KR20210086768A - 등수국 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균용 조성물 - Google Patents
등수국 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 등수국 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 조성물에 관한 것으로, 상기 등수국 추출물 또는 이의 분획물은 피부질환 또는 여드름을 유발하는 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis)와 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) 균주에 대해 우수한 항균 효과를 가지며, 등수국 추출물 및 이의 분획물이 에리트로마이신 내성을 가진 스타필로코커스 에피더미디스 및 프로피오니박테리움 아크네스에서 항균 효과를 나타내 항균용 조성물, 구체적으로 화장료 조성물로 이용가능하며, 또한, 여드름 개선 또는 치료용 약학조성물, 건강기능성식품 조성물 및 화장료 조성물로 이용 가능하다.
Description
본 발명은 등수국(Hydrangea petiolaris) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 항균용 조성물에 관한 것이다.
최근 현대인들은 과도한 스트레스와 불규칙한 생활습관뿐만 아니라 환경오염, 유해물질의 노출 등에 의해 아토피, 알러지, 염증 등의 피부 질환이 증가하는 추세에 있다. 이러한 피부 질환의 원인은 과량의 활성산소, 자외선 노출 등이 있으며, 과도하게 증식된 피부 상재균에 의해서 피부질환이 악화되는 것으로 알려져 있다.
피부 상재균은 그람 양성균인 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 황색포도상구균(Staphylococcus aureus) 및 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)와 그람 음성균인 대장균(Escherichia coli) 및 녹농균(Pseudomonas aeruginosa)이 있다.
이 중 여드름 유발균인 프로피오니박테리움 아크네스는 주로 모낭과 피지선이 많이 분포된 얼굴, 가슴 등에서 성장하며, 모낭의 피지선에 피지가 정체되면 모낭 입구는 막히게 되고 결국 모낭 내부에서 여드름균의 작용으로 여드름이 발생하게 된다. 또한, 우리 몸은 스트레스를 받게 되면 스트레스를 극복할 수 있는 호르몬인 코티솔(cortisol)을 분비하는데, 이로 인해 피지 분비가 더 많아지고 여드름이 더 악화된다.
스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis)는 표피포도상구균으로 외모낭이나 모낭의 중간에서 성장하며, 원발성 피부질환 및 여드름, 증상의 속발성을 악화시키는 원인균이다. 숙주의 면역반응인 식균작용을 저지하며 혈구 응집능의 억제, 숙주의 면역계를 손상시키는 것으로 알려져 있다.
이러한 균의 작용을 억제하여 염증성 피부질환을 치료하기 위해 항생제가 처방되고 있다. 현재 사용되고 있는 항생제 중에는 에리트로마이신(erythromycin), 레티노이드(retinoid), 트리클로산(triclosan), 과산화벤조일(benzyl peroxide), 테트라사이클린(tetracyclin) 등이 있다. 그러나 레티노이드, 과산화벤조일는 피부건조증이나 과민증을 유발하고, 에리트로마이신, 테트라사이클린은 항생제에 대한 내성 발생으로 인하여 지속적인 사용이 어려운 것으로 알려져 있다.
따라서 인체에 무해하며 유해한 세균으로부터 피부를 보호할 수 있는 천연 유래 항균물질을 찾으려는 노력이 지속되고 있다.
본 발명의 하나의 목적은 등수국(Hydrangea petiolaris) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 항균용 조성물을 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 등수국(Hydrangea petiolaris) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 여드름 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 등수국(Hydrangea petiolaris) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 여드름 질환의 예방 또는 개선용 건강기능성식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 등수국(Hydrangea petiolaris) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 여드름 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 등수국(Hydrangea petiolaris) 추출물 또는 이의 분획물에서 항균 활성 화합물을 분리하는 단계를 포함하는 등수국으로부터 항균활성 화합물을 분리하는 방법을 제공하는 것이다.
이러한 배경 하에서, 본 발명자들은 항균 효과를 나타내면서 부작용이 적은 천연물을 찾고자 예의 연구 노력한 결과, 등수국 잎의 추출물과 이의 분획물이 피부질환 또는 여드름을 유발하는 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis)와 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) 균주에 대해 우수한 항균 효과를 가지며, 등수국 추출물 및 이의 분획물이 에리트로마이신 내성을 가진 스타필로코커스 에피더미디스 및 프로피오니박테리움 아크네스에서 항균 효과를 가짐을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
상기의 목적을 달성하기 위해 본 발명은 하나의 양태로, 등수국(Hydrangea petiolaris) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균용 조성물을 제공한다.
본 발명의 용어 “등수국(Hydrangea petiolaris)”는 범의귀과의 덩굴식물로, 가지에서 땅위로 나와 있는 뿌리를 내려서 암벽과 나무줄기를 타고 20 m 정도 자란다. 주로 울릉도, 제주도, 일본의 해안, 산지에서 자라며, 제주도에서는 해발 1,700 m 이하의 숲 속이나 계곡의 바위 또는 수간에 붙어 자란다. 꽃은 6~7월에 피고, 가지 끝에 달리는 지름 14~25 cm의 산방상 취산꽃차례를 이루며, 가장자리의 중성화에 꽃잎같은 3~4개의 꽃받침잎이 있으며 가장자리에 톱니가 있고 지름 3 ㎝정도이다. 안쪽의 양성화는 꽃받침잎과 꽃잎이 각각 5개, 수술은 15~20개, 암술대는 2~3개이며 자방은 2~3실이다. 열매는 삭과로서 구형이나 뒷부분이 편평하게 잘린 모양이고 절두이며 9~10월에 갈색으로 익는다. 잎은 마주나고 넓은 달걀 모양 또는 원형이며 끝이 뾰족하고 밑은 둥글거나 심장저로서 가장자리에 톱니가 있다. 잎자루의 길이는 3~9cm이다. 종자와 삽목번식을 통하여 증식이 이루어지며 종자를 이끼 위에 파종, 육묘하면 다량의 묘목을 얻을 수 있다.
본 발명에서 상기 항균용 조성물은 등수국을 건조 및 파쇄하여 분말화한 것을 추출에 적용할 수 있고, 등수국의 잎, 줄기, 뿌리, 꽃 또는 이들 모두를 포함할 수 있으며, 구체적으로는 잎을 사용할 수 있다.
본 발명에서 용어, "추출물"은 추출 처리에 의하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다.
본 발명에서 추출물의 건조는 채취한 식물로부터 유용한 성분들이 파괴되지 않는 범위에서 공지의 방법으로 진행될 수 있고, 예를 들어 음지에서 자연건조의 방법으로 진행될 수 있다. 또한, 파쇄 또는 분쇄는 이후 추출과정에서 식물의 유용한 성분들이 충분하게 추출될 수 있을 정도로 파쇄 또는 분쇄하여 분말화할 수 있다. 상기 건조와 파쇄 또는 분쇄 공정은 필요에 따라서 순서를 뒤바꿔서 진행하거나 반복하여 실시할 수 있다.
본 발명의 추출에 있어서, 상기 추출하는 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다.
본 발명에서 등수국 추출물은 물, 유기용매, 또는 이들의 혼합용매를 이용하는 추출과정으로 획득할 수 있다. 구체적으로 물, 메탄올, 에탄올 및 부탄올 등과 같은 탄소수 1(C1) 내지 4(C4)의 알코올 또는 이들의 혼합용매를 이용하여 수득될 수 있다. 또한, 상기 저급 알코올은 에탄올일 수 있다.
본 발명에서 용어 “분획물”은 다양한 구성성분을 포함하는 혼합물로부터 특정 성분 또는 특정 그룹을 분리하는 분획방법에 의하여 얻어진 결과물을 의미한다.
본 발명에서 상기 분획물을 얻는 분획 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 수행될 수 있다. 상기 분획 방법의 비제한적인 예로는, 등수국 추출물에 소정의 용매를 처리하여 상기 추출물로부터 분획물을 얻는 방법을 들 수 있다.
본 발명의 등수국 추출물을 증류수(물)에 현탁한 후, 탄소수 1(C1) 내지 4(C4)의 알코올, 에틸아세테이트, n-헥산 또는 이들의 혼합용매를 사용하여 분획함으로써 수득할 수 있다.
본 발명의 실시예에서 건조 G 분쇄된 등수국 잎을 70%(v/v) 에탄올에 넣고 상온에서 24시간동안 침출하고, 여과하여 등수국 잎 추출물을 증류수에 현탁한 후 n-헥산을 첨가하여 n-헥산 분획물을 수득하고, 상기 n-헥산 분획물을 제외한 남은 수용층에 에틸아세테이트를 추가하여 에틸아세테이트 분획물을 수득하였으며, 상기 에틸아세테이트 분획물을 제외하고 남은 수용성 성분에 n-부탄올을 추가하여 부탄올 분획물을 수득하였다. 상기 n-부탄올 분획물을 제외하고 남은 수용성 성분을 물 분획물로 수득하였다.
본 발명에서 상기 분획물은 n-헥산 분획물, 에틸아세테이트 분획물, n-부탄올 분획물 또는 물 분획물이다.
본 발명의 실시예에서 등수국 잎 에탄올 추출물과 상기 추출물의 n-헥산 분획물, 에틸아세테이트 분획물, n-부탄올 분획물이 스타필로코커스 에피더미디스 및 프로피오니박테리움 아크네스에 대해 생육을 억제함을 확인하였다. 반면 등수국 에탄올 추출물의 물 분획물은 스타필로코커스 에피더미디스 및 프로피오니박테리움 아크네스에 대해 생육 억제 활성이 없음을 확인하였다.
또한, 양성 대조군인 에리트로마이신은 스타필로코커스 에피더미디스 CCARM 3710과 프로피오니박테리움 아크네스 CCARM 9009, CCARM 9010 균주에 대해 생육 억제 활성이 나타나지 않았으나, 등수국 추출물, 이의 n-헥산 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 또는 n-부탄올 분획물은 이들 균주(CCARM 3710, CCARM 9009, CCARM 9010)에 대해 생육 억제 활성을 나타냄을 확인하였다.
즉, 등수국 추출물 및 이의 분획물이 에리트로마이신에 대해 내성을 가지는 스타필로코커스 에피더미디스 및 프로피오니박테리움 아크네스에 대해 항균 활성을 가짐을 확인하였다.
따라서 본 발명의 등수국 추출물 또는 이의 분획물은 항균 용도의 약학, 식품, 의약외품 및 화장료 조성물로 이용할 수 있다.
따라서 본 발명에서 용어 “항균”은 미생물에 대한 생장 억제 및 저해, 사멸효과를 가지는 것으로, 구체적으로 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) 또는 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis)에 대해 항균 활성 가지는 것일 수 있다.
구체적으로 상기 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) 또는 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis)는 에리트로마이신(erythromycin)에 대해 내성을 가지는 것일 수 있다.
본 발명의 다른 실시예에서 등수국 추출물 또는 이의 분획물의 스타필로코커스 에피더미디스 균주(CCARM 3709, CCARM 3710, CCARM 3711)에 대한 최소억제농도와 최소사멸농도를 측정하여 항균활성을 분석한 결과, CCARM 3709 균주에 대해 n-부탄올 분획물이 최소억제농도와 최소사멸농도가 가장 낮게 측정되어 CCARM 3709 균주에 대한 항균효과가 우수함을 확인하였고, CCARM 3710 균주에 대해서는 에탄올 추출물, 에틸아세테이트 분획물 및 n-부탄올 분획물에서 최소억제농도(1000 ㎍/㎖)와 최소사멸농도(2000 ㎍/㎖)가 모두 우수하게 측정되었으며, CCARM 3711 균주는 에틸아세테이트 분획물의 최소억제농도와 최소사멸농도가 가장 낮게 측정되어 에틸아세테이트 분획물이 CCARM 3711 균주에 대한 항균효과가 가장 우수함을 확인하였다.
반면 n-헥산 분획물과 물 분획물은 CCARM 3709, CCARM 3710, CCARM 3711 균주에 대해 최소억제농도와 최소사멸농도가 모두 4000㎍/㎖ 이상으로 측정되어 항균효과가 미흡함을 확인하였다.
즉, 등수국 추출물의 에틸아세테이트 분획물 및 n-부탄올 분획물이 항균효과가 우수함을 확인하였다.
따라서 본 발명의 분획물은 구체적으로 에틸아세테이트 또는 탄소수 1(C1) 내지 4(C4)의 알코올 용매로 분획한 것일 수 있으며, 상기 탄소수 1(C1) 내지 4(C4)의 알코올 용매는 부탄올일 수 있다.
본 발명의 다른 양태로 상기 항균용 조성물을 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에서 항균에 관한 설명은 전술한 바와 같다.
본 발명의 화장용 조성물은 등수국 추출물 또는 이의 분획물을 포함하여 항균 효과를 가지며, 구체적으로 프로피오니박테리움 아크네스 또는 스타필로코커스 에피더미디스 균주에 대해 항균 효과를 가진다.
본 발명의 화장료 조성물은 상기 항균용 조성물 이외에 통상적으로 허용되는 성분들을 제한없이 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 용액, 외용연고, 크림, 폼, 영양화장수, 유연화장수, 팩, 유연수, 유액, 메이크업베이스, 에센스, 비누, 액체 세정료, 입욕제, 선 스크린크림, 선오일, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 패치 및 스프레이로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 제형으로 제조할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물은 일반 피부 화장료에 배합되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체를 1 종 이상 추가로 포함할 수 있으며, 통상의 성분으로 예를 들면 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알콜, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체는 제형에 따라 다양하다.
본 발명의 제형이 연고, 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는, 담체성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 또는 이들의 혼합물이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 또는 이들의 혼합물이 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되며, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알콜, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일이 이용될 수 있으며, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알콜, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 비누인 경우에는 담체 성분으로서 지방산의 알칼리 금속 염, 지방산 헤미에스테르 염, 지방산 단백질 히드롤리제이트, 이세티오네이트, 라놀린 유도체, 지방족 알콜, 식물성 유, 글리세롤, 당 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시테이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 오일, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 또 다른 양태로 등수국 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 여드름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에서 등수국, 추출물, 분획물, 화장료 조성물에 관한 설명은 전술한 바와 같다.
전술한 실시예에서 등수국 추출물 또는 이의 분획물이 피부질환 또는 여드름을 유발하는 스타필로코커스 에피더미디스와 프로피오니박테리움 아크네스 균주에 대해 항균활성을 가지며 또한, 항생제인 에리트로마이신(erythromycin) 내성을 가진 균주에 항균활성을 가짐을 확인하였다.
따라서 본 발명에서 사용된 용어 “여드름 개선”은 피부상에서 여드름 유발 균주인 스타필로코커스 에피더미디스 또는 프로피오니박테리움 아크네스의 생육을 저해하거나 감소시켜 여드름의 증상을 완화 또는 개선시키는 것을 의미한다. 구체적으로 항생제 내성 스타필로코커스 에피더미디스 균주 또는 항생제 내성 프로피오니박테리움 아크네스 균주에 대해 항균 활성을 통해 여드름을 개선시키는 것일 수 있다.
본 발명의 또 다른 양태로 등수국 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 여드름 질환의 예방 또는 개선용 건강기능성식품 조성물을 제공한다.
본 발명에서 등수국, 추출물, 분획물, 여드름에 관한 설명은 전술한 바와 같다.
본 발명에서 사용된 용어 “여드름 질환”은 모피지선, 모낭 및 주변조직에서 발생하는 복합적인 염증성 피부질환으로, 면포라는 발진을 특징적 증상으로 한다. 면포는 얼굴, 이마, 콧등에 가장 자주 나타나는 나사 모양의 굳어진 피지 덩어리로, 면포 내부에는 여드름 원인균으로 알려진, 혐기성균인 프로피오니박테리움 아크네스가 생장하고, 면포 표면에는 호기성균인 스타필로코커스 에피더미디스가 생장하며, 생산하는 여러 화학성분이 모낭 및 주위피부에 염증을 일으킨다.
본 발명의 용어, “예방’이란, 본 발명에 따른 조성물을 개체에 투여하여 여드름의 발병을 억제하거나 지연시키는 모든 행위를 의미할 수 있고, “개선”은, 본 발명에 따른 조성물을 개체에 투여하여 여드름 증상을 완화 또는 감소시키는 것을 의미한다.
구체적으로 항생제 내성 스타필로코커스 에피더미디스 균주 또는 항생제 내성 프로피오니박테리움 아크네스 균주에 대해 항균 활성을 통해 여드름을 예방 또는 개선시키는 것일 수 있다.
본 발명에서 사용된 용어 "건강기능성 식품"이란 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등의 형태로 제조 및 가공한 식품을 말한다. 여기서 기능성이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의 건강기능성 식품은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어날 수 있다.
유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품의 제조 시에 본 발명의 파디나 코머소니 재분획물은 원료 조성물 중 1 내지 50 중량%, 바람직하게는 5 내지 10 중량%의 양으로 첨가될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능성 식품을 모두 포함한다.
본 발명의 또 다른 양태로 등수국 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 여드름 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명에서 등수국, 추출물, 분획물, 여드름 질환, 예방에 관한 설명은 전술한 바와 같다.
본 발명의 용어, “치료”란, 본 발명의 상기 조성물에 의해 여드름에 의한 증세가 호전되도록 하거나 이롭게 되도록 하는 모든 행위를 의미할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 유효성분 이외의 약학 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형체 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 이때, 상기 조성물에 포함되는 등수국 추출물 또는 이의 분획물은 특별히 이에 제한되지 않으나, 조성물 총 중량에 대하여 0.001 중량% 내지 99 중량%로, 바람직하게는 0.01 중량% 내지 50 중량%를 포함할 수 있다.
상기 약학 조성물은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결 건조제 및 좌제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가질 수 있으며, 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.
경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 약학으로 유효한 양으로 투여할 수 있다. 본 발명에서 용어, "약학으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 질병의 종류, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
적합한 총 1일 사용량은 올바른 의학적 판단범위 내에서 처치에 의해 결정될 수 있으며, 일반적으로 0.001 내지 1000 mg/kg의 양, 바람직하게는 0.05 내지 200 mg/kg, 보다 바람직하게는 0.1 내지 100 mg/kg의 양을 일일 1회 내지 수회로 나누어 투여할 수 있다.
본 발명은 다른 양태로, 등수국 추출물 또는 이의 분획물에서 항균 활성 화합물을 분리하는 단계를 포함하는 등수국으로부터 항균 활성 화합물을 분리하는 방법을 제공한다.
본 발명에서 등수국, 추출물, 분획물에 대한 설명은 전술한 바와 같다.
본 발명의 항균 활성 화합물은 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) 또는 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis)에 대해 생장 억제 또는 사멸 효과를 가져 항균 활성을 가지는 화합물로, 아시아틱산(asiatic acid) 또는 코로솔릭산(corosolic acid)을 포함한다.
상기 프로피오니박테리움 아크네스 또는 스타필로코커스 에피더미디스는 항생제에 대해 내성을 가지는 균주로 구체적으로 에리트로마이신(erythromycin)에 대해 내성을 가지는 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에서 에틸아세테이트(EtOAc) 분획물 5.0 g을 극성에 따라 순차적으로 세분화하기 위하여 MPLC(medium pressure liquid chromatography)를 수행하였다. 에틸아세테이트(EtOAc) 분획물 5.0 g을 메탄올(MeOH) 7㎖, DMSO 3㎖에 녹이고 0.45 ㎛ PVDF 필터를 이용해 여과한 후 주입하였으며 컬럼(column)은 역상 실리카겔(C18)을 사용하였다. 기울기 용리법을 이용해 메탄올(MeOH):물(H2O)(10→50%, 100분), 메탄올(MeOH):물(H2O)(50→100%, 20분), 메탄올(MeOH)(100%, 10분)의 용매 조건들로 극성 비율을 순차적으로 낮추면서 각각 40 ㎖씩 용출시켜 총 48개의 분획물(fraction, Fr.)을 얻었다. MPLC 분획물 중 Fr.48로부터 화합물 2(corosolic acid 31.4 mg)를 얻었으며, Fr.46-47(141.8 mg)을 클로로포름(CHCl3):메탄올(MeOH)=15:1의 용매 조건으로 세파덱스 LH-20 컬럼 크로마토그래피(Sephadex LH-20 column chromatograpy)를 수행하여 화학물 1 (asiatic acid 5.0 mg)을 얻었다.
상기 분리된 아시아틱산(asiatic acid) 또는 코로솔릭산(corosolic acid)은 항균 효과가 있다고 보고되어 있다. 따라서 등수국 추출물 또는 이의 분획물에서 항균 활성 화합물을 분리할 수 있다.
상기 등수국 추출물 또는 이의 분획물에서 항균 활성 화합물을 분리하는 단계는 등수국 추출물 또는 이의 분획물을 크로마토그래피 상에서 용출 용매의 극성 조건을 달리하며 분리하는 것을 특징으로 한다. 구체적으로 상기 크로마토그래피는 MPLC(medium pressure liquid chromatography) 또는 세파덱스 LH-20 컬럼 크로마토그래피일 수 있다.
상기 용출용매는 탄소수 1 내지 4의 알코올, 클로로포름 및 물로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상일 수 있다.
본 발명은 등수국 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 조성물에 관한 것으로, 상기 등수국 추출물 또는 이의 분획물은 피부질환 또는 여드름을 유발하는 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis)와 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) 균주에 대해 우수한 항균 효과를 가지며, 등수국 추출물 및 이의 분획물이 에리트로마이신 내성을 가진 스타필로코커스 에피더미디스 및 프로피오니박테리움 아크네스에서 항균 효과를 나타내 항균용 조성물, 구체적으로 화장료 조성물로 이용가능하며, 또한, 여드름 개선 또는 치료용 약학조성물, 건강기능성식품 조성물 및 화장료 조성물로 이용 가능하다.
이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 첨부한 도면을 참고로 하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.
<실시예 1> 등수국 잎 추출물 및 분획물 제조
본 발명에 사용된 시료인 등수국(Hydrangea petiolaris) 잎은 2018년 1월에 제주생물자원(주)로부터 구입하여 사용하였다. 건조 및 분쇄된 등수국 잎 120 g을 70%(v/v) 에탄올(EtOH) 20 L에 넣고 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 침출시킨 시료를 감압 여과 장치를 이용하여 여액만 취하였으며, 이와 같은 방법으로 분리한 잔사에 대하여 동일한 조건으로 2회 더 반복 실시하였다. 이후 여과하여 얻어진 여액은 40℃ 이하의 수욕 상에서 회전 농축기(rotary evaporator)로 농축하여 70% 에탄올 추출물 38.5g을 수득하였다. 상기 수득한 70% 에탄올 추출물을 증류수 1 L에 현탁시키고, 분별 깔때기를 이용해 극성순서에 따라 순차적으로 분획하여 n-헥산(n-hexane, n-Hex), 에틸아세테이트(ethyl acetate, EtOAc), n-부탄올(n-butanol, n-BuOH) 및 물(water, H2O) 순서로 총 4개의 용매 분획 층을 얻었다. 상기 생성된 분획물들은 각각 감압 농축하여 분말 형태의 등수국 잎 분획물로 준비하였다.
<실시예2 > 균주배양
상기 실시예1에서 수득한 등수국 잎 추출물 및 용매 분획물 시료의 항균활성을 측정하기 위해, 피부상재균인 표피포도상구균(Straphylococcus epidermidis; CCARM 3709, 3710, 3711), 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes; CCARM 0081, 9009, 9010, 9089)를 항생제 내성균주은행(Culture Collection of Antimicrobial Resistant Microbes)으로부터 분양 받아 사용하였다. S. epidermidis의 경우, TSB(tryptic soy broth) 배양 배지를 사용하여 3계대 배양하고, P. acnes의 경우, GAM(gifu anaerobic medium) 배양 배지를 사용하여 3계대 배양한 후 항균 활성 실험에 사용하였다.
<실시예3> 등수국 잎 추출물 및 이의 분획물의 항균활성 측정
3.1. 페이퍼 디스크 확산법(Paper disc diffusion method)
시료의 항균 활성을 측정하기 위하여 페이퍼 디스크 확산법으로 생육 저지환(clear zone)의 크기를 측정하였다. S. epidermidis와 P. acnes를 0.5 McFarlnad standard로 탁도를 조절하여 0.8% 한천을 포함하는 TSB 및 GAM 배지에 넣어 1.5% 한천을 포함하는 고체 배지 위에 부었다. 배지가 굳으면 등수국 잎 추출물 및 용매 분획물 시료가 처리된 직경 8 mm 페이퍼 디스크를 배지 위에 올리고 S. epidermidis는 37℃에서 24시간 배양하였고, 혐기성인 P. acnes는 인큐베이션 용기(incubating jar) 내에 CO2 가스 팩을 넣어준 뒤 밀봉하여 37℃에서 48시간 배양하였다. 배양 후 형성된 원형 발육 저지환(clear zone)의 직경 크기를 측정하였으며, 대조군으로는 에리트로마이신(erythromycin, 1 mg/㎖)을 사용하였다.
상기 표 1에 나타나 있듯이, 등수국 추출물은 S. epidermidis (CCARM 3709, 3711)과 P. acnes (CCARM 0081, 9009, 9010)에 대해 생육 억제 활성을 나타냈다.
등수국 추출물의 n-Hex 분획물은 P. acnes (CCARM 0081, 9009, 9010)에 대하여 항균 활성을 나타냈고, 등수국 추출물의 에틸아세테이트(EtOAc) 분획물은 S. epidermidis 균주 및 P. acnes 균주 모두에 대해 생육 억제 활성을 나타냈다. 부탄올(n-BuOH) 분획물에서는 S. epidermidis (CCARM 3709, 3710, 3711)와 P. acnes (CCARM 0081)에 대하여 생육 억제 활성을 나타냈다.
반면, 물 분획물은 생육 억제 활성이 나타나지 않음을 확인하였다.
또한, 양성 대조군인 에리트로마이신은 S. epidermidis 인 CCARM 3710과 P.acnes CCARM 9009, CCARM 9010 균주에 대해 생육 억제 활성이 나타나지 않았으나, 등수국 추출물, 이의 n-Hex 분획물, EtOAc 분획물, 또는 n-BuOH 분획물은 이들 균주(S. epidermidis: CCARM 3710, 또는 P.acnes: CCARM 9009, CCARM 9010)에 대해 생육 억제 활성을 나타냈다.
따라서 등수국 추출물 또는 이의 분획물(n-Hex, EtOAc, 또는 n-BuOH)이 에리트로마이신에 대해 내성을 가지는 S. epidermidis(CCARM 3710) 또는 P.acnes: (CCARM 9009, CCARM 9010)에 대해 항균 활성을 가짐을 확인하였다.
3.2 최소억제농도(minimum inhibitory concentration, MIC) 및 최소사멸농도(minimum bactericidal concentration, MBC) 분석
최소억제농도(MIC)는 미생물의 성장을 막는 항생물질의 최소농도로 미생물에 대한 MIC 값이 낮으면 낮을수록 그 미생물에 대한 감수성이 높다고 할 수 있다. MIC 측정은 액체배지 희석법을 변형하여 사용하였다.
96 웰 플레이트에 배지로 희석한 시료 100㎕와 0.5 McFarland standard로 탁도를 조절한 균 100㎕를 넣어 S. epidermidis는 37℃에서 24시간 배양하여 균의 증식이 나타나지 않는 최소농도를 확인하였다.
최소사멸농도는(MBC)란 미생물이 완전히 사멸하는 최소 농도를 의미한다. MIC 값이 나타난다 해도 그 균은 모두 사멸한 것이 아니며, 시료의 영향으로 균의 성장을 방해하여 균이 자라지 않아 모두 죽은 것처럼 보일 수 있기 때문이다.
MIC를 진행한 96 웰 플레이트에 루프(loop)를 이용하여 시료 배양액을 찍어내서 하드배지에 도말 하였고, S. epidermidis는 37℃에서 24시간 배양하여 콜로니가 형성되지 않는 최소농도를 확인하였다.
상기 표 2에서 나타났듯이, 등수국 추출물과 이의 에틸아세테이트 분획물 또는 n-부탄올 분획물이 S. epidermidis (CCARM 3709, CCARM 3710, CCARM 3711)에 대하여 MIC 값이 500 내지 2000 ㎍/㎖이며, MBC 값이 1000 내지 4000 ㎍/㎖임을 확인하엿다.
구체적으로 CCARM 3709 균주에 대해 n-부탄올 분획물이 최소억제농도와 최소사멸농도가 가장 낮게 측정되어 CCARM 3709 균주에 대한 항균효과가 우수함을 확인하였고, CCARM 3710 균주에 대해서는 에탄올 추출물, 에틸아세테이트 분획물 및 n-부탄올 분획물에서 최소억제농도(1000 ㎍/㎖)와 최소사멸농도(2000 ㎍/㎖)가 모두 우수하게 측정되었으며, CCARM 3711 균주는 에틸아세테이트 분획물의 최소억제농도와 최소사멸농도가 가장 낮게 측정되어 에틸아세테이트 분획물이 CCARM 3711 균주에 대한 항균효과가 가장 우수함을 확인하였다.
반면 n-헥산 분획물과 물 분획물은 CCARM 3709, CCARM 3710, CCARM 3711 균주에 대해 최소억제농도와 최소사멸농도가 모두 4000 ㎍/㎖ 이상으로 측정되어 항균효과가 미흡함을 확인하였다.
즉, 등수국 추출물의 에틸아세테이트 분획물 또는 n-부탄올 분획물의 항균 활성이 우수함을 확인하였다.
<실시예4> 등수국 잎 추출물의 에틸아세테이트(EtOAc) 분획물로부터 화합물 분리 및 구조 동정
상기 실시예1에서 수득한 에틸아세테이트(EtOAc) 분획물 5.0 g을 극성에 따라 순차적으로 세분화하기 위하여 MPLC(medium pressure liquid chromatography)를 수행하였다. 에틸아세테이트(EtOAc) 분획물 5.0 g을 메탄올(MeOH) 7 ㎖, DMSO 3㎖에 녹이고 0.45 ㎛ PVDF 필터를 이용해 여과한 후 주입하였으며 컬럼(column)은 역상 실리카겔(C18)을 사용하였다. 기울기 용리법을 이용해 메탄올(MeOH): 물(H2O)(10→50%, 100분), 메탄올(MeOH):물(H2O)(50→100%, 20분), 메탄올(MeOH)(100%, 10분)의 용매 조건들로 극성 비율을 순차적으로 낮추면서 각각 40 ㎖씩 용출시켜 총 48개의 분획(fraction, Fr.)을 얻었다. MPLC 분획물 중 Fr.48로부터 화합물 2(corosolic acid 31.4 mg)를 얻었다.
Fr.46-47(141.8 mg)을 클로로포름(CHCl3):메탄올(MeOH)=15:1의 용매 조건으로 세파덱스 LH-20 컬럼 크로마토그래피(Sephadex LH-20 column chromatograpy)를 수행하여 화합물 1 (아시아틱산, asiatic acid 5.0 mg)을 얻었다.
상기와 같이 에틸아세테이트(EtOAc) 분획물로부터 총 2개의 활성 화합물을 분리하여 1H-핵자기공명 스펙트럼(1H NMR spectrum) 및 13C-핵자기공명 스펙트럼(13C-NMR spectrum)을 측정하여 구조를 동정한 결과, 화합물 1은 아시아틱산(asiatic acid)으로, 화합물 2는 코로솔릭산(corosolic acid)으로 동정되었다.
Claims (12)
- 등수국 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균용 조성물.
- 제 1항에서,
상기 등수국 추출물은 등수국 잎 추출물인 것인, 조성물. - 제 1항에서,
상기 등수국 추출물은 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 추출한 것인 항균용 조성물. - 제1항에서
상기 분획물은 등수국 추출물의 n-헥산, 에틸아세테이트 및 n-부탄올로 이루어진 군에서 선택되는 어는 하나 이상의 용매 분획물인 것인, 조성물. - 제 1항에서
상기 등수국 추출물 또는 이의 분획물은 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) 또는 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis)에 대해 항균 활성을 나타내는 것인, 조성물. - 제 5항에서
상기 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) 또는 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis)는 에리트로마이신(erythromycin)에 대해 내성을 가지는 것인, 조성물. - 제 1항 내지 6항의 항균용 조성물을 포함하는 화장료 조성물.
- 등수국 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 여드름 개선용 화장료 조성물.
- 등수국 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 여드름 질환의 예방 또는 개선용 건강기능성식품 조성물
- 등수국 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 여드름 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 등수국 추출물 또는 이의 분획물에서 항균 활성 화합물을 분리하는 단계를 포함하는 등수국으로부터 항균활성 화합물을 분리하는 방법.
- 제 11항에서,
상기 항균 활성 화합물을 아시아틱산(asiatic acid) 또는 코로솔릭산(corosolic acid)인 것인, 항균 활성 화합물을 분리하는 방법
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