KR20220152295A - 피리미도헤테로사이클릭 화합물 및 이의 응용 - Google Patents

피리미도헤테로사이클릭 화합물 및 이의 응용 Download PDF

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KR20220152295A
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원타오 우
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지쿠이 쑨
양양 쉬
즈졘 천
즈?? 천
존 펀위 진
수후이 천
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Abstract

한 부류의 피리미도헤테로사이클릭(pyrimidoheterocyclic) 화합물, 구체적으로는 화학식 III으로 표시된 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 개시되어 있다.
[화학식 III]
Figure pct00151

Description

피리미도헤테로사이클릭 화합물 및 이의 응용
본원은 다음의 우선권을 주장한다:
2020년 3월 12일에 출원된 CN202010172140.2;
2020년 4월 22일에 출원된 CN202010323035.4;
2020년 9월 11일에 출원된 CN202010953203.8;
2020년 12월 29일에 출원된 CN202011593642.9.
발명의 분야
본 발명은 한 종류의 피리미도헤테로사이클릭(pyrimidoheterocyclic) 화합물, 구체적으로 화학식 III으로 표시된 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염에 관한 것이다.
RAS 종양유전자 돌연변이(oncogene mutation)는 인간 암에서 가장 흔한 활성화 돌연변이(activating mutation)이며, 인간 종양의 30%에서 발생한다. RAS 유전자 패밀리는 3개의 하위 유형(KRAS, HRAS 및 NRAS)을 포함하며, 이 중 RAS로-유발된(RAS-driven) 암의 85%는 KRAS 하위 유형의 돌연변이에 의해 발생된다. KRAS 돌연변이는 폐 선암(lung adenocarcinoma), 췌관암종(pancreatic ductal carcinoma), 대장암(colorectal cancer) 등과 같은 고형 종양에서 흔히 발견된다. KRAS 돌연변이된 종양에서, 종양원성 돌연변이(oncogenic mutation)의 80%는 코돈(codon) 12에서 발생하며, 가장 흔한 돌연변이는 p.G12D (41%), p.G12V (28%) 및 p.G12C (14%)를 포함한다.
KRAS 유전자의 전체 이름은 키르스텐 랫트 육종 바이러스 종양유전자 동족체(Kirsten rat sarcoma viraloncogene homolog)이다. KRAS는 세포 성장의 신호 전달 조절에서 중추적인 역할을 한다. EGFR (ErbB1), HER2 (ErbB2), ErbB3, 및 ErbB4와 같은 업스트림 세포 표면 수용체(upstream cell surface receptor)는 외부 신호를 받은 후 RAS 단백질을 통해 다운스트림(downstream)으로 신호를 전송한다. KRAS 단백질이 활성화되지 않으면, 이것은 GDP(구아노신 이인산(guanosine diphosphate))에 단단히 결합한다. KRAS 단백질은 SOS1과 같은 구아노신 교환 인자에 의해 활성화된 후, KRAS 단백질은 GTP(구아노신 삼인산(guanosine triphosphate))와 결합하여 키나아제 활성 상태(kinase active state)가 된다. 돌연변이 후, KRAS 유전자는, 업스트림 성장 인자 수용체 신호와 독립적인 다운스트림 경로로 성장 및 증식에 대한 신호를 독립적으로 전달하여, 제어되지 않은 세포 성장 및 종양 진행을 유발할 수 있다. 한편, KRAS 유전자가 돌연변이를 갖는지 아닌지 여부도 종양 예후의 중요한 지표이다.
KRAS는 최초로 발견된 종양유전자이지만, 오랫동안 약물 투여가 불가능한(undruggable) 표적으로 여겨져 왔다. Amgen과 Mirati Therapeutics는 2019년까지 이들의 소분자 KRAS 억제제 AMG510과 MRTX849의 임상 연구 결과를 잇따라 발표하였고, 이것은 KRAS 억제제의 종양의 임상 치료에서의 임상적 유효성을 처음으로 확인시켰다. AMG 510과 MRTX849는 모두, KRAS G12C 돌연변이체 단백질의 시스테인 잔기와 비가역적 공유 결합을 형성하여 KRAS 활성을 억제하는, 비가역적 소분자 억제제이다.
통계적인 결과는, 폐 선암의 12-36%이 KRAS 돌연변이에 의해 유발되고; 결장암(colon cancer)의 27-56%가 KRAS에 의해 유발되고; 90%의 췌장암, 21%의 자궁내막암(endometrial cancer), 12-36%의 폐 선암이 KRAS에 의해 유발되는 것을 보여주며, 이는 환자 집단(patient population)이 거대함을 나타낸다. KRAS 유전자 돌연변이에서, 돌연변이의 97%는 위치 12 또는 13의 아미노산 잔기에서 발생하며, 여기서 G12D, G12V 및 G13D 돌연변이는 열악한(poor) 약물 투여 가능성(druggability)을 갖고, 위치 12의 글리신이 시스테인으로 대체되는 KRAS (G12C) 돌연변이는 공유결합 억제제의 개발을 위한 좋은 방향을 제공한다.
본 발명은 화학식 III으로 표시된 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다:
[화학식 III]
Figure pct00001
상기 화학식 III에서,
T1은 O 및 N으로부터 선택되고;
R1은 C6-10 아릴 및 5원 내지 10원 헤테로아릴로부터 선택되되, 이때 상기 C6-10 아릴 및 5원 내지 10원 헤테로아릴은 1, 2, 3, 4 또는 5개의 Ra로 치환되거나 치환되지 않고;
T1이 O일 때, R2은 존재하지 않고;
T1이 N일 때, R2은 H, C1-3 알킬, -C(=O)-C1-3 알킬 및 -S(=O)2-C1-3 알킬로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬, -C(=O)-C1-3 알킬 및 -S(=O)2-C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rb로 치환되거나 치환되지 않고;
R3은 C1-3 알킬이고, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rc로 치환되거나 치환되지 않고;
R4는 H 및 C1-3 알킬로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rd로 치환되거나 치환되지 않고;
R5, R6 및 R7은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, 및 C1-3 알킬로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 F로 치환되거나 치환되지 않고;
R8은 H 및 CH3으로부터 선택되고;
Ra는 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, C1-3 알킬, C1-3 알콕시, C2-3 알키닐 및 C2-3 알케닐로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬, C1-3 알콕시, C2-3 알키닐 및 C2-3 알케닐은 1, 2 또는 3개의 F로 치환되거나 치환되지 않고;
Rb는 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I, OH 및 NH2로부터 선택되고;
Rc는 각각 독립적으로 4원 내지 8원 헤테로사이클로알킬로부터 선택되되, 이때 상기 4원 내지 8원 헤테로사이클로알킬은 1, 2 또는 3개의 R로 치환되거나 치환되지 않고;
Rd는 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I, OH, NH2 및 CN으로부터 선택되고;
R은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, OH, CN, C1-3 알킬, C1-3 알콕시 및 -C1-3 알킬-O-CO-C1-3 알킬아미노로부터 선택되고;
단, R1이 나프틸일 때, 상기 나프틸은 F, Cl, Br, OH, NH2, CF3, CH2CH3 및 -C≡CH로 치환되거나 치환되지 않고, R5, R6 및 R7은 각각 독립적으로 H이다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 Ra은 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, CH3, CH2CH3, OCH3, OCH2CH3, -CH=CH2, -CH2-CH=CH2 및 -C≡CH로부터 선택되고, 이때 상기 CH3, CH2CH3, OCH3, OCH2CH3, -CH=CH2, -CH2-CH=CH2 및 -C≡CH는 1, 2 또는 3개의 F로 치환되거나 치환되지 않고, 다른 치환체(variable)들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 Ra은 각각 독립적으로 F, OH, NH2, CH3, CF3, CH2CH3 및 -C≡CH로부터 선택되고, 다른 치환체들이 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R1은 페닐, 나프틸, 인돌릴 및 인다졸릴로부터 선택되되, 이때 상기 페닐, 나프틸, 인돌릴 및 인다졸릴은 1, 2 또는 3개의 Ra로 치환되거나 치환되지 않고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R1은
Figure pct00002
및
Figure pct00003
로부터 선택되고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R2은 H, CH3, CH2CH3 및 CH(CH3)2로부터 선택되되, 이때 상기 CH3, CH2CH3 및 CH(CH3)2은 1, 2 또는 3개의 Rb로 치환되거나 치환되지 않고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R2은 H 및 CH3으로부터 선택되고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, OH, CN, CH3, CH2CH3, CH2CF3, OCH3, OCF3 및
Figure pct00004
로부터 선택되고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 Rc는 테트라하이드로피롤릴 및 헥사하이드로-1H-피롤리지닐로부터 선택되되, 이때 상기 테트라하이드로피롤릴 및 헥사하이드로-1H-피롤리지닐은 1, 2 또는 3개의 R로 치환되거나 치환되지 않고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 Rc는
Figure pct00005
,
Figure pct00006
, 및
Figure pct00007
로부터 선택되고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 Rc는
Figure pct00008
,
Figure pct00009
, 및
Figure pct00010
로부터 선택되고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R3은 CH3이고, 이때 상기 CH3은 1, 2 또는 3개의 Rc로 치환되거나 치환되지 않고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R3은
Figure pct00011
, 및
Figure pct00012
로부터 선택되고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R3은
Figure pct00013
, 및
Figure pct00014
로부터 선택되고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R4는 H 및 CH3으로부터 선택되되, 이때 상기 CH3은 1, 2 또는 3개의 Rd로 치환되거나 치환되지 않고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R4는 H, CH3 및 CH2CN으로부터 선택되고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명은 화학식 III으로 표시된 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다:
[화학식 III]
Figure pct00015
상기 화학식 III에서,
T1은 O 및 N으로부터 선택되고;
R1은 페닐, 나프틸 및 인다졸릴로부터 선택되되, 이때 상기 페닐, 나프틸 및 인다졸릴은 1, 2, 3, 4 또는 5개의 Ra로 치환되거나 치환되지 않고;
T1이 O일 때, R2은 존재하지 않고;
T1이 N일 때, R2은 H, C1-3 알킬, -C(=O)-C1-3 알킬 및 -S(=O)2-C1-3 알킬로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬, -C(=O)-C1-3 알킬 및 -S(=O)2-C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rb로 치환되거나 치환되지 않고;
R3은 C1-3 알킬이고, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rc로 치환되거나 치환되지 않고;
R4는 H 및 C1-3 알킬로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rd로 치환되거나 치환되지 않고;
R5, R6 및 R7은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH 및 NH2로부터 선택되고;
R8은 H 및 CH3으로부터 선택되고;
Ra는 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, CH3, CF3 및 OCH3으로부터 선택되고;
Rb는 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I, OH 및 NH2로부터 선택되고;
Rc는 각각 독립적으로 테트라하이드로피롤릴 및 헥사하이드로-1H-피롤리지닐로부터 선택되되, 이때 상기 테트라하이드로피롤릴 및 헥사하이드로-1H-피롤리지닐은 1, 2 또는 3개의 R로 치환되거나 치환되지 않고;
Rd는 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I, OH, NH2 및 CN으로부터 선택되고;
R은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br 및 CH3으로부터 선택된다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용된 염이 개시되며, 상기 화합물은 다음으로부터 선택된다:
[화학식 II]
Figure pct00016
상기 화학식 II에서,
R4는 C1-3 알킬이되, 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rd로 치환되거나 치환되지 않고;
T1, R1, R2, R3, R5, R6, R7 및 Rd는 본 개시내용에서 정의된 것과 같고;
"*"로 표시된 탄소는 키랄(chiral) 탄소 원자이고, 이는 (R) 또는 (S) 단일 거울상 이성질체(enantiomer)의 형태로 존재하거나, 또는 하나의 거울상 이성질체가 풍부한(enriched) 것이다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R1은 페닐, 나프틸 및
Figure pct00017
로부터 선택되되, 이때 상기 페닐, 나프틸 및
Figure pct00018
은 1, 2 또는 3개의 Ra로 치환되거나 치환되지 않고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R1은
Figure pct00019
및
Figure pct00020
로부터 선택되고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R2은 H, CH3, CH2CH3 및 CH(CH3)2로부터 선택되되, 이때 상기 CH3, CH2CH3 및 CH(CH3)2은 1, 2 또는 3개의 Rb로 치환되거나 치환되지 않고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R2은 H 및 CH3으로부터 선택되고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 Rc는
Figure pct00021
,
Figure pct00022
, 및
Figure pct00023
로부터 선택되고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 Rc는
Figure pct00024
,
Figure pct00025
, 및
Figure pct00026
로부터 선택되고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R3은 CH3이되, 이때 상기 CH3은 1, 2 또는 3개의 Rc로 치환되거나 치환되지 않고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R3은
Figure pct00027
및
Figure pct00028
로부터 선택되고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R3은
Figure pct00029
및
Figure pct00030
로부터 선택되고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R4는 H 및 CH3으로부터 선택되되, 이때 상기 CH3은 1, 2 또는 3개의 Rd로 치환되거나 치환되지 않고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R4는 H, CH3 및 CH2CN으로부터 선택되고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명은 화학식 III으로 표시된 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다:
[화학식 III]
Figure pct00031
상기 화학식 III에서,
T1은 O 및 N으로부터 선택되고;
R1은 페닐, 나프틸 및 인다졸릴로부터 선택되되, 이때 상기 페닐, 나프틸 및 인다졸릴은 1, 2, 3, 4 또는 5개의 Ra로 치환되거나 치환되지 않고;
T1이 O일 때, R2은 존재하지 않고;
T1이 N일 때, R2은 H, C1-3 알킬, -C(=O)-C1-3 알킬 및 -S(=O)2-C1-3 알킬로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬, -C(=O)-C1-3 알킬 및 -S(=O)2-C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rb로 치환되거나 치환되지 않고;
R3은 C1-3 알킬이되, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rc로 치환되거나 치환되지 않고;
R4는 H 및 C1-3 알킬로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rd로 치환되거나 치환되지 않고;
R5, R6 및 R7은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH 및 NH2로부터 선택되고;
R8은 H 및 CH3으로부터 선택되고;
Ra는 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, CH3, CF3 및 OCH3으로부터 선택되고;
Rb는 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I, OH, NH2 및 CH3으로부터 선택되고;
Rc는 각각 독립적으로 테트라하이드로피롤릴이되, 이때 상기 테트라하이드로피롤릴은 1, 2 또는 3개의 R로 치환되거나 치환되지 않고;
Rd는 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I, OH, NH2 및 CN으로부터 선택되고;
R은 각각 독립적으로 F, Cl, Br 및 CH3으로부터 선택된다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 개시되고, 상기 화합물은 다음으로부터 선택된다:
[화학식 II]
Figure pct00032
상기 화학식 II에서, T1, R1, R2, R3, R4, R5, R6 및 R7은 본 개시내용에서 정의된 것과 같고;
"*"로 표시된 탄소 원자는 키랄 탄소 원자이고, 이는 (R) 또는 (S) 단일 거울상 이성질체의 형태로 존재하거나, 또는 하나의 거울상 이성질체가 풍부한 것이다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R1은 페닐, 나프틸 및
Figure pct00033
로부터 선택되고, 이때 상기 페닐, 나프틸 및
Figure pct00034
은 1, 2 또는 3개의 Ra로 치환되거나 치환되지 않고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R1은
Figure pct00035
및
Figure pct00036
로부터 선택되고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R2은 H, CH3, CH2CH3 및 CH(CH3)2로부터 선택되고, 상기 CH3, CH2CH3 및 CH(CH3)2은 1, 2 또는 3개의 Rb로 치환되거나 치환되지 않고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R2은 H 및 CH3으로부터 선택되고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 Rc는
Figure pct00037
이고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R3은 CH3이되, 이때 상기 CH3은 1, 2 또는 3개의 Rc로 치환되거나 치환되지 않고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R3은
Figure pct00038
이고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R4는 CH3이고, 이때 상기 CH3은 1, 2 또는 3개의 Rd로 치환되거나 치환되지 않고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R4는 CH2CN이고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명은 화학식 II로 표시된 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다:
[화학식 II]
Figure pct00039
상기 화학식 II에서,
T1은 O 및 N으로부터 선택되고;
R1은 페닐 및 나프틸로부터 선택되되, 이때 상기 페닐 및 나프틸은 1, 2 또는 3개의 Ra로 치환되거나 치환되지 않고;
T1이 O일 때, R2은 존재하지 않고;
T1이 N일 때, R2은 C1-3 알킬, -C(=O)-C1-3 알킬 및 -S(=O)2-C1-3 알킬로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬, -C(=O)-C1-3 알킬 및 -S(=O)2-C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rb로 치환되거나 치환되지 않고;
R3은 C1-3 알킬이되, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rc로 치환되거나 치환되지 않고;
R4는 C1-3 알킬이되, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rd로 치환되거나 치환되지 않고;
R5, R6 및 R7은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH 및 NH2로부터 선택되고;
Ra는 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, CH3 및 OCH3으로부터 선택되고;
Rb는 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I, OH, NH2 및 CH3으로부터 선택되고;
Rc는 각각 독립적으로 테트라하이드로피롤릴이고, 이때 상기 테트라하이드로피롤릴은 1, 2 또는 3개의 R로 치환되거나 치환되지 않고;
Rd는 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I, OH, NH2 및 CN으로부터 선택되고;
R은 각각 독립적으로 F, Cl, Br 및 CH3으로부터 선택되고;
"*"로 표시된 탄소 원자는 키랄 탄소 원자이고, 이는 (R) 또는 (S) 단일 거울상 이성질체의 형태로 존재하거나, 또는 하나의 거울상 이성질체가 풍부한 것이다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R1은 나프틸이되, 이때 상기 나프틸은 1, 2 또는 3개의 Ra로 치환되거나 치환되지 않고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R1은
Figure pct00040
및
Figure pct00041
로부터 선택되고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R2은 CH3, CH2CH3 및 CH(CH3)2로부터 선택되되, 이때 상기 CH3, CH2CH3 및 CH(CH3)2은 1, 2 또는 3개의 Rb로 치환되거나 치환되지 않고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R2은 CH3이고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 Rc는
Figure pct00042
이고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R3은 CH3이되, 이때 상기 CH3은 1, 2 또는 3개의 Rc로 치환되거나 치환되지 않고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R3은
Figure pct00043
이고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R4는 CH3이되, 이때 상기 CH3은 1, 2 또는 3개의 Rd로 치환되거나 치환되지 않고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R4는 CH2CN이고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명은 화학식 I로 표시된 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다:
[화학식 I]
Figure pct00044
상기 화학식 I에서,
R1은 페닐 및 나프틸로부터 선택되되, 이때 상기 페닐 및 나프틸은 1, 2 또는 3개의 Ra로 치환되거나 치환되지 않고;
R2은 C1-3 알킬, -C(=O)-C1-3 알킬 및 -S(=O)2-C1-3 알킬로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬, -C(=O)-C1-3 알킬 및 -S(=O)2-C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rb로 치환되거나 치환되지 않고;
R3은 C1-3 알킬이되, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rc로 치환되거나 치환되지 않고;
R4는 C1-3 알킬이되, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rd로 치환되거나 치환되지 않고;
R5, R6 및 R7은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, OH 및 NH2로부터 선택되고;
Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I, OH, NH2 및 CH3으로부터 선택되고;
Rc는 각각 독립적으로 테트로하이드로피롤릴이되, 상기 테트라하이드로피롤릴은 1, 2 또는 3개의 R로 치환되거나 치환되지 않고;
Rd는 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I, OH, NH2 및 CN으로부터 선택되고;
R은 각각 독립적으로 F, Cl, Br 및 CH3으로부터 선택되고;
"*"로 표시된 탄소 원자는 키랄 탄소 원자이고, 이는 (R) 또는 (S) 단일 거울상 이성질체의 형태로 존재하거나, 또는 하나의 거울상 이성질체가 풍부한 것이다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R1은 나프틸이고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R1은
Figure pct00045
이고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R2은 CH3, CH2CH3 및 CH(CH3)2로부터 선택되고, 이때 상기 CH3, CH2CH3 및 CH(CH3)2은 1, 2 또는 3개의 Rb로 치환되거나 치환되지 않고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R2은 CH3이고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 Rc는
Figure pct00046
이고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R3은 CH3이고, 이때 상기 CH3은 1, 2 또는 3개의 Rc로 치환되거나 치환되지 않고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R3은
Figure pct00047
이고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R4는 CH3이고, 이때 상기 CH3은 1, 2 또는 3개의 Rd로 치환되거나 치환되지 않고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 R4는 CH2CN이고, 다른 치환체들은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 개시되고, 상기 화합물은 다음으로부터 선택된다:
[화학식 P-1]
Figure pct00048
상기 화학식 P-1에서,
R1, R5, 및 Rc는 본 개시내용에서 정의된 것과 같고;
R4는 C1-3 알킬이고, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rd로 치환되거나 치환되지 않고;
Rd는 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I, OH, NH2 및 CN으로부터 선택되고;
"*"로 표시된 탄소 원자는 키랄 탄소 원자이고, 이는 (R) 또는 (S) 단일 거울상 이성질체의 형태로 존재하거나, 또는 하나의 거울상 이성질체가 풍부한 것이다.
본 발명의 일부 양태에서, 상기 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 개시되고, 상기 화합물은 다음으로부터 선택된다:
[화학식 I-1]
Figure pct00049
[화학식 II-1]
Figure pct00050
[화학식 IV-1]
Figure pct00051
[화학식 IV-2]
Figure pct00052
상기 화학식 I-1, II-1, IV-1, 및 IV-2에서,
R1, R2, R4, R5, R6, R7, R8 및 R은 본 개시내용에서 정의된 것과 같다.
본 발명은 또한 상기 변수들의 임의의 조합에 의해 얻어진 일부 양태를 포함한다.
본 발명은 하기 화학식의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00053
Figure pct00054
본 발명의 일부 양태에서, 상기 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 개시되고, 상기 화합물은 다음으로부터 선택된다:
Figure pct00055
Figure pct00056
본 발명의 일부 양태에서, 상기 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 개시되고, 상기 화합물은 다음으로부터 선택된다:
Figure pct00057
Figure pct00058
Figure pct00059
Figure pct00060
본 발명은 또한 KRASG12C 돌연변이체 단백질(mutant protein)과 관련된 질병을 치료하기 위한 약제(medicament)의 제조에서 상기 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도를 제공한다.
기술적인 효과
본 발명의 화합물은 KRASG12C-돌연변이된 MIA-PA-CA-2 세포주 및 NCI-H358 세포에 대한 우수한 세포 증식 억제 활성을 갖는다. 본 발명의 화합물은 간 마이크로솜, 간세포, 혈청 및 전혈 중 우수한 안정성을 가질 뿐 아니라, 우수한 PK 특성 및 현저한 항종양 효과를 갖는다.
관련 정의들
본 명세서에서 사용되는 다음 용어 및 구문은, 달리 명시되지 않는 한, 다음과 같은 의미를 갖는다. 특정 용어나 구문은 특별한 정의가 없을 때 불확실하거나 불분명한 것으로 간주되어서는 안 되며, 종래의 의미로 이해되어야 한다. 상품명이 본 명세서에 표시되는 경우, 해당 상품 또는 이의 활성 성분을 나타내기 위한 것이다.
용어 "약제학적으로 허용되는(pharmaceutically acceptable)"은, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 또는 다른 문제 또는 합병증 없이, 신뢰할 수 있는 의학적 판단의 범위 내에서 인간 및 동물 조직과 접촉하여 사용하기에 적합하고, 합리적인 이익/위험 비율에 상응하는 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투여형(dosage form)과 관련하여 본 명세서에서 사용된다.
용어 "약제학적으로 허용되는 염"은, 본원에 개시된 특정 치환체를 갖는 화합물을 비교적 무독성인 산 또는 염기와 반응시켜 제조된, 본원에 개시된 화합물의 염을 의미한다. 본원에 개시된 화합물이 비교적 산성인 작용기를 함유하는 경우, 순수한 용액 또는 적합한 불활성 용매 중에서 상기 화합물을 충분한 양의 염기와 접촉시켜 염기 부가 염(base addition salt)을 수득할 수 있다. 약제학적으로 허용되는 염기 부가 염은 나트륨, 칼륨, 칼슘, 암모늄, 유기 아민 또는 마그네슘의 염 또는 유사한 염을 포함한다. 본원에 개시된 화합물이 비교적 염기성인 작용기를 함유하는 경우, 순수한 용액 또는 적합한 불활성 용매 중에서 상기 화합물을 충분한 양의 산과 접촉시켜 산 부가 염(acid addition salt)을 수득할 수 있다. 약제학적으로 허용되는 산 부가 염의 예시는 다음과 같다: 무기 산 염으로서, 상기 무기 산 염은, 예를 들면, 염산, 브롬화수소산, 질산, 탄산, 중탄산염, 인산, 인산일수소(monohydrogen phosphate), 인산이수소(dihydrogen phosphate), 황산 수소염(hydrogen sulfate), 요오드화수소산, 아인산 등을 포함하는 것인, 무기 산 염; 및 유기산 염으로서, 상기 유기산 염은 예를 들면 아세트산, 프로피온산, 이소부티르산(isobutyric acid), 말레산(maleic acid), 말론산(malonic acid), 벤조산(benzoic acid), 숙신산(succinic acid), 수베르산(suberic acid), 푸마르산(fumaric acid), 젖산(lactic acid), 만델산(mandelic acid), 프탈산(phthalic acid), 벤젠설폰산(benzenesulfonic acid), p-톨루엔설폰산(p-toluenesulfonic acid), 시트르산(citric acid), 타르타르산(tartaric acid) 및 메탄설폰산(methanesulfonic acid) 등을 포함하는 것인, 유기산 염; 및 아미노산의 염(예를 들면, 아르기닌 등), 및 유기산, 예를 들면 글루쿠론산 (glucuronic acid) 등. 본원에 개시된 특정 화합물은 염기성 및 산성 작용기를 모두 함유하고 임의의 염기 또는 산 부가염으로 전환될 수 있다.
본원에 개시된 약제학적으로 허용되는 염은 통상적인 화학적 방법에 의해 산성 또는 염기성 모이어티(moiety)를 함유하는 모 화합물로부터 제조될 수 있다. 일반적으로, 이러한 염은 화합물의 유리 산 또는 염기 형태를, 물 또는 유기 용매 또는 이들의 혼합물 중에서, 화학양론적 양의 적절한 염기 또는 산과 반응시켜 제조할 수 있다.
본원에 개시된 화합물은 특정한 기하학적 또는 입체이성질체 형태로 존재할 수 있다. 본 발명은 시스 및 트랜스 이성질체, (-)- 및 (+)-거울상 이성질체, (R)- 및 (S)-거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, (D)-이성질체, (L)-이성질체, 및 라세미 혼합물 및 기타 혼합물, 예를 들어 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체가 풍부한 혼합물을 포함하여, 모든 이러한 화합물을 고려하며, 이들 모두는 본원에 개시된 범위 내에 포함된다. 알킬과 같은 치환체는 추가적인 비대칭 탄소 원자를 가질 수 있다. 이들 모든 이성질체 및 이들의 혼합물은 본원에 개시된 범위 내에 포함된다.
본원에 개시된 화합물은 화합물을 구성하는 하나 이상의 원자에서 비천연 비율(unnatural proportion)의 원자 동위원소를 함유할 수 있다. 예를 들어, 화합물은 삼중수소(3H), 요오드-125(125I) 또는 C-14(14C)와 같은 방사성 동위원소로 표지될 수 있다. 다른 예시를 들면, 수소는 중수소로 대체되어 중수소화된(deuterated) 약물을 형성할 수 있다. 중수소와 탄소 간의 결합은 일반 수소와 탄소 간의 결합보다 강하다. 중수소화되지 않은 약물에 비해, 중수소화된 약물은 독성 부작용 감소, 약물 안정성 증가, 효능 향상 및 약물의 생물학적 반감기 연장이라는 장점을 갖는다. 본원에 개시된 화합물의 동위원소 조성의 모든 변화는, 방사능에 관계없이, 본 발명의 범위에 포함된다.
용어 "선택적" 또는 "선택적으로"는 후속 이벤트 또는 조건이 발생할 수 있지만 필수는 아니며, 상기 용어는 이벤트 또는 조건이 발생하는 경우와 이벤트 또는 조건이 발생하지 않는 경우를 포함하는 것을 의미한다.
용어 "치환된"은, 특정 원자의 원자가가 정상이고 치환된 화합물이 안정적인 한, 특정 원자의 하나 이상의 수소 원자가 중수소 및 수소 변이체를 비롯한 치환체로 치환됨을 의미한다. 치환체가 옥소 (즉, =O)인 경우, 2개의 수소 원자가 치환됨을 의미한다. 방향족 고리 상의 위치는 옥소로 치환될 수 없다. 용어 "임의로 치환된"은, 달리 명시되지 않는 한, 원자가 치환체로 치환될 수 있거나 치환되지 않을 수 있음을 의미하며, 치환체의 종 및 개수는 화학적으로 달성 가능한 한 임의적일 수 있다.
어떠한 치환체(예를 들면, R)가 화합물의 구성이나 구조에서 두 번 이상 발생하는 경우, 각 경우에 치환체의 정의는 독립적이다. 따라서, 예를 들어, 기(group)가 0-2개의 R로 치환되는 경우, 상기 기는 최대 2개의 R로 임의로 치환될 수 있으며, 여기서 R의 정의는 각 경우에 독립적이다. 더욱이, 치환체 및/또는 이의 변이체의 조합은 조합이, 안정한 화합물을 생성하는 경우에만, 허용된다.
연결기(linking group)의 개수가 0인 경우, 예를 들면 -(CRR)0-의 경우, 이것은 연결기가 단일 결합임을 의미한다.
치환체들 중 하나가 단일 결합일 때, 이는 상기 단일 결합에 의해 연결된 2개의 기가 직접 연결됨을 의미한다. 예를 들면, A-L-Z 중 L이 단일 결합을 나타내면, A-L-Z의 구조는 실제로 A-Z이다.
열거된 연결기가 연결 방향을 나타내지 않는 경우, 연결 방향은 임의적이다. 예를 들어,
Figure pct00061
중 연결기 L이 -M-W-인 경우, -M-W-는 왼쪽에서 오른쪽으로 읽는 순서와 동일한 방향으로 고리 A 및 고리 B에 연결되어
Figure pct00062
를 구성하거나, 왼쪽에서 오른쪽으로 읽는 순서와 반대 방향으로 고리 A 및 고리 B에 연결되어
Figure pct00063
를 구성할 수 있다. 연결기, 치환체 및/또는 이의 변이체의 조합은 이러한 조합이 안정한 화합물을 생성할 수 있는 경우에만 허용된다.
달리 명시되지 않는 한, 기가 하나 이상의 연결 가능한 부위를 갖는 경우, 기의 임의의 하나 이상의 부위는 화학 결합을 통해 다른 기에 연결될 수 있다. 화학 결합의 연결 위치가 가변적이며 연결 가능한 위치(들)에 H 원자(들)가 있는 경우, H 원자(들)를 갖는 연결 가능한 부위가 화학 결합에 연결될 때, 이 위치에서 H 원자(들)의 개수는 연결된 화학 결합의 수가 증가함에 따라 상응하여 감소할 것이고, 기는 상응하는 원자가의 기가 될 것이다. 부위와 다른 기 간의 화학 결합은 직선 실선 결합(straight solid bond)(
Figure pct00064
), 직선 점선 결합(straight dashed bond)(
Figure pct00065
) 또는 물결선(wavy line)(
Figure pct00066
)으로 표시될 수 있다. 예를 들어, -OCH3의 직선 실선 결합은 기가 기 내 산소 원자를 통해 다른 기에 연결됨을 나타내며;
Figure pct00067
내 직선 점선 결합은 기가 기 내 질소 원자의 두 끝을 통해 다른 기에 연결됨을 나타내고;
Figure pct00068
내 물결선은 기가 페닐 기 내 1-탄소 원자 및 2-탄소 원자를 통해 다른 기에 연결됨을 나타내며;
Figure pct00069
는 피페리디닐 기 상 임의의 연결 가능한 부위가, 적어도 4가지 연결 방식인
Figure pct00070
,
Figure pct00071
및
Figure pct00072
를 포함하여, 하나의 화학 결합을 통해 다른 기에 연결될 수 있음을 나타내고; H 원자가 -N- 상에 그려지더라도,
Figure pct00073
은 여전히
Figure pct00074
의 연결 방법을 포함하며; 하나의 화학 결합이 연결되면 이 위치에서의 H가 1만큼 감소될 것이고, 기는 대응하는 1가의 피페리디닐 기가 될 것이기 때문이다.
달리 명시되지 않는 한, 쐐기 모양의 실선 결합(wedged solid bond)(
Figure pct00075
) 및 쐐기 모양의 점선 결합(wedged dashed bond)(
Figure pct00076
)은 입체 중심(stereocenter)의 절대 배열(absolute configuration)을 나타내고; 직선 실선 결합(straight solid bond)(
Figure pct00077
) 및 직선 점선 결합 (straight dashed bond)(
Figure pct00078
)은 입체 중심의 상대 배열(relative configuration)을 나타내며; 물결선(wavy line)(
Figure pct00079
)은 쐐기 모양의 실선 결합(wedged solid bond)(
Figure pct00080
) 또는 쐐기 모양의 점선 결합(wedged dashed bond)(
Figure pct00081
)을 나타내거나; 또는, 물결선(
Figure pct00082
)은 직선 실선 결합(
Figure pct00083
) 및 직선 점선 결합(
Figure pct00084
)을 나타낸다. 예를 들어,
Figure pct00085
은
Figure pct00086
및
Figure pct00087
을 나타내고,
Figure pct00088
은
Figure pct00089
및
Figure pct00090
을 나타낸다.
달리 명시되지 않는 한, "하나의 이성질체가 풍부한", "이성질체가 풍부한", "하나의 거울상 이성질체가 풍부한" 또는 "거울상 이성질체가 풍부한"이라는 용어는 하나의 이성질체 또는 거울상 이성질체의 함량이 100% 미만이고, 이성질체 또는 거울상 이성질체의 함량이 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상, 99.5% 이상, 99.6% 이상, 99.7% 이상, 99.8% 이상, 또는 99.9% 이상임을 의미한다.
달리 명시되지 않는 한, "이성질체 과잉" 또는 "거울상 이성질체 과잉"이라는 용어는 2개의 이성질체들 또는 2개의 거울상 이성질체들의 상대 백분율 간의 차이를 의미한다. 예를 들어, 하나의 이성질체 또는 거울상 이성질체가 90%의 양으로 존재하고, 다른 이성질체 또는 거울상 이성질체가 10%의 양으로 존재하는 경우, 상기 이성질체 또는 거울상 이성질체 과잉(ee 값)은 80%이다.
광학 활성 (R)- 및 (S)-이성질체, 또는 D 및 L 이성질체는 키랄 합성, 키랄 시약, 또는 기타 통상적인 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 본원에 개시된 특정 화합물의 한 종류의 거울상 이성질체를 얻으려는 경우, 비대칭 합성 또는 키랄 보조제의 유도체 작용에 이어서, 생성된 부분입체 이성질체 혼합물을 분리하고, 보조기(auxiliary group)를 절단함으로써 순수한 원하는 거울상 이성질체를 얻을 수 있다. 대안적으로, 분자가 염기성 작용기(예를 들어, 아미노) 또는 산성 작용기(예를 들어, 카복실)를 함유하는 경우, 화합물은 적절한 광학 활성 산 또는 광학 활성 염기와 반응하여 부분입체 이성질체의 염을 형성하고, 이어서 순수한 거울상 이성질체를 제공하기 위해 당업계의 통상적인 방법을 통해 부분입체 이성질체 분할을 거친다. 또한, 거울상 이성질체 및 부분입체 이성질체는 일반적으로 키랄 고정상을 사용하고, 선택적으로 화학적 유도법(예를 들어, 아민으로부터 생성된 카바메이트)과 결합하는 크로마토그래피를 통해 단리된다.
달리 명시되지 않는 한, "C1-6 알킬"은 1 내지 6개의 탄소 원자로 구성된 선형 또는 분지형 포화 탄화수소 기를 나타내기 위해 사용된다. C1-6 알킬은 C1-5, C1-4, C1-3, C1-2, C2-6, C2-4, C6, 및 C5 알킬 등을 포함한다. C1-6 알킬은 1가(예를 들어, 메틸), 2가(예를 들어, 메틸렌) 또는 다가(예를 들어, 메테닐)일 수 있다. C1-6 알킬의 예로는 메틸(Me), 에틸(Et), 프로필(n-프로필 및 이소프로필 포함), 부틸(n-부틸, 이소부틸, 2급-부틸 및 3급-부틸 포함), 펜틸(n-펜틸, 이소펜틸 및 네오펜틸 포함), 헥실 등이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "C1-3 알킬"은 1 내지 3개의 탄소 원자로 구성된 선형 또는 분지형 포화 탄화수소 기를 나타내는 데 사용된다. C1-3 알킬은 C1-2 알킬, C2-3 알킬 등을 포함한다. C1-3 알킬은 1가(예를 들어, 메틸), 2가(예를 들어, 메틸렌) 또는 다가(예를 들어, 메테닐)일 수 있다. C1-3 알킬의 예로는 메틸(Me), 에틸(Et), 프로필(n-프로필 및 이소프로필 포함) 등이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "C1-3 알콕시"는 1 내지 3개의 탄소 원자를 함유하고, 산소 원자에 의해 분자의 나머지 부분에 부착된 알킬 기를 의미한다. C1-3 알콕시 기는 C1-2, C2-3, C3, 및 C2 알콕시 기 등을 포함한다. C1-3 알콕시 기의 예로는 메톡시, 에톡시, 프로폭시(n-프로폭시 및 이소프로폭시 포함) 등이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "C1-3 알킬아미노"는 1 내지 3개의 탄소 원자를 함유하고, 아미노 기에 의해 분자의 나머지 부분에 부착된 알킬 기를 의미한다. C1-3 알킬아미노 기는 C1-2, C3 및 C2 알킬아미노 기 등을 포함한다. C1-3 알킬아미노 기의 예로는 -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCH2CH3, -N(CH3)CH2CH3, -NHCH2CH2CH3, -NHCH2(CH3)2 등이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
달리 명시되지 않는 한, "C2-3 알케닐"은 적어도 하나의 탄소-탄소 이중 결합을 함유하는 2 내지 3개의 탄소 원자로 구성된 선형 또는 분지형 탄화수소 기를 나타내는 데 사용되며, 이때 탄소-탄소 이중 결합은 상기 기의 임의의 위치에 위치할 수 있다. C2-3 알케닐은 C3 및 C2 알케닐을 포함한다. C2-3 알케닐은 1가, 2가 또는 다가일 수 있다. C2-3 알케닐의 예로는 비닐, 프로페닐 등이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
달리 명시되지 않는 한, "C2-3 알키닐"은 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하는 2 내지 3개의 탄소 원자로 구성된 선형 또는 분지형 탄화수소 기를 나타내는 데 사용되며, 이때 탄소-탄소 삼중 결합은 상기 기의 임의의 위치에 위치할 수 있다. C2-3 알키닐은 C3 및 C2 알키닐을 포함한다. C2-3 알키닐의 예로는 에티닐, 프로피닐 등이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "C6-10 방향족 고리" 및 "C6-10 아릴"은 본 개시내용에서 상호교환적으로 사용될 수 있다. 용어 "C6-10 방향족 고리" 또는 "C6-10 아릴"은 공액 파이 전자 시스템을 갖고 6 내지 10개의 탄소 원자로 구성된 사이클릭 탄화수소 기를 의미한다. 이는 모노사이클릭, 융합된 바이사이클릭 또는 융합된 트리사이클릭 고리 시스템일 수 있으며, 이때 각 고리는 방향족이다. 이는 1가, 2가 또는 다가일 수 있다. C6-10 아릴은 C6-9, C9, C10 및 C6 아릴 등을 포함한다. C6-10 아릴의 예로는 페닐, 나프틸(1-나프틸 및 2-나프틸 등 포함)이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "5원 내지 10원 헤테로방향족 고리" 및 "5원 내지 10원 헤테로아릴"은 상호교환적으로 사용될 수 있다. 용어 "5원 내지 10원 헤테로아릴"은 공액 파이 전자 시스템을 갖고 5 내지 10개의 고리 원자로 구성된 사이클릭 기를 의미하며, 이때 1, 2, 3 또는 4개의 고리 원자는 O, S 및 N으로부터 독립적으로 선택된 헤테로원자이고, 나머지는 탄소 원자이다. 이는 모노사이클릭, 융합된 바이사이클릭 또는 융합된 트리사이클릭 고리 시스템일 수 있으며, 이때 각각의 고리는 방향족이고, 질소 원자는 선택적으로 4차화되고(quaternized), 질소 및 황 헤테로원자는 선택적으로 산화된다(즉, NO 및 S(O)p, p는 1 또는 2임). 5원 내지 10원 헤테로아릴은 헤테로원자 또는 탄소 원자를 통해 분자의 나머지 부분에 부착될 수 있다. 5원 내지 10원 헤테로아릴 기는 5원 내지 8원, 5원 내지 7원, 5원 내지 6원, 5원 및 6원 헤테로아릴 기를 포함한다. 5원 내지 10원 헤테로아릴의 예에는 피롤릴(N-피롤릴, 2-피롤릴, 3-피롤릴, 등 포함), 피라졸릴(2-피라졸릴 및 3-피라졸릴, 등 포함), 이미다졸릴(N-이미다졸릴, 2-이미다졸릴, 4-이미다졸릴, 및 5-이미다졸릴, 등 포함), 옥사졸릴(2-옥사졸릴, 4-옥사졸릴, 및 5-옥사졸릴, 등 포함), 트리아졸릴(1H-1,2,3-트리아졸릴, 2H-1,2,3-트리아졸릴, 1H-1,2,4-트리아졸릴 및 4H-1,2,4-트리아졸릴, 등), 테트라졸릴, 이속사졸릴(3-이속사졸릴, 4-이속사졸릴 및 5-이속사졸릴, 등), 티아졸릴(2-티아졸릴, 4-티아졸릴 및 5-티아졸릴, 등 포함), 푸릴(2-푸릴 및 3-푸릴, 등 포함), 티에닐(2-티에닐 및 3-티에닐, 등 포함), 피리딜(2-피리딜, 3-피리딜 및 4-피리딜, 등 포함), 피라지닐 또는 피리미디닐(2-피리미디닐 및 4-피리미디닐, 등 포함), 벤조티아졸릴(5-벤조티아졸릴, 등 포함), 푸리닐, 벤즈이미다졸릴 (2-벤즈이미다졸릴, 등 포함), 벤즈옥사졸릴, 인돌릴(5-인돌릴, 등 포함), 이소퀴놀릴(1-이소퀴놀릴, 5-이소퀴놀릴, 등 포함), 퀴녹살리닐(2-퀴녹살리닐, 5-퀴녹살리닐, 등 포함) 또는 퀴놀릴(3-퀴놀릴, 6-퀴놀릴, 등 포함)이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "4원 내지 8원 헤테로사이클로알킬"은 단독으로 또는 다른 용어와 함께 각각 4 내지 8개의 고리 원자로 구성된 포화된 사이클릭 기를 나타내며, 여기서 1, 2, 3 또는 4개의 고리 원자는 O, S 및 N으로부터 독립적으로 선택된 헤테로원자이고, 나머지는 탄소 원자이며, 이때 질소 원자는 선택적으로 4차화되고, 질소 및 황 헤테로원자는 선택적으로 산화된다(즉, NO 및 S(O)p, p는 1 또는 2임). 고리는 모노사이클릭 및 바이사이클릭 고리 시스템을 포함하고, 이때 바이사이클릭 고리 시스템은 스피로, 융합 및 가교된 사이클릭 고리를 포함한다. 또한, "4원 내지 8원 헤테로사이클로알킬"에 대하여, 헤테로원자는 분자의 나머지 부분에 헤테로사이클로알킬 기가 부착되는 위치에 존재할 수 있다. 4원 내지 8원 헤테로사이클로알킬은 4원 내지 6원, 5원 내지 6원, 4원, 5원, 및 6원 헤테로사이클로알킬, 등을 포함한다. 4원 내지 8원 헤테로사이클로알킬의 예에는 아제티디닐, 옥세타닐, 티에타닐, 피롤리디닐, 피라졸리디닐, 이미다졸리디닐, 테트라하이드로티에닐(테트라하이드로티엔-2-일 및 테트라하이드로티엔-3-일 등 포함), 테트라하이드로푸라닐(테트라하이드로푸란-2-일 등 포함), 테트라하이드로피라닐, 피페리디닐(1-피페리디닐, 2-피페리디닐 및 3-피페리디닐 등 포함), 피페라지닐(1-피페라지닐 및 2-피페라지닐 등 포함), 모르폴리닐(3-모르폴리닐 및 4-모르폴리닐 등 포함), 디옥사닐, 디티아닐, 이속사졸리디닐, 이소티아졸리디닐, 1,2-옥사지닐, 1,2-티아지닐, 헥사하이드로피리다지닐, 호모피페라지닐, 호모피페리디닐 또는 디옥세파닐, 등이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.
달리 명시되지 않는 한, Cn-n+m 또는 Cn-Cn+m은 n 내지 n+m개 탄소의 임의의 특정 경우를 포함하며, 예를 들어, C1-12는 C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, C10, C11 및 C12를 포함하고, 또한 n부터 n+m까지의 임의의 범위를 포함하며, 예를 들어, C1-12는 C1-3, C1-6, C1-9, C3-6, C3-9, C3-12, C6-9, C6-12 및 C9-12 등을 포함하고; 유사하게, n원 내지 n+m원은 고리 상의 원자의 수가 n 내지 n+m임을 나타내며, 예를 들어, 3원 내지 12원 고리는 3원 고리, 4원 고리, 5원 고리, 6원 고리, 7원 고리, 8원 고리, 9원 고리, 10원 고리, 11원 고리, 및 12원 고리를 포함하고, 또한 n부터 n+m까지의 임의의 범위를 포함하며, 예를 들어, 3원 내지 12원 고리는 3원 내지 6원 고리, 3원 내지 9원 고리, 5원 내지 6원 고리, 5원 내지 7원 고리, 6원 내지 7원 고리, 6원 내지 8원 고리, 및 6원 내지 10원 고리, 등을 포함한다.
용어 "이탈기"는 치환 반응(예를 들어, 친핵성 치환 반응)을 통해 다른 작용기 또는 원자로 대체될 수 있는 작용기 또는 원자를 지칭한다. 예를 들어, 대표적인 이탈기는 트리플레이트(triflate); 염소, 브롬 및 요오드; 설포네이트 기, 예를 들어 메실레이트, 토실레이트, p-브로모벤젠설포네이트, p-톨루엔설포네이트 등; 아실옥시, 예를 들어, 아세톡시, 트리플루오로아세톡시 등을 포함한다.
용어 "보호기"에는 "아미노 보호기", "하이드록시 보호기" 또는 "티오 보호기"가 포함되지만, 이에 제한되지 않는다. 용어 "아미노 보호기"는 아미노의 질소에 대한 부반응(side reaction)을 차단하기에 적합한 보호기를 의미한다. 대표적인 아미노 보호기는 다음을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다: 포르밀; 아실, 예를 들어 알카노일(예를 들어, 아세틸, 트리클로로아세틸 또는 트리플루오로아세틸); 알콕시카보닐, 예를 들어, 3급-부톡시카보닐(Boc); 아릴메톡시카보닐, 예를 들어, 벤질옥시카보닐(Cbz) 및 9-플루오레닐메톡시카보닐(Fmoc); 아릴메틸, 예를 들어, 벤질(Bn), 트리틸(Tr), 1,1-비스-(4'-메톡시페닐)메틸; 실릴, 예를 들어, 트리메틸실릴(TMS) 및 3급-부틸디메틸실릴(TBS) 등. 용어 "하이드록실 보호기"는 하이드록시에 대한 부반응을 차단하기에 적합한 보호기를 지칭한다. 대표적인 하이드록시 보호기는 다음을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다: 알킬, 예를 들어, 메틸, 에틸 및 3급-부틸; 아실, 예를 들어, 알카노일(예를 들어, 아세틸); 아릴메틸, 예를 들어, 벤질(Bn), p-메톡시벤질(PMB), 9-플루오레닐메틸(Fm), 및 디페닐메틸(벤즈하이드릴, DPM); 실릴, 예를 들어, 트리메틸실릴(TMS) 및 3급-부틸 디메틸 실릴(TBS) 등.
본원에 개시된 화합물들은 하기 열거된 양태, 다른 화학적 합성 방법과 조합하여 하기 열거된 양태에 의해 형성된 양태, 및 당업자에게 널리 공지된 동등한 대체 방법을 포함하는, 당업자에게 널리 공지된 다양한 합성 방법들에 의해 제조될 수 있다. 대안적인 양태는 본원에 개시된 양태를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
본원에 개시된 화합물의 구조는 당업자에게 널리 공지된 통상적인 방법에 의해 확인될 수 있다. 본 발명이 화합물의 절대 배열에 관한 것이라면, 절대 배열은 단결정 X선 회절(single crystal X-Ray diffraction: SXRD)과 같은 당업계의 통상적인 기술에 의해 확인될 수 있다. 단결정 X선 회절(SXRD)에서, 성장한 단결정(cultivated single crystal)의 회절 강도 데이터는 φ/ω 스캔의 스캐닝 모드에서 CuKα 방사선의 광원이 있는 Bruker D8 벤처 회절계를 사용하여 수집되며; 관련 데이터를 수집한 후, 결정 구조를 직접 방법(Shelxs97)으로 추가로 분석하여 절대 배열을 확인한다.
본 발명에 사용된 용매는 상업적으로 입수 가능하다.
화합물은 당업계의 일반적인 명명 원칙에 따라 또는 ChemDraw® 소프트웨어에 의해 명명되고, 상업적으로 입수 가능한 화합물은 벤더 디렉토리 이름(vendor directory name)으로 명명된다.
도 1은 다른 용량들에서 시간에 따른 종양 부피의 변화를 보여준다.
도 2는 다른 용량들에서 시간에 따른 동물 체중의 변화를 보여준다.
본 발명은 실시예에 의해 아래에서 상세하게 설명된다. 그러나, 이들 실시예들은 본 발명을 불리하게 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 본 발명은 여기에서 상세하게 설명되었고, 양태들도 여기에 개시되어 있다. 본원에 개시된 사상 및 범위를 벗어나지 않으면서 본원에 개시된 양태에 다양한 변경 및 수정이 이루어질 수 있음은 당업자에게 명백할 것이다.
실시예 1
Figure pct00091
단계 1: 화합물 1-2의 합성
화합물 1-1(10 g, 64.03 mmol, 8.70 mL, 1 eq) 및 3급-부틸 설핀아미드(7.76 g, 64.03 mmol, 1 eq)를 테트라하이드로푸란(100 mL)에 용해시킨 후, 테트라에틸 티타네이트(29.21 g, 128.06 mmol, 26.56 mL, 2 eq)를 첨가했다. 상기 혼합물을 25℃에서 10시간 동안 교반했다. 반응이 완료되면, 빙수욕에 얼음 10 g을 가한 결과 다량의 고체가 침전되었다. 이어서, 테트라하이드로푸란(100 mL)을 첨가하고, 상기 혼합물을 여과했다. 여액을 수집하고, 농축하여 화합물 1-2를 얻었고, 이는 다음 반응 단계에 바로 사용되었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 9.17 (s, 1H), 9.05 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.05 (dd, J = 7.9, 10.8 Hz, 2H), 7.94 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.72 - 7.63 (m, 1H), 7.59 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 1.34 (s, 9H); LCMS m/z =260.1 [M+1]+.
단계 2: 화합물 1-3의 합성
메틸 아세테이트(4.28 g, 57.83 mmol, 4.60 mL, 1.5 eq)를 테트라하이드로푸란(100 mL)에 용해시키고, 상기 혼합물을 질소 하에 -78℃로 냉각시켰다. 상기 반응 용액에 리튬 헥사메틸디실라자이드(1 M, 59.76 mL, 1.55 eq)를 서서히 적가하였다. -78℃에서 1시간 동안 교반한 후, 상기 반응 용액에 화합물 1-2(10 g, 38.56 mmol, 1 eq)를 서서히 적가하고, 혼합물을 이 온도에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응이 완료되면, 상기 반응 용액을 포화 염화암모늄 수용액(80 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트(50 mL × 3)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 수집하고, 농축하였다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 50/1 - 1/1)로 정제하여 화합물 1-3을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ= 8.17 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.57 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 7.54 - 7.52 (m, 1H), 7.52 - 7.44 (m, 2H), 4.78 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 3.69 (s, 3H), 3.09 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 1.25 - 1.22 (s, 9H); LCMS m/z = 334.1 [M+1]+.
단계 3: 화합물 1-4의 합성
화합물 메틸 아세테이트(5.55 g, 74.98 mmol, 5.96 mL, 5 eq)를 테트라하이드로푸란(50 mL)에 용해시키고, 상기 혼합물을 질소 하에 -78℃로 냉각시켰다. 상기 반응 용액에 나트륨 헥사메틸디실라자이드(1 M, 74.98 mL, 5 eq)를 첨가하였다. -78℃에서 1시간 동안 교반한 후, 상기 반응 용액에 화합물 1-3(5 g, 15.00 mmol, 1 eq)을 서서히 적가하고, 혼합물을 이 온도에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. 반응이 완료되면, 상기 반응 용액을 포화 염화암모늄 수용액(50 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트(50 mL × 3)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 식염수(50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 수집하고, 농축하여 화합물 1-4를 얻었고, 이는 다음 반응 단계에 바로 사용되었다. LCMS m/z = 376.1 [M+1]+.
단계 4: 화합물 1-5의 합성
화합물 1-4(5 g, 13.32 mmol, 11.92 mL, 1 eq)를 톨루엔(50 mL)에 용해시키고, N,N-디메틸포름아미드 디메틸 아세탈(15.87 g, 133.16 mmol, 17.69 mL, 10 eq)을 첨가하고, 상기 혼합물을 교반하여 19℃에서 10시간 동안 반응시켰다. 반응이 완료되면, 상기 반응 용액을 포화 염화암모늄 수용액(80 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트(50 mL × 3)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 수집하고, 농축하였다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 100/1 - 10/1)로 정제하여 화합물 1-5를 얻었다. LCMS m/z = 431.1 [M+1]+.
단계 5: 화합물 1-6의 합성:
화합물 1-5(2.4 g, 5.57 mmol, 1 eq)를 하이드로클로라이드/디옥산(4 M, 60.00 mL)에 용해시키고, 상기 혼합물을 18℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응이 완료되면, 상기 반응 용액을 바로 농축하여 화합물 1-6의 염산염을 얻었고, 이는 다음 반응 단계에 바로 사용되었다. LCMS m/z = 282.1 [M+1]+.
단계 6: 화합물 1-7의 합성
화합물 1-6 하이드로클로라이드(2 g, 6.29 mmol, 1 eq)를 N,N-디메틸포름아미드(20 mL)에 용해시킨 다음, 탄산칼륨(6.15 g, 18.88 mmol, 3 eq) 및 요오도메탄(1.79 g, 12.59 mmol, 783.65 μL, 2 eq)을 순차적으로 첨가하고, 18℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응이 완료되면, 상기 반응 용액을 물(30 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트(30 mL × 2)로 추출하였다. 합한 유기상을 포화 식염수(50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 50/1 - 10/1)로 정제하여 화합물 1-7을 얻었다. 1H NMR (400 MHz,CDCl3) δ = 8.47 (s, 1H), 7.96 - 7.88 (m, 2H), 7.85 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 - 7.51 (m, 2H), 7.48 - 7.41 (m, 1H), 7.35 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 5.52 - 5.39 (m, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.19(s, 3H),3.23 - 3.14 (m, 1H), 2.98 - 2.87 (m, 1H).
단계 7: 화합물 1-8의 합성
화합물 1-7(20 mg, 67.72 μmol, 1 eq)을 에탄올(0.2 mL) 및 1,4-디옥산(1 mL)에 용해시켰다. 이어서, 염화니켈 육수화물(19.32 mg, 81.26 μmol, 1.2 eq)을 첨가하였다. 5 내지 10℃로 냉각시킨 후, 수소화붕소나트륨(1.28 mg, 33.86 μmol, 0.5 eq)을 첨가하고, 상기 혼합물을 10℃에서 0.5시간 동안 반응시켰다. 반응이 완료되면, 상기 혼합물을 포화 염화암모늄 수용액(5 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트(10 mL × 2)로 추출하였다. 합한 유기상을 포화 식염수(5 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 농축하여 조 생성물을 얻었다.
조 생성물을 박층 크로마토그래피 분취 플레이트(thin-layer chromatography preparative plate)(현상액: 석유 에테르/에틸 아세테이트= 3/1)로 정제하여 화합물 1-8을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 11.99 - 11.85 (m, 1H), 8.67 - 8.49 (m, 1H), 7.92 - 7.85 (m, 1H), 7.85 - 7.77 (m, 1H), 7.57 - 7.41 (m, 4H), 3.82 (s, 3H), 3.56 - 3.51 (m, 1H), 3.16 - 2.95 (m, 2H), 2.68 - 2.47 (m, 1H), 2.15 (s, 3H).
단계 8: 화합물 1-9의 합성
화합물 1-8(240 mg, 807.14 μmol, 1 eq) 및 우레아(242.36 mg, 4.04 mmol, 216.40 μL, 5 eq)를 에탄올(5 mL)에 용해시키고, 나트륨 메톡사이드(130.80 mg, 2.42 mmol, 3 eq)를 첨가하였다. 85℃에서 10시간 동안 반응시킨 후, 상기 반응 용액을 물에 서서히 부은 다음, 에틸 아세테이트(5 mL)를 첨가하였다. 고형물을 침전시켰다. 상기 혼합물을 여과하고, 고형물을 수집하여 화합물 1-9를 얻었다. LCMS m/z = 308.1 [M+1]+.
단계 9: 화합물 1-10의 합성
화합물 1-9(400 mg, 1.30 mmol, 1 eq)를 옥시염화인(132.00 g, 860.89 mmol, 80 mL)에 용해시켰다. 상기 혼합물을 105℃로 10시간 동안 가열하여 반응시킨 다음 감압 하에 농축하여 과량의 옥시염화인을 제거하였다. 잔류물을 에틸 아세테이트(50 mL)에 용해시킨 다음, 상기 용액을 포화 탄산수소나트륨 수용액(20 mL)에 첨가하였다. 수성상을 에틸 아세테이트(50 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기상을 포화 식염수(50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 박층 크로마토그래피 컬럼(용리액: 석유 에테르/에틸 아세테이트= 20/1 - 0/1)으로 정제하여 화합물 1-10을 얻었다. LCMS m/z = 344.0 [M+1]+.
단계 10: 화합물 1-11의 합성
화합물 1-10(250 mg, 726.24 μmol, 1 eq) 및 중간체 1-10A 하이드로클로라이드(279.24 mg, 944.12 μmol, 1.3 eq)를 이소프로판올(2 mL)에 용해시키고, N,N-디이소프로필에틸아민(375.44 mg, 2.90 mmol, 505.98 μL, 4 eq)을 첨가하였다. 110℃에서 12시간 동안 반응시킨 후, 상기 반응 용액을 바로 농축하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(용리액: 석유 에테르/에틸 아세테이트= 10/1 - 1/1)로 정제하여 화합물 1-11을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.60 - 8.48 (m, 1H), 7.93 - 7.87 (m, 1H), 7.86 - 7.80 (m, 1H), 7.58 - 7.34 (m, 9H), 5.21 (m, 2H), 4.77 - 4.61 (m, 1H), 4.06 (m, 2H), 3.97 - 3.75 (m, 2H), 3.62 - 3.40 (m, 3H), 3.30 - 3.00 (m, 4H), 2.78 - 2.64 (m, 1H), 2.26 (s, 1.5H), 2.21 (s, 1.5H); LCMS m/z = 567.3 [M+1]+.
단계 11: 화합물 1-12의 합성
화합물 1-11(100 mg, 176.34 μmol, 1 eq) 및 1-11A(60.93 mg, 529.03 μmol, 62.81 μL, 3 eq)를 1,4-디옥산(1.5 mL)에 용해시키고, 탄산세슘(172.37 mg, 529.03 μmol, 3 eq), 2-디사이크로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시-1,1'-바이페닐(16.46 mg, 35.27 μmol, 0.2 eq) 및 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(32.30 mg, 35.27 μmol, 0.2 eq)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 90℃에서 24시간 동안 질소 하에 반응시켰다. 반응이 완료되면, 반응 혼합물을 바로 농축하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(용리액: 디클로로메탄/메탄올 = 100/1 - 10/1)로 정제하여 화합물 1-12를 얻었다. LCMS m/z = 646.4 [M+1]+.
단계 12: 화합물 1-13의 합성
화합물 1-12(50 mg, 77.42 μmol, 1 eq)를 테트라하이드로푸란(50 mL)에 용해시키고, Pd/C(77.4 mg, 10% 순도)를 첨가하였다. 반응계를 H2로 3회 교체하였다. 상기 혼합물을 20℃에서 10시간 동안 15 psi로 교반하여 반응시켰다. 반응이 완료되면, 혼합물을 여과하여 화합물 1-13의 테트라하이드로푸란 용액(70 mL)을 얻었고, 이를 다음 단계에 바로 사용하였다. LCMS m/z = 512.3 [M+1]+.
단계 13: 화합물 1의 합성
이전 단계에서 얻은 화합물 1-13의 테트라하이드로푸란 용액(70 mL)에 N,N-디이소프로필에틸아민(17.18 mg, 132.90 μmol, 23.15 μL, 2 eq)을 첨가하였다. 이어서, 상기 혼합물을 -20 내지 -30℃로 냉각시키고, 아크릴로일 클로라이드(6.01 mg, 66.45 μmol, 5.42 μL, 1 eq)를 첨가하였다. 이 온도에서 30분간 반응시킨 후, 상기 반응 용액을 물(10 mL)에 부은 다음, 에틸 아세테이트(10 mL)로 추출하였다. 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 고성능 액체 크로마토그래피 컬럼(컬럼: Phenomenex Luna 80×30 mm×3 μm; 이동상: [10 mM NH4HCO3 수용액-아세토니트릴]; 아세토니트릴 %: 30%-60%, 7분)으로 정제하여 화합물 1을 얻었고, 이는 SFC(Chiralcel OD-3 컬럼, P1 Rt =1.93분, P2 Rt =2.08분, P1:P2=50.6:49.4)에 의해 식별된 바와 같이 2개의 부분입체 이성질체들로 이루어졌다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ= 8.66 - 8.53 (m, 1H), 7.93 - 7.87 (m, 1H), 7.82 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.56 - 7.41 (m, 4H), 6.70 - 6.50 (m, 1H), 6.47 - 6.34 (m, 1H), 5.84 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.38 (m, 1H), 4.27 - 4.09 (m, 2H), 4.05 - 3.78 (m, 4H), 3.60 - 3.35 (m, 3H), 3.23 - 3.01 (m, 4H), 2.84 - 2.60 (m, 3H), 2.50 - 2.41 (m, 3H), 2.30 - 2.21 (m, 4H), 2.10 - 1.98 (m, 1H), 1.90 - 1.66 (m, 4H). LCMS m/z = 566.4 [M+1]+.
실시예 2 및 3
Figure pct00092
단계 1: 화합물 2-2의 합성
화합물 2-1(2.2 g, 9.11 mmol, 1 eq)을 무수 테트라하이드로푸란(15 mL)에 용해시키고, 상기 혼합물을 질소 하에 -78℃로 냉각시켰다. 이어서, n-BuLi(2.5 M, 3.64 mL, 1 eq)를 적가하고, 상기 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반하여 반응시켰다. N,N-디메틸포름아미드(3.33 g, 45.55 mmol, 3.50 mL, 5 eq)를 첨가하고, 상기 혼합물을 -78℃에서 추가로 0.5시간 동안 교반하였다. 포화 염화암모늄 용액(10 mL)을 첨가하여 반응을 켄칭한 다음, 물(10 mL)을 첨가하였다. 유기상을 분리하고, 수성상을 에틸 아세테이트(50 mL)로 추출하였다. 합한 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하여 건조제(desiccant)를 제거하였다. 용매를 감압 하에 제거하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 컬럼(에틸 아세테이트/석유 에테르 = 0 - 15%)으로 정제하여 화합물 2-2를 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=11.32 (s, 1H), 8.04 (dd, J=1.2, 8.0 Hz, 1H), 7.92 (dd, J=1.2, 7.2 Hz, 1H), 7.87 (dd, J=1.2, 8.4 Hz, 1H), 7.71 (dd, J=1.2, 7.2 Hz, 1H), 7.59 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.51 - 7.44 (m, 1H).
단계 2: 화합물 2-3의 합성
수소화나트륨(248.01 mg, 6.20 mmol, 60% 순도, 1.2 eq)을 무수 테트라하이드로푸란(5 mL)에 현탁하고, 혼합물을 질소 하에 0℃로 냉각시키고, 여기에 메틸 아세토아세테이트(600 mg, 5.17 mmol, 555.56 μL, 1 eq)를 적가하였다. 10분 동안 교반한 후, n-부틸리튬(2.5 M, 2.27 mL, 1.1 eq)을 적가하고, 상기 혼합물을 0℃에서 추가로 20분 동안 교반하여 반응시켰다. 이어서, 반응계를 드라이아이스 아세톤 배스에서 -78℃로 냉각시키고, 테트라하이드로푸란 중 화합물 2-2(1.08 g, 5.68 mmol, 1.1 eq)의 용액(6 mL)을 적가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 교반한 다음, 실온으로 서서히 가온시키고, 30분 동안 교반하였다. 물(30 mL)을 첨가하여 반응을 켄칭하고, 수성상을 에틸 아세테이트(50 mL×2)로 추출하였다. 합한 유기상을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하여 건조제를 제거하였다. 감압 하에 여액으로부터 용매를 제거하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 컬럼(에틸 아세테이트/석유 에테르 = 0 - 20%)으로 정제하여 화합물 2-3을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ= 8.07 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.81 (d, J=8.0 Hz, 2H), 7.63 - 7.49 (m, 2H), 7.35 (t, J=8.0 Hz, 1H), 6.92 (br d, J=9.6 Hz, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.55 (s, 2H), 3.37 (dd, J=1.6, 18.1 Hz, 1H), 3.24 (d, J=1.2 Hz, 1H), 2.86-2.77 (m, 1H).
단계 3: 화합물 2-4의 합성
화합물 2-3(520 mg, 1.70 mmol, 1 eq)을 디클로로메탄(5 mL)에 용해시킨 다음, N,N-디메틸포름아미드 디메틸아세탈(202.01 mg, 1.70 mmol, 225.20 μL, 1 eq)을 첨가하였다. 생성된 반응 용액을 25℃에서 1시간 동안 교반하여 반응시킨 후, 삼플루오르화붕소 에테레이트 착물(Boron trifluoride etherate complex)(240.60 mg, 1.70 mmol, 209.22 μL, 1 eq)을 첨가하고, 반응 용액을 25℃에서 18시간 동안 교반하여 반응시켰다. 상기 반응 용액을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 2 M 염산으로 pH 3-4으로 조정하였다. 이어서, 상기 혼합물을 에틸 아세테이트(30 mL × 3)로 추출하였다. 합한 유기상을 진공 하에 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 컬럼(에틸 아세테이트/석유 에테르 = 0 - 35%)으로 정제하여 화합물 2-4를 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ= 8.56 (d, J=0.8 Hz, 1H), 7.91 (t, J=8.0 Hz, 2H), 7.85 (dd, J=1.2, 8.4 Hz, 1H), 7.65 (dd, J=1.6, 7.6 Hz, 1H), 7.59 (t, J=8.0 Hz, 1H), 7.44 - 7.35 (m, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.27 - 3.17 (m, 1H), 2.92-2.82 (m, 1H). LCMS m/z = 317.0 [M+H]+.
단계 4: 화합물 2-5의 합성
화합물 2-4(780 mg, 2.46 mmol, 1 eq)를 테트라하이드로푸란(3 mL)에 용해시키고, 상기 혼합물을 질소 하에 -78℃로 냉각시켰다. 이어서, 리튬 트리-2급-부틸보로하이드라이드(1 M, 2.46 mL, 1 eq)를 적가하고, 상기 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반하여 반응시켰다. 반응물을 포화 염화암모늄(5 mL)으로 켄칭한 다음, 에틸 아세테이트(50 mL × 3)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 진공 하에 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 컬럼(에틸 아세테이트/석유 에테르 = 0 - 15%)으로 정제하여 화합물 2-5를 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=11.81 (s, 1H), 7.99 (d, J=7.2 Hz, 1H), 7.85-7.80 (m, 2H), 7.63 - 7.53 (m, 2H), 7.36 (t, J=7.6 Hz, 1H), 6.30 (dd, J=2.8, 10.4 Hz, 1H), 4.68 - 4.62 (m, 1H), 4.56 - 4.47 (m, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.07 - 2.98 (m, 1H), 2.57 - 2.46 (m, 1H).
단계 5: 화합물 2-6의 합성
화합물 2-5(497 mg, 1.56 mmol, 1 eq)를 메탄올(2 mL)에 용해시킨 다음, 2-메틸티오우레아 설페이트(528.27 mg, 2.81 mmol, 1.8 eq) 및 나트륨 메톡사이드(421.14 mg, 7.80 mmol, 5 eq)를 첨가하였다. 생성된 반응 용액을 질소 하에 25℃에서 18시간 동안 교반하였다. 메탄올을 감압 하에 제거하고, 잔류물에 물(1 mL)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 2 M 염산으로 pH 5-6으로 조정한 결과, 다량의 백색 고형물이 침전되었다. 고형물을 여과에 의해 수집하고, 진공 하에 건조시켜 화합물 2-6을 얻었다. 조 생성물을 다음 반응 단계에 바로 사용하였다. LCMS m/z = 359.1 [M+H]+.
단계 6: 화합물 2-7의 합성
화합물 2-6(440.00 mg, 1.23 mmol, 1 eq) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(316.95 mg, 2.45 mmol, 427.15 μL, 2 eq)을 무수 디클로로메탄(5 mL)에 첨가하고, 상기 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 트리플릭 무수물(triflic anhydride)(449.74 mg, 1.59 mmol, 263.00 μL, 1.3 eq)을 첨가하였다. 첨가를 완료한 후, 상기 혼합물을 0℃에서 60분 동안 교반하여 반응시켰다. 상기 반응 용액을 진공 하에 농축하여 조 생성물을 얻었고, 이를 컬럼(에틸 아세테이트/석유 에테르 = 0 - 6%)으로 정제하여 화합물 2-7을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.99 (d, J=7.2 Hz, 1H), 7.90-7.82 (m, 2H), 7.66 - 7.54 (m, 2H), 7.44 - 7.33 (m, 1H), 6.46 (dd, J=2.4, 10.4 Hz, 1H), 5.12 - 5.04 (m, 1H), 4.97 - 4.89 (m, 1H), 3.63 (dd, J=2.0, 18.0 Hz, 1H), 3.05-2.90 (m, 1H), 2.57 (s, 3H). LCMS m/z = 491.0 [M+H]+.
단계 7: 화합물 2-8의 합성
화합물 2-7(121 mg, 246.48 μmol, 1 eq) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(95.57 mg, 739.45 μmol, 128.80 μL, 3 eq)을 N,N-디메틸포름아미드(1.5mL)에 첨가한 다음, 화합물 1-10A 하이드로클로라이드(70.31 mg, 237.71 μmol, 1.1 eq)를 첨가하였다. 반응 용액 중의 가스를 질소로 교체하고, 반응 용액을 100℃의 오일욕에서 1시간 동안 교반하여 반응시켰다. 상기 반응 용액을 진공 하에 농축하여 조 생성물을 얻었고, 이를 컬럼(에틸 아세테이트/석유 에테르 = 0 - 30%)으로 정제하여 화합물 2-8을 얻었다. LCMS m/z = 600.2 [M+H]+.
단계 8: 화합물 2-9의 합성
화합물 2-8(125 mg, 208.29 μmol, 1 eq)을 디클로로메탄(1 mL)에 용해시킨 다음, m-클로로퍼옥시벤조산(84.57 mg, 416.58 μmol, 85% 순도, 2 eq)을 첨가하고, 생성된 반응 용액을 20℃에서 8시간 동안 교반하여 반응시켰다. 상기 반응 용액을 여과하여 불용성 물질을 제거하고, 여액을 감압 하에 농축하여 조 생성물을 얻었고, 이를 컬럼(에틸 아세테이트/석유 에테르 = 0 - 60%)으로 정제하여 화합물 2-9를 얻었다. LCMS m/z = 632.3 [M+H]+.
단계 9: 화합물 2-10의 합성
화합물 2-9(101 mg, 159.78 μmol, 1 eq) 및 1-11A(55.21 mg, 479.34 μmol, 56.91 μL, 3 eq)를 톨루엔(0.8 mL)에 용해시켰다. 생성된 용액을 -5℃로 냉각시킨 다음, t-BuONa(30.71 mg, 319.56 μmol, 2 eq)를 첨가하고, 생성된 반응 용액을 -5 내지 0℃에서 1시간 동안 교반하여 반응시켰다. 상기 반응 용액을 에틸 아세테이트 3 mL로 희석하고, 물(1 mL) 및 포화 식염수(1 mL)로 세척하였다. 유기상을 진공 하에 농축하여 조 생성물을 얻었고, 이를 컬럼(메탄올/디클로로메탄 = 0 - 8%)으로 정제하여 화합물 2-10을 얻었다. LCMS m/z = 667.3 [M+H]+.
단계 10: 화합물 2-11과 3-1의 혼합물의 합성
화합물 2-10(101 mg, 151.38 μmol, 1 eq)을 디클로로메탄(1 mL)에 용해시킨 다음, 팔라듐 아세테이트(6.80 mg, 30.28 μmol, 0.2 eq) 및 트리에틸실란(88.01 mg, 756.90 μmol, 120.90 μL, 5 eq)을 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하여 반응시켰다. 상기 반응 용액을 진공 하에 농축하여 화합물 2-11과 3-1의 혼합물을 얻었고, 이를 다음 단계에서 추가 정제하지 않고 바로 사용하였다. 화합물 2-11: LCMS m/z = 555.3 [M+Na]+; 화합물 3-1: LCMS m/z = 521.3 [M+Na]+.
단계 11: 화합물 2 및 3의 합성
화합물 2-11과 3-1의 혼합물을 디클로로메탄(1 mL)에 용해시킨 다음 트리에틸아민(45.95 mg, 454.14 μmol, 63.21 μL, 3 eq)을 첨가하였다. 상기 반응 용액을 0℃로 냉각시킨 다음, 아크릴로일 클로라이드(20.55 mg, 227.07 μmol, 18.52 μL, 1.5 eq)를 첨가하고, 상기 혼합물을 30분 동안 교반하여 반응시켰다. 상기 반응 용액을 진공 하에 농축하여 조 생성물을 얻었고, 이를 분취용 고성능 액체 크로마토그래피(분리 조건: 컬럼: Welch Xtimate C18 150×30 mm×5 μm; 이동상: [물(0.225% 포름산)-아세토니트릴]; 아세토니트릴%: 15%-55%, 8분)로 분리하여 화합물 2 및 3을 얻었다. 화합물 2 및 3은 각각 부분입체 이성질체 쌍이었다. 화합물 2: LCMS m/z = 587.3 [M+H]+; 화합물 3: LCMS m/z = 553.3 [M+H]+.
실시예 4
Figure pct00093
Figure pct00094
Figure pct00095
중간체 4-14A의 합성
단계 1: 화합물 4-21의 합성
화합물 4-20(3 g, 8.35 mmol, 1 eq)을 테트라하이드로푸란(30 mL)에 용해시키고, 탄소 상의 습윤 팔라듐(1.2 g, 10% 질량)을 첨가하였다. 대기를 수소(562.02 μg, 278.23 μmol, 1 eq)로 3회 교체하고, 상기 혼합물을 25℃의 실온에서 2시간 동안 15 Psi로 반응시켰다. 상기 반응 용액을 여과하고, 모액을 수집하여 농축하여 화합물 4-21을 얻었다. LCMS m/z = 170.1[M-55+H]+.
단계 2: 화합물 4-22의 합성
화합물 4-21(0.2 g, 887.76 μmol, 1 eq)을 테트라하이드로푸란(5 mL)에 용해시키고, 트리에틸아민(269.50 mg, 2.66 mmol, 370.70 μL, 3 eq)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 질소 하에 0℃로 냉각시키고, 트리플루오로아세트산 무수물(205.10 mg, 976.53 μmol, 135.83 μL, 1.1 eq)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 반응시켰다. 상기 혼합물을 포화 염화암모늄 수용액(10 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트(5 mL × 2)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 포화 식염수(5 mL)로 세척하고, 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트= 10/1 - 1/1, TLC: 석유 에테르/에틸 아세테이트= 3/1)로 정제하여 화합물 4-22를 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 4.86 (s, 1H), 4.51 - 4.06 (m, 2H), 3.88 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 3.52 - 3.33 (m, 1H), 3.24 (dd, J = 4.0, 14.2 Hz, 1H), 3.12 - 2.92 (m, 1H), 2.91 - 2.73 (m, 1H), 2.67 (s, 1H), 1.50 (s, 9H); LCMS: MS m/z = 222.0 [M-100+H]+.
단계 3: 화합물 4-14A의 합성
화합물 4-22(150 mg, 466.86 μmol, 1 eq)를 하이드로클로라이드/디옥산(5 M, 8 mL, 85.68 eq)에 용해시켰다. 상기 혼합물을 질소 하에 18℃에서 1시간 동안 반응시킨 다음, 바로 회전 증발시켜 건조시켜 화합물 4-14A의 염산염을 얻었다. LCMS: MS m/z = 222.0 [M+H]+
실시예 4의 합성
단계 1: 화합물 4-2의 합성
물(210mL) 및 염산(210mL, 36-38% 질량 함량)을 혼합한 후, 화합물 4-1(36.00 g, 176.44 mmol, 1 eq)을 첨가하였다. 혼합물을 65℃로 가열하고, 1시간 동안 반응시킨 후, 0 내지 5℃로 냉각시켰다. 물(70 mL) 중 아질산나트륨(14.61 g, 211.72 mmol, 1.2 eq)의 용액을 적가하고, 상기 혼합물을 15분 동안 교반하였다. 염화제일구리(26.20 g, 264.65 mmol, 6.33 mL, 1.5 eq)를 염산(350 mL, 36 - 38% 질량 함량)에 용해시키고, 상기 용액을 0 내지 5℃로 냉각시켰다. 상기 용액을 반응 용액에 적가하고, 혼합물을 추가로 6시간 동안 반응시켰다. 반응계에 디클로로메탄 750 mL를 첨가하고, 혼합물을 20분 동안 교반하였다. 층들을 분리하였다. 유기상을 포화 식염수 350 mL로 1회 세척하고, 무수 황산나트륨 30.00 g으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 45℃에서 감압 하에 회전 증발시켜 화합물 4-2를 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.24 - 7.21 (m, 1H), 6.94 (dd, J = 2.8, 8.8 Hz, 1H), 2.43 (s, 3H).
단계 2: 화합물 4-3의 합성
미리 준비된 깨끗한 반응 플라스크에 테트라하이드로푸란(395 mL) 및 화합물 4-2(39.50 g, 176.76 mmol, 1 eq)를 첨가하고, 교반시켰다. 상기 혼합물을 -70 내지 -65℃로 냉각시켰다. 리튬 디이소프로필아미드(2 M, 106.05 mL, 1.2 eq)를 적가하고, 혼합물을 추가로 1시간 동안 반응시켰다. 이어서, N,N-디메틸포름아미드(18.76 g, 256.70 mmol, 19.75 mL, 1.45 eq)를 첨가하고, 혼합물을 추가로 1시간 동안 반응시켰다. 반응계에 포화 염화암모늄 용액 500 mL를 첨가한 다음, 층들을 분리하였다. 유기상을 포화 식염수 300 mL로 1회 세척한 다음, 무수 황산나트륨 20 g으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 45℃에서 감압 하에 회전 증발시켜 화합물 4-3을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 10.28 (s, 1H), 7.08 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 2.51 (s, 3H); LCMS m/z = 245.0[M+H]+, 247.0[M+3H]+.
단계 3: 화합물 4-4의 합성
미리 준비된 깨끗한 반응 플라스크에 디메틸 설폭사이드(300 mL) 및 화합물 4-3(20.00 g, 79.53 mmol, 1 eq)을 첨가하고, 교반하였다. 이어서, 하이드라진 수화물(48.75 g, 954.35 mmol, 47.33 mL, 98% 질량 함량, 12 eq)을 첨가하고, 혼합물을 130℃로 가열하고, 3시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 소규모 반응 용액과 합한 다음, 혼합물을 물 700 mL에 부었다. 상기 혼합물을 여과하고, 필터 케이크(filter cake)를 물(100 mL × 3회)로 세척하였다. 얻은 필터 케이크를 에틸 아세테이트 300 mL에 용해시키고, 층들을 분리하였다. 유기상을 무수 황산나트륨 50.00 g으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 45℃에서 감압 하에 회전 증발시켜 화합물 4-4를 얻었다. 1H NMR (400 MHz,CDCl3) δ = 10.38 (brs, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 2.57 (s, 3H); LCMS m/z = 245.1[M+H]+, 247.1[M+3H]+.
단계 4: 화합물 4-5의 합성
미리 준비된 깨끗한 반응 플라스크에 디클로로메탄(200 mL) 및 화합물 4-4(20.00 g, 81.47 mmol, 1 eq)를 첨가하고, 교반하였다. 이어서, 피리디늄 p-톨루엔설포네이트(2.05 g, 8.15 mmol, 0.1 eq) 및 2-메틸하이드록시-3,4-디하이드로피란(20.56 g, 244.40 mmol., 3 eq)을 순차적으로 첨가하였다. 상기 혼합물을 20℃에서 12시간 동안 반응시켰다. 반응계에 물 200 mL를 첨가한 후, 반응 용액의 층들을 바로 분리하였다. 유기상을 무수 황산나트륨 20.00 g으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 45℃에서 감압 하에 회전 증발시켜 조 화합물을 얻었다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트= 100/0 - 70/30, TLC: 석유 에테르/에틸 아세테이트= 5/1)로 정제하여 화합물 4-5를 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.95 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 5.67 (dd, J = 2.8, 8.8 Hz, 1H), 4.02 - 3.98 (m, 1H), 3.79 - 3.71 (m, 1H), 2.57 (s, 3H), 2.54 - 2.46 (m, 1H), 2.18 - 2.05 (m, 2H), 1.80 - 1.66 (m, 3H); LCMS m/z = 329.0[M+H]+, 331.0[M+3H]+.
단계 5: 화합물 4-6의 합성
미리 준비된 깨끗한 반응 플라스크에 테트라하이드로푸란(160 mL) 및 화합물 4-5(16 g, 48.54 mmol, 1 eq)를 첨가하고, 교반하였다. 상기 혼합물을 -70 내지 -65℃로 냉각시킨 후, n-부틸리튬(2.5 M, 21.36 mL, 1.1 eq)을 서서히 적가하고, 혼합물을 추가로 1시간 동안 반응시켰다. 이어서, N,N-디메틸포름아미드(35.48 g, 485.41 mmol, 37.35 mL, 10 eq)를 첨가하고, 혼합물을 추가로 0.5시간 동안 반응시켰다. 포화 염화암모늄 용액 250 mL를 첨가한 후, 층들을 분리하였다. 유기상을 포화 식염수 150 mL로 1회 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 45℃에서 감압 하에 회전 증발시켜 유상 물질(oily substance)을 얻었다. 유상 물질을 에틸 아세테이트 7 mL와 혼합하였다. 상기 혼합물을 20분 동안 슬러리화한 다음 여과하였다. 필터 케이크를 45℃에서 감압 하에 회전 증발시켜 화합물 4-6을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 10.72 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 5.70 (dd, J = 2.8, 8.8 Hz, 1H), 3.98 - 3.94 (m, 1H), 3.75 - 3.68 (m, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.53 - 2.45 (m, 1H), 2.16 - 2.05 (m, 2H), 1.83 - 1.61 (m, 3H); LCMS m/z = 279.1[M+H]+.
단계 6: 화합물 4-7의 합성
미리 준비된 깨끗한 반응 플라스크에 테트라하이드로푸란(54 mL) 및 화합물 4-6(5.4 g, 19.37 mmol, 1 eq)을 첨가하고, 교반하였다. 이어서, 3급-부틸 설핀아미드(2.58 g, 21.31 mmol, 232.15 μL, 1.1 eq) 및 테트라이소프로필 티타네이트(8.84 g, 38.75 mmol, 8.04 mL, 2 eq)를 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 12시간 동안 반응시켰다. 반응계에 포화 염화암모늄 용액 50 mL를 첨가한 후, 층들을 분리하였다. 유기상을 무수 황산나트륨 3.00 g으로 건조시킨 다음, 여과하였다. 여액을 45℃에서 감압 하에 회전 증발시켰다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트= 100/0 내지 50/50, TLC: 석유 에테르/에틸 아세테이트= 10/1)로 정제하여 화합물 4-7을 얻었다. LCMS m/z = 382.2[M+H]+.
단계 7: 화합물 4-8의 합성
미리 준비된 깨끗한 반응 플라스크에 테트라하이드로푸란(35 mL) 및 수소화나트륨(829.50 mg, 20.74 mmol, 60% 질량 함량, 1.2 eq)을 첨가하고, 교반하였다. 이어서, 상기 혼합물을 0 내지 5℃로 냉각시키고, 메틸 아세토아세테이트(2.41 g, 20.74 mmol, 2.23 mL, 1.2 eq)를 적가하였다. 상기 혼합물을 20분 동안 반응시켰다. 이어서, n-부틸리튬(2.5 M, 7.60 mL, 1.1 eq)을 적가하고, 혼합물을 추가로 20분 동안 반응시켰다. 상기 혼합물을 -70 내지 -65℃로 냉각시킨 후, 테트라하이드로푸란(35 mL) 중 화합물 4-7(6.60 g, 17.28 mmol, 1 eq)의 용액을 적가하고, 혼합물을 추가로 20분 동안 반응시켰다. 상기 혼합물을 20℃의 실온으로 서서히 가온시키고, 추가로 0.5시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 포화 염화암모늄 용액 100 mL에 부었다. 1 g 배치와 합한 후, 층들을 분리하였다. 유기상을 무수 황산나트륨 3.00 g으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 45℃에서 감압 하에 회전 증발시켰다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트= 100/0 - 20/80, TLC: PE/EtOAc = 0:1)로 정제하여 화합물 4-8을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.20 (s, 1H), 7.44 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 5.72 - 5.64 (m, 2H), 4.04 - 3.99 (m, 1H), 3.77 - 3.69 (m, 4H), 3.57 - 3.46 (m, 2H), 3.15 - 3.08 (m, 1H), 2.59 - 2.52 (m, 4H), 2.16 - 2.05 (m, 2H), 1.83 - 1.65 (m, 4H), 1.20 - 1.18 (m, 9H); LCMS m/z = 498.2[M+H]+.
단계 8: 화합물 4-9의 합성
미리 준비된 깨끗한 반응 플라스크에 톨루엔(66 mL) 및 화합물 4-8(6.60 g, 13.25 mmol, 1 eq)을 첨가하고, 교반하였다. 이어서, N,N-디메틸포름아미드 디메틸 아세탈(4.74 g, 39.76 mmol, 5.28 mL, 3 eq)을 첨가하고, 상기 혼합물을 20℃의 실온에서 12시간 동안 반응시켰다. 반응계에 물 60 mL와 에틸 아세테이트 60 mL를 첨가하고, 혼합물을 5분 동안 교반하였다. 층들을 분리하였다. 유기상을 포화 식염수 60 mL로 1회 세척하고, 무수 황산나트륨 5.00 g으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 50℃에서 감압 하에 회전 증발시켜 화합물 4-9를 얻었고, 이를 다음 단계에서 바로 사용하였다.
단계 9: 화합물 4-10의 합성
화합물 4-9(50 mg, 90.40 μmol, 1 eq)를 하이드로클로라이드/에틸 아세테이트(3 mL)에 용해시켰다. 상기 혼합물을 18℃에서 20분 동안 교반시켰다. 상기 반응 용액을 바로 농축하여 조 생성물을 화합물 4-10의 염산염으로 얻었다. LCMS m/z = 320.0[M+H]+
단계 10: 화합물 4-11의 합성
화합물 4-10(5.00 g, 14.04 mmol, 1 eq, HCl)을 디클로로메탄(50 mL)에 용해시키고, 트리에틸아민(5.97 g, 58.96 mmol, 8.21 mL, 4.2 eq), 3급-부틸 디카보네이트(12.25 g, 56.15 mmol, 12.90 mL, 4 eq), 및 4-디메틸아미노피리딘(1.71 g, 14.04 mmol, 1 eq)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 18℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 처리를 위해 0.5 g 배치와 합했다. 상기 혼합물을 포화 염화암모늄 수용액(100 mL)으로 켄칭하고, 디클로로메탄(30 mL×2회)으로 추출하였다. 합한 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트= 50/1 - 0/1, TLC: 석유 에테르/에틸 아세테이트= 1/1)로 정제하여 화합물 4-11을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 9.02 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 6.16 (dd, J = 5.2, 8.8 Hz, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.10 (dd, J = 8.4, 16.0 Hz, 1H), 2.82 (m, 1H), 2.48 (s, 3H), 1.63 (s, 9H), 1.18 (s, 9H). LCMS m/z = 520.1[M+H]+.
단계 11: 화합물 4-12의 합성
화합물 4-11(3.00 g, 5.77 mmol, 1 eq)을 테트라하이드로푸란(30 mL)에 용해시키고, 상기 용액을 -78℃로 냉각시켰다. 질소 하에 상기 반응 용액에 리튬 트리-2급-부틸보로하이드라이드(1 M, 5.77 mL, 1 eq)를 적가하고, 혼합물을 0.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 수용액(30 mL)으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(20 mL × 2회)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 화합물 4-12의 조 생성물을 얻었다. LCMS m/z = 522.2[M+H]+,466.1[M-56+H]+.
단계 12: 화합물 4-13의 합성
화합물 4-12(2.30 g, 4.41 mmol, 1 eq) 및 2-메틸-2-티오슈도우레아 디설페이트(2-methyl-2-thioseudourea disulfate)(1.66 g, 8.81 mmol, 2 eq, H2SO4)를 메탄올(430 mL)에 용해시키고, 나트륨 메톡사이드(476.05 mg, 8.81 mmol, 2 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 18℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 이어서, 상기 반응 용액에 나트륨 메톡사이드(357.04 mg, 6.61 mmol, 1.5 eq)를 첨가하고, 혼합물을 18℃에서 10시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 회전 증발시켜 건조시키고, 물(50 mL)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 1 M 묽은 염산으로 pH 2 - 3으로 조정하고, 백색 고형물을 침전시켰다. 상기 고형물을 여과에 의해 수집하였다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트= 10/1 - 0/1, TLC: 석유 에테르/에틸 아세테이트= 1/1)로 정제하여 화합물 4-13을 얻었다. LCMS m/z = 562.1[M+H]+.
단계 13: 화합물 4-14의 합성
화합물 4-13(0.328 g, 583.55 μmol, 1 eq) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(377.09 mg, 2.92 mmol, 508.21 μL, 5 eq)을 디클로로메탄(10 mL)에 용해시키고, 트리플릭 무수물(246.96 mg, 875.32 μmol, 144.42 μL, 1.5 eq)을 0℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 처리를 위해 0.56 g 배치와 합했다. 상기 혼합물을 포화 염화암모늄 수용액(50 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트(20 mL × 3회)로 추출하였다. 유기상을 포화 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트= 20/1 - 5/1, TLC: 석유 에테르/에틸 아세테이트= 5/1)로 정제하여 화합물 4-14를 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.21 - 8.11 (m, 1H), 8.00 - 7.90 (m, 1H), 5.86 - 5.69 (m, 1H), 5.25 - 5.09 (m, 1H), 4.68 - 4.46 (m, 1H), 3.57 - 3.42 (m, 1H), 3.27 - 3.08 (m, 1H), 2.66 - 2.41 (m, 6H), 1.79 - 1.67 (m, 9H), 1.21 - 1.07 (m, 9H); LCMS m/z = 637.9[M-56+H]+,639.8[M-56+3H]+.
단계 14: 화합물 4-15의 합성
화합물 4-14(630 mg, 907.60 μmol, 1 eq) 및 화합물 4-14A(420.90 mg, 1.63 mmol, 1.8 eq, HCl)를 N,N-디메틸포름아미드(15 mL)에 용해시키고, N,N-디이소프로필에틸아민(469.19 mg, 3.63 mmol, 632.33 μL, 4 eq)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 물(30 mL)에 상기 혼합물을 붓고, 에틸 아세테이트(20 mL × 3)로 추출하였다. 유기상을 포화 식염수(10 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 농축하여 조 생성물을 얻었고, 이를 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트= 50/1 - 1/1, TLC: 석유 에테르/에틸 아세테이트= 0/1)로 정제하여 화합물 4-15를 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.18 - 8.05 (m, 1H), 8.04 - 7.93 (m, 1H), 5.75 - 5.45 (m, 1H), 5.06 - 4.89 (m, 1H), 4.66 - 4.35 (m, 1H), 4.19 - 3.84 (m, 3H), 3.82 - 3.45 (m, 1H), 3.43 - 3.12 (m, 2H), 3.06 - 2.75 (m, 6H), 2.61 - 2.38 (m, 5H), 1.79 - 1.60 (m, 9H), 1.14 - 0.85 (s, 9H); LCMS m/z = 765.0[M+H]+.
단계 15: 화합물 4-16의 합성
화합물 4-15(400.00 mg, 522.71 μmol, 1 eq)를 디클로로메탄(8 mL)에 용해시키고, m-클로로퍼옥시벤조산(200.00 mg, 985.11 μmol, 85% 질량 함량, 1.88 eq)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 처리를 위해 200 mg 배치와 합했다. 상기 반응 용액을 수성 아황산나트륨(20 mL, 10%)으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2 100 메시, 석유 에테르/에틸 아세테이트= 50/1 - 1/1, TLC: 석유 에테르/에틸 아세테이트= 2/1)로 정제하여 화합물 4-16을 얻었다. LCMS m/z = 697.1[M-100+H]+.
단계 16: 화합물 4-17의 합성
화합물 1-11A(57.79 mg, 501.73 μmol, 59.57 μL, 4 eq)를 톨루엔(1 mL)에 용해시키고, 나트륨 3급-부톡사이드(42.19 mg, 439.01 μmol, 3.5 eq)를 0℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 15분 동안 교반하였다. 이어서, 상기 반응 용액에, 톨루엔 0.1 mL 중 화합물 4-16(100.00 mg, 125.43 μmol, 1 eq)의 용액을 서서히 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 반응시켰다. 반응 혼합물을 물(5 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(5 mL × 2)로 추출하였다. 유기상을 합하여 화합물 4-17을 얻었다. LCMS m/z = 636.1[M+H]+.
단계 17: 화합물 4-18의 합성
화합물 4-17(79.80 mg, 125.44 μmol, 1 eq)을 디클로로메탄(2 mL)에 용해시키고, N,N-디이소프로필에틸아민(81.06 mg, 627.18 μmol, 109.24 μL, 5 eq)을 18℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 -78℃로 냉각시켰다. 상기 반응 용액에 아크릴로일 클로라이드(4.54 mg, 50.17 μmol, 4.09 μL, 0.4 eq)를 서서히 첨가하고, 혼합물을 -78℃에서 0.5시간 동안 반응시켰다. 아크릴로일 클로라이드 8.00 mg을 추가로 첨가하고, 혼합물을 추가로 1시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 혼합물을 포화 수성 염화암모늄(5 mL)으로 켄칭하고, 디클로로메탄(5 mL × 2)으로 추출하였다. 유기상을 합했다. 탄산칼륨(1.7 M, 1 mL)/메탄올 (1 mL)에 조 생성물을 첨가하고, 혼합물을 18℃에서 1시간 동안 교반하였다. 생성물을 측정하여(시간 = 0.943) 화합물 4-18을 얻었다. LCMS m/z = 690.3[M+H]+.
단계 18: 화합물 4A 및 4B의 합성
화합물 4-18(100 mg, 144.88 μmol, 1 eq)을 디클로로메탄(2 mL) 및 트리플루오로아세트산(3.08 g, 27.01 mmol, 2.00 mL, 186.45 eq)에 용해시키고, 혼합물을 18℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 상기 혼합물을 농축하여 화합물 4-19를 얻었다. 화합물 4-19를 고성능 액체 크로마토그래피 컬럼(컬럼: Phenomenex luna C18 100×40 mm×5 μm; 이동상: [H2O(0.1% TFA)-아세토니트릴]; 아세토니트릴 %: 5%-30%, 8분)으로 정제하였다. 상기 샘플에 0.05 mL의 묽은 염산 0.2 mL를 첨가하였다. 상기 혼합물을 진공 하에 농축하여 화합물 4A 염산염(피크 도달 시간(time-to-peak): 2.417분, LCMS m/z = 590.1 [M+H]+, 295.9[M/2+H]+) 및 화합물 4B 염산염(피크 도달 시간: 2.388분, LCMS m/z = 590.1[M+H]+, 295.9[M/2+H]+)을 얻었다.
실시예 5
Figure pct00096
단계 1: 화합물 5-1의 합성
미리 준비된 깨끗한 반응 플라스크에 테트라하이드로푸란(27 mL) 및 수소화나트륨(789.28 mg, 19.73 mmol, 60% 질량 함량, 2 eq)을 첨가하고, 교반하였다. 이어서, 상기 혼합물을 0 내지 5℃로 냉각시키고, 메틸 아세토아세테이트(2.29 g, 19.73 mmol, 2.12 mL, 2 eq)를 적가하였다. 상기 혼합물을 30분 동안 반응시켰다. 이어서, n-부틸리튬(2.5 M, 7.50 mL, 1.9 eq)을 적가하고, 혼합물을 추가로 30분 동안 반응시켰다. 이어서, 상기 혼합물을 -70 내지 -65℃로 냉각시켰다. 테트라하이드로푸란(27 mL) 중 화합물 4-6(2.75 g, 9.87 mmol, 1 eq)의 용액을 적가하고, 혼합물을 추가로 0.5시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 포화 염화암모늄 용액 50 mL에 부어 켄칭하였다. 유기상을 무수 황산나트륨 1.50 g으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 45℃에서 감압 하에 회전 증발시켰다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트= 100/0 - 70/30, TLC: 석유 에테르/에틸 아세테이트= 1/1)로 정제하여 화합물 5-1을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.40 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 5.95 - 5.91 (m, 1H), 5.69 - 5.64 (m, 1H), 4.04 - 3.98 (m, 1H), 3.78 - 3.70 (m, 4H), 3.56 (d, J = 0.8 Hz, 2H), 3.37 (d, J = 3.2, 8.4 Hz, 1H), 3.08 - 2.99 (m, 2H), 2.61 - 2.54 (m, 1H), 2.50 (s, 3H), 2.18 - 2.04 (m, 2H), 1.81 - 1.70 (m, 2H). LCMS: MS m/z = 395.0[M+H]+.
단계 2: 화합물 5-2의 합성
미리 준비된 깨끗한 반응 플라스크에 디클로로메탄(25 mL) 및 화합물 5-1(1.6 g, 4.05 mmol, 1 eq)을 첨가하고, 교반하였다. 이어서, N,N-디메틸포름아미드 디메틸 아세탈(724.30 mg, 6.08 mmol, 807.47 μL, 1.5 eq)을 첨가하고, 혼합물을 20℃의 실온에서 12시간 동안 반응시켰다. 이어서, 혼합물을 0 내지 5℃로 냉각시켰다. 삼플루오르화붕소 에테레이트(575.13 mg, 4.05 mmol, 500.11 μL, 1 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 20℃의 실온에서 추가로 1시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 30℃에서 감압 하에 회전 증발시켜 화합물 5-2를 얻었고, 이를 다음 단계에서 바로 사용하였다.
단계 3: 화합물 5-3의 합성
미리 준비된 깨끗한 반응 플라스크에 테트라하이드로푸란(58 mL) 및 화합물 5-2(3.9 g, 8.40 mmol, 87.233% 질량 함량, 1 eq)를 첨가하고, 교반하였다. 상기 혼합물을 -70 내지 -65℃로 냉각시키고, 리튬 트리-2급-부틸보로하이드라이드(1 M, 9.24 mL, 1.1 eq) 를 적가하였다. 상기 혼합물을 0.5시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 포화 염화암모늄 용액 50 mL에 부었다. 유기상을 무수 황산나트륨 2.00 g으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 45℃에서 감압 하에 회전 증발시켰다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트= 100/0 - 70/30, TLC: 석유 에테르/에틸 아세테이트= 5/1)로 정제하여 화합물 5-3을 얻었다. LCMS: MS m/z = 407.0[M+H]+
단계 4: 화합물 5-4의 합성
미리 준비된 반응 플라스크에 메탄올(4 mL), 화합물 5-3(0.65 g, 1.60 mmol, 1 eq), 및 메틸 이소티오우레아 설페이트(1.22 g, 6.39 mmol, 4 eq, H2SO4)를 첨가하고, 교반하였다. 이어서, 나트륨 메톡사이드(172.61 mg, 3.20 mmol, 2 eq)를 첨가하고, 상기 혼합물을 25℃의 실온에서 1시간 동안 반응시켰다. 추가로 나트륨 메톡사이드(172.62 mg, 3.20 mmol, 2 eq)를 첨가한 후, 혼합물을 추가로 15시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 45℃에서 감압 하에 회전 증발시켰다. 얻어진 백색 고형물에 물 10 mL를 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 10 mL로 추출하였다. 층들을 분리하였다. 유기상을 포화 식염수 10 mL로 1회 세척하고, 무수 황산나트륨 0.50 g으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 45℃에서 감압 하에 회전 증발시켰다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/0 - 40/60, TLC: 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 1/1)로 정제하여 화합물 5-4를 얻었다. LCMS: MS m/z = 447.0[M+H]+.
단계 5: 화합물 5-5의 합성
미리 준비된 깨끗한 반응 플라스크에 디클로로메탄(20 mL) 및 화합물 5-4(610 mg, 1.36 mmol, 1 eq)를 첨가하고, 교반하였다. 혼합물을 0 내지 5℃로 냉각시킨 후, N,N-디이소프로필에틸아민(617.36 mg, 4.78 mmol, 832.02 μL, 3.5 eq) 및 트리플릭 무수물(770.13 mg, 2.73 mmol, 450.37 μL, 2 eq)을 순차적으로 첨가하였다. 상기 혼합물을 0.5시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 포화 염화암모늄 용액 20 mL에 붓고, 층들을 분리하였다. 유기상을 포화 식염수 10 mL로 1회 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 45℃에서 감압 하에 회전 증발시켰다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르/에틸 아세테이트 = 100/0 - 70/30, TLC: 석유 에테르/에틸 아세테이트 = 5/1)로 정제하여 화합물 5-5를 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.26 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 5.73 - 5.67 (m, 1H), 5.53 - 5.49 (m, 1H), 5.15 (dd, J = 3.2, 15.6 Hz, 1H), 4.88 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 4.06 - 3.99 (m, 1H), 3.80 - 3.72 (m, 1H), 3.30 - 3.25 (m, 1H), 3.12 - 3.04 (m, 1H), 2.61 - 2.49 (m, 7H), 2.19 - 2.07 (m, 2H), 1.83 - 1.68 (m, 3H).
단계 6: 화합물 5-6의 합성
미리 준비된 깨끗한 반응 플라스크에 N,N-디메틸포름아미드(5 mL) 및 화합물 5-5(0.33 g, 569.94 μmol, 1 eq)를 첨가하고, 교반하였다. 이어서, N,N-디이소프로필에틸아민(368.29 mg, 2.85 mmol, 496.35 μL, 5 eq) 및 화합물 5-5a(143 mg, 1.14 mmol, 2.00 eq, 2HCl)를 순차적으로 첨가하였다. 상기 혼합물을 100℃로 가열하고, 1시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 포화 염화암모늄 용액 20 mL에 부은 다음, 혼합물을 에틸 아세테이트 10 mL에 첨가하였다. 층들을 분리하였다. 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 45℃에서 감압 하에 회전 증발시켰다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올=100/0 - 85/15, TLC: 디클로로메탄/메탄올=15/1)로 정제하여 화합물 5-6을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.22 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.71 - 5.66 (m, 1H), 5.57 - 5.53 (m, 1H), 4.89 - 4.80 (m, 2H), 4.05 - 3.86 (m, 2H), 3.77 - 3.32 (m, 1H), 3.60 - 3.57 (m, 1H), 3.39 - 3.38 (m, 1H), 3.31 - 3.26 (m, 1H), 3.23 - 3.17 (m, 1H), 3.12 - 3.09(m, 1H), 3.02 - 2.96 (m, 3H), 2.93 - 2.83 (m, 2H), 2.57 - 2.56 (m, 1H), 2.54 - 2.52 (m, 7H), 2.16 - 2.04 (m, 2H), 1.79 - 1.71 (m, 3H). LCMS: MS m/z = 554.0[M+H]+.
단계 7: 화합물 5-7의 합성
화합물 5-6(190 mg, 342.90 μmol, 1 eq)을 테트라하이드로푸란(2 mL)에 용해시키고, 교반하였다. 이어서, 상기 혼합물을 0 내지 5℃로 냉각시키고, 트리플루오로아세트산 무수물(108.03 mg, 514.34 μmol, 71.54 μL, 1.5 eq) 및 트리에틸아민(121.44 mg, 1.20 mmol, 167.04 μL, 3.5 eq)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 0.5시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 포화 염화암모늄 용액 10 mL에 부은 다음, 디클로로메탄 10 mL로 추출하였다. 유기상을 포화 식염수로 1회 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 45℃에서 감압 하에 회전 증발시켜 화합물 5-7을 얻었다. LCMS: MS m/z = 650.2[M+H]+.
단계 8: 화합물 5-8의 합성
미리 준비된 깨끗한 반응 플라스크에 디클로로메탄(5 mL) 및 화합물 5-7(0.2 g, 290.04 μmol, 94.281% 질량 함량, 1 eq)을 첨가하고, 교반하였다. 이어서, m-클로로퍼옥시벤조산(143.96 mg, 667.37 μmol, 80% 질량 함량, 2.30 eq)을 첨가하고, 상기 혼합물을 25℃의 실온에서 0.5시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 티오황산나트륨 용액(10%) 20 mL에 붓고, 혼합물을 디클로로메탄 15 mL로 추출하였다. 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 45℃에서 감압 하에 회전 증발시켰다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올= 100/0 - 85/15, TLC: 디클로로메탄/메탄올= 15/1)로 정제하여 화합물 5-8을 얻었다. LCMS: MS m/z = 682.0[M+H]+
단계 9: 화합물 5-9의 합성
미리 준비된 깨끗한 반응 플라스크에 톨루엔(5 mL) 및 화합물 1-11A(148.59 mg, 1.29 mmol, 153.18 μL, 4 eq)를 첨가하고, 교반하였다. 이어서, 상기 혼합물을 0 내지 5℃로 냉각시키고, 나트륨 3급-부톡사이드(123.98 mg, 1.29 mmol, 4 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 15분 동안 반응시켰다. 화합물 5-8(0.22 g, 322.53 μmol, 1 eq)을 톨루엔 0.2 mL에 녹인 용액을 빠르게 첨가하고, 혼합물을 0.5시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 포화 염화암모늄 용액 10 mL에 붓고, 혼합물을 디클로로메탄 10 mL로 추출하였다. 유기상을 포화 식염수 10 mL로 1회 세척하고, 무수황산나트륨 0.50 g으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 45℃에서 감압 하에 회전 증발시켜 화합물 5-9를 얻었다. LCMS: MS m/z = 621.4[M+H]+
단계 10: 화합물 5-10의 합성
미리 준비된 반응 플라스크에 디클로로메탄(5 mL) 및 화합물 5-9(98.26 mg, 125.80 μmol, 79.529% 질량 함량, 1 eq)를 첨가하고, 교반하였다. 이어서, 상기 혼합물을 -60℃로 냉각시키고, N,N-디이소프로필에틸아민(162.59 mg, 1.26 mmol, 219.12 μL, 10 eq)을 첨가하였다. 아크릴로일 클로라이드(17.08 mg, 188.70 μmol, 15.39 μL, 1.5 eq)를 디클로로메탄 0.3 mL에 녹인 용액을 적가하고, 상기 혼합물을 10분 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 포화 염화암모늄 용액 5 mL에 붓고, 층들을 분리하였다. 유기상을 포화 식염수 5 mL로 1회 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 35℃에서 감압 하에 회전 증발시켜 화합물 5-10을 얻었고, 이를 다음 단계에서 바로 사용하였다. LCMS: MS m/z = 675.1[M+H]+
단계 11: 화합물 5A 및 5B의 합성
반응 플라스크에 디클로로메탄/트리플루오로아세트산(4 mL, 5/3) 및 화합물 5-10(0.1 g, 148.10 μmol, 1 eq)을 첨가하고, 상기 혼합물을 25℃의 실온에서 0.5시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 포화 탄산수소나트륨 용액 15 mL에 서서히 적가한 후, 상기 혼합물을 디클로로메탄 10 mL로 추출하였다. 유기상을 포화 식염수 10 mL로 1회 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 30℃에서 감압 하에 회전 증발시켰다. 조 생성물을 고성능 액체 크로마토그래피 컬럼(컬럼: Phenomenex Gemini-NX 150×30 mm×5 μm; 이동상: [H2O(0.1%TFA)-아세토니트릴]; 아세토니트릴%: 20%-50%, 9분)으로 정제하여 화합물 5-11을 얻었다. 화합물 5-11을 SFC(DAICEL CHIRALPAK AS (250 mm×30 mm, 10 μm); 이동상: [0.1%NH 3 H2O EtOH]; 에탄올: 50%-50%, 15분)로 분리하였다.
화합물 5A를 얻었다(키랄 컬럼에서 피크까지 도달하는 시간: 1.516). SFC 분리 방법(resolution method)(컬럼: Chiralpak AD-3, 50×4.6 mm, I.D., 3μm; 이동상: A(CO2) 및 B(이소프로판올, 0.05% 디에탄올아민 함유), 구배: B%=5 - 50%, 3분 ; 유속: 3.4 mL/분, 파장: 220 nm, 압력: 1800 psi, 광학 순도: 91.04%. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.26 (s, 1H), 7.37 (s, 1H), 6.62 - 6.56 (m, 1H), 6.42 - 6.38 (m, 1H), 5.84 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 5.58 (dd, J = 4.0, 11.2 Hz, 1H), 4.94 (s, 2H), 4.55 - 4.43 (m, 1H), 4.27 - 4.18 (m, 1H), 4.02 - 3.87 (m, 1H), 3.76 - 3.73 (m, 1H), 3.23 - 3.18 (m, 4H), 3.07 - 2.98 (m, 2H), 2.87 - 2.74 (m, 3H), 2.56 - 2.53 (m, 6H), 2.13 - 2.07 (m, 1H), 1.82 - 1.76 (m, 3H), 1.37 - 1.29 (m, 3H). LCMS: MS m/z = 591.2[M+H]+.
화합물 5B를 얻었다(키랄 컬럼에서 피크까지 도달하는 시간: 1.800). SFC 분리 방법(컬럼: Chiralpak AD-3, 50×4.6 mm, I.D., 3μm; 이동상: A(CO2) 및 B(이소프로판올, 0.05% 디에탄올아민 함유), 구배: B%=5 - 50%, 3분 ; 유속: 3.4 mL/분, 파장: 220 nm, 압력: 1800 psi, 광학 순도: 99.74%. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.31 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 6.63 - 6.53 (m, 1H), 6.42 - 6.37 (m, 1H), 5.83 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 5.59 (dd, J = 4.0, 11.2 Hz, 1H), 4.98 - 4.88 (m, 2H), 4.55 - 4.80 (m, 1H), 4.24 - 4.19 (m, 1H), 4.01 - 3.97 (m, 1H), 3.93 - 3.85 (m, 1H), 3.74 - 3.69 (m, 1H), 3.56 - 3.52 (m, 1H), 3.28 - 3.05 (m, 3H), 3.03 - 2.95 (m, 1H), 2.83 - 2.69 (m, 3H), 2.58 - 2.53 (m, 6H), 2.43 - 2.33 (m, 1H), 2.12 - 2.06 (m, 1H), 1.91 - 1.86 (m, 1H), 1.81 - 1.79 (m, 2H), 1.45 - 1.30 (m, 2H). LCMS: MS m/z = 591.2[M+H]+.
실시예 6
Figure pct00097
단계 1: 화합물 6-1의 합성
화합물 4-17(190 mg, 298.65 μmol, 1 eq) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(192.99 mg, 1.49 mmol, 260.10 μL, 5 eq)을 디클로로메탄(5 mL)에 용해시키고, 트리플루오로아세트산 무수물(94.09 mg, 447.98 μmol, 62.31 μL, 1.5 eq)를 0℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 혼합물을 포화 수성 염화암모늄(5 mL)으로 켄칭하고, 디클로로메탄(5 mL × 2)으로 추출하였다. 유기상을 합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 농축하여 화합물 6-1을 얻었다. LCMS: MS m/z = 732.3[M+H]+
단계 2: 화합물 6-2의 합성
화합물 6-1(200 mg, 273.15 μmol, 1 eq)을 디클로로메탄(4 mL)에 용해시키고, 트리플루오로아세트산(3.08 g, 27.01 mmol, 2 mL, 98.89 eq)을 0℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 18℃에서 0.5시간 동안 반응시켰다. 상기 혼합물을 바로 회전 증발시켜 건조시켜 조 생성물을 얻었고, 이를 고성능 액체 크로마토그래피 컬럼(Phenomenex Gemini-NX 150×30 mm×5 μm; 이동상: [H2O(0.1%TFA)-아세토니트릴]; 아세토니트릴%: 30% - 60%, 9분)으로 정제하여 화합물 6-2를 얻었다. LCMS: MS m/z = 632.3[M+H]+
단계 3: 화합물 6-3의 합성
화합물 6-2(110 mg, 174.03 μmol, 1 eq) 및 파라포름알데히드(88.91 mg, 1.74 mmol, 10 eq)를 1,2-디클로로에탄(1 mL) 및 메탄올(1 mL)에 용해시켰다. 빙초산(1.05 mg, 17.40 μmol, 9.95e-1 μL, 0.1 eq)을 첨가하고, 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 나트륨 시아노보로하이드라이드(21.87 mg, 348.06 μmol, 2 eq)를 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 10시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 포화 수성 염화암모늄(10 mL)에 붓고, 디클로로메탄(5 mL × 3)을 첨가하였다. 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축하여 화합물 6-3을 얻었다. LCMS: MS m/z = 646.1[M+H]+, 647.7[M+2H]+
단계 4: 화합물 6-4의 합성
화합물 6-3(90 mg, 139.30 μmol, 1 eq)을 메탄올(3 mL)에 용해시키고, 탄산칼륨(1.7 M, 2.70 mL, 32.95 eq)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 18℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 혼합물을 포화 수성 염화암모늄(5 mL)으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(5 mL × 2)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 농축하여 화합물 6-4를 얻었다. LCMS: MS m/z = 550.2[M+H]+, 551.8[M+2H]+.
단계 5: 화합물 6A 및 6B의 합성
화합물 6-4(76 mg, 138.16 μmol, 1 eq)를 디클로로메탄(20 mL)에 용해시키고, N,N-디이소프로필에틸아민(267.83 mg, 2.07 mmol, 360.96 μL, 15 eq)을 첨가하였다. 아크릴로일 클로라이드(12.50 mg, 138.16 μmol, 11.27 μL, 1 eq)를 -60℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 -60℃에서 0.5시간 동안 반응시켰다. 상기 혼합물을 포화 수성 염화암모늄(5 mL)으로 켄칭하고, 에틸 아세테이트(5 mL × 2)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 농축하여 화합물 6-5를 얻었고, 이를 고성능 액체 크로마토그래피 컬럼(컬럼: Phenomenex Gemini-NX C18 75×30 mm×3 μm; 이동상: [H2O(0.04%NH3H2O+10mM NH4HCO3)-ACN]; 아세토니트릴%: 25%-55%, 6분)으로 정제하여 화합물 6-5를 얻었고, 이를 SFC(컬럼: Phenomenex Gemini-NX C18 75×30 mm×3 μm; 이동상: [H2O(0.04%NH3H2O+10mM NH4HCO3)-ACN]; 아세토니트릴%: 25%-55%, 6분)로 분리하여 화합물 6A((키랄 컬럼에서 피크까지 도달하는 시간 = 1.435분), SFC 분석 방법(컬럼: Chiralpak AD-3, 50 × 4.6 mm, I.D.,3μm; 이동상: A(CO2) 및 B(이소프로판올, 0.05% 디에탄올아민 함유), 구배: B%=5 - 50%, 3분, 유속: 3.4 mL/분; 파장: 220 nm, 압력: 1800 psi, 광학 순도: 87.38%. LCMS: MS m/z = 604.1[M +H]+) 및 화합물 6B((키랄 컬럼에서 피크까지 도달하는 시간 = 1.643), SFC 분석 방법(컬럼: Chiralpak AD-3, 50×4.6 mm, I.D., 3μm; 이동상: A(CO2) 및 B(이소프로판올, 0.05% 디에탄올아민 함유), 구배: B%=5 - 50%, 3분, 유속: 3.4 mL/분, 파장: 220 nm, 압력: 1800 psi, 광학 순도: 100%, LCMS: MS m/z = 604.1[M+H]+)를 얻었다.
실시예 7
Figure pct00098
단계 1: 화합물 7-1의 합성
미리 준비된 반응 플라스크에 N,N-디메틸포름아미드(6 mL) 및 화합물 5-9(150 mg, 193.18 μmol, 80% 질량 함량, 1 eq)를 첨가하고, 교반하였다. 이어서, 혼합물을 0 내지 5℃로 냉각시켰다. 그런 다음, 2-플루오로아크릴산(26.10 mg, 289.78 μmol, 3.08 μL, 1.5 eq), 2-(7-아자벤조트리아졸)-N,N,N,N-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(110.18 mg, 289.78 μmol, 1.5 eq), 및 N,N-디이소프로필에틸아민(74.90 mg, 579.55 μmol, 100.94 μL, 3 eq)을 순차적으로 첨가하고, 상기 혼합물을 0.5시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 포화 염화암모늄 용액 15 mL에 붓고, 에틸 아세테이트 20 mL로 추출하였다. 수성상을 에틸 아세테이트 15 mL로 1회 세척하였다. 유기상을 합하고, 포화 식염수 15 mL로 1회 세척한 다음, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 45℃에서 감압 하에 회전 증발시켰다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피(디클로로메탄/메탄올 = 50/1,30/1,20/1,15/1,10/1, TLC: 디클로로메탄/메탄올 = 10/1)로 정제하여 화합물 7-1을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.24 - 8.21 (m, 1H), 7.48 - 7.43 (m, 1H), 5.71 - 5.65 (m, 1H), 5.61 - 5.55 (m, 1H), 5.27 - 5.23 (m, 1H), 4.97- 4.84 (m, 2H), 4.60- 4.56 (m, 2H), 4.06- 4.00 (m, 2H), 3.76 - 3.67 (m, 5H), 3.57 - 3.37 (m, 2H), 3.21 - 3.15 (m, 4H), 3.04 - 2.97 (m, 4H), 2.93 - 2.81 (m, 3H), 2.54 (s, 3H), 2.38 - 2.33 (m, 1H), 2.19 - 2.05 (m, 6H), 1.79 - 1.66 (m, 3H). LCMS: MS m/z = 693.2[M+H]+.
단계 2: 화합물 7A 및 7B의 합성
반응 플라스크에 디클로로메탄/트리플루오로아세트산(7 mL, 5/3) 및 화합물 7-1(70 mg, 100.98 μmol, 1 eq)을 첨가하고, 상기 혼합물을 25℃의 실온에서 3시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 포화 탄산수소나트륨 용액 15 mL에 서서히 적가한 후, 소규모 반응 용액과 혼합하였다. 상기 혼합물을 디클로로메탄 10 mL로 추출하였다. 유기상을 포화 식염수 10 mL로 1회 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 30℃에서 감압 하에 회전 증발시켜 조 생성물을 얻었고, 이를 고성능 액체 크로마토그래피 컬럼(컬럼: Phenomenex luna C18 100×40 mm×5 μm; 이동상: [H2O(0.1%TFA)-아세토니트릴]; 아세토니트릴%: 10%-35%, 8분)으로 정제하여 화합물 7-2를 얻었으며, 이를 SFC(컬럼: DAICEL CHIRALCEL OJ(250 mm×30 mm, 10 μm); 이동상: [0.1%NH3H2O EtOH]; EtOH%: 40%-40%, 15분)로 분리하였다.
화합물 7A를 얻었다(키랄 컬럼에서 피크까지 도달하는 시간: 1.263분). SFC 분리 방법(컬럼: Chiralcel OJ-3, 50×4.6 mm I.D., 3μm, 이동상: A(CO2) 및 B(에탄올, 0.05% 디이소프로필아민 함유), 구배: B%=5-50%, 3분, 유속: 3.4 mL/분, 파장: 220 nm, 압력: 1800 psi 광학 순도: 91.94%. 1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.29 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 5.61 - 5.57 (m, 1H), 5.48 - 5.32 (m, 1H), 5.28 - 5.24 (m, 1H),4.95 - 4.86 (m, 3H), 4.44 - 4.43 (m, 1H), 4.20 - 4.16 (m, 2H), 3.97 - 3.93 (m, 1H), 3.80 - 3.78 (m, 1H), 3.50 - 3.48 (m, 1H), 3.27 - 3.22 (m, 1H), 3.14 - 2.95 (m, 4H), 2.81 - 2.71 (m, 3H), 2.52 - 2.50 (m, 7H), 2.34 - 2.28 (m, 1H), 2.08 - 2.02 (m, 1H), 1.91 - 1.84 (m, 2H). LCMS: MS m/z = 609.2[M+H]+.
화합물 7B를 얻었다(키랄 컬럼에서 피크까지 도달하는 시간: 1.393분). SFC 분리 방법(컬럼: Chiralcel OJ-3, 50×4.6 mm I.D., 3μm; 이동상: A(CO2) 및 B(에탄올, 0.05% 디이소프로필아민 함유); 구배: B%=5-50%, 3분; 유속: 3.4 mL/분; 파장: 220 nm; 압력: 1800 psi, 광학 순도: 82.48%. 1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ = 8.26 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 5.59 - 5.55 (m, 1H), 5.48 - 5.36 (m, 1H), 5.29 - 5.24 (m, 1H),4.93 (s, 2H), 4.42 - 4.40 (m, 1H), 4.24 - 4.20 (m, 2H), 3.73 - 3.70 (m, 1H), 3.24 - 2.98 (m, 8H), 2.90 - 2.71 (m, 3H), 2.53 - 2.48 (m, 7H), 2.33 - 2.31 (m, 1H), 2.09 - 2.04 (m, 1H), 1.89 - 1.85 (m, 2H). LCMS: MS m/z = 609.1[M+H]+.
실시예 8
Figure pct00099
Figure pct00100
단계 1: 화합물 8-2의 합성
건조한 2 L 3구 플라스크(무수 및 무산소 환경)에서, 수소화나트륨(39.12 g, 978.08 mmol, 60% 질량 함량, 2.4 eq)을 N,N-디메틸포름아미드(510 mL)에 첨가하자 반응계가 불균일하고 회색이 되었다. 상기 혼합물을 0℃로 냉각시키고, N,N-디메틸포름아미드(200 mL) 중 화합물 8-1(51 g, 407.53 mmol, 1 eq)의 용액을 질소 하에 적가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 반응시켰다. p-메톡시벤질 클로라이드(140.41 g, 896.57 mmol, 122.10 mL, 2.2 eq)를 첨가하고, 반응계를 20℃까지 서서히 가온하였다. 반응계는 흙빛이 도는 붉은색(earthy red)이 되었고, 질소 하에 7.5시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 포화 염화암모늄 200 mL에 서서히 첨가하고, 메틸 3급-부틸 에테르(200 mL × 2)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 식염수 200 mL로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 이어서, 여액을 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 크로마토그래피 정제 시스템 COMBI-FLASH(구배 용리: 석유 에테르:에틸 아세테이트 = 10:0 - 10:1, 석유 에테르:에틸 아세테이트 = 10:1)로 분리하여 화합물 8-2를 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.23-7.18 (m, 4H), 6.91-6.87(m, 1H), 6.82-6.76 (m, 4H), 6.65 -6.59(m, 2H), 4.20 (s, 4H), 3.79(s, 6H), 2.19 (s, 3H). LCMS: MS m/z = 366.1 [M+H]+.
단계 2: 화합물 8-3의 합성
2,2,6,6-테트라메틸피페리딘(31.31 g, 221.65 mmol, 37.63 mL, 3 eq)을 무수 테트라하이드로푸란(300 mL)에 첨가하고, 혼합물을 -5℃로 냉각시켰다. n-부틸리튬(2.5 M, 94.57 mL, 3.2 eq)을 적가하고, -5 내지 0℃에서 15분 동안 반응시켰다. 상기 혼합물을 -60℃로 냉각하고, 테트라하이드로푸란(60 mL) 중 화합물 8-2(27 g, 73.88 mmol, 1 eq)의 용액을 첨가하였다. 상기 혼합물을 -60℃에서 0.5시간 동안 반응시켰다. N,N-디메틸포름아미드(108.00 g, 1.48 mol, 113.69 mL, 20 eq)를 빠르게 첨가하고, 혼합물을 -60℃에서 10분 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액에 포화 염화암모늄 400 mL를 첨가하고, 메틸 3급-부틸 에테르 200 mL × 2로 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 식염수 200 mL로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 농축하여 조 생성물을 얻었고, 이를 석유 에테르 및 메틸 3급-부틸 에테르(석유 에테르:메틸 3급-부틸 에테르 = 5:1)의 용매 혼합물 70 mL로 0.5시간 동안 슬러리화한 후, 여과하였다. 필터 케이크를 회전 증발시켜 건조시키고, 여액을 교반하고, 컬럼(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 100:0-10:1)으로 정제하여 화합물 8-3을 얻었다. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 10.43 - 10.35 (m, 1H), 7.21-7.18 (m, 5H), 6.92 - 6.81 (m, 5H), 4.25 (s, 4H), 3.80 (s, 6H), 2.23 (s, 3H). LCMS:MS m/z = 394.2[M+H]+.
단계 3: 화합물 8-4의 합성
화합물 8-3(17.8 g, 45.24 mmol, 1 eq)을 N,N-디메틸포름아미드(170 mL)에 첨가하였다. 브로모석신이미드(8.05 g, 45.24 mmol, 1 eq)를 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 20분 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 물 300 mL에 첨가하고, 메틸 3급-부틸 에테르 150 mL × 2로 추출하였다. 유기상을 합하고, 100 mL × 2의 포화 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 농축하였다. 조 생성물을 에틸 아세테이트 및 메틸 3급-부틸 에테르의 용매 혼합물(에틸 아세테이트:메틸 3급-부틸 에테르 = 1:1)로 0.5시간 동안 슬러리화한 후, 여과하였다. 필터 케이크를 회전 증발시켜 건조시켜 화합물 8-4를 얻었다. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 10.39 (s, 1H), 7.17 (d, J = 8.8 Hz, 4H), 6.89 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.85-6.82 (m, 4H), 4.22 (s, 4H), 3.79 (s, 6H), 2.28 (s, 3H). LCMS:MS m/z = 472.1[M+H]+, 474.1[M+3H]+.
단계 4: 화합물 8-5의 합성
화합물 8-4(19.3 g, 40.86 mmol, 1 eq)를 N,N-디메틸포름아미드(190 mL)에 첨가하였다. 요오드화제일구리(15.56 g, 81.72 mmol, 2 eq) 및 메틸 플루오로설포닐디플루오로아세테이트(39.25 g, 204.30 mmol, 25.99 mL, 5 eq)를 첨가하고, 혼합물을 질소 하에 100℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 규조토 패드를 통해 여과하였다. 여액을 물 300 mL에 첨가하고, 메틸 3급-부틸 에테르 150mL × 2로 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 식염수(200 mL × 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 농축하였다. 조 생성물을 컬럼(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 100:0-10:1, 석유 에테르:에틸 아세테이트 = 5:1)으로 정제하여 화합물 8-5를 얻었다. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 10.37 (q, J = 4.0 Hz, 1H), 7.18 - 7.11 (m, 4H), 6.89 - 6.82 (m, 4H), 6.73 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.36 (s, 4H), 3.81 (s, 6H), 2.37 - 2.29 (m, 3H). LCMS: MS m/z =484.0[M+Na]+.
단계 5: 화합물 8-6의 합성
무수 테트라하이드로푸란(50 mL) 및 수소화나트륨(1.17 g, 29.26 mmol, 60% 질량 함량, 3 eq)을 건조한 3구 플라스크에 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 메틸 아세토아세테이트(3.40 g, 29.26 mmol, 3.15 mL, 3 eq)를 질소 하에 적가하고, 혼합물을 질소 하에 0℃에서 0.5시간 동안 반응시켰다. n-부틸리튬(2.5 M, 11.70 mL, 3 eq)을 적가하고, 상기 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 반응시켰다. 상기 혼합물을 -60℃로 냉각시켰다. 테트라하이드로푸란(20 mL) 중 화합물 8-5(4.5 g, 9.75 mmol, 1 eq)의 용액을 적가하고, -60℃에서 0.5시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액에 포화 염화암모늄 용액 100 mL를 첨가하고, 상기 혼합물을 에틸 아세테이트 30 mL로 추출하였다. 유기상을 포화 식염수 80 mL로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 농축하여 조 생성물을 얻었고, 이를 합하고 컬럼(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 100:0-3:1, 석유 에테르:에틸 아세테이트 = 3:1)으로 정제하여 화합물 8-6을 황색 오일로 얻었다. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 7.18-7.15 (m, 4H), 6.90 - 6.78 (m, 4H), 6.61 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.72 - 5.57 (m, 1H), 4.31 (m, 4H), 3.81(s, 6H), 3.76(s, 3H), 3.56 (s, 2H), 3.50 - 3.38 (m, 1H), 2.98 - 2.93 (m, 1H), 2.38 - 2.26 (m, 3H). LCMS: MS m/z =578.1[M+H]+.
단계 6: 화합물 8-7의 합성
화합물 8-6(3 g, 5.19 mmol, 1 eq)을 무수 디클로로메탄(30 mL)에 첨가하고, N,N-디메틸포름아미드 디메틸 아세탈(742.74 mg, 6.23 mmol, 828.02 μL, 1.2 eq)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 20℃에서 16시간 동안 반응시켰다. 삼플루오르화붕소 에테레이트(884.66 mg, 6.23 mmol, 769.27 μL, 1.2 eq)를 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 포화 탄산수소나트륨 용액 20 mL에 첨가하였다. 층들을 분리하고, 수성상을 디클로로메탄 20 mL로 추출하였다. 유기상을 합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 농축하였다. 조 생성물을 컬럼(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 100:0-3:1, 석유 에테르:에틸 아세테이트 = 3:1)으로 정제하여 화합물 8-7을 얻었다. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ =8.43 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.21 - 7.10 (m, 4H), 6.91 - 6.81 (m, 4H), 6.70 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.93 (dd, J = 3.2, 14.8 Hz, 1H), 4.35 (s, 4H), 3.8(s, 3H), 3.81 (s, 6H), 3.38-3.29 (m, 1H), 2.68 (dd, J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 2.39 - 2.24 (m, 3H). LCMS: MS m/z =588.2[M+H]+.
단계 7: 화합물 8-8의 합성
화합물 8-7(2.1 g, 3.57 mmol, 1 eq)을 무수 테트라하이드로푸란(21 mL)에 첨가하였다. 상기 혼합물을 -60℃로 냉각시키고, 리튬 트리-2급-부틸보로하이드라이드(1 M, 4.29 mL, 1.2 eq)를 질소 하에 첨가하였다. 상기 혼합물을 -60℃에서 0.5시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 포화 염화암모늄 30 mL에 첨가하였다. 추출 후 층들을 분리하였다. 유기상을 포화 식염수 20 mL로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 농축하여 조 생성물을 얻었고, 이를 컬럼(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 100:0 - 3:1, 석유 에테르:에틸 아세테이트 = 3:1)으로 정제하여 화합물 8-8을 얻었다. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 7.167-7.14(m, 4H), 6.87-6.83 (m, 4H), 6.63 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.05-5.00 (m, 1H), 4.61-4.58 (m, 1H), 4.42 - 4.24 (m, 5H), 3.85-3.73 (m, 10H), 3.13-3.05 (m, 1H), 2.47 - 2.38 (m, 1H), 2.35-2.31 (m, 3H). LCMS: MS m/z = 600.1[M+H]+.
단계 8: 화합물 8-9의 합성
화합물 8-8(1.27 g, 2.15 mmol, 1 eq)을 에탄올(15 mL) 및 물(3 mL)에 첨가하고, 탄산수소나트륨(3.62 g, 43.08 mmol, 1.68 mL, 20 eq) 및 메틸 이소티오우레아 설페이트(4.05 g, 21.54 mmol, 10 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 50℃에서 4시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 물 40 mL에 넣고, 에틸 아세테이트 20 mL × 2로 추출하였다. 유기상을 합하고, 20 mL × 2의 포화 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 농축하였다. 조 생성물을 컬럼(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 100:0 - 1:1, 석유 에테르:에틸 아세테이트 = 1:1)으로 정제하여 화합물 8-9를 얻었다. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 7.22 - 7.14 (m, 4H), 6.91 - 6.82 (m, 4H), 6.65 (dd, J = 8.4 Hz 1H), 5.12-5.08 (m, 1H), 4.97-4.91 (m, 1H), 4.67 - 4.57 (m, 1H), 4.45 - 4.22 (m, 4H), 3.88 - 3.74 (m, 6H), 3.43-3.35 (m, 1H), 2.77-2.72 (m, 1H), 2.59 (m, 3H), 2.40-2.31 (m, 3H). LCMS:MS m/z =630.2[M+H]+.
단계 9: 화합물 8-10의 합성
화합물 8-9(0.57 g, 905.25 μmol, 1 eq)를 무수 디클로로메탄(6 mL)에 첨가하고, N,N-디이소프로필에틸아민(409.48 mg, 3.17 mmol, 551.86 μL, 3.5 eq) 및 트리플릭 무수물(510.81 mg, 1.81 mmol, 298.72 μL, 2 eq)을 0℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 0 내지 5℃에서 5시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 포화 염화암모늄 20 mL에 첨가하고, 디클로로메탄 10 mL로 추출하였다. 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 농축하였다. 조 생성물을 컬럼(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 100:0 - 5:1, 석유 에테르:에틸 아세테이트 = 3:1)으로 정제하여 화합물 8-10을 얻었다. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 7.21 - 7.11 (m, 4H), 6.90 - 6.80 (m, 4H), 6.66 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.19-5.15 (m, 1H), 5.04 - 4.93 (m, 1H), 4.77-4.72 (m, 1H), 4.41 - 4.19 (m, 4H), 3.80 (s, 6H), 3.62-3.54 (m, 1H), 3.11 - 2.97 (m, 1H), 2.56 (s, 3H), 2.42 - 2.31 (m, 3H). LCMS:MS m/z =762.2[M+H]+.
단계 10: 화합물 8-11의 합성
화합물 8-10(0.45 g, 590.76 μmol, 1 eq)을 N,N-디메틸포름아미드(5 mL)에 첨가하고, N,N-디이소프로필에틸아민(229.05 mg, 1.77 mmol, 308.69 μL, 3 eq) 및 화합물 1-10A(306.37 mg, 1.18 mmol, 2 eq, HCl)를 순차적으로 첨가하였다. 상기 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 물 20 mL에 붓고, 여과하였다. 필터 케이크를 메틸 3급-부틸 에테르 20 mL에 용해시키고, 포화 식염수 20 mL로 세척하였다. 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 농축하여 화합물 8-11을 얻었다. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 7.44 - 7.32 (m, 5H), 7.16-7.13 (m, 4H), 6.85-6.82 (m, 4H), 6.63 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.21-5.15 (m, 2H), 4.80 - 4.66 (m, 3H), 4.39 - 4.22 (m, 4H), 3.93-3.88 (m, 1H), 3.80 (s, 6H), 3.71 - 3.55 (m, 1H), 3.52 - 3.29 (m, 2H), 3.25 - 3.08 (m, 3H), 3.06 - 2.96 (m, 2H), 2.91 - 2.77 (m, 1H), 2.71-2.68 (m, 1H), 2.52 (s, 3H), 2.35-2.30 (m, 3H). LCMS: MS m/z =871.4[M+H]+.
단계 11: 화합물 8-12의 합성
화합물 8-11(580.00 mg, 665.94 μmol, 1 eq)을 무수 디클로로메탄(6 mL)에 첨가하고, m-클로로퍼옥시벤조산(359.13 mg, 1.66 mmol, 80% 질량 함량, 2.5 eq)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 티오황산나트륨 용액(10%) 20 mL에 붓고, 디클로로메탄 10 mL로 추출하였다. 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 45℃에서 감압 하에 회전 증발시켰다. 조 생성물을 컬럼(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 100:0-1:1, 석유 에테르:에틸 아세테이트 = 1:1)으로 정제하여 화합물 8-12를 얻었다. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 7.40-7.37 (m, 5H), 7.17-7.12 (m, 4H), 6.86-6.82 (m, 4H), 6.67-6.64 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.19 (s, 2H), 4.86 - 4.79 (m, 2H), 4.71-4.63 (m, 1H), 4.35 - 4.24 (m, 4H), 3.82-3.81 (m, 1H), 3.80 (s, 6H), 3.64 - 3.50 (m, 2H), 3.46 - 3.33 (m, 2H), 3.30 - 3.27 (m, 4H), 3.25 - 3.11 (m, 3H), 2.71-2.65 (m, 1H), 2.52-2.45 (m, 1H), 2.38-2.30 (m, 3H). LCMS: MS m/z =903.3[M+H]+.
단계 12: 화합물 8-13의 합성
화합물 1-11A(117.35 mg, 1.02 mmol, 120.98 μL, 4 eq)를 디옥산(5 mL)에 첨가하였다. 상기 혼합물을 0 내지 5℃로 냉각시켰다. 나트륨 3급-부톡사이드(97.91 mg, 1.02 mmol, 4 eq)를 첨가하고, 상기 혼합물을 10분 동안 반응시켰다. 톨루엔(1 mL) 중 화합물 8-12(230.00 mg, 254.72 μmol, 1 eq)의 용액을 첨가하고, 상기 혼합물을 0.5시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 포화 염화암모늄 20 mL에 첨가하고, 에틸 아세테이트 10 mL × 2로 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 식염수 20 mL로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 농축하였다. 조 생성물을 컬럼(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 1:1-0:1, 디클로로메탄:메탄올 = 100:0 - 10:1, 디클로로메탄:메탄올 = 10:1)으로 정제하여 화합물 8-13을 얻었다. LCMS: MS m/z =938.2[M+H]+.
단계 13: 화합물 8-14의 합성
화합물 8-13(0.15 g, 159.91 μmol, 1 eq)을 무수 디클로로메탄(5 mL)에 첨가하고, 트리플루오로아세트산(0.5 mL)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 25℃에서 2.5시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 포화 탄산수소나트륨 용액 10 mL에 넣고, 디클로로메탄 5 mL × 2로 추출하였다. 유기상을 합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 농축하여 화합물 8-14를 얻었다. LCMS: MS m/z =698.2[M+H]+.
단계 14: 화합물 8-15의 합성
화합물 8-14(0.17 g, 243.65 μmol, 1 eq)를 무수 메탄올(2 mL) 및 무수 테트라하이드로푸란(2 mL)에 첨가하였다. 탄소 상의 팔라듐(0.15 g, 10% 질량 함량)을 첨가하고, 상기 혼합물을 수소(15 psi) 하에 25℃에서 0.5시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 바로 여과하여 촉매를 회수하고, 여액을 농축하여 화합물 8-15를 황색 고체로 얻었다. LCMS: MS m/z =564.2[M+H]+.
단계 15: 화합물 8A 및 8B의 합성
화합물 8-15(60 mg, 106.46 μmol, 1 eq), 2-플루오로아크릴산(11.50 mg, 127.75 μmol, 1.2 eq) 및 2-(7-아자벤조트리아졸)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(60.72 mg, 159.69 μmol, 1.5 eq)를 N,N-디메틸포름아미드(1 mL)에 첨가하였다. N,N-디이소프로필에틸아민(41.28 mg, 319.38 μmol, 55.63 μL, 3 eq)을 첨가하고, 상기 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 포화 염화암모늄 10 mL에 첨가하고, 에틸 아세테이트 5 mL × 2로 추출하였다. 유기상을 합하고, 5 mL × 2의 포화 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 농축하여 화합물 8-16을 얻었으며, 이를 고성능 액체 크로마토그래피 컬럼(컬럼: 컬럼: Phenomenex Gemini-NX 150×30 mm×5 μm; 이동상: [H2O(0.1%TFA)-ACN]; 아세토니트릴%: 20%-50%, 9분)으로 정제하였다. 분획들을 진공 하에 농축하였다. 탈이온수 5 mL와 아세토니트릴 0.5 mL를 첨가한 후, 1 M 염산 용액 2방울을 첨가하였다. 상기 혼합물을 진공 하에 농축하여 다음 화합물들을 얻었다: 화합물 8A 염산염((피크 도달 시간: 1.379분). SFC 분리 방법(컬럼: Chiralcel OD-3, 50×4.6 mm I.D., 3μm; 이동상: A(CO2) 및 B(메탄올, 0.05% 디이소프로필아민 함유), 구배: B%=5-50%, 3분, 유속: 3.4 mL/분, 파장: 220 nm, 압력: 1800 psi 광학 순도: 80.82%. LCMS:MS m/z =636.4[M+H]+) 및 화합물 8B 염산염((피크 도달 시간: 1.789분). SFC 분리 방법(컬럼: Chiralcel OD-3, 50×4.6 mm I.D., 3μm; 이동상: A(CO2) 및 B(메탄올, 0.05% 디이소프로필아민 함유); 구배: B%=5-50%, 3분; 유속: 3.4 mL/분; 파장: 220 nm; 압력: 1800 psi, 광학 순도: 75.56%). 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 6.59 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.50 - 5.33 (m, 1H), 5.29 - 5.16 (m, 2H), 4.82 - 4.69 (m, 2H), 4.39 (dd, J=5.2, 10.8 Hz, 1H), 4.16 (dd, J=6.8, 10.4 Hz, 1H), 4.04 (s, 2H), 3.94 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 3.68 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.50 - 3.32 (m, 2H), 3.10 (br t, J = 7.2 Hz, 1H), 3.05 - 2.94 (m, 2H), 2.79 (br d, J = 7.2 Hz, 2H), 2.71-2.62 (m, 1H), 2.48 (s, 3H), 2.39 (q, J = 4.0 Hz, 3H), 2.32 - 2.22 (m, 1H), 2.11 - 1.99 (m, 1H), 1.93 - 1.66 (m, 6H). LCMS: MS m/z =636.4[M+H]+.
실시예 9
Figure pct00101
단계 1: 화합물 9-3A의 합성
건조한 반응 플라스크에 무수 테트라하이드로푸란(30 mL)을 첨가한 다음, 화합물 9-6(1.5 g, 6.07 mmol, 1 eq)을 첨가하였다. 반응계를 10℃로 냉각시켰다. 수소화알루미늄리튬(690.66 mg, 18.20 mmol, 3 eq)을 배치로 첨가하고, 반응계를 15℃에서 16시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액에 황산나트륨 10수화물(4 g)을 첨가하고, 상기 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 여과했다. 필터 케이크를 테트라하이드로푸란(20 mL × 2)에 첨가하고, 상기 혼합물을 0.5시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 별도로 여과하였다. 여액을 합하고, 감압 하에 농축하여 화합물 9-3A를 얻었으며, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 바로 사용하였다. 1H NMR (400 MHz,CDCl3) δ ppm 5.25 - 4.98 (m, 1 H) 3.75 - 3.65 (m, 1 H) 3.61 - 3.43 (m, 2 H) 2.83 - 2.74 (m, 1 H) 2.71 - 2.56 (m, 1 H) 2.39 (s, 3 H) 2.14 - 2.03 (m, 2 H). LCMS m/z =134.2[M+H]+.
단계 2: 화합물 9-2의 합성
건조한 반응 플라스크에 N,N-디메틸포름아미드(6 mL)를 첨가한 다음, 화합물 8-10(0.55 g, 722.04 μmol, 1 eq), N,N-디이소프로필에틸아민(279.95 mg, 2.17 mmol, 377.29 uL, 3 eq) 및 화합물 9-1A(289.22 mg, 1.44 mmol, 2 eq)를 첨가하였다. 반응계를 질소 하에 50℃에서 50분 동안 반응시켰다. 추가로 화합물 9-1A(50 mg)를 첨가하고, 상기 혼합물을 추가로 0.5시간 동안 반응시켰다. TLC(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 3:1)에서는 원료가 사라지고, 새로운 반점이 나타났음을 보여주었다. 반응계를 실온(15℃)으로 냉각시킨 후, 상기 반응 용액을 포화 염화암모늄 용액(30 mL)에 첨가하고, 메틸 3급-부틸 에테르(10 mL × 2)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 식염수(20 mL × 2)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 화합물 9-2를 얻었고, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 바로 사용하였다. LCMS m/z =812.4[M+H]+
단계 3: 화합물 9-3의 합성
건조한 반응 플라스크에 디클로로메탄(10 mL)을 첨가한 다음, 화합물 9-2(0.65 g, 800.57 μmol, 1 eq) 및 m-클로로퍼옥시벤조산(207.23 mg, 960.68 μmol, 80% 순도, 1.2 eq)을 첨가하였다. 반응계를 15℃에서 0.5시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 물(20 mL)에 부었다. 티오황산나트륨 용액(20 mL, 10%)을 첨가하고, 전분-KI 종이(starch-KI paper)에 의해 상기 혼합물은 음성을 나타내었다. 이어서, 상기 혼합물을 디클로로메탄(20 mL)으로 추출하였다. 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 40℃에서 농축하여 조 생성물을 얻었고, 이를 TLC(석유 에테르:에틸 아세테이트=0:1, RF=0.53)에 따른 컬럼(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 3:1 내지 0:1)으로 정제하여 화합물 9-3을 얻었다. 1H NMR (400 MHz,CDCl3) δ ppm 7.16 (d, J = 7.60 Hz, 4 H) 6.84 (d, J = 8.40 Hz, 4 H) 6.66 (s, 1 H) 5.26 (d, J = 10.42 Hz, 1 H), 4.85 - 4.68 (m, 2 H) 4.39 - 4.20 (m, 4 H) 4.09 - 3.90 (m, 2 H) 3.89 - 3.67 (m, 7 H) 3.66 - 3.42 (m, 2 H) 3.40 - 3.16 (m, 2 H) 3.14 - 2.75 (m, 4 H) 2.34 (d, J = 4.00 Hz, 3 H) 1.49 (s, 9 H) 1.43 - 1.37 (m, 2 H) 1.19 (m, 2 H), LCMS m/z =828.2[M+H]+
단계 4: 화합물 9-4의 합성
건조한 반응 플라스크에 톨루엔(6 mL)을 첨가한 다음, 화합물 9-3A(289.51 mg, 2.17 mmol, 28.68 μL, 4 eq)를 첨가하였다. 반응계를 0℃로 냉각시켰다. 나트륨 3급-부톡사이드(208.93 mg, 2.17 mmol, 4 eq)를 첨가하고, 반응계를 0 내지 5℃에서 10분 동안 반응시켰다. 톨루엔(2 mL) 중 화합물 9-3(0.45 g, 543.53 μmol, 1 eq)의 용액을 첨가하고, 반응계를 0 내지 5℃에서 0.5시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 포화 염화암모늄(20 mL × 2)으로 세척한 후, 포화 식염수(20 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 화합물 9-4를 얻었으며, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 바로 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.15 (d, J = 7.60 Hz, 4 H) 6.84 (d, J = 8.40 Hz, 4 H) 6.62 (d, J = 7.20 Hz, 1 H) 5.29 - 5.04 (m, 3 H) 4.29 (d, J = 14.80 Hz, 4 H) 3.80 (s, 6 H) 3.44 - 3.34 (m, 2 H) 3.30 - 3.21 (m, 1 H) 3.06 - 2.79 (m, 2 H) 2.68 - 2.52 (m, 5 H) 2.47 (s, 3 H) 2.42 - 2.27 (m, 5 H) 2.25 - 2.08 (m, 5 H) 1.49 (s, 9 H) 1.38 (d, J = 6.40 Hz, 2 H) 1.14 (d, J = 6.80 Hz, 1 H). LCMS m/z =897.3[M+H]+
단계 5: 화합물 9-5의 합성
건조한 반응 플라스크에 디클로로메탄(15 mL)을 첨가한 다음, 화합물 9-4(0.6 g, 668.91 μmol, 1 eq) 및 트리플루오로아세트산(3 mL)을 첨가하였다. 반응계를 15℃에서 2.5시간 동안 반응시켰다. 추가의 트리플루오로아세트산(0.5 mL)을 첨가하고, 상기 혼합물을 추가로 1시간 동안 반응시켰다. 추가의 트리플루오로아세트산(0.5 mL)을 첨가하고, 상기 혼합물을 추가로 1시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 포화 탄산수소나트륨 용액(80 mL)에 서서히 첨가하고, 디클로로메탄(30 mL × 2)으로 추출하였다. 유기상을 합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 조 생성물을 얻었고, 이를 TLC(디클로로메탄:메탄올 = 5:1)에 따른 컬럼(디클로로메탄:메탄올 = 100:0-1:1)으로 정제하여 화합물 9-5를 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 6.59 (d, J = 8.40 Hz, 1 H) 5.29 - 5.07 (m, 2 H) 4.75 - 4.67 (m, 1 H) 4.52 - 4.38 (m, 1 H) 4.32 - 4.16 (m, 1 H) 4.08 - 3.87 (m, 3 H) 3.66 - 3.26 (m, 4 H) 3.25 - 2.8 (m, 6 H) 2.72 - 2.59 (m, 1 H) 2.54 (d, J = 2.00 Hz, 3 H) 2.44 - 2.26 (m, 3H) 2.11 - 1.86 (m, 1 H) 1.52 (d, J = 6.80 Hz, 1 H) 1.26 (d, J = 6.80 Hz, 2 H). LCMS m/z =557.3[M+H]+.
단계 6: 화합물 9A 및 9B의 합성
건조한 반응 플라스크에 디클로로메탄(5 mL)을 첨가한 다음, 아크릴산(21.75 mg, 301.85 μmol, 20.72 μL, 1.2 eq) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(97.53 mg, 754.62 μmol, 131.44 μL, 3 eq)을 첨가했다. 반응계를 -60℃로 냉각시키고, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N,N-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(114.77 mg, 301.85 μmol, 1.2 eq)를 첨가하였다. 반응계를 -60℃에서 10분 동안 반응시켰다. 화합물 9-5(0.14 g, 251.54 μmol, 1 eq)를 첨가하고, 상기 화합물을 추가로 1시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 디클로로메탄(10 mL)으로 희석하고, 포화 염화암모늄 용액(10 mL × 2)으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하였다. 생성물을 고성능 액체 크로마토그래피 컬럼{(컬럼: Phenomenex luna C18 80×40 mm×3 μm; 이동상: [H2O(0.04%HCl)-ACN]; 아세토니트릴%: 20%-32%, 7분]}으로 정제하고, 동결건조한 후 SFC{(컬럼: DAICEL CHIRALCEL OD(250 mm×30 mm, 10 μm); 이동상: [0.1%NH3H2O MEOH]; MeOH%: 60%-60%, 9분)에 따라 키랄 분리를 거쳐 다음 화합물들을 얻었다: 화합물 9A((키랄 컬럼에서 피크까지 도달하는 시간: 1.594분), SFC 분석 방법(컬럼: Chiralcel OD-3, 50 × 4.6 mm I.D., 3μm; 이동상: A(CO2) 및 B(메탄올, 0.05% 디이소프로필아민 함유), 구배: B%=5-50%, 3분, 유속: 3.4 mL/분, 파장: 220 nm, 압력: 1800 psi, 광학 순도: 100%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 6.71 - 6.49 (m, 2 H) 6.42 - 6.28 (m, 1 H) 5.77 (d, J = 10.80 Hz, 1 H) 5.50 to 5.04 (m, 3 H) 4.71 (s, 3 H) 4.49 - 4.22 (m, 2 H) 4.03 (s, 3 H) 3.78 (d, J = 9.20 Hz, 1 H) 3.64 (s, 1 H) 3.51 - 3.17 (m, 4 H) 3.14 - 3.00 (m, 4 H) 2.64 - 2.48 (m, 1 H) 2.40 (d, J = 4.00 Hz, 4 H) 1.16 (d, J = 10.40 Hz, 3 H). LCMS m/z =611.3[M+H]+) 및 화합물 9B((키랄 컬럼에서 피크까지 도달하는 시간: 1.903분), SFC 분석 방법(컬럼: Chiralcel OD-3, 50 × 4.6 mm I.D., 3μm; 이동상: A(CO2) 및 B(메탄올, 0.05% 디이소프로필아민 함유); 구배: B%=5-50%, 3분; 유속: 3.4 mL/분; 파장: 220 nm; 압력: 1800 psi, 광학 순도: 100%). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 6.69 - 6.54 (m, 2 H) 6.42 - 6.30 (m, 1 H) 5.77 (d, J = 10.80 Hz, 1 H) 5.47 - 5.01 (m, 3 H) 4.71 (s, 3 H) 4.49 - 4.23 (m, 2 H) 4.03 (s, 3 H) 3.94 - 3.72 (m, 1 H) 3.64 (s, 1 H) 3.53 - 3.22 (m, 4 H) 3.14 - 3.01 (m, 4 H) 2.62 - 2.49 (m, 1 H) 2.40 (d, J = 4.00 Hz, 4 H) 1.16 (d, J = 10.40 Hz, 3 H). LCMS m/z =611.3[M+H]+).
실시예 10
Figure pct00102
단계 1: 화합물 10-1A 및 10-1B의 합성
화합물 8-9(9 g, 15.27 mmol, 1 eq)를 에탄올(100 mL) 및 물(20 mL)에 용해시킨 다음, 2-메틸-2-티오이소우레아 설페이트(42.49 g, 152.65 mmol, 10 eq) 및 탄산수소나트륨(25.65 g, 305.31 mmol, 11.87 mL, 20 eq)을 첨가하였다. 상기 반응 용액을 30℃에서 4시간 동안 교반하였다. 상기 반응 용액에 포화 염화암모늄 용액 100 mL를 첨가하였다. 상기 혼합물을 에틸 아세테이트(100 mL × 2)로 추출하고, 포화 식염수 80 mL로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 농축하여 조 생성물을 얻었고, 이를 TLC(석유 에테르:에틸 아세테이트= 0:1)에 따른 컬럼(석유 에테르:에틸 아세테이트= 10%-20%-30%)으로 정제한 다음, SFC(컬럼: DAICEL CHIRALPAK AD (250 mm×50 mm, 10 μm); 이동상: [0.1%NH3.H2O EtOH]; EtOH%: 45%-45%, 6.3분)로 분리하여 화합물 10-1A(피크 도달 시간:1.665) 및 화합물 10-1B(피크 도달 시간: 2.446)를 얻었다.
단계 2: 화합물 10-2의 합성
화합물 10-1A(2 g, 3.18 mmol, 1 eq)를 디클로로메탄(20 mL)에 용해시키고, N,N-디이소프로필에틸아민(1.23 g, 9.53 mmol, 1.66 mL, 3 eq)을 첨가하였다. 반응계를 0 내지 10℃로 냉각시키고, 트리플릭 무수물(1.34 g, 4.76 mmol, 786.11 μL, 1.5 eq)을 서서히 첨가하였다. 반응계를 이 온도에서 15분간 반응시켰다. 포화 염화암모늄 수용액(15 mL)을 반응계에 붓고, 층들을 분리하였다. 수성상을 디클로로메탄(15 mL × 2)으로 추출하였다. 유기상을 합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 TLC(PE/EtOAc=10/1)에 따른 컬럼 크로마토그래피(PE/EtOAc=100/1 - 0/1)로 정제하여 화합물 10-2를 얻었다. LCMS m/z =762.2[M+H]+.
단계 3: 화합물 10-3의 합성
건조한 반응 플라스크에 N,N-디메틸포름아미드(2 mL)를 첨가한 다음, 화합물 10-2(0.16 g, 210.05 μmol, 1 eq), N,N-디이소프로필에틸아민(81.44 mg, 630.15 μmol, 109.76 μL, 3 eq) 및 화합물 10-2A(50.48 mg, 252.06 μmol, 1.2 eq)를 첨가하였다. 반응계를 질소 하에 50℃에서 1시간 동안 반응시켰다. TLC(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 3:1)에서는 원료가 사라지고, 새로운 반점이 나타났음을 보여주었다. 상기 반응 용액에 메틸 3급-부틸 에테르(10 mL)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 포화 염화암모늄 용액(20 mL × 2)에 이어 포화 식염수(10 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 화합물 10-3을 얻었으며, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 바로 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.12 (d, J = 8.80 Hz, 4 H) 6.81 (d, J = 8.80 Hz, 4 H) 6.60 (d, J = 8.80 Hz, 1 H) 5.19 (d, J = 8.00 Hz, 1 H) 4.72 (s, 2 H) 4.37 - 4.22 (m, 4 H) 3.88 (d, J = 13.2 Hz, 1 H) 3.77 (s, 6 H) 3.71 - 3.56 (dd, J = 12.80, 13.20 Hz, 2 H) 3.40 (dd, J = 12.40, 12.40 Hz, 1 H) 3.31 (m, 2 H) 3.20 (s, 1 H) 3.03 - 2.91 (m, 2 H) 2.50 (s, 3 H) 2.35 - 2.25 (m, 3 H) 1.46 (s, 9 H) 1.13 (d, J = 6.80 Hz, 3 H).
단계 4: 화합물 10-4의 합성
건조한 반응 플라스크에 디클로로메탄(5 mL)을 첨가하고, 화합물 10-3(0.21 g, 258.64 μmol, 1 eq) 및 m-클로로퍼옥시벤조산(66.95 mg, 310.37 μmol, 80% 순도, 1.2 eq)을 첨가하였다. 반응계를 15℃에서 0.5시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액에 티오황산나트륨 용액(15 mL, 10%)을 첨가하였다. 전분-KI 종이에 의해 상기 혼합물이 음성을 나타내었다. 이어서, 상기 혼합물을 디클로로메탄(15 mL)으로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 조 생성물을 얻었고, 이를 TLC(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 0:1)에 따른 컬럼(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 10:1 내지 0:1)으로 정제하여 화합물 10-4 및 10-4A를 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.20 (s, 4 H), 6.84 (d, J = 8.80 Hz, 4 H), 6.79 - 6.62(s,1 H), 5.24 (d, J = 10.80 Hz, 1 H), 4.87 - 4.74 (m, 2 H), 4.36 (s, 4 H), 3.99 - 3.83 (m, 3 H), 3.83 - 3.71 (m, 7 H), 3.62 - 3.43 (m, 2 H), 3.40 - 3.27 (m, 3 H), 3.22 - 3.06 (m, 2 H), 2.92 (d, J = 5.20 Hz, 1 H), 2.34 (s, 3 H),1.49 (s, 9 H), 1.16 (d, J = 6.80 Hz, 3 H). LCMS m/z =828.2M+H]+.
단계 3: 화합물 10-5의 합성
건조한 반응 플라스크에 톨루엔(1 mL)을 첨가하고, 화합물 1-11A(38.95 mg, 338.19 μmol, 4 eq)를 첨가하였다. 반응계를 0℃로 냉각시켰다. 나트륨 3급-부톡사이드(32.50 mg, 338.19 μmol, 4 eq)를 첨가하고, 상기 혼합물을 10분 동안 반응시켰다. 톨루엔(1 mL) 중 화합물 10-4(0.07 g, 84.55 μmol, 1 eq) 및 10-4A(71.35 mg, 84.55 μmol, 1 eq)의 혼합물을 첨가하고, 상기 혼합물을 0.5시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액에 에틸 아세테이트 10 mL를 첨가한 후, 상기 혼합물을 포화 염화암모늄 용액 및 포화 식염수 10 mL로 각각 세척하였다. 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 화합물 10-5를 얻었으며, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 바로 사용하였다. LCMS m/z =879.3[M+H]+.
단계 4: 화합물 10-6의 합성
건조한 반응 플라스크에 디클로로메탄(5 mL)을 첨가하고, 화합물 10-5(0.16 g, 182.03 μmol, 1 eq) 및 트리플루오로아세트산(1.25 mL)을 첨가하였다. 반응계를 18℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 추가의 트리플루오로아세트산(0.25 mL)을 첨가하고, 상기 혼합물을 추가로 1.5시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액에 물(5mL)을 첨가하였다. 수성상을 수집하고, 포화 탄산수소나트륨 용액을 사용하여 pH를 8로 조정하고, 디클로로메탄(20 mL × 2)으로 추출하였다. 유기상을 합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 화합물 10-6을 얻었으며, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 바로 사용하였다. LCMS m/z =539.2[M+H]+.
단계 5: 화합물 10의 합성
건조한 반응 플라스크에 디클로로메탄(5 mL)을 첨가한 다음, 아크릴산(5.54 mg, 76.87 μmol, 5.28 μL, 2 eq), 화합물 10-6(23 mg, 38.43 μmol, 90% 순도, 1 eq) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(14.90 mg, 115.30 μmol, 20.08 μL, 3 eq)을 첨가하였다. 반응계를 -60℃로 냉각시키고, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N,N-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(17.54 mg, 46.12 μmol, 1.2 eq)를 첨가하였다. 이어서, 상기 혼합물을 0.5시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 처리를 위해 화합물 10-6의 배치(19.49 mg)와 합하였다. 상기 반응 용액에 물(5 ml)을 첨가하고, 층들을 분리하였다. 유기상을 감압 하에 농축시키고, 고성능 액체 크로마토그래피 컬럼{컬럼: Phenomenex luna C18 80×40 mm×3 μm; [H2O(0.04%HCl)-ACN]; 아세토니트릴%: 20%-40%, 7분}에서 분리하여 화합물 10을 얻었다. LCMS m/z =593.4[M+H]+.
실시예 11
Figure pct00103
Figure pct00104
단계 1: 화합물 11-2의 합성
건조한 반응 플라스크에 N,N-디메틸포름아미드(2 mL)를 첨가한 다음, 화합물 10-2(0.16 g, 210.05 μmol, 1 eq), N,N-디이소프로필에틸아민(81.44 mg, 630.15 μmol, 109.76 μmol, 3 eq) 및 화합물 11-1(54.02 mg, 252.06 μmol, 1.2 eq)을 첨가하였다. 반응계를 질소 하에 50℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 상기 혼합물을 처리를 위해 화합물 10-2의 배치(50 mg)와 합하였다. 상기 반응 용액에 메틸 3급-부틸 에테르(10 mL)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 포화 염화암모늄 용액(10 mL × 2)에 이어 포화 식염수(10 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 화합물 11-2를 얻었으며, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 바로 사용하였다. 1H NMR (400 MHz,CDCl3) δ ppm 7.14 (d, J = 8.80 Hz, 4 H), 6.84 (d, J = 8.40 Hz, 4 H), 6.62 (d, J = 8.80 Hz, 1 H), 5.19 (br d, J = 8.00 Hz, 1 H), 4.76 (s, 2 H), 4.37 - 4.22 (m, 5 H), 3.80 (s, 7 H),3.58 - 3.35 (m, 3 H), 3.22 (s, 2 H), 3.04 - 2.93 (m, 1 H), 2.52 (s, 3 H), 2.38 - 2.30 (m, 3 H), 1.49 (s, 9 H), 1.34 (dd, J = 6.80, 6.40 Hz, 6 H).
단계 2: 화합물 11-3의 합성
건조한 반응 플라스크에 디클로로메탄(5 mL)을 첨가하고, 화합물 11-2(0.20 g, 242.14 μmol, 1 eq) 및 m-클로로퍼옥시벤조산(62.68 mg, 290.57 μmol, 80% 순도, 1.2 eq)을 첨가하였다. 반응계를 15℃에서 0.5시간 동안 반응시켰다. 상기 혼합물을 처리를 위해 화합물 11-2의 배치(50 mg)와 합하였다. 상기 반응 용액에 티오황산나트륨 용액(15 mL, 10%)을 첨가하고, 전분-KI 종이에 의해 상기 혼합물이 음성을 나타내었다. 상기 혼합물을 디클로로메탄(10 mL)으로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 조 생성물을 얻었고, 이를 TLC(석유 에테르:에틸 아세테이트= 0:1)에 따른 컬럼(석유 에테르:에틸 아세테이트= 10:1 내지 0:1)으로 정제하여 화합물 11-3과 화합물 11-3A의 혼합물을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.17 (d, J = 6.40 Hz, 4 H) 6.84 (d, J = 8.40 Hz, 4 H) 6.67 (s, 1 H) 5.23 (d, J = 11.20 Hz, 1 H) 4.90 - 4.74 (m, 2 H) 4.32 (d, J = 12.00 Hz, 4 H) 3.84 - 3.75 (m, 9 H) 3.68 - 3.39 (m, 3 H) 3.31 - 3.10 (m, 3 H) 2.89 (d, J=10.40 Hz, 2 H) 2.34 (d, J=3.60 Hz, 3 H) 1.49 (s, 9 H) 1.42 - 1.29 (m, 6 H). LCMS m/z =842.2[M+H]+.
단계 3: 화합물 11-4의 합성
건조한 반응 플라스크에 톨루엔(1 mL)을 첨가하고, 화합물 1-11A(46.51 mg, 403.82 μmol, 4 eq)를 첨가하였다. 반응계를 0℃로 냉각시켰다. 나트륨 3급-부톡사이드(38.81 mg, 403.82 μmol, 4 eq)를 첨가하고, 상기 혼합물을 10분 동안 반응시켰다. 톨루엔(1 mL) 중 화합물 11-3(0.085 g, 100.96 μmol, 1 eq) 및 화합물 11-3A(86.62 mg, 100.96 μmol, 1 eq)의 혼합물을 첨가하고, 반응계를 0.5시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 처리를 위해 화합물 11-3의 배치(10 mg)와 합하였다. 상기 반응 용액에 에틸 아세테이트 10 mL를 첨가한 후, 포화 염화암모늄 용액 및 포화 식염수 10 mL로 각각 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 화합물 11-4를 얻었으며, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 바로 사용하였다. LCMS m/z =893.4[M+H]+.
단계 4: 화합물 11-5의 합성
건조한 반응 플라스크에 디클로로메탄(5 mL)을 첨가하고, 화합물 11-4(0.13 g, 145.57 μmol, 1 eq) 및 트리플루오로아세트산(1.25 mL)을 첨가하였다. 반응계를 18℃에서 1.5시간 동안 반응시켰다. 추가의 트리플루오로아세트산(0.25 mL)을 첨가하고, 상기 혼합물을 추가로 1.5시간 동안 반응시켰다. 상기 혼합물을 처리를 위해 화합물 11-4의 배치(15 mg)와 합하였다. 상기 반응 용액에 물(5 mL)을 첨가하였다. 수성상을 수집하고, 포화 탄산수소나트륨 용액을 사용하여 pH를 8로 조정하고, 디클로로메탄(20 mL × 2)으로 추출하였다. 유기상을 합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 화합물 11-5를 얻었으며, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 바로 사용하였다. LCMS m/z =553.2[M+H]+.
단계 5: 화합물 11의 합성
건조한 반응 플라스크에 디클로로메탄(5 mL)을 첨가한 다음, 아크릴산(14.08 mg, 195.44 μmol, 13.41 μmol, 2 eq), 화합물 11-5(60.00 mg, 97.72 μmol, 90% 순도, 1 eq) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(37.89 mg, 293.16 μ mol, 51.06 μL, 3 eq)을 첨가하였다. 반응계를 -60℃로 냉각시켰다. O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N,N-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(44.59 mg, 117.26 μmol, 1.2 당량)를 첨가하였다. 이어서, 상기 혼합물을 0.5시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 처리를 위해 화합물 11-5의 배치(20 mg)와 합하였다. 상기 반응 용액에 물(5 ml)을 첨가하였다. 층들을 분리하였다. 유기상을 감압 하에 농축시키고, 고성능 액체 크로마토그래피 컬럼{컬럼: Phenomenex luna C18 80×40 mm×3 μm; 이동상: [H2O(0.04%HCl)-ACN]; 아세토니트릴%: 15%-40%, 7분}으로 정제하여 화합물 11을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 6.92 - 6.75 (m, 1H), 6.74 - 6.70 (m, 1H), 6.33 - 6.24 (m, 1H), 5.88 - 5.77 (m, 1H), 5.28 - 5.18 (m, 1H), 4.82 - 4.63 (m, 2H), 4.56 - 4.43 (m, 1H), 4.42 - 4.23 (m, 1H), 4.01 - 3.81 (m, 2H), 3.79 - 3.59 (m, 2H), 3.57 - 3.41 (m, 1H), 3.32 - 3.20 (m, 5H), 3.17 - 3.02 (m, 3H), 2.84 (m, 2H), 2.51 - 2.35 (m, 3H), 2.31 - 1.99 (m, 3H), 1.49 - 1.29 (m, 6H). LCMS m/z =607.5[M+H]+.
실시예 12
Figure pct00105
단계 1: 화합물 12-2의 합성
건조한 반응 플라스크에 N,N-디메틸포름아미드(2 mL)를 첨가한 다음, 화합물 10-2(0.2 g, 262.56 μmol, 1 eq), N,N-디이소프로필에틸아민(101.80 mg, 787.69 μmol, 137.20 μL, 3 eq) 및 화합물 9-1A(63.10 mg, 315.07 μmol, 1.2 eq)를 첨가하였다. 반응계를 질소 하에 50℃에서 30분 동안 반응시켰다. 추가로 화합물 9-1A(30 mg, 0.6 eq)를 첨가하고, 상기 혼합물을 추가로 30분 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액에 포화 염화암모늄 용액(10 mL)을 첨가하고, 상기 혼합물을 메틸 3급-부틸 에테르(5 mL)로 추출하였다. 유기상 용액을 포화 염화암모늄 용액(10 mL) 및 포화 식염수(10 mL)로 차례로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 화합물 12-2를 얻었으며, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 바로 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.14 (d, J = 8.80 Hz, 4 H) 6.84 (d, J = 8.40 Hz, 4 H) 6.62 (d, J = 8.80 Hz, 1 H) 5.21 (d, J = 7.20 Hz, 1 H) 4.78 - 4.63 (m, 2 H) 4.38 - 4.15 (m, 4 H) 4.00 - 3.82 (m, 2 H) 3.80 (s, 6 H) 3.73 - 3.60 (m, 1 H) 3.48 - 3.33 (m, 1 H) 3.22 (s, 2 H) 3.16 - 2.80 (m, 3 H) 2.51 (s, 3 H) 2.38 - 2.30 (m, 3 H) 1.49 (s, 9 H) 1.38 (d, J = 6.80 Hz, 3 H). LCMS m/z =812.3[M+H]+.
단계 2: 화합물 12-3의 합성
건조한 반응 플라스크에 디클로로메탄(5 mL)을 첨가한 다음, 화합물 12-2(0.18 g, 221.70 μmol, 1 eq) 및 m-클로로퍼옥시벤조산(57.39 mg, 266.03 μmol, 80% 순도, 1.2 eq)을 첨가하였다. 반응계를 15℃에서 0.5시간 동안 반응시켰다. 상기 혼합물을 처리를 위해 화합물 12-2의 배치(30 mg)와 합하였다. 상기 반응 용액에 티오황산나트륨 용액(10 mL, 10%)을 첨가하고, 전분-KI 종이에 의해 혼합물이 음성을 나타내었다. 상기 혼합물을 디클로로메탄(3 mL)으로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 조 생성물을 얻었고, 이를 TLC(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 0:1)에 따른 컬럼(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 10:1 내지 0:1)으로 정제하여 화합물 12-3을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.17 (br s, 4 H) 6.84 (br d, J = 8.40 Hz, 4 H) 6.67 (br s, 1 H) 5.25 (br d, J = 9.60 Hz, 1 H) 4.89 - 4.64 (m, 2 H) 4.32 (br d, J = 10.40 Hz, 4 H) 4.09 - 3.86 (m, 3 H) 3.84 - 3.68 (m, 7 H) 3.64 - 3.51 (m, 1 H) 3.37 - 2.97 (m, 4 H) 2.95 - 2.81 (m, 3 H) 2.34 (br d, J = 3.60 Hz, 3 H) 1.49 (s, 9 H) 1.41 (br s, 3 H). LCMS m/z =828.2[M+H]+.
단계 3: 화합물 12-4의 합성
건조한 반응 플라스크에 톨루엔(1 mL)을 첨가한 다음, 화합물 12-3A(66.52 mg, 471.06 μmol, 3 eq)를 첨가하였다. 반응계를 0℃로 냉각시킨 다음, 3급-부탄올 나트륨(45.27 mg, 471.06 μmol, 3 eq)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 10분 동안 교반한 다음, 톨루엔(0.5 mL) 중 화합물 12-3(0.13 g, 157.02 μmol, 1 eq)의 용액을 첨가하였다. 상기 혼합물을 0.5시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 처리를 위해 화합물 12-3의 배치(20 mg)와 합하였다. 상기 반응 용액에 에틸 아세테이트 10 mL를 첨가하였다. 이어서, 상기 혼합물을 포화 염화암모늄 용액 및 포화 식염수 10 mL로 각각 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 화합물 12-4를 얻었으며, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 바로 사용하였다. LCMS m/z =905.3[M+H]+.
단계 4: 화합물 12-5의 합성
건조한 반응 플라스크에 디클로로메탄(6 mL)을 첨가한 다음, 화합물 12-4(0.18 g, 198.89 μmol, 1 eq) 및 트리플루오로아세트산(1.5 mL)을 첨가하였다. 상기 반응계를 18℃에서 3.5시간 동안 교반하였다. 상기 반응 용액에 물(5 mL)을 첨가하였다. 수성상을 수집하고, 포화 탄산수소나트륨 용액을 사용하여 pH를 8로 조정하고, 디클로로메탄(20 mL × 2)으로 추출하였다. 유기상을 합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 농축하여 화합물 12-5를 얻었으며, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 바로 사용하였다. LCMS m/z =565.2[M+H]+.
단계 5: 화합물 12의 합성
건조한 반응 플라스크에 디클로로메탄(5 mL)을 첨가하고, 교반하였다. 아크릴산(11.49 mg, 159.40 μmol, 10.94 μL, 2 eq), 화합물 12-5 (50 mg, 79.70 μmol, 90% 순도, 1 eq) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(30.90 mg, 239.10 μmol, 41.65 μL, 3 eq)을 첨가하였다. 반응계를 -60℃로 냉각시키고, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N,N-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(36.37 mg, 95.64 μmol, 1.2 eq)를 첨가하였다. 이어서, 상기 혼합물을 0.5시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 처리를 위해 화합물 12-5의 배치(20 mg)와 합하였다. 상기 반응 용액에 물(5 ml)을 첨가하였다. 층들을 분리하였다. 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 조 생성물을 얻었고, 이를 고성능 액체 크로마토그래피 컬럼{컬럼: Phenomenex luna C18 80×40 mm×3 μm; 이동상: [H2O(0.04%HCl)-ACN]; 아세토니트릴%: 15%-40%, 7분}으로 정제하여 화합물 12를 얻었다(피크 도달 시간: 1.509). SFC 분석 방법(컬럼: Chiralcel OD-3, 50×4.6 mm I.D., 3μm; 이동상: A(CO2) 및 B(메탄올, 0.05% 디이소프로필아민 함유); 구배: B%=5-50%, 3분; 유속: 3.4 mL/분; 파장: 220 nm; 압력: 1800 psi, 광학 순도: 99.4%. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 6.89 - 6.71 (m, 1H), 6.71 - 6.65 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.32 - 6.19 (m, 1H), 5.84 - 5.75 (m, 1H), 5.26 - 5.15 (m, 1H), 4.68 - 4.60 (m, 1H), 4.52 (s, 2H), 4.50 - 4.45 (m, 1H), 4.39 - 4.32 (m, 1H), 4.27 - 4.16 (m, 1H), 4.15 - 3.89 (m, 2H), 3.76 - 3.61 (m, 2H), 3.60 - 3.32 (m, 2H), 3.28 - 3.13 (m, 3H), 3.09 - 3.00 (m, 1H), 2.96 - 2.85 (m, 1H), 2.38 - 2.32 (m, 3H), 2.32 - 2.24 (m, 2H), 2.24 - 2.12 (m, 4H), 2.12 - 2.03 (m, 2H), 1.42 - 1.31 (m, 3H). LCMS m/z =619.3[M+H]+.
실시예 13
Figure pct00106
단계 1: 화합물 13-2의 합성
건조한 반응 플라스크에 N,N-디메틸포름아미드(4 mL)를 첨가한 다음, 화합물 10-2(220 mg, 288.82 μmol, 1 eq) 및 화합물 13-1(115.69 mg, 577.64 μmol, 2 eq)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 교반한 다음, N,N-디이소프로필에틸아민(111.98 mg, 866.45 μmol, 150.92 μL, 3 eq)을 첨가하였다. 반응계를 50℃로 가열하고, 1시간 동안 교반하였다. 상기 반응 용액을 에틸 아세테이트(30 mL)로 추출하고, 포화 염화암모늄(15 mL)으로 1회, 포화 식염수(15mL)로 1회 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 화합물 13-2의 조 생성물을 얻었고, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 바로 사용하였다. LCMS m/z =812.2[M+H]+.
단계 2: 화합물 13-3의 합성
건조한 반응 플라스크에 디클로로메탄(10 mL)을 첨가하고, 화합물 13-2(200.00 mg, 246.33 μmol, 1 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 교반하고, m-클로로퍼옥시벤조산(60.01 mg, 295.59 μmol, 85% 순도, 1.2 eq)을 첨가하였다. 반응계를 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 상기 반응 용액을 디클로로메탄(20 mL)으로 희석한 다음, 5% 티오황산나트륨(10 mL)으로 1회, 포화 식염수(10 mL)로 1회 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 조 생성물을 얻었고, 이를 TLC(석유 에테르:에틸 아세테이트= 1:1)에 따른 컬럼(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 90:10 내지 50:50)으로 정제하여 화합물 13-3을 얻었다. LCMS m/z =828.3[M+H]+.
단계 3: 화합물 13-4의 합성
건조한 반응 플라스크에 톨루엔(5 mL)을 첨가한 다음, 화합물 1-11A(112.68 mg, 978.35 μmol, 4.5 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 교반하였다. 이어서, 나트륨 3급-부톡사이드(94.02 mg, 978.35 μmol, 4.5 eq)를 첨가하고, 반응계를 0℃로 냉각시키고, 10분 동안 교반하였다. 이어서, 화합물 13-3(180 mg, 217.41 μmol, 1 eq)을 첨가하고, 반응계를 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 처리를 위해 화합물 13-3의 배치(60 mg)와 합하였다. 상기 반응 용액을 에틸 아세테이트(30 mL)로 추출하였다. 유기상 용액을 포화 염화암모늄 용액(10 mL)으로 1회, 포화 식염수(10 mL)로 1회 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 화합물 13-4의 조 생성물을 얻었고, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 바로 사용하였다. LCMS m/z =879.3[M+H]+.
단계 4: 화합물 13-5의 합성
건조한 반응 플라스크에 디클로로메탄(5 mL)을 첨가한 다음, 화합물 13-4(260 mg, 295.79 μmol, 1 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 교반하였다. 아세트산칼륨(2.82 g, 24.70 mmol, 1.83 mL, 83.50 eq)을 첨가하고, 반응계를 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 상기 반응 용액에 물(30mL)을 첨가하고, 층들을 분리하였다. 수성상을 포화 탄산수소나트륨을 사용하여 pH를 9로 조정한 다음, 에틸 아세테이트(15 mL × 2)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 식염수(10 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 화합물 13-5의 조 생성물을 얻었고, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 바로 사용하였다. LCMS m/z =539.2[M+H]+.
단계 5: 화합물 13의 합성
건조한 반응 플라스크에 디클로로메탄(5 mL)을 첨가한 다음, 아크릴산(10.84 mg, 150.40 μmol, 10.32 μL, 1 eq), 화합물 13-5(90 mg, 150.40 μmol, 90% 순도, 1 eq) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(58.31 mg, 451.19 μmol, 78.59 μL, 3 eq)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 교반하였다. 반응계를 -60℃로 냉각시키고, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N,N-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(68.62 mg, 180.47 μmol, 1.2 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 0.5시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 처리를 위해 화합물 13-5의 배치(30 mg)와 합하였다. 상기 반응 용액에 물(5mL)을 첨가하고, 층들을 분리하였다. 유기상 용액을 바로 감압 하에 농축하여 조 생성물을 얻었고, 이를 고성능 액체 크로마토그래피 컬럼{컬럼: Welch Xtimate C18 100×25 mm×3 μm; 이동상: [H2O(0.05%HCl)-ACN]; 아세토니트릴%: 15%-45%, 8분}으로 정제하여 화합물 13을 얻었다(피크 도달 시간: 1.683). SFC 분석 방법(컬럼: Chiralcel OD-3, 50×4.6mm I.D., 3μm; 이동상: A(CO2) 및 B(메탄올, 0.05% 디이소프로필아민 함유); 구배: B%=5-50%, 3분; 유속: 3.4 mL/분; 파장: 220 nm; 압력: 1800 psi, 광학 순도: 95.48%). 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 6.87 - 6.73 (m, 1H), 6.68 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.25 (dd, J = 3.8, 16.6 Hz, 1H), 5.78 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 5.20 (dd, J = 4.0, 11.2 Hz, 1H), 4.83 - 4.75 (m, 2H), 4.74 - 4.61 (m, 2H), 4.60 - 4.45 (m, 2H), 4.32 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 4.17 - 3.92 (m, 1H), 3.90 - 3.80 (m, 1H), 3.71 - 3.57 (m, 2H), 3.55 - 3.42 (m, 1H), 3.39 - 3.32 (m, 1H), 3.27 - 3.18 (m, 2H), 3.04 (s, 3H), 2.99 - 2.85 (m, 2H), 2.41 - 2.30 (m, 4H), 2.22 - 1.95 (m, 3H), 1.11 (d, J = 6.6 Hz, 3H), LCMS m/z =593.3[M+H]+.
실시예 14
Figure pct00107
단계 1: 화합물 14-2의 합성
건조한 반응 플라스크에 N,N-디메틸포름아미드(4 mL)를 첨가한 다음, 화합물 10-2(220 mg, 288.82 μmol, 1 eq), 화합물 14-1(123.79 mg, 577.64 μmol, 2 eq) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(111.98 mg, 866.45 μmol, 150.92 μL, 3 eq)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 교반하였다. 반응계를 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 상기 반응 용액을 에틸 아세테이트(30 mL)로 추출하였다. 유기상 용액을 수집하고, 포화 염화암모늄 용액(15 mL)으로 1회, 포화 식염수(15 mL)로 1회 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 이어서, 여액을 감압 하에 농축하여 화합물 14-2의 조 생성물을 얻었고, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 바로 사용하였다. LCMS m/z =826.3[M+H]+.
단계 2: 화합물 14-3의 합성
건조한 반응 플라스크에 디클로로메탄(10 mL)을 첨가한 다음, 화합물 14-2(350.18 mg, 423.97 μmol, 1 eq)를 첨가하고, 상기 혼합물을 교반하였다. m-클로로퍼옥시벤조산(109.75 mg, 508.77 μmol, 80% 순도, 1.2 eq)을 첨가하고, 반응계를 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 더 극성인 주요 스팟(spot)이 감지되었다. 상기 반응 용액을 디클로로메탄(10 mL)으로 희석한 후, 5% 티오황산나트륨(10 mL)으로 1회, 포화 식염수(10 mL)로 1회 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 TLC(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 0:1)에 따른 컬럼(석유 에테르:에틸 아세테이트 = 90:10 내지 50:50)으로 정제하여 화합물 14-3을 얻었다. LCMS m/z =842.3[M+H]+.
단계 3: 화합물 14-4의 합성
건조한 반응 플라스크에 톨루엔(5 mL)을 첨가한 다음, 화합물 1-11A(98.73 mg, 857.24 μmol, 4.5 eq)를 첨가하고, 교반하였다. 이어서, 나트륨 3급-부톡사이드(82.38 mg, 857.24 μmol, 4.5 eq)를 첨가하고, 반응계를 0℃로 냉각시키고, 10분 동안 교반하였다. 톨루엔(2 mL) 중 화합물 14-3(160.39 mg, 190.50 μmol, 1 eq)의 용액을 첨가하고, 반응계를 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 처리를 위해 화합물 14-3의 배치(50 mg)와 합하였다. 상기 반응 용액을 에틸 아세테이트(30 mL)로 추출하였다. 유기상 용액을 수집하고, 포화 염화암모늄 용액(10 mL)으로 1회, 포화 식염수(10 mL)로 1회 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 화합물 14-4의 조 생성물을 얻었고, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 바로 사용하였다. LCMS m/z =893.4[M+H]+.
단계 4: 화합물 14-5의 합성
건조한 반응 플라스크에 디클로로메탄(5 mL)을 첨가한 다음, 화합물 14-4(260 mg, 291.15 μmol, 1 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 교반하였다. 트리플루오로아세트산(2.77 g, 24.31 mmol, 1.8 mL, 83.50 eq)을 첨가하고, 반응계를 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 상기 반응 용액을 디클로로메탄(20 mL)으로 희석한 다음, 물(20 mL)을 첨가하였다. 층들을 분리하였다. 수성상을 포화 탄산수소나트륨을 사용하여 pH를 8로 조정한 다음, 에틸 아세테이트(20 mL × 2)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 식염수(10 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 화합물 14-5의 조 생성물을 얻었고, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 바로 사용하였다. LCMS m/z =553.2[M+H]+.
단계 5: 화합물 14의 합성
건조한 반응 플라스크에 디클로로메탄(5 mL)을 첨가한 다음, 아크릴산(10.56 mg, 146.58 μmol, 10.06 μL, 1 eq), 화합물 14-5(90 mg, 146.58 μmol, 90% 순도, 1 eq) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(56.83 mg, 439.73 μmol, 76.59 μL, 3 eq)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 교반하고, 반응계를 -60℃로 냉각시켰다. O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N,N-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(66.88 mg, 175.89 μmol, 1.2 eq)를 첨가하였다. 이어서, 상기 혼합물을 0.5시간 동안 교반하였다. 물(5 mL)을 첨가하여 반응을 켄칭하고, 층들을 분리하였다. 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 고성능 액체 크로마토그래피 컬럼{컬럼: Welch Xtimate C18 100×25 mm×3μm; 이동상: [H2O(0.05%HCl)-ACN]; 아세토니트릴%: 15%-45%, 8분}으로 정제하여 화합물 14를 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3)6.69 - 6.62 (m, 1H), 6.62 - 6.48 (m, 1H), 6.47 - 6.34 (m, 1H), 5.91 - 5.76 (m, 1H), 5.34 (s, 1H), 5.25 - 5.14 (m, 1H), 5.10 - 4.99 (m, 1H), 4.86 - 4.64 (m, 2H), 4.62 - 4.30 (m, 2H), 4.21 - 4.11 (m, 1H), 4.06 - 3.93 (m, 2H), 3.90 - 3.73 (m, 2H), 3.71 - 3.59 (m, 1H), 3.57 - 3.49 (m, 3H), 3.47 - 3.33 (m, 1H), 3.28 - 3.15 (m, 2H), 3.09 - 2.92 (m, 1H), 2.50 - 2.35 (m, 4H), 2.26 - 2.09 (m, 2H), 1.43 - 1.32 (m, 4H), 1.31 - 1.25 (m, 2H), LCMS m/z =607.4[M+H]+.
실시예 15
Figure pct00108
단계 1: 화합물 15-2의 합성
건조한 반응 플라스크에 N,N-디메틸포름아미드(3 mL)를 첨가하고, 화합물 10-2(200 mg, 262.56 μmol, 1 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 교반하였다. N,N-디이소프로필에틸아민(101.80 mg, 787.69 μmol, 137.20 μL, 3 eq) 및 화합물 15-1(78.88 mg, 393.84 μmol, 1.5 eq)을 첨가하였다. 반응계를 50℃에서 30분 동안 반응시켰다. 상기 혼합물을 처리를 위해 화합물 10-2의 배치(10 mg)와 합하였다. 상기 반응 용액을 포화 수성 염화암모늄(5 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트(5 mL × 3)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 식염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 화합물 15-2의 조 생성물을 얻었고, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 바로 사용하였다. LCMS m/z =812.2[M+H]+.
단계 2: 화합물 15-3의 합성
건조한 반응 플라스크에 디클로로메탄(3 mL)을 첨가한 다음, 화합물 15-2(0.24 g, 295.59 μmol, 1 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 교반하였다. m-클로로퍼옥시벤조산(66.95 mg, 310.37 μmol, 80% 순도 1.05 eq)을 첨가하고, 반응계를 25℃에서 30분 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 수성 아황산나트륨(5 mL 5%)으로 켄칭하였다. 층들을 분리하였다. 수성상을 디클로로메탄(5 mL × 2)으로 추출하였다. 유기상을 합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 조 생성물을 얻었다. 수성상은 전분-요오드화칼륨 시험지로 검출되었으며, 비산화성을 나타냈다. 상기 수성상을 버렸다. 조 생성물을 TLC(석유 에테르:에틸 아세테이트=1:1, 생성물 Rf=0.51)에 따른 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트= 50:1 내지 0:1)로 정제하여 화합물 15-3을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.17 - 7.06 (m, 4H), 6.83 - 6.72 (m, 4H), 6.71 - 6.60 (m, 1H), 5.24 - 5.10 (m, 1H), 4.87 - 4.64 (m, 2H), 4.44 - 4.17 (m, 4H), 3.98 - 3.81 (m, 2H), 3.78 - 3.69 (m, 6H), 3.67 - 3.43 (m, 2H), 3.20 - 2.97 (m, 4H), 2.88 - 2.78 (m, 3H), 2.32 - 2.20 (m, 3H), 1.47 - 1.37 (m, 9H), 1.32 - 1.23 (m, 3H). LCMS m/z =828.3 M+H]+.
단계 3: 화합물 15-4의 합성
건조한 반응 플라스크에 톨루엔(1 mL)을 첨가하고, 화합물 15-3(180 mg, 217.41 μmol, 1 eq)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 교반하였다. 반응계를 0 내지 5℃로 냉각시키고, 나트륨 3급-부톡사이드(2.68 mg, 652.23 μmol, 3 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 상기 반응 용액에, 화합물 1-11A(75.12 mg, 652.23 μmol, 77.44 μL, 3 eq)를 톨루엔(0.3 mL)에 녹인 용액을 첨가하고, 반응계를 0 내지 5℃에서 30분간 반응시켰다. 상기 반응 용액을 포화 수성 염화암모늄(5 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트(5 mL × 3)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 식염수(5 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 화합물 15-4의 조 생성물을 얻었고, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 바로 사용하였다. LCMS m/z =879.4[M+H]+.
단계 4: 화합물 15-5의 합성
건조한 반응 플라스크에 디클로로메탄(4 mL)을 첨가하고, 화합물 15-4(160 mg, 182.03 μmol, 1 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 교반하였다. 반응계를 0 내지 5℃로 냉각시켰다. 트리플루오로아세트산(1.23 g, 10.81 mmol, 800.00 μL, 59.36 eq)을 첨가하고, 상기 혼합물을 4시간 동안 교반하였다. 상기 반응 용액을 포화 수성 탄산수소나트륨(10 mL)에 첨가하였다. 층들을 분리하였다. 상기 혼합물을 디클로로메탄(5 mL × 2)으로 추출하였다. 유기상을 합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 화합물 15-5의 조 생성물을 얻었고, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 바로 사용하였다. LCMS m/z =539.2[M+H]+.
단계 5: 화합물 15의 합성
건조한 반응 플라스크에 디클로로메탄(10 mL)을 첨가한 다음, 화합물 15-5(0.06 g, 111.40 μmol, 1 eq) 및 아크릴산(16.06 mg, 222.81 μmol, 15.29 μL, 2 eq)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 교반하였다. 이어서, N,N-디이소프로필에틸아민(28.80 mg, 222.81 μmol, 38.81 μL, 2 eq)을 첨가하고, 반응계를 -60℃로 냉각시켰다. O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N,N-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(63.54 mg, 167.11 μmol, 1.5 eq)를 첨가하고, 반응계를 -60℃에서 0.5시간 동안 반응시켰다. 상기 혼합물을 처리를 위해 화합물 15-5의 배치(20 mg)와 합하였다. 상기 반응 용액에 디클로로메탄(5 mL)을 첨가하였다. 상기 반응 용액을 포화 염화암모늄 용액(5 mL × 2)으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 고성능 액체 크로마토그래피 컬럼{컬럼: Phenomenex Luna C18 200×40 mm×10 μm; 이동상: [H2O(0.04%HCl)-ACN]; 아세토니트릴%: 1%-50%, 8분}으로 정제하였다. 분취액에 암모니아수 한 방울을 가한 결과 상기 용액은 알칼리성을 나타냈다. 상기 용액을 농축하여 유기 용매를 제거하고, 동결건조하여 화합물 15를 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 7.24 - 7.07 (m, 2H), 6.80 (dd, J = 10.8, 16.8 Hz, 1H), 6.71 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.24 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.79 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 5.24 - 5.16 (m, 1H), 4.76 (d, J = 13.8 Hz, 3H), 4.57 (dd, J = 7.2, 12.5 Hz, 2H), 4.07 - 3.86 (m, 3H), 3.73 (s, 1H), 3.17 (d, J = 11.4 Hz, 3H), 3.07 (s, 3H), 2.90 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 2.46 - 2.34 (m, 4H), 2.33 - 2.30 (m, 1H), 2.26 - 1.95 (m, 3H), 1.41 (s, 3H). LCMS m/z =593.2[M+H]+.
실시예 16
Figure pct00109
단계 1: 화합물 16-2의 합성
건조한 반응 플라스크에 N,N-디메틸포름아미드(3 mL)를 첨가하고, 화합물 10-2(200 mg, 262.56 μmol, 1 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 교반하였다. N,N-디이소프로필에틸아민(101.80 mg, 787.69 μmol, 137.20 μL, 3 eq) 및 화합물 16-1(78.02 mg, 393.84 μmol, 1.5 eq, 2HCl)을 첨가하고, 반응계를 50℃에서 30분 동안 반응시켰다. 상기 혼합물을 처리를 위해 합하였다. 상기 반응 용액을 포화 수성 염화암모늄(15 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트(10 mL × 3)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 식염수(20 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 화합물 16-2의 조 생성물을 얻었고, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 바로 사용하였다. LCMS m/z =737.2[M+H]+.
단계 2: 화합물 16-3의 합성
건조한 반응 플라스크에 N,N-디메틸포름아미드(3 mL)를 첨가하고, 화합물 16-2(230 mg, 312.15 μmol, 1 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 교반하였다. N,N-디이소프로필에틸아민(121.03 mg, 936.46 μmol, 163.11 μL, 3 eq) 및 디-3급-부틸 디카보네이트(74.94 mg, 343.37 μmol, 78.88 μL, 1.1 eq)를 첨가하고, 반응계를 20℃에서 10시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 포화 수성 염화암모늄(15 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트(10 mL × 2)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 식염수(5 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 TLC(석유 에테르:에틸 아세테이트=3:1)에 따른 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트=100:1-0:1)로 정제하여 화합물 16-3을 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ = 7.16 (d, J = 8.4 Hz, 4H), 6.85 (d, J = 8.6 Hz, 4H), 6.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.22 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.90 - 4.68 (m, 2H), 4.61 (s, 1H), 4.41 - 4.21 (m, 4H), 4.04 (s, 1H), 3.80 (s, 6H), 3.71 (s, 1H), 3.50 (d, J = 11.0 Hz, 2H), 3.30 (s, 1H), 3.24 - 3.02 (m, 2H), 2.90 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 2.78 - 2.58 (m, 2H), 2.55 (s, 3H), 2.34 (d, J = 4.0 Hz, 3H), 1.51 (s,9H). LCMS m/z =837.2[M+H]+.
단계 3: 화합물 16-4의 합성
건조한 반응 플라스크에 디클로로메탄(0.3 mL)을 첨가하고, 화합물 16-3(230 mg, 274.81 μmol, 1 eq)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 교반하였다. m-클로로퍼옥시벤조산(61.37 mg, 302.29 μmol, 85% 순도, 1.1 eq)을 첨가하고, 반응계를 20℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 5% 수성 아황산나트륨 용액(5 mL)에 붓고, 층들을 분리하였다. 수성상을 디클로로메탄(5 mL × 2)으로 추출하였다. 유기상을 합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 조 생성물을 얻었다. 수성상은 전분-요오드화칼륨 시험지로 시험되었고, 비산화성을 나타냈다. 상기 수성상을 버렸다. 조 생성물을 TLC(석유 에테르:에틸 아세테이트=1:1)에 따른 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트=100:1-0:1)로 정제하여 화합물 16-4를 얻었다. LCMS m/z =853.2[M+H]+.
단계 4: 화합물 16-5의 합성
건조한 반응 플라스크에 톨루엔(2 mL)을 첨가하고, 화합물 16-4(158 mg, 185.24 μmol, 1 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 교반하였다. 반응계를 0℃로 냉각시켰다. 나트륨 3급-부톡사이드(35.60 mg, 370.49 μmol, 2 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 15분 동안 교반하고, 화합물 12-3A(65.40 mg, 463.11 μmol, 2.5 eq)를 첨가하였다. 반응계를 0℃에서 30분 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 포화 수성 염화암모늄(5 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트(5 mL × 3)로 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 식염수(3 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 화합물 16-5의 조 생성물을 얻었고, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 바로 사용하였다. LCMS m/z =930.4[M+H]+.
단계 5: 화합물 16-6의 합성
건조한 반응 플라스크에 디클로로메탄(5 mL)을 첨가하고, 화합물 16-5(0.18 g, 193.54 μmol, 1 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 교반하였다. 이어서, 트리플루오로아세트산(1 mL)을 첨가하고, 반응계를 18℃에서 3시간 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액에 물(10 mL)을 첨가하고, 상기 혼합물을 추출하였다. 층들을 분리하였다. 수성상을 수집하고, 포화 탄산수소나트륨 용액을 사용하여 pH를 8로 조정하고, 디클로로메탄(20 mL × 2)으로 추출하였다. 유기상을 합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 화합물 16-6의 조 생성물을 얻었고, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 바로 사용하였다. LCMS m/z =590.2[M+H]+
단계 6: 화합물 16의 합성
화합물 16-6(62.77 mg, 106.46 μmol, 1 eq), 2-플루오로아크릴산(19.17 mg, 212.92 μmol, 2 eq), 및 N,N-디이소프로필에틸아민(41.28 mg, 319.38 μmol, 55.63 μL, 3 eq)를 DCM(5 mL)에 용해시키고, 상기 혼합물을 -60℃로 냉각시켰다. O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N,N-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(48.58 mg, 127.75 μmol, 1.2 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 0.5시간 동안 교반하였다. 상기 반응 용액을 처리를 위해 화합물 16-6의 배치(20.92 mg)와 합하였다. 상기 반응 용액에 물 5mL를 첨가하였다. 층들을 분리하였다. 유기상을 농축하고, 고성능 액체 크로마토그래피 컬럼{컬럼: Phenomenex luna C18 80×40 mm×3 μm; 이동상: [H2O(0.04%HCl)-ACN]; 아세토니트릴%: 20%-40%, 7분}으로 정제하여 화합물 16을 얻었다. 1H NMR (400MHz, CD3OD) δ = 6.73 (d, J=8.6 Hz, 1H), 5.45 - 5.21 (m, 3H), 4.87 - 4.80 (m, 2H), 4.57 (s, 2H), 4.19 (br d, J=13.7 Hz, 1H), 3.98 (br d, J=13.1 Hz, 1H), 3.75 - 3.66 (m, 2H), 3.56 - 3.49 (m, 1H), 3.37 (s, 3H), 3.32 - 3.27 (m, 2H), 3.26 - 3.11 (m, 1H), 3.06 - 2.87 (m, 1H), 3.06 - 2.87 (m, 1H), 3.06 - 2.87 (m, 1H), 2.44 - 2.03 (m, 12H). LCMS m/z =662.4[M+H]+.
실시예 17
Figure pct00110
단계 1: 화합물 17-2의 합성
건조한 반응 플라스크에 N,N-디메틸포름아미드(30 mL)를 첨가하고, 화합물 10-2(2.8 g, 3.68 mmol, 1 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 교반하였다. N,N-디이소프로필에틸아민(1.43 g, 11.03 mmol, 1.92 mL, 3 eq) 및 화합물 16-1(873.80 mg, 4.41 mmol, 1.2 eq, 2HCl)을 첨가하고, 반응계를 질소 하에 50℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 상기 혼합물을 처리를 위해 화합물 10-2의 배치(0.2 g)와 합하였다. 상기 반응 용액에 메틸 3급-부틸 에테르(30 mL)를 첨가하고, 상기 혼합물을 포화 염화암모늄 용액(30 mL × 2)으로 2회, 포화 식염수(30 mL × 2)로 2회 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 화합물 17-2의 조 생성물을 얻었고, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 바로 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.15 (d, J = 8.80 Hz, 4 H), 6.84 (d, J = 8.40 Hz, 4 H), 6.63 (d, J = 8.40 Hz, 1 H), 5.22 (dd, J = 11.20, 4.00 Hz, 1 H), 4.71 (s, 2 H), 4.36 - 4.20 (m, 4 H), 4.06 (d, J = 12.80 Hz, 1 H), 3.80 (s, 6 H), 3.61 - 3.50 (m, 2 H), 3.43 (dd, J = 18.80, 11.60 Hz, 2 H), 3.27 - 3.15 (m, 2 H), 3.12 - 2.98 (m, 2 H), 2.85 - 2.66 (m, 2 H), 2.53 (s, 3 H), 2.38 - 2.31 (m, 3 H), LCMS m/z =737.2[M+H]+.
단계 2: 화합물 17-3의 합성
건조한 반응 플라스크에 디클로로메탄(25 mL)을 첨가하고, 화합물 17-2(2.3 g, 3.12 mmol, 1 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 교반하였다. 반응계를 0℃로 냉각시켰다. 트리에틸아민(789.67 mg, 7.80 mmol, 1.09 mL, 2.5 eq) 및 트리플루오로아세트산 무수물(983.42 mg, 4.68 mmol, 651.27 μL, 1.5 eq)을 첨가하고, 반응계를 0 내지 5℃에서 0.5시간 동안 반응시켰다. 상기 혼합물을 처리를 위해 화합물 17-2의 배치(0.3 g)와 합하였다. 상기 반응 용액을 포화 염화암모늄 용액(20 mL × 2)으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 화합물 17-3의 조 생성물을 얻었고, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 바로 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.15 (d, J = 8.40 Hz, 4 H), 6.84 (d, J = 8.40 Hz, 4 H), 6.65 (br d, J = 8.40 Hz, 1 H), 5.29 - 5.20 (m, 1 H), 4.77 (s, 2 H), 4.38 - 4.24 (m, 4 H), 4.05 - 3.88 (m, 2 H), 3.80 (s, 6 H), 3.78 - 3.60 (m, 2 H), 3.59 - 3.37 (m, 2 H), 3.14 - 2.99 (m, 2 H), 2.98 - 2.93 (m, 1 H), 2.91 - 2.86 (m, 1 H), 2.78 (t, J = 6.80 Hz, 1 H), 2.53 (s, 3 H), 2.39 - 2.30 (m, 3 H), LCMS m/z =833.1[M+H]+.
단계 3: 화합물 17-4의 합성
건조한 반응 플라스크에 디클로로메탄(30 mL)을 첨가하고, 화합물 17-3(2.6 g, 3.12 mmol, 1 eq)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 교반하였다. m-클로로퍼옥시벤조산(697.20 mg, 3.43 mmol, 85% 순도, 1.1 eq)을 첨가하고, 반응계를 18℃에서 0.5시간 동안 반응시켰다. 상기 반응계를 처리를 위해 화합물 17-3의 배치(0.2 g)와 합하였다. 상기 반응 용액에 티오황산나트륨 용액(20 mL 10%)을 첨가하고, 전분-KI 종이에 의해 상기 혼합물은 음성을 나타내었다. 상기 혼합물을 디클로로메탄(20 mL × 2)으로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 조 생성물을 얻었고, 이를 TLC(석유 에테르:에틸 아세테이트= 0:1)에 따른 컬럼(석유 에테르:에틸 아세테이트=10:1-0:1)으로 정제하여 화합물 17-4를 얻었다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.15 (d, J = 8.40 Hz, 4 H), 6.84 (d, J = 8.40 Hz, 4 H), 6.66 (d, J = 8.40 Hz, 1 H), 5.27 (d, J = 9.20 Hz, 1 H), 4.93 - 4.982 (m, 2 H), 4.38 - 4.24 (m, 4 H), 4.10 - 3.99 (m, 2 H), 3.98 - 3.88 (m, 1 H), 3.87 - 3.68 (m, 8 H), 3.67 - 3.54 (m, 1 H), 3.54 - 2.98 (m, 3 H), 2.93 - 2.79 (m, 4 H), 2.78 - 2.65 (m, 1 H), 2.35 (d, J = 3.60 Hz, 3 H), LCMS m/z =849.1[M+H]+.
단계 4: 화합물 17-5의 합성
건조한 반응 플라스크에 톨루엔(1 mL)을 첨가하고, 화합물 17-4A(78.77 mg, 494.80 μmol, 3 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 교반하였다. 반응계를 0℃로 냉각시키고, 나트륨 3급-부톡사이드(47.55 mg, 494.80 μmol, 3 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 10분 동안 교반한 다음, 화합물 17-4(0.14 g, 164.93 μmol, 1 eq)를 톨루엔(0.5 mL)에 녹인 용액을 첨가하였다. 상기 혼합물을 추가로 0.5시간 동안 반응시켰다. 반응계를 처리를 위해 화합물 17-4의 배치(20 mg)와 합하였다. 상기 반응 용액을 에틸 아세테이트(5 mL)로 희석하고, 포화 염화암모늄(10 mL × 2) 및 포화 식염수(10 mL)로 순차적으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 화합물 17-5의 조 생성물을 얻었고, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 바로 사용하였다. LCMS m/z =848.3[M+H]+.
단계 5: 화합물 17-6의 합성
건조한 반응 플라스크에 디클로로메탄(12 mL)을 첨가한 다음, 화합물 17-5(160.00 mg, 188.70 μmol, 1 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 교반하였다. 이어서, 트리플루오로아세트산(2 mL)을 첨가하고, 반응계를 18℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응계를 처리를 위해 화합물 17-5의 배치(20 mg)와 합하였다. 상기 반응 용액에 물(10 mL)을 첨가하였다. 추출 후 층들을 분리하였다. 수성상을 포화 탄산수소나트륨 용액으로 pH 8로 조정하고, 디클로로메탄(10 mL × 2)으로 추출하였다. 유기상을 합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 화합물 17-6의 조 생성물을 얻었고, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 바로 사용하였다. LCMS m/z =608.3[M+H]+.
단계 6: 화합물 17의 합성
건조한 반응 플라스크에 디클로로메탄(5 mL)을 첨가한 다음, 화합물 17-6(50 mg, 82.29 μmol, 1 eq), 2-플루오로아크릴산(14.82 mg, 164.58 μmol, 2 eq), 및 N,N-디이소프로필에틸아민(31.90 mg, 246.87 μmol, 43.00 μL, 3 eq)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 교반하였다. 반응계를 -60℃로 냉각하고, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N,N-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(37.55 mg, 98.75 μmol, 1.2 eq)를 첨가하였다. 이어서, 상기 혼합물을 0.5시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 처리를 위해 합하였다. 상기 반응 용액에 물(5 mL)을 첨가하여 반응 혼합물을 켄칭하고, 층들을 분리하였다. 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 조 생성물을 얻었고, 이를 고성능 액체 크로마토그래피 컬럼{컬럼: Welch Xtimate C18 100×25 mm×3 μm; 이동상:[H2O(0.05%HCl) -ACN]; 아세토니트릴%: 20%-50%, 8분}으로 정제하여 화합물 17을 얻었다. SFC 분석 방법(컬럼: Chiralcel OD-3, 50×4.6mm I.D., 3μm; 이동상: A(CO2) 및 B(메탄올, 0.05% 디이소프로필아민 함유); 구배: B%=5-50%, 3분; 유속: 3.4 mL/분; 파장: 220 nm; 압력: 1800 psi, 광학 순도: 99.21%, 피크 도달 시간: 1.840). 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ = 6.80 - 6.68 (m, 1H), 5.73 - 5.51 (m, 1H), 5.46 - 5.19 (m, 3H), 5.05 - 4.90 (m, 3H), 4.74 - 4.58 (m, 2H), 4.37 - 4.26 (m, 1H), 4.20 - 4.06 (m, 2H), 4.05 - 3.84 (m, 3H), 3.79 - 3.59 (m, 2H), 3.54 - 3.43 (m, 1H), 3.42 - 3.35 (m, 1H), 3.31 - 3.24 (m, 1H), 3.13 - 2.89 (m, 3H), 2.82 - 2.52 (m, 2H), 2.50 - 2.42 (m, 1H), 2.41 - 2.30 (m, 5H), 2.29 - 2.18 (m, 1H).
실시예 18
Figure pct00111
단계 1: 화합물 18-1의 합성
화합물 1-11A(194.75 mg, 1.69 mmol, 200.78 μL, 4e q)를 무수 톨루엔(16 mL)에 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 나트륨 3급-부톡사이드(162.50 mg, 1.69 mmol, 4 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 0 내지 5℃에서 10분 동안 반응시켰다. 화합물 9-3(0.35 g, 422.74 μmol, 1 eq)을 톨루엔(5 mL)에 녹인 용액을 첨가하고, 상기 혼합물을 0 내지 5℃에서 0.5시간 동안 반응시켰다. 상기 혼합물을 처리를 위해 화합물 9-3의 배치(50 mg)와 합하였다. 상기 반응 용액을 포화 염화암모늄 20 mL × 2, 및 포화 식염수 20 mL로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 농축하여 화합물 18-1을 얻었다. MS m/z =879.2[M+H]+.
단계 2: 화합물 18-2의 합성
무수 디클로로메탄(12 mL)에 화합물 18-1(0.4 g, 455.07 μmol, 1 eq)을 첨가하고, 트리플루오로아세트산(2.4 mL)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 25℃에서 1.5시간 동안 반응시켰다. 상기 혼합물을 처리를 위해 화합물 18-1의 배치(50 mg)와 합하였다. 포화 탄산수소나트륨을 pH가 7-8이 될 때까지 상기 반응 용액에 서서히 첨가하였다. 상기 혼합물을 디클로로메탄 20 mL로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 이어서, 여액을 회전 증발에 의해 농축하여 건조시켜 화합물 18-2를 얻었다. LCMS m/z =539.1[M+H]+
단계 5: 화합물 18A 및 18B의 합성
화합물 18-2(36.80 mg, 510.60 μmol, 35.04 μL, 1.1 eq), 아크릴산(36.80 mg, 510.60 μmol, 35.04 μL, 1.1 eq) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(179.97 mg, 1.39 mmol, 242.55 μL, 3 eq)을 무수 디클로로메탄(5 mL)에 첨가하였다. 상기 혼합물을 -60℃로 냉각시키고, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N,N-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(176.50 mg, 464.18 μmol, 1 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 -60℃에서 30분 동안 반응시켰다. 상기 반응 용액을 디클로로메탄 10 mL로 희석하고, 포화 염화암모늄 10 mL × 2로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 이어서, 여액을 농축하였다. 잔류물을 고성능 액체 크로마토그래피 컬럼(컬럼: Phenomenex luna C18 100×40 mm×5 μm; 이동상: [H2O(0.1%TFA)-ACN]; 아세토니트릴%: 10%-40%, 8분)으로 정제하고, 동결건조한 다음, SFC(컬럼: DAICEL CHIRALCEL OD(250 mm×30 mm, 10 μm); 이동상: [0.1%NH3H2O ETOH]; 에탄올%: 50%-50%, 15분)에 따른 키랄 분리를 거쳐 다음 화합물들을 얻었다: 화합물 18A((키랄 피크 도달 시간: 1.479). SFC 분리 방법(컬럼: Chiralcel OD-3, 50×4.6 mm I.D., 3 μm; 이동상: A(CO2) 및 B(메탄올, 0.05% 디이소프로필아민 함유); 구배: B%=5-50%, 3분; 유속: 3.4 mL/분; 파장: 220 nm; 압력: 1800 psi, 광학 순도 100%). MS m/z =593.3[M+H]+, 1H NMR (400MHz,CDCl3) δ = 6.66 - 6.50 (m, 2H), 6.36 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.76 (d, J=10.0 Hz, 1H), 5.20 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.58-4.53 (m, 1H), 4.45 - 4.20 (m, 2H), 4.01 (s, 3H), 3.85 - 3.23 (m, 6H), 3.04 - 2.86 (m, 2H), 2.67 (s, 2H), 2.47 - 2.33 (m, 3H), 2.22 - 1.53 (m, 8H), 1.23 - 1.04 (m, 3H)) 및 화합물 18B((키랄 피크 도달 시간: 1.642), SFC 분리 방법(컬럼: Chiralcel OD-3, 50×4.6 mm I.D., 3 μm; 이동상: A(CO2) 및 B(메탄올, 0.05% 디이소프로필아민 함유); 구배: B%=5-50%, 3분; 유속: 3.4 mL/분; 파장: 220 nm; 압력: 1800 psi, 광학 순도 97.8%). LCMS m/z =593.3[M+H]+. 1H NMR (400MHz, CDCl3) δ = 6.72 - 6.48 (m, 2H), 6.35 (dd, J = 1.6, 16.8 Hz, 1H), 5.76 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.20 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.83 - 4.57 (m, 3H), 4.18 - 3.99 (m, 3H), 3.94 - 3.51 (m, 2H), 3.50 - 3.20 (m, 2H), 3.11 - 2.75 (m, 6H), 2.43 - 2.35 (m, 3H), 2.35 - 1.80 (m, 8H), 1.38 (d, J = 6.4 Hz, 3H)).
실시예 19
Figure pct00112
단계 1: 화합물 19의 합성
건조한 반응 플라스크에 디클로로메탄(5 mL)을 첨가한 다음, 화합물 17-6(25 mg, 42.40 μmol, 1 eq), 아크릴산(6.11 mg, 84.80 μmol, 5.82 μL, 2 eq) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(16.44 mg, 127.20 μmol, 22.16 μL, 3 eq)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 교반하였다. 반응계를 0℃로 냉각시키고, O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N,N-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(19.35 mg, 50.88 μmol, 1.2 eq)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 20℃에서 3시간 동안 교반하였다. 상기 반응 용액에 물(5 mL)을 첨가하여 반응을 켄칭하고, 층들을 분리하였다. 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 조 생성물을 수득하고, 이를 고성능 액체 크로마토그래피 컬럼{컬럼: Phenomenex luna C18 80×40 mm×3 μm; 이동상: [H2O(0.04%HCl)-ACN]; B%: 18%-34%, 7분}으로 정제하여 화합물 19를 얻었다. LCMS m/z =622.2[M+H]+.
실시예 20
Figure pct00113
단계 1: 중간체 20-1의 제조
화합물 9-2(90 mg, 110.85 μmol)를 디클로로메탄(2 mL)에 용해시키고, m-클로로퍼옥시벤조산(45.01 mg, 221.70 μmol, 85% 함량)을 첨가하였다. 상기 반응 용액을 20℃에서 추가로 3시간 동안 교반하였다. 감압 하에 유기 용매를 제거하고, 생성된 조 생성물을 분취 박층 크로마토그래피 플레이트(현상제: 디클로로메탄:메탄올 = 20:1)로 정제하여 화합물 20-1을 얻었다. MS m/z =844.4 [M+H] +.
단계 2: 중간체 20-2의 제조
화합물 17-4A(12.26 mg, 77.02 μmol)를 20℃에서 무수 테트라하이드로푸란(2 mL)에 용해시켰다. 나트륨 3급-부톡사이드(7.40 mg, 77.02 μmol)를 첨가하고, 상기 반응 용액을 추가로 30분 동안 교반하였다. 테트라하이드로푸란(0.5 mL) 중 화합물 20-1(50 mg, 59.25 μmol)의 용액을 첨가하고, 상기 반응 용액을 이 온도에서 0.5시간 동안 교반하였다. 감압 하에 유기 용매를 제거하고, 생성된 조 생성물을 분취 박층 크로마토그래피 플레이트(현상제: 디클로로메탄:메탄올 = 10:1)로 정제하여 화합물 20-2를 얻었다. MS m/z =923.6 [M+H] +.
단계 3: 화합물 20-3의 제조
화합물 20-2(45 mg, 48.75 μmol)를 무수 디클로로메탄(2 mL)에 용해시키고, 트리플루오로아세트산(1.5 mL)을 첨가하였다. 상기 반응 용액을 20℃에서 추가로 2시간 동안 교반하였다. 감압 하에 용매를 제거하고, 생성된 조 생성물을 디클로로메탄 20 mL에 용해시켰다. 고체 탄산수소나트륨 3 g을 첨가하고, 상기 혼합물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 여과하고, 감압 하에 유기 용매를 제거하여 화합물 20-3의 조 생성물을 얻었고, 이를 추가로 정제하지 않고 다음 반응 단계에 바로 사용하였다.
단계 5: 화합물 20의 제조
화합물 20-3(20 mg, 34.33 μmol)을 20℃에서 무수 디클로로메탄(2 mL)에 용해시켰다. 디이소프로필에틸아민(13.31 mg, 102.99 μmol, 17.94 μL) 및 아크릴로일 클로라이드(4.66 mg, 51.49 μmol, 4.20 μL)를 첨가하고, 상기 반응 용액을 이 온도에서 추가로 16시간 동안 교반하였다. 감압 하에 유기 용매를 제거하고, 조 생성물을 고성능 액체 크로마토그래피(컬럼: Welch Xtimate C18 100×40 mm×3 μm; 이동상: [물(0.075% 트리플루오로아세트산)-아세토니트릴]; 아세토니트릴: 22%-52%, 8분)로 정제하여 화합물 20의 트리플루오로아세테이트 염을 얻었다. MS m/z =637.4 [M+H] +.
생물학적 검정 데이터:
검정 실시예 1: KRAS G12C -돌연변이된 MIA-PA-CA-2 세포의 증식에 대한 화합물의 억제 효과 검정
1.1 검정의 목적
화합물들을 KRASG12C-돌연변이된 MIA-PA-CA-2 세포 증식 억제의 IC50에 대해 분석하였다.
1.2 시약
이 검정에 사용된 주요 시약은 CellTiter-Glo(Promega, Cat. No. G7573)를 포함하였다.
1.3 기기
이 검정에 사용된 주요 기기는 PerkinElmer EnVision 다기능 마이크로플레이트 판독기였다.
1.4 검정 방법
1) 부착된 세포를 트립신으로 분해하여 세포 현탁액을 형성하고, 이후 사용을 위해 세포 현탁액을 계수하였다.
2) 원심분리 튜브에 적당량의 세포를 첨가하고, 세포 배양 배지를 필요한 부피가 되도록 첨가한 다음, 세포를 100 μL의 배양 배지에서 2000개 세포/웰의 최종 밀도로 96웰 플레이트에 평판배양하였다.
3) 24시간 동안 인큐베이션한 후, 화합물을 DMSO로 10 mM로 제형화하고, DPBS(Dulbecco's Phosphate Buffered Saline)로 9점까지 3배 연속 희석하였고; 10 μL를 각 웰에 이중으로 넣었다. 웰당 10 μL의 DPBS를 검정 대조군 웰(Con)에 넣었다.
4) 같은 날, 화합물이 없는 다른 세포 배양 플레이트에 50 μL의 CellTiter Glo를 첨가하고, EnVision으로 형광 값을 판독하였다. 값은 Day0 값으로 표시되었다.
5) 화합물로 처리된 세포를 72시간 인큐베이션한 후, 플레이트를 제거하고, 50 μL의 CellTiter Glo를 세포 플레이트에 첨가하였다. 형광 값은 EnVision에 의해 판독되었다.
6) 데이터 분석: 다음 방정식에 따라 각 웰의 세포 억제율을 계산하였다:
Figure pct00114
* FDay0은 화합물을 처리하지 않은 원래의 세포 수 검정 웰의 판독 값이었다.
FCon은 인큐베이션 72시간 후 Con 그룹의 형광 판독 값이었다.
FCpd는 인큐베이션 72시간 후 각 화합물 웰의 형광 판독 값이었다.
7) Log(작용제) 대 반응 -- 화합물의 억제율 데이터(억제율 %)에 대한 가변 기울기 비선형 피팅 분석을 수행하여 다음 방정식을 사용하여 GraphPad Prism 소프트웨어에 의해 화합물들의 IC50 값을 얻었다:
Y=하단 + (상단-하단)/(1+10^((LogIC50-X)*기울기))
1.5 검정 결과
Figure pct00115
검정 결과는 본 발명의 화합물이 KRASG12C-돌연변이된 MIA-PA-CA-2 세포주의 세포 증식에 대한 우수한 억제 활성을 갖는다는 것을 보여주었다.
검정 실시예 2: H358 세포 검정
2.1 검정의 목적
화합물들을 KRASG12C-돌연변이된 H358 세포 증식 억제의 IC50에 대해 분석하였다.
2.2 시약
이 검정에 사용된 주요 시약은 RPMI-1640 배지, Vicente에서 구입한 페니실린/스트렙토마이신 항생제, Biosera에서 구입한 소 태아 혈청, Promega에서 구입한 CellTiter-Glo(세포 생존율 화학발광 검출 시약(cell viability chemiluminescence detection reagent)) 시약, 및 중국과학원 세포은행(Cell Bank of the Chinese Academy of Sciences)에서 구입한 NCI-H358 세포주를 포함하였다.
2.3 기기
이 검정에 사용된 주요 기기는 Nivo 다중 표지 분석기(PerkinElmer)였다.
2.4 검정 방법:
1) NCI-H358 세포를 흰색 96웰 플레이트에 접종하였고, 각 웰에는 80 μL의 세포 현탁액과 4000개의 NCI-H358 세포가 들어 있었다. 세포 플레이트를 이산화탄소 인큐베이터에서 밤새 인큐베이션하였다.
2) 검정되는 화합물들을 다중 채널 피펫으로 5배 연속 희석하여 9가지 농도, 즉, 2 mM부터 5.12 nM까지 얻었다. 검정을 이중으로 수행하였다. 중간 플레이트에 78 μL의 배지를 첨가한 다음, 2 μL의 연속 희석된 화합물을 대응하는 위치에 따라 중간 플레이트의 각 웰에 옮겼다. 잘 혼합한 후, 웰당 20 μL를 세포 플레이트로 옮겼다. 세포 플레이트로 옮긴 화합물들의 농도는 10 μM에서 0.0256 nM까지의 범위였다. 세포 플레이트를 이산화탄소 인큐베이터에서 5일 동안 인큐베이션하였다. 또 다른 세포 플레이트를 준비하고, 화합물 첨가 당일 세포 플레이트의 신호값을 최대값(하기 방정식에서 최대값)으로 판독하여 데이터 분석에 참여하였다. 세포 생존율 화학발광 검출 시약 25 μL를 세포 플레이트의 각 웰에 첨가하고, 상기 플레이트를 실온에서 10분 동안 인큐베이션하여 발광 신호를 안정화시켰다. 플레이트를 판독하기 위해 다중 라벨 분석기를 사용하였다.
3) 세포 생존율 화학발광 검출 시약 25 μL를 세포 플레이트의 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 실온에서 10분 동안 인큐베이션하여 발광 신호를 안정화시켰다. 플레이트를 판독하기 위해 다중 라벨 분석기를 사용하였다.
데이터 분석:
방정식 (샘플-최소)/(최대-최소)×100%를 사용하여 원시 데이터를 억제율로 변환하고, 4개의 파라미터를 사용한 곡선 피팅을 통해 IC50 값을 얻을 수 있다(GraphPad Prism에서 "log(억제제) 대 반응 -- 가변 기울기" 모드). NCI-H358 세포 증식에 대한 본 발명의 화합물의 억제 활성을 표 2에 제공하였다.
Figure pct00116
결론: 본 발명의 일부 화합물들은 NCI-H358 세포의 증식에 대해 우수한 억제 활성을 나타낸다.
검정 실시예 3: 간세포의 대사 안정성
검정 목적: CD-1 마우스, SD 랫트, 비글견, 사이노몰구스 원숭이 및 인간의 간세포에서 검정 화합물의 대사 안정성을 각각 분석하였다.
검정 절차: 여러 96웰 샘플 침전 플레이트들을 준비하고, 각각 T0, T15, T30, T60, T90, T120, T0-MC, T120-MC 및 블랭크 기질로 명명했다. 회수 배지와 인큐베이션 배지를 미리 꺼내어 37℃ 수욕에 넣어 예열하였다. 액체 질소 탱크로부터 동결보존된 간세포를 꺼내어 즉시 37℃ 수욕에 담갔다(약 90초). 동결보존된 간세포를 해동하여 풀어지게(loosen) 한 후, 이를 40 mL의 회수 배지가 들어 있는 원심분리 튜브에 붓고, 튜브를 가볍게 뒤집어 세포가 회수 배지에 재현탁되도록 하였다. 세포를 실온에서 5분 동안 100 × g에서 원심분리하고, 상청액을 제거하였다. 간세포를 적절한 부피의 인큐베이션 배지에 재현탁하고, 세포 생존율을 Trypan Blue 염색법으로 계산하였다. 간세포 현탁액(0.51 × 106개 세포/mL) 198 μL를 예열된 인큐베이션 플레이트에 첨가하였다. 배양 배지 대조군의 경우, 간세포가 없는 배양 배지 198 μL를 T0-MC 및 T120-MC 인큐베이션 플레이트에 첨가하였다. 모든 인큐베이션 플레이트들을 37℃ 인큐베이터에서 10분 동안 사전 인큐베이션하였다. 이어서, 검정 샘플과 대조 화합물의 작업 용액을 각각 2 μL씩 첨가하고, 혼합물을 잘 혼합하였다. 인큐베이션 플레이트를 즉시 인큐베이터 내의 쉐이커에 넣고, 타이머를 작동시키면서 반응을 개시하였다. 각 시점의 각 화합물에 대해, 2개의 중복 샘플을 준비하였다. 인큐베이션 조건은 37℃, 포화 습도, 및 5% CO2였다. 검정 시스템에서, 검정 샘플의 최종 농도는 1 μM이었고, 대조군 샘플의 최종 농도는 3 μM이었으며, 간세포의 최종 농도는 0.5×106개 세포/mL이었고, 총 유기 용매의 최종 농도는 0.96%였으며, 이 중 DMSO의 최종 농도는 0.1%였다. 대응하는 시점의 인큐베이션이 끝나면, 인큐베이션 플레이트를 꺼내고, 125 μL의 정지 용액(아세토니트릴 중 톨부타미드(tolbutamide) 및 라베탈롤(labetalol) 200 ng/mL)을 포함하는 샘플 플레이트에 세포와 화합물 및 대조군 화합물의 혼합물 25 μL를 첨가하였다. 블랭크 샘플 플레이트의 경우, 간세포가 없는 배양 배지 25 μL를 직접 넣었다. 밀봉 후, 모든 샘플 플레이트들을 진탕기에서 600 rpm으로 10분 동안 진탕한 다음, 3220×g에서 20분 동안 원심분리하였다. 검정 샘플과 대조 샘플의 상청액을 1:3의 비율로 초순수로 희석하였다. 모든 샘플들을 잘 혼합하고, LC/MS/MS로 분석하였다.
검정 결과는 표 3에 나와 있다.
Figure pct00117
결론: 다양한 종의 간세포에서의 대사 검정은 본 발명의 화합물이 우수한 대사 안정성을 갖는다는 것을 보여주었다.
검정 실시예 4: 간 마이크로솜에서의 시험관내 안정성 검정
검정 목적: CD-1 마우스, SD 랫트, 비글견, 사이노몰구스 원숭이 및 인간의 간 마이크로솜에서 검정 화합물의 대사 안정성을 각각 분석하였다.
검정 절차: 2개의 96웰 인큐베이션 플레이트를 준비하고, 각각 T60 인큐베이션 플레이트 및 NCF60 인큐베이션 플레이트로 명명하였다. T60 인큐베이션 플레이트 및 NCF60 인큐베이션 플레이트에 각각 445 μL의 마이크로솜 작업 용액(간 마이크로솜 단백질 농도 0.56 mg/mL)을 첨가한 다음, 상기 인큐베이션 플레이트를 37℃ 수욕에서 약 10분 동안 사전 인큐베이션하였다.
사전 인큐베이션 후, 검정 샘플 또는 대조군 화합물의 작업 용액 5 μL를 각각 T60 인큐베이션 플레이트 및 NCF60 인큐베이션 플레이트에 첨가하고, 혼합물을 잘 혼합하였다. NCF60 인큐베이션 플레이트의 각 웰에 인산칼륨 완충액 50 μL를 첨가하여 반응을 개시하였다. 180 μL의 정지 용액(아세토니트릴 중 톨부타미드 200 ng/mL 및 라베탈롤 200 ng/mL) 및 6 uL의 NADPH 재생 시스템 작업 용액을 T0 정지 플레이트에 첨가하고, 54 μL의 샘플을 T60 인큐베이션 플레이트에서 T0 정지 플레이트로 옮겼다(T0 샘플 생성). T60 인큐베이션 플레이트의 각 웰에 44 μL의 NADPH 재생 시스템 작업 용액을 첨가하여 반응을 시작하였다. 54 μL의 마이크로솜 작업 용액, 6 μL의 NADPH 재생 시스템 작업 용액 및 180 μL의 정지 용액만 블랭크 플레이트에 추가되었다. 따라서, 검정 화합물 또는 대조 화합물의 샘플에서, 화합물, 테스토스테론, 디클로페낙 및 프로파페논의 최종 반응 농도는 1 μM이었고, 간 마이크로솜의 농도는 0.5 mg/mL이었으며, 반응계에서 DMSO 및 아세토니트릴의 최종 반응 농도는 각각 0.01%(v/v) 및 0.99%(v/v)였다.
적절한 시간(예를 들어, 5, 15, 30, 45 및 60분)의 인큐베이션 후, 180 μL의 정지 용액(아세토니트릴 중 톨부타미드 200 ng/mL 및 라베탈롤 200 ng/mL)을 각 정지 플레이트의 샘플 웰에 첨가하였다. T60 인큐베이션 플레이트에서 샘플 60 μL를 제거하여 반응을 중지시켰다. 모든 샘플 플레이트들을 잘 진탕한 다음, 3220×g에서 20분 동안 원심분리하였다. 이어서, 각 웰에서 80 μL의 상청액을 꺼내고, 액체 크로마토그래피-탠덤 질량 분석법 분석을 위해 240 μL의 순수에 희석하였다. 모든 샘플을 주입하고, 액체 크로마토그래피-탠덤 질량 분석법으로 분석하였다.
Figure pct00118
결론: 간 마이크로솜에서 대사 안정성 검정 결과, 본 발명의 화합물이 우수한 대사 안정성을 갖는다는 것을 보여주었다.
검정 실시예 5: 혈장에서의 안정성 검정
검정 목적: CD-1 마우스 및 인간의 혈장에서 검정 화합물들의 안정성을 각각 분석하였다.
검정 절차: 동결보존된 혈장을 10 내지 20분 동안 해동하였다. 혈장이 완전히 해동되면, 이를 원심분리기에 넣고, 3220×g에서 5분 동안 원심분리하여 혈장 내 임의의 부유 물질과 침전물을 제거하였다. 96웰 인큐베이션 플레이트를 준비하고, 각각 T0, T10, T30, T60, T120으로 명명하였다. 마우스, 랫트, 개(canine), 원숭이 및 인간의 블랭크 혈장 98 μL를 대응하는 인큐베이션 플레이트들에 넣은 다음, 화합물 또는 대조군 화합물의 작업 용액 2 μL를 대응하는 플레이트들에 이중으로 첨가하였다. 모든 샘플들을 37℃ 수욕에서 인큐베이션하였다. 화합물 및 대조 화합물인 비사코딜(bisacodyl), 에날라프릴 말레에이트(enalapril maleate), 프로카인(procaine) 및 프로반틴(probanthine)의 최종 인큐베이션 농도는 2 μM이었고, 최종 유기상 함량은 2.0%였다. 각 시점의 인큐베이션이 끝나면, 대응하는 인큐베이션 플레이트를 제거하고, 200 ng/mL의 아세토니트릴 중 톨부타미드 및 라베탈롤 용액 400 μL를 각 대응하는 샘플 웰에 첨가하여 단백질을 침전시켰다. 모든 샘플 플레이트들을 밀봉하고, 잘 진탕한 다음, 3220×g에서 20분 동안 원심분리하였다. 상청액 50 μL를 취하고, 초순수 100 μL로 희석하였다. 모든 샘플들을 잘 혼합한 다음, LC/MS/MS로 분석하였다.
Figure pct00119
결론: 본 발명의 화합물은 인간 및 마우스의 혈장에서 우수한 안정성을 갖는다.
검정 실시예 6: 전혈에서의 안정성 검정
검정 목적: CD-1 마우스, SD 랫트, 비글견 및 사이노몰구스 원숭이의 전혈에서 검정 화합물의 안정성을 각각 분석하였다.
검정 절차: 검정 당일 또는 검정 전날에, CD-1 마우스, SD 랫트, 비글견 및 사이노몰구스 원숭이로부터 항응고제 EDTA-K2를 사용하여 신선한 전혈을 채혈하였다. 검정을 시작하기 전에, 전혈을 PBS와 1:1(v:v)로 혼합하고, 혼합물을 37℃ 수욕에서 10 내지 20분 동안 예열하였다. 96웰 인큐베이션 플레이트를 준비하고, 각각 T0, T30, T60, T240으로 명명하였다. T0, T30, T60 및 T240 인큐베이션 플레이트를 포함하는 대응하는 인큐베이션 플레이트에서, 화합물 또는 대조군 화합물의 작업 용액 2 μL를 마우스, 랫트, 개, 원숭이 및 인간의 블랭크 전혈 98 μL와 이중으로 혼합하였다. 모든 샘플들을 37℃ 수욕에서 인큐베이션하였다. 화합물의 최종 인큐베이션 농도는 5 μM이었고, 대조군 화합물의 최종 인큐베이션 농도는 2 μM이었다. 각 시점의 인큐베이션이 끝나면, 대응하는 인큐베이션 플레이트를 제거하고, 100 μL의 초순수를 대응하는 샘플 웰에 즉시 첨가하고, 잘 혼합하였다. 200 ng/mL의 아세토니트릴 중 톨부타미드 및 라베탈롤 용액 800 μL를 첨가하여 단백질을 침전시켰다. 샘플 플레이트를 밀봉하고, 잘 진탕한 다음, 3220×g에서 20분 동안 원심분리하였다. 150 μL의 상층액을 취하여 LC/MS/MS로 분석하였다.
Figure pct00120
결론: 다양한 종의 전혈에서의 안정성 검정 결과, 본 발명의 화합물이 전혈에서 우수한 안정성을 가짐을 보여주었다.
검정 실시예 7: 단백질 결합률 검정
검정 목적: CD-1 마우스, SD 랫트, 비글견, 사이노몰구스 원숭이 및 인간의 혈장에서 검정 화합물의 단백질 결합률을 평형 투석법(equilibrium dialysis)에 의해 결정하였다.
검정 절차: 상기 5종의 혈장을 사용하여 화합물 농도가 2 μM인 혈장 샘플을 준비하고, 96웰 평형 투석기에 넣고, 37±1℃에서 4시간 동안 인산염 완충 용액으로 투석하였다. 이 검정에서는 대조 화합물로 와파린을 사용하였다. 혈장 및 투석 완충액 중 검정 화합물의 농도는 LC-MS/MS 방법에 의해 결정되었다.
Figure pct00121
결론: 다양한 종의 혈장 결합률에 대한 검정 결과, 본 발명의 화합물이 혈장에서 더 높은 단백질 미결합률(protein unbound rate)을 나타낸다는 것을 보여주었다.
검정 실시예 8: 생체내 약동학 검정
1) SD 랫트에서 경구 투여 및 정맥내 주사에 의한 검정 화합물의 약동학 검정
검정 화합물을 5% 디메틸 설폭사이드/95%(10% 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린) 용액과 혼합하였다. 혼합물을 와동하고, 초음파 처리하여 1 mg/mL의 투명한 용액을 제조하고, 이를 나중에 사용하기 위해 미세다공성 막을 통해 여과하였다. 7 내지 10주령의 수컷 SD 랫트를 선택하고, 후보 화합물 용액을 정맥내 또는 경구 투여하였다. 일정 시간 동안 전혈을 채혈하여 혈장을 얻기 위해 준비하였다. 약물 농도는 LC-MS/MS 방법으로 분석하였고, 약동학적 파라미터는 Phoenix WinNonlin 소프트웨어(Pharsight, USA)로 계산하였다. 검정 결과는 표 8에 나와 있다:
Figure pct00122
참고: Vdss,u는 미결합 혈장 단백질(Vdss,u=Vdss/PPB(미결합%)) 하에서 겉보기 분포 부피(apparent volume of distribution)이고; Cmax, u 및 AUC0-last, u는 미결합 혈장 단백질 하에서 상응하는 값이다(Cmax,u= Cmax × PPB(미결합%); AUC0-last, u = AUC0-last × PPB(미결합%))
결론: PK 검정에서는 본 발명의 화합물이 랫트에서 더 높은 미결합 혈장 노출 및 우수한 경구 생체이용률을 나타낸다는 것을 보여주었다.
2) CD 마우스에서 경구 투여 및 정맥내 주사에 의한 검정 화합물의 약동학 검정
검정 화합물을 5% 디메틸 설폭사이드/95%(10% 하이드록시프로필-β-사이클로덱스트린) 용액과 혼합하였다. 상기 혼합물을 와동하고, 초음파 처리하여 1 mg/mL의 투명한 용액을 제조하고, 이를 나중에 사용하기 위해 미세다공성 막을 통해 여과하였다. 7 내지 10주령의 수컷 CD 마우스를 선택하고, 후보 화합물 용액을 정맥내 또는 경구 투여하였다. 일정 시간 동안 전혈을 채혈하여 혈장을 얻기 위해 준비하였다. 약물 농도는 LC-MS/MS 방법으로 분석하였고, 약동학적 파라미터는 Phoenix WinNonlin 소프트웨어(Pharsight, USA)로 계산하였다. 검정 결과는 표 9에 나와 있다:
Figure pct00123
참고: Vdss,u는 미결합 혈장 단백질(Vdss,u=Vdss/PPB(미결합%)) 하에서 겉보기 분포 부피이고; Cmax, u 및 AUC0-last, u는 미결합 혈장 단백질 하에서 상응하는 값이다(Cmax,u= Cmax × PPB(미결합%); AUC0-last, u = AUC0-last × PPB(미결합%))
결론: PK 검정에서는 본 발명의 화합물이 마우스에서 더 높은 미결합 혈장 노출 및 우수한 경구 생체이용률을 나타낸다는 것을 보여주었다.
검정 실시예 9: 생체내 약력학 검정
Balb/c 누드 마우스에서 인간 췌장암 Mia PaCa-2 세포의 피하 이식된 종양 모델에서 생체내 약력학 검정
1. 세포 배양 및 종양 조직 준비
세포 배양: 인간 췌장암 Mia PaCa-2 세포(ATCC-CRL-1420)를 37℃, 5% 이산화탄소 인큐베이터에서 10% 우태 혈청 및 2.5% 말 혈청을 포함하는 DMEM 배지에서 시험관내에서 단층으로 배양하였다. 세포는 일주일에 두 번 트립신-EDTA를 사용한 일상적인 분해에 의해 계대되었다. 세포 포화도가 80%-90%에 도달하고, 세포 수가 요건을 충족하면, 세포를 수거하고, 계수하고, 적절한 양의 PBS에 재현탁하였다. Matrigel을 1:1의 비율로 첨가하여 세포 밀도가 25 × 106개 세포/mL인 세포 현탁액을 얻었다.
세포 접종: 0.2 mL(5 × 106개 세포/마우스)의 Mia PaCa-2 세포(+ Matrigel, 부피 기준으로 1:1)를 각 마우스의 오른쪽 등에 피하 접종하였다. 평균 종양 부피가 190 mm3에 도달했을 때, 마우스를 종양 부피에 기초하여 그룹들로 무작위 배정하고, 표 10의 프로토콜에 따라 투여를 시작하였다.
Figure pct00124
참고: PO는 경구 투여를 나타내고; QD는 1일 1회를 나타낸다.
2. 종양 측정 및 검정 지표
일주일에 2번 버니어 캘리퍼(vernier caliper)로 종양 직경을 측정하였다. 종양 부피의 계산 공식은 V = 0.5a × b2였으며, 여기서 b는 각각 종양의 장경과 단경을 나타낸다.
화합물의 항종양 효능을 TGI(%) 또는 상대 종양 증식률 T/C(%)로 평가하였다. 상대 종양 증식율 T/C(%) = TRTV / CRTV × 100%(TRTV: 치료군의 RTV; CRTV: 음성 대조군의 RTV). 종양 측정 결과에 따라 상대 종양 부피(relative tumor volume: RTV)를 계산하였으며, 계산식은 RTV = Vt/V0이었으며, 여기서 V0는 투여 시점(즉, D0)에 측정된 그룹별 평균 종양 부피이고, Vt는 특정 측정 시점에서의 평균 종양 부피였다. TRTV와 CRTV는 동일한 날의 데이터를 사용하였다.
TGI(%)는 종양 성장 억제율을 반영하였다. TGI(%) = [(1-(치료군의 투여 종료 시 평균 종양 부피 - 치료군의 투여 개시 시 평균 종양 부피)) / (비히클 대조군의 치료 종료 시 평균 종양 부피 - 비히클 대조군의 치료 시작 시 평균 종양 부피)] × 100%.
3. 검정 결과
검정 결과는 도 1 및 2에 도시되어 있다.
투여 22일째의 결과를 표 11에 나타내었다.
Figure pct00125
결론: 본 발명의 화합물은 상당한 종양 억제 효과를 나타낸다. 더욱이, 각 용량 그룹에서 마우스의 체중은 안정적이며, 명백한 불내성(intolerance)은 없다.

Claims (22)

  1. 화학식 III으로 표시된 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    [화학식 III]
    Figure pct00126

    상기 화학식 (III)에서,
    T1은 O 및 N으로부터 선택되고;
    R1은 C6-10 아릴 및 5원 내지 10원 헤테로아릴로부터 선택되되, 이때 상기 C6-10 아릴 및 5원 내지 10원 헤테로아릴은 1, 2, 3, 4 또는 5개의 Ra로 치환되거나 치환되지 않고;
    T1이 O일 때, R2는 존재하지 않고;
    T1이 N일 때, R2는 H, C1-3 알킬, -C(=O)-C1-3 알킬 및 -S(=O)2-C1-3 알킬로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬, -C(=O)-C1-3 알킬 및 -S(=O)2-C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rb로 치환되거나 치환되지 않고;
    R3은 C1-3 알킬이고, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rc로 치환되거나 치환되지 않고;
    R4는 H 및 C1-3 알킬로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rd로 치환되거나 치환되지 않고;
    R5, R6 및 R7은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, I, 및 C1-3 알킬로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 F로 치환되거나 치환되지 않고;
    R8은 H 및 CH3으로부터 선택되고;
    Ra는 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, C1-3 알킬, C1-3 알콕시, C2-3 알키닐 및 C2-3 알케닐로부터 선택되되, 이때 상기 C1-3 알킬, C1-3 알콕시, C2-3 알키닐 및 C2-3 알케닐은 1, 2 또는 3개의 F로 치환되거나 치환되지 않고;
    Rb는 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I, OH 및 NH2로부터 선택되고;
    Rc는 각각 독립적으로 4원 내지 8원 헤테로사이클로알킬로부터 선택되되, 이때 상기 4원 내지 8원 헤테로사이클로알킬은 1, 2 또는 3개의 R로 치환되거나 치환되지 않고;
    Rd는 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I, OH, NH2 및 CN으로부터 선택되고;
    R은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, OH, CN, C1-3 알킬, C1-3 알콕시 및 -C1-3 알킬-O-C(=O)-C1-3 알킬아미노로부터 선택되되;
    단, R1이 나프틸일 때, 상기 나프틸은 F, Cl, Br, OH, NH2, CF3, CH2CH3 및 -C≡CH로 치환되거나 치환되지 않고, R5, R6 및 R7은 각각 독립적으로 H이다.
  2. 제1항에 있어서,
    Ra는 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I, OH, NH2, CN, CH3, CH2CH3, OCH3, OCH2CH3, -CH=CH2, -CH2-CH=CH2 및 -C≡CH로부터 선택되되, 이때 상기 CH3, CH2CH3, OCH3, OCH2CH3, -CH=CH2, -CH2-CH=CH2 및 -C≡CH는 1, 2 또는 3개의 F로 치환되거나 치환되지 않은 것인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  3. 제2항에 있어서,
    Ra는 각각 독립적으로 F, OH, NH2, CH3, CF3, CH2CH3 및 -C≡CH로부터 선택되는 것인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    R1은 페닐, 나프틸, 인돌릴 및 인다졸릴로부터 선택되되, 이때 상기 페닐, 나프틸, 인돌릴 및 인다졸릴은 1, 2 또는 3개의 Ra로 치환되거나 치환되지 않은 것인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  5. 제4항에 있어서,
    R1은
    Figure pct00127
    및
    Figure pct00128
    으로부터 선택되는 것인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  6. 제1항에 있어서,
    R2는 H, CH3, CH2CH3 및 CH(CH3)2로부터 선택되되, 이때 상기 CH3, CH2CH3 및 CH(CH3)2는 1, 2 또는 3개의 Rb로 치환되거나 치환되지 않은 것인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  7. 제6항에 있어서,
    R2는 H 및 CH3으로부터 선택되는 것인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  8. 제1항에 있어서,
    R은 각각 독립적으로 H, F, Cl, Br, OH, CN, CH3, CH2CH3, CH2CF3, OCH3, OCF3 및
    Figure pct00129
    로부터 선택되는 것인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  9. 제1항에 있어서,
    Rc는 테트라하이드로피롤릴 및 헥사하이드로-1H-피롤리지닐로부터 선택되되, 이때 상기 테트라하이드로피롤릴 및 헥사하이드로-1H-피롤리지닐은 1, 2 또는 3개의 R로 치환되거나 치환되지 않은 것인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  10. 제9항에 있어서,
    Rc는
    Figure pct00130
    , 및
    Figure pct00131
    로부터 선택되는 것인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  11. 제1항, 제9항 및 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    Rc는
    Figure pct00132
    , 및
    Figure pct00133
    로부터 선택되는 것인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  12. 제1항에 있어서,
    R3은 CH3이고, 이때 상기 CH3은 1, 2 또는 3개의 Rc로 치환되거나 치환되지 않은 것인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  13. 제12항에 있어서,
    R3은
    Figure pct00134
    및
    Figure pct00135
    로부터 선택되는 것인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  14. 제1항, 제12항 및 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
    R3은
    Figure pct00136
    및
    Figure pct00137
    로부터 선택되는 것인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  15. 제1항에 있어서,
    R4는 H 및 CH3으로부터 선택되되, 이때 상기 CH3은 1, 2 또는 3개의 Rd로 치환되거나 치환되지 않은 것인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  16. 제15항에 있어서,
    R4는 H, CH3 및 CH2CN으로부터 선택되는 것인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 화합물은 하기로부터 선택되는 것인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    [화학식 P-1]
    Figure pct00138

    상기 화학식 P-1에서,
    R1은 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 정의된 것과 같고;
    R4는 C1-3 알킬이되, 이때 상기 C1-3 알킬은 1, 2 또는 3개의 Rd로 치환되거나 치환되지 않고;
    Rd는 각각 독립적으로 F, Cl, Br, I, OH, NH2 및 CN으로부터 선택되고;
    R5는 제1항에 정의된 것과 같고;
    Rc는 제1항 및 제8항 내지 제11항 중 어느 한 항에 정의된 것과 같고;
    "*"로 표시된 탄소 원자는 키랄(chiral) 탄소 원자이고, 이는 (R) 또는 (S) 단일 거울상 이성질체(enantiomer)의 형태로 존재하거나, 또는 하나의 거울상 이성질체가 풍부한(enriched) 것이다.
  18. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 화합물은 하기로부터 선택되는 것인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    [화학식 I-1]
    Figure pct00139

    [화학식 II-1]
    Figure pct00140

    [화학식 IV-1]
    Figure pct00141

    [화학식 IV-2]
    Figure pct00142

    상기 화학식 I-1, II-1, IV-1, 및 IV-2에서,
    R1은 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 정의된 것과 같고;
    R2는 제1항, 제6항 및 제7항 중 어느 한 항에 정의된 것과 같고;
    R4는 제1항, 제15항 및 제16항 중 어느 한 항에 정의된 것과 같고;
    R5, R6, R7 및 R8은 제1항에 정의된 것과 같고;
    R은 제1항 또는 제8항에서 정의된 것과 같다.
  19. 하기 화학식으로 표시된 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00143

    Figure pct00144
  20. 제19항에 있어서,
    상기 화합물은 하기로부터 선택되는 것인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00145

    Figure pct00146

    Figure pct00147
  21. 제20항에 있어서,
    상기 화합물은 하기로부터 선택되는 것인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00148

    Figure pct00149

    Figure pct00150
  22. KRAS-관련된 질병을 치료하기 위한 약제의 제조에 있어서, 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 기재된 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도.
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