KR20220058774A - 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 포함하는 항산화, 항염, 항균 및 안티 폴루션용 조성물 - Google Patents
레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 포함하는 항산화, 항염, 항균 및 안티 폴루션용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 조성물에 관한 것으로 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물은 DPPH 라디칼 소거활성 및 지질과산화 억제 효과가 우수하며, 황색포도구균(Staphylococcus aureus), 표피포도상구균(Staphylococcus epidermidis) 및 리스테리아균 모노사이토제니스(Listeria monocytogenes)에 대한 항균 효과를 나타내고, 염증을 효과적으로 억제하며, 항염증 효과 역시 우수하다.
따라서 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 항산화, 항염 또는/및 항균용도로 의약품, 식품, 화장품 등에 활용할 수 있다. 또한, 항산화 및 항염 효과를 활용하여 안티 폴루션용 소재로 활용할 수 있다.
따라서 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 항산화, 항염 또는/및 항균용도로 의약품, 식품, 화장품 등에 활용할 수 있다. 또한, 항산화 및 항염 효과를 활용하여 안티 폴루션용 소재로 활용할 수 있다.
Description
본 발명은 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 포함하는 조성물에 관한 것으로, 상기 혼합추출물은 항산화, 항염 또는/및 항균 용도로 화장료, 식품, 약학 조성물 및 의약외품 등에 활용 가능하다.
또한, 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물은 산화스트레스 및 염증을 억제하여 미세먼지로 유발되는 산화스트레스 및 염증을 감소시킬 수 있어, 안티 폴루션용 식품 조성물로 활용 가능하다.
미세먼지는 입자크기 10㎛ 이하인 먼지를 통칭하고 PM10(Particulate Matter 10)으로 약칭하며, 2.5㎛ 이하의 초미세먼지인 PM2.5(Particulate Matter 2.5)로 구분된다. 주로 화석연료를 연소할 때 발생하며, 석탄 의존도가 70%인 중국발 미세먼지가 상당부분을 차지한다. 또한, 황사는 중국이나 몽골 등 아시아 대륙의 중심부에 있는 사막과 황토 지대의 작은 모래나 황토 또는 먼지가 하늘에 떠다니다가 상층 바람을 타고 멀리까지 날아가 떨어지는 현상을 말하며 장거리 이동성 대기오염물질로 제주도까지 이동이 가능하다.
특히 미세먼지는 우리 몸의 가장 외부에 위치해 있는 피부와 직접적으로 접촉하는 경우 피부가 유기체와 환경 사이의 장벽기능 역할을 하는데, 직접적으로 잦은 오염에 노출이 될 경우에는 이 장벽의 기능이 저하되어 여러가지 문제를 발생시킨다. 특히 미세먼지는 모공의 20 배나 더 작기 때문에 인체의 피부에는 손쉽게 침투될 수 가있다. 예를 들면, 환경오염에 대한 물질을 흡수하는 주요한 부위인 피부는 독성물질인 클로로포름 같은 물질이 피부로 흡수하는 것은 호흡기로 인해 흡입하는 것과 동일하게 간주되고 있다.
미세먼지는 체내 또는 피부에서 산화 스트레스를 유발하고 염증을 발생시킨다. 이렇게 유발된 염증은 전신에 영향을 미치며, 피부 염증성 질환, 탈모, 아토피 악화, 뇌졸증, 알츠하이머 등의 뇌 염증 질환, 호흡기 질환, 심혈관계 질환의 위험을 증가시킨다.
현재 미세먼지와 같은 자극으로 인한 염증 반응과 산화스트레스에 대해 보호 작용을 하는 항염, 항산화 기능성 소재에 대한 수요가 급격하게 증가하고 있다.
현재, 안전성이 입증된 천연물 유래 소재로부터 치료효과가 높고 부작용이 적은 새로운 물질을 찾고자 하는 연구가 많이 이루어지고 있다.
본 발명에서는 체내의 항산화 활성을 강화시키고 산화적 스트레스 및 염증을 경감시키며, 미생물에 대한 항균 효과를 나타내는 천연물 유래 복합 소재를 개발하였으며, 복합 소재가 세포독성 없이 항산화, 염증 및 항균 효과가 우수함을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 해결하고자 하는 과제는 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항염, 항균용 조성물을 제공하는 것으로, 상기 조성물을 식품 조성물, 화장료 조성물, 약학 조성물, 의약외품 조성물을 포함한다.
또한 본 발명의 다른 과제는 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 유효성분으로 포함하는 안티 폴루션용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항염 또는 항균용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에서 상기 혼합추출물은 레몬머틀, 맥문동 및 당귀를 1~3: 4~6: 2~4의 중량비로 혼합하여 추출한 것일 수 있다.
본 발명에서 상기 혼합추출물은 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 열수 추출일 수 있다.
본 발명에서 상기 항균은 황색포도구균(Staphylococcus aureus), 표피포도상구균(Staphylococcus epidermidis) 및 리스테리아균 모노사이토제니스(Listeria monocytogenes)로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 미생물의 생장을 억제하는 것일 수 있다.
또한 본 발명은 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항염 또는 항균용 화장료 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 유효성분으로 포함하는 항균용 또는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명에서 상기 염증성 질환은 뇌 또는 신경 염증성 질환일 수 있다.
또한 본 발명은 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항염 또는 항균용 의약외품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 유효성분으로 포함하는 안티 폴루션용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에서 상기 안티 폴루션은 황사 또는 미세먼지에 의해 유도되는 염증 또는 산화스트레스를 억제하는 것일 수 있다.
본 발명은 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 포함하는 항산화, 항염, 항균용 조성물에 관한 것이다. 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물은 DPPH 라디칼 소거활성 및 지질과산화 억제 효과가 우수하며, 황색포도구균(Staphylococcus aureus), 표피포도상구균(Staphylococcus epidermidis) 및 리스테리아균 모노사이토제니스(Listeria monocytogenes)에 대한 항균 효과를 나타내고, 염증을 효과적으로 억제함을 확인하였는바, 항산화, 항염 및 항균용도로 활용할 수 있다.
또한 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 미세먼지에 의해 유발되는 산화스트레스 및 염증을 완화시키는 안티 폴루션용 식품 개발에 활용할 수 있다.
도 1은 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 각 균주에 대해 농도별로 항균 효과를 분석한 결과이다.
도 2는 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물(LMD)의 농도에 따른 DPPH 라디칼 소거활성을 분석한 결과이다.
도 3은 LPS로 마우스에서 뇌 염증을 유발한 후, 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물(LMD) 투여에 의한 산화적 손상 지표인 지질과산화물(MDA)의 생성 변화를 분석한 결과이다.
도 4는 LPS로 마우스에서 뇌 염증을 유발한 후, 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물(LMD) 투여에 의한 뇌 조직에서 염증 관련 세포인 미세교세포 및 성상교세포의 변화(증가/감소)를 조직면역염색으로 분석한 결과이다.
도 2는 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물(LMD)의 농도에 따른 DPPH 라디칼 소거활성을 분석한 결과이다.
도 3은 LPS로 마우스에서 뇌 염증을 유발한 후, 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물(LMD) 투여에 의한 산화적 손상 지표인 지질과산화물(MDA)의 생성 변화를 분석한 결과이다.
도 4는 LPS로 마우스에서 뇌 염증을 유발한 후, 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물(LMD) 투여에 의한 뇌 조직에서 염증 관련 세포인 미세교세포 및 성상교세포의 변화(증가/감소)를 조직면역염색으로 분석한 결과이다.
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 명명법 및 이하에 기술하는 실험 방법은 본 기술 분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.
본 발명은 일 관점에서, 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항염 또는 항균용 식품 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 항산화, 항염 또는 항균용 식품 조성물은 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 유효성분으로 포함한다.
본 발명에서 “레몬머틀”은 학명 Backhousia citriodora의 식물로 주로 호주 퀸즈랜드의 열대림에 서식하는 관목이다.
본 발명에서 “맥문동”은 학명 Liriope platyphylla인 식물로 음지 습한 곳에서 잘 자라고, 7월에 보라색의 꽃이 피어 10월에는 검은색 열매를 맺는 백합과에 속하는 다년생 초본식물이다.
본 발명에서 “당귀”는 학명이 Angelica gigas Nakai인 식물로 참당귀로도 불리면, 산형과에 속하는 다년생 풀인 당귀의 뿌리를 말린 것으로서 맛은 달고, 매운 것을 특징으로 한다.
본 발명에서 “추출물”은 추출 처리에 의하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다.
본 발명에서 추출물의 건조한 식물로부터 유용한 성분들이 파괴되지 않는 범위에서 공지의 방법으로 진행될 수 있고, 예를 들어 음지에서 자연건조의 방법으로 진행될 수 있다. 또한, 파쇄 또는 분쇄는 이후 추출과정에서 식물의 유용한 성분들이 충분하게 추출될 수 있을 정도로 파쇄 또는 분쇄하여 분말화할 수 있다. 상기 건조와 파쇄 또는 분쇄 공정은 필요에 따라서 순서를 뒤바꿔서 진행하거나 반복하여 실시할 수 있다.
상기 추출물은 통상의 식물 추출물의 제조방법에 따라 제조된 것일 수 있으며, 구체적으로는 용매추출법, 수침추출법, 냉침추출법, 온침추출법 또는 초음파 추출법 등일 수 있으며, 통상의 추출기기, 초음파분쇄 추출기 또는 분획기를 이용할 수 있다.
상기 추출물의 추출용매는 물 또는 유기용매일 수 있다. 상기 유기용매는 극성 용매, 비극성 용매 또는 이들의 혼합액일 수 있고, 일 예로, 알코올, 알코올 희석수, 헥산, 메틸렌클로라이드, 아세톤, 에틸아세테이트, 에틸에테르, 클로로포름 또는 이들의 혼합액일 수 있으며, 상기 알코올은 C1 내지 C5 알코올, 일 예로 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 이소프로판올 등일 수 있다. 또한, 알코올 희석수는 알코올을 50 내지 99.9%(v/v)로 물에 희석한 것일 수 있다.
또한, 상기 용매로 추출한 추출물은 이후, 헥산, 메틸렌클로라이드, 아세톤, 에틸아세테이트, 에틸에테르, 클로로포름, 물 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 용매로 분획과정을 더욱 실시할 수 있다. 상기 분획 시 용매는 2종 이상 사용할 수 있으며, 용매의 극성에 따라 순차적으로 사용하거나 혼합하여 사용하여, 각 용매 분획물을 제조할 수 있다.
상기 제조된 추출물 또는 상기 분획과정을 수행하여 수득한 분획물은 이후 여과하거나 농축 또는 건조과정을 수행하여 용매를 제거할 수 있으며, 여과, 농축 및 건조를 모두 수행할 수 있다. 구체적으로 상기 여과는 여과지를 이용하거나 감압여과기를 이용할 수 있으며, 상기 농축은 감압 농축기, 일 예로 회전 증발기를 이용하여 감압 농축할 수 있으며, 상기 건조는 일 예로 동결건조법으로 수행할 수 있다.
본 발명에서 “혼합추출물”은 레몬머틀, 맥문동 및 당귀를 추출하여 제조된 추출물로, 레몬머틀, 맥문동 및 당귀를 각각 추출하여 혼합하여 제조되거나, 레몬머틀, 맥문동 및 당귀를 혼합한 후 추출하여 제조된 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에서 건조된 레몬머틀 잎, 맥문동 및 당귀를 혼합한 후, 증류수를 용매로 100℃에서 가압 추출물를 이용하여 3시간 동안 혼합 추출하였다.
따라서 본 발명의 혼합 추출물은 레몬머틀, 맥문동 및 당귀를 열수 추출한 것이며, 구체적으로 90 내지 110℃에서 열수 추출한 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에서 레몬머틀, 맥문동 및 당귀를 2: 1 내지 10: 3 중량비로 혼합하여 추출물을 제조하고, 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합 비율에 따른 추출물에 대해 세포독성을 분석한 결과, 레몬머틀, 맥문동 및 당귀가 2: 5: 3(실시예1)의 중량비로 혼합된 혼합 추출물은 세포독성이 나타나지 않았으나, 레몬머틀, 맥문동 및 당귀가 2: 1: 3(비교예1) 또는 2: 10: 3(비교예2)의 중량비로 혼합한 경우, 세포독성이 높게 나타났다.
따라서 본 발명에서 혼합추출물은 레몬머틀, 맥문동 및 당귀를 1~3: 4~6: 2~4의 중량비로 혼합하여 추출한 것일 수 있으며, 구체적으로 레몬머틀, 맥문동 및 당귀를 1~3: 4~6: 2~4의 중량비로 혼합하고 90 내지 110℃에서 열수 추출하여 제조된 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에서 레몬머틀, 맥문동, 당귀의 혼합 추출물(실시예1, LMD)의 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 표피포도상구균(Staphylococcus epidermidis), 리스테리아 모노사이토제니스(Listeria monocytogenes), 또는 대장균(Escherichia coli)에 대한 항균 효과를 분석하였다.
분석결과, 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 표피포도상구균(Staphylococcus epidermidis), 리스테리아 모노사이토제니스(Listeria monocytogenes)에 대해서는 항균 효과가 나타났으며, 대장균(Escherichia coli)에 대해서는 항균 효과가 없음을 확인하였다.
또한, 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 표피포도상구균(Staphylococcus epidermidis)에 대해서는 1%의 농도로 희석 한 시료 처리한 경우에도 클리어 존이 명확하게 나타나 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물이 황색포도구균(Staphylococcus aureus) 및 표피포도상구균(Staphylococcus epidermidis)에 매우 뛰어난 항균 활성을 나타냄을 확인하였다.
따라서 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합 추출물은 미생물 생성을 억제하는 바, 항균용 조성물로 이용할 수 있다.
본 발명에서 “항균”은 미생물의 생장을 억제하는 것으로, 구체적으로 황색포도구균(Staphylococcus aureus), 표피포도상구균(Staphylococcus epidermidis) 및 리스테리아균 모노사이토제니스(Listeria monocytogenes)로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 미생물의 생장을 억제하는 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에서 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물(실시예1, LMD)의 농도의존적으로 DPPH 소거활성이 증가함을 확인하였으며, 항산화 효과를 분석하고자 LPS로 마우스에서 뇌 염증을 유발한 후, 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물(LMD) 투여에 의한 산화적 손상 지표인 지질과산화물(MDA)의 생성 변화를 분석한 결과, LPS는 실험동물의 뇌에서 MDA의 생성량을 170% 정도 증가시켰다. 이는 LPS에 의해 산화적 손상이 유도되었음을 의미한다. 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물(LMD)의 고용량 투여시(1000 mg/kg) LPS에 의해 증가된 MDA 생성량을 통계적으로 유의하게 감소시킴을 확인하였다.
즉, 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물이 DPPH 소거활성이을 나타내며, 산화적 손상에 의해 발생하는 지질과산화물(MDA) 억제하여 항산화 효과가 우수함을 확인하였는바, 본 발명의 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물은 항산화용 조성물로 이용할 수 있다.
본 발명에서 "항산화"는 산화적 스트레스로부터 세포를 보호하는 것으로, 구체적으로 활성산소종의 생성을 억제하거나 지질과산화물 생성을 억제하는 것일 수 있다.
본 발명의 다른 실시예에서 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물(LMD)의 항염증 효과를 분석하고자 LPS로 마우스에서 뇌 염증을 유발한 후, 7일간 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물(LMD) 경구 투여한 후 뇌 조직에서 염증 관련 세포인 미세교세포(microglia)와 성상교세포(astrocyte)의 증가 정도를 분석하였다. 분석결과, LPS는 실험동물의 뇌에서 성상교세포 표지자인 GFAP 양성 세포와 미세교세포 표지자인 Iba-1 양성세포의 증가를 유도하였다. 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물(LMD)의 경구 투여시 LPS로 유도된 성상교세포(GFAP 양성세포) 및 미세교세포(Iba-1 양성세포)의 증가를 유의하게 감소시킴을 확인하였다.
즉, 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물이 항염 효과를 나타냄을 확인하였는바, 본 발명의 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물은 항염증 조성물로 이용할 수 있다.
본 발명에서 "항염"은 염증의 발생을 억제 또는 예방하거나, 또는 염증으로 인한 손상으로부터 세포를 보호하는 것이다.
본 발명에서 염증은 미생물 감염, 황사 또는 미세먼지 노출, 화학물질의 노출, 또는 산화적 스트레스에 의해 유발되는 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 식품 조성물은 환제, 분말, 과립, 침제, 정제, 캡슐 또는 액제 등의 형태를 포함할 수 있으며, 본 발명의 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합 추출물을 첨가할 수 있는 식품의 종류에는 별다른 제한이 없으며, 예를 들어 각종 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있다.
상기 식품 조성물은 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합 추출물 이외에도 다른 성분을 추가할 수 있으며, 그 종류는 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어, 통상의 식품과 같이 여러 가지 생약 추출물, 식품학적으로 허용되는 식품보조첨가제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있으며, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에서 “식품보조첨가제”는 식품에 보조적으로 첨가될 수 있는 구성요소를 의미하며, 각 제형의 건강기능성 식품을 제조하는데 첨가되는 것으로서 당업자가 적절히 선택하여 사용할 수 있다. 식품보조첨가제의 예로는 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등이 포함되지만, 상기 예들에 의해 본 발명의 식품보조첨가제의 종류가 제한되는 것은 아니다.
상기 천연 탄수화물의 예는 포도당, 과당 등의 단당류; 말토스, 수크로스 등의 이당류; 및 덱스트린, 시클로덱스트린 등의 다당류와, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이 있으며, 상기한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴 등), 스테비아 추출물(레바우디오시드 Ａ, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있다.
상기 식품 조성물은 건강기능성식품 조성물일 수 있다.
본 발명에서 “건강기능성 식품”은 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등의 형태로 제조 및 가공한 식품을 말한다. 여기서 기능성이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의 건강기능성 식품은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조 가능하며, 상기 제조시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어날 수 있다.
상기 건강기능성식품은 이너뷰티 푸드(inner beauty) 형태로 섭취함으로써 더욱 우수한 효과를 갖는 장점을 가진다. 상기 이너뷰티(inner beauty)는 '먹는 화장품 또는 뷰티푸드'로 일컬어지는 푸드로, 피부에 좋은 여러 가지 성분을 몸속으로 흡수시켜 피부 체질을 건강하게 바꾸는 식품을 지칭하며, 피부 타입에 맞는 화장품을 고르듯 피부 컨디션과 라이프스타일을 고려해 개개인에게 맞는 이너뷰티 푸드를 선택하여 섭취할 수 있다. 보다 바람직하게는 상기 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 포함하는 화장품과 상기 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 포함하는 이너뷰티 푸드를 혼용할 경우, 화장품만 사용하는 것에 비해 항산화, 항염 또는 항균 효과가 월등히 높아져 더욱 효과적인 항산화, 항염 또는 항균 효과를 볼 수 있는 장점을 가진다.
유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품의 제조 시에 본 발명의 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합 추출물은 원료 조성물 중 1 내지 50 중량%, 바람직하게는 5 내지 10 중량%의 양으로 첨가될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하로도 사용될 수 있다.
본 발명은 다른 관점에서 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항염 또는 항균용 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명에서 레몬머틀, 맥문동, 당귀, 혼합추출물, 항산화, 항염, 항균에 관한 설명은 전술한 바와 같다.
본 발명의 화장료 조성물은 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물 이외에, 항산화, 항염 또는 항균 효과를 상승 또는 보강시킬 수 있도록 항산화, 항염 또는 항균 효과가 있다고 알려진 화합물이나 천연 추출물을 더 포함할 수 있다.
본 발명의 항산화, 항염 또는 항균용 화장료 조성물에 있어서, 그 유효성분은 항산화, 항염 또는 항균 효과를 나타낼 수 있는 한 용도, 제형, 배합 목적 등에 따라 임의의 양(유효량)으로 포함할 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001 중량 % 내지 99.99 중량 % 범위 내에서 포함될 수 있다. 여기서 “유효량” 이란 항산화, 항염 또는 항균 효과를 유도할 수 있는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 다양한 형태로 제조될 수 있는데, 예컨대, 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 구체적으로, 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 마사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 립스틱, 메이크업 베이스, 파운데이션, 프레스파우더 및 루스 파우더로 이루어진 군으로부터 선택되는 제형을 가질 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 화장료 조성물은 그 유효성분 이외에 화장료 제제에 있어서 수용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 여기서 “화장료 제제에 있어서 수용 가능한 담체” 란 화장품 제제에 포함될 수 있는 이미 공지되어 사용되고 있는 화합물 또는 조성물이거나 앞으로 개발될 화합물 또는 조성물로서 피부와의 접촉시 인체가 적응 가능한 이상의 독성, 불안정성 또는 자극성이 없는 것을 말한다. 상기 담체는 본 발명의 화장료 조성물에 그것의 전체 중량에 대하여 약 1 중량 % 내지 약 99.99 중량 %, 바람직하게는 조성물의 중량의 약 5 중량% 내지 약 99 중량 %로 포함될 수 있다. 그러나 상기 비율은 본 발명의 화장료의 제조되는 제형에 따라 또한 그것의 구체적인 적용 부위(얼굴이나 손)나 그것의 바람직한 적용량 등에 따라 달라지는 것이기 때문에, 상기 비율은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 안 된다.
한편, 상기 담체로서는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료 등이 예시될 수 있다. 상기 담체로서 사용될 수 있는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료로 사용될 수 있는 화합물/조성물 등은 이미 당업계에 공지되어 있기 때문에 당업자라면 적절한 해당 물질/조성물을 선택하여 사용할 수 있다.
본 발명은 또 다른 관점에서 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 유효성분으로 포함하는 항균용 또는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
본 발명에서 레몬머틀, 맥문동, 당귀, 혼합추출물에 관한 설명은 전술한 바와 같다.
본 발명에서 항균용 약학 조성물은 미생물을 생장 또는 증진을 억제하여 감염성 질환의 예방 또는 치료하는 약학 조성물이다.
본 발명에서 “감염성 질환”은 미생물 감염에 의해 발생하는 질환으로, 구체적으로 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 표피포도상구균(Staphylococcus epidermidis), 및 리스테리아 모노사이토제니스(Listeria monocytogenes)의 감염에 의해 발생하는 질환을 의미한다.
본 발명의 전술한 실시예에서 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물이 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 표피포도상구균(Staphylococcus epidermidis), 및 리스테리아 모노사이토제니스(Listeria monocytogenes)에 대해 항균 활성을 가짐을 확인하였는바, 본 발명의 약학 조성물은 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 표피포도상구균(Staphylococcus epidermidis), 및 리스테리아 모노사이토제니스(Listeria monocytogenes) 생장을 억제하여 감염성 질환의 예방 또는 치료 효과를 나타낸다.
본 발명에서 “염증성 질환”은 염증 반응(inflammation)에 의해 유발되는 질환으로, 상기 염증은 미생물(세균, 바이러스, 곰팡이) 감염, 황사, 미세먼지, 화학물질의 노출 또는 산화스트레스에 의해 유도된 것 일수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 염증성 질환은 알레르기성 질환, 염증성 장질환, 죽상동맥경화, 염증성 콜라겐 혈관 질환, 사구체신염, 염증성 피부 질환, 유육종증, 망막염, 위염, 간염, 장염, 관절염, 편도선염, 인후염, 기관지염, 폐렴, 췌장염, 패혈증, 뇌 또는 신경 염증성 질환 및 신장염으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 일 수 있다.
본 발명의 전술한 실시예에서 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물(LMD)이 LPS로 염증을 유도한 실험동물의 뇌에서 염증 관련 세포인 성상교세포와 미세교세포의 생성을 증가를 억제함을 확인하였는바, 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물은 염증을 억제하여 염증성 질환을 예방 또는 치료하는데 활용 가능하다.
또한, 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물이 뇌 조직의 염증을 억제함을 확인하였는바, 본 발명에서 상기 염증성 질환은 구체적으로 뇌 또는 신경 염증성 질환일 수 있다.
상기 뇌 또는 신경 염증성 질환은 산화적 스트레스, 과도한 염증반응에 의해 유발되는 퇴행성 뇌칠환일 수 있으며 구체적으로, 알츠하이머병 (Alzheimer's disease), 파킨슨병(Parkinson's disease), 헌팅턴병(Huntington's disease) 및 근위축성 측삭경화증 (ALS; Amyotrophic Lateral Sclerosis)으로 이루어진 군에서 선택되는 하나일 수 있다.
본 발명에서 “치료”는 본 발명의 대상 질환인 감염성 질환 또는 염증성 질환의 감소, 억제, 진정 또는 근절을 의미한다. 본 발명에서 “예방”은 본 발명의 대상 질환인 감염성 질환 또는 염증성 질환의 발병을 저해 또는 지연시키는 모든 행위를 의미하며, 치료적 의미를 포함한다.
본 발명의 약학 조성물은 약학으로 유효한 양으로 투여할 수 있다.
본 발명에서 “약학으로 유효한 양”은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 질병의 종류, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 감염성 질환 또는 염증성 질환의 치료 또는 예방을 목적으로 하는 개체이면 특별히 한정되지 않고, 어떠한 것이든 적용 가능하다. 예를 들면, 원숭이, 개, 고양이, 토끼, 모르모트, 랫트, 마우스, 소, 양, 돼지, 염소 등과 같은 비인간동물, 인간, 조류 및 어류 등 어느 것이나 사용할 수 있으며, 상기 약학 조성물은 비 경구, 피하, 복강 내, 폐 내 및 비강 내로 투여될 수 있고, 국부적 치료를 위해, 필요하다면 병변 내 투여를 포함하는 적합한 방법에 의하여 투여될 수 있다. 본 발명의 상기 약학 조성물의 바람직한 투여량은 개체의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 예를 들어, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관 내 주사에 의해 투여될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 약학 조성물은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결 건조제 및 좌제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가질 수 있으며, 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.
경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
적합한 총 1일 사용량은 올바른 의학적 판단범위 내에서 처치의에 의해 결정될 수 있으며, 일반적으로 0.001 내지 1000 mg/kg의 양, 바람직하게는 0.05 내지 200 mg/kg, 보다 바람직하게는 0.1 내지 100 mg/kg의 양을 일일 1회 내지 수회로 나누어 투여할 수 있다.
본 발명은 또 다른 관점에서 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항염 또는 항균용 의약외품 조성물에 관한 것이다.
본 발명에서 레몬머틀, 맥문동, 당귀, 혼합추출물, 항산화, 항염, 항균에 관한 설명은 전술한 바와 같다.
본 발명에서 “의약외품”은 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 개선, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용되는 물품들 중 의약품보다 작용이 경미한 물품들을 의미하는 것으로, 예를 들어 약사법에 따르면 의약외품이란 의약품의 용도로 사용되는 물품을 제외한 것으로, 사람ㆍ동물의 질병 치료나 예방에 쓰이는 섬유ㆍ고무 제품, 인체에 대한 작용이 경미하거나 직접 작용하지 않으며, 기구 또는 기계가 아닌 것과 이와 유사한 것, 감염병을 막기 위한 살균ㆍ살충제 등이 이에 포함된다.
본 발명의 의약외품 조성물의 종류나 제형은 특별히 제한되지 아니하나, 바람직하게는 소독 청결제, 샤워폼, 가그린, 물티슈, 세제 비누, 핸드 워시, 가습기 충진제, 마스크, 연고제 또는 필터 충진제 등일 수 있다.
본 발명의 조성물을 항산화, 항염 또는 항균 목적으로 의약외품에 포함시킬 경우, 상기 조성물을 그대로 포함하여 사용하거나 다른 의약외품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효 성분의 혼합량은 사용 목적에 따라 적합하게 결정할 수 있으며, 본 발명에 의한 의약외품 조성물은 상기 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 조성물 총 중량에 대하여 0.01~20 중량%로 함유할 수 있다.
본 발명은 또 다른 관점에서 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 유효성분으로 포함하는 안티 폴루션용 식품 조성물에 관한 것이다.
본 발명에서 레몬머틀, 맥문동, 당귀, 혼합추출물, 식품에 관한 설명은 전술한 바와 같다.
본 발명에서 “안티 폴루션”은 황사 또는 미세먼지에 의해 유도되는 산화스트레스 또는 염증을 억제하는 것을 의미한다.
본 발명의 전술한 실시예에서 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물이 DPPH 라디칼 소거활성이 우수함을 확인하였으며, 마우스에서 LPS에 의해 유도되 지질과산화물의 생성을 억제하여 항산화 효과가 우수함을 확인하였는바, 황사 또는 미세먼지에 의해 세포에서 유도되는 산화스트레스를 억제 또는 감소시켜 황사 또는 미세먼지에 대해 세포를 보호할 수 있다.
또한, 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 경구 투여한 마우스에서 LPS로 뇌 조직에서 염증을 유도하였을 때, LPS만 투여한 대조군과 비교하여 염증 관련 세포인 성상교세포(GFAP 양성세포) 및 미세교세포(Iba-1 양성세포)의 생성을 억제함을 확인하였는바, 본 발명에 따른 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물은 미세먼지에 의해 유도되는 염증을 억제 또는 예방하여 세포를 보호할 수 있다.
또한, 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물의 경구 투여가, 뇌 조직에서 염증을 억제함을 확인하였는바, 본 발명의 안티 폴루션은 구체적으로 미세먼지에 의해 유도된 염증으로 인한 신경 또는 뇌세포의 손상으로부터 세포를 보호하는 것일 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명의 구성 및 효과를 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
1. 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물의 제조
건조된 레몬머틀 잎, 맥문동 및 당귀를 표 1의 중량비로 혼합한 후 증류수를 용매로 하여 100℃에서 가압 추출기를 이용하여 3시간 동안 혼합 추출한 후 여과, 농축 및 -75℃ deepfreezer 냉동 후 동결 건조하여 시료로 사용하였다.
제조된 혼합추출물에 대해 세포독성 분석결과 실시예1은 세포독성이 없었으나, 비교예1 및 비교예2에서 세포독성이 높게 나타나 추가 실험을 수행하지 않았다.
| 시료명 | 혼합 중량비 | ||
| 레몬머틀 | 맥문동 | 당귀 | |
| 실시예1(LMD) | 2 | 5 | 3 |
| 비교예1 | 2 | 1 | 3 |
| 비교예2 | 2 | 10 | 3 |
2. 항균 효과 분석
1) 미생물 배양
황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 표피포도상구균(Staphylococcus epidermidis), 리스테리아 모노사이토제니스(Listeria monocytogenes), 대장균(Escherichia coli)로 한국생명공학연구원 미생물자원센터(Daejeon, Korea)에서 분양 받았다. 미생물 배양은 트립틱 소이 브로스(Tryptic soy broth, TSB, Difco Co.) 또는 트립틱 소이 브로스 아가(Tryptic soy broth agar, TSA, Difco Co.)를 사용하여 37℃ 인큐베이터에서 균주에 따라 24 내지 39시간 배양하여 항균력 실험에 사용하였다.
2) 항균 효과 측정
항균력 측정은 페이터 디스크(paper disc) 법으로 측정한다. 평판배지에 배양된 각 균주를 1 백금이량 취하여 액체배지 10 ㎖에서 18 내지 48시간 배양한 후, 이른 다시 액체배지 10㎖에 0.1㎖ 접종하여 3 내지 6시간 본 배양하였다.
평판배지에 멸균 면봉으로 균주를 균일하게 도말한 후 멸균된 8mm의 필터 페이퍼 디스크(filter paper disc)를 고체 평판배지에 올려놓는다. 시료를 농도 별로 필터 페이퍼 디스크(filter paper disc)에 흡수시켜 37℃ 또는 25℃에서 18 내지 48시간 배양하여 디스크(disc) 주위의 클리어 존(clear zone, mm)의 직경을 측정하였다.
3) 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물(LMD)의 항균효과 평가
레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물(실시예1, LMD)을 0%, 1%, 3%, 5%, 10%로 농도 희석하여 실험에 사용하였으며, 분석결과는 도 1과 같다. 도 1에서 가장 위에 가운데 위치한 disc가 0% 시료이며, 시계방향으로 1%, 3%, 5% 및 10%를 배치하였다.
레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물은 황색포도구균(Staphylococcus aureus) 및 표피포도상구균(Staphylococcus epidermidis)에서 1%의 농도로 희석 한 시료 처리한 경우에도 클리어 존이 명확하게 나타나 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물이 황색포도구균(Staphylococcus aureus) 및 표피포도상구균(Staphylococcus epidermidis)에 대해 저농도(1% 농도)에서도 매우 뛰어난 항균 활성을 나타냄을 확인하였다(도 1).
레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물은 리스테리아균 모노사이토제니스(Listeria monocytogenes)은 대해서는 5% 농도 이상에 클리어존이 명확하게 보여, 리스테리아균 모노사이토제니스(Listeria monocytogenes)에 대한 약간의 항균활성을 나타냈다. 리스테리아균 모노사이토제니스(Listeria monocytogenes)에서 대조군(control, 0%)이 항균효과를 보이는 것처럼 띠를 형성한 것은 페이퍼 디스크(paper disc)에 분주 시 증류수가 일시적으로 퍼져 항균효과를 가진 것처럼 보인 것으로 추정하였다. 이는 다른 균주에 대조군의 결과를 보았을 때, 대조군(0%)은 항균활성을 나타내지 않는 것으로 판단하였다(도 1).
반면, 대장균(Escherichia coli)은 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 10% 농도로 처리한 경우에도 클리어 존이 나타나지 않아, 대장균에 대해서 항균 효과를 나타나지 않음을 확인하였다.
3. 시험관내(
In-vitro
) 항산화 효과 분석
1) DPPH 라디칼 소거활성 분석
레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물(실시예1, LMD)을 50, 100, 500, 1000 ㎍/㎖의 농도가 되도록 증류수에 녹여 실험에 사용하였다. DPPH 용액은 3 mg의 DPPH를 에탄올 15 ㎖에 녹인 용액 1.5 ㎖에 에탄올 3 ㎖와 DMSO 0.5 ㎖를 혼합하여 제조하였다.
DPPH 라디칼 소거활성은 시료 50 ㎕와 DPPH 용액을 혼합하여 상온에서 10분간 반응한 후 분광광 도계를 이용하여 517 nm에서 흡광도를 측정하여 얻었다. DPPH 라디칼 소거활성은 전자공여능(electron donating ability, EDA)을 수학식1과 같이 계산하여 분석하였다.
A: 시료의 흡광도, B: 대조구의 흡광도
레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물(실시예1, LMD)의 항산화 효과를 측정하기 위해 시험관에서 DPPH 소거활성을 분석한 결과, 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물(LMD)는 농도의존적으로 DPPH 라디칼 소거능이 증가하였으며, EC50(Half maximal effective concentration)는 116.9 μM 로 나타났다(도 2).
4. 동물모델에서(
In-vivo
) 항산화 및 항염 효과 분석
1) 실험동물의 준비
샘타코 바이오에서 수컷 ICR mice (6주령)를 구입하여 1주일간 순화시켜 사용하였다. 동물은 12 시간 주기로 낮/밤이 설정되어 있는 온도 22 ± 1 ℃, 습도 50 ± 10 %의 개별사육장치에서 사육하였고, 물과 먹이는 자율 식이로 제공하였다. 실험군은 LPS 및 시료 샘플을 투여하지 않은 비투여 대조군(sham), LPS 대조군(control), 시료샘플(LMD)과 LPS를 함께 투여한 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물(LMD) 저용량군 (100 mg/kg), 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물(LMD) 고용량군 (1000 mg/kg)군, 그리고 양성대조군(페룰산, ferulic acid)으로 구성하였다.
모든 동물 실험은 동아대학교 실험동물윤리위원회(IACUC)의 승인을 받았다(DIACUC-승인-20-18).
2) 약물(시료) 투여 및 뇌 샘플 채취
레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물(LMD) 투여 용량은 저용량(100 mg/kg)과 고용량(1000 mg/kg)으로 설정하였다. 양성 대조군으로 사용된 페룰산(ferulic acid)은 논문에서 사용한 용량(20 mg/kg)을 투여하였다.
LPS는 PBS에 녹여 1 ㎍/3 ㎕ 용량을 제3 뇌실에 투여하였고, 각 시료는 10% tween 80 용액에 녹여 LPS 투여 3일 전부터 경구투여 하였다.
LPS 투여 후 7일간 시료를 경구투여 하였으며, 7일 후 실험동물의 뇌 조직을 채취하였다. 뇌조직의 반은 웨스턴 블랏(western blot) 및 ELISA 분석을 위해 분쇄하였으며, 나머지 반은 조직면역염색을 위해 후고정하였다.
3) 항산화 효과 평가: 지질과산화 분석(MDA 측정)
레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물(LMD)의 항산화 효과를 분석하고자 LPS로 마우스에서 뇌 염증을 유발한 후, 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물(LMD) 투여에 의한 산화적 손상 지표인 지질과산화물(MDA)의 생성 변화를 분석하였다.
지질과산화물의 변화를 측정하고자, 쥐의 해마 조직을 인산완충식염수(phosphate buffer saline, PBS)을 사용하여 4℃에서 균질화하였다. 그 후 10,000 rpm에 5분 동안 원심분리하여 상층액을 사용하였다. 0.15 M 염화칼륨(potassium chloride)과 각각의 균질화된 조직 500 ㎕에 시료를 처리하여 20 mM 염화제2철(ferric chloride) 100 ㎕를 가하였다. 그 후 37℃ 인큐베이터(incubator)에서 30분간 반응시킨 후 15% TCA, 0.38% TBA와 0.5% BHT가 포함된 0.25 N cold-HCl을 500 ㎕를 첨가하였다. 90℃에서 60분간 열을 가해준 후 5,000 rpm, 4℃에서 5분 동안 원심분리하여 상층액을 흡광도 532 nm 파장에서 타이오바비투르산 반응성 물질(thiobarbituric acid reactive substances, TBARS)를 측정하였다.
분석결과, LPS는 실험동물의 뇌에서 MDA의 생성량을 170% 정도 증가시켰다. 이는 LPS에 의해 산화적 손상이 유도되었음을 의미한다. 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물(LMD)의 고용량 투여시(1000 mg/kg) LPS에 의해 증가된 MDA 생성량을 통계적으로 유의하게 감소시킴을 확인하였다.
또한, 양성대조군으로 사용한 페룰산(ferulic acid, FA)도 역시 LPS에 의한 MDA 생성을 억제함을 확인하였다(도 3).
4) 항염 효과 평가: 염증세포의 조직면역 염색 분석
레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물(LMD)의 항염증 효과를 분석하고자 LPS로 마우스에서 뇌 염증을 유발한 후, 7일간 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물(LMD) 경구 투여한 후 뇌 조직에서 염증 관련 세포인 미세교세포(microglia)와 성상교세포(astrocyte)의 증가 정도를 분석하였다. 구체적으로 Iba-1 항체를 이용하여 미세교세포(microglia)와 GFAP 항체를 이용하여 성상교세포(astrocyte)를 조직면역염색 하여 각 세포의 증가 정도를 분석하였다.
고정한 뇌 조직의 해마 부분을 골라 PBS로 3 회 세척한 후 내인성 과산화효소(peroxidase)를 제거하기 위하여 과산화수소로 처리하였다. 그 후 1차 항체 래빗 안티-Iba-1 (1:1000 희석), 또는 래빗 안티-GFAP (1:1000 희석)을 하룻밤 반응시켰다. 2차 항체는 바이오틴와 안티-래빗 (1:200 희석)을 사용하고, ABC 반응을 거쳐 DAB를 이 용하여 3 분간 발색시켰다.
각 과정 사이에 PBS로 3 회 세척을 행하였다. 염색반응을 완료시킨 후 해마 조직이 있는 커버슬라이드는 마운팅 용액을 이용해 덮어 건조 후 보관하였 다. 뇌 조직은 젤라틴 코팅된 슬라이드에 마운팅 후 70 내지 100 % 에탄올과 자일렌의 과정을 거치고 커버슬라이드로 조직을 덮어 보관하였다. 염색을 시행한 해마 슬라이스는 광학현미경(Olympus Microscope System BX51; Olympus, Tokyo, Japan)을 사용하여 관찰하였다. 각각의 항체에 양성인 부위의 면적을 전체 해마 면적에 대한 비율로 나타냈다.
분석결과, LPS는 실험동물의 뇌에서 성상교세포 표지자인 GFAP 양성 세포와 미세교세포 표지자인 Iba-1 양성세포의 증가를 유도하였다. 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물(LMD)의 경구 투여시 LPS로 유도된 성상교세포(GFAP 양성세포) 및 미세교세포(Iba-1 양성세포)의 증가를 유의하게 감소시켰다.
양성대조군(ferulic acid, FA)도 LPS에 의한 성상세포의 증가는 억제하였으나, 미세교세포의 증가는 감소하는 경향만 보이고 통계적 유의성을 보이지는 않았다(도 4).
즉, 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물(LMD)의 경구 투여가 동물모델에서 항염 효과를 나타냄을 확인하였다.
Claims (10)
- 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항염 또는 항균용 식품 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 혼합추출물은 레몬머틀, 맥문동 및 당귀를 1~3: 4~6: 2~4의 중량비로 혼합하여 추출한 것인, 항산화, 항염 또는 항균용 식품 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 혼합추출물은 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 열수 추출물인 것인, 항산화, 항염 또는 항균용 식품 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 항균은 황색포도구균(Staphylococcus aureus), 표피포도상구균(Staphylococcus epidermidis) 및 리스테리아균 모노사이토제니스(Listeria monocytogenes)로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 미생물의 생장을 억제하는 것인, 항산화, 항염 또는 항균용 식품 조성물. - 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항염 또는 항균용 화장료 조성물.
- 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 유효성분으로 포함하는 항균용 또는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제 6항에 있어서,
상기 염증성 질환은 뇌 또는 신경 염증성 질환인 것인, 약학 조성물 - 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화, 항염 또는 항균용 의약외품 조성물.
- 레몬머틀, 맥문동 및 당귀의 혼합추출물을 유효성분으로 포함하는 안티 폴루션용 식품 조성물.
- 제9항에 있어서,
상기 안티 폴루션은 황사 또는 미세먼지에 의해 유도되는 염증 또는 산화스트레스를 억제하는 것인, 안티 폴루션용 식품 조성물.
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| Date | Code | Title | Description |
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| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant |