KR20220161567A

KR20220161567A - 칡 추출물 및 감초 추출물을 포함하는 항염증 또는 항산화용 조성물

Info

Publication number: KR20220161567A
Application number: KR1020210067971A
Authority: KR
Inventors: 손성오; 정욱; 김미성; 김민식
Original assignee: 네이처퓨어코리아 주식회사
Priority date: 2021-05-27
Filing date: 2021-05-27
Publication date: 2022-12-07

Abstract

본 발명은 칡 추출물 및 감초 추출물을 포함하는 조성물에 관한 것으로, 상기 조성물은 항산화, 항염증 효과가 우수하다. 또한 천연물 식의약소재로 실제 식품으로 섭취가 가능하고 부작용이 없으며, 농생물 자원을 활용해 신규 기능성 물질을 유용하게 사용될 수 있다.

Description

칡 추출물 및 감초 추출물을 포함하는 항염증 또는 항산화용 조성물{Composition for anti-inflammatory or antioxidant comprising Pueraria lobata Ohwi extract and Glycyrrhiza uralensis Fischer extract}

본 발명은 항염증 또는 항산화용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 칡 추출물 및 감초 추출물을 포함하는 항염증 또는 항산화용 조성물에 관한 것이다.

염증 반응은 생체나 조직에 물리적 작용이나 화학적 물질, 세균 감염 등의 어떠한 기질적 변화를 가져오는 침습이 가해질 때 그 손상부위를 수복 재생하려는 기전으로, 일단 자극이 가해지면 국소적으로 히스타민, 세로토닌, 브라디키닌, 프로스타글란딘, HETE(hydroxyeicosatetraenoic acid), 류코트리엔과 같은 혈관 활성 물질이 유리되어 혈관 투과성이 증대되면서 염증을 유발한다.

대식세포는 일산화질소(NO), 프로스타글란딘 E2(PGE2) 및 전염증성 사이토카인 등을 분비함으로써 염증에 반응하고, 염증 및 면역반응 모두에서 중요한 조절세포로 작용하는데, 이렇게 작용하기 위해서는 반드시 활성화 과정을 거쳐야 한다. 그람 음성균의 세포벽 구성성분 중의 하나이며 내독소로 잘 알려진 LPS(lipopolysaccharide)는 대식세포의 활성화에 관여하는 가장 잘 알려진 외부인자로서, 특히 RAW 264.7 세포와 같은 대식세포나 단핵세포에서 TNF-α(tumor necrosis factor-alpha), IL-6(interleukin-6), IL-1β(interleukin-1 beta)와 같은 전염증성 사이토카인(pro-inflammatory cytokine)을 분비하여 염증부위에서 증가되는 것으로 알려져 있다. LPS가 대식세포를 자극하게 되면 iNOS(inducible nitric oxide synthase)라는 효소에 의해 L-알기닌이 L-시트룰린으로 변하는 과정에서 일산화질소(NO)가 생성됨으로써 대식세포로부터 NO가 생성된다. 포유동물에서 NO는 세 가지 종류의 NO 합성효소(NOS, nitric oxide synthase), 즉, nNOS(neuronal NOS), eNOS(endothelial NOS) 및 iNOS(inducible NOS)에 의해 합성된다. 이 중에서 nNOS와 eNOS에 의해 생성되는 NO는 정상적인 생체기능을 위해 생성되며, 조직 내에서의 농도는 일정수준으로 낮게 유지된다. 그러나 iNOS에 의해 생성된 NO는 과도하게 생성되어 병리적인 혈관확장, 세포독성, 조직 손상 등과 같은 생체에 유해한 작용을 나타낸다.

한편, 칡과 감초는 산업적으로 건강기능식품 기능성 원료로서, 숙취해소용으로 주목을 받고 있지만 신경계에 미치는 영향에 대해서는 알려진 바 없다.

등록특허공보 제10-2229323호

상기와 같은 배경 하에 본 발명은 칡과 감초의 항염증 또는 항산화 효과가 우수함을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

따라서 본 발명은 칡 추출물과 감초 추출물을 포함하는 항염증 또는 항산화용 조성물을 제공하고자 한다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위해 본 발명은 칡 추출물과 감초 추출물을 포함하는 항염증 또는 항산화용 조성물을 제공한다.

상기 칡(Pueraria lobata Ohwi) 추출물은 칡의 뿌리, 잎, 줄기 등으로부터 추출된 것일 수 있으나, 바람직하게는 칡의 뿌리로부터 추출된 추출물일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서의 상기 칡 또는 감초는 건조되지 않은 상태, 건조된 상태, 건조 후 분쇄된 상태 등일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 감초(Glycyrrhiza uralensis Fischer) 추출물은 감초의 꽃, 잎, 뿌리, 줄기 등으로부터 추출된 것일 수 있으나, 바람직하게는 감초의 뿌리 또는 뿌리 줄기로부터 추출된 추출물일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 칡 추출물 또는 감초 추출물은 물, 에탄올과 같은 극성 용매 또는 유기 용매를 사용하여 추출될 수 있으나, 바람직하게는 물, 에탄올을 사용하여 추출될 수 있고, 더욱 바람직하게는 50 내지 90%(v/v) 의 발효주정, 더욱 바람직하게는 60 내지 80%(v/v)을 사용하여 추출할 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 상기 칡 추출물과 감초 추출물은 1 : 1 내지 5, 바람직하게는 1 : 1 내지 3, 더욱 바람직하게는 1:1의 중량비로 포함될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 칡 추출물과 감초 추출물은 40 내지 80℃, 바람직하게는 50 내지 70℃, 더욱 바람직하게는 60℃에서 1 내지 3시간, 바람직하게는 2시간 동안 추출될 수 있다. 상기 온도 및 시간 미만으로 추출할 경우 유효성분이 잘 추출되지 않을 수 있고, 상기 온도 및 시간을 초과하여 추출할 경우, 유효성분이 파괴될 수 있다.

상기 항염증 조성물은 염증의 예방, 개선 또는 치료용 약학적 조성물 또는 염증의 예방 또는 개선용 화장료 조성물 또는 염증의 예방 또는 개선용 식품 조성물일 수 있다.

본 발명에서의 염증 질환은 아토피 피부염, 여드름, 건선, 부비동염, 비염, 결막염, 천식, 피부염, 사구체신염, 뇌염, 염증성 장염, 과민성 대장 증후군, 만성 폐쇄성 폐질환, 패혈증, 패혈성 쇼크증, 바이러스 또는 박테리아 감염에 의한 만성 염증 질환 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 항산화용 조성물은 항산화용 식품 조성물 또는 항산화용 화장료 조성물일 수 있다.

상기 항산화는 산화를 방지하는 모든 작용을 의미할 수 있다. 구체적으로, 활성산소종(ROS) 제거, ABTS 및 DPPH 자유 라디칼 소거, 산화질소 생성 억제 작용 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서의 약학적 조성물은 칡 추출출 및 감초 추출물을 10ug/mg 이상, 바람직하게는 100ug/mg 이상, 더욱 바람직하게는 200ug/mg 이상, 더욱 바람직하게는 400ug/mg 이상의 농도로 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 상기 약학적 조성물은 약학적으로 허용되는 담체, 결합제, 활탁제, 붕해제, 부형제, 가용화제, 분산제, 안정화제, 현탁화제 등을 추가적으로 더 포함할 수 있고, 예를 들면 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 알지네이트, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 말토덱스트린, 이산화규소, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 등일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 상기 약학 조성물은 당 업계에서 제제화에 통상적으로 사용되는 방법으로 정제, 캡슐, 서방형 제제, 엘릭서, 서스펜션, 시럽, 웨이퍼, 단위 투약 주사제 앰플, 현탁액 등의 제형으로 제조될 수 있다.

상기 약학 조성물의 투여 방식은 경구 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 동맥내 투여, 골수내 투여, 경막내 투여, 심장내 투여, 경피 투여, 피하 투여, 복강내 투여, 비강내 투여, 장관 투여, 구강 및 설하는 포함하는 국소 투여, 직장 투여, 국소 투여, 진피 투여, 점막 투여, 척추내 투여 등의 방법으로 투여될 수 있고, 바람직하게는 경구 투여일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한, 상기 투여 시 각 투여 방식에 절절한 제형으로 제제화되어 투여될 수 있으며, 제제화는 당 업계에서 널리 알려져 있는 방법으로 제제화될 수 있다.

상기 약학 조성물은 투여 대상의 연령, 체중, 건강 상태, 성별, 투여시간, 투여 경로, 배출율, 유효성분의 함량, 예방 또는 치료될 특정 질환의 중증도 등에 따라 적절하게 선택될 수 있고, 투여 횟수는 1일 1회 또는 2회, 격일마다, 격주마다, 격월 등의 방식으로 투여할 수 있다.

상기 화장료 조성물은 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 용매, 안정화제, 용해화제, 유화제, 비타민, 향료와 같은 통상적인 보조제, 담체 등을 추가적으로 더 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 예를 들어, 화장수, 영양로션, 영양크림, 영양에센스, 팩, 파운데이션, 바디오일, 헤어오일, 샴푸, 린스 등의 제형으로 제조될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 식품 조성물은 당 업계에서 식품을 제조하기 위해 통상적으로 사용하는 향미제, 풍미제, 안정화제, 증점제, 방부제 등을 추가적으로 더 포함할 수 있고, 예를 들면 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 알지네이트, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 말토덱스트린, 이산화규소, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 등일 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 식품 조성물은 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 분말, 과립, 정제, 캡슐,과자, 등의 형태로 제조될 수 있다.

상기 식품 조성물은 섭취 대상의 연령, 체중, 건강 상태, 성별, 투여시간, 유효성분의 함량, 질환의 중증도 등에 따라 적절하게 선택될 수 있고, 섭취 횟수는 1일 1회 또는 2회, 격일마다, 격주마다, 격월 등의 방식으로 섭취할 수 있다.

본 발명의 칡뿌리 및 감초 복합 추출물을 포함하는 조성물은 항산화, 항염증증(NO 저해, IL-6 억제, TNF-alpha 억제) 효과가 뛰어나다. 또한 천연물 식의약소재로 실제 식품으로 섭취가 가능하고 부작용이 없으며, 농생물 자원을 활용해 신규 기능성 물질을 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 본 발명의 복합추출물의 총페놀 함량 증가 및 상승효과 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 복합추출물(칡뿌리+감초)의 NO 저해능 증가 및 상승효과 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 복합추출물(칡뿌리+감초)의 IL-6 저해능 증가 및 상승효과 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 복합추출물(칡뿌리+감초)의 TNF-alpha 저해능 증가 및 상승효과 결과를 나타낸 것이다.

이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1> 칡뿌리 및 감초 복합추출물의 제조

건조 후 분쇄한 칡뿌리 및 감초 뿌리 또는 뿌리 줄기 10g에 70%(v/v) 발효주정을 용매로 사용하여 각각 90 mL을 첨가하고 60℃에서 2시간 동안 추출한 후 760g에서 20분간 원심분리한 상등액을 6 μm filter paper로 여과하였다. 이후, 감압농축 및 동결건조 후 분말화하여 각각의 추출물을 제조하였다. 이후, 칡뿌리 추출물 및 감초 추출물을 최적의 배합비율 1:1의 동량비(중량비)로 상호 보완적으로 상승 작용할 수 있도록 혼합 조성하여 복합 추출물을 실험에 사용하였다.

<실험예 1> 항산화 활성 평가: 총 페놀 함량(TPC) 평가

총 페놀성 화합물 함량은 Folin-Denis법에 의해 비색 정량하였다. 원심분리한 시료 1 mL에 0.2M phenol reagent 1 mL를 첨가하여 3분 동안 실온에서 방치한 후 2% Na₂CO₃용액 1 mL를 첨가하여 실온에서 1시간 방치한 다음 UV spectrophotometer를 사용하여 750 nm에서 흡광도를 측정하여 gallic acid를 표준물질로 사용하여 상기의 방법으로 적성한 표준곡선으로부터 총 페놀을 gallic acid의 양으로 환산하였다. 추출물 10 mg/ml에 대한 총페놀 함량을 측정한 결과, 각각의 단독추출물(칡뿌리 495μg/ml, 감초 344μg/ml)에 비해 복합추출물(칡뿌리+감초)에서 총페놀 함량이 550μg/ml으로 증가하여 복합추출물의 상승효과를 확인하였다(도 1).

<실험예 2> 항염증증 효과 평가

2-1. 일산화질소(NO) 저해효과 평가

Mouse leukaemic monocyte macrophage 유래 세포주인 RAW 264.7 세포는 생체 외 실험에서 대식세포주 모델이며 RAW 264.7 세포를 LPS 등으로 자극한 후 대식세포에서 분비되는 사이토카인(cytokine)과 일산화질소(NO) 생성 등을 측정하여 기능성 소재의 면역 활성을 측정할 수 있다. 추출물의 항염증증 효과를 검증하기 위하여 RAW 264.7 cell는 24well plate에 2×10⁵cells/well로 동일하게 분주하여 24시간 배양하였다. 이후, 배지를 제거하고, 농도별 추출물과 1 μg/mL 농도의 LPS를 처리하여 24시간 배양한 후, 배양 상등액을 분리하였다. 분리된 배양 상등액 100 μL에 동량의 Griess (Sigma-Aldrich) 시약을 처리하여 15분 동안 암실에서 반응시킨 후, micro-plate reader를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. NO의 농도는 sodium nitrite (NaNO₂,Sigma-Aldrich)를 사용하여 얻은 표준 직선과 비교하여 산출하였다.

추출물 200 μg/ml 및 LPS 1 μg/mL을 처리한 세포 배양 상등액의 NO 저해능을 측정한 결과, 각각의 단독추출물(칡뿌리, 감초)에 비해 복합추출물(칡뿌리+감초)에서 NO 저해능이 증가하여 복합추출물의 우수한 상승효과를 확인하였다(도 2).

2-2. 사이토카인 (IL-6, IFN-α) 억제효과 평가

사이토카인은 면역세포에서 생성되는 수용성 단백질로서 이들은 하나의 네트워크를 형성하여 세포의 증식과 활성, 분화의 조절과 염증세포를 활성화시키고 사이토카인의 생성을 증가 또는 억제하는 등 외부 항원에 대한 여러 면역 세포간의 협력을 중재하므로, 이들의 생성과 분비는 면역반응조절에 있어서 매우 중요하다.

사이토카인 (IL-6, IFN-α) 함량은 Mouse IL-6 ELISA kit 및 Mouse TNF alpha ELISA kit (Invitrogen)을 사용하여 측정하였으며, NO 측정을 위해 세포처리한 동일한 조건으로 확보된 배양 상등액을 사용하였다. 이때 사이토카인의 농도는 kit에 포함되어 있는 표준용액으로부터 산출된 표준곡선으로부터 계산하였다.

추출물 400 μg/ml 및 LPS 1 μg/mL을 처리한 세포 배양 상등액의 사이토카인 IL-6 및 IFN-α의 저해능을 측정한 결과, 각각의 단독추출물(칡뿌리, 감초)에 비해 복합추출물(칡뿌리+감초)에서 사이토카인 (IL-6, IFN-α) 저해능이 증가하여 복합추출물의 우수한 상승효과를 확인하였다 (도 3 및 도 4).

Claims

칡 추출물 및 감초 추출물을 포함하는 항염증 또는 항산화용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 칡 추출물 및 감초 추출물은 50 내지 90%(v/v) 발효 주정으로 추출한 것을 특징으로 하는 항염증 또는 항산화용 조성물.
제1항에 있어서, 칡 추출물 및 감초 추출물은 각각 칡의 뿌리, 감초의 뿌리로부터 추출된 것을 특징으로 하는 항염증 또는 항산화용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 칡 추출물 : 감초 추출물을 1 : 1~3의 중량비로 포함하는 것을 특징으로 하는 항염증 또는 항산화용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 칡 추출물과 감초 추출물은 50 내지 70℃에서 추출된 것을 특징으로 하는 항염증 또는 항산화용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 칡 추출물과 감초 추출물은 1 내지 3시간 동안 추출된 것을 특징으로 하는 항염증 또는 항산화용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 염증은 아토피 피부염, 여드름, 건선, 부비동염, 비염, 결막염, 천식, 피부염, 사구체신염, 뇌염, 염증성 장염, 과민성 대장 증후군, 만성 폐쇄성 폐질환, 패혈증, 패혈성 쇼크증, 바이러스 또는 박테리아 감염에 의한 만성 염증 질환 중 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 항염증 또는 항산화용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 항산화는 활성산소종(ROS) 제거, ABTS 및 DPPH 자유 라디칼 소거, 산화질소 생성 억제 작용 중 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 항염증 또는 항산화용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 항염증 조성물은 약학 조성물, 식품 조성물, 또는 화장료 조성물 중 어느 하나인 것을 특징으로 하는 항염증 또는 항산화용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 항산화용 조성물은 식품 조성물, 또는 화장료 조성물 중 어느 하나인 것을 특징으로 하는 항염증 또는 항산화용 조성물.