KR20230054431A

KR20230054431A - 오토파지 활성화제

Info

Publication number: KR20230054431A
Application number: KR1020237009525A
Authority: KR
Inventors: 유코 나카가미
Original assignee: 가부시끼가이샤 레조낙
Priority date: 2020-09-17
Filing date: 2021-09-17
Publication date: 2023-04-24
Also published as: EP4215199A1; CN116322705A; JPWO2022059775A1; WO2022059775A1; US20230355646A1

Abstract

메틸헤스페리딘을 유효 성분으로서 함유하는, 오토파지 활성화제 및 당해 오토파지 활성화제와 약학적으로 허용되는 담체를 함유하는, 오토파지 활성화용 조성물.

Description

오토파지 활성화제

본 발명은 오토파지 활성화제 및 오토파지 활성화용 조성물에 관한 것이다.

본원은 2020년 9월 17일에, 일본에 출원된 특원 제2020-156459호에 기초하여 우선권을 주장하고, 그 내용을 여기에 원용한다.

오토파지(autophagy)는 기아, 성장 인자 결핍 및 병원체 감염 등의 세포 외 혹은 세포 내의 스트레스 및 시그널에 응답하고, 노후화 혹은 손상된 세포 내 물질 및 오르가넬라를 분해하는 것으로, 에너지의 재생산 및 손상 물질의 제거를 하는 메커니즘이며, 정상적인 세포의 항상성 유지에 중요하다. 과거의 연구로부터, 노화가 진행될수록 세포 내의 오토파지 활성이 급격히 감소한다고 보고되어 있다(비특허문헌 1). 또한, 오토파지를 억제한 경우, 세포 내에 노후 미토콘드리아나 잘못 접힌 단백질 등이 과잉으로 축적되고, 세포 내의 산화 스트레스가 증가함으로써 세포사가 유도되고, 결과로서 세포가 노화하게 된다.

따라서, 세포 내의 노화한 물질 및 오르가넬라를 분해하고, 그 분해 산물을 리사이클하는 오토파지를 활성화함으로써, 세포 내의 불필요한 물질을 신속하게 제거함으로써 세포의 항상성을 높일 수 있다.

한편, 노화가 오토파지에 미치는 영향으로서, 인간의 뇌에서는 가령(加齡)과 함께 ATG5, ATG7 및 Beclin 1 유전자의 발현량이 저하되는 것이 알려져 있다. 또한, 알츠하이머병 등의 신경 변성 질환에서는, 오토파지의 활성 저하가 확인된다고 여겨진다. 그 때문에, 오토파지의 활성화는 알츠하이머병을 비롯하여, 헌팅턴병, 파킨슨병 등의 신경 변성 질환의 치료 및 예방에 기여하는 것이 알려져 있다(비특허문헌 2, 3). 특히 알츠하이머병에서는 오토파지의 기능이 저해되고 있기 때문에, 아밀로이드 β라 불리는 응집 단백질이 생체 내에 축적되고, 이것이 발증에 관련되어 있는 것으로 알려져 있다(비특허문헌 4). 또한, 뇌의 흑질 및 담창구에 있어서의 철의 침착과 대뇌의 위축을 수반하는 신경 변성 질환인 SENDA병(SENDA: static encephalopathy of childhood with neurodegeneration in adulthood), 소화관에 위중한 염증 혹은 궤양을 야기하는 염증성 장질환인 크론병 및 암에 대해서도, 오토파지 관련 유전자나 선택적 오토파지에 관여하는 유전자의 변이가 영향을 미친다고 알려져 있다(비특허문헌 5).

오토파지의 과정은, 효모 및 포유류의 양쪽에서 연구되고 있고, 최대 36의 단백질이 이용되고 있다. 그 중에서도 오토파고솜의 형성으로부터 그 내용물의 분화까지는, 오토파지 관련 유전자(ATG)에 코드되는 Atg 단백질에 의해 제어되고 있고, Atg12-Atg5 결합계, LC3-포스파티딜에탄올아민(PE) 결합계를 포함하는 6개의 그룹으로 분류할 수 있고, 각각이 각 과정에서 단계적으로 작용하고 있다.

한편, 오토파지는 정상 상태에서는 낮은 레벨로 억제되어 있지만, 기아 등 스트레스 하에서는 활성화된다. mTOR(mammalian target of rapamycin)은 효모로부터 포유류에 걸치는 오토파지의 주요한 억제 인자로서 작용하고 있지만, 기아 조건 하에서는 mTOR가 불활성화되어 오토파지가 유도되는 것이 알려져 있다(비특허문헌 6).

오토파지 활성화제로서는, 오토파지의 활성 상태의 마커인 LC3 관련 인자를 증가시켜서 오토파지를 활성화하는 화합물 및 오토파지 플럭스(오토파고솜의 리소좀에 대한 융합을 포함한다)를 촉진하는 화합물이 보고되어 있다(특허문헌 1 내지 4).

또한, 감귤류로부터 추출되는 폴리페놀의 일종인 헤스페리딘은 오토파지를 활성화하는 작용이 있는 것이 알려져 있다(비특허문헌 7).

국제공개 제2018/173653호 일본특허공개 제2018-80204호 공보 일본특허공표 제2018-510902호 공보 일본특허공표 제2019-529514호 공보

Yogendra S. Rajawat et al., Aging: Central role for autophagy and the lysosomal degradative system. Ageing Research Reviews 8 (2009) 199-213. Aaron Barnett et al., Autophagy in Aging and Alzheimer's Disease: Pathologic or Protective?. J Alzheimers Dis. 2011; 25(3): 385-394. Marta M. Lipinski et al., Genome-wide analysis reveals mechanisms modulating autophagy in normal brain aging and in Alzheimer's disease. Proc Natl Acad Sci USA. 2010, 107, 14164-14169. Xiangqing Li et al., Cubeben induces autophagy via PI3K-AKT-mTOR pathway to protect primary neurons against amyloid beta in Alzheimer's disease. Cytotechnology (2019) 71: 679-686. 카게야마 외, 「오토파지와 질환」, 영역 융합 리뷰, 2014년, 3, e006 이노마타 외, 「오토파지와 노화의 관련성」, 기후켄 치과학회 잡지, 2018년, 제45권, 제1호, 1-7 Gowrikumar Saiprasad et al., Hesperidin induces apoptosis and triggers autophagic markers through inhibition of Aurora-A mediated phosphoinositide-3-kinase/Akt/mammalian target of rapamycin and glycogen synthase kinase-3 beta signalling cascades in experimental colon carcinogenesis. European Journal of Cancer (2014) 50, 2489-2507.

상기한 바와 같이 알츠하이머병 등의 여러 가지 질환에 있어서 오토파지 기능이 저하되는 것이 알려져 있고, 오토파지를 효과적으로 활성화할 수 있는 약제가 요구되고 있다. 그러나, 종래 알려져 있는 약제로는, 그 효과는 아직 불충분하다고 할 수 있다.

그래서, 본 발명은 오토파지를 효과적으로 활성화할 수 있는, 오토파지 활성화제 및 상기 오토파지 활성화제를 함유하는 오토파지 활성화용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명은 이하의 양태를 포함한다.

[1] 메틸헤스페리딘을 유효 성분으로서 함유하는, 오토파지 활성화제.

[2] 상기 메틸헤스페리딘이, 하기 일반식 (1)로 표시되는 칼콘체 메틸헤스페리딘 및 하기 일반식 (2)로 표시되는 플라바논체 메틸헤스페리딘으로 이루어지는 군에서 선택되는 1종 이상인, [1]에 기재된 오토파지 활성화제.

[식 (1) 중, R¹ 내지 R⁹는, 각각 독립적으로 메틸기 또는 수소 원자이다. 단, R¹ 내지 R⁹ 중 적어도 1개는 메틸기이다.

식 (2) 중, R¹¹ 내지 R¹⁸은, 각각 독립적으로 메틸기 또는 수소 원자이다. 단, R¹¹ 내지 R¹⁸ 중 적어도 1개는 메틸기이다.]

[3] 상기 메틸헤스페리딘이, 하기 일반식 (3)으로 표시되는 칼콘체 메틸헤스페리딘 및 하기 일반식 (4)로 표시되는 플라바논체 메틸헤스페리딘으로 이루어지는 군에서 선택되는 1종 이상인, [2]에 기재된 오토파지 활성화제.

[식 (3) 중, R²⁰ 내지 R²³은, 각각 독립적으로 메틸기 또는 수소 원자이다.

식 (4) 중, R²⁴ 내지 R²⁵는, 각각 독립적으로 메틸기 또는 수소 원자이다.]

[4] 상기 일반식 (3)으로 표시되는 칼콘체 메틸헤스페리딘이, 하기 표 1에 나타내지는 R²⁰ 내지 R²³의 조합을 갖는 칼콘체-1 내지 3으로 이루어지는 군에서 선택되는 1종 이상인, [3]에 기재된 오토파지 활성화제.

[5] 상기 일반식 (4)로 표시되는 플라바논체 메틸헤스페리딘이, 하기 표 2에 나타내지는 R²⁴ 내지 R²⁵의 조합을 갖는 플라바논체-1 내지 4로 이루어지는 군에서 선택되는 1종 이상인, [3] 또는 [4]에 기재된 오토파지 활성화제.

[6] LC3 유전자의 발현을 촉진하는, [1] 내지 [5]의 어느 하나에 기재된 오토파지 활성화제.

[7] ATG5 유전자의 발현을 촉진하는, [1] 내지 [6]의 어느 하나에 기재된 오토파지 활성화제.

[8] ATG7 유전자의 발현을 촉진하는, [1] 내지 [7]의 어느 하나에 기재된 오토파지 활성화제.

[9] mTOR 유전자의 발현을 억제하는, [1] 내지 [8]의 어느 하나에 기재된 오토파지 활성화제.

[10] 알츠하이머병의 예방 또는 치료에 사용하는, [1] 내지 [9]의 어느 하나에 기재된 오토파지 활성화제.

[11] [1] 내지 [10]의 어느 하나에 기재된 오토파지 활성화제 및 약학적으로 허용되는 담체를 함유하는, 오토파지 활성화용 조성물.

[12] 상기 메틸헤스페리딘의 합계 함유량이, 오토파지 활성화용 조성물 전량에 대하여, 0.01 내지 2질량%인, [11]에 기재된 오토파지 활성화용 조성물.

[13] 비타민 C 유도체 및 비타민 E 유도체로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종의 비타민 유도체 또는 그의 염을 더 함유하는, [11] 또는 [12]에 기재된 오토파지 활성화용 조성물.

[14] 상기 비타민 유도체 또는 그의 염이, 인산아스코르빌, 인산아스코르빌의 지방산 에스테르, 토코페롤인산에스테르 및 그들의 염으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종인, [13]에 기재된 오토파지 활성화용 조성물.

[15]이노시톨에 당이 결합한 이노시톨 유도체를 더 함유하는, [11] 내지 [14]의 어느 하나에 기재된 오토파지 활성화용 조성물.

[16] 상기 당이, 글루코오스 또는 글루코오스를 구성 단위로서 포함하는 올리고당인, [15]에 기재된 오토파지 활성화용 조성물.

본 발명에 따르면, 오토파지를 효과적으로 활성화할 수 있는, 오토파지 활성화제 및 상기 오토파지 활성화제를 함유하는 오토파지 활성화용 조성물을 제공할 수 있다.

(오토파지 활성화제)

일 실시 형태에 있어서, 본 발명은 메틸헤스페리딘을 유효 성분으로서 함유하는, 오토파지 활성화제를 제공한다.

여기서 「오토파지(autophagy)」란, 노후 또는 손상된 세포 내 물질 및 오르가넬라를 분해하는 것으로, 에너지의 재생산 및 손상 물질의 제거를 하는 메커니즘이다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 오토파지 마커인 LC3 유전자, 그리고 오토파고솜에 포함되는 ATG5 유전자 및 ATG7 유전자의 발현을 촉진할 수 있고, 오토파지를 활성화시킬 수 있다. 또한, 오토파지의 억제 인자로서 작용하는 mTOR 유전자의 발현을 억제함으로써, 오토파지를 활성화시킬 수 있다.

<메틸헤스페리딘>

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 메틸헤스페리딘을 유효 성분으로서 포함하는 것이면 특별히 한정되지 않는다. 본 실시 형태의 오토파지 활성화제에 사용되는 메틸헤스페리딘으로서는, 헤스페리딘을 메틸화하고, 물에 가용화한 것이 바람직하다.

메틸헤스페리딘에는, 주로, 하기 일반식 (1)로 표시되는 칼콘형 화합물(칼콘체 메틸헤스페리딘)과, 하기 일반식 (2)로 표시되는 플라바논형 화합물(플라바논체 메틸헤스페리딘)이 있는 것이 알려져 있다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제에 사용되는 메틸헤스페리딘은, 상기 일반식 (1)로 표시되는 칼콘체 메틸헤스페리딘 및 상기 일반식 (2)로 표시되는 플라바논체 메틸헤스페리딘으로 이루어지는 군에서 선택되는 1종 이상인 것이 바람직하다.

상기 일반식 (1) 중, R¹ 내지 R⁹는, 각각 독립적으로 메틸기 또는 수소 원자이며, R¹ 내지 R⁹ 중 적어도 1개는 메틸기이다. R¹ 내지 R⁹ 중, 어느 1 내지 6개가 메틸기인 것이 바람직하고, 어느 2 내지 5개가 메틸기인 것이 보다 바람직하다.

상기 일반식 (2) 중, R¹¹ 내지 R¹⁸은, 각각 독립적으로 메틸기 또는 수소 원자이며, R¹¹ 내지 R¹⁸ 중 적어도 1개는 메틸기이다. R¹¹ 내지 R¹⁸ 중, 어느 1 내지 4개가 메틸기인 것이 바람직하고, 어느 1 내지 3개가 메틸기인 것이 보다 바람직하다.

상기 일반식 (1)로 표시되는 화합물 중에서도, 칼콘체 메틸헤스페리딘으로서는, 하기 일반식 (3)으로 표시되는 화합물이 바람직하다. 상기 일반식 (2)로 표시되는 화합물 중에서도, 플라바논체 메틸헤스페리딘으로서는, 하기 일반식 (4)로 표시되는 화합물이 바람직하다.

상기 일반식 (3) 중, R²⁰ 내지 R²³은, 각각 독립적으로 메틸기 또는 수소 원자이다. 상기 일반식 (3)으로 표시되는 칼콘체 메틸헤스페리딘은, 하기 표 3에 나타내지는 R²⁰ 내지 R²³의 조합을 갖는 칼콘체-1 내지 3으로 이루어지는 군에서 선택되는 1종 이상인 것이 바람직하다.

상기 일반식 (4) 중, R²⁴ 내지 R²⁵는, 각각 독립적으로 메틸기 또는 수소 원자이다. 상기 일반식 (4)로 표시되는 플라바논체 메틸헤스페리딘으로서는, 하기 표 4에 나타내지는 R²⁴ 내지 R²⁵의 조합을 갖는 플라바논체-1 내지 4로 이루어지는 군에서 선택되는 1종 이상인 것이 바람직하다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제에 사용되는 메틸헤스페리딘은, 1종 단독이여도 되고, 2종 이상의 혼합물이어도 된다. 메틸헤스페리딘은, 상기 일반식 (1)로 표시되는 칼콘체 메틸헤스페리딘 또는 상기 일반식 (3)으로 표시되는 칼콘체 메틸헤스페리딘과, 상기 일반식 (2)로 표시되는 플라바논체 메틸헤스페리딘 또는 상기 일반식 (4)로 표시되는 플라바논체 메틸헤스페리딘의, 양쪽을 포함하는 것이어도 되고, 한쪽만을 포함하는 것이어도 된다. 메틸헤스페리딘은, 상기 일반식 (3)으로 표시되는 칼콘체 메틸헤스페리딘 및 상기 일반식 (4)로 표시되는 플라바논체 메틸헤스페리딘을 포함하는 것이어도 된다. 또한, 메틸헤스페리딘은, 상기 칼콘체-1 내지 3의 어느 1종 이상을 포함하는 것이어도 되고, 상기 플라바논체-1 내지 4의 어느 1종 이상을 포함하는 것이어도 된다.

또한, 본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 메틸헤스페리딘으로서, 칼콘체-1 내지 3 및 플라바논체-1 내지 3의 혼합물을 포함하는 것이어도 된다.

메틸헤스페리딘은 공지된 방법에 의해 제조할 수 있다. 메틸헤스페리딘은, 예를 들어 감귤류의 과피 등으로 제조된 헤스페리딘을 수산화나트륨 수용액에 녹이고, 그 알칼리 용액에 대응량의 디메틸 황산을 작용시켜서, 반응액을 황산으로 중화하고, n-부틸알코올로 추출하고, 용매를 증류 제거한 뒤, 이소프로필알코올로 재결정함으로써 제조할 수 있다(사키에키, 일본 화학 잡지, (1958) Vol.79, pp.733-736; 일본특허 6312333호 공보). 메틸헤스페리딘의 제조 방법은, 상기 방법에 한정되지 않는다.

메틸헤스페리딘은, 시판품(예를 들어, 의약품 첨가물, 식품 첨가물 및 화장품 원료로서 유통되고 있는 것, 또는 「메틸헤스페리딘」(쇼와 덴코 가부시키가이샤), 「메틸헤스페리딘」(도쿄 가세이 고교 사), 「헤스페리딘메틸칼콘」(Sigma사) 등)을 구입해서 사용할 수도 있다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 알츠하이머병, 헌팅턴병, 파킨슨병 등의 신경 변성 질환의 치료의 목적으로, 그 자체를 환자에게 투여해서 사용할 수 있다. 또한, 본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 오토파지를 활성화할 목적으로, 의약품이나 화장품에 배합해서 사용할 수도 있다. 또한, 후술하는 오토파지 활성화용 조성물에 배합해서 사용해도 된다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 LC3 유전자의 발현을 촉진함으로써, 오토파지를 효과적으로 활성화할 수 있다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 ATG5 유전자의 발현을 촉진함으로써, 오토파지를 효과적으로 활성화할 수 있다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 ATG7 유전자의 발현을 촉진함으로써, 오토파지를 효과적으로 활성화할 수 있다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 mTOR 유전자의 발현을 억제함으로써, 오토파지를 효과적으로 활성화할 수 있다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 오토파지를 효과적으로 활성화할 수 있으므로, 알츠하이머병의 예방 또는 치료에 사용할 수 있다.

아밀로이드 β는 신경 세포에 있어서의 오토파지의 저하를 야기하는 것이 알려져 있다. 또한, 아밀로이드 β는 오토파지의 저하와 그것에 의한 신경 세포의 아포토시스라고 불리는 세포사를 유인하는 것으로 알려져 있다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 아밀로이드 β 존재 하에서의 LC3 유전자 발현을 촉진시킬 수 있다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 아밀로이드 β 존재 하에서의 ATG5 유전자 발현을 촉진시킬 수 있다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 아밀로이드 β 존재 하에서의 ATG7 유전자 발현을 촉진시킬 수 있다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 아밀로이드 β 존재 하에서의 아포토시스를 억제할 수 있다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 특히 신경 세포에 있어서, 아밀로이드 β 존재 하에서의 LC3 유전자, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종의 유전자의 발현을 촉진시킬 수 있다. 또한, 본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 특히 신경 세포에 있어서, 아밀로이드 β 존재 하에서의 아포토시스를 억제할 수 있다.

아밀로이드 β 존재 하에서 LC3 유전자 발현을 촉진시킨다는 것은, 아밀로이드 β 존재 하에서, 본 실시 형태의 오토파지 활성화제를 투여함으로써, 상기 오토파지 활성화제를 투여하지 않은 경우와 비교하여, LC3 유전자의 발현량이 상승하는 것을 의미한다. ATG5 유전자 및 ATG7 유전자에 대해서도 마찬가지이다.

아밀로이드 β 존재 하에서 아포토시스를 억제한다는 것은, 아밀로이드 β 존재 하에서, 본 실시 형태의 오토파지 활성화제를 투여함으로써, 상기 오토파지 활성화제를 투여하지 않은 경우와 비교하여, 아포토시스가 억제되는 것을 의미한다.

LC3(microtubule associated protein 1 light chain 3 alpha: NCBI Gene ID: 84557)은, 오토파지의 시그널 전달 상류에서 포스파티딜에탄올아민을 부가받고, 오토파고솜막으로 유인되는 LC3-II로 변환되어, 오토파고솜막에 결합한다. LC3은 오토파고솜의 마커로서 사용된다. 인간 LC3 유전자의 염기 서열로서는, 예를 들어 NCBI Reference Sequence 데이터베이스에 등록되어 있는 NM_032514.4 및 NM_181509.3 등을 들 수 있다.

ATG5(autophagy related 5: NCBI Gene ID: 9474)는, ATG12와 결합하여, 유비퀴틴과 같은 공액계에서 E1과 같은 활성화 효소로서 기능한다. 인간 ATG5 유전자의 염기 서열로서는, 예를 들어 NCBI Reference Sequence 데이터베이스에 등록되어 있는 NM_001286106.1, NM_001286107.1, NM_001286108.1, NM_001286111.1 및 NM_004849.4등을 들 수 있다.

ATG7(autophagy related 7: NCBI Gene ID: 10533)은, ATP 의존적으로 LC3 및 ATG12를 활성화하는 E1과 같은 활성화 효소로서 기능한다. 인간 ATG7 유전자의 염기 서열로서는, 예를 들어 NCBI Reference Sequence 데이터베이스에 등록되어 있는 NM_001136031.3, NM_001144912.2, NM_001349232.2, NM_001349233.2, NM_001349234.2 등을 들 수 있다.

mTOR(mechanistic target of rapamycin kinase: NCBI Gene ID: 2475)은, 포스파티딜이노시톨 키나아제 관련 키나아제의 1종이며, DNA 손상 및 영양 결핍 등의 스트레스에 대한 세포 응답을 매개한다. mTOR은 오토파지의 억제 인자로서 기능한다. 인간 mTOR 유전자의 염기 서열로서는, 예를 들어 NCBI Reference Sequence데이터베이스에 등록되어 있는 NM_004958.4 등을 들 수 있다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 알츠하이머병, 헌팅턴병, 파킨슨병 등의 신경 변성 질환의 발증 리스크가 높은 환자에게 투여하여, 알츠하이머병, 헌팅턴병, 파킨슨병 등의 신경 변성 질환을 예방하기 위해 사용해도 된다. 또한, 본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 알츠하이머병, 헌팅턴병, 파킨슨병 등의 신경 변성 질환을 발증한 환자에게 투여하여, 신경 변성 질환의 진행이나 악화를 억제하기 위해서 사용해도 된다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화제는 후술하는 오토파지 활성화용 조성물과 마찬가지 방법으로 환자에게 투여할 수 있고, 경구적으로 투여해도 되고, 비경구적으로 투여해도 되고, 정맥 내, 동맥 내, 근육 내, 피내, 피하, 복강 내 등에 투여해도 되고, 좌제로서 직장 내 투여해도 되고, 피부 외용제로서 피부에 투여해도 된다.

(오토파지 활성화용 조성물)

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물은, 상술한 메틸헤스페리딘을 함유하는 오토파지 활성화제와, 약학적으로 허용되는 담체를 함유한다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물은, 통상의 방법(예를 들어, 일본 약전 기재된 방법)에 따라, 상술한 오토파지 활성화제, 약학적으로 허용되는 담체 및 경우에 따라서는 다른 성분을 혼합해서 제제화함으로써 제조할 수 있다.

본 명세서에 있어서, 「약학적으로 허용되는 담체」란, 유효 성분의 생리 활성을 저해하지 않고, 또한 그 투여 대상에 대하여 실질적인 독성을 나타내지 않는 담체를 의미한다.

또한, 「실질적인 독성을 나타내지 않는다」란, 그 성분이 통상 사용되는 투여량에 있어서, 투여 대상에 대하여 독성을 나타내지 않는 것을 의미한다.

약학적으로 허용되는 담체로서는, 특별히 제한되지 않고, 부형제, 결합제, 붕괴제, 활택제, 안정제, 희석제, 주사제용 용제, 보습제, 감촉 향상제, 계면 활성제, 고분자·증점·겔화제, 용제, 분사 제조, 산화 방지제, 환원제, 산화제, 킬레이트제, 산, 알칼리, 분체, 무기염, 물, 금속 함유 화합물, 불포화 단량체, 다가 알코올, 고분자 첨가제, 습윤제, 증점제, 점착 부여 물질, 유성 원료, 액상 매트릭스, 지용성 물질, 고분자 카르복실산염 등을 들 수 있다.

이들 성분의 구체예로서는, 예를 들어 국제공개 공보 제2016/076310호에 기재된 것 등을 들 수 있다. 또한, 고분자·증점·겔화제의 구체예로서는, 메타크로일옥시에틸포스포릴콜린, 메타크릴산부틸 또는 이들 중합체 등을 들 수 있다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물에 있어서의 약학적으로 허용되는 담체는, 1종을 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 병용해도 된다.

또한, 다른 성분으로서는, 특별히 제한되지 않고, 방부제, 항균제, 자외선 흡수제, 미백제, 메틸헤스페리딘 이외의 비타민류 및 그의 유도체류, 소염제, 항염증제, 육모용 약제, 혈행 촉진제, 자극제, 호르몬류, 주름 방지제, 항노화제, 당김제, 냉감제, 온감제, 창상 치유 촉진제, 자극 완화제, 진통제, 세포 부활제, 식물·동물·미생물 엑기스, 종자유, 진양제, 각질 박리·용해제, 땀 억제제, 청량제, 수렴제, 효소, 핵산, 향료, 색소, 착색제, 염료, 안료, 소염 진통제, 항진균제, 항히스타민제, 최면 진정제, 정신 안정제, 항고혈압제, 강압 이뇨제, 항생 물질, 마취제, 항균성 물질, 항간질제, 관혈관 확장제, 생약, 가려움 억제제, 각질 연화 박리제, 자외선 차단제, 살균제, 항산화 물질, pH 조정제, 첨가제, 금속 비누 등을 들 수 있다. 이들 성분의 구체예로서는, 예를 들어 국제공개 공보 제2016/076310호에 기재된 것 등을 들 수 있다. 또한, 식물·동물·미생물 엑기스의 구체예로서는, 서양개보리뺑이(Lapsana communis) 꽃/잎/줄기, 녹차잎 등을 들 수 있다. 종자유의 구체예로서는, 모링가 종자유를 들 수 있다. 향료의 구체예로서는, 페릴알데히드를 들 수 있다.

다른 성분은, 1종을 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 병용해도 된다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물은, 상기 오토파지 활성화제를 치료적 유효량 함유할 수 있다. 「치료적 유효량」이란, 환자의 질환 치료 또는 예방하는 데 유효한 약제의 양을 의미한다. 치료적 유효량은, 투여 대상의 질환 상태, 연령, 성별 및 체중 등에 따라 변동할 수 있다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물에 있어서, 상기 오토파지 활성화제의 치료적 유효량은 메틸헤스페리딘이, 오토파지를 활성화할 수 있는 양일 수 있다. 또한, 상기 오토파지 활성화제의 치료적 유효량은 메틸헤스페리딘이 LC3 유전자, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종의 유전자의 발현을 촉진할 수 있는 양일 수 있다. 또한, 상기 오토파지 활성화제의 치료적 유효량은, 메틸헤스페리딘이 mTOR 유전자의 발현을 억제할 수 있는 양일 수 있다. 또한, 상기 오토파지 활성화제의 치료적 유효량은 메틸헤스페리딘이 아밀로이드 β의 존재 하에서, 아포토시스를 억제할 수 있는 양일 수 있다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물에 있어서의 상기 오토파지 활성화제의 치료적 유효량(메틸헤스페리딘의 합계 함유량)은 오토파지 활성화용 조성물 전량에 대하여, 예를 들어 0.01 내지 2질량%여도 되고, 예를 들어 0.05 내지 1.5질량%여도 되고, 예를 들어 0.1 내지 1.0질량%여도 된다.

또한, 메틸헤스페리딘의 합계 함유량이란, 1종의 메틸헤스페리딘을 단독으로 사용하는 경우에는 그 화합물의 함유량을 의미하고, 메틸헤스페리딘을 2종 이상 조합하고 사용하는 경우에는, 이들 화합물의 합계 함유량을 의미한다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물은, 상기 오토파지 활성화제에 더하여, 다른 오토파지 활성화 성분을 포함하고 있어도 된다. 다른 오토파지 활성화 성분으로서는, 예를 들어 비타민 C 유도체 및 비타민 E 유도체로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종의 비타민 유도체 또는 그의 염, 그리고 이노시톨에 당이 결합한 이노시톨 유도체를 들 수 있다.

<비타민 C 유도체 또는 그의 염>

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물은, 상기 오토파지 활성화제에 더하여, 비타민 C 유도체 또는 그의 염을 함유하는 것이 바람직하다. 비타민 C 유도체 또는 그의 염을 함유함으로써, 오토파지의 활성화 작용이 보다 향상된다.

비타민 C 유도체로서는, 아스코르브산의 적어도 하나의 수산기를 유도화한 아스코르브산 유도체를 들 수 있다.

상기 아스코르브산 유도체로서, 보다 구체적으로는, 아스코르브산의 수산기의 어느 것을 인산에스테르화시킨 인산아스코르빌(아스코르브산인산에스테르라고도 한다); 아스코르브산의 수산기의 어느 것을 인산에스테르화하고, 다른 수산기를 지방산에 의해 에스테르화시킨 인산아스코르빌의 지방산 에스테르; 아스코르브산의 수산기의 어느 것을 에톡시화시킨 에틸아스코르브산; 아스코르브산의 수산기의 어느 것을 글루코시드화시킨 아스코르브산글루코시드; 아스코르브산의 수산기의 어느 것을 아실화시킨 아실화 아스코르브산; 아스코르브산의 수산기의 어느 것을 아실화하고, 다른 수산기를 인산에스테르화시킨 아실화 인산아스코르빌; 아스코르브산의 수산기의 어느 것을 글리세린으로 치환한 글리세릴아스코르브산; 인산을 통해 아스코르브산과 토코페롤이 각각 에스테르 결합으로 결합한 아스코르브산과 토코페롤의 인산 디에스테르(구체적으로는, dl-α-토코페롤2-L-아스코르브산인산디에스테르 등) 등을 들 수 있다.

아스코르브산 유도체의 염으로서는, 예를 들어 아스코르브산 유도체와 무기 염기와의 염, 아스코르브산 유도체와 유기 염기와의 염 등을 들 수 있다.

무기 염기와의 염으로서는, 예를 들어 나트륨염, 칼륨염 등의 알칼리 금속염; 칼슘염, 마그네슘염 등의 알칼리 토류 금속염; 알루미늄염; 암모늄염; 아연염 등을 들 수 있다.

유기 염기와의 염으로서는, 예를 들어 알킬암모늄염, 염기성 아미노산과의 염 등을 들 수 있다.

아스코르브산 유도체 또는 그의 염으로서는, 상기한 것 중에서도, (i) 인산아스코르빌 또는 그의 염, (ii) 인산아스코르빌의 지방산 에스테르 또는 그의 염, (iii) 에틸아스코르브산 또는 그의 염, (iv) 아스코르브산글루코시드 또는 그의 염이 바람직하고, (i) 인산아스코르빌 또는 그의 염, (ii) 인산아스코르빌의 지방산 에스테르 또는 그의 염이 보다 바람직하다.

≪(i) 인산아스코르빌 또는 그의 염≫

·인산아스코르빌

인산아스코르빌은 아스코르브산의 적어도 하나의 수산기에 인산기가 도입된 화합물이다.

인산아스코르빌로서는, 하기 화학식 (5)로 표시되는 화합물을 적합하게 들 수 있다.

하기 화학식 (5)로 표시되는 화합물은, 아스코르브산의 2위의 수산기를 인산에스테르에 의해 보호한, 아스코르브산-2-인산에스테르이다.

인산아스코르빌에는, D체 및 L체의 입체 이성체, 그리고 라세미체의 DL체가 존재한다. 본 실시 형태에 있어서의 인산아스코르빌은, 이들의 입체 이성체의 어느 것이어도 되지만, 입수 용이성의 관점에서, L체인 것이 바람직하고, 구체적으로는, L-아스코르브산-2-인산에스테르가 바람직하다.

·인산아스코르빌의 염

인산아스코르빌의 염으로서는, 예를 들어 인산아스코르빌과 무기 염기와의 염, 인산아스코르빌과 유기 염기와의 염 등을 들 수 있다.

인산아스코르빌의 염으로서는, 상기한 것 중에서도, 알칼리 금속염 또는 알칼리 토류 금속염이 바람직하고, 나트륨염 또는 마그네슘염이 보다 바람직하고, 마그네슘염이 더욱 바람직하다.

인산아스코르빌의 마그네슘염은, 안정성이 높고, 또한 착색되기 어렵다고 하는 관점에서 바람직하다.

인산아스코르빌 또는 그의 염으로서는, 상기한 것 중에서도, 안정성 향상의 관점에서, 인산아스코르빌의 염인 것이 바람직하고, 상기 화학식 (5)로 표시되는 화합물의 알칼리 금속염 또는, 상기 화학식 (5)로 표시되는 화합물의 알칼리 토류 금속염이 보다 바람직하고, 상기 화학식 (5)로 표시되는 화합물의 나트륨염 또는, 상기 화학식 (5)로 표시되는 화합물의 마그네슘염이 더욱 바람직하다.

상기 화학식 (5)로 표시되는 화합물의 마그네슘염은, 구체적으로는, L-아스코르브산-2-인산에스테르의 마그네슘염이 특히 바람직하다.

상기 화학식 (5)로 표시되는 화합물의 나트륨염은, 구체적으로는, L-아스코르브산-2-인산에스테르의 나트륨염이 특히 바람직하다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물에 있어서, 인산아스코르빌 또는 그의 염은, 1종 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 병용해서 사용해도 된다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물이 인산아스코르빌 또는 그의 염을 함유하는 경우, 그 함유량은, 오토파지 활성화용 조성물 전량에 대하여, 0.1 내지 15질량%인 것이 바람직하고, 0.5 내지 10질량%인 것이 보다 바람직하고, 1 내지 5질량%인 것이 더욱 바람직하다.

인산아스코르빌 또는 그의 염은, 공지된 제조 방법, 예를 들어 일본특허공개 평2-279690, 일본특허공개 평6-345786에 기재된 방법 등에 의해 제조할 수 있다.

예를 들어, 인산아스코르빌의 구체적인 제조 방법으로서는, 아스코르브산과, 옥시염화인 등을 반응시켜서, 포스포릴화함으로써 얻을 수 있다.

또한, 인산아스코르빌의 염의 구체적인 제조 방법으로서는, 인산아스코르빌 용액을, 산화마그네슘 등의 금속 산화물 또는, 수산화나트륨 등의 금속 수산화물 등으로 중화함으로써, 인산아스코르빌의 염을 얻을 수 있다.

인산아스코르빌의 염의 시판품의 예로서는, 쇼와 덴코사제의 아스코르브산 PS(화합물명; L-아스코르브산-2-인산에스테르의 나트륨염(L-아스코르브산-2-인산나트륨이라고도 한다), 표시 명칭; 아스코르빌인산 Na), 쇼와 덴코사제의 아스코르브산 PM(화합물명; L-아스코르브산-2-인산에스테르의 마그네슘염(L-아스코르브산-2-인산 마그네슘이라고도 한다), 표시 명칭; 인산아스코르빌 Mg) 등을 들 수 있다.

≪(ii) 인산아스코르빌의 지방산 에스테르 또는 그의 염≫

·인산아스코르빌의 지방산 에스테르

인산아스코르빌의 지방산 에스테르는, 인산아스코르빌의 적어도 하나의 수산기에 지방산이 에스테르 결합한 화합물이다. 해당 지방산으로서는, 탄소 원자수 6 내지 22의 직쇄상 또는 분지쇄상의 지방산(즉, 카르복시기에 결합하는 직쇄상 또는 분지쇄상의 알킬기 탄소 원자수가 5 내지 21인 지방산)인 것이 바람직하고, 탄소 원자수 10 내지 20의 직쇄상 또는 분지쇄상의 지방산인 것이 보다 바람직하고, 탄소 원자수 12 내지 18의 직쇄상 또는 분지쇄상의 지방산인 것이 더욱 바람직하다.

인산아스코르빌의 지방산 에스테르로서는, 하기 일반식 (6)으로 표시되는 화합물을 들 수 있다. 하기 일반식 (6)으로 표시되는 화합물은, 아스코르브산의 2위의 수산기에 인산이 에스테르 결합하고, 6위의 수산기에 지방산이 에스테르 결합한, 아스코르브산-2-인산-6-지방산이다.

[식 중, Rc¹은 탄소 원자수 5 내지 21의 직쇄상 또는 분지쇄상의 알킬기이다.]

상기 일반식 (6) 중, Rc¹은 탄소 원자수 5 내지 21의 직쇄상 또는 분지쇄상의 알킬기이다. 구체적으로는, 직쇄상 또는 분지쇄상의 펜틸기, 직쇄상 또는 분지쇄상의 헥실기, 직쇄상 또는 분지쇄상의 헵틸기, 직쇄상 또는 분지쇄상의 옥틸기, 직쇄상 또는 분지쇄상의 노닐기, 직쇄상 또는 분지쇄상의 데실기, 직쇄상 또는 분지쇄상의 운데실기, 직쇄상 또는 분지쇄상의 도데실기, 직쇄상 또는 분지쇄상의 트리데실기, 직쇄상 또는 분지쇄상의 테트라데실기, 직쇄상 또는 분지쇄상의 펜타데실기, 직쇄상 또는 분지쇄상의 헥사데실기, 직쇄상 또는 분지쇄상의 헵타데실기, 직쇄상 또는 분지쇄상의 옥타데실기, 직쇄상 또는 분지쇄상의 노나데실기, 직쇄상 또는 분지쇄상의 이코실기, 직쇄상 또는 분지쇄상의 헨이코실기를 들 수 있다.

상기 일반식 (6) 중, Rc¹은 상기한 것 중에서도, 탄소 원자수 9 내지 19의 직쇄상 또는 분지쇄상의 알킬기인 것이 바람직하고, 탄소 원자수 11 내지 17의 직쇄상 또는 분지쇄상의 알킬기인 것이 보다 바람직하고, 탄소 원자수 13 내지 15의 직쇄상 또는 분지쇄상의 알킬기인 것이 더욱 바람직하고, 원료 입수성 등의 관점에서, 탄소 원자수 15의 직쇄상 알킬기(직쇄상의 펜타데실기)인 것이 특히 바람직하다.

즉, 상기 일반식 (6)으로 표시되는 화합물로서는, 6-O-팔미토일아스코르브산-2-인산에스테르(아스코르브산-2-인산-6-팔미트산이라고도 한다)이 특히 바람직하다.

인산아스코르빌의 지방산 에스테르에는, D체 및 L체의 입체 이성체, 그리고 라세미체의 DL체가 존재한다. 본 실시 형태에 있어서의 인산아스코르빌의 지방산 에스테르는, 이들의 입체 이성체의 어느 것이어도 되지만, 입수 용이성의 관점에서, L체인 것이 바람직하고, 구체적으로는, L-아스코르브산-2-인산에스테르의 지방산 에스테르가 바람직하다.

·인산아스코르빌의 지방산 에스테르의 염

인산아스코르빌의 지방산 에스테르의 염으로서는, 예를 들어 인산아스코르빌의 지방산 에스테르와 무기 염기와의 염, 인산아스코르빌의 지방산 에스테르와 유기 염기와의 염 등을 들 수 있다.

인산아스코르빌의 지방산 에스테르의 염으로서는, 상기한 것 중에서도, 알칼리 금속염 또는 알칼리 토류 금속염이 바람직하고, 나트륨염 또는 마그네슘염이 보다 바람직하고, 나트륨염이 더욱 바람직하다.

인산아스코르빌의 지방산 에스테르 나트륨염은, 안정성 및 제제에 대한 배합 용이성의 관점에서 바람직하다.

인산아스코르빌의 지방산 에스테르 또는 그의 염으로서는, 상기한 것 중에서도, 안정성 및 제제에 대한 배합 용이성의 관점에서 인산아스코르빌의 지방산 에스테르의 염인 것이 바람직하고, 상기 일반식 (6)으로 표시되는 화합물의 알칼리 금속염 또는, 상기 일반식 (6)으로 표시되는 화합물의 알칼리 토류 금속염이 보다 바람직하고, 상기 일반식 (6)으로 표시되는 화합물의 나트륨염 또는, 상기 일반식 (6)으로 표시되는 화합물의 마그네슘염이 더욱 바람직하고, 상기 일반식 (6)으로 표시되는 화합물의 나트륨염, 구체적으로는, L-아스코르브산-2-인산-6-팔미트산의 나트륨염이 특히 바람직하다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물에 있어서, 인산아스코르빌의 지방산 에스테르 또는 그의 염은, 1종 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 병용해서 사용해도 된다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물이 인산아스코르빌의 지방산 에스테르 또는 그의 염을 함유하는 경우, 그 함유량은, 0.05 내지 12질량%인 것이 바람직하고, 0.05 내지 5질량%인 것이 보다 바람직하고, 0.1 내지 2질량%인 것이 더욱 바람직하다.

인산아스코르빌의 지방산 에스테르 또는 그의 염은, 공지된 제조 방법, 예를 들어 일본특허 6265550에 기재된 방법 등에 의해 제조할 수 있다.

예를 들어, 인산아스코르빌의 지방산 에스테르의 구체적인 제조 방법으로서는, 상술한 인산아스코르빌의 제조 방법과 마찬가지 방법으로 인산아스코르빌을 제조한 후, 해당 인산아스코르빌과, 지방산 또는 그 에스테르를 축합 반응시킴으로써 얻을 수 있다.

또한, 인산아스코르빌의 지방산 에스테르의 염의 구체적인 제조 방법으로서는, 인산아스코르빌의 지방산 에스테르 용액을, 산화마그네슘 등의 금속 산화물 또는, 수산화나트륨 등의 금속 수산화물 등으로 중화함으로써, 인산아스코르빌의 지방산 에스테르의 염을 얻을 수 있다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물에 있어서의 인산아스코르빌의 지방산 에스테르의 염의 시판품의 예로서는, 쇼와 덴코사제의 아프레시에(등록상표)(APPS)(화합물명; L-아스코르브산-2-인산-6-팔미트산의 나트륨염(L-6-O-팔미토일아스코르브산-2-인산에스테르의 나트륨염이라고도 한다), 표시 명칭; 팔미트산 아스코르빌인산 3Na) 등을 들 수 있다.

≪(iii) 에틸아스코르브산 또는 그의 염≫

·에틸아스코르브산

에틸아스코르브산은 아스코르브산의 적어도 하나의 수산기에 에틸기가 도입된 화합물이다.

에틸아스코르브산으로서는, 하기 화학식 (7)로 표시되는 화합물을 적합하게 들 수 있다.

하기 화학식 (7)로 표시되는 화합물은, 아스코르브산의 3위의 수산기인 수소 원자를 에틸기에 의해 치환한, 3-O-에틸아스코르브산이다.

에틸아스코르브산에는, D체 및 L체의 입체 이성체, 그리고 라세미체의 DL체가 존재한다. 에틸아스코르브산은, 이들의 입체 이성체의 어느 것이어도 되지만, 입수 용이성의 관점에서, L체인 것이 바람직하고, 구체적으로는, L-3-O-에틸아스코르브산(3-O-에틸-L-아스코르브산이라고도 한다)이 바람직하다.

·에틸아스코르브산의 염

에틸아스코르브산의 염으로서는, 예를 들어 에틸아스코르브산과 무기 염기와의 염, 에틸아스코르브산과 유기 염기와의 염 등을 들 수 있다.

에틸아스코르브산 또는 그의 염으로서는, 상기한 것 중에서도, 입수 용이성의 관점에서, 에틸아스코르브산인 것이 바람직하고, L-3-O-에틸아스코르브산이 보다 바람직하다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물에 있어서, 에틸아스코르브산 또는 그의 염은, 1종 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 병용해서 사용해도 된다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물이 에틸아스코르브산 또는 그의 염을 함유하는 경우, 그 함유량은 오토파지 활성화용 조성물 전량에 대하여, 0.1 내지 15질량%인 것이 바람직하고, 0.5 내지 10질량%인 것이 보다 바람직하고, 1 내지 5질량%인 것이 더욱 바람직하다.

에틸아스코르브산 또는 그의 염은, 공지된 제조 방법으로 제조할 수 있다.

예를 들어, 에틸아스코르브산의 제조 방법으로서는, 아스코르브산을 디메틸술폭시드(DMSO) 중에서 나트륨 메톡시드 존재 하에 할로겐화 알킬에 의해 알킬화하는 방법; 일본특허공개 평8-134055, 일본특허공개 평1-228977에 기재된 방법 등에 의해 제조할 수 있다.

또한, 에틸아스코르브산의 염의 구체적인 제조 방법으로서는, 에틸아스코르브산 용액을, 산화마그네슘 등의 금속 산화물 또는, 수산화나트륨 등의 금속 수산화물 등으로 중화함으로써, 에틸아스코르브산의 염을 얻을 수 있다.

에틸아스코르브산의 시판품의 예로서는, 후지 필름 와코준야쿠사제의 3-O-에틸-L-아스코르브산(표시 명칭; 3-O-에틸아스코르브산) 등을 들 수 있다.

≪(iv) 아스코르브산글루코시드 또는 그의 염≫

·아스코르브산글루코시드

아스코르브산글루코시드는 아스코르브산의 적어도 하나의 수산기가 글루코시드화된 화합물이다. 글루코시드 결합은 α-글루코시드 결합인 것이 바람직하다.

아스코르브산글루코시드로서는, 하기 화학식 (8)로 표시되는 화합물을 적합하게 들 수 있다.

하기 화학식 (8)로 표시되는 화합물은 아스코르브산의 2위의 수산기에 글루코오스가 결합한, 아스코르브산 2-글루코시드이다.

아스코르브산에는 D체 및 L체의 입체 이성체, 그리고 라세미체의 DL체가 존재한다. 아스코르브산글루코시드 중의 아스코르브산은, 이들의 입체 이성체의 어느 것이어도 되지만, 입수 용이성의 관점에서, L체인 것이 바람직하고, 아스코르브산글루코시드는, 구체적으로는 L-아스코르브산 2-글루코시드가 바람직하다. 아스코르브산글루코시드중의 글루코오스는, D체이거나 L체여도 되지만, 입수 용이성의 관점에서, D체인 것이 바람직하다.

·아스코르브산글루코시드의 염

아스코르브산글루코시드의 염으로서는, 예를 들어 아스코르브산글루코시드와 무기 염기와의 염, 아스코르브산글루코시드와 유기 염기와의 염 등을 들 수 있다.

아스코르브산글루코시드 또는 그의 염으로서는, 상기한 것 중에서도, 입수 용이성의 관점에서, 아스코르브산글루코시드인 것이 바람직하고, L-아스코르브산 2-글루코시드가 보다 바람직하다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물에 있어서, 아스코르브산글루코시드 또는 그의 염은, 1종 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 병용해서 사용해도 된다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물이 아스코르브산글루코시드 또는 그의 염을 함유하는 경우, 그 함유량은, 오토파지 활성화용 조성물 전량에 대하여, 0.1 내지 15질량%인 것이 바람직하고, 0.5 내지 10질량%인 것이 보다 바람직하고, 1 내지 5질량%인 것이 더욱 바람직하다.

아스코르브산글루코시드 또는 그의 염은, 예를 들어 일본특허공개 평03-139288에 기재된 방법 등에 의해 제조할 수 있다.

예를 들어, 아스코르브산글루코시드의 구체적인 제조 방법으로서는, 아스코르브산의 2위의 수산기에 글루코오스 1분자를 효소 반응으로 α-글루코시드 결합시킴으로써 제조할 수 있다.

또한, 아스코르브산글루코시드의 염의 구체적인 제조 방법으로서는, 아스코르브산글루코시드 용액을, 산화마그네슘 등의 금속 산화물 또는, 수산화나트륨 등의 금속 수산화물 등으로 중화함으로써, 아스코르브산글루코시드의 염을 얻을 수 있다.

아스코르브산글루코시드의 시판품의 예로서는, 하야시바라사제의 아스코르브산 2-글루코시드(화합물명; L-아스코르브산 2-글루코시드, 표시 명칭; 아스코르빌 글루코시드) 등을 들 수 있다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물에 있어서, 아스코르브산 유도체 또는 그의 염은, 1종 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 병용해서 사용해도 된다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물이 함유하는 아스코르브산 유도체 또는 그의 염으로서는, 상기한 것 중에서도, 보다 오토파지를 활성화할 수 있는 관점에서, (i) 인산아스코르빌 혹은 그의 염 또는 (ii) 인산아스코르빌의 지방산 에스테르 혹은 그의 염인 것이 바람직하고, (ii) 인산아스코르빌의 지방산 에스테르 또는 그의 염인 것이 보다 바람직하다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물은, 메틸헤스페리딘에 더하여, 아스코르브산 유도체 또는 그의 염을 함유함으로써, LC3 유전자, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자의 발현을 보다 촉진할 수 있다.

또한, 본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물은, 메틸헤스페리딘에 더하여, 아스코르브산 유도체 또는 그의 염을 함유함으로써, mTOR 유전자의 발현을 보다 억제할 수 있다.

또한, 본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물은, 메틸헤스페리딘에 더하여, 아스코르브산 유도체 또는 그의 염을 함유함으로써, 특히 신경 세포에 있어서, 아밀로이드 β 존재 하에서의 LC3 유전자, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자의 발현을 보다 촉진할 수 있다.

또한, 본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물은, 메틸헤스페리딘에 더하여, 아스코르브산 유도체 또는 그의 염을 함유함으로써, 특히 신경 세포에 있어서, 아밀로이드 β 존재 하에서의 아포토시스를 보다 억제할 수 있다.

<비타민 E 유도체 또는 그의 염>

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물은, 상기 오토파지 활성화제에 더하여, 비타민 E 유도체 또는 그의 염을 함유하는 것이 바람직하다. 비타민 E 유도체 또는 그의 염을 함유함으로써, 오토파지의 활성화 작용이 보다 향상된다.

비타민 E 유도체로서는, 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염을 들 수 있다.

토코페롤인산에스테르로서는, 하기 일반식 (9)로 표시되는 화합물을 들 수 있다.

[식 중, Rd¹, Rd² 및 Rd³은, 서로 독립적으로, 수소 원자 또는 메틸기를 나타낸다.]

토코페롤인산에스테르에는, 상기 일반식 (9) 중의 Rd¹, Rd², Rd³에 의해, α-토코페롤인산에스테르(Rd¹, Rd², Rd³=CH₃), β-토코페롤인산에스테르(Rd¹, Rd³=CH₃, Rd²=H), γ-토코페롤인산에스테르(Rd¹, Rd²=CH₃, Rd³=H), δ-토코페롤인산에스테르(Rd¹=CH₃, Rd², Rd³=H), ζ₂-토코페롤인산에스테르(Rd², Rd³=CH₃, Rd¹=H), η-토코페롤인산에스테르(Rd²=CH₃, Rd¹, Rd³=H) 등이 존재한다.

토코페롤인산에스테르는, 특별히 한정되지 않고, 이들의 토코페롤인산에스테르의 어느 것이어도 된다. 이들 중에서도, α-토코페롤인산에스테르 및 γ-토코페롤인산에스테르가 바람직하고,α-토코페롤인산에스테르가 보다 바람직하다.

상기 일반식 (9)로 표시되는 화합물은, 크로만환의 2위에 비대칭 탄소 원자를 갖기 때문에, d체 및 l체의 입체 이성체, 그리고 dl체가 존재한다. 토코페롤인산에스테르는, 이들의 입체 이성체의 어느 것이어도 되지만, dl체가 바람직하다.

상기한 것 중에서도, 토코페롤인산에스테르로서는, dl-α-토코페롤인산에스테르 및 dl-γ-토코페롤인산에스테르가 바람직하고, dl-α-토코페롤인산에스테르가 보다 바람직하다.

토코페롤인산에스테르의 염은, 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어 무기 염기와의 염, 유기 염기와의 염 등을 들 수 있다.

상기한 것 중에서도, 토코페롤인산에스테르의 염으로서는, 알칼리 금속염이 바람직하고, 나트륨염이 보다 바람직하다. 토코페롤인산에스테르의 알칼리 금속염, 특히 나트륨염은, 물에 대한 용해성이 높고, 또한 성상이 분말이 되기 때문에 취급이 용이해진다고 하는 이점을 갖고 있다.

토코페롤인산에스테르의 바람직한 형태로서는, 상기 일반식 (9)로 표시되는 화합물의 알칼리 금속염(예, 나트륨염), α-토코페롤인산에스테르의 알칼리 금속염(예, 나트륨염), γ-토코페롤인산에스테르의 알칼리 금속염(예, 나트륨염), dl-α-토코페롤인산에스테르의 알칼리 금속염(예, 나트륨염), dl-γ-토코페롤인산에스테르의 알칼리 금속염(예, 나트륨염) 등을 들 수 있다.

토코페롤인산에스테르의 알칼리 금속염 중에서도, α-토코페롤인산에스테르의 나트륨염 및 γ-토코페롤인산에스테르의 나트륨염이 바람직하고,α-토코페롤인산에스테르의 나트륨염이 보다 바람직하다.

dl-α-토코페롤인산에스테르의 나트륨염은 TPNa(등록상표)(표시 명칭: 토코페릴인산 Na)의 제품명으로 쇼와 덴코로부터 시판되고 있다. 상기 TPNa는 토코페롤인산에스테르의 바람직한 예로서 예시된다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물에 있어서, 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염은, 1종을 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 병용해도 된다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물이 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염을 함유하는 경우, 그 함유량은, 오토파지 활성화용 조성물 전량에 대하여, 0.01 내지 10질량%인 것이 바람직하고, 0.05 내지 5질량%인 것이 보다 바람직하고, 0.1 내지 3질량%인 것이 더욱 바람직하다.

토코페롤인산에스테르 또는 그의 염은, 공지된 제조 방법, 예를 들어 일본특허공개 소59-44375호 공보, 국제공개 공보 제97/14705호 등에 기재된 방법에 의해 제조할 수 있다.

예를 들어, 용매 중에 용해한 토코페롤에 옥시염화인 등의 인 산화제를 작용시켜서, 반응 종료 후에 적절히 정제함으로써 토코페롤인산에스테르를 얻을 수 있다. 또한, 얻어진 토코페롤인산에스테르를, 산화마그네슘 등의 금속 산화물, 수산화나트륨 등의 금속 수산화물, 또는, 수산화암모늄이나 수산화 알킬암모늄 등으로 중화함으로써, 토코페롤인산에스테르의 염을 얻을 수 있다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물은, 메틸헤스페리딘에 더하여, 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염을 함유함으로써, LC3 유전자, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자의 발현을 보다 촉진할 수 있다.

또한, 본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물은, 메틸헤스페리딘에 더하여, 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염을 함유함으로써, mTOR 유전자의 발현을 보다 억제할 수 있다.

또한, 본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물은, 메틸헤스페리딘에 더하여, 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염을 함유함으로써, 특히 신경 세포에 있어서, 아밀로이드 β 존재 하에서의 LC3 유전자, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자의 발현을 보다 촉진할 수 있다.

또한, 본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물은, 메틸헤스페리딘에 더하여, 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염을 함유함으로써, 특히 신경 세포에 있어서, 아밀로이드 β 존재 하에서의 아포토시스를 보다 억제할 수 있다.

<이노시톨 유도체>

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물은, 상기 오토파지 활성화제에 더하여, 이노시톨에 당이 결합한 이노시톨 유도체를 함유하는 것이 바람직하다. 이노시톨 유도체를 함유함으로써, 오토파지의 활성화 작용이 보다 향상된다. 상기 이노시톨 유도체는, 이노시톨과 당으로 구성되는 화합물이며, 구체적으로는, 이노시톨의 적어도 하나의 수산기에 당이 결합한 화합물이다.

·이노시톨

이노시톨이란, C₆H₆(OH)₆으로 표현되는 환상 6가 알코올이다. 이노시톨에는, cis-이노시톨, epi-이노시톨, allo-이노시톨, myo-이노시톨, muco-이노시톨, neo-이노시톨, chiro-이노시톨(D체 및 L체가 존재한다.), scyllo-이노시톨의, 9개의 입체 이성체가 존재한다.

이노시톨 유도체를 구성하는 이노시톨로서는, 상기 입체 이성체 중에서도, 생리 활성을 갖는 myo-이노시톨인 것이 바람직하다. myo-이노시톨의 구조식을 이하에 나타낸다.

이노시톨의 제조 방법으로서는, 예를 들어, 쌀겨로부터 추출하는 방법, 화학 합성법 및 발효법 등을 들 수 있다.

·당

이노시톨 유도체를 구성하는 당은, 단당이어도 되고, 올리고당이어도 된다. 여기서, 단당이란, 그 이상 가수 분해되지 않는 당을 의미하고, 다당을 형성할 때의 구성 요소가 되는 화합물을 의미한다. 단당은, 당류의 최소 단위라고 할 수도 있다. 올리고당이란, 단당이 글리코시드 결합에 의해 복수개 결합한 당의 올리고머이다.

‥단당

단당으로서, 구체적으로는, 글루코오스(포도당), 프룩토오스(과당), 갈락토오스, 리보오스, 크실로오스, 만니톨, 소르비톨, 크실리톨, 에리트리톨, 펜타에리트리톨 등을 들 수 있다.

‥올리고당

올리고당으로서, 구체적으로는, 수크로오스(자당), 락토오스(유당), 말토오스(맥아당), 이소말토오스, 트레할로오스, 셀로비오스, 말티톨 등의 2당; 라피노오스, 멜레지토오스, 말토트리오스 등의 3당; 스타키오스 등의 4당; α-시클로덱스트린 등의 6당; β-시클로덱스트린 등의 7당; γ-시클로덱스트린 등의 8당을 들 수 있다.

이노시톨 유도체를 구성하는 당으로서는, 상기한 것 중에서도, 글루코오스 또는 글루코오스를 단당 단위로서 포함하는 올리고당인 것이 바람직하다.

여기서, 단당 단위란, 단당에 상당하는 화학 구조를 의미하고, 단당에 유래하는 화학 구조라고도 할 수 있다.

상기 글루코오스를 단당 단위로서 포함하는 올리고당은, 글루코오스만이 글리코시드 결합에 의해 복수 결합한 올리고당이어도 되고, 적어도 1분자의 글루코오스와, 글루코오스 이외의 당이 글리코시드 결합에 의해 복수 결합한 올리고당이어도 된다.

해당 글루코오스를 단당 단위로서 포함하는 올리고당의 분자량은, 예를 들어 300 내지 3000정도여도 된다.

이노시톨 유도체에 있어서, 당은 이노시톨 분자 내에 6개 존재하는 수산기의 어느 하나에 결합하고 있어도 되고, 어느 2개 이상에 결합하고 있어도 된다. 예를 들어, 1분자의 이노시톨에 1개 또는 복수의 단당이 결합하고 있어도 되고, 1분자의 이노시톨에 1개 또는 복수의 올리고당이 결합하고 있어도 되고, 1분자의 이노시톨에 1개 또는 복수의 단당 및 1개 또는 복수의 올리고당이 결합하고 있어도 된다.

이노시톨 유도체에 있어서, 1분자의 이노시톨에 결합한 당(단당 및/또는 올리고당)의 합계는, 단당 단위로 환산해서 1 이상이고, 예를 들어 2 이상이어도 되고, 예를 들어 3 이상이어도 되고, 예를 들어 4 이상이어도 되고, 예를 들어 10 이상이어도 된다.

여기서, 단당 단위로 환산이란, 1분자의 이노시톨에 결합한 당이 몇개의 단당 단위로 구성되어 있는지를 나타내는 것이다. 또한, 1분자의 이노시톨에 복수의 당이 결합하고 있는 경우에는, 복수의 당의 단당 단위를 각각 합계한 값을 의미한다.

구체적으로는, 2당을 단당 단위로 환산하면 2이고, 3당을 단당 단위로 환산하면 3이다. 또한, 1분자의 이노시톨에 2당 및 3당이 결합하고 있는 경우에는, 단당 단위로 환산하면 5이다.

보다 구체적으로는, 글루코오스(포도당), 프룩토오스(과당), 갈락토오스, 리보오스, 크실로오스, 만니톨, 소르비톨, 크실리톨, 에리트리톨, 펜타에리트리톨 등의 단당을 단당 단위로 환산하면 1이다.

또한, 수크로오스(자당), 락토오스(유당), 말토오스(맥아당), 이소말토오스, 트레할로오스, 셀로비오스, 말티톨 등의 2당을 단당 단위로 환산하면 2이다.

또한, 라피노오스, 멜레지토오스, 말토트리오스 등의 3당을 단당 단위로 환산하면 3이다.

또한, 스타키오스 등의 4당을 단당 단위로 환산하면 4이고, α-시클로덱스트린 등의 6당을 단당 단위로 환산하면 6이고, β-시클로덱스트린 등의 7당을 단당 단위로 환산하면 7이고, γ-시클로덱스트린 등의 8당을 단당 단위로 환산하면 8이다.

이노시톨 유도체는, 높은 정제도의 이노시톨 유도체를 얻기 쉬워진다는 관점에서, 원료의 당으로서, β-시클로덱스트린을 사용한 것인 것이 바람직하다. β-시클로덱스트린은, 공업적으로 저렴해서 안정 공급이 가능하다.

이 경우, 이노시톨 유도체를 구성하는 당은 글루코오스를 구성 단위로서 포함하게 된다.

한편, 이노시톨 유도체의 원료의 당으로서, 보다 저렴한 전분 등을 사용한 경우, 이노시톨 유도체의 합성 시에 다양한 당이 다양한 장소로 전이되기 때문에, 얻어지는 이노시톨 유도체의 정제도가 안정되지 않는 경향이 있다.

이노시톨 유도체는, 약학적으로 허용 가능한 염의 형태여도 된다.

본 명세서에 있어서, 「약학적으로 허용 가능한 염」이란, 이노시톨 유도체의 생리 활성을 저해하지 않는 염의 형태를 의미한다.

이노시톨 유도체의 약학적으로 허용 가능한 염으로서는, 특별히 제한되지 않고, 예를 들어 알칼리 금속(나트륨, 칼륨 등)과의 염; 알칼리 토류 금속(마그네슘, 칼슘 등)과의 염; 유기 염기(피리딘, 트리에틸아민 등)와의 염, 아민과의 염 등을 들 수 있다.

또한, 이노시톨 유도체는, 용매화물의 형태여도 된다. 또한, 이노시톨 유도체는, 이노시톨 유도체의 염의 용매화물의 형태여도 된다. 용매화물로서는, 특별히 제한되지 않고, 예를 들어 수화물, 에탄올 용매화물 등을 들 수 있다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물에 있어서, 이노시톨 유도체는, 1종을 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 병용해도 된다.

이노시톨 유도체는, 상기한 것 중에서도, 2종 이상의 이노시톨 유도체의 혼합물인 것이 바람직하고, 2 내지 40종류의 이노시톨 유도체의 혼합물인 것이 보다 바람직하고, 2 내지 30종류의 이노시톨 유도체의 혼합물인 것이 더욱 바람직하고, 10 내지 30종류의 이노시톨 유도체의 혼합물인 것이 특히 바람직하다.

이노시톨 유도체는, 상기한 것 중에서도, 이노시톨 1분자에 결합한 당의 합계가 단당 단위 환산으로 10 이상인 이노시톨 유도체를 포함하는 것이 바람직하다.

또한, 이노시톨 유도체는, 이노시톨에 글루코오스 또는 글루코오스를 단당 단위로서 포함하는 올리고당이 결합한 이노시톨 유도체인 것이 바람직하고, 2종 이상의 해당 이노시톨 유도체의 혼합물인 것이 바람직하고, 2 내지 40종류의 해당 이노시톨 유도체의 혼합물인 것이 보다 바람직하고, 2 내지 30종류의 해당 이노시톨 유도체의 혼합물인 것이 더욱 바람직하고, 10 내지 30종류의 해당 이노시톨 유도체의 혼합물인 것이 특히 바람직하다.

이노시톨 유도체는, 이노시톨에 글루코오스 또는 글루코오스를 단당 단위로서 포함하는 올리고당이 결합한 이노시톨 유도체를 포함하고, 이노시톨 1분자에 결합한 글루코오스 및 글루코오스를 단당 단위로서 포함하는 올리고당의 합계가 단당 단위 환산으로 10 이상인 이노시톨 유도체를 포함하는 것이 바람직하다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물이 이노시톨 유도체를 함유하는 경우, 그 함유량은 오토파지 활성화용 조성물 전량에 대하여, 0.1 내지 2질량%인 것이 바람직하고, 0.2 내지 1.5질량%인 것이 보다 바람직하고, 0.5 내지 1.5질량%인 것이 더욱 바람직하다.

이노시톨 유도체의 합성 방법으로서는, 특별히 제한은 없고, 종래 알려져 있는 방법으로 적절히 합성할 수 있다. 예를 들어, 이노시톨 및 올리고당의 1종인 시클로덱스트린을, 시클로덱스트린글루카노트랜스퍼라제의 존재 하에서 반응시켜서, 이노시톨 유도체를 합성해도 된다(예를 들어, 일본특허공개 소63-196596호 공보를 참조). 혹은, 글루코실아인산에스테르를 당공여체로서 사용하여, 글루코실체를 얻는 방법에 의해, 이노시톨 유도체를 합성해도 된다(예를 들어, 일본특허공개 평6-298783호 공보를 참조).

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물은, 메틸헤스페리딘에 더하여, 이노시톨 유도체를 함유함으로써, LC3 유전자, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자의 발현을 보다 촉진할 수 있다.

또한, 본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물은, 메틸헤스페리딘에 더하여, 이노시톨 유도체를 함유함으로써, mTOR 유전자의 발현을 보다 억제할 수 있다.

또한, 본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물은, 메틸헤스페리딘에 더하여, 이노시톨 유도체를 함유함으로써, 특히 신경 세포에 있어서, 아밀로이드 β 존재 하에서의 LC3 유전자, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자의 발현을 보다 촉진할 수 있다.

또한, 본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물은, 메틸헤스페리딘에 더하여, 이노시톨 유도체를 함유함으로써, 특히 신경 세포에 있어서, 아밀로이드 β 존재 하에서의 아포토시스를 보다 억제할 수 있다.

본 실시 형태의 오토파지 활성화용 조성물은, 의약 조성물이어도 되고, 화장료여도 된다.

(의약 조성물)

일 실시 형태에 있어서, 본 발명은 상술한 오토파지 활성화제 및 약학적으로 허용되는 담체를 함유하는, 오토파지 활성화용 의약 조성물을 제공한다.

본 실시 형태의 의약 조성물에 있어서, 약학적으로 허용되는 담체로서는, 특별히 제한되지 않고, 상기에 예로 든 것 외에 의약품에 일반적으로 사용되는 담체를 사용할 수 있다. 예를 들어, 일본 약전, 일본 약전외 의약품 규격, 의약품 첨가물 규격 2013(야쿠지 닛포사, 2013년), 의약품 첨가물 사전 2016(일본 의약품 첨가제 협회편, 야쿠지 닛포사, 2016년), Handbook of Pharmaceutical Excipients, 7th edition(Pharmaceutical Press, 2012년) 등에 기재되어 있는 일반적인 원료를 사용할 수 있다.

약학적으로 허용되는 담체는, 1종을 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 병용해도 된다.

본 실시 형태의 의약 조성물은, 상기 오토파지 활성화제 및 약학적으로 허용되는 담체에 더하여, 다른 성분을 함유하고 있어도 된다. 다른 성분으로서는, 특별히 제한되지 않고, 일반적인 의약품 첨가물을 사용할 수 있다. 또한, 다른 성분으로서, 상술한 오토파지 활성화제 이외의 활성 성분을 사용할 수도 있다. 다른 성분으로서의 의약품 첨가물 및 활성 성분으로서는, 상기에 예로 든 것 외에, 예를 들어 일본 약전, 일본 약전외 의약품 규격, 의약품 첨가물 규격 2013(야쿠지 닛포사, 2013년), 의약품 첨가물 사전 2016(일본 의약품 첨가제 협회편, 야쿠지 닛포사, 2016년), Handbook of Pharmaceutical Excipients, 7th edition(Pharmaceutical Press, 2012년) 등에 기재되어 있는 일반적인 원료를 사용할 수 있다. 다른 성분은, 1종을 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 병용해도 된다.

본 실시 형태의 의약 조성물의 제형으로서는, 특별히 제한되지 않고, 의약품 제제로서 일반적으로 사용되는 제형으로 할 수 있다. 예를 들어, 정제, 피복 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 액제, 현탁제, 유제 등의 경구적으로 투여하는 제형; 및 주사제, 좌제, 피부 외용제 등의 비경구적으로 투여하는 제형 등을 들 수 있다. 이들 제형의 의약 조성물은, 통상적인 방법(예를 들어, 일본 약전에 기재된 방법)에 따라, 제제화할 수 있다.

본 실시 형태의 의약 조성물의 투여 방법은, 특별히 제한되지 않고, 의약품의 투여 방법으로서 일반적으로 사용되는 방법으로 투여할 수 있다. 예를 들어, 정제, 피복 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 액제, 현탁제, 유제 등으로서 경구 투여해도 되고, 주사제, 수액 제제 등으로서, 단독으로, 또는 포도당액, 링거액 등의 일반적인 수액과 혼합하여, 정맥 내, 동맥 내, 근육 내, 피내, 피하, 복강 내 등에 투여해도 되고, 좌제로서 직장 내 투여해도 되고, 피부 외용제로서 피부에 투여해도 된다.

본 실시 형태의 의약 조성물의 투여량은 치료적 유효량으로 할 수 있다. 치료적 유효량은 환자의 증상, 체중, 연령 및 성별 등, 그리고 의약 조성물의 제형 및 투여 방법 등에 따라 적절히 결정하면 된다.

예를 들어, 본 실시 형태의 의약 조성물의 투여량은, 경구 투여의 경우에는, 메틸헤스페리딘의 합계 함유량으로서 투여 단위 형태당 0.01 내지 500㎎, 주사제의 경우에는, 메틸헤스페리딘의 합계 함유량으로서 투여 단위 형태당 0.02 내지 250㎎, 좌제의 경우에는, 메틸헤스페리딘의 합계 함유량으로서 투여 단위 형태당 0.01 내지 500㎎, 피부 외용제의 경우에는, 메틸헤스페리딘의 합계 함유량으로서 투여 단위 형태당 0.01 내지 500㎎ 등을 들 수 있다.

본 실시 형태의 의약 조성물의 투여 간격은, 환자의 증상, 체중, 연령 및 성별 등, 그리고 의약 조성물의 제형 및 투여 방법 등에 따라 적절히 결정하면 된다. 예를 들어, 1일 1회 또는 2 내지 3회 정도 등으로 할 수 있다.

본 실시 형태의 의약 조성물은, 오토파지 활성의 저하에 기인하는 질환의 치료 또는 예방을 위해 사용할 수 있다. 그러한 질환으로서는, 예를 들어 알츠하이머병, 헌팅턴병, 파킨슨병, SENDA병 등의 신경 변성 질환; 크론병 등의 염증성 장질환; 암 등을 들 수 있다.

본 실시 형태의 의약 조성물은, 예를 들어 알츠하이머병, 헌팅턴병, 파킨슨병, SENDA병 등의 신경 변성 질환; 크론병 등의 염증성 장질환; 또는 암 환자에게 투여하여, 신경 변성 질환, 염증성 장질환, 또는 암의 진행을 억제하기 위해서 사용할 수 있다. 또한, 본 실시 형태의 의약 조성물은, 알츠하이머병, 헌팅턴병, 파킨슨병, SENDA병 등의 신경 변성 질환; 크론병 등의 염증성 장질환; 또는 암 환자에게 투여하여, 신경 변성 질환, 염증성 장질환, 또는 암을 치료하기 위해 사용할 수 있다. 또한, 본 실시 형태의 의약 조성물은, 아밀로이드 β에 기인하는 질환을 치료하기 위해 사용할 수 있다. 또한, 본 실시 형태의 의약 조성물은, LC3 유전자, ATG5 유전자, 또는 ATG7 유전자의 발현량 저하에 기인하는 질환을 치료하기 위해 사용할 수 있다. 또한, 본 실시 형태의 의약 조성물은, mTOR의 발현량 상승에 기인하는 질환을 치료하기 위해 사용할 수 있다.

본 실시 형태의 의약 조성물은, 상기한 것 중에서도, 특히 알츠하이머병을 치료하기 위해 적합하게 사용할 수 있다.

본 실시 형태의 의약 조성물은, 알츠하이머병을 비롯하여, 헌팅턴병, 파킨슨병, SENDA병 등의 신경 변성 질환의 발증 리스크가 높은 환자에게 투여하여, 신경 변성 질환을 예방하기 위해 사용할 수도 있다. 또한, 본 실시 형태의 의약 조성물은, 크론병 등의 염증성 장질환의 발증 리스크가 높은 환자에게 투여하여, 염증성 장질환을 예방하기 위해 사용할 수도 있다. 또한, 본 실시 형태의 의약 조성물은, 암의 발증 리스크가 높은 환자에게 투여하여, 암을 예방하기 위해 사용할 수도 있다.

(화장료)

일 실시 형태에 있어서, 본 발명은 상술한 오토파지 활성화제 및 약학적으로 허용되는 담체를 함유하는, 오토파지 활성화를 위한 화장료를 제공한다.

본 실시 형태의 화장료에 있어서, 약학적으로 허용되는 담체로서는, 특별히 제한되지 않고, 상기에 예로 든 것 외에 화장료에 일반적으로 사용되는 담체를 사용할 수 있다. 예를 들어, 화장품 원료 기준 제2판 주해(일본 공정서 협회편, 야쿠지 닛포사, 1984년), 화장품 원료 기준 외 성분 규격(후생성 약무국 심사과 감수, 야쿠지 닛포사, 1993년), 화장품 원료 기준 외 성분 규격 추보(追補)(후생성 약무국 심사과 감수, 야쿠지 닛포사, 1993년), 화장품 종별 허가 기준(후생성 약무국 심사과 감수, 야쿠지 닛포사, 1993년), 화장품 원료 사전(닛코 케미컬즈사, 1991년), International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook 2002 Ninth Edition Vol.1 내지 4, by CTFA 등에 기재되어 있는 일반적인 원료를 사용할 수 있다.

본 실시 형태의 화장료는, 오토파지 활성화제 및 약학적으로 허용되는 담체에 더하여, 다른 성분을 함유하고 있어도 된다. 다른 성분으로서는, 특별히 제한되지 않고, 일반적인 화장품 첨가물을 사용할 수 있다. 또한, 다른 성분으로서, 상술한 오토파지 활성화제 이외의 활성 성분을 사용할 수도 있다. 다른 성분으로서의 화장품 첨가물 및 활성 성분으로서는, 상기에 예로 든 것 외에, 예를 들어 화장품 원료 기준 제2판 주해(일본 공정서 협회편, 야쿠지 닛포사, 1984년), 화장품 원료 기준 외 성분 규격(후생성 약무국 심사과 감수, 야쿠지 닛포사, 1993년), 화장품 원료 기준 외 성분 규격 추보(후생성 약무국 심사과 감수, 야쿠지 닛포사, 1993년), 화장품 종별 허가 기준(후생성 약무국 심사과 감수, 야쿠지 닛포사, 1993년), 화장품 원료 사전(닛코 케미컬즈사, 1991년), International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook 2002 Ninth Edition Vol.1 내지 4, by CTFA 등에 기재되어 있는 일반적인 원료를 사용할 수 있다. 다른 성분은, 1종을 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 병용해도 된다.

본 실시 형태의 화장료의 형태로서는, 특별히 제한되지 않고, 화장료로서 일반적으로 사용되는 형태로 할 수 있다. 예를 들어, 샴푸, 린스, 이발제 등의 모발용 화장료; 세안료, 클렌징제, 화장수, 유액, 로션, 크림, 젤, 썬 스크린제, 팩, 마스크, 미용액 등의 기초 화장료; 파운데이션류, 화장 기초, 립스틱류, 립글로스, 볼터치류 등의 메이크업 화장료; 보디 세정료, 보디 파우더, 방취 화장료 등의 보디 화장료 등을 들 수 있다. 이들 화장료는 통상적인 방법에 따라서 제조할 수 있다.

또한, 본 실시 형태의 화장료의 제형으로서는, 특별히 제한되지 않고, 예를 들어 수중유(O/W)형, 유중수(W/O)형, W/O/W형, O/W/O형 등의 유화형, 유화 고분자형, 유성, 고형, 액상, 연상, 스틱상, 휘발성 유형, 분상, 젤리상, 젤상, 페이스트상, 크림상, 시트상, 필름상, 미스트상, 스프레이형, 에어로졸상, 다층상, 기포상, 플레이크상 등을 들 수 있다.

본 실시 형태의 화장료의 사용량은, 특별히 제한되지 않지만, 오토파지를 활성화하는 데 유효한 양으로 할 수 있다.

예를 들어, 본 실시 형태의 화장료의 사용량은, 메틸헤스페리딘의 합계 함유량으로서 1회의 사용당 0.01 내지 500㎎이고, 예를 들어 0.15 내지 300㎎이어도 되고, 예를 들어 0.15 내지 200㎎이어도 되고, 예를 들어 0.2 내지 100㎎이어도 된다.

본 실시 형태의 화장료의 사용 간격은, 특별히 제한되지 않지만, 예를 들어 1일 1회 또는 2 내지 3회 정도 등으로 할 수 있다.

본 실시 형태의 화장료는, 오토파지 활성의 저하에 기인하는 증상을 완화하기 위해 사용할 수 있다. 또는, 오토파지 활성의 저하에 기인하는 증상의 발증을 예방하기 위해, 이들 발증 리스크가 높은 피험자에 의해 일상적인 스킨케어나 메이크업에 사용되어도 된다.

(기타 실시 형태)

일 실시 형태에 있어서, 본 발명은 메틸헤스페리딘을 대상으로 투여하는 공정을 포함하는, 오토파지를 활성화하는 방법을 제공한다.

일 실시 형태에 있어서, 본 발명은 메틸헤스페리딘을 대상으로 투여하는 공정을 포함하는, LC3 유전자, ATG5 유전자, 또는 ATG7 유전자의 발현을 촉진하는 방법을 제공한다.

일 실시 형태에 있어서, 본 발명은 메틸헤스페리딘을 대상으로 투여하는 공정을 포함하는, mTOR 유전자의 발현을 억제하는 방법을 제공한다.

일 실시 형태에 있어서, 본 발명은 메틸헤스페리딘을 대상으로 투여하는 공정을 포함하는, 아밀로이드 β 존재 하에서의 아포토시스를 억제하는 방법을 제공한다.

일 실시 형태에 있어서, 본 발명은 오토파지를 활성화하기 위한, 메틸헤스페리딘을 제공한다.

일 실시 형태에 있어서, 본 발명은 LC3 유전자, ATG5 유전자, 또는 ATG7 유전자의 발현을 촉진하기 위한, 메틸헤스페리딘을 제공한다.

일 실시 형태에 있어서, 본 발명은 mTOR 유전자의 발현을 억제하기 위한, 메틸헤스페리딘을 제공한다.

일 실시 형태에 있어서, 본 발명은 아밀로이드 β 존재 하에서의 아포토시스를 억제하기 위한, 메틸헤스페리딘을 제공한다.

일 실시 형태에 있어서, 본 발명은 알츠하이머병, 헌팅턴병, 파킨슨병, SENDA병, 크론병, 또는 암을 예방 또는 치료하기 위한, 메틸헤스페리딘을 제공한다.

일 실시 형태에 있어서, 본 발명은 오토파지 활성화제를 제조하기 위한, 메틸헤스페리딘의 사용을 제공한다.

일 실시 형태에 있어서, 본 발명은 LC3 유전자, ATG5 유전자, 또는 ATG7 유전자 발현의 촉진제를 제조하기 위한, 메틸헤스페리딘의 사용을 제공한다.

일 실시 형태에 있어서, 본 발명은 mTOR 유전자 발현의 억제제를 제조하기 위한, 메틸헤스페리딘의 사용을 제공한다.

일 실시 형태에 있어서, 본 발명은 아밀로이드 β 존재 하에서의 LC3 유전자, ATG5 유전자, 또는 ATG7 유전자 발현의 촉진제를 제조하기 위한, 메틸헤스페리딘의 사용을 제공한다.

일 실시 형태에 있어서, 본 발명은 아밀로이드 β 존재 하에서의 아포토시스 억제제를 제조하기 위한, 메틸헤스페리딘의 사용을 제공한다.

일 실시 형태에 있어서, 본 발명은 오토파지 활성화용 조성물을 제조하기 위한, 메틸헤스페리딘의 사용을 제공한다.

일 실시 형태에 있어서, 본 발명은 LC3 유전자, ATG5 유전자, 또는 ATG7 유전자 발현의 촉진용 조성물을 제조하기 위한, 메틸헤스페리딘의 사용을 제공한다.

일 실시 형태에 있어서, 본 발명은 mTOR 유전자 발현의 억제용 조성물을 제조하기 위한, 메틸헤스페리딘의 사용을 제공한다.

일 실시 형태에 있어서, 본 발명은 아밀로이드 β 존재 하에서의 LC3 유전자, ATG5 유전자, 또는 ATG7 유전자 발현의 촉진용 조성물을 제조하기 위한, 메틸헤스페리딘의 사용을 제공한다.

일 실시 형태에 있어서, 본 발명은 아밀로이드 β 존재 하에서의 아포토시스 억제용 조성물을 제조하기 위한, 메틸헤스페리딘의 사용을 제공한다.

상술한 실시 형태에 있어서, 메틸헤스페리딘은, 아스코르브산 유도체 또는 그의 염, 토코페롤인산에스테르 또는 그의 염 및 이노시톨이 당이 결합한 이노시톨 유도체로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종과 병용되는 것이 바람직하다.

실시예

이하, 실시예에 의해 본 발명을 더욱 상세하게 설명하지만, 본 발명은 이들 예에 의해서 한정되는 것은 아니다.

[메틸헤스페리딘]

쇼와 덴코 가부시키가이샤로부터 판매되고 있는 메틸헤스페리딘(제품명: 메틸헤스페리딘)을 사용했다. 이 제품은, 상기 칼콘체-1 내지 3 및 상기 플라바논체-1 내지 3의 합계 함유량이, 조성물 전량 중, 97.5질량% 이상이다.

[비타민 C 유도체]

이하의 실시예 및 처방예에서는, 하기의 비타민 C 유도체를 사용했다.

APM: L-아스코르브산-2-인산에스테르의 마그네슘염(표시 명칭; 인산아스코르빌 Mg, 제품명; 아스코르브산 PM, 쇼와 덴코사제)

APPS: L-아스코르브산-2-인산-6-팔미트산의 나트륨염(표시 명칭; 팔미트산 아스코르빌인산 3Na, 제품명; 아프레시에(APPS), 쇼와 덴코사제)

[비타민 E 유도체]

이하의 실시예 및 처방예에서는, 하기의 비타민 E 유도체를 사용했다.

α-TPNa:dl-α-토코페릴인산나트륨(표시 명칭: 토코페릴인산 Na, 제품명; TPNa(등록상표), 쇼와 덴코사제)

γ-TPNa: dl-γ-토코페릴인산나트륨(쇼와 덴코사제)

[이노시톨 유도체]

이하의 실시예 및 처방예에서는, 국제공개 제2019/045113호에 기재된 방법에 의해 제조한 이노시톨 유도체 A를 사용했다.

구체적으로는, myo-이노시톨(츠노라이스파인 케미컬즈사제)과 β-시클로덱스트린(엔스이코 세이토사제)을 시클로덱스트린글루카노트랜스퍼라제(노보자임사제)의 존재 하에서 반응시켜서, myo-이노시톨에 글루코오스 또는 글루코오스를 단당 단위로 하는 올리고당이 결합한 이노시톨 유도체의 혼합물인 이노시톨 유도체 A를 제작했다. 제작한 이노시톨 유도체 A를 액체 크로마토그래피 질량 분석법(LC-MS)으로 분석한 결과, 조성은 이하와 같았다.

<시료 용액의 제작>

이하의 각 시료 용액을 제작하고, 실시예 및 비교예에 사용했다.

메틸헤스페리딘 DMSO 용액: 메틸헤스페리딘을 DMSO에 용해했다.

헤스페리딘 DMSO 용액: 헤스페리딘(도쿄 가세이 고교사제)을 DMSO에 용해했다.

APM 수용액: APM을 정제수에 용해했다.

APPS 수용액: APPS를 정제수에 용해했다.

α-TPNa 용액: α-TPNa를 0.05%(V/V) 에탄올 수용액에 용해했다.

γ-TPNa 용액: γ-TPNa를 0.05%(V/V) 에탄올 수용액에 용해했다.

이노시톨 유도체 A 수용액: 이노시톨 유도체 A를 정제수에 용해했다.

<인간 노화 섬유 아세포에 있어서의 LC3 유전자, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자의 발현 촉진 효과의 평가>

인위적으로 노화를 유발한 세포를 제작하기 위해서, 섬유 아세포를 사용해서 시험을 행하였다. 노화 섬유 아세포는, 이하의 수순에 의해 제작했다.

≪노화 섬유 아세포의 제작≫

10% 소 태아 혈청(MP Biomedicals사제)을 첨가한 D-MEM 배지(Sigma-Aldrich사제)에서, 인간 정상 섬유 아세포(NB1RGB; RIKEN BRC 셀 뱅크제)를 콘플루언트가 될 때까지 배양했다. 그 후, 250μM 과산화수소수로 2시간 처리하고, 새로운 10% 소 태아 혈청을 첨가한 D-MEM 배지에서 24시간 배양했다. 이 과산화수소수에 의한 처리와 세포 배양의 조작을 3회 반복하여, 얻어진 섬유 아세포를 노화 섬유 아세포로 하였다.

≪유전자의 발현 촉진 효과의 평가 시험≫

제작한 노화 섬유 아세포를, 10000개/㎠의 파종 밀도로 준비하고, 10% 소 태아 혈청(MP Biomedicals사제)을 첨가한 D-MEM 배지(Sigma-Aldrich사제)에서 24시간 배양했다. 이어서, 실시예 1에서는, 메틸헤스페리딘 최종 농도가 10^-3%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 메틸헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가했다. 실시예 2에서는, 메틸헤스페리딘 최종 농도가 10^-2%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 메틸헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가했다. 실시예 3에서는, 메틸헤스페리딘 최종 농도가 10^-2%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 메틸헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가하고, APM의 최종 농도가 100μM이 되도록 APM 수용액을 배지에 첨가했다. 실시예 4에서는, 메틸헤스페리딘 최종 농도가 10^-2%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 메틸헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가하고, APPS의 최종 농도가 10μM이 되도록 APPS 수용액을 배지에 첨가했다. 실시예 5에서는, 메틸헤스페리딘 최종 농도가 10^-2%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 메틸헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가하고, α-TPNa의 최종 농도가 10μM이 되도록 α-TPNa 용액을 배지에 첨가했다. 실시예 6에서는, 메틸헤스페리딘 최종 농도가 10^-2%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 메틸헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가하고, γ-TPNa의 최종 농도가 10μM이 되도록 γ-TPNa 용액을 배지에 첨가했다. 실시예 7에서는, 메틸헤스페리딘 최종 농도가 10^-2%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 메틸헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가하고, 이노시톨 유도체 A의 최종 농도가 10^-3%(V/V)가 되도록 이노시톨 유도체 A 수용액을 배지에 첨가했다.

또한, 비교예 1에서는, DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, DMSO만을 배지에 첨가했다. 비교예 2에서는, 헤스페리딘 최종 농도가 10^-2%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가했다.

이어서, 각각의 배지를, 24시간, 37℃, 5% CO₂ 하에서 배양했다.

한편, 참고예 1로서는, 상기 인간 정상 섬유 아세포를, 10000개/㎠의 파종 밀도로 준비하고, 10% 소 태아 혈청(MP Biomedicals사제)을 첨가한 D-MEM 배지(Sigma-Aldrich사제)에서 24시간 배양하고, 해당 배지에 DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, DMSO만을 첨가했다. 이어서, 해당 배지를, 24시간, 37℃, 5% CO₂ 하에서 배양했다.

그 후, Nucleospin(등록상표) RNA 키트(다카라 바이오사제)를 사용하여, 각 예의 노화 섬유 아세포, 또는 인간 정상 섬유 아세포로부터 RNA를 추출하고, 얻어진 RNA로부터 cDNA를 합성했다. 이어서, 이 cDNA를 템플릿에, 정량 리얼타임 PCR로, LC3 유전자, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자에 특이적인 프라이머(다카라 바이오사제)을 각각 사용하여, 각 유전자의 발현량을 정량했다.

내부 표준 유전자로서 화합물 첨가에 의해 유전자 발현에 변동이 보이지 않는 하우스키핑 유전자의 GAPDH(프라이머; 다카라 바이오사제)의 발현량을 정량하고, 그 값에 따라 각 유전자의 발현량을 표준화했다. 상기 각 예에 있어서의 유전자 발현량에 대해서, 비교예 1에 있어서의 각 유전자의 발현량을 각각 1.00으로 했을 때의, 상대 유전자 발현량을 구했다. 그 결과를 표 6에 나타냈다.

표 6에 나타내는 바와 같이, 참고예 1 및 비교예 1에 있어서, 각각 DMSO만 첨가해서 배양한 인간 정상 섬유 아세포 및 노화 섬유 아세포에서는, 노화 섬유 아세포 쪽이 LC3 유전자, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자의 발현량이 모두 저하되어 있는 것이 확인되었다.

비교예 2의 헤스페리딘 DMSO 용액을 첨가해서 배양한 노화 섬유 아세포와, 비교예 1의 DMSO만 첨가해서 배양한 노화 섬유 아세포를 비교하면, 비교예 2의 노화 섬유 아세포는, 비교예 1의 노화 섬유 아세포보다, LC3 유전자, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자의 발현량이 저하되어 있었다.

한편, 실시예 1 내지 7의 오토파지 활성화제를 첨가해서 배양한 노화 섬유 아세포에서는, 비교예 1의 DMSO만 첨가해서 배양한 노화 섬유 아세포에 비하여, LC3 유전자, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자의 발현량이 모두 증가하였고, 특히 LC3 유전자의 발현량이 증가하였다.

실시예 3 내지 7의 최종 농도 10^-2%(V/V)의 메틸헤스페리딘 및 추가 성분(APM, APPS, α-TPNa, γ-TPNa 또는 이노시톨 유도체 A)을 첨가해서 배양한 노화 섬유 아세포는, 실시예 2의 최종 농도 10^-2%(V/V)의 메틸헤스페리딘을 첨가해서 배양한 노화 섬유 아세포와 비교하여, LC3 유전자, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자의 발현량이 보다 증가하여, 상기 각 유전자의 발현이 보다 촉진되었다. 이 결과로부터, 메틸헤스페리딘과, 추가 성분(APM, APPS, α-TPNa, γ-TPNa 또는 이노시톨 유도체 A)을 병용함으로써, LC3 유전자, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자의 발현을 보다 촉진할 수 있는 것이 확인되었다.

<인간 노화 섬유 아세포에 있어서의 mTOR 유전자의 발현 억제 효과의 평가>

상기에서 제작한 노화 섬유 아세포를, 10000개/㎠의 파종 밀도로 준비하고, 10% 소 태아 혈청(MP Biomedicals사제)을 첨가한 D-MEM 배지(Sigma-Aldrich사제)에서 24시간 배양했다. 이어서, 실시예 8에서는, 메틸헤스페리딘 최종 농도가 10^-3%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 메틸헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가했다. 실시예 9에서는, 메틸헤스페리딘 최종 농도가 10^-2%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 메틸헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가했다. 실시예 10에서는, 메틸헤스페리딘 최종 농도가 10^-2%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 메틸헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가하고, APM의 최종 농도가 100μM이 되도록 APM 수용액을 배지에 첨가했다. 실시예 11에서는, 메틸헤스페리딘 최종 농도가 10^-2%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 메틸헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가하고, APPS의 최종 농도가 10μM이 되도록 APPS 수용액을 배지에 첨가했다. 실시예 12에서는, 메틸헤스페리딘 최종 농도가 10^-2%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 메틸헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가하고, α-TPNa의 최종 농도가 10μM이 되도록 α-TPNa 용액을 배지에 첨가했다. 실시예 13에서는, 메틸헤스페리딘 최종 농도가 10^-2%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 메틸헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가하고, γ-TPNa의 최종 농도가 10μM이 되도록 γ-TPNa 용액을 배지에 첨가했다. 실시예 14에서는, 메틸헤스페리딘 최종 농도가 10^-2%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 메틸헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가하고, 이노시톨 유도체 A의 최종 농도가 10^-3%(V/V)가 되도록 이노시톨 유도체 A 수용액을 배지에 첨가했다.

또한, 비교예 3에서는, DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, DMSO를 배지에 첨가했다. 비교예 4에서는, 헤스페리딘 최종 농도가 10^-2%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가했다.

한편, 참고예 2로서는, 상기 인간 정상 섬유 아세포를, 10000개/㎠의 파종 밀도로 준비하고, 10% 소 태아 혈청(MP Biomedicals사제)을 첨가한 D-MEM 배지(Sigma-Aldrich사제)에서 24시간 배양하고, 해당 배지에 DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, DMSO만을 첨가했다. 이어서, 해당 배지를, 24시간, 37℃, 5% CO₂ 하에서 배양했다.

그 후, Nucleospin(등록상표) RNA 키트(다카라 바이오사제)를 사용하여, 각 예의 노화 섬유 아세포, 또는 인간 정상 섬유 아세포로부터 RNA를 추출하고, 얻어진 RNA로부터 cDNA를 합성했다. 이어서, 이 cDNA를 템플릿에 정량 리얼타임 PCR로 mTOR 유전자에 특이적인 프라이머(다카라 바이오사제)를 사용하여, mTOR 유전자의 발현량을 정량했다.

내부 표준 유전자로서 화합물 첨가에 의해 발현에 변동이 보이지 않는 하우스키핑 유전자의 GAPDH(프라이머; 다카라 바이오사제)의 발현량을 정량하고, 그 값에 따라 각 유전자의 발현량을 표준화했다. 각 예에 있어서의 유전자 발현량에 대해서, 비교예 3에 있어서의 mTOR 유전자의 발현량을 1.00으로 했을 때의, 상대 유전자 발현량을 구했다. 그 결과를 표 7에 나타냈다.

표 7에 나타내는 바와 같이, 참고예 2 및 비교예 3에 있어서, 각각 DMSO만 첨가해서 배양한 인간 정상 섬유 아세포 및 노화 섬유 아세포에서는, 참고예 2의 인간 정상 섬유 아세포에 비하여, 비교예 3의 노화 섬유 아세포에서는 mTOR 유전자의 발현 항진이 보였다.

비교예 4의 헤스페리딘 DMSO 용액을 첨가해서 배양한 노화 섬유 아세포의 mTOR 유전자의 발현량은, 비교예 3의 DMSO만을 첨가해서 배양한 노화 섬유 아세포와 거의 동등했다.

한편, 실시예 8 내지 14의 오토파지 활성화제를 첨가해서 배양한 노화 섬유 아세포는, 비교예 3의 DMSO만 첨가해서 배양한 노화 섬유 아세포에 비하여, mTOR 유전자의 발현량이 저하되어 있고, mTOR 유전자의 발현이 억제되어 있었다.

실시예 10 내지 14의 최종 농도 10^-2%(V/V)의 메틸헤스페리딘 및 추가 성분(APM, APPS, α-TPNa, γ-TPNa 또는 이노시톨 유도체 A)을 첨가해서 배양한 노화 섬유 아세포는, 실시예 9의 최종 농도 10^-2%(V/V)의 메틸헤스페리딘을 첨가해서 배양한 노화 섬유 아세포와 비교하여, mTOR 유전자의 발현량이 보다 저하되어 있고, mTOR 유전자의 발현이 보다 억제되어 있었다. 이 결과로부터, 메틸헤스페리딘과, 추가 성분(APM, APPS, α-TPNa, γ-TPNa 또는 이노시톨 유도체 A)을 병용함으로써, mTOR 유전자의 발현을 보다 억제할 수 있는 것이 확인되었다.

<인간 신경 아세포종에 있어서의 LC3 유전자, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자의 발현 촉진 효과의 평가>

오토파지 활성화제 존재 하에서, 인간 신경 아세포종(SH-SY5Y; ATCC로부터 입수)에 있어서의 LC3 유전자, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자의 발현량을 이하의 시험 방법으로 측정하고, 오토파지 활성화제에 의한 LC3 유전자, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자의 발현 촉진 효과를 평가했다.

이하의 실시예 및 비교예에서는, 신경 세포에 있어서의 오토파지의 저하를 야기하는 것이 알려져 있는 아밀로이드 β를 각 배지에 첨가해서 시험을 행하였다.

SH-SY5Y 세포를 10000개/㎠의 파종 밀도로 준비하고, 10% 소 태아 혈청(MP Biomedicals사제)을 첨가한 D-MEM/Ham's F-12 배지(Sigma-Aldrich사제)에서 24시간 배양했다. 이어서, 실시예 15에서는, 메틸헤스페리딘 최종 농도가 10^-3%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 메틸헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가했다. 실시예 16에서는, 메틸헤스페리딘 최종 농도가 10^-2%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 메틸헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가했다. 실시예 17에서는, 메틸헤스페리딘 최종 농도가 10^-2%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 메틸헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가하고, APM의 최종 농도가 100μM이 되도록 APM 수용액을 배지에 첨가했다. 실시예 18에서는, 메틸헤스페리딘 최종 농도가 10^-2%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 메틸헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가하고, APPS의 최종 농도가 10μM이 되도록 APPS 수용액을 배지에 첨가했다. 실시예 19에서는, 메틸헤스페리딘 최종 농도가 10^-2%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 메틸헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가하고, α-TPNa의 최종 농도가 10μM이 되도록 α-TPNa 용액을 배지에 첨가했다. 실시예 20에서는, 메틸헤스페리딘 최종 농도가 10^-2%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 메틸헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가하고, γ-TPNa의 최종 농도가 10μM이 되도록 γ-TPNa 용액을 배지에 첨가했다. 실시예 21에서는, 메틸헤스페리딘 최종 농도가 10^-2%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 메틸헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가하고, 이노시톨 유도체 A의 최종 농도가 10^-3%(V/V)가 되도록 이노시톨 유도체 A 수용액을 배지에 첨가했다.

또한, 비교예 5에서는, DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, DMSO를 배지에 첨가했다. 비교예 6에서는, 헤스페리딘 최종 농도가 10^-2%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가했다.

이어서, 아밀로이드 β(Sigma-Aldrich사제)를 0.01%(V/V)DMSO 수용액에 녹인 아밀로이드 β 용액을 조제하고, 각 배지에 있어서의 아밀로이드 β의 최종 농도가 20μM이 되도록, 해당 아밀로이드 β 용액을 각 배지에 첨가했다.

또한, 참고예 3에서는, DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, DMSO만 첨가하고, 아밀로이드 β 용액은 첨가하지 않았다.

이어서, 각각의 배지를, 48시간, 37℃, 5% CO₂ 하에서 배양했다.

그 후, Nucleospin(등록상표) RNA 키트(다카라 바이오사제)를 사용하여, 각 예의 SH-SY5Y 세포로부터 RNA를 추출하고, 얻어진 RNA로부터 cDNA를 합성했다. 이어서, 이 cDNA를 템플릿에, 정량 리얼타임 PCR로, LC3 유전자, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자에 특이적인 프라이머(다카라 바이오사제)를 각각 사용해서, 각 유전자의 발현량을 정량했다.

내부 표준 유전자로서 화합물 첨가에 의해 발현에 변동이 보이지 않는 하우스키핑 유전자의 GAPDH(프라이머; 다카라 바이오사제)의 발현량을 정량하고, 그 값에 따라 각 유전자의 발현량을 표준화했다. 각 예에 있어서의 유전자 발현량에 대해서, 참고예 3에 있어서의 각 유전자의 발현량을 각각 1.00으로 했을 때의, 상대 유전자 발현량을 구했다. 그 결과를 표 8에 나타냈다.

표 8에 나타내는 바와 같이, 참고예 3 및 비교예 5에 있어서, DMSO만 첨가해서 배양한 SH-SY5Y 세포에 비하여, 추가로 아밀로이드 β를 첨가해서 배양한 SH-SY5Y 세포에서는, LC3 유전자, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자의 발현량이 모두 저하되어 있는 것이 확인되었다.

실시예 15 내지 21의 오토파지 활성화제와 아밀로이드 β 용액을 첨가해서 배양한 SH-SY5Y 세포에서는, 비교예 5의 DMSO와 아밀로이드 β 용액을 첨가해서 배양한 SH-SY5Y 세포에 비하여, LC3 유전자, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자의 발현량이 모두 증가하였다.

또한, 비교예 6의 최종 농도 10^-2%(V/V)의 헤스페리딘을 첨가해서 배양한 SH-SY5Y 세포에서도, 비교예 5의 SH-SY5Y 세포에 비하여, LC3 유전자, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자의 발현량이 증가하였다. 그러나, 실시예 16의 최종 농도 10^-2%(V/V)의 메틸헤스페리딘을 첨가해서 배양한 SH-SY5Y 세포 쪽이, 어느 유전자에 대해서도 발현량의 증가가 현저했다.

실시예 17 내지 21의 최종 농도 10^-2%(V/V)의 메틸헤스페리딘 및 추가 성분(APM, APPS, α-TPNa, γ-TPNa 또는 이노시톨 유도체 A)을 첨가해서 배양한 SH-SY5Y 세포는, 실시예 16의 최종 농도 10^-2%(V/V)의 메틸헤스페리딘을 첨가해서 배양한 SH-SY5Y 세포와 비교하여, LC3 유전자, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자의 발현량이 보다 증가하였고, 상기 각 유전자의 발현이 보다 촉진되었다. 이 결과로부터, 메틸헤스페리딘과, 추가 성분(APM, APPS, α-TPNa, γ-TPNa 또는 이노시톨 유도체 A)을 병용함으로써, 아밀로이드 β 존재 하에서의 신경 세포에 있어서의 LC3 유전자, ATG5 유전자 및 ATG7 유전자의 발현을 보다 촉진할 수 있는 것이 확인되었다.

<인간 신경 아세포종에 있어서의 아밀로이드 β에 기인하는 아포토시스 억제 작용의 평가>

오토파지 활성화제 존재 하에서의 인간 신경 아세포종(SH-SY5Y; ATCC로부터 입수)에 있어서의 아포토시스 세포의 비율을 이하의 시험 방법으로 측정하고, 오토파지 활성화제에 의한 아포토시스 억제 작용을 평가했다.

이하의 실시예 및 비교예에서는, 오토파지의 저하와 그것에 의한 신경 세포의 아포토시스라고 불리는 세포사를 유인하는 것으로 알려져 있는 아밀로이드 β를 각 배지에 첨가해서 시험을 행하였다.

SH-SY5Y 세포를 50000개/㎠의 파종 밀도로 준비하고, 10% 소 태아 혈청(MP Biomedicals사제)을 첨가한 D-MEM/Ham's F-12 배지(Sigma-Aldrich사제)에서 24시간 배양했다. 이어서, 실시예 22에서는, 메틸헤스페리딘 최종 농도가 10^-3%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 메틸헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가했다. 실시예 23에서는, 메틸헤스페리딘 최종 농도가 10^-2%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 메틸헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가했다. 실시예 24에서는, 메틸헤스페리딘 최종 농도가 10^-2%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 메틸헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가하고, APM의 최종 농도가 100μM이 되도록 APM 수용액을 배지에 첨가했다. 실시예 25에서는, 메틸헤스페리딘 최종 농도가 10^-2%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 메틸헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가하고, APPS의 최종 농도가 10μM이 되도록 APPS 수용액을 배지에 첨가했다. 실시예 26에서는, 메틸헤스페리딘 최종 농도가 10^-2%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 메틸헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가하고, α-TPNa의 최종 농도가 10μM이 되도록 α-TPNa 용액을 배지에 첨가했다. 실시예 27에서는, 메틸헤스페리딘 최종 농도가 10^-2%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 메틸헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가하고, γ-TPNa의 최종 농도가 10μM이 되도록 γ-TPNa 용액을 배지에 첨가했다. 실시예 28에서는, 메틸헤스페리딘 최종 농도가 10^-2%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 메틸헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가하고, 이노시톨 유도체 A의 최종 농도가 10^-3%(V/V)가 되도록 이노시톨 유도체 A 수용액을 배지에 첨가했다.

또한, 비교예 7에서는, DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, DMSO를 배지에 첨가했다. 비교예 8에서는, 헤스페리딘 최종 농도가 10^-2%(V/V), DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, 헤스페리딘 DMSO 용액을 배지에 첨가했다.

이어서, 아밀로이드 β(Sigma-Aldrich사제)를 0.01%(V/V)DMSO 수용액에 녹인 아밀로이드 β 용액을 조제하고, 각 배지에 있어서의 아밀로이드 β의 최종 농도가 30μM이 되도록, 해당 아밀로이드 β 용액을 각 배지에 첨가했다.

또한, 참고예 4에서는, DMSO의 최종 농도가 0.1%(V/V)가 되도록, DMSO만 첨가하고, 아밀로이드 β 용액은 첨가하지 않았다.

그 후, 배지를 제거한 각 SH-SY5Y 세포에 10μM Hoechst 33342(Sigma-Aldrich사제) 수용액을 첨가하고, 실온(25℃)에서 10분간 정치했다. 용액을 제거 후, 각 SH-SY5Y 세포를 인산 완충액(PBS, 와코준야쿠사제)으로 세정하고, 형광 현미경 하에서 크로마틴 응집에 의한 아포토시스와 같은 강한 Hoechst 형광이 보이는 세포수(Hoechst(+) 세포)를 계측했다. 독립 시행의 4 실험으로, 각 시야 5000 세포이상을 계측하고, 해당 4 시험에 있어서의 Hoechst(+) 세포의 비율의 평균값을, 아포토시스를 일으키고 있는 세포의 비율로 하였다. 각 예에 대해서, 참고예 4에 있어서의 아포토시스 세포의 비율을 1.00으로 했을 때의 상대값을 산출하고, 그 결과를 표 9에 나타냈다.

표 9에 나타내는 바와 같이, 참고예 4 및 비교예 7에 있어서, 참고예 4의 DMSO만 첨가해서 배양한 SH-SY5Y 세포에 비하여, 비교예 7의 추가로 아밀로이드 β를 첨가해서 배양한 SH-SY5Y 세포에서는, 아포토시스 세포의 비율이 증가하는 것이 확인되었다.

실시예 22 내지 28의 오토파지 활성화제와 아밀로이드 β 용액을 첨가해서 배양한 SH-SY5Y 세포에서는, 비교예 7의 DMSO와 아밀로이드 β 용액을 첨가해서 배양한 SH-SY5Y 세포에 비하여, 아포토시스 세포의 비율이 저하되는 것이 확인되었다.

또한, 비교예 8의 최종 농도 10^-2%(V/V)의 헤스페리딘을 첨가해서 배양한 SH-SY5Y 세포에서도, 비교예 7의 SH-SY5Y 세포에 비하여, 아포토시스 세포의 비율이 저하되어 있었다. 그러나, 실시예 23의 최종 농도 10^-2%(V/V)의 메틸헤스페리딘을 첨가해서 배양한 SH-SY5Y 세포 쪽이, 아포토시스 세포의 비율 저하가 현저했다.

실시예 24 내지 28의 최종 농도 10^-2%(V/V)의 메틸헤스페리딘 및 추가 성분(APM, APPS, α-TPNa, γ-TPNa 또는 이노시톨 유도체 A)을 첨가해서 배양한 SH-SY5Y 세포는, 실시예 23의 최종 농도 10^-2%(V/V)의 메틸헤스페리딘을 첨가해서 배양한 SH-SY5Y 세포와 비교하여, 아포토시스 세포의 비율이 보다 저하되어 있었다. 이 결과로부터, 메틸헤스페리딘과, 추가 성분(APM, APPS, α-TPNa, γ-TPNa 또는 이노시톨 유도체 A)을 병용함으로써, 아밀로이드 β 존재 하에서의 신경 세포의 아포토시스를 보다 억제할 수 있는 것이 확인되었다.

[처방예]

오토파지 활성화용 조성물로서, 외용제의 처방예 1 내지 5를 표 10에 나타냈다.

본 발명에 의해, 오토파지를 효과적으로 활성화할 수 있는 오토파지 활성화제 및 상기 오토파지 활성화제를 함유하는 오토파지 활성화용 조성물이 제공된다.

이상, 본 발명의 바람직한 실시예를 설명했지만, 본 발명은 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 취지를 일탈하지 않는 범위에서, 구성의 부가, 생략, 치환 및 기타 변경이 가능하다. 본 발명은 전술한 설명에 의해 한정되지 않고, 첨부의 클레임 범위에 의해서만 한정된다.

Claims

메틸헤스페리딘을 유효 성분으로서 함유하는, 오토파지 활성화제.
제1항에 있어서, 상기 메틸헤스페리딘이, 하기 일반식 (1)로 표시되는 칼콘체 메틸헤스페리딘 및 하기 일반식 (2)로 표시되는 플라바논체 메틸헤스페리딘으로 이루어지는 군에서 선택되는 1종 이상인, 오토파지 활성화제.

[식 (1) 중, R¹ 내지 R⁹는, 각각 독립적으로 메틸기 또는 수소 원자이다. 단, R¹ 내지 R⁹ 중 적어도 1개는 메틸기이다.
식 (2) 중, R¹¹ 내지 R¹⁸은, 각각 독립적으로 메틸기 또는 수소 원자이다. 단, R¹¹ 내지 R¹⁸ 중 적어도 1개는 메틸기이다.]
제2항에 있어서, 상기 메틸헤스페리딘이, 하기 일반식 (3)으로 표시되는 칼콘체 메틸헤스페리딘 및 하기 일반식 (4)로 표시되는 플라바논체 메틸헤스페리딘으로 이루어지는 군에서 선택되는 1종 이상인, 오토파지 활성화제.

[식 (3) 중, R²⁰ 내지 R²³은, 각각 독립적으로 메틸기 또는 수소 원자이다.
식 (4) 중, R²⁴ 내지 R²⁵는, 각각 독립적으로 메틸기 또는 수소 원자이다.]
제3항에 있어서, 상기 일반식 (3)으로 표시되는 칼콘체 메틸헤스페리딘이, 하기 표 1에 나타내지는 R²⁰ 내지 R²³의 조합을 갖는 칼콘체-1 내지 3으로 이루어지는 군에서 선택되는 1종 이상인, 오토파지 활성화제.
[표 1]
제3항 또는 제4항에 있어서, 상기 일반식 (4)로 표시되는 플라바논체 메틸헤스페리딘이, 하기 표 2에 나타내지는 R²⁴ 내지 R²⁵의 조합을 갖는 플라바논체-1 내지 4로 이루어지는 군에서 선택되는 1종 이상인, 오토파지 활성화제.
[표 2]
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, LC3 유전자의 발현을 촉진하는, 오토파지 활성화제.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, ATG5 유전자의 발현을 촉진하는, 오토파지 활성화제.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, ATG7 유전자의 발현을 촉진하는, 오토파지 활성화제.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, mTOR 유전자의 발현을 억제하는, 오토파지 활성화제.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 알츠하이머병의 예방 또는 치료에 사용하는, 오토파지 활성화제.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 기재된 오토파지 활성화제 및 약학적으로 허용되는 담체를 함유하는, 오토파지 활성화용 조성물.
제11항에 있어서, 상기 메틸헤스페리딘의 합계 함유량이, 오토파지 활성화용 조성물 전량에 대하여, 0.01 내지 2질량%인, 오토파지 활성화용 조성물.
제11항 또는 제12항에 있어서, 비타민 C 유도체 및 비타민 E 유도체로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종의 비타민 유도체 또는 그의 염을 더 함유하는, 오토파지 활성화용 조성물.
제13항에 있어서, 상기 비타민 유도체 또는 그의 염이, 인산아스코르빌, 인산아스코르빌의 지방산 에스테르, 토코페롤인산에스테르 및 그들의 염으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 1종인, 오토파지 활성화용 조성물.
제11항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 이노시톨에 당이 결합한 이노시톨 유도체를 더 함유하는, 오토파지 활성화용 조성물.
제15항에 있어서, 상기 당이, 글루코오스 또는 글루코오스를 구성 단위로서 포함하는 올리고당인, 오토파지 활성화용 조성물.