KR20220097658A - 서양 유채의 생물전환 추출물을 포함하는 항균 조성물 - Google Patents

서양 유채의 생물전환 추출물을 포함하는 항균 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 서양 유채의 생물전환 추출물을 함유하는 항균 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는, 서양 유채에 생물전환 기법(bio-renovation)을 적용하여 제조된 추출물을 포함하는 광범위 항균 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 광범위 항균 조성물의 유효성분으로서의 서양 유채 생물전환 추출물은 본 명세서의 실시예를 통해 증명된 바와 같이 항균용 약학 조성물, 건강 기능 식품, 화장료 조성물, 동물 사료 조성물, 식품, 화장품 또는 동물 사료용 첨가물, 각종 세정제, 각종 청결제 및 항균 티슈 등의 용도로 사용할 수 있는 뛰어난 효과가 있다. 뿐만 아니라, 본 발명의 서양 유채의 생물전환 추출물은 열 안정성이 우수하고, pH 2의 산성조건 및 혈장 내에서도 활성의 손실이 나타나지 않아, 액상, 크림, 분말, 환, 정 등의 다양한 형태로 손쉽게 가공될 수 있어 제약 산업, 식품 산업, 축산업, 보건 산업 및 화장품 산업상 매우 유용하게 이용될 수 있다.

Description

서양 유채의 생물전환 추출물을 포함하는 항균 조성물{ANTIMICROBIAL COMPOSITION COMPRISING THE BIO RENOVATION EXTRACT OF BRASSICA NAPUS}
본 발명은 서양 유채의 생물전환 추출물을 함유하는 항균 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는, 서양 유채에 생물전환 기법(bio-renovation)을 적용하여 제조된 추출물을 포함하는 광범위 항균 조성물에 관한 것이다.
세균성 감염 질환은 병원성 세균, 바이러스, 곰팡이, 기생충 등이 인체에 침입해 발병하는 것으로, 예를 들면, 결핵, 인플루엔자, 장티푸스, 콜레라, 인후염, 폐렴 등이 있다. 세균성 감염 질환은 현재 의학의 발달로 항생제와 예방접종을 통해 어느 정도 치료가 가능해졌으나, 점차 항생제 내성 세균의 출현과 증가 등의 이유로 항생제 사용의 어려움이 발생하고 있다.
세균의 항생제 내성은 나라에 따라서 정도의 차이는 있으나 이미 세계적으로 심각한 문제가 되었다. 1992년에 당면한 항생제 내성 문제가 심각하였으며, 대부분의 병원성 세균이 기본에 사용하여 왔던 항생제에 내성인 경우가 흔하다고 하였다. 최근 수년 동안 주요 내성균의 비율이 증가하고 있으며, 특히, 우리나라의 항생제 내성문제는 매우 심각하다고 할 수 있다.
항생제 내성 세균의 출현과 증가는 항생제 사용 때문임이 인정되고 있으나, 항생제는 세균성 감염 질환의 가장 중요한 치료제이므로 사용하지 않을 수 없으며, 무엇보다 환자의 항균제 사용 요구 및 세균 감염이 있음에도 이를 알지 못하고 항균제를 투여하지 않음으로써 환자의 상태를 악화시킬 수 있는 위험 때문에 항생제를 사용하여야 한다.
포도상구균(Staphylococcus aureus)은 환자에서 흔히 분리되는 중요한 병원균으로, 호흡기 감염 외에도 균혈증, 골수염, 수막염 등의 감염을 일으키며, 가장 흔한 감염증은 피부 감염이다. 포도상구균 중에 페니실린(penicillin)에 감수성인 균주가 드물어진 것은 이미 오래되었고, 현재는 메티실린(methicillin) 내성 포도상구균(MRSA)는 거의 모두가 원내 감염균으로 그 비율은 나라에 따라서 매우 다르나, 국내의 경우 MRSA 비율은 입원 환자에서 분리되는 포도상구균 중의 50%를 1990년대 초반에 이미 넘었고, 2002년 Korean Nationwide Surveillance of Antimicrobial Resistance(KONSAR) 그룹 조사에 의하면 국내 대부분의 병원에서 분리된 포도상구균 중의 비율은 67%이었다. 그 밖의 비병원성으로, 결막염, 홍채염 등 만성화농증을 일으키는 고초균(Bacillus subtilis) 및 식중독 등을 일으키는 대장균(E. coil)의 경우도 내성률이 꾸준히 증가하는 추세로(월간의약정보(최신 감염질환의 이해), pp.2-31, 2005), 이러한 부작용이 없는 새로운 천연물 항생제의 개발이 시급하다.
에스케리치아 콜라이(Escherichia coli)는 사람이나 포유류의 창자 속에 상주하는 세균의 하나로, 좁은 뜻으로는 장내세균과 에스케리치아에 속하는 세균을 말하며, 넓은 뜻으로는 시트로박터·클레브시엘라·엔테로박터 등을 포함한 3가지 대장균군을 말한다. 좁은 뜻의 대장균은 너비 0.5~0.7μm, 길이 2~3μm의 그람 음성인 간균으로 주모성이지만, 균주에 따라서는 편모가 없는 것도 있다. 보통의 배양기에서 잘 발육하며, 평활형이고 불투명하며 백색의 군락을 형성한다.
대장균은 포도당, 젖당, 만니톨을 분해하며(때로는 설탕과 살리신도 분해한다), 산과 가스를 발생한다. 병원대장균으로서는 O-55, O-111, O-124 등이 보고되어 있다. 일반적으로 대장균은 포유동물의 장관 내의 상재균으로서, 숙주에 대해서는 의미 있는 존재가치를 지니고 있다. 즉 전술한 대장균의 분해력은 장관 내에서 발휘되며, 비타민의 생성 등과도 관련된다. 또한 대장균군은 분변 오염의 척도로서 음료수나 식품, 나아가서는 해수욕장이나 공중목욕탕 등의 위생검사에 흔히 기준이 된다. 이것은 분변오염이 있으면 소화기계의 전염병균인 적리균이라든지 장티푸스균 외에도 식중독균인 살모넬라균과 병원대장균의 존재, 또는 그러한 의심이 제기되기 때문이다. 그러나 대장균군 자체는 유해균은 아니며, 장관내 이외의 자연계에서는 증식이 되지 않기 때문에 오염지표로 사용되고 있다. 또한, 에스케리치아 콜라이는 요도계감염, 방광염, 신장감염, 요도감염, 위장관염, 복막염, 맹장염, 폐렴, 수막염, 뼈나 관절에 감염 등과 관련이 있는 것으로 알려져 있다.
바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)는 흔히 '고초균'이라고도 하며 주로 토양 속에서 서식하고, Bacillus 속에 속하는 균으로서 그람 양성(Gram positive)균이다. 호기성이며, 막대기 모양 또는 원통형 세균으로 그 크기와 길이는 다양하고 양 끝의 모양도 일정하지 않으며 편모나 포자를 가지고 있기도 하다. 균체의 한끝에 1~3개, 또는 균체의 주위에 다수의 편모가 있어 운동할 수 있는 것도 있고, 균체의 한 끝 또는 중앙부에 포자를 가지고 있는 간균도 있다. 세균의 포자는 세균 균체가 휴식상태에 있는 부분으로 생활현상은 영위하지 않지만, 외부 환경의 영향에 대해서는 저항력이 강하다. 따라서 나쁜 생활조건 아래서도 오래 생존할 수 있고, 적당한 환경에서는 발아해서 고유의 세균 균체로 된다. 즉, 세균의 포자는 세균의 종자와 같은 것이다. 또한 한국인에게는 청국장의 발효 미생물로서 관계가 깊을 뿐만 아니라 여러 미생물 제제로서도 이용되고 있다. 결막염, 홍채염 등과 관련이 있는 것으로 알려져 있다.
칸디다 알비칸스(Candida albicans)는 구강 및 위장관에서 흔히 관찰되는 대표적인 진균으로, 정상인의 구강에서 50%, 분변에서 90% 발견된다. C. albicans는 대부분의 경우, 임상적으로 의의가 없는 비특이적 병변을 유발하나, 환자의 면역력에 따라 다양한 질환을 유발할 수 있다. C. albicans는 위장관 어디에서나 발견될 수 있으나, 인후, 식도에서 가장 흔히 병변을 일으키며, 대부분 무증상이다. 드물게 위, 십이지장에도 진균감염을 유발하나, 대부분 양성 혹은 악성 궤양에 이차적으로 전이 증식을 일으킨 병변으로, 임상적 의의가 적다고 알려져 있다.
스트렙토코커스 뮤탄스(Streptococcus mutans)는 정상인의 구강 내에 존재하는 박테리아 종으로, 에나멜 손상의 초기 단계와 관련이 있으며, 충치의 주요 원인균이다. 당을 분해하여, 불용성인 Dextran을 합성하며, Dextran은 Mutans를 비롯한 구강세균을 응집하여, 프라그를 형성하고, 프라그의 대사물질(산)에 의해 에나멜질 탈회, 충치를 발생시킨다.
스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus)는 그람 양성이며 구균으로, 병원에서 기회적 감염균으로 문제가 되고 있으며, 최근 MRSA, VRSA으로 대표적인 슈퍼박테리아로 지명되고 있다. 다양한 독소와 다양한 감염부위로 염증, 괴사를 유발하는 병원균으로 페니실린에 민감한 그람양성균인데도 불구하고 내성을 갖는다. 성인의 20~30%에서 코나 피부에서 확인이 되지만 대부분 경우는 문제를 일으키지 않으나, 피부의 손상이나 부상을 통해 방어벽이 무너지게 되면서 감염이 일어나게 된다. 농가진, 봉소염, 열상피부증후군, 유방염, 균혈증, 포도상구균성패혈증, 포도상구균성폐염, 심내막증 등과 관련이 있으며, 포도상구균군으로 오는 식중독은 메스꺼움, 구토, 설사, 탈수를 일으키는 장질환을 유발하게 된다.
이와 같이 병원성 미생물 특히 항생제 다중 내성 병원 미생물에 대한 위험성은 널리 알려져 있으나, 이를 제어하기 위한 효과적인 천연물 기원의 항균제의 개발 성과는 여전히 미미한 실정이다.
KR 10-1901451 B KR 10-2091937 B
본 발명은 상기와 같은 종래 기술의 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로서, 본 발명에서 해결하고자 하는 과제는 서양 유채의 생물전환 추출물을 포함하는 광범위 항균 조성물을 제공하고자 하는 것이다.
상기와 같은 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 서양 유채의 생물전환 추출물을 포함하는 항균 조성물을 제공한다.
상기 서양 유채는 서양 유체의 열수 추출물인 것이 바람직하다.
상기 생물전환은 바실러스 아밀로리퀴파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens)를 이용하는 것이 바람직하다.
상기 항균 조성물에는 토란 뿌리의 생물전환 추출물을 더 포함하는 것이 바람직하다.
상기 토란 뿌리는 토란 뿌리의 열수 추출물인 것이 바람직하다.
상기 생물전환은 바실러스 아밀로리퀴파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens)를 이용하는 것이 바람직하다.
상기 항균 조성물은 약학 조성물, 건강 기능 식품, 화장료 조성물, 동물 사료 조성물, 식품 첨가물, 화장품 첨가물, 동물 사료용 첨가물, 세정제, 청결제 및 항균 티슈로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것이 바람직하다.
본 발명의 광범위 항균 조성물의 유효성분으로서의 서양 유채 생물전환 추출물은 본 명세서의 실시예를 통해 증명된 바와 같이 항균용 약학 조성물, 건강 기능 식품, 화장료 조성물, 동물 사료 조성물, 식품, 화장품 또는 동물 사료용 첨가물, 각종 세정제, 각종 청결제 및 항균 티슈 등의 용도로 사용할 수 있는 뛰어난 효과가 있다. 뿐만 아니라, 본 발명의 서양 유채의 생물전환 추출물은 열 안정성이 우수하고, pH 2의 산성조건 및 혈장 내에서도 활성의 손실이 나타나지 않아, 액상, 크림, 분말, 환, 정 등의 다양한 형태로 손쉽게 가공될 수 있어 제약 산업, 식품 산업, 축산업, 보건 산업 및 화장품 산업상 매우 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 서양 유채의 생물전환 추출물의 칸디다균에 대한 저해율을 나타낸 그래프이다.
도 2는 3인의 시험대상자의 손바닥에 칸디다균을 도포하고, 본 발명의 서양 유채 생물전환 추출물이 함침된 항균 티슈를 사용한 후의 손바닥의 세균집락 이미지를 나타낸 것이다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명의 발명자들은 천연물로부터 수득되는 생물전환 추출물을 대상으로 항세균 및 항진균 효능을 검정하기 위하여, 일정 방법으로 다수의 천연 식물체 추출물에 생물전환용 균주를 접종하여 이로부터 생물전환 추출물을 조제하고, 이의 항균 활성을 평가한 결과, 서양 유채 생물전환 추출물을 광범위 항균 활성 성분으로 회수하였으며, 상기 추출물은 인간 적혈구에 대해 용혈 활성은 전혀 나타내지 않으면서도, 열 안정성과 산 안정성이 우수한 특징을 가짐을 확인함으로서 상기 서양 유채 생물전환 추출물을 광범위 항균 조성물로 활용하고자 하였다.
구체적으로, 본 발명자들은 민간 및 한방에서 혈관 및 순환계, 소화계, 신진대사계, 노화, 당뇨, 항균활성 등 다양한 질환에 효과가 있다고 알려진 식물 기원의 천연 추출물들을 조제하고 이로부터 생물전환 추출물을 조제한 후, 이들의 항세균 및 항진균 활성을 평가한 결과, 최종적으로 서양 유채 생물전환 추출물에서 실제적으로 이용 가능한 강력하면서도 광범위한 항세균 및 항진균 활성을 나타냄을 확인하였다.
특히, 상기 서양 유채 생물전환 추출물에 토란 뿌리 생물전환 추출물을 더 추가하는 경우, 그람 양성 세균, 그람 음성 세균 및 진균에 대해 강력한 항균력을 나타내어, 이를 다양한 세균 및 진균 감염병에 대한 광범위 항균제 등으로 개발될 수 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명은 서양 유채의 생물전환 추출물을 포함하는 항균 조성물을 제공한다.
상기 서양 유채는 서양 유체의 열수 추출물인 것이 바람직하다.
상기 생물전환은 바실러스 아밀로리퀴파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens)를 이용하는 것이 바람직하다.
상기 항균 조성물에는 토란 뿌리의 생물전환 추출물을 더 포함하는 것이 바람직하다.
상기 토란 뿌리는 토란 뿌리의 열수 추출물인 것이 바람직하다.
상기 생물전환은 바실러스 아밀로리퀴파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens)를 이용하는 것이 바람직하다.
상기 항균 조성물은 약학 조성물, 건강 기능 식품, 화장료 조성물, 동물 사료 조성물, 식품 첨가물, 화장품 첨가물, 동물 사료용 첨가물, 세정제, 청결제 및 항균 티슈로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것이 바람직하다.
이하에서는, 본 발명의 서양 유채 생물전환 추출물 및 토란 뿌리 생물전환 추출물의 제조 방법 및 효능 실험 등을 보다 구체적으로 설명한다.
본 발명의 서양 유채 생물전환 추출물은 (A) 건조된 서양 유채에 추출용매를 가하여 서양 유채 추출물을 제조하는 단계; (B) 상기 서양 유채 추출물을 포함하는 배지에 바실러스 아밀로리퀴파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens)를 접종하여 30~40℃에서 60~80시간 동안 배양하는 단계; 및 (C) 배양이 끝난 후, 5,000~6,000rpm에서 10~15분 동안 원심분리를 진행하고, 상등액을 수거하여 이를 감압농축 등의 방법으로 서양 유채 생물전환 추출물을 제조하는 단계로부터 제조될 수 있다.
상기 (A) 단계에서 추출은 건조된 서양 유채 전초에 5~10배 중량의 정제수를 가하여 100~125℃에서 2~3회 추출하는 것이 바람직하다.
상기 (B) 단계에서 생물전환을 위한 미생물은 바실러스 아밀로리퀴파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens)를 사용하며, 상기 균주는 미생물자원센터에서 분양받을 수 있다(KCTC 13588). 상기 균주의 전배양 배지는 Nutrient broth(소고기 추출물(beef extract)) 3.0g/L 및 펩톤((peptone) 5.0 g/L)일 수 있으며, 최적 생육 조건에 맞추어 20시간 동안 전배양할 수 있다. 20시간 배양 후, 5,000rpm에서 10분동안 원심분리하여 미생물 펠렛(pellet)을 수득하고, 수득한 미생물 펠렛을 PG 버퍼(50mM 인산염(phosphate)(pH7.2) 및 2% 글리세롤)로 세척하여, PG 버퍼 5ml에 현탁시킨 후, 현탁액과 서양 유채 추출물을 혼합하여 배양할 수 있다.
상기 (C) 단계에서 수득된 배양액을 여과 및 농축하여 추출물을 제조할 수 있으며, 추출에 사용되는 유기용매는 열수, 메탄올, 에탄올, 헥센, 에틸아세테이트, 부탄올 등일 수 있으나, 열수로 추출하는 것이 바람직하다.
본 발명의 서양 유채 생물전환 추출물은 감압건조 및 동결건조, 또는 분무건조 등과 같은 통상적인 분말화 과정을 거쳐 분말로 제조될 수 있다. 본 발명의 서양 유채 생물전환 추출물은 혈장 내의 분해효소에 분해되지 않으며, 100℃의 열처리와 pH 2의 인체 위 내의 pH에서도 항균 활성을 유지한다.
또한, 본 발명의 토란 뿌리 생물전환 추출물은 (A) 건조된 토란 뿌리에 추출용매를 가하여 토란 뿌리 추출물을 제조하는 단계; (B) 상기 토란 뿌리 추출물을 포함하는 배지에 바실러스 아밀로리퀴파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens)를 접종하여 30~40℃에서 60~80시간 동안 배양하는 단계; 및 (C) 배양이 끝난 후, 5,000~6,000rpm에서 10~15분 동안 원심분리를 진행하고, 상등액을 수거하여 이를 감압농축 등의 방법으로 토란 뿌리 생물전환 추출물을 제조하는 단계로부터 제조될 수 있다.
상기 (A) 단계에서 추출은 건조된 토란 뿌리에 5~10배 중량의 정제수를 가하여 100~125℃에서 2~3회 추출하는 것이 바람직하다.
상기 (B) 단계에서 생물전환을 위한 미생물은 바실러스 아밀로리퀴파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens)를 사용하며, 상기 균주는 미생물자원센터에서 분양받을 수 있다(KCTC 13588). 상기 균주의 전배양 배지는 Nutrient broth(소고기 추출물(beef extract)) 3.0g/L 및 펩톤((peptone) 5.0 g/L)일 수 있으며, 최적 생육 조건에 맞추어 20시간 동안 전배양할 수 있다. 20시간 배양 후, 5,000rpm에서 10분동안 원심분리하여 미생물 펠렛(pellet)을 수득하고, 수득한 미생물 펠렛을 PG 버퍼(50mM 인산염(phosphate)(pH7.2) 및 2% 글리세롤)로 세척하여, PG 버퍼 5ml에 현탁시킨 후, 현탁액과 토란 뿌리 추출물을 혼합하여 배양할 수 있다.
상기 (C) 단계에서 수득된 배양액을 여과 및 농축하여 추출물을 제조할 수 있으며, 추출에 사용되는 유기용매는 열수, 메탄올, 에탄올, 헥센, 에틸아세테이트, 부탄올 등일 수 있으나, 열수로 추출하는 것이 바람직하다.
본 발명의 토란 뿌리 생물전환 추출물은 감압건조 및 동결건조, 또는 분무건조 등과 같은 통상적인 분말화 과정을 거쳐 분말로 제조될 수 있다. 본 발명의 토란 뿌리 생물전환 추출물은 혈장 내의 분해효소에 분해되지 않으며, 100℃의 열처리와 pH 2의 인체 위 내의 pH에서도 항균 활성을 유지한다.
상기와 같이 제조된 서양 유채 생물전환 추출물 및 토란 뿌리 생물전환 추출물은 조성물 중 0.01~50중량%로 포함될 수 있다.
본 발명의 서양 유채 생물전환 추출물은 강력한 항균 활성을 나타내어, 병원성 세균의 감염의 예방 또는 치료와 관련되는 약학 조성물, 건강 기능 식품, 화장료 조성물, 동물 사료 조성물, 식품, 화장품, 동물 사료용 첨가물 및 항균 티슈와 같은 각종 청결제의 소재로 사용될 수 있다.
바람직한 구체예로서, 본 발명의 항균 조성물은 약학적 조성물의 용도로서 적용될 수 있다.
상기 약학적 조성물은 각각의 사용 목적에 맞게 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구 제형, 멸균 주사용액의 주사제 등 다양한 형태로 제형화하여 사용할 수 있으며, 경구 투여하거나 정맥 내, 복강 내, 피하, 직장, 국소 투여 등을 포함한 다양한 경로를 통해 투여될 수 있다. 이러한 약학적 조성물에는 추가적으로 담체, 부형제 또는 희석제 등이 더 포함될 수 있으며, 포함될 수 있는 적합한 담체, 부형제 또는 희석제의 예로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리쓰리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 비정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 들 수 있다. 또한, 본 발명의 약학적 조성물은 충전제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 추가로 더 포함할 수도 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에서, "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물에서 항균 활성을 갖는 성분의 유효량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로는 체중 당 1 내지 5,000mg, 바람직하게는 100 내지 3,000mg을 매일 또는 격일 투여하거나 1일 1 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 투여 경로, 질병의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 본 발명의 약학적 조성물은 다양한 경로를 통하여 대상에 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관 내(intra-cerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다. 본 발명에서 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 환자에게 소정의 물질을 제공하는 것을 의미하며, 본 발명의 약학적 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 일반적인 모든 경로를 통하여 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 유효성분을 표적 세포로 전달할 수 있는 임의의 장치를 이용해 투여될 수도 있다. 본 발명에서 "대상"은, 특별히 한정되는 것은 아니지만, 예를 들어, 인간, 원숭이, 소, 말, 양, 돼지, 닭, 칠면조, 메추라기, 고양이, 개, 마우스, 쥐, 토끼 또는 기니아 피그를 포함하고, 바람직하게는 포유류, 보다 바람직하게는 인간을 의미한다.
바람직한 구체예로서, 본 발명의 항균 조성물은 건강 기능 식품의 용도로서 적용될 수 있다.
본 발명의 건강 기능 식품은 병원성 미생물의 감염 우려가 높은 대상으로부터 감염의 가능성을 낮추어 줄 수 있는 효과적인 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 발명의 항균 활성이 우수한 유효성분을 포함하는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다. 본 발명의 활성 성분은 일반적으로 전체 식품 중량의 0.01 내지 15중량%로 가할 수 있으며, 건강음료 조성물은 100 ml를 기준으로 0.02 내지 10g, 바람직하게는 0.3 내지 1g의 비율로 가할 수 있다. 본 발명의 건강 기능 식품은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 것 외에 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제, 예컨대, 천연 탄수화물 및 다양한 향미제 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 예로는 포도당, 과당 등의 단당류, 말토오스, 수크로오스 등의 이당류 및 덱스트린, 시클로덱스트린 등의 다당류와 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등의 당알코올이 있다. 상기 향미제로는 타우마틴, 레바우디오시드 A, 글리시르히진, 사카린, 아스파르탐 등을 사용할 수 있다. 상기 향미제의 비율은 본 발명의 건강 기능 식품 100ml당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g을 사용한다. 상기 외에 본 발명의 건강 기능 식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물, 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 건강 기능 식품은 천연 과일 주스 및 과일 주스 음료 및 야채 음료 등의 제조를 위한 과육을 함유할 수도 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 본 발명의 상기 활성 분획물 100 중량부 당 0.01 내지 약 20중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
바람직한 구체예로서, 본 발명의 항균 조성물은 화장료 조성물의 용도로서 적용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 본 발명의 항균 활성이 우수한 성분을, 예를 들어, 에센스, 영양크림, 바디로션, 린스, 샴푸, 바디클렌저, 로션, 스킨, 마스크팩 등의 형태로 제조될 수 있으며, 여기에 한정되는 것은 아니다. 상기 형태로의 제조는 당업자에게 알려진 다양한 제조 공정에 따라 용이하게 수행될 수 있을 것이다.
바람직한 구체예로서, 본 발명의 항균 조성물은 동물 사료 조성물의 용도로서 적용될 수 있다.
상기 동물은 식물에 대응하는 생물군으로 주로 유기물을 영양분으로 섭취하며, 소화나 배성 및 호흡기관이 분화되어 있는 것을 말하고, 구체적으로는 극피동물, 갑각류, 연체동물, 어류, 양서류, 파충류, 조류, 포유류일 수 있으며, 바람직하게는 성게류 또는 해삼류와 같은 극피동물, 게, 새우, 대하 등의 갑각류를 포함하는 절지동물, 두족류, 복족류 또는 이매패류 등의 연체동물, 참돔, 도미, 대구, 가자미, 넙치 등의 어류, 꿩 또는 닭 등의 가금류를 포함하는 조류 또는 돼지, 소, 염소 등의 포유류일 수 있다.
상기 동물 사료용 조성물은 본 발명의 항균 성분을 포함하는 항균 조성물에 곡물, 식물성 단백질 사료, 동물성 단백질 사료, 당분 또는 유제품을 추가로 포함할 수 있다. 상기 곡물은 구체적으로는 분쇄 또는 파쇄된 밀, 귀리, 보리, 옥수수 및 쌀일 수 있고, 상기 식물성 단백질 사료는 구체적으로는 평지, 콩 및 해바라기를 주성분으로 하는 것일 수 있으며, 상기 동물성 단백질 사료는 구체적으로는 혈분, 육분, 골분 및 생선분일 수 있고, 상기 당분 또는 유제품은 구체적으로는 각종 분유 및 유장 분말로 이루어지는 건조성분일 수 있다.
상기 동물 사료용 조성물은 추가로 영양 보충제, 소화 및 흡수 향상제, 성창 촉진제 또는 질병 예방제와 같은 성분을 함께 사용할 수 있다.
본 발명의 동물 사료용 조성물에 포함되는 항균 조성물은 사료의 사용목적 및 사용조건에 따라 달라질 수 있으며, 일 예로 최종 생산된 사료 1kg을 기준으로 상기 항균성 조성물이 0.1g 내지 100g 포함될 수 있다.
또한, 상기 사료 조성물은 성분들의 분쇄 정도에 따라 경점성의 조립 또는 과립 물질로 제조될 수 있으며, 상기 조성물은 메쉬로 공급되거나 추가 가공 및 포장을 위해 원하는 분리된 형상으로 형성시킬 수 있으며, 저장을 위해 펠렛화, 팽창화 또는 압출 공정을 거칠 수 있으며, 저장의 용이성을 위해 바람직하게는 과잉의 물을 건조 제거될 수 있다.
바람직한 구체예로서, 본 발명의 항균 조성물은 식품, 화장품 또는 동물 사료용 첨가제의 용도로서 적용될 수 있다.
상기 첨가제는 사용되는 식품, 화장품 또는 동물 사료에 보존성을 부여하기 위하여 첨가되는 것으로서, 상기 항균 조성물은 천연성분으로 인체에 유해하지 아니하므로 식품, 화장품 또는 동물용 사료에 안전하게 적용할 수 있다.
상기 첨가제는 그 사용 목적 및 용도에 따라 적의 선택된 추가적인 여타의 첨가물을 추가로 더 포함할 수 있으며, 통상적으로 사용되는 첨가물 등 다른 유효성분이나 색소, 계면활성제, 방부제 등의 첨가물과 혼합하여 사용할 수 있다. 상기 첨가제는 그 사용 목적 및 용도에 따라 분말화, 과립화, 정제화 또는 액상화하여 제조될 수 있으며, 제품화를 위하여 포장을 위해 통상의 방법을 사용할 수 있다.
또한, 상기 첨가제 중 항균 조성물의 사용량은 사용목적과 적용형태, 적용부위, 적용대상물품 등에 따라 적절히 사용될 수 있으며, 예를 들면 전체 조성물 기준으로 0.01 중량부 내지 50 중량부를 포함할 수 있으나, 상기 항균 조성물의 함량은 이에 한정되는 것은 아니다. 본원 발명의 항균 조성물은 천연성분으로 인체에 유해하지 아니하므로, 그 제품의 특성상 적용목적을 달성할 수 있는 경우라면 다양한 양으로 사용가능하다.
바람직한 구체예로서, 본 발명은 항균 조성물은 세정제의 용도로서 적용될 수 있다.
상기 세정제는 바람직하게는 의류용 세제, 식기 세척제, 식품 세정제, 가전제품 세척제일 수 있다. 상기 항균 조성물은 천연성분으로 인체에 유해하지 아니하므로, 더욱 바람직하게는 주방용품 또는 식품세척 등을 포함하는 각종 생활용품의 세척이나 항균성 부여를 목적으로 사용할 수 있다.
상기 세정제는 그 사용 목적 및 용도에 따라 적의 선택된 첨가물을 추가로 포함할 수 있으며, 통상적으로 사용되는 세정제 등 다른 유효성분이나 색소, 계면활성제, 방부제 등의 첨가제와 혼합하여 사용할 수 있다. 상기 세정제는 그 사용 목적 및 용도에 따라 분말화, 과립화, 정제화 또는 액상화하여 제조될 수 있으며, 제품화를 위하여 포장을 위해 통상의 방법을 사용할 수 있다.
또한, 상기 세정제 중 항균성 조성물의 사용량은 사용목적과 적용형태, 적용부위, 적용대상물품 등에 따라 적절히 사용될 수 있으며, 예를 들면 전체 조성물 기준으로 0.01 중량부 내지 50 중량부를 포함할 수 있으나, 상기 항균성 조성물의 함량은 이에 한정되는 것은 아니다. 본원 발명의 항균성 조성물은 천연성분으로 인체에 유해하지 아니하므로, 그 제품의 특성상 적용목적을 달성할 수 있는 경우라면 다양한 양으로 사용가능하다.
바람직한 구체예로서, 본 발명은 항균 조성물은 항균 티슈와 같은 청결제의 용도로서 적용될 수 있다.
상기 청결제는 일상 생활에서 흔히 감염되기 쉬운 병원성 미생물의 체내 감염을 예방 차원에서 수행하기 위하여 간단한 방법으로 손, 구강 또는 여성용 청결제 등의 용도로 사용될 수 있다. 상기 항균 조성물은 천연성분으로 인체에 유해하지 아니하므로 손, 구강, 여성용 청결제로 사용하는 경우에도 안전하게 적용할 수 있다.
상기 청결제는 그 사용 목적 및 용도에 따라 적의 선택된 추가적인 여타의 첨가물을 추가로 더 포함할 수 있으며, 통상적으로 사용되는 첨가물 등 다른 유효성분이나 색소, 계면활성제, 방부제 등의 첨가물과 혼합하여 사용할 수 있다. 상기 청결제는 그 사용 목적 및 용도에 따라 분말화, 과립화, 정제화 또는 액상화하여 제조될 수 있으나, 액상형의 경우 편리한 사용이 가능할 것이다.
또한, 상기 청결제 중 항균 조성물의 사용량은 사용목적과 적용형태, 적용부위 등에 따라 적절히 사용될 수 있으며, 예를 들면 전체 조성물 기준으로 0.01 중량부 내지 50 중량부를 포함할 수 있으나, 상기 항균 조성물의 함량은 이에 한정되는 것은 아니다. 본원 발명의 항균 조성물은 천연성분으로 인체에 유해하지 아니하므로, 그 제품의 특성상 적용목적을 달성할 수 있는 경우라면 다양한 양으로 사용가능하다.
이하에서는 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다. 하기 실시예는 본 발명의 바람직한 일 구체예일 뿐이며, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예의 범위로 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
실시예 1: 서양 유채 생물전환 추출물의 제조
2019년 제주도에서 재배 및 수확한 서양 유채 전초를 구입하여 5배 중량의 정제수를 가한 후 100℃에서 5시간 동안 3회 열수 추출하고, 이를 여과하여 서양 유채 추출물을 제조하였다. 다음으로, 미생물자원센터(KCTC 13588)에서 분양받은 바실러스 아밀로리퀴파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens)를 Nutrient broth(소고기 추출물(beef extract)) 3.0g/L 및 펩톤((peptone) 5.0 g/L)에서 30℃에서 20시간 동안 전배양하였다. 20시간 배양 후, 5,000rpm에서 10분동안 원심분리하여 미생물 펠렛(pellet)을 수득하고, 수득한 미생물 펠렛을 PG 버퍼(50mM 인산염(phosphate)(pH7.2) 및 2% 글리세롤)로 세척하여, PG 버퍼 5ml에 현탁시킨 후, 현탁액과 서양 유채 추출물을 혼합하여 상기 배지에서 30℃에서 20시간 동안 본배양하였다. 상기 발효액은 여과한 후, 열수 추출하고, 이를 감압농축하여 서양 유채 생물전환 추출물 분말을 제조하였다.
실시예 2: 토란 뿌리 생물전환 추출물의 제조
국내산 토란을 구입하여, 건조된 뿌리에 5배 중량의 정제수를 가한 후 100℃에서 5시간 동안 3회 열수 추출하고, 이를 여과하여 토란 뿌리 추출물을 제조하였다. 다음으로, 미생물자원센터(KCTC 13588)에서 분양받은 바실러스 아밀로리퀴파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens)를 Nutrient broth(소고기 추출물(beef extract)) 3.0g/L 및 펩톤((peptone) 5.0 g/L)에서 30℃에서 20시간 동안 전배양하였다. 20시간 배양 후, 5,000rpm에서 10분동안 원심분리하여 미생물 펠렛(pellet)을 수득하고, 수득한 미생물 펠렛을 PG 버퍼(50mM 인산염(phosphate)(pH7.2) 및 2% 글리세롤)로 세척하여, PG 버퍼 5ml에 현탁시킨 후, 현탁액과 토란 뿌리 추출물을 혼합하여 상기 배지에서 30℃에서 20시간 동안 본배양하였다. 상기 발효액은 여과한 후, 열수 추출하고, 이를 감압농축하여 토란 뿌리 생물전환 추출물 분말을 제조하였다.
실시예 3: 생물전환 추출물의 항균활성 평가
실시예 1 및 실시예 2의 생물전환 추출물의 항균 활성을 평가하여 그 결과를 표 1에 나타내었다. 항균 활성 평가에 사용된 균주로는, 그람 음성균으로서 Escherichia coli KCTC 1682(EC), Proteus vulgaris KCTC 2433(PV), Pseudomonas aeruginosa KACC 10186(PA), Salmonella typhimurium KCTC 1926(ST)을 사용하였고, 그람 양성균으로는 Staphylococcus aureus KCTC 1916(SA), Staphylococcus epidermidis ATCC 12228(SE), Listeria monocytogenes KACC 10550(LM), Bacillus subtilis KCTC 1924(BS)를 사용하였다. 한편, 항진균 활성 평가를 위해서는 Saccharomyces cerevisiae IF0 0233(SC) 및 캔디다증 진균감염증 원인균 Candida albicans KCTC 1940(CA)을 사용하였다.
먼저, 항세균 활성 평가의 경우, Nutrient broth(Difco Co., USA)에 각각의 세균을 접종하여 37℃에서 24시간 동안 배양한 후, 각 균주를 O.D.600 0.1로 조정하여 Nutrient agar(Difco Co., USA) 배지를 포함하는 멸균 petri dish(90mm, 녹십자, 한국)에 100μl씩 도말하고, 각각의 시료 5μl를 멸균 disc-paper(지름 6.5mm, Whatsman No. 2)에 가하여, 37℃에서 24시간 동안 배양하였으며, 진균의 경우에는, Sabouraud dextrose(Difco Co. USA)를 이용하여 동일한 방법으로 30℃에서 24시간 동안 배양 후, 생육저지환의 크기를 측정하여 항균활성을 평가하였다. 대조구로는 항세균제인 엠피실린(ampicillin)과 항진균제인 마이코나졸(miconazole, Sigma Co., USA)을 각각 1μg/disc 농도로 사용하였으며, 생육저지환의 크기는 육안으로 생육이 나타나지 않는 부분의 지름을 mm 단위로 측정하였고, 3회 이상 평가 후 대표 결과로 나타내었다.
[표 1] 생물전환 추출물의 항균 활성
Figure pat00001
그 결과, 표 1에 나타낸 바와 같이, 임상에서 항세균제로 사용되고 있는 ampicillin은 1μg/disc에서도 광범위한 항균 활성을 나타내었다. 임상에서 항진균제로 사용되고 있는 miconazole은 1μg/disc에서도 Saccharomyces cerevisiae와 Candida albicans의 생육을 강하게 저해하였다. 한편, 서양 유채 생물전환 추출물, 토란 뿌리 생물전환 추출물 및 이들의 혼합물의 경우 500μg/disc에서 실험균 모두에 강력한 항균력을 나타내었다.
실시예 4: 생물전환 추출물의 인간 적혈구 용혈 활성
본 발명의 생물전환 추출물은 모두 식품원재료 및 제한적 식품재료로 등록되어 안전성이 확보된 천연물이다. 서양 유채 생물전환 추출물 및 토란 뿌리 생물전환 추출물의 독성 가능성을 평가하기 위해 인간 적혈구 용혈 활성을 평가하였으며, 그 결과는 표 2에 나타내었다.
이때, 용혈 활성은 PBS로 3회 수세한 인간 적혈구 100μl를 96-well microplate에 가하고 다양한 농도의 시료용액 100μl를 가한 다음 37℃에서 30분간 반응시켰으며, 이후, 반응액을 10분간 원심분리(1,500rpm)하여 상등액 100μl를 새로운 microtiter plate로 옮긴 후 용혈에 따른 헤모글로빈 유출 정도를 414nm에서 측정하였다. 시료의 용매 대조구로는 DMSO(2%)를 사용하였으며, 적혈구 용혈을 위한 실험 대조구로는 Triton X-100(1mg/ml)를 사용하였다. 용혈 활성은 다음의 수식을 이용하여 계산하였다.
Figure pat00002
[표 2] 생물전환 추출물의 인간 적혈구 용혈 활성
Figure pat00003
먼저, 대조구로 사용된 DMSO와 물은 용혈 활성이 없었으며, triton X-100은 1mg/ml 농도에서 적혈구를 100% 용혈시킴을 확인하였다. 또한, 항암제, 항진균제로 사용되고 있는 amphotericin B의 경우 0.025mg/ml 농도에서 59.5%의 적혈구를 용혈시킴을 확인하였다. 본 발명의 서양 유채 생물전환 추출물, 토란 뿌리 생물전환 추출물 및 이들의 혼합물의 경우, 급성독성 및 적혈구 용혈 활성은 없음을 확인하였다.
실시예 5: 생물전환 추출물의 혈장, 산 및 열 안정성 평가
상기 실시예 1 및 실시예 2에서 얻은 서양 유채 생물전환 추출물, 토란 뿌리 생물전환 추출물 및 이들의 혼합물을 대상으로 항균 활성에 대한 혈장 안정성, 열 안정성 및 산 안정성을 확인하였다. 본 발명의 서양 유채 생물전환 추출물, 토란 뿌리 생물전환 추출물 및 이들의 혼합물은 100℃에서 1시간 열 처리, pH 2(0.01M HCl)에서의 1시간 처리, 혈장에서 1시간 처리시에도 항세균 및 항진균 활성의 심각한 손실이 나타나지 않아 높은 안정성을 보였다. 따라서, 서양 유채 생물전환 추출물, 토란 뿌리 생물전환 추출물 및 이들의 혼합물은 다양한 가공 공정하에서도 우수한 항균 활성을 유지할 것으로 예상된다.
실시예 6: 항균 티슈의 제조
실시예 1 및 실시예 2로부터 제조된 생물전환 추출물을 포함하는 항균 티슈를 아래 표 3의 조성비에 따라 제조하였다.
[표 3] 생물전환 추출물을 포함하는 항균 티슈 조성
Figure pat00004
실시예 7: 항균 티슈의 항균력 평가
성인 남녀 20인으로 구성되는 시험대상자를 대상으로 본 발명의 실시예 6에서 제조된 항균 티슈의 항균력을 평가하였다.
시험 부위(한쪽 손바닥 부위)에 칸디다균을 도포한 후 hand plate에 손바닥을 가볍게 3초간 접촉시켰다. 그 후, 실시예 6에서 제조된 항균 티슈로 세정한 후 다시 한번 hand plate 위에 손바닥을 가볍게 3초간 접촉시켰다. 그 후, 항균 티슈에 대한 항균 효과를 평가하여 그 결과를 표 4, 도 1 및 도 2에 나타내었다.
[표 4] 시험대상자별 항균력 테스트 평가 결과
Figure pat00005
상기 표 4에 나타난 바와 같이, 시험대상자 20인 전원에서 99% 이상의 항균력을 보임을 확인하였다.

Claims (7)

  1. 서양 유채의 생물전환 추출물을 포함하는 항균 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 서양 유채는 서양 유체의 열수 추출물인 것을 특징으로 하는 항균 조성물.
  3. 제 1항에 있어서, 상기 생물전환은 바실러스 아밀로리퀴파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens)를 이용하는 것을 특징으로 하는 항균 조성물.
  4. 제 1항에 있어서, 토란 뿌리의 생물전환 추출물을 더 포함하는 항균 조성물.
  5. 제 4항에 있어서, 상기 토란 뿌리는 토란 뿌리의 열수 추출물인 것을 특징으로 하는 항균 조성물.
  6. 제 4항에 있어서, 상기 생물전환은 바실러스 아밀로리퀴파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens)를 이용하는 것을 특징으로 하는 항균 조성물.
  7. 제 1항 내지 제 6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항균 조성물은 약학 조성물, 건강 기능 식품, 화장료 조성물, 동물 사료 조성물, 식품 첨가물, 화장품 첨가물, 동물 사료용 첨가물, 세정제, 청결제 및 항균 티슈로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 항균 조성물.
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