CN102935228B - 用于肿瘤治疗的试剂、其用途及方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物医学领域，特别涉及用于治疗和/或预防肿瘤细胞对辐射疗法(radiation therapy，简称为RT)的抗性的试剂、其用途及相关方法。

Description

用于肿瘤治疗的试剂、其用途及方法

技术领域

本发明涉及生物医学领域，特别涉及用于治疗和/或预防肿瘤细胞对辐射疗法(radiation therapy，下文中简称为RT)的抗性的试剂、其用途及相关方法。

背景技术

辐射疗法的原理是基于诱导对于肿瘤细胞或肿瘤相关间质而言致死性的DNA损伤。癌症患者通常在数周内每天接受低剂量(1.5-3Gy)的分次RT，常常与化学疗法相结。传统上，RT被认为是免疫抑制性的20。虽然有研究调查了局部的RT对于肿瘤潜在的免疫调节效果，关于这种应答是促进还是干扰肿瘤的消退存在相互矛盾的报导^21-24。

发明人最近的研究表明，局部的灼烧性RT可以引起对于肿瘤消退的免疫应答^1，2。但是在RT之后的肿瘤复发是起初的应答之后常见的临床问题，即存在对于RT有抗性的肿瘤和/或肿瘤细胞。在本发明中，发明人显示了新的、可与RT协同作用的产品，其相应的用途和方法，以引起肿瘤、特别是对RT有抗性的肿瘤的消退。

辐射引起先天的和获得性的免疫应答。暴露于辐射过程的肿瘤细胞具有分泌危险性信号(例如HMGB-1)的能力，所述危险性信号与表达在树突细胞上的TLR4交互作用并随后促进抗原交互呈递³。此外，发明人之前的结果表明由辐射引起的I型干扰素增加所述危险信号并增加CD8⁺T细胞的交叉启动²。随后，树突细胞和吞噬凋亡肿瘤细胞的巨噬细胞迁移到淋巴结中并活化T细胞⁴。在这些过程中，共刺激分子增加T细胞应答并使肿瘤生长萎缩。相反地，共抑制分子抑制T细胞应答并帮助肿瘤逃脱⁵。然而，仍不清楚哪些共同信号传导分子(例如，共抑制分子)在RT之后被上调并抑制T细胞免疫性。

B7-H1/PD1通路对肿瘤免疫抑制起作用

B7-H1是共抑制分子并且是B7家族的成员，它在肿瘤细胞、树突细胞和巨噬细胞上被诱导性地表达⁶。与肿瘤相关的B7-H1涉及诱导肿瘤反应性T细胞的凋亡和损伤CTL的细胞毒性⁷。与此同时，表达在树突细胞上的B7-H1被认为抑制T细胞的增殖及抑制T细胞产生细胞因子⁸。PD-1是可诱导地表达在活化的T细胞上的抑制因子受体，它促进T细胞的失效、凋亡和衰竭⁵。PD-1信号传导被认为是慢性感染中抗原特异性T细胞衰竭(例如小鼠中的LCMV和人中的HIV和HCV)的调节因子^9-12。衰竭的T细胞的标志包括增殖功能和效应因子功能的损伤¹³。数篇文献已经显示了B7-H1/PD1通路对于癌症中的T细胞衰竭起作用^14-16。已显示抑制B7-H1/PD1信号传导可以回复有功能的T细胞应答并延缓肿瘤的生长^14，16，17。因此，这些证据表明抑制B7-H1/PD-1信号传导有可能对于设计与辐射疗法的联合用药是有重要价值的。

发明内容

发明人的研究已经显示其最近开发的方案，即局部高剂量的辐射疗法可以减少肿瘤负荷并增加抗肿瘤的免疫性，但是肿瘤的复发经常发生，即在辐射疗法之后存在对RT有抗性的肿瘤细胞或组织，这些肿瘤细胞或组织能够进一步发展为肿瘤或者具有发展为肿瘤的潜力。现在，发明人惊讶地发现了RT可以诱导B7-H1在肿瘤上的表达并且能够诱导PD-1在T细胞上的表达，而所述B7-H1和PD-1的表达会抑制抵抗肿瘤的进一步的免疫性并会因此导致肿瘤的复发。然而，通过在RT之后使用阻断B7-H1/PD1信号传导的免疫疗法和/或产品，可以减少由RT诱导的免疫抑制(即减少肿瘤细胞对RT的抗性)并增强宿主抵抗肿瘤的免疫性。因此，本发明的产品和方法呈现了一种新的策略/方案：即进行辐射治疗，然后及时地施用阻断B7-H1/PD1信号传导的免疫疗法和/或产品(例如，抗B7-H1抗体)，这样可以增强抗肿瘤的治疗活性并实现对于癌症患者有益的治疗效果。

因此，在一个方面，本发明涉及用于治疗和/或预防肿瘤细胞对辐射疗法的抗性的组合物(例如药物组合物)，其包含能够抑制B7-H1/PD1信号传导的试剂。

在一个实施方式中，所述组合物中包含的抑制B7-H1/PD1信号传导的试剂是B7-H1和/或PD1活性的抑制剂，例如B7-H1或PD1的阻断抗体；在特别的实施方式中，所述抑制剂可以是B7-H1的阻断性单克隆抗体，例如购自Bio-X cell(West Lebanon，NH03784，USA)的单克隆抗体10F.9G2。

在本发明的一些实施方式中，所述辐射疗法是单次或多次X射线照射，例如1次、2次、3次、4次、5次、6次或更多次；优选地，在每次照射中所使用的X射线剂量可以为5Gy-20Gy，例如5-8Gy、5-12Gy或5-15Gy。特别地，当施用多次X射线照射时，各次之间的间隔可以是一至数小时(例如，2、3、4、5、6、7、8、9直至24小时)，一至数天(例如，2、3、4、5、6、7、8、9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19天等)，甚至一至数月(例如2、3、4、5、6、7、8、9，10，11，12)等。

在另外的实施方式中，所述肿瘤可以是但不限于：乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、结肠癌和黑素瘤和/或其细胞，例如乳腺癌细胞(如TUBO细胞)或Myc-Cap肿瘤细胞系。

在某些实施方式中，所述组合物进一步包含可用作化疗剂的其它化合物，特别地，所述其它化合物包括但不限于：阿霉素(Adriamycin)、环磷酰胺和紫杉烷类[紫杉醇(Taxol)和多西他赛(Taxotere)]、卡培他滨(Xeloda)、吉西他滨(Gemzar)、长春瑞滨(Navelbine)、他莫昔芬、芳香酶抑制剂(瑞宁得、弗隆、阿诺新)、5-FU加亚叶酸、伊立替康(camptosar)、奥沙利铂、顺铂、卡铂、雌莫司汀、米托蒽醌(Novantrone)、泼尼松、长春新碱(Oncovin)等。

在其它的实施方式中，所述药物可以是适于直接施用在肿瘤位点的形式或者是适于全身性施用的形式。

在另一个方面，本发明涉及治疗和/或预防肿瘤细胞对辐射疗法的抗性的方法，所述方法包括下列步骤：

向有需要的受试者或细胞施用包含能够抑制B7-H1/PD1信号传导的试剂的药物组合物；其中所述受试者患有肿瘤并且经受过辐射治疗，而所述细胞为经受过辐射处理的肿瘤细胞。

所述方法可以在动物体(包括但不限于哺乳动物)或人体中进行，也可以在体外进行。

在一个实施方式中，所施用的组合物中包含的抑制B7-H1/PD1信号传导的试剂是B7-H1和/或PD1活性的抑制剂，例如B7-H1或PD1的阻断抗体；在特别的实施方式中，所述抑制剂可以是B7-H1的阻断性单克隆抗体，例如购自Bio-X cell(West Lebanon，NH 03784，USA)的单克隆抗体10F.9G2。

在其它的实施方式中，所述受试者或细胞所经受的辐射疗法或辐射处理是X射线照射，例如单次或多次X射线照射，例如1次、2次、3次、4次、5次、6次或更多次；优选地，在每次照射中所使用的X射线剂量可以为5Gy-20Gy，例如5-8Gy、5-12Gy或5-15Gy。特别地，当施用多次X射线照射时，各次之间的间隔可以是一至数小时(例如，2、3、4、5、6、7、8、9直至24小时)，一至数天(例如，2、3、4、5、6、7、8、9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19天等)，甚至一至数月(例如2、3、4、5、6、7、8、9，10，11，12)。

在另外的实施方式中，所述肿瘤可以是但不限于：乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、结肠癌和黑素瘤和/或其细胞，例如乳腺癌细胞(如TUBO细胞)或Myc-Cap肿瘤细胞系。

在一些实施方式中，在辐射治疗或辐射处理后的数小时(例如10-48小时)、数天(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9天)或数周内施用本发明的所述组合物，例如1-8周，1-7周，1-6周，1-5周，1-4周，1-3周，或1-2周内。需要时，可以多次施用所述组合物，例如2次，3次，4次，5次，6次或更多次，并且各次施用之间的间隔时间可以是数小时，1天，数天(例如2-30天，2-25天，2-20天，2-15天，2-14天，2-13天，2-12天，2-11天，2-10天，2-9天，2-8天，2-7天，2-6天，2-5天，2-4天，2-3天)，一至数月或更长时间。

在另一些实施方式中，可以全身性地施用所述组合物，或仅在肿瘤位点处施用所述组合物。

在某些实施方式中，所施用的组合物可进一步包含可用作化疗剂的其它化合物，特别地，所述其它化合物包括但不限于：阿霉素(Adriamycin)、环磷酰胺和紫杉烷类[紫杉醇(Taxol)和多西他赛(Taxotere)]、卡培他滨(Xeloda)、吉西他滨(Gemzar)、长春瑞滨(Navelbine)、他莫昔芬、芳香酶抑制剂(瑞宁得、弗隆、阿诺新)、5-FU加亚叶酸、伊立替康(camptosar)、奥沙利铂、顺铂、卡铂、雌莫司汀、米托蒽醌(Novantrone)、泼尼松、长春新碱(Oncovin)等。备选地，本发明所述的方法可与治疗和/或预防肿瘤的其它方法(例如，手术治疗、化学疗法或辐射疗法联合使用)。

在又一个方面，本发明涉及抑制B7-H1/PD1信号传导的试剂用于制备药物的用途，所述药物用于治疗和/或预防肿瘤细胞对辐射疗法的抗性。

在一个实施方式中，所述抑制B7-H1/PD1信号传导的试剂是B7-H1和/或PD1活性的抑制剂，例如B7-H1或PD1的阻断抗体；在特别的实施方式中，所述抑制剂可以是B7-H1的阻断性单克隆抗体，例如购自Bio-X cell(West Lebanon，NH 03784，USA)的单克隆抗体10F.9G2。

在本发明另外的实施方式中，所述辐射疗法是单次或多次X射线照射，例如1次、2次、3次、4次、5次、6次或更多次；优选地，在每次照射中所使用的X射线剂量可以为5Gy-20Gy，例如5-8Gy、5-12Gy或5-15Gy。特别地，当施用多次X射线照射时，各次之间的间隔可以是一至数小时(例如，2、3、4、5、6、7、8、9直至24小时)，一至数天(例如，2、3、4、5、6、7、8、9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19天等)，甚至一至数月(例如2、3、4、5、6、7、8、9，10，11，12)等。

在其它的实施方式中，所述肿瘤可以是但不限于：乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、结肠癌和黑素瘤和/或其细胞，例如乳腺癌细胞(如TUBO细胞)或Myc-Cap肿瘤细胞系。

在某些实施方式中，所述组合物进一步包含可用作化疗剂的其它化合物，特别地，所述其它化合物包括但不限于：阿霉素(Adriamycin)、环磷酰胺和紫杉烷类[紫杉醇(Taxol)和多西他赛(Taxotere)]、卡培他滨(Xeloda)、吉西他滨(Gemzar)、长春瑞滨(Navelbine)、他莫昔芬、芳香酶抑制剂(瑞宁得、弗隆、阿诺新)、5-FU加亚叶酸、伊立替康(camptosar)、奥沙利铂、顺铂、卡铂、雌莫司汀、米托蒽醌(Novantrone)、泼尼松、长春新碱(Oncovin)等。

在其它的实施方式中，所述药物可以是适于直接施用在肿瘤位点的形式或者是适于全身性施用的形式。

附图说明

图1显示了辐射之后，B7-H1和PD-1在肿瘤微环境中的表达。

在Ba1b/c小鼠的胁腹中皮下注射5x10⁵TUBO。在第14天，以15格雷(Gy)局部辐射小鼠。在第28天，取出肿瘤并消化以得到单细胞悬浮液用于染色。(A)B7-H1在肿瘤细胞上的表达受到辐射的影响；(B)B7-H1在DC和巨噬细胞上的表达在辐射后被改变；(C)经辐射和不经辐射的T细胞上，PD-1均高度表达。

图2：RT在Myc-Cap细胞系中引起B7-H1的上调。A.RT后B7-H1的表达。用0、4和8Gy辐射肿瘤细胞(Myc-Cap肿瘤细胞系)。然后培养经辐射的肿瘤细胞24或48小时。24小时或48小时后，收获细胞，然后用抗B7-H1单克隆抗体染色。未经辐射的Myc-Cap细胞用作对照。

图3：阻断B7-H1改善了辐射疗法。

在Ba 1b/c小鼠的胁腹中皮下注射5x10⁵TUBO。在第14天，用1剂量12Gy的辐射局部处理小鼠。在第15、18和21天，用50μg的B7-H1阻断单克隆抗体(克隆10F.9G2)腹膜内注射小鼠。监测肿瘤的生长。

具体实施方式

在本申请中，术语“抑制B7-H1/PD1信号传导的试剂”在其最广泛的范围内包括任何能够降低或阻止B7-H1/PD1信号传导的试剂，包括但不限于抑制编码B7-H1或PD1的基因的转录、翻译、修饰的试剂、影响B7-H1或PD1蛋白的活性的试剂、或者以其它方式影响B7-H1与PD1的直接或间接相互作用的试剂。在本发明的某些实施方式中，所述试剂可以是抑制B7-H1或PD1蛋白活性的试剂，例如B7-H1或PD1的阻断抗体，在特别的实施方式中，所述阻断抗体可以是特异性的单克隆抗体、多克隆抗体、人源化抗体、嵌合抗体、或其抗原特异性片段(例如Fab、Fv、ScFv抗体片段等)。本领域技术人员将明了，任何能够特异性结合B7-H1或PD1蛋白，并且影响其功能和/或结构的试剂都将潜在地作为本发明的“抑制B7-H1/PD1信号传导的试剂”。

在本申请中，术语“辐射疗法”或“辐射处理”包括例如，分次辐射治疗、非分次辐射治疗和超分次辐射治疗，以及辐射与化学治疗的组合。辐射的类型还包括电离(γ)辐射、粒子辐射、低能量传递(LET)、高能量传递(HET)、X射线辐射、紫外辐射、红外辐射、可见光、和光敏化辐射等。

在本发明的一种实施方式中，所述辐射疗法或辐射处理是单次或多次X射线照射，例如1次、2次、3次、4次、5次、6次或更多次；优选地，在每次照射中所使用的X射线剂量可以为5Gy-20Gy，例如5-8Gy、5-12Gy或5-15Gy。特别地，当施用多次X射线照射时，各次之间的间隔可以是一至数小时(例如，2、3、4、5、6、7、8、9直至24小时)，一至数天(例如，2、3、4、5、6、7、8、9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19天等)，甚至一至数月(例如2、3、4、5、6、7、8、9，10，11，12)。

在本申请中，“化疗剂”与“化学治疗剂”、“用于化学治疗的试剂”可互换地使用。其包括单一活性成分的组合物或者多种化学治疗剂的组合。在需要治疗的受试者中，化学治疗可以与手术治疗或者辐射治疗组合，或者与其他抗肿瘤治疗形式组合，例如，可与本发明的“抑制B7-H1/PD1信号传导的试剂”组合使用。特别地，所述化疗剂包括但不限于：阿霉素(Adriamycin)、环磷酰胺和紫杉烷类[紫杉醇(Taxol)和多西他赛(Taxotere)]、卡培他滨(Xeloda)、吉西他滨(Gemzar)、长春瑞滨(Navelbine)、他莫昔芬、芳香酶抑制剂(瑞宁得、弗隆、阿诺新)、5-FU加亚叶酸、伊立替康(camptosar)、奥沙利铂、顺铂、卡铂、雌莫司汀、米托蒽醌(Novantrone)、泼尼松、长春新碱(Oncovin)等，或它们的组合。

在本发明的情境中，“对辐射疗法的抗性”指细胞(例如肿瘤细胞)在经受辐射治疗或处理后没有丧失继续繁殖和/或生长的能力。这种抗性通常可导致辐射疗法对于肿瘤治疗的效力降低或效力丧失，进而引起肿瘤的复发。

在本发明的情境中，“肿瘤”、“癌”或者“过度增殖性疾病”是指所有恶性或良性的瘤性细胞生长和增殖，包括所有转化的细胞和组织和所有癌性细胞和组织。

癌症的实例包括，但不限于，癌、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病或者淋巴恶性肿瘤。此类癌症的更具体的实例包括鳞状细胞癌(例如，上皮鳞状细胞癌)、肺癌，包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺的腺癌和肺的鳞状细胞癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌，包括胃肠癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或者子宫癌、唾液腺癌、肾癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、肛门癌、阴茎癌，以及头颈癌。癌症的其他实例在下面的“过度增殖性疾病”中列出。特别地，所述肿瘤选自：乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、结肠癌和黑素瘤和/或其细胞，例如乳腺癌细胞(如TUBO细胞)或Myc-Cap肿瘤细胞系。

在本发明的一些实施方式中，在辐射治疗或辐射处理后的数小时(例如10-48小时)、数天(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9天)或数周内施用本发明的抑制B7-H1/PD1信号传导的试剂或包含此试剂的组合物，例如在1-8周，1-7周，1-6周，1-5周，1-4周，1-3周，或1-2周内。需要时，可以多次施用所述试剂或组合物，例如2次，3次，4次，5次，6次或更多次，并且各次施用之间的间隔时间可以是数小时，1天，数天(例如2-30天，2-25天，2-20天，2-15天，2-14天，2-13天，2-12天，2-11天，2-10天，2-9天，2-8天，2-7天，2-6天，2-5天，2-4天，2-3天)，一至数月或更长时间。

对于预防或治疗所述对辐射治疗的抗性，施用本发明的试剂或组合物的剂量和方式可以由临床医师根据已知的标准选择。所施用的抑制B7-H1/PD1信号传导的试剂的浓度、剂量可以取决于待治疗的癌症类型、疾病的严重性和病程、肿瘤大小、转移程度、施用的目的是预防性的还是治疗性的、先前的治疗、患者的临床病史及对抗体的应答、以及主治医师的判断。对于持续几天或更长时间的重复施用，根据情况，可以维持该治疗直到疾病症状获得期望的抑制，例如肿瘤大小/体积的减小和转移的减小。可以通过常规方法和分析试验，基于医师或本领域其它技术人员已知的标准，监测该治疗的过程。

特别地，对于抗体而言，施用的剂量可以是0.1μg/kg到100mg/kg患者体重。例如0.1mg/kg到20mg/kg患者体重，1mg/kg到10mg/kg患者体重。通常，由于对外来多肽的免疫反应，人抗体在人体中比来自其他物种的抗体有更长的半寿期。从而，较低剂量的人抗体和较低频率的施用通常是可能的。此外，通过修饰，如脂化，增强抗体的摄入和组织穿透(例如，进入脑)可以减少抗体的剂量和施用频率。

根据本发明的药物组合物可以包含药学上可接受的赋形剂、载体、缓冲质、稳定剂或本领域技术人员公知的其他材料。此类材料应当是非毒性的并且不应干扰活性成分的功效。此类材料可以包括，例如任何一种和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂以及生理学相容的物质等。药学上可接受的载体可以是例如水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、葡萄糖、甘油、乙醇等，以及其组合。在许多情况下，所述药物组合物中可以包括等渗剂，例如糖，多元醇如甘露醇、山梨糖醇，或氯化钠将是优选的。药学上可接受的物质的还可以是湿润剂或少量辅助物质例如湿润剂或乳化剂、防腐剂或缓冲质，其增强抗体的保存期或效用。载体或其他材料的精确性质将取决于施用途径，所述施用途径可以是口服、局部、通过吸入或通过注射，例如静脉内。在一个实施方案中，所述药物组合物通过静脉内输注或注射进行施用。在另一优选实施方案中，所述药物组合物通过肌内或皮下注射进行施用。

用于口服施用的药物组合物可以是片剂、胶囊、粉剂或液体形式，例如含有惰性稀释剂或可同化的可食用载体。片剂可以包含固体载体例如明胶或佐剂。液体药物组合物一般包含液体载体例如水、石油、动物或植物油、矿物油或合成油。可以包括生理盐水溶液、葡萄糖或其他糖类溶液或者二醇例如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇。特异性结合成员(需要时，以及其他成分)还可包封在硬或软壳明胶胶囊内，压缩成片剂，或直接掺入受试者饮食中。对于口服治疗施用，活性成分可以与赋形剂相掺合，并以可吸收的片剂、颊含片剂、锭剂、胶囊、酏剂、悬浮液、糖浆剂、糯米纸囊剂等的形式进行使用。为了通过除肠胃外施用以外的其他方式施用本发明的化合物，可能必需用防止其失活的材料包被所述化合物或将所述化合物与所述材料共施用。

对于静脉内注射，或在痛苦部位(例如肿瘤部位)注射，活性成分将是肠胃外可接受的水溶液的形式，其是无热原的并且具有合适的pK、等渗性和稳定性。本领域相关技术人员将能够容易地例如使用等渗媒介物例如氯化钠注射液、林格注射液、乳酸盐林格注射液来制备合适的溶液。需要时，可以包括防腐剂、稳定剂、缓冲质、抗氧化剂和/或其他添加剂。

本发明的试剂或组合物可以单独地或与其他治疗相组合地同时或顺次施用，这取决于被治疗的病状。

下面的实施例仅用于进一步阐释本发明的内容，而不意欲在任何方面限制本发明。本领域技术人员将领会，可对下述具体实施方式进行修饰而仍不偏离所附的权利要求所要求保护的本发明的范围、精神和主旨。

在下面的所有实施例中，如无特别声明，均采用本领域技术人员惯常所用的方法、仪器、试剂和实验方案等。

实施例1辐射后B7-H1和PD-1在肿瘤微环境中高度表达

RT之后的复发是一个普遍的问题，这至少一部分是由于受试者中存在对RT有抗性的肿瘤细胞和/或组织。发明人提出所述复发过程，即这些对RT有抗性的肿瘤的发展可能涉及抑制T细胞应答的抑制性分子。为了研究RT是否诱导B7-H1/PD-1的表达，发明人对肿瘤细胞、树突细胞和巨噬细胞上的B7-H1进行了染色，并对CD4⁺T细胞和CD8⁺T细胞上的PD-1进行了染色。实验过程简述如下：在Ba1b/c小鼠的胁腹中皮下注射5x10⁵TUBO肿瘤细胞(源自Ba1b/c Her2/neu转基因小鼠的乳腺癌细胞)¹⁸。在第14天，利用X-射线发生器(PCM 1000，Pantak)以15格雷(Gy)局部辐射小鼠。在第28天，取出肿瘤，并用0.2mg/ml的胶原酶消化30分钟，以得到单细胞悬浮液用于通过标准染色方法对B7-H1进行染色，染色使用的是0.5μg/ml的单克隆抗体10F.9G2，所述抗体购自Bio-X cell，West Lebanon，NH 03784，USA。

发明人发现，辐射之后B7-H1不仅在肿瘤细胞上表达，也在树突细胞和巨噬细胞上表达(图1A和图1B)。发明人还发现PD-1也在浸润的CD8⁺T细胞和CD4⁺T细胞上高度表达(图1C)。

实施例2RT引起B7-H1的上调

为了研究RT是否能够诱导B7-H1在肿瘤细胞(Myc-Cap前列腺癌细胞系¹⁹)上的表达，用0、4和8Gy辐射肿瘤细胞(Myc-Cap肿瘤细胞系)。然后培养经辐射的肿瘤细胞24或48小时。24小时或48小时后，收获细胞，随后用抗B7-H1的单克隆抗体(0.5μg/ml的抗体10F.9G2，购自Bio-X cell，West Lebanon，NH03784，USA)对所收获的细胞(10⁶个细胞)进行标准染色。将未经辐射的Myc-Cap细胞用作对照。结果表明，RT显著地上调了B7-H1在Myc-Cap细胞中的表达。

实施例3抗B7-H1的阻断促进了局部的RT作用并减少肿瘤负荷

为了测试RT介导的B7-H1是否损伤获得性免疫应答，在进行RT的同时，阻断B7-H1/PD1信号传导通路。在Ba1b/c小鼠的胁腹中皮下注射5x10⁵TUBO。在第14天，用1剂量12Gy的辐射局部处理小鼠(使用X-射线发生器，PCM 1000，Pant ak)。在第15、18和21天，分别用50μg的B7-H1阻断性单克隆抗体(克隆10F.9G2，购自Bio-X cell，West Lebanon，NH 03784，USA)腹膜内注射小鼠，并监测肿瘤的生长。结果显示，虽然单独的RT或单独的B7-H1阻断性单克隆抗体对于肿瘤的生长没有很大的影响，但是RT与所述抗体的组合产生了协同作用的效果，有效地引起了肿瘤的显著消退(图3)。

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11.Trautmann，L.，等人Upregulation of PD-1 expression onHIV-specific  CD8+T cells leads to reversible immunedysfunction.Nat Med 12，1198-1202(2006)。

12.Nakamot o，N.，等人Synergistic reversal ofintrahepatic HCV-specific CD8T cell exhaustion by combinedPD-1/CTLA-4 blockade.PLoS Pathog 5，e1000313(2009)。

13.Freeman，G.J.，Wherry，E.J.，Ahmed，R.& Sharpe，A.H.Reinvigorating exhausted HIV-specific T cells via PD-1-PD-1ligand blockade.J Exp Med 203，2223-2227(2006)。

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15.Fourcade，J.，等人Upregulation of Tim-3 and PD-1expression is associated with tumor antigen-specific CD8+Tcell dysfunction in melanoma patients.J Exp Med 207，2175-2186。

16.Mumprecht，S.，Schurch，C.，Schwaller，J.，Solenthaler，M.& Ochsenbein，A.F.Programmed death 1 signaling on chronicmyeloid leukemia-specific T cells results in T-cell exhaustionand disease progression.Blood 114，1528-1536(2009)。

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18.Rovero，S.，Amici，A.，Carlo，E.D.，Bei，R.，Nanni，P.，Quaglino，E.，Porcedda，P.，Boggio，K.，Smorlesi，A.，Lollini，P.L.，等人(2000).DNA vaccination against rat her-2/Neu p185more effectively inhibits carcinogenesis than transplantablecarcinomas in transgenic BALB/c mice.J.Immunol.165，5133-5142。

19.Watson PA，Ellwood-Yen K，King JC，Wongvipat J，LebeauMM，Sawyers CL.Context-dependent hormone-refractoryprogression revealed through characterization of a novel murineprostate cancer cell line.Cancer Res.2005 Dec15；65(24)：11565-71。

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21.Ohuchida K.等人，Radiation to stromal fibroblastsincreases invasiveness of pancreatic cancer cells throughtumor-stromal interactions.Cancer Res.2004；64：3215-3222。

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23.Chen等人，TGF-beta released by apoptotic T cellscontributes to an immunosuppressive milieu。Immunity 2001；14：715-725。

24.Reits EA等人，Radiation modulates the peptiderepertoire，enhances MHC class I expression，and inducessuccessful antitumor immunotherapy.J.Exp Med.2006；203：1259-1271。

Claims (8)

1.抑制B7-H1/PD1信号传导的试剂用于制备药物的用途，所述药物用于治疗和/或预防对辐射治疗有抗性的肿瘤，其中所述肿瘤的细胞在经受所述辐射治疗后没有丧失继续繁殖和/或生长的能力，其中所述抑制B7-H1/PD1信号传导的试剂为所述药物中的单一活性成分；或与辐射治疗联合，其中所述抑制B7-H1/PD1信号传导的试剂是B7-H1的单克隆抗体或PD1的单克隆抗体；其中所述肿瘤选自乳腺癌和前列腺癌。

2.权利要求1所述的用途，其中所述辐射治疗是单次或多次X射线照射。

3.权利要求2中所述的用途，其中所述辐射治疗是1次、2次、3次、4次、5次、6次或更多次X射线照射。

4.权利要求2中所述的用途，其中在每次照射中所使用的X射线剂量为5Gy－20Gy。

5.权利要求4中所述的用途，其中在每次照射中所使用的X射线剂量为5－8Gy。

6.权利要求4中所述的用途，其中在每次照射中所使用的X射线剂量为5－12Gy。

7.权利要求4中所述的用途，其中在每次照射中所使用的X射线剂量为5－15Gy。

8.权利要求1中所述的用途，其中所述细胞选自乳腺癌TUBO细胞和Myc-Cap前列腺癌细胞系。