JP2023536460A - がんの処置のための併用療法 - Google Patents

Abstract

免疫チェックポイント阻害薬および化学療法薬の投与と組み合わせて免疫賦活性サイトカインの腫瘍内電気穿孔でがんを処置するための方法ならびに処置スケジュールが、記載されている。上記方法は、（ａ）対象における少なくとも１つの腫瘍に、少なくとも１つの免疫賦活性サイトカインをコードする少なくとも１つの発現ベクターの有効用量を腫瘍内電気穿孔によって投与すること；（ｂ）有効用量の免疫チェックポイント阻害薬をその対象に投与すること；および（ｃ）有効用量の化学療法薬を対象に投与することを含む。

Description

（関連出願への相互参照）
本願は、本明細書において参考として援用される、２０２０年７月２９日に出願された米国仮出願第６３／０５８，０２６号に基づく利益を主張する。

（背景）
乳がんは、米国の女性において診断される最も一般的ながんであり、がん関連死の二番目に主な原因である。トリプルネガティブ乳がん（ＴＮＢＣ）は、浸潤性乳がんの４つの主要な分子サブタイプのうちの１つを代表し、全症例のうちの１０～２０％を占める。ＴＮＢＣは、生物学的に不均一であるが、エストロゲン（ＥＲ）レセプターおよびプロゲステロン（ＰＲ）レセプターについての陰性表現型と、ヒト上皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２）についての遺伝子増幅／タンパク質過剰発現の欠如とによって主に同定され得る。これらの生物学的特徴は、他のすべての乳がんサブタイプにおいて観察されるよりも高い侵襲性および再発リスクを与える。

腫瘍細胞レセプターの欠如が原因で、ＴＮＢＣを有する患者は、ホルモン療法からも、発癌性ＨＥＲ２経路を標的にする処置からも、利益を受けない。化学療法が、アジュバント状況、ネオアジュバント状況、および転移性状況における現在の標準治療処置である。再発性および／または転移性の疾患を有する患者のための標準治療は、細胞傷害性化学療法である。生存期間中央値は、再発または遠隔転移の診断の時点からおよそ１３か月である。従って、ＴＮＢＣを処置する改善された方法が、必要とされている。

（要旨）
がんを処置する方法が本明細書において記載されており、その方法は、対象に治療有効量の免疫賦活性サイトカインをチェックポイント阻害薬および化学療法薬と組み合わせて投与する工程を含む。

一部の実施形態において、がんを有する対象を処置する方法が記載され、その方法は、
（ａ）その対象における少なくとも１つの腫瘍に、少なくとも１つの免疫賦活性サイトカインをコードする少なくとも１つの発現ベクターの有効用量を腫瘍内電気穿孔によって投与する工程；
（ｂ）有効用量の免疫チェックポイント阻害薬をその対象に投与する工程；および
（ｃ）有効用量の化学療法薬をその対象に投与する工程；
を含む。
そのがんは、ステージ０、ステージＩ、ステージＩＩ、ステージＩＩＩ、またはステージＩＶであり得る。そのがんは、手術可能または手術不能であり得る。そのがんは、局所進行性がん（ステージＩＩもしくはステージＩＩＩ）、再発性、または転移性（ステージＩＶ）であり得る。そのがんは、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、黒色腫、頭頸部がん、扁平上皮癌、基底細胞癌、およびメルケル細胞癌であり得るが、これらに限定はされない。一部の実施形態において、そのがんは手術可能である。一部の実施形態において、そのがんは手術不能である。一部の実施形態において、そのがんは、手術不能な局所進行性または転移性のがんである。

一部の実施形態において、ＴＮＢＣを有する対象を処置する方法が記載され、その方法は、
（ａ）その対象における少なくとも１つの腫瘍に、少なくとも１つの免疫賦活性サイトカインをコードする少なくとも１つの発現ベクターの有効用量を腫瘍内電気穿孔によって投与する工程；
（ｂ）有効用量の免疫チェックポイント阻害薬をその対象に投与する工程；および
（ｃ）有効用量の化学療法薬をその対象に投与する工程；
を含む。
そのＴＮＢＣは、ステージ０、ステージＩ、ステージＩＩ、ステージＩＩＩ、またはステージＩＶであり得る。そのＴＮＢＣは手術可能または手術不能であり得る。そのがんは、局所進行性がん（ステージＩＩもしくはＩＩＩ）、再発性、または転移性（ステージＩＶ）であり得る。一部の実施形態において、そのＴＮＢＣは手術可能である。一部の実施形態において、そのＴＮＢＣは手術不能である。一部の実施形態において、そのＴＮＢＣは、手術不能な局所進行性または転移性のＴＮＢＣである。

一部の実施形態において、がんを有する対象を処置するための第一選択処置方法が記載され、その方法は、
（ａ）その対象における少なくとも１つの腫瘍に、少なくとも１つの免疫賦活性サイトカインをコードする少なくとも１つの発現ベクターの有効用量を腫瘍内電気穿孔によって投与する工程；
（ｂ）有効用量の免疫チェックポイント阻害薬をその対象に投与する工程；および
（ｃ）有効用量の化学療法薬をその対象に投与する工程；
を含む。
そのがんは、ステージ０、ステージＩ、ステージＩＩ、ステージＩＩＩ、またはステージＩＶであり得る。そのがんは、手術可能または手術不能であり得る。そのがんは、局所進行性がん（ステージＩＩもしくはステージＩＩＩ）、再発性、または転移性（ステージＩＶ）であり得る。そのがんは、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、黒色腫、頭頸部がん、扁平上皮癌、基底細胞癌、およびメルケル細胞癌であり得るが、これらに限定はされない。一部の実施形態において、そのがんは手術可能である。一部の実施形態において、そのがんは手術不能である。一部の実施形態において、そのがんは、手術不能な局所進行性または転移性のがんである。

一部の実施形態において、ＴＮＢＣを有する対象を処置するための第一選択処置歩法が記載され、その方法は、
（ａ）その対象における少なくとも１つの腫瘍に、少なくとも１つの免疫賦活性サイトカインをコードする少なくとも１つの発現ベクターの有効用量を腫瘍内電気穿孔によって投与する工程；
（ｂ）有効用量の免疫チェックポイント阻害薬をその対象に投与する工程；および
（ｃ）有効用量の化学療法薬をその対象に投与する工程；
を含む。
そのＴＮＢＣは、ステージ０、ステージＩ、ステージＩＩ、ステージＩＩＩ、またはステージＩＶであり得る。そのＴＮＢＣは手術可能または手術不能であり得る。そのがんは、局所進行性がん（ステージＩＩもしくはＩＩＩ）、再発性、または転移性（ステージＩＶ）であり得る。一部の実施形態において、そのＴＮＢＣは手術可能である。一部の実施形態において、そのＴＮＢＣは手術不能である。一部の実施形態において、そのＴＮＢＣは、手術不能な局所進行性または転移性のＴＮＢＣである。

一部の実施形態において、がんを有する対象を処置するための第二選択処置方法が記載され、その方法は、
（ａ）その対象における少なくとも１つの腫瘍に、少なくとも１つの免疫賦活性サイトカインをコードする少なくとも１つの発現ベクターの有効用量を腫瘍内電気穿孔によって投与する工程；
（ｂ）有効用量の免疫チェックポイント阻害薬をその対象に投与する工程；および
（ｃ）有効用量の化学療法薬をその対象に投与する工程；
を含む。
そのがんは、ステージ０、ステージＩ、ステージＩＩ、ステージＩＩＩ、またはステージＩＶであり得る。そのがんは、手術可能または手術不能であり得る。そのがんは、局所進行性がん（ステージＩＩもしくはステージＩＩＩ）、再発性、または転移性（ステージＩＶ）であり得る。そのがんは、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、黒色腫、頭頸部がん、扁平上皮癌、基底細胞癌、およびメルケル細胞癌であり得るが、これらに限定はされない。一部の実施形態において、そのがんは手術可能である。一部の実施形態において、そのがんは手術不能である。一部の実施形態において、そのがんは、手術不能な局所進行性または転移性のがんである。

一部の実施形態において、ＴＮＢＣを有する対象を処置するための第二選択処置方法が記載され、その方法は、
（ａ）その対象における少なくとも１つの腫瘍に、少なくとも１つの免疫賦活性サイトカインをコードする少なくとも１つの発現ベクターの有効用量を腫瘍内電気穿孔によって投与する工程；
（ｂ）有効用量の免疫チェックポイント阻害薬をその対象に投与する工程；および
（ｃ）有効用量の化学療法薬をその対象に投与する工程；
を含む。
そのＴＮＢＣは、ステージ０、ステージＩ、ステージＩＩ、ステージＩＩＩ、またはステージＩＶであり得る。そのＴＮＢＣは手術可能または手術不能であり得る。そのがんは、局所進行性がん（ステージＩＩもしくはＩＩＩ）、再発性、または転移性（ステージＩＶ）であり得る。一部の実施形態において、そのＴＮＢＣは手術可能である。一部の実施形態において、そのＴＮＢＣは手術不能である。一部の実施形態において、そのＴＮＢＣは、手術不能な局所進行性または転移性のＴＮＢＣである。

その免疫賦活性サイトカインは、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５／レセプターα、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＩＬ－３５、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、ＴＧＦ－β、およびＣ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド９（ＣＸＣＬ９）からなる群より選択され得る。一部の実施形態において、その免疫賦活性サイトカインはＩＬ－１２を含む。

腫瘍内電気穿孔は、腫瘍への発現ベクターの注射と、その腫瘍への少なくとも１電気穿孔パルスの投与とを含む。その電気穿孔パルスは、持続時間約１００マイクロ秒～約１ミリ秒および場の強度約３００Ｖ／ｃｍ～約１５００Ｖ／ｃｍにわたる、少なくとも１電圧パルスの投与を含み得る。

一部の実施形態において、その免疫チェックポイント阻害薬は全身投与される。全身注射は、静脈内注入を含み得る。一部の実施形態において、その免疫チェックポイント阻害薬は、発現ベクター上にコードされ、そのがん性腫瘍に電気穿孔療法によって送達される。一部の実施形態において、その免疫チェックポイント阻害薬は、その免疫賦活性サイトカインもまたコードする発現ベクター上にコードされ、そのがん性腫瘍に電気穿孔療法によって送達される。その免疫チェックポイント阻害薬は、表１の少なくとも１つの免疫チェックポイントタンパク質のアンタゴニストである。その免疫チェックポイント阻害薬は、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、または抗ＣＴＬＡ－４ １抗体であり得るが、これらに限定はされない。その免疫チェックポイント阻害薬は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、セミプリマブ、シンチリマブ、トリパリマブ、またはカムレリズマブ（ｃａｍｒｅｌｉｚｕｍａｂ）であり得るが、これらに限定はされない。一部の実施形態において、その免疫チェックポイント阻害薬は、ＰＤ－１アンタゴニスト、ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストまたはＰＤ－Ｌ２アンタゴニストを含む。一部の実施形態において、その免疫チェックポイント阻害薬は、その免疫賦活性サイトカインの電気穿孔後に投与される。一部の実施形態において、免疫チェックポイント阻害薬は、その免疫賦活性サイトカインの電気穿孔前に投与される。一部の実施形態において、免疫チェックポイント阻害薬は、その免疫賦活性サイトカインの電気穿孔と本質的に同時に投与される。その免疫チェックポイント阻害薬と免疫賦活性サイトカインとが同じ日に投与される日に、免疫チェックポイント阻害薬は、ＩＴ－ＥＰ免疫賦活性サイトカインの投与の前、その投与と同時、またはその投与後に投与され得る。一部の実施形態において、ＩＴ－ＥＰ免疫賦活性サイトカインは、免疫チェックポイント阻害薬の投与の前に投与される。化学療法薬とＩＴ－ＥＰ免疫賦活性サイトカインとが同じ日に投与される日に、化学療法薬は、ＩＴ－ＥＰ免疫賦活性サイトカインの投与の前、その投与と同時、またはその投与後に投与され得る。免疫チェックポイント阻害薬と化学療法薬とが同じ日に投与される日に、免疫チェックポイント阻害薬は、化学療法薬の投与の前、その投与と同時、またはその投与後に投与され得る。

その化学療法薬は、そのがんの処置について承認または認可された、あらゆる化学療法薬であり得る。一部の実施形態において、例えばトリプルネガティブ乳がんの処置のために、その化学療法薬は、乳がんまたはトリプルネガティブ乳がんの処置について承認または認可されている。その化学療法薬は、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ペグ化リポソームドキソルビシン、エピルビシン）、シクロホスファミド、アルキル化薬（例えば、チオテパ）、タキサン（例えば、ドセタキセル、パクリタキセル、ｎａｂ－パクリタキセル）、ヌクレオチドアナログもしくは代謝拮抗薬（例えば、フルオロウラシル（５－ＦＵ）、ゲムシタビン、メトトレキサート、カペシタビン）、微小管阻害薬（例えば、エリブリン）、白金製剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチン）、ＰＩ３Ｋ阻害薬（例えば、アルペリシブ）、ポリＡＤＰリボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害薬（例えば、オラパリブ、タラゾパリブ）、シトキサン、イクサベピロン、ムタノリシン（ｍｕｔａｎｙｃｉｎ）、ビノレルビン、またはそれらの組合せであり得るが、これらに限定はされない。一部の実施形態において、そのがんは乳がんまたはＴＮＢＣであり、その化学療法薬はタキサン（例えば、パクリタキセルまたはｎａｂ－パクリタキセル）を含む。

その免疫賦活性サイトカイン、免疫チェックポイント阻害薬、および化学療法薬の各々は、その対象に周期的に投与される。少なくとも１つの免疫賦活性サイトカインをコードする少なくとも１つの発現ベクターの有効用量を腫瘍内電気穿孔によって投与するために、その発現ベクターは、３～６週間サイクルの１日目（±２日）；１日目（±２日）および５日目（±２日）；１日目（±２日）および８日目（±２日）；または１日目（±２日）、５日目（±２日）、および８日目（±２日）に（すなわち、その処置のための持続期間の間、３～６回の６週間ごとの示された日に）、ＩＴ－ＥＰによって投与される。一部の実施形態において、その免疫賦活性サイトカインは、６週間サイクルに従って投与される。一部の実施形態において、その免疫賦活性サイトカインは、６週間サイクルの１日目（±２日）、５日目（±２日）、および８日目（±２日）に投与される。一部の実施形態において、その免疫賦活性サイトカインは、６週間サイクルの１日目（±２日）、８日目（±２日）、および１５日目（±２日）に投与される。一部の実施形態において、その免疫賦活性サイトカインは、４週間サイクルの１日目（±２日）および８日目（±２日）に投与される。その免疫チェックポイント阻害薬の有効用量を投与するため、その免疫チェックポイント阻害薬は、３～６週間サイクルの１日目（±２日）に（すなわち、その処置のための持続期間の間、３～６回の６週間ごとの示された日に）、投与される。一部の実施形態において、その免疫チェックポイント阻害薬は、３週間サイクルの１日目（±２日）に投与される。一部の実施形態において、その免疫チェックポイント阻害薬は、４週間サイクルの１日目（±２日）に投与される。その化学療法薬は、その化学療法薬について一般的に受け入れられた慣行に従って（すなわち、製品表示または一般的に受け入れられた標準治療に従って）、その対象に投与され得る。一部の実施形態において、その化学療法薬は、１～６週間サイクルの１日目（±２日）；１日目（±２日）および８日目（±２日）；１日目（±２日）および１５日目（±２日）；または１日目（±２日）、８日目（±２日）、および１５日目（±２日）に（すなわち、その処置のための持続期間の間、１～６週間ごとの示された日に）、その対象に投与される。一部の実施形態において、その免疫チェックポイント阻害薬は、４週間サイクルに従って投与される。一部の実施形態において、その免疫チェックポイント阻害薬は、４週間サイクルの１日目、８日目、および１５日目に投与される。その免疫賦活性サイトカイン、免疫チェックポイント阻害薬、および化学療法薬の各々についての処置サイクルは、同時に投与される。一部の実施形態において、その免疫賦活性サイトカイン、免疫チェックポイント阻害薬、および化学療法薬の各々についての処置サイクルは、同じ日に開始され、例えば、３週間の免疫賦活性サイトカイン処置サイクルの日と、免疫チェックポイント阻害薬処置サイクルの１日目と、化学療法薬処置サイクルの１日目とが同じ日であるようになる。一部の実施形態において、その免疫賦活性サイトカインはＩＩＬ－１２を含み、そのチェックポイント阻害薬はＰＤ－１アンタゴニストまたはＰＤ－Ｌ１アンタゴニストを含み、その化学療法薬はｎａｂ－パクリタキセルを含む。

一部の実施形態において、対象におけるがんの方法が記載され、その方法は、
（ａ）６週間サイクルの１日目、５日目、および８日目に、その対象における腫瘍に、少なくとも１つの免疫賦活性サイトカインをコードする少なくとも１つの発現ベクターの有効用量を注射し、電気穿孔療法をその腫瘍に投与する工程；
（ｂ）３週間サイクルの１日目に、有効用量の免疫チェックポイント阻害薬をその対象に投与する工程；ならびに
（ｃ）４週間サイクルの１日目、８日目、および１５日目に、有効用量の化学療法薬をその対象に投与する工程；
を含む。
その対象は、複数サイクルの各作用物質で処置され得る。各作用物質（免疫賦活性サイトカイン、免疫チェックポイント阻害薬、および化学療法薬）についてのサイクルは、継続的に、すなわち、それぞれ６週間ごと、３週間ごとおよび４週間ごとに進行し得る。一部の実施形態において、各作用物質についての初回サイクルの１日目は同じ日に始まり、それらのサイクルは継続的に進行する。一部の実施形態において、その免疫賦活性サイトカイン、免疫チェックポイント阻害薬、および化学療法薬は、図１において図示される処置スケジュールに従ってその対象に投与される。一部の実施形態において、その免疫賦活性サイトカインはＩＬ－１２を含み、そのチェックポイント阻害薬はＰＤ－１アンタゴニストまたはＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト（すなわち、抗ＰＤ－１抗体、または抗ＰＤ－Ｌ１抗体）を含み、その化学療法薬はｎａｂ－パクリタキセルを含む。

記載される方法のうちのいずれかに従って投与するために処方された、免疫賦活性サイトカインとチェックポイント阻害薬と化学療法薬とを含む併用療法もまた，記載される。

それらの方法および併用は、手術不能ながんを有する対象を処置するために使用され得る。その手術不能ながんは、局所進行性または転移性であり得る。その手術不能ながん、局所進行性または転移性のがんは、ＴＮＢＣであり得るがこれに限定はされない。一部の実施形態において、その対象は、１またはそれ以上の事前のがん療法を受けたことがある。一部の実施形態において、その対象は、１またはそれ以上の事前のがん療法を受けたことがない。一部の実施形態において、方法は、非転移性疾患状況または潜在的に手術可能な疾患状況において事前のネオアジュバント処置またはアジュバント処置を受けたことがある対象を処置するために使用され得る。

それらの方法および併用は、進行性、転移性、処置抵抗性のがんまたは腫瘍を有する対象を処置するために使用され得る。処置抵抗性のがんまたは腫瘍は、免疫チェックポイント阻害薬抵抗性がん腫瘍、ホルモン抵抗性のがんもしくは腫瘍、放射線抵抗性がん腫瘍、または化学療法抵抗性のがんもしくは腫瘍であり得るが、これらに限定はされない。一部の実施形態において、その対象は、少なくとも１コースの免疫チェックポイント阻害薬療法に反応し損なったことがある。一部の実施形態において、その対象は、１またはそれ以上の抗がん療法（例えばチェックポイント阻害薬療法であるが、これに限定はされない）を進行中であるかまたは進行したことがある。

それらの方法および併用は、１またはそれ以上の抗がん療法に抵抗性または反応しないと予測される、腫瘍を有する対象を処置するために使用され得る。一部の実施形態において、その対象は、低腫瘍浸潤リンパ球、低部分細胞傷害性リンパ球、または疲弊したＴ細胞を有する。一部の実施形態において、その対象は、１またはそれ以上の事前のがん療法に進んだことがある。

例示的処置スケジュール。

（詳細な説明）
添付の特許請求の範囲を含む本明細書において使用される場合、「ある（ａ）」、「ある（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」などの語の単数形は、そうではないようにその文脈が明確に示さない限りは、それらに対応する複数の言及を含む。接続詞「または（もしくは、あるいは）」は、その文脈において包括的意味が妥当ではない限りは、包括的意味で、すなわち「および／または（もしくは、あるいは）」と同等として、解釈されるべきである。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、および「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」の使用は、限定的であることは意図されない。上記の概括的説明と詳細な説明との両方は例示的および説明的なものに過ぎず、本教示の限定ではないことが、理解されるべきである。

概して、用語「約」は、組成物の活性または安定性に対していかなる顕著な影響も有しない、その組成物の成分の量における非実質的な変動を示す。用語「約」は、当業者によって決定される特定の値についての許容可能な誤差範囲内にあることを意味し、その特定の値についての許容可能な誤差範囲は、その値がどのように測定または決定されるか（すなわち、測定システムの限界）に部分的に依存する。例えば、「約」は、当該分野における実務によって、１標準偏差または１よりも多い標準偏差以内にあることを意味し得る。あるいは、「約」は、所定の値の０～２０％まで、０～１０％まで、０～５％まで、または１％までの範囲を意味し得る。本出願および特許請求の範囲において特定の値が記載される場合、そうではないと記載されない限りは、その特定の値について許容可能な誤差範囲内にあることを意味する用語「約」が、想定されるべきである。すべての範囲は、「両終点を含まない」などの明示的除外が存在しない場合は、それらの両終点を含むと解釈されるべきであり、従って、例えば、「１０～１５以内」は、値１０および値１５を含む。記載された範囲は、両末端の値、それら両末端の値の中間の整数、および実際上の場合にはその範囲内にある有理数を含む（例えば、範囲５～１０は、５、６、７、８、９、および１０、ならびに実際上の場合には６．８、９．３５などの値を含む）ことを、当業者は理解する。

本明細書において引用されるすべての参考文献は、個別の公開物、特許出願、または特許の各々が参考として援用されると具体的および個別に示された場合と同じ程度に、参考として援用される。

（Ａ．定義）
「免疫チェックポイントタンパク質」は、Ｔ細胞機能不全またはアポトーシスを誘導する一群の免疫細胞表面レセプター／リガンドのうちの任意の１つである。これらの免疫阻害標的は、過度の免疫反応を減弱し自己寛容を保証する。腫瘍細胞は、これらのチェックポイントタンパク質の抑制性効果を利用する。免疫チェックポイントは、免疫系の標準的部分である。それらの役割は、制御されていない免疫反応を防ぐことである。免疫チェックポイントは、Ｔ細胞表面上のレセプターが、他の細胞によって発現されたチェックポイントタンパク質を認識してそれに結合する場合に、Ｔ細胞疲弊と呼ばれるプロセスに関与する。一部の腫瘍は、これらのチェックポイントタンパク質を発現することによって免疫応答を逃れる。チェックポイントタンパク質の例としては、細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ－４）、プログラム死１（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ Ｄｅａｔｈ １）（ＰＤ－１）、プログラム死リガンド１（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ Ｄｅａｔｈ Ｌｉｇａｎｄ １）（ＰＤ－Ｌ１）、ＰＤ－Ｌ２、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３）、Ｔ細胞免疫グロブリンムチン３（Ｔ ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｍｕｃｉｎ－３）（ＴＩＭ３）、キラー細胞免疫グロブリン様レセプター（ＭＲ）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（Ｂ－ ａｎｄ Ｔ－ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ Ａｔｔｅｎｕａｔｏｒ）（ＢＴＬＡ）、アデノシンＡ２ａレセプター（Ａ２ａＲ）、およびヘルペスウイルス侵入メディエーター（Ｈｅｒｐｅｓ Ｖｉｒｕｓ Ｅｎｔｒｙ Ｍｅｄｉａｔｏｒ）（ＨＶＥＭ）が挙げられるが、これらに限定はされない。例示的な免疫チェックポイントタンパク質が、表１において列挙される。チェックポイント阻害薬を使用してチェックポイントタンパク質とそれらのＴ細胞レセプターとの間の相互作用を遮断することが、Ｔ細胞疲弊を克服し、それにより腫瘍に対する免疫応答を増加するために、使用される。

「免疫チェックポイント阻害薬」（チェックポイント阻害薬）は、免疫チェックポイントタンパク質の効果を遮断することによって免疫抑制を阻害または防止する分子である。チェックポイント阻害薬としては、抗体および抗体フラグメント、ナノボディ、ダイアボディ、チェックポイント分子の可溶性結合パートナー、小分子治療薬、およびペプチドアンタゴニストが挙げられるが、これらに限定はされない。チェックポイント阻害薬の例としては、抗チェックポイントタンパク質抗体が挙げられる。免疫チェックポイント阻害薬は、ＰＤ－１アンタゴニストおよび／またはＰＤ－Ｌ１アンタゴニストであり得るが、これらに限定はされない。ＰＤ－１アンタゴニストおよび／またはＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、抗ＰＤ－１抗体またはＰＤ－Ｌ１抗体であり得るが、これらに限定はされない。抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１抗体としては、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、およびアテゾリズマブが挙げられるが、これらに限定はされない。

「免疫賦活性サイトカイン」は、外来抗原（ウイルス抗原、細菌抗原、または腫瘍抗原が挙げられる）に対する免疫応答を媒介または増強するサイトカインを含む。自然免疫賦活性サイトカインとしては、例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１５／レセプターα、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、ＩＬ－２７、ＩＬ－３５、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、ＴＧＦ－β、およびＣＸＣＬ９が挙げられ得る。適応免疫賦活性サイトカインとしては、例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＴＧＦ－β、ＩＬ－１０およびＩＦＮ－γが挙げられる。免疫賦活性サイトカインの例が、表２において提供される。

「核酸」は、ＲＮＡおよびＤＮＡの両方を含む。ＲＮＡおよびＤＮＡとしては、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ウイルスＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ウイルスＲＮＡ、合成ＲＮＡもしくは合成ＤＮＡ、およびｍＲＮＡが挙げられるが、これらに限定はされない。核酸としては、改変型ＲＮＡまたは改変型ＤＮＡもまた挙げられる。一部の実施形態において、その核酸は、「ベクター」を構成するプラスミドＤＮＡである。その核酸は、潜在的な治療作用を有するタンパク質（例えば、ＩＦＮ－α、ＩＬ－２、ＩＬ－１２など）を発現する真核生物プロモーターを有するプラスミドＤＮＡベクターであり得るが、これらに限定はされない。

「発現ベクター」とは、発現産物（例えば、ペプチド（すなわち、ポリペプチドもしくはタンパク質）、またはＲＮＡ）をコードする、ＲＮＡコード配列もしくはＤＮＡコード配列またはＲＮＡセグメントもしくはＤＮＡセグメントを指す。発現ベクターは、ウイルス、弱毒化ウイルス、プラスミド、直鎖ＤＮＡ分子、またはｍＲＮＡであり得るが、これらに限定はされない。発現ベクターは、細胞（例えば哺乳動物細胞）において１またはそれ以上のポリペプチドを発現可能である。その発現ベクターは、コードされた発現産物の発現のために必要な１またはそれ以上の配列を含み得る。その発現ベクターは、そのＤＮＡコード配列に作動可能に連結された、エンハンサー、プロモーター、ターミネーター、およびポリＡシグナルのうちの１またはそれ以上を含み得る。

用語「プラスミド」とは、哺乳動物細胞において発現され得るポリペプチドをコードする少なくとも１つの配列を含む、核酸（例えば、記載された発現ベクターのいずれか）を指す。プラスミドは、閉環状ＤＮＡ分子であり得る。種々の配列が、コード配列の発現を変化させるためおよび細胞におけるプラスミドの複製を促進するために、プラスミド中に組み込まれ得る。転写、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の安定性、ＲＮＡプロセシング、または翻訳の効率に影響を及ぼす配列が、使用され得る。そのような配列としては、５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）、プロモーター、イントロン、および３’非翻訳領域（３’ＵＴＲ）が挙げられるが、これらに限定はされない。プラスミドは、大規模量および／または高収量で製造され得る。プラスミドはさらに、ｃＧＭＰ製造を使用して製造され得る。プラスミドは、細菌（例えばＥ．ｃｏｌｉ）中に形質転換され得る。ＤＮＡプラスミドは、哺乳動物対象中への注射のために安全および有効であるように処方され得る。

「作動可能に連結された」とは、両方の成分が正常に機能にし、それらの成分のうちの少なくとも１つが他の成分のうちの少なくとも１つに対して発揮される機能を媒介し得る可能性を両方の成分が可能にする様式である、２以上の成分（例えば、プロモーターおよび別の配列エレメント）の並置を指す。例えば、コード配列に作動可能に連結されたプロモーターは、そのコード配列からＲＮＡ（ｍＲＮＡを含む）へのＲＮＡポリメラーゼ媒介性転写を指示し、その後、そのＲＮＡは（それがイントロンを含む場合には）スプライスされ得、必要に応じて、そのコード配列によりコードされるタンパク質へと翻訳され得る。コード配列は、１またはそれ以上の転写制御配列または翻訳制御配列に「作動可能に連結され」得る。遺伝子に作動可能に連結されたターミネーター／ポリＡシグナルは、その遺伝子からＲＮＡへの転写を終結させ、そのＲＮＡへのポリＡシグナルの付加を指示する。

「プロモーター」は、細胞におけるＲＮＡポリメラーゼを（例えば、直接に、または他のプロモーターに結合したタンパク質もしくは物質を介して）結合可能であり、コード配列の転写を開始可能である、ＤＮＡ調節領域である。プロモーターは、転写開始率に影響を及ぼす１またはそれ以上のさらなる領域もしくはエレメント（エンハンサーが挙げられるが、これに限定はされない）を含み得る。プロモーターは、構成的活性型プロモーター、条件的プロモーター、誘導性プロモーター、または細胞型特異的プロモーターであり得るが、これらに限定はされない。プロモーターの例は、例えば、ＷＯ２０１３／１７６７７２において見出され得る。そのプロモーターは、ＣＭＶプロモーター、ニワトリβアクチンプロモーター、改変型ニワトリβアクチンプロモーター（ｓｍＣＢＡ）、オプシンプロモーター、ヒトオプシンプロモーター、切断型ヒトオプシンプロモーター（ｈＯｐｓ）、ロドプシンキナーゼプロモーター、ヒトロドプシンキナーゼプロモーター、Ｉｇκプロモーター、ｍＰＧＫ、ＳＶ４０プロモーター、βアクチンプロモーター、αアクチンプロモーター、ＳＲαプロモーター、ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）プロモーター、マウス乳癌ウイルス末端反復配列（ｌｏｎｇ ｔｅｒｍｉｎａｌ ｒｅｐｅａｔ）（ＬＴＲ）プロモーター、アデノウイルス主要後期プロモーター（Ａｄ ＭＬＰ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、およびＥＦ１αプロモーターであり得るが、これらに限定はされない。そのＣＭＶプロモーターは、ＣＭＶ最初期プロモーター、ヒトＣＭＶプロモーター、マウスＣＮＶプロモーター、およびサルＣＭＶプロモーターであり得るが、これらに限定はされない。一部の実施形態において、そのプロモーターは、網膜特異的プロモーターである。

用語「がん」は、不適切な細胞増殖、異常または過度の細胞増殖によって一般的に特徴付けられる、無数の疾患を含む。がんの例としては、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、結腸がん、前立腺がん、膵がん、黒色腫、肺がん、卵巣がん、腎がん、脳がん、または肉腫が挙げられるが、これらに限定はされない。

トリプルネガティブ乳がんは、エストロゲン（ＥＲ）レセプターおよびプロゲステロン（ＰＲ）レセプターについての陰性表現型と、ヒト上皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２）についての遺伝子増幅／タンパク質過剰発現の欠如とを有する。ＥＲ／ＰＲ陰性は、腫瘍生検細胞のうちの１０％未満がＥＲまたはＰＲについて陽性に染色することを示す。

「処置抵抗性がん」は、少なくとも１つの事前医療処置に反応しないかまたは反応しなかった、がんである。一部の実施形態において、処置に関して処置抵抗性は、処置に対する不十分な反応またはその処置に対する部分奏功もしくは完全奏功の欠如を示す。例えば、患者は、ある処置（例えば、ＰＤ－１阻害薬療法またはＰＤ－Ｌ１阻害薬療法などのチェックポイント阻害薬療法）に対して、その患者が少なくとも２回分のその処置を受けた後で少なくとも部分奏効を示さない場合に、抵抗性であると考えられ得る。

「腫瘍微小環境」とは、腫瘍の周囲の環境を指し、「腫瘍微小環境」は、その腫瘍に酸素、増殖因子、および栄養分を提供することまたはその腫瘍に対する免疫応答を阻害することなどによって、腫瘍の増殖および／または生存を助ける、非悪性の血管および間質組織を含む。腫瘍微小環境は、その腫瘍が存在する細胞環境（周囲の血管、免疫細胞、線維芽細胞、骨髄由来炎症細胞、リンパ球、シグナリング分子および細胞外マトリックスを含む）を含む。

「腫瘍周辺」または「周辺組織」は、腫瘍のすぐ近くにあるかまたは腫瘍を取り囲む、外観上は正常な組織である。代表的には、周辺組織は、その組織の０．１～２ｃｍ以内にある外観上は正常な組織である。腫瘍周辺組織は、腫瘍が外科的に切除される場合に、しばしば除去される。

「処置」としては、がん細胞増殖の阻害もしくは減少、がん細胞の破壊、がん細胞増殖の防止、悪性細胞開始の防止、形質転換前悪性細胞から悪性疾患への進行の停止もしくは逆転、または疾患の寛解が挙げられるが、これらに限定はされない。

「薬理学的有効量」、「治療有効量」、「有効量」、または「有効用量」とは、意図された薬理学的結果、治療結果、または予防的結果を生じる作用物質の量を指す。

「対象」とは、動物（例えば哺乳動物（例えばヒト））を指す。本明細書において記載される方法は、ヒトおよび非ヒト動物の両方において有用であり得る。一部の実施形態において、その対象は哺乳動物（例えば、疾患の動物モデル）であり、一部の実施形態において、その対象はヒトである。獣医学的用途もまた、本発明によって包含されることが意図される。

「電気穿孔」、「電気透過処理（ｅｌｅｃｔｒｏ－ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ）」、または「動電的増強（ｅｌｅｃｔｒｏ－ｋｉｎｅｔｉｃ ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ）」（「ＥＰ」）とは、細胞中への生体分子（例えば、プラスミド、核酸、または薬物）の侵入を促進するための膜貫通電場（電気穿孔）パルスの使用を指す。

「可逆的電気穿孔」は、標的細胞の電場閾値より下である電気パルスを使用する、通常は細胞膜不透過性の分子に対する、細胞膜の可逆的または一時的な透過処理である。その電気パルスはその細胞の電気閾値より下であるので、その細胞は、修復し得、その電気パルスによって死滅させられない。可逆的電気穿孔は、細胞を死滅させることなく細胞中へ高分子（例えば核酸）を送達するために使用され得る。可逆的電気穿孔は、細胞中への高分子（例えば核酸）の取込みを促進するために電気パルスを適用する方法である。そうではないと示されない限りは、本明細書における電気穿孔に対する言及は、可逆的電気穿孔を含む。

「腫瘍内電気穿孔」（ＩＴ－ＥＰ）は、１またはそれ以上の核酸を腫瘍中に注射することと、少なくとも１電気穿孔パルスをその腫瘍に投与することとを含む。その１またはそれ以上の核酸は、その電気穿孔パルスを投与する前、またはその電気穿孔パルスを投与するのと実質的に同時に、注射され得る。その電気穿孔パルスは、哺乳動物対象における使用のために適切なあらゆる公知の電気穿孔デバイスを使用して、実施され得る。

「局所進行性がん」は、それが始まった器官の外側で増殖したが身体の遠隔部分へは未だ伝播していない、がんを記述するために使用される。局所進行性がんは、組織またはリンパ節付近に伝播したがんであり得る。局所進行性がんは、遠隔転移が存在しない場合に最も進行した腫瘍によって特徴付けられる。局所進行性がん（例えば乳がん）は、局所領域的再発の長期減少を提供する初期外科的アプローチの後の病理組織検査においてネガティブマージン（ｎｅｇａｔｉｖｅ ｍａｒｇｉｎ）を達成する確率に基づいて、「手術可能」または「手術不能」のいずれかであり得る。

「転移性がん」は、それが始まった身体部分（原発部位）から他の身体部位へと伝播した、がんである。

「手術可能」は、手術によって処置または除去され得るがんを記述する。

「手術不能」は、代表的には多発性腫瘍または転移の位置もしくは存在が原因で、容易には外科的に除去され得ないがんを記述する。

「第一選択療法」または「第一選択処置」は、所定の型およびステージのがんについて与えられる最初または初回の処置、処置レジメンもしくはレジメンである。それは、単独療法または一組の処置（手術の後に続く化学療法および放射線が挙げられるが、これらに限定はされない）であり得る。それはまた、一次処置または一次療法とも呼ばれる。一部の実施形態において、第一選択療法は、腫瘍の外科的切除の前にネオアジュバントとして対象に投与される。

「第二選択療法」または「第二選択処置」は、所定の型およびステージのがんについての２番目または次回の処置、処置レジメンもしくはレジメンである。。それは、単独療法または一組の処置であり得る。一部の実施形態において、第二選択療法は、対象が第一選択療法に十分に反応し損なったかまたは第一選択療法にもはや反応しない後に、対象に投与される。

「ネオアジュバント」は、主要な処置（これは通常は手術である）が与えられる前に腫瘍を収縮するための最初のステップとして与えられる処置である。

（Ｂ．がんを処置するための方法）
がんを処置するための方法が、記載される。記載される方法は、対象における１もしくはそれ以上の腫瘍の大きさを減少するため、対象におけるがん細胞の増殖を阻害するため、転移を阻害もしくは減少するため、対象における新たな腫瘍もしくは転移の発達を減少もしくは阻害するため、および／またはがんに罹患している対象におけるがんの再発を減少するために、使用され得る。

療法は、対象を免疫賦活性サイトカイン、免疫チェックポイント阻害薬、および化学療法薬で処置して達成される。その免疫賦活性サイトカイン（例えばＩＬ－１２）は、その免疫賦活性サイトカインをコードする核酸発現ベクターの腫瘍内電気穿孔によって、その対象における腫瘍に投与される。その免疫チェックポイント阻害薬および化学療法薬は、その対象に、その免疫チェックポイント阻害薬および化学療法薬についての製品表示に従って（例えば全身に）、投与され得る。免疫チェックポイント阻害薬療法および化学療法は、その免疫賦活性サイトカインをコードする発現ベクターの電気穿孔による腫瘍内送達の前、その途中、またはその後に、生じ得る。

一部の実施形態において、それらの方法は、
ａ）少なくとも１つの免疫賦活性サイトカイン処置サイクルを対象に投与する工程であって、そのサイクルは、腫瘍に、ＩＴ－ＥＰによって、少なくとも１つの免疫賦活性サイトカインをコードする発現ベクターの治療有効量を含む組成物を投与することを含む、工程；
ｂ）少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害薬処置サイクルをその対象に投与する工程であって、そのサイクルは、その対象に、静脈内注入によって、治療有効量の免疫チェックポイント阻害薬を含む組成物を投与することを含む、工程；および
ｃ）少なくとも１つの化学療法薬処置サイクルをその対象に投与する工程であって、そのサイクルは、その対象に治療有効量の化学療法薬を含む組成物を投与することを含む、工程；
を含む。
一部の実施形態において、その免疫賦活性サイトカインはＩＬ－１２を含む。一部の実施形態において、その免疫チェックポイント阻害薬はＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体）を含む。一部の実施形態において、その化学療法薬はｎａｂ－パクリタキセルを含む。一部の実施形態において、その免疫賦活性サイトカインはＩＬ－１２を含み、その免疫チェックポイント阻害薬はＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤ－１抗体、または抗ＰＤ－Ｌ１抗体）を含み、その化学療法薬はｎａｂ－パクリタキセルを含む。

一部の実施形態において、それらの方法は、３～６週間サイクルの１日目、５日目、および８日目に、がん性腫瘍に、少なくとも１つの免疫賦活性サイトカインをコードする少なくとも１つの発現ベクターの有効用量を注射し、電気穿孔療法をその腫瘍に投与する工程を含む。一部の実施形態において、それらの方法は、６週間サイクルの１日目、５日目、および８日目に、がん性腫瘍に、少なくとも１つの免疫賦活性サイトカインをコードする少なくとも１つの発現ベクターの有効用量を注射し、電気穿孔療法をその腫瘍に投与する工程を含む。一部の実施形態において、それらの方法は、６週間サイクルの１日目、５日目、および８日目に少なくとも１サイクル、がん性腫瘍に、少なくとも１つの免疫賦活性サイトカインをコードする少なくとも１つの発現ベクターの有効用量を注射し、電気穿孔療法をその腫瘍に投与する工程を含む。一部の実施形態において、それらの方法は、６週間サイクルの１日目、５日目、および８日目に少なくとも２サイクル、がん性腫瘍に、少なくとも１つの免疫賦活性サイトカインをコードする少なくとも１つの発現ベクターの有効用量を注射し、電気穿孔療法をその腫瘍に投与する工程を含む。一部の実施形態において、それらの方法は、６週間ごとに１日目、５日目、および８日目に少なくとも２サイクル、がん性腫瘍に、少なくとも１つの免疫賦活性サイトカインをコードする少なくとも１つの発現ベクターの有効用量を注射し、電気穿孔療法をその腫瘍に投与する工程を含む。一部の実施形態において、それらの方法は、６週間ごとに１日目、５日目、および８日目に１７サイクル以上まで、がん性腫瘍に、少なくとも１つの免疫賦活性サイトカインをコードする少なくとも１つの発現ベクターの有効用量を注射し、電気穿孔療法をその腫瘍に投与する工程を含む。一部の実施形態において、それらの方法は、６週間ごとに１日目、５日目、および８日目に２年間以上まで、がん性腫瘍に、少なくとも１つの免疫賦活性サイトカインをコードする少なくとも１つの発現ベクターの有効用量を注射し、電気穿孔療法をその腫瘍に投与する工程を含む。各投与について、その投与は、示された日±２日（例えば、１日目±２日、５日目±２日、８日目±２日）に生じ得る。

一部の実施形態において、それらの方法は、３週間サイクルの１日目に、有効用量の免疫チェックポイント阻害薬を対象に投与する工程を含む。一部の実施形態において、それらの方法は、３週間サイクルの１日目に少なくとも１サイクル、有効用量の免疫チェックポイント阻害薬を対象に投与する工程を含む。一部の実施形態において、それらの方法は、３週間サイクルの１日目に少なくとも２サイクル、有効用量の免疫チェックポイント阻害薬を対象に投与する工程を含む。一部の実施形態において、それらの方法は、３週間ごとに１日目に少なくとも２サイクル、有効用量の免疫チェックポイント阻害薬を対象に投与する工程を含む。一部の実施形態において、それらの方法は、３週間ごとの１日目に３３サイクル以上まで、有効用量の免疫チェックポイント阻害薬を対象に投与する工程を含む。一部の実施形態において、それらの方法は、３週間ごとの１日目に２年間以上まで、有効用量の免疫チェックポイント阻害薬を対象に投与する工程を含む。各投与について、その投与は、示された日±２日（例えば、１日目±２日）に生じ得る。

一部の実施形態において、それらの方法は、４週間サイクルの１日目、８日目、および１５日目に、有効用量の化学療法薬を対象に投与する工程を含む。一部の実施形態において、それらの方法は、４週間サイクルの１日目、８日目、および１５日目に少なくとも１サイクル、有効用量の化学療法薬を対象に投与する工程を含む。一部の実施形態において、それらの方法は、４週間サイクルの１日目、８日目、および１５日目に少なくとも２サイクル、有効用量の化学療法薬を対象に投与する工程を含む。一部の実施形態において、それらの方法は、４週間ごとの１日目、８日目、および１５日目に少なくとも２サイクル、有効用量の化学療法薬を対象に投与する工程を含む。一部の実施形態において、それらの方法は、４週間サイクルごとの１日目、８日目、および１５日目に２５サイクル以上まで、有効用量の化学療法薬を対象に投与する工程を含む。一部の実施形態において、それらの方法は、４週間ごとの１日目、８日目、および１５日目に２年間以上まで、有効用量の化学療法薬を対象に投与する工程を含む。各投与について、その投与は、示された日±２日（例えば、１日目±２日、８日目±２日、１５日目±２日）に生じ得る。

一部の実施形態において、その免疫賦活性サイトカインと、免疫チェックポイント阻害薬と、化学療法薬とは、患者に、初回サイクルの同じ日に投与され、すなわち、その初回サイクルの１日目は、各サイクルについて同じ日である。

一部の実施形態において、免疫賦活性サイトカインと、チェックポイント阻害薬と、化学療法薬とは、対象に、１日目に投与される。その後、その免疫賦活性サイトカインは５日目および８日目にまた投与され、化学療法薬は８日目および１５日目にまた投与される。その免疫賦活性サイトカインは、６週間ごとに１日目、５日目、および８日目に投与され、そのチェックポイント阻害薬は、３週間ごとに１日目に投与され、その化学療法薬は、４週間ごとに１日目、８日目、および１５日目に投与される。

一部の実施形態において、その免疫賦活性サイトカインは、６週間ごとに１日目、５日目、および８日目に投与され、そのチェックポイント阻害薬は、３週間ごとに１日目に投与され、その化学療法薬は、その化学療法薬についての標準治療に従って投与される。

記載される方法は、多数の型の悪性腫瘍（すなわち、がん）における使用のために意図される。例えば、本明細書において記載されるデバイスおよび方法は、以下における使用のために意図される：副腎皮質がん、肛門がん、胆管がん（例えば、末梢型（ｐｅｒｉｐｈｉｌａｒ）がん、遠位胆管がん、肝内胆管がん）、膀胱がん、良性骨がんおよびがん性骨がん（例えば、骨腫、類骨腫、骨芽細胞腫、骨軟骨腫（ｏｓｔｅｏｃｈｒｏｎｄｒｏｍａ）、血管腫、軟骨粘液線維腫、骨肉腫、軟骨肉腫、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、骨巨細胞腫、脊索腫、リンパ腫、多発性骨髄腫）、脳および中枢神経系のがん（例えば、髄膜腫、星細胞腫（ａｓｔｏｃｙｔｏｍａ）、乏突起神経膠腫、上衣腫、神経膠腫、髄芽腫、神経節膠腫、シュワン細胞腫、胚細胞腫、頭蓋咽頭腫）、乳がん（例えば、非浸潤性乳管癌、浸潤性乳管癌、浸潤性小葉癌、非浸潤性小葉癌、女性化乳房）、キャッスルマン病（例えば、巨大リンパ節過形成、血管濾胞性リンパ節過形成）、子宮頸がん、直腸結腸がん、子宮内膜がん（例えば、子宮内膜腺癌、腺棘細胞癌（ａｄｅｎｏｃａｎｔｈｏｍａ）、漿液性乳頭状腺癌、明細胞）、食道がん、胆嚢がん（粘液性腺癌、小細胞がん）、消化管カルチノイド腫瘍（例えば、絨毛癌、破壊性絨毛腺腫）、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、カポジ肉腫、腎がん（例えば、腎細胞がん）、喉頭および下咽頭のがん、肝がん（例えば、血管腫、肝腺腫、限局性結節性過形成、肝細胞癌）、肺がん（例えば、小細胞肺がん、非小細胞肺がん）、中皮腫、形質細胞腫、鼻腔および副鼻腔のがん（例えば、感覚神経芽細胞腫、正中肉芽腫）、上咽頭がん、神経芽細胞腫、口腔および中咽頭のがん、卵巣がん、膵がん、陰茎がん、下垂体がん、前立腺がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫（例えば、胎児性横紋筋肉腫、胞巣状横紋筋肉腫、多形性横紋筋肉腫）、唾液腺がん、皮膚がん、黒色腫および非黒色腫皮膚がんの両方）、胃がん、精巣がん（例えば、セミノーマ、非セミノーマ胚細胞がん）、胸腺がん、甲状腺がん（例えば、濾胞状癌、未分化癌、低分化癌、甲状腺髄様癌、甲状腺リンパ腫）、腟がん、外陰がん、ならびに子宮がん（例えば、子宮平滑筋肉腫）。一部の実施形態において、それらの方法は、トリプルネガティブ乳がんを処置することにおける使用のために意図される。一部の実施形態において、それらの方法は、黒色腫を処置することにおける使用のために意図される。

処置される腫瘍は、皮膚腫瘍、皮下腫瘍、または内蔵腫瘍であり得る。一部の実施形態において、記載される方法および発現ベクターは、原発腫瘍ならびに遠隔（すなわち未処置の）腫瘍および転移を処置するために使用され得る。

そのがんは、ステージ０（上皮内（ｉｎ ｓｉｔｕ））、ステージＩ、ステージＩＩ、ステージＩＩＩ、またはステージＩＶであり得る。そのがんは、手術可能または手術不能であり得る。そのがんは、局所進行性がん（ステージＩＩもしくはＩＩＩ）または転移性（ステージＩＶ）であり得る。そのがんは、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、黒色腫、頭頸部がん、扁平上皮癌、基底細胞癌、およびメルケル細胞癌であり得るが、これらに限定はされない。一部の実施形態において、そのがんは手術可能である。一部の実施形態において、そのがんは手術不能である。一部の実施形態において、そのがんは、手術不能な局所進行性または転移性のがんである。

ステージ０（上皮内（ｉｎ ｓｉｔｕ））のがんは、それらが始まった場所（上皮内（ｉｎ ｓｉｔｕ））に依然として位置し、付近の組織に伝播していない。

ステージＩのがんは、付近の組織中へ深くは増殖していない、通常は小さいがんまたは腫瘍である。それはまた、リンパ節にも他の身体部分にも伝播していない。それは、しばしば初期がんと呼ばれる。

ステージＩＩのがんは、ステージＩよりも大きいが、他の位置には伝播していない。

ステージＩＩＩのがんは、付近の組織中へより深く増殖した、より大きながんまたは腫瘍である。それらはまた、リンパ節に伝播したが他の身体部分には伝播していない状態であり得る。

ステージＩＶのがんは、元の腫瘍を越えて身体の他の器官または部分に伝播した状態である。それはまた、進行性がんまたは転移性がんと呼ばれ得る。

がんはまた、主要な（元の）腫瘍の大きさおよび程度（Ｔ）、そのがんが伝播したリンパ節の数（Ｎ）、ならびに転移の程度（Ｍ）に従うＴＮＭシステムに従って、ステージ分類され得る。Ｔ、Ｎ、およびＭの各々は、数を割り当てられ得る：Ｔ０～Ｔ６、Ｎ０～Ｎｘ（例えば、ｘ＝１、２、３）、およびＭ０～Ｍ１。Ｔｘ、Ｎｘ、またはＭｘは、その腫瘍または転移が測定され得ないことを示す。

対象における腫瘍の処置のための方法が記載され、その方法は、その対象に、免疫賦活性サイトカイン（例えば、ＩＬ－１２）をコードする発現ベクターの有効用量を投与する工程を含む。その免疫賦活性サイトカインをコードする発現ベクターは、その発現ベクターをその腫瘍、腫瘍微小環境、および／または腫瘍周辺組織に注射し、電気穿孔療法をその腫瘍、腫瘍微小環境、および／または腫瘍周辺組織に投与すること（ＩＴ－ＥＰ処置）によって、その対象に投与される。

ＩＴ－ＥＰ免疫賦活性サイトカイン療法またはＩＴ－ＥＰ免疫賦活性サイトカイン処置は、腫瘍、腫瘍微小環境、および／または腫瘍周辺組織に、免疫賦活性サイトカインをコードする発現ベクターの有効用量を注射すること、および少なくとも１電気穿孔パルスをその腫瘍に投与することを含む。電気穿孔は、ＩＬ－１２プラスミド注射の１０分間以内、８分間以内、５分間以内、４分間以内、３分間以内、２分間以内、または１分間以内に投与される。その電気穿孔パルスは、哺乳動物対象における使用のために適切なあらゆる公知の電気穿孔デバイスを使用して、実施され得る。一部の実施形態において、その電気穿孔デバイスは、約０．５～約１．０ｃｍ直径の環状構成で６本の針を含む。その電気穿孔デバイスの針は、プラスミドが注射される部位の中または周辺に配置される。ＩＴ－ＥＰ免疫賦活性サイトカイン療法は、腫瘍微小環境におけるその免疫賦活性サイトカインの局所的発現を生じる。

一部の実施形態において、個別の腫瘍各々は、次の腫瘍に注射および電気穿孔する前に、注射および電気穿孔される。病変が近接している場合、これらの病変がまず注射され得、その後にＥＰを受け得る。一部の実施形態において、対象におけるすべての腫瘍は、注射され、その後に、注射された腫瘍の電気穿孔が続く。

ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２療法 またはＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２処置は、腫瘍、腫瘍微小環境、および／または腫瘍周辺組織に、ＩＬ－１２をコードする発現ベクターの有効用量を注射すること、および少なくとも１電気穿孔パルスをその腫瘍に投与することを含む。その電気穿孔パルスは、哺乳動物対象における使用のために適切なあらゆる公知の電気穿孔デバイスを使用して、実施され得る。ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２は、腫瘍微小環境におけるＩＬ－１２の局所的発現を生じる。

ＴＮＢＣ病変におけるＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２は、腫瘍へのＴ細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）の浸潤（ＴＩＬ）を増加すると予期される。腫瘍微小環境内におけるＴＩＬの増加は、無病生存期間の改善および全生存期間の改善と関連付けられている。腫瘍におけるＩＬ－１２の発現はまた、その腫瘍に対する細胞媒介性免疫応答を、例えば、ナチュラルキラー細胞および細胞傷害性ＴＩＬの活性化、制御性Ｔ細胞および骨髄由来免疫抑制細胞の阻害（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ ＭＬら（１９８９）、「Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌ ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｆａｃｔｏｒ （ＮＫＳＦ），ａ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｗｉｔｈ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｂｉｏｌｏｇｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｈｕｍａｎ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ」、Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ １７０（３）：８２７～８４５；Ｂｒｕｎｄａ ＭＪら（１９９３）、「Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ａｎｄ ａｎｔｉｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ １２ ａｇａｉｎｓｔ ｍｕｒｉｎｅ ｔｕｍｏｒｓ」、Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ １７８（４）：１２２３～１２３０；Ｓｔｅｄｉｎｇ ＣＥら（２０１１）、「Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１２ ｏｎ ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ ｍｙｅｌｏｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｃｅｌｌｓ，ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｏｖｅｒａｌｌ ｓｕｒｖｉｖａｌ ａｎｄ ｒｅｄｕｃｉｎｇ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ」、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １３３（２）：２１～２３８）、インターフェロンγ（ＩＦＮｙ）産生の誘導、ならびに腫瘍内における抗原プロセシングおよび提示機構のアップレギュレーションを介して、増加する。ＩＬ－１２の局所発現は、高レベルの全身ＩＬ－１２をもたらさず、その結果、ＩＬ－１２の全身投与に関連する毒性を回避する。ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２は、癌を処置することにおけるチェックポイント阻害薬療法に対する臨床反応を増強することが示されている。

ＩＬ－１２は、ＩＬ－１２Ａ（ｐ３５）サブユニットおよびＩＬ－１２Ｂ（ｐ４０）サブユニットの両方を有するヘテロ二量体サイトカインである。ＩＬ－１２をコードする発現ベクターは、ＩＬ－１２ ｐ４０－ＩＬ－１２ ｐ３５融合タンパク質（ＩＬ－１２ ｐ７０）をコードする核酸配列、ＩＬ－１２ ｐ３５－ＩＬ－１２ ｐ４０融合タンパク質（ＩＬ－１２ ｐ７０）をコードする核酸配列、またはＩＬ－１２ ｐ３５サブユニットおよびＩＬ－１２ ｐ４０サブユニットを含み得る。そのＩＬ－１２ ｐ３５サブユニットをコードする核酸配列およびＩＬ－１２ ｐ４０サブユニットをコードする核酸配列は、翻訳修飾エレメントによって隔てられた連続した核酸配列であり得、両方のサブユニットが単一のプロモーターからまたは単一のｍＲＮＡで発現されることを可能にする。その翻訳修飾エレメントは、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）エレメントまたはリボソームスキッピングモジュレーターであり得る。リボソームスキッピングモジュレーターは、２Ａエレメント（２Ａペプチドまたは２Ａ自己切断ペプチドとも呼ばれる）であり得るが、これらに限定はされない。その２Ａエレメントは、Ｐ２Ａエレメント、Ｔ２Ａエレメント、Ｅ２ＡエレメントまたはＦ２Ａエレメントであり得るが、これらに限定はされない。そのＩＬ－１２ ｐ３５コード配列およびＩＬ－１２ ｐ４０コード配列は、マルチシストロン性発現ベクターから単一のプロモーターから発現され得、ＩＲＥＳエレメントまたは２Ａエレメントによって隔てられ得る。

発現ベクターまたは発現プラスミドは、マルチシストロン性発現ベクターを含み得る。マルチシストロン性発現ベクターは、２以上の別個のタンパク質を同じｍＲＮＡから発現し、１またはそれ以上の翻訳修飾エレメントを含む。一部の実施形態において、ＩＬ－１２をコードする発現ベクターは、単一のプロモーターから発現される２つまたは３つのポリペプチドを発現し、それらの２つまたは３つのポリペプチドが単一のｍＲＮＡから発現されるのを可能にする１またはそれ以上の翻訳修飾エレメントを含む。一部の実施形態において、その発現ベクターは、
（ｃ）Ｐ－Ａ－Ｔ^１－Ａ’
（ａ）Ｐ－Ａ－Ｔ^１－Ｂ、
（ｂ）Ｐ－Ｂ－Ｔ^１－Ａ、
（ｄ）Ｐ－Ａ－Ｔ^１－Ａ’－Ｔ^２－Ｂまたは
（ｅ）Ｐ－Ｂ－Ｔ^１－Ａ－Ｔ^２－Ａ’
を含み、Ｐはプロモーターであり、ＡおよびＡ’はＩＬ－１２またはＩＬ－１２サブユニットをコードし、Ｔ^１およびＴ^２は両方とも翻訳修飾エレメントであり、Ｂは第２の治療ポリペプチドをコードする。その第２の治療ポリペプチドは、チェックポイント阻害薬、遺伝子アジュバント、腫瘍抗原、抗ＣＤ３抗体もしくはそのフラグメント、第２の免疫賦活性サイトカイン（例えば、ＣＸＣＬ９）、またはそれらの組合せであり得るが、これらに限定はされない。一部の実施形態において、Ｔ^１およびＴ^２は、翻訳修飾エレメント、独立して配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）エレメントまたはリボソームスキッピングモジュレーターである。翻訳修飾エレメントは、単一の転写物からの２以上の遺伝子の翻訳を可能にする。ＩＲＥＳエレメントは、ｍＲＮＡの内部領域からの翻訳の開始を提供する。リボソームスキッピングモジュレーターは、そのリボソームがそのエレメントのＣ末端におけるペプチド結合の合成をスキップすることを可能にする。リボソームスキッピングモジュレーターは、２Ａエレメント（２Ａペプチドまたは２Ａ自己切断ペプチドとも呼ばれる）であり得るが、これらに限定はされない。その２Ａエレメントは、Ｐ２Ａエレメント、Ｔ２Ａエレメント、Ｅ２ＡエレメントまたはＦ２Ａエレメントであり得るが、これらに限定はされない。翻訳修飾エレメントの組込みは、単一のポリシストロン性ｍＲＮＡからの２以上のポリペプチドの共発現を生じる。

一部の実施形態において、そのＩＬ－１２発現ベクター構築物は、Ｐ－Ａ－Ｔ－Ａ’によって示される式を含み、その式において、ａ）Ｐは発現プロモーターであり、ｂ）ＡおよびＡ’はＩＬ－１２のサブユニットをコードし、ｃ）Ｔは翻訳修飾エレメントである。特定の実施形態において、Ｐは、ヒトＣＭＶプロモーター、サルＣＭＶプロモーター、ＳＶ－４０、ｍＰＧＫ、およびβアクチンからなる群より選択され；ＡはＩＬ－１２ｐ３５をコードした；Ａ’はＩＬ－１２ｐ４０をコードした；ＴはＰ２ＡおよびＩＲＥＳからなる群より選択される。

その発現ベクターは、インビボ投与のために構成され得る。一部の実施形態において、その発現ベクターは、電気穿孔によるインビボ投与のために構成される。一部の実施形態において、その発現ベクターは、電気穿孔による腫瘍内投与（ＩＴ－ＥＰ）のために構成される。その核酸は、当該分野において公知の方法を使用して作製され得る。

一部の実施形態において、あるＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２療法サイクルは、４週間サイクルまたは６週間サイクルの１日目（±２日）；１日目（±２日）および５日目（±２日）；１日目（±２日）および８日目（±２日）；あるいは１日目（±２日）、５日目（±２日）、および８日目（±２日）、または１日目（±２日）、５日目（±２日）、および８日目（±２日）に、免疫賦活薬をコードする核酸のＩＴ－ＥＰ投与を含む。一部の実施形態において、そのサイクルは６週間サイクルである。

免疫チェックポイント阻害薬は、抗体、抗原結合フラグメント、またはナノボディの形態であり得、それらの各々は、発現ベクターにコードされて電気穿孔によって腫瘍に送達され得るか、またはタンパク質／ペプチドとして送達され得る。タンパク質／ペプチドは、全身投与され得る。その免疫チェックポイント阻害薬治療薬の投与は、免疫賦活性サイトカイン（例えばＩＬ－１２）の電気穿孔による腫瘍内送達の前、その途中、またはその後に、生じ得る。

抗体は、全長のインタクトな（ｉｎｔａｃｔ）抗体として、または多数の十分に特徴付けられたフラグメントとして、存在する。抗体フラグメントとしては、Ｆ（ａｂ）、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）２、およびｓｃＦｖ（単鎖可変領域フラグメント）が挙げられるが、これらに限定はされない。種々の抗体フラグメントが、化学的にかまたは組換えＤＮＡ技術を利用することによってかのいずれかで、新規に合成され得る。

他の免疫チェックポイント阻害薬としては、可溶性アンタゴニスト（例えば、チェックポイントタンパク質の細胞顔ドメイン）が挙げられるが、これに限定はされない。可溶性免疫チェックポイント阻害薬は、発現ベクターにコードされて電気穿孔によって腫瘍に送達され得るか、またはタンパク質／ペプチドとして全身に送達され得る。

一部の実施形態において、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害薬処置サイクルを投与することは、その免疫チェックポイント阻害薬の有効用量を３～６週間サイクルの１日目（±２日）に投与することを含む。一部の実施形態において、その免疫チェックポイント阻害薬は、３週間サイクルの１日目（±２日）に投与される。一部の実施形態において、その免疫チェックポイント阻害薬は、４週間サイクルの１日目（±２日）に投与される。一部の実施形態において、その免疫チェックポイント阻害薬は、抗ＰＤ－１抗体、もしくは抗ＰＤ－Ｌ１抗体、またはそれらの抗原結合フラグメントを含む。

ペムブロリズマブは、ヒト化イムノグロブリンＧ４（ＩｇＧ４）モノクローナル抗体（ｍＡｈ）であり、ＰＤ－１レセプターへの結合の特異性を有し、それにより、ＰＤ－Ｌ１およびプログラム死ガンド２（ＰＤ－Ｌ２）とのその相互作用を阻害する。ペムブロリズマブは、多数の適応症（切除不能ならびに／または転移性の黒色腫および非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）が挙げられる）にわたる患者の処置のために適応される。ペムブロリズマブは、その薬物製品表示に従って投与される。一部の実施形態において、ペムブロリズマブは、３週間サイクルの各々の１日目（±２日）に、３０分間（－５／＋１０分間）の静脈内（ＩＶ）注入を使用して約２００ｍｇの用量で静脈内（ＩＶ）投与される。任意の所定のサイクルにおいて、その注射のうちの１またはそれ以上が、医学的に必要とされた場合には、保留され得るか、または別の用量で、もしくは別の日に、投与され得る。投与量を変更すること（別の用量を投与すること）は、注入を中断すること、導入速度を変更すること、注入を休止および再開すること、または注入中に別の量の薬物を投与することを含み得る。ペムブロリズマブに対する有害反応もまた、製造者の推奨（例えば、薬物製品表示）に従って処置され得る。

腫瘍におけるプログラム死ガンド１（ＰＤ－Ｌ１）の発現は、ＴＩＬの抗腫瘍活性の阻害をもたらす。従って、抗ＰＤ－１／抗ＰＤ－Ｌ１療法の投与は、ＰＤ－Ｌ１発現により媒介される免疫阻害を逆転と予期される。一部の実施形態において、対象は、腫瘍サンプルにおけるＰＤ－Ｌ１の発現についてスクリーニングされる。ＰＤ－Ｌ１を発現する対象は、抗ＰＤ－１／抗ＰＤ－Ｌ１療法に対する増加した反応を有すると予期される。マウスモデルにおける治療研究は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１相互作用を遮断する抗体の投与が、腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の浸潤を増強することを、示した。

本明細書において記載されるチェックポイント阻害薬のいずれもが、対象に投与され得る。

少なくとも１化学療法薬処置サイクルを投与することは、処置されるべき特定の型およびステージのがんを処置することにおいてその化学療法薬について一般的に受け入れられた慣行に従って（すなわち、製品表示または一般的に受け入れられた標準治療もしくは他の推奨される用量レベルに従って）、その化学療法薬を投与することを含む。一部の実施形態において、その化学療法薬は、その認知された投与経路および／または投薬量レベルに従って、投与される。臨床的に適切な用量の化学療法薬が、適用可能な場合には、使用される。例えば、一部の薬物に関して、その化学療法薬は、あるサイクルの最初の日にだけ与えられる。他の化学療法薬は、数日間連続してか、または一週間に１回、与えられる。あるサイクルの最後に、その化学療法薬処置は、次のサイクルを開始するために反復される。その化学療法薬は、例えば、静脈内注射、静脈内注入、筋肉内注射、経口投与（例えば、丸薬またはカプセルまたは液体による）によって、投与され得る。

そのがんがＴＮＢＣである場合、その化学療法薬は、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ペグ化リポソームドキソルビシン、エピルビシン）、シクロホスファミド、アルキル化薬（例えば、チオテパ）、タキサン（例えば、ドセタキセル、パクリタキセル、ｎａｂ－パクリタキセル）、ヌクレオチドアナログもしくは代謝拮抗薬（例えば、フルオロウラシル（５－ＦＵ）、ゲムシタビン、メトトレキサート、カペシタビン）、微小管阻害薬（例えば、エリブリン）、白金製剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチン）、ＰＩ３Ｋ阻害薬（例えば、アルペリシブ）、ポリＡＤＰリボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害薬（例えば、オラパリブ、タラゾパリブ）、シトキサン、イクサベピロン、ムタノリシン（ｍｕｔａｎｙｃｉｎ）、ビノレルビン、またはそれらの組合せであり得るが、これらに限定はされない。一部の実施形態において、そのがんは乳がんまたはＴＮＢＣであり、その化学療法薬はタキサン（例えば、パクリタキセルまたはｎａｂ－パクリタキセル）を含む。

その化学療法薬がｎａｂ－パクリタキセルである一部の実施形態において、そのｎａｂ－パクリタキセルは、投薬レジメンおよび毒性管理についての標準治療に従って、投与される。一部の実施形態において、そのｎａｂ－パクリタキセルは、４週間サイクルの１日目（±２日）、８日目（±２日）、および１５日目（±２日）に対象に投与される。「ｎａｂ－パクリタキセル」は、タンパク質結合型パクリタキセル（ナノ粒子アルブミン結合型パクリタキセル（アブラキサン）とも呼ばれる）であり、とりわけ乳がん、肺がんおよび膵がんを処置するために使用されるパクリタキセルの注射可能な製剤である。パクリタキセルは、細胞分裂中に微小管の正常な分解を防止することによって、がん細胞を死滅させる。ｎａｂ－パクリタキセルは、送達担体としてのアルブミンに結合された、パクリタキセルである。ｎａｂ－パクリタキセルは、４週間ごとの１日目、８日目、および１５日目（各々±２日）に、約１００ｍｇ／ｍ^２～約２６０ｍｇ／ｍ^２の用量で、３０分間（－５／＋１０分間）にわたって静脈内に投与され得る。一部の実施形態において、そのｎａｂ－パクリタキセルは、薬物製品表示に従って投与される。任意の所定のサイクルにおいて、その注射のうちの１またはそれ以上が、医学的に必要とされた場合には、変更され得るか、保留され得るか、または別の用量で、もしくは別の日に、投与され得る。投与量を変更すること（別の用量を投与すること）は、注入を中断すること、導入速度を変更すること、注入を休止および再開すること、または注入中に別の量の薬物を投与することを含み得る。ｎａｂ－パクリタキセルに対する有害反応もまた、製造者の推奨（例えば、薬物製品表示）に従って処置され得る。

一部の実施形態において、その化学療法薬は、パクリタキセルであり、１週間当たり１２０ｍｇ／ｍ^２または３週間ごとの１日目に１７５ｍｇ／ｍ^２の用量として、対象に投与される。

一部の実施形態において、化学療法薬の併用が、使用され得る。種々の化学療法薬が、同じサイクルまたは別々のサイクルにおいて、使用され得る。

対象におけるがんを処置する方法が記載され、その方法は、ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２療法と免疫チェックポイント阻害薬療法と化学療法薬療法との同時サイクルを投与する工程を含む。ＩＴ－ＰＥ ＩＬ－１２療法は、その対象における１またはそれ以上の腫瘍にＩＬ－１２をコードする発現ベクターの有効用量を投与し、電気穿孔療法をその腫瘍に投与することを含む。あるＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２療法サイクルは、６週間サイクルの１日目±２日、５日目±２日、および８日目±２日に、ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２を投与することを含む。ある免疫チェックポイント阻害薬療法サイクルは、３週間サイクルの１日目±２日に、有効用量の抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体を投与することを含む。ある化学療法薬療法サイクルは、４週間サイクルの１日目±２日、８日目±２日、および１５日目±２日に、有効用量のｎａｂ－パクリタキセルまたはパクリタキセルを投与することを含む。対象の処置は、１日目に開始し得、ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２療法、免疫チェックポイント阻害薬療法、および化学療法薬療法の各々が、そのサイクルスケジュールに従って進行する。

対象におけるがんを処置する方法が記載され、その方法は、ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２療法と、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１（抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１）療法と、ｎａｂ－パクリタキセルまたはパクリタキセル療法との同時サイクルを投与する工程を含む。ＩＴ－ＰＥ ＩＬ－１２療法は、対象における１またはそれ以上の腫瘍に、ＩＬ－１２をコードする発現ベクターの有効用量を注射し、電気穿孔療法をその腫瘍に投与することを含む。あるＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２療法サイクルは、６週間サイクルの１日目±２日、５日目±２日、および８日目±２日にＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２を投与することを含む。ある抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法サイクルは、有効用量の抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体を、３週間サイクル１日目±２日に投与することを含む。その抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、セミプリマブ、シンチリマブ、トリパリマブ、またはカムレリズマブからなる群より選択され得る。あるｎａｂ－パクリタキセル／パクリタキセル療法サイクルは、有効用量のｎａｂ－パクリタキセルまたはパクリタキセルを４週間サイクルの１日目±２日、８日目±２日、および１５日目±２日に投与することを含む。対象の処置は、１日目に開始し得、ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２療法、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法、およびパクリタキセル／パクリタキセル療法の各々が、そのサイクルスケジュールに従って進行する。

ペムブロリズマブとＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２とが同じ日に投与される日に、ペムブロリズマブは、ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２の投与の前、その投与と同時、またはその投与後に投与され得る。一部の実施形態において、ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２は、ペムブロリズマブの投与の前に投与される。ｎａｂ－パクリタキセルとＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２とが同じ日に投与される日に、ｎａｂ－パクリタキセルは、ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２の投与の前、その投与と同時、またはその投与の後に投与され得る。ペムブロリズマブとｎａｂ－パクリタキセルとが同じ日に投与される日に、ペムブロリズマブは、ｎａｂ－パクリタキセルの投与の前、その投与と同時、またはその投与の後に投与され得る。

がん治験における臨床アウトカムは、固形がんの効果判定基準（Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ Ｉｎ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓ）（ＲＥＣＩＳＴ）の基準によって測定され得る。ＲＥＣＩＳＴは、腫瘍が、改善する（「奏功する」）か、同じままである（「安定する」）か、または悪化する（「進行する」）場合を規定する、ガイドラインを提供する。

すべての標的病変についての最長径（ＬＤ）の和が、ベースラインＬＤ和として使用され、標的病変における客観的腫瘍縮小効果（ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ ｔｕｍｏｒ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）を特徴付ける基準として、使用される：
ａ．完全奏功（ＣＲ）は、すべての標的病変の消失である；
ｂ．部分奏功（ＰＲ）は、標的病変のＬＤの和の少なくとも３０％の減少を示す；
ｃ．安定（Ｓｔａｂｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅ）（ＳＤ）は、ＰＲに相当する十分な収縮も進行（ＰＤ）に相当する十分な増大もない場合に、存在する；および
ｄ．進行（Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ Ｄｉｓｅａｓｅ）（ＰＤ）：標的病変のＬＤの和の少なくとも２０％増加または１もしくはそれ以上の新病変の出現。

（Ｃ．処方）
記載される発現ベクター、チェックポイント阻害薬、または化学療法薬のいずれもが、１またはそれ以上の薬学的に許容可能な賦形剤を含み得る。一部の実施形態において、１またはそれ以上の薬学的に許容可能な賦形剤（担体、キャリア、希釈剤、および／または送達ポリマーが挙げられる）が、免疫賦活性サイトカインをコードする発現ベクター、チェックポイント阻害薬、または化学療法薬に添加される。

薬学的に許容可能な賦形剤（「賦形剤」）は、薬物送達システムに意図的に含まれる、医薬品有効成分（ＡＰＩ、治療生成物；例えば、コロナウイルス抗原性ポリペプチドをコードする核酸または免疫賦活薬）以外の物質である。賦形剤は、意図される投与量では治療効果を発揮することも、発揮するように意図されることもない。賦形剤は、ａ）製造中にその薬物送達システムの処理を助けるように、ｂ）そのＡＰＩの安定性、そのＡＰＩのバイオアベイラビリティまたはそのＡＰＩの患者による許容性を保護、支持もしくは増強するように、ｃ）製品識別を補助するように、および／あるいはｄ）保存中または使用中のそのＡＰＩの全体的安全性、有効性もしくは送達の他の何らかの特性を増強するように、作用し得る。薬学的に許容可能な賦形剤は、不活性物質であってもよく、または不活性物質ではなくてもよい。

賦形剤としては、以下が挙げられるが、これらに限定はされない：トランスフェクションを増強する作用物質、吸収促進剤、流動化助剤（ａｎｔｉ－ａｄｈｅｒｅｎｔ）、消泡剤、抗酸化剤、結合剤、緩衝剤、キャリア、コーディング剤、着色剤（ｃｏｌｏｒ）、送達促進剤、送達ポリマー、デキストラン、デキストロース、希釈剤、崩壊剤、乳化剤、増量剤、充填剤、矯味矯臭剤、流動化剤（ｇｌｉｄａｎｔ）、保湿剤、滑沢剤、油、ポリマー、保存剤、生理食塩水、塩、溶剤、糖、懸濁剤、徐放性マトリックス、増粘剤、等張化剤、担体、撥水剤、および湿潤剤。トランスフェクションを増強する作用物質としては、脂質、カチオン性脂質、脂質、ポリカチオン、細胞透過性ペプチド、およびそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定はされない。

発現ベクター、チェックポイント阻害薬、または化学療法薬は、薬学的組成物において一般的に見出される他のさらなる成分を含み得る。そのようなさらなる成分としては、鎮痒薬、収斂薬、局所麻酔薬、または抗炎症薬（例えば、抗ヒスタミン薬、ジフェンヒドラミンなど）が挙げられ得るが、これらに限定はされない。本明細書において使用される場合、「薬理学的有効量」、「治療有効量」、または単に「有効用量」とは、意図される薬理学的結果、治療結果、または予防的結果を生じる記載された核酸の量を指す。

（Ｄ．電気穿孔）
記載される免疫賦活性サイトカインをコードする発現ベクターは、電気穿孔によって送達され得る。電気穿孔は、少なくとも１電気穿孔パルスを細胞、組織または腫瘍に投与することを含む。電気穿孔（ＥＰ）は、電気パルスを適用して細胞膜を一時的に透過性にし、細胞中への高分子（例えば核酸）の取込みを促進する技術である。インビボＥＰは、ＤＮＡワクチンおよび薬物を種々の組織に送達するために、いくつかの臨床試験において使用されてきた（Ｄｒａｇｈｉａ－Ａｋｌｉ Ｒら、「Ｇｅｎｅ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｔｈｅｒａｐｙ：Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ」、２００９）。電気穿孔は、遺伝子送達を劇的に改善することが示されてきた（１００～１０００倍；Ｓａｒｄｅｓａｉら、「Ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ＤＮＡ Ｖａｃｃｉｎｅｓ： Ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ ｆｏｒ Ｓｕｃｃｅｓｓ」、Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２０１１年６月、２３（３）：４２１～４２９；Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ ＢＤら、「Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｏｆ ａ ｌｉｃｅｎｓｅｄ ａｎｔｈｒａｘ ｖａｃｃｉｎｅ ｖｅｒｓｕｓ ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ ｂａｓｅｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ａ ＰＡ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ＤＮＡ ｖａｃｃｉｎｅ ｉｎ ｒｈｅｓｕｓ ｍａｃａｑｕｅｓ」、Ｖａｃｃｉｎｅ、２０１０、２８（４）：１０５６～６１）。インビボ電気穿孔は、種々の多くの組織へのプラスミドＤＮＡの効率的送達のために首尾良く使用されてきた遺伝子送達技術である。インビボ電気穿孔の使用は、腫瘍組織におけるプラスミドＤＮＡ取込みを増強し、その腫瘍内における発現をもたらす。記載される発現ベクターは、その電気パルスの投与の前、その途中、またはその後に、対象に投与され得る。その発現ベクターは、対象における腫瘍にかまたはその腫瘍付近に、投与され得る。記載される発現ベクターは、皮下針を使用して腫瘍中に注射され得る。

電気穿孔は、哺乳動物対象における使用のために適切なあらゆる公知の電気穿孔デバイスを使用して、実施され得る。記載される化合物、組成物、および方法とともに使用するために適切な電気穿孔デバイスとしては、米国特許第７２４５９６３号、同第５４３９４４０号、同第６０５５４５３号、同第６００９３４７号、同第９０２０６０５号、および同第９０３７２３０号、ならびに米国特許出願公開第２００５／００５２６３０号、同第２０１９／０１１７９６４号、同第２０２０／０２４６６１２号ならびに特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０３０４３７（それらの各々が本明細書において参考として援用される）において記載される電気穿孔デバイスが挙げられるが、これらに限定はされない。

一部の実施形態において、電気穿孔は、１またはそれ以上の電圧パルスの投与を含む。発生されるべき電場の性質は、組織の性質、選択される組織の大きさおよびその位置によって決定される。腫瘍に送達され得る電圧パルスは、約３００Ｖ／ｃｍ～約１５００Ｖ／ｃｍであり得る。一部の実施形態において、その電圧パルスは約７００Ｖ／ｃｍ～１５００Ｖ／ｃｍである。一部の実施形態において、その電圧パルスは約１３００Ｖ／ｃｍ～１５００Ｖ／ｃｍである。一部の実施形態において、その電圧パルスは約１５００Ｖ／ｃｍである。一部の実施形態において、その電圧パルスは、約６００Ｖ／ｃｍ、６５０Ｖ／ｃｍ、７００Ｖ／ｃｍ、７５０Ｖ／ｃｍ、８００Ｖ／ｃｍ、８５０Ｖ／ｃｍ、９００Ｖ／ｃｍ、９５０Ｖ／ｃｍ、１０００Ｖ／ｃｍ、１０５０Ｖ／ｃｍ、１１００Ｖ／ｃｍ、１１５０Ｖ／ｃｍ、１２００Ｖ／ｃｍ、１２５０Ｖ／ｃｍ、１３００Ｖ／ｃｍ、１３５０Ｖ／ｃｍ、１４００Ｖ／ｃｍ、１４５０Ｖ／ｃｍ、または１５００Ｖ／ｃｍであり得る。一部の実施形態において、その電圧パルスは約３００Ｖ／ｃｍ～７００Ｖ／ｃｍである。一部の実施形態において、その電気（ｅｌｅｃｔｒｉｃ）は、約１００Ｖ／ｃｍ、１５０Ｖ／ｃｍ、２００Ｖ／ｃｍ、２５０Ｖ／ｃｍ、３００Ｖ／ｃｍ、３５０Ｖ／ｃｍ、または４００Ｖ／ｃｍ、４５０Ｖ／ｃｍ、５００Ｖ／ｃｍ、５５０Ｖ／ｃｍ、６００Ｖ／ｃｍ ６５０Ｖ／ｃｍ、または７００Ｖ／ｃｍである。

電気穿孔パルスのパルス持続時間は、約１０マイクロ秒～約１秒であり得る。一部の実施形態において、そのパルス持続時間は約１０マイクロ秒～約１００ミリ秒（ｍｓ）である。一部の実施形態において、そのパルス持続時間は、１００マイクロ秒、１ｍｓ、１０ｍｓ、または１００ｍｓである。パルスのセット間の間隔は、望ましい任意の時間（例えば、１秒）であり得る。波形、電場強度およびパルス持続時間はまた、細胞の型、および電気穿孔を介してその細胞に侵入することになっている分子の型にも依存し得る。

パルス発生装置によって提供される電気シグナルの波形は、指数関数的減衰波、方形波、ユニポーラ振動パルス列、バイポーラ振動パルス列、またはこれらの波形のいずれかの組合せであり得る。方形波電気穿孔システムは、所定電圧へ急速に上昇し、所定時間（パルス長）の間はそのレベルに留まり、その後急速に低下して０になる、制御された電気パルスを送達する。

１～１００パルスが、投与され得る。一部の実施形態において、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０パルスが、投与される。一部の実施形態において、６パルスが投与される。一部の実施形態において、６回の０．１ミリ秒パルスが投与される。一部の実施形態において、６パルスが投与される。一部の実施形態において、６回の０．１ミリ秒パルスが、１３００～１５００Ｖ／ｃｍで投与される。一部の実施形態において、８パルスが投与される。一部の実施形態において、８回の１０ミリ秒パルスが投与される。一部の実施形態において、８回の１０ミリ秒パルスが、３００～５００Ｖ／ｃｍで投与される。

任意の所定のサイクルにおいて、その注射のうちの１またはそれ以上が、医学的に必要とされた場合には、保留され得るか、または別の用量で、もしくは別の日に、投与され得る。

電気穿孔デバイスは、単一針電極、一対の針電極、または複数もしくはアレイ状の針電極を含み得る。一部の実施形態において、その電気穿孔デバイスは、皮下針または同等物を含む。一部の実施形態において、その電気穿孔デバイスは、使用者によるそのパルスパラメータの制御および入力に基づいて、アレイ状の電極間で一連のプログラム可能な定電流パルスパターンを発生可能である、動電的デバイス（「ＥＫＤデバイス」）を含み得る。一部の実施形態において、そのＥＰアプリケータは、その電極が核酸注射部位に及ぶように挿入される。

一部の実施形態において、その電気穿孔（ＥＰ）デバイスシステムは、３つの主要構成成分：
（ａ）電気パルスを発生する、電気穿孔発生装置、
（ｂ）針アレイを含む、滅菌アプリケータチップ、および
（ｃ）その電気穿孔発生装置に近位端で接続し、そのアプリケータチップに遠位端で接続する、アプリケータハンドル
からなる。

アプリケータチップは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上の針（電極）を含み得る。一部の実施形態において、そのアプリケータチップは、環の直径０．５～１ｃｍである環状アレイ状に６本の針を含む。その針の長さは、０．５～２ｃｍであり得る。そのアプリケータチップは、挿入可能な可変長の針を、それらの針が挿入深度０～２ｃｍに調整され得るように、含み得る。一部の実施形態において、それらの針は、１．５ｃｍ長であり、挿入深度０．１～１．５ｃｍに調整され得る。

電気穿孔デバイスは、フットスイッチによってその電気穿孔パルスを送達するように始動（作動）され得る。その電気穿孔発生装置は、制御された電気パルスを方形波パルスパターンで送達し得る。６針アプリケータチップについて、その電気穿孔パルスは、その環状配置に対して対向する針間で生じる。その電気穿孔デバイスは、第１の対向する針の対の間で第１のパルスを投与し得、それに続いて、同じ対向する針の対の間で反対の極性の第２のパルスを投与し得る。その後、その電気穿孔デバイスは、第２の対向する針の対（その第２の対は第１の対とは異なる）の間で第３のパルスを送達し得、その第２の針の対の間で反対の極性の第４のパルスを送達し得る。２パルス（各極性１つ）が、すべての針の対に２パルスが送達されるまで、対向する針の対の間で投与される。従って、６針アプリケータチップについて、２パルスが、対向する電極対各々に合計６パルス送達される。２針電極について、パルスまたは反対の極性が、望ましい数のパルスが到達するまで、送達される。一部の実施形態において、任意の数のパルスが処置において使用され得る。一部の実施形態において、６パルスが使用される。一部の実施形態において、８パルスが使用される。一部の実施形態において、１０パルスが使用される。

（Ｅ．キット）
記載される発現ベクター、チェックポイント阻害薬、および／または化学療法薬のいずれもが、キット、容器、パック、またはディスペンサー中に包装され得るかまたは含まれ得る。そのキット、容器、パック、またはディスペンサーは、単一有効用量または複数有効用量を提供するために十分な量の発現ベクター、チェックポイント阻害薬、および／または化学療法薬を含み得る。記載される発現ベクター、チェックポイント阻害薬、および／または化学療法薬のいずれもが、予め充填されたシリンジまたはバイアル中に包装され得る。その発現ベクター、チェックポイント阻害薬、および／または化学療法薬は、凍結乾燥粉末として提供され得るか、またはそれらは、溶液中で提供され得る。キットは、本明細書において開示される方法を実施する際に利用される試薬を含み得る。キットは、電気穿孔アプリケータもまた含み得る。一部の実施形態において、そのキットは、免疫賦活性サイトカインをコードする発現ベクターと、電気穿孔デバイスまたは電気穿孔アプリケータを含む。一部の実施形態において、そのキットは、１またはそれ以上の記載される発現ベクター、１またはそれ以上の電気穿孔アプリケータ、シリンジ、および注射針を含む。一部の実施形態において、キットは、使用指示書、または製品の製造、使用もしくは販売を規制する政府当局により規定された形式の告知書のうちの１またはそれ以上をさらに含む。

（実施例）
（実施例１．ＩＬ－１２をコードするプラスミド）
Ａ．ＩＬ－１２：
ＩＬ－１２ ｃＤＮＡを発現するＤＮＡプラスミドベクター（ｐＵＭＶＣ３－ｈＩＬ－１２－ＮＧＶＬ３３１、「ｐＩＬ－１２」、「ＩＬ－１２プラスミド」、「ＴＡＶＯ」、または「Ｔａｖｏｋｉｎｏｇｅｎｅ Ｔｅｌｓｅｐｌａｓｍｉｄ」とも呼ばれる）は、単一のＣＭＶプロモーターによって駆動される配列内リボソーム進入部位によって隔てられたヒトＩＬ－１２ ｐ３５サブユニットおよびヒトＩＬ－１２ ｐ４０サブユニットを含んだ。ｐＩＬ－１２を、直接的腫瘍内注射とその後のインビボＥＰのために、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に処方した。ＧＭＰグレードのｐＩＬ－１２がＶＧＸＩ ＵＳＡによって製造され、利用可能なバッチが、濃度０．５ｍｇ／ｍｌおよび充填容積１．５ｍｌで２．０ｍｌバイアルとして供給された。ｐＩＬ－１２の未開封バイアルを、薬局または他の適切な安全な場所にある、安全で継続的に温度をモニターされ警報装置付きである冷凍庫において、－２０℃±５℃にて保存した。

Ｂ．ＩＬ－１２ Ｐ２Ａ：
ｐＵＭＶＣ３バックボーンを、Ａｌｄｅｖｒｏｎ（Ｆａｒｇｏ、ＮＤ）から購入した。ｈＩＬ１２ｐ４０（Ｐ２Ａ－ｈＩＬ１２ｐ４０）にインフレームで連結された翻訳修飾エレメントＰ２Ａをコードする１０７１ｂｐのＤＮＡフラグメント（遺伝子ブロック）を、ＩＤＴ（Ｃｏｒａｌｖｉｌｌｅ、ＩＡ）から購入した。そのｐ４０遺伝子ブロックを、Ｐｈｕｓｉｏｎポリメラーゼ（ＮＥＢ、Ｉｐｓｗｉｃｈ ＭＡ、カタログ番号Ｍ０５３０Ｓ）を使用してＰＣＲ増幅し、標準的制限酵素対形成およびＴ４ ＤＮＡリガーゼ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ、カタログ番号１５２２４－０１７）を使用して、ＣＭＶプロモーター／エンハンサーの下流でｐＵＭＶＣ３中に連結した。Ｐ２Ａ－ｈＩＬ１２ｐ４０／ｐＯＭＩ２Ａの陽性クローンを、制限酵素消化を介して同定し、ＤＮＡ配列決定によって確認した。ヒトｐ３５を、クローニングを容易にするために内部のＢａｍＨ１部位、ＢｇｌＩＩ部位およびＸｂａ１部位を除去した７８９ｂｐの遺伝子ブロックとして、ＩＤＴ（Ｃｏｒａｌｖｉｌｌｅ ＩＡ）に注文した。そのｐ３５遺伝子ブロックを、上記のとおりにＰＣＲ増幅し、ｐ４０遺伝子ブロックの上流でＰ２Ａ－ｈＩＬ１２ｐ４０／ｐＯＭＩ２Ａ中に連結した。ｈＩＬ１２ｐ３５－Ｐ２Ａ－ｐ４０／ｐＯＭＩ２Ａの陽性クローンを、制限酵素消化を介して同定し、ＤＮＡ配列決定によって確認した。ｐＩＬ－１２ Ｐ２Ａを、直接的腫瘍内注射とその後のインビボＥＰのために、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に処方する。ＧＭＰグレードのｐＩＬ－１２ Ｐ２Ａを、濃度０．５ｍｇ／ｍｌおよび充填容積１．５ｍｌで２．０ｍｌバイアルとして供給する。ｐＩＬ－１２ Ｐ２Ａの未開封バイアルを、薬局または他の安全な場所にある、安全で継続的に温度をモニターされる警報装置付き冷凍庫において、－２０℃±５℃にて保存する。

（実施例２．臨床研究）
がんの処置において化学療法を伴う静脈内ペムブロリズマブ療法と組み合わせた、プラスミドによりコードされるＩＬ－１２とそれに加えた電気穿孔（ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２）。

ＴＮＢＣは、乳がん診断のうちの１０～２０％を占める。化学療法が、アジュバント状況、ネオアジュバント状況、および転移性状況における現在の標準治療処置である。ＴＮＢＣは、併用ネオアジュバント化学療法後の３０％～４０％の範囲の病理学的完全奏功（ｐＣＲ）率によって証明されるように、化学療法に対して高度に感受性である。しかし、ＴＮＢＣは、より高い再発率を有し、不釣合な数の乳がん死に関連し、これは三種陰性パラドックスと呼ばれている。

ＴＮＢＣを有する患者は、予後における腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）の重要な役割が原因で、免疫ベースの治療法の追加から利益を受け得る。最近のデータは、炎症誘発性環境を有するＴＮＢＣ腫瘍が、ゲムシタビンおよびカルボプラチンなどの化学療法薬との関連を含む、より良いアウトカムと関連することを示唆する。少なくとも５０％のＴＩＬを有するＴＮＢＣ患者は、アントラサイクリンおよびタキサンベースのアジュバント療法で処置された場合に、より長い無病生存期間を示す（Ａｄａｍｓ Ｓら（２０１４）、「Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｔｕｍｏｒ－ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｉｎ ｔｒｉｐｌｅ－ｎｅｇａｔｉｖｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒｓ ｆｒｏｍ ｔｗｏ ｐｈａｓｅ ＩＩＩ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ａｄｊｕｖａｎｔ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｔｒｉａｌｓ：ＥＣＯＧ ２１９７ ａｎｄ ＥＣＯＧ １１９９」、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｏｎｃｏｌｏｇｙ、３２（２７）：２９５９～２９６６；Ｌｏｉ Ｓら（２０１４）、「Ｔｕｍｏｒ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ａｒｅ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｉｎ ｔｒｉｐｌｅ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ ｆｏｒ ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ ｂｅｎｅｆｉｔ ｉｎ ｅａｒｌｙ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ：ｒｅｓｕｌｔｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ＦｉｎＨＥＲ ｔｒｉａｌ」、Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｏｎｃｏｌｏｇｙ、２５（８）：１５４４～１５５０；Ｌｏｉ Ｓら（２０１５）、「Ｐｏｏｌｅｄ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ ｐａｔｉｅｎｔ ｄａｔａ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｓｔｒｏｍａｌ ｔｕｍｏｒ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｉｎ ｐｒｉｍａｒｙ ｔｒｉｐｌｅ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ－ｂａｓｅｄ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ」、３８ｔｈ Ａｎｎｕａｌ Ｓａｎ Ａｎｔｏｎｉｏ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ；２０１５年１２月８日～１２日、２０１５）。ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２を使用して、腫瘍領域において炎症誘発性環境を誘導し得る。

予備的データは、ＰＤ－１発現について選択されたＴＮＢＣ患者が、ＰＤ－Ｌ１発現について選択されていないＴＮＢＣ患者（＜１０％）のほぼ２倍の客観的抗腫瘍奏功率（１８．５％）を有する（Ｄｕａ Ｉら（２０１７）、「Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｔｒｉｐｌｅ－ｎｅｇａｔｉｖｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ：Ａ ｆｏｃｕｓ ｏｎ Ｉｍｍｕｎｅ ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、１３（４）：２０～２７）ことを示唆する。単独療法として与えられた抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１ ｍＡｂは、この集団において限定的な成功しか示さず、有効であるべきＣＤ８＋ ＴＩＬおよび／またはＰＤ－Ｌ１発現によって特徴付けられる免疫原性腫瘍を必要とするように見える。

ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２は、炎症誘発性サイトカインＩＬ－１２の腫瘍内発現を引き起こし、低免疫原性／低Ｔ細胞浸潤性腫瘍から高炎症性の免疫学的に活性な病変への変換を、循環ＩＬ－１２レベルを顕著に増加することなく可能にする。進行性皮膚悪性疾患（例えば黒色腫）を有する患者において、ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２は、処置病変および未処置病変の両方の退縮をもたらすと同時に、非常に好都合な安全性プロファイルを示す。さらに、臨床的証拠は、ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２／抗ＰＤ－１抗体併用療法が、免疫的に冷たい（ｃｏｌｄ）腫瘍を有する患者において継続的な客観的腫瘍縮小効果（ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ ｔｕｍｏｒ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）を提供することにおいて有効であり得る（Ａｌｇａｚｉ Ａ（２０１７）、「Ｉｍｍｕｎｅ ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｏｕｔｃｏｍｅｓ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｓｔａｇｅ ＩＩＩ／ＩＶ ｍｅｌａｎｏｍａ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ ａｎｄ ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ ｐｌａｓｍｉｄ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ １２ （ｐＩＬ－１２）」、ＡＳＣＯ－ＳＩＴＣ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏ－Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ、ポスター発表）ことを示唆する。

ＴＮＢＣ患者を、さらなる化学療法を伴う、ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２療法とそれに加えたチェックポイント阻害薬療法とで処置する。そのチェックポイント阻害薬療法は、抗ＰＤ－１／抗ＰＤ－Ｌ１抗体療法であり得るが、これに限定はされない。その抗ＰＤ－１／抗ＰＤ－Ｌ１抗体療法は、ペムブロリズマブ療法であり得るが、これに限定はされない。その化学療法は、タキサン療法（例えば、ｎａｂ－パクリタキセル）であり得るが、これに限定はされない。免疫賦活性サイトカイン療法と、免疫チェックポイント阻害薬療法と、化学療法とを併用することは、腫瘍の「炎症誘発性環境」を増大することによってＴＮＢＣ対象にとっての反応を改善すると予期され、その併用は好都合な安全性プロファイルを有する。

適格な対象は、局所進行性または転移性のＴＮＢＣについての病理学的な確定された診断を有する。その対象は、１０％未満のエストロゲン（ＥＲ）レセプターおよびプロゲステロン（ＰＲ）レセプター染色を有し、ヒト上皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２）陰性である。

コホート１：
以前に処置された手術不能な局所進行性または転移性のＴＮＢＣを有する対象を、ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２でペムブロリズマブと組み合わせて処置し、有効性を、固形がんの効果判定基準（Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓ）（ＲＥＣＩＳＴ）ｖ１．１に基づいて、調査者によって評価する客観的奏効率（ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｒａｔｅ）（ＯＲＲ）によって測定する。コホート１の対象は、少なくとも１回の事前療法を行った。

コホート２：
手術不能な局所進行性または転移性のＴＮＢＣを有する対象を、第一選択処置として、ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２でペムブロリズマブおよびｎａｂ－パクリタキセル化学療法と組み合わせて処置する。有効性を、ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１に基づいて評価するＯＲＲによって評価する。その対象は、非転移性疾患状況または手術可能疾患状況においてネオアジュバントおよびアジュバント処置を受けたことがあり得る。

奏功期間（ＤＯＲ）、ＯＲＲ、免疫ＯＲＲ（ｉＯＲＲ）、無増悪生存期間（ＰＦＳ）、免疫ＰＦＳ（ｉＰＦＳ）、病勢コントロール率（ＤＣＲ）、および全生存期間（ＯＳ）を追跡する。ＰＤ－Ｌ１陽性対象およびＰＤ－Ｌ１陰性対象における奏功をモニターする。ＰＤ－Ｌ１陰性患者は、登録集団のうちの３５～６０％であると見積もられる。

ＩＬ－１２をコードする核酸（０．５ｍｇ／ｍＬ）を、（６週間ごとの１日目、５日目、および８日目、すなわち、６週間サイクル１日目、５日目、および８日目に）、算出した病変体積のおよそ１／４の用量体積で、０．４ｃｍ^３未満の体積の病変について病変１つ当たり最小用量体積０．１ｍＬで、腫瘍内注射する。腫瘍内注射の後または腫瘍内注射と同時に、電気穿孔デバイス（アプリケータ）電極を、その注射した腫瘍中および／またはその注射した腫瘍付近に配置する。それらの電極を、核酸注射の部位および深度に共に位置付ける。一部の実施形態において、その電気穿孔デバイスは、約０．５～約１ｃｍ直径の環状アレイ状に配置した６本のステンレス鋼製針（電極）を含む。そのアプリケータを電源に接続し、場の強度約３００～約１５００ボルト／ｃｍおよびパルス幅約１００μｓ～約５ｍｓの６パルスを、約３００ミリ秒間隔で投与する。

ペムブロリズマブを、３０分間（－５分間／＋１０分間）の静脈内（ＩＶ）注入を使用して、３週間ごとの１日目（すなわち、３週間サイクルの１日目）に用量約２００ｍｇで投与する。

一部の実施形態において、そのＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２処置サイクルの１日目と、ペムブロリズマブ処置サイクルの１日目とを、同じ日に開始させる。

コホート１：
ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２を、６週間ごとの１日目、５日目、および８日目に腫瘍内注射によって投与する。その対象は、１またはそれ以上の接近可能な腫瘍（病変）においてＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２処置を受け得る。接近可能な病変としては、皮膚病変および皮下病変が挙げられる。ペムブロリズマブを、３週間ごとの１日目に静脈内投与する。ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２およびペムブロリズマブ療法を、そのＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２の６週間サイクルがペムブロリズマブの３週間サイクルと同時に進行して患者が６週間ごとの１日目にＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２とペムブロリズマブとを受けるように、同じ日に開始させる。

コホート２：
ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２を、６週間ごとの１日目、５日目、および８日目に腫瘍内注射によって投与する。その対象は、１またはそれ以上の接近可能な腫瘍（病変）においてＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２処置を受け得る。接近可能な病変としては、皮膚病変および皮下病変が挙げられる。ペムブロリズマブを、３週間ごとの１日目に静脈内投与する。ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２およびペムブロリズマブ療法を、そのＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２の６週間サイクルがペムブロリズマブの３週間サイクルと同時に進行して患者が６週間ごとの１日目にＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２とペムブロリズマブとを受けるように、同じ日に開始させる。さらに、患者に、その第一選択状況における標準治療に従って（例えば、４週間ごとの１日目、８日目、および１５日目に（２８日間））、約１００ｍｇ／ｍ^２を静脈内に）、またはその製品表示に示されるとおりに、ｎａｂ－パクリタキセル化学療法を投与する。処置を１日目に開始する場合に、患者に、ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２、ペムブロリズマブ、およびｎａｂ－パクリタキセルを投与する。

対象を、６週間サイクルの１日目、５日目、および８日目に１７サイクルまでの間、接近可能な病変へのＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２で処置し、各３週間サイクルの１日目にペムブロリズマブの３３サイクルまでの間（およそ２年間）、ＩＶペムブロリズマブ（２００ｍｇ）で処置する。コホート２について、対象を、４週間サイクルの１日目、８日目、および１５日目に２５サイクルまでの間（約２年間）、ｎａｂ－パクリタキセルでもまた処置する。

あらゆる病変に対してのＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２処置を、その病変について完全奏功が存在する場合には、中断し得る。いずれかのコホートにおける患者について接近可能な病変が存在しない場合には、ペムブロリズマブでの処置を、完全奏功（ＣＲ）が確定されるかまたはその対象に３３サイクルのペムブロリズマブを与えたかのいずれかになるまで、継続し得る。コホート２における患者について、ｎａｂ－パクリタキセルを、ＣＲが確定されるかまたは対象に２５サイクルのｎａｂ－パクリタキセルを与えたかのいずれかになるまで、調査者の判断によって継続し得る。

処置は、対象がその処置から正味の利益を得る限りは、継続し得る。正味の利益は、完全奏功、部分奏効、安定（ｓｔａｂｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ）、１もしくはそれ以上の病変の大きさの減少、腫瘍体積の正味の減少、新病変形成の欠如、または１もしくはそれ以上のがん関連症状の改善であり得るが、これらに限定はされない。

さらなる研究において、他のアンタゴニストＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法または他のチェックポイント阻害薬を、ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２およびｎａｂ－パクリタキセル投与と組み合わせて、使用し得る。

さらなる追加的研究において、他の化学療法薬を、ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２および免疫チェックポイント阻害薬療法と組み合わせて使用する。

ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２、チェックポイント阻害薬、および化学療法薬の種々の併用を使用して、他のがん（乳がん、黒色腫、頭頸部がん、扁平上皮癌、基底細胞癌、およびメルケル細胞癌が挙げられるがこれらに限定はされない）を処置し得る。

さらなる追加的研究において、免疫賦活性サイトカイン療法（例えば、ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２）、チェックポイント阻害薬療法（例えば、ペムブロリズマブ療法）、および化学療法（例えば、ｎａｂ－パクリタキセル療法）の併用を第一選択療法において使用して、乳がん、ＴＮＢＣ、黒色腫、頭頸部がん、扁平上皮癌、基底細胞癌、またはメルケル細胞癌を処置する。その化学療法は、処置すべきがんの型に基づいて選択する。

さらなる追加的研究において、免疫賦活性サイトカイン療法（例えば、ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２）、チェックポイント阻害薬療法（例えば、ペムブロリズマブ療法）、および化学療法（例えば、ｎａｂ－パクリタキセル療法）の併用を第二選択療法において使用して、乳がん、ＴＮＢＣ、黒色腫、頭頸部がん、扁平上皮癌、基底細胞癌、またはメルケル細胞癌を処置する。その化学療法は、処置すべきがんの型に基づいて選択する。

さらなる追加的研究において、免疫賦活性サイトカイン療法（例えば、ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２）、チェックポイント阻害薬療法（例えば、ペムブロリズマブ療法）、および化学療法（例えば、ｎａｂ－パクリタキセル療法）の併用を第二選択療法において使用して、乳がん、ＴＮＢＣ、黒色腫、頭頸部がん、扁平上皮癌、基底細胞癌、またはメルケル細胞癌を処置する。その化学療法は、処置すべきがんの型に基づいて選択する。

さらなる追加的研究において、免疫賦活性サイトカイン療法（例えば、ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２）、チェックポイント阻害薬療法（例えば、ペムブロリズマブ療法）、および化学療法（例えば、ｎａｂ－パクリタキセル療法）の併用を、手術可能な乳がん、ＴＮＢＣ、黒色腫、頭頸部がん、扁平上皮癌、基底細胞癌、またはメルケル細胞癌の処置においてネオアジュバント療法として使用する。その化学療法は、処置すべきがんの型に基づいて選択する。

さらなる追加的研究において、免疫賦活性サイトカイン療法（例えば、ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２）、チェックポイント阻害薬療法（例えば、ペムブロリズマブ療法）、および化学療法（例えば、ｎａｂ－パクリタキセル療法）の併用を、手術不能な乳がん、ＴＮＢＣ、黒色腫、頭頸部がん、扁平上皮癌、基底細胞癌、またはメルケル細胞癌の処置において使用する。その化学療法は、処置すべきがんの型に基づいて選択する。

この研究における処置に対する奏功を、ＲＥＣＩＳＴ委員会により提唱された国際的基準（Ｔｈｅｒａｓｓｅ Ｐら（２０００）、「Ｎｅｗ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｉｎ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｒｓ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｃａｎａｄａ」、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、９２（３）：２０５～２１６）、２００９年改訂（Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ ＥＡら（２００９）、「Ｎｅｗ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｕｒｓ：ｒｅｖｉｓｅｄ ＲＥＣＩＳＴ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ （ｖｅｒｓｉｏｎ １．１）」、Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ、４５（２）：２２８～２４７）および疾患特異的適合のための明確化（Ｓｃｈｗａｒｔｚ ＬＨら（２０１６）、「ＲＥＣＩＳＴ １．１－Ｓｔａｎｄａｒｄｉｓａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｄａｐｔａｔｉｏｎｓ：Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ＲＥＣＩＳＴ Ｗｏｒｋｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ」、Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ、６２：１３８～１４５）を使用して評価する。主要評価項目であるＯＲＲを、ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１を使用して評価する。

ｉＲＥＣＩＳＴを、ｉＲＥＣＩＳＴについて最近公開されたコンセンサスガイドライン（Ｓｅｙｍｏｕｒ Ｌら（２０１７）、「ｉＲＥＣＩＳＴ：ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ ｕｓｅ ｉｎ ｔｒｉａｌｓ ｔｅｓｔｉｎｇ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」、Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、１８（３）：ｅ１４３－ｅ１５２）に従って使用して、副次的評価項目を評価する。免疫療法薬は、悪性病変の大きさの一時的増大をもたらす免疫細胞の浸潤、または検出不能な病変が検出可能になることを生じ得る。その基準は、多くの点でＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１の基準と同じであるが、腫瘍量の増加または新病変の出現が真の腫瘍進行を反映しない場合を説明するように適合されている。

（実施例３）
手術不能な局所進行性または転移性のＴＮＢＣを有する患者において化学療法を伴う静脈内ペムブロリズマブ療法と組み合わせた、ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２の第２相マルチコホート非盲検研究。

これは、第２相マルチコホート非盲検研究である。コホート１は、 ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２とそれに加えたペムブロリズマブ療法との単一群研究である。コホート２は、ｎａｂ－パクリタキセル（アブラキサン（登録商標））化学療法を伴う、ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２とそれに加えたペムブロリズマブとの単一群研究である。

コホート１：
ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２を、１週目の１日目、５日目、および８日目とその後の６週間ごとに病変内注射によって投与する。ペムブロリズマブを、１週目の１日目とその後の３週間ごとに静脈内投与する。コホート１の対象は、手術不能な局所進行性または転移性のＴＮＢＣを以前に処置されたことがある。

コホート２：
ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２を、１週目の１日目、５日目、および８日目とその後の６週間ごとに病変内注射によって投与する。ペムブロリズマブを、１週目の１日目とその後の３週間ごとに静脈内投与する。ｎａｂ－パクリタキセル（アブラキサン（登録商標））化学療法を、第一選択状況における標準治療である１００ｍｇ／ｍ^２で静脈内に、１周目の１日目、８日目、および１５日目とその後の４週間ごとに（２８日間）、投与する。コホート２は、手術不能な局所進行性または転移性のＴＮＢＣを有する対象における第一選択処置である。

ＴＮＢＣおよびＥＰで接近可能な皮膚／皮下疾患を、この研究に登録する。適格な対象は、１０％未満のエストロゲン（ＥＲ）レセプターおよびプロゲステロン（ＰＲ）レセプター染色を有し、免疫組織化学（ＩＨＣ）０～１＋によって規定した場合にヒト上皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２）陰性である。ＩＨＣが不確かである場合には、蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）陰性またはインサイチュハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）陰性が容認できる。適格な対象は、非転移性疾患状況または手術可能な疾患状況においてネオアジュバントおよびアジュバント処置を受けたことがあり得、（ネオ）アジュバント療法の最後の投与から６か月以内に進行していないに違いない。対象を、処置の開始前にＤａｋｏ ２２Ｃ３ ＣＰＳによってＰＤ－Ｌ１についてアッセイする。

およそ６５人の対象を登録する；コホート１に２４人およびコホート２に４０人。

コホート１の適格な対象を、６週間ごとの１日目、５日目、および８日目に接近可能な病変へのＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２で、および各３週間サイクルの１日目にＩＶペムブロリズマブ（２００ｍｇ）で、ベースラインからＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２の１７サイクルおよびペムブロリズマブの３３サイクルまでの間（およそ２年間）またはその後の疾患進行まで、処置する。コホート２について、対象を、標準治療によって、認可された化学療法であるｎａｂ－パクリタキセルでもまた処置する。

１またはそれ以上の接近可能な病変（各々が０．３ｃｍ×０．３ｃｍ以上）を、処置する。ＩＴ－ＥＰについての接近可能な病変としては、その表面からＥＰ針アレイから（１．５ｃｍ深度まで）到達し得る皮膚病変または皮下病変が挙げられる。ＥＰの適用のために適切で安全な位置にある記載された接近可能な病変のみが、処置のために適格である。その接近可能な病変を、６週間処置サイクルの１日目、５日目、および８日目に処置する。

両方のコホートにおける患者について、その処置の結果として接近可能な病変が欠如した場合に、ペムブロリズマブ（コホート１）ならびにペムブロリズマブおよびｎａｂ－パクリタキセル（コホート２）での処置を、完全奏功（ＣＲ）が確定されるかまたはその対象に３３サイクルまでのペムブロリズマブおよび／または２５サイクルまでのｎａｂ－パクリタキセルを与えるかのいずれかになるまで、継続し得る。ペムブロリズマブまたはｎａｂ－パクリタキセルを継続する判断は、独立的に評価し得る。

ＩＬ－１２をコードするプラスミドを、６週間ごとの１日目、５日目、および８日目（±２日）に、１／４腫瘍体積の用量で濃度０．５ｍｇ／ｍＬにてＩＴ－ＥＰによって投与する。腫瘍体積を、以下によって決定する：１／４腫瘍体積＝［（最長径（ｃｍ））ｘ（垂直をなす直径（ｃｍ））２］／８。０．１ｃｍ３未満の病変について１／４体積で注射される病変１つ当たり最小０．１ｍＬを、投与する。１つ、１よりも多い、またはすべての接近可能な標的病変を、処置し得る。それらの病変は、皮膚病変または皮下病変であり得るが、これらに限定はされない。腫瘍内注射をそれらの病変全体にわたって供給し、より大きな病変には、必要に応じて複数回注射を与える。その腫瘍中へのＩＬ－１２プラスミド注射の直後に、０．５～１ｃｍ直径の環状アレイ状の６本の針を含む電気穿孔アプリケータを、注射部位中またはその付近に配置し、その注射の深度に近い深度まで挿入する。そのアプリケータチップを電気穿孔発生装置に接続し、その後、場の強度１５００Ｖ／ｃｍおよびパルス幅１００μｓで３００ミリ秒間隔の６パルスを、その腫瘍に送達する。いったん腫瘍を処置すれば、次の腫瘍に注射および電気穿孔する。ＩＴ－ＥＰ ＩＬ－１２は、処置過程中にあらゆる新たに提示する病変に広がらせ得る。注射の前に、その対象に、その注射部位付近に１％のリドカインを投与して、局所麻酔を獲得させ得る。その対象にはまた、処置の前または処置中に、鎮痛薬もしくは抗不安薬も与え得る。

そのＩＬ－１２プラスミドは、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）によって隔てられたヒトＩＬ－１２ ｐ３５サブユニットの遺伝子およびヒトＩＬ－１２ ｐ４０サブユニットの遺伝子を、ＣＭＶプロモーターの制御下にコードした。必要に応じて、そのＩＬ－１２プラスミドは、２Ａエレメントによって隔てられたヒトＩＬ－１２ ｐ３５サブユニットの遺伝子およびヒトＩＬ－１２ ｐ４０サブユニットの遺伝子をコードする。

そのＩＬ－１２プラスミドを、直接的腫瘍内注射および電気穿孔を介する腫瘍細胞への送達のために、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に処方する。必要に応じて、そのＩＬ－１２プラスミドを、対象中への注射のために適切な任意の溶液中に処方する。

ペムブロリズマブを、その薬物製品表示に従って投与する。一部の実施形態において、ペムブロリズマブを、３０分間（－５分間／＋１０分間）のＩＶ注入を使用して、各３週間サイクルの１日目（±２日）に用量約２００ｍｇでＩＶ投与する。任意の所定のサイクルにおいて、その注射のうちの１またはそれ以上を、医学的に必要とされた場合には、保留し得るか、または別の用量で、もしくは別の日に、投与し得る。投与量を変更すること（別の用量を投与すること）は、注入を中断すること、導入速度を変更すること、注入を休止および再開すること、または注入中に別の量の薬物を投与することを含み得る。ペムブロリズマブに対する有害反応もまた、製造者の推奨（例えば、薬物製品表示）に従って処置し得る。

ｎａｂ－パクリタキセルを、認可された表示によって推奨されるとおりに、４週間ごとに１日目、８日目および１５日目に１００ｍｇ／ｍ２～２６０ｍｇ／ｍ２、約３０分間にわたって静脈内に投与する。一部の対象において、ｎａｂ－パクリタキセルを１００ｍｇ／ｍ２で投与する。

コホート１における個別の対象各々についての研究期間は、ペムブロリズマブに関してベースラインから３３サイクル（およそ２年間）までである。コホート２について、期間は、ベースラインから、ペムブロリズマブに関して３３サイクルおよび／またはｎａｂ－パクリタキセルの２５サイクル（およそ２年間）までである。

あるいは、処置は、対象が処置から正味の利益（例えば、１もしくはそれ以上の病変の大きさの減少、腫瘍体積の正味の減少、または新病変状況における正味の減少、またはがん関連症状の改善）を送達する場合は、継続させ得る。

（処置開始前の）初期生検サンプルを取得して、生存ＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ８＋ゲートにおけるＰＤ－１ｈｉＣＴＬＡ－４ｈｉの頻度を決定する。一部の実施形態において、生検サンプルを処置過程中に取得して、腫瘍または腫瘍微小環境におけるＰＤ－１レベルおよび免疫マーカーレベルを評価する。マーカーレベルは、染色体法、マルチスペクトル免疫組織化学法、または核酸検出法によって、決定する。それらのサンプルにおける遺伝子発現を、ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ分析、ＲＮＡ－ｓｅｑ分析またはエピジェネティック分析（例えば、Ｉｌｌｕｍｉｎａ Ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙによる）によって、評価し得る。さらに、これらの分析を使用して、ＩＬ－１２発現、浸潤性Ｔ細胞集団における変化をモニターし得る。

処置に対する反応を、ＲＥＣＩＳＴ（ｖ．１．１）または（免疫関連ＲＥＣＩＳＴ（ｉＲＥＣＩＳＴ）によって、測定し得る。その処置レジメンを投与して、以下のうちの１またはそれ以上を提供する：無増悪生存期間の増加、全生存期間の増加、病勢コントロール率の増加、完全奏功の増加、部分奏効の増加、安定（ｓｔａｂｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ）の増加、および進行（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ）の減少。

完全奏功（ＣＲ）は、４週間以上間隔を開けて実施された２つの別個の観察によって決定されたすべての標的病変の消失、新病変の出現の欠如、およびすべての非標的（未処置）病変の消失と、必要に応じて腫瘍マーカーレベルの正常化とによって、特徴付けられる。

部分奏功（ＰＲ）は、そのベースラインＬＤ和を基準として、標的病変の最長径（ＬＤ）の和の少なくとも３０％減少によって特徴付けられる。新病変および非標的病変の出現の欠如は、非ＰＤである。

安定（Ｓｔａｂｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅ）（ＳＤ）は、その処置開始以降の最小のＬＤ和を基準としてＰＲに相当する十分な収縮もＰＤに相当する十分な増大もないこと、ならびに１またはそれ以上の非標的病変の持続および／または正常限度を超える腫瘍マーカーレベルの維持によって、特徴付けられる。

進行（Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ Ｄｉｓｅａｓｅ）（ＰＤ）は、研究で記録された最小の直径の和（ベースラインを含む）を基準として測定された病変の直径の和の少なくとも２０％増加および０．５ｃｍ以上の絶対的増加、または１またはそれ以上の新病変の出現によって、特徴付けられる。

無増悪生存期間（ＰＦＳ）は、最初の投薬日から疾患進行日（すなわち、腫瘍画像化の日）またはあらゆる原因由来の死亡までの時間（か月）である。ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１を使用して、進行日を決定する。

病勢コントロール率（ＤＣＲ）は、少なくとも６か月にわたり完全奏功（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、または安定（ｓｔａｂｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ）（ＳＤ）の状態の対象の割合である。

全生存期間（ＯＳ）は、診断からあらゆる原因由来の死亡までの時間である。

ＯＲＲは、その処置の開始から疾患の進行／再発（進行（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ）について、その処置開始以降に記録された最小の測定値を基準とする）まで記録された最良の効果（ｂｅｓｔ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）である（表５）。

その処置レジメンは、他のがん（黒色腫が挙げられるがこれに限定はされない）の処置のために適合させ得る。

Claims (32)

1. 対象におけるがんを処置する方法であって、
   （ａ）該対象における少なくとも１つの腫瘍に免疫賦活性サイトカインをコードする発現ベクターの有効用量を注射し、電気穿孔療法を該腫瘍に投与すること；
   （ｂ）有効用量の免疫チェックポイント阻害薬を該対象に投与すること；および
   （ｃ）有効用量の化学療法薬を該対象に投与すること；
   を含む、方法。
2. 前記免疫賦活性サイトカインがインターロイキン１２（ＩＬ－１２）を含む、請求項１に記載の方法。
3. 前記免疫賦活性サイトカインをコードする発現ベクターが、ＩＬ－１２ ｐ３５サブユニットおよびＩＬ－１２ ｐ４０サブユニットをコードする核酸を含む、請求項２に記載の方法。
4. ６週間サイクルの１日目±２日、５日目±２日、および８日目±２日に少なくとも２サイクル、前記免疫賦活性サイトカインが前記腫瘍に注射され、前記電気穿孔療法が該腫瘍に投与される、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
5. 電気穿孔療法を前記腫瘍に投与することが、前記少なくとも１つの腫瘍に少なくとも１電圧パルスを持続時間約１００マイクロ秒～約１ミリ秒にわたって送達することを含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
6. 前記少なくとも１電圧パルスが場の強度約３００Ｖ／ｃｍ～約１５００Ｖ／ｃｍを有する、請求項５に記載の方法。
7. 前記少なくとも１電圧パルスが、場の強度約３５０Ｖ／ｃｍおよび持続時間約１０ミリ秒を有するか、または場の強度約１５００Ｖ／ｃｍおよび持続時間約１００マイクロ秒を有する、請求項６に記載の方法。
8. 少なくとも１電圧パルスが６～８パルスを含む、請求項５～７のいずれか一項に記載の方法。
9. 前記免疫チェックポイント阻害薬がＰＤ－１アンタゴニストまたはＰＤ－Ｌ１アンタゴニストを含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
10. 前記ＰＤ－１アンタゴニストまたはＰＤ－Ｌ１アンタゴニストが、抗ＰＤ－１抗体もしくは抗ＰＤ－１抗体フラグメントまたは抗ＰＤ－Ｌ１抗体もしくは抗ＰＤ－Ｌ１抗体フラグメントを含む、請求項９に記載の方法。
11. 前記ＰＤ－１アンタゴニストまたはＰＤ－Ｌ１アンタゴニストが全身投与される、請求項９または１０に記載の方法。
12. 前記ＰＤ－１アンタゴニストまたはＰＤ－Ｌ１アンタゴニストが、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、セミプリマブ、シンチリマブ、トリパリマブ、およびカムレリズマブからなる群より選択される、請求項１１に記載の方法。
13. 前記免疫チェックポイント阻害薬が、前記対象に、３週間サイクルの１日目±２日に少なくとも２サイクル投与される、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
14. 前記化学療法薬が全身投与される、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
15. 前記化学療法薬がパクリタキセルまたはｎａｂ－パクリタキセルを含む、請求項１４に記載の方法。
16. 前記パクリタキセルまたはｎａｂ－パクリタキセルが、前記対象に、４週間サイクルの１日目±２日、８日目±２日、および１５日目±２日に少なくとも２サイクル投与される、請求項１５に記載の方法。
17. 前記少なくとも１つの腫瘍に前記免疫賦活性サイトカインをコードする発現ベクターを注射することと、前記免疫チェックポイント阻害薬を投与することと、前記化学療法薬を投与することとが、同じ日に開始される、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法。
18. 前記腫瘍が皮下腫瘍である、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。
19. 前記がんが手術可能である、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
20. 前記がんが手術不能である、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
21. 前記がんが、局所進行性であるか、再発性であるか、または転移性である、請求項１８または１９に記載の方法。
22. 前記対象が１またはそれ以上の事前のがん療法を受けたことがない、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。
23. 前記対象が１またはそれ以上の事前のがん療法を受けたことがある、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。
24. 前記対象が、非転移性疾患状況または潜在的に手術可能な疾患状況において事前のネオアジュバント処置またはアジュバント処置を受けたことがある、請求項２０に記載の方法。
25. 前記療法がネオアジュバントとして投与される、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。
26. 前記がんが、黒色腫、メルケル細胞癌、基底細胞癌、扁平上皮癌、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、および頭頸部がんからなる群より選択される、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。
27. 前記がんがトリプルネガティブ乳がんである、請求項１７に記載の方法。
28. 前記トリプルネガティブ乳がんが、手術不能な局所進行性または転移性のＴＮＢＣである、請求項１７に記載の方法。
29. 前記方法が、１もしくはそれ以上の腫瘍の大きさの減少、新しい腫瘍の形成の減少、または１もしくはそれ以上のがん関連症状の改善、無病の増加、生存期間の増加、無増悪生存期間の増加、または病勢コントロール率の増加をもたらす、請求項１に記載の方法。
30. 前記免疫賦活性サイトカインがＩＬ－１２を含み、前記免疫チェックポイント阻害薬が抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含み、前記化学療法薬がｎａｂ－パクリタキセルを含み、前記対象が、手術不能な局所進行性または転移性のトリプルネガティブ乳がんと診断されている、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。
31. 前記抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体がペムブロリズマブを含む、請求項２９に記載の方法。
32. 前記ＩＬ－１２がＩＴ－ＥＰによって６週間サイクルの１日目±２日、５日目±２日、および８日目±２日に少なくとも２サイクル投与され、前記ペムブロリズマブが３週間サイクルの１日目±２日に少なくとも２サイクル全身投与され、前記ｎａｂ－パクリタキセルが４週間サイクルの１日目±２日、８日目±２日、および１５日目±２日に少なくとも２サイクル投与される、請求項３０に記載の方法。