디옥시아데노신 5'-O-[1-페닐(에톡시-L-알라닌)]포스페이트; 및
    (2S)-이소프로필-2-(((((2S, 4R, 5R)-5-(6-아미노-9H-퓨린-9-일)-4-하이드록시테트라하이드로퓨란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트.
  20. 제1항에 있어서, 상기 화학식 (Ib)의 화합물은 (Sp)-3'-디옥시아데노신-5'-O-[페닐(벤질옥시-L-알라닌일)]포스페이트인, 화합물, 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르, 에스테르의 염, 용매화물 또는 전구 약물.
  21. 제1항에 있어서, 상기 화학식 (Ib)의 화합물은 (Rp)-3'-디옥시아데노신-5'-O-[페닐(벤질옥시-L-알라닌일)]포스페이트인, 화합물, 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르, 에스테르의 염, 용매화물 또는 전구 약물.
  22. 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제와 함께 조합하여 1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르, 에스테르의 염, 용매화물 또는 전구 약물을 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물, .
  23. 제22항에 있어서, 암의 치료에 있어서 암 줄기세포를 표적으로 하여 사용하기 위한, 약학적 조성물.
  24. 제23항에 있어서,
    상기 암은 백혈병, 림프종, 유방암, 폐암, 직장암, 전립선암, 난소암, 피부암, 방광암, 담도암 및 췌장암으로부터 선택되는, 약학적 조성물.
  25. 제23항에 있어서,
    상기 암은 유방암, 중추신경계 암, 직장암, 유잉 육종(Ewing's sarcoma), 흑색종, 간암, 담관암, 담도암, 난소암, 자궁 내막암, 췌장암, 비소세포폐암, 소세포폐암, 방광암, 급성 골수성 백혈병, B-급성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종 및 T-급성 림프구성 백혈병으로부터 선택되는, 약학적 조성물.
  26. 제22항에 있어서,
    상기 암은 백혈병, 림프종, 다발성 골수종, 폐암, 간암, 유방암, 방광암, 전립선암, 두경부암, 신경 모세포종, 육종, 갑상선암, 피부암, 구강 편평 세포 암종, 비뇨기 방광암, 라이디그(Leydig)세포 종양, 담관계 암, 췌장암, 대장암, 결장암, 및 부인과암으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 약학적 조성물.
  27. 제26항에 있어서, 상기 암은 백혈병 또는 골수종인, 약학적 조성물.
  28. 제27항에 있어서, 상기 백혈병은, 급성 림프구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 급성 전골수성 백혈병, 급성 림프성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 림프성 백혈병, 단핵모구성 백혈병, 털세포 백혈병(hairy cell leukaemia), 호지킨 림프종, 및 비-호지킨 림프종을 포함하는 군으로부터 선택되는, 약학적 조성물.
  29. 제28항에 있어서, 상기 백혈병은 급성 림프구성 백혈병인, 약학적 조성물.
  30. 제22항에 있어서, 상기 암은 재발성 또는 난치성 암인, 약학적 조성물.
  31. 제22항에 있어서, 상기 암은 전이성 암인, 약학적 조성물.
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