KR20230042350A

KR20230042350A - 암 치료용 조합 요법

Info

Publication number: KR20230042350A
Application number: KR1020237006460A
Authority: KR
Inventors: 크리스토퍼 지. 트위티
Original assignee: 온코섹 메디컬 인코포레이티드
Priority date: 2020-07-29
Filing date: 2021-07-29
Publication date: 2023-03-28
Also published as: EP4188524A1; MX2023001255A; AU2021319075A1; CA3187206A1; US20230302090A1; IL300106A; JP2023536460A; WO2022026682A1; BR112023001514A2

Abstract

면역 체크포인트 억제자 및 화학치료제의 투여와 조합된 면역자극 사이토카인의 종양내 전기천공법으로 암을 치료하기 위한 방법 및 치료 일정이 기재된다.

Description

암 치료용 조합 요법

관련 출원에 대한 교차-참조

본 출원은 2020년 7월 29일에 출원된 미국 가출원 번호 63/058,026의 이익을 주장하며, 그것은 본원에 참조로 포함된다.

유방암은 미국 여성 사이에서 진단된 가장 흔한 암이고 암-관련 사망의 두 번째 원인이다. 삼중 음성-유방암 (TNBC)은 전체 사례의 10-20%를 차지하는 침습성 유방암의 4개의 주요 분자 하위 유형 중 하나에 해당한다. TNBC는 생물학적으로 이종성이지만 주로 에스트로겐 (ER) 및 프로게스테론 (PR) 수용체에 대한 음성 표현형 및 인간 상피 성장 인자 수용체 2 (HER2)에 대한 유전자 증폭/단백질 과발현의 결핍으로 확인될 수 있다. 이들 생물학적 특성은 다른 모든 유방암 하위 유형에서 관찰된 것보다 더 높은 공격성 및 재발 위험을 부여한다.

종양 세포 수용체의 손실로 인해, TNBC에 걸린 환자는 종양원성 HER2 경로를 표적화하는 호르몬 요법 또는 치료로부터 이익을 얻을 수 없다. 화학요법은 보조, 신보조(neoadjuvant), 및 전이 설정에서 현재의 관리 표준(standard-of-care) 치료이다. 재발성 및/또는 전이성 질환에 걸린 환자에 대한 관리 표준은 세포독성 화학요법이다. 중간 생존 기간은 원격 전이의 재발 또는 진단 시간으로부터 대략 13개월이다. 따라서, 개선된 TNBC 치료 방법이 필요하다.

대상체에게 체크포인트(checkpoint) 억제자 및 화학치료제와 조합하여 면역자극 사이토카인의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 암을 치료하는 방법이 본원에서 기재된다.

일부 구체예에서, 암에 걸린 대상체를 치료하는 방법이 기재되며, 방법은 다음 단계를 포함한다:

a) 종양내 전기천공법에 의해 대상체의 적어도 하나의 종양에 적어도 하나의 면역자극 사이토카인을 암호화하는 적어도 하나의 발현 벡터의 유효 용량을 투여하는 단계;

b) 대상체에게 면역 체크포인트 억제자의 유효 용량을 투여하는 단계; 및

c) 대상체에게 화학치료제의 유효 용량을 투여하는 단계.

암은 0 기, I 기, II 기, III 기, 또는 IV 기일 수 있다. 암은 수술 가능하거나 수술 불가능할 수 있다. 암은 국소적으로 진행된 암 (II 기 또는 III), 재발성 암, 또는 전이성 암 (IV 기)일 수 있다. 암은 유방암, 삼중 음성 유방암, 흑색종, 두경부암, 편평세포 암종, 기저세포 암종, 및 메르켈(Merkel) 세포 암종일 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 일부 구체예에서, 암은 수술 가능하다. 일부 구체예에서, 암은 수술 불가능하다. 일부 구체예에서, 암은 수술 불가능한 국소적으로 진행된 암 또는 전이성 암이다.

일부 구체예에서, TNBC에 걸린 대상체를 치료하는 방법이 기재되며, 방법은 다음 단계를 포함한다:

c) 대상체에게 화학치료제의 유효 용량을 투여하는 단계.

TNBC는 0 기, I 기, II 기, III 기, 또는 IV 기일 수 있다. TNBC는 수술 가능하거나 수술 불가능할 수 있다. 암은 국소적으로 진행된 암 (II 기 또는 III), 재발성 암, 또는 전이성 암 (IV 기)일 수 있다. 일부 구체예에서, TNBC는 수술 가능하다. 일부 구체예에서, TNBC는 수술 불가능하다. 일부 구체예에서, TNBC는 수술 불가능한 국소적으로 진행된 TNBC 또는 전이성 TNBC이다.

일부 구체예에서, 암에 걸린 대상체를 치료하기 위한 제1 선 치료 방법이 기재되며, 방법은 다음 단계를 포함한다:

c) 대상체에게 화학치료제의 유효 용량을 투여하는 단계.

암은 0 기, I 기, II 기, III 기, 또는 IV 기일 수 있다. 암은 수술 가능하거나 수술 불가능할 수 있다. 암은 국소적으로 진행된 암 (II 기 또는 III), 재발성 암, 또는 전이성 암 (IV 기)일 수 있다. 암은 유방암, 삼중 음성 유방암, 흑색종, 두경부암, 편평세포 암종, 기저세포 암종, 및 메르켈 세포 암종일 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 일부 구체예에서, 암은 수술 가능하다. 일부 구체예에서, 암은 수술 불가능하다. 일부 구체예에서, 암은 수술 불가능한 국소적으로 진행된 암 또는 전이성 암이다.

일부 구체예에서, TNBC에 걸린 대상체를 치료하기 위한 제1 선 치료 방법이 기재되며, 방법은 다음 단계를 포함한다:

c) 대상체에게 화학치료제의 유효 용량을 투여하는 단계.

일부 구체예에서, 암에 걸린 대상체를 치료하기 위한 제2 선 치료 방법이 기재되며, 방법은 다음 단계를 포함한다:

c) 대상체에게 화학치료제의 유효 용량을 투여하는 단계.

일부 구체예에서, TNBC에 걸린 대상체를 치료하기 위한 제2 선 치료 방법이 기재되며, 방법은 다음 단계를 포함한다:

c) 대상체에게 화학치료제의 유효 용량을 투여하는 단계.

면역자극 사이토카인은 IL-1, IL-2, IL-7, IL-10, IL-12, IL-15, IL-15/수용체 α, IL-21, IL-23, IL-27, IL-35, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, TNF-α, TGF-β, 및 C-X-C 모티프 케모카인 리간드 9 (CXCL9)로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 일부 구체예에서, 면역자극 사이토카인은 IL-12를 포함한다.

종양내 전기천공법은 종양으로의 발현 벡터의 주사 및 종양에 적어도 하나의 전기천공 펄스를 투여하는 것을 포함한다. 전기천공 펄스는 약 100 마이크로초 내지 약 1 밀리초의 기간 동안 적어도 하나의 전압 펄스를 투여하는 것과 약 300V/cm 내지 약 1500V/cm의 전기장 강도(field strength)를 포함할 수 있다.

일부 구체예에서, 면역 체크포인트 억제자는 전신으로 투여된다. 전신 주사는 정맥내 주입을 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 면역 체크포인트 억제자는 발현 벡터 상에서 암호화되고 전기천공 요법에 의해 암성 종양으로 전달된다. 일부 구체예에서, 면역 체크포인트 억제자는 면역자극 사이토카인을 또한 암호화하는 발현 벡터 상에서 암호화되고 전기천공 요법에 의해 암성 종양으로 전달된다. 면역 체크포인트 억제자는 표 1의 적어도 하나의 면역 체크포인트 단백질의 안타고니스트(antagonist)이다. 면역 체크포인트 억제자는 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-PD-12 항체, 또는 항-CTLA-4 1 항체일 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 면역 체크포인트 억제자는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 피딜리주맙, 두르발루맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 세미플리맙, 신티브맙, 토리팔리맙, 또는 캄렐리주맙일 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 일부 구체예에서, 면역 체크포인트 억제자는 PD-1, PD-L1 또는 PD-12 안타고니스트를 포함한다. 일부 구체예에서, 면역 체크포인트 억제자는 면역자극 사이토카인의 전기천공법 후에 투여된다. 일부 구체예에서, 면역 체크포인트 억제자는 면역자극 사이토카인의 전기천공법 전에 투여된다. 일부 구체예에서, 면역 체크포인트 억제자는 근본적으로 면역자극 사이토카인의 전기천공법과 동시에 투여된다. 면역 체크포인트 억제자 및 면역자극 사이토카인이 동일한 날에 투여되는 날에, 면역 체크포인트 억제자는 IT-EP 면역자극 사이토카인의 투여 전에, 동시에, 또는 후에 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, IT-EP 면역자극 사이토카인은 면역 체크포인트 억제자의 투여 전에 투여된다. 화학치료제 및 IT-EP 면역자극 사이토카인이 동일한 날에 투여되는 날에, 화학치료제는 IT-EP 면역자극 사이토카인의 투여 전에, 동시에, 또는 후에 투여될 수 있다. 면역 체크포인트 억제자 및 화학치료제가 동일한 날에 투여되는 날에, 면역 체크포인트 억제자는 화학치료제의 투여 전에, 동시에, 또는 후에 투여될 수 있다.

화학치료제는 암 치료에 대해 승인되거나 공인된 임의의 화학치료제일 수 있다. 예컨대 삼중 음성 유방암의 치료에 대한 일부 구체예에서, 화학치료제는 유방암 또는 삼중 음성 유방암의 치료에 대해 승인되거나 공인된다. 화학치료제는 안트라사이클린 (예를 들어, 다우노루비신, 독소루비신, 페길화된 리포솜 독소루비신, 에피루비신), 사이클로포스파미드, 알칼리화제 (예를 들어, 티오테파), 탁세인 (예를 들어, 도세탁셀, 파클리탁셀, 납(nab)-파클리탁셀), 뉴클레오타이드 유사체 또는 대사 길항 물질 (예를 들어, 플루오로유라실 (5-FU), 젬시타빈, 메토트렉세이트, 카페시타빈), 미세소관 억제자 (예를 들어, 에리불린), 백금화제 (예를 들어, 씨스플라틴, 카르보플라틴), PI3K 억제자 (예를 들어, 알펠리십), 폴리 ADP-리보스 폴리머라제 (PARP) 억제자 (예를 들어, 올라파립, 탈라조파립), 사이톡산, 익사베필론, 무타마이신, 비노렐빈, 또는 이것들의 조합일 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 일부 구체예에서, 암은 유방암 또는 TNBC익 화학치료제는 파클리탁셀 또는 납-파클리탁셀과 같은 탁세인을 포함한다.

면역자극 사이토카인, 면역 체크포인트 억제자, 및 화학치료제는 각각 주기적으로 대상체에게 투여된다. 종양내 전기천공법에 의해 적어도 하나의 면역자극 사이토카인을 암호화하는 적어도 하나의 발현 벡터의 유효 용량을 투여하기 위해서, 발현 벡터는 3-6주 주기의 제1 일 (±2일); 제1 일 (±2일) 및 제5 일 (±2일); 제1 일 (±2일) 및 제8 일 (±2일); 또는 제1 일 (±2일), 제5 일 (±2일), 및 제8 일 (±2일)에 (즉, 치료 기간 동안 3-6주마다 지정된 날에) IT-EP에 의해 투여된다. 일부 구체예에서, 면역자극 사이토카인은 6주 주기에 따라 투여된다. 일부 구체예에서, 면역자극 사이토카인은 6주 주기의 제1 일 (±2일), 제5 일 (±2일), 및 제8 일 (±2일)에 투여된다. 일부 구체예에서, 면역자극 사이토카인은 6주 주기의 제1 일 (±2일), 제8 일 (±2일), 및 제15 일 (±2일)에 투여된다. 일부 구체예에서, 면역자극 사이토카인은 4주 주기의 제1 일 (±2일) 및 제8 일 (±2일)에 투여된다. 면역 체크포인트 억제자의 유효 용량을 투여하기 위해서, 면역 체크포인트 억제자는 3-6주 주기의 제1 일 (±2일)에 (즉, 치료 기간 동안 3-6주마다 지정된 날에) 투여된다. 일부 구체예에서, 면역 체크포인트 억제자는 3주 주기의 제1 일 (±2일)에 투여된다. 일부 구체예에서, 면역 체크포인트 억제자는 4주 주기의 제1 일 (±2일)에 투여된다. 화학치료제는 화학치료제에 대해 일반적으로 용인되는 관행에 따라 (즉, 제품 라벨 또는 일반적으로 용인되는 관리 표준에 따라) 대상체에게 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, 화학치료제는 대상체에게 1-6주 주기의 제1 일 (±2일); 제1 일 (±2일) 및 제8 일 (±2일); 제1 일 (±2일) 및 제15 일 (±2일); 또는 제1 일 (±2일), 제8 일 (±2일), 및 제15 일 (±2일)에 (즉, 치료 기간 동안 1-6주마다 지정된 날에) 투여된다. 일부 구체예에서, 면역 체크포인트 억제자는 4주 주기에 따라 투여된다. 일부 구체예에서, 면역 체크포인트 억제자는 4주 주기의 제1 일, 제8 일 및 제15 일에 투여된다. 각각의 면역자극 사이토카인, 면역 체크포인트 억제자, 및 화학치료제에 대한 치료 주기는 동시에 투여된다. 일부 구체예에서, 각각의 면역자극 사이토카인, 면역 체크포인트 억제자, 및 화학치료제에 대한 치료 주기는, 예를 들어, 3주 면역자극 사이토카인 치료 주기의 날, 면역 체크포인트 억제자 치료 주기의 제1 일, 및 화학치료제 치료 주기의 제1 일이 동일한 날에 시작되도록 동일한 날에 시작한다. 일부 구체예에서, 면역자극 사이토카인은 IIL-12를 포함하고, 체크포인트 억제자는 PD-1 또는 PD-L1 안타고니스트를 포함하고, 화학치료제는 납-파클리탁셀을 포함한다.

일부 구체예에서, 대상체에서 암의 방법이 기재되며 다음 단계를 포함한다:

(a) 대상체의 종양에 적어도 하나의 면역자극 사이토카인을 암호화하는 적어도 하나의 발현 벡터의 유효 용량을 주사하고 6주 주기의 제1 일, 제5 일, 및 제8 일에 종양에 전기천공 요법을 투여하는 단계;

(b) 3주 주기의 제1 일에 대상체에게 면역 체크포인트 억제자의 유효 용량을 투여하는 단계; 및

(c) 4주 주기의 제1 일, 제8 일, 및 제15 일에 대상체에게 화학치료제의 유효 용량을 투여하는 단계.

대상체는 각각의 작용제의 다수의 주기로 치료될 수 있다. 각각의 작용제 (면역자극 사이토카인, 면역 체크포인트 억제자, 및 화학치료제)에 대한 주기는 연속으로, 즉, 각각 6주마다, 3주마다 및 4주마다 실행될 수 있다. 일부 구체예에서, 각각의 작용제에 대한 처음 주기에 대한 제1 일이 동일한 날에 시작되고 주기는 동시에 실행된다. 일부 구체예에서, 면역자극 사이토카인, 면역 체크포인트 억제자, 및 화학치료제는 도 1에서 도표로 나타난 치료 일정에 따라 대상체에게 투여된다. 일부 구체예에서, 면역자극 사이토카인은 IL-12를 포함하고, 체크포인트 억제자는 PD-1 또는 PD-L1 안타고니스트 (즉, 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체)를 포함하고, 화학치료제는 납-파클리탁셀을 포함한다.

면역자극 사이토카인, 체크포인트 억제자 및 투여를 위해 기재된 방법에 따라 제제화된 화학치료제를 포함하는 조합 요법이 또한 기재된다.

방법 및 조합이 수술 불가능한 암에 걸린 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다. 수술 불가능한 암은 국소적으로 진행되거나 전이성일 수 있다. 수술 불가능한 암, 국소적으로 진행된 암 또는 전이성 암은 TNBC일 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 일부 구체예에서, 대상체는 하나 이상의 사전 암 요법을 받았다. 일부 구체예에서, 대상체는 하나 이상의 사전 암 요법을 받지 않았다. 일부 구체예에서, 방법은 비-전이성 또는 잠재적으로 수술 가능한 질환 설정에서 사전 신보조 또는 보조 치료를 받은 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다.

방법 및 조합이 진행성, 전이성, 난치성 암 또는 종양에 걸린 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다. 난치성 암 또는 종양은 면역 체크포인트 억제자 불응성 암 종양, 호르몬 불응성 암 또는 종양, 방사선 불응성 암 종양, 또는 화학요법 불응성 암 또는 종양일 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 일부 구체예에서, 대상체는 면역 체크포인트 억제자 요법의 적어도 하나의 과정에 반응하지 못 했다. 일부 구체예에서, 대상체는 하나 이상의 항암 요법, 제한되는 것은 아니지만, 예컨대 체크포인트 억제자 요법이 진행 중이거나 진행되었다.

방법 및 조합이 하나 이상의 항암 요법에 대해 불응성이거나 반응하지 않는 것으로 예측되는 종양을 가진 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다. 일부 구체예에서, 대상체는 적은 종양 침윤성 림프구, 적은 부분적 세포독성 림프구, 또는 소진된 T 세포를 갖는다. 일부 구체예에서, 대상체는 하나 이상의 사전 암 요법이 진행되었다.

도 1. 예시의 치료 일정.

첨부된 청구범위를 포함하여, 본원에서 사용된 바와 같이, "하나(a)", "하나(an)", 및 "그(the)"와 같은 단수형의 단어들은 문맥상 달리 분명하게 지시되지 않는 한 그것들의 상응하는 복수의 지시대상을 포함한다. 접속사 "또는"은 포괄적인 의미가 문맥상 비합리적이지 않는 한 포괄적인 의미로, 즉, "및/또는"과 동등한 것으로 해석되어야 한다. "포함하다", "포함하다", "포함하는", "함유하다", "함유하다", "함유하는", "포함하다", "포함하다", 및 "포함하는"은 제한하려는 의도가 아니다. 상기 언급된 일반적인 설명 및 상세한 설명 모두는 단지 예시이고 설명하기 위한 것이며 교시내용을 제한하지 않는다.

일반적으로, 용어 "약"은 조성물의 활성 또는 안정성에 대해 임의의 유의한 효과를 나타내지 않는 조성물의 구성요소의 양의 미약한 차이를 나타낸다. 용어 "약"은 당업자에 의해 결정될 때 특정 값에 대한 허용 가능한 오차 범위 이내를 의미하며, 이것은 값이 측정되거나 결정되는 방법, 즉, 측정 시스템의 한계에 부분적으로 의존할 것이다. 예를 들어, "약"은 당업계의 관례에 따라 1 또는 1 이상의 표준 편차 이내를 의미할 수 있다. 대안으로, "약"은 주어진 값의 최대 0 내지 20%, 0 내지 10%, 0 내지 5%, 또는 최대 1%의 범위를 의미할 수 있다. 특정 값이 본 출원 및 청구범위에서 기재된 경우, 달리 언급되지 않는 한 용어 "약"은 특정 값에 대해 허용 가능한 오차 범위 이내를 의미하는 것으로 가정되어야 한다. 모든 범위는 "종점을 포함하지 않는" 것과 같은 배제의 표현의 부재시 종점을 포함하는 것으로 해석되어야 하며; 따라서, 예를 들어, "10-15 이내"는 값 10과 15를 포함한다. 당업자는 나열된 범위가 끝값들 사이의 정수로서, 가능한 경우, 그 범위 내의 유리수로서 끝값을 포함한다는 것을 이해할 것이다 (예를 들어, 범위 5-10은 5, 6, 7, 8, 9, 및 10을 포함하고, 가능한 경우, 6.8, 9.35, 등과 같은 값을 포함한다).

본원에서 인용된 모든 참고문헌은 개개의 간행물, 특허 출원, 또는 특허가 구체적으로 및 개별적으로 참조로 포함되는 것으로 나타난 바와 동일한 정도로 참조로 포함된다.

A. 정의

"면역 체크포인트 단백질"은 T 세포 기능장애 또는 아폽토시스(apoptosis)를 유도하는 면역 세포 표면 수용체/리간드의 군 중 어느 하나이다. 이들 면역 억제 표적은 과도한 면역 반응을 약화시키고 자가-관용을 보장한다. 종양 세포는 이들 체크포인트 단백질의 억제 효과를 이용한다. 면역 체크포인트는 면역 시스템의 정상적인 부분이다. 그것들의 역할은 제어되지 않는 면역 반응을 방지하는 것이다. 면역 체크포인트는 T 세포의 표면 상의 수용체가 T 세포 소진이라고 불리는 과정에서 다른 세포에 의해 발현되는 체크포인트 단백질을 인식하고 그것에 결합할 때 관여한다. 일부 종양은 이들 체크포인트 단백질을 발현함으로써 면역 반응을 회피한다. 체크포인트 단백질의 예는 세포독성 T 림프구 항원-4 (CTLA-4), 예정된 사멸 1 (PD-1), 예정된 사멸 리간드 1 (PD-L1), PD-12, 림프구 활성화 유전자-3 (LAG-3), T 세포 면역글로불린 무친-3 (TIM3), 살해 세포 면역글로불린-유사 수용체 (MR), B- 및 T- 림프구 감쇠자 (BTLA), 아데노신 A2a 수용체 (A2aR), 및 헤르페스 바이러스 진입 매개자 (HVEM)를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 예시의 면역 체크포인트 단백질은 표 1에서 나열된다. 체크포인트 억제자를 사용하여 체크포인트 단백질과 그것들의 T 세포 수용체 사이의 상호작용을 차단하는 것은 T 세포 소진을 극복하여 종양에 대한 면역 반응을 증가시키는데 사용된다.

"면역 체크포인트 억제자" (체크포인트 억제자)는 면역 체크포인트 단백질의 효과를 차단함으로써 면역 억제를 억제하거나 방지하는 분자이다. 체크포인트 억제자는 항체 및 항체 단편, 나노바디, 디아바디, 체크포인트 분자의 가용성 결합 파트너, 소분자 치료제, 및 펩타이드 안타고니스트를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 체크포인트 억제자의 예는 항 체크포인트 단백질 항체를 포함한다. 면역 체크포인트 억제자는 PD-1 및/또는 PD-L1 안타고니스트일 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다. PD-1 및/또는 PD-L1 안타고니스트는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체일 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 항-PD-1/PD-L1 항체는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 피딜리주맙, 및 아테졸리주맙을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.

"면역자극 사이토카인"은 바이러스, 박테리아, 또는 종양 항원을 포함한 외래의 항원에 대한 면역 반응을 매개하거나 향상시키는 사이토카인을 포함한다. 선천성 면역자극 사이토카인은, 예를 들어, IL-1, IL-2, IL-7, IL-10, IL-12, IL-15, IL-15/수용체 α, IL-21, IL-23, IL-27, IL-35, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, TNF-α, TGF-β, 및 CXCL9를 포함할 수 있다. 적응성 면역자극 사이토카인은, 예를 들어, IL-2, IL-4, IL-5, TGF-β, IL-10 및 IFN-γ를 포함한다. 면역자극 사이토카인의 예는 표 2에서 제공된다.

"핵산"은 RNA 및 DNA 둘 다를 포함한다. RNA 및 DNA는 cDNA, 게놈 DNA, 바이러스 DNA, 플라스미드 DNA, 바이러스 RNA, 합성 RNA 또는 DNA, 및 mRNA를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 핵산은 또한 변형된 RNA 또는 DNA를 포함한다. 일부 구체예에서, 핵산은 "벡터"를 구성하는 플라스미드 DNA이다. 핵산은 잠재적인 치료 작용을 가진 단백질, 예를 들어, IFN-a, IL-2, IL-12, 등을 발현하는 진핵생물 프로모터를 가진 플라스미드 DNA 벡터일 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다.

"발현 벡터"는 발현 생성물 (예를 들어, 펩타이드(들) (즉, 폴리펩타이드(들) 또는 단백질(들)) 또는 RNA)을 암호화하는 RNA 또는 DNA 암호화 서열 또는 RNA 또는 DNA의 분절을 나타낸다. 발현 벡터는 바이러스, 약화된 바이러스, 플라스미드, 선형 DNA 분자, 또는 mRNA일 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 발현 벡터는 포유류 세포와 같은 세포에서 하나 이상의 폴리펩타이드를 발현할 수 있다. 발현 벡터는 암호화된 발현 생성물의 발현에 필요한 하나 이상의 서열을 포함할 수 있다. 발현 벡터는 DNA 암호화 서열에 작동 가능하게 연결된 인핸서, 프로모터, 종결자, 및 폴리A 신호 중 하나 이상을 포함할 수 있다.

용어 "플라스미드"는 포유류 세포에서 발현될 수 있는 폴리펩타이드를 암호화하는 적어도 하나의 서열 (예컨대 기재된 발현 벡터 중 어느 것)을 포함하는 핵산을 나타낸다. 플라스미드는 폐환형 DNA 분자일 수 있다. 암호화 서열의 발현을 변화시키고 세포에서 플라스미드의 복제를 촉진하기 위해 다양한 서열이 플라스미드에 포함될 수 있다. 전사, 전령 RNA (mRNA)의 안정성, RNA 처리, 또는 번역의 효율에 영향을 미치는 서열이 사용될 수 있다. 이러한 서열은 5' 비번역된 영역 (5' UTR), 프로모터, 인트론, 및 3' 비번역된 영역 (3' UTR)을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 플라스미드는 대량으로 및/또는 고수율로 제조될 수 있다. 플라스미드는 cGMP 제조를 사용하여 추가로 제조될 수 있다. 플라스미드는 박테리아, 예컨대 대장균(E. coli)으로 형절전환될 수 있다. DNA 플라스미드는 포유류 대상체로의 주사를 위해 안전하고 효과적이도록 제제화될 수 있다.

"작동 가능하게 연결된"은 두 구성요소가 정상적으로 기능하고 구성요소 중 적어도 하나가 다른 구성요소 중 적어도 하나에 가해지는 기능을 매개할 수 있을 가능성을 허용하는 2개 이상의 구성요소 (예를 들어, 프로모터 및 또 다른 서열 요소)의 병치를 나타낸다. 예를 들어, 암호화 서열에 작동 가능하게 연결된 프로모터는 스플라이싱되고 (인트론을 포함하는 경우), 선택적으로, 암호화 서열에 의해 암호화되는 단백질로 번역될 수 있는 RNA, 예컨대 mRNA로의 암호화 서열의 RNA 폴리머라제-매개된 전사를 지시할 것이다. 암호화 서열은 하나 이상의 전사 또는 번역 제어 서열에 "작동 가능하게 연결될" 수 있다. 유전자에 작동 가능하게 연결된 종결자/폴리A 신호는 RNA로의 유전자의 전사를 종결시키고 RNA에 폴리 A 신호의 추가를 지시한다.

"프로모터"는 세포에서 RNA 폴리머라제에 결합하고 (예를 들어, 직접적으로 또는 다른 프로모터-결합된 단백질 또는 물질을 통해) 암호화 서열의 전사를 시작할 수 있는 DNA 조절 영역이다. 프로모터는, 제한되는 것은 아니지만, 인핸서를 포함하는, 전사 시작 속도에 영향을 미치는 하나 이상의 추가적인 영역 또는 요소를 포함할 수 있다. 프로모터는 구성적으로 활성인 프로모터, 조건부 프로모터, 유도성 프로모터, 또는 세포-유형 특이적 프로모터일 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 프로모터의 예는, 예를 들어, WO 2013/176772에서 발견될 수 있다. 프로모터는 CMV 프로모터, 닭 β-액틴 프로모터, 변형된 닭 β-액틴 프로모터 (smCBA), 옵신 프로모터, 인간 옵신 프로모터, 절단된 인간 옵신 프로모터 (hOp), 로돕신 키나제 프로모터, 인간 로돕신 키나제 프로모터, Igκ 프로모터, mPGK, SV40 프로모터, β-액틴 프로모터, α-액틴 프로모터, SRa 프로모터, 헤르페스 티미딘 키나제 프로모터, 단순 헤르페스 바이러스 (HSV) 프로모터, 마우스 유선 종양 바이러스 긴 말단 반복부위 (LTR) 프로모터, 아데노바이러스 주요 후기 프로모터 (Ad MLP), 라우스 육종 바이러스 (RSV) 프로모터, 및 EF1α 프로모터일 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다. CMV 프로모터는 CMV 급초기 프로모터, 인간 CMV 프로모터, 마우스 CNV 프로모터, 및 유인원 CMV 프로모터일 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 일부 구체예에서, 프로모터는 망막-특이적 프로모터이다.

용어 "암"은 일반적으로 부적절한 세포 증식, 비정상적인 또는 과도한 세포 증식을 특징으로 하는 무수히 많은 질환을 포함한다. 암의 예는 유방암, 삼중 음성 유방암, 결장암, 전립선암, 췌장암, 흑색종, 폐암, 난소암, 신장암, 뇌암, 또는 육종을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.

삼중 음성 유방암은 에스트로겐 (ER) 및 프로게스테론 (PR) 수용체에 대한 음성 표현형 및 인간 상피 성장 인자 수용체 2 (HER2)에 대한 유전자 증폭/단백질 과발현의 결핍을 나타낸다. ER/PR 음성은 종양 생검 세포의 10% 미만이 ER 또는 PR에 대해 양성으로 염색된다는 것을 나타낸다.

"치료-불응성 암"은의 사전 의학적 치료에 반응하지 않거나, 또는 반응하지 않았던 암이다. 일부 구체예에서, 치료-불응성은, 치료에 관하여, 치료에 대한 불충분한 반응 또는 치료에 대한 부분적인 또는 완전한 반응의 결핍을 나타낸다. 예를 들어, 환자는 그들이 치료의 적어도 2회 용량을 받은 후 적어도 부분적인 반응을 나타내지 않으면, 치료 (예를 들어, PD-1 또는 PD-L1 억제자 요법과 같은 체크포인트 억제자 요법)에 대해 불응성인 것으로 간주될 수 있다.

"종양 미세환경"은 종양 주위의 환경을 나타내고, 예컨대 종양에 산소, 성장 인자, 및 영양소를 제공하거나, 또는 종양에 대한 면역 반응을 억제함으로써 종양의 성장 및/또는 생존을 돕는 비-악성 관 조직 및 기질 조직을 포함한다. 종양 미세환경은 종양이 존재하는 세포 환경을 포함하며, 주위 혈관, 면역 세포, 섬유아세포, 골수-유래된 염증 세포, 림프구, 신호전달 분자 및 세포외 매트릭스를 포함한다.

"종양 가장자리" 또는 "가장자리 조직"은 종양 바로 근처 또는 주위의 시각적으로 정상적인 조직이다. 전형적으로, 가장자리 조직은 조직의 0.1-2 cm 이내에 있는 시각적으로 정상적인 조직이다. 종양 가장자리 조직은 종종 종양이 수술에 의해 절제될 때 제거된다.

"치료"는 암 세포의 증식의 억제 또는 감소, 암 세포의 파괴, 암 세포의 증식의 방지, 악성 세포의 시작의 방지, 형질전환된 전악성 세포의 악성 질환으로의 진행의 정지 또는 반전, 또는 질환의 개선을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.

"약리학적 유효량", "치료적 유효량", "유효량", 또는 "유효 용량"은 의도된 약리학적, 치료적, 또는 예방적 결과를 생산하기 위한 작용제의 양을 나타낸다.

"대상체"는 동물, 예컨대 포유동물, 예를 들어, 인간을 나타낸다. 본원에서 기재된 방법은 인간 및 비-인간 동물 둘 다에서 유용할 수 있다. 일부 구체예에서, 대상체는 포유동물 (예컨대 질환의 동물 모델)이고, 일부 구체예에서, 대상체는 인간이다. 수의학적 용도가 또한 본 발명에 의해 포함되도록 의도된다.

"전기천공법", "전기-투과화", 또는 "동전학적 증강" ("EP")은 세포로의 생체 분자, 예컨대 플라스미드, 핵산, 또는 약물의 진입을 용이하게 하기 위한 막관통 전기장 (전기천공) 펄스의 사용을 나타낸다.

"가역적 전기천공법"은 일반적으로는 표적 세포의 전기장 임계치 미만인 전기 펄스를 사용하여 세포 막에 투과시킬 수 없는 분자에 대한 세포 막의 가역적인, 또는 일시적인 투과화이다. 전기 펄스가 세포의 전기적 임계치 미만일 때, 세포가 회복될 수 있고 전기 펄스에 의해 사멸되지 않는다. 가역적 전기천공법은 세포를 사멸시키지 않으면서 핵산과 같은 거대 분자를 세포로 전달하는데 사용될 수 있다. 가역적 전기천공법은 세포로의 핵산과 같은 거대 분자의 흡수를 용이하게 하기 위해 전기 펄스를 인가하는 방법이다. 달리 지시되지 않는 한, 본원에서 전기천공법에 대한 지시대상은 가역적 전기천공법을 포함한다.

"종양내 전기천공법" (IT-EP)은 하나 이상의 핵산을 종양에 주사하는 것과 적어도 하나의 전기천공 펄스를 종양에 투여하는 것을 포함한다. 하나 이상의 핵산은 전기천공 펄스를 투여하기 전에 또는 전기천공 펄스를 투여하는 것과 실질적으로 동시에 주사될 수 있다. 전기천공 펄스는 포유류 대상체에서 사용하기에 적합한 임의의 공지된 전기천공 디바이스를 사용하여 수행될 수 있다.

"국소적으로 진행된 암"은 그것이 시작된 장기 바깥으로 성장했지만 아직 신체의 먼 부분으로 확산되지 않은 암을 기재하는데 사용된다. 국소적으로 진행된 암은 근처의 조직 또는 림프절로 확산된 암일 수 있다. 국소적으로 진행된 암은 먼 거리 전이의 부재 하에 가장 많이 진행된 종양을 특징으로 한다. 국소적으로 진행된 암, 예컨대 유방암은 국소 재발의 장기간 감소를 제공하는 초기 수술 접근법 이후 조직병리학 검사에서 음성 가장자리를 달성할 확률을 기반으로 "수술 가능하거나" 또는 "수술 불가능할" 수 있다.

"전이성 암"은 그것이 시작된 신체의 부분 (원발 부위)에서 신체의 다른 부분으로 확산된 암이다.

"수술 가능하다"는 것은 수술에 의해 치료되거나 제거될 수 있는 암을 기재한다.

"수술 불가능하다"는 것은 전형적으로 다수의 종양 또는 전이의 위치 또는 존재로 인해 수술에 의해 쉽게 제거될 수 없는 암을 기재한다.

"제1 선 요법" 또는 "제1 선 치료"는 주어진 유형 및 단계의 암에 대해 제공된 첫 번째 또는 초기 치료, 치료 양생법, 또는 양생법이다. 그것은 단일요법이거나 치료의 세트, 제한되는 것은 아니지만, 예컨대 수술에 이어진 화학요법 및 방사선일 수 있다. 그것은 또한 1차 치료 또는 요법이라고도 불린다. 일부 구체예에서, 제1 선 요법은 종양의 수술에 의한 절제 전에 신보조제로서 대상체에게 투여된다.

"제2 선 요법" 또는 "제2 선 치료"는 주어진 유형 및 단계의 암에 대한 두 번째 또는 후속 치료, 치료 양생법, 또는 양생법이다. 그것은 단일요법이거나 치료의 세트일 수 있다. 일부 구체예에서, 제2 선 요법은 대상체가 제1 선 요법에 충분하 반응하지 못했거나 제1 선 요법에 더 이상 반응하지 않은 후에 대상체에게 투여된다.

"신보조제"는, 보통은 수술인, 주요 치료가 제공되기 전에 종양을 수축시키기 위한 첫 번째 단계로서 제공된 치료이다.

B. 암을 치료하기 위한 방법

암을 치료하기 위한 방법이 기재된다. 기재된 방법은 대상체에서 하나 이상의 종양의 크기를 감소시키고, 대상체에서 암 세포의 성장을 억제하고, 전이를 억제하거나 감소시키고, 대상체에서 새로운 종양 또는 전이의 발달을 감소시키거나 억제하고, 및/또는 암으로 고통받고 있는 대상체에세 암의 재발을 감소시키는데 사용될 수 있다.

요법은 대상체를 면역자극 사이토카인, 면역 체크포인트 억제자, 및 화학치료제로 치료하여 달성된다. 면역자극 사이토카인 (예를 들어, IL-12)은 면역자극 사이토카인을 암호화하는 핵산 발현 벡터의 종양내 전기천공법에 의해 대상체의 종양에 투여된다. 면역 체크포인트 억제자 및 화학치료제는 면역 체크포인트 억제자 및 화학치료제에 대한 제품 라벨에 따라 대상체에게 투여될 수 있다 (예를 들어, 전신으로). 면역 체크포인트 억제자 요법 및 화학요법은 면역자극 사이토카인을 암호화하는 발현 벡터의 전기천공법에 의한 종양내 전달 전에, 동안에, 또는 후에 일어날 수 있다.

일부 구체예에서, 방법은 다음 단계를 포함한다:

a) 대상체에게 적어도 하나의 면역자극 사이토카인 치료 주기를 투여하는 단계로서, 주기는 적어도 하나의 면역자극 사이토카인을 암호화하는 발현 벡터의 치료적 유효량을 포함하는 조성물을 IT-EP에 의해 종양에 투여하는 것을 포함하는, 단계

b) 대상체에게 적어도 하나의 면역 체크포인트 억제자 치료 주기를 투여하는 단계로서, 주기는 면역 체크포인트 억제자의 치료적 유효량을 포함하는 조성물을 정맥내 주입에 의해 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 단계; 및

c) 대상체에게 적어도 하나의 화학치료제 치료 주기를 투여하는 단계로서, 주기는 화학치료제의 치료적 유효량을 포함하는 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 단계.

일부 구체예에서, 면역자극 사이토카인은 IL-12를 포함한다. 일부 구체예에서, 면역 체크포인트 억제자는 PD-1/PD-L1 안타고니스트 (예를 들어, 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체)를 포함한다. 일부 구체예에서, 화학치료제는 납-파클리탁셀을 포함한다. 일부 구체예에서, 면역자극 사이토카인은 IL-12를 포함하고, 면역 체크포인트 억제자는 PD-1/PD-L1 안타고니스트 (예를 들어, 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체)를 포함하고 화학치료제는 납-파클리탁셀을 포함한다.

일부 구체예에서, 방법은 적어도 하나의 면역자극 사이토카인을 암호화하는 적어도 하나의 발현 벡터의 유효 용량을 암성 종양에 주사하는 단계 및 3-6주 주기의 제1 일, 제5 일, 및 제8 일에 전기천공 요법을 종양에 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 적어도 하나의 면역자극 사이토카인을 암호화하는 적어도 하나의 발현 벡터의 유효 용량을 암성 종양에 주사하는 단계 및 6주 주기의 제1 일, 제5 일, 및 제8 일에 전기천공 요법을 종양에 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 적어도 하나의 면역자극 사이토카인을 암호화하는 적어도 하나의 발현 벡터의 유효 용량을 암성 종양에 주사하는 단계 및 적어도 1 주기 동안 6주 주기의 제1 일, 제5 일, 및 제8 일에 전기천공 요법을 종양에 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 적어도 하나의 면역자극 사이토카인을 암호화하는 적어도 하나의 발현 벡터의 유효 용량을 암성 종양에 주사하는 단계 및 적어도 2 주기 동안 6주 주기의 제1 일, 제5 일, 및 제8 일에 전기천공 요법을 종양에 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 적어도 하나의 면역자극 사이토카인을 암호화하는 적어도 하나의 발현 벡터의 유효 용량을 암성 종양에 주사하는 단계 및 적어도 2 주기 동안 6주마다 제1 일, 제5 일, 및 제8 일에 전기천공 요법을 종양에 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 적어도 하나의 면역자극 사이토카인을 암호화하는 적어도 하나의 발현 벡터의 유효 용량을 암성 종양에 주사하는 단계 및 최대 17 주기 또는 그 이상 동안 6주마다 제1 일, 제5 일, 및 제8 일에 전기천공 요법을 종양에 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 적어도 하나의 면역자극 사이토카인을 암호화하는 적어도 하나의 발현 벡터의 유효 용량을 암성 종양에 주사하는 단계 및 최대 2년 또는 그 이상 동안 6주마다 제1 일, 제5 일, 및 제8 일에 전기천공 요법을 종양에 투여하는 단계를 포함한다. 각각의 투여에 대해, 투여는 지정된 날 ±2일; 예를 들어, 제1 일 ±2일, 제5 일 ±2일, 제8 일 ±2일에 일어날 수 있다.

일부 구체예에서, 방법은 3주 주기의 제1 일에 대상체에게 면역 체크포인트 억제자의 유효 용량을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 적어도 1 주기 동안 3주 주기의 제1 일에 대상체에게 면역 체크포인트 억제자의 유효 용량을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 적어도 2 주기 동안 3주 주기의 제1 일에 대상체에게 면역 체크포인트 억제자의 유효 용량을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 적어도 2 주기 동안 3주마다 제1 일에 대상체에게 면역 체크포인트 억제자의 유효 용량을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 최대 33주기 또는 그 이상 동안 3주마다 제1 일에 대상체에게 면역 체크포인트 억제자의 유효 용량을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 최대 2년 또는 그 이상 동안 3주마다 제1 일에 대상체에게 면역 체크포인트 억제자의 유효 용량을 투여하는 단계를 포함한다. 각각의 투여에 대해, 투여는 지정된 날 ±2일; 예를 들어, 제1 일 ±2일에 일어날 수 있다.

일부 구체예에서, 방법은 4주 주기의 제1 일, 제8 일, 및 제15 일에 대상체에게 화학치료제의 유효 용량을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 적어도 1 주기 동안 4주 주기의 제1 일, 제8 일, 및 제15 일에 대상체에게 화학치료제의 유효 용량을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 적어도 2 주기 동안 4주 주기의 제1 일, 제8 일, 및 제15 일에 대상체에게 화학치료제의 유효 용량을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 적어도 2 주기 동안 4주마다 제1 일, 제8 일, 및 제15 일에 대상체에게 화학치료제의 유효 용량을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 최대 25 주기 또는 그 이상 동안 4주 주기마다 제1 일, 제8 일, 및 제15 일에 대상체에게 화학치료제의 유효 용량을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 방법은 최대 2년 또는 그 이상 동안 4주마다 제1 일, 제8 일, 및 제15 일에 대상체에게 화학치료제의 유효 용량을 투여하는 단계를 포함한다. 각각의 투여에 대해, 투여는 지정된 날 ±2일; 예를 들어, 제1 일 ±2일, 제8 일 ±2일, 제15 일 ±2일에 일어날 수 있다.

일부 구체예에서, 면역자극 사이토카인, 면역 체크포인트 억제자, 및 화학치료제는 처음 주기의 동일한 날에 환자에게 투여되며; 즉, 제1 주기의 제1 일은 각 주기에 대해 동일한 날이다.

일부 구체예에서, 면역자극 사이토카인, 체크포인트 억제자 및 화학치료제는 제1 일에 대상체에게 투여된다. 면역자극 사이토카인은 제5 일 및 제8 일에 다시 투여되고, 화학치료제는 제8 일 및 제15 일에 다시 투여된다. 면역자극 사이토카인은 6주마다 제1 일, 제5 일, 및 제8 일에 투여되고; 체크포인트 억제자는 제1 일에 3주마다 투여되고; 화학치료제는 4주마다 제1 일, 제8 일, 및 제15 일에 투여된다.

일부 구체예에서, 면역자극 사이토카인은 6주마다 제1 일, 제5 일, 및 제8 일에 투여되고; 체크포인트 억제자는 3주마다 제1 일에 투여되고; 화학치료제는 화학치료제에 대한 관리 표준에 따라 투여된다.

기재된 방법은 많은 유형의 악성 종양 (즉, 암)에서의 사용에 대해 고려된다. 예를 들어, 본원에서 기재된 디바이스 및 방법은 부신피질암, 항문암, 담관암 (예를 들어, 간문주위 암, 원위부 담관암, 간내 담관암), 방광암, 양성 및 암성 골암 (예를 들어, 골종, 유골종, 골아세포종, 골연골종, 혈관종, 연골점액유사섬유종, 골육종, 연골육종, 섬유육종, 악성 섬유조직구종, 골 거대 세포 종양, 척삭종, 림프종, 다발성 골수종), 뇌 및 중추신경계 암 (예를 들어, 뇌수막종, 성상세포종, 핍지교종, 상의세포종, 신경교종, 수모세포종, 신경절교종, 신경초종, 배아세포종, 두개인두종), 유방암 (예를 들어, 유관 상피내암, 침윤성 관 암종, 침윤성 소엽 암종, 소엽 상피내암, 여성형 유방(gynecomastia)), 캐슬만 병(Castleman disease) (예를 들어, 거대 림프절 과형성, 혈관여포성 림프절 과형성), 자궁경부암, 결장작장암, 자궁내막암 (예를 들어, 자궁내막 선암종, 선극세포종, 유두상 장액성 선암종, 투명 세포), 식도암, 담낭암 (점액성 선암종, 소세포 암종), 위장관 카르시노이드 종양 (예를 들어, 융모암종, 파괴성 융모선암종), 호지킨 병(Hodgkin's disease), 비-호지킨 림프종(non-Hodgkin's lymphoma), 카포시 육종(Kaposi's sarcoma), 신장암 (예를 들어, 신장 세포 암), 후두 및 하인두암, 간암 (예를 들어, 혈관종, 간 선종, 국소 결절성 과증식, 간세포 암종), 폐암 (예를 들어, 소세포 폐암, 비-소세포 폐암), 중피종, 형질세포종, 비강 및 부비동암 (예를 들어, 감각신경 모세포종, 치사중간선 육아종), 비인두암, 신경아세포종, 구강 및 구인두암, 난소암, 췌장암, 음경암, 뇌하수체암, 전립선암, 망막아세포종, 횡문근육종 (예를 들어, 배아형 횡문근육종, 포상 횡문근육종, 다형태 횡문근육종), 타액선암, 피부암, 흑색종 및 비 흑색종 피부암 둘 다), 위암, 고환암 (예를 들어, 정상피종, 비정상피종 생식 세포 암), 흉선암, 갑상선암 (예를 들어, 소포성 암종, 미분화 암종, 저분화성 암종, 갑상선 수질 암종, 갑상선 림프종), 질암, 외음부암, 및 자궁암 (예를 들어, 자궁 평활근육종)에서의 사용에 대해 고려된다. 일부 구체예에서, 방법은 삼중 음성 유방암을 치료하는데 있어서의 사용에 대해 고려된다. 일부 구체예에서, 방법은 흑색종을 치료하는데 있어서의 사용에 대해 고려된다.

치료된 종양은 피부 종양, 피하 종양, 또는 내장 종양일 수 있다. 일부 구체예에서, 기재된 방법 및 발현 벡터는 원발성 종양, 뿐만 아니라 먼 거리 (즉, 미치료) 종양 및 전이를 치료하는데 사용될 수 있다.

암은 0 기 (제자리(in situ)), I 기, II 기, III 기, 또는 IV 기일 수 있다. 암은 수술 가능하거나 또는 수술 불가능할 수 있다. 암은 국소적으로 진행된 암 (II 기 또는 III) 또는 전이성 (IV 기)일 수 있다. 암은 유방암, 삼중 음성 유방암, 흑색종, 두경부암, 편평세포 암종, 기저세포 암종, 및 메르켈 세포 암종일 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 일부 구체예에서, 암은 수술 가능하다. 일부 구체예에서, 암은 수술 불가능하다. 일부 구체예에서, 암은 수술 불가능한 국소적으로 진행된 암 또는 전이성 암이다.

0 기 (제자리) 암은 그것들이 시작된 위치에 (제자리) 여전히 위치하고 근처의 조직으로 확산되지 않았다.

I 기 암은 보통 근처의 조직으로 깊게 자라지 않은 작은 암 또는 종양이다. 그것은 또한 림프절 또는 신체의 다른 부분으로 확산되지 않았다. 그것은 종종 초기 암이라고 불린다.

II 기 암은 I 기보다 더 크지만, 다른 위치로 확산되지는 않았다.

III 기 암은 근처의 조직으로 더 깊게 자란 더 큰 암 또는 종양이다. 그것들은 또한 림프절로 확산되지만 신체의 다른 부분으로는 확산되지 않을 수도 있다.

IV 기 암은 원래의 종양을 너머 다른 장기 또는 신체의 부분으로 확산되었다. 그것은 또한 진행된 암 또는 전이성 암이라고 불릴 수도 있다.

암은 또한 주요 (원래의) 종양의 크기 및 정도 (T), 암이 확산된 림프절의 수 (N), 및 전이의 정도 (M)에 따르는 TNM 시스템에 따라 단계를 나눌 수 있다. T, N, 및 M은 각각 번호가 할당될 수 있다: T0-T6, NO-Nx (예를 들어, x = 1, 2, 3), 및 M0-M1. Tx, Nx, 또는 Mx는 종양 또는 전이가 측정될 수 없다는 것을 나타낸다.

대상체에게 면역자극 사이토카인 (예를 들어, IL-12)을 암호화하는 발현 벡터의 유효 용량을 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 종양의 치료 방법이 기재된다. 면역자극 사이토카인을 암호화하는 발현 벡터는 발현 벡터를 종양, 종양 미세환경, 및/또는 종양 가장자리 조직에 주사하고 전기천공 요법을 종양, 종양 미세환경, 및/또는 종양 가장자리 조직에 투여함으로써 (IT-EP 치료) 대상체에게 투여된다.

IT-EP 면역자극 사이토카인 요법 또는 치료는 종양, 종양 미세환경, 및/또는 종양 가장자리 조직에 면역자극 사이토카인을 암호화하는 발현 벡터의 유효 용량을 주사하고 적어도 하나의 전기천공 펄스를 종양에 투여하는 것을 포함한다. 전기천공법은 IL-12 플라스미드 주사의 10분 이내, 8분 이내, 5분 이내, 4분 이내, 3분 이내, 2분 이내, 또는 1분 이내에 투여된다. 전기천공 펄스는 포유류 대상체에서 사용하기에 적합한 임의의 공지된 전기천공 디바이스를 사용하여 수행될 수 있다. 일부 구체예에서, 전기천공 디바이스는 약 0.5 내지 약 1.0 cm 직경의 원형 구성형태의 6개의 바늘을 포함한다. 전기천공 디바이스 바늘은 플라스미드가 주사되는 부위 또는 그 주위에 배치된다. IT-EP 면역자극 사이토카인 요법은 종양 미세환경에서 면역자극 사이토카인의 국소화된 발현을 초래한다.

일부 구체예에서, 개개의 종양은 다음 종양에 주사하고 전기천공하기 전에 주사되고 전기천공된다. 병변이 가까이에 있으면, 이들 병변이 먼저 주사된 다음 EP를 겪을 수 있다. 일부 구체예에서, 대상체의 모든 종양이 주사된 후 이어서 주사된 종양을 전기천공하였다.

IT-EP IL-12 요법 또는 치료는 종양, 종양 미세환경, 및/또는 종양 가장자리 조직에 IL-12를 암호화하는 발현 벡터의 유효 용량을 주사하고 적어도 하나의 전기천공 펄스를 종양에 투여하는 것을 포함한다. 전기천공 펄스는 포유류 대상체에서 사용하기에 적합한 임의의 공지된 전기천공 디바이스를 사용하여 수행될 수 있다. IT-EP IL-12는 종양 미세환경에서 IL-12의 국소화된 발현을 초래한다.

TNBC 병변에서 IT-EP IL-12는 종양으로의 T 세포, 예컨대 CD8+ T 세포의 침윤 (TIL)을 증가시킬 것으로 예상된다. 종양 미세환경 내에서 증가된 TIL은 개선된 무질환 및 전체 생존률과 연관성이 있었다. 종양에서 IL-12의 발현은 또한, 예컨대 자연 살해 세포 및 세포독성 TIL의 활성화, 조절 T 세포 및 골수-유래된 억제자 세포의 억제 (Kobayashi ML et al. (1989). "Identification and purification of natural killer cell stimulatory factor (NKSF), a cytokine with multiple biologic effects on human lymphocytes." The Journal of experimental medicine 170(3): 827-845; Brunda MJ et al. (1993). "Antitumor and antimetastatic activity of interleukin 12 against murine tumors." The Journal of experimental medicine 178(4): 1223-1230; Steding CE et al. (2011) "The role of interleukin- 12 on modulating myeloid-derived suppressor cells, increasing overall survival and reducing metastasis." Immunology 133(2): 221-238), 인터페론-감마 (IFNγ) 생산의 유도, 및 종양 내 항원 처리 및 제공 기작의 상향조절을 통해 종양에 대한 세포-매개된 면역 반응을 증가시킨다. IL-12의 국소 발현은 높은 수준의 전신 IL-12로 이어지지 않으며, 따라서 IL-12의 전신 투여와 관련된 독성을 방지한다. IT-EP IL-12는 암을 치료하는데 있어서 체크포인트 억제자 요법에 대한 임상 반응을 향상시키는 것으로 나타났다.

IL-12는 IL-12A (p35) 및 IL-12B (p40) 서브유닛 둘 다를 가진 헤테로다이머 사이토카인이다. IL-12를 암호화하는 발현 벡터는 IL-12 p40-IL-12 p35 융합 단백질 (IL-12 p70)을 암호화하는 핵산 서열, IL-12 p35-IL-12 p40 융합 단백질 (IL-12 p70)을 암호화하는 핵산 서열, 또는 IL-12 p35 서브유닛 및 IL-12 p40 서브유닛을 포함할 수 있다. IL-12 p35 및 IL-12 p40 서브유닛을 암호화하는 핵산 서열은 번역 수정 요소에 의해 분리된 인접한 핵산 서열 상에 있어서, 두 서브유닛이 단일 프로모터로부터 또는 단일 mRNA 상에서 발현되게 할 수 있다. 번역 수정 요소는 내부 리보솜 진입 부위 (IRES) 요소 또는 리보솜 건너뛰기(skipping) 조절자일 수 있다. 리보솜 건너뛰기 조절자는 2A 요소 (2A 펩타이드 또는 2A 자가-분열 펩타이드라고도 불림)일 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 2A 요소는 P2A, T2A, E2A 또는 F2A 요소일 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다. IL-12 p35 및 p40 암호화 서열은 단일 프로모터의 다중시스트론성 발현 벡터로부터 발현되고 IRES 또는 2A 요소에 의해 분리될 수 있다.

발현 벡터 또는 플라스미드는 다중시스트론성 발현 벡터를 포함할 수 있다. 다중시스트론성 발현 벡터는 동일한 mRNA로부터 2개 이상의 별개의 단백질을 발현하고 하나 이상의 번역 수정 요소를 포함한다. 일부 구체예에서, IL-12를 암호화하는 발현 벡터는 단일 프로모터로부터 발현되는 2개 또는 3개의 폴리펩타이드를 발현하며, 하나 이상의 번역 수정 요소는 2개 또는 3개의 폴리펩타이드가 단일 mRNA로부터 발현될 수 있게 한다. 일부 구체예에서, 발현 벡터는 다음을 포함한다:

(c) P-A-T¹-A'

(a) P-A-T¹-B,

(b) P-B-T¹-A,

(d) P-A-T¹-A'-T²-B 또는

(e) P-B-T¹-A-T²-A'

여기서 P는 프로모터이고, A 및 A'는 IL-12 또는 IL-12 서브유닛을 암호화하고, T¹ 및 T²는 둘 다 번역 수정 요소이고, B는 제2 치료 폴리펩타이드를 암호화한다. 제2 치료 폴리펩타이드는 체크포인트 억제자, 유전자 보조제, 종양 항원, 항-CD3 항체 또는 그것의 단편, 제2 면역자극 사이토카인 (예를 들어, CXCL9), 또는 이것들의 조합일 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 일부 구체예에서, T¹ 및 T²는 번역 수정 요소이며, 독립적으로 내부 리보솜 진입 부위 (IRES) 요소 또는 리보솜 건너뛰기 조절자이다. 번역 수정 요소는 단일 전사물로부터 2개 이상의 유전자의 번역을 가능하게 한다. IRES 요소는 mRNA의 내부 영역으로부터의 번역의 시작을 제공한다. 리보솜 건너뛰기 조절자는 리보솝이 요소의 C-말단에서 펩타이드 결합의 합성을 건너뛸 수 있게 한다. 리보솜 건너뛰기 조절자는 2A 요소 (2A 펩타이드 또는 2A 자가-분열 펩타이드라고도 불림)일 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 2A 요소는 P2A, T2A, E2A 또는 F2A 요소일 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 번역 조절 요소의 포함은 단일 다시스트론성 mRNA로부터의 2 이상의 폴리펩타이드의 동시-발현을 초래한다.

일부 구체예에서, IL-12 발현 벡터 작제물은 P-A-T-A'로 나타나는 식을 포함하며 여기서 a) P는 발현 프로모터이고; b) A, 및 A'는 IL-12의 서브유닛을 암호화하고; c) T는 번역 수정 요소이다. 특정 구체예에서, P는 인간 CMV 프로모터, 유인원 CMV 프로모터, SV-40, mPGK, 및 β-액틴으로 이루어진 군으로부터 선택되고; A는 IL-12p35를 암호화하고, A'는 IL-12p40을 암호화하고, T는 P2A 및 IRES로 이루어진 군으로부터 선택된다.

발현 벡터는 생체 내(in vivo) 투여를 위해 제제화될 수 있다. 일부 구체예에서, 발현 벡터는 전기천공법에 의한 생체 내 투여를 위해 제제화된다. 일부 구체예에서, 발현 벡터는 전기천공법 (IT-EP)에 의한 종양내 투여를 위해 제제화된다. 핵산은 해당 분야에 공지된 방법을 사용하여 제조될 수 있다.

일부 구체예에서, IT-EP IL-12 요법의 주기는 제1 일 (±2일); 제1 일 (±2일) 및 제5 일 (±2일); 제1 일 (±2일) 및 제8 일 (±2일); 또는 제1 일 (±2일), 제5 일 (±2일), 및 제8 일 (±2일) 또는 4 또는 6주 주기의 제1 일 (±2일), 제5 일 (±2일), 및 제8 일 (±2일)에 면역 자극물질을 암호화하는 핵산의 IT-EP 투여를 포함한다. 일부 구체예에서, 주기는 6주 주기이다.

면역 체크포인트 억제자는 항체, 항원-결합 단편, 또는 나노바디의 형태로 되어있을 수 있으며, 이것들은 각각 발현 벡터에서 암호화되어 전기천공법에 의해 종양으로 전달되거나, 또는 단백질/펩타이드로서 전달될 수 있다. 단백질/펩타이드는 전신으로 투여될 수 있다. 면역 체크포인트 억제자 치료제의 투여는 면역자극 사이토카인, 예를 들어, IL-12의 전기천공법에 의한 종양내 전달 전에, 동안에 또는 후에 일어날 수 있다.

항체는 전장 온전한 항체로 또는 많은 잘 특성화된 단편으로 존재한다. 항체 단편은 F(ab), F(ab'), F(ab')2, 및 scFv (단일 사슬 가변 단편)을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 다양한 항체 단편은 화학적으로 또는 재조합 DNA 방법론을 이용하여 데 노보(de novo) 합성될 수 있다.

다른 면역 체크포인트 억제자는 가용성 안타고니스트, 예컨대 체크포인트 단백질의 세포외 도메인을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 가용성 면역 체크포인트 억제자는 발현 벡터에서 암호화되어 전기천공법에 의해 종양에 전달되거나, 또는 단백질/펩타이드로서 전신으로 전달될 수 있다.

일부 구체예에서, 적어도 하나의 면역 체크포인트 억제자 치료 주기를 투여하는 것은 3-6주 주기의 제1 일 (±2일)에 면역 체크포인트 억제자의 유효 용량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 면역 체크포인트 억제자는 3주 주기의 제1 일 (±2일)에 투여된다. 일부 구체예에서, 면역 체크포인트 억제자는 4주 주기의 제1 일 (±2일)에 투여된다. 일부 구체예에서, 면역 체크포인트 억제자는 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체 또는 그것들의 항원 결합 단편을 포함한다.

펨브롤리주맙은 PD-1 수용체로의 결합의 특이성을 가져서, PD-L1 및 예정된 사멸 리간드 2 (PD-L2)와의 상호작용을 억제하는 인간화된 면역글로불린 G4 (IgG4) 단클론성 항체 (mAb)이다. 펨브롤리주맙은 절제 불가능 및/또는 전이성 흑색종 및 비-소세포 폐암 (NSCLC)을 포함하는 많은 적응증에 걸쳐 환자의 치료를 위한 것으로 나타난다. 펨브롤리주맙은 약품 라벨에 따라 투여된다. 일부 구체예에서, 펨브롤리주맙은 각각의 3주 주기의 제1 일 (±2일)에 30분 (-5/+10분) IV 주입을 사용하여 약 200 mg의 용량으로 IV 투여된다. 임의의 주어진 주기에서, 의학적인 필요에 따라 하나 이상의 주사가 보류되거나 상이한 용량으로 또는 상이한 날에 투여될 수 있다. 투약량을 변경하는 것 (상이한 용량으로 투여하는 것)은 주입을 중단시키는 것, 유도 속도를 변경하는 것, 주입을 멈추고 재시작하는 것, 또는 주입하는 동안 상이한 양의 약물을 투여하는 것을 포함할 수 있다. 펨브롤리주맙에 대한 불리한 반응은 또한 제조사의 권고 (예를 들어, 약품 라벨)에 따라 치료될 수 있다.

종양에서 예정된 사멸-리간드 1 (PD-L1)의 발현은 TIL의 항종양 활성의 억제로 이어진다. 그러므로, 항-PD-1 /항-PD-L1 요법의 투여는 PD-L1 발현에 의해 매개되는 면역 억제를 반전시킬 것으로 예상된다. 일부 구체예에서, 대상체는 종양 샘플에서 PD-L1의 발현에 대해 스크리닝된다. PD-L1을 발현하는 대상체는 항-PD-1/항-PD-L1 요법에 대한 증가된 반응을 나타낼 것으로 예상된다. 마우스 모델에서의 치료 연구는 PD-1/PD-L1 상호작용을 차단하는 항체의 투여가 종양-특이적 CD8+ T 세포의 침윤을 향상시킨다는 것을 보여주었다.

본원에서 기재된 체크포인트 억제자 중 어느 것도 대상체에 투여될 수 있다.

적어도 하나의 화학치료제 치료 주기를 투여하는 것은 치료되는 특정 유형 및 단계의 암을 치료하는데 있어서 화학치료제에 대해 일반적으로 용인되는 관행에 따라 (즉, 제품 라벨 또는 일반적으로 용인되는 관리 표준 또는 다른 권장된 용량 수준에 따라) 화학치료제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 화학치료제는 인정되는 투여 경로 및/또는 투약 수준에 따라 투여된다. 적용 가능할 때 임상적으로 적절한 용량의 화학치료제가 사용된다. 예를 들어, 일부 약물로는, 화학치료제가 주기의 제1 일에만 제공된다. 다른 화학치료제는 계속해서 며칠 동안, 또는 주 1회 제공된다. 주기가 끝나면, 화학치료제 처리는 다음 주기를 시작하기 위해 반복된다. 화학치료제는, 예를 들어, 정맥내 주사, 정맥내 주입, 근육내 주사, 경구 투여 (예컨대 알약 또는 캡슐 또는 액체로)에 의해 투여될 수 있다.

암이 TNBC인 경우에, 화학치료제는 안트라사이클린 (예를 들어, 다우노루비신, 독소루비신, 페길화된 리포솜 독소루비신, 에피루비신), 사이클로포스파미드, 알칼리화제 (예를 들어, 티오테파), 탁세인 (예를 들어, 도세탁셀, 파클리탁셀, 납-파클리탁셀), 뉴클레오타이드 유사체 또는 대사 길항 물질 (예를 들어, 플루오로유라실 (5-FU), 젬시타빈, 메토트렉세이트, 카페시타빈), 미세소관 억제자 (예를 들어, 에리불린), 백금화제 (예를 들어, 씨스플라틴, 카르보플라틴), PI3K 억제자 (예를 들어, 알펠리십), 폴리 ADP-리보스 폴리머라제 (PARP) 억제자 {예를 들어, 올라파립, 탈라조파립), 사이톡산, 익사베필론, 무타마이신, 비노렐빈, 또는 이것들의 조합일 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 일부 구체예에서, 암은 유방암 또는 TNBC이고 화학치료제는 탁세인, 예컨대 파클리탁셀 또는 납-파클리탁셀을 포함한다.

일부 구체예에서, 화학치료제는 납-파클리탁셀이고, 납-파클리탁셀은 주입 양생법 및 독성 관리에 대한 관리 표준에 따라 투여된다. 일부 구체예에서, 납-파클리탁셀은 4주 주기의 제1 일 (±2일), 제8 일 (±2일), 및 제15 일 (±2일)에 대상체에게 투여된다. "납-파클리탁셀"은 나노입자 알부민-결합된 파클리탁셀 (아브락산)으로도 알려져있는, 다른 것들 중에서도 유방암, 폐암 및 췌장암을 치료하는데 사용되는 파클리탁셀의 주사 가능한 제제인 단백질-결합된 파클리탁셀이다. 파클리탁셀은 세포 분열 중에 미세소관의 정상적인 붕괴를 방지함으로써 암 세포를 사멸시킨다. 납-파클리탁셀은 전달 비히클(vehicle)로서 알부민에 결합된 파클리탁셀이다. 납-파클리탁셀은 4주마다 제1 일, 제8 일, 및 제15 일 (각각 ±2일)에 정맥내로 30분 (-5/+10분)에 걸쳐 약 100 mg/m² 내지 약 260 mg/m²의 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, 납-파클리탁셀은 약품 라벨에 따라 투여된다. 임의의 주어진 주기에서, 하나 이상의 주사는 의학적으로 필요한 경우 보류 상태로 변경되거나 또는 상이한 용량으로 또는 상이한 날에 투여될 수 있다. 투약량을 변경하는 것 (상이한 용량으로 투여하는 것)은 주입을 중단하는 것, 유도 속도를 변경하는 것, 주입을 멈추고 재시작하는 것, 또는 주입하는 동안 상이한 양의 약물을 투여하는 것을 포함할 수 있다. 납-파클리탁셀에 대한 불리한 반응은 또한 제조사의 권고 (예를 들어, 약품 라벨)에 따라 치료될 수 있다.

일부 구체예에서, 화학치료제는 파클리탁셀이고 매주 120 mg/m², 또는 3주마다 하루에 175 mg/m²의 용량으로 대상체에게 투여된다.

일부 구체예에서, 화학치료제의 조합이 사용될 수 있다. 상이한 화학치료제가 동일한 주기에 또는 상이한 주기에 사용될 수 있다.

동시 주기의 IT-EP IL-12 요법, 면역 체크포인트 억제자 요법, 및 화학치료제 요법을 투여하는 단계를 포함하는 대상체에서 암을 치료하는 방법이 기재된다. IT-PE IL-12 요법은 대상체의 하나 이상의 종양에 IL-12를 암호화하는 발현 벡터의 유효 용량을 주사하고 전기천공 요법을 종양에 투여하는 것을 포함한다. IT-EP IL-12 요법의 주기는 6주 주기의 제1 일 ±2일, 제5 일 ±2일, 및 제8 일 ±2일에 IT-EP IL-12를 투여하는 것을 포함한다. 면역 체크포인트 억제자 요법의 주기는 3주 주기의 제1 일 ±2일에 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체의 유효 용량을 투여하는 것을 포함한다. 화학치료제 요법의 주기는 4주 주기의 제1 일 ±2일, 제8 일 ±2일, 및 제15 일 ±2일에 납-파클리탁셀 또는 파클리탁셀의 유효 용량을 투여하는 것을 포함한다. 대상체의 치료는 제1 일에 시작할 수 있으며, IT-EP IL-12 요법, 면역 체크포인트 억제자 요법, 및 화학치료제 요법은 각각 그것들의 주기 일정에 따라 진행된다.

동시 주기의 IT-EP IL-12 요법, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 (항 PD-1/PD-L1) 요법, 및 납-파클리탁셀 또는 파클리탁셀 요법을 투여하는 단계를 포함하는 대상체에서 암을 치료하는 방법이 기재된다. IT-PE IL-12 요법은 대상체의 하나 이상의 종양에 IL-12를 암호화하는 발현 벡터의 유효 용량을 주사하고 전기천공 요법을 종양에 투여하는 것을 포함한다. IT-EP IL-12 요법의 주기는 6주 주기의 제1 일 ±2일, 제5 일 ±2일, 및 제8 일 ±2일에 IT-EP IL-12를 투여하는 것을 포함한다. 항-PD-1 /PD-L1 요법의 주기는 3주 주기의 제1 일 ±2일에 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체의 유효 용량을 투여하는 것을 포함한다. 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1 항체는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 피딜리주맙, 두르발루맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 세미플리맙, 신틸리맙, 토리팔리맙, 또는 캄렐리주맙으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 납-파클리탁셀/파클리탁셀 요법의 주기는 4주 주기의 제1 일 ±2일, 제8 일 ±2일, 및 제15 일 ±2일에 납-파클리탁셀 또는 파클리탁셀의 유효 용량을 투여하는 것을 포함한다. 대상체의 치료는 제1 일에 시작할 수 있으며, IT-EP IL-12 요법, 항-PD-1/PD-L1 요법, 및 파클리탁셀/파클리탁셀 요법은 각각 그것들의 주기 일정에 따라 진행된다.

펨브롤리주맙 및 IT-EP IL-12가 동일한 날에 투여되는 날에, 펨브롤리주맙이 IT-EP IL-12의 투여 전에, 동시에, 또는 후에 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, IT-EP IL-12는 펨브롤리주맙의 투여 전에 투여된다. 납-파클리탁셀 및 IT-EP IL-12가 동일한 날에 투여되는 날에, 납-파클리탁셀은 IT-EP IL-12의 투여 전에, 동시에, 또는 후에 투여될 수 있다. 펨브롤리주맙 및 납-파클리탁셀이 동일한 날에 투여하는 날에, 펨브롤리주맙은 납-파클리탁셀의 투여 전에, 동시에, 또는 후에 투여될 수 있다.

암 시험의 임상 결과는 고체 종양의 반응 평가 기준 (Response Evaluation Criteria In Solid Tumors: RECIST)에 의해 측정될 수 있다. RECIST는 종양이 개선되거나 ("반응하거나"), 동일하게 유지되거나 ("안정화되거나"), 또는 악화될 때 ("진행할 때")를 정의하는 가이드라인을 제공한다.

모든 표적 병변에 대해 가장 긴 직경 (LD)의 합계는 베이스라인 합계 LD로 사용되고 표적화된 병변(들)에서 객관적인 종양 반응을 특성화하기 위한 기준으로 사용된다.

a. 완전한 반응 (CR)은 모든 표적 병변의 소멸이고;

b. 부분적 반응 (PR)은 표적 병변의 LD의 합계의 적어도 30% 감소를 나타내고;

c. 안정한 질환 (SD)은 PR에 대한 자격을 갖추기에 충분한 수축이 없거나 진행성 질환 (PD)에 대한 자격을 갖추기에 충분한 증가가 없는 경우 발생하고;

d. 진행성 질환 (PD): 표적 병변의 LD의 합계의 적어도 20% 증가 또는 하나 이상의 새로운 병변의 출현.

C. 제제화

기재된 발현 벡터, 체크포인트 억제자, 또는 화학치료제는 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 부형제 (예컨대 비히클, 담체, 희석제, 및/또는 전달 폴리머)가 면역자극 사이토카인, 체크포인트 억제자, 또는 화학치료제를 암호화하는 발현 벡터에 추가된다.

약학적으로 허용 가능한 부형제 ("부형제")는 의도적으로 약물 전달 시스템에 포함되는, 활성 약학적 성분 (API, 치료제; 예를 들어, 코로나바이러스 항원성 폴리펩타이드 또는 면역 자극물질을 암호화하는 핵산) 이외의 물질이다. 부형제는 의도된 투약량으로 치료 효과를 발휘하지 않거나 발휘하도록 의도되지 않는다. 부형제는 a) 제조 중에 약물 전달 시스템의 진행을 지원하고, b) API의 안정성, 생체이용률 또는 환자 허용 가능성을 보호하거나, 지지하거나 향상시키고, c) 생성물 확인을 돕고, 및/또는 d) 저장 또는 사용 중에 API 전달의 전체적인 안전성, 효과의 임의의 다른 속성을 향상시키는 작용을 할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 부형제는 불활성 물질일 수도 있고 아닐 수도 있다.

부형제는 트랜스펙션을 향상시키는 작용제, 흡수 강화제, 부착방지제, 항-소포제, 항산화제, 바인더, 완충제, 담체, 코팅제, 착색제, 전달 강화제, 전달 폴리머, 덱스트란, 덱스트로스, 희석제, 붕괴제, 에멀젼화제, 증량제, 충전제, 착향제, 유동화제, 보습제, 윤활제, 윤활제, 오일, 폴리머, 보존제, 식염수, 염, 용매, 당, 현탁화제, 지속 방출형 매트릭스, 농후화제, 장성조절제, 비히클, 방수제, 및 습윤제를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 트랜스펙션을 향상시키는 작용제는 지질, 양이온성 지질, 지질, 다가양이온, 세포-침투 펩타이드, 및 이것들의 조합을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.

발현 벡터, 체크포인트 억제자, 또는 화학치료제는 약학적 조성물에서 일반적으로 발견되는 다른 추가적인 구성요소를 함유할 수 있다. 이러한 추가적인 구성요소는 항소양제, 수렴제, 국소 마취제, 또는 항염증제 (예를 들어, 항히스타민제, 디펜히드라민, 등)을 포함할 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 본원에서 사용된 바와 같이, "약리학적 유효량", "치료적 유효량", 또는 간단히 "유효 용량"은 의도된 약리학적, 치료적, 또는 예방적 결과를 생산하기 위한 기재된 핵산의 양을 나타낸다.

D. 전기천공법

면역자극 사이토카인을 암호화하는 기재된 발현 벡터는 전기천공법에 의해 전달될 수 있다. 전기천공법은 적어도 하나의 전기천공 펄스를 세포, 조직, 또는 종양에 투여하는 것을 포함한다. 전기천공법 (EP)은 세포막을 일과성으로 투과하도록 전기 펄스를 인가하여, 세포로의 핵산과 같은 거대 분자의 흡수를 촉진하는 기술이다. 생체 내 EP는 여러 임상 시험에서 DNA 백신 및 약물을 다양한 조직에 전달하기 위해 사용되었다 (Draghia-Akli R et al. "Gene and cell therapy: Therapeutic mechanisms and strategies." 2009). 전기천공법은 유전자 전달을 극적으로 개선하는 것으로 나타났다 (100-1000배; Sardesai et al. "Electroporation Delivery of DNA Vaccines: Prospects for Success." Curr Opin Immunol 2011 June, 23(3):421-429; Livingston BD et al. "Comparative performance of a licensed anthrax vaccine versus electroporation based delivery of a PA encoding DNA vaccine in rhesus macaques." Vaccine, 2010 28(4): 1056-61). 생체 내에서 전기천공법은 많은 상이한 조직으로 플라스미드 DNA를 효율적으로 전달하기 위해 성공적으로 사용된 유전자 전달 기술이다. 생체 내에서 전기천공법의 사용은 종양 조직에서 플라스미드 DNA 흡수를 향상시켜, 종양 내에서 발현을 초래한다. 기재된 발현 벡터는 전기 펄스 투여 전에, 동안에, 또는 후에 대상체에게 투여될 수 있다. 발현 벡터는 대상체에서 종양 또는 그 근처에 투여될 수 있다. 기재된 발현 벡터는 피하 주사침을 사용하여 종양으로 주사될 수 있다.

전기천공법은 포유류 대상체에서 사용하기에 적합한 임의의 공지된 전기천공 디바이스를 사용하여 수행될 수 있다. 기재된 화합물, 조성물, 및 방법과 함께 사용하기에 적합한 전기천공 디바이스는 미국 특허 번호 7245963, 5439440, 6055453, 6009347, 9020605, 및 9037230, 및 미국 특허 출원 번호 2005/0052630, 2019/0117964, 2020/0246612 및 특허 출원 PCT/US2019/030437 (이것들은 각각 본원에 참조로 포함됨)에 기재된 것들을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.

일부 구체예에서, 전기천공법은 하나 이상의 전압 펄스의 투여를 포함한다. 생성되는 전기장의 성질은 조직의 성질, 선택된 조직의 크기 및 그 위치에 의해 결정된다. 종양으로 전달될 수 있는 전압 펄스는 약 300 V/cm 내지 약 1500V/cm일 수 있다. 일부 구체예에서, 전압 펄스는 약 700 V/cm 내지 1500 V/cm이다. 일부 구체예에서, 전압 펄스는 약 1300 V/cm 내지 1500 V/cm이다. 일부 구체예에서, 전압 펄스는 약 1500 V/cm이다. 일부 구체예에서, 전압 펄스는 약 600 V/cm, 650 V/cm, 700 V/cm, 750 V/cm, 800 V/cm, 850 V/cm, 900 V/cm, 950 V/cm, 1000 V/cm, 1050 V/cm, 1100 V/cm, 1150 V/cm, 1200 V/cm, 1250 V/cm, 1300 V/cm, 1350 V/cm, 1400 V/cm, 1450 V/cm, 또는 1500 V/cm일 수 있다. 일부 구체예에서, 전압 펄스는 약 300 V/cm 내지 700 V/cm이다. 일부 구체예에서, 전기는 약 100 V/cm, 150 V/cm, 200 V/cm, 250 V/cm, 300 V/cm, 350 V/cm, 또는 400 V/cm, 450 V/cm, 500 V/cm, 550 V/cm, 600 V/cm 650 V/cm, 또는 700 V/cm이다.

전기천공 펄스의 펄스 지속 기간은 약 10 μsec 내지 약 1초일 수 있다. 일부 구체예에서, 펄스 지속 기간은 약 10 μsec 내지 약 100 밀리초 (ms)이다. 일부 구체예에서, 펄스 지속 기간은 100 μsec, 1 ms, 10 ms, 또는 100 ms이다. 펄스 세트 사이의 간격은 임의의 원하는 시간, 예컨대 1초일 수 있다. 파형, 전기장 강도 및 펄스 지속 기간은 또한 세포의 유형 및 전기천공법을 통해 세포에 진입하기 위한 분자의 유형에 따라 달라질 수 있다.

펄스 발생기에 의해 제공되는 전기 신호의 파형은 지수 감소형 펄스, 정방형 펄스, 단극성 진동 펄스열, 이극성 진동 펄스열, 또는 이들 형태의 조합일 수 있다. 방형파 전기천공법 시스템은 설정 전압으로 빠르게 상승하고, 설정 기간 (펄스 길이) 동안 상기 수준에서 머무른 다음, 빠르게 0으로 하락하는 제어된 전기 펄스를 전달한다.

1 내지 100개의 펄스가 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 펄스가 투여된다. 일부 구체예에서, 6개의 펄스가 투여된다. 일부 구체예에서, 6x0.1 msec 펄스가 투여된다. 일부 구체예에서, 6개의 펄스가 투여된다. 일부 구체예에서, 6x0.1 msec 펄스가 1300-1500 V/cm로 투여된다. 일부 구체예에서 8개의 펄스가 투여된다. 일부 구체예에서 8x10 msec 펄스가 투여된다. 일부 구체예에서 8x10 msec 펄스가 300-500 V/cm로 투여된다.

임의의 주어진 주기에서, 의학적으로 필요한 경우 하나 이상의 주사가 보류되거나 상이한 용량으로 또는 상이한 날에 투여될 수 있다.

전기천공 디바이스는 단일 바늘 전극, 한 쌍의 바늘 전극, 또는 복수의 바늘 전극 또는 바늘 전극의 배열을 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 전기천공 디바이스는 피하 주사침 또는 동등물을 포함한다. 일부 구체예에서, 전기천공 디바이스는 사용자 제어 및 펄스 파라미터의 입력값을 기반으로 배열 내 전극 사이에서 일련의 프로그램 작동 가능한 정전류 펄스 패턴을 생산할 수 있는 동전학적 디바이스 ("EKD 디바이스")를 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, EP 어플리케이터(applicator)는 전극이 핵산 주사 부위에 걸치도록 삽입된다.

일부 구체예에서, 전기천공법 (EP) 디바이스 시스템은 3개의 주요 구성요소로 이루어진다:

(a) 전기 펄스를 생성하는 전기천공 발생기,

(b) 바늘 배열을 포함하는 멸균 어플리케이터 팁(tip), 및

(c) 전단부에서 전기천공 발생기에 연결되고 후단부에서 어플리케이터 팁에 연결된 어플리케이터 손잡이.

어플리케이터 팁은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개, 또는 그 이상의 바늘 (전극)을 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 어플리케이터 팁은 원지름이 0.5-1 cm인 원형 배열에 6개의 바늘을 포함한다. 바늘 길이는 0.5-2 cm일 수 있다. 어플리케이터 팁은 가변적인 삽입 가능한 길이의 바늘을 포함할 수 있으며, 이로 인해 그것들이 0-2 cm의 삽입 깊이에 대해 조정될 수 있다. 일부 구체예에서, 바늘은 길이가 1.5 cm이고 0.1-1.5 cm의 삽입 깊이에 대해 조정될 수 있다.

전기천공 디바이스는 발로 밟는 스위치(foot switch)에 의해 전기천공 펄스(들)을 전달하도록 촉발 (활성화)될 수 있다. 전기천공 발생기는 제어된 방형파 펄스 패턴으로 전기 펄스를 전달할 수 있다. 6개 바늘 어플리케이터 팁에 대해, 전기천공 펄스는 원형 배열에 관하여 대향 바늘 사이에서 발생한다. 전기천공 디바이스는 대향 바늘의 제1 쌍 사이에 제1 펄스를 투여한 후 이어서 동일한 쌍의 대향 바늘 사이에 반대 극성의 제2 펄스를 투여할 수 있다. 전기천공 디바이스는 대향 바늘의 제2 쌍 사이에 제3 펄스를 전달할 수 있고 (제2 쌍은 제1 쌍과 상이하다) 바늘의 제2 쌍 사이에 반대 극성의 제4 펄스를 전달할 수 있다. 2개의 펄스가 바늘의 모든 쌍에 전달될 때까지 각각의 극성 중 하나인 2개의 펄스가 대향 바늘의 쌍 사이에 투여된다. 따라서, 6개 바늘 어플리케이터 팁에 대해, 2개의 펄스가 총 6개의 펄스에 대한 대향 전극의 각각의 쌍으로 전달된다. 2개의 바늘 전극에 대해, 원하는 수의 펄스가 도달할 때까지 펄스 또는 반대 극성이 전달된다. 일부 구체예에서, 임의의 수의 펄스가 치료에 사용될 수 있다. 일부 구체예에서, 6개의 펄스가 사용된다. 일부 구체예에서, 8개의 펄스가 사용된다. 일부 구체예에서, 10개의 펄스가 사용된다.

E. 키트

기재된 발현 벡터, 체크포인트 억제자, 및/또는 화학치료제는 키트, 용기, 팩(pack), 또는 디스펜서(dispenser)에 포장되거나 포함될 수 있다. 키트, 용기, 팩, 또는 디스펜서는 단일 유효 용량 또는 다수의 유효용량을 제공하기에 충분한 양의 발현 벡터, 체크포인트 억제자, 및/또는 화학치료제를 포함할 수 있다. 기재된 발현 벡터, 체크포인트 억제자, 및/또는 화학치료제는 미리 채워진 주사기 또는 바이알에 포장될 수 있다. 발현 벡터, 체크포인트 억제자, 및/또는 화학치료제는 동결건조된 분말로서 제공될 수 있거나 또는 용액으로 제공될 수 있다. 키트는 본원에서 개시된 방법을 수행하는데 이용되는 시약을 포함할 수 있다. 키트는 또한 전기천공법 어플리케이터를 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 키트는 면역자극 사이토카인을 암호화하는 발현 벡터 및 전기천공 디바이스 또는 어플리케이터를 포함한다. 일부 구체예에서, 키트는 하나 이상의 기재된 발현 벡터, 하나 이상의 전기천공법 어플리케이터, 주사기, 및 주사 바늘을 포함한다. 일부 구체예에서, 키트는 다음 중 하나 이상을 더 포함한다: 제품의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 기관에 의해 규정된 형태의 사용 설명서, 또는 안내문.

실시예

실시예 1. IL- 12를 암호화하는 플라스미드.

A. IL-12: DNA 플라스미드 벡터 (pUMVC3-hIL-12-NGVL331, "pIL-12", "IL-12 플라스미드", "TAVO", 또는 "Tavokinogene Telseplasmid"라고 불림)는 IL-12 cDNA를 발현하며, 단일 CMV 프로모터에 의해 구동되는 내부 리보솜 진입 부위에 의해 분리되는 인간 IL-12 p35 및 p40 서브유닛을 포함하였다. 직접적인 종양내 주사에 이어지는 생체 내 EP에 대해 포스페이트 완충된 식염수 (PBS)에서 pIL-12를 제제화하였다. GMP-등급 pIL-12를 VGXI USA에 의해 제조하고 이용 가능한 배치를 0.5 mg/ml의 농도의 2.0 ml 바이알로 공급하고 1.5 ml 부피를 채웠다. 개봉되지 않은 pIL-12의 바이알을 약국의 안전하고, 지속적으로 온도 모니터링되고 경보장치가 달린 냉동고에서 또는 -20℃ ± 5℃의 다른 적절한 안전한 위치에서 저장하였다.

B. IL-12 P2A: pUMVC3 백본을 Aldevron (Fargo, ND)으로부터 구입하였다. 프레임 내에서(in-frame) hIL12p40 (P2A-hIL12p40)에 연결된 번역 조절 요소 P2A를 암호화하는 1071 bp DNA 단편 (유전자 블록)을 IDT (Coralville, IA)로부터 구입하였다. p40 유전자 블록을 Phusion 폴리머라제 (NEB, Ipswich MA, cat.# M0530S)를 사용하여 PCR 증폭시키고 표준 제한 효소 쌍 형성 및 T4 DNA 리가제 (Life Technologies, Grand Island NY, cat.# 15224-017)를 사용하여 CMV 프로모터/인핸서의 다운스트림(downstream)에서 pUMVC3에 결찰시켰다. P2A-hIL12p40/pOMI2A의 양성 클론을 제한 효소 분해를 통해 확인하였고 DNA 시퀀싱으로 검증하였다. 인간 p35를 클로닝을 용이하게 하기 위해 내부 BamHI, Bg1II 및 XbaI 부위가 제거된 IDT (Coralville IA)로부터의 789bp 유전자 블록으로 주문하였다. p35 유전자 블록을 상기 기재된 바와 같이 PCR 증폭하고 P2A-hIL12p40/pOMI2A에서 p40 유전자 블록의 업스트림(upstream)에 결찰시켰다. hIL12p35-P2A-p40/pOMI2A의 양성 클론을 제한 효소 분해를 통해 확인하였고 DNA 시퀀싱으로 검증하였다. pIL-12 P2A를 직접적인 종양내 주사에 이어지는 생체 내 EP에 대해 포스페이트 완충된 식염수 (PBS)에서 제제화하였다. GMP-등급 pIL-12 P2A를 0.5 mg/ml의 농도의 2.0 ml 바이알로 공급하고 1.5 ml의 부피를 채웠다. 개봉되지 않은 pIL-12 P2A의 바이알을 약국의 안전하고, 지속적으로 온도 모니터링되고 경보장치가 달린 냉동고에 서 또는 -20℃ ± 5℃의 다른 적절한 안전한 위치에서 저장하였다.

실시예 2. 임상 연구

암 치료시 정맥내 펨브롤리주맙 요법 및 화학요법과 조합된 플라스미드 암호화된 IL-12 플러스 전기천공법 (IT-EP IL-12).

TNBC는 유방암 진단의 10-20%를 차지한다. 화학요법은 보조, 신보조, 및 전이 설정에서 현재의 관리 표준 치료이다. TNBC는 조합 신보조 화학요법 이후 30% 내지 40% 범위의 병리학적 완전 반응율 (pCR)로 입증된 바와 같이 화학요법에 고도로 민감성이다. 하지만, TNBC는 더 높은 재발율을 나타내고 불균형적인 많은 유방암 사망과 관련이 있으며, 이것을 삼중-음성 역설(paradox)이라고 부른다.

TNBC에 걸린 환자는 예후에 대한 예후종양-침윤성 림프구 (TIL)의 중요한 역할로 인해 면역-기반 요법의 추가로부터 이익을 얻을 수 있다. 최근의 데이터는 전염증성 환경을 가진 TNBC 종양이, 예컨대 젬시타빈 및 카르보플라틴과 같은 화학요법의 맥락에서 더 양호한 결과와 관련이 있다는 것을 시사한다. 적어도 50% TIL을 가진 TNBC 환자는 안트라사이클린 및 탁세인-기반 보조 요법으로 치료될 때 더 긴 무질환 생존을 입증한다 (Adams S et al. (2014). "Prognostic value of tumor-infiltrating lymphocytes in triple-negative breast cancers from two phase III randomized adjuvant breast cancer trials: ECOG 2197 and ECOG 1199." Journal of clinical oncology 32(27): 2959-2966; Loi S et al. (2014). "Tumor infiltrating lymphocytes are prognostic in triple negative breast cancer and predictive for trastuzumab benefit in early breast cancer: results from the FinHER trial." Annals of oncology 25(8): 1544-1550; Loi S et al. (2015). "Pooled individual patient data analysis of stromal tumor infiltrating lymphocytes in primary triple negative breast cancer treated with anthracycline-based chemotherapy." 38th Annual San Antonio Breast Cancer Symposium; December 8-12, 2015). IT-EP IL-12는 종양의 영역에서 전염증성 환경을 유도하는데 사용될 수 있다.

예비 데이터는 PD-1 발현에 대해 선택된 TNBC 환자가 PD-L1 발현에 대해 선택되지 않은 환자에 비해 객관적인 항-종양 반응율 (18.5%)이 거의 2배임을 시사한다 (10% 미만; Dua I et al (2017). "Immunotherapy for triple-negative breast cancer: A focus on Immune checkpoint inhibitors." American Journal of Hematology Oncology 13(4): 20-27). 단일요법으로 제공된 항-PD-1/PD-L1 mAb는 이 집단에서 제한된 성공을 입증하였고 면역원성 종양을 필요로 하는 것으로 나타났으며, CD8+ TIL 및/또는 PD-L1 발현에 의해 효과적인 것으로 특징지어 졌다.

IT-EP IL-12는 전염증성 사이토카인 IL-12의 종양내 발현을 유발하여 순환하는 IL-12 수준을 크게 증가시키지 않으면서 고도로 염증이 생긴 면역원성 활성 병변으로의 저면역원성/저 T-세포 침윤성 종양의 전환을 가능하게 한다. 진행성 피부 악성 종양 (예를 들어, 흑색종)에 걸린 환자에서, IT-EP IL-12는 치료된 병변 및 치료되지 않은 병변 둘 다의 퇴행을 유도하면서 매우 유리한 안전성 프로파일을 입증한다. 이에 더하여, 임상 증거는 IT-EP IL-12/항-PD-1 항체 조합 요법이 면역학적으로 차가운 종양(cold tumor)을 가진 환자에서 오래가는 객관적인 종양 반응을 제공하는데 효과적일 수 있다는 것을 시사한다 (Algazi A. (2017). "Immune monitoring outcomes of patients with stage III/IV melanoma treated with a combination of pembrolizumab and intratumoral plasmid interleukin 12 (pIL-12)." ASCO-SITC Clinical Immuno-Oncology Symposium, poster presentation).

TNBC 환자는 추가적인 화학요법과 함께 IT-EP IL-12 요법 플러스 체크포인트 억제자 요법으로 치료될 것이다. 체크포인트 억제자 요법은 항-PD-1/항-PD-L1 항체 요법일 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 항-PD-1/항-PD-L1 항체 요법은 펨브롤리주맙 요법일 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 화학요법은 탁세인 요법 (예를 들어, 납-파클리탁셀)일 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 면역자극 사이토카인 요법, 면역 체크포인트 억제자 요법, 및 화학요법을 조합하는 것은 종양의 "전염증성 환경"을 증가시켜 TNBC 대상체에 대한 반응을 개선하고 그 조합은 유리한 안전성 프로파일을 가질 것으로 예상된다.

적격의 대상체는 국소적으로 진행된 TNBC 또는 전이성 TNBC의 병리학적으로 확인된 진단을 받을 것이다. 대상체는 10% 미만의 에스트로겐 (ER) 수용체 및 프로게스테론 (PR) 수용체 염색을 나타내고 인간 상피 성장 인자 수용체 2 (HER2)-음성이다.

코호트(Cohort) 1: 이전에 수술 불가능한 국소적으로 진행된 TNBC 또는 전이성 TNBC가 치료된 대상체를 펨브롤리주맙과 조합하여 IT-EP IL-12로 처리 하고 고체 종양의 반응 평가 기준 (RECIST) v1.1에 기초하여 조사자에 의해 평가된 객관적인 반응율 (ORR)로 효능을 측정한다. 코호트 1의 대상체는 적어도 1회의 사전 요법을 받았다.

코호트 2: 수술 불가능한 국소적으로 진행된 TNBC 또는 전이성 TNBC를 가진 대상체를 제1 선 치료로서 펨브롤리주맙 및 납-파클리탁셀 화학요법과 조합하여 IT-EP IL-12로 치료하였다. 효능을 RECIST v1.1에 기초하여 평가된 ORR에 의해 평가한다. 대상체는 비-전이성 또는 수술 가능한 질환 설정에서 신보조 및 보조 치료를 받았을 수도 있다.

반응 기간 (DOR), ORR, 면역 ORR (iORR), 무진행 생존률 (PFS), 면역 PFS (iPFS), 질환 제어율 (DCR), 및 전체 생존률 (OS)이 뒤따를 것이다. PD-L1 양성 및 음성 대상체에서의 반응을 모니터링한다. PD-L1 음성 환자는 등록된 집단의 35-60%인 것으로 추정된다.

IL-12 (0.5 mg/mL)를 암호화하는 핵산을 0.4 cm³ 미만의 부피의 병변에 대해 0.1 mL의 병변 당 최소한의 용량 부피로 계산된 병변 부피의 대략 1/4의 용량 부피로 종양내로 주사한다 (6주마다 제1 일, 제5 일 및 제8 일, 즉, 6주 주기의 제1 일, 제5 일, 및 제8 일에). 종양내 주사 후에 또는 그와 동시에, 전기천공 디바이스 (어플리케이터) 전극을 주사된 종양에 및/또는 그 주위에 위치시킨다. 전극을 핵산 주사 부위(들) 및 깊이에 공존시킨다. 일부 구체예에서, 전기천공 디바이스는 약 0.5 내지 약 1 cm 직경 원형 배열에 위치한 6개의 스테인리스강(stainless-steel) 바늘 (전극)을 포함한다. 어플리케이터를 전력 공급 장치에 연결하고 6개의 펄스는 약 300 내지 약 1500 볼트/cm의 전기장 강도이고 약 100 μs 내지 약 5 ms의 펄스 폭을 약 300 msec 간격으로 투여한다.

펨브롤리주맙을 3주마다 제1 일에 (즉, 3주 주기의 제1 일에) 3분 (-5분 / +10분) 정맥내 (IV) 주입을 사용하여 약 200 mg의 용량으로 투여한다.

일부 구체예에서, IT-EP IL-12 치료 주기의 제1 일과 펨브롤리주맙 치료 주기의 제1 일은 동일한 날로 의도된다.

코호트 1: IT-EP IL-12를 6주마다 제1 일, 제5 일, 및 제8 일에 종양내 주사에 의해 투여한다. 대상체는 하나 이상의 접근 가능한 종양 (병변)에서 IT-EP IL-12 치료를 받을 수 있다. 접근 가능한 병변은 피부 및 피하 병변을 포함한다. 펨브롤리주맙을 3주마다 제1 일에 정맥내로 투여한다. IT-EP IL-12 및 펨브롤리주맙 요법을 IT-EP IL-126주 주기가 펨브롤리주맙 3주 주기와 동시에 실행되고 환자가 6주마다 제1 일에 IT-EP IL-12 및 펨브롤리주맙을 받을 수 있도록 동일한 날에 시작하였다.

코호트 2: IT-EP IL-12를 6주마다 제1 일, 제5 일, 및 제8 일에 종양내 주사에 의해 투여한다. 대상체는 하나 이상의 접근 가능한 종양 (병변)에서 IT-EP IL-12 치료를 받을 수 있다. 접근 가능한 병변은 피부 및 피하 병변을 포함한다. 펨브롤리주맙을 3주마다 제1 일에 정맥내로 투여한다. IT-EP IL-12 및 펨브롤리주맙 요법을 IT-EP IL-126주 주기가 펨브롤리주맙 3주 주기와 동시에 실행되고 환자가 6주마다 제1 일에 IT-EP IL-12 및 펨브롤리주맙을 받을 수 있도록 동일한 날에 시작한다. 이에 더하여, 환자에 납-파클리탁셀 화학요법을 제1 선 설정의 관리 표준에 따라, 예를 들어, 약 100 mg/m²을 4주마다 (28일) 제1 일, 제8 일, 및 제15 일에 정맥내로 또는 제품 라벨에 지시된 바와 같이 투여한다. 치료가 제1 일에 시작될 때 환자에 IT-EP IL-12, 펨브롤리주맙, 및 납-파클리탁셀을 투여한다.

대상체에게 접근 가능한 병변에 최대 17주 주기 동안 6주 주기의 제1 일, 제5 일 및 제8 일에 IT-EP IL-12를 및 최대 33 주기 (대략 2년) 동안 각각의 3주 주기의 제1 일에 IV 펨브롤리주맙 (200 mg)을 처리하였다. 코호트 2에 대해 대상체를 또한 최대 25 주기 (약 2년) 동안 4주 주기의 제1 일, 제8 일 및 제15 일에 납-파클리탁셀로 처리한다.

임의의 병변에 대한 IT-EP IL-12 치료는 상기 병변에 대한 완전한 반응이 존재하면 중단될 수 있다. 코호트에서 환자에 대한 접근 가능한 병변이 없으면, 펨브롤리주맙으로의 치료는 완전한 반응 (CR)이 확인되거나 또는 대상체가 33 주기의 펨브롤리주맙을 받으면 중단될 수 있다. 코호트 2의 환자에 대해, 납-파클리탁셀은 CR이 확인되거나 또는 대상체가 25 주기의 납-파클리탁셀을 받으면 조사자의 재량에 따라 중단될 수 있다.

치료는 대상체가 치료로부터 순(net) 이익을 끌어내는 한 계속될 수 있다. 순 이익은 완전한 반응, 부분적 반응, 안정한 질환, 하나 이상의 병변의 크기 감소, 종양 부피의 순 감소, 새로운 병변의 형성 부재, 또는 하나 이상의 암 관련 증상의 개선을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.

추가적인 연구에서, 다른 안타고니스트 PD-1/PD-L1 요법 또는 다른 체크포인트 억제자는 IT-EP IL-12 및 납-파클리탁셀의 투여와 조합하여 사용될 수 있다.

더 이상의 추가적인 연구에서, 다른 화학요법이 IT-EP IL-12 및 면역 체크포인트 억제자 요법과 조합하여 사용된다.

IT-EP IL-12, 체크포인트 억제자, 및 화학치료제의 다양한 조합이, 제한되는 것은 아니지만, 유방암, 흑색종, 두경부암, 편평세포 암종, 기저세포 암종, 및 메르켈 세포 암종을 포함하는 다른 암을 치료하는데 사용될 수 있다.

더 이상의 추가적인 연구에서, 면역자극 사이토카인 요법 (예를 들어, IT-EP IL-12), 체크포인트 억제자 요법 (예를 들어, 펨브롤리주맙 요법), 및 화학요법 (예를 들어, 납-파클리탁셀 요법)의 조합은 유방암, TNBC, 흑색종, 두경부암, 편평세포 암종, 기저세포 암종, 또는 메르켈 세포 암종을 치료하기 위해 제1 선 요법에서 사용된다. 화학요법은 치료되는 암의 유형에 기초하여 선택된다.

더 이상의 추가적인 연구에서, 면역자극 사이토카인 요법 (. 예를 들어, IT-EP IL-12), 체크포인트 억제자 요법 (예를 들어, 펨브롤리주맙 요법), 및 화학요법 (예를 들어, 납-파클리탁셀 요법)의 조합은 유방암, TNBC, 흑색종, 두경부암, 편평세포 암종, 기저세포 암종, 또는 메르켈 세포 암종를 치료하기 위해 제2 선 요법에서 사용된다. 화학요법은 치료되는 암의 유형에 기초하여 선택된다.

더 이상의 추가적인 연구에서, 면역자극 사이토카인 요법 (예를 들어, IT-EP IL-12), 체크포인트 억제자 요법 (예를 들어, 펨브롤리주맙 요법), 및 화학요법 (예를 들어, 납-파클리탁셀 요법)의 조합은 유방암, TNBC, 흑색종, 두경부암, 편평세포 암종, 기저세포 암종, 또는 메르켈 세포 암종을 치료하기 위해 제2 선 요법에서 사용된다. 화학요법은 치료되는 암의 유형에 기초하여 선택된다.

더 이상의 추가적인 연구에서, 면역자극 사이토카인 요법 (예를 들어, IT-EP IL-12), 체크포인트 억제자 요법 (예를 들어, 펨브롤리주맙 요법), 및 화학요법 (예를 들어, 납-파클리탁셀 요법)의 조합은 수술 가능한 유방암, TNBC, 흑색종, 두경부암, 편평세포 암종, 기저세포 암종, 또는 메르켈 세포 암종의 치료시 신보조 요법으로 사용된다. 화학요법은 치료되는 암의 유형에 기초하여 선택된다.

더 이상의 추가적인 연구에서, 면역자극 사이토카인 요법 (예를 들어, IT-EP IL-12), 체크포인트 억제자 요법 (예를 들어, 펨브롤리주맙 요법), 및 화학요법 (예를 들어, 납-파클리탁셀 요법)의 조합은 수술 불가능한 유방암, TNBC, 흑색종, 두경부암, 편평세포 암종, 기저세포 암종, 또는 메르켈 세포 암종의 치료시 사용된다. 화학요법은 치료되는 암의 유형에 기초하여 선택된다.

이 연구에서 치료에 대한 반응은 RECIST 위원회에 의해 제안되고 (Therasse P et al. (2000). "New guidelines to evaluate the response to treatment in solid tumors. European Organization for Research and Treatment of Cancer, National Cancer Institute of the United States, National Cancer Institute of Canada." Journal of the National Cancer Institute 92(3):205-216), 2009년에 개정되고 (Eisenhauer EA et al (2009). "New response evaluation criteria in solid tumours: revised RECIST guideline (version 1.1)." European journal of cancer 45(2):228-247) 질환-특이적 조정에 대해 명시된 (Schwartz LH et al. (2016). "RECIST 1.1 - Standardisation and disease-specific adaptations: Perspectives from the RECIST Working Group." European journal of cancer 62: 138-145) 국제 기준을 사용하여 평가될 것이다. 주요 효능 종점, ORR은 RECIST v1.1을 사용하여 평가될 것이다.

iRECIST는 iRECIST에 대해 최근 공개된 공통 지침에 따라 2차 종점을 평가하는데 사용될 것이다 (Seymour L et al. (2017). "iRECIST: guidelines for response criteria for use in trials testing immunotherapeutics." The Lancet. Oncology 18(3): e143-e152). 면역치료제는 악성 병변의 크기의 일시적인 증가로 이어지거나, 또는 검출 불가능한 병변이 검출 가능해지는 면역 세포의 침윤을 초래할 수 있다. 그 기준은 많은 면에서 RECIST v1.1의 기준과 동일하지만 종양 크기의 증가, 또는 새로운 병변의 출현이 진성 종양 진행을 반영하지 않는 경우를 설명하기 위해 조정되었다.

실시예 3.

수술 불가능한 국소적으로 진행된 TNBC 또는 전이성 TNBC에 걸린 환자에서 화학요법과 함께 정맥내 펨브롤리주맙 요법과 조합된 IT-EP IL-12의 2기, 다중-코호트, 개방 표지 연구.

이것은 2기, 다중-코호트, 개방 표지 연구이다. 코호트 1은 IT-EP IL-12 플러스 펨브롤리주맙 요법의 단일-아암(arm) 연구일 것이다. 코호트 2는 납-파클리탁셀 (아브락산®) 화학요법과 함께 IT-EP IL-12 플러스 펨브롤리주맙의 단일-아암 연구일 것이다.

코호트 1: IT-EP IL-12는 6주마다 제1 주의 제1 일, 제5 일, 및 제8 일에 병변내 주사에 의해 투여될 것이다. 펨브롤리주맙은 3주마다 제1 주의 제1 일에 정맥내로 투여될 것이다. 코호트 1 대상체는 이전에 수술 불가능한 국소적으로 진행된 TNBC 또는 전이성 TNBC가 치료된 적이 있다.

코호트 2: IT-EP IL-12는 6주마다 제1 주의 제1 일, 제5 일, 및 제8 일에 병변내 주사에 의해 투여될 것이다. 펨브롤리주맙은 3주마다 제1 주의 제1 일에 정맥내로 투여될 것이다. 납-파클리탁셀 (아브락산®) 화학요법은 제1 선 설정의 관리 표준에 따라, 100 mg/m²을 4주마다 (28일) 제1 주의 제1 일, 제8 일, 및 제15 일에 정맥내로 투여될 것이다. 코호트 2는 수술 불가능한 국소적으로 진행된 TNBC 또는 전이성 TNBC를 가진 대상체에서의 제1 선 치료이다.

TNBC 및 EP 접근 가능한 피부/피하 질환에 걸린 대상체가 이 연구에 등록될 것이다. 적격의 대상체는 10% 미만의 에스트로겐 (ER) 수용체 및 프로게스테론 (PR) 수용체 염색을 나타내고 면역조직화학 (IHC) 0 내지 1+로 정의된 바와 같이 인간 상피 성장 인자 수용체 2 (HER2)-음성이다. IHC가 애매하면 형광 제자리 혼성체화 (FISH) 또는 제자리 혼성체화 (ISH) 음성이 받아들여질 것이다. 적격의 대상체는 비-전이성 또는 수술 가능한 질환 설정에서 신보조 및 보조 치료를 받았을 수도 있으며 (신)보조 요법의 최종 용량의 6개월 이내에 진행해서는 안 된다. 대상체를 치료를 시작하기 전에 Dako 22C3 CPS에 따라 PD-L1에 대해 배열한다.

대략적으로, 65명의 대상체, 코호트 1에 25명 및 코호트 2에 40명이 등록될 것이다.

코호트 1의 적격의 대상체는 접근 가능한 병변으로 베이스라인으로부터 IT-EP IL-12의 최대 17 주기 및 펨브롤리주맙의 33 주기 (대략 2년) 동안 또는 추후 질환이 진행될 때까지 6주마다 제1 일, 제5 일 및 제8 일에 IT-EP IL-12로 및 3주 주기의 제1 일에 IV 펨브롤리주맙 (200 mg)으로 치료될 것이다. 코호트 2에 대해, 대상체는 관리 표 준에 따라 승인된 화학요법인 납-파클리탁셀로 치료될 것이다.

각각 0.3 cm x 0.3 cm 이상의 하나 이상의 접근 가능한 병변이 치료될 것이다. IT-EP에 대한 접근 가능한 병변(들)은 EP 바늘 배열을 가진 표면으로부터 도달될 수 있는 피부 또는 피하 병변 (최대 1.5 cm 깊이)을 포함한다. EP의 적용에 적합하고 안전한 위치에 있는 문서화된 접근 가능한 병변만이 치료에 적격일 것이다. 접근 가능한 병변은 6주 치료 주기의 제1 일, 제5 일, 및 제8 일에 치료된다.

두 코호트의 환자에 대해, 치료의 결과로서 접근 가능한 병변의 부재시, 펨브롤리주맙 (코호트 1)과 펨브롤리주맙 및 납 파클리탁셀 (코호트 2)로의 치료는

완전한 반응 (CR)이 확인되거나 대상체가 최대 33 주기의 펨브롤리주맙 및/또는 최대 25 주기의 납-파클리탁셀을 받을 때까지 계속될 것이다. 펨브롤리주맙 또는 납-파클리탁셀을 계속하기 위한 결정은 독립적으로 평가될 수 있다.

IL-12를 암호화하는 플라스미드는 6주마다 제1 일, 제5 일, 및 제8 일 (±2일)에 IT-EP에 의해 0.5 mg/mL의 농도에서 1/4 종양 부피의 용량으로 투여된다. 종양 부피는 다음과 같이 결정된다: 1/4 종양 부피 = [(cm 단위의 가장 긴 직경) x (cm 단위의 수직 직경)2]/8. 1/4 부피에서 0.1 cm³ 미만의 병변에 대해 병변 당 최소 0.1 mL가 주사된다. 하나, 하나 이상, 또는 모든 접근 가능한 표적 병변이 치료될 수 있다. 병변은 피부 또는 피하 병변일 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 종양내 주사는 병변 전반에 걸쳐 분산되고 더 큰 병변은 선택적으로 다회수 주사를 받는다. 종양으로 IL-12 플라스미드의 주사 직후, 0.5 - 1 cm 직경 원형 배열의 6개의 바늘을 포함하는 전기천공법 어플리케이터 팁을 주사 부위 또는 그 주위에 위치시키고 주사 깊이에 가까운 깊이까지 삽입한다. 어플리케이터를 전기천공 발생기에 연결하고 300 msec 간격으로 1500 V/cm의 전기장 강도 및 100 μs의 펄스 폭의 6개의 펄스가 종양에 전달된다. 종양이 치료되면, 그 다음 종양이 주사되고 전기천공된다. IT-EP IL-12는 치료 과정 동안에 임의의 새롭게 제공되는 병변으로 확장될 수 있다. 주사 전에, 대상체는 국소 마취를 얻기 위해 주사 부위 주위에 1% 리도카인이 투여될 수 있다. 대상체는 또한 치료 전에 또는 동안에 진통제 또는 항불안제가 제공될 수 있다.

IL-12 플라스미드는 CMV 프로모터의 제어 하에 내부 리보솜 진입 부위 (IRES)에 의해 분리된 인간 IL-12 p35 및 p40 서브유닛에 대한 유전자를 암호화하였다. 선택적으로, IL-12 플라스미드는 2A 요소에 의해 분리된 인간 IL-12 p35 및 p40 서브유닛에 대한 유전자를 암호화한다.

IL-12 플라스미드는 직접적인 종양내 주사 및 전기천공법을 통한 종양 세포로의 전달을 위해 포스페이트 완충된 식염수 (PBS)에서 제제화된다. 선택적으로, IL-12 플라스미드는 대상체로의 주사에 적합한 임의의 용액에서 제제화된다.

펨브롤리주맙을 약품 라벨에 따라 투여한다. 일부 구체예에서, 펨브롤리주맙을 각각의 3주 주기의 제1 일 (±2일)에 30분 (-5/+10분) IV 주입을 사용하여 약 200 mg의 용량으로 IV 투여한다. 임의의 주어진 주기에서, 의학적으로 필요한 경우 하나 이상의 주사가 보류되거나 상이한 용량으로 또는 상이한 날에 투여될 수 있다. 투약량을 변경하는 것 (상이한 용량으로 투여하는 것)은 주입을 중단하는 것, 유도 속도를 변경하는 것, 주입을 멈추고 재시작하는 것, 또는 주입하는 동안 상이한 양의 약물을 투여하는 것을 포함할 수 있다. 펨브롤리주맙에 대한 불리한 반응은 또한 제조사의 권고 (예를 들어, 약품 라벨)에 따라 치료될 수 있다.

납-파클리탁셀은 승인된 라벨에 따라 권장된 바와 같이 투여된다: 4주마다 제1 일, 제8 일, 및 제15 일에 30분에 걸쳐 정맥내로 100 mg/m2 내지 260 mg/m2. 일부 대상체에서, 납-파클리탁셀은 100 mg/m2로 투여된다.

코호트 1의 개개의 대상체에 대한 연구 기간은 베이스라인으로부터 펨브롤리주맙으로 최대 33 주기 (대략 2년)일 것이다. 코호트 2에 대해, 기간은 베이스라인으로부터 펨브롤리주맙으로 최대 33 주기 및/또는 납-파클리탁셀의 25 주기 (대략 2년)일 것이다.

대안으로, 대상체가 하나 이상의 병변의 크기의 감소, 종양 부피 또는 새로운 병변의 설정의 순 감소 또는 암 관련 증상의 개선과 같이 치료로부터 순 이익을 끌어내고 있으면 치료는 계속될 수 있다.

생(live) CD45+CD3+CD8+ 게이트에서 PD-1hiCTLA-4hi 세포의 빈도를 결정하기 위해 초기 생검 샘플 (치료 시작 전)을 얻었다. 일부 구체예에서, 종양 또는 종양 미세환경에서 PD-1 및 면역 마커 수준을 평가하기 위해 치료 과정 동안에 생검 샘플을 얻었다. 마커 수준을 색원성 다중스펙트럼 면역조직화학법, 또는 핵산 검출 방법에 의해 결정한다. 샘플에서 유전자 발현을 NanoString, RNA-seq 분석 또는 후생적 (예컨대 Illumina Methylation Assay) 분석에 의해 평가할 수 있다. 이에 더하여, 이들 분석은 침윤성 T 세포 집단에서 IL-12 발현 변화를 모니터링하는데 사용될 수 있다.

치료에 대한 반응은 RECIST (v. 1.1) 또는 면역-관련 RECIST (iRECIST)에 의해 측정될 수 있다. 치료 양생법을 투여하여 증가된 무진행 생존률, 증가된 전체 생존률, 증가된 질환 제어율, 증가된 완전한 반응, 증가된 부분적 반응, 증가된 안정한 질환, 및 감소된 진행성 질환 중 하나 이상을 제공한다.

완전한 반응 (CR)은 4주 이상의 간격으로 실행된 2회의 별도의 관찰에 의해 결정된 모든 표적 병변의 소멸, 새로운 병변의 출현 없음, 및 모든 비-표적 (미처리) 병변의 소멸 및 선택적으로 종양 마커 수준의 표준화로 표시된다.

부분적 반응 (PR)은 베이스라인 합계 LD를 기준으로 하여 표적 병변의 가장 긴 직경 (LD)의 합계의 적어도 30% 감소로 표시된다. 새로운 병변의 출현 없음, 및 비-표적 병변은 비-PD이다.

안정한 질환 (SD)은 치료가 시작된 이후로 가장 작은 합계 LD 및 하나 이상의 비-표적 병변(들)의 지속 및/또는 정상 한계보다 높은 종양 마커 수준의 유지를 기준으로 하여 PR에 대한 자격을 갖추기에 충분한 수축이 없거나 PD에 대한 자격을 갖추기에 충분한 증가가 없는 것으로 표시된다.

진행성 질환 (PD)은 연구에서 기록된 직경 (베이스라인 포함)의 가장 작은 합계를 기준으로 하여 측정된 병변의 직경의 합계의 적어도 20% 증가 및 0.5 cm 이상의 절대적인 증가, 또는 하나 이상의 새로운 병변의 출현으로 표시된다.

무진행 생존률 (PFS)은 최초 주입일로부터 질환 진행일 (즉, 종양을 이미지화한 날) 또는 임의의 원인으로 사망한 날까지의, 월 단위의 시간이다. RECIST v1.1을 사용하여 진행일이 결정된다.

질환 제어율 (DCR)은 적어도 6개월 동안 완전한 반응 (CR), 부분적 반응 (PR), 또는 안정한 질환 (SD)을 가진 대상체의 퍼센트이다.

전체적인 생존률 (OS)은 진단에서 임의의 원인으로 사망할 때까지의 시간이다.

ORR은 치료의 시작에서 질환 진행/재발까지 기록된 최고의 반응이다 (치료가 시작된 이후로 기록된 가장 작은 측정값을 진행성 질환에 대한 기준으로 한다) (표 5).

치료 양생법은, 제한되는 것은 아니지만, 흑색종을 포함하는 다른 암의 치료에 적합할 수도 있다.

Claims

대상체에서 암을 치료하는 방법으로서,
(a) 대상체의 적어도 하나의 종양에 면역자극 사이토카인을 암호화하는 발현 벡터의 유효 용량을 주사하고 전기천공 요법을 종양에 투여하는 단계;
(b) 대상체에게 면역 체크포인트 억제자의 유효 용량을 투여하는 단계; 및
(c) 대상체에게 화학치료제의 유효 용량을 투여하는 단계
를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제1 항에 있어서, 면역자극 사이토카인은 인터류킨-12 (IL-12)를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제2 항에 있어서, 면역자극 사이토카인을 암호화하는 발현 벡터는 IL-12 p35 서브유닛 및 IL-12 p40 서브유닛을 암호화하는 핵산을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제1 항 내지 제3 항 중 어느 한 항에 있어서, 면역자극 사이토카인은 종양에 주사되고 전기천공 요법은 적어도 2 주기 동안 6주 주기의 제1 일 ±2일, 제5 일 ±2일, 및 제8 일 ±2일에 종양에 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제1 항 내지 제4 항 중 어느 한 항에 있어서, 전기천공 요법을 종양에 투여하는 단계는 약 100 마이크로초 내지 약 1 밀리초의 기간에 걸쳐 적어도 하나의 종양에 적어도 하나의 전압 펄스를 전달하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제5 항에 있어서, 적어도 하나의 전압 펄스는 약 300 V/cm 내지 약 1500 V/cm의 전기장 강도를 갖는 것을 특징으로 하는 방법.
제6 항에 있어서, 적어도 하나의 전압 펄스는 약 350 V/cm의 전기장 강도 및 약 10 msec의 기간, 또는 약 1500 V/cm의 전기장 강도 및 약 100 psec의 기간을 갖는 것을 특징으로 하는 방법.
제5 항 내지 제7 항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 전압 펄스는 6-8개의 펄스를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제1 항 내지 제8 항 중 어느 한 항에 있어서, 면역 체크포인트 억제자는 PD-1 또는 PD-L1 안타고니스트를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제9 항에 있어서, PD-1 또는 PD-L1 안타고니스트는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체 또는 항체 단편을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제9 항 또는 제10 항에 있어서, PD-1 또는 PD-L1 안타고니스트는 전신으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제11 항에 있어서, PD-1 또는 PD-L1 안타고니스트는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 피딜리주맙, 두르발루맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 세미플리맙, 신틸리맙, 토리팔리맙, 및 캄렐리주맙으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제1 항 내지 제12 항 중 어느 한 항에 있어서, 면역 체크포인트 억제자는 적어도 2 주기 동안 3주 주기의 제1 일 ±2일에 대상체에 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제1 항 내지 제13 항 중 어느 한 항에 있어서, 화학치료제는 전신으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제14 항에 있어서, 화학치료제는 파클리탁셀 또는 납-파클리탁셀을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제15 항에 있어서, 파클리탁셀 또는 납-파클리탁셀은 적어도 2 주기 동안 4주 주기의 제1 일 ±2일, 제8 일 ±2일, 및 제15 일 ±2일에 대상체에 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제1 항 내지 제16 항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 종양에 면역자극 사이토카인을 암호화하는 발현 벡터를 주사하는 단계; 면역 체크포인트 억제자를 투여하는 단계; 및 화학치료제를 투여하는 단계는 동일한 날에 시작되는 것을 특징으로 하는 방법.
제1 항 내지 제17 항 중 어느 한 항에 있어서, 종양은 피부 및 피하 종양인 것을 특징으로 하는 방법.
제1 항 내지 제18 항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 수술 가능한 것을 특징으로 하는 방법.
제1 항 내지 제18 항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 수술 불가능한 것을 특징으로 하는 방법.
제18 항 또는 제19 항에 있어서, 암은 국소적으로 진행성, 재발성, 또는 전이성인 것을 특징으로 하는 방법.
제1 항 내지 제21 항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 1회 이상의 사전 암 요법을 받지 않은 것을 특징으로 하는 방법.
제1 항 내지 제21 항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 1회 이상의 사전 암 요법을 받은 것을 특징으로 하는 방법.
제21 항에 있어서, 대상체는 비-전이성 또는 잠재적으로 수술 가능한 질환 설정에서 사전 신보조 또는 보조 치료를 받은 것을 특징으로 하는 방법.
제1 항 내지 제19 항 중 어느 한 항에 있어서, 요법은 신보조제로서 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제1 항 내지 제25 항 중 어느 한 항에 있어서, 암은 흑색종, 메르켈 세포 암종, 기저세포 암종, 편평세포 암종, 유방암, 삼중 음성 유방암, 및 두경부암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제17 항에 있어서, 암은 삼중 음성 유방암인 것을 특징으로 하는 방법.
제17 항에 있어서, 삼중 음성 유방암은 수술 불가능한 국소적으로 진행된 TNBC 또는 전이성 TNBC인 것을 특징으로 하는 방법.
제1 항에 있어서, 방법은 하나 이상의 종양의 크기의 감소, 새로운 종양의 형성의 감소, 또는 하나 이상의 암-관련 증상의 개선, 무질환의 증가, 생존률의 증가, 무진행 생존률의 증가, 또는 질환 제어율의 증가를 초래하는 것을 특징으로 하는 방법.
제1 항 내지 제17 항 중 어느 한 항에 있어서, 면역자극 사이토카인은 IL-12를 포함하고, 면역 체크포인트 억제자는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체를 포함하고, 화학치료제는 납-파클리탁셀을 포함하고, 대상체는 수술 불가능한 국소적으로 진행된 삼중 음성 유방암 또는 전이성 삼중 음성 유방암으로 진단된 것을 특징으로 하는 방법.
제30 항에 있어서, 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체는 펨브롤리주맙을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제31 항에 있어서, IL-12는 적어도 2 주기 동안 6주 주기의 제1 일 ±2일, 제5 일 ±2일, 및 제8 일 ±2일에 IT-EP에 의해 투여되고, 펨브롤리주맙은 적어도 2 주기 동안 3주 주기의 제1 일 ±2일에 전신으로 투여되고, 납-파클리탁셀은 적어도 2 주기 동안 4주 주기의 1 ±2일, 제8 일 ±2일, 및 제15 일 ±2일에 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.