KR20230057311A - 바이러스 표면 엔지니어링 기반의 면역 증강된 바이러스 백신 - Google Patents

바이러스 표면 엔지니어링 기반의 면역 증강된 바이러스 백신 Download PDF

Info

Publication number
KR20230057311A
KR20230057311A KR1020230048990A KR20230048990A KR20230057311A KR 20230057311 A KR20230057311 A KR 20230057311A KR 1020230048990 A KR1020230048990 A KR 1020230048990A KR 20230048990 A KR20230048990 A KR 20230048990A KR 20230057311 A KR20230057311 A KR 20230057311A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
val
ser
leu
thr
virus
Prior art date
Application number
KR1020230048990A
Other languages
English (en)
Inventor
신현진
유지훈
박정은
Original Assignee
(주)셀엔백스
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from KR1020210143999A external-priority patent/KR102523582B1/ko
Application filed by (주)셀엔백스 filed Critical (주)셀엔백스
Publication of KR20230057311A publication Critical patent/KR20230057311A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/215—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5258—Virus-like particles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552—Veterinary vaccine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55516—Proteins; Peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55522—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K2039/55527—Interleukins
    • A61K2039/55533—IL-2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55588—Adjuvants of undefined constitution
    • A61K2039/55594—Adjuvants of undefined constitution from bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/10011—Arteriviridae
    • C12N2770/10034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/20011—Coronaviridae
    • C12N2770/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/24011—Flaviviridae
    • C12N2770/24111—Flavivirus, e.g. yellow fever virus, dengue, JEV
    • C12N2770/24134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

바이러스 표면 엔지니어링 기반의 면역 증강된 바이러스 백신에 관한 것이다. 일 양상에 따른 링커 펩티드는 바이러스에 부착될 수 있는 특성을 가져, 면역체계를 활성화시키는 면역 증강 물질을 바이러스 표면에 효과적으로 결합시킬 수 있는 링커로서 사용되어 백신의 면역원성을 향상시킬 수 있다. 상기 링커 펩티드를 바이러스 표면 엔지니어링 기술에 접목시키면 바이러스 표면에 면역 증강 물질을 부착할 수 있어, 면역 증강된 백신 플랫폼으로 유용하게 사용할 수 있다.

Description

바이러스 표면 엔지니어링 기반의 면역 증강된 바이러스 백신 {Surface engineering based adjuvanted virus vaccine}
바이러스 표면 엔지니어링 기반의 면역 증강된 바이러스 백신에 관한 것이다.
해외 여행의 증가로 열대-아열대 지역에서 만연하고 있는 풍토병 질환들의 국내 유입이 증가하고, 특히 뎅기열이나 신종 코로나 바이러스와 같은 해외유입 전염병으로 인해 전세계적으로 연간 수억명의 환자가 발생하고 있다. 사람뿐만 아니라, 동물에서도 구제역, 아프리카 돼지 열병과 같은 한국내 자생 질병 및 해외에서 유입된 전염병으로 인해 경제적 피해가 막심하여 국가 경제에 악영향을 미치고 있다. 이러한 바이러스성 질병을 예방하기 위해서는 백신 개발이 무엇보다 가장 중요하며, 이는 많은 시간과 비용이 소요되기 때문에 보다 효율적으로, 높은 효과를 갖는 백신 제조 플랫폼의 개발이 매우 중요하다.
통상적으로, 백신에는 제조방법에 따라 1세대 백신인 약독화 백신, 불활성화 백신, 2세대 백신인 아단위 백신, 톡소이드 백신, 3세대 백신인 DNA, RNA, 재조합 바이러스 백신 등 다양한 형태가 존재한다. 이들 백신의 효능은 매우 다양하며, 각 형태별 면역활성 효능이 매우 다르게 나타난다. 예를 들어, 아단위 백신, 바이러스 백신은 안전성이 우수한 반면 면역원성을 향상시키기 위해서는 면역 증강 물질 또는 어쥬번트(adjuvant)가 필요하다. 어쥬번트는 면역체계의 일시적 활성화를 유도해 항원에 대한 면역반응을 증가시키는 물질로, 많은 백신 회사들은 백신 제조 시 어쥬번트를 첨가하여 백신 효능을 증가시킨다. 그러나, 특정 어쥬번트의 경우 백신의 면역 반응을 너무 심하게 일어나게 하여 알러지 반응과 같은 부작용을 유발하는 경우가 있다. 따라서, 백신의 효능을 극대화할 수 있으면서도 어쥬번트 사용에 따른 부작용을 최소화하고, 나아가 방법론적으로 간단하여 백신 제조 공정을 단축시킬 수 있는 새로운 백신 제조 기술이 필요한 실정이다. 이를 위해서는 기존 바이러스 백신 개발이 가지고 있는 단점을 해결할 수 있는, 근본적으로 새로운 바이러스 백신 개발 플랫폼의 구축이 요구된다.
한편, 바이러스의 항원결정기(epitope)는 대개 바이러스 표면의 스파이크 단백질이나 외부로 튀어나온 돌기로 구성되어 있으며, 바이러스 표면 단백질에 항체가 결합하면 바이러스가 숙주세포의 수용체에 결합하는 것을 방해할 수 있다. 상기 바이러스 표면 단백질은 면역원성 및 중화능이 가장 높아 바이러스 감염에서 가장 중요하다. 예를 들어, 코로나 바이러스의 경우 바이러스 표면에는 바이러스 구조 단백질인 스파이크 단백질(spike protein, S), 막 단백질(membrane protein, M) 및 외피 단백질(envelope protein, E)이 돌출되어 있다.
이러한 배경 하에, 본 발명자들은 다른 단백질과 친화성이 높으며 바이러스 표면에 부착될 수 있는 신규 링커 펩티드를 제조하고, 상기 링커 펩티드와 함께 바이러스 표면 엔지니어링 기술을 이용하여 면역 증강 물질을 바이러스 표면에 도입하는 새로운 백신 제조 플랫폼을 구축하였으며, 상기 백신 플랫폼을 이용하여 제조된 백신 조성물의 우수한 항원성을 검증하여 본 발명을 완성하였다.
일 양상은 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어지는 링커 펩티드를 제공한다.
다른 양상은 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어지는 링커 펩티드; 및 상기 링커 펩티드의 C-말단에 연결된 면역 증강 물질을 포함하는 융합 단백질을 제공한다.
다른 양상은 감염성 바이러스 유래 항원; 및 상기 융합 단백질을 유효성분으로 포함하는 백신 조성물을 제공한다.
다른 양상은 상기 백신 조성물을 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계를 포함하는 감염성 질환을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다.
일 양상은 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어지는 링커 펩티드를 제공하는 것이다.
본 명세서에서 용어, "펩티드"는 펩티드 결합에 의해 아미노산 잔기들이 서로 결합되어 형성된 선형의 분자를 의미할 수 있다. 상기 펩티드는 당업계에 공지된 화학적 합성 방법, 특히 고상 합성 기술 또는 액상 합성 기술 (US 등록특허 제5,516,891호)에 따라 제조될 수 있다. 본 발명자들은 생물학적으로 유효한 활성을 갖는 펩티드를 개발하고자 예의 노력한 결과, 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어지는 펩티드를 규명하였다. 여기서, 생물학적으로 유효한 활성은 바이러스 고유의 항원성은 유지한 상태로, 바이러스의 표면 또는 적어도 어느 하나의 영역에 연결 또는 결합되는 것을 나타내는 것일 수 있다.
본 명세서에서, 용어 "링커(linker)" 또는 "링커 펩티드(linker peptide)"는 별개의 폴리펩티드 영역을 연결하는 펩티드로서, 바람직하게는 바이러스 표면 단백질과 면역 증강 물질을 직접 또는 간접적으로 연결할 수 있는 펩티드를 의미한다.
상기 링커 펩티드는 20 내지 30개의 아미노산 서열로 이루어진 것일 수 있으며, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 것일 수 있고, 바람직하게는 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열로 이루어지는 것일 수 있다. 또한, 상기 서열번호 1로 구성된 아미노산 서열뿐만 아니라, 상기 서열과 80% 이상, 구체적으로는 90% 이상, 보다 구체적으로는 95% 이상, 더욱 구체적으로는 98% 이상, 가장 구체적으로는 99% 이상의 상동성을 나타내는 아미노산 서열로서 실질적으로 상기 단백질과 동일하거나 상응하는 효능을 나타내는 아미노산 서열이라면 제한 없이 포함한다. 또한, 이러한 상동성을 갖는 아미노산 서열이라면, 일부 서열이 결실, 변형, 치환 또는 부가된 아미노산 서열도 본 발명의 범위 내에 포함됨은 당업자에게 자명하다.
본 명세서에서, 용어 "상동성"이란 단백질을 암호화하는 염기 서열이나 단백질을 구성하는 아미노산 서열의 유사한 정도를 의미하는데, 상동성이 충분히 높은 경우 해당 유전자의 발현 산물 및 단백질은 동일하거나 유사한 활성을 가질 수 있다. 상기 상동성은 주어진 아미노산 서열 또는 염기 서열과 일치하는 정도에 따라 백분율로 표시될 수 있고, 예를 들면, 점수(score), 동일성(identity) 및 유사도(similarity) 등의 매개 변수(parameter)들을 계산하는 표준 소프트웨어, 구체적으로 BLAST 2.0을 이용하거나, 정의된 엄격한 조건(stringent condition)하에서 썼던 혼성화 실험에 의해 서열을 비교함으로써 확인할 수 있으며, 정의되는 적절한 혼성화 조건은 해당 기술 범위 내이고, 당업자에게 잘 알려진 방법(예컨대, J. Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2nd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory press, Cold Spring Harbor,New York, 1989; F.M. Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., New York)으로 결정될 수 있다.
상기 링커 펩티드는 다른 단백질들과 친화성이 높으며, 특히, 바이러스 표면에 부착될 수 있어 바이러스 표면 단백질에 대하여 면역 증강 물질을 연결시켜 기존의 바이러스 백신보다 면역원성이 향상된 백신 조성물의 개발에 사용될 수 있다. 상기 링커 펩티드는 예를 들어, 바이러스, 바이러스 유래 서브 유닛 또는 항원, 바이러스 유사 입자에 면역 증강 물질을 연결 또는 결합시키기 위하여 사용될 수 있다. 보다 구체적으로, 상기 링커 펩티드는 바이러스 유래 항원과의 결합능을 지님과 동시에 항원 자체로부터 비롯되는 항원성은 유효하게 유지시킬 수 있는 바, 백신 조성물로서의 효용성을 향상시키는데 기여할 수 있다.
다른 양상은 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어지는 링커 펩티드; 및 상기 링커 펩티드의 C-말단에 연결된 면역 증강 물질을 포함하는 융합 단백질을 제공하는 것이다.
상기에서 설명한 내용과 동일한 부분은 상기 융합 단백질에도 공히 적용된다.
본 명세서에서 용어 "면역 증강 물질" 또는 "어쥬번트(adjuvant)"는 면역반응 형성에서 면역원을 보조할 수 있는 물질로, 항원의 생물학적 또는 면역학적 반감기 증가; 항원 제공 서열로의 항원 전달 개선; 항원 제공 세포에 의한 항원 프로세싱 및 제공의 개선; 및 면역 조절성 사이토카인의 생산 유도를 포함하는 하나 이상의 기작과 같은 여러 기작을 통해 작용할 수 있다.
상기 면역 증강 물질은 특별히 제한되지는 않으나, 수산화알루미늄, 인산알루미늄 또는 기타 다른 알루미늄 염, 인산칼슘, DNA CpG 모티프, 모노포스포릴 지질 A, 콜레라 독소, 대장균 열불활화 독소, 백일해 독소, 뮤라밀 디펩티드, 프로인트 불완전 어쥬반트, MF59, SAF, 면역자극성 복합체, 리포좀, 생체분해성 미소구, 사포닌, 비이온성 블록 공중합체, 뮤라밀 펩티드 유사체, 폴리포스파젠, 합성 폴리뉴클레오티드, 항체의 Fc 영역, 플라젤린(flagellin), IFN-γ, IL-2(interleukin-2) 또는 IL-12(interleukin-12) 등을 단독 또는 2종 이상 사용할 수 있으며, 바람직하게는 항체의 Fc 영역, 플라젤린(flagellin) 및 IL-2(interleukin-2)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 사용할 수 있다.
상기 융합 단백질 내 링커 펩티드의 N-말단은 바이러스 표면 단백질에 결합하는 것일 수 있고, 링커 펩티드의 C-말단은 면역 증강 물질에 결합하는 것일 수 있다. 바람직하게는, 상기 링커 펩티드는 (바이러스 표면 단백질)-(링커 펩티드)-(면역 증강 물질)의 순서로 배열될 수 있으며, 이를 통해, 바이러스의 면역원성을 향상시킬 수 있다.
일 실시예에 따르면, PEDV 및 SARS-CoV-2 등 다양한 바이러스를 대상으로 백신 반응을 유도할 수 있는 항원 펩티드 및 상기 항원 펩티드의 항체 형성을 효과적으로 유도하기 위한 면역 증강 물질로서 IgG의 Fc 유래 단백질을 사용하여, 일 양상에 따른 링커 펩티드에 의해 바이러스 표면에 면역 증강 물질이 부착된 백신 조성물의 증가된 면역원성을 확인하였다. 따라서, 상기 링커 펩티드는 바이러스의 감염에 의해 유발되는 감염성 질환을 예방 또는 치료하기 위한 조성물 및 방법 등에 이용될 수 있다.
다른 양상은 상기 융합 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드, 또는 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 벡터를 제공하는 것이다.
본 명세서에서의 용어 "폴리뉴클레오티드"는 뉴클레오티드가 결합한 고분자 물질로서, 유전 정보를 코딩하고 있는 DNA를 의미한다.
본 발명에서 상기 링커 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 구성하는 염기 서열은 서열번호 1로 기재한 아미노산을 코딩하는 염기 서열뿐만 아니라, 상기 서열과 80% 이상, 구체적으로는 90% 이상, 보다 구체적으로는 95% 이상, 더욱 구체적으로는 98% 이상, 가장 구체적으로는 99% 이상의 상동성을 나타내는 염기 서열로서 실질적으로 상기 각 단백질과 동일하거나 상응하는 효능을 나타내는 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 구성하는 염기 서열이라면 제한 없이 포함한다.
또한, 상기 링커 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 코돈의 축퇴성(degeneracy)으로 인하여 상기 단백질을 발현시키고자 하는 생물에서 선호되는 코돈을 고려하여, 코딩영역으로부터 발현되는 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 범위 내에서 코딩영역에 다양한 변형이 이루어질 수 있다. 따라서, 상기 폴리뉴클레오티드는 각 단백질들을 암호화하는 염기 서열이면 제한 없이 포함될 수 있다. 또한, 공지의 서열로부터 조제될 수 있는 프로브, 예를 들면, 상기 폴리뉴클레오티드 서열의 전체 또는 일부에 대한 상보 서열과 엄격한 조건 하에 하이브리드화하여, 상기 단백질과 동일한 활성을 가지는 단백질을 암호화하는 서열이라면 제한 없이 포함될 수 있다.
상기 "엄격한 조건"이란 폴리뉴클레오티드 간의 특이적 혼성화를 가능하게 하는 조건을 의미한다. 이러한 조건은 문헌(예컨대, J. Sambrook et al., 상동)에 구체적으로 기재되어 있다. 예를 들어, 상동성이 높은 유전자끼리, 40% 이상, 구체적으로는 90% 이상, 보다 구체적으로는 95% 이상, 더욱 구체적으로는 97% 이상, 특히 구체적으로는 99% 이상의 상동성을 갖는 유전자끼리 하이브리드화하고, 그보다 상동성이 낮은 유전자끼리 하이브리드화하지 않는 조건, 또는 통상의 써던 하이브리드화의 세척 조건인 60℃, 1XSSC, 0.1% SDS, 구체적으로는 60℃, 0.1XSSC, 0.1% SDS, 보다 구체적으로는 68℃ 0.1XSSC, 0.1% SDS에 상당하는 염 농도 및 온도에서, 1회, 구체적으로는 2회 내지 3회 세정하는 조건을 열거할 수 있다.
혼성화는 비록 혼성화의 엄격도에 따라 염기 간의 미스매치(mismatch)가 가능할지라도, 두 개의 폴리뉴클레오티드가 상보적 서열을 가질 것을 요구한다. 용어, "상보적"은 서로 혼성화가 가능한 뉴클레오티드 염기 간의 관계를 기술하는데 사용된다. 예를 들면, DNA에 관하여, 아데노신은 티민에 상보적이며 시토신은 구아닌에 상보적이다. 따라서, 본 명세서는 또한 실질적으로 유사한 폴리뉴클레오티드 서열뿐만 아니라 전체 서열에 상보적인 단리된 폴리뉴클레오티드 단편을 포함할 수 있다.
구체적으로, 상동성을 가지는 폴리뉴클레오티드는 55℃의 Tm 값에서 혼성화 단계를 포함하는 혼성화 조건을 사용하고 상술한 조건을 사용하여 탐지할 수 있다. 또한, 상기 Tm 값은 60℃, 63℃ 또는 65℃일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니고 그 목적에 따라 당업자에 의해 적절히 조절될 수 있다. 폴리뉴클레오티드를 혼성화하는 적절한 엄격도는 폴리뉴클레오티드의 길이 및 상보성 정도에 의존하고 변수는 해당기술분야에 잘 알려져 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어, "벡터"는 적당한 숙주세포에서 목적 단백질을 발현할 수 있는 벡터로서, 유전자 삽입물이 발현되도록 작동 가능하게 연결된 조절 요소를 포함하는 유전자 작제물을 지칭한다. 일 실시예에 따른 벡터는 프로모터, 오퍼레이터, 개시코돈, 종결코돈, 폴리아데닐화 시그널, 및/또는 인핸서와 같은 발현 조절 요소를 포함할 수 있으며, 벡터의 프로모터는 구성적 또는 유도성일 수 있다. 또한, 상기 벡터는, 숙주 세포 내에서 안정적으로 상기 융합 단백질을 발현시킬 수 있는, 발현용 벡터일 수 있다. 상기 발현용 벡터는 당업계에서 식물, 동물 또는 미생물에서 외래의 단백질을 발현하는 데 사용되는 통상의 것을 사용할 수 있다. 상기 재조합 벡터는 당업계에 공지된 다양한 방법을 통해 구축될 수 있다. 예를 들어, 상기 벡터는 벡터를 함유 하는 숙주세포를 선택하기 위한 선택성 마커를 포함하고, 복제 가능한 벡터인 경우, 복제 기원을 포함할 수 있다.
상기 벡터는 동물세포, 예를 들어, 포유동물 세포에서 작동가능한 프로모터를 포함한다. 일 실시예에 따라 적합한 프로모터는 포유동물 바이러스로부터 유래된 프로모터 및 포유동물 세포의 지놈으로부터 유래된 프로모터를 포함하며, 예컨대, CMV (Cytomegalovirus) 프로모터, U6 프로모터 및 H1 프로모터, MLV(Murine Leukemia Virus) LTR(Long terminal repeat) 프로모터, 아데노바이러스 초기 프로모터, 아데노바이러스 후기 프로모터, 백시니아 바이러스 7.5K 프로모터, SV40 프로모터, HSV의 tk 프로모터, RSV 프로모터, EF1 알파 프로모터, 메탈로티오닌 프로모터, 베타-액틴 프로모터, 인간 IL-2 유전자의 프로모터, 인간 IFN 유전자의 프로모터, 인간 IL-4 유전자의 프로모터, 인간 림포톡신 유전자의 프로모터, 인간 GM-CSF 유전자의 프로모터, 인간 포스포글리세레이트 키나아제(PGK) 프로모터, 마우스 포스포글리세레이트 키나아제(PGK) 프로모터 및 설바이빈 (Survivin) 프로모터를 포함할 수 있다.
또한, 상기 벡터에서, 전술한 융합 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드 서열은 프로모터에 작동 가능하게 연결되어 있을 수 있다. 본 명세서에서 사용된 용어, "작동 가능하게 연결된"은 핵산 발현 조절 서열(예: 프로모터, 시그널 서열, 또는 전사조절인자 결합 위치의 어레이)과 다른 핵산 서열사이의 기능적인 결합을 의미하며, 이에 의해 상기 조절 서열은 상기 다른 핵산 서열의 전사 및/또는 번역을 조절하게 된다.
다른 양상은 상기 재조합 벡터로 형질 전환된 숙주 세포를 제공하는 것이다.
본 명세서에서 용어, "형질전환”은, 본래의 세포가 가지고 있던 것과 다른 종류의 외래 유전자가 있는 DNA사슬 조각 또는 플라스미드가 세포들 사이에 침투되어 원래 세포에 존재하던 DNA와 결합함으로써 세포의 유전형질을 변화시키는 분자생물학적 기술을 의미한다. 본 발명의 목적상 형질전환은 상기 서열번호 1로 이루어지는 아미노산 서열 및 상기 아미노산 서열의 C-말단에 연결된 면역 증강 물질을 포함하는 융합 단백질을 암호화(코딩)하는 폴리뉴클레오티드가 숙주세포 내로 삽입되어 이를 생산하는 것을 의미한다.
상기 숙주세포는 바람직하게는 박테리아 (E.Coli)나 효모 (Yeast)등의 미생물, CHO 세포, F2N 세포, 및 HEK293 세포로 이루어지는 군으로부터 선택된 어느 하나일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
다른 양상은 감염성 바이러스 유래 항원; 및 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어지는 링커 펩티드 및 상기 링커 펩티드의 C-말단에 연결된 면역 증강 물질을 포함하는 융합 단백질을 포함하는 백신 조성물을 제공하는 것이다.
상기에서 설명한 내용과 동일한 부분은 상기 백신 조성물에도 공히 적용된다.
본 명세서에서 용어, "백신"은 생체에 면역을 주는 항원을 함유한 생물학적인 제제로서, 감염증의 예방을 위하여 사람이나 동물에 주사하거나 경구 투여함으로써 생체에 면역이 생기게 하는 면역원 또는 항원성 물질을 말한다. 생체 내 면역은 병원균의 감염 후에 생체 내 면역력이 자동으로 얻어지는 자동면역과 외부에서 주입한 백신에 의하여 얻어지는 수동 면역으로 크게 나누어진다. 자동면역이 면역에 관계하는 항체의 생성 기간이 길고 지속적인 면역력의 특징이 있는 반면, 백신에 의한 수동 면역은 감염증 치료에 즉시 작용하나 지속력이 떨어지는 단점이 있다.
본 명세서에서 용어, "면역원" 또는 "항원성 물질"은 상기 바이러스 유래의 펩티드, 폴리펩티드, 상기 폴리펩티드를 발현하는 유산균, 단백질, 상기 단백질을 발현하는 유산균, 올리고뉴클레오티드, 폴리뉴클레오티드, 및 재조합 바이러스로 구성된 군에서 선택된 어느 하나일 수 있다. 구체적인 예를 들면, 상기 항원 물질은 불활성화된 전체 또는 부분 바이러스 제제 형태, 또는 통상적인 단백질 정제, 유전 공학 기법 또는 화학 합성에 의해 수득되는 항원 분자 형태일 수 있다.
일 구체예에서, 상기 바이러스는 특별히 제한되지 않으나, RNA형 바이러스 또는 DNA형 바이러스일 수 있다.
상기 RNA 바이러스는 RNA를 유전자로 갖고 있는 바이러스의 총칭으로서 mRNA가 되는 (+)사슬 RNA, 상보사슬의 (-)사슬 RNA, 이중가닥 RNA를 바이러스 입자내 유전자로서 갖는 것이 있고, 1분자의 RNA만을 갖는 바이러스(코로나바이러스, 파라믹소바이러스), 동종의 RNA분자를 2개 갖는 바이러스(레트로바이러스), 8개의 다른 RNA분자를 유전자로 삼는 바이러스(인플루엔자바이러스) 등이 있다. 보통 RNA를 주형으로 하는 RNA합성효소(레트로바이러스의 경우에는 DNA 합성효소)가 존재한다.
DNA 바이러스는 유전자의 형상에 따라 환형 DNA 바이러스 또는 선형 DNA 바이러스로 분류한다. 선형 DNA 바이러스에 속하는 것으로는 바이러스 입자에 외가닥 선형 DNA가 있는 파보바이러스와 2중 가닥 사슬선형 DNA가 있는 아데노바이러스, 헤르페스바이러스, 폭스바이러스 등이 있다. 대부분은 유전체 말단에 특수한 반복배열이 있고, 유전체 구조나 크기의 차이에 의해 각각 고유한 감염, 증식양식을 나타낸다. 환형 DNA 분자를 유전체로 갖고 있는 DNA 바이러스는 크게 2개 바이러스과로 분류된다. 즉, 이중나선 닫힌고리형 DNA 분자를 유전체로 갖는 파포바이러스과 바이러스(폴리오마바이러스, SV40, 파필로마 바이러스 등)와 외가닥부분을 포함한 이중나선 고리형 DNA 분자를 유전체로 하는 헤파드나바이러스과(Hepadnavi-ridae) 바이러스(B형 간염바이러스, 우드척(Woodchuck) 간염 바이러스 등)이다.
본 명세서에서, 상기 링커 펩티드가 표면 단백질과 결합할 수 있는 바이러스는 특별히 제한되지는 않으며, 상기와 같은 RNA형 바이러스 또는 DNA형 바이러스를 모두 포함할 수 있다.
일 구체예에서, 상기 감염성 바이러스 유래 항원은 돼지 유행성 설사병 바이러스 (Porcine epidemic diarrhea virus), 돼지 생식기 호흡기 증후군 바이러스 (Porcine reproductive and respiratory syndrome virus), 댕기열 바이러스 (Dengue virus), 일본 뇌염 바이러스 (Japanese encephalitis virus), 지카바이러스 (Zika virus), 에볼라　바이러스 (Ebola virus), 로타바이러스 (Rotavirus), 댕기열 바이러스 (Dengue virus), 웨스트 나일　바이러스 (West Nile virus), 황열 바이러스 (Yellow fever virus), 아데노바이러스 (Adenovirus), BK　바이러스 (BK virus), 천연두　바이러스 (Smallpox virus), 중증 열성 혈소판 감소 증후군　바이러스　(Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus) 단순 포진 바이러스 (Herpes simplex virus), 엡스타인-바 바이러스 (Epstein-Barr virus), A형 간염 바이러스 (Hepatitis A virus), B형 간염 바이러스 (Hepatitis B virus), C형 간염 바이러스 (Hepatitis C virus), D형 간염 바이러스 (Hepatitis D virus), E형 간염 바이러스 (Hepatitis E virus), 한탄 바이러스(Hantan virus), 또는 거대 세포 바이러스 (Cytomegalovirus) 유래 항원일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
일 구체예에서, 상기 백신 조성물은 약독화 생백신 (Live attenuated vaccine), 불활화 백신(Inactivated vaccine), 서브 유닛 백신(Subunit vaccine), 또는 바이러스 유사입자 백신 (Virus like Particle vaccine)일 수 있다.
본 명세서에서 용어, "바이러스 유사 입자(Virus-Like Particle, VLP)"는 바이러스성 단백질을 수반하거나 수반하지 않는 비감염성 바이러스성 소단위체를 의미하는 것일 수 있다. 예를 들어, 상기 바이러스 유사 입자는 바이러스와 유사한 형태를 띠고 있는 재조합 단백질을 의미하는 것일 수 있으며, 상기 바이러스 유사 입자는 바이러스의 구조 단백질들간 결합을 통하여 실제 바이러스와 유사한 형태로 자가 조립(self-assembly)이 되지만, 조립 과정에서 바이러스의 유전자는 바이러스 유사 입자 내부로 포함되지 않는 것일 수 있다. 상기의 특성을 갖는 바이러스 유사 입자는 실제 바이러스와 매우 유사한 형태를 띠고 있어 체내 주입 시 높은 면역원성을 나타낼 수 있고, 바이러스의 유전자를 포함하고 있지 않으므로 체내에서 증식이 불가능한 안전한 항원으로 작용할 수 있다.
상기 바이러스 유사 입자는 바이러스, 예를 들어, 코로나바이러스의 스파이크 단백질, 막 단백질, 외피 단백질 및 뉴클레오캡시드 단백질을 포함할 수 있다. 여기서, 스파이크 단백질은 바이러스 표면에 존재하며, 곤봉 모양의 돌기 형태로 이루어진 구조 단백질이다. 상기 단백질은 숙주세포의 당 단백질 수용체와 결합하는 것으로 알려져 있으며, 이는 세포막과 바이러스 외막의 융합, 그리고, 중화 항체의 생성을 야기할 수 있다. 또한, 뉴클레오캡시드 단백질은 외피의 내부에 존재하며, 세포성 면역 반응에 관여하는 것으로 알려져 있다.
상기 백신 조성물은 약학적으로 허용가능한 부형제, 희석제 또는 담체를 추가로 포함할 수 있다. 상기 "약학적으로 허용가능한 부형제, 희석제 또는 담체"란 생물체를 자극하지 않으면서, 주입되는 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 저해하지 않는 부형제, 희석제 또는 담체를 의미할 수 있다. 여기서 "약학적으로 허용가능한"의 의미는 유효성분의 활성을 억제하지 않으면서 적용(처방) 대상이 적응 가능한 이상의 독성을 지니지 않는다는 의미이다.
백신에 적합한 담체는 기술분야의 당업자에게 공지되어 있으며, 단백질, 당 등을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기의 담체는 수용액, 또는 비-수용액, 현탁액 또는 에멀젼일 수 있다. 면역원성을 증가시키기 위한 면역보조제로서 정형 또는 비정형 유기 또는 무기 고분자등이 사용될 수 있다. 면역보조제는 일반적으로 항원에 대한 화학적 물리적 결합을 통해 면역반응을 촉진시키는 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 면역보조제로서는 비정형 알루미늄 겔, 오일 에멀젼, 또는 이중 오일 에멀젼 그리고 이뮤노졸 등이 사용될 수 있다. 또한, 면역반응의 촉진을 위해 다양한 식물 유래 사포닌, 레바미솔, CpG 다이뉴클레오티드, RNA, DNA, LPS, 다양한 종류의 사이토카인 등이 사용될 수 있다. 상기와 같은 면역 조성물은 다양한 보조제와 면역반응 촉진 첨가물의 조합에 의해 최적의 면역반응 유도를 위한 조성으로 사용될 수 있다. 또한 백신에 추가될 있는 조성물로는 안정제, 불활화제, 항생제, 보존제, 등이 사용될 수 있다. 백신의 투여 경로에 따라 백신 항원은 증류수, 완충용액 등과도 혼합하여 사용될 수 있다.
상기 백신 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 단위 투약 앰플 또는 다수회 투약 형태의 주사제의 형태로 제제화하여 사용될 수 있다. 상기 백신 조성물을 제제화할 경우, 일반적으로 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 또는 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 추가하여 조제될 수 있다.
상기 백신 조성물이 비경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 주사제, 경피 투여제, 비강 흡입제 및 좌제의 형태로 제제화될 수 있다. 주사제로 제제화활 경우 적합한 담체로서는 멸균수, 에탄올, 글리세롤이나 프로필렌 글리콜 등의 폴리올 또는 이들의 혼합물을 들 수 있으며, 바람직하게는 링거 용액, 트리에탄올 아민이 함유된 PBS(phosphate buffered saline)나 주사용 멸균수, 5% 덱스트로스 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다. 경피 투여제로 제제화할 경우 연고제, 크림제, 로션제, 겔제, 외용액제, 파스타제, 리니멘트제, 에어롤제 등의 형태로 제제화될 수 있다. 비강 흡입제의 경우 디클로로플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 등의 적합한 추진제를 사용하여 에어로졸 스프레이 형태로 제제화될 수 있으며, 좌제로 제제화할 경우 그 기제로는 위텝솔(witepsol), 트윈(tween) 61, 폴리에틸렌글리콜류, 카카오지, 라우린지, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르류, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트류, 소르비탄 지방산 에스테르류 등이 사용될 수 있다.
상기 백신 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있으며, 구체적으로 상기 백신 조성물은 근육 투여용, 피하 투여용, 복강 투여용, 정맥 투여용, 경구 투여용, 진피 투여용, 안구 투여용, 및 뇌 내 투여용 조성물로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.
상기 백신 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있는데, 상기 용어 "약학적으로 유효한 양"이란 의학적 치료 또는 예방에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료 또는 예방하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 질환의 중증도, 약물의 활성, 환자의 연령, 체중, 건강, 성별, 환자의 약물에 대한 민감도, 사용된 본 발명 조성물의 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율 치료기간, 사용된 본 발명 조성물과 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 상기 백신 조성물은 단독으로 투여하거나, 공지된 감염성 질환에 대한 예방 또는 치료 효과를 나타내는 것으로 알려진 성분과 병용하여 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하다.
상기 백신 조성물의 투여량은 사용목적, 질환의 중독도, 환자의 연령, 체중, 성별, 기왕력, 또는 유효성분으로서 사용되는 물질의 종류 등을 고려하여 당업자가 결정할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 백신 조성물은 성인 1인당 약 0.1ng 내지 약 1,000 mg/kg, 바람직하게는 1 ng 내지 약 100 mg/kg로 투여할 수 있고, 본 발명의 조성물의 투여빈도는 특별히 이에 제한되지 않으나, 1일 1회 투여하거나 또는 용량을 분할하여 수회 투여할 수 있다. 상기 투여량 또는 투여횟수는 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
또 다른 양상은 상기 백신 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 감염성 질환을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다. 상기에서 설명한 내용과 동일한 부분은 상기 방법에도 공히 적용된다.
본 명세서에서, 용어 "예방"은 상기 백신 조성물의 투여로 인해 감염성 질환의 감염 및 상기 감염성 질환 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 명세서에서, 용어 "치료"는 상기 백신 조성물의 투여로 인해 감염성 질환의 감염에 의해 이미 유발된 질환의 증세가 호전되거나 이롭게 되는 모든 행위를 의미한다.
본 명세서에서, 용어 "감염성 질환"은 바이러스성 감염 질환을 의미하며, 바람직하게는 바이러스의 감염에 의해 유발된 질환을 의미하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 개체는 바이러스 감염 및 상기 감염에 의한 질환이 발병되거나 발병할 위험이 있는 소, 말, 양, 돼지, 염소, 낙타, 영양, 개, 고양이, 쥐, 가축, 인간 등을 포함하는 포유동물, 양식어류 등을 제한 없이 포함할 수 있다.
본 명세서에서, 용어 "투여"란 적절한 방법으로 개체에게 소정의 물질을 도입하는 것을 의미하며, 본 발명의 백신 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 국소 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여될 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 그러나 경구 투여시, 단백질은 소화가 되기 때문에 경구용 조성물은 활성 약제를 코팅하거나 위에서의 분해로부터 보호되도록 제형화 하는 것이 바람직하다. 또한, 제약 조성물은 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.
상기 백신 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
일 양상에 따른 링커 펩티드는 바이러스에 부착될 수 있는 특성을 가져, 면역체계를 활성화시키는 면역 증강 물질을 바이러스 표면에 효과적으로 결합시킬 수 있는 링커로써 사용되어 백신의 면역원성을 향상시킬 수 있다. 상기 링커 펩티드를 바이러스 표면 엔지니어링 기술에 접목시키면 바이러스 표면에 면역 증강 물질을 부착할 수 있어, 면역 증강된 백신 플랫폼으로 유용하게 사용할 수 있다.
도 1은 일 양상에 따른 링커 펩티드 (VES peptide)의 발현을 웨스턴 블로팅으로 확인한 결과이다.
도 2는 일 양상에 따른 링커 펩티드의 바이러스 표면에 대한 부착 활성을 확인한 것으로서, 도 2의 A는 바이러스 표면에 대한 부착 활성을 평가하기 위한 항원-항체 복합체 형성 및 이의 검출을 개략적으로 나타낸 것이고, 도 2의 B는 바이러스 표면에 대한 부착 활성을 평가한 결과를 정량적으로 나타낸 도이다.
도 3은 일 양상에 따른 재조합 단백질 (VSE-hFc, VSE-sFc)의 발현을 웨스턴 블로팅으로 확인한 결과이다.
도 4는 일 양상에 따른 재조합 단백질의 바이러스 표면에 대한 부착 활성을 확인한 것으로서, 도 4의 A는 바이러스 표면에 대한 부착 활성을 평가하기 위한 항원-항체 복합체 형성 및 이의 검출을 개략적으로 나타낸 것이고, 도 4의 B는 바이러스 표면에 대한 부착 활성을 평가한 결과를 정량적으로 나타낸 도이다.
도 5는 일 양상에 따른 재조합 항원(PEDV-VSE-sFc)을 제조하는 과정을 개략적으로 나타낸 도이다.
도 6은 일 양상에 따른 PEDV-VSE-sFc를 마우스에 복강 투여한 후, 상기 마우스의 혈청 내 존재하는 PEDV에 대한 특이적인 IgG의 수준을 확인한 결과이다.
도 7은 일 양상에 따른 PEDV-VSE-sFc를 마우스에 복강 투여한 후, 상기 마우스의 혈청 내 존재하는 중화 항체의 수준을 확인한 결과이다.
도 8은 일 양상에 따른 재조합 항원 (DENV-VSE-hFc)을 제조하는 과정을 개략적으로 나타낸 도이다.
도 9는 일 양상에 따른 DENV-VSE-hFc를 마우스에 복강 투여한 후, 상기 마우스의 혈청 내 존재하는 DENV 에 대한 특이적인 IgG의 수준을 확인한 결과이다.
도 10은 일 양상에 따른 DENV-VSE-hFc를 마우스에 복강 투여한 후, 상기 마우스의 혈청 내 존재하는 중화 항체의 수준을 확인한 결과이다.
도 11은 일 양상에 따른 재조합 항원 (PEDV-Fc)의 발현을 웨스턴 블로팅으로 확인한 결과이다.
도 12는 일 양상에 따른 PEDV-Fc를 동물 모델에 투여한 후, 상기 동물 모델의 혈청 내 존재하는 IgG 및 중화 항체의 수준을 확인한 결과이다.
이하 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 링커 펩티드 제작
바이러스 표면 또는 바이러스 유래 항원과 유효한 결합능을 갖는 링커 펩티드 (VES 펩티드)를 도출 및 제조하였다. 상기 링커 펩티드의 아미노산 서열 및 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 하기 표 1에 나타내었다.
명명 서열 (5’->3’) 서열번호
VSE peptide TQEVYDTHDCATNGTIRPFKVLS 1
VSE polynucleotide ACCCAAGAGGTGTACGACACCCACGACTGCGCCACCAACGGCACCATCAGACCTTTCAAGGTGCTGAGC 2
본 실시예에서는 진핵 세포의 발현 벡터인 pcDNA3.1-Myc-His vector에 상기 VSE 폴리뉴클레오티드를 클로닝한 뒤, 이를 CHO 세포에 발현시키고, Myc tag을 이용하여 정제하여 도 1에 나타낸 바와 같이, VSE 펩티드를 수득하였다.
실시예 2: 바이러스 표면에 대한 부착 활성 확인
본 실시예에서는 VES 펩티드의 바이러스 표면에 대한 부착 활성을 ELISA를 통하여 확인하고자 하였다. 구체적으로, 돼지 유행성 설사병 바이러스 (PEDV), 돼지 생식기 호흡기 증후군 바이러스 (PRRSV), 댕기열 바이러스 (DENV), 일본 뇌염 바이러스 (JEV), 또는 지카 바이러스 (ZIKV) 각각을 immunoplate의 표면에 코팅한 뒤, 실시예 1의 Myc가 표지된 VES 펩티드 (VSE-Myc tag)를 첨가하여 부착/결합 반응을 유도하였다. 이후, 여기에 HRP (Horseradish peroxidase)가 표지된 anti-Myc tag 항체를 첨가하여 반응을 유도하 뒤, HRP 수준을 정량적으로 검출하여 바이러스 표면에 대한 부착 활성을 평가하였다 (도 2의 A). 한편, 음성 대조군은 Scrambled 펩티드와 반응시킨 군, 양성 대조군은 각각의 바이러스로 면역화된 마우스 혈청을 사용한 군으로 설정하였다.
그 결과, 도 2의 B에 나타낸 바와 같이, 음성 대조군은 표지된 HRP의 검출 수준이 매우 낮았던 반면, 일 양상에 따른 VES 펩티드를 사용한 군은 양성 대조군과 유사한 수준으로 검출되었다. 이러한 실험 결과는 일 양상에 따른 VES 펩티드는 바이러스의 표면과의 유효한 부착 활성을 지님을 보여주는 것이다.
실시예 3: 바이러스 표면에 대한 면역 증강 물질의 부착 활성 확인
본 실시예에서는 상기 VES 펩티드의 바이러스 표면에 대한 부착 활성을 이용하여, 면역 증강 물질을 바이러스 표면에 부착 또는 결합시키고자 하였다. 구체적으로, VES 펩티드와 human Fc (VSE-hFc) 또는 swine Fc (VSE-sFc)를 진핵세포 발현 벡터인 pcDNA3.1-Myc-His vector에 클로닝하고, 이를 CHO 세포에서 발현시켜 도 3에 나타낸 바와 같이, 면역 증강 물질을 포함하는 재조합 단백질인 VSE-hFc 또는 VSE-sFc를 수득하였다. 상기 재조합 단백질 (VSE-hFc, VSE-sFc)의 아미노산 서열 및 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 하기 표 2 및 표 3에 나타내었다.
명명 서열 (5’->3’) 서열번호
VSE-human Fc TQEVYDTHDCATNGTIRPFKVLS DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 3
ACCCAAGAGGTGTACGACACCCACGACTGCGCCACCAACGGCACCATCAGACCTTTCAAGGTGCTGAGC GACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA 4
명명 서열 (5’->3’) 서열번호
VSE-swine Fc TQEVYDTHDCATNGTIRPFKVLS AYNTAPSVYPLAPCGRDVSDHNVALGCLVSSYFPEPVTVTWNSGALSRVVHTFPSVLQPSGLYSLSSMVIVAASSLSTLSYTCNVYHPATNTKVDKRVDIEPPTPICPEICSCPAAEVLGAPSVFLFPPKPKDILMISRTPKVTCVVVDVSQEEAEVQFSWYVDGVQLYTAQTRPMEEQFNSTYRVVSVLPIQHQDWLKGKEFKCKVNNKDLLSPITRTISKATGPSRVPQVYTLPPAWEELSKSKVSITCLVTGFYPPDIDVEWQSNGQQEPEGNYRTTPPQQDVDGTYFLYSKLAVDKVRWQRGDLFQCAVMHEALHNHYTQKSISKTQGK 5
ACCCAAGAGGTGTACGACACCCACGACTGCGCCACCAACGGCACCATCAGACCTTTCAAGGTGCTGAGC GCCTACAACACAGCTCCATCGGTCTACCCTCTGGCCCCCTGTGGCAGGGACGTGTCTGATCATAACGTGGCCTTGGGCTGCCTTGTCTCAAGCTACTTCCCCGAGCCAGTGACCGTGACCTGGAACTCGGGTGCCCTGTCCAGAGTCGTGCATACCTTCCCATCCGTCCTGCAGCCGTCAGGGCTCTACTCCCTCAGCAGCATGGTGATCGTGGCGGCCAGCAGCCTGTCCACCCTGAGCTACACGTGCAACGTCTACCACCCGGCCACCAACACCAAGGTGGACAAGCGTGTTGACATCGAACCCCCCACACCCATCTGTCCCGAAATTTGCTCATGCCCAGCTGCAGAGGTCCTGGGAGCACCGTCGGTCTTCCTCTTCCCTCCAAAACCCAAGGACATCCTCATGATCTCCCGGACACCCAAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAGGAGGCTGAAGTCCAGTTCTCCTGGTACGTGGACGGCGTACAGTTGTACACGGCCCAGACGAGGCCAATGGAGGAGCAGTTCAACAGCACCTACCGCGTGGTCAGCGTCCTGCCCATCCAGCACCAGGACTGGCTGAAGGGGAAGGAGTTCAAGTGCAAGGTCAACAACAAAGACCTCCTTTCCCCCATCACGAGGACCATCTCCAAGGCTACAGGGCCGAGCCGGGTGCCGCAGGTGTACACCCTGCCCCCAGCCTGGGAAGAGCTGTCCAAGAGCAAAGTCAGCATAACCTGCCTGGTCACTGGCTTCTACCCACCTGACATCGATGTCGAGTGGCAGAGCAACGGACAACAAGAGCCAGAGGGCAATTACCGCACCACCCCGCCCCAGCAGGACGTGGATGGGACCTACTTCCTGTACAGCAAGCTCGCGGTGGACAAGGTCAGGTGGCAGCGTGGAGACCTATTCCAGTGTGCGGTGATGCACGAGGCTCTGCACAACCACTACACCCAGAAGTCCATCTCCAAGACTCAGGGTAAA 6
이후, 돼지 유행성 설사병 바이러스 (PEDV), 돼지 생식기 호흡기 증후군 바이러스 (PRRSV), 댕기열 바이러스 (DENV), 일본 뇌염 바이러스 (JEV), 또는 지카 바이러스 (ZIKV) 각각을 immunoplate의 표면에 코팅한 뒤, 상기 VSE-hFc 또는 VSE-sFc를 첨가하여 부착/결합 반응을 유도하였다. 이후, 여기에 HRP (Horseradish peroxidase)가 표지된 anti-IgG 항체를 첨가하여 반응을 유도한 뒤, HRP 수준을 정량적으로 검출하여 바이러스 표면에 대한 부착 활성을 평가하였다 (도 4의 A). 한편, 음성 대조군은 Scrambled 펩티드를 사용한 군, 양성 대조군은 각각의 바이러스로 면역화된 마우스 혈청을 사용한 군으로 설정하였다.
그 결과, 도 4의 B에 나타낸 바와 같이, 음성 대조군은 표지된 HRP의 검출 수준이 매우 낮았던 반면, 일 양상에 따른 VES 펩티드를 사용한 군 (VSE-hFc, VSE-sFc)은 양성 대조군과 유사한 수준으로 검출되었다. 이러한 실험 결과는 일 양상에 따른 VES 펩티드는 면역 증강 물질을 바이러스 표면에 부착 또는 결합시킴으로써, 바이러스 항원을 포함하는 백신 제제의 효능을 향상시키는데 기여할 수 있음을 나타내는 것이다.
실시예 4: 바이러스 표면 엔지니어링을 통한 면역 반응 증강 효과 확인
본 실시예에서는 바이러스 표면에 VSE-sFc를 부착/결합시켜 재조합 항원을 제조한 뒤, 마우스 모델을 이용하여 상기 재조합 항원의 면역 반응 증강 효과를 확인하고자 하였다.
4-1. PEDV-VSE-sFc
도 5에 도시한 바와 같이, 돼지 유행성 설사병 바이러스 (PEDV)와 실시예 3의 VSE-sFc를 혼합한 뒤, 상온에서 2시간 동안 이들간 부착/결합 반응을 유도하여, 재조합 항원 (PEDV-VSE-sFc)을 제조하였다.
구체적으로, 4 주령의 Balb/C 마우스에 PEDV-VSE-sFc를 2주 간격으로 3회 복강 투여하여 면역화한 후, 마우스의 혈청 내 존재하는 PEDV에 대한 특이적인 IgG의 수준을 확인하였다. 이와 함께, 상기 면역화된 마우스의 혈청을 대상으로, Plaque reduction neutralization test를 수행하여, PEDV 항원에 대한 중화 항체 수준을 평가하였다. 한편, 음성 대조군으로는 PBS를 투여한 군, 비교군으로는 PEDV만을 투여한 군으로 설정하였다.
그 결과, 도 6 및 도 7에 나타낸 바와 같이, 일 양상에 따른 PEDV-VSE-sFc를 투여한 군에서는 마우스 혈청 내 높은 수준의 IgG 및 중화 항체를 확인하였다. 특히, PEDV-VSE-sFc를 면역화한 마우스의 혈청 내 중화 항체 수준은 비교군에 비해, 약 4.5 배 증진되었다.
4-2. DENV-VSE-hFc
도 8에 도시한 바와 같이, 댕기열 바이러스 (DENV)와 실시예 3의 VSE-hFc를 혼합한 뒤, 상온에서 2시간 동안 이들간 부착/결합 반응을 유도하여, 재조합 항원 (DENV-VSE-hFc)을 제조하였다.
구체적으로, 4 주령의 Balb/C 마우스에 DENV-VSE-hFc를 2주 간격으로 3회 복강 투여하여 면역화한 후, 마우스의 혈청 내 존재하는 DENV에 대한 특이적인 IgG의 수준을 확인하였다. 이와 함께, 상기 면역화된 마우스의 혈청을 대상으로, Plaque reduction neutralization test를 수행하여, DENV 항원에 대한 중화 항체 수준을 평가하였다. 한편, 음성 대조군으로는 PBS를 투여한 군, 비교군으로는 DENV 만을 투여한 군으로 설정하였다.
그 결과, 도 9 및 도 10에 나타낸 바와 같이, 일 양상에 따른 DENV-VSE-hFc를 투여한 군에서는 마우스 혈청 내 높은 수준의 IgG 및 중화 항체를 확인하였다. 특히, DENV-VSE-hFc를 면역화한 마우스의 혈청 내 중화 항체 수준은 비교군에 비해, 약 4.5 배 증진되었다.
이러한 실험 결과를 종합해 보면, 일 양상에 따른 VES 펩티드를 사용하여 바이러스 표면에 면역 증강 물질을 부착시킨 경우, 바이러스 항원의 면역 반응 유도 효과가 현격하게 향상됨을 알 수 있었다. 이에 따라, 상기의 재조합 항원은 백신 제제의 유효 성분으로서, 그 효용성이 향상되었음을 나타내는 것이다.
실시예 5: 바이러스 유래 항원에 대한 면역 반응 증강 효과 확인
본 실시예에서는 바이러스 유래 항원에 VSE-sFc를 부착/결합시켜 재조합 항원을 제조한 뒤, 상기 재조합 항원의 면역 반응 증강 효과를 확인하고자 하였다.
구체적으로, PEDV에 대한 백신 반응을 유도할 수 있는 항원으로서 PEDV의 스파이크 단백질 S1 유래 단백질, 및 항체 형성을 증진시키기 위한 면역 증강 물질로서 IgG의 Fc 유래 단백질을 포함하는 재조합 항원을 VSE 펩티드를 사용하여 상기 실시예 4와 동일한 방식으로 제작하였다. 또한, 이를 CHO 세포에서 발현시켜 도 11에 나타낸 바와 같이 면역 증강 물질을 포함하는 재조합 항원인 PEDV-Fc를 수득하였다. 상기 재조합 항원 (PEDV-Fc)의 아미노산 서열을 하기 표 4에 나타내었다.
명명 아미노산 서열(5’->3’) 서열번호
PEDV-Fc TQEVYDTHDCATNGTIRPFKVLSMRSLIYFWLLLPVLPTLSLPQDVTRCQSTTNFRRFFSKFNVQAPAVVVLGGYLPSMNSSSWYCGTGIETASGVHGIFLSYIDSSQGFEIGISQEPFDPSGYQLYLHKATNGNTNAIARLRISQFPDNKTLGPTVNDVTTGRNCLFNKAIPAYMRDGKDIVVGITWDNDRVTVFADKIYHFYLKNDWSRVATRCYNRRSCAMQYVYTPTYYMLNVTSAGEDGIYYEPCTANCTGYAANVFATDSNGHIPESFSFNNWFLLSNDSTLLHGKVVSNQPLLVNCLLAIPKIYGLGQFFSFNHTMDGVCNGAALDRAPEALRFNINDTSVILAEGSIVLHTALGTNLSFVCSNSSDPHLATFAIPLGATEVPYYCFLIVDTYNSTVYKFLAVLPPTVREIVITKYGDVYVNGFGYLHLGLLDAVTINFTGHGTDDDVSGFWTIDSTNFVDALIEVQGTSIQRILYCDDPVSQLKCSQVAFDLDDGFYPISSRNLLSHEQPISFVTLPSFNDHSFVNITVSASFGDHSGANLVASDTTINGFSSFCVDTRQFTIRLFYNVTSSYGYVSKSQYSNCPFTLQSVNDYLSFSKFCVSTSLLASACTIDLFGYPHFGSGVKFTSLYFQFTEGELITGTPKPLEGVTDVSFMTLDVCTKYTIYGFKGEGIITLTNSSFLAGVYYTSDSGQLLAFKNVTSGAVYSVTPCSFSEQAAYVDDDIVGVISSLSNSTFNNTRELPGFFYHSNDGSNCTEPVLVYSNIGVCKSGSIGYVPSQSGQVKIAPTVTGNISIPTNFSMSIRTEYLQLYNTPVSVDCATYVCNGNSRCKQLLTQYTAACKTIESALQLSARLESVEVNSMLTTSEQALQLATISSFNGDGYNFTNVLGVSVYDPASGRVVHKRSFIEDLLFNKVVTNGLGTVDEDYKRCSNGRSVADLVCAQYYSGVMVLPGVVDAEKLHMYSASLIGGMVLGGFTAAAALPFSYAVQARLNYLALQTDVLQRNQQLLAESFNSAIGNITSAFESVKEAISQTSQGLNTVARALTKVQEVVNSQGAALTQLTVQLQHNFQAISSSIDDIYSRLDILSADVQVDRLITGRLSALNAFVAQTLTKYTEVQASRKLAQQKVNECVKSQSQRYGFCGGDGEHIFSLVQAAPQGLLFLHTVLVPGDFVNVIAIAGLCVNGDIALTLREPGLVLFTHELQTHTATEYFVSSRRMFELRKPTVSDFVQIESCVVTYVNLTSDQLPDVIPDYIDVNKTLDEILASLPNRTGPSLPLDVFNATYLNLTGEIADLEQRSESLQNTTEELRTLIYNINNTLVDLEWLNRVETYIKWPWWIWLIIFIVLIFVVSLLVFCCISTGCCGCCGCCGACFSGCCRGPRLQPYEAFEKVHVQDIEPPTPICPEICSCPAAEVLGAPSVFLFPPKPKDILMISRTPKVTCVVVDVSQEEAEVQFSWYVDGVQLYTAQTRPMEEQFNSTYRVVSVLPIQHQDWLKGKEFKCKVNNKDLLSPITRTISKATGPSRVPQVYTLPPAWEELSKSKVSITCLVTGFYPPDIDVEWQSNGQQEPEGNYRTTPPQQDVDGTYFLYSKLAVDKVRWQRGDLFQCAVMHEALHNHYTQKSISKTQGK 7
또한, 면역 증강된 PEDV 바이러스 백신의 면역원성을 확인하기 위해 하기와 같은 실험을 수행하였다. 실험 동물에 상기 제조된 백신(PEDV-Fc)을 2주 간격으로 2회 근육접종 하였다(투여용량: 100 ul). 2차 접종 2주 후, 혈청 및 초유를 채취하여 IgG 역가를 측정하였으며, ELISA와 중화능 시험을 수행하여 혈청 및 초유 내 항체가를 검사하였다. 한편, 대조군으로 PBS를 첨가한 군, 비교군으로 PEDV만을 투여한 군을 설정하였다.
그 결과, 도 12에 나타낸 바와 같이 일 실시예에 따른 재조합 항원은 모돈의 혈청, 초유에서 비교군에 비해 높은 수준의 IgG 역가를 보여주었으며, 혈청 내 중화 항체가 역시 상기와 동일한 경향성을 보였다. 상기 결과를 통해, 일 실시예에 따른 백신 조성물은 면역원성이 증가되어 백신의 효능을 극대화시킬 수 있음을 확인하였다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.
<110> The Industry & Academic Cooperation in Chungnam National University (IAC) <120> Surface engineering based adjuvanted virus vaccine <130> PN139181 <150> KR 10-2021-0042027 <151> 2021-03-31 <160> 7 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VSE peptide <400> 1 Thr Gln Glu Val Tyr Asp Thr His Asp Cys Ala Thr Asn Gly Thr Ile 1 5 10 15 Arg Pro Phe Lys Val Leu Ser 20 <210> 2 <211> 69 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VSE polynucleotide <400> 2 acccaagagg tgtacgacac ccacgactgc gccaccaacg gcaccatcag acctttcaag 60 gtgctgagc 69 <210> 3 <211> 250 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VSE-human Fc peptide <400> 3 Thr Gln Glu Val Tyr Asp Thr His Asp Cys Ala Thr Asn Gly Thr Ile 1 5 10 15 Arg Pro Phe Lys Val Leu Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 20 25 30 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 35 40 45 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 50 55 60 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 65 70 75 80 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 85 90 95 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 100 105 110 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 115 120 125 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 130 135 140 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 145 150 155 160 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 165 170 175 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 180 185 190 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 195 200 205 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 210 215 220 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 225 230 235 240 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 245 250 <210> 4 <211> 750 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VSE-human Fc polynucleotide <400> 4 acccaagagg tgtacgacac ccacgactgc gccaccaacg gcaccatcag acctttcaag 60 gtgctgagcg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 120 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 180 gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 240 tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 300 agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 360 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 420 aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag 480 ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 540 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 600 ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 660 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 720 cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 750 <210> 5 <211> 356 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VSE-swine Fc peptide <400> 5 Thr Gln Glu Val Tyr Asp Thr His Asp Cys Ala Thr Asn Gly Thr Ile 1 5 10 15 Arg Pro Phe Lys Val Leu Ser Ala Tyr Asn Thr Ala Pro Ser Val Tyr 20 25 30 Pro Leu Ala Pro Cys Gly Arg Asp Val Ser Asp His Asn Val Ala Leu 35 40 45 Gly Cys Leu Val Ser Ser Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp 50 55 60 Asn Ser Gly Ala Leu Ser Arg Val Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu 65 70 75 80 Gln Pro Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Ile Val Ala Ala 85 90 95 Ser Ser Leu Ser Thr Leu Ser Tyr Thr Cys Asn Val Tyr His Pro Ala 100 105 110 Thr Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Asp Ile Glu Pro Pro Thr Pro 115 120 125 Ile Cys Pro Glu Ile Cys Ser Cys Pro Ala Ala Glu Val Leu Gly Ala 130 135 140 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Ile Leu Met Ile 145 150 155 160 Ser Arg Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu 165 170 175 Glu Ala Glu Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val Asp Gly Val Gln Leu Tyr 180 185 190 Thr Ala Gln Thr Arg Pro Met Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg 195 200 205 Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys 210 215 220 Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Leu Ser Pro Ile Thr 225 230 235 240 Arg Thr Ile Ser Lys Ala Thr Gly Pro Ser Arg Val Pro Gln Val Tyr 245 250 255 Thr Leu Pro Pro Ala Trp Glu Glu Leu Ser Lys Ser Lys Val Ser Ile 260 265 270 Thr Cys Leu Val Thr Gly Phe Tyr Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp 275 280 285 Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Gly Asn Tyr Arg Thr Thr Pro 290 295 300 Pro Gln Gln Asp Val Asp Gly Thr Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ala 305 310 315 320 Val Asp Lys Val Arg Trp Gln Arg Gly Asp Leu Phe Gln Cys Ala Val 325 330 335 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Ile Ser Lys 340 345 350 Thr Gln Gly Lys 355 <210> 6 <211> 1068 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VSE-swine Fc polynucleotide <400> 6 acccaagagg tgtacgacac ccacgactgc gccaccaacg gcaccatcag acctttcaag 60 gtgctgagcg cctacaacac agctccatcg gtctaccctc tggccccctg tggcagggac 120 gtgtctgatc ataacgtggc cttgggctgc cttgtctcaa gctacttccc cgagccagtg 180 accgtgacct ggaactcggg tgccctgtcc agagtcgtgc ataccttccc atccgtcctg 240 cagccgtcag ggctctactc cctcagcagc atggtgatcg tggcggccag cagcctgtcc 300 accctgagct acacgtgcaa cgtctaccac ccggccacca acaccaaggt ggacaagcgt 360 gttgacatcg aaccccccac acccatctgt cccgaaattt gctcatgccc agctgcagag 420 gtcctgggag caccgtcggt cttcctcttc cctccaaaac ccaaggacat cctcatgatc 480 tcccggacac ccaaggtcac gtgcgtggtg gtggacgtga gccaggagga ggctgaagtc 540 cagttctcct ggtacgtgga cggcgtacag ttgtacacgg cccagacgag gccaatggag 600 gagcagttca acagcaccta ccgcgtggtc agcgtcctgc ccatccagca ccaggactgg 660 ctgaagggga aggagttcaa gtgcaaggtc aacaacaaag acctcctttc ccccatcacg 720 aggaccatct ccaaggctac agggccgagc cgggtgccgc aggtgtacac cctgccccca 780 gcctgggaag agctgtccaa gagcaaagtc agcataacct gcctggtcac tggcttctac 840 ccacctgaca tcgatgtcga gtggcagagc aacggacaac aagagccaga gggcaattac 900 cgcaccaccc cgccccagca ggacgtggat gggacctact tcctgtacag caagctcgcg 960 gtggacaagg tcaggtggca gcgtggagac ctattccagt gtgcggtgat gcacgaggct 1020 ctgcacaacc actacaccca gaagtccatc tccaagactc agggtaaa 1068 <210> 7 <211> 1641 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PEDV-Fc <400> 7 Thr Gln Glu Val Tyr Asp Thr His Asp Cys Ala Thr Asn Gly Thr Ile 1 5 10 15 Arg Pro Phe Lys Val Leu Ser Met Arg Ser Leu Ile Tyr Phe Trp Leu 20 25 30 Leu Leu Pro Val Leu Pro Thr Leu Ser Leu Pro Gln Asp Val Thr Arg 35 40 45 Cys Gln Ser Thr Thr Asn Phe Arg Arg Phe Phe Ser Lys Phe Asn Val 50 55 60 Gln Ala Pro Ala Val Val Val Leu Gly Gly Tyr Leu Pro Ser Met Asn 65 70 75 80 Ser Ser Ser Trp Tyr Cys Gly Thr Gly Ile Glu Thr Ala Ser Gly Val 85 90 95 His Gly Ile Phe Leu Ser Tyr Ile Asp Ser Ser Gln Gly Phe Glu Ile 100 105 110 Gly Ile Ser Gln Glu Pro Phe Asp Pro Ser Gly Tyr Gln Leu Tyr Leu 115 120 125 His Lys Ala Thr Asn Gly Asn Thr Asn Ala Ile Ala Arg Leu Arg Ile 130 135 140 Ser Gln Phe Pro Asp Asn Lys Thr Leu Gly Pro Thr Val Asn Asp Val 145 150 155 160 Thr Thr Gly Arg Asn Cys Leu Phe Asn Lys Ala Ile Pro Ala Tyr Met 165 170 175 Arg Asp Gly Lys Asp Ile Val Val Gly Ile Thr Trp Asp Asn Asp Arg 180 185 190 Val Thr Val Phe Ala Asp Lys Ile Tyr His Phe Tyr Leu Lys Asn Asp 195 200 205 Trp Ser Arg Val Ala Thr Arg Cys Tyr Asn Arg Arg Ser Cys Ala Met 210 215 220 Gln Tyr Val Tyr Thr Pro Thr Tyr Tyr Met Leu Asn Val Thr Ser Ala 225 230 235 240 Gly Glu Asp Gly Ile Tyr Tyr Glu Pro Cys Thr Ala Asn Cys Thr Gly 245 250 255 Tyr Ala Ala Asn Val Phe Ala Thr Asp Ser Asn Gly His Ile Pro Glu 260 265 270 Ser Phe Ser Phe Asn Asn Trp Phe Leu Leu Ser Asn Asp Ser Thr Leu 275 280 285 Leu His Gly Lys Val Val Ser Asn Gln Pro Leu Leu Val Asn Cys Leu 290 295 300 Leu Ala Ile Pro Lys Ile Tyr Gly Leu Gly Gln Phe Phe Ser Phe Asn 305 310 315 320 His Thr Met Asp Gly Val Cys Asn Gly Ala Ala Leu Asp Arg Ala Pro 325 330 335 Glu Ala Leu Arg Phe Asn Ile Asn Asp Thr Ser Val Ile Leu Ala Glu 340 345 350 Gly Ser Ile Val Leu His Thr Ala Leu Gly Thr Asn Leu Ser Phe Val 355 360 365 Cys Ser Asn Ser Ser Asp Pro His Leu Ala Thr Phe Ala Ile Pro Leu 370 375 380 Gly Ala Thr Glu Val Pro Tyr Tyr Cys Phe Leu Ile Val Asp Thr Tyr 385 390 395 400 Asn Ser Thr Val Tyr Lys Phe Leu Ala Val Leu Pro Pro Thr Val Arg 405 410 415 Glu Ile Val Ile Thr Lys Tyr Gly Asp Val Tyr Val Asn Gly Phe Gly 420 425 430 Tyr Leu His Leu Gly Leu Leu Asp Ala Val Thr Ile Asn Phe Thr Gly 435 440 445 His Gly Thr Asp Asp Asp Val Ser Gly Phe Trp Thr Ile Asp Ser Thr 450 455 460 Asn Phe Val Asp Ala Leu Ile Glu Val Gln Gly Thr Ser Ile Gln Arg 465 470 475 480 Ile Leu Tyr Cys Asp Asp Pro Val Ser Gln Leu Lys Cys Ser Gln Val 485 490 495 Ala Phe Asp Leu Asp Asp Gly Phe Tyr Pro Ile Ser Ser Arg Asn Leu 500 505 510 Leu Ser His Glu Gln Pro Ile Ser Phe Val Thr Leu Pro Ser Phe Asn 515 520 525 Asp His Ser Phe Val Asn Ile Thr Val Ser Ala Ser Phe Gly Asp His 530 535 540 Ser Gly Ala Asn Leu Val Ala Ser Asp Thr Thr Ile Asn Gly Phe Ser 545 550 555 560 Ser Phe Cys Val Asp Thr Arg Gln Phe Thr Ile Arg Leu Phe Tyr Asn 565 570 575 Val Thr Ser Ser Tyr Gly Tyr Val Ser Lys Ser Gln Tyr Ser Asn Cys 580 585 590 Pro Phe Thr Leu Gln Ser Val Asn Asp Tyr Leu Ser Phe Ser Lys Phe 595 600 605 Cys Val Ser Thr Ser Leu Leu Ala Ser Ala Cys Thr Ile Asp Leu Phe 610 615 620 Gly Tyr Pro His Phe Gly Ser Gly Val Lys Phe Thr Ser Leu Tyr Phe 625 630 635 640 Gln Phe Thr Glu Gly Glu Leu Ile Thr Gly Thr Pro Lys Pro Leu Glu 645 650 655 Gly Val Thr Asp Val Ser Phe Met Thr Leu Asp Val Cys Thr Lys Tyr 660 665 670 Thr Ile Tyr Gly Phe Lys Gly Glu Gly Ile Ile Thr Leu Thr Asn Ser 675 680 685 Ser Phe Leu Ala Gly Val Tyr Tyr Thr Ser Asp Ser Gly Gln Leu Leu 690 695 700 Ala Phe Lys Asn Val Thr Ser Gly Ala Val Tyr Ser Val Thr Pro Cys 705 710 715 720 Ser Phe Ser Glu Gln Ala Ala Tyr Val Asp Asp Asp Ile Val Gly Val 725 730 735 Ile Ser Ser Leu Ser Asn Ser Thr Phe Asn Asn Thr Arg Glu Leu Pro 740 745 750 Gly Phe Phe Tyr His Ser Asn Asp Gly Ser Asn Cys Thr Glu Pro Val 755 760 765 Leu Val Tyr Ser Asn Ile Gly Val Cys Lys Ser Gly Ser Ile Gly Tyr 770 775 780 Val Pro Ser Gln Ser Gly Gln Val Lys Ile Ala Pro Thr Val Thr Gly 785 790 795 800 Asn Ile Ser Ile Pro Thr Asn Phe Ser Met Ser Ile Arg Thr Glu Tyr 805 810 815 Leu Gln Leu Tyr Asn Thr Pro Val Ser Val Asp Cys Ala Thr Tyr Val 820 825 830 Cys Asn Gly Asn Ser Arg Cys Lys Gln Leu Leu Thr Gln Tyr Thr Ala 835 840 845 Ala Cys Lys Thr Ile Glu Ser Ala Leu Gln Leu Ser Ala Arg Leu Glu 850 855 860 Ser Val Glu Val Asn Ser Met Leu Thr Thr Ser Glu Gln Ala Leu Gln 865 870 875 880 Leu Ala Thr Ile Ser Ser Phe Asn Gly Asp Gly Tyr Asn Phe Thr Asn 885 890 895 Val Leu Gly Val Ser Val Tyr Asp Pro Ala Ser Gly Arg Val Val His 900 905 910 Lys Arg Ser Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Val Thr Asn 915 920 925 Gly Leu Gly Thr Val Asp Glu Asp Tyr Lys Arg Cys Ser Asn Gly Arg 930 935 940 Ser Val Ala Asp Leu Val Cys Ala Gln Tyr Tyr Ser Gly Val Met Val 945 950 955 960 Leu Pro Gly Val Val Asp Ala Glu Lys Leu His Met Tyr Ser Ala Ser 965 970 975 Leu Ile Gly Gly Met Val Leu Gly Gly Phe Thr Ala Ala Ala Ala Leu 980 985 990 Pro Phe Ser Tyr Ala Val Gln Ala Arg Leu Asn Tyr Leu Ala Leu Gln 995 1000 1005 Thr Asp Val Leu Gln Arg Asn Gln Gln Leu Leu Ala Glu Ser Phe Asn 1010 1015 1020 Ser Ala Ile Gly Asn Ile Thr Ser Ala Phe Glu Ser Val Lys Glu Ala 1025 1030 1035 1040 Ile Ser Gln Thr Ser Gln Gly Leu Asn Thr Val Ala Arg Ala Leu Thr 1045 1050 1055 Lys Val Gln Glu Val Val Asn Ser Gln Gly Ala Ala Leu Thr Gln Leu 1060 1065 1070 Thr Val Gln Leu Gln His Asn Phe Gln Ala Ile Ser Ser Ser Ile Asp 1075 1080 1085 Asp Ile Tyr Ser Arg Leu Asp Ile Leu Ser Ala Asp Val Gln Val Asp 1090 1095 1100 Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Ser Ala Leu Asn Ala Phe Val Ala Gln 1105 1110 1115 1120 Thr Leu Thr Lys Tyr Thr Glu Val Gln Ala Ser Arg Lys Leu Ala Gln 1125 1130 1135 Gln Lys Val Asn Glu Cys Val Lys Ser Gln Ser Gln Arg Tyr Gly Phe 1140 1145 1150 Cys Gly Gly Asp Gly Glu His Ile Phe Ser Leu Val Gln Ala Ala Pro 1155 1160 1165 Gln Gly Leu Leu Phe Leu His Thr Val Leu Val Pro Gly Asp Phe Val 1170 1175 1180 Asn Val Ile Ala Ile Ala Gly Leu Cys Val Asn Gly Asp Ile Ala Leu 1185 1190 1195 1200 Thr Leu Arg Glu Pro Gly Leu Val Leu Phe Thr His Glu Leu Gln Thr 1205 1210 1215 His Thr Ala Thr Glu Tyr Phe Val Ser Ser Arg Arg Met Phe Glu Leu 1220 1225 1230 Arg Lys Pro Thr Val Ser Asp Phe Val Gln Ile Glu Ser Cys Val Val 1235 1240 1245 Thr Tyr Val Asn Leu Thr Ser Asp Gln Leu Pro Asp Val Ile Pro Asp 1250 1255 1260 Tyr Ile Asp Val Asn Lys Thr Leu Asp Glu Ile Leu Ala Ser Leu Pro 1265 1270 1275 1280 Asn Arg Thr Gly Pro Ser Leu Pro Leu Asp Val Phe Asn Ala Thr Tyr 1285 1290 1295 Leu Asn Leu Thr Gly Glu Ile Ala Asp Leu Glu Gln Arg Ser Glu Ser 1300 1305 1310 Leu Gln Asn Thr Thr Glu Glu Leu Arg Thr Leu Ile Tyr Asn Ile Asn 1315 1320 1325 Asn Thr Leu Val Asp Leu Glu Trp Leu Asn Arg Val Glu Thr Tyr Ile 1330 1335 1340 Lys Trp Pro Trp Trp Ile Trp Leu Ile Ile Phe Ile Val Leu Ile Phe 1345 1350 1355 1360 Val Val Ser Leu Leu Val Phe Cys Cys Ile Ser Thr Gly Cys Cys Gly 1365 1370 1375 Cys Cys Gly Cys Cys Gly Ala Cys Phe Ser Gly Cys Cys Arg Gly Pro 1380 1385 1390 Arg Leu Gln Pro Tyr Glu Ala Phe Glu Lys Val His Val Gln Asp Ile 1395 1400 1405 Glu Pro Pro Thr Pro Ile Cys Pro Glu Ile Cys Ser Cys Pro Ala Ala 1410 1415 1420 Glu Val Leu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 1425 1430 1435 1440 Asp Ile Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val 1445 1450 1455 Asp Val Ser Gln Glu Glu Ala Glu Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val Asp 1460 1465 1470 Gly Val Gln Leu Tyr Thr Ala Gln Thr Arg Pro Met Glu Glu Gln Phe 1475 1480 1485 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln Asp 1490 1495 1500 Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu 1505 1510 1515 1520 Leu Ser Pro Ile Thr Arg Thr Ile Ser Lys Ala Thr Gly Pro Ser Arg 1525 1530 1535 Val Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ala Trp Glu Glu Leu Ser Lys 1540 1545 1550 Ser Lys Val Ser Ile Thr Cys Leu Val Thr Gly Phe Tyr Pro Pro Asp 1555 1560 1565 Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Gly Asn 1570 1575 1580 Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Gln Asp Val Asp Gly Thr Tyr Phe Leu 1585 1590 1595 1600 Tyr Ser Lys Leu Ala Val Asp Lys Val Arg Trp Gln Arg Gly Asp Leu 1605 1610 1615 Phe Gln Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 1620 1625 1630 Lys Ser Ile Ser Lys Thr Gln Gly Lys 1635 1640

Claims (3)

  1. 감염성 바이러스 항원; 및 융합 단백질을 포함하는 백신 조성물로서,
    상기 융합 단백질은 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어지는 링커 펩티드; 및 상기 링커 펩티드의 C-말단에 연결된 면역 증강 물질을 포함하고,
    상기 링커 펩티드의 N-말단은 상기 감염성 바이러스 항원 표면에 결합되어 있으며,
    상기 감염성 바이러스 유래 항원은 돼지 생식기 호흡기 증후군 바이러스 (Porcine reproductive and respiratory syndrome virus), 일본 뇌염 바이러스 (Japanese encephalitis virus), 또는 지카바이러스 (Zika virus) 유래 항원인 것인, 백신 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 면역 증강 물질은 항체의 Fc 영역, 플라젤린(flagellin) 또는 IL-2 (interleukin-2) 중 선택되는 어느 하나 이상인 것인, 백신 조성물.
  3. 청구항 1에 있어서, 상기 백신 조성물은 약독화 생백신 (Live attenuated vaccine), 불활화 백신(Inactivated vaccine), 또는 바이러스 유사입자 백신 (Virus like Particle vaccine)인 것인, 백신 조성물.
KR1020230048990A 2021-03-31 2023-04-13 바이러스 표면 엔지니어링 기반의 면역 증강된 바이러스 백신 KR20230057311A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20210042027 2021-03-31
KR1020210042027 2021-03-31
KR1020210143999A KR102523582B1 (ko) 2021-03-31 2021-10-26 바이러스 표면 엔지니어링 기반의 면역 증강된 바이러스 백신

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020210143999A Division KR102523582B1 (ko) 2021-03-31 2021-10-26 바이러스 표면 엔지니어링 기반의 면역 증강된 바이러스 백신

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20230057311A true KR20230057311A (ko) 2023-04-28

Family

ID=83459406

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020230048990A KR20230057311A (ko) 2021-03-31 2023-04-13 바이러스 표면 엔지니어링 기반의 면역 증강된 바이러스 백신

Country Status (3)

Country Link
US (1) US20240189418A1 (ko)
KR (1) KR20230057311A (ko)
WO (1) WO2022211482A1 (ko)

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100923664B1 (ko) * 2007-09-21 2009-10-28 대한민국(관리부서 : 농림수산식품부 국립수의과학검역원) 돼지 ＩｇＧ의 Ｆｃ 도메인의 세포 표면 발현용 벡터, 상기 벡터에 의해 형질전환된 숙주세포, 상기 숙주세포를 이용한 돼지 질병 관련 바이러스 백신 및 이의 제조방법
EP3119429A4 (en) * 2014-03-21 2018-04-04 Nutech Ventures A non-naturally occuring porcine reproductive and respiratory syndrome virus (prrsv) and methods of using
KR20190096910A (ko) * 2019-08-12 2019-08-20 단국대학교 천안캠퍼스 산학협력단 담즙산에 의해 발현이 유도되는 pedv 백신 제조용 표면발현 벡터, 그에 의해 형질전환된 형질전환유산균과 이들 pedv 백신용 표면발현벡터 및 형질전환된 재조합 유산균의 제조방법

Also Published As

Publication number Publication date
WO2022211482A1 (ko) 2022-10-06
US20240189418A1 (en) 2024-06-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11969467B2 (en) Nucleic acid vaccine against the SARS-CoV-2 coronavirus
EP0830141B1 (en) Improved virus vaccines
UA117732C2 (uk) Парентеральна норовірусна вакцина
CA3233697A1 (en) Recombinant fusion protein derived from hr region of s2 protein of sars-cov-2 and application of recombinant fusion protein
CN109836501A (zh) 一种靶向her2的单链抗体、嵌合抗原受体t细胞及其制备方法和应用
JP2001518455A (ja) 単純疱疹ウイルスの処置のための免疫原性の複合ポリペプチド
CN110343174B (zh) 一种高亲和力的黄热病毒人源单克隆抗体及其应用
KR102523582B1 (ko) 바이러스 표면 엔지니어링 기반의 면역 증강된 바이러스 백신
KR20230057311A (ko) 바이러스 표면 엔지니어링 기반의 면역 증강된 바이러스 백신
EP3981426A1 (en) Adjuvant based on peptide nucleic acid
CN117425667A (zh) 基于病毒表面工程的免疫增强的病毒疫苗
EP4333882A1 (en) Sars-cov-2 subunit vaccine
EP4333883A2 (en) Sars-cov-2 subunit vaccine
CN110343173B (zh) 一种高功能活性的黄热病毒人源单克隆抗体及其应用
US6699478B1 (en) Enhanced immune response to attachment (G) protein of Respiratory Syncytial Virus
CA3184406A1 (en) A dna plasmid sars-coronavirus-2/covid-19 vaccine
CN113817031B (zh) 一种分离的抗原表位多肽
JP2003528614A (ja) 肝炎ウイルスのｏｒｆ２のｎ末端領域に由来するプロセシング成分および抗原性ポリペプチドをコードする核酸構築物
KR20240054479A (ko) 바이러스 표면 엔지니어링 기반의 면역 증강된 돼지 유행성 설사병 바이러스 백신
CN113372441B (zh) 一种高灵敏度的黄热病毒人源单克隆抗体及其应用
CN108728463A (zh) 一种表达IgG抗体的微环DNA载体及其制备方法和应用
TW202203970A (zh) 靶向冠狀病毒的IgY免疫球蛋白、其製備方法、及其使用方法
CN118284431A (zh) SARS-CoV-2亚单位疫苗
KR100267058B1 (ko) B형간염바이러스의다른두항원을동시에인식하는이중특이항체및그의제조방법
NZ627530B (en) Combination adjuvant formulation

Legal Events

Date Code Title Description
A107 Divisional application of patent