KR20210088625A - 항 igf-i 수용체 인간화 항체 - Google Patents

Abstract

IGF-I 수용체를 통해서, 근육량을 증가시키지만, 혈당값을 저하시키지 않는 인간화 항체를 제공한다. 이러한 인간화 항체는, 각 CDR 서열로서 각각 서열 번호 1 ∼ 6 등의 특정한 아미노산 서열을 갖고, IGF-I 수용체의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는, 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체이다.

Description

항 IGF-I 수용체 인간화 항체

본 발명은 항 IGF-I 수용체 인간화 항체에 관한 것이다. 구체적으로는, 척추 동물의 IGF-I 수용체에 특이적으로 결합하는 항 IGF-I 수용체 인간화 항체에 관한 것이다.

1. IGF-I

IGF-I 는, 인슐린형 성장 인자이고, 하수체로부터 분비되는 성장 호르몬 (GH) 에 의한 GH 수용체의 활성화를 통해서, 주로 간장으로부터 분비되고, IGF-I 수용체에 작용함으로써, 각종 장기에서 여러 가지 생리 기능을 발현한다. 이러한 점에서 IGF-I 는, 여러 가지 질환에 대한 치료가 기대된다. IGF-I 는, 프로인슐린의 아미노산 서열과 비교하여, 약 40 ％ 로 높은 상동성을 가지므로, 인슐린 수용체에도 결합하여, 인슐린형의 작용을 발현하는 경우가 있다 (비특허문헌 1). 또, IGF-I 수용체는, 인슐린 수용체의 아미노산 서열과 비교하여, 약 60 ％ 로 높은 상동성을 가지므로, 양 수용체는 헤테로 2 량체를 형성하는 경우가 있다 (비특허문헌 1). 또한, 인슐린은, 인슐린 수용체에 작용함으로써, 강력한 혈당 저하 작용을 발현하므로, 혈당 강하약으로서 치료에 사용되고 있다.

2. IGF-I 수용체

IGF-I 수용체는 α 사슬 및 β 사슬로 구성되고, L1, CR, L2, Fn1, Fn2 및 Fn3 의 6 개의 세포외 도메인, 막 관통 도메인, 및 세포내 도메인을 포함하는 막 관통 단백질이다 (비특허문헌 2). IGF-I 수용체의 세포내 도메인은, 티로신 키나아제를 갖는다. 세포외 도메인인 CR (cysteine-rich domain) 은, IGF-I 가 IGF-I 수용체에 결합했을 때의 당해 수용체의 입체 구조의 변화에 수반하는, 세포내의 티로신 키나아제의 활성화에 관여한다. IGF-I 수용체는, 호모 2 량체 복합체 (호모형) 를 형성하고, IGF-I 가 결합하면, 수용체 키나아제를 활성화함으로써 신호를 보낸다. 또, 인슐린 수용체와의 헤테로 2 량체 복합체 (헤테로형) 를 형성하고, 인슐린 또는 IGF-I 가 결합하면, 수용체 키나아제를 활성화함으로써 신호를 보낸다 (비특허문헌 3, 4).

3. IGF-I 의 생리 작용

IGF-I 는, 신장이나 체중 증가 등의 성장 촉진 작용, 및 당 대사 촉진이나 혈당 저하 작용 등의 인슐린형 대사 작용이 분명하게 되어 있다. 인간 재조합 IGF-I 인 메카세르민은, 인슐린 수용체 이상증의 고혈당, 고인슐린혈증, 흑색 표피종 및 다모와 같은 증상을 개선하는 것이 관찰되고 있다. 또, 성장 호르몬 저항성 저신장증의 성장 장해를 개선하는 것이 관찰되고 있다 (비특허문헌 5).

4. IGF-I 의 성장 촉진 작용

IGF-I 는 인간 연골 세포의 DNA 합성능을 항진시키는 것이 알려져 있다. 또, IGF-I 의 투여는, 하수체 적출 래트의 체중을 증가시켜, 대퇴골 뼈길이를 신장시킨다 (비특허문헌 5).

5. IGF-I 의 근육량 증가 작용

IGF-I 를 통한 세포 증식 활성의 항진은, IGF-I 수용체의 지속적인 활성화가 필요하다 (비특허문헌 6). IGF-I 수용체를 과잉 발현시킨 동물에서는 근육량이 증가하고 있다 (비특허문헌 7). 또, IGF-I/IGFBP3 의 지속 투여는, 대퇴골 근위부 골절 환자의 악력을 항진시켜, 개조 (介助) 없이 앉은 자리에서 일어서는 능력을 개선시킨다 (비특허문헌 8). 고령의 인간 및 마우스의 근육 중의 IGF-I 농도는, 약령 (若齡) 과 비교하여 저하되는 것이 알려져 있지만 (비특허문헌 9, 10), IGF-I 를 근조직 특이적으로 강제 발현시킨 고령의 마우스에서는, 야생형 마우스와 비교하여, 근육량이 개선되었다 (비특허문헌 11).

6. 근육량을 증가시키는 선행품

그렐린 수용체의 작동약인 아나모렐린은, 폐용성 근위축증인 카켁시아의 임상 시험에 있어서, 제지방량을 증가시켰다. 한편, 부작용으로서, 구토 및 혈당값의 상승이 관찰된다 (비특허문헌 12).

마이오스타틴은, 액티빈 수용체 II (ActRII) 에 작용하여, Akt/mTOR 을 저해하는, 골격근 형성의 부 (負) 의 제어 인자이다 (비특허문헌 13 ∼ 15). 항마이오스타틴 항체인 LY2495655 는, 전체 인공 고관절 치환술을 실시한 환자 및 고령자의 근육량을 증가시킨다 (비특허문헌 16, 17).

또, 항 ActRII 항체인 비마그루맙은, 신경근 질환 환자의 근육량을 증가시킨다 (비특허문헌 18). 그러나, 골격근의 형성을 촉진시켜, 치료를 위해서 사용할 수 있는 약은 현재로서는 존재하지 않는다.

7. IGF-I 의 혈당 저하 작용

IGF-I 의 인슐린형 작용으로서, 혈당 저하 작용이 알려져 있다. IGF-I 는, 래트 근육 유래 세포에 있어서 글루코오스 흡수 작용을 항진시킨다 (비특허문헌 5). 또, IGF-I 의 투여는, 래트의 혈당값을 저하시킨다 (비특허문헌 5).

IGF-I 에 의한 혈당 저하 작용은, 임상 상의 부작용으로서 저혈당을 야기시키는 것이 보고되고 있다 (비특허문헌 19). 또한, IGF-I 는, 인간에 대한 투여에 의해 저혈당을 일으키므로, 치료 개시시는, 저용량으로부터 순차 적당량을 투여하고, 투여 후의 혈당값 등을 포함하는 각종 임상 소견의 관찰이 필요해진다 (비특허문헌 5).

IGF-I 는, IGF-I 수용체의 하류 시그널인 Akt 의 인산화의 항진을 통해서 혈당 저하 작용을 발현한다. Akt 의 활성형 변이체는, 3T3-L1 세포의 글루코오스 흡수를 항진시킨다 (비특허문헌 20). 한편, Akt2 를 결손시킨 마우스는, 혈당값이 상승하였다 (비특허문헌 21). 또, 래트 근육 유래 세포에 있어서 Akt 저해제는, 인슐린 자극에 의한 글루코오스 흡수를 저해한다 (비특허문헌 22). 또한, IGF-I 는, 혈당 저하 작용에 관여하는 인슐린 수용체를 활성화시키는 것이 알려져 있다. 이러한 점에서, IGF-I 에 의한 혈당 저하 작용에는, Akt 의 과잉인 활성화 및 인슐린 수용체의 활성화가 관여하는 것이 생각된다.

8. IGF-I 의 짧은 혈중 반감기

IGF-I 의 혈중 반감기는, 짧기 때문에 치료에서는 빈회 (頻回) 투여가 필요해진다. 실제로, 인간 재조합 IGF-I 인 메카세르민은, 혈중 반감기가 약 11 시간 내지 16 시간이고, 저신장증의 치료에서는 1 일 1 회 내지 2 회의 투여가 필요하다 (비특허문헌 5).

혈중의 IGF-I 의 약 70 내지 80 ％ 는 IGFBP3 과 결합하고 있다. IGF-I 의 유리체가 생리 활성을 나타낸다. IGFBP3 과의 결합은, IGF-I 의 혈중 반감기를 약 10 시간 내지 16 시간으로 유지하고 있다 (비특허문헌 1).

IGF-I 와 IGFBP3 의 배합제인 IPLEX 는, 혈중 반감기가 약 21 시간 내지 26 시간으로 IGF-I 와 비교하여 길고, 1 일 1 회의 투여를 가능하게 한 약제이다 (비특허문헌 23). 그러나, IPLEX 는 시장으로부터 철퇴되고 있다.

IGF-I 의 동태를 개선시킨 PEG 화 IGF-I 도 개발이 시도되었지만, 치료에 사용되고 있는 약제는 존재하지 않는다 (특허문헌 1).

9. IGF-I 의 작용에 의해 기대되는 치료 효과

IGF-I 는 다종의 장기에 작용하고, 그 생리 기능은 다방면에 걸치는 것이 알려져 있다 (비특허문헌 19).

IGF-I 는, 중추 신경계에 있어서, IGF-I 수용체의 활성화를 통해서, 미토콘드리아의 보호 및 항산화 작용에 의한 신경 보호 작용이 있는 것이 보고되고 있다 (비특허문헌 24, 25). IGF-I 는, 상해 후의 신경 돌기의 형성을 촉진시킨다 (비특허문헌 26).

IGF-I 는, 성장 촉진의 주요한 인자이다 (비특허문헌 27, 28). 실제로, 인간 재조합 IGF-I 인 메카세르민은, 저신장증의 치료약으로서 임상에서 사용되고 있다.

IGF-I 는, 간경변의 치료에 유용하다고 생각되고 있다. 간경변은, 간 장해 또는 만성 간질환에서 병태 진전된 것이고, 간장의 섬유화를 수반하는 질환이다. 간경변 모델 동물에 있어서, IGF-I 의 투여는, 간장의 섬유화를 억제하였다 (비특허문헌 29).

IGF-I 는, 신장의 발달, 기능에도 관여하는 것이 알려져 있다. 신장의 메산쥼 세포에 있어서, IGF-I 는, 당독성에 의한 산화 스트레스 및 아포토시스에 대해 보호 작용이 있다 (비특허문헌 30). IGF-I 는, 신증의 치료약으로서 기대된다.

IGF-I 의 투여에 의해 개선이 기대되는 병태에는, 저신장증, 라론증, 간경변, 간섬유화, 노화, 자궁내 태아 발육 지연 (IUGR), 신경 질환, 뇌졸중, 척수 손상, 심혈관 보호, 당뇨병, 인슐린 저항성, 메타볼릭 신드롬, 신증, 골조송증, 낭포성 섬유증, 창상 치유, 근강직성 디스트로피, 에이즈 근감약증, HIV 에 수반하는 지방 재분포 증후군, 화상, 크론병, 베르너 증후군, X 연쇄성 복합 면역 부전증, 난청, 신경성 무식욕증 및 미숙아 망막증이 있다 (비특허문헌 19).

IGF-I 는, 그 다채로운 생리 작용으로부터, 여러 가지 질환의 치료약으로서 기대된다. 그러나, 부작용인 혈당 저하 작용, 및 짧은 반감기에 의한 복수회의 투여가 임상에서 사용하기 위한 과제이다.

10. IGF-I 수용체 아고니스트 항체

항체 제제는, 일반적으로 반감기가 길고, 한달에 1 회 내지 2 회의 투여로 유효성을 나타낸다. IGF-I 수용체 아고니스트 항체는, 인비트로 (in vitro) 에서의 수용체 활성화 작용이 보고되고 있지만, 인비보 (in vivo) 에 있어서 IGF-I 수용체에 대한 아고니스트 활성을 나타낸 항체의 보고는 없다 (비특허문헌 31 ∼ 35).

항체 3B7 및 항체 2D1 은, 인비트로에 있어서 세포의 DNA 합성을 항진한다 (비특허문헌 32).

항체 11A1, 11A4, 11A11 및 24-57 은, 인비트로에 있어서 IGF-I 수용체의 티로신의 인산화를 항진한다 (비특허문헌 33).

항체 16-13, 17-69, 24-57, 24-60, 24-31 및 26-3 은, 인비트로에 있어서 세포의 DNA 합성, 및 글루코오스 흡수의 항진 작용을 갖는 것이 나타나 있고, 이들 항체는 혈당 저하 작용을 가질 가능성이 있다 (비특허문헌 34, 35).

그러나, 지금까지 초대 배양 세포, 그 중에서도 인간 근아 세포를 사용한 인비트로에서의 세포 증식 활성을 나타낸 IGF-I 수용체 아고니스트 항체의 보고는 없고, 하물며 인비보에서의 근육량 증가 작용을 나타내는 IGF-I 수용체 아고니스트 항체는 없었다.

11. IGF-I 수용체 안타고니스트 항체

IGF-I 수용체에 결합하는 항체는 IGF-I 와 IGF-I 수용체의 결합을 저해하는 안타고니스트 작용을 이용하여, 악성 종양 등의 치료에 대한 응용이 시도되고 있다. 그러나, 기존의 IGF-I 수용체 안타고니스트 항체는 단독 치료에 있어서 고혈당 등의 부작용이 많을 뿐만 아니라 (비특허문헌 36), 다른 항암제와의 병용에 의해 고혈당의 발현율이 상승하므로 (비특허문헌 37), 치료에 대한 적용은 한정적인 것이 되는 것으로 생각되고 있다.

일본 공표특허공보 2011-518778호

Ohlsson, C., et al., The role of liver-derived insulin-like growth factor-I. Endocr Rev, 2009. 30(5) : p.494-535. Kavran, J. M., et al., How IGF-I activates its receptor. Elife, 2014. 3. Bailyes, E. M., et al., Insulin receptor/IGF-I receptor hybrids are widely distributed in mammalian tissues : quantification of individual receptor species by selective immunoprecipitation and immunoblotting. Biochem J, 1997. 327 (Pt 1) : p.209-15. Pandini, G., et al., Insulin/insulin-like growth factor I hybrid receptors have different biological characteristics depending on the insulin receptor isoform involved. J Biol Chem, 2002. 277(42) : p.39684-95. 오펀 패시픽, IF. 2015. Fukushima, T., et al., Phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) activity bound to insulin-like growth factor-I (IGF-I) receptor, which is continuously sustained by IGF-I stimulation, is required for IGF-I-induced cell proliferation. J Biol Chem, 2012. 287(35) : p.29713-21. Schiaffino, S. and C. Mammucari, Regulation of skeletal muscle growth by the IGF-I-Akt/PKB pathway : insights from genetic models. Skelet Muscle, 2011. 1(1) : p.4. Boonen, S., et al., Musculoskeletal effects of the recombinant human IGF-I/IGF binding protein-3 complex in osteoporotic patients with proximal femoral fracture : a double-blind, placebo-controlled pilot study. J Clin Endocrinol Metab, 2002. 87(4) : p.1593-9. Barton-Davis, E. R., et al., Viral mediated expression of insulin-like growth factor I blocks the aging-related loss of skeletal muscle function. Proc Natl Acad Sci USA, 1998. 95(26) : p.15603-7. Lamberts, S. W., A. W. van den Beld, and A. J. van der Lely, The endocrinology of aging. Science, 1997. 278(5337) : p.419-24. Musaro, A., et al., Localized IGF-I transgene expression sustains hypertrophy and regeneration in senescent skeletal muscle. Nat Genet, 2001. 27(2) : p.195-200. Temel, J. S., et al., Anamorelin in patients with non-small-cell lung cancer and cachexia (ROMANA 1 and ROMANA 2) : results from two randomized, double-blind, phase 3 trials. Lancet Oncol, 2016. 17(4) : p.519-31. Glass, D. J., Signaling pathways perturbing muscle mass. Curr Opin Clin Nutr Metab Care, 2010. 13(3) : p.225-9. Lee, S. J. and A. C. McPherron, Regulation of myostatin activity and muscle growth. Proc Natl Acad Sci U S A, 2001. 98(16) : p.9306-11. Amirouche, A., et al., Down-regulation of Akt/mammalian target of rapamycin signaling pathway in response to myostatin overexpression in skeletal muscle. Endocrinology, 2009. 150(1) : p.286-94. Woodhouse, L., et al., A Phase 2 Randomized Study Investigating the Efficacy and Safety of Myostatin Antibody LY2495655 versus Placebo in Patients Undergoing Elective Total Hip Arthroplasty. J Frailty Aging, 2016. 5(1) : p.62-70. Becker, C., et al., Myostatin antibody (LY2495655) in older weak fallers : a proof-of-concept, randomized, phase 2 trial. Lancet Diabetes Endocrinol, 2015. 3(12) : p.948-57. Amato, A. A., et al., Treatment of sporadic inclusion body myositis with bimagrumab. Neurology, 2014. 83(24) : p.2239-46. Puche, J. E. and I. Castilla-Cortazar, Human conditions of insulin-like growth factor-I (IGF-I) deficiency. J Transl Med, 2012. 10 : p.224. Kohn, A. D., et al., Expression of a constitutively active Akt Ser/Thr kinase in 3T3-L1 adipocytes stimulates glucose uptake and glucose transporter 4 translocation. J Biol Chem, 1996. 271(49) : p.31372-8. Cho, H., et al., Insulin resistance and a diabetes mellitus-like syndrome in mice lacking the protein kinase Akt2 (PKB beta). Science, 2001. 292(5522) : p.1728-31. Green, C. J., et al., Use of Akt inhibitor and a drug-resistant mutant validates a critical role for protein kinase B/Akt in the insulin-dependent regulation of glucose and system A amino acid uptake. J Biol Chem, 2008. 283(41) : p.27653-67. FDA 신청 자료, APPLICATION NUMBER 21-884 Garcia-Fernandez, M., et al., Low doses of insulin-like growth factor I improve insulin resistance, lipid metabolism, and oxidative damage in aging rats. Endocrinology, 2008. 149(5) : p.2433-42. Puche, J. E., et al., Low doses of insulin-like growth factor-I induce mitochondrial protection in aging rats. Endocrinology, 2008. 149(5) : p.2620-7. Joseph D'Ercole, A. and p. Ye, Expanding the mind : insulin-like growth factor I and brain development. Endocrinology, 2008. 149(12) : p.5958-62. Abuzzahab, M. J., et al., IGF-I receptor mutations resulting in intrauterine and postnatal growth retardation. N Engl J Med, 2003. 349(23) : p.2211-22. Woods, K. A., et al., Intrauterine growth retardation and postnatal growth failure associated with deletion of the insulin-like growth factor I gene. N Engl J Med, 1996. 335(18) : p.1363-7. Perez, R., et al., Mitochondrial protection by low doses of insulin-like growth factor- I in experimental cirrhosis. World J Gastroenterol, 2008. 14(17) : p.2731-9. Kang, B. P., et al., IGF-I inhibits the mitochondrial apoptosis program in mesangial cells exposed to high glucose. Am J Physiol Renal Physiol, 2003. 285(5) : p.F1013-24. Bhaskar, V., et al., A fully human, allosteric monoclonal antibody that activates the insulin receptor and improves glycemic control. Diabetes, 2012. 61(5) : p.1263-71. Xiong, L., et al., Growth-stimulatory monoclonal antibodies against human insulin-like growth factor I receptor. Proc Natl Acad Sci U S A, 1992. 89(12) : p.5356-60. Runnels, H. A., et al., Human monoclonal antibodies to the insulin-like growth factor 1 receptor inhibit receptor activation and tumor growth in preclinical studies. Adv Ther, 2010. 27(7) : p.458-75. Soos, M. A., et al., A panel of monoclonal antibodies for the type I insulin-like growth factor receptor. Epitope mapping, effects on ligand binding, and biological activity. J Biol Chem, 1992. 267(18) : p.12955-63. Kato, H., et al., Role of tyrosine kinase activity in signal transduction by the insulin-like growth factor-I (IGF-I) receptor. Characterization of kinase-deficient IGF-I receptors and the action of an IGF-I-mimetic antibody (alpha IR-3). J Biol Chem, 1993. 268(4) : p.2655-61. Atzori, F., et al., A Phase I Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Study of Dalotuzumab (MK-0646), an Anti-Insulin-like Growth Factor-1 Receptor Monoclonal Antibody, in Patients with Advanced Solid Tumors. Clin Cancer Res., 2011. 17(19) : p.6304-12. de Bono J. S., et al., Phase II randomized study of figitumumab plus docetaxel and docetaxel alone with crossover for metastaticcastration-resistant prostate cancer. Clin Cancer Res., 2014. 20(7) : p.1925-34.

본 발명은, 척추 동물의 IGF-I 수용체에 특이적으로 결합하는, 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체를 제공하는 것을, 그 목적의 하나로 한다. 또, 본 발명은, IGF-I 수용체를 통해서, 근육량을 증가시키고, 혈당값을 저하시키지 않는 항체를 제공하는 것을, 그 목적의 하나로 한다.

즉, 본 발명은 이하에 관한 것이다.

[1] 중사슬 가변 영역의 CDR-1 (CDR-H1) 서열로서, 서열 번호 1 의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 1 의 아미노산 서열에 있어서 1 지점의 아미노산 잔기가 치환된 아미노산 서열, 중사슬 가변 영역의 CDR-2 (CDR-H2) 서열로서, 서열 번호 2 의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 2 의 아미노산 서열에 있어서 1 혹은 2 지점의 아미노산 잔기가 치환된 아미노산 서열, 중사슬 가변 영역의 CDR-3 (CDR-H3) 서열로서, 서열 번호 3 의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 3 의 아미노산 서열에 있어서 1 혹은 2 지점의 아미노산 잔기가 치환된 아미노산 서열, 경사슬 가변 영역의 CDR-1 (CDR-L1) 서열로서, 서열 번호 4 의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 4 의 아미노산 서열에 있어서 1 혹은 2 지점의 아미노산 잔기가 치환된 아미노산 서열, 경사슬 가변 영역의 CDR-2 (CDR-L2) 서열로서, 서열 번호 5 의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 5 의 아미노산 서열에 있어서 1 지점의 아미노산 잔기가 치환된 아미노산 서열, 및 경사슬 가변 영역의 CDR-3 (CDR-L3) 서열로서, 서열 번호 6 의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 6 의 아미노산 서열에 있어서 1 혹은 2 지점의 아미노산 잔기가 치환된 아미노산 서열을 포함하고, 서열 번호 14 (인간 IGF-I 수용체) 의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는, 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체.

[2] 상기 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체가, 중사슬 가변 영역으로서, 서열 번호 7 의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 7 의 아미노산 서열에 있어서 1 혹은 수 지점에 있어서의 아미노산 잔기가 치환, 결실, 혹은 부가된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열, 및 경사슬 가변 영역으로서, 서열 번호 8 의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 8 의 아미노산 서열에 있어서 1 혹은 수 지점에 있어서의 아미노산 잔기가 치환, 결실, 혹은 부가된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는, [1] 에 기재된 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체.

[3] 상기 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체가, 중사슬 가변 영역으로서 서열 번호 7 의 아미노산 서열, 및 경사슬 가변 영역으로서 서열 번호 8, 9, 10, 11 및 12 에서 선택되는 어느 아미노산 서열을 포함하는, [1] 또는 [2] 에 기재된 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체.

[4] 정상 영역으로서, 인간 면역 글로블린의 각 클래스에 있어서의 정상 영역을 추가로 포함하는, [1] 내지 [3] 에 기재된 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체.

[5] 중사슬 정상 영역이, 인간 IgG4 클래스의 중사슬 정상 영역인, [4] 에 기재된 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체.

[6] 서열 번호 14 (인간 IGF-I 수용체) 의 아미노산 번호 308 내지 319 에 상당하는 아미노산 서열 (ProSerGlyPheIleArgAsnGlySerGlnSerMet) 을 갖는 펩티드를 포함하는 에피토프 또는 그 근방에 결합하는, [1] 내지 [5] 중 어느 하나에 기재된 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체.

[7] 인간 또는 모르모트에서 유래하는 근아 세포의 증식을 유도하는 용량에 있어서, 당해 배양 세포에서의 글루코오스 흡수를 유도하지 않는, [1] 내지 [6] 중 어느 하나에 기재된 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체.

[8] 척추 동물에 투여되고, 당해 척추 동물의 근육량 및/또는 체장의 증가를 유도하는 용량에 있어서, 당해 척추 동물의 혈당값을 저하시키지 않는, [1] 내지 [7] 중 어느 하나에 기재된 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체.

[9] 척추 동물에 투여되고, 당해 척추 동물의 근육량 및/또는 체장의 증가를 유도하는 유효 용량에 대해 10 배 이상의 혈중 노출량에 있어서도, 당해 척추 동물의 혈당값을 저하시키지 않는, [8] 에 기재된 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체.

[10] [1] 내지 [9] 중 어느 하나에 기재된 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체를 코드하는 폴리뉴클레오티드 서열로 이루어지는 핵산 분자.

[11] [10] 에 기재된 핵산 분자를 적어도 1 개 포함하는 클로닝 벡터 또는 발현 벡터.

[12] [11] 에 기재된 벡터가 숙주 세포에 도입된 재조합 체세포.

[13] [12] 에 기재된 재조합 체세포를 배양하고, 상기 재조합 체세포로부터 산생되는 당해 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체를 정제하는 공정을 포함하는, [1] 내지 [9] 중 어느 하나에 기재된 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체의 제조 방법.

[14] [1] 내지 [9] 중 어느 하나에 기재된 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체, [10] 에 기재된 핵산 분자, [11] 에 기재된 벡터 혹은 [12] 에 기재된 재조합 체세포를 유효 성분으로서 포함하는, 의약 조성품.

[15] 근위축성 질환 또는 저신장증의 치료에 사용되는, [14] 에 기재된 의약 조성품.

[16] 근위축성 질환이, 폐용성 근위축, 사르코페니아 또는 카켁시아인, [15] 에 기재된 의약 조성품.

[17] 저신장증이, 라론형 저신장증 또는 성장 호르몬 저항성 저신장증인, [15] 에 기재된 의약 조성품.

본 발명의 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체는, 척추 동물의 IGF-I 수용체에 특이적으로 결합하는 효과를 갖는다.

도 1 은, IGF-I 수용체의 CR 도메인의 아미노산 서열 (아미노산 서열은 1 문자 표기로 나타낸다) 을, 마우스, 래트, 인간, 모르모트 및 토끼로 비교한 결과를 나타내는 도면이다.
도 2 는, 모르모트에 IGF-I 를 삼투압 펌프로 지속 투여, 또는 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 R11-16B 를 단회 정맥내 투여했을 때의 투여 2 주 후의 장지신근의 중량을 나타내는 도면이다.
도 3 은, 절식 조건하의 모르모트에, IGF-I 를 단회 피하 투여했을 때의 혈중 동태의 시간 경과적 추이를 나타내는 도면이다.
도 4 는, 절식 조건하의 모르모트에, 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 R11-16B 를 단회 정맥내 투여했을 때의 혈중 동태의 시간 경과적 추이를 나타내는 도면이다.

이하, 본 발명을 구체적인 실시형태에 기초하여 설명하지만, 본 발명은 이들 실시형태에 전혀 한정되지 않는다. 또한, 본 명세서에 있어서 인용하는 특허공보, 특허출원 공개공보, 및 비특허공보를 포함하는 모든 문헌은, 모든 목적에 있어서, 그 전체가 원용에 의해 본 명세서에 받아들여진다.

[IGF]

본 개시에 있어서 「IGF」 란, 인슐린형 성장 인자 (Insulin-like Growth Factor) 를 말하고, IGF-I 와 IGF-II 가 존재한다. IGF-I 및 IGF-II 는, 후술하는 IGF-I 수용체 (인슐린형 성장 인자-I 수용체 : Insulin-like Growth Factor-I Receptor) 에 결합하고, 세포내에 세포 분열이나 대사의 시그널을 넣는 아고니스트 활성을 갖는 생체내의 리간드이다. IGF-I 및 IGF-II 는, IGF-I 수용체와 구조적으로 유사성이 있는 인슐린 수용체 (INSR) 에도 약하게 교차적으로 결합하는 것이 알려져 있다. 본 명세서에서는, 생리적 기능 등이 보다 잘 알려져 있는 IGF-I 를 주로 취급하지만, IGF-I 수용체와 리간드의 결합을 통한 작용이나 질환 등의 검토를 실시하는 경우에는, IGF-I 와 IGF-II 의 양자의 작용을 포함하여 기재하는 경우가 있다.

IGF-I 는 소마토메딘 C 라고도 불리고, 70 아미노산으로 이루어지는 단일 폴리펩티드의 호르몬이다. 인간의 IGF-I 의 서열은 EMBL-EBI 의 UniProtKB-액세션 번호 P50919 등을 참조하여 입수할 수 있다. 서열표의 서열 번호 13 에 성숙형 IGF-I 의 아미노산 서열을 나타낸다. 이 70 아미노산으로 이루어지는 서열은, 많은 종으로 보존되어 있다. 본 발명에 있어서는, 「IGF-I」 만으로 기재된 경우에는, 특별히 언급이 없는 한, 호르몬 활성을 갖는 IGF-I 단백질을 의미한다.

IGF-I 는, 간장 세포를 비롯하여 생체내의 여러 가지 세포로 산생되어 있고, 혈액이나 그 밖의 체액 중에도 존재한다. 따라서, 천연형의 IGF-I 는 동물의 체액이나, 동물로부터 분리한 초대 배양 세포나 주화 세포 등을 배양한 배양물로부터 정제하여 얻을 수 있다. 또, IGF-I 는 성장 호르몬에 의해 세포에서의 산생이 유도되기 때문에, 성장 호르몬이 투여된 동물의 체액이나, 동물로부터 분리한 초대 배양 세포나 주화 세포 등을 성장 호르몬 존재하에서 배양한 배양물로부터도 IGF-I 를 정제함으로써 얻어진다. 또, 다른 방법으로서, IGF-I 의 아미노산 서열을 코드하는 핵산 분자를 발현 벡터에 도입하여 대장균 등의 원핵 생물이나 효모, 곤충 세포 또는 포유류 유래의 배양 세포 등의 진핵 세포의 숙주에 도입한 재조합 체세포나, IGF-I 유전자를 도입한 트랜스제닉 동물이나 트랜스제닉 식물 등을 사용하여, IGF-I 를 제조할 수도 있다. 또한, 인간 IGF-I 는 연구용 시약 (Enzo Life Sciences, catalog : ADI-908-059-0100 ; Abnova, catalog : P3452 등), 의약품 (소마존 ^{(등록상표)}, 메카세르민, INCRELEX ^{(등록상표)} 등) 으로서 입수할 수도 있다. 사용하는 IGF-I 의 인비보 및 인비트로에서의 활성은, World Health Organization 의 National Institute for Biological Standards and Control (NIBSC) 의 NIBSC code : 91/554 의 IGF-I 표준 물질에서의 활성을 1 국제 유닛/마이크로그램으로서 비교함으로써, 그 비활성을 평가할 수 있다. 본 발명에 있어서의 IGF-I 는, 당해 NIBSC code : 91/554 의 IGF-I 와 동등한 비활성을 갖는 것으로서 취급하는 것으로 한다.

[IGF-I 수용체]

본 개시에 있어서 「IGF-I 수용체」 란, 인슐린형 성장 인자-I 수용체 (Insulin-like Growth Factor-I Receptor) 를 말한다. 본 명세서에 있어서 「IGF-I 수용체」 는, 특별히 언급이 없는 한, IGF-I 수용체 단백질을 의미한다. IGF-I 수용체는 α 사슬과 β 사슬로 이루어지는 서브 유닛이 2 개 회합된 구조의 단백질이다. 서열 번호 14 에 나타낸 인간 IGF-I 수용체의 아미노산 서열에 있어서는, 그 아미노산 서열 중, 31 번째 내지 735 번째의 아미노산 서열로 이루어지는 부분이 α 사슬에 상당하고, β 사슬은 740 번째 이후의 서열에 상당한다. IGF-I 수용체의 α 사슬은 IGF-I 의 결합 부분을 갖고, β 사슬은 막 관통형의 구조이고, 세포내로의 시그널을 전하는 작용을 한다. IGF-I 수용체의 α 사슬은, L1, CR, L2, FnIII-1 및 FnIII2a/ID/FnIII2b 의 도메인으로 나누어진다. 서열 번호 14 에 나타낸 인간 IGF-I 수용체의 아미노산 서열에 있어서는, 31 번째 내지 179 번째의 부분이 L1 도메인, 180 번째 내지 328 번째의 부분이 CR 도메인, 329 번째 내지 491 번째의 부분이 L2 도메인, 492 번째 내지 607 번째의 부분이 FnIII-1 도메인 및 608 번째 내지 735 번째까지가 FnIII-2a/ID/FnIII-2b 도메인에 상당한다. 그 중에서도 CR 도메인 (cysteine-rich domain) 은, IGF-I 가 IGF-I 수용체에 결합했을 때의 당해 수용체의 입체 구조의 변화에 수반하는, β 사슬의 세포내 티로신 키나아제의 활성화에 관여한다. 인간의 IGF-I 수용체의 아미노산 서열은, EMBL-EBI 의 UniProtKB-액세션 번호 P08069 등으로부터 참조하는 것이 가능하지만, 서열표의 서열 번호 14 에도 나타낸다.

IGF-I 수용체는 생체내의 조직이나 세포의 넓은 범위에서 발현하고 있는 것이 알려져 있고, IGF-I 에 의한 세포 증식의 유도나 세포내 시그널의 활성화 등의 자극을 받는다. 특히 근아 세포는 IGF-I 의 IGF-I 수용체를 통한 작용을, 세포 증식 활성을 지표로 하여 평가에 사용하는 것이 가능하다. 이러한 점에서 근아 세포는, IGF-I 수용체에 결합하는 항체의 작용을 해석하는 데에 있어서 유용하다. 또, 인간이나 그 밖의 척추 동물의 IGF-I 수용체의 아미노산 서열을 코드하는 핵산 분자를 발현 벡터에 도입하고, 곤충 세포 또는 포유류 유래의 배양 세포 등의 진핵 세포의 숙주에 도입한 재조합 체세포에 있어서, 그 세포막 상에 도입된 핵산이 코드하는 IGF-I 수용체를 발현시킴으로써, 인간이나 그 밖의 척추 동물의 IGF-I 수용체를 발현한 세포를 인공적으로 제조하는 것이 가능하다. 당해 IGF-I 수용체 발현 세포는 항체의 결합성의 해석이나 세포내로의 시그널의 전달 등의 검토에 사용할 수 있다.

[항 IGF-I 수용체 인간화 항체]

본 발명의 일 측면에 의하면, 신규한 항 IGF-I 수용체 인간화 항체가 제공된다 (이것을 이하 적절히 「본 발명의 항체」 라고 칭한다.).

본 개시에 있어서 「항체」 란, 디술파이드 결합에 의해 상호 결합된 적어도 2 개의 중 (H) 사슬 및 2 개의 경 (L) 사슬을 포함하는 당 단백질이다. 각각의 중사슬은, 중사슬 가변 영역 (VH 로 약기된다) 및 중사슬 정상 영역을 포함하고, 중사슬 정상 영역은, 3 개의 도메인, CH1, CH2 및 CH3 을 포함한다. 각각의 경사슬은, 경사슬 가변 영역 (VL 로 약기된다) 및 경사슬 정상 영역을 포함한다. 경사슬 정상 영역은, 1 개의 도메인, CL 을 포함한다. 경사슬의 정상 영역에는 λ 사슬 및 κ 사슬로 불리는 2 종류가 존재한다. 중사슬의 정상 영역에는 γ 사슬, μ 사슬, α 사슬, δ 사슬 및 ε 사슬이 존재하고, 그 중사슬의 차이에 의해, 각각 IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE 라는 항체의 아이소 타입이 존재한다. VH 및 VL 은, 또한 프레임 워크 영역 (FR) 이라고 칭해지는, 보다 보존되어 있는 4 개의 영역 (FR-1, FR-2, FR-3, FR-4) 과, 상보성 결정 영역 (CDR) 이라고 칭해지는 초가변성의 3 개의 영역 (CDR-1, CDR-2, CDR-3) 으로 세분된다. VH 는, 아미노 말단으로부터 카르복시 말단으로, FR-1, CDR-1 (CDR-H1), FR-2, CDR-2 (CDR-H2), FR-3, CDR-3 (CDR-H3), FR-4 의 순서로 서열된 3 개의 CDR 및 4 개의 FR 을 포함한다. VL 은, 아미노 말단으로부터 카르복시 말단으로, FR-1, CDR-1 (CDR-L1), FR-2, CDR-2 (CDR-L2), FR-3, CDR-3 (CDR-L3), FR-4 의 순서로 서열된 3 개의 CDR 및 4 개의 FR 을 포함한다. 중사슬 및 경사슬의 가변 영역은, 항원과 상호 작용하는 결합 도메인을 포함한다.

본 발명의 항체는, 항체의 단편 및/또는 유도체이어도 된다. 항체의 단편으로는, F(ab')2, Fab, Fv 등을 들 수 있다. 항체의 유도체로는, 정상 영역 부분에 인공적으로 아미노산 변이를 도입한 항체, 정상 영역의 도메인의 구성을 개변한 항체, 1 분자당 2 이상의 Fc 를 갖는 형태의 항체, 중사슬만 또는 경사슬만으로 구성되는 항체, 당 사슬 개변 항체, 이중 특이성 항체, 항체 또는 항체의 단편 화합물이나 항체 이외의 단백질과 결합시킨 항체 콘주게이트, 항체 효소, 나노 보디, 탠덤 scFv, 이중 특이성 탠덤 scFv, 디아바디 (Diabody), VHH 등을 들 수 있다. 또한, 본 발명에 있어서 간단히 「항체」 라고 하는 경우에는, 별도로 명기하지 않는 한, 항체의 단편 및/또는 유도체도 포함하는 것으로 한다.

본 개시에 있어서 「항원 항체 반응」 이란, IGF-I 수용체에 대해, 항체가 평형 해리 정수 (定數) (KD) 1 × 10^-7 M 이하의 친화성으로 결합하는 것을 말한다. 본 발명의 항체는, IGF-I 수용체에 대해, 통상 1 × 10^-5 M 이하, 그 중에서도 1 × 10^-6 M 이하, 나아가서는 1 × 10^-7 M 이하의 KD 로 결합하는 것이 바람직하다.

본 개시에 있어서, 항체가 항원에 대해 「특이성」 을 갖는이란, 항체와 그 항원 사이에 높은 항원 항체 반응이 일어나는 것을 말한다. 특히, 본 개시에 있어서 「IGF-I 수용체 특이적 항체」 란, IGF-I 수용체를 발현시킨 세포와 유의하게 항원 항체 반응을 나타내는 농도에 있어서, IGF-I 수용체의 일차 구조 (아미노산 서열) 및 고차 구조와 높은 유사성을 갖는 INSR 에 대한 항원 항체의 반응성이, Mock 세포에 대한 반응성의 1.5 배 이하인 경우를 말한다.

항원 항체 반응의 측정은, 당업자이면 고상 또는 액상의 계에서의 결합 측정을 적절히 선택하여 실시하는 것이 가능하다. 그러한 방법으로는, 효소 결합 면역 흡착법 (enzyme-linked immunosorbent assay : ELISA), 효소 면역 측정법 (enzyme immunoassay : EIA), 표면 플라즈몬 공명법 (surface plasmon resonance : SPR), 형광 공명 에너지 이동법 (fluorescence resonance energy transfer : FRET), 발광 공명 에너지 이동법 (luminescence resonance energy transfer : LRET) 등을 들 수 있지만, 그것들에 한정되는 것은 아니다. 또, 그러한 항원 항체 결합을 측정할 때, 항체 및/또는 항원을 효소, 형광 물질, 발광 물질, 방사성 동위 원소 등으로 표지를 실시하고, 그 표지한 물질의 물리적 및/또는 화학적 특성에 적합한 측정 방법을 사용하여 항원 항체 반응을 검출할 수도 있다.

본 발명의 항체는, IGF-I 수용체의 CR 도메인에 결합함으로써, IGF-I 수용체가 2 량체를 형성한 호모형의 수용체, 혹은 IGF-I 수용체와 INSR 이 2 량체를 형성한 헤테로형의 수용체를 활성화시킨다고 생각된다.

본 발명의 항체는, 각 CDR 서열로서, 특정한 아미노산 서열을 갖는 것이 바람직하다. 구체적으로는 이하와 같다. 또한, 본 발명에 있어서 아미노산 서열의 「동일성」 (identity) 이란, 일치하는 아미노산 잔기의 비율을 의미하고, 「상동성」 (similarity) 이란, 일치 또는 유사한 아미노산 잔기의 비율을 의미한다. 상동성 및 동일성은, 예를 들어 BLAST 법 (NCBI 의 PBLAST 의 디폴트 조건) 에 의해 결정할 수 있다.

여기서 「유사한 아미노산 잔기」 란, 동일한 화학적 특징 (예를 들어, 전하 또는 소수성) 을 갖는 측사슬을 갖는 아미노산 잔기를 의미한다. 유사한 아미노산 잔기로는, 예를 들어 이하의 조합을 들 수 있다.

1) 지방족 측사슬을 갖는 아미노산 잔기 : 글리신, 알라닌, 발린, 류신, 및 이소류신 잔기.

2) 지방족 하이드록실 측사슬을 갖는 아미노산 잔기 : 세린 및 트레오닌 잔기.

3) 아미드 함유 측사슬을 갖는 아미노산 잔기 : 아스파라긴 및 글루타민 잔기.

4) 방향족 측사슬을 갖는 아미노산 잔기 : 페닐알라닌, 티로신, 및 트립토판 잔기.

5) 염기성 측사슬을 갖는 아미노산 잔기 : 리신, 아르기닌, 및 히스티딘 잔기.

6) 산성 측사슬을 갖는 아미노산 잔기 : 아스파르트산 및 글루탐산 잔기.

7) 황 함유 측사슬을 갖는 아미노산 잔기 : 시스테인 및 메티오닌 잔기.

본 발명에 있어서, 중사슬 가변 영역의 CDR-1 (CDR-H1) 서열로는, 서열 번호 1 (SerTyrTrpMetHis), 또는 서열 번호 1 중 어느 1 지점의 아미노산 잔기가 치환된 아미노산 서열이 바람직하다. 또, 중사슬 가변 영역의 CDR-H1 서열은, 서열 번호 1 과 80 ％ 이상의 상동성 (바람직하게는 동일성) 을 갖는 것이 바람직하다.

중사슬 가변 영역의 CDR-2 (CDR-H2) 서열로는, 서열 번호 2 (GluThrAsnProSerAsnSerValThrAsnTyrAsnGluLysPheLysSer), 또는 서열 번호 2 중 어느 1 지점 혹은 2 지점의 아미노산 잔기가 치환된 아미노산 서열이 바람직하다. 또, 중사슬 가변 영역의 CDR-H2 서열은, 서열 번호 2 와 88 ％ 이상, 그 중에서도 94 ％ 의 상동성 (바람직하게는 동일성) 을 갖는 것이 바람직하다.

중사슬 가변 영역의 CDR-3 (CDR-H3) 서열로는, 서열 번호 3 (GlyArgGlyArgGlyPheAlaTyr), 또는 서열 번호 3 중 어느 1 지점 혹은 2 지점의 아미노산 잔기가 치환된 아미노산 서열이 바람직하다. 또, 중사슬 가변 영역의 CDR-H3 서열은, 서열 번호 3 과 75 ％ 이상, 그 중에서도 87 ％ 이상의 상동성 (바람직하게는 동일성) 을 갖는 것이 바람직하다.

경사슬 가변 영역의 CDR-1 (CDR-L1) 서열로는, 서열 번호 4 (ArgAlaSerGlnAsnIleAsnPheTrpLeuSer), 또는 서열 번호 4 중 어느 1 지점 혹은 2 지점의 아미노산 잔기가 치환된 아미노산 서열이 바람직하다. 또, 경사슬 가변 영역의 CDR-L1 서열은, 서열 번호 4 와 81 ％ 이상의 상동성, 그 중에서도 90 ％ 이상의 상동성 (바람직하게는 동일성) 을 갖는 것이 바람직하다.

경사슬 가변 영역의 CDR-2 (CDR-L2) 서열로는, 서열 번호 5 (LysAlaSerAsnLeuHisThr), 또는 서열 번호 5 중 어느 1 지점의 아미노산 잔기가 치환된 아미노산 서열이 바람직하다. 또, 경사슬 가변 영역의 CDR-L2 서열은, 서열 번호 5 와 85 ％ 이상의 상동성 (바람직하게는 동일성) 을 갖는 것이 바람직하다.

경사슬 가변 영역의 CDR-3 (CDR-L3) 서열로는, 서열 번호 6 (LeuGlnGlyGlnSerTyrProTyrThr), 또는 서열 번호 6 중 어느 1 지점 혹은 2 지점의 아미노산 잔기가 치환된 아미노산 서열이 바람직하다. 또, 경사슬 가변 영역의 CDR-L3 서열은, 서열 번호 6 과 77 ％ 이상, 그 중에서도 88 ％ 이상의 상동성 (바람직하게는 동일성) 을 갖는 것이 바람직하다.

특히, 본 발명의 항체는, 이하의 CDR 서열의 조합을 갖는 것이 바람직하다. CDR-H1 서열로서, 서열 번호 1 의 아미노산 서열, CDR-H2 서열로서, 서열 번호 2 의 아미노산 서열, CDR-H3 서열로서, 서열 번호 3 의 아미노산 서열, CDR-L1 서열로서, 서열 번호 4 의 아미노산 서열, CDR-L2 서열로서, 서열 번호 5 의 아미노산 서열, 및 CDR-L3 서열로서, 서열 번호 6 의 아미노산 서열.

또한, 항체에 있어서의 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2, 또는 CDR-L3 의 각 서열을 동정하는 방법으로는, 예를 들어 Kabat 법 (Kabat et al., The Journal of Immunology, 1991, Vol.147, No.5, pp.1709-1719) 이나 Chothia 법 (Al-Lazikani et al., Journal of Molecular Biology, 1997, Vol.273, No.4, pp.927-948) 을 들 수 있다. 이들 방법은, 이 영역의 당업자에게 있어서는 기술 상식이지만, 예를 들어 Dr. Andrew C. R. Martin's Group 의 인터넷 홈페이지 (http ://www.bioinf.org.uk/abs/) 로부터 개요를 아는 것도 가능하다.

본 발명의 항체인 면역 글로블린의 프레임 워크 서열은, 인간의 면역 글로블린의 각 클래스에 있어서의 프레임 워크 서열인 것이 바람직하다.

본 발명의 항체는, 중사슬 가변 영역 및 경사슬 가변 영역으로서, 특정한 아미노산 서열을 갖는 것이 바람직하다. 구체적으로는 이하와 같다. 또한, 본 개시에 있어서 「1 지점 혹은 수 지점」 이란, 특별히 설명문이 없는 한, 1 지점, 2 지점, 3 지점, 4 지점, 5 지점, 6 지점, 7 지점, 8 지점, 9 지점, 또는 10 지점 중 어느 것을 가리키는 것으로 한다.

본 발명의 항체의 중사슬 가변 영역으로는, 서열 번호 7, 서열 번호 7 중 어느 1 지점 혹은 수 지점의 아미노산 잔기가 치환된 아미노산 서열, 또는 서열 번호 7 과 90 ％ 이상의 상동성 (바람직하게는 동일성) 을 갖는 아미노산 서열이 바람직하다. 또, 본 발명의 항체의 경사슬 가변 영역으로는, 서열 번호 8, 서열 번호 8 중 어느 1 지점 혹은 수 지점의 아미노산 잔기가 치환된 아미노산 서열, 또는 서열 번호 8 과 90 ％ 이상의 상동성 (바람직하게는 동일성) 을 갖는 아미노산 서열이 바람직하다.

특히, 본 발명의 항체는, 중사슬 가변 영역으로서 서열 번호 7 을 가짐과 함께, 경사슬 가변 영역으로서 서열 번호 8, 또는 서열 번호 8 의 36 번째 (Kabat 번호 : L36) 가 Tyr 로부터 Ala, Ser, Phe 혹은 Cys 로 치환된 아미노산 서열을 포함하는 서열 (각각 서열 번호 9, 서열 번호 10, 서열 번호 11 및 서열 번호 12) 을 갖는 것이 바람직하다.

본 발명의 항체의 중사슬 및 경사슬의 각 프레임 워크 영역 및/또는 각 정상 영역의 아미노산 서열은, 예를 들어 인간의 IgG, IgA, IgM, IgE, 및 IgD 의 각 클래스 그리고 그들의 변이체에서 선택하는 것이 가능하다. 일례에 의하면, 본 발명의 항체의 중사슬 정상 영역은, 인간의 IgG4 의 중사슬 정상 영역이다.

[항 IGF-I 수용체 인간화 항체의 에피토프]

본 발명의 항체는, IGF-I 수용체의 CR 도메인을 에피토프로 한다. 바람직하게는, 본 발명의 항체는, 서열 번호 14 (인간 IGF-I 수용체) 의 아미노산 번호 308 내지 319 에 상당하는 아미노산 서열 (ProSerGlyPheIleArgAsnGlySerGlnSerMet) 을 갖는 펩티드를 포함하는 에피토프 또는 그 근방에 결합한다. 본 발명의 항체는, IGF-I 수용체의 CR 도메인에 결합함으로써, IGF-I 수용체가 2 량체를 형성한 호모형의 수용체, 혹은 IGF-I 수용체와 INSR 이 2 량체를 형성한 헤테로형의 수용체를 활성화시킨다고 생각된다. 단, 후술하는 본 발명의 아고니스트 항체 (아고니스트 항체인 본 발명의 항체) 는, IGF-I 수용체의 일차 구조 (아미노산 서열) 및 고차 구조와 높은 유사성을 갖는 INSR 에 대해서는 결합성을 갖지 않는다.

[IGF-I 수용체 아고니스트 항체 및 안타고니스트 항체]

본 발명의 항체는, 아고니스트 항체와 안타고니스트 항체의 양방을 포함한다 (이하, 아고니스트 항체인 본 발명의 항체를 적절히 「본 발명의 아고니스트 항체」 라고 칭하고, 안타고니스트 항체인 본 발명의 항체를 적절히 「본 발명의 안타고니스트 항체」 라고 칭한다). 본 발명의 아고니스트 항체는, 단독으로 작용시켰을 경우, IGF-I 에 의한 근아 세포의 증식 활성을 항진하는 작용을 갖는다. 한편, 본 발명의 안타고니스트 항체는, IGF-I 와 동시에 작용시켰을 경우, IGF-I 에 의한 근아 세포의 증식 활성을 저해하는 작용을 갖는다.

본 발명의 아고니스트 항체는, 인간 IgG 클래스 또는 그 변이체인 것이 바람직하고, 인간 IgG4 서브 클래스 혹은 그 변이체, 또는 인간 IgG1 서브 클래스 혹은 그 변이체인 것이 바람직하다. 1 개의 예에서는, 안정화 IgG4 정상 영역은, Kabat 의 계에 의해, 힌지 영역의 위치 241 에 있어서 프롤린을 포함한다. 이 위치는, EU 부번 (付番) 방식 (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, DIANE Publishing, 1992, Edelman et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA, 63, 78-85, 1969) 에 의해, 힌지 영역의 위치 228 에 대응한다. 인간 IgG4 에서는, 이 잔기는 일반적으로 세린이고, 세린의 프롤린으로의 치환으로 안정화를 유도할 수 있다. 1 개의 예에서는, IgG1 의 정상 영역에 N297A 변이를 도입하여 Fc 수용체에 대한 결합 및/또는 보체를 고정시키는 능력을 가능한 한 억제할 수 있다.

본 발명의 아고니스트 항체는, IGF-I 수용체의 특이적인 도메인에 강력하게 결합하여, 인비트로에서 근아 세포의 증식 활성의 항진 작용을 갖는다.

또, 본 발명의 아고니스트 항체는, 인비트로에서의 분화 근세포의 글루코오스 흡수 항진 작용을 갖지 않다는 특징을 갖는다. 구체적으로, 본 발명의 아고니스트 항체는, 근아 세포 (예를 들어, 인간 또는 모르모트에서 유래하는 근아 세포) 의 증식 활성을 항진시키는 작용 농도, 보다 바람직하게는 작용 농도보다 10 배 높은 농도, 더욱 바람직하게는 100 배 높은 농도에서도, 인비트로에서의 배양 분화 근세포의 글루코오스 흡수 항진 작용을 갖지 않는다.

또, 본 발명의 아고니스트 항체는, 근육량 증가 작용을 나타내는 용량에 있어서, 혈당 저하 작용을 갖지 않는다는 특징을 갖는다. IGF-I 는, 근육량 증가 작용을 나타내는 용량으로 투여했을 경우, 현저한 혈당 저하 작용을 갖는다. 그러나, 본 발명의 아고니스트 항체는, 척추 동물의 근육량 및/또는 체장의 증가를 유도하는 용량에 있어서, 당해 척추 동물의 혈당값을 저하시키는 작용을 갖지 않는다. 바람직하게는, 본 발명의 아고니스트 항체는, 척추 동물의 근육량 및/또는 체장의 증가를 유도하는 유효 용량의 10 배 이상의 혈중 노출량이 되도록 투여했을 경우조차도, 척추 동물의 혈당값을 저하시키는 작용을 갖지 않는다.

또한, 본 발명의 아고니스트 항체는, 모르모트에 단회 투여했을 경우에, IGF-I 를 지속 투여했을 때의 근육량 증가 작용과, 동일한 정도의 인비보 활성을 갖는다. 또, 본 발명의 아고니스트 항체는, 혈중 반감기가 길고, 동물에 대한 단회 투여에 의해 근육량 증가 작용을 나타낸다.

이상으로부터, 본 발명의 아고니스트 항체는, IGF-I 로 기대되는, 폐용성 근위축 및 저신장증 등의 IGF-I 수용체가 관련되는 여러 가지 질환의 치료약 또는 예방약이 될 가능성을 갖고, IGF-I 의 문제점인, 혈당 저하 작용을 극복하여, 혈중 반감기를 장기화하는 것이 가능하다.

한편, 본 발명의 안타고니스트 항체는, IGF-I 가 IGF-I 수용체에 결합하는 것을 저해하는 작용을 갖는다.

본 발명의 안타고니스트 항체의 하나의 양태는, IGF-I 수용체를 활성화하지만, IGF-I 에 의한 IGF-I 수용체에 대한 작용을 저해하는 항체이다. 이 경우, 당해 항체는 IGF-I 의 상가적 (相加的) 인 아고니스트 활성, 예를 들어 근아 세포의 IGF-I 에 의한 증식 유도 활성을 없애는 작용이 있다.

본 발명의 안타고니스트 항체의 다른 양태는, IGF-I 수용체와 결합하지만, IGF-I 수용체를 활성화시키지 않는 항체이다. 이와 같은 IGF-I 수용체의 가교에 의한 활성화를 일으키지 않는 안타고니스트 항체의 예로는, Fab, scFv 등의 항원 결합성이 1 가인 항체, 이중 특이성 항체와 같이 2 가의 결합 부위를 갖지만 그 편측의 결합 부위만이 IGF-I 수용체의 특이적 도메인에 결합하는 항체, 또는 2 가의 결합 부위의 거리를 링커 등으로 변화시킨 항체 등이 있다. 그러나, 본 양태의 안타고니스트 항체는, 이들에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 안타고니스트 항체 중, IGF-I 수용체와 결합하지만, 아고니스트 활성을 갖지 않는 양태의 항체에 대해서는, 항체와 IGF-I 수용체의 항원 항체 반응을 측정하는 방법에 의해, IGF-I 수용체에 대한 결합성을 갖는 것, 근아 세포 등의 세포에서의 세포 증식 시험에 의해 세포 증식의 유도 활성을 갖지 않는 것을 확인할 수 있다.

또, 본 발명의 안타고니스트 항체는, 인비트로에서의 분화 근세포의 글루코오스 흡수나 인비보에서의 혈당값에 대해 영향을 미치지 않는다. 따라서, 본 발명의 안타고니스트 항체는, 고혈당 등의 부작용을 나타내지 않는 항 IGF-I 수용체 인간화 항체로서, 유방암, 대장암, 사르코마, 폐암, 전립선암, 갑상선암, 미엘로마 등의 악성 종양 등의 치료약 또는 예방약이 될 가능성을 가지고 있다.

[교차 반응]

본 발명의 항체는, 다른 척추 동물의 IGF-I 수용체에 대해 교차 반응을 갖는 것이 바람직하다. 교차 반응이란, 그 항체가 항원 항체 반응을 하는 IGF-I 수용체의 동물종 (예를 들어 인간) 과는 상이한, 다른 동물종의 항원에 대한 항체의 결합성을 나타낸다. 그 항체가 항원 항체 반응을 하는 IGF-I 수용체의 동물종 이외인, 인간, 또는 모르모트, 원숭이, 토끼, 소, 돼지, 말, 양, 개 혹은 닭을 포함하는 비인간 동물의 IGF-I 수용체와 교차 반응성을 갖는 것이 바람직하다. 후술하는 실시예 4 에 있어서, 항 IGF-I 수용체 인간화 항체인 R11-16B 는, 인간 IGF-I 수용체의 CR 도메인에 있어서의 ProSerGlyPheIleArgAsnGlySerGlnSerMet 의 서열과 결합하는 것이 나타났다. 원숭이 (필리핀 원숭이), 토끼, 모르모트, 소, 양, 말 및 개의 IGF-I 수용체의 상동적인 부분에 있어서, 이 ProSerGlyPheIleArgAsnGlySerGlnSerMet 의 서열이 보존되어 있고, 이들 종 사이에서의 IGF-I 수용체와 결합 교차성이 있다. 또, 마우스 및 래트에 있어서는, 당해 상동적인 부분의 아미노산 서열이 ProSerGlyPheIleArgAsnSerThrGlnSerMet 로 되어 있고, 이 부분에 결합하는 항 IGF-I 수용체 항체를 취득함으로써, 마우스나 래트 등의 IGF-I 수용체와 결합하여, R11-16B 와 동일한 성상이나 기능을 갖는 항체를 취득하는 것이 가능하다.

또, 본 발명의 항체와 교차 반응하지 않는 동물의 종을 사용하여, 그 세포나 동물을 유전자 공학적으로 개변시킴으로써, 본 발명의 항체가 교차 반응하는 IGF-I 수용체를 발현하는 세포나 동물을 제조할 수도 있다.

[척추 동물 유래 세포의 증식 유도 활성, 근육량 및/또는 체장의 증가의 유도 활성]

본 발명의 어느 양태에 있어서의 항 IGF-I 수용체 인간화 항체는, 척추 동물 유래 세포의 증식 유도 활성을 갖는다. IGF-I 수용체 아고니스트 항체의 존재는 이미 알려져 있었지만, 초대 배양 세포, 그 중에서도 근아 세포에 있어서 세포의 증식 유도 활성을 나타낸 항체의 보고는 없었다. 또한, 인비트로에 있어서 IGF-I 의 EC₅₀ 값보다 저용량으로 세포의 증식 유도 활성을 갖는 항체의 보고도 없었다.

또한, 본 개시에 있어서 「척추 동물 유래 세포」 란, 바람직하게는 포유류, 조류, 파충류, 양서류 또는 어류에서 유래하는 세포이고, 보다 바람직하게는 포유류 또는 조류에서 유래하는 세포이고, 더욱 더 바람직하게는, 인간, 원숭이, 토끼, 모르모트, 소, 돼지, 양, 말 또는 개에서 유래하는 세포이다. 이들 종에서 유래하는 세포이고, IGF-I 수용체를 발현하며, 당해 IGF-I 수용체에 본 발명의 항체가 교차 반응하는 세포이면, 본 발명의 항체에 의해 세포 증식이 유도될 수 있다. 또, 본 발명의 항체와 교차 반응성이 있는 종의 IGF-I 수용체가 발현되도록 개변된 세포나 동물, 또는 당해 개변 동물에서 유래하는 세포도, 본 개시에 있어서의 「척추 동물 유래 세포」 에 포함된다.

척추 동물 유래 세포의 인비트로에 있어서의 증식 유도 활성을 조사하기 위한 세포로는, 초대 배양 세포, 주화 세포, 또는 그들 세포의 형질 전환 체세포 등을 사용하는 것이 가능하다.

본 개시에 있어서 「초대 배양 세포」 란, 생물의 장기나 조직으로부터 분리된 세포로, 통상은 어느 정도의 계대수에서의 계대 배양이 가능한 것을 말한다. 척추 동물 유래의 초대 배양 세포는, 척추 동물의 장기나 조직으로부터 효소 처리, 물리적 방법에 의한 분산 또는 explant 법 등의 수법으로 얻을 수 있다. 또, 척추 동물로부터 얻어진 장기나 조직, 또는 그들의 단편을 사용하는 것도 가능하다. 그들의 당해 초대 세포를 조제하는 장기나 조직으로는, 바람직하게는 갑상선, 부갑상선이나 부신 등의 내분비 조직, 충수, 편도선, 림프절이나 비장 등의 면역 조직, 기관이나 폐 등의 호흡기, 위, 십이지장, 소장이나 대장 등의 소화기, 신장이나 방광 등의 비뇨기, 수정관, 고환이나 전립선 등의 웅성 생식기, 유방이나 난관 등의 자성 생식기, 심근이나 골격근 등의 근조직 등을 들 수 있고, 보다 바람직하게는 간장, 신장 혹은 소화기 또는 근조직 등이고, 더욱 더 바람직하게는 근조직이다. 본 발명의 항체의 증식 유도 활성을 조사하기 위해서 사용되는 당해 초대 배양 세포로는, IGF-I 수용체를 발현하고, 그 IGF-I 수용체와 결합하는 IGF-I 에 의해 증식이 유도되는 세포가 사용된다. 그 대표로는, 근조직으로부터 분리된 초대 배양 세포인 골격근 근아 세포 등이 사용된다. 인간이나 동물 유래의 초대 배양 세포로는, 분양이나 시판되고 있는 것을 입수하여 사용할 수도 있다. 인간 초대 배양 세포는, 예를 들어 ATCC ^{(등록상표)}, ECACC, Lonza, Gibco ^{(등록상표)}, Cell Applications, ScienCell research laboratories, PromoCell 등의 기관이나 회사로부터 입수할 수 있다.

본 개시에 있어서 「주화 세포」 란, 생물에서 유래하는 세포가 불사화 (不死化) 되어 일정한 성질을 유지하면서 반영구적으로 증식할 수 있는 배양 세포를 말한다. 주화 세포에는 비종양 유래의 것과, 종양 유래의 것이 존재한다. 본 발명의 항체에 의한 증식 유도 활성을 조사하기 위한 척추 동물 유래의 주화 세포로는, IGF-I 수용체를 발현하고, 그 IGF-I 수용체와 결합하는 IGF-I 에 의해 증식이 유도되는 세포가 사용된다. IGF-I 수용체를 발현하고, IGF-I 에 의해 세포 증식이 유도되는 주화 세포로는, 예를 들어 인간 신경아 세포종 SH-SY5Y, 인간 표피 각화 세포주 HaCaT, 인간 폐포 기저 상피 선암 세포주 A549, 인간 결장선암 세포주 Caco-2, 인간 간암 유래 세포주 HepG2, 인간 자궁 경부암 세포주 Hela, 인간 자궁 경부암 세포주 SiHa, 인간 유방암 세포주 MCF7, 인간 다능성 태생기암 NTERA-2 나 인간 골육종 세포주 U-2-OS 등이 있지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.

본 개시에 있어서, 본 발명의 항체에 의한 증식 유도 활성을 조사하기 위해서 사용할 수 있는 형질 전환 체세포로는, 전술한 초대 배양 세포나 주화 세포의 형질 전환 체세포를 들 수 있다. 그러한 형질 전환 세포의 일례로는, 초대 배양 세포로부터 제조한 iPS 세포나, 그 iPS 세포로부터 분화 유도한 세포나 조직 등을 들 수 있다. 또, 다른 형질 전환 세포의 예로는, 초대 배양 세포나 주화 세포에 유전자를 도입하여 일과적 또는 지속적으로 발현시킨 세포도 당해 형질 전환 세포에 포함된다. 당해 세포에 도입하여 발현시키는 유전자로는, 인간 또는 다른 종의 IGF-I 수용체의 유전자를 포함해도 된다.

척추 동물 유래의 세포에 있어서의 본 발명의 항체에 의한 세포의 증식 유도 활성을 조사하는 방법으로는, 세포수 계측, DNA 합성량의 측정, 대사 효소 활성의 변화량의 측정 등을 들 수 있다. 세포수 계측의 방법은, 혈구 산정반을 사용한 방법이나 쿨터 카운터 등의 세포수 계측 장치를 사용한 방법이 있고, DNA 합성량을 측정하는 방법으로는, [3H]-티미딘이나 5-브로모-2'-데옥시우리딘 (BrdU) 의 흡수에 의한 측정 방법, 대사 효소 활성의 변화량을 보는 방법으로는, MTT 법, XTT 법이나 WST 법 등이 있지만, 당업자이면 적절히 그 밖의 방법 등으로도 실시할 수 있다.

세포의 증식 유도 활성은, 시험에 사용하는 배양 세포에 대해, 본 발명의 항체를 반응시켰을 경우 쪽이, 당해 항체를 반응시키지 않은 경우보다 세포의 증식이 상승하고 있는 것으로 판정할 수 있다. 이 경우, 당해 유도 활성의 대조로서, 동 조건으로 본래의 IGF-I 수용체의 리간드인 IGF-I 를 반응시킨 측정을 실시하면, 그 활성의 평가에 편리하다. 시험을 실시하는 배양 세포에 대해, 본 발명의 항체 및 IGF-I 를 각각의 농도를 변화시켜 반응시켰을 때, 최대의 증식 유도 활성의 50 ％ 를 나타낼 때의 농도를 EC₅₀ 값으로서 나타낸다. 인간 골격근 근아 세포를 사용하여 증식 유도 활성을 평가했을 경우, 바람직하게는 본 발명의 항체의 세포 증식 유도 활성은 IGF-I 와 동등한 EC₅₀ 값이고, 보다 바람직하게는 본 발명의 항체의 EC₅₀ 값은 IGF-I 의 1/10 이하이고, 더욱 바람직하게는 1/20 이하이고, 더욱 더 바람직하게는 본 발명의 항체의 EC₅₀ 값은 IGF-I 의 1/50 이하이다. 또, 인간 골격근 근아 세포를 사용하여 증식 유도 활성을 평가했을 경우, 본 발명의 항체의 EC₅₀ 값은, 바람직하게는 0.5 n㏖/ℓ 이하이고, 보다 바람직하게는 0.3 n㏖/ℓ 이하이고, 더욱 바람직하게는 0.1 n㏖/ℓ 이하이다.

척추 동물 유래 세포의 인비보에 있어서의 증식 유도 활성을 조사하는 방법으로는, 당해 척추 동물에 본 발명의 항체를 투여하고, 투여된 개체 전체, 또는 투여된 개체에 있어서의 장기 또는 조직의 중량, 크기, 세포수 등의 변화를 계측하거나, 당해 척추 동물 세포가 이식된 동물을 사용하여, 당해 이식을 받은 개체에 있어서 당해 이식된 척추 동물 세포를 포함하는 이식편의 중량, 크기, 세포수 등의 변화를 계측함으로써 조사할 수 있다. 개체 전체에서의 계측에서는, 체중, 체장, 사지 주위 길이 등의 측정이나, 임피던스법에 의한 체조성 측정, 크레아티닌, 신장 계수 등이 사용된다. 개체에서의 장기나 조직, 또는 이식편의 계측에 대해서는, 인간 이외의 동물에서는 직접 목적으로 하는 장기, 조직 또는 이식편을 회수하고, 중량, 크기나 포함되는 세포수의 산정 등이 실시된다. 또, 비침습적으로 개체의 장기, 조직 또는 이식편을 계측하는 방법으로는, X 선 촬영 이미지나 CT, MRI 에 의한 화상 해석, 동위 원소나 형광 물질에 의한 트레이서를 사용한 조영법 등이 사용된다. 대상이 되는 조직이 골격근인 경우에는, 근력의 변화 등이 지표가 된다. 그 밖에, 당업자이면 적절히 그 밖의 방법을 사용함으로써, 본 발명의 항체의 척추 동물 유래 세포의 인비보에 있어서의 증식 유도 활성에 대한 작용을 조사할 수 있다. 본 발명의 항체의 인비보에 있어서의 척추 동물 유래 세포의 증식 유도 활성을 조사하기 위해서는, 본 발명의 항체를 투여한 개체와, 본 발명의 항체 이외의 항체 또는 다른 대조 물질이 투여된 개체 사이에서, 상기에서 나타낸 방법 등으로의 계측 등을 실시한 결과를 비교함으로써 평가할 수 있다.

본 발명의 항체는, 세포에 접촉시킨 시간에 대해, 증식 유도하는 작용의 지속성이 천연형 IGF-I 에 대해 길다는 특징을 갖는다. 인비트로에서의 세포 증식 유도 활성에 있어서, 천연형 IGF-I 는, 세포에 접촉시킨 후에 IGF-I 를 포함하지 않는 배지에서 세정하면 세포 증식 유도 활성이 소실되어 버리는 데에 대해, 본 발명의 항체의 설계의 기 (基) 가 된 마우스 항체인 IGF11-16 항체 (일본 특허출원 : 일본 특허출원 2017-106529) 는, 세포에 접촉시킨 후 IGF11-16 항체를 포함하지 않는 배지로 세정했을 경우에도, 세포의 증식 유도 활성이 지속되어 있었다. 또, 후술하는 실시예 8 에 있어서, IGF-I 와 본 발명의 항체인 R11-16B 항체의 혈중 동태를 비교하고 있지만, 천연형 IGF-I 는 동물에 대한 투여 후 24 시간까지 약 50 ％ 이상이 혈중으로부터 소실되는 데에 대해, R11-16B 항체는 동물에 투여된 후, 48 시간 후에도 60 ％ 이상이 혈중에 존재하므로, 장기간에 걸쳐서 혈중에 존재하고 있는 것이 나타났다. 이러한 점에서, 본 발명의 항체는, 인비트로 및 인비보에 있어서 긴 세포 증식 유도 효과를 나타내는 것을 알 수 있다.

또, 본 발명의 항체의 인비보에서의 효과로는, 근육량 및/또는 체장의 증대 효과를 들 수 있다. IGF-I 는 골격근에 있어서 상기 서술한 근아 세포의 증식이나 분화에 작용하는 것 외에, 근섬유를 굵게 하는 작용도 있으며, 그러한 종합적인 작용으로서 근육량을 증대시키는 효과가 있다고 생각되고 있다. 본 발명의 항체도 IGF-I 와 동일하게 동물에 투여함으로써, 당해 동물의 근육량을 증대시키는 효과를 갖는다. IGF-I 수용체 아고니스트 항체의 작용으로서, 인비보에서 근육의 증대 작용을 갖는 것이 나타난 것은, 본 발명의 항체가 처음이다.

본 발명의 항체에 의한 근육량의 증대 효과를 계측하는 방법으로는, 개체 전체에서의 계측에서는, 체중, 체장, 사지 주위 길이 등의 측정이나, 임피던스법에 의한 체조성 측정, 크레아티닌, 신장 계수 등이 사용되고, 또, CT, MRI 에 의한 화상 해석, 동위 원소나 형광 물질에 의한 트레이서를 사용한 조영법 등의 방법이 사용되는 것 외에, 근력의 변화 등도 지표가 된다. 또, 인간 이외의 동물에서는 직접 근육을 채취하여 그 중량이나 크기를 계측하는 방법 등도 가능하다. 근육량의 증가의 효과는, 본 발명의 항체가 투여된 개체와 당해 항체가 투여되지 않았던 개체에서의 근육량의 증가를 비교하는 것, 또는 하나의 개체로 본 발명의 항체를 투여하기 전과 투여한 후에서의 근육량의 비교를 실시함으로써 평가할 수 있다. 근육량의 증가의 효과는, 본 발명의 항체가 투여에 의해 근육량의 증가의 차가 보이면, 그 효과를 알 수 있지만, 본 발명의 항체가 투여된 개체와 투여되지 않았던 개체, 또는 본 발명의 항체가 투여되기 전과 후에서, 바람직하게는 103 ％ 이상, 보다 바람직하게는 104 ％ 이상의 근육량의 차가 관찰됨으로써 본 발명의 항체의 투여에 의한 효과를 판단하는 것이 가능하다. IGF-I 는 뼈의 성장에도 관여하여, 체장 (인간의 경우에는 신장) 을 증대시키는 작용도 있다. 따라서, 본 발명의 항체도, 동물에 투여함으로써 체장을 증대시키는 효과를 갖는다. 본 발명의 항체에 의한 체장 증대의 효과는, 개체의 체중, 체장, 사지 주위 길이 등의 측정에 의해 계측하는 것이 가능하다.

[척추 동물 유래 세포에서의 글루코오스 흡수 및/또는 동물에서의 혈당값에 대한 작용]

일 양태에 의하면, 본 발명의 항체는, 척추 동물 유래의 분화 근세포에서의 세포내로의 글루코오스의 흡수 작용 및/또는 척추 동물에서의 혈당값에 영향을 미치지 않는다는 특징을 갖는다. IGF-I 는, IGF-I 수용체에 대한 아고니스트 작용의 일부로서, 세포로의 글루코오스의 흡수의 항진이나 혈당값의 저하 작용을 일으키는 것이 알려져 있다. 그러나, IGF-I 수용체 아고니스트 항체로서 기능하는 본 발명의 아고니스트 항체는, 척추 동물 유래 세포에서의 증식 유도 활성의 인비트로에 있어서의 EC₅₀ 값의 100 배 이상의 용량에 있어서도, 분화 근세포에서의 글루코오스 흡수를 유도하지 않고, 또, 동물에 비경구적으로 투여했을 경우에 근육량의 증가를 유도하는 유효 용량의 또한 10 배 이상의 혈중 노출량에서도, 혈당값을 변동시키지 않는다는 특징을 나타낸다는, 예상외의 효과를 갖는다. 또, IGF-I 수용체 안타고니스트 항체로서 기능하는 본 발명의 안타고니스트 항체도, 척추 동물 유래 세포의 분화 근세포에서의 글루코오스 흡수 및/또는 척추 동물에서의 혈당값에 영향을 미치지 않는다는 특징은, 종래의 IGF-I 수용체 안타고니스트 항체를 인간의 치료에 사용할 때의 미충족의 과제인 고혈당 등을 회피하는 데에 있어서 유리한 효과이다. 또한, 본 개시에 있어서의 척추 동물 유래 세포에 대해서는 전술한 바와 같다.

본 발명의 항체가 갖는, 척추 동물 유래 세포의 인비트로에 있어서의 세포내로의 글루코오스 흡수에 영향을 미치지 않는다는 특징을 조사하기 위한 세포로는, 초대 배양 세포, 주화 세포, 또는 그들 세포의 형질 전환 체세포 등을 사용하는 것이 가능하다. 또한, 본 개시에 있어서의 초대 배양 세포, 주화 세포, 및 형질 전환 체세포에 대해서는, 어느 것도 전술한 바와 같다.

척추 동물 유래의 세포에 있어서의 본 발명의 항체에 의한 글루코오스 흡수에 미치는 영향을 조사하는 방법으로는, 세포내 글루코오스 농도의 측정, 글루코오스 유연 (類緣) 트레이서 물질의 세포내 흡수량의 측정, 글루코오스 트랜스포터의 변화의 측정 등을 들 수 있다. 글루코오스 농도의 측정 방법은, 효소법 등의 흡광도 측정법이 있고, 글루코오스 유연 트레이서 물질의 세포내 흡수량을 측정하는 방법으로는, [3H]-2'-데옥시글루코오스의 흡수량의 측정, 글루코오스 트랜스포터의 변화를 보는 방법으로는, 세포 면역 염색법, 웨스턴 블롯 등이 있지만, 당업자이면 적절히 그 밖의 방법 등으로도 실시할 수 있다. 세포내로의 글루코오스 흡수에 미치는 영향은, 시험에 사용하는 배양 세포에 대해, 본 발명의 항체를 반응시켰을 경우의 세포내로의 글루코오스 흡수가, 당해 항체를 반응시키지 않은 경우와 동일한 정도인 것으로 판정할 수 있다. 이 경우, 당해 유도 활성의 대조로서, 동일한 조건으로 본래의 IGF-I 수용체의 리간드인 IGF-I 를 반응시킨 측정을 실시하면, 그 활성의 평가에 편리하다.

시험을 실시하는 배양 세포에 대해, 본 발명의 항체 및 IGF-I 를 각각의 농도를 변화시켜 반응시켰을 때, 무처치군의 세포내로의 글루코오스 흡수를 100 ％ 로 했을 경우의 글루코오스 흡수량으로서 나타낸다. 인간 분화 근세포를 사용하여 글루코오스 흡수량을 평가했을 경우, 바람직하게는 본 발명의 항체의 글루코오스 흡수량은 동일 농도의 IGF-I 의 글루코오스 흡수량 이하이고, 보다 바람직하게는 본 발명의 항체의 글루코오스 흡수량은 무처치군의 110 ％ 이하이고, 더욱 바람직하게는 본 발명의 항체의 글루코오스 흡수량은 무처치군과 동등한 100 ％ 이다. 또, 인간 분화 근세포를 사용하여 글루코오스 흡수량을 평가했을 경우, 본 발명의 항체를 100 n㏖/ℓ 첨가했을 경우의 글루코오스 흡수량은, 바람직하게는 110 ％ 이하이고, 보다 바람직하게는 105 ％ 이하이고, 더욱 바람직하게는 95 내지 100 ％ 이다.

척추 동물 유래 세포의 인비보에 있어서의 글루코오스 흡수를 조사하는 방법으로는, 당해 척추 동물에 본 발명의 항체를 투여하고, 투여된 개체에 있어서의 장기 또는 조직 중의 글루코오스 함량 등의 변화를 계측함으로써 조사할 수 있다. 개체 전체에서의 계측에서는, 혈당값 등의 측정이나, 당화 단백질을 지표로 한 헤모글로빈 A1C 등이 사용된다. 개체에서의 장기나 조직 중의 글루코오스 흡수량 등의 측정에 있어서는, 인간 이외의 동물에 있어서는 직접 목적으로 하는 장기 또는 조직을 회수하여, 글루코오스 함량 또는 트레이서의 산정 등이 실시된다. 또, 비침습적으로 개체의 장기 또는 조직 중의 글루코오스 흡수를 측정하는 방법으로는, X 선 촬영 이미지나 CT, MRI 에 의한 화상 해석, 동위 원소나 형광 물질에 의한 트레이서를 사용한 조영법 등이 사용된다. 대상이 되는 조직이 골격근인 경우에는, 글루코오스 클램프 등도 지표가 된다. 그 밖에, 당업자이면 적절히 그 밖의 방법을 사용함으로써, 본 발명의 항체의 척추 동물 유래 세포의 인비보에 있어서의 글루코오스 흡수에 미치는 영향을 조사할 수 있다.

또, 본 발명의 항체는, 척추 동물에 투여되었을 경우, 당해 척추 동물의 근육량의 증가를 유도하는 유효 용량에 대하여, 동일 용량, 바람직하게는 10 배 이상의 용량에 있어서도, 당해 척추 동물의 혈당값을 변동시키지 않는 것을 특징으로 한다. 본 발명의 항체의 척추 동물에서의 혈당값의 변화를 조사하기 위한 동물로는, 바람직하게는 포유류, 조류, 파충류, 양서류 또는 어류에 속하는 동물이고, 보다 바람직하게는 포유류 또는 조류에 속하는 동물이고, 더욱 더 바람직하게는, 인간, 원숭이, 토끼, 모르모트, 소, 돼지, 양, 말 또는 개이다. 또, 본 발명의 항체와 교차 반응성이 있는 종의 IGF-I 수용체가 발현되도록 개변된 동물도, 본 발명의 항체의 척추 동물에서의 혈당값의 변화를 조사하기 위한 동물에 포함된다. 혈당값의 측정은, 관혈적 방법으로는 비색법이나 전극법 등이 사용되고, 검출을 위한 효소에는 글루코오스옥시다아제법 (GOD 법), 글루코오스데하이드로게나아제법 (GDH 법) 등이 있고, 비관혈적 방법으로는 광학적 측정법 등이 있지만, 당업자이면 적절히 그 밖의 방법도 선택할 수 있다. 혈당값은 인간인 경우, 공복시 혈당값의 정상역은, 100 ㎎/㎗ ∼ 109 ㎎/㎗ 이다. 혈당값에 대한 약제 투여에 의한 유해 사상은 (유해 사상 공통 용어 규준 v4.0), 혈당값이 77 ㎎/㎗ ∼ 55 ㎎/㎗ 의 범위보다 낮은 값이 되는 경우에는 저혈당, 109 ㎎/㎗ ∼ 160 ㎎/㎗ 의 범위보다 높은 값이 되는 경우에는 고혈당으로 정의되어 있다. 약제 투여에 의한 혈당값에 미치는 영향이 없다란, 약제 투여 후의 혈당값이 55 ㎎/㎗ 보다 위이고 160 ㎎/㎗ 미만의 범위 내가 되는 것, 보다 바람직하게는 77 ㎎/㎗ 보다 위이고 109 ㎎/㎗ 미만의 범위 내가 되는 것이다. 단, 혈당값은 투여하는 동물에 따라 정상값이나 그 변동의 폭이 상이하고, 또 인간이어도 투여시의 혈당값이 반드시 정상값의 범위라고는 할 수 없으므로, 본 개시에 있어서 척추 동물의 혈당값을 변동시키지 않는다란, 본 발명의 항체가 투여된 척추 동물의 혈당값이 바람직하게는 30 ％ 이내, 보다 바람직하게는 20 ％ 이내, 더욱 더 바람직하게는 10 ％ 이내의 변화인 것을 말한다.

[항 IGF-I 수용체 인간화 항체의 제법]

본 발명의 항체는, IGF-I 수용체에 대한 마우스 모노클로날 항체 IGF11-16 (마우스 IGF11-16 항체, 일본 특허출원 : 일본 특허출원 2017-106529) 을 인간화함으로써 취득할 수 있다. 그러한 인간화 항체의 취득 방법의 예는, 후술하는 실시예 1 에 기재되어 있고, 그에 따라 얻어진 인간화 항체로는, 서열 번호 7 의 VH 아미노산 서열, 서열 번호 8, 9, 10, 11 또는 12 의 VL 아미노산 서열을 갖는 인간화 항체 (R11-16B, R11-16C, R11-16D, R11-16E 또는 R11-16F) 를 들 수 있다. 그러나, 본 발명의 항체는, 그것들에 한정되는 것은 아니다.

얻어진 항 IGF-I 수용체 인간화 항체에 대해, 그 항체의 단백질의 아미노산을 코드하는 염기 서열을 갖는 핵산 분자를 얻는 것도 가능하고, 그러한 핵산 분자를 사용하여 유전자 공학적으로 항체를 제조할 수도 있다. 당해 항체의 유전자 정보에 있어서의 H 사슬, L 사슬, 혹은 그들의 가변 영역에 대해, CDR 서열 등의 정보를 참고로 하여, 항체의 결합성이나 특이성의 향상을 위한 개변 등을 실시할 수 있다.

본 발명의 항체를 제조하는 방법으로는, 각각 취득하고자 하는 항체의 단백질의 아미노산을 코드하는 유전자가 도입된 포유 세포, 곤충 세포, 및 대장균 등을 배양하고, 얻어진 배양 상청으로부터 통상적인 방법에 의해 항체를 정제하여 취득할 수 있다. 그 구체적인 방법으로는, 이것에 한정되는 것은 아니지만, 이하와 같은 방법이 예시된다.

먼저, H 사슬 가변 영역을 코드하는 핵산 분자에, H 사슬 시그널 펩티드를 코드하는 핵산 분자와, H 사슬 정상 영역을 코드하는 핵산 분자를 결합시켜 제조한다. L 사슬 가변 영역을 코드하는 핵산 분자에, L 사슬 시그널 펩티드를 코드하는 핵산 분자와, L 사슬 정상 영역을 코드하는 핵산 분자를 결합시켜 제조한다.

이들 H 사슬 유전자와 L 사슬 유전자를, 선택한 숙주 세포로 발현하는 데에 적합한 벡터, 예를 들어 클로닝 벡터 또는 발현용 벡터에 도입한다. 여기서, H 사슬 유전자 및 L 사슬 유전자는, 양방의 유전자가 발현하는 형태이면, 하나의 벡터에 도입되어도 되고, 또, 각각 다른 벡터에 도입되어도 된다.

다음으로, H 사슬 유전자와 L 사슬 유전자가 도입된 벡터는, 숙주 세포에 도입된다. 숙주 세포로는, 예를 들어 포유 동물 세포, 곤충 세포, 효모 세포, 혹은 식물 세포 등의 진핵 세포, 또는 세균 세포를 들 수 있다. 숙주 세포에 유전자를 도입하는 방법으로는, 인산칼슘이나 리포펙션법 등의 화학적 방법, 일렉트로포레이션법이나 파티클 건법 등의 물리적 방법 또는 바이러스나 파지 등에서의 감염에 의한 방법 등에서 적절히 선택할 수 있다. H 사슬 유전자 및 L 사슬 유전자가 도입된 숙주 세포는, 선택을 가하는 일 없이 배양에 사용할 수도 있고, 약제 내성이나 영양 요구성 등의 성질을 사용하여 유전자가 도입된 재조합 체세포를 선택적으로 농축하는 것이나, 또한 유전자가 도입된 단일 숙주 세포로부터 수립된 클론의 재조합 체세포를 배양에 사용하는 것도 가능하다.

H 사슬 유전자 및 L 사슬 유전자가 도입된 숙주 세포는, 적절한 배지와 배양 조건으로 배양된다. 여기서, 숙주 세포내에서 발현한 H 사슬 유전자 및 L 사슬 유전자의 산물은, 통상은 항체 단백질로서 배지 중에 분비되고, 당해 배지를 회수함으로써 산생된 항체 단백질을 얻을 수 있다. 단, 유전자와 숙주의 조합에 의해, 필요가 있는 경우에는 숙주 세포를 파괴하여 세포내에 축적된 항체 단백질을 회수하는 것, 원핵 세포의 경우에는 페리플라즘 획분으로부터 항체 단백질을 회수하는 것도 선택할 수 있다. 회수된 항체 단백질을 포함하는 배지 등의 시료로부터 항체를 정제하는 방법으로는, 염침법 (鹽沈法), 투석이나 한외 여과법 등에 의한 농축이나 용매의 교환, 프로테인 A, 프로테인 G 또는 항원 등이 고정화된 담체를 사용한 어피니티 크로마토그래피 등이 일반적으로 사용되지만, 그 밖에, 이온 교환 크로마토그래피, 소수 크로마토그래피, 혼합 모드 크로마토그래피나 사이즈 배제 크로마토그래피 등의 방법도 적절히 사용하여 정제하는 것이 가능하다. 이들 순서에 사용되는 각종 수법은, 어느 것도 당업자에게는 주지되어 있다.

여기서, 면역 글로블린의 중사슬 및/또는 경사슬을 코드하는 유전자에 대해, 바라는 형질을 도입하기 위한 유전자 개변을 실시하거나, 면역 글로블린의 중사슬 및/또는 경사슬의 가변 영역 또는 CDR 영역의 구조 정보를 사용하거나 함으로써, 항체 키메라 단백질, 저분자 항체, 스캐폴드 항체 등을 제조하는 것은, 당업자이면 공지된 기술을 사용하여 실시 가능하다. 또, 항체의 성능의 향상이나 부작용의 회피를 목적으로, 항체의 정상 영역의 구조에 개변을 가하는 것이나, 당 사슬의 부분에서의 개변을 실시하는 것도, 당업자에게 잘 알려진 기술에 의해 적절히 실시할 수 있다.

[항 IGF-I 수용체 인간화 항체를 함유하는 약]

본 발명의 항체는, IGF-I 에 관련된 상태 또는 IGF-I 수용체에 대한 작용에서 기인하는 질환의 치료약 또는 예방약으로서 이용 가능하다. 구체적으로는, IGF-I 에 관련된 상태 또는 IGF-I 수용체 아고니스트 항체에서의 치료 또는 예방의 대상이 되는 질환으로는, 근위축성 질환 (예를 들어 폐용성 근위축, 사르코페니아, 카켁시아 등), 저신장증 (예를 들어 라론형 저신장증, 성장 호르몬 저항성 저신장증 등), 간경변, 간섬유화, 당뇨병성 신증, 만성 신부전, 노화, 자궁내 태아 발육 지연 (IUGR), 심혈관 보호, 당뇨병, 인슐린 저항성, 메타볼릭 신드롬, 골조송증, 낭포성 섬유증, 근강직성 디스트로피, 에이즈 근감약증, HIV 에 수반하는 지방 재분포 증후군, 크론병, 베르너 증후군, X 연쇄성 복합 면역 부전증, 난청, 신경성 무식욕증 및 미숙아 망막증, 터너 증후군, 프라더·윌리 증후군, 실버·러셀 증후군, 특발성 저신장, 비만, 다발성 경화증, 궤양성 대장염, 저근육량, 심근허혈, 저골밀도, IGF-I 수용체 안타고니스트 항체에서의 치료 또는 예방의 대상이 되는 질환으로는, 신경아 세포종, 횡문근육종, 골육종, 소아암, 선단 거대증, 난소암, 췌장암, 양성 전립선 비대증, 유방암, 전립선암, 골암, 폐암, 결장 직장암, 경부암, 활막육종, 방광암, 위암, 윌름스 종양, 전이성 카르시노이드 및 혈관 작동성 장관 펩티드 분비 종양에 관련되는 설사, 비포마, 베르너-모리슨 증후군, 벡위스-비데만 증후군, 신장암, 신세포암, 이행 상피암, 유잉 육종, 백혈병, 급성 림프 아구성 백혈병, 뇌종양, 교아종, 비교아종성 뇌종양, 수막종, 하수체 선종, 전정 신경 초종, 미분화 신경 외배엽성 종양, 수아종, 성상 세포종, 핍돌기 교종, 뇌실상의종, 맥락총 유두종, 거인증, 건선, 아테롬성 동맥경화증, 혈관의 평활근 재협착, 부적절한 미소 혈관 증식, 당뇨병성 망막증, 그레이브스병, 전신성 에리테마토데스, 하시모토 갑상선염, 중증근 무력증, 자기 면역성 갑상선염, 및 베체트병을 들 수 있다. 특히, 본 발명의 항체는, 근위축성 질환 (예를 들어 폐용성 근위축, 사르코페니아, 카켁시아 등) 및/또는 저신장증 (예를 들어 라론형 저신장증, 성장 호르몬 저항성 저신장증 등) 의 치료약 또는 예방약으로서의 사용이 바람직하다. 또, 본 발명의 항체는 투여에 의해 혈당값의 변동을 발생시키지 않는 점에 있어서 우수하다.

본 발명의 항체를 함유하는 약은, 본 발명의 항체 외에, 의약적으로 허용되는 담체 및/또는 그 밖의 첨가제를 함유하는, 의약 조성물의 형태로서 제제화해도 된다. 의약적으로 허용되는 담체 및/또는 그 밖의 첨가제를 사용한 제제는, 예를 들어 University of the Sciences in Philadelphia, "Remington : The Science and Practice of Pharmacy, 20th EDITION", Lippincott Williams & Wilkins, 2000 에 기재된 방법으로 실시하는 것이 가능하다.

이와 같은 치료제 또는 예방제의 하나의 형태로는, 무균의 수성액 또는 유성액에 용해, 현탁, 또는 유화함으로써 조제된 액제 혹은 동결 건조제로서 제공된다. 이와 같은 용제 또는 용해액으로서, 수성액으로는 주사용 증류수, 생리 식염수 등을 들 수 있고, 그것에 더하여 삼투압 조절제 (예를 들어, D-글루코오스, D-소르비톨, D-만니톨, 염화나트륨 등) 가 첨가되는 경우, 적당한 용해 보조제, 예를 들어 알코올 (예를 들어 에탄올), 폴리알코올 (예를 들어 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜), 비이온성 계면 활성제 (예를 들어 폴리소르베이트 80, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 50) 등이 병용되는 경우도 있다. 또, 용제 또는 용해액으로는 유성액이 사용되는 경우도 있고, 당해 유성액의 예로는 참기름, 대두유 등을 들 수 있고, 용해 보조제로서 벤조산벤질, 벤질알코올 등이 병용되는 경우도 있다. 이와 같은 제제에 있어서는, 적절히, 완충제 (예를 들어, 인산염류 완충제, 아세트산염류 완충제), 무통화제 (예를 들어, 염화벤잘코늄, 염산프로카인 등), 안정제 (예를 들어, 인간 혈청 알부민, 폴리에틸렌글리콜 등), 보존제 (예를 들어, 아스코르브산, 에리소르브산 및 그들의 염 등), 착색제 (예를 들어, 동클로로필, β-카로틴, 적색 2 호, 청색 1 호 등), 방부제 (예를 들어 파라옥시벤조산에스테르, 페놀, 염화벤제토늄, 염화벤잘코늄 등), 증점제 (예를 들어 하이드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스 및 그들의 염 등), 안정화제 (예를 들어 인간 혈청 알부민, 만니톨, 소르비톨 등), 교취제 (예를 들어 멘톨, 감귤 향료 등) 의 첨가제가 사용되는 경우가 있다.

다른 형태로서, 점막 적용용 치료제 또는 예방제도 들 수 있다. 이 제제에 있어서는, 점막에 대한 흡착성, 체류성 등을 부여하는 것을 주된 목적으로 하고, 첨가제로서 점착제, 점착 증강제, 점조제, 점조화제 등 (예를 들어, 뮤신, 한천, 젤라틴, 펙틴, 카라기난, 알긴산나트륨, 로커스트빈검, 잔탄검, 트래거캔스검, 아라비아 고무, 키토산, 풀루란, 왁시 스타치, 수크랄페이트, 셀룰로오스, 및 그 유도체 (예를 들어, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스, 폴리글리세린 지방산 에스테르, 아크릴산(메트)아크릴산알킬 공중합체, 또는 그 염, 폴리글리세린 지방산 에스테르 등) 이 함유되는 경우도 있다. 그러나, 생체에 공여되는 치료제 또는 예방제의 형태 및 용제나 첨가제는 이들에 한정되는 것은 아니며, 당업자이면 적절히 선택할 수 있다.

본 발명의 항체를 함유하는 약은, 본 발명의 항체 외에, 기존의 다른 약물 (활성 성분) 을 포함하고 있어도 된다. 또, 본 발명의 항체를 포함하는 약을, 기존의 다른 약물과 조합하여, 키트의 형태로 해도 된다. IGF-I 수용체 아고니스트 항체와 조합하는 활성 성분으로서, 성장 호르몬 또는 그 아날로그, 인슐린 또는 그 아날로그, IGF-II 또는 그 아날로그, 항마이오스타틴 항체, 마이오스타틴안타고니스트, 항액티빈 IIB 형 수용체 항체, 액티빈 IIB 수용체 안타고니스트, 가용성 액티빈 IIB 형 수용체 또는 그 아날로그, 그렐린 또는 그 아날로그, 폴리스타틴 또는 그 아날로그, 베타 2 아고니스트, 및 선택적 안드로겐 수용체 모듈레이터를 들 수 있다. 또, IGF-I 수용체 안타고니스트 항체와 조합하는 활성 성분으로서, 코르티코스테로이드, 제토약, 온단세트론염산, 그라니세트론염산, 메토클로프라미드 (metroclopramide), 돔페리돈, 할로페리돌, 시클리진, 로라제팜, 프로클로르페라진, 덱사메타손, 레보메프로마진, 트로피세트론, 암백신, GM-CSF 저해약, GM-CSF DNA 백신, 세포에 기초하는 백신, 수상 세포 백신, 재조합 바이러스 백신, 열쇼크 단백질 (HSP) 백신, 동종 종양 백신, 자기 종양 백신, 진통약, 이부프로펜, 나프록센, 트리살리실산콜린마그네슘, 옥시코돈염산, 항혈관 형성약, 항혈전약, 항 PD-1 항체, 니볼루맙, 펨브로리주맙, 항 PD-L1 항체, 아테졸리주맙, 항 CTLA4 항체, 이필리무맙, 항 CD20 항체, 리툭시맙, 항 HER2 항체, 트라스투주맙, 항 CCR4 항체, 모가물리주맙, 항 VEGF 항체, 베바시주맙, 항 VEGF 수용체 항체, 가용성 VEGF 수용체 단편, 항 TWEAK 항체, 항 TWEAK 수용체 항체, 가용성 TWEAK 수용체 단편, AMG 706, AMG 386, 항증식약, 파르네실 단백질 트랜스페라아제 저해약, αvβ3 저해약, αvβ5 저해약, p53 저해약, Kit 수용체 저해약, ret 수용체 저해약, PDGFR 저해약, 성장 호르몬 분비 저해약, 앙기오포이에틴 저해약, 종양 침윤 매크로파지 저해약, c-fms 저해약, 항 c-fms 항체, CSF-1 저해약, 항 CSF-1 항체, 가용성 c-fms 단편, 페그비소만트, 젬시타빈, 파니투무맙, 이리노테칸, 및 SN-38 을 들 수 있다. 배합되는 본 발명의 항체 이외의 약물의 용량으로는, 통상적인 치료에 사용되는 용량으로 실시할 수 있지만, 상황에 따라 증감시킬 수도 있다.

본 발명에 있어서의 치료제 또는 예방제는, 증상의 개선을 목적으로 하여, 비경구적으로 투여할 수 있다. 비경구 투여의 경우에는, 예를 들어 경비제로 할 수 있고, 액제, 현탁제, 고형제제 등을 선택할 수 있다. 또 다른 비경구 투여의 형태로는, 주사제로 할 수 있고, 주사제로는, 피하 주사제, 정맥 주사제, 점적 주사제, 근육 주사제, 뇌실내 주사제 또는 복강내 주사제 등을 선택할 수 있다. 또 그 밖의 비경구 투여에 사용하는 제제로는, 좌제, 설하제, 경피제, 경비제 이외의 경점막 투여제 등도 들 수 있다. 또한, 스텐트나 혈관내 전색제에 함유 혹은 도포하는 양태로, 혈관내 국소 투여할 수도 있다.

본 발명에 있어서의 치료제 또는 예방제의 투여량은, 환자의 연령, 성별, 체중, 증상, 치료 효과, 투여 방법, 처리 시간, 또는 당해 의약 조성물에 함유되는 활성 성분의 종류 등에 따라 상이하지만, 통상 성인 1 명당, 1 회에 대해 주제를 0.1 ㎎ 내지 1 g 의 범위에서, 바람직하게는 0.5 ㎎ 내지 300 ㎎ 의 범위에서, 1 주 내지 4 주간에 1 회, 혹은 1 개월 내지 2 개월에 1 회 투여할 수 있다. 그러나, 투여량 및 투여 횟수는 여러 가지 조건에 따라 변동되기 때문에, 상기 투여량 및 횟수보다 적은 양 및 횟수로 충분한 경우도 있고, 또 상기의 범위를 초과하는 투여량 및 투여 횟수가 필요한 경우도 있다.

[항 IGF-I 수용체 인간화 항체를 사용한 세포 배양 방법]

척추 동물 유래 세포를 인비트로에 있어서 유지, 증식 및/또는 분화시키기 위한 세포 배양 기술에 있어서, IGF-I 또는 그 유도체가 많이 사용되고 있고, 세포 배양용의 시약으로서 시판되고 있다. IGF-I 는 안정성의 문제 등으로부터, 장기의 배양에 있어서는 시간이 지남에 따라 효과가 감약될 가능성이 있고, 안정적인 세포 배양을 실시하기 위해서는 적절히 농도를 조절하는 등의 대응이 필요해진다. 또, IGF-I 는 세포로의 글루코오스의 흡수를 유도하므로, 세포내 글루코오스 농도의 상승에 의해 세포의 대사나 특성의 변화가 유도되거나, 배지 중의 글루코오스 농도가 감소하여 배양 환경이 변화할 가능성이 있다. 본 발명의 항체는 IGF-I 와 비교하여 안정성이 높고, 세포에 접촉하고 나서의 세포 증식을 유도하는 시간이 길고, IGF-I 보다 저농도로 세포 증식 유도 활성을 나타내고, 또한, 세포내로의 글루코오스 흡수를 유도하지 않는다는 특징을 갖는다. 본 발명의 항체는, 세포 배양에 있어서 그 배지에 적당량을 첨가하여 사용되는 것 외에, 배양을 실시하는 용기의 고상에 흡착 또는 고정시켜 사용하는 것이 가능하고, 그에 따라 사용량을 삭감하거나, 고상에 부착되는 세포에 대해 유효하게 세포 증식 유도를 실시할 수 있다. 또한, 본 개시에 있어서의 척추 동물 유래 세포에 대해서는, 전술한 바와 같다. 또한, 본 발명의 항체를 사용한 배양의 대상으로는, 척추 동물 또는 그 유전자 개변 동물에서 유래하는 장기나 조직 등도 포함된다. 본 발명의 항체는, 세포를 사용한 물질 생산을 위한 배양이나, 세포 자체를 사용하는 세포 의료·재생 의료에서의 배양 공정에서 사용할 수 있다.

실시예

이하, 실시예를 들어 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다. 단, 본 발명은 이하의 실시예에도 속박되는 것은 아니며, 본 발명의 취지를 일탈하지 않는 범위에 있어서, 임의의 형태로 실시하는 것이 가능하다.

[실시예 1] 마우스 IGF11-16 항체의 인간화 항체 유전자의 제조 :

Kohler 들 (Nature, 256 : 495-497, 1975) 의 하이브리도마법에 의해 제조하여 얻어진 IGF-I 수용체에 대한 마우스 모노클로날 항체 IGF11-16 (마우스 IGF11-16 항체, 일본 특허출원 : 일본 특허출원 2017-106529) 의 중사슬 가변 영역 (VH) 및 경사슬 가변 영역 (VL) 중의 상보성 결정 영역 (CDR) 아미노산의 이식처가 되는 주형 인간 항체는, 마우스 IGF11-16 항체의 VH, VL 의 프레임 워크 영역 (FR) 의 아미노산 서열에 대해, 그것들과 상동성이 높은 아미노산 서열을 갖는 인간 항체의 생식 세포 계열 (germline) 중에서 선택하였다.

상기의 주형 인간 항체 VH 및 VL 의 FR 에, 마우스 IGF11-16 항체의 VH 및 VL 로부터 필요한 아미노산 서열을 이식하여 인간화 항체를 제조하였다. 구체적으로는, VH 에 대해서는, 전술한 주형 인간 항체 VH 의 CDR 아미노산 서열 및 FR 아미노산의 수 지점을 마우스 IGF11-16 항체의 VH 중의 대응하는 아미노산 서열로 치환하고, 마우스 IGF11-16 항체를 인간화한 VH 인 R11-16VH 의 아미노산 서열을 디자인하며 (서열 번호 7), 또한 그들의 아미노산을 코드하는 DNA 의 염기 서열을 디자인하였다.

VL 에 대해서는, 전술한 주형 인간 항체 VL 의 CDR 아미노산 서열 및 FR 아미노산의 수 지점을 마우스 IGF11-16 항체의 VL 중의 아미노산 서열로 치환하고, 마우스 IGF11-16 항체를 인간화한 VL 인 R11-16VL 의 아미노산 서열을 디자인하였다.

R11-16VL 의 36 번째의 아미노산에 대해서는, 마우스 IGF11-16 항체에서는 시스테인이었지만, 통상적인 인간 항체에서는 이 위치에 시스테인은 존재하는 일은 적고, 본래는 발생하지 않는 디술파이드 결합이 형성되어, 응집의 원인이 되는 것을 생각할 수 있었으므로, 36 번째의 아미노산이 시스테인, 티로신, 알라닌, 세린, 페닐알라닌으로 이루어지는 5 종류의 R11-16VL, 즉 R11-16VL-C36, R11-16VL-C36Y, R11-16VL-C36A, R11-16VL-C36S, R11-16VL-C36F 의 아미노산 서열을 디자인하고 (서열 번호 12, 서열 번호 8, 서열 번호 9, 서열 번호 10, 서열 번호 11), 또한 그들의 아미노산을 코드하는 DNA 의 염기 서열을 디자인하였다. 각 인간화 항체의 구조 및 그 아미노산을 하기 표 1 에 나타낸다.

[실시예 2] 인간화 항체의 조제 :

디자인된 인간화 항체의 중사슬 가변 영역 R11-16VH 와, 인간 IgG4 서브 클래스를 안정화시킨 변이체인 인간 IgG4S228P 변이체를 코드하는 DNA 를 각각 합성하고, pCAGGS1 계 발현 벡터에 도입하여 연결하여, 인간화 항체 중사슬을 발현하는 플라스미드로 하였다.

디자인된 인간화 항체의 경사슬 가변 영역 R11-16VL 에 대해서는, κ 사슬 정상 영역을 연결한 인간화 항체 경사슬 영역을 코드하는 DNA 를 합성하고, pCAGGS1 계 발현 벡터에 도입하여, 인간화 항체 경사슬을 발현하는 플라스미드로 하였다.

이들 인간화 항체 중사슬 발현 플라스미드와 인간화 항체 경사슬 발현 플라스미드를 혼합하여 Expi293^TM Expression System (Thermo Fisher Scientific) 을 사용하여 세포에 도입함으로써, 마우스 IGF11-16 항체를 인간화한 각종 항체를 발현시켰다. 이 때, R11-16VH 를 도입한 중사슬 발현 플라스미드와 R11-16VL-C36Y 를 도입한 경사슬 발현 플라스미드를 조합하여 발현시킨 인간화 항체를 R11-16B 항체, R11-16VH 를 도입한 중사슬 발현 플라스미드와 R11-16VL-C36A 를 도입한 경사슬 발현 플라스미드를 조합하여 발현시킨 인간화 항체를 R11-16C 항체, R11-16VH 를 도입한 중사슬 발현 플라스미드와 R11-16VL-C36S 를 도입한 경사슬 발현 플라스미드를 조합하여 발현시킨 인간화 항체를 R11-16D 항체, R11-16VH 를 도입한 중사슬 발현 플라스미드와 R11-16VL-C36F 를 도입한 경사슬 발현 플라스미드를 조합하여 발현시킨 인간화 항체를 R11-16E 항체, R11-16VH 를 도입한 중사슬 발현 플라스미드와 R11-16VL-C36 을 도입한 경사슬 발현 플라스미드를 조합하여 발현시킨 인간화 항체를 R11-16F 항체로 각각 명명하였다. 인간화 항체는, 인간화 항체 중사슬 및 인간화 항체 경사슬 발현 플라스미드를 도입한 세포의 배양 상청을, 프로테인 A 칼럼을 사용하여 어피니티 정제함으로써 취득하였다.

[실시예 3] IGF-I 수용체에 대한 결합 활성 (ELISA) :

인간 (서열 번호 14, NP_000866), 모르모트 (서열 번호 16, XP_003475316), 필리핀 원숭이 (서열 번호 18, XP_005560575) 및 래트 (서열 번호 20, NP_434694) 의 IGF-I 수용체에 대한 IGF-I 수용체 아고니스트 항체의 결합 활성을 검토하기 위해, 각종 IGF-I 수용체를 발현시킨 세포를 사용하여 Cell ELISA 를 실시하였다.

HEK293T 세포에 리포펙션법에 의해 인간 (서열 번호 15), 모르모트 (서열 번호 17), 필리핀 원숭이 (서열 번호 19) 및 래트 (서열 번호 21) 의 IGF-I 수용체 유전자를 도입한 pEF1 발현 벡터 (Thermofisher) 를 도입하였다. 리포펙션 후에 하룻밤 이상 배양시킨 HEK293T 세포를 4 × 10⁴ cells/웰로 96 웰 플레이트 (폴리-D-리신 코트) 에 첨가하고, 추가로 하룻밤 이상 배양한 것을 ELISA 에 사용하였다.

ELISA 는, 1 ％ BSA/1 ％ FBS/PBS 로 2 nM 으로 조제된 각 인간화 항체 용액을 각 웰에 100 ㎕ 첨가하고 37 ℃ 에서 약 1 시간 반응시켰다. 세정액으로 3 회 세정하였다. 1 ％ BSA/1 ％ FBS/PBS 로 각 농도로 조제된 항인간 IgG 항체 HRP 콘주게이트 용액을 각 웰에 100 ㎕ 첨가하고 37 ℃ 에서 약 1 시간 반응시키고, 세정액으로 3 회 세정하였다. 각 웰에 기질 (TMB) 을 100 ㎕ 첨가하여 반응을 개시시켰다. 약 30 분 후에 각 웰에 100 ㎕ 의 1 M 황산을 첨가하여 450 및 650 ㎚ 의 흡광도를 측정하고, 흡광도 450 - 650 ㎚ 를 산출하였다. IGF-I 수용체 유전자를 도입하고 있지 않은 HEK293T 세포 (컨트롤 세포) 에 대한 흡광도 450 - 650 ㎚ 의 값을 1 로 하여, 결합 활성을 산출하였다. 결과를 하기 표 2 에 나타낸다.

각 인간화 항체는, 인간, 필리핀 원숭이, 및 모르모트의 IGF-I 수용체를 발현시킨 세포에서는, 컨트롤 세포 (HEK293T) 와 비교하여, 결합 활성을 3 배 이상으로 상승시켰다. 한편, 래트의 IGF-I 수용체를 발현시킨 세포에 대한 결합 활성은, 컨트롤 세포와 동등하였다. 이러한 점에서, 각 인간화 항체는 인간, 필리핀 원숭이, 및 모르모트의 IGF-I 수용체에 결합하지만, 래트의 IGF-I 수용체에는 결합하지 않는 것이 나타났다.

[실시예 4] 인간화 항체 R11-16B 의 에피토프의 결정 :

R11-16B 는, 인간, 필리핀 원숭이, 및 모르모트의 IGF-I 수용체에 결합하지만, 래트의 IGF-I 수용체에는 결합하지 않는다. 또, R11-16B 의 설계의 기가 된 마우스 항체 (일본 특허출원 : 일본 특허출원 2017-106529) 인 마우스 IGF11-16 항체는, 인간 IGF-I 수용체의 CR 도메인에 결합하고, 래트의 IGF-I 수용체에는 결합하지 않는다. 이러한 점에서 R11-16B 의 에피토프는, IGF-I 수용체의 CR 도메인의 아미노산 서열 중, 인간, 필리핀 원숭이 및 모르모트에 공통되고, 래트와는 상이한 아미노산 서열로 추정하였다.

R11-16B 가 인간 IGF-I 수용체의 CR 도메인의 어느 부위의 아미노산에 결합하는지를 결정하기 위해서, CR 도메인의 각종 아미노산 치환체에 대한 결합성을 ELISA 에 의해 측정하였다. CR 도메인 중, R11-16B 와의 결합이 추정되는 아미노산 서열을 변이시킨 IGF-I 수용체를 발현시킨 세포를 사용하여 Cell ELISA 를 실시하였다.

CR 도메인의 각종 아미노산 치환체는, 이하의 2 종을 사용하였다. 또, 양성 대조로서 야생형의 인간 IGF-I 수용체 (서열 번호 14, NP_000866) 의 C 말단에 FLAG 태그 (AspTyrLysAspAspAspAspLys) 를 결합시킨 아미노산 서열을 코드하는 DNA (서열 번호 22) 를 pEF1 발현 벡터 (Thermofisher) 에 도입한 것을 사용하였다. pEF1 발현 벡터만을 처치한 세포를 Mock 로 하였다.

(CR 도메인의 치환체 1)

인간 IGF-I 수용체 (서열 번호 14, NP_000866) 의 아미노산 서열, 245 번째, 247 번째 및 294 번째의 아스파르트산, 알라닌 및 글루탐산을, 각각 아스파라긴, 트레오닌 및 아스파르트산으로 치환시켰다. 당해 치환체 1 수용체의 아미노산 서열의 C 말단에 FLAG 태그를 결합시킨 아미노산 서열을 코드하는 DNA (서열 번호 23) 를 pEF1 발현 벡터에 도입하였다.

(CR 도메인의 치환체 2)

인간 IGF-I 수용체 (서열 번호 14, NP_000866) 의 아미노산 서열, 315 번째 및 316 번째의 글리신 및 세린을, 각각 세린 및 트레오닌으로 치환시켰다. 당해 치환체 2 수용체의 아미노산 서열의 C 말단에 FLAG 태그를 결합시킨 아미노산 서열을 코드하는 DNA (서열 번호 24) 를 pEF1 발현 벡터에 도입하였다.

293T 세포를 6 × 10⁶ cells 로 폴리-D-리신 코트된 10 ㎝ 디시에 파종하였다. 다음날에 각 플라스미드 DNA 를 리포펙션법에 의해 세포에 도입하였다. 그 다음날에 0.05 ％ 트립신/EDTA 를 사용하여 293T 세포를 벗기고, 배양액으로 현탁하였다. 293T 세포를 2 × 10⁴ cells/웰로 96 웰 플레이트 (폴리-D-리신 코트) 에 첨가하고, 37 ℃, 5 ％ CO₂ 의 조건으로 하룻밤 인큐베이트하였다. 96 웰 플레이트로부터 배지를 제거하고, 10 ％ 완충 포르말린 (Mildform ^{(등록상표)} 10 NM, Wako) 을 사용하여 고정시키고, 블로킹 버퍼 (3 ％ BSA/PBS/0.02 ％ 아지드화나트륨) 로 치환한 것을 ELISA 에 사용하였다.

ELISA 는, 블로킹 버퍼로 5 nM 으로 조제된 R11-16B 를 각 웰에 50 ㎕ 첨가하고 실온에서 약 1 시간 반응시켰다. 세정액으로 2 회 세정하였다. 블로킹 버퍼로 2500 배로 희석된 항인간 IgG 항체 ALP 콘주게이트 용액 (2087-04, Southern Biotech) 을 각 웰에 50 ㎕ 첨가하고 실온에서 약 1 시간 반응시켰다. 세정액으로 3 회 세정하였다. 각 웰에 기질 (pNPP) 을 100 ㎕ 첨가하여 반응을 개시시켰다. 약 1 시간 후에 405 및 550 ㎚ 의 흡광도를 측정하였다. R11-16B 처치군으로부터 무처치군의 값을 뺀 것을 결합 활성으로서 평가하였다. 결과를 하기 표 3 에 나타낸다.

R11-16B 의 인간 IGF-I 수용체에 대한 결합 활성은, Mock 와 비교하여, 2 배 이상 항진되었다. 또, 치환체 1 에 대한 결합 활성은, 인간 IGF-I 수용체에 대한 것과 동등하였다. 한편, 치환체 2 에 대한 결합 활성은, Mock 와 동등하고, 결합 활성의 항진은 관찰되지 않았다. 이러한 점에서, R11-16B 의 인간 IGF-I 수용체에 대한 결합 활성은, IGF-I 수용체의 315 번째 및 316 번째의 아미노산이 중요하다는 것이 나타났다.

이상의 결과로부터, R11-16B 의 인간 IGF-I 수용체에 대한 결합 부위는, 315 번째 및 316 번째의 Gly (글리신) 와 Ser (세린) 의 근방으로 추정되었다. 일반적으로 항체에 의한 인식 서열수는 아미노산 8 잔기 (6 내지 10 잔기의 평균값) 인 것, 및 R11-16B 의 교차 반응성 (래트의 IGF-I 수용체에 대한 결합성 없음, 인간 및 모르모트의 IGF-I 수용체에 대한 결합성을 갖는다) 으로부터, 인간 IGF-I 수용체의 R11-16B 에 대한 결합 부위의 서열은, ProSerGlyPheIleArgAsnGly^*Ser^*GlnSerMet 로 생각되었다 (Gly^*Ser^* 은, 315 번째 및 316 번째의 아미노산 서열을 나타낸다).

[실시예 5] 인간 근아 세포에 있어서의 세포 증식 활성 :

IGF-I 수용체 아고니스트 항체의 인간 근아 세포에 대한 증식 활성을 검토하기 위해, 인간 근아 세포에 약제를 첨가하고, 4 일 후의 세포 내의 ATP 량을 측정하였다.

정상 인간 골격근 근아 세포 (Human Skeletal Muscle Myoblast Cells, HSMM, Lonza) 를, SkBM-2 (Lonza, CC-3246) 에 1 ％ BSA 를 포함하는 배지를 사용하여, 96 웰 플레이트 (Collagen type I coated) 에, 0.1 ㎖/웰 (2 × 10³ cells/웰) 로 파종하고, 37 ℃, 5 ％ CO₂ 의 조건으로 인큐베이트하였다. 세포 파종의 다음날에 각종 약제를 25 ㎕/웰로 첨가하고, 37 ℃, 5 ％ CO₂ 의 조건으로 4 일간 인큐베이트하였다. 세포 증식의 지표로서 세포내의 ATP 량을, CellTiter-Glo ^{(등록상표)} 발광 세포 생존 어세이 (Promega) 를 사용하여 측정하였다. 4 일간 인큐베이트한 96 웰 플레이트를, 배양액이 50 ㎕/웰이 되도록 상청을 제거하고, 30 분 이상 실온에서 정치 (靜置) 시켰다. CellTiter-Glo ^{(등록상표)} 시약을 50 ㎕/웰로 첨가하고 10 분 이상 반응시킨 후에 루미노미터 (버솔드) 로 발광 시그널을 측정하였다. 용매만을 첨가한 군의 활성을 100 ％ 로서 산출하였다. 결과를 하기 표 4 ∼ 6 에 나타낸다.

0.0000005, 0.000005, 0.00005, 0.0005, 0.005, 0.05, 0.5, 5 및 50 nM 의 R11-16B 는, 인간 근아 세포의 증식 활성을 농도 의존적으로 항진시켰다. R11-16B, 마우스 IGF11-16 항체 및 IGF-I 의 근아 세포 증식 활성의 EC₅₀ 은, 각각 0.002, 0.002 및 0.95 nM 이고, R11-16B 는 마우스 IGF11-16 항체와 동등, 또한, IGF-I 와 비교하여 100 배 이상 강한 활성을 나타냈다.

0.00005, 0.0005, 0.005, 0.05, 0.5, 5, 및 50 nM 의 R11-16B, R11-16C, R11-16D, R11-16E, R11-16F 는, 인간 근아 세포의 증식 활성을 농도 의존적으로 항진시켰다. R11-16B, R11-16C, R11-16D, R11-16E 및 R11-16F 의 인간 근아 세포 증식 활성의 EC₅₀ 은, 모두 0.002 nM 이었다. 각 인간화 항체는 IGF-I 와 비교하여 100 배 이상 강한 활성을 나타냈다.

IGF-I 는, 컨트롤 항체 (FLAG M2, 시그마 알드리치) 와 비교하여, 세포 증식 활성을 항진시켰다.

비특허문헌 35 에 기재된 16-13 항체, 및 26-3 항체 (인비트로에 있어서의 세포의 DNA 합성, 및 글루코오스 흡수의 항진 작용을 갖는 것이 나타나 있는 아고니스트 항체) 는, 용매 컨트롤 (아지드화나트륨을 포함한다) 에 비해, 현저한 세포 증식 활성은 관찰되지 않고, R11-16B 의 활성과 비교하여 약한 것이었다.

[실시예 6] 인비보 약효 (모르모트에 있어서의 근육량 증가 작용) :

IGF-I 수용체 아고니스트 항체의 인비보에서의 약효를 확인하기 위해서, IGF-I 를 지속 투여했을 때의 작용과 비교하였다.

모르모트에 R11-16B 를 단회 투여하고, 2 주 후의 근육량을 측정하였다. 근육량 증가 작용이란, 모르모트의 근육 중량을 컨트롤군과 비교하여 5 ％ 이상 증가시키는 것으로 한다. R11-16B (0.1 및 0.3 ㎎/㎏) 를, 정상 모르모트의 정맥내에 단회 투여하였다. 양성 대조로서 인간 재조합 IGF-I (메카세르민) 를, 삼투압 펌프 (알제트) 를 사용하여 피하에 매립하고, 0.3 및 1 ㎎/㎏/일이 되도록 지속 투여하였다. 약제 투여의 2 주 후, 모르모트를 마취하에서 방혈 치사시켜, 장지신근의 중량을 측정하였다. 결과를 도 2 에 나타낸다.

R11-16B 의 0.1 및 0.3 ㎎/㎏ 을 정맥내 투여한 군 (R11-16B) 은, 용매만을 처치한 컨트롤군 (vehicle) 과 비교하여, 용량 의존적, 또한 유의하게 근육량을 증가시켰다.

R11-16B 의 0.3 ㎎/㎏ 의 단회 투여군의 근육 증가량은, 인간 재조합 IGF-I 를 1 ㎎/㎏/일로 지속 투여한 군 (IGF-I) 과 동일한 정도였다. 이러한 점에서, R11-16B 는, 단회 투여에 의해, IGF-I 의 지속 투여와 동등한 약효를 갖는 것이 나타났다. 임상에서의 IGF-I (메카세르민) 의 용법 용량은 1 일 1 회 내지 2 회이다. 한편, 인비보에 있어서 R11-16B 는 2 주에 1 회의 투여로 IGF-I 의 지속 투여와 동등한 유효성을 나타내므로, IGF-I 와 비교하여 지속성이 우수한 것이 나타났다.

[실시예 7] 인비보 혈당 저하 작용 (모르모트에 있어서의 혈당 저하 작용) :

IGF-I 수용체 아고니스트 항체의 인비보에서의 혈당 저하 작용의 유무를 확인하기 위해, 모르모트에 R11-16B 를 단회 투여하고, 계시적으로 혈당값을 측정하고, IGF-I 의 단회 투여시의 혈당 저하 작용과 비교하였다. 혈당 저하 작용이란, 혈당값을 50 ㎎/㎗ 이하로 저하시키거나, 또는 저혈당 증상을 일으키는 작용으로 한다.

IGF-I 에 의한 혈당 저하 작용을 검토하였다. 모르모트를 12 시간 절식시키고, 인간 재조합 IGF-I (메카세르민) 를, 0.3, 1, 3 및 10 ㎎/㎏ 으로 단회 피하 투여하였다. 모르모트는, 투여 24 시간 후까지 절식시켰다. 각성 상태의 모르모트를, 투여 전 (0 시간), 투여 1, 2, 4, 8, 및 24 시간 후에 채혈하고, 글루테스트 센서 (산와 화학 연구소) 를 사용하여 혈당값을 측정하였다. 결과를 하기 표 7 에 나타낸다.

IGF-I 는, 0.3 ㎎/㎏ 으로부터 유의하게 혈당값을 저하시키고, 1 ㎎/㎏ 이상에서는 저혈당 증상이 관찰되고, 3 ㎎/㎏ 이상에서는 사망예가 관찰되었다.

R11-16B, R11-16C, R11-16D, R11-16E 및 R11-16F 가 혈당값에 미치는 영향을 검토하였다. 모르모트를 12 시간 절식시키고, 각 인간화 항체를, 10 ㎎/㎏ 으로 단회 정맥내 투여하였다. 모르모트는, 투여 24 시간 후까지 절식시켰다. 각성 상태의 모르모트를, 투여 전 (0 시간), 투여 1, 2, 4, 8, 및 24 시간 후에 채혈하고, 글루테스트 센서 (산와 화학 연구소) 를 사용하여 혈당값을 측정하였다. 결과를 하기 표 8 ∼ 표 10 에 나타낸다.

각 인간화 항체는, 용매만을 투여한 용매 대조군과 비교하여, 혈당값에 유의한 차를 관찰할 수 없고, 투여 후의 혈당값은 모두 50 ㎎/㎗ 이상이었다. 이러한 점에서, 각 인간화 항체는, IGF-I 와 같은 현저한 혈당 저하 작용을 갖지 않고, 혈당값에 영향을 미치지 않으므로, IGF-I 의 부작용인 저혈당을 극복하는 약제로서의 가능성이 나타났다.

[실시예 8] IGF-I 와 R11-16B 의 혈중 동태 (모르모트에 있어서의 혈중 동태) :

·IGF-I 의 혈중 동태 :

모르모트를 12 시간 절식시키고, 인간 재조합 IGF-I 를, 0.3, 1, 3 및 10 ㎎/㎏ 으로 피하 투여하였다. 모르모트는, 투여 24 시간 후까지 절식시켰다. 각성 상태의 모르모트를, 투여 전 (0 시간), 투여 1, 2, 4, 8, 10 및 24 시간 후에 채혈하고, 혈장 중의 인간 IGF-I 농도를 ELISA (DG100, R & D) 에 의해 측정하였다. 결과를 도 3 에 나타낸다.

혈장 중의 IGF-I 농도는 투여 용량에 의존하여 상승하고, 투여 24 시간 후의 혈장 중의 IGF-I 농도는 피크시의 약 50 ％ 이하까지 저하되어 있었다. 0.3 ㎎/㎏ 투여군의 투여 24 시간 후의 IGF-I 농도는 측정 하한 이하였다. 또, 10 ㎎/㎏ 투여군은 투여 4 시간 이후에 저혈당 때문에 사망했기 때문에 혈장을 채취할 수 없었다.

·인간화 항체의 혈중 동태 :

모르모트를 12 시간 절식시키고, 인간화 항체 R11-16B 를, 1.5 및 10 ㎎/㎏ 으로 단회 정맥내 투여하였다. 모르모트는, 투여 24 시간 후까지 절식시키고, 24 시간 후에 재급이하였다. 각성 상태의 모르모트를, 투여 전 (0 시간), 투여 2, 4, 8, 24, 48 및 72 시간 후에 채혈하고, 혈장 중의 인간화 항체 농도를 ELISA 에 의해 측정하였다. 결과를 도 4 에 나타낸다.

혈장 중의 인간화 항체 농도는 투여 용량에 의존하여 상승하고, 투여 48 시간 이후도 혈장 중의 인간화 항체 농도는 투여 24 시간 후와 비교하여 약 50 ％ 이상을 유지하고 있었다. 인간화 항체의 혈중 동태는 IGF-I 와 비교하여 지속성이 우수한 것이 나타났다.

산업상 이용가능성

본 발명은, 척추 동물의 IGF-I 수용체에 특이적으로 결합하여, IGF-I 수용체를 통해서, 근육량을 증가시키고, 혈당값을 저하시키지 않는 항체를 제공할 수 있기 때문에, 항 IGF-I 수용체 인간화 항체에 관한 질환의 치료, 예방 또는 진단에 이용 가능하다.

SEQUENCE LISTING <110> Teijin Pharma Limited KM Biologics Co., Ltd. <120> Humanized anti IGF-1R antibody <130> P190562WO <150> 2018-226669 <151> 2018-12-03 <160> 24 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-H1 <400> 1 Ser Tyr Trp Met His 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-H2 <400> 2 Glu Thr Asn Pro Ser Asn Ser Val Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Ser <210> 3 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-H3 <400> 3 Gly Arg Gly Arg Gly Phe Ala Tyr 1 5 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-L1 <400> 4 Arg Ala Ser Gln Asn Ile Asn Phe Trp Leu Ser 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-L2 <400> 5 Lys Ala Ser Asn Leu His Thr 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR-L3 <400> 6 Leu Gln Gly Gln Ser Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 7 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 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ctgtgtagct tgccgccact actactacgc cggtgtctgc 780 gtgcctgcct gcccgcccaa cacctacagg tttgagggct ggcgctgtgt ggaccgtgac 840 ttctgcgcca acatcctcag tgccgagagc agcgactccg agggtttcgt gatccacgac 900 ggcgagtgca tgcaggagtg cccctcaggc ttcatccgca acggcagcca gagcatgtac 960 tgcatccctt gtgaaggtcc ttgccccaag gtctgtgagg aagaaaagaa aacaaagacc 1020 attgattctg ttacttctgc tcagatgctt caaggatgca ccatcttcaa gggcaatttg 1080 ctcattaaca tccgacgggg gaataacatt gcttcagaac tggagaactt catggggctc 1140 atcgaggtgg tgacgggcta cgtgaagatc cgccattccc atgccttggt ctccttgtcc 1200 ttcctaaaaa accttcgcct catcttagga gaggagcagc tagaagggaa ttactccttc 1260 tacgtcctcg acaaccagaa cttgcagcaa ctatgggact gggaccaccg caacctgacc 1320 atcaaagcag ggaaaatgta ctttgctttc aatcccaaat tgtgtgtttc ggaaatttac 1380 cgcatggagg aagtgacggg gactaaaggg cgccaaagca aaggggacat aaacaccagg 1440 aacaacgggg aaagagcctc ctgtgaaagt gacgtcctgc atttcacctc caccaccacg 1500 tggaagaatc gcatcatcat aacctggcac cggtaccggc cccctgacta cagggatctc 1560 atcagcttca ccgtttacta caaggaagca ccttttaaga atgtcacgga gtatgatggg 1620 caggatgcct gcggctccaa cagctggaac atggtggacg tggacctccc gcccaacaag 1680 gacgtggagc ccggcatctt actgcatggg ctgaagccct ggactcagta cgccgtttac 1740 gtcaaggctg tgaccctcac catggtggag aacgaccata tccgtggggc caagagtgag 1800 atcttgtaca ttcgcaccaa tgcttcagtt ccttccattc ccttggacgt tctttcagca 1860 tcgaactcct cttctcagtt aatcgtgaag tggaaccctc cctctctgcc caacggcaac 1920 ctgagttact acattgtgcg ctggcagcgg cagcctcagg acggctacct ttaccggcac 1980 aattactgct ccaaagacaa aatccccatc aggaagtatg ccgacggcac cattgacatt 2040 gaggaggtca cagagaaccc gaagactgag gtgtgtggtg gagagaaagg gccttgctgc 2100 gcctgcccca aaactgaagc tgagaagcag gccgagaagg aggaggctga gtaccgcaaa 2160 gtctttgaga atttcctgca caactccatc tttgtgccca gacctgaaag gaagcggaga 2220 gatgtcatgc aagtggccaa caccaccatg tccagccgaa gcaggaacac cacggtggca 2280 gacacctaca acatcacaga tctggaagag ctagagacag agtacccttt ctttgagagc 2340 agagtggata ataaggagag aactgtcatt tctaaccttc ggcctttcac attgtaccgc 2400 attgatatcc acagctgcaa ccacgaggct gagaaactgg gctgcagcgc ctccaacttt 2460 gtctttgcaa ggactatgcc tgcagaagga gcagatgaca ttcctgggcc agtgacctgg 2520 gagccaaggc ctgaaaactc catcttttta aagtggccag aacctgagaa tcccaatgga 2580 ttgattctaa tgtatgaaat aaaatacgga tcacaagttg aggatcagcg agaatgtgtg 2640 tccagacagg aatacaggaa gtatggaggg gccaagctaa accggctaaa cccggggaac 2700 tacacagccc ggattcaggc tacatctctc tctgggaatg ggtcgtggac agatcctgtg 2760 ttcttctatg tccaggccaa aacaggatac gaaaacttca tccatctgat catcgctctg 2820 cccgtcgctg tcctgttgat cgtgggaggg ttggtgatca tgctgtacgt cttccataga 2880 aagagaaata acagcaggct ggggaatgga gtgctgtacg cgtctgtgaa cccggagtac 2940 ttcagcgctg cggatgtgta cgttcctgat gagtgggagg tggctcggga gaagatcacc 3000 atgagccggg aacttgggca ggggtcgttt gggatggtct atgaaggagt tgccaagggt 3060 gtggtgaaag acgaacctga aaccagagtg gccattaaaa cagtgaacga ggccgcgagc 3120 atgcgtgaaa ggatcgagtt tctcaacgag gcttctgtga tgaaggagtt caattgtcac 3180 catgtggtgc ggttgctggg tgtggtgtcc cagggccagc caacgctggt catcatggaa 3240 ctgatgacgc ggggcgatct caaaagttat ctccggtctc tgaggccaga aatggagaat 3300 aatccagtcc tagcacctcc aagcctaagc aagatgattc agatggctgg agagattgca 3360 gacggcatgg catacctcaa cgccaacaag ttcgtccaca gagaccttgc tgcccggaat 3420 tgcatggtag ccgaggattt cacagtcaaa attggagatt ttgggatgac gcgagatatc 3480 tatgagacag actattaccg gaaaggaggg aaagggctgt tgcccgtgcg ctggatgtct 3540 cccgagtccc tcaaggatgg agtcttcacc acttactcgg acgtctggtc cttcggggtt 3600 gtcctctggg agatcgccac actggccgag cagccctacc agggcttgtc caacgagcaa 3660 gtccttcgct tcgtcatgga gggcggcctt ctggacaagc cagacaactg ccccgacatg 3720 ctgtttgaat tgatgcgcat gtgctggcag tacaacccca agatgaggcc ttccttcctg 3780 gagatcatca gcagcatcaa agacgagatg gagcctggct tccgggaggt ctccttctac 3840 tacagtgagg agaacaagct gcccgagccg gaggagctgg acctggagcc agagaacatg 3900 gagagcgtcc ccctggaccc ctcggcctcc tcgtcctccc tgccactgcc cgacagacac 3960 tcaggacaca aggccgagaa cggccccggc cctggagtgc tggtgctccg cgccagcttc 4020 gatgagagac agccttacgc acacatgaac ggtggccgca agaacgagcg ggccttgccg 4080 ctgccccagt cttcgacctg cgattataag 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tgtatcccct gtgaaggccc ctgccccaag gtctgcggcg atgaagaaaa gaaaacgaaa 1020 accatcgatt ctgtgacgtc tgcccagatg ctccaagggt gcaccatttt gaagggcaat 1080 ctgcttatta acatccggcg aggcaataac attgcctcgg aattggagaa cttcatgggg 1140 ctcatcgagg tggtgactgg ctacgtgaag atccgccatt cccatgcctt ggtctccttg 1200 tccttcctga agaaccttcg tctcatctta ggagaggagc agctagaagg aaactactcc 1260 ttctatgtcc tggacaacca gaacttgcag cagctgtggg actggaacca ccggaacctg 1320 accgtcaggt cagggaaaat gtacttcgct ttcaatccca agctgtgtgt ctctgaaatt 1380 taccgaatgg aggaggtgac aggaacaaag ggacggcaga gcaaaggaga cataaacacc 1440 aggaacaacg gagagcgagc ttcctgtgaa agtgatgttc tccgtttcac ctccaccacc 1500 acctggaaga accgcatcat cataacgtgg caccggtacc ggccgccgga ctaccgggat 1560 ctcatcagtt tcacagtcta ctacaaggag gcacccttta aaaacgtcac ggaatacgac 1620 gggcaggatg cctgtggctc caacagctgg aacatggtgg acgtggacct gcctccgaac 1680 aaggaggggg agcctggcat tttgctgcat gggctgaagc cctggaccca gtatgcagtc 1740 tatgtcaagg ctgtgaccct caccatggtg gaaaacgacc acatccgtgg ggccaaaagt 1800 gaaatcttgt acattcgcac caacgcttca gttccttcca ttcctctaga tgtcctctcg 1860 gcatcaaact cctcctctca gctgatcgtg aagtggaacc ccccaactct gcccaatggt 1920 aacttgagtt actacattgt gaggtggcag cggcagccgc aggatggcta tctgttccgg 1980 cacaactact gctccaaaga caaaataccc atcagaaagt acgccgatgg taccatcgat 2040 gtggaggagg tgacagaaaa tcccaagaca gaagtgtgcg gtggtgataa agggccgtgc 2100 tgtgcctgtc ctaaaaccga agctgagaag caggctgaga aggaggaggc tgagtaccgt 2160 aaagtctttg agaatttcct tcacaactcc atctttgtgc ccagacctga gaggaggcgg 2220 agagatgtcc tgcaggtggc taacaccacc atgtccagcc gaagcaggaa caccacggta 2280 gctgacacct acaatatcac agacccggaa gagttcgaga cagaataccc tttctttgag 2340 agcagagtgg ataacaagga gaggactgtc atttccaacc tccggccttt cactctgtac 2400 cgtatcgata tccacagctg caaccacgag gctgagaagc tgggctgcag cgcctccaac 2460 tttgtctttg caagaaccat gccagcagaa ggagcagatg acattcctgg cccagtgacc 2520 tgggagccaa gacctgaaaa ctccatcttt ttaaagtggc cagaacccga gaaccccaac 2580 ggattgattc taatgtatga aataaaatac ggatcgcaag tcgaggatca gcgggaatgt 2640 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aggcatcgac 120 atccgcaacg actatcagca gctgaagcgc ctggagaact gcacggtgat cgagggctac 180 ctccacatcc tgctcatctc caaggccgag gactaccgca gctaccgctt ccccaagctc 240 acggtcatta ccgagtactt gctgctgttc cgagtggctg gcctcgagag cctcggagac 300 ctcttcccca acctcacggt catccgcggc tggaaactct tctacaacta cgccctggtc 360 atcttcgaga tgaccaatct caaggatatt gggctttaca acctgaggaa cattactcgg 420 ggggccatca ggattgagaa aaatgctgac ctctgttacc tctccactgt ggactggtcc 480 ctgatcctgg atgcggtgtc caataactac attgtgggga ataagccccc aaaggaatgt 540 ggggacctgt gtccagggac catggaggag aagccgatgt gtgagaagac caccatcaac 600 aatgagtaca actaccgctg ctggaccaca aaccgctgcc agaaaatgtg cccaagcacg 660 tgtgggaagc gggcgtgcac cgagaacaat gagtgctgcc accccgagtg cctgggcagc 720 tgcagcgcgc ctgacaacga cacggcctgt gtagcttgcc gccactacta ctatgccggt 780 gtctgtgtgc ctgcctgccc gcccaacacc tacaggtttg agggctggcg ctgtgtggac 840 cgtgacttct gcgccaacat cctcagcgcc gagagcagcg actccgaggg gtttgtgatc 900 cacgacggcg agtgcatgca ggagtgcccc tcgggcttca tccgcaacgg cagccagagc 960 atgtactgca tcccttgtga aggtccttgc ccgaaggtct gtgaggaaga aaagaaaaca 1020 aagaccattg attctgttac ttctgctcag atgctccaag gatgcaccat cttcaagggc 1080 aatttgctca ttaacatccg acgggggaat aacattgctt cagagctgga gaacttcatg 1140 gggctcatcg aggtggtgac gggctacgtg aagatccgcc attctcatgc cttggtctcc 1200 ttgtccttcc taaaaaacct tcgcctcatc ctaggagagg agcagctaga agggaattac 1260 tccttctacg tcctcgacaa ccagaacttg cagcaactgt gggactggga ccaccgcaac 1320 ctgaccatca aagcagggaa aatgtacttt gctttcaatc ccaaattatg tgtttccgaa 1380 atttaccgca tggaggaagt gacggggact aaagggcgcc aaagcaaagg ggacataaac 1440 accaggaaca acggggagag agcctcctgt gaaagtgacg tcctgcattt cacctccacc 1500 accacgtcga agaatcgcat catcataacc tggcaccggt accggccccc tgactacagg 1560 gatctcatca gcttcaccgt ttactacaag gaagcaccct ttaagaatgt cacagagtat 1620 gatgggcagg atgcctgcgg ctccaacagc tggaacatgg tggacgtgga cctcccgccc 1680 aacaaggacg tggagcccgg catcttacta catgggctga agccctggac tcagtacgcc 1740 gtttacgtca aggctgtgac cctcaccatg gtggagaacg accatatccg tggggccaag 1800 agtgagatct tgtacattcg caccaatgct tcagttcctt ccattccctt ggacgttctt 1860 tcagcatcga actcctcttc tcagttaatc gtgaagtgga accctccctc tctgcccaac 1920 ggcaacctga gttactacat tgtgcgctgg cagcggcagc ctcaggacgg ctacctttac 1980 cggcacaatt actgctccaa agacaaaatc cccatcagga agtatgccga cggcaccatc 2040 gacattgagg aggtcacaga gaaccccaag actgaggtgt gtggtgggga gaaagggcct 2100 tgctgcgcct gccccaaaac tgaagccgag aagcaggccg agaaggagga ggctgaatac 2160 cgcaaagtct ttgagaattt cctgcacaac tccatcttcg tgcccagacc tgaaaggaag 2220 cggagagatg tcatgcaagt ggccaacacc accatgtcca gccgaagcag gaacaccacg 2280 gccgcagaca cctacaacat caccgacccg gaagagctgg agacagagta ccctttcttt 2340 gagagcagag tggataacaa ggagagaact gtcatttcta accttcggcc tttcacattg 2400 taccgcatcg atatccacag ctgcaaccac gaggctgaga agctgggctg cagcgcctcc 2460 aacttcgtct ttgcaaggac tatgcccgca gaaggagcag atgacattcc tgggccagtg 2520 acctgggagc caaggcctga aaactccatc tttttaaagt ggccggaacc tgagaatccc 2580 aatggattga ttctaatgta tgaaataaaa tacggatcac aagttgagga tcagcgagaa 2640 tgtgtgtcca gacaggaata caggaagtat ggaggggcca agctaaaccg gctaaacccg 2700 gggaactaca cagcccggat tcaggccaca tctctctctg ggaatgggtc gtggacagat 2760 cctgtgttct tctatgtcca ggccaaaaca ggatatgaaa acttcatcca tctgatcatc 2820 gctctgcccg tcgctgtcct gttgatcgtg ggagggttgg tgattatgct gtacgtcttc 2880 catagaaaga gaaataacag caggctgggg aatggagtgc tgtatgcctc tgtgaacccg 2940 gagtacttca gcgctgctga tgtgtacgtt cctgatgagt gggaggtggc tcgggagaag 3000 atcaccatga gccgggaact tgggcagggg tcgtttggga tggtctatga aggagttgcc 3060 aagggtgtgg tgaaagatga acctgaaacc agagtggcca ttaaaacagt gaacgaggcc 3120 gcaagcatgc gtgagaggat tgagtttctc aacgaagctt ctgtgatgaa ggagttcaat 3180 tgtcaccatg tggtgcgatt gctgggtgtg gtgtcccaag gccagccaac actggtcatc 3240 atggaactga tgacacgggg cgatctcaaa agttatctcc ggtctctgag gccagaaatg 3300 gagaataatc cagtcctagc acctccaagc ctgagcaaga tgattcagat ggccggagag 3360 attgcagacg gcatggcata cctcaacgcc aataagttcg tccacagaga ccttgctgcc 3420 cggaattgca tggtagccga agatttcaca gtcaaaatcg gagattttgg tatgacgcga 3480 gatatctatg agacagacta ttaccggaaa ggagggaaag ggctgctgcc cgtgcgctgg 3540 atgtctcctg agtccctcaa ggatggagtc ttcaccactt actcggacgt ctggtccttc 3600 ggggtcgtcc tctgggagat cgccacactg gccgagcagc cctaccaggg cttgtccaac 3660 gagcaagtcc ttcgcttcgt catggagggc ggccttctgg acaagccaga caactgtcct 3720 gacatgctgt ttgaactgat gcgcatgtgc tggcagtata accccaagat gaggccttcc 3780 ttcctggaga tcatcagcag catcaaagag gagatggagc ctggcttccg ggaggtctcc 3840 ttctactaca gcgaggagaa caagctgccc gagccggagg agctggacct ggagccagag 3900 aacatggaga gcgtccccct ggacccctcg gcctcctcgt cctccctgcc actgcccgac 3960 agacactcag gacacaaggc cgagaacggc cccggccctg gggtgctggt cctccgcgcc 4020 agcttcgacg agagacagcc ttacgcccac atgaacgggg gccgcaagaa cgagcgggcc 4080 ttgccgctgc cccagtcttc gacctgcgac tacaaagacg atgacgacaa gtgagcggcc 4140 gc 4142 <210> 23 <211> 4142 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hIGF1R-D245N-A247T-E294D_FLAG <400> 23 gaattcatga agtctggctc cggaggaggg tccccgacct cgctgtgggg gctcctgttt 60 ctctccgccg cgctctcgct ctggccgacg agtggagaaa tctgcgggcc aggcatcgac 120 atccgcaacg actatcagca gctgaagcgc ctggagaact gcacggtgat cgagggctac 180 ctccacatcc tgctcatctc caaggccgag gactaccgca gctaccgctt ccccaagctc 240 acggtcatta ccgagtactt gctgctgttc cgagtggctg gcctcgagag cctcggagac 300 ctcttcccca acctcacggt catccgcggc tggaaactct tctacaacta cgccctggtc 360 atcttcgaga tgaccaatct caaggatatt gggctttaca acctgaggaa cattactcgg 420 ggggccatca ggattgagaa aaatgctgac ctctgttacc tctccactgt ggactggtcc 480 ctgatcctgg atgcggtgtc caataactac attgtgggga ataagccccc aaaggaatgt 540 ggggacctgt gtccagggac catggaggag aagccgatgt gtgagaagac caccatcaac 600 aatgagtaca actaccgctg ctggaccaca aaccgctgcc agaaaatgtg cccaagcacg 660 tgtgggaagc gggcgtgcac cgagaacaat gagtgctgcc accccgagtg cctgggcagc 720 tgcagcgcgc ctgacaacaa cacgacctgt gtagcttgcc gccactacta ctatgccggt 780 gtctgtgtgc ctgcctgccc gcccaacacc tacaggtttg agggctggcg ctgtgtggac 840 cgtgacttct gcgccaacat cctcagcgcc gagagcagcg actccgacgg gtttgtgatc 900 cacgacggcg agtgcatgca ggagtgcccc tcgggcttca tccgcaacgg cagccagagc 960 atgtactgca tcccttgtga aggtccttgc ccgaaggtct gtgaggaaga aaagaaaaca 1020 aagaccattg attctgttac ttctgctcag atgctccaag gatgcaccat cttcaagggc 1080 aatttgctca ttaacatccg acgggggaat aacattgctt cagagctgga gaacttcatg 1140 gggctcatcg aggtggtgac gggctacgtg aagatccgcc attctcatgc cttggtctcc 1200 ttgtccttcc taaaaaacct tcgcctcatc ctaggagagg agcagctaga agggaattac 1260 tccttctacg tcctcgacaa ccagaacttg cagcaactgt gggactggga ccaccgcaac 1320 ctgaccatca aagcagggaa aatgtacttt gctttcaatc ccaaattatg tgtttccgaa 1380 atttaccgca tggaggaagt gacggggact aaagggcgcc aaagcaaagg ggacataaac 1440 accaggaaca acggggagag agcctcctgt gaaagtgacg tcctgcattt cacctccacc 1500 accacgtcga agaatcgcat catcataacc tggcaccggt accggccccc tgactacagg 1560 gatctcatca gcttcaccgt ttactacaag gaagcaccct ttaagaatgt cacagagtat 1620 gatgggcagg atgcctgcgg ctccaacagc tggaacatgg tggacgtgga cctcccgccc 1680 aacaaggacg tggagcccgg catcttacta catgggctga agccctggac tcagtacgcc 1740 gtttacgtca aggctgtgac cctcaccatg gtggagaacg accatatccg tggggccaag 1800 agtgagatct tgtacattcg caccaatgct tcagttcctt ccattccctt ggacgttctt 1860 tcagcatcga actcctcttc tcagttaatc gtgaagtgga accctccctc tctgcccaac 1920 ggcaacctga gttactacat tgtgcgctgg cagcggcagc ctcaggacgg ctacctttac 1980 cggcacaatt actgctccaa agacaaaatc cccatcagga agtatgccga cggcaccatc 2040 gacattgagg aggtcacaga gaaccccaag actgaggtgt gtggtgggga gaaagggcct 2100 tgctgcgcct gccccaaaac tgaagccgag aagcaggccg agaaggagga ggctgaatac 2160 cgcaaagtct ttgagaattt cctgcacaac tccatcttcg tgcccagacc tgaaaggaag 2220 cggagagatg tcatgcaagt ggccaacacc accatgtcca gccgaagcag gaacaccacg 2280 gccgcagaca cctacaacat caccgacccg gaagagctgg agacagagta ccctttcttt 2340 gagagcagag tggataacaa ggagagaact gtcatttcta accttcggcc tttcacattg 2400 taccgcatcg atatccacag ctgcaaccac gaggctgaga agctgggctg cagcgcctcc 2460 aacttcgtct ttgcaaggac tatgcccgca gaaggagcag atgacattcc tgggccagtg 2520 acctgggagc caaggcctga aaactccatc tttttaaagt ggccggaacc tgagaatccc 2580 aatggattga ttctaatgta tgaaataaaa tacggatcac aagttgagga tcagcgagaa 2640 tgtgtgtcca gacaggaata caggaagtat ggaggggcca agctaaaccg gctaaacccg 2700 gggaactaca cagcccggat tcaggccaca tctctctctg ggaatgggtc gtggacagat 2760 cctgtgttct tctatgtcca ggccaaaaca ggatatgaaa acttcatcca tctgatcatc 2820 gctctgcccg tcgctgtcct gttgatcgtg ggagggttgg tgattatgct gtacgtcttc 2880 catagaaaga gaaataacag caggctgggg aatggagtgc tgtatgcctc tgtgaacccg 2940 gagtacttca gcgctgctga tgtgtacgtt cctgatgagt gggaggtggc tcgggagaag 3000 atcaccatga gccgggaact tgggcagggg tcgtttggga tggtctatga aggagttgcc 3060 aagggtgtgg tgaaagatga acctgaaacc agagtggcca ttaaaacagt gaacgaggcc 3120 gcaagcatgc gtgagaggat tgagtttctc aacgaagctt ctgtgatgaa ggagttcaat 3180 tgtcaccatg tggtgcgatt gctgggtgtg gtgtcccaag gccagccaac actggtcatc 3240 atggaactga tgacacgggg cgatctcaaa agttatctcc ggtctctgag gccagaaatg 3300 gagaataatc cagtcctagc acctccaagc ctgagcaaga tgattcagat ggccggagag 3360 attgcagacg gcatggcata cctcaacgcc aataagttcg tccacagaga ccttgctgcc 3420 cggaattgca tggtagccga agatttcaca gtcaaaatcg gagattttgg tatgacgcga 3480 gatatctatg agacagacta ttaccggaaa ggagggaaag ggctgctgcc cgtgcgctgg 3540 atgtctcctg agtccctcaa ggatggagtc ttcaccactt actcggacgt ctggtccttc 3600 ggggtcgtcc tctgggagat cgccacactg gccgagcagc cctaccaggg cttgtccaac 3660 gagcaagtcc ttcgcttcgt catggagggc ggccttctgg acaagccaga caactgtcct 3720 gacatgctgt ttgaactgat gcgcatgtgc tggcagtata accccaagat gaggccttcc 3780 ttcctggaga tcatcagcag catcaaagag gagatggagc ctggcttccg ggaggtctcc 3840 ttctactaca gcgaggagaa caagctgccc gagccggagg agctggacct ggagccagag 3900 aacatggaga gcgtccccct ggacccctcg gcctcctcgt cctccctgcc actgcccgac 3960 agacactcag gacacaaggc cgagaacggc cccggccctg gggtgctggt cctccgcgcc 4020 agcttcgacg agagacagcc ttacgcccac atgaacgggg gccgcaagaa cgagcgggcc 4080 ttgccgctgc cccagtcttc gacctgcgac tacaaagacg atgacgacaa gtgagcggcc 4140 gc 4142 <210> 24 <211> 4142 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hIGF1R-G315S-S316T_FLAG <400> 24 gaattcatga agtctggctc cggaggaggg tccccgacct cgctgtgggg gctcctgttt 60 ctctccgccg cgctctcgct ctggccgacg agtggagaaa tctgcgggcc aggcatcgac 120 atccgcaacg actatcagca gctgaagcgc ctggagaact gcacggtgat cgagggctac 180 ctccacatcc tgctcatctc caaggccgag gactaccgca gctaccgctt ccccaagctc 240 acggtcatta ccgagtactt gctgctgttc cgagtggctg gcctcgagag cctcggagac 300 ctcttcccca acctcacggt catccgcggc tggaaactct tctacaacta cgccctggtc 360 atcttcgaga tgaccaatct caaggatatt gggctttaca acctgaggaa cattactcgg 420 ggggccatca ggattgagaa aaatgctgac ctctgttacc tctccactgt ggactggtcc 480 ctgatcctgg atgcggtgtc caataactac attgtgggga ataagccccc aaaggaatgt 540 ggggacctgt gtccagggac catggaggag aagccgatgt gtgagaagac caccatcaac 600 aatgagtaca actaccgctg ctggaccaca aaccgctgcc agaaaatgtg cccaagcacg 660 tgtgggaagc gggcgtgcac cgagaacaat gagtgctgcc accccgagtg cctgggcagc 720 tgcagcgcgc ctgacaacga cacggcctgt gtagcttgcc gccactacta ctatgccggt 780 gtctgtgtgc ctgcctgccc gcccaacacc tacaggtttg agggctggcg ctgtgtggac 840 cgtgacttct gcgccaacat cctcagcgcc gagagcagcg actccgaggg gtttgtgatc 900 cacgacggcg agtgcatgca ggagtgcccc tcgggcttca tccgcaacag cacccagagc 960 atgtactgca tcccttgtga aggtccttgc ccgaaggtct gtgaggaaga aaagaaaaca 1020 aagaccattg attctgttac ttctgctcag atgctccaag gatgcaccat cttcaagggc 1080 aatttgctca ttaacatccg acgggggaat aacattgctt cagagctgga gaacttcatg 1140 gggctcatcg aggtggtgac gggctacgtg aagatccgcc attctcatgc cttggtctcc 1200 ttgtccttcc taaaaaacct tcgcctcatc ctaggagagg agcagctaga agggaattac 1260 tccttctacg tcctcgacaa ccagaacttg cagcaactgt gggactggga ccaccgcaac 1320 ctgaccatca aagcagggaa aatgtacttt gctttcaatc ccaaattatg tgtttccgaa 1380 atttaccgca tggaggaagt gacggggact aaagggcgcc aaagcaaagg ggacataaac 1440 accaggaaca acggggagag agcctcctgt gaaagtgacg tcctgcattt cacctccacc 1500 accacgtcga agaatcgcat catcataacc tggcaccggt accggccccc tgactacagg 1560 gatctcatca gcttcaccgt ttactacaag gaagcaccct ttaagaatgt cacagagtat 1620 gatgggcagg atgcctgcgg ctccaacagc tggaacatgg tggacgtgga cctcccgccc 1680 aacaaggacg tggagcccgg catcttacta catgggctga agccctggac tcagtacgcc 1740 gtttacgtca aggctgtgac cctcaccatg gtggagaacg accatatccg tggggccaag 1800 agtgagatct tgtacattcg caccaatgct tcagttcctt ccattccctt ggacgttctt 1860 tcagcatcga actcctcttc tcagttaatc gtgaagtgga accctccctc tctgcccaac 1920 ggcaacctga gttactacat tgtgcgctgg cagcggcagc ctcaggacgg ctacctttac 1980 cggcacaatt actgctccaa agacaaaatc cccatcagga agtatgccga cggcaccatc 2040 gacattgagg aggtcacaga gaaccccaag actgaggtgt gtggtgggga gaaagggcct 2100 tgctgcgcct gccccaaaac tgaagccgag aagcaggccg agaaggagga ggctgaatac 2160 cgcaaagtct ttgagaattt cctgcacaac tccatcttcg tgcccagacc tgaaaggaag 2220 cggagagatg tcatgcaagt ggccaacacc accatgtcca gccgaagcag gaacaccacg 2280 gccgcagaca cctacaacat caccgacccg gaagagctgg agacagagta ccctttcttt 2340 gagagcagag tggataacaa ggagagaact gtcatttcta accttcggcc tttcacattg 2400 taccgcatcg atatccacag ctgcaaccac gaggctgaga agctgggctg cagcgcctcc 2460 aacttcgtct ttgcaaggac tatgcccgca gaaggagcag atgacattcc tgggccagtg 2520 acctgggagc caaggcctga aaactccatc tttttaaagt ggccggaacc tgagaatccc 2580 aatggattga ttctaatgta tgaaataaaa tacggatcac aagttgagga tcagcgagaa 2640 tgtgtgtcca gacaggaata caggaagtat ggaggggcca agctaaaccg gctaaacccg 2700 gggaactaca cagcccggat tcaggccaca tctctctctg ggaatgggtc gtggacagat 2760 cctgtgttct tctatgtcca ggccaaaaca ggatatgaaa acttcatcca tctgatcatc 2820 gctctgcccg tcgctgtcct gttgatcgtg ggagggttgg tgattatgct gtacgtcttc 2880 catagaaaga gaaataacag caggctgggg aatggagtgc tgtatgcctc tgtgaacccg 2940 gagtacttca gcgctgctga tgtgtacgtt cctgatgagt gggaggtggc tcgggagaag 3000 atcaccatga gccgggaact tgggcagggg tcgtttggga tggtctatga aggagttgcc 3060 aagggtgtgg tgaaagatga acctgaaacc agagtggcca ttaaaacagt gaacgaggcc 3120 gcaagcatgc gtgagaggat tgagtttctc aacgaagctt ctgtgatgaa ggagttcaat 3180 tgtcaccatg tggtgcgatt gctgggtgtg gtgtcccaag gccagccaac actggtcatc 3240 atggaactga tgacacgggg cgatctcaaa agttatctcc ggtctctgag gccagaaatg 3300 gagaataatc cagtcctagc acctccaagc ctgagcaaga tgattcagat ggccggagag 3360 attgcagacg gcatggcata cctcaacgcc aataagttcg tccacagaga ccttgctgcc 3420 cggaattgca tggtagccga agatttcaca gtcaaaatcg gagattttgg tatgacgcga 3480 gatatctatg agacagacta ttaccggaaa ggagggaaag ggctgctgcc cgtgcgctgg 3540 atgtctcctg agtccctcaa ggatggagtc ttcaccactt actcggacgt ctggtccttc 3600 ggggtcgtcc tctgggagat cgccacactg gccgagcagc cctaccaggg cttgtccaac 3660 gagcaagtcc ttcgcttcgt catggagggc ggccttctgg acaagccaga caactgtcct 3720 gacatgctgt ttgaactgat gcgcatgtgc tggcagtata accccaagat gaggccttcc 3780 ttcctggaga tcatcagcag catcaaagag gagatggagc ctggcttccg ggaggtctcc 3840 ttctactaca gcgaggagaa caagctgccc gagccggagg agctggacct ggagccagag 3900 aacatggaga gcgtccccct ggacccctcg gcctcctcgt cctccctgcc actgcccgac 3960 agacactcag gacacaaggc cgagaacggc cccggccctg gggtgctggt cctccgcgcc 4020 agcttcgacg agagacagcc ttacgcccac atgaacgggg gccgcaagaa cgagcgggcc 4080 ttgccgctgc cccagtcttc gacctgcgac tacaaagacg atgacgacaa gtgagcggcc 4140 gc 4142

Claims (17)

1. 중사슬 가변 영역의 CDR-1 (CDR-H1) 서열로서, 서열 번호 1 의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 1 의 아미노산 서열에 있어서 1 지점의 아미노산 잔기가 치환된 아미노산 서열, 중사슬 가변 영역의 CDR-2 (CDR-H2) 서열로서, 서열 번호 2 의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 2 의 아미노산 서열에 있어서 1 혹은 2 지점의 아미노산 잔기가 치환된 아미노산 서열, 중사슬 가변 영역의 CDR-3 (CDR-H3) 서열로서, 서열 번호 3 의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 3 의 아미노산 서열에 있어서 1 혹은 2 지점의 아미노산 잔기가 치환된 아미노산 서열, 경사슬 가변 영역의 CDR-1 (CDR-L1) 서열로서, 서열 번호 4 의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 4 의 아미노산 서열에 있어서 1 혹은 2 지점의 아미노산 잔기가 치환된 아미노산 서열, 경사슬 가변 영역의 CDR-2 (CDR-L2) 서열로서, 서열 번호 5 의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 5 의 아미노산 서열에 있어서 1 지점의 아미노산 잔기가 치환된 아미노산 서열, 및 경사슬 가변 영역의 CDR-3 (CDR-L3) 서열로서, 서열 번호 6 의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 6 의 아미노산 서열에 있어서 1 혹은 2 지점의 아미노산 잔기가 치환된 아미노산 서열을 포함하고, 서열 번호 14 (인간 IGF-I 수용체) 의 세포외 도메인에 특이적으로 결합하는, 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체.
2. 제 1 항에 있어서,
   상기 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체가, 중사슬 가변 영역으로서, 서열 번호 7 의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 7 의 아미노산 서열에 있어서 1 혹은 수 지점에 있어서의 아미노산 잔기가 치환, 결실, 혹은 부가된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열, 및 경사슬 가변 영역으로서, 서열 번호 8 의 아미노산 서열, 또는 서열 번호 8 의 아미노산 서열에 있어서 1 혹은 수 지점에 있어서의 아미노산 잔기가 치환, 결실, 혹은 부가된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 포함하는, 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체.
3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
   상기 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체가, 중사슬 가변 영역으로서 서열 번호 7 의 아미노산 서열, 및 경사슬 가변 영역으로서 서열 번호 8, 9, 10, 11 및 12 에서 선택되는 어느 아미노산 서열을 포함하는, 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체.
4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
   정상 영역으로서, 인간 면역 글로블린의 각 클래스에 있어서의 정상 영역을 추가로 포함하는, 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체.
5. 제 4 항에 있어서,
   중사슬 정상 영역이, 인간 IgG4 클래스의 중사슬 정상 영역인, 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체.
6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,
   서열 번호 14 (인간 IGF-I 수용체) 의 아미노산 번호 308 내지 319 에 상당하는 아미노산 서열 (ProSerGlyPheIleArgAsnGlySerGlnSerMet) 을 갖는 펩티드를 포함하는 에피토프 또는 그 근방에 결합하는, 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체.
7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
   인간 또는 모르모트에서 유래하는 근아 세포의 증식을 유도하는 용량에 있어서, 당해 배양 세포에서의 글루코오스 흡수를 유도하지 않는, 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체.
8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
   척추 동물에 투여되고, 당해 척추 동물의 근육량 및/또는 체장의 증가를 유도하는 용량에 있어서, 당해 척추 동물의 혈당값을 저하시키지 않는, 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체.
9. 제 8 항에 있어서,
   척추 동물에 투여되고, 당해 척추 동물의 근육량 및/또는 체장의 증가를 유도하는 유효 용량에 대해 10 배 이상의 혈중 노출량에 있어서도, 당해 척추 동물의 혈당값을 저하시키지 않는, 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체.
10. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 기재된 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체를 코드하는 폴리뉴클레오티드 서열로 이루어지는 핵산 분자.
11. 제 10 항에 기재된 핵산 분자를 적어도 1 개 포함하는 클로닝 벡터 또는 발현 벡터.
12. 제 11 항에 기재된 벡터가 숙주 세포에 도입된 재조합 체세포.
13. 제 12 항에 기재된 재조합 체세포를 배양하고, 상기 재조합 체세포로부터 산생되는 당해 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체를 정제하는 공정을 포함하는, 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 기재된 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체의 제조 방법.
14. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 기재된 항 IGF-I 수용체 인간화 항체 혹은 그 단편, 또는 그들의 유도체, 제 10 항에 기재된 핵산 분자, 제 11 항에 기재된 벡터 혹은 제 12 항에 기재된 재조합 체세포를 유효 성분으로서 포함하는, 의약 조성품.
15. 제 14 항에 있어서,
    근위축성 질환 또는 저신장증의 치료에 사용되는, 의약 조성품.
16. 제 15 항에 있어서,
    근위축성 질환이 폐용성 근위축, 사르코페니아 또는 카켁시아인, 의약 조성품.
17. 제 15 항에 있어서,
    저신장증이 라론형 저신장증 또는 성장 호르몬 저항성 저신장증인, 의약 조성품.

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