KR102263888B1 - 항염 효능을 지닌 제주산 비자종자 발효 추출물의 제조방법 - Google Patents

항염 효능을 지닌 제주산 비자종자 발효 추출물의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 건조된 비자종자를 분쇄하여 비자종자 분쇄물을 제조하는 비자종자 분쇄물 제조단계; 상기 비자종자 분쇄물 제조단계가 종료된 후 비자종자 분쇄물, 증류수, 죽염 및 MRS배지를 1 : 2 내지 4 : 0.001 내지 0.01 : 0.005 내지 0.012의 중량비율로 혼합하여 115 내지 125℃의 온도범위에서 10 내지 20분 동안 멸균하여 비자종자 배지를 제조하는 비자종자 배지 제조단계; 상기 비자종자 배지 제조단계가 종료된 후 비자종자 배지 100중량부 기준으로, 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) 종균 0.5 내지 1.5중량부를 비자종자 배지에 접종한 후 35 내지 40℃의 온도범위에서 1 내지 3일간 배양한 뒤 115 내지 125℃의 온도범위에서 10 내지 20분 동안 멸균한 후 동결건조하여 비자종자 발효분말을 제조하는 비자종자 발효분말 제조단계; 및 상기 비자종자 발효분말 제조단계가 종료된 후 상기 비자종자 발효분말 100중량부 기준으로, 900 내지 1,100중량부의 용제와 혼합한 뒤 20 내지 30시간 동안 교반한 후 여과지로 여과하여 걸러진 여액을 감압 농축하여 건조하는 비자종자 발효 추출물 제조단계를 포함하는 비자종자 발효 추출물 제조방법을 제공한다.
본 발명에 따른 비자종자 발효 추출물의 제조방법은 항산화 및/또는 항염증 활성을 가지는 동시에 부작용이 적은 천연물인 비자종자 발효 추출물의 제조방법을 제공하여, 화장료, 식품, 의약품 등에 이용될 수 있다.

Description

항염 효능을 지닌 제주산 비자종자 발효 추출물의 제조방법{Preparation Methods for Fermentative Extract of Torreya Nucifera Seed from JEJU Having Anti-Inflammatory Activities}
본 발명은 비자종자 발효 추출물의 제조방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 항염 효능을 갖는 비자종자 발효 추출물의 제조방법에 관한 것이다.
비자나무는 겉씨식물 구과목 주목과의 상록교목으로서 학명은 Torreya nucifera이고, 높이가 약 25m이며, 지름이 약 2m에 달한다.
이러한 비자나무는 가지가 사방으로 퍼지고, 수피는 회색빛을 띤 갈색이며, 늙은 나무에서는 얕게 갈라져서 떨어진다.
또한, 비자나무의 잎은 길이 약 25mm, 너비 약 3mm 정도이고, 줄 모양으로 단단하며 끝이 뾰족하고 깃꼴처럼 2줄로 배열하며, 잎 표면은 짙은 녹색, 뒷면은 갈색이고, 중륵(中肋)은 뒷면에만 있으며, 길이 3mm 정도의 잎자루가 있고, 6 내지 7년 만에 떨어진다.
한편, 비자나무의 꽃은 단성화이며 4월에 피고, 수꽃은 10개 내외의 포가 있는데 갈색이며, 그 길이 약 10mm 정도로 10여 개의 꽃이 한 꽃자루에 달린다.
또한, 비자나무의 암꽃은 모양이 일정하지 않은 달걀 모양으로서 한군데에 2 내지 3개씩 달리고 5 내지 6개의 녹색 포로 싸인다. 그리고 열매는 다음해 9 내지 10월에 익고 길이 25 내지 28mm, 지름 약 20mm, 두께 약 3mm 정도로 타원형이다.
또한, 비자나무의 종자는 타원형이고 길이 약 23mm, 지름 약 12mm로 다갈색이며 껍질이 딱딱하며, 그 종자만을 비자라고도 하며 약용으로 사용하고 있다.
한편, 체내 효소계, 환원대사, 화학약품, 공해물질 및/또는 광화학반응 등의 각종 물리적, 화학적 및 환경적 요인 등에 의하여 생성되는 활성산소는 세포구성 성분들인 지질, 단백질, 당 및/또는 DNA 등에 대하여 비선택적, 비가역적인 파괴 작용을 통해 세포노화 또는 암을 비롯한 각종 질병을 일으키는 것으로 알려져 있다.
또한, 이들 활성산소에 의한 지질과산화의 결과로 생성되는 지질과산화물을 비롯한 여러 가지 체내 과산화물도 세포에 대한 산화적 파괴를 일으켜 각종 기능장애를 야기함으로써 여러 가지 질병의 원인이 되기도 한다.
따라서 이와 같은 자유 라디칼을 소거할 수 있는 화합물(free radical scavengers) 또는 과산화물 생성 억제물질과 같은 항산화제들이 이들 산화물들에 기인하는 노화 및 각종 질환의 억제 또는 치료제로서 기대된다.
한편, 인체는 산화촉진물질과 산화억제물질이 균형을 이루고 있으나, 여러 가지 요인들로 인하여 이러한 균형 상태를 잃고 산화를 촉진하는 방향으로 기울게 되면, 생체 내에 산화적 스트레스(oxidative stress)가 유발되어 세포손상 및 병리적 질환을 유발하게 된다.
이러한 산화적 스트레스의 직접적 원인이 되는 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS)은 화학적으로 불안정하고 반응성이 높아 DNA, 단백질, 지질 및/또는 탄수화물과 같은 여러 생체물질과 쉽게 반응할 수 있으며, 생체 내 고분자들을 공격하여 세포와 조직에 비가역적인 손상을 일으키거나, 돌연변이, 세포독성 및/또는 암 등을 초래하게 된다.
인체 내에서 대식세포는 병원체에 반응하여 종양 괴사인자-α(tumor necrotic factor-α, TNF-α), 인터루킨-6(IL-6), 인터루킨-1β(IL-1β) 등과 같은 염증유발인자를 생성하고, 유도성 일산화질소 합성효소(inducible nitric oxide synthase, iNOS)와 사이클로옥시게나제-2(cyclooxygenase-2, COX-2)를 합성하여 일산화질소(NO) 및 프로스타글란딘(prostaglandin E2, PGE2)을 생성한다.
또한, 생리학적으로 NO는 세균과 종양을 제거하고 혈압을 조절하거나 신경 전달을 매개하는 등 다양한 역할을 한다.
그러나 염증 반응이 일어나게 되면 관련 세포들에서 iNOS의 발현이 증가하여 많은 양의 NO가 생성되고, 과도하게 생성된 NO는 조직의 손상, 유전자 변이, 신경 손상 등을 유발하며, 혈관 투과성을 증가시켜 부종 등의 염증 반응을 촉진시킨다.
또한, 염증 반응시에는 다양한 염증유발인자와 더불어 여러 가지 자유 라디칼(free radical)이 생성되며, 정상적인 자유 라디칼은 세포의 항상성 유지에 관여하며, 세포의 분화, 성장, 생존, 노화에 영향을 준다.
이러한 자유 라디칼 중 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS)은 세포 내의 미토콘드리아에서 호흡과 면역 반응에 의한 산소의 산화와 환원 과정을 통해 끊임없이 생성된다.
유해한 ROS는 일반적으로 슈퍼옥사이드 디스뮤타제(superoxide dismutase), 카탈라제(catalase), 글루타치온 퍼옥시다제(glutathione peroxidase), 글루타민 리덕타제(glutamine reductase), 비타민 C, 비타민 E, 요산, 빌리루빈(bilirubin)과 같은 항산화 체계의 작용으로 제거된다.
그러나 자유 라디칼의 생성과 소거의 균형이 무너지게 되면 산화적 스트레스(oxidative stress)가 발생하게 되어 염증, 노화 또는 암과 같은 다양한 병리학적인 변화를 일으킨다.
실제로 많은 임상 질환에서 산화적 스트레스가 증가되는 것이 확인되었으며, 이러한 산화적 스트레스를 줄이기 위해 새로운 항산화 물질에 대한 다양한 연구가 이루어지고 있다.
이에, 본 발명자들은 항산화 및/또는 항염증 활성을 가지는 동시에 부작용이 적은 천연물 유래 소재를 개발하고자 예의 연구 노력한 결과, 제주에서 군락으로 서식하는 제주산 비자종자 추출물에서 자유 라디칼 소거능 및 NO 생성 저해능을 확인하여 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
특허문헌 1. 국내특허공개 제10-2018-0102415호(2018년 09월 17일 공개)
본 발명은 전술한 문제점을 극복하기 위해 창출된 것으로서, 항산화 및/또는 항염증 효능을 갖는 비자종자 발효 추출물의 제조방법을 제공하고자 한다.
본 발명은
건조된 비자종자를 분쇄하여 비자종자 분쇄물을 제조하는 비자종자 분쇄물 제조단계;
상기 비자종자 분쇄물 제조단계가 종료된 후 비자종자 분쇄물, 증류수, 죽염 및 MRS배지를 1 : 2 내지 4 : 0.001 내지 0.01 : 0.005 내지 0.012의 중량비율로 혼합하여 115 내지 125℃의 온도범위에서 10 내지 20분 동안 멸균하여 비자종자 배지를 제조하는 비자종자 배지 제조단계;
상기 비자종자 배지 제조단계가 종료된 후 비자종자 배지 100중량부 기준으로, 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) 종균 0.5 내지 1.5중량부를 비자종자 배지에 접종한 후 35 내지 40℃의 온도범위에서 1 내지 3일간 배양한 뒤 115 내지 125℃의 온도범위에서 10 내지 20분 동안 멸균한 후 동결건조하여 비자종자 발효분말을 제조하는 비자종자 발효분말 제조단계; 및
상기 비자종자 발효분말 제조단계가 종료된 후 상기 비자종자 발효분말 100중량부 기준으로, 900 내지 1,100중량부의 용제와 혼합한 뒤 20 내지 30시간 동안 교반한 후 여과지로 여과하여 걸러진 여액을 감압 농축하여 건조하는 비자종자 발효 추출물 제조단계를 포함하는 비자종자 발효 추출물 제조방법을 제공한다.
본 발명에 따른 비자종자 발효 추출물의 제조방법은 항산화 및/또는 항염증 활성을 가지는 동시에 부작용이 적은 천연물인 비자종자 발효 추출물의 제조방법을 제공한다.
도 1은 본 발명의 실시예 및 비교예에 따른 항염 실험결과를 나타내는 도,
도 2는 본 발명의 실시예에 따른 비자종자 발효 조건별 추출물의 항염 실험결과를 나타내는 도이다.
이하, 본 발명을 구체적으로 설명한다.
본 발명은 건조된 비자종자를 분쇄하여 비자종자 분쇄물을 제조하는 비자종자 분쇄물 제조단계; 상기 비자종자 분쇄물 제조단계가 종료된 후 비자종자 분쇄물, 증류수, 죽염 및 MRS배지를 1 : 2 내지 4 : 0.001 내지 0.01 : 0.005 내지 0.012의 중량비율로 혼합하여 115 내지 125℃의 온도범위에서 10 내지 20분 동안 멸균하여 비자종자 배지를 제조하는 비자종자 배지 제조단계; 상기 비자종자 배지 제조단계가 종료된 후 비자종자 배지 100중량부 기준으로, 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) 종균 0.5 내지 1.5중량부를 비자종자 배지에 접종한 후 35 내지 40℃의 온도범위에서 1 내지 3일간 배양한 뒤 115 내지 125℃의 온도범위에서 10 내지 20분 동안 멸균한 후 동결건조하여 비자종자 발효분말을 제조하는 비자종자 발효분말 제조단계; 및 상기 비자종자 발효분말 제조단계가 종료된 후 상기 비자종자 발효분말 100중량부 기준으로, 900 내지 1,100중량부의 용제와 혼합한 뒤 20 내지 30시간 동안 교반한 후 여과지로 여과하여 걸러진 여액을 감압 농축하여 건조하는 비자종자 발효 추출물 제조단계를 포함하는 비자종자 발효 추출물 제조방법을 제공한다.
본 발명에 따른 비자종자 발효 추출물, 특정적으로 항염 효능을 지닌 비자종자 발효 추출물의 제조방법은 당업계의 통상적인 비자종자 발효 추출물이라면 특별히 한정되지 않는다.
본 발명에 따른 비자종자 분쇄물 제조단계는 건조된 비자종자를 분쇄하여 비자종자 분쇄물, 특정적으로 분말 형태의 분쇄물을 제조하는 것으로서, 이러한 목적을 갖는 당업계의 통상적인 비자종자 분쇄물 제조방법이라면 어떠한 것이라도 무방하다.
여기서, 상기 비자종자는 당업계의 통상적인 비자나무 종자, 즉 씨앗을 지칭한다.
또한, 상기 분쇄물, 특정적으로 비자종자 분쇄물은 비자종자 발효분말을 제조하기 위한 재료로 사용되는바, 그 제조방법은 당업계의 통상적인 분쇄방법, 바람직하게는 볼밀을 이용한 볼밀법을 이용하여 분쇄한 것을 포함한다.
바람직한 비자종자는 제주도산 비자 종자를 사용하는 것을 추천한다.
한편, 본 발명에 따른 비자종자 배지 제조단계는 상기 비자종자 분쇄물을 이용하여 발효분말, 특정적으로 비자종자 발효분말을 제조하기 위한 배지를 제조하기 위한 것으로서, 이러한 목적을 갖는 당업계의 통상적인 방법이라면 어떠한 것을 사용하여도 무방하지만, 바람직하게는 상기 비자종자 분쇄물 제조단계가 종료된 후 비자종자 분쇄물, 물(증류수), 죽염 및 MRS배지를 1 : 2 내지 4 : 0.001 내지 0.01 : 0.005 내지 0.012의 중량비율로 혼합하여 115 내지 125℃, 추천하기로는 약 121℃의 온도범위에서 10 내지 20분, 추천하기로는 약 15분 동안 멸균하는 것을 포함한다.
이때, 상기 비자종자 분쇄물, 물(증류수), 죽염 및 MRS배지의 중량비는 상기 중량비율로 한정될 수도 있지만, 가장 효과적으로는 1 : 3 : 0.005 : 0.008의 중량비율인 것을 추천한다.
본 발명에 따른 비자종자 발효분말 제조단계는 상기 비자종자 배지 제조단계를 거쳐 제조된 비자종자 배지에 종균을 접종한 후 배양하여 비자종자 발효분말을 제조하기 위한 것으로서, 이러한 목적을 갖는 당업계의 통상적인 비자종자 발효분말 제조방법이라면 어떠한 것이라도 무방하지만, 바람직하게는 상기 비자종자 배지 제조단계가 종료된 후 비자종자 배지 100중량부 기준으로, 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) 종균 0.5 내지 1.5중량부, 추천하기로는 약 1중량부를 비자종자 배지에 접종한 후 35 내지 40℃, 추천하기로는 약 37℃의 온도범위에서 1 내지 3일간, 추천하기로는 약 2일간 배양한 뒤 115 내지 125℃, 추천하기로는 약 121℃의 온도범위에서 10 내지 20분, 추천하기로는 약 15분 동안 멸균한 후 동결건조하는 것을 포함한다.
본 발명에 따른 비자종자 발효 추출물 제조단계는 상기 비자종자 발효분말 제조단계에서 제조된 비자종자 발효분말로부터 비자종자 발효 추출물을 추출하기 위한 것으로서, 이러한 목적을 위한 당업계의 통상적인 추출방법이라면 어떠한 것을 사용하여도 무방하지만, 바람직하게는 상기 비자종자 발효분말 제조단계가 종료된 후 상기 비자종자 발효분말 100중량부 기준으로, 900 내지 1,100중량부, 바람직하게는 약 1,000중량부의 용제와 혼합한 뒤 20 내지 30시간, 바람직하게는 약 24시간 동안 교반한 후 여과지, 바람직하게는 약 5㎛ 여과지로 여과하여 걸러진 여액을 감압 농축하여 건조하는 것을 포함한다.
이때, 상기 비자종자 발효 추출물 제조단계를 거쳐 추출된 추출물은 분말형태인 것이 바람직하다.
또한, 상기 비자종자 발효 추출물 제조단계의 용제는 물, 특정적으로 증류수 및/또는 에탄올을 포함할 수 있으며, 상기 물(증류수) 및 에탄올이 서로 혼합되어 용제를 구성할 경우 물, 특정적으로 증류수와 에탄올이 1:1 내지 1:5의 혼합비율로 혼합되는 것이 좋지만, 추천하기로는 용제가 50% 에탄올 또는 80% 에탄올인 것이 좋다.
또한, 본 발명에 따른 비자종자 발효 추출물 제조단계는 비자종자 발효분말과 용제가 혼합된 뒤 혼합물을 80 내지 100℃의 온도범위에서 3 내지 5시간, 바람직하게는 4시간 동안 열수추출한 후 여과지, 바람직하게는 약 5㎛ 여과지로 여과하여 걸러진 여액을 감압 농축하여 건조하는 것을 포함할 수 있다.
이와 같은 구성을 갖는 본 발명에 따른 비자종자 발효 추출물 제조방법으로 제조된 비자종자 발효 추출물은 화장료 조성물, 항염제 및/또는 항산화제에 포함될 수 있다.
이하에서 실시예를 통하여 본 발명을 구체적으로 설명하기로 한다. 그러나 하기의 실시예는 오로지 본 발명을 구체적으로 설명하기 위한 것으로 이들 실시예에 의해 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
[실시예 1]
건조된 비자종자[제주자원식물연구소]를 볼밀로 분쇄하여 분말화한 비자종자 분쇄물을 제조하였다.
그 다음, 상기 비자종자 분쇄물 100g, 증류수 300g, 죽염 0.5g, 및 MSR배지 0.8g을 혼합한 뒤 약 121℃에서 약 15분동안 멸균하여 비자종자 배지를 제조하였다.
그 다음, 제조된 비자종자 배지 100g에 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) 종균을 1g, 접종한 후 약 37℃의 온도에서 2일간 배양한 뒤 약 121℃에서 약 15분 동안 멸균한 뒤 동결건조하여 비자종자 발효분말을 제조하였다.
그 다음, 상기 비자종자 발효분말 100g과 증류수 1,000g을 혼합하여 약 24시간 동안 교반한 후 약 5㎛ 여과지로 여과한 뒤 여액을 감압 농축 및 건조하여 비자종자 발효 추출물을 제조하였다.
[실시예 2]
실시예 1과 동일한 방법으로 실시하되, 비자종자 발효분말 100g과 증류수 1,000g을 혼합하여 약 24시간 동안 교반한 후 약 5㎛ 여과지 여과한 뒤 여액을 감압 농축 및 건조하는 것 대신 비자종자 발효분말 100g과 증류수 1,000g을 혼합한 뒤 약 90℃의 온도에서 약 4시간 동안 열수추출한 후 약 5㎛ 여과지로 여과한 뒤 여액을 감압 농축 및 건조하여 실시하였다.
[실시예 3]
실시예 1과 동일한 방법으로 실시하되, 증류수 1,000g 대신 물과 에탄올이 1:1의 중량비율로 혼합된 50% 에탄올 1,000g을 이용하여 실시하였다.
[실시예 4]
실시예 1과 동일한 방법으로 실시하되, 증류수 1,000g 대신 물과 에탄올이 1:4의 중량비율로 혼합된 80% 에탄올 1,000g을 이용하여 실시하였다.
[비교예 1]
건조된 비자종자[제주자원식물연구소]를 볼밀로 분쇄하여 분말화한 비자종자 분쇄물을 제조하였다.
그 다음, 상기 비자종자 분쇄물 100g과 50% 에탄올 1,000g을 혼합하여 약 24시간 동안 교반한 후 약 5㎛ 여과지로 여과한 뒤 여액을 감압 농축 및 건조하여 비자종자 추출물을 제조하였다.
[실험]
세포배양
Murine macrophage cell line인 RAW264.7 cell은 ATCC[American Type Cell Culture]로부터 분양받아 100U/mL 페니실린(penicillin), 100μg/mL 스트렙토마이신(streptomycin)과 10% FBS[Fetal Bovine Serum]가 함유된 DMEM[Dulbecco’s modified Eagle’s medium]배지를 사용하여 37℃, 5% 이산화탄소 항온기에서 배양하며, 2일 간격으로 계대 배양하였다.
NO 생성율 측정
24 well plate에 RAW264.7 cell을 2 × 105 cells/well로 분주하고 37℃, 5% 이산화탄소 조건하에서 18시간 전 배양하였다.
그 다음, 1μg/mL의 LPS[lipopolysaccharide]를 포함하는 배지로 교환하고 실시예 및 비교예를 각각 처리하여 24시간 배양하였다.
그 다음, 이후 생성된 NO(Nitric Oxide)의 양은 세포 배양 상등액 100μL와 Griess 시약(1% sulfanilamide, 0.1% naphthylethylene-diamine in 2.5% phosphoric acid) 100μL를 혼합하여 96 well plate에서 10분 동안 반응시킨 후 540nm에서 흡광도를 측정하였다.
생성된 NO의 양은 세포 배양액 중에 존재하는 NO2-의 형태로 측정하며, sodium nitrite (NaNO2)를 표준물질로 사용하여 작성한 표준검정곡선을 통해 정량화 하였다.
여기서, 상기 NO(Nitric Oxide)는 체내 방어 기능, 신호전달 기능뿐만 아니라 세균을 죽이는 등의 항균 역할도 하지만 염증상태에서 iNOS(inducible NOS)에 의해 생성된 과도한 NO는 염증 매개 물질의 생합성을 촉진하여 염증을 악화시키는 것으로 알려져 있으며, 이로 인해 NO 생성을 저해하는 물질은 염증성 질환을 예방할 수 있는 가능성이 있다고 알려져 있다.
세포독성 평가(MTT assay)
세포를 2.0 × 105cells/well로 분주하여 37℃, 5% 이산화탄소 조건의 세포 배양기에서 18시간 전배양한 후, LPS와 실시예 및 비교예를 각각 농도별로 배양하였다.
그 다음, 상기 세포를 24시간 배양한 후 500μg/mL의 농도로 MTT[3-(4,5-dimethyl-thiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide] 용액을 첨가하여 3시간 추가 반응시켰다.
그 다음, 살아있는 세포와 반응하여 생긴 포마잔(formazan) 침전물에 DMSO[dimethyl sulfoxide]를 가하여 용해시키고, microplate reader를 이용하여 570nm에서 흡광도를 측정하였다.
상기 NO 생성율 및 세포독성 평가 결과를 표 1, 표 2, 도 1 및 도 2로 나타냈다.
NO 생성률(%) NO 저해율(%) 세포생존률(%)
대조군 LPS (-) 5.2 94.8 105.3
LPS (+) 100.0 0.0 100.0
비교예 1 100 μg/mL 98.7 1.3 94.0
200 μg/mL 93.3 6.7 91.0
400 μg/mL 82.8 17.2 113.8
실시예 3 100 μg/mL 79.8 20.2 101.4
200 μg/mL 69.3 30.7 105.5
400 μg/mL 54.7 45.3 102.6
표 1 및 도 1에 나타낸 바와 같이, 비교예 1인 비발효 추출물은 400μg/mL의 농도에서 NO의 생성을 17.2% 저해시켰지만, 실시예 3인 발효 추출물은 45.3% 저해시켰으며, 이를 통해 실시예 3이 동일 농도에서 발효 추출물의 항염효능이 더 우수함을 확인할 수 있었다.
또한, 비자 종자 발효 추출물인 실시예 3은 100 ~ 400 μg/mL의 농도에서 농도 의존적으로 NO의 생성을 억제시키는 효과가 있음을 확인하였다.
NO 생성률(%) NO 저해율(%) 세포생존률(%)
대조군 LPS (-) 5.2 94.8 105.3
LPS (+) 100.0 0.0 100.0
실시예 1 100 μg/mL 89.6 10.4 99.5
200 μg/mL 79.5 20.5 97.1
400 μg/mL 72.4 27.6 91.7
실시예 2 100 μg/mL 87.1 12.9 99.5
200 μg/mL 84.2 15.8 102.1
400 μg/mL 77.8 22.2 97.9
실시예 3 100 μg/mL 79.8 20.2 101.4
200 μg/mL 69.3 30.7 105.5
400 μg/mL 54.7 45.3 102.6
실시예 4 100 μg/mL 61.3 38.7 101.0
200 μg/mL 49.4 50.6 103.6
400 μg/mL 12.0 88.0 102.1
표 2 및 도 2에 나타낸 바와 같이, 80% 에탄올 추출물인 실시예 4의 항염 효능이 가장 우수하였다. 특히, 실시예 4에 따른 비자 종자 발효물에 대한 80% 에탄올 추출물은 400μg/mL의 농도에서 NO의 생성을 88.0% 저해시켰으며, 농도 의존적으로 NO의 생성을 억제시키는 효과가 있음을 확인하였다.
이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예는 모두 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가개념으로부터 도출되는 모두 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (6)

  1. 건조된 비자종자를 분쇄하여 비자종자 분쇄물을 제조하는 비자종자 분쇄물 제조단계;
    상기 비자종자 분쇄물 제조단계가 종료된 후 비자종자 분쇄물, 증류수, 죽염 및 MRS배지를 1 : 2 내지 4 : 0.001 내지 0.01 : 0.005 내지 0.012의 중량비율로 혼합하여 115 내지 125℃의 온도범위에서 10 내지 20분 동안 멸균하여 비자종자 배지를 제조하는 비자종자 배지 제조단계;
    상기 비자종자 배지 제조단계가 종료된 후 비자종자 배지 100중량부 기준으로, 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) 종균 0.5 내지 1.5중량부를 비자종자 배지에 접종한 후 35 내지 40℃의 온도범위에서 1 내지 3일간 배양한 뒤 115 내지 125℃의 온도범위에서 10 내지 20분 동안 멸균한 후 동결건조하여 비자종자 발효분말을 제조하는 비자종자 발효분말 제조단계; 및
    상기 비자종자 발효분말 제조단계가 종료된 후 상기 비자종자 발효분말 100중량부 기준으로, 900 내지 1,100중량부의 용제와 혼합한 뒤 20 내지 30시간 동안 교반한 후 여과지로 여과하여 걸러진 여액을 감압 농축하여 건조하는 비자종자 발효 추출물 제조단계를 포함하는 비자종자 발효 추출물 제조방법.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 비자종자 발효 추출물 제조단계의 용제는 증류수인 것을 포함하는 비자종자 발효 추출물 제조방법.
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 제1항 또는 제2항에 따른 비자종자 발효 추출물 제조방법으로 제조된 비자종자 발효 추출물.
  6. 제1항 또는 제2항에 따른 비자종자 발효 추출물 제조방법으로 제조된 비자종자 발효 추출물을 포함하는 화장료 조성물.
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