CN113476380A - 一种鱼腥草大米发酵产物滤液组合物的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种鱼腥草大米发酵产物滤液组合物的制备方法，涉及微生物发酵及化妆品技术领域，包括步骤一：将鱼腥草和大米洗净晒干，粉碎机粉碎；步骤二：混合发酵液包括以下质量百分比的组分：鱼腥草粉3～10％，大米粉3～10％，酵母菌液2～5％，剩余部分为水；步骤三：将摇床活化好的酵母菌接种到培养基中进行发酵；步骤四：发酵结束后，灭活菌液，过滤收集滤液，按一定比例进行配比，添加防腐剂。本发明工艺简单，能够有效解决化妆品中存在化学污染大，温和性不足的问题。本发明中滤液中的鱼腥草活性成分抑菌抗炎效果显著，可适用于美容护肤等领域。

Description

一种鱼腥草大米发酵产物滤液组合物的制备方法
技术领域
本发明涉及微生物发酵及化妆品技术领域，尤其涉及一种鱼腥草大米发酵产 物滤液组合物的制备方法。
背景技术
发酵制品被广大人群所知悉，大家对发酵制品的认知也越来越加深。经酵母 菌发酵后处理得到的发酵产物滤液组合物，含有丰富的氨基酸、多肽、矿物质以 及各种维生素等多种活性成分，它们是人体的重要组成部分，在抗氧化和改善皮 肤条件上起着重要的作用，同时鱼腥草里面的活性成分抑菌抗炎效果显著。但是 随着发酵制品的不断增多，发酵制品的质量也备受关注。
现有的发酵工艺很多，但是缺少将大米和鱼腥草与菌种同时发酵的工艺，作 为化妆品常用的原料，通过复合发酵，既能减少单一化妆品原料生产中存在化学 污染大，温和性不足的问题，同时还能节省化妆品生产过程中配料的时间，该工 艺在现阶段有较好的发展潜力。
发明内容
为克服现有技术中的化妆品中存在化学污染大，温和性不足的问题，节省化 妆品生产过程中配料的时间，本发明提出了一种鱼腥草大米发酵产物滤液组合物 的制备方法。
本发明的技术方案是：一种鱼腥草大米发酵产物滤液组合物的制备方法，包 括以下步骤：
步骤一：分别将鱼腥草和大米用纯净水清洗干净，干燥处理，采用粉碎机粉 碎，用80-100目筛网对鱼腥草粉、大米粉分别进行筛选，分别收集通过筛网的 部分；
步骤二：按以下质量百分比的组分配置混合发酵液：鱼腥草粉3～10％，大 米粉3～10％，酵母菌液2～5％，剩余部分为水；先制备培养基：将鱼腥草粉、大 米粉和水按照比例混合后，灭菌处理，降温到28～32℃备用；
步骤三：按照步骤二的配比将摇床活化好的酵母菌液接种到培养基中进行发 酵12～16小时；
步骤四：发酵结束后，灭活菌液，将步骤三所得混合发酵液通过孔径为0.1～3μm的微孔滤膜或滤纸过滤，收集滤液，即得发酵浓缩液；
步骤五：收集步骤四的滤渣，向滤渣中加入4～6倍浓度为60～75％的乙醇， 500～800W的超声波辅助条件下浸提60～80分钟，浸提温度50～70℃；
步骤六：浸提结束，将提取液在4000-5000r/min速度下离心，并在5-30bar 压力下过滤，分离固体残渣和醇提取液；
步骤七：将分离回收后的醇提取液与步骤四所得的发酵浓缩液混合；
步骤八：将步骤七所得的混合液在120℃高温下灭菌15-30秒。
进一步地，还包括步骤九：将最终所得的混合液添加质量分数0.4～0.8％的 防腐剂；添加防腐剂的为对羟基苯乙酮和1,2-己二醇为防腐剂，按羟基苯乙酮 0.3～0.7％，1,2-己二醇0.4～0.8％的比例进行添加。
进一步地，步骤三还包括采用500～800W的超声波辅助发酵。
进一步地，所述步骤三的发酵过程还包括：通入无菌空气，通气量为 15～20L/min，同时采用搅拌装置不断搅拌，搅拌转速为50～120rpm。
进一步地，所述的鱼腥草的产地是广西，大米是市场采购的苏北大米，酵母 菌选用酿酒酵母菌。
进一步地，鱼腥草、大米清洗所用的水，来自生活用纯净水，符合纯净水检 测标准38项。
进一步地，洗干净的鱼腥草、大米用800Y型号的高速多功能粉碎机粉碎； 用80-100目筛网对鱼腥草粉、大米粉分别进行筛选，保留通过筛网的部分。
进一步地，干燥处理后的鱼腥草和大米，其含水量小于5％，优选为含水量 1～2％；所述干燥处理的方式为晒干或在60～70℃下鼓风烘干。
进一步地，所述酵母菌发酵的条件为：pH值范围5.5～6.5，发酵温度28～32℃， 摇床速度100～200rpm，发酵时间12～16小时。
进一步地，酵母菌先经过活化，再进行筛选菌株，获得菌种纯度最高与活性 最强的菌株，进而在摇床里面进行菌种扩培，获得酵母菌液。
进一步地，所述步骤四中，发酵结束后，灭活菌液的温度为90℃，时间为1 小时，降温至室温。
进一步地，所述步骤四经过三次过滤，过滤用的滤膜或滤纸的孔径依次为 3μm，1μm，0.45μm。
进一步地，收集滤液，以多糖含量为参考标准，按一定比例进行配比，要求 多糖含量大于等于0.1％。
进一步地，将本发明制备的鱼腥草大米发酵产物滤液应用在制备化妆品领域； 所述化妆品剂型包括膏霜、乳液、水剂。
用本发明鱼腥草大米发酵产物滤液制备的化妆品具有显著的抗氧化的作用， 抑制氧自由基活性，清除自由基对人体损伤，从而延缓皮肤老化，保持皮肤弹力 和光滑，最终表现为美白抗炎作用；本发明的鱼腥草大米发酵产物滤液具有抑制 透明质酸酶的活性可使透明质酸不被分解，维持正常的生理功能，从而达到抗炎 的功效，而且温和无刺激，对人体无副作用。
附图说明
图1是一种鱼腥草大米发酵产物滤液组合物的制备方法工艺流程图；
图2是阴性对照、阳性对照及实施例对透明质酸酶活性的抑制率图；
图3是实施例2样品清除DPPH自由基测试结果图。
具体实施方式
以下结合附图和实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所 描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
一种鱼腥草大米发酵产物滤液组合物的制备方法，其工艺流程如图1所示， 包括以下步骤：
1、生活用纯净水，符合纯净水检测标准38项，将鱼腥草和大米洗净晒干， 其含水量小于5％。
2、对晒干的鱼腥草和大米，用800Y型号的高速多功能粉碎机粉碎。用80 目筛网对鱼腥草粉、大米粉分别进行筛选，分别收集通过筛网的部分。
3、混合发酵液包括以下质量百分比的组分：鱼腥草粉3～10％，大米粉3～10％，酵母菌液2～5％，剩余部分为水。将鱼腥草粉、大米粉和水先混合后，灭菌处理， 降温到28～32℃备用。
4、将摇床活化好的酵母菌接种到培养基中进行发酵。发酵的条件为：pH值 范围5.5～6.5，发酵温度28～32℃，摇床速度120～180rpm，发酵时间12～16小时。
5、发酵结束后，灭活菌液，过滤收集滤液，按一定比例进行配比，添加防 腐剂。
实施例2
1、生活用纯净水，符合纯净水检测标准38项，将鱼腥草和大米洗净晒干， 其含水量1～5％。
2、对晒干的鱼腥草和大米，用800Y型号的高速多功能粉碎机粉碎。用80 目筛网对鱼腥草粉、大米粉分别进行筛选，分别收集通过筛网的部分。
3、混合发酵液包括以下质量百分比的组分：鱼腥草粉4～8％，大米粉4～8％， 酵母菌液2～5％，剩余部分为水。将鱼腥草粉、大米粉和水先混合后，灭菌处理， 降温到28～32℃备用。
4、将摇床活化好的酵母菌接种到培养基中进行发酵。发酵的条件为：pH值 范围5.7～6.5，发酵温度29～32℃，摇床速度120～160rpm，发酵时间12～16小时。
5、发酵结束后，灭活菌液，过滤收集滤液，按一定比例进行配比，以对羟 基苯乙酮和1,2-己二醇为防腐剂，按羟基苯乙酮0.3～0.7％，1,2-己二醇0.4～0.8％ 的比例进行添加。
实施例3
1、生活用纯净水，符合纯净水检测标准38项，将鱼腥草和大米洗净晒干， 其含水量1～3％。
2、对晒干的鱼腥草和大米，用800Y型号的高速多功能粉碎机粉碎。用80 目筛网对鱼腥草粉、大米粉分别进行筛选，分别收集通过筛网的部分。
3、混合发酵液包括以下质量百分比的组分：鱼腥草粉4～7％，大米粉4～7％， 酵母菌液3～5％，剩余部分为水。将鱼腥草粉、大米粉和水先混合后，灭菌处理， 降温到28～32℃备用。
4、将摇床活化好的酵母菌接种到培养基中进行发酵。发酵的条件为：pH值 范围5.5～6.2，发酵温度28～31℃，摇床速度120～160rpm，发酵时间12～16小时。
5、发酵结束后，灭活菌液，过滤收集滤液，按一定比例进行配比，以对羟 基苯乙酮和1,2-己二醇为防腐剂，按羟基苯乙酮0.3～0.6％，1,2-己二醇0.4～0.7％ 的比例进行添加。
实施例4
1、生活用纯净水，符合纯净水检测标准38项，将鱼腥草和大米洗净晒干， 其含水量1～2％。
2、对晒干的鱼腥草和大米，用800Y型号的高速多功能粉碎机粉碎。用80 目筛网对鱼腥草粉、大米粉分别进行筛选，分别收集通过筛网的部分。
3、混合发酵液包括以下质量百分比的组分：鱼腥草粉3～7％，大米粉3～7％， 酵母菌液3～5％，剩余部分为水。将鱼腥草粉、大米粉和水先混合后，灭菌处理， 降温到28～32℃备用。
4、将摇床活化好的酵母菌接种到培养基中进行发酵。发酵的条件为：pH值
范围5.8～6.2，发酵温度29～31℃，摇床速度120～150rpm，发酵时间14～16 小时。
5、发酵结束后，灭活菌液，收集滤液，以多糖含量为参考标准，按一定比 例进行配比，要求多糖含量大于等于0.1％。以对羟基苯乙酮和1,2-己二醇为防 腐剂，按羟基苯乙酮0.4～0.6％，1,2-己二醇0.5～0.7％的比例进行添加。
实施例5
1、生活用纯净水，符合纯净水检测标准38项，将鱼腥草和大米洗净晒干， 其含水量0.5～1.5％。
2、对晒干的鱼腥草和大米，用800Y型号的高速多功能粉碎机粉碎。用80 目筛网对鱼腥草粉、大米粉分别进行筛选，分别收集通过筛网的部分。
3、混合发酵液包括以下质量百分比的组分：鱼腥草粉4～7％，大米粉4～7％， 酵母菌液4～6％，剩余部分为水。将鱼腥草粉、大米粉和水先混合后，灭菌处理， 降温到30～32℃备用。
4、将摇床活化好的酵母菌接种到培养基中进行发酵。发酵的条件为：pH值
范围5.8～6.2，发酵温度30～31℃，摇床速度120～150rpm，发酵时间13～15 小时。
5、发酵结束后，灭活菌液，收集滤液，以多糖含量为参考标准，按一定比 例进行配比，要求多糖含量大于等于0.1％，此处多糖检测方法为UV检测，参考 标准是“NY/T 1676-2008食用菌中粗多糖含量的测定”。
6、收集发酵结束的滤渣，向滤渣中加入4～6倍浓度为60～75％的乙醇， 500～800W的超声波辅助条件下浸提60～80分钟，浸提温度50～70℃；
7、浸提结束后，将提取液在4000-5000r/min速度下离心，并在5-30bar 压力下过滤，分离固体残渣和醇提取液；
8、将分离回收后的醇提取液与发酵过滤所得的发酵浓缩液混合；
9、将七所得的混合液在120℃高温下灭菌15-30秒。
10、将最终所得的混合液添加防腐剂；按羟基苯乙酮0.4～0.6％，1,2-己二醇 0.5～0.7％的比例进行添加。
上述说明描述了本发明的优选实施例，如前所述，应当理解本发明并非局限 于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、 修改和环境，并能够在本文所述发明构想范围内，通过上述教导或相关领域的技 术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范 围，则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。
效果实施例1：
抗炎效果的检测：透明质酸酶活性抑制试验
试验原理：当过敏原初次侵入机体时，机体产生抗体IgE，过敏原再次入侵 机体时，与致敏细胞表面的IgE抗体相结合，发生FceRI交联.从而启动活化信 号，引发信号传导，使胞内透明质酸酶在内的多种酶活化，此过程被称为过敏反 应。透明质酸是组织基质中限制水分和其它胞外物质扩散的成分，被透明质酸酶 水解后，细胞间则变为非粘性，引起细胞脱颗粒和合成的新介质渗出，发挥生物 效应，导致速发型过敏反应的发生。透明质酸酶是过敏反应的参与者，已有研究 表明透明质酸酶与炎症和过敏密切相关，抑制透明质酸酶的活性可使透明质酸不 被分解，维持正常的生理功能，从而达到抗炎的功效。
1)溶液配制
透明质酸酶溶液：准确称取0.01g透明质酸酶，加入4mL醋酸缓冲溶液， 最终浓度为1250μg/mL。
0.5mg/mL透明质酸钠溶液：准确称取0.005g透明质酸钠，加入到10mL 醋酸缓冲溶液中，充分溶解后备用。
醋酸缓冲溶液(pH＝5.6)：取1155μL冰乙酸于容量瓶中稀释至100mL， 混匀后取4.8mL为A溶液；取2.72g乙酸钠结晶，溶解并定容至100mL，混 匀后量取45.2mL为B溶液；混合A、B溶液，去离子水定容至100mL混匀。精 密测定其pH值，用溶液A或B调pH值至5.6。
埃尔利希试剂：准确称取0.8g对-二甲氨基苯甲醛溶于15mL浓盐酸和15 mL无水乙醇中，备用。
乙酰丙酮溶液：准确取3.5mL乙酰丙酮溶于50mL的1.0mol/L的碳酸钠 溶液中。乙酰丙酮溶液需现用现配。
受试样品溶液：随机取实施例1最终产品10mg，定容到50ml容量瓶待用
2)实验过程
在试管中加入0.1mL的0.25mmol/L的CaCl2溶液和0.5mL透明质酸酶液， 37℃保温培养20min；加入0.5mL样品液，37℃保温培养20min；加入0.5mL 透明质酸钠液，37℃保温30min；然后常温静置5min，加入0.4mol/L的NaOH 溶液0.1mL和乙酰丙酮溶液0.5mL，沸水浴中加热反应15min后立刻冰浴5min； 再加入1.0mL埃尔利希试剂并用3.0mL无水乙醇进行稀释，放置20min后进 行显色，测定其吸光度值，代入下式计算抑制率。
Figure BDA0003129199520000071
式中：A为对照溶液吸光度值(用醋酸缓冲溶液代替样品溶液)；
B为空白对照溶液吸光度值(用醋酸缓冲溶液代替样品溶液及酶液)；
C为受试样溶液吸光度值；
D为试样空白溶液吸光度值(用醋酸缓冲溶液代替酶液)。
实验时先对A组试样进行波长扫描，波长范围450-700nm，确定最大吸收 波长，去离子水作参比，最大吸收波长下对其他试样分别进行ABS值测定。
图2阴性对照、阳性对照及实施例对透明质酸酶活性的抑制率图
图2中以1％甘草酸二钾为对照，甘草酸二钾对透明质酸酶的抑制率达到94.35％，实施例1对透明质酸酶抑制率达到85.27％。与甘草酸二钾相比，本产 品也有着很好的抗炎功效。
效果实施例2：
抗氧化效果的测试：清除DPPH自由基试验
一、试剂准备
(1)3.943mgDPPH用95％乙醇定容至50mL
(2)10mgTrolox用95％乙醇定容至100mL
(3)实施例2样品
二、实验步骤
(1)UV校零，95％乙醇作为空白样
(2)预实验(DPPH浓度选择)
500μL DPPH+1000μL 95％乙醇震荡10s，静置10min，测吸光度值(520nm 处吸光度值0.45-0.55，则可作为以下实验DPPH溶液)
(3)Trolox的测定
Sample Trolox(μL) 95％乙醇(μL) DPPH(μL)
S 100 900 500
SB 100 900+500 0
C 0 100+900 500
CB 0 100+900+500 0
加入DPPH或95％乙醇后，震荡10s，静置10min，测吸光度值
(1)实验步骤
Figure BDA0003129199520000081
加入DPPH或95％乙醇后，震荡10s，静置10min
(2)分别在520nm处测吸光度值，制作表格，作图，得IC50值。
计算公式：抑制率(％)＝[1-(S-SB)/(C-CB)]*100
三、实验结果
Figure BDA0003129199520000082
Figure BDA0003129199520000083
Inner(μL) Con(μL/mL) DPPH(％)
400 266.67 55.54
300 200 55.82
200 133.33 41.90
图3实施例2样品清除DPPH自由基测试结果图
图3可以看出实施例2样品有清除DPPH自由基的作用，IC50值约为170μL/mL。
应用实施例：
注：本发明发酵复合液暂命名为：酵母菌鱼腥草发酵复合物
应用实施例1鱼腥草精华液
Figure BDA0003129199520000091
鱼腥草精华液工艺：
1.投料前，罐子先用纯水煮一遍，A相原料依次投入罐中，45Hz的搅拌速度。
2.升温到80℃，加热搅拌溶解30分钟，取样观察完全溶解后。
3.降温到60℃，B相原料依次投入罐中，搅拌溶解20分钟，取样观察完全溶解 后。
4.C、D相(D相外部先溶解)依次投入釜中搅拌混匀，此时搅拌速度调整到 40Hz，搅拌20min后，取样检测pH、密度、粘度等所有指标合格后，降温到45℃ 左右。
5. 300目滤芯和250目的纱布过滤包装。
应用实施例2酵母菌鱼腥草复合乳液
Figure BDA0003129199520000092
Figure BDA0003129199520000101
酵母菌鱼腥草复合乳液工艺：
1.A相投入釜中80℃加热搅拌溶解40min，40HZ搅拌速度，搅拌25min
2.取样观察完全溶解后，B相投入釜中搅拌混匀10min
3.C相另一釜中80℃加热搅拌溶解
4.C相加入上面混合液中，搅拌混匀10min后，开乳化，45HZ搅拌速度，22HZ 乳化速度，3min，分两次进行,间隔5min
5.乳化完成后，取样观察，降温到60℃，转速40HZ,D相加入釜中搅拌混匀15min，取样检测
6.合格后，纱布过滤包装
应用实施例3
酵母菌鱼腥草复合面膜液
Figure BDA0003129199520000102
Figure BDA0003129199520000111
酵母菌鱼腥草复合面膜液工艺：
1.反应釜先用纯水煮一遍，A相1,2号(水分散一下)原料投入釜中，45HZ搅拌 速度，搅拌5分钟后，
2.A相其他原料投入釜中，升温到85℃，保温40分钟，降温到60℃，取样观察 完全溶解后，
3.B(提前溶解好)、C相原料依次投入釜中，搅拌混匀10min后，D相原料投入釜 中，搅拌混匀20min，
4.取样检测pH，密度，粘度，外观，肤感等指标合格后，250目纱布过滤包装。

Claims (10)

1.一种鱼腥草大米发酵产物滤液组合物的制备方法，其特征在于：包括：
步骤一：分别将鱼腥草和大米用纯净水清洗干净，干燥处理，采用粉碎机粉碎，用80-100目筛网对鱼腥草粉、大米粉分别进行筛选，分别收集通过筛网的部分；
步骤二：按以下质量百分比的组分配置混合发酵液：鱼腥草粉3～10％，大米粉3～10％，酵母菌液2～5％，剩余部分为水；先制备培养基：将鱼腥草粉、大米粉和水按照比例混合后，灭菌处理，降温到28～32℃备用；
步骤三：按照步骤二的配比将摇床活化好的酵母菌液接种到培养基中进行发酵12～16小时；
步骤四：发酵结束后，灭活菌液，将步骤三所得混合发酵液通过孔径为0.1～3μm的微孔滤膜或滤纸过滤，收集滤液，即得发酵浓缩液。
2.根据权利要求2所述的一种鱼腥草大米发酵产物滤液组合物的制备方法，其特征在于：还包括：
步骤五：收集步骤四的滤渣，向滤渣中加入4～6倍浓度为60～75％的乙醇，500～800W的超声波辅助条件下浸提60～80分钟，浸提温度50～70℃；
步骤六：浸提结束，将提取液在4000-5000r/min速度下离心，并在5-30bar压力下过滤，分离固体残渣和醇提取液；
步骤七：将分离回收后的醇提取液与步骤四所得的发酵浓缩液混合；
步骤八：将步骤七所得的混合液在120℃高温下灭菌15-30秒。
3.根据权利要求1或2所述的一种鱼腥草大米发酵产物滤液组合物的制备方法，其特征在于：还包括添加防腐剂步骤：将最终所得的混合液添加质量分数0.3～0.8％的防腐剂。
4.根据权利要求1所述的一种鱼腥草大米发酵产物滤液组合物的制备方法，其特征在于：步骤三还包括采用500～800W的超声波辅助发酵。
5.根据权利要求1所述的一种鱼腥草大米发酵产物滤液组合物的制备方法，其特征在于：所述酵母菌发酵的条件为：pH值范围5.5～6.5，发酵温度28～32℃，摇床速度100～200rpm，发酵时间12～16小时。
6.根据权利要求1所述的一种鱼腥草大米发酵产物滤液组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤三的发酵过程还包括：通入无菌空气，通气量为15～20L/min，同时采用搅拌装置不断搅拌，搅拌转速为50～120rpm。
7.根据权利要求1所述的一种鱼腥草大米发酵产物滤液组合物的制备方法，其特征在于：干燥处理后的鱼腥草和大米，其含水量小于5％；所述干燥处理的方式为晒干或在60～70℃下鼓风烘干。
8.根据权利要求1所述的一种鱼腥草大米发酵产物滤液组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤四经过三次过滤，过滤用的滤膜或滤纸的孔径依次为3μm，1μm，0.45μm。
9.根据权利要求3所述的一种鱼腥草大米发酵产物滤液组合物的制备方法，其特征在于：添加的防腐剂为1,2-己二醇和对羟基苯乙酮。
10.一种应用鱼腥草大米发酵产物滤液组合物制备的化妆品，其特征在于：所述鱼腥草大米发酵产物滤液组合物采用权利要求1-9任一项所述制备方法制备；所述化妆品剂型包括膏霜、乳液、水剂。
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