KR20220143996A - 아이스플랜트 발효물과 캐리어 펩타이드를 포함하는 피부노화 개선용 화장료 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은, 상기한 종래 기술의 문제를 감안한 것으로, 세포내 콜라겐 생성을 촉진하는 효과 등을 나타내는 아이스플랜트 유산균 발효물과 화장료 활성물질의 피부 투과를 촉진시키는 캐리어 펩타이드를 포함하여 피부노화 개선, 항산화, 보습 등에 효과가 우수하고, 피부침투효율이 향상된 피부노화 개선용 화장료 조성물을 제공하기 위한 것으로, 캐리어 펩타이드와 아이스플랜트 발효물을 포함하되, 상기 캐리어 펩타이드는 화장료 활성물질의 피부 투과를 촉진시키는 펩타이드인 것으로 특징으로 한다.
Description
본 발명은 아이스플랜트 발효물과 캐리어 펩타이드를 포함하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 특히 세포내 콜라겐 생성을 촉진하는 효과 등을 나타내는 아이스플랜트 유산균 발효물과 화장료 활성물질의 피부 투과를 촉진시키는 캐리어 펩타이드를 포함하여 피부노화 개선, 항산화, 보습 등에 효과가 우수하고, 피부침투효율이 향상된 피부노화 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.
피부는 나이가 들어감에 따라 자연스럽게 노화가 진행되고 이는 다양한 외부적 자극에 의해서 노화가 촉진되거나 감소되기도 한다.
피부 노화는 내인성 노화(Intrinsic aging)와 광노화(photoaging)의 두가지 형태로 구분되는데, 내인성 노화(자연노화)는 세월의 흐름에 따라 섬유아세포의 수가 감소하고 그 작용이 저하되어 섬유성분(콜라겐)의 합성량이 줄어들고, 피부 내 수분이 손실되는 외부환경과는 무관하게 유전적 요소의 영향에 따라 나타나는 노화현상을 일컫는다. 광노화는 외적으로 지속적인 자외선 노출에 의한 체내에서 단백질 분해효소의 활성화와 기질단백질의 사슬절단 및 비정상적인 교차결합 등의 생체 구성 성분들의 손상을 가져온다.
또한, 광노화는 외인성 노화로서, 피부가 자외선에 노출되면 체내에서 활성산소(oxygen free radical)가 생성되는데, 활성산소는 피부 세포 및 조직의 손상, 멜라닌 생성 증가, 표피의 각질화 등을 유발한다. 즉, 각질층이 손상을 입으면서 각질층의 두께가 증가하고, 자외선에 의해 진피층의 콜라겐 생합성의 저하와 콜라겐 분해를 촉진하여 피부주름이 생성된다.
최근 피부 주름개선을 위한 소재로는 비타민 C, α-토코페롤, 레티놀 및 그의 유도체 등이 화장품에 배합되어 이용되어 왔으나 이들은 제형에 변취 현상이 발생하거나 화학적 안정성이 좋지 못하다는 단점이 있다.
이러한 단점을 극복하기 위해 피부의 노화를 억제할 수 있는 소재에 대한 관심과 그를 함유하는 화장품에 대한 사회적 수요가 증가하고 있으며, 생체 친화적이면서도 효능이 정확하게 검증된 원료를 이용한 신규한 피부노화 개선용 화장료 조성물의 개발이 필요하다.
이러한 새로운 소재로서 아이스플랜트(Mesembryanthemum crystallinum L., Carpobrotus edulis)는 분류학에서 번행초과, 사철채송화속의 쌍자엽 일년생 식물에 속한다.
상기 아이스플랜트 추출물은 항광노화, 항산화시키고 DNA를 수복하여 콜라겐 분해를 지연시키고, 콜라겐 유실을 지연시키며 피부 주름을 효과적으로 감소시키는 것으로 알려져 있는데, 예를 들어, 한국등록특허 제10-6107503호(이하, "특허문헌 1"이라 함)는 아이스플랜트 캘러스 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 미백 및 주름 개선을 위한 조성물을 개시하고 있고, 한국공개특허 제10-2020-0067973호(이하, "특허문헌 2"라 함)는 피부 세포 노화의 지연, 피부의 컨디셔닝, 피부암의 치료 및 예방에 있어서 아이스플랜트 캘러스 추출물의 용도에 대해 개시하고 있다.
한편, 기능성 화장품 소재들은 피부 손상을 주지 않고 진피층까지 전달해야만 그 효능이 최대한 나타날 수 있는데, 한국등록특허 제10-1470793호(이하, "특허문헌 3"이라 함)는 세포 사이의 간극인 밀착결합을 열어 세포간극로를 통해 약물이 통과할 수 있게 함으로써 생체 이용률이 낮은 약물들을 용이하게 점막, 특히 소장, 비강, 구강, 피부, 폐, 질, 직장, 대장 점막을 통과하게 하는 흡수촉진제로서의 펩타이드(이하, "캐리어 펩타이드")를 개시하고 있다.
즉, 화장품의 활성 성분의 세포내로의 이동을 촉진하는 캐리어 펩타이드는 기존 화장품 소재 개발 및 실용화에 지속적으로 대두되고 있는 경피흡수의 한계, 인체 피부조직 투과 및 세포내 흡수의 어려움을 극복할 수 있다.
이에 본 발명자들은 특허문헌 1, 2의 아이스플랜트 추출물로부터 더 나아가 아이스플랜트 추출물을 발효시킨 아이스플랜트 발효물에 대해 피부노화와 관련된 주름개선 기능에 대한 더 나은 효과를 검증하고, 특허문헌 3의 캐리어 펩타이드를 이용하여 상기 아이스플랜트 발효물의 피부 침투 능력을 높임으로써 피부노화와 관련하여 주름개선 기능이 있는 화장품 소재를 개발하여 본 발명에 이르게 되었다.
본 발명은, 상기한 종래 기술의 문제를 감안한 것으로, 세포내 콜라겐 생성을 촉진하는 효과 등을 나타내는 아이스플랜트 유산균 발효물과 화장료 활성물질의 피부 투과를 촉진시키는 캐리어 펩타이드를 포함하여 피부노화 개선, 항산화, 보습 등에 효과가 우수하고, 피부침투효율이 향상된 피부노화 개선용 화장료 조성물을 제공하기 위한 것이다.
본 발명의 피부노화 개선용 화장료 조성물은, 캐리어 펩타이드와 아이스플랜트 발효물을 포함하되, 상기 캐리어 펩타이드는 화장료 활성물질의 피부 투과를 촉진시키는 펩타이드인 것으로 특징으로 한다.
또한, 본 발명의 피부노화 개선용 화장료 조성물의 상기 케리어 펩타이드는 Phe-Cys-Ile-Gly-Arg-Leu의 아미노산 서열을 가지는 펩타이드로서, 상기 아미노산 서열 말단의 루이신의 카르복실기 -COOH가 -CONH2로 변형된 펩타이드인 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명의 피부노화 개선용 화장료 조성물의 상기 아이스플랜트 발효물은 아이스플랜트 추출물에 락토바실러스 플란타럼와 락토바실러스 파라카제이를 접종하여 발효시킨 발효물인 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명의 피부노화 개선용 화장료 조성물에 있어서, 상기 접종은 상기 락토바실러스 플란타럼와 락토바실러스 파라카제이를 MRS 액체배지에서 35~39℃, 100~140rpm으로 4~20시간 진탕 배양하여 수득한 액체배양액을 상기 아이스플랜트 추출물에 1 내지 4%(v/v)로 첨가하여 이루어지는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명의 피부노화 개선용 화장료 조성물에 있어서, 상기 발효는 35~39℃, 100~140rpm으로 12~24시간 진탕하여 발효한 것이고, 상기 아이스플랜트 발효물은 상기 진탕하여 발효한 액을 여과하여 수득한 것을 특징으로 한다.
본 발명에 의하면, 세포내 콜라겐 생성을 촉진하는 효과 등을 나타내는 아이스플랜트 유산균 발효물과 화장료 활성물질의 피부 투과를 촉진시키는 캐리어 펩타이드를 포함함으로써, 피부노화 개선, 항산화, 보습 등에 효과가 우수하고, 화장료의 피부침투효율이 향상되는 효과가 있다.
본 발명에 의하면, 천연추출물로 이루어진 천연방부제를 포함함으로써, 민감한 피부에도 사용할 수 있는 저자극성의 화장료 조성물을 제공할 수 있다.
본 발명에 의한 피부노화 개선용 화장료 조성물은 아이스플랜트 추출물을 유산균으로 발효시킨 아이스플랜트 발효물과 화장료 활성물질의 피부 투과를 촉진시키기 위한 캐리어 펩타이드를 포함한다.
또한, 본 발명에 의한 피부노화 개선용 화장료 조성물은 초피나무 열매 추출물, 할미꽃추출물 및 우스니아 추출물을 혼합한 천연방부제를 더 포함할 수 있다.
아이스플랜트 추출물
상기 아이스플랜트 추출물은 아이스플랜트의 어떤 부위든 사용하여 추출이 가능하나 아이스플랜트의 잎과 줄기 중에서 선택된 하나 이상의 재료를 사용하여 추출하는 것이 바람직하다.
상기 아이스플랜트 추출물의 추출방법은, 상기 아이스플랜트의 잎이나 줄기로 부터 수득한 재료로부터 물을 용매로 이용하여 가열하는 방법을 통해 유용성분을 추출하는 열수 추출방법이 바람직하게 이용될 수 있는데, 구체적으로 아이스플랜트의 잎이나 줄기의 분쇄물에 10~30배 중량의 물을 첨가하고 50~100℃에서 12~36시간 동안 추출하여 수득하는 것이 바람직하고, 보다 바람직하게는 상기 아이스플랜트의 분쇄물에 15~25배 중량의 물을 첨가하여 80~100℃에서 20~30시간 동안 추출하여 수득하는 것이 좋다.
또한, 추출된 상기 아이스플랜트 추출물은 여과를 통해 슬러지를 제거하는 것이 바람직하다.
또한, 추출된 상기 아이스플랜트 추출물은 후술하는 발효과정에서 발생할 수 있는 잡균의 증식으로 인한 잘못된 발효를 방지하기 위하여 멸균과정을 거치는 것이 바람직하다. 이때 멸균방법으로는 미세공 필터를 사용하는 여과방법이나 고온고압 가열 방법 등이 바람직하게 사용될 수 있다.
아이스플랜트 발효물
상기 아이스플랜트 추출물을 발효하기 위한 발효균으로는, 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) 및 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei)를 사용하는데, 이때 락토바실러스 플란타럼 균주로 KCCM 12116, ATCC 14917, IFO 15891 또는 DSM 20174가 바람직하게 사용될 수 있으며, 락토바실러스 파라카제이 균주로는 KCCM 32822, IFO 12004가 바람직하게 사용될 수 있다.
또한, 상기 아이스플랜트 추출물에 대한 발효균의 접종은 상기 발효균의 액체배양액을 상기 아이스플랜트 추출물에 첨가하는 방법으로 이루어질 수 있다.
상기 발효균의 액체배양액은 각 발효균이 생장할 수 있는 액체배지에 각 발효균을 접종하여 배양하는 방법으로 수득할 수 있다. 이때 상기 발효균의 배양은 MRS 액체배지에서 35~39℃, 50~200rpm으로 12~36시간 동안 진탕배양을 하여 발효효율을 높일 수 있다.
또한, 상기 락토바실러스 플란타럼 및 락토바실러스 파라카제이 발효균을 각각 별도로 배양하여 각각의 액체배양액을 상기 아이스플랜트 추출물에 첨가할 수 있으며, 또한 상기 락토바실러스 플란타럼 및 락토바실러스 파라카제이 발효균을 함께 배양하더라도 서로의 성장에 악영향을 미치지 않으므로, 상기 락토바실러스 플란타럼 및 락토바실러스 파라카제이 발효균을 하나의 액체배지에서 함께 배양하여 수득한 액체배양액을 상기 아이스플랜트 추출물에 첨가할 수도 있다.
상기 락토바실러스 플란타럼 및 락토바실러스 파라카제 발효균을 각각 별도로 배양한 액체배양액을 이용하는 경우, 상기 아이스플랜트 추출물에 각각의 액체배양액을 1~3%(v/v)씩 첨가하는 것이 바람직하며, 상기 락토바실러스 플란타럼 및 락토바실러스 파라카제이 발효균을 함께 배양한 액체배양액을 이용하는 경우에는 상기 아이스플랜트 추출물에 액체배양액을 2~6%(v/v) 첨가하는 것이 발효효율을 높이는데 있어서 바람직하다.
또한, 상기 락토바실러스 플란타럼 및 락토바실러스 파라카제이의 액체배양액이 첨가된 아이스플랜트 추출물의 혼합물의 발효는 상기 발효균의 생장 및 발효가 가능한 온도에서 적절한 시간동안 유지하는 방법으로 이루어질 수 있는데, 35~39℃에서, 50~200rpm으로 12~36시간 진탕하여 발효하는 경우 효율적인 발효가 이루어질 수 있으며, 더 바람직하게는 36~38℃에서, 100~140rpm으로 20~30시간 진탕하여 발효하는 것이 좋다.
상기와 같은 방법을 통해 제조된 아이스플랜트 발효물은 여과하여 여과액을 수득하고, 농축 및 동결건조 과정을 통해 분말화하여 사용하는 것이 바람직하다.
또한, 화장료를 제조하는 과정 중에 상기 아이스플랜트 발효물을 첨가할 수 있는데, 이때 상기 아이스플랜트 발효물의 첨가량은 화장료의 종류, 형태, 목적, 제조방법 등을 고려하여 적절하게 선택될 수 있다. 예를 들어, 상기 아이스플랜트 발효물의 첨가량은 최종 화장료 중량을 기준으로 0.1~100 중량%, 바람직하게는 1~50 중량%, 더 바람직하게는 2~20 중량%가 포함될 수 있다.
캐리어 펩타이드
상기 캐리어 펩타이드는 Phe-Cys-Ile-Gly-Arg-Leu의 아미노산 서열을 가지는 펩타이드로서 상기 아미노산 서열 말단의 루이신의 카르복실기 -COOH가 -CONH2로 변형된 펩타이드이다.
상기한 특허문헌 3에 따르면, 상기 캐리어 펩타이드는 세포 사이의 간극인 밀착결합을 열어 세포간극로를 통해 약물이 통과할 수 있게 함으로써 생체 이용률이 낮은 약물들을 용이하게 점막, 특히 소장, 비강, 구강, 피부, 폐, 질, 직장, 대장 점막을 통과하게 함으로써 생체 이용률이 낮은 약물들의 생체 이용률을 용이하게 향상시킬 수 있다.
즉, 상기 캐리어 펩타이드는 추가적인 보조제 없이도 약물이나 화장료 등의 활성물질의 피부 흡수를 현저히 촉진시키는 피부 투과 촉진제로서 기능할 수 있다.
천연방부제
본 발명의 천연방부제는 초피나무 열매 추출물(Zanthoxylum piperitum fruit extract), 할미꽃추출물(Pulsatilla koreana extract) 및 우스니아 추출물(Usnea Barbata(lichen) extract)을 포함한다.
초피나무 잎에는 플라보노이드 성분이 함유되어 있어 항산화 작용을 하여 활성산소 작용을 억제하고 노화를 예방시켜 주고, 초피나무 열매에는 토코페롤과 비타민C가 다량 함유되어 있어 외부 환경으로부터 피부를 보호하고 항균, 항염작용이 뛰어나 피부 염증에 효과적이다.
할미꽃추출물은 피부의 열을 감소시켜 피부진정에 효과적이고, 사포닌 성분을 함유하고 있어 피부를 건강하고 유연하게 유지해주며 우수한 항균, 살균효과를 가지고 있는 것으로 알려져 있다.
우스니아 추출물은 우스니아의 주 성분인 우스닌산(Usnic Acid)이 강력한 항생제, 항진균제로서 사용되며 박테리아와 곰팡이의 번식을 방지하는데 효과적인 것으로 알려져 있다.
본 발명의 천연방부제는 상기 초피나무 열매 추출물, 할미꽃추출물 및 우스니아 추출물이 동일 질량비로 포함되는 것이 바람직하다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다.
[실시예 1]
1. 아이스플랜트 추출물 제조
아이스플랜트 잎 및 줄기를 수세한 후 상온에서 건조시키고 분쇄하여 조분쇄물 500g을 수득하였다. 상기 조분쇄물 중 100g을 20배 중량의 정제수에 침지하여 저온추출기에서 95℃로 24시간 동안 저온 열수추출하였다. 수득한 추출물을 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하는 방법으로 미생물 및 슬러지를 제거하여 추출액을 수득하였으며, 잔여 원료에 대해 동일한 방법으로 3회 반복 추출한 후 상온에서 냉각하였다.
2. 발효미생물 준비
락토바실러스 플란타럼(KCCM 12116, ATCC 14917) 및 락토바실러스 파라카제이(KCCM 32822)를 각각 MRS 액체배지에 접종하고 37℃에서 120rpm으로 15시간 진탕배양하였다. 이렇게 수득한 배양액을 이후 발효에 사용하였다.
3. 아이스플랜트 발효물의 제조
상기 아이스플랜트 추출물로 발효배지를 제조하고, 121℃에서 15분간 멸균하였다. 상기 아이스플랜트 추출물로 제조된 발효배지에 락토바실러스 플란타럼 배양액과 락토바실러스 파라카제이 배양액을 각각 1%(v/v)씩 첨가하여 접종한 다음 37℃에서 120rpm으로 24시간동안 진탕발효하였다. 이렇게 수득된 상기 아이스플랜트 발효물을 와트만(Whatman)#5 여과지로 여과하였고, 농축 및 동결건조 과정을 거쳐 분말화한 후 실험에 사용하였다.
[실험예 1] 총 폴리페놀 함량 및 총 플라보노이드 함량의 측정
상기 아이스플랜트 추출물(시료 1)과 아이스플랜트 발효물(시료 2)에 대해 총 폴리페놀의 함량 및 총 플라보노이드의 함량을 측정하였다.
총 폴리페놀 함량은 각 시료 0.5㎖에 2N 폴린(folin) 시약 0.5㎖을 가하고 3분간 정치한 후 10% Na2CO3 0.5㎖를 가하여 1시간 반응 후 700nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 지표물질로 갈릭산(gallic acid)을 이용하여 작성한 표준곡선으로부터 총 폴리페놀의 함량을 구하였다.
총 플라보노이드 함량은 각 시료 0.5㎖를 NaNO2 용액 75㎕와 혼합하여 5분간 반응시키고 AlCl3 H2O 용액 150㎕를 첨가하여 다시 5분간 반응시킨 후 1M NaOH 0.5㎖와 섞어 510nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 총 플라보노이드 함량은 카테킨을 이용하여 작성한 표준곡선으로부터 구하였다.
| 시료명 | 총 폴리페놀 함량 | 총 플라보노이드 함량 |
| 아이스플랜트 추출물(시료 1) | 320.21 | 12.24 |
| 아이스플랜트 발효물(시료 2) | 374.47 | 16.33 |
상기 [표 1]에서 보는 바와 같이, 아이스플랜트 추출물보다 아이스플랜트 발효물에 있어서 항산화 효과가 있어 피부 노화 방지 등에 효과가 있는 것으로 알려진 총 폴리페놀 및 총 플라보노이드의 함량이 높은 것으로 나타났다.
이는, 상기 아이스플랜트의 잎 및 줄기 등으로부터 추출된 아이스플랜트 추출물을 다시 락토바실러스 플란타럼 및 락토바실러스 파라카제이 유산균으로 발효시키는 과정에서 총 폴리페놀 및 총 플라보노이드의 함량을 증가시키는 것으로 볼 수 있다.
따라서, 아이스플랜트 추출물을 그대로 사용하는 경우보다 상기 아이스플랜트 추출물을 상기 락토바실러스 플란타럼 및 락토바실러스 파라카제이 유산균으로 발효시킨 아이스플랜트 발효물을 화장료 조성물의 원료로 사용하는 경우, 피부 노화 방지에 더 효과적으로 작용할 수 있게 된다.
[실험예 2] DPPH 라디칼 소거능 측정
상기 아이스플랜트 추출물(시료 1)과 아이스플랜트 발효물(시료 2)에 대해 DPPH 라디칼 소거 실험을 통해 항산화력을 조사하였다.
DPPH(1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl)는 그 자체가 매우 안전한 프리 라디칼(Free radical)로써, 517㎚에서 특정적인 광흡수를 나타내는 진한 보라색의 화합물을 측정하며, 라디컬 소거활성이 있는 항산화제에 의해 정량적으로 탈색됨으로 인해 항산화 활성을 측정할 수 있다.
농도별로 상기 아이스플랜트 추출물(시료 1)과 아이스플랜트 발효물(시료 2) 각각의 시료 1㎖에 500μM DPPH 용액 1㎖를 첨가하여 교반한 후, 37℃ 암소에서 30분간 반응시켰다. 반응용액은 517㎚에서 흡광도를 측정하고, 아래의 식(1)에 의하여 radical scavenging activity를 계산하였으며, 그 결과를 아래의 [표 2]에 나타내었다.
소거 활성(%)=[1-(추출물 또는 발효물 첨가구의 흡광도/추출물 또는 발효물 무 첨가구의 흡광도)]×100 … (1)
| 시료 | 농도(㎍/㎖) | DPPH radical 소거능(%) |
| 아이스플랜트 추출물 (시료 1) |
100 | 10.99 |
| 200 | 20.90 | |
| 500 | 33.35 | |
| 1,000 | 77.42 | |
| 아이스플랜트 발효물 (시료 2) |
100 | 12.02 |
| 200 | 22.69 | |
| 500 | 45.80 | |
| 1,000 | 91.88 |
위의 [표 2]에서 보는 바와 같이, 상기 아이스플랜트 추출물 및 아이스플랜트 발효물 모두 농도 의존적으로 DPPH 라디칼 소거 활성이 높아지고 있는 것으로 나타났으며, 같은 농도에서는 아이스플랜트 발효물이 상기 아이스플랜트 추출물보다 높은 DPPH 라디칼 소거 활성을 나타냈다.
즉, 상기 아이스플랜트 발효물이 상기 아이스플랜트 추출물보다 더 우수한 항산화 효과를 나타내는 것으로 확인되었다.
[실험예 3] 아질산염 소거활성 측정
상기 아이스플랜트 추출물(시료 1)과 아이스플랜트 발효물(시료 2)에 대해 아질산염 소거활성을 측정하였다.
농도별로 희석한 시료(시료 1, 시료 2)를 1mM의 NaNO2 용액 2㎖에 각각 첨가하고, 여기에 0.1N HCl(pH 1.2)과 0.2M citrate buffer를 사용하여 반응용액의 pH를 6.0으로 조정한 후, 반응용액의 부피를 10㎖로 하여 37℃에서 1시간동안 반응시킨 후 각각 시료를 1㎖씩 취하여 2% acetic acid 5㎖를 첨가하였다. 그리고 Griess reagent(A:B=1:1, A: 1% sulfanilic acid in 30% acetic acid, B:1% naphthylamine in 30% acetic acid) 0.4㎖를 첨가하여 vortex mixing 후, 실온에서 15분간 반응시켰다. 반응시킨 각각의 시료를 spectrophotometer를 사용하여 520㎚에서 흡광도를 측정하였다. 이때 대조구로는 아이스플랜트 추출물 또는 아이스플랜트 발효물 대신 증류수를 가하여 동일하게 실험하였고, 각 시료의 Nitrite scavenging activity은 아래의 식(2)에 의해 계산하였으며, 그 결과를 [표 3]에 나타내었다.
Nitrite scavenging activity(%)=(1-시료 흡광도/대조구 흡광도)×100 …(2)
| 시료 | 농도(㎍/㎖) | Nitrite scavenging activity(%) |
| 아이스플랜트 추출물 (시료 1) |
100 | 3.24 |
| 200 | 7.28 | |
| 500 | 16.13 | |
| 1,000 | 32.65 | |
| 아이스플랜트 발효물 (시료 2) |
100 | 2.06 |
| 200 | 6.39 | |
| 500 | 22.81 | |
| 1,000 | 44.15 |
위의 [표 3]에서 보는 바와 같이, 상기 아이스플랜트 추출물 및 아이스플랜트 발효물 모두 농도 의존적으로 아질산염 소거활성이 높아지고 있는 것으로 나타났으며, 고농도로 갈수록 같은 농도에서 아이스플랜트 발효물이 상기 아이스플랜트 추출물보다 높은 아질산염 소거활성을 나타냈다. 즉, 아이스플랜트 발효물이 상기 아이스플랜트 추출물보다 더 우수한 항산화 효과를 나타낼 수 있음을 알 수 있다
[실험예 4] 시료의 세포독성 평가
상기 아이스플랜트 추출물(시료 1), 아이스플랜트 발효물(시료 2) 및 캐리어 펩타이드(시료 3) 각각의 피부세포에 대한 세포독성을 평가하였다.
세포독성 평가는, 96-웰 시험 플레이트에 세포배양 배지(DMEM에 10% FBS가 첨가된 것)에 희석된 섬유아세포(fibroblast)를 1×106cells/㎖개씩 넣고 24시간 동안 부착시켰다. 각 웰에 적절한 농도로 희석한 시료(시료 1, 시료 2, 시료 3)를 각각 농도별로 100㎕ 씩 처리한 후 24시간 동안 배양하였다. 24시간이 지나면 배지를 제거하고, 각 웰 당 MTT(3-(4,5 dimethyl thiazol-2yl)-2,5-dipheyl tetrazolium bromide) 용액(2.5mg/㎖)이 함유된 세포배양 배지 200㎕를 넣은 후 2시간 동안 37℃, CO2 배양기에서 배양하였다. 배지를 제거하고 DMSO(Dimethyl sulfoxide)를 100㎕씩 넣어주었다. 5분동안 진탕하여 세포를 용해시킨 후 마이크로플레이트 판독기에서 565㎚ 흡광도를 측정하였다.
각 시료(시료 1, 시료 2, 시료 3)에서의 세포생존율(%)은 아래의 식(3)으로 계산하여, 아래의 [표 4]에 나타내었으며, 세포의 생존에 영향을 미치지 않는 시료의 농도를 결정하였다.
세포생존율(%) = 시료 처리군 흡광도/대조군(시료 미처리군) 흡광도×100 … (3)
| 농도 (㎍/㎖) |
세포 생존율 (%) | ||
| 아이스플랜트 추출물 | 아이스플랜트 발효물 | 캐리어 펩타이드 | |
| 20 | 99.8 | 111 | 98.8 |
| 50 | 104.0 | 99.6 | 102 |
| 100 | 104.0 | 97.9 | 97.9 |
| 200 | 91.9 | 89.3 | 90 |
위의 [표 4]에서 보는 바와 같이, 상기 아이스플랜트 추출물(시료 1), 아이스플랜트 발효물(시료 2) 및 캐리어 펩타이드(시료 3) 모두 모든 농도에서 세포 생존율이 높은 것으로 나타났다. 즉, 아이스플랜트 추출물, 아이스플랜트 발효물 및 펩타이드 모두 화장품 원료로 사용하는 경우 피부에 대해 저자극성으로 안전하게 사용할 수 있는 것으로 나타났다.
[실험예 5] MMP-1(Matrix Metalloproteinase-1) 생성 억제 효과 평가
Matrix metalloproteinase-1(MMP-1, collagenase) 생성을 저해하는 물질은 콜라겐을 보호하여 피부조직의 기계적 특성을 유지시켜 탄력과 피부가 늘어지는 것을 방지한다. 즉, MMP-1 생성을 저해하는 활성을 갖는 원료는 주름을 개선하고 탄력있는 피부를 위한 화장품 개발에 유용하게 사용될 수 있는 것으로 평가할 수 있다.
따라서, 상기 아이스플랜트 추출물(시료 1), 아이스플랜트 발효물(시료 2)과 상기 아이스플랜트 발효물에 캐리어 펩타이드를 동일 농도로 혼합한 혼합물(시료 4)에 대해 MMP-1 생성 저해능 시험을 진행하였다. 사람 진피 섬유아세포 Human dermal fibroblast(HDF) 세포는 DMEM(Dulbecco'modified Eagle'media, Sigma)에 10% 우태아혈청(fetal bovine serum, Sigma)을 첨가한 배지로 37℃, 5% CO2 조건에서 배양하였다. 24-웰 플레이트에 2 X 105 cells/well의 농도로 세포를 배양하고 세포의 부착을 확인한 뒤, 대조군에는 아무것도 처리하지 않고 용매만 넣었으며, 디쉬에는 선정된 상기 3종 시료의 실험군과 대조군으로 에피갈로카테킨 갈레이트(epigallocatechin gallate, EGCG)를 100㎍/㎖ 농도가 되도록 처리를 하였다. 각각의 디쉬에 시험물질을 가한 뒤 2일 동안 배양하였으며, 2일 뒤 배지를 채취하여 Matrix metalloproteinase-1(MMP-1), Human, biotrak ELISA kit(GE healthcare RPN2610)을 통해 MMP-1의 저해능을 측정하였으며, 측정결과는 아래의 [표 5]와 같다.
| 시료 | 농도(㎍/㎖) | MMP-1 생성 억제율(%) |
| 아이스플랜트 추출물(시료 1) | 100 | 73.6 |
| 아이스플랜트 발효물(시료 2) | 100 | 87.5 |
| 아이스플랜트 발효물 +캐리어 펩타이드(시료 4) |
100 | 84.0 |
| EGCG(대조군) | 100 | 95.6 |
위의 [표 5]에서 보는 바와 같이, 아이스플랜트 발효물(시료 2)이나 캐리어 펩타이드를 첨가한 아이스플랜트 발효물(시료 4)의 경우, 아이스플랜트 추출물(시료 1)보다 MMP-1 생성 억제율에 있어서 더 나은 효과를 나타내었다.
또한, 아이스플랜트 발효물의 경우 대조군인 EGCG 대비 91.5%, 캐리어 펩타이드를 첨가한 아이스플랜트 발효물의 경우 대조군인 EGCG 대비 87.9%의 MMP-1 생성 억제율을 나타났다. 즉, 아이스플랜트 발효물 또는 캐리어 펩타이드를 첨가한 아이스플랜트 발효물의 경우 MMP-1 생성을 저해하여 피부 주름의 생성을 억제할 수 있을 것으로 나타났다.
[실험예 6] 세포내 콜라겐 생성능 평가
상기 아이스플랜트 추출물(시료 1), 아이스플랜트 발효물(시료 2)과 상기 아이스플랜트 발효물에 캐리어 펩타이드를 동일 농도로 혼합한 혼합물(시료 4)을 첨가 후 피부기질 성분 타입 1 프로콜라겐의 생합성을 촉진시키는 효과를 알아보기 위하여 프로콜라겐 분석(procollagen assay)을 하기와 같은 방법으로 실시하였다.
사람 진피섬유아세포 Human dermal fibroblast(HDF) 세포는 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's media, Sigma)에 10% 우태아혈청(fetal bovine serum, Sigma)을 첨가한 배지로 37℃, 5% CO2 조건에서 배양하였다.
프로콜라겐의 양을 측정하는 실험을 위해서 섬유아세포를 48-웰 플레이트에 90% 이상 배양한 후 각 시료(시료 1, 시료 2, 시료 4)을 각각 100㎍/㎖ 농도로 가하고, 24시간 후에 배지 중에 유리된 프로콜라겐의 양을 프로콜라겐타입-1C-펩타이드 EIA 키트(procollagen type-1 C-peptide EIA kit)(MK101, Takara, Japan)을 사용하여 측정하였으며, 그 결과는 아래의 [표 6]과 같다.
| 시료 | 농도(㎍/㎖) | 프로콜라겐 생합성촉진효과(%) |
| 아이스플랜트 추출물(시료 1) | 100 | 43.2 |
| 아이스플랜트 발효물(시료 2) | 100 | 49.2 |
| 아이스플랜트 발효물 +캐리어 펩타이드(시료 4) |
100 | 52.0 |
| Ascorbic acid(대조군) | 100 | 100 |
위의 [표 6]에서 보는 바와 같이, 아이스플랜트 발효물(시료 2)이나 캐리어 펩타이드를 첨가한 아이스플랜트 발효물(시료 4)의 경우 아이스플랜트 추출물(시료 1)보다 프로콜라겐 생합성촉진에 있어서 더 나은 효과를 나타내었다.
즉, 아이스플랜트 발효물이나 캐리어 펩타이드를 첨가한 아이스플랜트 발효물의 경우, 프로콜라겐의 생합성을 촉진하여 피부의 주름을 개선할 수 있는 것으로 나타났다.
[실시예 2] 초피나무 열매 추출물, 할미꽃 추출물, 우스니아 추출물의 제조
1. 초피나무 열매 추출물 제조
초피나무 열매를 수세한 후 상온에서 건조시키고 분쇄하여 조분쇄물을 수득하였으며, 수득한 조분쇄물 100g을 20배 중량의 정제수에 침지하여 저온추출기에서 95℃로 24시간 동안 저온 열수추출하였다. 수득한 초피나무 열매 추출물을 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하는 방법으로 미생물 및 슬러지를 제거하여 추출액을 수득하였고, 잔여 원료에 대해 동일한 방법으로 3회 반복 추출한 후 상온에서 냉각하였으며, 농축 및 동결과정을 통해 분말화하였다.
2. 할미꽃 추출물의 제조
할미꽃 전초(뿌리, 줄기, 잎)를 수세한 후 상온에서 건조시키고 분쇄하여 조분쇄물을 수득하였으며, 수득한 조분쇄물 100g을 이용하여 초피나무 열매 추출물과 동일한 방법으로 할미꽃 추출물을 제조하였다.
3. 우스니아 추출물
우스니아 전초를 수세한 후 상온에서 건조시키고 분쇄하여 조분쇄물을 수득하였으며, 수득한 조분쇄물 100g을 이용하여 초피나무 열매 추출물과 동일한 방법으로 우스니아 추출물을 제조하였다.
[실험예 7] 천연방부제의 방부력 평가
상기 초피나무 열매 추출물, 할미꽃 추출물 및 우스니아 추출물을 포함하는 천연방부제의 세균에 대한 방부력을 평가하였다.
상기 천연방부제의 세균에 대한 방부력 평가는, 상기 초피나무 열매 추출물, 할미꽃 추출물 및 우스니아 추출물을 동일 질량비로 포함하는 시료에 세균으로 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 에스케리치아 콜리(Escherichia coli), 및 슈도모나스 아에루기노사(Paeudomonas aeruginosa) 3가지의 혼합균액을 시료 1g 당 16X106개가 되도록 접종을 하고, 접종한 날부터 1일, 3일, 5일, 7일, 14일, 21일, 28일 간격으로 시료를 1g씩 취하여 생균 수를 측정하였으며, 그 결과는 아래의 [표 7]과 같다.
| 접종균수 (개/g) |
기간 경과에 따른 생균수(개/g) | ||||||
| 1일 | 3일 | 5일 | 7일 | 14일 | 21일 | 28일 | |
| 1.6×106 | 2.2×104 | 1.4×103 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 |
상기 천연방부제가 방부력에 있어 유효성이 있으면, 세균은 접종 7일 이내에 99.9% 이상 균수가 감소해야 하며, 시험기간 동안 증식이 없어야 한다.
본 발명의 실시예에 의한 천연방부제에 있어서도, 위의 [표 7]에서 보는 바와 같이, 세균 접종일로부터 5일이내에 생균수가 99.9%이상 감소하였고, 향후 증식이 일어나지 않았다. 즉, 본 발명에 의한 상기 천연방부제는 유효한 방부효과가 있는 것으로 나타났다.
또한, 초피나무 열매 추출물, 할미꽃 추출물 및 우스니아 추출물을 동일 질량비로 포함하여 이루어진 상기 천연방부제는 유효한 방부효과를 나타냄으로써 기존 화학 방부제를 대신할 수 있는 것으로 평가되었다.
[실험예 8] 천연방부제의 아이스플랜트 발효물의 활성 저해 평가
천연 추출물들로 이루어진 천연방부제를 더 포함하는 경우, 천연 추출물의 발효물인 아이스플랜트 발효물의 DPPH radical 소거활성, MMP-1 생성 억제, 세포내 콜라겐 생성 등의 활성을 저해하는지에 대해 평가하였다.
이때, 상기 아이스플랜트 발효물은 상기 [실시예 1]에 의해 추출 및 발효된 발효물이고, 상기 천연방부제는 상기 [실시예 2]에 의해 추출된 초피나무 열매 추출물, 할미꽃 추출물 및 우스니아 추출물을 동일 질량비로 혼합한 것이다.
또한, 상기 아이스플랜트 발효물의 중량 대비 상기 천연방부제의 중량을 달리하여 혼합하였으며, 상기 아이스플랜트 발효물과 상기 천연방부제가 혼합된 시료의 농도를 100㎍/㎖로 하여, DPPH radical 소거활성, MMP-1 생성 억제, 세포내 콜라겐 생성에 대해 측정하였다,
또한, 상기 DPPH radical 소거활성은 위의 [실험예 2]에서 측정한 방법과 동일한 방법으로 측정하였으며, MMP-1 생성 억제 활성은 위의 [실험예 5]에서 측정한 방법과 동일한 방법으로 측정하였으며, 세포내 콜라겐 생성 활성은 위의 [실험예 6]에서 측정한 방법과 동일한 방법으로 측정하였다. 그 결과는 아래의 [표 8]과 같다.
| 혼합비율 (A:B)* |
DPPH radical 소거능 (%) |
MMP-1 생성 억제율 (%) |
프로콜라겐 생합성촉진효과 (%) |
| 1:0 | 12.02 | 87.5 | 49.2 |
| 30:1 | 12.02 | 87.5 | 49.2 |
| 20:1 | 12.01 | 87.4 | 49.2 |
| 10:1 | 12.02 | 87.6 | 49.2 |
| 5:1 | 11.99 | 87.6 | 49.1 |
| 3:1 | 11.97 | 87.8 | 49.1 |
| 1:1 | 11.97 | 87.7 | 49.1 |
*:A(아이스플랜트 발효물)과 B(천연방부제)의 혼합비, 시료의 농도:100㎍/㎖
위의 [표 8]에서 볼 수 있는 바와 같이, 상기 초피나무 열매 추출물, 할미꽃 추출물 및 우스니아 추출물을 혼합한 천연방부제에 의해 상기 아이스플랜트 발효물의 DPPH radical 소거활성, MMP-1 생성 억제 및 세포내 콜라겐 생성 등의 활성이 저해되지 않은 것으로 나타났다.
즉, 상기 아이스플랜트 발효물에 상기 천연방부제를 더 포함하더라도, 상기 아이스플랜트 발효물에 의한 항산화 효과, 주름 예방 및 개선효과를 저해하지 않으면서도, 상기 천연방부제를 사용함으로써 저자극성의 화장료를 제공할 수 있을 것으로 기대할 수 있다.
또한, 상기 천연방부제는 상기 초피나무 열매 추출물, 할미꽃 추출물 및 우스니아 추출물을 혼합한 것으로, 원료의 수급이나 가격변동에 따라 상기 천연방부제을 구성하는 추출물의 함량비를 변화시켜 탄력적으로 대응하면서도 제품의 전성분에 따른 일관성을 유지할 수 있을 것으로 기대된다.
[실시예 3] 로션 타입의 화장료 조성물의 제조
아래 [표 9]의 조성으로 제형된 아이스플랜트 발효물과 캐리어 펩타이드를 포함하는 로션 타입의 화장료 조성물을 통상의 방법에 따라 제조하였다.
| 성분 | 함량(중량%) |
| Water | 잔량 |
| Glycerin | 4 |
| Sodium hyaluronate | 1 |
| Caprylic/Capric triglyceride | 3 |
| Olive oil | 2 |
| Lactobacillus Mesembryanthemum crystallinum Lysate | 2.5 |
| carrier peptide | 0.02 |
| Niacinamide | 2 |
| Cetearyl olivate, Sorbitan olivate | 3 |
| Fructan | 0.20 |
| Polyglutamic acid | 0.01 |
| Penetylene glycol | 0.50 |
| Galactomyces ferment filtrate | 1 |
| Bifida ferment filtrate | 1 |
| rh-Oligopeptide-1 | 0.02 |
| Copper-tripeptide-1 | 0.02 |
| Argania spinosa kernel oil | 1 |
| Golden simmondsia chinensis oil | 1 |
| Macadamia Integrifolia seed oil | 1 |
| Squalane | 0.3 |
| Isoamyl laurate | 0.5 |
| Cetearyl alcohol | 1 |
| Glyceryl sterate | 0.5 |
| 1,2-Hexanediol | 2 |
| Zanthoxylum piperitum fruit extract | 1 |
| Pulsatilla koreana extract | 1 |
| Usnea Barbata extract | 1 |
| Betain | 1 |
| Adenosine | 0.08 |
| Xanthan Gum | 0.2 |
| Fragrance | 0.20 |
| 합계 | 100 |
[실험예 9] 로션 타입 화장료의 안정성 평가
위의 [표 9]의 조성으로 제형된 로션 타입의 화장료 조성물에 대해 온도변화에 따른 안정성을 시험하였다. 위의 [표 9]의 조성으로 제형된 로션 타입의 화장료 시료(시료 5)를 불투명 초자 용기에 담아 45℃로 일정하게 유지되는 항온조에서 1주동안 보관하였으며, 또한 불투명 초자 용기에 담아 4℃로 일정하게 유지되고 완전히 차광된 냉장고 내에서 1주동안 보관한 후 변색정도를 비교 측정하였다.
또한, 대조군으로 위의 [표 9]의 조성 중 아이스플랜트 발효물를 제외하고 정제수를 추가로 첨가하여 로션 타입으로 제형된 화장료에 대해 상기와 동일한 방법으로 변색정도를 측정하였으며, 이때 화장료의 변색 정도에 대한 평가는 아래 [표 10]의 화장료 변색 평가 기준에 따라 6등급으로 분류하여 평가하였으며, 그 결과는 아래의 [표 11]과 같다.
| 점수 | 변색정도 |
| 0 | 변화 없음 |
| 1 | 극히 조금 변함 |
| 2 | 조금 변함 |
| 3 | 조금 심하게 변함 |
| 4 | 심하게 변함 |
| 5 | 극히 심하게 변함 |
| 온도 | 변색정도 평가점수 | |
| 시료 5 | 대조군 | |
| 4℃ | 0 | 0 |
| 45℃ | 0 | 0 |
위의 [표 11]에서 보는 바와 같이, 위의 [표 9]의 조성으로 제형된 아이스플랜트 발효물를 포함하는 로션 타입의 화장료(시료 5) 및 위의 [표 9]의 조성 중 아이스플랜트 발효물를 제외하고 정제수를 추가한 화장료(대조군) 모두, 4℃와 45℃에서 변색이 일어나지 않았다.
즉, 아이스플랜트 발효물를 포함하는 화장료의 경우 온도변화에 대해 안정성이 있는 것으로 나타났다.
[실험예 10] 피부 첩포에 의한 피부자극 평가
아이스플랜트 발효물과 캐리어 펩타이드를 포함하는 화장료 조성물을 피부에 적용하였을 때, 피부에 작용하는 자극을 확인하기 위해 피부 첩포에 의한 자극에 대해 시험을 하였다.
과거력상 피부자극에 과민반응을 보인 적이 없으며, 현재 피부병 내지 피부 알레르기 증상이 없는 20~60대 남녀 33명을 시험대상으로 하였으며, [표 9]의 조성으로 제형된 아이스플랜트 발효물과 캐리어 펩타이드를 포함하는 로션 타입의 화장료(시료 5)를 시험대상자의 피부에 첩포하여 실시하였다.
시험방법은 우선 시험대상자의 시험부위를 70% 에탄올로 닦아 낸 뒤 건조시키고, 시료 5로 준비된 시험물질을 IQ UltimateTM에 20㎕에 로딩하여 피부에 고정한 후 24시간 동안 피부에 부착하였다. 첩포 제거 30분 후 시험부위를 관찰하여 홍반 및 부종 유무에 대해 피부과 전문의에 의한 1차 육안평가를 진행하였고, 첩포 제거 24시간 후에 다시 2차 육안평가를 진행하였다.
육안평가는 PCPC(Personal Care Products Council) Safety Testing Guidelines과 ICDRG(International Contact Dermatitis Research Group) criteria를 기반으로 평가하였으며, 피부 반응의 육안 평가기준 및 점수는 [표 12]과 같다.
| 기호 | 점수 | 피부반응 |
| - | 0 | 무반응, 정상피부 |
| + | 1 | 희미한 또는 가벼운 홍반 |
| ++ | 2 | 경계가 뚜렷하나 악?h 홍반, 부종 및 구진 |
| +++ | 3 | 뚜렷한 홍반, 구진 및 소수포 |
| ++++ | 4 | 심한 홍반 및 수포형성 |
또한, 육안평가 결과를 바탕으로 아래의 식(4)의 피부자극지수 계산 공식에 따라 피부 자극 지수를 산출하였다.
또한, 위의 식(4)에 의해 산출된 피부자극지수를 바탕으로, 아래 [표 13]의 피부 자극 지수표를 참조하여 시험 제품의 피부 자극을 평가하였으며, 피부 자극 평가결과는 아래의 [표 14]와 같다.
| 피부 자극 지수 | 피부 자극 범위 |
| 0.00 ~ 0.25 | 저자극 범위 |
| 0.26 ~ 1.00 | 경자극 범위 |
| 1.01~ 2.50 | 중자극 범위 |
| 2.51~ 4.00 | 강자극 범위 |
| 시험물질 | 육안평가 | 피부 자극 지수 | 피부 자극 판정 | |
| 1차 | 2차 | |||
| 시료 5 | 1 | 0 | 0.02 | 저자극 범위 |
위의 [표 14]에서 보는 바와 같이, 시료 5에 대한 위의 식(4)에 의해 산출된 피부 자극 지수는 0.02로 나타났으며, 이를 위의 [표 13]의 <피부 자극 지수표>에 따라 판정한 결과 저자극 범위에 속하는 것으로 판정되었다.
따라서, 본 발명에 의한 아이스플랜트 발효물과 캐리어 펩타이드를 포함하는 로션 타입의 화장료의 경우, 저자극성으로 피부가 약하거나 민감한 피부에도 사용 가능한 것으로 나타났다.
[실험예 11] 눈가 주름 개선 임상시험
아이스플랜트 발효물과 캐리어 펩타이드를 포함하는 화장료 조성물을 피부에 적용하였을 때의 피부노화 개선 효과를 확인하기 위하여 눈가 주름 개선 임상시험을 수행하였다.
과거력상 피부자극에 과민반응을 보인 적이 없으며, 현재 피부병 내지 피부 알레르기 증상이 없는 20~60대 여성 22명을 시험대상으로 하였으며, [표 9]의 조성으로 제형된 아이스플랜트 발효물과 캐리어 펩타이드를 포함하는 로션 타입의 화장료(시료 5)를 4주동안 1일 2회(아침, 저녁 세안 후) 적당량을 덜어 눈가를 포함한 안면부에 사용하도록 하여 눈가 주름 개선에 대한 효과를 평가하였다.
눈가 주름 측정은 PRIMOS(Phaseshift Rapid In-vivo Measurement of Skin)를 이용하여 상기 화장료(시료 5)를 사용하기 전과 4주동안 사용 후에 각각 연구대상자의 안면부(눈가 부위)를 측정하여 분석하였다. 분석값은 평균 거칠기를 의미하는 Ra(Arithmetic roughness average) 값을 사용하였다. PRIMOS로 측정된 주름의 거칠기 단면 peak에 대한 산술 평균값으로 Ra값이 작아질수록 피부 주름의 깊이가 낮아져 주름이 개선됨을 의미하며, 단위는 ㎛이다.
| 측정 시점 | Ra(평균 ±표준편차) | p-value* |
| 사용 전 | 20.40 ±2.82 | < 0.001 |
| 4주 사용 후 | 19.52 ±2.92 |
*p-value: p<0.05 by Paired t-test
위의 [표 15]에서 보는 바와 같이, 아이스플랜트 발효물과 캐리어 펩타이드를 포함하는 로션 타입의 화장료(시료 5)를 사용한 경우, 화장료를 사용하기 전보다 4주동안 상기 화장료를 사용한 후에 평균 거칠기를 의미하는 Ra값에 있어서 통계적으로 유의한 수준에서 눈가 주름 개선 효과가 있는 것으로 나타났다.
[실험예 12] 피부보습 임상시험
아이스플랜트 발효물과 캐리어 펩타이드를 포함하는 화장료 조성물을 피부에 적용하였을 때의 피부노화 개선 효과를 확인하기 위한 피부보습 임상시험을 수행하였다.
과거력상 피부자극에 과민반응을 보인 적이 없으며, 현재 피부병 내지 피부 알레르기 증상이 없는 20~60대 여성 22명을 시험대상으로 하였으며, [표 9]의 조성으로 제형된 아이스플랜트 발효물과 캐리어 펩타이드를 포함하는 로션 타입의 화장료(시료 5)를 4주동안 1일 2회(아침, 저녁 세안 후) 적당량을 덜어 눈가를 포함한 안면부에 사용하도록 하고 피부 보습 개선에 대한 효과를 평가하였다.
수분 측정은 Epsilon E100을 사용하여 상기 화장료(시료 5)를 사용하기 전과 4주 사용동안 후에 연구대상자의 안면부(볼 부위)를 측정하였다. 측정값은 피부 평균 유전율을 나타내는 ε값을 사용하였으며, 측정결과는 아래의 [표 16]과 같다.
| 측정 시점 | ε(평균 ±표준편차) | p-value* |
| 사용 전 | 17.18 ±3.94 | < 0.001 |
| 4주 사용 후 | 21.75 ±4.45 |
*p-value: p<0.05 by Paired t-test
위의 [표 16]에서 보는 바와 같이, 아이스플랜트 발효물과 캐리어 펩타이드를 포함하는 로션 타입의 화장료(시료 5)를 사용한 경우, 상기 화장료를 사용하기 전에 비해 상기 화장료를 4주동안 사용한 후에 피부 평균 유전율에 있어서 26.2%로 통계적으로 유의하게 (p<0.05) 증가된 것으로 나타났다.
즉, 본 발명에 의한 아이스플랜트 발효물과 캐리어 펩타이드를 포함하는 로션 타입의 화장료의 경우 피부 보습에 효과가 있다는 점에서 피부노화 개선에 효과적인 것으로 볼 수 있다.
Claims (5)
- 캐리어 펩타이드와 아이스플랜트 발효물을 포함하되, 상기 캐리어 펩타이드는 화장료 활성물질의 피부 투과를 촉진시키는 펩타이드인 것으로 특징으로 하는 피부노화 개선용 화장료 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 케리어 펩타이드는 Phe-Cys-Ile-Gly-Arg-Leu의 아미노산 서열을 가지는 펩타이드로서 상기 아미노산 서열 말단의 루이신의 카르복실기 -COOH가 -CONH2로 변형된 펩타이드인 것을 특징으로 하는 피부노화 개선용 화장료 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 아이스플랜트 발효물은 아이스플랜트 추출물에 락토바실러스 플란타럼와 락토바실러스 파라카제이를 접종하여 발효시킨 발효물인 것을 특징으로 하는 피부노화 개선용 화장료 조성물. - 제3항에 있어서,
상기 접종은 상기 락토바실러스 플란타럼와 락토바실러스 파라카제이를 MRS 액체배지에서 35~39℃, 100~140rpm으로 4~20시간 진탕 배양하여 수득한 액체배양액을 상기 아이스플랜트 추출물에 1 내지 4%(v/v)로 첨가하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 피부노화 개선용 화장료 조성물. - 제3항에 있어서,
상기 발효는 35~39℃, 100~140rpm으로 12~24시간 진탕하여 발효한 것이고,
상기 아이스플랜트 발효물은 상기 진탕하여 발효한 액을 여과하여 수득한 것을 특징으로 하는 피부노화 개선용 화장료 조성물.
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| KR101470793B1 (ko) | 2014-06-30 | 2014-12-08 | 순천향대학교 산학협력단 | 흡수촉진제로서의 펩타이드와 이를 포함하는 조성물 |
| KR20190046246A (ko) * | 2017-10-25 | 2019-05-07 | 에이앤펩주식회사 | 피부노화방지 및 피부주름개선용 메셈브리안테뭄속 아이스플랜트와 콜라겐의 혼합 발효물, 발효 용해물의 제조방법 및 이를 포함하는 화장료 조성물 |
| KR20190064306A (ko) * | 2017-11-30 | 2019-06-10 | 에이앤펩주식회사 | 기능성 펩타이드와 콜라겐 발효물을 포함하는 피부 노화 완화용 화장료 조성물 |
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-
2021
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