KR20230008997A - 효모유래 세포외소포 및 용해물을 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents
효모유래 세포외소포 및 용해물을 함유하는 화장료 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 사카로미세스 세레비지에부터 유래된 엑소좀 및 이의 용해물을 유효성분으로 포함하는 항노화, 피부재생, 피부탄력개선 또 는 피부주름개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 배양액은 증식에 필요한 성분과 세포가 내뿜는 대사산물 등 다양한 성분을 함유하고 있는 만큼, 피부에 유용한 성분과 피부에 유해한 성분을 모두 함유하고 있으므로, 본 발명은 효모배양액으로부터 피부에 실질적으로 유용한 성분만을 분리하여 우수한 효과를 내는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 배양액은 증식에 필요한 성분과 세포가 내뿜는 대사산물 등 다양한 성분을 함유하고 있는 만큼, 피부에 유용한 성분과 피부에 유해한 성분을 모두 함유하고 있으므로, 본 발명은 효모배양액으로부터 피부에 실질적으로 유용한 성분만을 분리하여 우수한 효과를 내는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
Description
본 발명은 사카로미세스 세레비지에부터 유래된 세포외소포 및 이의 용해물 중 하나 이상으로부터 분리된 유효성분을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
노화의 진행이나 자외선 등에 의해 피부 세포에서는 염증성 사이토카인을 생성하는 효소인 COX-2의 증가로 인한 프로스타글란딘 E2(Prostaglandin E2)의 합성이 증가하고, 염증유발인자들의 생성이 증가하는 것으로 알려져 있다. 염증 반응들로 인해서 MMP의 생합성이 증가하여 콜라겐 분해가 일어나고 피부탄력 감소와 피부주름 형성이 나타나게 된다. 특히, 일광 및 자외선이 피부에 직접 조사될 경우 자유라디칼을 많이 발생시키며, 이러한 자유라디칼에 의해 피부의 항산화 방어체계는 손상을 받게 되어 주름을 증가시키고, 피부를 이완시키는 등 피부노화를 가속화시킨다. 따라서, 피부주름 감소 및 탄력 유지를 위해서는 활성산소종 및 자유라디칼 생성 억제, 염증 반응 억제 및 상처로부터 피부재생을 촉진시켜 피부를 보호하여야 한다.
피부주름개선에 효과적이라고 알려진 물질로는 아데노신, 레티노인산(retinoic acid) 등이 있으나, 아데노신은 임상에서의 효능이 미미하고, 레티노인산은 가임 여성에게 사용할 수 없고, 홍반 등의 부작용이 있다. 이에 따라 식물이나 천연물의 유효성분을 활용한 피부 항노화용 기능성 화장품이 최근 주목을 받고 있다. 그러나 식물 추출물을 유효성분으로 포함한 기능성 화장품은 피부에 도포한 후 용액이 증발하는 과정에서 이물감이 발생할 수 있고, 효과 지속시간이 짧은 문제가 있다.
세포는 세포외 환경에 다양한 막(membrane) 유형의 소포체를 방출하는데, 통상 이러한 방출 소포체들을 세포외 소포체(Extracellular vesicles, EV)라고 부르고 있다. 세포외소포(Extracellular vesicles)는 유래, 크기, 생성과정 등에 따라 엑소좀 (Exosome), 마이크로소포체 (Micro vesicles), 외막소포체 (Outer membrane vesicles) 등으로 구분되나, 외관상 차이가 크지 않고, 세포 외로 분비되는 소포라는 공통점이 있어 현재는 “세포외소포”로 통칭하고 있다.
엑소좀은 세포막의 구조와 동일한 이중인지질막으로 이루어진 수십 내지 수백 나노미터 크기의 소포체로서, 내부에는 엑소좀 카고(cargo)라고 불리는 단백질, 핵산(mRNA, miRNA 등) 등이 포함되어 있다. 엑소좀 카고에는 광범 위한 신호전달 요소들(signaling factors)이 포함되며, 이들 신호전달 요소들은 세포 타입에 특이적이고, 분비세포의 환경에 따라 상이하게 조절되는 것으로 알려져 있다.
엑소좀은 세포가 분비하는 세포간 신호전달 매개체로서 이를 통해 전달된 다양한 세포 신호는 표적 세포의 활성화, 성장, 이동, 분화, 탈분화, 사멸(apoptosis), 괴사(necrosis)를 포함한 세포 행동을 조절한다고 알려져 있다. 엑소좀은 유래된 세포의 성질 및 상태에 따라 특이적인 유전물질과 생체활성 인자들이 포함되어 있다. 증식하는 줄기세포 유래 엑소좀의 경우 세포의 이동, 증식 및 분화와 같은 세포 행동을 조절하고, 조직 재생과 관련된 줄기세포의 특성이 반영되어 있다(Nature Review Immunology 2002 (2) 569-579). 이러한 특성으로 인해 세포외소포를 진단/치료 등의 목적으로 활용하려는 연구가 이루어지고 있다(특허문헌 2).
세포의 아바타라고 불리는 엑소좀은 줄기세포 및 암세포로부터 방출될 뿐만 아니라 식물, 세균(bacteria), 균류(fungi), 조류(algae) 등 다양한 생물의 세포로부터도 방출되는 것으로 알려져 있다. 예를 들어, 엑소좀은 중간엽 줄기세포 배양액, 섬유아세포 배양액 외에도 효모의 배양액 내지 발효물로부터도 분리될 수 있다.
이와 관련하여 발효 화장품이 최근 인기를 얻고 있으며 화장품에 사용되는 효모의 종류도 증가하고 있다. 화장 품 원료로 사용되는 효모의 종류는 대략 수백가지가 넘고 있으며, 발효 화장품 원료 중 소비자 반응이 가장 좋은 것이 갈락토마이세스 발효 여과물(Galactomyces Ferment Filtrate)이다. 갈락토마이세스는 정종을 빚는 장인의 손의 피부가 나이에 비하여 탄력이 있고 깨끗한 것에 착안하여 여러 효모들을 연구하는 과정에서 찾아낸 효모이다.
갈락토마이세스 발효 여과물은 비타민, 미네랄, 아미노산, 유기산, 효소, 효모 펩타이드 등이 풍부하다. 그러나 갈락토마이세스 발효 여과물은 발효 성분에 민감한 피부를 가진 사람의 경우 피부 트러블, 피 부의 붉어짐, 또는 피부염 등의 부작용을 일으킬 수 있다(특허문헌 1).
상기 발효물의 경우 발효시 성분변화 및 피부에 미치는 효과에 대한 연구가 많이 이루어졌으나, 단순 효모배양액의 경우 피부에 직접적으로 미치는 영향에 대한 연구는 아직 부족한 상황이다.
본 발명은 사카로미세스 세레비지에부터 유래된 엑소좀 및 이의 용해물을 유효성분으로 포함하는 항노화, 피부재생, 피부탄력개선 또 는 피부주름개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
상기 설명과 같이, 배양액은 증식에 필요한 성분과 세포가 내뿜는 대사산물 등 다양한 성분을 함유하고 있는 만큼, 피부에 유용한 성분과 피부에 유해한 성분을 모두 함유하고 있으므로, 본 발명은 효모배양액으로부터 피부에 실질적으로 유용한 성분만을 분리하여 우수한 효과를 내는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 사카로미세스 세레비지에부터 유래된 세포외소포 및 이의 용해물 중 하나 이상으로부터 분리된 유효성분을 포함하는 것이 바람직하다.
상기 효모가 Saccharomyces cerevisiae RD-03 RI SC(C) (기탁번호: KCTC SD1359)인 것이 바람직하다.
상기 화장료 조성물이 항노화, 피부재생, 피부탄력개선 또는 피부주름개선용인 것이 바람직하다.
상기 세포외소포 또는 이의 용해물이 초원심분리 또는 한외여과막으로 분리된 것이 바람직하다.
보다 바람직하게는 상기 세포외소포 또는 이의 용해물이 한외여과막으로 분리될 수 있다.
상기 세포외소포의 크기가 30~200 nm인 것이 바람직하다.
상기 화장료 조성물이 부틸렌글리콜, 헥산디올, 에틸헥실글리세린 및 페녹시에탄올로부터 선택된 1종 이상의 첨가제를 추가로 포함하는 것이 바람직하다.
상기 화장료 조성물이 화장수, 영양크림, 맛사지크림, 에센스, 팩, 젤, 로션, 연고, 패치 및 분무제로 이루어지는 군으로부턴 선택되는 제형인 것이 바람직하다.
본 발명의 다른 구체예로서, 상기 세포외소포 또는 이의 용해물의 유효성분을 피부 또는 세포 또는 세포외소포 내로 전달하기 위한 전달체로서 상기 세포외소포를 이용하는 것이 바람직하다.
본 발명의 다른 구체예로서, 상기 세포외소포 전달체를 이용하여 상기 유효성분을 효모 배양시 세포외소포 내로 투입하여 자연적으로 유효성분을 캡슐화하거나, 상기 유효성분이 효모 배양시 세포외소포 내로 투입된 후 초음파 처리를 통해 인위적으로 세포외소포 내에서 캡슐화하는 방법이 바람직하다.
본 발명의 사카로미세스 세레비지에부터 유래된 세포외소포 및 이의 용해물 중 하나 이상으로부터 분리된 유효성분을 포함하는 화장료 조성물을 이용하여, 치료용을 제외한 포유동물 피부의 상태를 개선하는 미용방법에 사용될 수 있다.
상기 미용방법은, (a) 상기 화장료 조성물을 포유동물의 피부에 직접 도포하는 것, (b) 상기 화장료 조성물이 도포되거나 침적된 패취, 마스크팩 또는 마스크시트를 포유동물의 피부에 접촉 또는 부착하는 것, 또는 상기 (a) 및 (b)를 순차적으로 진행하는 것이 바람직하다.
또한, (c) 상기 (b) 단계 이후에 상기 패취, 마스크팩 또는 마스크시트를 상기 포유동물의 피부로부터 제거하고, 상기 화장료 조성물을 포유동물의 피부에 도포하는 단계를 더 포함하는 것이 바람직하다.
본 발명은 사카로미세스 세레비지에부터 유래된 세포외소포 및 이의 용해물로부터 실질적으로 유용한 성분만을 유효성분으로 포함하는 항노화, 피부재생, 피부탄력개선 또 는 피부주름개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
도 1은 본 발명에 따른 실시예 2의 투과전자현미경 이미지를 나타낸 것이다.
도 2는 실험예 2의 결과를 개략적으로 나타낸 것이다.
도 3a 및 도 3b는 실험예 3의 결과를 개략적으로 나타낸 것이다.
도 4는 실험예 4의 결과를 개략적으로 나타낸 것이다.
도 5는 실험예 5의 결과를 개략적으로 나타낸 것이다.
도 6a 및 도 6b는 실험예 6의 결과를 개략적으로 나타낸 것이다.
도 7a 및 도 7b는 실험예 7의 결과를 개략적으로 나타낸 것이다.
도 2는 실험예 2의 결과를 개략적으로 나타낸 것이다.
도 3a 및 도 3b는 실험예 3의 결과를 개략적으로 나타낸 것이다.
도 4는 실험예 4의 결과를 개략적으로 나타낸 것이다.
도 5는 실험예 5의 결과를 개략적으로 나타낸 것이다.
도 6a 및 도 6b는 실험예 6의 결과를 개략적으로 나타낸 것이다.
도 7a 및 도 7b는 실험예 7의 결과를 개략적으로 나타낸 것이다.
이하, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시형태를 들어 상세히 설명한다. 본 발명의 실시형태는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 더욱 완전하게 설명하기 위해서 제공되는 것이다. 따라서, 본 발명의 실시형태는 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 이하 설명하는 실시형태로 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 “포함”한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성요소를 더 포함하는 것을 의미한다.
본 발명의 명세서 전체에서, 어떤 단계가 다른 단계와 “상에” 또는 “전에” 위치하고 있다고 할 때, 이는 어떤 단계가 다른 단계와 직접적 시계열적인 관계에 있는 경우뿐만 아니라, 각 단계 후의 혼합하는 단계와 같이 두 단계의 순서에 시계열적 순서가 바뀔 수 있는 간접적 시계열적 관계에 있는 경우와 동일한 권리를 포함할 수 있다.
본 발명의 명세서 전체에서 사용되는 정도의 용어 “약”, “실질적으로” 등은 언급된 의미에 고유한 제조 및 물질 허용 오차가 제시될 때 그 수치에서 또는 그 수치에 근접한 의미로 사용되고, 본 발명의 이해를 돕기 위해 정확하거나 절대적인 수치가 언급된 개시 내용을 비양심적인 침해자가 부당하게 이용하는 것을 방지하기 위해 사용된다. 본원 명세서 전체에서 사용되는 용어 “~(하는) 단계” 또는 “~의 단계”는 “~를 위한 단계”를 의미하지 않는다.
본 발명은 사카로미세스 세레비지에부터 유래된 세포외소포 및 이의 용해물 중 하나 이상으로부터 분리된 유효성분을 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.
상기 화장료 조성물이 항노화, 피부재생, 피부탄력개선 또는 피부주름개선용인 것이 바람직하다.
본 발명에서는 효모배양액으로부터 서로 다른 2가지 분리 방법으로 효모유래 세포외소포와 이의 용해물을 확보하였다. 이를 인간섬유아세포에 처리하여 가장 우수한 콜라겐 합성능을 갖는 배양조건과 세포외소포 분리방법을 확정하였다.
세포외소포의 제조 방법으로써는 초원심분리 방법이 주로 이루어지고 있으나, 양산을 고려하였을 때 본 발명에서 사용한 한외여과막을 이용하는 것이 보다 바람직하며, 한외여과막의 컷오프 분자량을 단계적으로 설정하여 공정을 구축한다면 입자사이즈별 세포외소포를 얻는 등, 세분화된 제품화가 가능할 것이다.
본 발명에서 분리한 세포외소포는 30~200 nm에 해당하는 것으로, 효모유래 세포외소포는 천연유래 나노구조체라 볼 수 있다. 효모유래 세포외소포는 그 자체로 피부 주름 예방 및 개선 효과가 있음을 확인하여 제품으로 활용 가능하다.
또한, 나노크기의 구조체는 주름을 제거하거나 노화를 방지하는 기능을 하는 생리활성물질과 쉽게 결합하는 특징이 있다. 이러한 나노구조체를 전달체 역할로써 화장품에 응용하여 나노화장품이 개발되고 있으며, 크기가 피부 세포의 간격보다 훨씬 작기 때문에 피부에 쉽게 흡수된다. 즉, 나노 구조체는 화장품의 성분을 피부내로 또는 세포내로 또는 세포외소포 내로 쉽게 전달하는 전달체 역할을 할 수 있다.
이러한 나노 구조체를 전달체로서 이용하여, 유효성분을 효모유래 세포외소포에 넣으면, 더 많은 제품으로 파생 가능할 것이다. 예를 들어, 효모 배양시 전달체를 통해 유효성분을 첨가하여 자연적으로 유효성분을 캡슐화하는 방법이나, 초음파 처리를 통해 순간적으로 세포외소포의 구조적 변화를 유도하여 인위적으로 유효성분을 캡슐화하는 방법을 사용할 수 있다.
이하, 본 발명의 내용에 대해 하기 실시예 또는 실험예를 통해 예시적으로 보다 상세히 설명하고자 한다.
(비교예 1~8) 효모배양여과액
효모(Saccharomyces cerevisiae RD-03 RI-SC(C) (KCTC SD1359))를 YM Broth에 접종하여 27℃ 및 37℃에서 8, 16, 24, 48 시간 동안 교반 배양(Shaking incubation)시킨 후, 4℃, 4000 rpm, 20 min 조건으로 원심분리하고, 상층액을 0.22 ㎛ PES로 여과하여 비교예 1~8을 제조하였다.
(비교예 9~16) 분리시약을 이용한 효모유래 세포외소포 용액
비교예 1~8의 효모배양 여과액과 총 엑소좀 분리시약(Total exosome isolation reagent)을 반응시킨 뒤, 4℃, 10,000 rpm, 1 hr 조건으로 원심분리하여 상층액을 제거하고, 세포외소포 펠렛을 확보하였다. 인산염 완충액으로 재현탁하여 비교예 9~16을 제조하였다.
(비교예 17~24) 분리시약을 이용한 효모유래 세포외소포 용해물
비교예 1~8의 효모배양 여과액과 총 엑소좀 분리시약을 반응시킨 뒤, 4℃, 10,000 rpm, 1 hr 조건으로 원심분리하여 상층액을 제거하고, 세포외소포 펠렛을 확보하였다. 증류수로 재현탁하고 5분 간격으로 3회 음파(Sonication) 처리하여 비교예 17~24를 제조하였다.
상기 비교예 1~24의 배양 조건을 아래 표 1에 나타내었다.
비교예# | 구분 | 배양온도 (℃) | 배양시간 (hr) |
1 | 효모배양 여과액 |
27 | 8 |
2 | 16 | ||
3 | 24 | ||
4 | 48 | ||
5 | 37 | 8 | |
6 | 16 | ||
7 | 24 | ||
8 | 48 | ||
9 | 시약분리 세포외소포 (IR-EVsol) |
27 | 8 |
10 | 16 | ||
11 | 24 | ||
12 | 48 | ||
13 | 37 | 8 | |
14 | 16 | ||
15 | 24 | ||
16 | 48 | ||
17 | 시약분리 세포외소포 용해물 (IR-EVlys) |
27 | 8 |
18 | 16 | ||
19 | 24 | ||
20 | 48 | ||
21 | 37 | 8 | |
22 | 16 | ||
23 | 24 | ||
24 | 48 |
(실시예 1) 한외여과를 이용한 효모유래 세포외소포 용액
효모(Saccharomyces cerevisiae RD-03 RI-SC(C) (KCTC SD1359))를 YM Broth에 접종하여 27℃에서 48시간 동안 교반 배양시킨 후, 4℃, 4000 rpm, 20 min 조건으로 원심분리하고, 상층액을 0.22 ㎛ PES 여과하여 효모배양 여과액을 제조하였다. 40 nm 한외여과장치로 여과하여 여액을 제거하였다. 효모배양 여과액 대비 1/10 양의 증류수를 사용하여 40 nm 한외여과장치에 의해 걸러진 EV를 회수하고, 0.22 ㎛ PES로 여과하여 실시예 1을 제조하였다.
(실시예 2) 한외여과를 이용한 효모유래 세포외소포 용해물
상기 실시예 1에서 얻어진 세포외소포 용액을 5분 간격으로 3회 음파 처리하여 실시예 2를 제조하였다. 이러한 세포외소포 용해물에 대한 투과전자현미경 이미지를 도 1에 나타내었다.
(실험예 1) 단백질 함량 평가 (비교예 1~24)
효모 배양 조건에 따른 총 단백질 함량을 비교하기 위해 비교예 1~24를 시료로 BCA assay을 수행하였다.
아래 표 2에 나타낸 바와 같이, 효모배양 여과액 형태인 비교예 1~8의 단백질 함량이 가장 높았으며, 배양시간이 길수록 단백질 함량이 감소하는 경향을 보아 배지 성분의 영향임을 확인하였다. 비교예 9~24은 단백질 함량은 100 ㎍/ml 미만으로, 세포외소포 분리시 배지성분을 포함한 대부분의 단백질이 제거됨을 확인하였다.
비교예 | 총 단백질 함량 (㎍/ml) |
1 | 2170.56 |
2 | 1995.65 |
3 | 1840.28 |
4 | 1795.11 |
5 | 2143.35 |
6 | 1794.31 |
7 | 1786.45 |
8 | 1789.47 |
9 | 44.74 |
10 | 39.84 |
11 | 87.89 |
12 | 95.30 |
13 | 65.11 |
14 | 99.52 |
15 | 72.54 |
16 | 117.74 |
17 | 32.16 |
18 | 57.56 |
19 | 52.99 |
20 | 68.75 |
21 | 49.03 |
22 | 33.00 |
23 | 43.04 |
24 | 61.30 |
(실험예 2) 섬유아세포 증식능 평가 (비교예 9~24)
노화가 진행됨에 따라 콜라겐과 엘라스틴 발현을 담당하는 섬유아세포의 수와 기능이 감소한다. 인간유래 섬유아세포(Human Dermal Fibroblast)를 플레이트에 24시간 배양한 뒤, 비교예 9~24를 시료로 처리하여 24시간 배양하였다. MTT reagent을 처리하여 무처리군 대비 시료처리에 의한 섬유아세포의 증식능을 계산하였다.
도 2에 도시된 바와 같이, 27℃, 48시간 효모 배양액에서 분리한 세포외소포 용해물인 비교예 20 처리군에서 가장 높은 세포증식능을 확인하였으며, 0.01~0.5% 처리군에서 농도 의존적인 결과를 나타냈다.
(실험예 3) 콜라겐 합성능 평가 (비교예 12 및 20; 실시예 1 및 2)
노화가 진행됨에 따라 콜라겐과 엘라스틴 발현을 담당하는 섬유아세포의 기능이 감소한다. 분자량이 큰 콜라겐은 피부층으로부터 흡수되는 것은 거의 불가능하며, 피부세포에서 생합성되는 것이 가장 효과적이다. 콜라겐은 세포 내에서 프로콜라겐(procollagen)으로 합성된 후, 세포외로 분비되어 콜라겐 섬유로 중합한다. 세포외로 분비된 PIP(Procollagen Type I C-terminal Peptide)을 ELISA(Enzyme-linked immuosorbent assay)로 확인하여 인간유래 섬유아세포에서 시료 처리에 의한 콜라겐 합성능을 평가하였다.
도 3a 및 도 3b에 도시된 바와 같이, 비교예 12와 비교예 20은 콜라겐 합성능을 높았고, 실시예 2가 보다 높은 것으로 확인되었다.
(실험예 4) Ergosterol 확인시험 (TLC)
Ergosterol은 프로비타민D라고도 하며, 효모, 버섯류 등 균류에 들어있는 성분 중 하나로, 효모 EV membrane marker로 볼 수 있다. Ergosterol 존재 유무를 박층크로마토그래프(Thin layer chromatograph)법을 이용하여 확인하였다. 실시예 2를 동결건조하여 용매를 제거한 뒤, 메탄올에 현탁하고, 원심분리하여 상층액 100㎕씩을 점적하였다. 비교를 위해 Ergosterol 표준품을 메탄올에 녹여 점적하고, 전개용액에 전개한 뒤, UV 254nm 조사시 표준품과 동일한 Rf값을 갖는 반점이 형성되는지 확인하였다.
도 4에 나타낸 TLC 결과에서 보듯이, 실시예 2는 Ergosterol 표준품의 Rf와 동일한 Rf값을 갖는 반점을 형성하여 Ergosterol의 존재를 확인하였다.
(실험예 5) 단백질 패턴분석(SDS-PAGE/Gel Staining)
세포외소포를 구성하는 단백질 패턴을 확인하기 위해 SDS-PAGE 및 Brilliant Blue Gel Staining을 진행하였다. 실시예 2를 동결건조한 뒤 증류수에 현탁하여 젤(gel)에 로딩하고, 10~180 kDa 및 40~300 kDa의 두 가지 단백질 마커(protein marker)를 사용하여 단백질 패턴을 분석하였다.
도 5에서 보듯이, 실시예 2는 60~75 kDA 및 100~180 kDa의 단백질로 이루어져 있음을 확인하였다.
(실험예 6) 입자분포 및 농도분석(Nano tracking Analysis)
실시예 1 및 2에 존재하는 세포외소포의 입자분포와 농도를 확인하기 위해 나노입자추적분석기(NS300)를 이용해 분석하였다.
도 6a 및 도 6b에 도시된 바와 같이, 실시예 1과 2의 평균 입자 크기는 150~220 nm로 확인되었으며, 입자 농도는 약 1 x 108 ~ 1 x 1010 particles/ml로 확인되었다.
(실험예 7) 제타전위 분석(Zetapotential Analysis)
실시예 1 및 2에 존재하는 세포외소포 입자의 분산 안정성를 확인하기 위해 제타전위입도분석기를 이용해 분석하였다.
도 7a 및 도 7b에 도시된 바와 같이, 실시예 1과 2의 제타전위는 -19.7 mV ~ -21 mV로 확인되어, 분산도는 안정함을 확인하였다.
상기 화장료 조성물은 부틸렌글리콜, 헥산디올, 에틸헥실글리세린 및 페녹시에탄올로부터 선택된 1종 이상의 첨가제를 추가로 포함할 수 있다. 상기 첨가제는 후속하는 제형의 형성을 위해 필요하며, 이에 제한되는 것이 아니다.
상기 화장료 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 맛사지크림, 에센스, 팩, 젤, 로션, 연고, 패치 및 분무제로 이루어지는 군으로부턴 선택되는 제형일 수 있으나, 이에 제한되는 것이 아니다.
또한, 본 발명의 사카로미세스 세레비지에부터 유래된 세포외소포 및 이의 용해물 중 하나 이상으로부터 분리된 유효성분을 포함하는 화장료 조성물을 이용하여, 치료용을 제외한 포유동물 피부의 상태를 개선하는 미용방법에 사용될 수 있다.
상기 미용방법은, (a) 상기 화장료 조성물을 포유동물의 피부에 직접 도포하는 것, (b) 상기 화장료 조성물이 도포되거나 침적된 패취, 마스크팩 또는 마스크시트를 포유동물의 피부에 접촉 또는 부착하는 것, 또는 상기 (a) 및 (b)를 순차적으로 진행하는 것이 바람직하다.
또한, (c) 상기 (b) 단계 이후에 상기 패취, 마스크팩 또는 마스크시트를 상기 포유동물의 피부로부터 제거하고, 상기 화장료 조성물을 포유동물의 피부에 도포하는 단계를 더 포함하는 것이 바람직하다.
이상에서 본 발명의 실시예에 대하여 상세하게 설명하였지만 본 발명의 권리범위는 이에 한정되는 것은 아니고, 청구범위에 기재된 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 다양한 수정 및 변형이 가능하다는 것은 당 기술분야의 통상의 지식을 가진 자에게는 자명할 것이다.
Claims (13)
- 사카로미세스 세레비지에부터 유래된 세포외소포 및 이의 용해물 중 하나 이상으로부터 분리된 유효성분을 포함하는 화장료 조성물.
- 제 1 항에 있어서, 상기 효모가 Saccharomyces cerevisiae RD-03 RI SC(C) (기탁번호: KCTC SD1359)인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제 1 항에 있어서, 상기 화장료 조성물이 항노화, 피부재생, 피부탄력개선 또는 피부주름개선용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제 1 항에 있어서, 상기 세포외소포 또는 이의 용해물이 초원심분리 또는 한외여과막으로 분리된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제 1 항에 있어서, 상기 세포외소포 또는 이의 용해물이 한외여과막으로 분리된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제 1 항에 있어서, 상기 세포외소포의 크기가 30~200 nm인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제 1 항에 있어서, 상기 화장료 조성물이 부틸렌글리콜, 헥산디올, 에틸헥실글리세린 및 페녹시에탄올로부터 선택된 1종 이상의 첨가제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제 1 항에 있어서, 상기 화장료 조성물이 화장수, 영양크림, 맛사지크림, 에센스, 팩, 젤, 로션, 연고, 패치 및 분무제로 이루어지는 군으로부턴 선택되는 제형인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 세포외소포 또는 이의 용해물의 유효성분을 피부 또는 세포 또는 세포외소포 내로 전달하기 위한 제 1 항에 따른 세포외소포 전달체.
- 제 9 항에 따른 세포외소포 전달체를 이용하여 상기 유효성분을 효모 배양시 세포외소포 내로 투입하여 자연적으로 유효성분을 캡슐화하거나, 상기 유효성분이 효모 배양시 세포외소포 내로 투입된 후 초음파 처리를 통해 인위적으로 세포외소포 내에서 캡슐화하는 방법.
- 사카로미세스 세레비지에부터 유래된 세포외소포 및 이의 용해물 중 하나 이상으로부터 분리된 유효성분을 포함하는 화장료 조성물을 이용하여, 치료용을 제외한 포유동물 피부의 상태를 개선하는 미용방법.
- 제 11 항에 있어서, (a) 상기 화장료 조성물을 포유동물의 피부에 직접 도포하는 것, (b) 상기 화장료 조성물이 도포되거나 침적된 패취, 마스크팩 또는 마스크시트를 포유동물의 피부에 접촉 또는 부착하는 것, 또는 상기 (a) 및 (b)를 순차적으로 진행하는 것을 포함하는, 미용방법.
- 제 12 항에 있어서, (c) 상기 (b) 단계 이후에 상기 패취, 마스크팩 또는 마스크시트를 상기 포유동물의 피부로부터 제거하고, 상기 화장료 조성물을 포유동물의 피부에 도포하는 단계를 더 포함하는, 미용방법.
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