KR20230000893A - 항 광노화, 진정 및 쿨링 효과를 가지는 발효 조성물 및 그 제조방법과 응용 - Google Patents
항 광노화, 진정 및 쿨링 효과를 가지는 발효 조성물 및 그 제조방법과 응용 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 항 광노화, 진정 및 쿨링 효과를 가지는 발효 조성물 및 그 제조방법과 응용을 공개하였다. 상기 발효 조성물은 두충:복숭아꽃:진정 조성물 = 20 내지 50 : 0.5 내지 5 : 50 내지 100의 질량비로 구성되며, 진정 조성물은 복숭아 수지 : 선인장 : 석곡을 3:1:1 또는 3.5:2:2의 비율로 포함한다. 본 발명이 제공하는 발효 조성물은 광노화 손상, 특히 빛이 가지는 열량과 빛 에너지가 열 에너지로 변환되는 두 가지 측면에서 야기되는 광노화 손상을 방지할 수 있고, 동시에 상기 조성물은 자유라디칼을 제거하고 염증 인자의 방출을 억제함으로써 태양광 복사가 피부에 초래하는 간접 손상을 감소시킬 수 있다. 본 발명에서 사용되는 발효 방식은 전통 추출 공정으로 인한 활성 성분의 손실을 피할 수 있고, 조성물의 시너지 작용을 통하여 피부를 다방면으로 보호하고, 항 광노화 효과를 향상시키며, 피부 건조, 거칠어짐, 다크닝, 노화 증상을 개선할 수 있다.
Description
본 발명은 화장품 분야에 해당하며, 구체적으로는 항 광노화, 진정 및 쿨링 효과를 가지는 발효 조성물 및 그 제조방법과 응용에 관한 것이다.
자외선 차단제는 빛의 흡수, 반사 또는 산란 작용을 이용하여 특정 자외선으로 인한 손상으로부터 피부를 보호하거나 또는 제품 자체를 보호하기 위하여 화장품에 첨가하는 물질을 말한다. 자외선 차단에 대한 소비자의 인식과 관심이 높아짐에 따라, 자외선 차단 제품은 실외 또는 여름 등 특정 상황에만 국한되거나 자외선 차단 측면에만 국한되지 않으며, 대중은 다방면에서의 광 차단을 보다 중시하게 되었다.
그러나, SPF 값이 높은 제품도 여전히 100%의 보호를 제공하지는 못하며, 예컨대 현대인이 직면한 블루라이트 손상 및 투과력이 매우 강한 자외선 복사 등으로 인한 상해 등에 대해서는 자외선 차단 제품의 자외선 차단제 또한 매우 우수한 방지 작용을 하지는 못하고 있다. 또한, 비록 자외선 차단제가 자외선을 흡수, 반사, 굴절시킬 수는 있으나, 광 조사에 따라 발생하는 열량에는 속수무책이며, 유기 자외선 차단제의 경우, 일부 자외선 차단제는 주로 UVB를 흡수하고 일부는 주로 UVA를 흡수하며, 일부는 넓은 스펙트럼의 자외선 차단제에 해당하여 UVB를 흡수할 수 있고 UVA도 흡수할 수 있다. 이러한 유형의 자외선 차단제는 흡수한 자외선의 광 에너지를 열 에너지로 전환할 수도 있다.
광노화(photoaging)는 과도한 햇빛 조사로 인해 피부의 특징적 변형을 일으키는 복잡한 과정으로서, 주로 피부 건조, 늘어짐, 주름, 색소 증가 또는 소실 및 모세혈관 확장 등으로 나타난다. 광노화로 인한 손상은 주로 DNA 손상, 미토콘드리아 손상, 세포 내 생물 거대 분자(단백질, 인지질 등)의 과산화와 세포 외 기질(콜라겐, 탄성섬유)의 분해, 염증성 캐스케이드 및 면역 억제 등을 포함한다. 자외선이 유발할 수 있는 광노화 이외에도, VL(가시광선)과 IR(적외선) 또한 광노화를 유발할 수 있음을 밝히는 연구가 증가하는 추세이다. 예컨대, 대량의 활성 산소(reactive oxygen species; ROS)는 산화 스트레스 반응을 유발하고 기질금속단백질분해효소인 MMP(matrix metalloproteinase)-1과 MMP-9의 발현을 촉진할 수 있으며, 염증세포의 침윤과 기질 콜라겐의 분해를 초래하여 피부 노화를 유발할 수 있고, VL 조사가 유발한 색소 침착은 피부 다크닝 노화를 야기한다. 또한, 광 조사로 인해 유발된 피부 온도 상승 및 자외선 차단제의 에너지 전환 과정에서 생성된 자유라디칼과 열 에너지 또한 피부 광노화를 더욱 촉진한다.
최종 당산화물(Advanced glycation end products, AGEs)은 단백질, 지질, 핵산 등의 거대분자 물질의 유리아미노와 환원당이 비효소 당화반응에 의해 생성한, 쉽게 분해되지 않는 갈색의 거대분자 산물이다. 연구 결과, AGEs가 광노화된 피부에 대량으로 축적되며 광노화의 여러 단계에서 중요한 작용을 일으킨다는 것이 밝혀졌다. 그러나, AGEs는 대식세포, 섬유아세포 등의 세포에 의해 식균된 후 리소좀 또는 유비퀴틴-프로테아솜에 의해 분해 및 제거될 수 있다.
두충은 중국 고유의 유명한 의약용 수목 종자로서, 여러 종류의 유효한 활성 성분을 포함하는데, 주로 플라보노이드, 클로로젠산, 이리도이드, 다당류, 폴리페놀, 페닐프로파노이드, 리그난 등의 화합물을 포함한다. 항산화, 자유라디칼 제거, 항노화, 유기체 기능 촉진, 항암 등에 사용될 수 있다. 연구 결과, 두충은 햇빛을 차단하고, 광 조사가 피부에 야기하는 손상을 방지하는 효과를 가진다는 것이 밝혀졌다. 먼저, 두충은 적외선 방지 효과를 가지며, 적외선이 피부에 가하는 열량을 감소시킨다. 다음으로, 두충은 TRPV4 등의 온도 민감성 통로에 대한 조절 작용을 하며, 온도 민감성 통로를 자극함으로써 피부를 쿨링하는 효과를 발생시킨다. 일시적 수용체 전위(transient receptor potential; TRP) 통로는 비 전압 의존성 양이온 통로로서, 포유동물의 다양한 조직에서 광범위하게 발현되고, 예컨대 피부, 구강 등에서도 발현되며, 유기체의 여러 가지 중요한 생리 기능에 관여한다. TRPV1, TRPV4, TRPM8 등은 온도에 민감한데, 연구 결과 일부 중약 성분이 TRPM8의 기능을 조절하는 작용을 하고, 예컨대 대황과 황련 등은 효모열에 걸린 쥐의 체온을 낮출 수 있으며, 그러한 기능은 TRPV1과 TRPM8에 대한 유효한 조절과 관련될 수 있음이 발견되었다. 또한, 두충에 포함된 아우쿠빈(aucubin) 등의 유효 성분은 혈관을 확장시키고 열량 산실을 증가시켜 온도 감소 효과를 달성할 수 있다.
복숭아꽃은 장미과 낙엽교목인 복숭아나무의 꽃으로, 그 미용과 건강 보조 효과는 중국 전통 의학 사례에서도 광범위하게 응용되었다. 최초의 약제학 전문 저서인 <신농본초경>에서 복숭아꽃이 "사람의 안색을 좋게 하는" 효과가 있음을 언급하였고; <도경본초>에서는 "사람의 얼굴을 윤택하게 하고, 보습으로 안색을 좋게 한다"라고 기록하였으며, 약왕 손사막의 미용방법에서도 복숭아꽃의 효과를 매우 높게 평가하고 있다. 현대의학과 영양학 연구에 의해서도 복숭아꽃이 폴리페놀, 다당, 카로티노이드와 각종 비타민, 아미노산 및 미량원소 등의 화학성분을 풍부하게 함유하며 비교적 우수한 약용 및 영양 가치를 가짐이 밝혀졌다.
종래 기술에서 자외선 차단 제품이 자외선으로부터 보호 및 자외선으로 초래되는 광노화 현상만을 케어할 뿐, 빛의 조사로 인한 피부의 간접적 손상, 예컨대 광조사가 직접적으로 초래하는 열량과 자외선 차단제의 에너지 전환 과정에서 생성되는 열량, 직접적 경로와 간접적 경로를 통하여 피부에 야기되는 열 손상, 및 VL 및 IR이 피부에 야기하는 산화 스트레스로 인한 손상 등 여러 측면에서 피부의 광노화를 촉진하는 현상에 대해서는 체계적으로 케어하지 못했다는 문제점을 해결하고자 하는 것이다. 상기 발효 조성물은 피부를 쿨링할 수 있고, 피부의 열노화를 막을 수 있으며, VL과 IR 등이 야기하는 피부 광노화 등을 방지할 수 있다. 또한, 초음파 추출은 추출 효율을 향상시키고, 유산간균을 파열시켜, 피부에 유익한 성분을 방출시킬 수 있다. 피부 길항 작용을 유발하는 세포벽 등의 물질을 제거하고 피부와의 친화력을 높인다. 자외선 차단 제품의 사용이 보다 광범위해지고 사용 시간이 길어짐에 따라, 상기 발효 조성물은 민감함을 진정시키고 자극을 완화하는 효과와 함께, 그을린 피부로 인한 불편함을 감소시키는 기능을 동시에 구비한다. 상기 발효 조성물은 피부의 광노화를 근본적으로 방지할 수 있을 뿐 아니라, 그을린 피부를 진정시키고 AGEs의 축적을 감소시키며, 피부 톤을 밝게 하고, 일광에 의한 탄력 조직의 변성을 감소시킬 수 있다. 신선한 식물, 저온 건조 및 발효 방법을 사용하여 피부에 유익한 활성 성분을 보다 많이 유지할 수 있고 원료의 이용률을 높일 수 있다.
본원은 아래와 같은 기술적 해결 방법으로 구현된다:
본 발명의 일 양태는 항 광노화, 진정 및 쿨링 효과를 가지는 발효 조성물을 제공하며, 이는 20 내지 50 : 0.5 내지 5 : 50 내지 100의 질량비를 가지는 두충, 복숭아꽃 및 진정 조성물을 분쇄, 발효 및 추출하여 상기 발효 조성물을 제조하는 방법으로 수득되고;
상기 진정 조성물은 복숭아 수지, 선인장 및 석곡의 조합이며; 상기 조성물의 질량비는 복숭아 수지, 선인장 및 석곡이 3:1:1 또는 3.5:2:2이고; 상기와 같이 제조된 진정 조성물을 사용한다.
바람직하게는, 상기 두충 : 복숭아꽃 : 진정 조성물의 질량비는 30 내지 40 : 1 내지 3 : 60 내지 90이다.
보다 바람직하게는, 상기 두충:복숭아꽃:진정 조성물의 질량비는 35:2:75 또는 30:2:80이다.
바람직하게는, 상기 제조 방법은 구체적으로 다음과 같다:
1) 두충, 복숭아꽃 및 진정 조성물을 분류 및 세척하고 저온 건조한 후 비율에 따라 칭량하는 단계;
2) 복숭아 수지, 선인장 및 석곡을 분쇄한 후 탈이온수에 첨가하여 침지시키고 2시간 교반하는 단계;
3) 두충과 복숭아꽃을 분쇄한 후 2)에 첨가하여 습식 초미세분쇄를 실시하여 균질액을 얻는 단계;
4) 3)에서 얻은 균질액에 균액을 접종하여 균일한 속도로 교반하며 발효시키는 단계;
5) 발효가 완성된 후 초음파 추출, 여과 및 멸균하고, 여과액을 원심분리하여 상청액을 얻는 단계;
6) 5)에서 얻은 상청액을 상이한 공극 크기를 갖는 미세여과막을 순차적으로 사용하여 여과하고, 여과액을 수집하여, 상기 발효 조성물을 얻는 단계;를 포함하며,
보다 바람직하게는:
상기 단계 1)에서의 저온 건조 조건은 50℃ 미만에서의 건조이고; 상기 건조 방법은 오븐 건조, 냉동 건조, 진공 건조 중 하나 또는 두 가지의 병용을 포함하나, 이에 제한되지 아니하며;
상기 단계 2)에서의 탈이온수의 용량은 두충, 복숭아꽃 및 진정 조성물의 총 질량의 5 내지 20배이고;
상기 단계 3)에서, 상기 습식 초미세분쇄는 콜로이드 밀 또는 균질기를 사용하여 진행한다.
보다 바람직하게는:
상기 단계 4)에서, 접종 균액은 유산간균, 유산균 및 효모균 중 하나 또는 두 가지의 병용을 포함하나, 이에 제한되지 아니하며;
상기 단계 4)에서, 균액 접종량은 균질액 질량의 5% 내지 10%이고, 균 함량은 ≥1.0Х1011 cfu/g이며, 발효 온도는 28 내지 35℃이고, 발효 시간은 12 내지 48시간이다.
보다 바람직하게는:
상기 단계 6)에서의 미세여과막의 공극 크기 범위는 0.1 내지 10 μm이며, 바람직하게는 10 μm, 0.45 μm 및 0.2 μm이다.
보다 구체적인 일부 구체예에서, 발효 조성물은 다음과 같은 공정으로 제조된다:
(1) 두충, 복숭아꽃 및 진정 조성물을 분류 및 세척하고 저온 건조한 후 비율에 따라 칭량하는 단계;
(2) 복숭아 수지, 선인장 및 석곡을 분쇄한 후 단계 1)에서 칭량한 두충, 복숭아꽃 및 진정 조성물의 총 질량의 20배의 탈이온수를 첨가하여 침지시키고 2시간 교반하는 단계;
(3) 두충과 복숭아꽃을 분쇄한 후 2)에 첨가하여 습식법으로 초미세분쇄를 실시하여 균질액을 얻는 단계;
(4) 3)에서 얻은 균질액에 균질액 질량의 10%의 균액을 접종하고, 35℃에서 48시간 교반하며 발효시키는 단계로서, 균액은 유산간균이며, 균액의 균 함량은 ≥1.0Х10 11 cfu/g이고;
(5) 발효가 완성된 후 20분간 초음파 추출하고 여과, 멸균하고, 여과액을 원심분리하여 상청액을 얻는 단계;
(6) 5)에서 얻은 상청액을 10 μm, 0.45 μm 및 0.2 μm의 공극 크기를 갖는 미세여과막을 순차적으로 사용하여 여과하고, 여과액을 수집하여, 상기 발효 조성물을 얻는 단계.
상기 단계 1)의 건조 방법은 냉동 건조이고;
상기 단계 3)에서, 상기 습식 초미세분쇄는 균질기를 사용하여 실시한다.
상기 복숭아 수지, 선인장 및 석곡의 질량비는 3.5:2:2이다.
본 발명의 또다른 양태는 하기 단계를 포함하는, 발효 조성물의 제조 방법을 제공한다:
1) 두충, 복숭아꽃 및 진정 조성물을 분류 및 세척하고 저온 건조한 후 비율에 따라 칭량하는 단계;
2) 복숭아 수지, 선인장 및 석곡을 분쇄한 후 탈이온수에 첨가하고 침지시키고 2시간 교반하는 단계;
3) 두충과 복숭아꽃을 분쇄한 후 2)에 첨가하여 습식 초미세분쇄를 실시하여 균질액을 얻는 단계;
4) 3)에서 얻은 균질액에 균액을 접종하여 균일한 속도로 교반하며 발효시키는 단계;
5) 발효가 완성된 후 초음파 추출, 여과 및 멸균하고, 여과액을 원심분리하여 상청액을 얻는 단계;
6) 5)에서 얻은 상청액을 상이한 공극 크기를 갖는 미세여과막을 순차적으로 사용하여 여과하고, 여과액을 수집하여, 상기 발효 조성물을 얻는 단계;
상기 단계 1)에서의 저온 건조 조건은 50℃ 미만에서의 건조이고; 상기 건조 방법은 오븐 건조, 냉동 건조, 진공 건조 중 하나 또는 두 가지의 병용을 포함하나, 이에 제한되지 아니하며;
상기 단계 2)에서의 탈이온수의 용량은 두충, 복숭아꽃 및 진정 조성물의 총 질량의 5 내지 20배이고;
상기 단계 3)에서, 상기 습식 초미세분쇄는 콜로이드 밀 또는 균질기를 사용하여 진행하며;
상기 단계 4)에서, 접종 균액은 유산간균, 유산균 및 효모균 중 하나 또는 두 가지의 병용을 포함하나, 이에 제한되지 아니하고; 균액 접종량은 균질액 질량의 5% 내지 10%이고, 균 함량은 ≥1.0Х1011 cfu/g이며, 발효 온도는 28 내지 35℃이고, 발효 시간은 12 내지 48시간이며;
상기 단계 6)에서의 미세여과막의 공극 크기 범위는 0.1 내지 10 μm이며, 바람직하게는 10 μm, 0.45 μm 및 0.2 μm이다.
바람직하게는, 상기 두충, 복숭아꽃, 및 복숭아 수지, 선인장 및 석곡으로 구성된 진정 조성물의 질량비는 30 내지 40 : 1 내지 3 : 60 내지 90이고;
상기 복숭아 수지, 선인장 및 석곡의 질량비는 3:1:1 또는 3.5:2:2이다.
본 발명의 또다른 양태는 상기 발효 조성물을 함유하는 화장품을 제공하며; 상기 화장품은 액제, 에멀젼, 스프레이, 스프레이, 크림, 마스크팩, 리퀴드 파운데이션을 포함하나, 이에 제한되지 아니한다.
선행 기술과 비교하면, 본원은 아래와 같은 기술적 효과를 획득할 수 있다:
총 농도가 동일할 경우, 본원이 제공한 발효 조성물의 DPPH 제거율이 단일 성분의 제거율보다 높으며, 이는 세 가지의 원료가 조합 방식을 통하여 보다 우수한 피부 항산화 효과를 얻을 수 있음을 설명한다. 또한, 본 발명은 물을 용매로 사용하며, 유기 시약의 도입을 피하고, 신선한 식물을 원료로 사용하며, 저온 건조 방법 및 발효 공정을 통하여 보다 많은 활성 성분을 보유한다. 또한, 발효 후 세포벽, 세포막 등의 성분을 제거함으로써 피부와의 친화력을 증가시키고, 화장품원료로 사용되었을 때 초래될 수 있는 자극를 줄일 수 있다. 기존의 방법과 비교하면, 추출 온도는 낮고, 효율은 높다.
또한, 본 출원의 진정 조성물에 포함된 복숭아 수지, 선인장, 석곡은 모두 다당류 성분을 풍부하게 포함하고 있어 매우 강한 피부 보습 효과를 가지며, 피부 장벽의 손상을 방지할 수 있다. 연구 결과, 진정 조성물이 매우 강한 항알러지, 항자극 효과를 가지고 있으며, 화장품 또는 기타 요소가 피부에 초래하는 알러지 또는 자극 증상을 완화시킬 수 있음이 발견되었다.
도 1은 실험예 3에서 발효 조성물을 사용한 후의 MMP-1의 발현 억제율(%)을 나타낸다.
도 2는 실험예 4에서 발효 조성물을 사용한 후의 AGEs의 생성 억제율(%)을 나타낸다.
도 3은 실험예 6에서 발효 조성물 사용 전후의 피부 탄력 회복 비율(R2) 값을 나타낸다.
도 4는 실시예 6에서 발효 조성물을 사용한 후 경피 수분 손실(TEWL) 값의 감소율(%) 그래프이다.
도 5는 실험예 6에서 발효 조성물 사용 전후의 피부결을 나타낸 그래프이다.
도 2는 실험예 4에서 발효 조성물을 사용한 후의 AGEs의 생성 억제율(%)을 나타낸다.
도 3은 실험예 6에서 발효 조성물 사용 전후의 피부 탄력 회복 비율(R2) 값을 나타낸다.
도 4는 실시예 6에서 발효 조성물을 사용한 후 경피 수분 손실(TEWL) 값의 감소율(%) 그래프이다.
도 5는 실험예 6에서 발효 조성물 사용 전후의 피부결을 나타낸 그래프이다.
아래에서는 실시예를 통하여 본원의 실시 방식을 상세히 설명하고, 이로써 본원에서 기술적 수단을 어떻게 응용하여 기술적 과제를 달성할 것인지에 대한 구현 과정을 충분히 이해하고 이에 따라 실시한다.
특별한 설명이 없는 경우, 본원에서 사용된 원료, 장비 등은 모두 당업계에서 일반적으로 사용되는 원료, 장비이며 모두 시중에서 구입한 제품이다. 특별한 설명이 없는 경우, 본원에서 사용한 방법은 모두 당업계의 통상적인 방법이다.
본원에는 실시 가능한 여러 가지의 다른 기술적 해결 방법이 존재하나, 본 명세서에서 일일이 열거하지는 않으며, 본원의 청구항에서 보호를 청구하는 기술적 해결 방법 또한 모두 실시 가능하다.
실시예
후술하는 본 발명의 실시예와 비교예에서, 항 광노화, 진정 및 쿨링 효과를 가지는 발효 조성물은 하기 공정에 의해 제조된다:
(1) 두충, 복숭아꽃 및 진정 조성물을 분류 및 세척하고 저온 건조한 후, 비율에 따라 칭량하는 단계;
(2) 복숭아 수지, 선인장 및 석곡을 분쇄한 후 단계 1)에서 칭량한 두충, 복숭아꽃 및 진정 조성물의 총 질량의 20배의 탈이온수를 첨가하여 침지시키고 2시간 교반하는 단계;
(3) 두충과 복숭아꽃을 분쇄한 후 2)에 첨가하여 습식 초미세분쇄를 실시하여 균질액을 얻는 단계;
(4) 3)에서 얻은 균질액에 균질액 질량의 10%의 균액을 접종하고, 35℃에서 48시간 교반하며 발효시키는 단계로서, 균액은 유산간균이며, 균액의 균 함량은 ≥1.0×1011 cfu/g이고;
(5) 발효가 완성된 후 초음파로 20분간 추출하고 여과 및 멸균하고, 여과액을 원심분리하여 상청액을 얻는 단계;
(6) 5)에서 얻은 상청액을 10 μm, 0.45 μm 및 0.2 μm의 공극 크기를 갖는 미세여과막을 순차적으로 사용하여 여과하고, 여과액을 수집하여, 상기 발효 조성물을 얻는 단계.
상기 단계 1)의 건조 방법은 냉동 건조이고;
상기 단계 3)에서, 상기 습식 초미세분쇄는 균질기를 사용하여 실시한다.
상기 복숭아 수지, 선인장 및 석곡의 질량비는 3.5:2:2이다.
표 1은 실시예 1 내지 12 및 비교예 1 내지 3의 각각의 발효 조성물의 조성비를 나타낸다(두충 : 복숭아꽃 : 진정 조성물의 조성비는 질량으로 계산됨). 표 1에 근거하여 상기 방법으로 각 실시예와 비교예의 발효 조성물을 제조하고, 얻어진 발효 조성물의 효과를 테스트하였다.
| 원료 구성(두충:복숭아꽃:진정 조성물, 질량 기준) | |
| 실시예 1 | 20:0.5:50 |
| 실시예 2 | 20:2:50 |
| 실시예 3 | 20:3.5:50 |
| 실시예 4 | 20:5:50 |
| 실시예 5 | 35:2:50 |
| 실시예 6 | 50:2:50 |
| 실시예 7 | 35:2:75 |
| 실시예 8 | 35:2:100 |
| 실시예 9 | 30:2:100 |
| 실시예 10 | 40:2:100 |
| 실시예 11 | 30:2:80 |
| 실시예 12 | 30:2:70 |
| 비교예 1 | 1:0:0 |
| 비교예 2 | 0:1:0 |
| 비교예 3 | 0:0:1 |
미발효군
본 발명의 이하 실험예에서의 미발효군은 다음과 같은 공정으로 제조하였다:
여기에서, 각 조성물의 비율은 균액 대신에 탈이온수를 사용한 것을 제외하고는 각 실시예 및 비교예와 일치하였다.
(1) 두충, 복숭아꽃 및 진정 조성물을 분류 및 세척하고 저온 건조한 후 비율에 따라 칭량하는 단계;
(2) 복숭아 수지, 선인장 및 석곡을 분쇄한 후 단계 1)에서 칭량한 두충, 복숭아꽃 및 진정 조성물의 총 질량의 20배의 탈이온수를 첨가하여 침지시키고 2시간 교반하는 단계;
(3) 두충과 복숭아꽃을 분쇄한 후 2)에 첨가하여 습식 초미세분쇄를 실시하여 균질액을 얻는 단계;
(4) 3)에서 얻은 균질액에 균질액 질량의 10%의 탈이온수를 첨가하고 48시간 교반하는 단계;
(5) 20분간 초음파 추출하고 여과 및 멸균하고, 여과액을 원심분리하여 상청액을 얻는 단계;
(6) 5)에서 얻은 상청액을 10 μm, 0.45 μm 및 0.2 μm 공극 크기를 갖는 미세여과막을 순차적으로 사용하여 여과하고, 여과액을 수집하여, 미발효 조성물을 얻는 단계,
상기 단계 1)에서의 저온 건조 방법은 냉동 건조이고;
상기 단계 3)에서, 상기 습식 초미세분쇄는 균질기를 사용하여 실시한다.
상기 복숭아 수지, 선인장 및 석곡의 질량비는 3.5:2:2이다.
블랭크군
본 발명의 이하 실험예에서의 블랭크군은 하기 공정에 의해 제조하였다:
(1) 일정량의 탈이온수를 취하는 단계;
(2) 탈이온수에 탈이온수 질량의 10%의 균액을 첨가하고, 35℃에서 48시간 교반하며 발효시키는 단계로서, 균액은 유산간균이며, 균액내 균 함량은 ≥1.0×1011 cfu/g이고;
(3) 발효가 완성된 후 20분간 초음파 추출, 여과 및 멸균하고, 여과액을 원심분리하여 상청액을 얻는 단계;
(4) 3)에서 얻은 상청액을 10 μm, 0.45 μm 및 0.2 μm의 공극 크기를 갖는 미세여과막을 순차적으로 사용하여 여과하고, 여과액을 수집하여, 상기 블랭크군을 얻는 단계.
실험예 1
세포 독성 테스트:
MTT assay는 살아있는 세포의 수를 측정하여, 세포 독성 또는 세포 증식을 검출할 때 널리 사용되는 실험 방법으로서, 그 검출 원리는 살아있는 세포의 미토콘드리아 내의 숙신산탈수소효소가 수용성의 황색염 MTT (3-(4,5-디메틸티아졸-2)-2, 5-디페닐테트라졸리움 브로미드)를 불수용성인 청색의 포르마잔으로 환원시키고 세포 내에 축적시키는 것으로서, 죽은 세포는 이러한 기능을 가지지 못한다. 생성된 결정 포르마잔은 일반적으로 DMSO(디메틸설폭사이드)에 첨가하여 용해한 후 흡광도를 측정한다. 구체적인 실험 방법은 96-웰 플레이트에 1Х104 개/웰의 밀도로 10%의 소 혈청을 함유한 DMEM 배지와 각질형성세포(HaCaT)를 각 100 μl씩 접종하고, 24시간 배양한 후 무혈청 배지로 교체하는 것이다. 무혈청 배지에 각각 상이한 농도의 조성물을 첨가하여 처리한 후 24시간 배양한다. 배지를 제거한 후, 20 μl의 MTT 용액으로 처리하고, 37℃에서 2시간 반응시킨다. MTT 용액을 제거한 세포에 200 μl의 이소프로판올을 첨가하고 30분간 가볍게 진탕하여 결정 포르마잔을 완전히 용해시키고, 570 nm에서 흡광도를 측정하여, 아래 공식에 따라 세포 생존율을 계산하였다.
블랭크 군은 발효 조성물을 첨가하지 않고 실험하였다. 표 2는 실시예 1 내지 12 및 비교예 1 내지 3에서 얻은, 발효 조성물의 세포 독성 결과를 나타낸다.
| 그룹 구분 | 실험 농도(μg/ml) | 세포 생존율(%) |
| 블랭크군 | 100 | |
| 실시예 1 | 50 | 96.01 |
| 100 | 96.27 | |
| 200 | 95.33 | |
| 실시예 2 | 50 | 96.64 |
| 100 | 95.87 | |
| 200 | 96.34 | |
| 실시예 3 | 50 | 97.16 |
| 100 | 97.31 | |
| 200 | 95.69 | |
| 실시예 4 | 50 | 96.61 |
| 100 | 95.14 | |
| 200 | 94.89 | |
| 실시예 5 | 50 | 97.07 |
| 100 | 96.78 | |
| 200 | 96.32 | |
| 실시예 6 | 50 | 97.77 |
| 100 | 97.36 | |
| 200 | 96.52 | |
| 실시예 7 | 50 | 97.18 |
| 100 | 96.64 | |
| 200 | 96.15 | |
| 실시예 8 | 50 | 97.02 |
| 100 | 96.48 | |
| 200 | 96.43 | |
| 실시예 9 | 50 | 97.12 |
| 100 | 96.87 | |
| 200 | 96.26 | |
| 실시예 10 | 50 | 96.98 |
| 100 | 96.38 | |
| 200 | 95.79 | |
| 실시예 11 | 50 | 97.58 |
| 100 | 96.85 | |
| 200 | 96.88 | |
| 실시예 11 | 50 | 96.98 |
| 100 | 96.29 | |
| 200 | 95.88 | |
| 비교예 1 | 50 | 96.22 |
| 100 | 96.04 | |
| 200 | 95.65 | |
| 비교예 2 | 50 | 96.56 |
| 100 | 95.32 | |
| 200 | 95.01 | |
| 비교예 3 | 50 | 96.32 |
| 100 | 95.69 | |
| 200 | 95.34 |
실험예 2
항산화 평가 테스트:
DPPH는 1,1-디페닐-2-트리니트로페닐히드라진이라고도 칭하며, 매우 안정적인 질소 중심의 자유라디칼로서, 그 무수에탄올 용액은 보라색을 나타내고, 자유라디칼 소거제를 첨가했을 때 자유라디칼 수가 감소하여, 흡광도가 낮을수록 용액의 색깔이 옅어지므로, 자유라디칼 소거 능력을 평가할 수 있다.
획득된 조성물을 피펫으로 40 μl 취하고, 다시 160 μl의 DPPH 에탄올 용액을 첨가한다(200 μg/ml). 균일하게 혼합한 후 실온의 차광 조건에서 30분간 반응시키고, 다시 517 nm에서 흡광도 A를 측정하고, 각 그룹마다 3개의 병렬 실험을 설정하여 평균값을 계산하였으며, 계산 방법은 다음과 같다:
소거율 % =[1-（A1-A2）/A0]Х100
식에서, A0은 각 발효 조성물을 첨가하지 않은 DPPH 용액의 흡광도이고;
A1은 각 발효 조성물을 첨가한 후의 DPPH 용액의 반응 후의 흡광도이며;
A2는 DPPH 용액과 각 발효 조성물의 혼합 후 반응 전의 흡광도이다.
표 3은 실시예 1 내지 12 및 비교예 1 내지 3에서 각 발효 조성물의 항산화 평가 테스트 결과를 나타낸다.
| 원료 구성(두충:복숭아꽃:진정 조성물, 질량 기준) | 평균 소거율(%) | |
| 실시예 1 | 20:0.5:50 | 61.96 |
| 실시예 2 | 20:2:50 | 63.34 |
| 실시예 3 | 20:3.5:50 | 63.78 |
| 실시예 4 | 20:5:50 | 63.86 |
| 실시예 5 | 35:2:50 | 65.54 |
| 실시예 6 | 50:2:50 | 66.11 |
| 실시예 7 | 35:2:75 | 72.68 |
| 실시예 8 | 35:2:100 | 68.43 |
| 실시예 9 | 30:2:100 | 69.22 |
| 실시예 10 | 40:2:100 | 66.86 |
| 실시예 11 | 30:2:80 | 72.13 |
| 실시예 12 | 30:2:70 | 69.76 |
| 비교예 1 | 1:0:0 | 51.97 |
| 비교예 2 | 0:1:0 | 56.12 |
| 비교예 3 | 0:0:1 | 52.26 |
상기의 표로부터 다음과 같은 점을 알 수 있다:
실시예 1 내지 12에서 얻은 발효 조성물의 DPPH 제거율은 모두 비교예 1 내지 3에서보다 높으며, 이는 세 가지의 원료가 조합되는 방식으로 보다 우수한 DPPH 제거 효과를 얻을 수 있음을 설명하고;
DPPH 제거율은 세 가지 원료와 모두 일정한 용량-반응 관계를 가지며, 질량 분율이 일정한 범위까지 증가하면, 상승 추세가 느려진다. 실시예 1, 2, 3, 4를 비교한 결과, 복숭아꽃의 질량 분율이 2와 5일 때의 DPPH의 제거율 차이가 크지 않음을 발견하였고; 실시예 2, 5, 6을 비교한 결과 두충의 질량 분율이 35, 50일 때의 DPPH 제거율 차이가 크지 않음을 발견하였으며; 실시예 5, 7, 8 및 9, 11, 12를 비교한 결과, 진정 조성물의 질량 분율이 75 및 80일 때의 제거율이 가장 우수함을 발견하였다. 따라서, DPPH 제거 능력과 경제적 효과 및 이점을 고려하면, 실시예 7(35:2:75)과 실시예 11(30:2:80)이 바람직하다.
전술한 내용을 종합하면, 세 가지 원료를 상이한 비율로 조합하였을 경우 대응되는 항산화 능력은 상이하며, 두충 : 복숭아꽃 : 진정 조성물의 질량비가 (30-40) : (1-3) : (60-90)인 것이 바람직하고, 두충:복숭아꽃:진정 조성물의 질량비가 35:2:75 및 30:2:80인 것이 보다 바람직하다.
실험예 3
MMP-1 유전자 발현 테스트:
MMP-1(Matrix metalloproteinase-1)은 콜라겐 분해를 담당하는 주효소로서, 일광 또는 적외선 조사 후 상향 조절될 수 있으며, 콜라겐의 분해는 광 노화의 중요한 지표이므로, MMP-1의 발현은 항 광노화 효과 평가를 위한 지표로 사용된다.
ELISA법을 사용하여 음성군(시료 첨가하지 않음, IR 조사 처리함), 블랭크군(조성물 첨가하지 않은 발효물, IR 조사 처리함), 실시예 7-1, 7-2(0.1%와 0.3%의 시료 첨가, IR 조사 처리함), 미발효 실시예 7-1, 미발효 실시예 7-2(미발효 조성물 0.1%, 0.3% 첨가, IR 조사 처리함), 실시예 11-1, 11-2(0.1%와 0.3%의 시료 첨가, IR 조사 처리함), 미발효 실시예 11-1, 미발효 실시예 11-2(발효 조성물 0.1%, 0.3% 첨가, IR 조사 처리함), 비교예 1-1, 1-2(0.1%, 0.3%의 시료 첨가, IR 조사 처리함), 비교예 2-1, 2-2(0.1%, 0.3%의 시료 첨가, IR 조사 처리함), 비교예 3-1, 3-2(0.1%, 0.3%의 시료 첨가, IR 조사 처리함)로부터 인간 MMP-1를 검출하였다. 테스트할 샘플(10X)를 웰당 100 μl로 12-웰 세포 플레이트에 첨가하고, 37℃, 5% CO2의 항온 배양기에서 72시간 배양하였다. 각각의 세포 플레이트는 모두 음성 대조군(세포+배지)으로 설정되며, 각 농도군은 3개의 복제 웰을 가진다. 세포 배양 상청을 수집하고, ELISA 검출 키트를 통하여 콜라겐 분해 효과를 평가하였다.
계산 공식: MMP-1 억제율%=（OD450 음성군-OD450 테스트 대상 시료군）/OD450 음성군×100.
MMP-1 발현에 있어서, 도 1과 같이, 블랭크 군은 MMP-1 발현에 유의한 영향을 미치지 않으며, 실시예 7(0.1%, 0.3%), 실시예 11(0.1%, 0.3%)은 비교예 1 내지 3에 비하여 MMP-1의 발현을 유의하게 낮출 수 있었다. 또한, 발효 조성물은 미발효 조성물에 비해 MMP-1 감소에 있어서 보다 유의한 효과를 보인다. 본 발효 조성물의 피부 광 노화 개선 작용이 단일 성분보다 우수하고 발효 후 광노화 개선 효과가 보다 우수함을 입증하였다.
실험예 4
체외 항당화 활성 테스트:
우혈청 알부민-포도당(BSA(bovine serum albumin)-Glucose) 모델을 생성하여 메일라드 반응 시스템을 시뮬레이션함으로써 발효 조성물의 항당화 능력을 평가하였다. 반응 혼합물은 우혈청 알부민(BSA), 포도당, 인산 완충액(PBS) 및 각 발효, 미발효 조성물 시료(Asample)를 포함하며, 무균 조건의 37℃에서 28일 배양시켰고, 이 중 아미노구아니딘(aminoguanidine; AG)과 발효 조성물을 포함하지 않는 시료는 음성 대조군(ANC)이며, AG를 다당류 대신 첨가한 시료는 양성 대조군(Asample)이다. 형광 분광법을 사용한 검출 방법을 통해, 최종 당화 산물의 형광 강도를 측정하였으며, 여기 파장은 370 nm, 방출 파장은 440 nm로 설정하였다. 형광성 AGEs의 생성에 대한 상이한 샘플들의 억제율(R)은 아래의 공식으로 계산하였다:
R（%）=（ANC－Asample）/ ANCХ100%
그 중 ANC는 음성 대조군의 흡광도이고; Asample은 발효 조성물 또는 AG군의 흡광도이다.
도 2에 나타낸 바와 같이, 실시예 7 및 실시예 11에서 AGEs의 생성에 대한 억제율은 모두 비교예 1, 비교예 2, 비교예 3보다 높아, 발효 조성물이 최적의 조합으로 배합되면 시너지 효과를 일으켜 항 당화 효과를 향상시킬 수 있음이 증명되었다.
실험예 5
안전성 피부 첩포 테스트:
20 μl의 테스트용 액체를 첩포 테스터에 점적하고, 대조웰을 블랭크 대조군(순수한 물)으로 설정하고; 테스트 물질을 첨가한 첩포 테스터를 대상체의 팔 앞쪽 굴곡 측에 부착하고, 손바닥으로 가볍게 눌러 피부에 고르게 도포시킨 다음 24시간 유지하고; 첩포 테스터를 제거한 다음 30분, 24시간, 48시간 후 표 4에 따라 피부 자극 및 알레르기 유발성을 관찰하고 그 관찰 결과를 기록한다. 피부 폐쇄 첩포 테스트에서 피부 반응의 등급 기준은 표 4에 나타난 바와 같다.
| 평가 등급 | 피부 반응 |
| 0 | 음성 반응 |
| 1 | 의심 반응: 약간의 홍반만 나타남 |
| 2 | 약한 양성 반응(홍반 반응): 홍반, 침윤, 수종, 구진 발생 가능 |
| 3 | 강한 양성 반응(포진 반응): 홍반, 침윤, 수종, 구진, 포진, 반응이 피험 영역을 초과할 가능성 |
| 4 | 매우 강한 양성 반응(융합성 포진 반응): 뚜렷한 홍반, 심한 침윤, 수종, 융합성 구진, 반응이 피험 영역을 초과 |
실험 결과: 실시예 7 및 11에 인체 피부 첩포 테스트를 실시하였으며, 결과는 표 5에 나타내었다. 인체 피부 첩포 테스트 결과, 30명 중 피부에 부작용이 나타난 사람은 없었다.
| 테스트 항목 및 시간 | 물 | 실시예 7 | 실시예 11 | |||||||
| 0.5 시간 | 24 시간 | 48 시간 | 0.5 시간 | 24 시간 | 48 시간 | 0.5 시간 | 24 시간 | 0.5 시간 | ||
| 첩포 테스트에서 다양한 피부 반응을 보인 사람의 수 | 0 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
| 1 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| 2 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| 3 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| 4 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
실험예 6
1) 쿨링 효과 테스트:
25세에서 45세 사이의 여성 지원자 30명을 선발하고, 10명의 지원자에게는 실시예 7을 도포하고, 10명의 지원자는 실시예 11을 도포하였으며, 나머지 10명은 블랭크군(위약)을 도포하였다. 얼굴 전체에 2 mg/cm2의 단위 용량으로 도포하고, 매일 아침과 저녁에 사용하였으며, 연속 2주간 사용하고, 첫날과 2주 후에 피부 표면 온도-열화상 카메라(FLIR T450 sc, USA)를 사용하여 발효 조성물의 쿨링 효과를 평가하였다.
실험 결과는 표 6에 나타난 바와 같으며, 블랭크군을, 실시예 7 및 실시예 11을 함유하는 에멀젼과 비교한 결과, 본 발명의 발효 조성물이 매우 우수한 쿨링 효과를 가지고 있음을 발견하였다.
| 그룹 구분 | 전(℃) | 2주(℃) | IR 2주 후(℃) |
| 블랭크군 | 34.1 ± 0.48 | 33.9 ± 0.54 | 36.2 ± 0.20 |
| 실시예 7 | 33.4 ± 0.36 | 32.2 ± 0.28 | 35.2 ± 0.22 |
| 실시예 11 | 33.6 ± 0.38 | 32.1 ± 0.24 | 35.6 ± 0.32 |
2) 피부 탄력 테스트:
14일간 계속 사용한 후, 기기를 사용하여 사용 전, 2주, 4주 후의 탄성 회복 비율(R2)(A.U.)을 테스트하였으며, R2: 음압이 없을 때의 회복 탄력량과 음압이 있을 때의 최대 연신량의 비율에 있어서, 비율이 1에 가까울수록 피부 탄성이 좋음을 나타낸다. 결과는 각각 아래에 나타난 바와 같다.
실험 결과: 결과를 도 3에 나타내었으며, 실시예 7 및 11은 블랭크군과 비교하여 피부 탄성이 유의하게 향상되었으며, 사용 전의 피부 탄성에 비하여 10.4%, 10.5% 향상되었다.
3) 피부 장벽 회복 테스트:
도 4는 상이한 발효 조성물을 사용한 후 경피 수분 손실(transepidermal water loss; Twel) 값의 감소율(%) 그래프이다. 도 4로부터, 실시예 7과 실시예 11은 피부의 경피 수분 손실량을 개선하고, 손상된 피부 장벽을 회복하며, 피부의 항알러지와 항자극 능력을 향상시킬 수 있음을 알 수 있다.
4) 피부결 테스트:
도 5는 상이한 발효 조성물 사용 전후의 피부결을 나타낸 도면이다. 도 5로부터, 실시예 7과 실시예 11은 피부결에 유의한 개선 작용을 하였음을 알 수 있다.
본원의 명세서에서, 자세하게 설명하지 않은 내용은 당업자들의 공지성 상식에 해당된다.
명세서 전체와 청구범위에서 언급한 바와 같은 "포함하다"는 개방형 용어이므로, "포함하나 이에 제한되지 않는다"로 해석되어야 한다. "대략"은 허용 가능한 오차 범위 내에 존재하는 것을 지칭하며, 당업자들은 일정한 오차 범위 내에서 상기의 기술적 과제를 해결하고 기본적으로 상기 기술적 효과를 달성할 수 있다.
또한 유의할 점은, "포함하다"와 같은 용어 또는 이의 임의의 다른 변형은 비배타적인 포함을 의도하여, 일련의 요소를 포함하는 상품 또는 시스템이 이러한 요소들을 포함할 뿐 아니라 명확하게 열거되지 않은 다른 요소를 포함하거나, 또는 이러한 상품 또는 시스템 고유의 요소를 포함하도록 한다는 것이다. 더 많은 제한이 존재하지 않는 경우, "……을 포함하는"이라는 표현으로 한정되는 요소는 상기 요소를 포함하는 상품 또는 시스템에 다른 동일한 요소의 존재를 배제하지 않는다.
상기 설명을 통하여 본원의 일부 바람직한 실시예를 도시하고 설명하였으나, 전술한 바와 같이, 본원은 본문에 개시된 형태에 국한되지 아니하며, 기타 실시예를 배제하는 것으로 간주해서는 아니되고, 다양한 기타의 조합, 변경 또는 환경에 응용될 수 있으며, 본문에 기술된 발명 구상의 범위 내에서 상기의 교시 또는 관련 분야의 기술 또는 지식을 통하여 개선할 수 있다. 당업자들이 실시하는 개선과 변화는 본원의 사상과 범위를 벗어나지 아니하며, 모두 본원 청구범위의 보호 범위 내에 해당되어야 한다.
Claims (10)
- 항 광노화, 진정 및 쿨링 효과를 가지는 발효 조성물로서, 20 내지 50 : 0.5 내지 5 : 50 내지 100의 질량비를 가지는 두충, 복숭아꽃 및 진정 조성물을 분쇄, 발효 및 추출하여 상기 발효 조성물을 수득하는 방법으로 수득되고;
상기 진정 조성물은 복숭아 수지, 선인장 및 석곡의 조합이며; 상기 복숭아 수지, 선인장 및 석곡의 질량비는 3:1:1 또는 3.5:2:2인 것을 특징으로 하는, 발효 조성물. - 제1항에 있어서, 상기 두충 : 복숭아꽃 : 진정 조성물의 질량비는 30 내지 40 : 1 내지 3 : 60 내지 90인 것을 특징으로 하는, 발효 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 두충:복숭아꽃:진정 조성물의 질량비는 35:2:75 또는 30:2:80인 것을 특징으로 하는, 발효 조성물.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제조 방법은 구체적으로
1) 두충, 복숭아꽃 및 진정 조성물을 분류 및 세척하고 저온 건조한 후 비율에 따라 칭량하는 단계;
2) 복숭아 수지, 선인장 및 석곡을 분쇄한 후 탈이온수에 첨가하여 침지시키고 2시간 교반하는 단계;
3) 두충과 복숭아꽃을 분쇄한 후 2)에 첨가하여 습식 초미세분쇄를 실시하여 균질액을 얻는 단계;
4) 3)에서 얻은 균질액에 균액을 접종하여 균일한 속도로 교반하며 발효시키는 단계;
5) 발효가 완성된 후 초음파 추출, 여과 및 멸균하고, 여과액을 원심분리하여 상청액을 얻는 단계; 및
6) 5)에서 얻은 상청액을 상이한 공극 크기를 갖는 미세여과막을 순차적으로 사용하여 여과하고, 여과액을 수집하여, 상기 발효 조성물을 얻는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 발효 조성물. - 제4항에 있어서,
상기 단계 1)에서의 저온 건조 조건은 50℃ 미만에서의 건조이고; 상기 건조 방법은 오븐 건조, 냉동 건조, 진공 건조 중 하나 또는 두 가지의 병용을 포함하나, 이에 제한되지 아니하며;
상기 단계 2)에서의 탈이온수의 용량은 두충, 복숭아꽃 및 진정 조성물의 총 질량의 5 내지 20배이고;
상기 단계 3)에서, 상기 습식 초미세분쇄는 콜로이드 밀 또는 균질기를 사용하여 진행하는 것을 특징으로 하는, 발효 조성물. - 제4항에 있어서,
상기 단계 4)에서, 접종 균액은 유산간균, 유산균 및 효모균 중 하나 또는 두 가지의 병용을 포함하나, 이에 제한되지 아니하며;
상기 단계 4)에서, 균액 접종량은 균질액 질량의 5% 내지 10%이고, 균 함량은 ≥1.0Х1011 cfu/g이며, 발효 온도는 28 내지 35℃이고, 발효 시간은 12 내지 48시간인 것을 특징으로 하는, 발효 조성물. - 제4항에 있어서,
상기 단계 6)에서의 미세여과막의 공극 크기 범위는 0.1 내지 10 μm이며, 바람직하게는 10 μm, 0.45 μm 및 0.2 μm인 것을 특징으로 하는, 발효 조성물. - 하기 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 발효 조성물의 제조 방법:
1) 두충, 복숭아꽃 및 진정 조성물을 분류 및 세척하고 저온 건조한 후 비율에 따라 칭량하는 단계;
2) 복숭아 수지, 선인장 및 석곡을 분쇄한 후 탈이온수에 첨가하고 침지시키고 2시간 교반하는 단계;
3) 두충과 복숭아꽃을 분쇄한 후 2)에 첨가하여 습식 초미세분쇄를 실시하여 균질액을 얻는 단계;
4) 3)에서 얻은 균질액에 균액을 접종하여 균일한 속도로 교반하며 발효시키는 단계;
5) 발효가 완성된 후 초음파 추출, 여과 및 멸균하고, 여과액을 원심분리하여 상청액을 얻는 단계; 및
6) 5)에서 얻은 상청액을 상이한 공극 크기를 갖는 미세여과막을 순차적으로 사용하여 여과하고, 여과액을 수집하여, 상기 발효 조성물을 얻는 단계;
상기 단계 1)에서의 저온 건조 조건은 50℃ 미만에서의 건조이고; 상기 건조 방법은 오븐 건조, 냉동 건조, 진공 건조 중 하나 또는 두 가지의 병용을 포함하나, 이에 제한되지 아니하며;
상기 단계 2)에서의 탈이온수의 용량은 두충, 복숭아꽃 및 진정 조성물의 총 중량의 5 내지 20배이고;
상기 단계 3)에서, 상기 습식 초미세분쇄는 콜로이드 밀 또는 균질기를 사용하여 진행하며;
상기 단계 4)에서, 접종 균액은 유산간균, 유산균 및 효모균 중 하나 또는 두 가지의 병용을 포함하나, 이에 제한되지 아니하며; 균액 접종량은 균질액 질량의 5% 내지 10%이고, 균 함량은 ≥1.0Х1011 cfu/g이며, 발효 온도는 28 내지 35℃이고, 발효 시간은 12 내지 48시간이며;
상기 단계 6)에서의 미세여과막의 공극 크기 범위는 0.1 내지 10 μm이며, 바람직하게는 10 μm, 0.45 μm 및 0.2 μm인 것을 특징으로 하는, 제조 방법. - 제8항에 있어서, 상기 두충, 복숭아꽃, 및 복숭아 수지, 선인장 및 석곡으로 구성된 진정 조성물의 질량비는 30 내지 40:1 내지 3:60 내지 90이고;
상기 복숭아 수지, 선인장 및 석곡의 질량비는 3:1:1 또는 3.5:2:2인 것을 특징으로 하는 제조 방법. - 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 발효 조성물을 함유하고; 액제, 에멀젼, 스프레이, 크림, 마스크팩, 리퀴드 파운데이션을 포함하나, 이에 제한되지 아니하는 것을 특징으로 하는, 화장품.
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