KR20210093968A - 길항작용 cd40 모노클로날 항체 및 그의 용도 - Google Patents

길항작용 cd40 모노클로날 항체 및 그의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20210093968A
KR20210093968A KR1020217018573A KR20217018573A KR20210093968A KR 20210093968 A KR20210093968 A KR 20210093968A KR 1020217018573 A KR1020217018573 A KR 1020217018573A KR 20217018573 A KR20217018573 A KR 20217018573A KR 20210093968 A KR20210093968 A KR 20210093968A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
ser
val
thr
lys
gly
Prior art date
Application number
KR1020217018573A
Other languages
English (en)
Other versions
KR102627246B1 (ko
Inventor
애런 얌니욱
매리 스트루터스
스탠리 알. 주니어 크리스텍
아크바 나이엠
진저 레이크스트로
Original Assignee
브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 filed Critical 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니
Publication of KR20210093968A publication Critical patent/KR20210093968A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102627246B1 publication Critical patent/KR102627246B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/72—Increased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/75—Agonist effect on antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Abstract

본 개시내용은 CD40에 결합하는, 인간화 항체를 포함한 항체를 제공한다. 항체는 CD40에 결합하고, CD40 효능제 활성을 나타내지 않는다. 항체는 변형된 IgG1 Fc 도메인을 포함하고, 미성숙 수지상 세포의 최소 활성화를 나타낼 수 있다. 항체를 포함하는 조성물, CD40 활성을 수반하는 질환의 치료를 위한 사용 방법 및 CD40 활성을 수반하는 질환의 치료를 위한 의약의 제조에서의 용도가 제공된다.

Description

길항작용 CD40 모노클로날 항체 및 그의 용도
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2018년 11월 19일에 출원된 미국 가출원 번호 62/769,514를 우선권 주장하며, 이는 모든 목적을 위해 그 전문이 본원에 포함된다.
서열 목록
본 출원은 ASCII 포맷으로 전자적으로 제출된 서열 목록을 함유하며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 2019년 11월 13일에 생성된 상기 ASCII 카피는 200896-0015-00-WO-592417_SL.txt로 명명되고, 170,111 바이트 크기이다.
분야
본 개시내용은 CD40에 결합하는 항체를 제공한다. 항체 폴리펩티드는 CD40에 결합하고, CD40 효능제 활성을 나타내지 않는다. 항체는 변형된 IgG1 Fc 도메인을 포함하고, 미성숙 수지상 세포의 최소 활성화를 나타낼 수 있다. 항체를 포함하는 조성물, CD40 활성을 수반하는 질환의 치료를 위한 사용 방법 및 CD40 활성을 수반하는 질환의 치료를 위한 의약의 제조에서의 용도가 제공된다.
CD40은 수지상 세포, B 세포 및 대식세포를 포함한 항원 제시 세포 (APC) 상에 존재하는 종양 괴사 인자 (TNF) 수용체 슈퍼패밀리에 속하는 공동-자극 분자이다. APC는 CD40이 TH 세포 상의 그의 리간드인 CD154 (CD40L)에 결합하는 경우에 활성화된다. CD40-매개된 APC 활성화는 시토카인 생산, 공동-자극 분자 (예컨대 CD86)의 상향-조절, 및 증진된 항원 제시 및 B 세포 증식을 포함한 다양한 면역 반응에 수반된다. CD40은 또한 내피 세포, 평활근 세포, 섬유모세포 및 상피 세포에 의해 발현될 수 있다.
CD40 활성화는 또한, 예를 들어 자가면역, 이식 거부 또는 알레르기 반응과 관련된 다양한 바람직하지 않은 T 세포 반응에 수반된다. 바람직하지 않은 T 세포 반응을 제어하기 위한 하나의 전략은 CD40을 길항작용 항체로 표적화하는 것이다. 예를 들어, 이전에 키론 1212로 공지된 모노클로날 항체 HCD122 (루카투무맙)는 현재 특정 CD40-매개된 염증성 질환의 치료를 위해 임상 시험 중이다. 인터넷 http: clinicaltrialsfeeds.org/clinical-trials/show/NCT01275209 (2011년 1월 11일 마지막 업데이트) 상의 ["Study of HCD122 (Lucatumumab) and Bendamustine Combination Therapy in CD40+ Rituximab-Refractory Follicular Lymphoma," Clinical Trials Feeds]을 참조한다. 그러나, 모노클로날 항체는 효능제 활성을 나타낼 수 있다. 예를 들어, 항-CD40 항체 Chi220의 유용성은 그의 약한 자극 잠재력에 의해 제한된다. 문헌 [Adams, et al., "Development of a chimeric anti-CD40 monoclonal antibody that synergizes with LEA29Y to prolong islet allograft survival," J. Immunol. 174: 542-50 (2005)]을 참조한다.
제1 실시양태에서, 본 발명은 인간 CD40에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분이며, 여기서 항체는 중쇄 가변 영역을 포함하는 제1 폴리펩티드 부분 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 제2 폴리펩티드 부분을 포함하고, 여기서
중쇄 가변 영역은 (i) SYWMH (서열식별번호(SEQ ID NO): 1)를 포함하는 CDR1, QINPTTGRSQYNEKFKT (서열식별번호: 2)를 포함하는 CDR2, WGLQPFAY (서열식별번호: 3)를 포함하는 CDR3; 및 (ii) SYWMH (서열식별번호: 1)를 포함하는 CDR1, QINPSQGRSQYNEKFKT (서열식별번호: 12)를 포함하는 CDR2, WGLQPFAY (서열식별번호: 3)를 포함하는 CDR3 중 하나의 경우를 포함하고;
경쇄 가변 영역은 KASQDVSTAVA (서열식별번호: 7)를 포함하는 CDR1, SASYRYT (서열식별번호: 8)를 포함하는 CDR2 및 QQHYSTPWT (서열식별번호: 9)를 포함하는 CDR3을 포함하는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 제공한다.
본 발명은 추가로, 인간 CD40에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분이며, 여기서 항체는 중쇄 가변 영역을 포함하는 제1 폴리펩티드 부분 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 제2 폴리펩티드 부분을 포함하고, 여기서
중쇄 가변 영역은 (i) SYWMH (서열식별번호: 1)로 이루어진 CDR1, QINPTTGRSQYNEKFKT (서열식별번호: 2)로 이루어진 CDR2, WGLQPFAY (서열식별번호: 3)로 이루어진 CDR3; 및 (ii) SYWMH (서열식별번호: 1)로 이루어진 CDR1, QINPSQGRSQYNEKFKT (서열식별번호: 12)로 이루어진 CDR2, WGLQPFAY (서열식별번호: 3)로 이루어진 CDR3 중 하나의 경우를 포함하고;
경쇄 가변 영역은 KASQDVSTAVA (서열식별번호: 7)로 이루어진 CDR1, SASYRYT (서열식별번호: 8)로 이루어진 CDR2 및 QQHYSTPWT (서열식별번호: 9)로 이루어진 CDR3을 포함하는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 제공한다.
본 발명은 추가로, 인간 CD40에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분이며, 여기서 항체는 중쇄 가변 영역을 포함하는 제1 폴리펩티드 부분 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 제2 폴리펩티드 부분을 포함하고, 여기서
중쇄 가변 영역은 SYWMH (서열식별번호: 1)로 이루어진 CDR1, QINPTTGRSQYNEKFKT (서열식별번호: 2)로 이루어진 CDR2, WGLQPFAY (서열식별번호: 3)로 이루어진 CDR3을 포함하고;
경쇄 가변 영역은 KASQDVSTAVA (서열식별번호: 7)로 이루어진 CDR1, SASYRYT (서열식별번호: 8)로 이루어진 CDR2 및 QQHYSTPWT (서열식별번호: 9)로 이루어진 CDR3을 포함하는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 제공한다.
본 발명은 추가로, 인간 CD40에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분이며, 여기서 항체는 중쇄 가변 영역을 포함하는 제1 폴리펩티드 부분 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 제2 폴리펩티드 부분을 포함하고, 여기서
중쇄 가변 영역은
Figure pct00001
(서열식별번호: 4)의 아미노산 서열을 포함하고,
경쇄 가변 영역은
Figure pct00002
(서열식별번호: 10)의 아미노산 서열을 포함하는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 제공한다.
본 발명은 추가로, 인간 CD40에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분이며, 여기서 항체는 중쇄 가변 영역을 포함하는 제1 폴리펩티드 부분 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 제2 폴리펩티드 부분을 포함하고, 여기서 중쇄 가변 영역은
Figure pct00003
(서열식별번호: 13)의 아미노산 서열을 포함하고,
경쇄 가변 영역은
Figure pct00004
(서열식별번호: 16)의 아미노산 서열을 포함하는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 제공한다.
본 발명은 추가로, 인간 CD40에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분이며, 여기서 항체는 중쇄 가변 영역을 포함하는 제1 폴리펩티드 부분 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 제2 폴리펩티드 부분을 포함하고, 여기서 중쇄 가변 영역은
Figure pct00005
(서열식별번호: 4)의 아미노산 서열을 포함하고,
경쇄 가변 영역은
Figure pct00006
(서열식별번호: 16)의 아미노산 서열을 포함하는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 제공한다.
특정 실시양태에서, 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 인간 중쇄 불변 영역을 포함하는 제1 폴리펩티드 부분; 및 인간 경쇄 불변 영역을 포함하는 제2 폴리펩티드 부분을 포함한다. 본원에 기재된 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 (1) 프롤린 238 (P238)이 리신, 세린, 알라닌, 아르기닌 및 트립토판으로 이루어진 군으로부터 선택된 잔기 중 하나로 돌연변이되어, 항체 또는 그의 항원 결합 부분이 감소된 Fc-감마-수용체 (FcγR) 결합을 갖게 되는 것인, FcγR에 대한 결합을 감소시키는 카바트 위치 238에서의 돌연변이; 또는 (2) 카바트 위치 297에서 치환된 알라닌을 포함하는 인간 IgG1 Fc 도메인을 포함할 수 있다.
본원에 기재된 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 프롤린 238 (P238)이 리신, 세린, 알라닌, 아르기닌 및 트립토판으로 이루어진 군으로부터 선택된 잔기 중 하나로 돌연변이되어, 항체 또는 항원 결합 부분이 감소된 Fc-감마-수용체 (FcγR) 결합을 갖게 되는 것인, FcγR에 대한 결합을 감소시키는 카바트 위치 238에서의 돌연변이를 포함하는 인간 IgG1 Fc 도메인을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, P238은 리신으로 돌연변이된다.
본원에 기재된 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 하기로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 도메인을 포함할 수 있다:
Figure pct00007
(서열식별번호: 22; IgG1-P238K (-C-말단 Lys)),
Figure pct00008
(서열식별번호: 23; IgG1-P238K),
Figure pct00009
(서열식별번호: 24; CH1-IgG1-P238K (-C-말단 Lys)),
Figure pct00010
(서열식별번호: 25; CH1-IgG1-P238K),
Figure pct00011
(서열식별번호: 26; IgG1f-P238K (-C-말단 Lys)),
Figure pct00012
(서열식별번호: 27; IgG1f-P238K),
Figure pct00013
(서열식별번호: 28; CH1-IgG1f-P238K (-C-말단 Lys)), 또는
Figure pct00014
(서열식별번호: 29; CH1-IgG1f-P238K).
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 (1) 프롤린 238 (P238)이 리신, 세린, 알라닌, 아르기닌 및 트립토판으로 이루어진 군으로부터 선택된 잔기 중 하나로 돌연변이되어, 항체 또는 그의 항원 결합 부분이 감소된 Fc-감마-수용체 (FcγR) 결합을 갖게 되는 것인, FcγR에 대한 결합을 감소시키는 카바트 위치 238에서의 돌연변이; 또는 (2) 카바트 위치 297에서 치환된 알라닌을 포함하는 인간 IgG1 Fc 도메인을 포함하고, SYWMH (서열식별번호: 1)을 포함하는 CDR1, QINPTTGRSQYNEKFKT (서열식별번호: 2)를 포함하는 CDR2, WGLQPFAY (서열식별번호: 3)를 포함하는 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 KASQDVSTAVA (서열식별번호: 7)를 포함하는 CDR1, SASYRYT (서열식별번호: 8)를 포함하는 CDR2 및 QQHYSTPWT (서열식별번호: 9)를 포함하는 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 서열식별번호: 22 또는 서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 인간 IgG1 Fc 도메인을 포함할 수 있다.
본원에 기재된 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분의 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩티드 부분은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어지고:
Figure pct00015
(서열식별번호: 5; HC_Y12XX-hz28-CH1-IgG1-P238K-, 말단 리신 부재),
Figure pct00016
(서열식별번호: 6; HC_Y12XX-hz28-CH1-IgG1-P238K-, 말단 리신 존재),
Figure pct00017
(서열식별번호: 30; HC_Y12XX-hz28-CH1-IgG1f-P238K-, 말단 리신 부재), 및
Figure pct00018
(서열식별번호: 31; HC_Y12XX-hz28-CH1-IgG1f-P238K-, 말단 리신 존재);
제2 폴리펩티드 부분은 하기 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진다:
Figure pct00019
(서열식별번호: 11; LC_Y12XX-hz28-CL).
본원에 기재된 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분의 일부 실시양태에서, 제1 폴리펩티드 부분은 하기 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어지고:
Figure pct00020
(서열식별번호: 5; HC_Y12XX-hz28-CH1-IgG1-P238K-, 말단 리신 부재);
제2 폴리펩티드 부분은 하기 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진다:
Figure pct00021
(서열식별번호: 11; LC_Y12XX-hz28-CL).
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 카바트 위치 297에서 치환된 알라닌을 포함하는 인간 IgG1 Fc 도메인을 포함하는 인간 IgG1 Fc 도메인을 포함한다.
본원에 기재된 바와 같은 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 CD40의 활성을 길항할 수 있다. 본원에 기재된 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 키메라 항체일 수 있다. 본원에 기재된 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 인간화 항체일 수 있다. 본원에 기재된 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 인간 중쇄 불변 영역 및 인간 경쇄 불변 영역을 포함할 수 있다.
본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 Fv, Fab, F(ab')2, Fab', dsFv, scFv, sc(Fv)2, 디아바디 및 scFv-Fc로 이루어진 군으로부터 선택된 항원 결합 부분이다. 본원에 기재된 바와 같은 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 scFv-Fc이다.
본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 치료제에 연결될 수 있다.
본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 상기 항체 또는 그의 항원 결합 부분과 상이한 결합 특이성을 갖는 제2 기능적 모이어티에 연결될 수 있다.
본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 추가의 모이어티를 추가로 포함할 수 있다.
단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 코딩하는 핵산 분자가 본원에 개시된다. 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터가 본원에 개시된다. 발현 벡터로 형질전환된 세포가 또한 고려된다.
a) 본원에 개시된 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터로 형질전환된 세포에서 항-인간 CD40 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 발현시키고;
b) 세포로부터 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 단리하는 것
을 포함하는, 항-인간 CD40 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 제조하는 방법이 또한 개시된다.
a) 본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 부분; 및 b) 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물이 또한 제공된다.
대상체에게 본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 면역 반응을 치료 또는 예방하는 방법이 제공된다. 대상체에게 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 부분을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 자가면역 또는 염증성 질환을 치료 또는 예방하는 방법이 추가로 제공된다. 임의로, 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 면역억제제/면역조정제 및/또는 항염증제와 함께 투여된다. 투여는 동시 또는 순차적일 수 있다. 예시적인 작용제는 CTLA4 돌연변이체 분자, 예컨대 L104EA29Y-Ig (벨라타셉트)이다. 대상체에서 면역 반응을 치료 또는 예방하는 이러한 방법에서, 및 대상체에서 자가면역 또는 염증성 질환을 치료 또는 예방하는 이러한 방법에서, 바람직하게는 대상체는 애디슨병, 알레르기, 아나필락시스, 강직성 척추염, 천식, 아테롬성동맥경화증, 아토피성 알레르기, 귀의 자가면역 질환, 눈의 자가면역 질환, 자가면역 간염, 자가면역 이하선염, 기관지 천식, 관상동맥 심장 질환, 크론병, 당뇨병, 부고환염, 사구체신염, 그레이브스병, 길랑-바레 증후군, 하시모토병, 용혈성 빈혈, 특발성 혈소판감소성 자반증, 염증성 장 질환, 재조합 약물 제품 (예를 들어, 혈우병에서의 인자 VII)에 대한 면역 반응, 루푸스 신염, 루푸스 신염, 전신 홍반성 루푸스, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 천포창, 건선, 류마티스성 열, 류마티스 관절염, 사르코이드증, 경피증, 쇼그렌 증후군, 척추관절병증, 갑상선염, 이식 거부, 혈관염 및 궤양성 결장염으로 이루어진 군으로부터 선택된 질환을 갖는다.
의약으로서 사용하기 위한 본원에 개시된 바와 같은 항체 또는 그의 항원 결합 부분이 또한 고려된다. 치료를 필요로 하는 대상체를 치료하는데 사용하기 위한, 본원에 개시된 바와 같은 항체 또는 그의 항원 결합 부분 또는 그를 포함하는 의약이 추가로 고려된다. 면역 반응의 치료 또는 예방에 사용하기 위한, 면역 반응의 치료 또는 예방을 필요로 하는 환자에게 투여하기 위한 치료 유효량의 본원에 개시된 바와 같은 항체 또는 그의 항원 결합 부분이 추가로 고려된다.
도 1A-1D를 포함하는 도 1은 인간 FcγR에 대한 항체의 결합의 SPR 센소그램 데이터를 도시한다. 도 1A는 대조군 항체, 대조군 IgG1에 대한 데이터를 도시한다. 도 1B는 Y12XX-hx28-IgG1-P238K, 대조군 IgG1에 대한 데이터를 도시한다. 도 1C는 대조군 항체, 항체 B에 대한 데이터를 도시한다. 도 1D는 항체/FcγR 상호작용에 대한 KD 값을 요약한 표이다. KD 값을 1:1 랭뮤어 피트 (hCD64) 또는 1:1 정상 상태 피트 (hCD32a-H131, hCD32a-R131, hCD32b, hCD16a-V158 및 hCD16a-F158)로부터 수득하였다.
도 2A-2C를 포함하는 도 2는 CD32a-발현 CHO 세포 첨가의 존재 또는 부재 하의 인간화 Y12XX 항체 또는 대조군 항체로의 iDC의 처리에 대한 iDC 활성화 데이터를 도시한다. 항-CD86 및 항-CD54 항체를 사용한 유동 세포측정법 평균 형광 염색에 의해 나타난 바와 같이, 세포 배양 배지로부터의 IL-6 (인터류킨-6)의 증가 및 세포 표면 마커 발현을 평가하였다. 도 2A는 IL-6 데이터를 도시한다. 도 2B는 CD86 데이터를 도시한다. 도 2C는 CD54 데이터를 도시한다. 도 2B 및 도 2C 둘 다에서 평균 형광 강도 (MFI)가 Y-축 상에 측정되어 있다. 각각의 기호는 개별 공여자로부터의 iDC에 대한 데이터를 나타낸다. Y12XX-hz42-P238K를 4명의 공여자로부터의 세포에서 시험하고, Y12XX-hz40-P238K를 6명의 공여자로부터의 세포에서 시험하고, Y12XX-hz28-P238K를 10명의 공여자에서 시험하였다. μg/ml 단위의 항체의 농도가 표시되어 있다 (10, 30 또는 100 μg/ml). 검정에 CHO-CD32 세포를 포함시키는 것은 나타낸 바와 같이 FcγR 매개된 가교 또는 클러스터링을 매개하기 위한 것이다. Ly6-IgG를 음성 대조군으로서 사용하였다. 부분 CD40 효능제 2141 및 BMS986090-100을 양성 대조군으로서 사용하였다.
도 3A 및 3B를 포함하는 도 3은 인간화 Y12XX 항체, CD40 항체 및 대조군 항체의 보체 의존성 세포독성 (CDC) 분석으로부터의 예시적인 데이터를 도시한다. CDC 검정을 2회 수행하였다. 제2 검정에서, 새로 해동된 인간 보체 혈청을 사용하였다. 도 3A는 검정의 제1 반복으로부터의 데이터를 도시하고, 도 3B는 검정의 제2 반복으로부터의 데이터를 도시한다.
도 4A 및 4B를 포함하는 도 4는 이펙터 세포로서 2명의 상이한 공여자로부터의 CD14+ 단핵구를 사용한 인간화 Y12XX 항체 또는 대조군 항체의 항체 의존성 세포성 식세포작용 (ADCP) 분석으로부터의 예시적인 데이터를 도시한다. 도 4A는 이펙터 세포로서 공여자 #8 CD14+ 단핵구를 사용하여 수득된 데이터를 도시한다. 도 4B는 이펙터 세포로서 공여자 #65 CD14+ 단핵구를 사용하여 수득된 데이터를 도시한다.
도 5A 및 5B를 포함하는 도 5는 이펙터 세포로서 2명의 상이한 공여자로부터의 NK 세포를 사용한 인간화 Y12XX 항체 또는 대조군 항체의 항체 의존성 세포성 세포독성 (ADCC) 분석으로부터의 예시적인 데이터를 도시한다. 도 5A는 이펙터 세포로서 공여자 #38 NK 세포를 사용하여 수득된 데이터를 도시한다. 도 5B는 이펙터 세포로서 공여자 #55 NK 세포를 사용하여 수득된 데이터를 도시한다.
도 6A, 6B, 6C 및 6D를 포함하는 도 6은 상이한 항-CD40 항체로의 자극 시 라모스 블루(Ramos Blue) 세포에 대한 NF-kB/AP-1 유도성 SEAP 활성을 평가하도록 설계된 검정으로부터의 데이터를 도시한다. CD40 mAb의 활성에 대한 3가지 독립적 연구로부터의 대표적인 결과가 도 6A 및 6B에 제시된다. 도 6C 및 6D는 양성 대조군인 CD40L-IZ에 대한 데이터를 도시한다. AIMV: AIM V™ 배지 (1x) (써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific), 매사추세츠주 월섬).
본 개시내용은 항-CD40 항체 및 특히 길항작용 항-CD40 항체에 관한 것이다. 치료 표적, 예컨대 CD40에 대해, 항-CD40 항체의 FcγR-매개된 가교는 바람직하지 않은 효능제 신호전달을 유도하는 잠재력 및 독성에 대한 잠재력을 갖는다. 본 개시내용은 또한 "저친화도" FcγR: hCD32a/FcγRIIa, hCD32b/FcγRIIb 및 hCD16a/FcγRIIIa의 감소된 결속, 뿐만 아니라 "고친화도" FcγR hCD64에 대한 감소된 결속을 갖는 길항작용 항-CD40 항체를 기재한다. 저친화도 FcγR의 감소된 결속은 바람직하지 않은 효능제 신호전달 및 바람직하지 않은 독성에 대한 잠재력의 가능성을 감소시킬 것으로 예상된다.
정의 & 약어
추가의 약어 및 정의가 하기에 제공된다.
APC 항원 제시 세포
CD54 ICAM-1로도 지칭됨
CDR 상보성 결정 영역
CH 또는 CH 불변 중쇄
CL 또는 CL 불변 경쇄
CHO 세포 차이니즈 햄스터 난소 세포
dAb 도메인 항체
DC 수지상 세포
FcgR FcγR과 상호교환가능함
FcγR Fc-감마-수용체
FR 프레임워크 영역
GM-CSF 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자
HC 중쇄
ICAM-1 세포내 부착 분자 1
iDC 미성숙 수지상 세포
IFN 인터페론
IgG 이뮤노글로불린 G
IL-6 인터류킨-6
LC 경쇄
mAb 모노클로날 항체
mg 밀리그램
ml 또는 mL 밀리리터
ng 나노그램
nM 나노몰
pI 등전점
SPR 표면 플라즈몬 공명
TNF 종양 괴사 인자
μg 마이크로그램
μM 마이크로몰
VL 또는 VL 가변 경쇄 도메인
Vk 또는 VK 카파 가변 경쇄 도메인
VH 또는 VH 가변 중쇄 도메인
본 상세한 설명에 따라, 하기 약어 및 정의가 적용된다. 본원에 사용된 단수 형태는 문맥이 달리 명백하게 지시하지 않는 한 복수 지시대상을 포함한다는 것을 주목해야 한다. 따라서, 예를 들어 "항체"에 대한 언급은 복수의 이러한 항체를 포함하고, "투여량"에 대한 언급은 하나 이상의 투여량 및 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 그의 등가물 등에 대한 언급을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "약"은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 이해되고, 사용되는 문맥에 따라 어느 정도까지 변경될 것이다. 일반적으로, "약"은 명세서에 달리 나타내지 않는 한 참조 값의 플러스/마이너스 10%인 값의 범위를 포괄한다.
제시된 범위 사이의 임의의 및 모든 전체 또는 부분 정수는 본원에 포함되는 것으로 이해된다.
CD40은 또한 B-세포 표면 항원 CD40, Bp50, CD40L 수용체, CDw40, CDW40, MGC9013, p50, TNFRSF5 및 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 구성원 5로 공지되어 있고 이로 지칭된다. "인간 CD40"은 하기 아미노산 서열을 포함하는 CD40을 지칭한다:
Figure pct00022
(서열식별번호: 20).
본원에 사용된 용어 "가변 도메인"은 문헌 [Kabat et al., Sequences of Immunological Interest, 5th ed., U.S. Dept. Health & Human Services, Washington, D.C. (1991)]에 의해 정의된 이뮤노글로불린 가변 도메인을 지칭한다. 가변 도메인 내의 CDR 아미노산 잔기의 넘버링 및 위치는 널리 공지된 카바트 넘버링 규정에 따른다. VH, "가변 중쇄" 및 "가변 중쇄 도메인"은 중쇄의 가변 도메인을 지칭한다. VL, "가변 경쇄" 및 "가변 경쇄 도메인"은 경쇄의 가변 도메인을 지칭한다.
용어 "인간"은, 항체에 적용되는 경우에, 항체가 인간 이뮤노글로불린으로부터 유래된 서열, 예를 들어 FR 및/또는 CH 도메인을 갖는다는 것을 의미한다. 서열은 그 서열이 (a) 인간 개체로부터 또는 인간 개체로부터의 세포 또는 세포주로부터 단리되거나; (b) 클로닝된 인간 항체 유전자 서열 또는 인간 항체 가변 도메인 서열의 라이브러리로부터 단리되거나; 또는 (c) 상기 폴리펩티드 중 1개 이상으로부터 돌연변이 및 선택에 의해 다양화되는 경우에 인간 이뮤노글로불린 코딩 서열"로부터 유래된" 것이다.
본원에 사용된 "단리된" 화합물은 화합물과 자연에서 자연적으로 회합되어 있는 적어도 1종의 성분으로부터 화합물이 분리되어 나온 것을 의미한다.
본 개시내용의 항-CD40 항체는 가변 중쇄 및 가변 경쇄를 포함하며, 이들 각각은 아미노-말단에서 카르복시-말단으로 하기 순서로 배열된 3개의 상보성-결정 영역 (CDR) 및 4개의 프레임워크 영역 (FR)을 함유한다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. CDR은 항원과 특이적 상호작용을 형성하고 주로 항원 인식을 담당하는 잔기의 대부분을 함유한다.
본 개시내용의 항-CD40 항체는 인간화 항체 Y12XX-hz28 (Vh-hz14; Vk-hz2), Y12XX-hz40 (Vh-hz12; Vk-hz3) 또는 Y12XX-hz42 (Vh-hz14; Vk-hz3)의 CDR을 포함할 수 있다. 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열의 개관이 표 1에 제공된다. 표는 각각의 아미노산 서열에 대한 약칭 및 보다 상세한 명칭, 뿐만 아니라 서열 식별자를 포함한다.
표 1.
Figure pct00023
구체적 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD40 항체는 인간화 항체 Y12XX-hz28 (Vh-hz14; Vk-hz2)의 CDR을 포함한다. Y12XX-hz28의 아미노산 서열의 상세사항이 표 2에 제공된다.
표 2.
Y12XX-hz28 서열 (Vh-hz14; Vk-hz2)
Figure pct00024
구체적 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD40 항체는 인간화 항체 Y12XX-hz40 (Vh-hz12; Vk-hz3)의 CDR을 포함한다. Y12XX-hz40의 아미노산 서열이 표 3에 제공된다.
표 3.
Y12XX-hz40 서열 (Vh-hz12; Vk-hz3)
Figure pct00025
구체적 실시양태에서, 본 개시내용의 항-CD40 항체는 인간화 항체 Y12XX-hz42 (Vh-hz14; Vk-hz3)의 CDR을 포함한다. Y12XX-hz42의 아미노산 서열의 상세사항이 표 4에 제공된다.
표 4.
Y12XX-hz42 서열 (Vh-hz14; Vk-hz3)
Figure pct00026
한 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 인간화 Y12XX-hz28 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 CDR1, CDR2 및 CDR3 영역의 아미노산 서열을 포함할 수 있다 (예를 들어, 예로서 각각 서열식별번호: 4 및 10 참조). 모노클로날 항체는 모든 6개의 CDR (VH에 대해 3개 및 VL에 대해 3개), 예를 들어 각각 가변 중쇄 CDR 1-3에 대해 SYWMH (서열식별번호: 1), QINPTTGRSQYNEKFKT (서열식별번호: 2) 및 WGLQPFAY (서열식별번호: 3), 및 각각 가변 경쇄 CDR 1-3에 대해 KASQDVSTAVA (서열식별번호: 7), SASYRYT (서열식별번호: 8) 및 QQHYSTPWT (서열식별번호: 9)를 함유한다.
한 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 인간화 Y12XX-hz40 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 CDR1, CDR2 및 CDR3 영역의 아미노산 서열을 포함할 수 있다 (예를 들어, 예로서 각각 서열식별번호: 13 및 16 참조). 모노클로날 항체는 모든 6개의 CDR (VH에 대해 3개 및 VL에 대해 3개), 예를 들어 각각 가변 중쇄 CDR 1-3에 대해 SYWMH (서열식별번호: 1), QINPSQGRSQYNEKFKT (서열식별번호: 12) 및 WGLQPFAY (서열식별번호: 3), 및 각각 가변 경쇄 CDR 1-3에 대해 KASQDVSTAVA (서열식별번호: 7), SASYRYT (서열식별번호: 8) 및 QQHYSTPWT (서열식별번호: 9)를 함유한다.
한 실시양태에서, 본 개시내용의 항체는 인간화 Y12XX-hz42 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 CDR1, CDR2 및 CDR3 영역의 아미노산 서열을 포함할 수 있다 (예를 들어, 예로서 각각 서열식별번호: 4 및 16 참조). 모노클로날 항체는 모든 6개의 CDR (VH에 대해 3개 및 VL에 대해 3개), 예를 들어 각각 가변 중쇄 CDR 1-3에 대해 SYWMH (서열식별번호: 1), QINPTTGRSQYNEKFKT (서열식별번호: 2) 및 WGLQPFAY (서열식별번호: 3), 및 각각 가변 경쇄 CDR 1-3에 대해 KASQDVSTAVA (서열식별번호: 7), SASYRYT (서열식별번호: 8) 및 QQHYSTPWT (서열식별번호: 9)를 함유한다.
"항체" (Ab)는 항원에 특이적으로 결합하고, 디술피드 결합에 의해 상호연결된 적어도 2개의 중쇄 (H) 및 2개의 경쇄 (L)를 포함하는 이뮤노글로불린 또는 그의 항원-결합 부분을 비제한적으로 포함할 것이다. 각각의 H 쇄는 중쇄 가변 영역 (본원에서 VH로 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역을 포함한다. 중쇄 불변 영역은 3개의 불변 도메인인 CH1, CH2 및 CH3을 포함한다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역 (본원에서 VL로 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역을 포함한다. 경쇄 불변 영역은 1개의 불변 도메인인 CL을 포함한다. VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역 (FR)으로 불리는 보다 보존된 영역이 사이에 배치되어 있는, 상보성 결정 영역 (CDR)으로 불리는 초가변성 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 아미노-말단에서 카르복시-말단으로 하기 순서로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR을 포함한다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다.
Ab의 "항원 결합 부분" ("항원-결합 단편"으로도 불림) 또는 그의 항원 결합 부분은 전체 Ab에 의해 결합되는 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는, Ab (전장 항체의 전장 또는 단편)의 1개 이상의 서열을 지칭한다. 항원-결합 단편의 예는 Fab, F(ab')2, scFv (단일-쇄 가변 단편), Fab', dsFv, sc(Fv)2 및 scFv-Fc를 포함한다.
"인간화" 항체는 비-인간 Ab의 CDR 도메인 외부의 아미노산 중 일부, 대부분 또는 모두가 인간 이뮤노글로불린으로부터 유래된 상응하는 아미노산으로 대체된 Ab를 지칭한다. 인간화 형태의 Ab의 한 실시양태에서, CDR 도메인 외부의 아미노산 중 일부, 대부분 또는 모두가 인간 이뮤노글로불린으로부터의 아미노산으로 대체된 반면, 1개 이상의 CDR 영역 내의 아미노산 중 일부, 대부분 또는 모두는 변화되지 않는다. 아미노산의 적은 부가, 결실, 삽입, 치환 또는 변형은, 이들이 특정한 항원과 결합하는 Ab의 능력을 제거하지 않는 한, 허용가능하다. "인간화" Ab는 원래의 Ab의 경우와 유사한 항원 특이성을 보유한다.
"키메라 항체"는 가변 영역이 한 종으로부터 유래되고 불변 영역이 또 다른 종으로부터 유래된 Ab, 예컨대 가변 영역이 마우스 Ab로부터 유래되고 불변 영역이 인간 Ab로부터 유래된 Ab를 지칭한다.
본원에 사용된 "특이적 결합"은, 예를 들어 표면 플라즈몬 공명 (SPR)에 의해 측정 시 약 1 μM 이하의 해리 상수 (Kd)로 항체가 항원에 결합하는 것을 지칭한다. 적합한 검정 시스템은 비아코어(BIAcore)™ (지이 헬스케어 라이프 사이언시스(GE Healthcare Life Sciences), 매사추세츠주 말보로) 표면 플라즈몬 공명 시스템 및 비아코어™ 동역학 평가 소프트웨어 (예를 들어, 버전 2.1)를 포함한다.
CD40에 대한 본 발명의 항체의 결합은 적어도 1종의 CD40 활성을 길항한다. "CD40 활성"은 T 세포 활성화 (예를 들어, T 세포 증식 또는 시토카인 분비의 유도), 대식세포 활성화 (예를 들어, 대식세포에서의 반응성 산소 종 및 산화질소의 유도), 및 B 세포 활성화 (예를 들어, B 세포 증식, 항체 이소형 전환 또는 형질 세포로의 분화)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. CD40 활성은 다른 분자와의 상호작용에 의해 매개될 수 있다. "CD40 활성"은 CD40과 하기 분자 (괄호 안의 유니프롯(Uniprot) 수탁 번호로 식별됨) 사이의 기능적 상호작용을 포함한다.
CALR (P27797);
ERP44 (Q9BS26);
FBL (P22087);
POLR2H (P52434);
RFC5 (P40937);
SGK1 (O00141);
SLC30A7 (Q8NEW0);
SLC39A7 (Q92504);
TRAF2 (Q5T1L5);
TRAF3 (Q13114);
TRAF6 (Q9Y4K3);
TXN (Q5T937);
UGGT1 (Q9NYU2); 및
USP15 (Q9Y4E8).
예를 들어, CD40 "활성"은 TRAF2와의 상호작용을 포함한다. CD40/TRAF2 상호작용은 NF-κB 및 JNK를 활성화시킨다. 문헌 [Davies et al., Mol. Cell Biol. 25: 9806-19 (2005)]을 참조한다. 따라서, 이러한 CD40 활성은 참조 대비 CD40-의존성 세포 NF-κB 및 JNK 활성화에 의해 결정될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "활성화시키다", "활성화시킨다" 및 "활성화된"은 주어진 측정가능한 CD40 활성이 참조에 비해 적어도 10%, 예를 들어 적어도 10%, 25%, 50%, 75% 또는 심지어 적어도 100% 또는 그 초과 증가한 것을 지칭한다. CD40 활성은 CD40 활성이 길항제 부재 시에 비해 적어도 10%, 예시적인 실시양태에서 적어도 약 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 97% 또는 심지어 100% (즉, 검출가능한 활성이 없음) 감소된 경우에 "길항된다". 예를 들어, 항체는 CD40을 활성화시키지 않으면서 일부 또는 모든 CD40 활성을 길항할 수 있다. 예를 들어, 항체는 B 세포 증식을 활성화시키지 않을 수 있다. 항체는 T 세포에 의한 시토카인 분비를 활성화시키지 않을 수 있으며, 여기서 시토카인은 IL-2, IL-6, IL-10, IL-13, TNF-α 및 IFN-γ로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 시토카인이다.
가변 도메인은 인간 배선 항체 유전자 절편이 코딩하는 상응하는 프레임워크 영역과 동일한 아미노산 서열을 갖는 1개 이상의 프레임워크 영역 (FR)을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 항체에 사용하기에 바람직한 프레임워크 서열은 본원에 기재된 항체에 의해 사용되는 프레임워크 서열과 구조적으로 유사한 것이다. VH CDR1, 2 및 3 서열 및 VL CDR1, 2 및 3 서열은 프레임워크 서열이 유래된 배선 이뮤노글로불린 유전자에서 발견되는 것과 동일한 서열을 갖는 프레임워크 영역 상에 그라프팅될 수 있거나, 또는 CDR 서열은 배선 서열과 비교하여 20개 이하의, 바람직하게는 보존적인 아미노산 치환을 함유하는 프레임워크 영역 상에 그라프팅될 수 있다. 예를 들어, 특정 경우에 프레임워크 영역 내의 잔기를 돌연변이시켜 항체의 항원 결합 능력을 유지 또는 증진시키는 것이 유익한 것으로 밝혀졌다 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,530,101; 5,585,089; 5,693,762 및 6,180,370 (Queen et al.) 참조).
예시적인 프레임워크 영역은 하기 표 5 및 6의 것들을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
표 5.
Figure pct00027
표 6.
Figure pct00028
변이체 가변 도메인은 인간화 Y12XX-hz28, Y12XX-hz40 또는 Y12XX-hz42 서열의 가변 도메인과 10개 이하의 아미노산 또는 그 사이의 임의의 정수 값만큼 상이할 수 있으며, 여기서 변이체 가변 도메인은 CD40에 특이적으로 결합한다. 대안적으로, 변이체 가변 도메인은 각각 인간화 Y12XX-hz28, Y12XX-hz40 또는 Y12XX-hz42 서열의 서열에 대해 적어도 90% 서열 동일성 (예를 들어, 적어도 92%, 95%, 98% 또는 99% 서열 동일성)을 가질 수 있다. 동일하지 않은 아미노산 잔기 또는 2개의 서열 사이에 상이한 아미노산은 아미노산 치환, 부가 또는 결실을 나타낼 수 있다. 2개의 서열 사이에 상이한 잔기는 2개의 서열이 적절한 아미노산 서열 정렬 알고리즘, 예컨대 BLAST® (미국 국립 의학 도서관의 등록 상표)에 의해 정렬되는 경우에 동일하지 않은 위치로 보인다.
본 발명의 예시적인 CD40 항체는 인간 CD40에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 포함할 수 있으며, 여기서 상기 항체는 중쇄 가변 영역을 포함하는 제1 폴리펩티드 부분 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 제2 폴리펩티드 부분을 포함하고, 여기서
상기 중쇄 가변 영역은 (i) SYWMH (서열식별번호: 1)를 포함하는 CDR1, QINPTTGRSQYNEKFKT (서열식별번호: 2)를 포함하는 CDR2, WGLQPFAY (서열식별번호: 3)를 포함하는 CDR3 및 (ii) SYWMH (서열식별번호: 1)를 포함하는 CDR1, QINPSQGRSQYNEKFKT (서열식별번호: 12)를 포함하는 CDR2, WGLQPFAY (서열식별번호: 3)를 포함하는 CDR3 중 하나의 경우를 포함하고;
상기 경쇄 가변 영역은 KASQDVSTAVA (서열식별번호: 7)를 포함하는 CDR1, SASYRYT (서열식별번호: 8)를 포함하는 CDR2 및 QQHYSTPWT (서열식별번호: 9)를 포함하는 CDR3을 포함한다.
단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 CD40의 1종 이상의 활성을 길항할 수 있다. 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 키메라 항체일 수 있다. 키메라 항체에 대한 예시적인 중쇄 및 경쇄 가변 쇄는 실시예의 표 8에 있다. 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 인간화 항체일 수 있다. 예시적인 인간화 중쇄 및 경쇄 가변 쇄는 실시예의 표 10에 있다. 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 인간 중쇄 불변 영역 및 인간 경쇄 불변 영역을 포함할 수 있다.
Fc 도메인 및 불변 영역
중쇄의 카르복실-말단 "절반"은 불변 영역 (Fc)을 정의하며, 이는 주로 이펙터 기능을 담당한다. 본원에 사용된 용어 "Fc 도메인"은 문헌 [Kabat et al., Sequences of Immunological Interest, 5th ed., U.S. Dept. Health & Human Services, Washington, D.C. (1991)]에 따라 한정된 CH2 및 CH3 불변 도메인을 포함하는 불변 영역 항체 서열을 지칭한다. Fc 영역은 인간 IgG로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, Fc 영역은 인간 IgG1 또는 인간 IgG4 Fc 영역으로부터 유래될 수 있다. 중쇄 가변 도메인은 Fc 도메인에 융합될 수 있다. 가변 도메인의 카르복실 말단은 Fc CH2 도메인의 아미노 말단에 연결 또는 융합될 수 있다. 대안적으로, 가변 도메인의 카르복실 말단은 Fc 도메인의 아미노 말단에 자체 융합된 링커 아미노산 서열의 아미노 말단에 연결 또는 융합될 수 있다. 대안적으로, 가변 도메인의 카르복실 말단은 Fc CH2 도메인에 자체 융합된 CH1 도메인의 아미노 말단에 연결 또는 융합될 수 있다. 임의로, 단백질은 CH1 도메인 이후의 힌지 영역을 전체적으로 또는 부분적으로 포함할 수 있다. 임의로, 아미노산 링커 서열은 가변 도메인과 Fc 도메인 사이에 존재한다. 경쇄 가변 도메인의 카르복실 말단은 CL 도메인의 아미노 말단에 연결 또는 융합될 수 있다.
중쇄 CH1에 대한 예시적인 서열은 서열식별번호: 5의 아미노산 118-215
Figure pct00029
; 서열식별번호: 18)이다. 경쇄 CL에 대한 예시적인 서열은 서열식별번호: 11의 아미노산 108-214
Figure pct00030
; 서열식별번호: 19)이다.
항체는 인간 CD40에 특이적으로 결합하는 제1 가변 도메인 및 Fc 도메인을 포함하는 제2 도메인을 포함하는 융합 항체일 수 있다.
융합 단백질에 사용된 예시적인 Fc 도메인은 인간 IgG 도메인을 포함할 수 있다. 예시적인 인간 IgG Fc 도메인은 IgG4 Fc 도메인 및 IgG1 Fc 도메인을 포함한다. 인간 IgG 중쇄 유전자가 C-말단 리신을 코딩하지만, 리신은 종종 혈액 순환에서의 절단의 결과로 내인성 항체에 부재한다. C-말단 리신을 포함한 IgG 중쇄를 갖는 항체는, 포유동물 세포 배양물에서 발현되는 경우에, 또한 가변 수준의 C-말단 리신이 존재할 수 있다 (Cai et al., 2011, Biotechnol Bioeng. 108(2): 404-12). 따라서, 본원에 개시된 임의의 IgG 중쇄 Fc 도메인의 C-말단 리신은 생략될 수 있다.
본원에 기재된 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 하기 아미노산 서열을 포함하는 Fc 도메인을 포함할 수 있다:
Figure pct00031
(Fc 컨센서스; 서열식별번호: 21). 괄호 표기는 그 위치에서의 가능한 아미노산 동일성을 나타낸다. 예를 들어, 카바트 위치 238은 프롤린 (P) 또는 리신 (K)일 수 있으며, 이는 (P/K)로 표기된다. 추가의 예시적인 비-제한적 컨센서스 서열은 서열식별번호: 118-120이다.
본원에 기재된 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 프롤린 238 (P238)이 리신 (K), 세린 (S), 알라닌 (A), 아르기닌 (R) 및 트립토판 (W)으로 이루어진 군으로부터 선택된 잔기 중 하나로 돌연변이되어, 항체 또는 그의 항원 결합 부분이 감소된 Fc-감마-수용체 (FcγR) 결합을 갖게 되는 것인, FcγR에 대한 결합을 감소시키는 카바트 위치 238에서의 돌연변이를 포함하는 인간 IgG1 Fc 도메인을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 인간 IgG1 Fc 도메인에서 P238이 리신으로 돌연변이된 것일 수 있다.
단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 서열식별번호: 22-29로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 도메인을 포함한다.
상기 IgG1 Fc 도메인을 포함하는 예시적인 서열은 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 30 및 서열식별번호: 31을 포함한다.
본원에 기재된 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 카바트 위치 297에서 치환된 알라닌을 포함하는 인간 IgG1 Fc 도메인을 포함할 수 있다. 예를 들어, 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 서열식별번호: 32-39로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 Fc 도메인을 포함한다.
본원에 기재된 단리된 항체 또는 항원 결합 부분은 (1) 실시예에서의 표 8 또는 표 10으로부터 선택된 가변 중쇄 (VH) 또는 그의 CDR, 및/또는 (2) 실시예에서의 표 8 또는 표 10으로부터 선택된 가변 경쇄 (VL) 또는 그의 CDR을 포함할 수 있다.
본원에 개시된 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 Vh-hz12 (서열식별번호: 13) 및 Vh-hz14 (서열식별번호: 4)로부터 선택된 중쇄 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본원에 개시된 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 Vk-hz2 (서열식별번호: 10) 및 Vk-hz3 (서열식별번호: 16)으로부터 선택된 경쇄 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본원에 개시된 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 항체일 수 있다:
a) 서열식별번호: 5 또는 6의 중쇄 및 서열식별번호: 11의 경쇄를 갖는 Y12XX-hz28-P238K;
b) 서열식별번호: 14 또는 15의 중쇄 및 서열식별번호: 17의 경쇄를 갖는 Y12XX-hz40-P238K; 및
c) 서열식별번호: 5 또는 6의 중쇄 및 서열식별번호: 17의 경쇄를 갖는 Y12XX-hz42-P238K.
본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 부분, 여기서 항원 결합 부분은 Fv, Fab, F(ab')2, Fab', dsFv, scFv, sc(Fv)2, 디아바디 및 scFv-Fc로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 면역접합체일 수 있으며, 여기서 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 치료제에 연결된다.
본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 이중특이적 항체일 수 있으며, 여기서 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 상기 항체 또는 그의 항원 결합 부분과 상이한 결합 특이성을 갖는 제2 기능적 모이어티에 연결된다.
본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 부분은 추가의 모이어티를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 항체의 가변 영역은 임의로 "아미노산 링커" 또는 "링커"에 의해 Fc 도메인에 연결될 수 있다. 예를 들어, 가변 중쇄 도메인의 C-말단은 아미노산 링커의 N-말단에 융합될 수 있고, Fc 도메인은 링커의 C-말단에 융합될 수 있다. 아미노산 링커는 임의의 길이일 수 있고, 아미노산의 임의의 조합으로 이루어질 수 있지만, 링커 길이는 연결된 도메인들 사이의 상호작용을 감소시키기 위해 비교적 짧을 수 있다 (예를 들어, 5개 이하의 아미노산). 링커의 아미노산 조성은 또한 벌키 측쇄를 갖는 아미노산 또는 2차 구조를 도입할 가능성이 있는 아미노산의 수를 감소시키도록 조정될 수 있다. 적합한 아미노산 링커는 3, 4, 5, 6, 7, 10, 15, 20 또는 25개 이하의 아미노산 길이를 갖는 것을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 대표적인 아미노산 링커 서열은 GGGGS (서열식별번호: 40), 및 GGGGS의 2, 3, 4 또는 5개의 카피를 포함하는 링커 (각각 서열식별번호: 41 내지 44)를 포함한다. 표 7은 본 개시내용에서 사용하기에 적합한 링커 서열을 열거한다.
표 7
대표적인 링커 서열
Figure pct00032
항체 제조
항체는 적합한 포유동물 숙주 세포주, 예컨대 CHO, 293, COS, NSO 등에서 통상의 기술을 사용하여 생산 및 정제되고, 이어서 단백질 A 친화성 크로마토그래피, 이온 교환, 역상 기술 등을 포함한 방법 중 하나 또는 조합을 사용하여 정제될 수 있다.
관련 기술분야에 널리 공지된 바와 같이, 다수의 코돈이 동일한 아미노산을 코딩할 수 있다. 따라서, 단백질 서열을 코딩하는 핵산은 코돈 축중성을 갖는 핵산을 포함한다. 본원에 개시된 폴리펩티드 서열은 다양한 핵산에 의해 코딩될 수 있다. 유전자 코드는 범용이고 널리 공지되어 있다. 본원에 개시된 임의의 폴리펩티드 서열을 코딩하는 핵산은 관련 기술분야의 통상적인 지식에 기초하여 용이하게 고안될 뿐만 아니라 생산에 최적화될 수 있다. 표준 유전자 코드 표를 고려하고 컴퓨터를 보조로 사용하였을 때, 주어진 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열의 가능한 수는 많지만, 통상의 기술자는 주어진 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열의 모든 가능한 조합을 용이하게 생성할 수 있다.
불변 영역 CH1 및 Fc 도메인 IgG1-P238K를 포함하는 Y12XX-hz28의 Y12XX 중쇄 가변 도메인을 코딩하는 대표적인 핵산 서열은 하기와 같다:
Figure pct00033
(서열식별번호: 49). 이 서열에서, 뉴클레오티드 1-51은 신호 펩티드를 코딩하고 (임의적임), 뉴클레오티드 52-402는 중쇄 가변 영역을 코딩하며, 여기서 뉴클레오티드 141-155는 Y12XX 중쇄 가변 도메인의 CDR1을 코딩하고, 뉴클레오티드 198-249는 CDR2를 코딩하고, 뉴클레오티드 346-369는 CDR3을 코딩한다. 뉴클레오티드 403-696은 CH1 도메인을 코딩하고, 뉴클레오티드 697-1399는 IgG1-P238K를 코딩한다. 뉴클레오티드 1400-1402는 정지 코돈이다.
불변 영역 CL을 포함하는 Y12XX-hz28의 Y12XX 경쇄 가변 도메인을 코딩하는 대표적인 핵산 서열은 하기와 같다:
Figure pct00034
(서열식별번호: 50). 이 서열에서, 뉴클레오티드 1-51은 신호 펩티드를 코딩하고 (임의적임), 뉴클레오티드 52-372는 경쇄 가변 영역을 코딩하며, 여기서 뉴클레오티드 121-153은 CDR1을 코딩하고, 뉴클레오티드 199-219는 CDR2를 코딩하고, 뉴클레오티드 316-342는 CDR3을 코딩한다. 뉴클레오티드 373-693은 CL을 코딩한다. 뉴클레오티드 694-696은 정지 코돈이다.
중쇄 및/또는 경쇄에 대한 코딩 서열은 임의로 코딩 서열의 5' 말단에서 신호 펩티드, 예컨대 MRAWIFFLLCLAGRALA (서열식별번호: 51)를 코딩할 수 있다. 상기 기재된 바와 같이, 이러한 신호 펩티드에 대한 예시적인 핵산 코딩 서열은 ATGAGGGCTTGGATCTTCTTTCTGCTCTGCCTGGCCGGGAGAGCGCTCGCA (서열식별번호: 52)이다.
따라서, 본원에 개시된 항체를 코딩하는 핵산이 또한 고려된다. 이러한 핵산은 벡터, 예컨대 적합한 발현 벡터, 예를 들어 pHEN-1 내로 삽입될 수 있다 (Hoogenboom et al. (1991) Nucleic Acids Res. 19:4133-4137). 벡터 및/또는 핵산을 포함하는 단리된 숙주 세포가 추가로 제공된다.
본 개시내용의 항체는 임의의 적합한 포유동물 숙주 세포주, 예컨대 CHO (차이니즈 햄스터 난소 세포), 293 (인간 배아 신장 293 세포), COS 세포, NSO 세포 등에서 단지 통상의 기술을 사용하여 생산 및 정제되고, 이어서 단백질 A 친화성 크로마토그래피, 이온 교환, 역상 기술 등을 포함한 방법 중 하나 또는 조합을 사용하여 정제될 수 있다.
제약 조성물 및 치료 방법
제약 조성물은 치료 유효량의 1종 이상의 항체 및 임의로 제약상 허용되는 담체를 포함한다. 제약상 허용되는 담체는, 예를 들어 물, 염수, 포스페이트 완충 염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 등, 뿐만 아니라 그의 조합을 포함한다. 제약상 허용되는 담체는 융합 단백질의 보관-수명 또는 유효성을 증진시키는 미량의 보조 물질, 예컨대 습윤제 또는 유화제, 보존제 또는 완충제를 추가로 포함할 수 있다. 조성물은 투여 후에 활성 성분(들)의 신속, 지속 또는 지연 방출을 제공하도록 제제화될 수 있다. 적합한 제약 조성물 및 그를 제조하는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Remington, The Science and Practice of Pharmacy, A. Gennaro, et al., eds., 21st ed., Mack Publishing Co. (2005)]을 참조한다.
제약 조성물은 단독으로 또는 면역억제제/면역조정제 및/또는 항염증제와 조합 요법으로 (즉, 동시에 또는 순차적으로) 투여될 수 있다. 작용제의 예시적인 유형은 세포독성 T 림프구-연관 단백질 4 (CTLA4) 돌연변이체 분자이다. 예시적인 CTLA4 돌연변이체 분자는 변형된 CTLA4-Ig인 L104EA29Y-Ig (벨라타셉트)이다. 상이한 면역 질환은 면역 질환을 치료하는데 유용한 특정 보조 화합물의 사용을 요구할 수 있으며, 이는 환자-대-환자 기준으로 결정될 수 있다. 예를 들어, 제약 조성물은 1종 이상의 적합한 아주반트, 예를 들어 시토카인 (예를 들어 IL-10 및 IL-13) 또는 다른 면역 자극제, 예를 들어 케모카인, 종양-연관 항원 및 펩티드와 조합되어 투여될 수 있다. 적합한 아주반트는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
면역 질환의 치료를 필요로 하는 환자에서 면역 질환을 치료하는 방법은 환자에게 치료 유효량의 본원에 기재된 바와 같은 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 투여하는 것을 포함할 수 있다. 자가면역 또는 염증성 질환의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 본원에 기재된 바와 같은 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 투여하는 것을 포함할 수 있는, 상기 환자에서 자가면역 또는 염증성 질환을 치료 또는 예방하는 방법이 추가로 제공된다. 면역 질환 또는 자가면역 또는 염증성 질환의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 투여하는 것을 포함할 수 있는, 면역 질환의 치료를 필요로 하는 환자에서 면역 질환을 치료하기 위한, 및/또는 자가면역 또는 염증성 질환의 치료를 필요로 하는 환자에서 자가면역 또는 염증성 질환을 치료 또는 예방하기 위한, 본 개시내용의 항체 또는 그의 항원 결합 부분 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도가 또한 제공된다. CD40-매개된 T 세포 활성화를 길항하는 것은, 예를 들어 자가면역, 이식 거부 또는 알레르기 반응 동안 발생하는 바람직하지 않은 T 세포 반응을 억제할 수 있다. CD40-매개된 T 세포 활성화를 억제하는 것은 이들 질환의 진행 및/또는 중증도를 완화시킬 수 있다.
면역 질환의 치료를 필요로 하는 환자에서의 면역 질환의 치료 및/또는 자가면역 또는 염증성 질환의 치료를 필요로 하는 환자에서의 자가면역 또는 염증성 질환의 치료 또는 예방을 위한 의약의 제조에서의 본 개시내용의 항체 또는 그의 항원 결합 부분 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도가 또한 제공된다. 의약은, 예를 들어 면역억제제/면역조정제 및/또는 항염증제와 조합되어 투여될 수 있다.
본원에 사용된 "환자"는 동물, 예를 들어 인간을 포함한 포유동물을 의미한다. 환자는 면역 질환으로 진단될 수 있다. "치료" 또는 "치료하다" 또는 "치료하는"은 증상, 장애, 병태 또는 질환의 진행 또는 중증도의 완화를 수반하는 과정을 의미한다. "면역 질환"은 개체에서 세포성 및/또는 체액성 면역 반응을 포함한 면역 반응의 발생과 연관된 임의의 질환을 지칭한다. 면역 질환의 예는 염증, 알레르기, 자가면역 질환 또는 이식편-관련 질환을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 따라서, 환자는 자가면역 질환 또는 염증성 질환으로 진단될 수 있다. "자가면역 질환"은 개체에서 세포성 및/또는 체액성 면역 반응을 포함한 자가면역 반응의 발생과 연관된 임의의 질환을 지칭한다. 자가면역 질환의 예는 궤양성 결장염 및 크론병을 포함하나 이에 제한되지는 않는 염증성 장 질환 (IBD)이다. 다른 자가면역 질환은 전신 홍반성 루푸스, 다발성 경화증, 류마티스 관절염, 당뇨병, 건선, 경피증 및 아테롬성동맥경화증을 포함한다. 이식편-관련 질환은 이식편 대 숙주 질환 (GVHD), 급성 이식 거부 및 만성 이식 거부를 포함한다.
본 개시내용의 항체를 투여함으로써 치료될 수 있는 질환은 애디슨병, 알레르기, 아나필락시스, 강직성 척추염, 천식, 아테롬성동맥경화증, 아토피성 알레르기, 귀의 자가면역 질환, 눈의 자가면역 질환, 자가면역 간염, 자가면역 이하선염, 기관지 천식, 관상동맥 심장 질환, 크론병, 당뇨병, 부고환염, 사구체신염, 그레이브스병, 길랑-바레 증후군, 하시모토병, 용혈성 빈혈, 특발성 혈소판감소성 자반증, 염증성 장 질환, 재조합 약물 제품 (예를 들어, 혈우병환자에서의 인자 VII)에 대한 면역 반응, 루푸스 신염, 전신 홍반성 루푸스, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 천포창, 건선, 류마티스성 열, 류마티스 관절염, 사르코이드증, 경피증, 쇼그렌 증후군, 척추관절병증, 갑상선염, 이식 거부, 혈관염 및 궤양성 결장염으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
제약 조성물은 단독으로 또는 면역억제제/면역조정제 및/또는 항염증제와의 조합 요법으로 (즉, 동시에 또는 순차적으로) 투여될 수 있다. 상이한 면역 질환은 면역 질환을 치료하는데 유용한 특정 보조 화합물의 사용을 요구할 수 있으며, 이는 환자-대-환자 기준으로 결정될 수 있다. 예를 들어, 제약 조성물은 1종 이상의 적합한 아주반트, 예를 들어 시토카인 (예를 들어 IL-10 및 IL-13) 또는 다른 면역 자극제, 예를 들어 케모카인, 종양-연관 항원 및 펩티드와 조합되어 투여될 수 있다. 적합한 아주반트는 관련 기술분야에 공지되어 있다.
임의의 적합한 방법 또는 경로가 항체 또는 그의 항원 결합 부분 또는 제약 조성물을 투여하는데 사용될 수 있다. 투여 경로는, 예를 들어 정맥내, 복강내, 피하 또는 근육내 투여를 포함한다. 투여된 항체의 치료 유효 용량은, 예를 들어 치료될 면역 질환의 유형 및 중증도, 조합 요법의 사용, 항체 또는 그의 항원 결합 부분 또는 제약 조성물의 투여 경로, 및 환자의 체중을 포함한 수많은 인자에 좌우된다. 도메인 항체의 치료 유효량에 대한 비제한적 범위는 환자의 체중 기준으로 0.1-20 밀리그램/킬로그램 (mg/kg), 한 측면에서 1-10 mg/kg이다.
키트
인간 환자에서 면역 질환을 치료하는데 유용한 키트가 제공된다. 인간 환자에서 자가면역 질환 또는 염증성 질환을 치료 또는 예방하는데 유용한 키트가 또한 제공된다. 키트는 (a) 소정 용량의 본 개시내용의 항체 또는 그의 항원 결합 부분, 및 (b) 환자에서의 면역 질환을 치료하는 방법에서 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 사용하는 것 또는 환자에서의 자가면역 또는 염증성 질환을 치료 또는 예방하는 방법에서 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 사용하는 것에 대한 지침서를 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "지침서"는 키트 내의 본 발명의 조성물 및/또는 화합물의 유용성을 알리기 위해 사용될 수 있는 간행물, 기록물, 다이어그램 또는 임의의 다른 표현 매체를 포함한다. 키트의 지침서는, 예를 들어 본 발명의 화합물 및/또는 조성물을 함유하는 용기에 부착되거나, 또는 화합물 및/또는 조성물을 함유하는 용기와 함께 운송될 수 있다. 대안적으로, 지침서는 수용자가 지침서 및 화합물을 협력하여 사용할 의도가 있는 경우에 용기와 별도로 운송될 수 있다. 지침서의 전달은, 예를 들어 키트의 유용성을 알리는 간행물 또는 다른 표현 매체의 물리적 전달에 의할 수 있거나, 또는 대안적으로 전자 전송에 의해, 예를 들어 컴퓨터에 의해, 예컨대 전자 메일에 의해 달성되거나 또는 웹사이트로부터 다운로드될 수 있다.
실시예
실시예 1: 인간 CD40에 대한 마우스 항-인간 CD40 항체의 결합
마우스 항-인간-CD40 항체를 생성하고, 표면 플라즈몬 공명 (SPR)에 의해 인간 CD40에의 결합에 대해 시험하였다. 각각의 항체에 대한 Vh 및 Vk 서열이 표 8에 제시된다.
표 8
마우스 항-인간-CD40 가변 중쇄 및 경쇄 서열
Figure pct00035
Figure pct00036
Figure pct00037
Figure pct00038
단백질 A 센서 칩 표면 상에서 포획된 마우스 항-인간 CD40 항체에의 인간-CD40 단량체 결합에 대한 CD40 동역학 및 친화도 데이터를 SPR에 의해 평가하였다. 데이터가 표 9에 제시된다. 제시된 데이터는 단일 농도의 CD40 분석물 (1 μM)에 대한 것이고, 따라서 겉보기 (app) 값으로서 보고된다.
표 9
SPR 동역학/친화도 데이터
Figure pct00039
SPR 데이터 및 서열 데이터에 기초하여, 3종의 항체인 ADX_Y1258.ZZ0-1, ADX_Y1262.ZZ0-1 및 ADX_Y1268.ZZ0-1을 인간화하기 위해 선택하였다.
실시예 2: Y12XX의 인간화 변이체의 인간화 및 선택
인간화 배경/절차는 WO2017004006 내의 섹션 "II. 조작 및 변형된 항체"에 논의된 바와 같으며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 이러한 분석에 기초하여, 9종의 인간화 Vh 서열 (Vh-hz1, Vh-hz2, Vh-hz3, Vh-hz4, Vh-hz5, Vh-hz6, Vh-hz9, Vh-hz10 및 Vh-hz11) 및 3종의 인간화 Vκ 서열 (Vk-hz1, Vk-hz2 및 Vk-hz3)을 시험하기 위해 선택하였다. 추가로, 5종의 인간화 Vh 서열 (Vh-hz7, Vh-hz8, Vh-hz12, Vh-hz13 및 Vh-hz14)을 설계된 화학적 문제 위험을 감소시키기 위해 의도된 돌연변이를 함유하도록 설계하였다. 돌연변이는 Y1262_IGHV1.6908에서 잠재적 가수분해 위험을 완화시키기 위한 D100Q (Y1262_IGHV1.6908-D100Q) 및 P101A (Y1262_IGHV1.6908-P101A) 돌연변이를 포함한다. 돌연변이는 또한 Y1268_IGHV1.6908에서 잠재적 탈아미드화 위험을 완화시키기 위한 N55Q (Y1268_IGHV1.6908-N55Q), G56A (Y1268_IGHV1.6908-G56A) 및 S54T-N55T 이중 돌연변이 (Y1268_IGHV1.6908-S54T-N55T)를 포함한다. S54T-N55T 이중 돌연변이는 ADX_Y1262.ZZ0-1-Vh 내의 이들 위치에서 발견된 상응하는 아미노산 잔기에 기초하여 설계하였다. 표 10을 참조한다.
이들 변이체에 대한 서열이 표 10에 제시된다.
표 10
Figure pct00040
Figure pct00041
표 10은 비아코어™ 표면 플라즈몬 공명 (SPR)을 사용한 CD40 결합 분석뿐만 아니라 옥테트(Octet) BLI 역가 분석 (아래에서 논의됨)을 위한, 인간화 항체뿐만 아니라 키메라 항체 대조군의 구축에 사용된 중쇄 및 가변 경쇄 도메인 서열을 제공한다.
Vh 서열을 IgG1-P238K 이소형 (CH1-IgG1-P238K; 서열식별번호: 25)으로 포맷화하였다. Vκ 서열을 공통 CL 서열 (서열식별번호: 11의 아미노산 108-214)을 갖는 전장 경쇄로서 포맷화하였다. 표 11에서, "Y1258" 및 "Y1262"는 마우스 가변 영역 및 인간 불변 영역을 함유하는 키메라 분자를 지칭한다. 인간화 HC 구축물 및 LC 구축물뿐만 아니라 키메라 Y1258 및 Y1262 분자의 다양한 상이한 조합을 역가 분석 및 CD40 결합 분석을 위해 3 밀리리터 (ml) 상청액으로서 발현시켰다. 분자의 패밀리를 상이한 중쇄 / 경쇄 쌍을 고유하게 식별하기 위해 "Y12XX" 접두어, 이어서 "hz#" 접미어를 사용하여 집합적으로 식별하였다.
옥테트 RED 기기 (포르테바이오(Fortebio)) 상에서 생물층 간섭측정법 (BLI)을 사용하여, 단백질 A 센서 팁을 사용하여 상청액으로부터 항체를 포획하고, 대조군 항체 샘플을 사용하여 수득된 표준 곡선에 대해 포획 반응을 측정함으로써, 역가 분석을 수행하였다. 비아코어™ T200 기기 (지이 헬스케어)를 사용하여, 단백질 A 표면 상에서 항체를 포획하고, 인간-CD40 분석물의 500 nM 및 50 nM 주입물의 결합을 시험함으로써, SPR 데이터를 수득하였다. 2가지 농도의 hCD40-단량체에 대한 동역학 데이터를 1:1 랭뮤어 모델에 피팅하여, 이들 상호작용에 대한 동역학 및 친화도 값의 추정치를 산출하고, 상이한 분자들을 비교하였다.
옥테트 역가 및 비아코어™ SPR CD40 결합 데이터가 표 11에 제공된다. 상청액 ("sup") 샘플을 시험하는 것에 추가로, 인간 야생형 IgG1f 이소형
Figure pct00042
; 서열식별번호: 117)을 함유하는 정제된 키메라 Y1258, Y1262 및 Y1268 항체를 대조군으로서 SPR에 의해 시험하였으며; 이들은 표 11에서 "Y1258-hIgG1f", "Y1632-hIgG1f" 및 "Y1268-hIgG1f"로 명명되고, Vh 및 Vk 쇄는 "Chim-P"로 표기된다.
표 11
옥테트 역가 및 비아코어™ SPR CD40 결합 데이터
Figure pct00043
주어진 중쇄 구축물에 대해, 역가는 일반적으로 Vk-hz3 (서열식별번호: 16) 함유 경쇄와 쌍형성된 경우에 가장 높고, Vk-hz2 (서열식별번호: 10)와 쌍형성된 중쇄에 대해 더 낮고, Vk-hz1 (서열식별번호: 116) 함유 경쇄와 쌍형성된 중쇄에 대해 가장 낮다.
SPR 분석 데이터는 항체가 1 E-07 초과 내지 1 E-09 미만의 범위의 KD 값으로, CD40에 대한 가변 친화도로 결합하였다는 것을 나타낸다. 일부 항체의 경우, 친화도가 너무 강하여 본 검정에서 신뢰있게 정확히 결정할 수 없었으며, 이는 해리율이 너무 느려 측정할 수 없었기 때문이다. 표에서 이탤릭체인 이들 값은 본 검정에서 정확한 정량화 한계를 넘는다.
서열, 역가 및 SPR 결합 데이터에 기초하여, 항체를 보다 큰 규모의 발현, 정제 및 추가의 특징화를 위해 선택하였다. 25℃ 또는 37℃에서 PBS-T pH 7.1 완충제 중 인간-CD40 단량체의 500 - 3.9 nM (2:1) 일련의 희석물의 결합으로 단백질 A 표면 상에서 항체를 포획함으로써, 정제된 항체를 사용하는 SPR 분석을 수행하였고; 적정 데이터를 1:1 랭뮤어 모델에 피팅하였다. 데이터가 표 12에 제공된다.
표 12
SPR 동역학/친화도 데이터
Figure pct00044
이들 데이터는 선택된 Y12XX 항체가 25℃에서 고친화도 및 KD = 1 E-9 M 범위의 KD 값으로 결합한다는 것을 나타낸다. 결합을 또 다른 항-CD40 항체인 항체 BI-mAb-B (미국 특허 번호 9,090,696, 중쇄 서열 서열식별번호: 32 및 경쇄 서열 서열식별번호: 31; 본원에서 "항체 B" 및 "BI-LALA"로 지칭됨)의 경우와 비교하였다. 표 12에서의 데이터에 의해 제시된 바와 같이, 항체 B는 인간화 Y12XX 분자보다 훨씬 더 낮은 친화도로 CD40에 결합한다.
Y12XX 항체의 모든 3종의 인간화 버전은 CD40L-IZ 삼량체 효능제로 자극된 B 세포 증식의 강력한 길항제였다. 표 13을 참조한다.
표 13
가용성 CD40L 삼량체에 의해 유도된 B 세포 증식의 억제
Figure pct00045
Y12XX-hz28-P238K는 또한 CD40L-발현 CHO 세포로부터의 세포 CD40L로 자극된 B 세포 증식의 강력한 길항제였다. 표 14를 참조한다.
표 14.
CD40L 발현 CHO 세포에 의한 B 세포 증식의 자극의 억제에 대한 효력
Figure pct00046
* 시험된 최고 용량 (1-3 μg/ml)에서의 % 억제
인간화 Y12XX 항체에 대한 데이터를 항체 B의 데이터와 비교하였으며, 이는 가용성 CD40L 신호에 의해 구동된 B 세포 증식의 강력한 억제를 나타냈지만, 세포 CD40L (CD40L을 과다발현하는 CHO 세포)에 의해 구동된 B 세포 증식의 억제에 있어서는 훨씬 덜 효과적이었다. 대조적으로, 인간화 Y12XX 항체는 세포 표면 CD40L 자극의 억제에 대한 효력에서 단지 <10배 이동을 나타내어, CD40L에 대한 B 세포 반응의 보다 강건한 차단을 제공하였다.
인간화 Y12XX 항체를 FcγR에 대한 결합 친화도를 감소시키고 FcγR-매개된 신호전달을 감소시키기 위해 IgG1-P238K 이소형 (CH1-IgG1-P238K; 서열식별번호: 25)으로 포맷화하였다. 이러한 IgG1-P238K 이소형을 갖는 대표적인 인간화 Y12XX 항체 (Y12XX-hz28-IgG1-P238K)에 대한 FcγR 결합을 야생형 IgG1 이소형으로 포맷화된 대조군 항체 (대조군-IgG1)뿐만 아니라 돌연변이 L234A-L235A를 함유하는 IgG1 이소형을 갖는 항체 B의 결합과 비교하였다. 이들 L234A-L235A 돌연변이 또한 FcγR 결합을 감소시키기 위해 도입한 것이다.
단백질 A 센서 칩 표면 상에서 항체를 포획하고, 정제된 His-태그부착된 인간 FcγR을 분석물로서 결합시킴으로써, FcγR 결합 SPR 연구를 수행하였다. hCD64 결합은 10 μM - 1.5 nM hCD64 (2:1 일련의 희석물)의 적정으로 이루어진 반면, 저친화도 FcγR hCD32a-H131, hCD32a-R131, hCD32b, hCD16a-V158 및 hCD16a-F158에 대한 데이터는 10 uM - 13.7 nM FcγR 단백질의 적정으로 이루어졌다.
대조군-IgG1 항체는 시험된 모든 FcγR에 대한 결합을 나타냈다. 도 1A를 참조한다. 야생형과 비교하여, Y12XX-hz28-IgG1-P238K 항체는 hCD64에 대해 125배 더 약한 결합을 나타냈고, 시험된 임의의 저친화도 FcγR hCD32a-H131, hCD32a-R131, hCD32b, hCD16a-V158 및 hCD16a-F158에 대해 검출가능한 결합을 나타내지 않았다. 도 1B를 참조한다. 항체 B는 또한 야생형 IgG1보다 더 약한 hCD64 결합을 나타냈지만, 또한 hCD16a-V158에 대해 주목할 만한 결합 (KD = 7 μM) 및 hCD32a-H131 및 hCD32a-R131에 대해 일부 약한 결합을 나타냈다. 도 1C를 참조한다. KD 값은 도 1D에 제공된다.
Fc 영역에 P238K 돌연변이를 갖는 항체 Y12XX의 인간화 버전을 임의의 효능제 활성에 대해 추가로 시험하였다. 단핵구 유래 미성숙 수지상 세포 (iDC)는 CD40 활성화에 매우 민감하여, CD40 자극 시 시토카인 생산 (IL-6)을 증가시키고 활성화의 표면 마커 (CD86 및 CD54)를 상향조절한다. 따라서, 가장 유망한 인간화 Y12XX 항체를 시험하여 그의 iDC 자극 능력을 평가하였다. CD40을 효능화하는 CD40 항체의 능력은 세포 표면 FcγR에 대한 항체 분자의 Fc 부분의 클러스터링 또는 가교 결합에 의해 증진될 수 있다. 저친화도 FcγR인 CD32a를 고도로 과다발현하는 CHO 세포의 첨가를 사용하여 FcγR 매개된 클러스터링/가교에 대한 잠재력을 평가하였다. CHO 세포 대 iDC의 비는 이들 실험에서 1:6이었으며, 이는 잠재적으로 과장된 수준의 클러스터링/가교를 나타낸다. BMS-986090 및 2141을 양성 대조군으로서 사용하였다. BMS-986090은 IgG4 Fc에 융합된 항-CD40 길항제 도메인 항체이다 (WO 2012/145673에서의 서열식별번호: 1287 참조). 2141 (mAb 134-2141)은 부분 CD40 효능제이다 (문헌 [Robert Vonderheide et al., 2007, J. Clin. Oncol. 25(7): 876-883] 참조). L6-IgG4는 CD40 결합 능력이 없는 융합 단백질이고, 음성 대조군으로서의 역할을 하였다.
도 2에서의 데이터에 의해 예시된 바와 같이, 부분 효능제 2141 또는 BMS-986090의 첨가는 공여자의 하위세트에서 iDC의 약한 활성화만을 유도하였다. 그러나, 2141 또는 BMS-986090에 대한 CD32a-발현 CHO 세포의 첨가는 시험된 거의 모든 공여자에서 IL-6 생산의 강건한 증가 (도 2A) 및 CD86 및 CD54 상향조절 (각각 도 2B 및 도 2C)을 유도하였으며, 이는 이들 분자의 그의 Fc 부분을 통한 FcγR 매개된 클러스터링이 CD40 활성화를 유도한 것과 일치한다. 대조적으로, Y12XX-hz28-P238K 및 Y12XX-hz40-P238K는 단독으로 또는 CD32 의존성 클러스터링과 함께, 6-10명의 공여자로부터의 iDC 세포를 사용하여 음성 대조군에서 관찰된 것보다 높은 iDC 활성화의 어떠한 징후도 나타내지 않았다. Y12XX-hz42-P238K를 4명의 공여자로부터의 세포에서 시험하였으며, 이는 4명의 공여자 중 1명에서만 IL-6 생산 및 CD86 및 CD54 상향조절을 포함한 약한 활성화 징후를 나타냈고, 2141 또는 BMS-986090에서 관찰된 활성과 달리, CD32a-발현 CHO 세포의 첨가에 의존성이 아니었다.
실시예 1 및 2에 대한 물질 및 방법
FcγR 결합 SPR: 비아코어™ 표면 플라즈몬 공명 (SPR)과 같은 방법을 사용하여, 정제된 FcγR을 사용하여 시험관내에서 FcγR 결합을 측정할 수 있다. 하나의 방법은 에탄올아민 차단과 함께 표준 에틸(디메틸아미노프로필) 카르보디이미드 (EDC)/N-히드록시숙신이미드 (NHS) 화학을 사용하여 고정화된 단백질 A를 함유하는 센서 표면 상에서 포획된 항체에 대한 정제된 His-태그부착된 FcγR 단백질 (FcγR-his)의 결합을 시험하는 것이다. 이들 실험을 25℃에서 비아코어™ T200 기기 (지이 헬스케어, 매사추세츠주 말보로) 상에서 수행한다. 예를 들어, 3 μg/ml 농도의 정제된 항체의 샘플을 먼저 10 μl/분 유량으로 15초 (s) 접촉 시간을 사용하여 고정화된 단백질 A 표면 상에서 포획한다. 이어서, 다양한 농도, 예컨대 10 μM - 1.5 nM (2:1 일련의 희석물) 또는 10 μM - 13.7 nM (2:1 일련의 희석물)의 정제된 FcγR-His 단백질을 30 μ/분의 유량으로 120초 회합 및 해리 시간을 사용하여 결합시킨다. 모든 단계를 10 mM NaPO4, 130 mM NaCl, 0.05% p20 (PBS-T) pH 7.1로 이루어진 구동 완충제 중에서 수행한다. 이들 연구에서 시험된 FcγR 단백질은 "고친화도" FcγR CD64 (hFcγRI), 뿐만 아니라 "저친화도" FcγR CD32a-H131 (FcγRIIa-H131), CD32a-R131 (FcγRIIa-R131), CD32b (FcγRIIb), CD16a-V158 (FcγRIIIa-V158) 및 CD16a-F158 (FcγRIIIa-F158)을 포함하며, 이들은 사내 발현 및 정제된 것이다. 비아코어™ T200 평가 소프트웨어를 사용하여, SPR 데이터를 1:1 랭뮤어 모델 또는 1:1 정상 상태 모델에 피팅하여 회합률 상수 (ka), 해리율 상수 (kd) 및 해리 상수 (KD)에 대한 값을 수득한다.
상이한 FcγR에 대한 결합 반응을 비교하기 위해, 하기 식을 사용하여 최대 결합 반응을 이론적 최대 결합 반응의 백분율 (%Rmax)로서 계산함으로써 SPR 데이터를 분석할 수 있다:
식 1: %Rmax = (결합 반응 분석물) / [ ((Mw 분석물) / (Mw 리간드)) x (반응 리간드) x (분석물:리간드 화학량론) ]
여기서 "분석물"은 FcγR이고, "리간드"는 포획된 항체이다. 이러한 분석은 항체 또는 FcγR의 글리코실화의 질량을 고려하지 않고, 포획된 리간드에 대한 100% 분율의 활성을 가정한다. FcγR이 글리코실화되어 있기 때문에, %Rmax 값은 포화 조건 하에 전형적으로 100% 초과이다.
CD40 결합 동역학 및 친화도: 25℃ 또는 37℃에서 비아코어™ T200 기기 (지이 헬스케어 라이프 사이언시스) 상에서 표면 플라즈몬 공명 (SPR)에 의해, 고정화된 단백질 A 센서 칩 표면 상에서 항체를 포획한 다음, 인간-CD40-단량체 단백질 (사내 생성됨)을, 예를 들어 PBS-T, pH 7.1 중 30 μl/분으로 180초의 회합 시간 및 180초 또는 360초의 해리 시간을 사용하여 결합시킴으로써, 항체 분자의 1가 CD40 결합 친화도를 측정한다. 비아코어™ T200 평가 소프트웨어를 사용하여, SPR 데이터를 1:1 랭뮤어 모델에 피팅하여 회합률 상수 (ka), 해리율 상수 (kd) 및 해리 상수 (KD)에 대한 값을 수득한다.
역가 분석: 25℃에서 옥테트® RED 기기 (포르테바이오, 캘리포니아주 프리몬트) 상에서 생물층 간섭측정법 (BLI)을 사용하여 역가 분석을 수행하였다. 단백질 A 센서 팁을 사용하여 120초의 회합 시간을 사용하여 상청액으로부터 항체를 포획하고, 결합 반응을 측정하고, 대조군 항체 샘플을 사용하여 수득된 표준 곡선과 비교하여 상청액 중 항체의 농도를 결정하였다.
1차 세포 단리 및 배양: 헤파린처리된 인간 혈액으로부터 피콜 밀도 구배 분리에 의해 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)를 단리하였다. PBMC로부터 수동 이지셉(EasySep)™ 프로토콜 (스템셀(STEMCELL), 캐나다 밴쿠버)에 따라 단핵구를 단리하였다. 1백만개의 단리된 단핵구를 6-웰 플레이트의 각각의 웰 내 IL-4 (100 ng/ml) 및 GM-CSF (100 ng/ml)를 함유하는 6 mL의 완전 배지 (RPMI-1640, 10% 열-불활성화 태아 소 혈청, 100 유닛/ml 페니실린-스트렙토마이신) 중에 플레이팅하고, 37℃/5% CO2에서 6일 동안 인큐베이션하고, 배지를 격일로 교체하되 동일한 농도의 시토카인을 함유하는 신선한 배지로 교체하였다. iDC (미성숙 수지상 세포)를 제6일에 수거하고, 철저히 세척하고, 완전 배지 중에 재현탁시켰다.
FcγR 클러스터링/가교의 존재 또는 부재 하에 항-CD40 항체를 사용한 iDC의 처리: 다양한 생물학적 작용제의 적정물을 완전 배지에서 제조하고, 이중 96-웰 플레이트에 첨가하였다. 가교의 경우에, 항체를 세포에 30분 동안 첨가한 후, CD32a-발현 CHO 세포를 1:6의 비로 첨가하였다. 세포를 37℃/5% CO2에서 대략 18-20시간 동안 인큐베이션하고, 150 μL의 상청액을 각각의 웰로부터 분리해내고, 1:5로 희석하고, 상업적으로 입수가능한 ELISA 키트 (알앤디 시스템즈(R&D Systems), 미네소타주 미네아폴리스)를 제조업체의 지침에 따라 사용하여 IL-6, TNFα 및 IL-12의 단백질 농도에 대해 평가하였다. 플레이트에 남아있는 수거된 상청액으로부터의 세포를 이중 처리당 1개의 샘플로 합하고, 새로운 96-웰 둥근 바닥 (RB) 플레이트로 옮기고, 4℃에서 두었다. 세포를 D-PBS, Ca++ 및 Mg++ 무함유로 세척하고, 라이브/데드(LIVE/DEAD)® 고정가능한 근적외선 사멸 세포 염색 키트 (인비트로젠(Invitrogen), 캘리포니아주 칼스배드)를 사용하여 세포 생존에 대해 얼음 상에서 30분 동안 염색하였다. 세포를 세척하고, D-PBS, Ca++ 및 Mg++ 무함유, 2% FBS, 0.1% NaN3 (염색 완충제) 중에 재현탁시키고, 염색 완충제 중 5μl/웰의 인간 트루스테인 FcX(TruStain FcX)™ (Fc 수용체 차단 용액, 바이오레전드(Biolegend), 캘리포니아주 샌디에고)로 차단하였다.
DC를 PerCpCy5.5-접합된 αCD3, αCD19, αCD14 (Lin-), BUV395-접합된 αCD11c (비디 바이오사이언시스(BD Biosciences), 캘리포니아주 샌디에고), APC-접합된 αCD86 (바이오레전드, 캘리포니아주 샌디에고), PE-접합된 αCD83 (이바이오사이언스(eBioscience), 캘리포니아주 샌디에고), FITC-접합된 αCD54 (바이오레전드, 캘리포니아주 샌디에고)로 면역염색하고, 4℃에서 45분 동안 인큐베이션하였다. 세포를 염색 완충제 중에서 2회 세척하고, 100 μl의 비디 시토픽스 고정 완충제 (비디 바이오사이언스, 캘리포니아주 샌디에고)를 첨가함으로써 고정시켰다 (실온에서 15, 빛으로부터 보호됨). DC를 LSRII-포르테사 유동 세포측정기 (비디 바이오사이언시스, 캘리포니아주 샌디에고) 및 플로우조 분석 소프트웨어 (트리스타(Treestar), 오레곤주 앳슈랜드)를 사용하여 CD86, ICAM-1 및 CD83 발현에 대해 평가하였다.
CD40L 유도된 인간 B 세포 증식의 억제: 인간 편도 B 세포를 소아과 환자로부터 상용 편도선절제 동안 수득하였으며, 조직을 세절하고 완만히 분쇄하고, 세포를 스크린에 통과시키고, 인간 림포라이트(Lympholyte)®-H 분리 배지 (세달란 랩스(Cedarlane Labs), 온타리온주 벌링톤)를 사용하여 밀도 구배 분리에 의해 단핵 세포를 단리함으로써 단리하였다. 단핵 세포를 계면으로부터 수집하고, 세척하고, 양 적혈구 (SRBC, 콜로라도 세럼 캄파니(Colorado Serum Company); 콜로라도주 덴버)로 4℃에서 1시간 동안 로제팅화한 후, 밀도 구배 분리하여 T 세포를 제거하였다. 세포를 다시 세척하고, 10% FBS를 함유하는 RPMI (완전 배지) 중에 재현탁시켰다. 항체의 적정물을 완전 배지에서 제조하고, 96-웰 둥근 바닥 (RB) 플레이트에 삼중으로 첨가하였다. 1 X 105개의 편도 인간 B 세포를 첨가하고, 가용성 IZ-hCD40L (2 μg/mL), 또는 10,000 rad로 방사선조사된 인간 CD40L로 안정하게 형질감염된 차이니즈 햄스터 난소 세포 (CHO-hCD40L)로 자극하고, 각각의 웰에 2 X 103개 세포/웰로 200 μL의 최종 부피로 플레이팅하였다. 플레이트를 37℃/5% CO2에서 72시간 동안 인큐베이션하고, 마지막 6시간 동안 웰당 0.5 μCi의 3[H]-티미딘으로 표지하고, 수거하고, 액체 섬광에 의해 계수하였다. B 세포 증식을 티미딘 혼입에 기초하여 정량화하였다.
실시예 3: 시험관내 Fc 수용체 검정
항체는 면역 세포 또는 보체 인자의 표면 상의 Fc 감마 수용체 (FcγR)에 대한 Fc 영역의 결합에 의해 이펙터 기능, 예컨대 보체 의존성 세포독성 (CDC) 및 항체 의존성 세포성 세포독성 (ADCC)을 발휘할 수 있다. 항체 의존성 세포성 식세포작용은 또 다른 잠재적 Fc 이펙터 기능이다. 인간화 Y12XX 항체의 특성을 추가로 특징화하기 위해, 항체를 보체 의존성 세포독성 (CDC), 항체 의존성 세포성 식세포작용 (ADCP) 및 항체 의존성 세포성 세포독성 (ADCC)에 대해 검정하였다. 표 15는 본 실시예에서 검정된 항체를 열거한다.
표 15
Figure pct00047
CDC 검정을 하기와 같이 수행하였다. "CDC 검정 배지"는 0.1% BSA (시그마(Sigma)) 및 1% 페니실린-스트렙토마이신 (라이프 테크놀로지스(Life Technologies))이 보충된 L-글루타민 함유, 페놀 레드-무함유 (하이클론(HyClone)) 로스웰 파크 메모리얼 인스티튜트 배지 (RPMI)-1640 (하이클론)을 지칭한다. 50 마이크로리터의 표적 세포 (CDC 검정 배지 중 5 x 105개 세포/mL)를 96-웰 검정 플레이트의 웰에 첨가하였다. 표적 세포는 CD40을 내인성으로 발현하는 Raji 세포였다 (ATCC로부터 입수함). 시험된 각각의 항체에 대해 연속 희석물 (133 내지 0.002 nM)을 제조하고, 각각의 농도 항체 25 마이크로리터를 각각의 웰에 첨가하였다. 25 마이크로리터의 인간 보체 (퀴델(Quidel)로부터 입수함; CDC 검정 배지로 1:3 희석함)를 각각의 웰에 첨가하였다. 검정 플레이트를 가습 인큐베이터 내 37℃에서 4시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 100 마이크로리터의 셀타이터-글로(CellTiter-Glo)® (프로메가(Promega), 위스콘신주 매디슨)를 각각의 웰에 첨가하였다. 이어서, 퍼킨엘머(PerkinElmer) 엔비전(EnVision)® 플레이트 판독기 (퍼킨엘머, 매사추세츠주 월섬)에 의해 발광 데이터를 획득하였다. 이소형 대조군 (100% 생존율) 대비 퍼센트 생존율을 계산하였다. 생성된 값을 항체 농도에 대해 플롯팅하였다. 그래프패드 인크.(GraphPad Inc.)로부터의 프리즘 v5.01 소프트웨어를 사용하여 세포 생존율의 백분율을 각각의 항체에 대해 플롯팅하였다.
CDC 검정을 2회 수행하였다. 제2 검정에서, 새로 해동된 인간 보체 혈청을 사용하였다. 결과가 도 3에 도시된다. 도 3A는 검정의 제1 반복을 도시하고, 도 3B는 검정의 제2 반복을 도시한다. CD20 hIgG1은 양성 대조군이고, 세포독성을 나타냈다. 검정된 항-CD40 항체에 대한 검출가능한 CDC 활성은 존재하지 않았고, 구체적으로 검정된 인간화 Y12XX 항체 중 어떠한 것도 보체-의존성 세포독성을 유도하지 않았다.
ADCP 검정을 하기와 같이 수행하였다. "ADCP 검정 배지"는 10% 초저 IgG FBS (깁코(Gibco))가 보충된 L-글루타민 함유, 페놀 레드-무함유 RPMI-1640 배지 (하이클론)를 지칭한다. 이펙터 세포는 2명의 상이한 건강한 인간 공여자로부터의 신선한 PBMC로부터 정제된 1차 인간 CD14+ 단핵구였다. 표적 세포는 다시 Raji 세포였다. Raji 세포를 2.0 μM PKH26 (적색 형광 염료; 시그마)으로 표지하고, 농도를 ADCP 검정 배지 중 4x106개 세포/mL로 조정하였다. 표지된 표적 세포 (50 μL/웰)를 50 μL/웰의 시험 또는 대조군 항체를 함유하는 V-바닥 96-웰 플레이트에 첨가하고, 얼음 상에서 30분 동안 인큐베이션함으로써, 표지된 표적 세포를 항체로 사전-코팅하였다. 세포를 세척한 다음, 이펙터 세포 (CD14+ 단핵구)를 첨가하여 (100 μL/웰) 1:4의 최종 이펙터 세포-대-표적 세포 비 (E:T) 및 30 nM 내지 0.1 nM 범위의 최종 항체 농도를 생성하였다. 이어서, 플레이트를 가습 37℃ 인큐베이터에 1시간 동안 두었다. 세포를 얼음 상에서 30분 동안 APC-항-CD89 (바이오레전드)로 염색하고, 유동 세포측정기 (비디 칸토(BD Canto)™, 비디 바이오사이언시스, 캘리포니아주 산호세)에 의해 분석하였다. 세포를 CD89+ 세포에 대해 및 후속적으로 염색된 포식된 이펙터 (CD89+, PKH26+)에 대해 게이팅하였다. 식세포작용의 백분율을 총 CD89+ 세포 중 CD89+, PKH26+ 세포의 집단으로서 계산하였다. 이소형 대조군으로부터의 배경 값을 차감하여 식세포작용의 최종 백분율을 얻었다. 플로우조 소프트웨어 및 그래프패드 인크.로부터의 프리즘 v5.01 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석하였다.
2명의 상이한 공여자로부터의 CD14+ 단핵구를 사용한 예시적인 데이터가 도 4에 도시된다. CD20 hIgG1은 양성 대조군이고, 예상된 바와 같이 Raji 세포의 식세포작용을 유도하였다. BMS-986090도 또한 식세포작용을 유도하였다. 대조적으로, 본 개시내용의 인간화 Y12XX 항-CD40 항체를 포함한 시험된 다른 항체 중 어떠한 것도 본 검정에서 검출가능한 식세포작용을 유도하지 않았다.
ADCC 검정을 하기와 같이 수행하였다. "ADCC 검정 배지"는 10% 초저 IgG FBS (깁코) 및 1 mM 피루브산나트륨 (라이프 테크놀로지스)이 보충된 L-글루타민 함유, 페놀 레드-무함유 RPMI-1640 (하이클론)을 지칭한다. 1차 인간 NK (자연 사멸) 세포를 2명의 상이한 사내 공여자로부터의 신선한 PBMC로부터 정제하고, 이펙터 세포로서 사용하였다. 헤파린처리된 전혈 샘플로부터 밀도 구배 원심분리에 의해 PBMC를 정제하고, 2% FBS가 보충된 PBS (하이클론)로 세척하였다. PBMC로부터 자기 비드-기반 분리 키트 (밀테니 바이오텍(Miltenyi Biotec))를 사용하여 음성 선택에 의해 NK 세포를 단리하였다. NK 세포를 활성화시키기 위해, 정제된 NK 세포를 1 μM 히드로코르티손 (스템셀 테크놀로지스(StemCell Technologies)) 및 500 IU/mL 재조합 인간 IL-2 (페프로테크(Peprotech))가 보충된 미엘로컬트(MyeloCult) H5100 배지 (스템셀 테크놀로지스) 중에 1x106개 세포/mL로 재현탁시키고, 37℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 다음 날, 활성화된 NK 이펙터 세포를 ADCC 검정 배지 중에서 2회 세척하고, 농도를 ADCC 검정 배지 중 5x105개 세포/mL로 조정하였다. Raji 세포 (표적 세포)를 하기와 같이 칼세인으로 표지하였다. 칼세인 AM (라이프 테크놀로지스) 시약을, 50 μg의 동결건조 시약을 함유하는 시약 튜브에 20 μL의 초순수 DMSO를 첨가함으로써 제조하였다. 2 μL 부피의 재구성된 칼세인 AM을 현탁된 Raji 세포에 1 mL의 부피마다 첨가하고; 세포를 볼텍싱하고, 가습 37℃ 인큐베이터에 30분 동안 두었다. 인큐베이션 기간 후, 표지된 표적 세포를 ADCC 검정 배지로 3회 세척하고, 농도를 ADCC 검정 배지 중 105개 세포/mL로 조정하였다. 표지된 표적 세포 (50 μL/웰)를 50 μL/웰의 시험 또는 대조군 항체를 함유하는 V-바닥 96-웰 플레이트에 첨가하였다. 이어서, 활성화된 NK 이펙터 세포를 첨가하여 (100 μL/웰) 10:1의 최종 이펙터 세포-대-표적 세포 비 (E:T) 및 0.0002 내지 1 μg/mL 범위의 최종 항체 농도를 생성하였다. 이어서, 플레이트를 가습 37℃ 인큐베이터에 2시간 동안 두었다. 상청액 (50 μL/웰)을 광학 96-웰 흑색 플레이트로 옮기고, 485 nm 여기 및 535 nm 방출 필터로 설정된 엔비전® 플레이트 판독기 (퍼킨엘머, 매사추세츠주 월섬)를 사용하여 형광 강도를 판독함으로써 칼세인 방출을 측정하였다.
항체의 부재 하에 이펙터 세포와 함께 인큐베이션된 표적 세포는 항체-비의존성 용해 (자발적 용해)의 배경에 대한 대조군을 제공한 반면, 20 μL/웰 10% 트윈-20 용해 완충제로 용해된 표적 세포는 검정에서 최대 방출을 나타냈다.
평균 형광 강도 (MFI)에 기초하여 하기 식으로 항체-의존성 세포 용해의 백분율을 계산하였다:
Figure pct00048
그래프패드 인크.로부터의 프리즘 v5.01 소프트웨어를 사용하여 표적 세포 용해의 백분율을 각각의 항체에 대해 플롯팅하였다.
2명의 상이한 공여자로부터의 NK 세포를 사용한 예시적인 데이터가 도 5에 도시된다. 표적 세포를 양성 대조군 항-CD20 항체에 의해 사멸시켰다. 대조적으로, ADCC는 모든 항-CD40 항체에 대해 낮거나 내지는 음성이며, 이는 이들 항체가 Raji 세포의 항체-의존성 세포독성을 유도하지 않는다는 것을 나타내고, 이들 항체의 CD40 길항작용을 입증한다.
요약하면, 본 실시예에서, 본 개시내용의 인간화 Y12XX 항-CD40 항체 및 구체적으로 Y12XX-hz28-P238K, Y12XX-hz40-P238K 및 Y12XX-hz42-P238K가 ADCC (항체-의존성 세포성 세포독성), ADCP (항체-의존성 세포성 식세포작용) 또는 CDC (보체-의존성 세포독성)를 매개하는 잠재력을, 표적으로서 내인성-CD40-발현 Raji 세포를 사용하여 시험하였다. 항-CD20 항체를 양성 대조군으로서 사용하였다. ADCC의 경우, 이펙터 세포로서 NK 세포를 사용하였고, 상이한 공여자로부터의 이펙터 세포로 2가지 실험을 실행하였다. 각각의 경우에, Y12XX-hz28-P238K, Y12XX-hz40-P238K 및 Y12XX-hz42-P238K 중 어떠한 것도 Raji 세포의 용해를 유도하지 않았다. Y12XX-hz28-P238K, Y12XX-hz40-P238K 및 Y12XX-hz42-P238K 중 어떠한 것도 인간 IgG1 이소형 대조군의 효과를 넘어서 Raji 세포의 CDC를 유도하지 않았다. ADCP의 경우, 이펙터 세포로서 CD14+ 단핵구를 이용하였고, 이 시스템에서 Y12XX-hz28-P238K, Y12XX-hz40-P238K 및 Y12XX-hz42-P238K 중 어떠한 것도 세포성 식세포작용을 촉진하지 않았다. 대조적으로, BMS-986090은 세포성 식세포작용을 나타냈다.
실시예 4: NF-kB/AP-1 신호전달의 검정
본 실시예의 목적은 항-CD40 항체로의 자극으로부터 생성된, 라모스-블루™ 세포 (인비보젠(InvivoGen))에 대한 NF-κB/AP-1 유도성 SEAP (분비 배아 알칼리 포스페이트) 활성을 평가하는 것이었다.
라모스-블루™ 세포는 NF-κB/AP-1 유도성 분비 배아 알칼리 포스페이트 (SEAP) 리포터 유전자를 발현하는 인간 B 림프구 리포터 세포주이다. 라모스-블루™ 세포주는 NF-κB/AP1 신호전달을 위해서뿐만 아니라 톨-유사 수용체 (TLR)의 신호전달 경로에서 사용되어 왔으며, 라모스-블루™ 세포는 CD40을 내인성으로 발현하고, CD40 및 TLR에 반응성이다. 라모스-블루™ 세포주가 자극되는 경우에, 이들은 세포 배양 상청액에서 SEAP를 생산한다. SEAP는 퀀티-블루(QUANTI-Blue)™ 검출 배지 (인비보젠, 캘리포니아주 샌디에고)를 사용하여 검출될 수 있다. SEAP의 수준은 가시적으로 또는 620 nm에서 분광광도계를 사용함으로써 관찰될 수 있다. 라모스-블루™ 세포는 CD32 (FcγRII)를 발현하지 않는다.
표 6은 본 실시예에서 검정된 시험 물질 (항체 및 다른 폴리펩티드)을 열거한다. 모든 시험 물질은 BMS에 의해 사내 제조된 것이다.
표 16
Figure pct00049
라모스-블루™ 세포를 인비보젠으로부터 구입하였다. 본 검정을 위해, 라모스-블루™ 세포에 인간 CD32 (FcγRII)를 형질도입함으로써 본원에서 라모스 블루 세포 # 4로 지정된 형질도입된 세포주를 제조하였다. 두 유형의 라모스-블루™ 세포를 라모스 세포 배양 배지 (10% 태아 소 혈청 (FBS), 2mM L-글루타민, 페니실린 및 스트렙토마이신 (100 U/mL, 100 ug/mL), 100 ug/mL의 노르모신 및 선택 약물로서의 제오신 (100 ug/mL)이 보충된 이스코브 변형 둘베코 배지 (IMDM))에서 배양하였다. 세포를 5% CO2 하에 37℃에서 배양하였다. 두 유형의 세포를 3일마다 계대시키고, 0.5 x 106개 세포/ml의 세포 밀도로 유지하였다. 세포를 세포 계대 # 21 (P21)까지 사용하였다. P21 후, 세포를 폐기하였다.
검정을 하기와 같이 수행하였다. "AIM V™ 배지"는 L-글루타민, 50 μg/mL 스트렙토마이신 술페이트, 10 μg/mL 겐타미신 술페이트가 보충된 무혈청 배지를 지칭한다 (써모 피셔 사이언티픽). 라모스 블루 세포 #4에서 NF-kB/AP-1 활성에 대한 CD40 길항제 항체에 의한 CD40 효능제 활성을 평가하기 위해, 세포를 항생제 노르모신/제오신이 없는 AIM V™ 배지로 2회 (2x) 세척하였다. 이어서, 세포를 실온에서 2,000 rpm으로 10분 동안 원심분리하였다. 세포 펠릿을 파괴하지 않도록 조심스럽게 배지를 흡인하였다. 1 mL의 AIM V™를 세포 펠릿에 첨가하여 세포 펠릿을 재현탁시키고, 재현탁 후 추가의 9 ml의 AIM V™를 첨가하였다. 20 마이크로리터 (μl) 비아스테인(ViaStain)™ AOPI (아크리딘 오렌지 / 프로피듐 아이오다이드) 염색 용액 (넥스셀롬 바이오사이언스, 엘엘씨(Nexcelom Bioscience, LLC), 매사추세츠주 로렌스) 및 20 μl의 라모스-블루™ 세포 현탁액을 첨가함으로써 세포 계수기를 사용하여 세포를 계수하였다.
라모스-블루™ 세포를 AIM V™ 무혈청 배지 중 4x106개 세포/mL로 조정하였다. 100 μl의 400K 라모스-블루™ 세포를 편평 바닥 조직 배양 플레이트에 웰마다 첨가하였다. 이어서, 100 μl의 BMS-986325, BMS-986090, mAb134-2141 (CD40-2142) 또는 대조군을 각각의 상응하는 웰에 첨가하였다. CD40L-IZ를 양성 대조군으로서 사용하였다. AIM V™ 중 라모스-블루™ 세포 (0.4 x 106개 세포/웰)를 검정을 위한 음성 대조군으로서 포함시켰다. 최종 부피는 200 μl/웰이었다.
플레이트를 5% CO2 인큐베이터 내 37℃에서 20시간 동안 인큐베이션하였다. 20시간의 세포 배양 후, 플레이트를 2000 rpm으로 10분 동안 원심분리하였다.
자극된 라모스 세포로부터의 세포 배양 상청액 40 μl를 편평 바닥 플레이트의 웰에 첨가하였다. 이어서, 웰당 160 μl의 퀀티-블루™ 용액을 첨가하였다. 최종 부피는 200 μl/웰이었다.
플레이트를 5% CO2 인큐베이터 내 37℃에서 1 내지 6시간 동안 인큐베이션하였다. SEAP 수준을 엔비전® 광학 판독기를 사용하여 620 nm에서 60분마다 측정하였다 (OD: 620 nm).
예시적인 데이터가 도 6에 도시된다. 본 실시예에서, 항-CD40 모노클로날 항체를 CD32가 결여된 라모스-블루™ 세포 또는 CD32로 형질도입된 라모스-블루™ 세포 (라모스 블루 # 4)에 대해, 항-CD40 항체로의 자극 시 라모스-블루™ 세포에 대한 NFκ-B/AP-1 유도성 SEAP 활성을 평가함으로써 시험하였다.
CD40-2142의 첨가는 본 검정에서 유의한 신호전달 반응을 유도하였다 (도 6A 및 6B). 이들 결과는 CD40-2142가 본 검정 시스템에서 완전 효능제라는 것을 나타낸다. BMS-986090의 첨가는 라모스-블루™ 세포 (-CD32)를 사용하였을 때 반응을 나타내지 않았지만 (도 6A), 라모스 블루 세포 # 4 (CD32로 형질도입된 라모스-블루™ 세포)를 사용한 검정에서는 부분 효능작용을 나타냈다 (도 6B). 이러한 결과는 FcγR 의존성이 BMS-986090의 첨가에 의해 유도된 효능작용 반응을 매개한다는 것을 나타낸다. 대조군 폴리펩티드인 삼량체 CD40L-IZ는 도 6C 및 6D에 반영된 바와 같이 두 검정에서 반응을 유도하였다.
대조적으로, BMS-986325의 첨가는 라모스-블루™ 세포 (CD32-) (도 6A) 또는 라모스 # 4 (CD32+) (도 6B)를 사용하였을 때 유의한 NFκ-B/AP-1 반응을 유도하지 않았다. 이들 데이터는 BMS-986325가 CD40을 효능화하지 않았고 CD32 (FcγRII)에 결속하지 않았다는 것을 나타낸다. 이들 데이터는 저친화도 FcγR, 예컨대 CD32 (FcγRII)의 감소된 결속이 바람직하지 않은 효능제 신호전달 및 바람직하지 않은 독성에 대한 잠재력의 가능성을 감소시킨다는 것을 지지한다.
실시예 7: BMS-986325의 비-임상 약동학 평가의 요약
BMS-986325 (Y12XX-hz28-P238K)의 약동학 (PK)을 마우스 및 시노몰구스 원숭이에서 평가하였다. BMS-986325는 뮤린 CD40 수용체에 교차 반응하지 않기 때문에, 마우스에서 평가된 PK는 고유 또는 비-특이적 PK이다. BMS-986325는 원숭이 CD40 수용체와 교차 반응하므로, 따라서 원숭이에서 총 PK (특이적 및 비-특이적 PK)를 평가하였다. 마우스에 대한 BMS-986325 (단일 1- 및 10-mg/kg 용량)의 정맥내 (IV) 투여 후, BMS-986325는 0.5 내지 1.02 mL/d/kg의 낮은 총 혈청 클리어런스 "CLT", 0.12 내지 0.19 L/kg의 제한된 정상 상태에서의 분포 부피 "Vss", 및 118 내지 183시간 (~5 내지 8일)의 긴 겉보기 제거 반감기 "T-HALF"를 나타냈다.
원숭이에, 단일 피하 (SC) 용량의 BMS-986325를 투여하였다. 투여되는 용량은 특이적 클리어런스 (표적-매개된 약물 배치 "TMDD")가 포화되지 않는 용량이다. 단일 SC 용량 후, BMS-986325는 (동일한 IV 용량에서의 노출에 비해) 70.4%의 절대 생체이용률로 잘 흡수되었다. 원숭이에 대한 BMS-986325 (10 mg/kg 단일 용량)의 IV 투여 후, BMS-986325는 0.41 mL/d/kg의 CLT, 0.05 L/kg의 제한된 Vss 및 100시간 (~4일)의 T-HALF를 나타냈다. 원숭이에 대한 BMS-986325의 단일 SC 용량 투여 (1, 10 및 100 mg/kg의 용량 투여) 후 최대 혈장 농도까지의 시간 "Tmax"은 24 내지 54시간이었다. 노출 (최대 농도 "Cmax" 및 제0 시점으로부터 무한대까지 외삽된 농도 대 시간 곡선하 면적 "AUC[INF]")의 용량-비례 증가를 초과하는 증가, 및 용량에 따른 T-HALF의 증가 (각각 1, 10 및 100 mg/kg에서 ~31, ~119 및 ~197시간)가 존재하였다. 이들 데이터는 비선형 PK 및 포화가능한 클리어런스 메카니즘을 시사하고; 이는 TMDD를 반영하는 표적 (CD40)-매개된 클리어런스로부터 생성될 가능성이 있다. 본 단일-용량 PK 연구에서, 항-약물 항체 (ADA) 형성이 원숭이의 ~50%에서 검출되었지만, 전체 PK 파라미터에 대해 분명한 영향을 미치지는 않았다.
약동학/약역학 모델링 (준 정상-상태 가정 하의 TMDD 모델 [TMDD-Qss])을 사용하여 원숭이에서 관찰된 비선형 PK를 설명하고, 혈청 약물 노출과 CD40 수용체 점유율 (RO) 및 후속 인간 용량 추정치 사이의 관계를 확립하였다.
본 실시양태는 상기 실시예를 참조하여 상세히 기재되었지만, 이들 실시양태의 취지로부터 벗어나지 않으면서 다양한 변형이 이루어질 수 있고, 이는 통상의 기술자에게 용이하게 알려질 것이라고 이해된다.
본원에 열거된 예시적인 구체적 치료 방법, 의약 및 용도를 포함한 본원에 개시된 이들 및 다른 측면은 본원에 함유된 교시로부터 분명할 것이다.
SEQUENCE LISTING <110> BRISTOL-MEYERS SQUIBB COMPANY <120> ANTAGONISTIC CD40 MONOCLONAL ANTIBODIES AND USES THEREOF <130> 200896-0015-00-WO-592417 <140> <141> <150> 62/769,514 <151> 2018-11-19 <160> 120 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: VH-CDR1" <400> 1 Ser Tyr Trp Met His 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: VH-CDR2" <400> 2 Gln Ile Asn Pro Thr Thr Gly Arg Ser Gln Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Thr <210> 3 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: VH-CDR3" <400> 3 Trp Gly Leu Gln Pro Phe Ala Tyr 1 5 <210> 4 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Vh-hz14" <400> 4 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gln Ile Asn Pro Thr Thr Gly Arg Ser Gln Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Thr Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Gly Leu Gln Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 5 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: HC_Y12XX-hz28-CH1-IgG1-P238K (is IgG1 without C-terminal lysine)" <400> 5 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gln Ile Asn Pro Thr Thr Gly Arg Ser Gln Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Thr Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Gly Leu Gln Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Lys Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 6 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: HC_Y12XX-hz28-CH1-IgG1-P238K (is IgG1 with C-terminal lysine)" <400> 6 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gln Ile Asn Pro Thr Thr Gly Arg Ser Gln Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Thr Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Gly Leu Gln Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Lys Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 7 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: VL-CDR1" <400> 7 Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 8 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: VL-CDR2" <400> 8 Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr 1 5 <210> 9 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: VL-CDR3" <400> 9 Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp Thr 1 5 <210> 10 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Vk-hz2" <400> 10 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 11 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: LC_ Y12XX-hz28" <400> 11 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 12 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: VH-CDR2 (Vh-hz12)" <400> 12 Gln Ile Asn Pro Ser Gln Gly Arg Ser Gln Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Thr <210> 13 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Vh-hz12" <400> 13 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gln Ile Asn Pro Ser Gln Gly Arg Ser Gln Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Thr Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Gly Leu Gln Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 14 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: HC_Y12XX-hz40-P238K -IgG1a without C-terminal lysine" <400> 14 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gln Ile Asn Pro Ser Gln Gly Arg Ser Gln Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Thr Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Gly Leu Gln Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Lys Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 15 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: HC_Y12XX-hz40-P238K -IgG1a with C-terminal lysine" <400> 15 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gln Ile Asn Pro Ser Gln Gly Arg Ser Gln Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Thr Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Gly Leu Gln Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Lys Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 16 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Vk-hz3" <400> 16 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 17 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: LC_ Y12XX-hz40" <400> 17 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 18 <211> 98 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: heavy chain CH1=amino acids 118-215 of SEQ ID NO: 5" <400> 18 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val <210> 19 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: light chain CL = amino acids 108-214 of SEQ ID NO: 11" <400> 19 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 1 5 10 15 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 20 25 30 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 65 70 75 80 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 85 90 95 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 100 105 <210> 20 <211> 277 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Met Val Arg Leu Pro Leu Gln Cys Val Leu Trp Gly Cys Leu Leu Thr 1 5 10 15 Ala Val His Pro Glu Pro Pro Thr Ala Cys Arg Glu Lys Gln Tyr Leu 20 25 30 Ile Asn Ser Gln Cys Cys Ser Leu Cys Gln Pro Gly Gln Lys Leu Val 35 40 45 Ser Asp Cys Thr Glu Phe Thr Glu Thr Glu Cys Leu Pro Cys Gly Glu 50 55 60 Ser Glu Phe Leu Asp Thr Trp Asn Arg Glu Thr His Cys His Gln His 65 70 75 80 Lys Tyr Cys Asp Pro Asn Leu Gly Leu Arg Val Gln Gln Lys Gly Thr 85 90 95 Ser Glu Thr Asp Thr Ile Cys Thr Cys Glu Glu Gly Trp His Cys Thr 100 105 110 Ser Glu Ala Cys Glu Ser Cys Val Leu His Arg Ser Cys Ser Pro Gly 115 120 125 Phe Gly Val Lys Gln Ile Ala Thr Gly Val Ser Asp Thr Ile Cys Glu 130 135 140 Pro Cys Pro Val Gly Phe Phe Ser Asn Val Ser Ser Ala Phe Glu Lys 145 150 155 160 Cys His Pro Trp Thr Ser Cys Glu Thr Lys Asp Leu Val Val Gln Gln 165 170 175 Ala Gly Thr Asn Lys Thr Asp Val Val Cys Gly Pro Gln Asp Arg Leu 180 185 190 Arg Ala Leu Val Val Ile Pro Ile Ile Phe Gly Ile Leu Phe Ala Ile 195 200 205 Leu Leu Val Leu Val Phe Ile Lys Lys Val Ala Lys Lys Pro Thr Asn 210 215 220 Lys Ala Pro His Pro Lys Gln Glu Pro Gln Glu Ile Asn Phe Pro Asp 225 230 235 240 Asp Leu Pro Gly Ser Asn Thr Ala Ala Pro Val Gln Glu Thr Leu His 245 250 255 Gly Cys Gln Pro Val Thr Gln Glu Asp Gly Lys Glu Ser Arg Ile Ser 260 265 270 Val Gln Glu Arg Gln 275 <210> 21 <211> 232 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Fc consensus" <220> <221> VARIANT <222> (23)..(23) <223> /replace="Lys" <220> <221> VARIANT <222> (82)..(82) <223> /replace="Ala" <220> <221> VARIANT <222> (141)..(141) <223> /replace="Glu" <220> <221> VARIANT <222> (143)..(143) <223> /replace="Met" <220> <221> VARIANT <222> (232)..(232) <223> /replace=" " <220> <221> SITE <222> (1)..(232) <223> /note="Variant residues given in the sequence have no preference with respect to those in the annotations for variant positions" <400> 21 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 20 25 30 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 35 40 45 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 50 55 60 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 65 70 75 80 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 85 90 95 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 100 105 110 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 115 120 125 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 130 135 140 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 145 150 155 160 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 165 170 175 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 180 185 190 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 195 200 205 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 210 215 220 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 225 230 <210> 22 <211> 231 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: IgG1-P238K(-C-term Lys)" <400> 22 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Lys Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 20 25 30 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 35 40 45 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 50 55 60 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 65 70 75 80 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 85 90 95 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 100 105 110 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 115 120 125 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 130 135 140 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 145 150 155 160 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 165 170 175 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 180 185 190 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 195 200 205 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 210 215 220 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 225 230 <210> 23 <211> 232 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: IgG1-P238K" <400> 23 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Lys Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 20 25 30 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 35 40 45 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 50 55 60 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 65 70 75 80 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 85 90 95 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 100 105 110 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 115 120 125 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 130 135 140 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 145 150 155 160 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 165 170 175 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 180 185 190 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 195 200 205 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 210 215 220 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 225 230 <210> 24 <211> 329 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: CH1-IgG1-P238K(-C-term Lys)" <400> 24 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Lys Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 325 <210> 25 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: CH1-IgG1-P238K" <400> 25 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Lys Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 26 <211> 231 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: IgG1f-P238K(-C-term Lys)" <400> 26 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Lys Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 20 25 30 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 35 40 45 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 50 55 60 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 65 70 75 80 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 85 90 95 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 100 105 110 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 115 120 125 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr 130 135 140 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 145 150 155 160 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 165 170 175 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 180 185 190 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 195 200 205 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 210 215 220 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 225 230 <210> 27 <211> 232 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: IgG1f-P238K" <400> 27 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Lys Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 20 25 30 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 35 40 45 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 50 55 60 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 65 70 75 80 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 85 90 95 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 100 105 110 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 115 120 125 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr 130 135 140 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 145 150 155 160 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 165 170 175 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 180 185 190 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 195 200 205 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 210 215 220 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 225 230 <210> 28 <211> 329 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: CH1-IgG1f-P238K(-C-term Lys)" <400> 28 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Lys Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 325 <210> 29 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: CH1-IgG1f-P238K" <400> 29 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Lys Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 30 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: HC_Y12XX-hz28-CH1-IgG1f-P238K- no terminal lysine)" <400> 30 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gln Ile Asn Pro Thr Thr Gly Arg Ser Gln Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Thr Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Gly Leu Gln Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Lys Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 <210> 31 <211> 447 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: HC_Y12XX-hz28-CH1-IgG1f-P238K- with terminal lysine)" <400> 31 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gln Ile Asn Pro Thr Thr Gly Arg Ser Gln Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Thr Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Gly Leu Gln Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190 Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His 210 215 220 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Lys Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 32 <211> 231 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: IgG1-N297A(-C-term Lys)" <400> 32 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 20 25 30 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 35 40 45 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 50 55 60 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 65 70 75 80 Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 85 90 95 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 100 105 110 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 115 120 125 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 130 135 140 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 145 150 155 160 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 165 170 175 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 180 185 190 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 195 200 205 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 210 215 220 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 225 230 <210> 33 <211> 232 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: IgG1-N297A" <400> 33 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 20 25 30 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 35 40 45 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 50 55 60 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 65 70 75 80 Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 85 90 95 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 100 105 110 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 115 120 125 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 130 135 140 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 145 150 155 160 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 165 170 175 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 180 185 190 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 195 200 205 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 210 215 220 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 225 230 <210> 34 <211> 329 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: CH1-IgG1-N297A(-C-term Lys)" <400> 34 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 325 <210> 35 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: CH1-IgG1-N297A" <400> 35 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 225 230 235 240 Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 36 <211> 231 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: IgG1f-N297A(-C-term Lys)" <400> 36 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 20 25 30 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 35 40 45 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 50 55 60 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 65 70 75 80 Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 85 90 95 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 100 105 110 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 115 120 125 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr 130 135 140 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 145 150 155 160 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 165 170 175 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 180 185 190 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 195 200 205 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 210 215 220 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 225 230 <210> 37 <211> 232 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: IgG1f-N297A" <400> 37 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 20 25 30 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 35 40 45 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 50 55 60 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 65 70 75 80 Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 85 90 95 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 100 105 110 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 115 120 125 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr 130 135 140 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 145 150 155 160 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 165 170 175 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 180 185 190 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 195 200 205 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 210 215 220 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 225 230 <210> 38 <211> 329 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: CH1-IgG1f-N297A(-C-term Lys)" <400> 38 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 325 <210> 39 <211> 330 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: CH1-IgG1f-N297A" <400> 39 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 40 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Linker" <400> 40 Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 41 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Linker" <400> 41 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 <210> 42 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Linker" <400> 42 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 43 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Linker" <400> 43 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser 20 <210> 44 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Linker" <400> 44 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 20 25 <210> 45 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Linker" <400> 45 Ala Ser Thr 1 <210> 46 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Linker" <400> 46 Thr Val Ala Ala Pro Ser 1 5 <210> 47 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Linker" <400> 47 Thr Val Ala 1 <210> 48 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Linker" <400> 48 Ala Ser Thr Ser Gly Pro Ser 1 5 <210> 49 <211> 1392 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: representative nucleic acid sequence encoding the Y12XX heavy chain variable domain of Y12XX-hz28 including a constant region CH1 and Fc domain IgG1-P238K" <400> 49 atgagggctt ggatcttctt tctgctctgc ctggccggga gagcgctcgc acaggtgcag 60 ctggtgcagt ctggtgccga ggtcaaaaag ccaggctcca gcgtgaaggt gagctgcaag 120 gcctctggct acgctttcac ctcttattgg atgcactggg tgagacaggc tcctggacag 180 ggcctggagt ggatgggcca gatcaaccca accaccggca gaagccagta caatgagaag 240 tttaagaccc gcgtgaccat cacagccgac aagtccacca gcacagctta tatggagctg 300 tcttccctga ggtccgagga tacagccgtg tactattgcg ctcggtgggg cctgcagcct 360 ttcgcttact ggggccaggg caccctggtg acagtgagct ctgctagcac caagggccca 420 tcggtcttcc ccctggcacc ctcctccaag agcacctctg ggggcacagc ggccctgggc 480 tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg gtgacggtgt cgtggaactc aggcgccctg 540 accagcggcg tgcacacctt cccggccgtc ctacagtcct caggactcta ctccctcagc 600 agcgtggtga ccgtgccctc cagcagcttg ggcacccaga cctacatctg caacgtgaat 660 cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag agagttgagc ccaaatcttg tgacaaaact 720 cacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa ctcctggggg gaaagtcagt cttcctcttc 780 cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg 840 gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag 900 gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc 960 agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc 1020 tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc 1080 cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggatg agctgaccaa gaaccaggtc 1140 agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 1200 aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc 1260 ttcttcctct acagcaagct caccgtggac aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc 1320 tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg 1380 tctccgggtt ga 1392 <210> 50 <211> 696 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: representative nucleic acid sequence encoding the Y12XX light chain variable domain of Y12XX-hz28 including a constant region CL" <400> 50 atgagggctt ggatcttctt tctgctctgc ctggccgggc gcgccttggc cgacatccag 60 atgacccagt ccccctcctt cctgtctgcc tccgtgggcg acagagtgac catcacctgt 120 aaggcttccc aggatgtgag cacagccgtg gcttggtacc agcagaagcc aggcaaggcc 180 cccaagctgc tgatctattc cgcctcttac aggtataccg gcgtgccctc tcggttctcc 240 ggcagcggct ctggcacaga ctttaccctg acaatctcca gcctgcagcc tgaggatttc 300 gccacctact attgccagca gcactactcc accccatgga catttggcgg cggcaccaag 360 gtggagatca agcgtacggt ggctgcacca tctgtcttca tcttcccgcc atctgatgag 420 cagttgaaat ctggaactgc ctctgttgtg tgcctgctga ataacttcta tcccagagag 480 gccaaagtac agtggaaggt ggataacgcc ctccaatcgg gtaactccca ggagagtgtc 540 acagagcagg acagcaagga cagcacctac agcctcagca gcaccctgac gctgagcaaa 600 gcagactacg agaaacacaa agtctacgcc tgcgaagtca cccatcaggg cctgagctcg 660 cccgtcacaa agagcttcaa caggggagag tgttag 696 <210> 51 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: signal peptide" <400> 51 Met Arg Ala Trp Ile Phe Phe Leu Leu Cys Leu Ala Gly Arg Ala Leu 1 5 10 15 Ala <210> 52 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: coding sequence for signal peptide" <400> 52 atgagggctt ggatcttctt tctgctctgc ctggccggga gagcgctcgc a 51 <210> 53 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1060.ZZ0-1-Vh" <400> 53 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Pro Asp Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Asn Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Gln Pro Leu Gly Tyr Cys Thr Asn Gly Val Cys Ser Tyr 100 105 110 Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 54 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1072.ZZ0-1-Vh" <400> 54 Gln Val Gln Phe Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Gln Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Ser Arg Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Leu Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Ile Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Asn Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Phe Ser Leu Tyr Asp Gly Tyr Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 55 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1234.ZZ0-1-Vh" <400> 55 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Asn Ser Gly Val Gly Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Gly Asn Tyr Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 56 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1236.ZZ0-1-Vh" <400> 56 Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Gly Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 57 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1238.ZZ0-1-Vh" <400> 57 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Leu Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Val Ile Asn Pro Gly Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Gln Leu Gly Arg Arg Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 58 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1241.ZZ0-1-Vh" <400> 58 Glu Phe Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Ile Ile Gln Trp Val Lys Lys Gln Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Ser Ser Glu Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Leu Ile Gly Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 59 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1242.ZZ0-1-Vh" <400> 59 Glu Phe Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Val Met His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Ala Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Asn Asp Gly Ser Glu Tyr Asn Glu Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Ala Pro Tyr Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 60 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1249.ZZ0-1-Vh" <400> 60 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Thr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asp Pro Ser Ser His Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Thr Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Tyr Arg Tyr Ala Tyr Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala 100 105 110 Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 61 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1256.ZZ0-1-Vh" <400> 61 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Thr Thr Gly Tyr Ser Ala Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Thr Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ser Arg Trp Gly Leu Pro Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 62 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1257.ZZ0-1-Vh" <400> 62 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Thr Thr Gly Tyr Ser Ala Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Ala Lys Thr Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Thr Ser Leu Thr Phe Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ser Arg Trp Gly Leu Pro Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 63 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1258.ZZ0-1-Vh" <400> 63 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Asn Pro Thr Thr Gly Tyr Ser Glu Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Gly Leu Pro Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 64 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1259.ZZ0-1-Vh" <400> 64 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Asn Pro Thr Thr Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Ser Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ser Arg Trp Gly Leu Pro Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 65 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1260.ZZ0-1-Vh" <400> 65 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Thr Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Ser Ile Asn Pro Ser Thr Gly Tyr Thr Glu Asp Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Gly Leu Pro Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 66 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1261.ZZ0-1-Vh" <400> 66 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Arg Ala Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Asn Pro Asn Thr Gly His Thr Asp Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ser Arg Trp Gly Leu Pro Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 67 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1262.ZZ0-1-Vh" <400> 67 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Thr Thr Gly Tyr Ser Ala Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Asp Pro Arg Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 68 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1263.ZZ0-1-Vh" <400> 68 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly Thr 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Val His Trp Val Lys Glu Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly His Thr Asn Pro Asn Thr Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Asp Pro Arg Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 69 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1264.ZZ0-1-Vh" <400> 69 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Ser Ile Asn Pro Gly Asn Ser Asp Ala Phe Tyr Asn Gln Gln Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Lys Leu Thr Ala Val Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Asn Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Trp Gly Leu Pro Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 70 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1265.ZZ0-1-Vh" <400> 70 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Val Leu Ala Gly Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Asp Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Thr Ile Asn Pro Gly Lys Gly Asp Ser Asn Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Lys Leu Thr Ala Val Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Asn Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Trp Gly Leu Pro Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 71 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1266.ZZ0-1-Vh" <400> 71 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Asn Pro Ser Asn Gly Arg Thr Gln Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Met Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Ile Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Gly Leu Gln Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 72 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1267.ZZ0-1-Vh" <400> 72 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Asn Pro Ser Asn Gly Arg Thr Gln Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Met Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Ile Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Gly Leu Gln Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 73 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1268.ZZ0-1-Vh" <400> 73 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Asn Pro Ser Asn Gly Arg Ser Gln Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Thr Met Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Ile Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Gly Leu Gln Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 74 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1269.ZZ0-1-Vh" <400> 74 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Pro Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Thr Val His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Ser Ser Tyr Thr Ser Tyr Asp Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Val Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Thr Met Tyr Trp Tyr Phe Asp Ile Trp Gly Ala Gly Thr 100 105 110 Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 75 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1297.ZZ0-1-Vh" <400> 75 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Asn Phe 50 55 60 Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Thr Tyr Tyr Tyr Gly Ser Arg Phe Pro Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 115 120 <210> 76 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1060.ZZ0-1-Vk" <400> 76 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Tyr Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Thr Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ile Phe Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 77 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1072.ZZ0-1-Vk" <400> 77 Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Arg 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Phe Cys Ser Gln Ser 85 90 95 Thr His Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 78 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1234.ZZ0-1-Vk" <400> 78 Asp Ile Leu Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Ser 20 25 30 Ile His Trp Tyr Gln Gln Arg Thr Ile Gly Ser Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Ser 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile Asn Ser Trp Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 79 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1236.ZZ0-1-Vk" <400> 79 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Ile Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Arg Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile 35 40 45 Tyr Leu Ala Ser Asn Arg His Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala 65 70 75 80 Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 80 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1238.ZZ0-1-Vk" <400> 80 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Arg Thr Gly 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Asn Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Pro Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 81 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1241.ZZ0-1-Vk" <400> 81 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 82 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1242.ZZ0-1-Vk" <400> 82 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 83 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1249.ZZ0-1-Vk" <400> 83 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 84 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1256.ZZ0-1-Vk" <400> 84 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 85 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1257.ZZ0-1-Vk" <400> 85 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 86 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1258.ZZ0-1-Vk" <400> 86 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 87 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1259.ZZ0-1-Vk" <400> 87 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 88 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1260.ZZ0-1-Vk" <400> 88 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 89 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1261.ZZ0-1-Vk" <400> 89 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 90 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1262.ZZ0-1-Vk" <400> 90 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 91 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1263.ZZ0-1-Vk" <400> 91 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 92 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1264.ZZ0-1-Vk" <400> 92 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 93 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1265.ZZ0-1-Vk" <400> 93 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 94 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1266.ZZ0-1-Vk" <400> 94 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 95 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1267.ZZ0-1-Vk" <400> 95 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln His Tyr Thr Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 96 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1268.ZZ0-1-Vk" <400> 96 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 97 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1269.ZZ0-1-Vk" <400> 97 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Pro Asn 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Thr Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 98 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: ADX_Y1297.ZZ0-1-Vk" <400> 98 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Arg Ile Asn 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Thr Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 99 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Vh-C1" <400> 99 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Asn Pro Thr Thr Gly Tyr Ser Glu Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Gly Leu Pro Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 100 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Vh-hz1" <400> 100 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Phe Ile Asn Pro Thr Thr Gly Tyr Ser Glu Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Gly Leu Pro Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 101 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Vh-hz2" <400> 101 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Phe Ile Asn Pro Thr Thr Gly Tyr Ser Glu Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Gly Leu Pro Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 102 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Vh-hz3" <400> 102 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Asn Pro Thr Thr Gly Tyr Ser Glu Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Gly Leu Pro Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 103 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Vh-C2" <400> 103 Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Thr Thr Gly Tyr Ser Ala Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Asp Pro Arg Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 104 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Vh-hz4" <400> 104 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Thr Thr Gly Tyr Ser Ala Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Asp Pro Arg Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 105 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Vh-hz5" <400> 105 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Thr Thr Gly Tyr Ser Ala Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Asp Pro Arg Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 106 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Vh-hz6" <400> 106 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Thr Thr Gly Tyr Ser Ala Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Asp Pro Arg Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 107 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Vh-hz7" <400> 107 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Thr Thr Gly Tyr Ser Ala Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Gln Pro Arg Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 108 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Vh-hz8" <400> 108 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Tyr Ile Asn Pro Thr Thr Gly Tyr Ser Ala Tyr Asn Gln Lys Phe 50 55 60 Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Asp Ala Arg Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 109 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Vh-C3" <400> 109 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Asn Pro Ser Asn Gly Arg Ser Gln Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Thr Met Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Ile Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Gly Leu Gln Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 110 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Vh-hz9" <400> 110 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gln Ile Asn Pro Ser Asn Gly Arg Ser Gln Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Thr Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Gly Leu Gln Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 111 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Vh-hz10" <400> 111 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gln Ile Asn Pro Ser Asn Gly Arg Ser Gln Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Thr Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Gly Leu Gln Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 112 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Vh-hz11" <400> 112 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Asn Pro Ser Asn Gly Arg Ser Gln Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Thr Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Gly Leu Gln Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 113 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Vh-hz13" <400> 113 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gln Ile Asn Pro Ser Asn Ala Arg Ser Gln Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Thr Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Gly Leu Gln Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 114 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Vk-C1" <400> 114 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 115 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Vk-C2" <400> 115 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 116 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Vk-hz1" <400> 116 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 117 <211> 330 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 117 Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 1 5 10 15 Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45 Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60 Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95 Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 115 120 125 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 130 135 140 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 145 150 155 160 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 165 170 175 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 180 185 190 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 195 200 205 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 210 215 220 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 225 230 235 240 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 245 250 255 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 260 265 270 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 275 280 285 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 290 295 300 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 305 310 315 320 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 330 <210> 118 <211> 232 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Fc consensus" <220> <221> VARIANT <222> (23)..(23) <223> /replace="Ser" or "Ala" or "Arg" or "Trp" <220> <221> VARIANT <222> (141)..(141) <223> /replace="Glu" <220> <221> VARIANT <222> (143)..(143) <223> /replace="Met" <220> <221> VARIANT <222> (232)..(232) <223> /replace=" " <220> <221> SITE <222> (1)..(232) <223> /note="Variant residues given in the sequence have no preference with respect to those in the annotations for variant positions" <400> 118 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Leu Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 20 25 30 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 35 40 45 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 50 55 60 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 65 70 75 80 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 85 90 95 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 100 105 110 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 115 120 125 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 130 135 140 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 145 150 155 160 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 165 170 175 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 180 185 190 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 195 200 205 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 210 215 220 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 225 230 <210> 119 <211> 232 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Fc consensus" <220> <221> VARIANT <222> (141)..(141) <223> /replace="Glu" <220> <221> VARIANT <222> (143)..(143) <223> /replace="Met" <220> <221> VARIANT <222> (232)..(232) <223> /replace=" " <220> <221> SITE <222> (1)..(232) <223> /note="Variant residues given in the sequence have no preference with respect to those in the annotations for variant positions" <400> 119 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 20 25 30 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 35 40 45 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 50 55 60 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 65 70 75 80 Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 85 90 95 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 100 105 110 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 115 120 125 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 130 135 140 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 145 150 155 160 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 165 170 175 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 180 185 190 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 195 200 205 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 210 215 220 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 225 230 <210> 120 <211> 232 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Synthetic polypeptide: Fc consensus" <220> <221> VARIANT <222> (23)..(23) <223> /replace="Ser" or "Ala" or "Arg" or "Trp" <220> <221> VARIANT <222> (82)..(82) <223> /replace="Ala" <220> <221> VARIANT <222> (141)..(141) <223> /replace="Glu" <220> <221> VARIANT <222> (143)..(143) <223> /replace="Met" <220> <221> VARIANT <222> (232)..(232) <223> /replace=" " <220> <221> SITE <222> (1)..(232) <223> /note="Variant residues given in the sequence have no preference with respect to those in the annotations for variant positions" <400> 120 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Leu Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 20 25 30 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 35 40 45 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 50 55 60 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 65 70 75 80 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 85 90 95 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 100 105 110 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 115 120 125 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 130 135 140 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 145 150 155 160 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 165 170 175 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 180 185 190 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 195 200 205 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 210 215 220 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 225 230

Claims (35)

  1. 인간 CD40에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분이며, 여기서 상기 항체는 중쇄 가변 영역을 포함하는 제1 폴리펩티드 부분 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 제2 폴리펩티드 부분을 포함하고, 여기서
    상기 중쇄 가변 영역은
    (i) 서열식별번호: 1을 포함하는 CDR1, 서열식별번호: 2를 포함하는 CDR2, 서열식별번호: 3을 포함하는 CDR3, 또는
    (ii) 서열식별번호: 1을 포함하는 CDR1, 서열식별번호: 12를 포함하는 CDR2, 서열식별번호: 3을 포함하는 CDR3
    중 하나의 경우를 포함하고;
    상기 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 7을 포함하는 CDR1, 서열식별번호: 8을 포함하는 CDR2 및 서열식별번호: 9를 포함하는 CDR3을 포함하는 것인
    단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분.
  2. 제1항에 있어서, CD40 활성을 길항하는 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분.
  3. 제1항에 있어서, 상기 중쇄 가변 영역이
    (i) 서열식별번호: 1로 이루어진 CDR1, 서열식별번호: 2로 이루어진 CDR2, 서열식별번호: 3으로 이루어진 CDR3, 또는
    (ii) 서열식별번호: 1로 이루어진 CDR1, 서열식별번호: 12로 이루어진 CDR2, 서열식별번호: 3으로 이루어진 CDR3
    중 하나의 경우를 포함하고;
    상기 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 7로 이루어진 CDR1, 서열식별번호: 8로 이루어진 CDR2 및 서열식별번호: 9로 이루어진 CDR3을 포함하는 것인
    단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 1로 이루어진 CDR1, 서열식별번호: 2로 이루어진 CDR2, 서열식별번호: 3으로 이루어진 CDR3을 포함하고;
    상기 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 7로 이루어진 CDR1, 서열식별번호: 8로 이루어진 CDR2 및 서열식별번호: 9로 이루어진 CDR3을 포함하는 것인
    단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고,
    상기 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 것인
    단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하고,
    상기 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 것인
    단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고,
    상기 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 것인
    단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 폴리펩티드 부분이 인간 중쇄 불변 영역을 포함하고; 상기 제2 폴리펩티드 부분이 인간 경쇄 불변 영역을 포함하는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분.
  9. 제8항에 있어서, 상기 인간 중쇄 불변 영역이
    (1) 프롤린 238 (P238)이 리신, 세린, 알라닌, 아르기닌 및 트립토판으로 이루어진 군으로부터 선택된 잔기 중 하나로 돌연변이되어, 항체 또는 그의 항원 결합 부분이 감소된 Fc-감마-수용체 (FcγR) 결합을 갖게 되는 것인, FcγR에 대한 결합을 감소시키는 카바트 위치 238에서의 돌연변이; 또는
    (2) 카바트 위치 297에서 치환된 알라닌
    을 포함하는 인간 IgG1 Fc 도메인인 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분.
  10. 제8항 또는 제9항에 있어서, 프롤린 238 (P238)이 리신, 세린, 알라닌, 아르기닌 및 트립토판으로 이루어진 군으로부터 선택된 잔기 중 하나로 돌연변이되어, 항체 또는 그의 항원 결합 부분이 감소된 Fc-감마-수용체 (FcγR) 결합을 갖게 되는 것인, FcγR에 대한 결합을 감소시키는 카바트 위치 238에서의 돌연변이를 포함하는 인간 IgG1 Fc 도메인을 포함하는 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분.
  11. 제10항에 있어서, P238이 리신으로 돌연변이되는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분.
  12. 제10항 또는 제11항에 있어서, Fc 도메인이 서열식별번호: 22, 서열식별번호: 23, 서열식별번호: 24, 서열식별번호: 25, 서열식별번호: 26, 서열식별번호: 27, 서열식별번호: 28 또는 서열식별번호: 29로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분.
  13. 제9항에 있어서,
    상기 중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 1을 포함하는 CDR1, 서열식별번호: 2를 포함하는 CDR2, 서열식별번호: 3을 포함하는 CDR3을 포함하고;
    상기 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 7을 포함하는 CDR1, 서열식별번호: 8을 포함하는 CDR2 및 서열식별번호: 9를 포함하는 CDR3을 포함하는 것인
    단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분.
  14. 제13항에 있어서, 인간 IgG1 Fc 도메인이 서열식별번호: 22 또는 서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분.
  15. 제1항에 있어서,
    제1 폴리펩티드 부분이 서열식별번호: 5, 서열식별번호: 6, 서열식별번호: 30 및 서열식별번호: 31로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어지고;
    제2 폴리펩티드 부분이 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 것인
    단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분.
  16. 제1항에 있어서,
    제1 폴리펩티드 부분이 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어지고;
    제2 폴리펩티드 부분이 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이로 이루어진 것인
    단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분.
  17. 제8항에 있어서, 상기 인간 중쇄 불변 영역이 카바트 위치 297에서 치환된 알라닌을 포함하는 인간 IgG1 Fc 도메인을 포함하는 것인 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 인간화된 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분.
  19. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 결합 부분이 scFv-Fc인 항체 또는 그의 항원 결합 부분.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 치료제에 연결된 항체 또는 그의 항원 결합 부분.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 그의 항원 결합 부분과 상이한 결합 특이성을 갖는 제2 기능적 모이어티에 연결된 항체 또는 그의 항원 결합 부분.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 추가의 모이어티를 추가로 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 부분.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항의 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 코딩하는 핵산 분자.
  24. 제23항의 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터.
  25. 제24항의 발현 벡터 또는 제23항의 핵산으로 형질전환된 세포.
  26. a) 제25항의 세포에서 항-인간 CD40 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 발현시키고;
    b) 세포로부터 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 단리하는 것
    을 포함하는, 항-인간 CD40 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 제조하는 방법.
  27. a) 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원 결합 부분; 및 b) 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
  28. 대상체에게 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 면역 반응을 치료 또는 예방하는 방법.
  29. 대상체에게 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 항원 결합 부분을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 자가면역 또는 염증성 질환을 치료 또는 예방하는 방법.
  30. 제28항 또는 제29항에 있어서, 항체 또는 그의 항원 결합 부분이 면역억제제/면역조정제 및/또는 항염증제와 함께 투여되는 것인 방법.
  31. 제30항에 있어서, 상기 면역억제제/면역조정제 및/또는 항염증제가 CTLA4 돌연변이체 분자인 방법.
  32. 제31항에 있어서, 상기 CTLA4 돌연변이체 분자가 L104EA29Y-Ig (벨라타셉트)인 방법.
  33. 제28항 또는 제29항에 있어서, 대상체가 애디슨병, 알레르기, 아나필락시스, 강직성 척추염, 천식, 아테롬성동맥경화증, 아토피성 알레르기, 귀의 자가면역 질환, 눈의 자가면역 질환, 자가면역 간염, 자가면역 이하선염, 기관지 천식, 관상동맥 심장 질환, 크론병, 당뇨병, 부고환염, 사구체신염, 그레이브스병, 길랑-바레 증후군, 하시모토병, 용혈성 빈혈, 특발성 혈소판감소성 자반증, 염증성 장 질환, 재조합 약물 제품 (예를 들어, 혈우병환자에서의 인자 VII)에 대한 면역 반응, 루푸스 신염, 전신 홍반성 루푸스, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 천포창, 건선, 류마티스성 열, 류마티스 관절염, 사르코이드증, 경피증, 쇼그렌 증후군, 척추관절병증, 갑상선염, 이식 거부, 혈관염 및 궤양성 결장염으로 이루어진 군으로부터 선택된 질환을 갖는 것인 방법.
  34. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한 항체 또는 그의 항원 결합 부분.
  35. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 치료를 필요로 하는 대상체의 치료에 사용하기 위한 항체 또는 그의 항원 결합 부분.
KR1020217018573A 2018-11-19 2019-11-18 길항작용 cd40 모노클로날 항체 및 그의 용도 KR102627246B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862769514P 2018-11-19 2018-11-19
US62/769,514 2018-11-19
PCT/US2019/062011 WO2020106620A1 (en) 2018-11-19 2019-11-18 Antagonistic cd40 monoclonal antibodies and uses thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20210093968A true KR20210093968A (ko) 2021-07-28
KR102627246B1 KR102627246B1 (ko) 2024-01-18

Family

ID=68848451

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020217018573A KR102627246B1 (ko) 2018-11-19 2019-11-18 길항작용 cd40 모노클로날 항체 및 그의 용도

Country Status (19)

Country Link
US (6) US11261258B2 (ko)
EP (1) EP3883652A1 (ko)
JP (2) JP7271666B2 (ko)
KR (1) KR102627246B1 (ko)
CN (2) CN113164781B (ko)
AR (1) AR117091A1 (ko)
AU (1) AU2019385331A1 (ko)
BR (1) BR112021009140A2 (ko)
CA (1) CA3120358C (ko)
CL (1) CL2021001230A1 (ko)
CO (1) CO2021007691A2 (ko)
EA (1) EA202191359A1 (ko)
IL (1) IL283104A (ko)
MX (1) MX2021005565A (ko)
PE (1) PE20211293A1 (ko)
SG (1) SG11202104776VA (ko)
TW (1) TWI800694B (ko)
WO (1) WO2020106620A1 (ko)
ZA (1) ZA202103353B (ko)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2923143T3 (es) 2017-05-25 2022-09-23 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos monoclonales antagonistas contra CD40 y sus usos
AR117091A1 (es) 2018-11-19 2021-07-07 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos monoclonales antagonistas contra cd40 y sus usos
MX2023002093A (es) 2020-08-25 2023-03-15 Bristol Myers Squibb Co Metodo de tratamiento de una enfermedad autoinmune con anticuerpos monoclonales antagonistas para el cumulo de diferenciacion 40 (cd40).
JP2024506831A (ja) 2021-01-28 2024-02-15 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド サイトカイン放出症候群を治療するための組成物及び方法
CN115768477A (zh) * 2021-06-29 2023-03-07 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司 特异性识别cd40的抗体及其应用
CN115812082A (zh) * 2021-07-14 2023-03-17 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司 特异性识别cd40的抗体及其应用
TW202340256A (zh) * 2022-04-02 2023-10-16 大陸商和鉑醫藥（上海）有限責任公司 一種標靶ｃｄ４０的抗原結合蛋白及其製備和應用
CN117264063B (zh) * 2023-03-22 2024-04-23 赛业（苏州）生物科技有限公司 一种抗gpc3抗体及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2018520654A (ja) * 2015-05-29 2018-08-02 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｃｄ４０抗体およびその使用
JP2018526978A (ja) * 2015-06-29 2018-09-20 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｃｄ４０に対する抗体

Family Cites Families (55)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US7183387B1 (en) 1999-01-15 2007-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
GB2353887B (en) 1999-09-04 2003-09-24 Ibm Speech recognition system
WO2003028809A1 (en) * 2001-10-02 2003-04-10 Chiron Corporation Methods of therapy for b-cell malignancies
US7662925B2 (en) 2002-03-01 2010-02-16 Xencor, Inc. Optimized Fc variants and methods for their generation
US20080199471A1 (en) 2002-03-01 2008-08-21 Bernett Matthew J Optimized cd40 antibodies and methods of using the same
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US20060235208A1 (en) 2002-09-27 2006-10-19 Xencor, Inc. Fc variants with optimized properties
US9051373B2 (en) 2003-05-02 2015-06-09 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
ES2346978T3 (es) * 2003-11-04 2010-10-22 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Uso de anticuerpos monoclonantes anti-cd40 antagonistas para el tratamiento del mieloma multiple.
PT1682177E (pt) * 2003-11-04 2010-11-29 Xoma Technology Lt Utilização de anticorpos antagonistas anti-cd40 para o tratamento da leucemia linfocítica crónica
PL2149585T3 (pl) * 2003-11-04 2014-01-31 Novartis Vaccines & Diagnostics Inc Zastosowanie antagonistycznych przeciwciał monoklonalnych anty-CD40
BRPI0510317A (pt) * 2004-04-27 2007-10-16 Novartis Vaccines & Diagnostic anticorpos monoclonais anti-cd40 antagonistas e métodos para seu uso
EP2471813B1 (en) 2004-07-15 2014-12-31 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US20080057070A1 (en) * 2004-11-04 2008-03-06 Chiron Corporation Antagonist Anti-Cd40 Monoclonal Antibodies and Methods for Their Use
US20150315284A1 (en) 2004-11-09 2015-11-05 Xencor, Inc. OPTIMIZED Fc VARIANTS
JP2009511067A (ja) 2005-10-14 2009-03-19 メディミューン，エルエルシー 抗体ライブラリーの細胞提示
AU2008207898B2 (en) 2007-01-23 2012-05-03 Xencor, Inc Optimized CD40 antibodies and methods of using the same
DK2155789T3 (da) 2007-05-01 2013-10-21 Res Dev Foundation Immunoglobulin-Fc-biblioteker
NZ586053A (en) 2007-11-09 2012-09-28 Peregrine Pharmaceuticals Inc Anti-vegf antibody compositions and methods
US10053513B2 (en) 2009-11-30 2018-08-21 Janssen Biotech, Inc. Antibody Fc mutants with ablated effector functions
PT3178851T (pt) 2010-03-31 2020-07-17 Boehringer Ingelheim Int Anticorpos anti-cd40
WO2012046745A1 (ja) 2010-10-04 2012-04-12 独立行政法人理化学研究所 Ｍｈｃクラスｉｉを発現する悪性腫瘍の治療薬
AR083847A1 (es) 2010-11-15 2013-03-27 Novartis Ag Variantes de fc (fragmento constante) silenciosas de los anticuerpos anti-cd40
WO2012088461A2 (en) 2010-12-23 2012-06-28 Biogen Idec Inc. Linker peptides and polypeptides comprising same
KR101734614B1 (ko) 2011-04-21 2017-05-12 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Cd40을 길항하는 항체 폴리펩티드
WO2012149356A2 (en) * 2011-04-29 2012-11-01 Apexigen, Inc. Anti-cd40 antibodies and methods of use
TW201817744A (zh) 2011-09-30 2018-05-16 日商中外製藥股份有限公司 具有促進抗原清除之ＦｃＲｎ結合域的治療性抗原結合分子
CN108144058A (zh) 2011-09-30 2018-06-12 中外制药株式会社 促进抗原消除的抗原结合分子
US20150210763A1 (en) 2012-02-09 2015-07-30 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha MODIFIED Fc REGION OF ANTIBODY
GB201203051D0 (en) 2012-02-22 2012-04-04 Ucb Pharma Sa Biological products
WO2014006217A1 (en) 2012-07-06 2014-01-09 Genmab B.V. Dimeric protein with triple mutations
TWI717591B (zh) 2012-08-24 2021-02-01 日商中外製藥股份有限公司 ＦｃγＲＩＩｂ特異性Ｆｃ區域變異體
CN110066335B (zh) * 2012-10-30 2024-04-05 埃派斯进有限公司 抗-cd40抗体及其使用方法
US20140294812A1 (en) 2013-03-15 2014-10-02 Xencor, Inc. Fc variants that improve fcrn binding and/or increase antibody half-life
KR20210130260A (ko) 2013-04-02 2021-10-29 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 Ｆｃ영역 개변체
GB201308658D0 (en) 2013-05-14 2013-06-26 Isis Innovation Antibodies
EP3113796A1 (en) 2014-03-07 2017-01-11 Bristol-Myers Squibb Company Method of using antibody polypeptides that antagonize cd40 to treat ibd
PE20211533A1 (es) 2014-08-04 2021-08-16 Hoffmann La Roche Moleculas biespecificas de unon a antigeno activadoras de celulas t
AU2015303239A1 (en) * 2014-08-14 2016-12-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of antibodies activating human CD40 and antibodies against human PD-L1
WO2016028810A1 (en) 2014-08-18 2016-02-25 Biogen Ma Inc. Anti-cd40 antibodies and uses thereof
MY189836A (en) 2014-11-21 2022-03-11 Bristol Myers Squibb Co Antibodies against cd73 and uses thereof
BR112017028353A2 (pt) 2015-06-29 2018-09-04 The Rockfeller University anticorpos para cd40 com atividade agonista melhorada
US20190048089A1 (en) 2015-09-30 2019-02-14 Janssen Biotech, Inc. Antagonistic Antibodies Specifically Binding Human CD40 and Methods of Use
EP3523329A1 (en) 2016-10-06 2019-08-14 GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Limited Antibodies with reduced binding to process impurities
US11603406B2 (en) 2017-03-14 2023-03-14 Five Prime Therapeutics, Inc. Antibodies binding to VISTA at acidic pH
US20200095323A1 (en) 2017-03-20 2020-03-26 The General Hospital Corporation MITIGATING Fc-Fc RECEPTOR INTERACTIONS IN CANCER IMMUNOTHERAPY
CN116333129A (zh) 2017-05-25 2023-06-27 百时美施贵宝公司 包含经修饰的重链恒定区的抗体
US20200148779A1 (en) 2017-05-25 2020-05-14 Bristol-Myers Squibb Company MODIFIED IgG1 Fc DOMAINS AND ANTI-CD40 DOMAIN ANTIBODY FUSIONS THEREWITH
ES2923143T3 (es) 2017-05-25 2022-09-23 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos monoclonales antagonistas contra CD40 y sus usos
WO2019087094A1 (en) 2017-11-03 2019-05-09 Novartis Ag Anti-cd40 antibodies for use in treatment of sjögren's syndrome
AR117091A1 (es) 2018-11-19 2021-07-07 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos monoclonales antagonistas contra cd40 y sus usos
WO2020112781A1 (en) 2018-11-28 2020-06-04 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies comprising modified heavy constant regions

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2018520654A (ja) * 2015-05-29 2018-08-02 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｃｄ４０抗体およびその使用
JP2018526978A (ja) * 2015-06-29 2018-09-20 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｃｄ４０に対する抗体

Also Published As

Publication number Publication date
US11261258B2 (en) 2022-03-01
TWI800694B (zh) 2023-05-01
JP2023106402A (ja) 2023-08-01
US20220144962A1 (en) 2022-05-12
JP2022507741A (ja) 2022-01-18
BR112021009140A2 (pt) 2021-08-17
US11773178B2 (en) 2023-10-03
CN113164781B (zh) 2023-02-28
AR117091A1 (es) 2021-07-07
PE20211293A1 (es) 2021-07-20
WO2020106620A1 (en) 2020-05-28
US11795231B2 (en) 2023-10-24
US20240124597A1 (en) 2024-04-18
US20210054090A1 (en) 2021-02-25
IL283104A (en) 2021-06-30
JP7271666B2 (ja) 2023-05-11
ZA202103353B (en) 2022-12-21
CA3120358C (en) 2024-03-26
US20220153856A1 (en) 2022-05-19
CN116003608A (zh) 2023-04-25
CA3120358A1 (en) 2020-05-28
AU2019385331A1 (en) 2021-07-01
EA202191359A1 (ru) 2021-10-21
US20200157233A1 (en) 2020-05-21
KR102627246B1 (ko) 2024-01-18
TW202033556A (zh) 2020-09-16
CN113164781A (zh) 2021-07-23
CO2021007691A2 (es) 2021-09-20
CL2021001230A1 (es) 2022-01-07
CN116003608B (zh) 2024-04-05
US20220169742A1 (en) 2022-06-02
EP3883652A1 (en) 2021-09-29
US11254750B2 (en) 2022-02-22
US11926673B2 (en) 2024-03-12
MX2021005565A (es) 2021-07-06
SG11202104776VA (en) 2021-06-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102627246B1 (ko) 길항작용 cd40 모노클로날 항체 및 그의 용도
JP6703520B2 (ja) Ｃｄ３イプシロンおよびｂｃｍａに対する二特異性抗体
US11613585B2 (en) Nucleic acids encoding antagonistic CD40 monoclonal antibodies
KR20190086477A (ko) 다발성 골수종 치료를 위한 bcma 및 cd3에 대응하는 이중 특이적 항체 및 면역학적 약물의 복합용도
KR20170032461A (ko) 종양-표적 il-2 변이체 면역사이토카인 및 인간 pd-l1에 대한 항체의 조합 요법
KR101859857B1 (ko) Ｉｌ－21 항체
JP2021524267A (ja) Ｃｄ１３７及びｏｘ４０に結合する抗体分子
JP2017509649A (ja) Ｃｄ４０ｌに対するドメイン抗体を用いる移植拒絶を治療する方法
JP2023532248A (ja) 免疫関連疾患のためのｔｉｇｉｔに対するヒトモノクローナル抗体
US20230331860A1 (en) Method of Treating an Autoimmune Disease with Antagonistic CD40 Monoclonal Antibodies
JP7278623B2 (ja) 抗ｃｄ２７抗体およびその使用

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
AMND Amendment
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
E601 Decision to refuse application
AMND Amendment
X701 Decision to grant (after re-examination)
GRNT Written decision to grant