KR20210100302A - 복분자 추출물을 유효성분으로 함유하는 호흡기 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 복분자(Rubus coreanus Miquel fruits) 추출물을 유효성분으로 함유하는 호흡기 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 추출물이 세포독성이 없고, 유의적인 항염증 효과를 나타내며, 기관지 세포에서 염증성 점액단백질의 분비를 유의적으로 억제하고, 천식 및 미세먼지에 의한 호흡기 질환 개선 효과가 있으므로, 기관지염, 천식, 폐렴, 만성 폐쇄성 폐질환 등을 포함하는 호흡기 질환 예방 또는 치료용, 진해 또는 거담용 조성물의 유효성분으로 이용할 수 있다.
Description
본 발명은 복분자 (Rubus coreanus Miquel fruits) 추출물을 포함하는 호흡기 질환 예방 또는 치료용, 또는 진해 및 거담용 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 상기 추출물을 포함하는 호흡기 질환 예방 또는 치료용 식품 및 약학적 조성물에 관한 것이다.
우리 몸의 호흡기는 물리 화학적인 자극에 대해 끊임없이 방어하고 있는 기관 중 하나로 자극물질이 호흡기로 유입되면 대부분의 자극물질은 코털에 걸려 호흡기로 들어오지 못하나 이를 통과한 미세한 자극물질은 점액으로 둘러싸이고, 기도 벽에 위치한 미세한 섬모의 운동에 의해 위로 또는 밖으로 내보내 지게 되는데 , 바로 이것이 기침의 기본 작용원리이다.
비·부비동염과 천식, 만성기관지염, 낭종성섬유증 등과 같은 염증성 호흡기질환에서는 과다한 점액 분비 또는 점도의 변화로 인하여 병의 이환율 및 사망률을 증가시킬 수 있으므로, 점액이 과다분비 되지 않게 조절하는 것이 임상적으로 매우 중요하다. 점액은 물과 이온, 점소 (mucin), 여러 종류의 고분자 물질로 이루어지는데, 이 중 점소는 점액의 유동학적과 물리화학적, 또는 생화학적 특성을 결정할 때 가장 큰 영향을 미치는 당단백으로 점액 유전자에 의해 생성이 조절된다.
현재 사람에서 20여 가지의 점액 유전자가 발견되었고, 점액 유전자에 의해 발현되는 점액단백질 구조에 따라 분비형 점소 (secreted mucin)인 MUC2와 MUC5AC, MUC5B, MUC8 과 세포의 수용체 역할을 하는 막성점소 (transmembrane mucin)인 MUC1과 MUC4, MUC11, MUC13, MUC15, MUC20 로 크게 나뉠 수 있다. 그 중 MUC4와 MUC5AC, MUC5B, MUC8이 호흡기에서 발현되는 중요한 점액 유전자로 알려져 있다.
사람의 호흡기 상피세포에서 lipopolysaccharide(LPS)는 그람 음성 세균의 외막성분으로 인체 내에서 toll like receptor(TLR) 4를 활성화하여 mitogen activated protein kinase(MAPK) 경로를 통해 대식세포를 자극시켜 사이토카인(cytokine)을 유도하여 여러 염증 반응을 일으켜서 점액 유전자 발현과 점액 단백 생성을 증가시킨다.
복분자 (Rubus coreanus Miquel fruits)는 장미과에 속하는 다년생의 낙엽 활엽성 관목으로 한국, 중국, 그리고 일본이 원산지임. 복분자는 5~6월에 연한 분홍색의 꽃이 피고, 7~8월에 열매를 수확하여 식용한다. 현재까지 복분자의 효능에 대해 보고된 내용에 의하면 한방에서는 복분자 미숙과 말린 것을 한약재로 사용하고 있고, 간 기능 강화, 갈증 해소, 성기능 상승, 시력보호, 배뇨개선 및 기력상승 등이 알려져 있다. 복분자는 철과 칼륨, 인 등의 무기질, ascorbic acid 및 여러 종류의 유기산이 포함되어 있으며, quercetin이나 kamferol과 같은 페놀성 화합물, 가수분해성 탄닌 등이 함유되어 있다.
이에, 본 발명자들은 천연물 유래 호흡기 질환 치료제를 개발하기 위해 노력한 결과, 복분자 (Rubus coreanus Miquel fruits) 추출물이 세포독성이 없고, 유의적인 항염증 효과를 나타내며, 기관지 세포에서 염증성 점액단백질의 분비를 유의적으로 억제하는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서 본 발명의 목적은, 복분자 (Rubus coreanus Miquel fruits) 추출물을 포함하는 호흡기 질환 예방 또는 치료용 식품 및 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 복분자 (Rubus coreanus Miquel fruits) 추출물을 유효성분으로 함유하는, 호흡기 질환 예방용 식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 복분자 추출물을 유효성분으로 함유하는, 호흡기 질환 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 복분자 추출물을 유효성분으로 함유하는, 항염증용 식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 복분자 추출물을 유효성분으로 함유하는, 항염증용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 최적 복분자 추출물이 세포독성이 없고, 유의적인 항염증 효과를 나타내며, 기관지 세포에서 염증성 점액단백질과 염증성 사이토카인 분비를 유의적으로 억제하는 효과가 있으므로, 기관지염, 천식, 폐렴, 만성 폐쇄성 폐질환 등을 포함하는 호흡기 질환 예방 또는 치료용 조성물의 유효성분으로 유용하게 이용할 수 있다.
1은 RAW 264.7 세포에 LPS (Lipopolysaccharide) 100 ng/mL 또는 LPS 100 ng/mL와 본 발명의 실시예에서 제조한 복분자추출물을 처리한 후 세포생존율을 확인한 도이다.
도 2는 RAW 264.7 세포에 LPS (Lipopolysaccharide) 100 ng/mL 또는 LPS 100 ng/mL와 본 발명의 실시예에서 제조한 복분자추출물을 처리한 후 NO 생성 정도를 확인한 도이다.
도 3은 NCI-H292 세포에 LPS 20 μg/mL 및 PMA 100 ng/mL, LPS 20 μg/mL 및 PMA 100 ng/mL 및 복분자추출물을 농도별로 처리한 후 세포생존율을 확인한 도이다.
도 4은 NCI-H292 세포에 LPS 20 μg/mL 및 PMA 100 ng/mL, LPS 20 μg/mL 및 PMA 100 ng/mL 및 복분자추출물을 농도별로 처리한 후 MUC5AC의 분비량을 확인한 도이다.
도 5은 NCI-H292 세포에 LPS 20 μg/mL 및 PMA 100 ng/mL, LPS 20 μg/mL 및 PMA 100 ng/mL 및 복분자추출물을 농도별로 처리한 후 TNF-α의 분비량을 확인한 도이다.
도 2는 RAW 264.7 세포에 LPS (Lipopolysaccharide) 100 ng/mL 또는 LPS 100 ng/mL와 본 발명의 실시예에서 제조한 복분자추출물을 처리한 후 NO 생성 정도를 확인한 도이다.
도 3은 NCI-H292 세포에 LPS 20 μg/mL 및 PMA 100 ng/mL, LPS 20 μg/mL 및 PMA 100 ng/mL 및 복분자추출물을 농도별로 처리한 후 세포생존율을 확인한 도이다.
도 4은 NCI-H292 세포에 LPS 20 μg/mL 및 PMA 100 ng/mL, LPS 20 μg/mL 및 PMA 100 ng/mL 및 복분자추출물을 농도별로 처리한 후 MUC5AC의 분비량을 확인한 도이다.
도 5은 NCI-H292 세포에 LPS 20 μg/mL 및 PMA 100 ng/mL, LPS 20 μg/mL 및 PMA 100 ng/mL 및 복분자추출물을 농도별로 처리한 후 TNF-α의 분비량을 확인한 도이다.
이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다
본 발명은 복분자 (Rubus coreanus Miquel fruits) 추출물을 유효성분으로 함유하는, 호흡기 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 유효성분인 복분자 추출물은 하기의 단계들을 포함하는 방법에 의해 제조되는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다:
1) 복분자 각각에 추출용매를 가하여 추출하는 단계;
2) 단계 1)의 추출물을 여과하는 단계;
3) 단계 2)의 여과물을 감압 농축하는 단계; 및
4) 단계 3)의 농축물을 건조하는 단계
본 발명의 제조방법에 있어서, 단계 1)의 복분자는 재배한 것 또는 시판되는 것을 제한 없이 사용할 수 있다.
본 발명의 제조방법에 있어서, 상기 단계 1)의 추출용매는 물, 알코올 또는 이의 혼합물을 사용하는 것이 바람직하다. 상기 알코올로는 C1 내지 C2의 저급 알코올 이용하는 것이 바람직하며, 저급 알코올로는 에탄올 또는 메탄올을 이용하는 것이 바람직하다. 추출방법으로는 진탕추출, Soxhelt 추출 또는 환류 추출을 이용하는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 상기 추출용매를 건조된 복분자 분량의 1 내지 12배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하고, 3 내지 10배 첨가하여 추출하는 것이 보다 바림직하며, 5 내지 8배 첨가하여 추출하는 것이 보다 더 바람직하다.
추출 온도는 20℃ 내지 100℃인 것이 바람직하며, 80℃ 내지 100℃인 것이 보다 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 또한, 추출시간은 1 내지 72시간이 바람직하며, 12 내지 48시간이 보다 바람직하고, 20 내지 28시간이 보다 더 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 아울러 추출 횟수는 1 내지 5회인 것이 바람직하며, 3 내지 4회 반복추출하는 것이 보다 바람직하고, 3회인 것이 보다 더 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 제조방법에 있어서, 단계 3)의 감압농축은 진공 감압 농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조하는것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
상기 호흡기 질환은 천식, 기관지염, 폐렴, 기침 또는 가래를 동반하는 폐기종, 기관지 확장증, 폐섬유증 및 만성폐쇄성 폐질환(chronic obstructive pulmonary disease)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
상기 추출물은 기관지 상피세포에서 염증을 억제하고, 염증성 점액단백질의 분비를 억제하는 것이 바람직하다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 복분자 추출물을 제조하고, 상기 추출물을 제조하였다.
또한, 본 발명자들은 염증을 유도한 대식세포에서 복분자 추출물의 항염증 효과를 확인한결과, 본 발명의 추출물은 세포독성 없이 NO 생성을 유의적으로 억제함을 확인하였다. (도 1 및 도 2 참조).
또한, 본 발명자들은 염증성 점액단백질인 MUC5AC 생성을 유도 또는 염증을 유도한 기관지 상피세포에서 상기 복분자 추출물의 항염증 효과를 확인한 결과, 본 발명의 추출물은 세포독성 없이 MUC5AC 분비를 유의적으로 억제하고, 염증 매개 인자인 PGE2 분비를 유의적으로 억제함을 확인 하였다. (도 3 내지 도 5 참조).
따라서, 본 발명자들은 본 발명의 국화 및 황금 혼합 추출물이 세포독성이 없고, 유의적인 항염증 효과를 나타내며, 기관지 세포에서 염증성 점액단백질의 분비를 유의적으로 억제하고, 천식 및 미세먼지에 의한 호흡기 질환 개선 효과가 있음을 확인하였고, 상기 효과가 보다 우수한 복분자 추출물을 기관지염, 천식, 폐렴, 만성폐쇄성 폐질환 등을 포함하는 호흡기 질환 예방 또는 치료용 조성물의 유효성분으로 유용하게 이용할 수 있다.
본 발명의 조성물은 경구 또는 비경구 투여(예를 들어, 도포 또는 정맥 내, 피하, 복강 내 주사)할 수 있으나 경구 투여가 바람직하다. 비경구 투여를 위한 제제로는 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 멸균된 수용액, 액제, 비수성용제, 현탁제, 에멀젼, 시럽, 좌제, 에어로졸 등의 외용제 및 멸균 주사제제의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 바람직하게는 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플 라스마제의 피부 외용 약학적 조성물을 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 한정하는것은 아니다. 국소 투여의 조성물은 임상적 처방에 따라 무수형 또는 수성형일 수 있다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween)61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다. 경구 투여를 위한 고형제제에는 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 연질캅셀제, 환 등이 포함된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 에어로졸 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
상기 조성물은 투여를 위해서 본 발명의 유효성분 이외에 추가로 약제학 적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 제조할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로즈용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형 등으로 제제화할 수 있다.
본 발명에 따른 약제학적으로 허용가능한 첨가제는 상기 조성물에 대해 0.1 내지 90 중량부로 포함되는 것이 바람직하다.
본 발명의 조성물의 바람직한 투여량은 체내에서 활성성분의 흡수도, 환자의 연령, 성별 및 비만의 정도에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 경구 투여제의 경우 일반적으로 성인에게 1일에 체중 1㎏당 본 발명의 조성물을 1일 0.0001 내지 500 ㎎/㎏으로, 바람직하게는 0.001 내지 300 ㎎/㎏으로, 보다 바람직하게는 0.01 내지 200 mg/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 복분자 추출물을 유효성분으로 함유하는, 호흡기 질환 예방 또는 개선용 건강식품을 제공한다.
아울러, 본 발명은 복분자 추출물을 유효성분으로 함유하는, 진해 또는 거담용 건강식품을 제공한다.
상기 복분자 추출물은 상기 호흡기 질환 예방 또는 치료용 조성물에 대한 설명과 동일한 바, 구체적인 설명은 상기 내용을 원용하고, 이하에서는 건강식품에 특유한 구성에 대해서만 설명하도록 한다.
한편, 약학적 조성물과 마찬가지로, 본 발명의 복분자 추출물이 세포독성이 없고, 유의적인 항염증효과를 나타내며, 기관지 세포에서 염증성 점액 단백질의 분비를 유의적으로 억제하고, 천식 및 미세먼지에 의한 호흡기 질환 개선 효과가 있음을 확인하였으므로, 본 발명의 추출물을 기관지염, 천식, 폐렴, 만성 폐쇄성폐질환 등을 포함하는 호흡기 질환 예방 또는 치료용, 진해 또는 거담용 건강 식품의 유효성분으로 유용하게 이용할 수 있다.
본 발명의 추출물을 식품 또는 음료 첨가물로 사용할 경우, 상기 2종의 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용되고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 상기 2종의 추출물 의 혼합양은 그의 사용목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우, 상기 추출물은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에, 장기간 복용이 가능하다. 상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 초콜릿류, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제등이 있다. 음료수로 제형화할 경우에 상기 추출물 이외에 첨가되는 액체 성분으로는 이제 한정되지는 않으나, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드(예, 포도당, 과당 등), 디사카라이드(예, 말토오스, 수크로오스 등) 및 폴리사카라이드(예, 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당), 및 자일리톨, 소르비톨, 에리스리톨 등의 당 알코올이다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖ 당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제[타우마린, 스테비아 추출물(예, 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등)] 및 합성 향미제(예, 사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다.
다른 양태로서, 본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 증진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 또한 본 발명의 식품 조성물은 과일 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 단독으로 또는 조합으로 사용될 수 있으며, 이러한 첨가제의 비율은 조성물 전체 중량당 0.001 내지 50 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하, 본 발명을 실시예, 실험예 및 제조예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예, 실험예 및 제조예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예, 실험예 및 제조예에 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 복분자 추출물의 제조
복분자(Rubus coreanus Miquel fruits) 원물 100 g에 10배량의 70% 에탄올을 가하여 24시간 동안 실온에서 추출한 후 여과지(Watman No. 2)로 여과한 뒤 농축기(EYELA N-3000, Japan)로 55℃에서 감압농축 및 동결건조하여 추출물을 얻었다.
<실험예 1> 대식세포에서 복분자 추출물의 항염증 효과 확인
<1-1> 대식세포에서 복분자 추출물의 세포독성 확인
상기 <실시예 1>에서 제조한 복분자 추출물의 세포독성을 확인하기 위하여, 상기 <실시예 1>의 복분자 추출물을 처리하고 LPS로 염증을 유도한 대식세포에서 3-[4,5-Dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide (MTT) 분석법으로 측정하였다.
세포(1X105 cell/ml)세포를 96-well plate에 180 μL씩 분주하여 12시간 이상 CO2 배양기에서 배양한 다음, 시료를 각각의 조건에 따라 처리하여 24시간 배양하였다. 배양한 후 배양액을 제거하고 0.5 mg/mL MTT가 함유되어 있는 배지 200 μL를 첨가한 다음 4시간 동안 배양하여 MTT가 환원되도록 하였다. 그 후 배양액을 제거하고 dimethylsulfoxide (DMSO) 100 μL 첨가하여 생성된 formazone결정을 용해시킨 후, ELISA reader를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포 생존율은 대조군과 비교하여 백분율(%)로 나타내었다.
Cell viability 측정 결과 LPS 및 복분자 추출물을 단독으로 또는 같이 처리한 모든 실험군에서 대조군에 비하여 세포 생존율이 변하지 않음을 확인하였다 (도 1).
이는 염증 유도 물질인 LPS와 복분자 추출물이 세포 생존에는 영향을 주지 않음을 나타낸다.
<1-2> 대식세포에서 복분자 추출물의 NO 생성 억제 효과 확인
복분자 추출물의 항염증 효능을 분석하기 위하여 본 연구에서는 염증 유발 인자인 LPS를 각 농도별로 자극된 대식세포에서 생산되는 NO 농도를 의존적으로 효능을 있는지 확인하였다.
NO 측정은 24 well plate에 세포를 5 x 105cell/을 seeding 한 후, LPS와 추출물을 농도차를 두어 첨가 한 후, 24 h incubator에서 반응시킨 후, 각각 100 μL씩 Griess reagent (1% sulfanilamide/0.1% N-(1-naphthyl)- ethylenediamine dihydrochloride/2.5% H3PO4)와 반응 시킨 후, 파장이 540nm인 Sunrise basic 96-well microplate spectrophotometer (TECAN AUSTRIA)를 사용하여 값을 측정한다.
대식세포에서 LPS (100 ng/mL)에 의해서 유도되는 NO는 약 20.21 μM로 대조군으로 사용한 2.34 μM에 비하여 약 8배 이상 증가하였고, 실험군으로 복분자 추출물을 각각 100, 250, 500, 1,000 μg/mL의 농도로 처리를 한 결과 NO 생성이 복분자 추출물의 농도 의존적으로 줄어드는 것을 확인하였다 (도 2).
<실험예 2> 인간 유래 기관지 상피세포에서 복분자 추출물의 항염증 효과 확인
<2-1> 인간 유래 기관지 상피세포에서 복분자 추출물의 세포독성 확인
기관지 상피세포에서 상기 <실시예 1>에서 제조한 복분자 추출물을 처리하고 LPS 및 PMA (phorbol 12-myristate 13-acetate)로 MUC5AC 분비를 유도한 기관지 상피세포 에서 세포 생존율을 확인하였다.
구체적으로, 기관지 상피세포로 인간 유래 기관지 상피세포주 NCI-H292 세포를 4×10⁴cell/mL로 24-well plate에 500 μL씩 분주하고 37℃, 5% CO2 배양기에서 48시간 동안 배양 배지로 배양하여 세포를 안정화시켰다. 48시간 뒤 배양 배지를 모두 제거하고 0.2% FBS/DMEM 배지로 교체한 후 24시간 동안 배양하였다. 그 다음, PBS로 2번 세척하고, 무혈청 배지 400 μL와 농도별로 희석한 상기 <실시예 1>에서 제조한 복분자 추출물 시료 50 μL를 처리하고 1시간 동안 배양하였다.
그 후, 100 ng/mL 농도의 PMA 및 20 μg/mL 농도의 LPS를 처리하고 24시간 동안 재배양하여 MUC5AC의 생성을 유도한 다음, 상기 실험예 <1-1>에 기재된 방법과 동일한 방법으로 세포생존율을 측정하였다.
그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, LPS 및 PMA만 처리한 NCI-H292 세포와 비교하여, LPS 및 PMA와 함께 복분자 추출물을 동시에 처리한 NCI-H292 세포의 경우 세포생존율이 높게 나타남을 확인하였다(도 3).
상기의 결과를 통해 기관지 상피세포에서도 복분자 추출물은 세포독성이 없음을 확인하였다.
<2-2> 인간 유래 기관지 상피세포에서 복분자 추출물의 염증성 점액단백질 생성 억제 확인
MUC5AC(Mucin 5AC)는 염증성 점액단백질로, LPS와 같은 물질의 자극에 의해 분비되며, 이들의 과다분비는 만성폐쇄성 폐질환(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)을 유발하는 것으로 알려져 있다. 이에, 기관지 상피세포에서 국화 및 황금 혼합 추출물의 MUC5AC 억제 활성을 알아보기 위하여, 상기 <실시예 1>에서 제조한 복분자 추출물을 처리하고 LPS 및 PMA로 MUC5AC분비를 유도한 기관지 상피세포에서 MUC5AC의 분비량을 sandwitch ELISA법을 이용하여 측정하였다.
구체적으로, 상기 실험예 <2-1>에 기재된 방법과 동일한 방법으로 NCI-H292 세포에 상기 <실시예 1>에서 제조한 복분자 추출물 시료를 농도별로 처리하고 LPS 및 PMA로 MUC5AC의 생성을 유도하였다. 그 다음, 배양상등액만을 취하여, MUC5AC 분비량을 측정하였다.
그 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이, PMA 및 LPS에 의해 유도된 MUC5AC의 분비가 복분자 추출물에 의해 억제됨을 확인하였다. (도 4).
상기의 결과를 통해 복분자 추출물은 세포독성 없이 MUC5AC 분비를 억제하여 과도한 가래 분비를 억제할 수 있음을 확인하였다.
<2-3> 인간 유래 기관지 상피세포에서 국화 및 황금 혼합 추출물의 염증 매개 인자 생성 억제 효과 확인
TNF-α는 염증을 매개하는 물질로 폐조직의 섬유화(fibrosis)에 관여하는 것으로 잘 알려져 있다. 이에, 기관지 상피세포에서 국화 및 황금 혼합 추출물의 항염증 활성을 알아보기 위하여, 상기 <실시예 1>의 복분자 추출물을 처리하고 LPS 및 PMA로 MUC5AC 분비를 유도한 기관지 상피세포에서 TNF-α 분비량을 sandwitch ELISA법을 이용하여 측정하였다.
구체적으로, 기관지 상피세포로 인간 유래 기관지 상피세포주 NCI-H292 세포를 1×105 cell/mL로 96-웰 플레이트에 200 μL씩 분주하고 37℃, 5% CO2 배양기에서 24시간 동안 배양 배지로 배양하여 세포를 안정화시켰다. 24시간 뒤 배양 배지를 모두 제거하고 0.2% FBS/DMEM 배지로 교체한 후 24시간 동안 배양하였다. 그 다음, PBS로 2번세척하고, 무혈청 배지 160 μL와 농도별로 희석한 상기 <실시예 1>의 복분자 추출물 시료 20 μL를 처리하고 30분 동안 배양하였다. 그후, 20 또는 100 ng/㎖ 농도의 PMA 처리하고 24시간 동안 재배양하여 염증을 유도한 다음, 배양 상등액만을 취하여, TNF-α 분비량을 측정하였다.
그 결과, 도 5에 나타낸 바와 같이, PMA에 의해 유도된 TNF-α의 분비가 복분자 추출물에 의해 억제됨을 확인하였다. (도 5).
상기의 결과를 통해 복분자 추출물은 세포독성 없이 TNF-α 분비를 억제하여 폐섬유화를 억제할 수 있음을 확인하였다.
Claims (7)
- 복분자(Chrysanthemum indicum) 추출물을 유효성분으로 함유하는, 호흡기 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 호흡기 질환은 천식, 기관지염, 폐렴, 기침 또는 가래를 동반하는 폐기종, 기관지 확장증, 폐섬유증 및 만성폐쇄성 폐질환(chronic obstructive pulmonary disease)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 호흡기 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 추출물은 염증성 점액단백질의 분비를 억제하는 것을 특징으로 하는 호흡기 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 제7항에 있어서, 상기 염증성 점액단백질은 Mucin 5AC(MUC5AC)인 것을 특징으로 하는, 호흡기 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 복분자 추출물을 유효성분으로 함유하는, 호흡기 질환 예방 또는 개선용 건강식품.
- 복분자 추출물을 유효성분으로 함유하는, 진해 또는 거담용 약학적 조성물.
- 복분자 추출물을 유효성분으로 함유하는, 진해 또는 거담용 건강식품.
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102439791B1 (ko) * | 2021-12-29 | 2022-09-01 | 단국대학교 천안캠퍼스 산학협력단 | 복분자로부터 유효성분을 추출하는 방법 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100629624B1 (ko) | 2004-01-27 | 2006-09-29 | 전라북도 고창군 | 항염증 활성을 갖는 복분자 잎 추출물을 포함하는 조성물 |
| KR20190134233A (ko) | 2018-05-25 | 2019-12-04 | 대한민국(농촌진흥청장) | 복분자 미성숙과 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 및 항염증용 조성물 |
-
2020
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