KR20210039757A

KR20210039757A - 의약품 보존용 조성물 및 이의 제조방법

Info

Publication number: KR20210039757A
Application number: KR1020190122383A
Authority: KR
Inventors: 이승아; 김수경
Original assignee: 오스템임플란트 주식회사; 오스템파마 주식회사
Priority date: 2019-10-02
Filing date: 2019-10-02
Publication date: 2021-04-12
Also published as: KR102363733B1

Abstract

본 발명은 벤조산 계열 화합물 및 EDTA를 포함하는 보존용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명의 보존용 조성물은 벤조산 계열의 화합물의 함량을 현저히 낮추었음에도 중성에서도 우수한 보존 효과를 나타내도록 하여 안전성 및 안정성이 모두 확보될 수 있도록 하였다.

Description

의약품 보존용 조성물 및 이의 제조방법{COMPOSITION FOR MEDICINAL PRESERVATION AND METHODS THEREOF}

의약품 또는 화장품 등의 각종 제품에는 유기 수용성 고분자, 무기 화합물, 계면활성제, 교미제, 착색제 등의 다양한 성분들이 함유되어 있어 미생물이 성장하기에 적합한 환경이다. 이에 따라, 미생물에 의해 약품이 부패되는 것을 방지하고, 미생물을 경시적으로 사멸시켜 제품의 열화를 방지하기 위하여 보존제를 첨가하고 있다.

흔히 사용되는 보존제로는 파라벤 계열이 있다. 이러한 파라벤 계열의 보존제는 방부 효과가 pH 3-7에서 광범위하게 나타나며, 적은 양으로도 효과적이어서 널리 사용되어 왔으나, 최근에 파라벤의 독성 및 부작용이 있음이 알려지면서 파라벤의 보존제 사용이 제한되고 있다.

한편, 파라벤 계열 다음으로 보편적으로 사용되었던 벤조산 계열의 보존제는 파라벤과 달리 독성 및 부작용이 없어 보존제로의 사용이 확대되고 있으나, pH 5이하에서만 방부 효과를 가짐에 따라 의약품에서의 사용이 제한적이라는 문제가 있어왔다. 이에 따라 벤조산 계열 보존제의 적용 pH 범위를 중성으로 확장하여 다양한 제형의 의약품에서 사용할 수 있는 기술개발이 필요한 실정이다.

한국공개특허 제10-2015-0090130호

본 발명의 목적은 벤조산 계열 화합물; 및 EDTA를 포함하는 보존용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 보존용 조성물의 제조방법을 제공하는 것이다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위한 본 발명의 일 측면은 벤조산 계열 화합물; 및 에틸렌다이아민테트라아세트산(ethylenediaminetetraacetic acid, EDTA)을 포함하는, 보존용 조성물에 관한 것이다.

본 발명에서 “보존용 조성물”은 통상의 보존제를 의미하거나, 이를 포함하는 조성물일 수 있다. 이는 의약품, 화장품, 식품 등의 분해 또는 감염 위험성이 있는 미생물의 증식을 예방하거나 저지하기 위해 사용되는 물질이다. 특히, 진균류 및/또는 곰팡이에 특이적인 활성에 더하여 세균에 대한 항비생물 활성의 개선을 보여준다. 특히 의약품의 보존력을 향상시킨 것일 수 있으며, 의약외품, 외용 의약품의 보존력 향상도 포함할 수 있다.

상기 보존용 조성물은 오염의 위험성이 큰 경구용 액제(현탁제 또는 유제 포함), 외용액제, 크림제 및 다회 사용 무균제제(주사용 다용량 제제, 점안제)와 같이 수분을 함유하는 제제에서의 첨가물로 사용될 수 있으며, 구체적으로 액상 제제, 내용액제 또는 외용액제에 적용될 수 있다. 상기 첨가는 주성분과 동시 또는 이시로 혼합하는 방식으로 이루어질 수 있다.

본 발명에서, '벤조산 계열 화합물'은 통상 보존제 등에 적용될 수 있는 것으로서, 벤조산, 벤조산나트륨, 파라옥시벤조산메틸, 파라옥시벤조산에틸, 파라옥시벤조산프로필, 파라옥시벤조산부틸 등을 포함할 수 있다.

또한, 본 발명의 상기 보존 용도로서 적용되는 '벤조산 계열 화합물'은 동일 효과를 나타낼 수 있는 소르빈산, 소르빈산칼륨, 소르빈산나트륨, 클로로부탄올(클로로부톨), 염화벤잘코늄, 염화벤제토늄, 페놀, 프레솔, 클로로크레솔, 벤질알콜, 부틸파라벤, 염화세틸피리디늄, 염화부탄올, 염화크레솔, 크레솔, 에틸파라벤, 메틸파라벤, 메틸파라벤소듐, 페닐에틸알콜, 초산페닐수은, 질산페닐수은, 벤조산칼륨, 프로필파라벤, 프로필파라벤소듐, 데히드로초산나트륨, 프로피온산나트륨, 치메로살, 티몰 등으로 대체하여 적용될 수 있으며, 상기 종류에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서, '에틸렌다이아민테트라아세트산(ethylenediaminetetraacetic acid, EDTA)'는 하기 화학식 1의 구조를 포함하며, 이의 유도체 또는 이의 염을 모두 포함할 수 있다.

[화학식 1]

본 발명에서 상기 EDTA, 이의 유도체 또는 이의 염은 안정화제 용도로 사용될 수 있다. 상기 안정화제는 주성분을 포함하는 의약 물질의 화학적 분해, 물리적 변화를 억제하는 목적으로 액상 제제 등에 첨가하는 물질로서, EDTA, 이의 유도체 또는 이의 염 뿐 아니라, 산화티탄, 메타인산나트륨, 로릴 황산 나트륨(sodium lauryl sulfate, SLS), 이들의 유도체 또는 이들의 염 등을 포함할 수 있으며, 상기에 제한되는 것은 아니다.

보존제의 용도로 활용되는 벤조산 계열 화합물의 경우 다른 보존제들과 달리 특유의 향이 없고 인체에 특별한 독성이 발견되지 않는 등의 안정성이 보장되어, 최근에 가장 많이 활용되고 있는 보존제 중 하나이다. 그러나, 벤조산 계열의 화합물을 포함하는 보존제는 pH 5 이하의 산성 조건에서만 안정성을 유지할 뿐, 중성에서는 안정성이 거의 유지되지 않음에 따라, pH 5 이하의 의약품 등에서만 보존제로 활용되는 한계가 있었다.

본 발명자들은 방부 효능 또는 보존력과는 무관한 EDTA 계열의 물질을 안정화제로서 벤조산 계열의 화합물과 일정 비율로 혼합할 경우, 중성 환경에서도 활성을 띄며 우수한 방부 효과가 있음을 새로이 규명하였다.

구체적으로, 상기 벤조산 계열 화합물은 0.01 내지 0.5 중량%로 포함되는 것일 수 있다.

또한 구체적으로, 상기 EDTA는 0.01 내지 0.2중량%로 포함되는 것일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에서는 벤조산나트륨 및 EDTA가 일정 중량% 비율로 포함되는 보존용 조성물을 제조하여 대한약전 일반시험법 보존력 시험법에 따라 그 효능을 확인한 결과, 중성에서도 매우 높은 수준의 항균 및 항진균 효과를 나타냄으로써 의약품의 보존 효과가 우수함을 확인하였다(표 2).

또한 구체적으로, 상기 보존용 조성물은 pH 조절제를 더욱 포함하는 것일 수 있다. 상기 pH 조절제는 염기성의 pH 조절제일 수 있다. 예컨대 수산화물을 증류수에 녹여 제조된 조절제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니고 pH 를 중성으로 조절할 수 있는 것이면 제한없이 사용할 수 있다.

더욱 구체적으로, 상기 pH 조절제는 포타슘하이드록사이드(KOH), 칼슘하이드록사이드(Ca(OH)₂), 소듐 카본네이트(Na₂CO₃), 포타슘카본네이트(K₂CO₃), 소듐바이카보네이트(NaHCO₃), 리튬하이드록사이드(LiOH) 시트릭액씨드(citric acid), 락틱액씨드(lactic acid), 2-아미노부탄올(2-Aminobutanol), 아세틱 액씨드(Acetic Acid), 아세틸 만델릭 액씨드(Acetyl Mandelic Acid), 아디픽 액씨드(Adipic Acid), 알루미늄 하이드록사이드 옥사이드(Aluminum Hydroxide Oxide), 알루미늄 트리포르메이트(Aluminum Triformate), 아미노에틸 프로판디올(Aminoethyl Propanediol), 아미노메틸 프로판디올(Aminomethyl Propanediol), 아미노메틸 프로판올(Aminomethyl Propanol), 아미노프로판디올(Aminopropanediol), 암모니아(Ammonia), 암모늄 바이카르보네이트(Ammonium Bicarbonate), 암모늄 카바메이트(Ammonium Carbamate), 암모늄 카르보네이트(Ammonium Carbonate), 암모늄 글리코레이트(Ammonium Glycolate), 암모늄 하이드록사이드(Ammonium Hydroxide), 암모늄 포스페이트(Ammonium Phosphate), 아스코르빅 액씨드(Ascorbic Acid), 아젤라익 액씨드(Azelaic Acid), 바바수 액씨드(Babassu Acid), 벤질릭 액씨드(Benzilic Acid), 벤조익 액씨드(Benzoic Acid), 비스-하이드록시에틸 트로메타민(Bis-Hydroxyethyl Tromethamine), 부틸 디에탄올아민(Butyl Diethanolamine), 부틸에탄올아민(Butylethanolamine), 칼슘 시트레이트(Calcium Citrate), 칼슘 디하이드로젠 포스페이트(Calcium Dihydrogen Phosphate), 칼슘 글라이시네이트(Calcium Glycinate), 칼슘 옥사이드(Calcium Oxide), 캠포르 술포닉 액씨드(Camphor Sulfonic Acid), 클로로아세틱 액씨드(Chloroacetic Acid), 쿠퍼 글리시네이트(Copper Glycinate), 디부틸 에탄올아민(Dibutyl Ethanolamine), 디에탄올아민(Diethanolamine), 디에탄올아민 바이설페이트(Diethanolamine Bisulfate), 디이소프로판올아민(Diisopropanolamine), 디이소프로필아민(Diisopropylamine), 디메틸 이소프로판올아민(Dimethyl Isopropanolamine), 디메틸 MEA(Dimethyl MEA), 디올레오일 에데톨모늄 메쏘설페이트(Dioleoyl Edetolmonium Methosulfate), 디올레일 포스페이트(Dioleyl Phosphate), 디포타지움 포스페이트(Dipotassium Phosphate), 디프로필렌트리아민(Dipropylenetriamine), 디소듐 푸마레이트(Disodium Fumarate), 디소듐 포스페이트(Disodium Phosphate), 디소듐 파이로포스페이트(Disodium Pyrophosphate), 디소듐 타트레이트(Disodium Tartrate), 에탄올아민(Ethanolamine), 에탄올아민 염화수소(Ethanolamine HCl), 에틸 에탄올아민(Ethyl Ethanolamine), 포믹 액씨드(Formic Acid), 푸마릭 액씨드(Fumaric Acid), 갈락투로닉 액씨드(Galacturonic Acid), 제라닉 액씨드(Geranic Acid), 글루코헵토닉 액씨드(Glucoheptonic Acid), 글루코사민 염화수소(Glucosamine HCl), 글루쿠로닉 액씨드(Glucuronic Acid), 글루타릭 액씨드(Glutaric Acid), 글라이콜릭 액씨드(Glycolic Acid), 글리옥실릭액씨드(Glyoxylic Acid), 구아니딘 카보네이트(Guanidine Carbonate), 하이드로브로믹 액씨드(Hydrobromic Acid), 하이드록클로릭 액씨드(Hydrochloric Acid), 이미다졸(Imidazole), 이소프로판올아민(Isopropanolamine), 이소프로필아민(Isopropylamine), 케토글루타릭 액씨드(Ketoglutaric Acid), 락토비오닉 액씨드(Lactobionic Acid), 리튬 카르보네이트(Lithium Carbonate), 마그네슘 카르보네이트(Magnesium Carbonate), 마그네슘 카르보네이트 하이드록사이드(Magnesium Carbonate Hydroxide), 마그네슘 글리시네이트(Magnesium Glycinate), 마그네슘 하이드록사이드(Magnesium Hydroxide), 마그네슘 옥사이드(Magnesium Oxide), 말레익 액씨드(Maleic Acid), 말릭 액씨드(Malic Acid), 말로닉 액씨드(Malonic Acid), 말토바이오닉 액씨드(Maltobionic Acid), 메타포스포릭 액씨드(Metaphosphoric Acid), 메톡시 PEG-100/폴리엡실론 카프로락톤 에틸헥사노에이트(Methoxy PEG-100/Polyepsilon Caprolactone Ethylhexanoate), 메톡시 PEG-100/폴리엡실록 카프로락톤 팔미테이트(Methoxy PEG-100/Polyepsilon Caprolactone Palmitate), 메톡시 PEG-114/폴리엡실론 카프로락톤(Methoxy PEG-114/Polyepsilon Caprolactone), 메틸에탄올아민(Methylethanolamine), 메틸글루카민(Methylglucamine), 모르폴린(Morpholine), 모르폴리노프로판 설포닉 액씨드(Morpholinopropane Sulfonic Acid Oxalic Acid), p-아니식 액씨드(p-Anisic Acid), 펜타포타슘 트리포스페이트(Pentapotassium Triphosphate), 펜타소듐 트리포스페이트(Pentasodium Triphosphate), 페놀설포프탈레인(Phenolsulfonphthalein), 포스포릭 액씨드(Phosphoric Acid), 포타슘 바이카보네이트(Potassium Bicarbonate), 포타슘 바이프탈레이트(Potassium Biphthalate), 포타슘 보레이트(Potassium Borate), 포타슘 시트레이트(Potassium Citrate), 포타슘 마그네슘 아스팔테이트(Potassium Magnesium Aspartate), 포타슘 옥사이드(Potassium Oxide), 포타슘 포스페이트(Potassium Phosphate), 포타슘 타트레이트(Potassium Tartrate), 프로피오닉 액씨드(Propionic Acid), 퀴닉 액씨드(Quinic Acid), 리보닉 액씨드(Ribonic Acid), 세바식 액씨드(Sebacic Acid), 세스퀴에톡시트리에탄올아민(Sesquiethoxytriethanolamine), 소듐 알루미네이트(Sodium Aluminate), 소듐 아니세이트(Sodium Anisate), 소듐 아라키데이트(Sodium Arachidate), 소듐 바이설페이트(Sodium Bisulfate), 소듐 보레이트(Sodium Borate), 소듐 칼슘 보론 포스페이트(Sodium Calcium Boron Phosphate), 소듐 칼슘 쿠퍼 포스페이트(Sodium Calcium Copper Phosphate), 소듐 칼슘 징크 포스페이트(Sodium Calcium Zinc Phosphate), 소듐 신남메이트(Sodium Cinnamate), 소듐 시트레이트(Sodium Citrate), 소듐 시아네이트(Sodium Cyanate), 소듐 푸마레이트(Sodium Fumarate), 소듐 글라이콜레이트(Sodium Glycolate), 소듐 하이드록사이드(Sodium Hydroxide), 소듐 옥사이드(Sodium Oxide), 소듐 세스퀴카르보네이트(Sodium Sesquicarbonate), 소듐 실리케이트(Sodium Silicate), 소듐 숙시네이트(Sodium Succinate), 소듐 트리메타포스페이트(Sodium Trimetaphosphate), 소듐 텅스테이트 안디모네이트(Sodium Tungstate Antimonate), 스트론튬 하이드록사이드(Strontium Hydroxide), 숙시닉 액씨드(Succinic Acid), 설포네이티드 스티렌/DVB 크로스폴리머(Sulfonated Styrene/DVB Crosspolymer), 설포릭 액씨드(Sulfuric Acid), 타타릭 액씨드(Tartaric Acid), TEA-디리시놀에이트/IPDI 코폴리머(TEA-Diricinoleate/IPDI Copolymer), 테트라포타지움 파이로포스페이트(Tetrapotassium Pyrophosphate), 테트라소듐 파이로포스페이트(Tetrasodium Pyrophosphate), 트리에탄올아민(Triethanolamine), 트리이소프로판올아민(Triisopropanolamine), 트리소듐 포스페이트(Trisodium Phosphate), 트리소듐 설포숙시네이트(Trisodium Sulfosuccinate), 트로메타민(Tromethamine), 비니거(Vinegar), 징크 카르보네이트 하이드록사이드(Zinc Carbonate Hydroxide), 징크 글라이시네이트(Zinc Glycinate) 및 징크 마그네슘 아스팔테이트(Zinc Magnesium Aspartate)로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상인 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기와 같은 본 발명의 보존용 조성물은 의약품, 의약외품 또는 외용 의약품의 보존 용도인 것일 수 있다. 구체적으로, 경구형 제제, 비경구형 제제를 모두 포함하며, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 연질캡슐제, 환제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 에어로졸, 멸균된 수용액, 액제, 비수성용제, 현탁제, 에멀젼, 점안제, 안연고제, 좌제, 크림, 젤, 패치, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플 라스마제 등의 보존 용도로 활용될 수 있으며, 상기 제제 형태에 제한되는 것은 아니다.

또한 본 발명의 보존용 조성물은 다른 부형제, 예를 들어 희석제, 용해보조제, 습윤제, 감미제, 방향제, 점증제 등과 함께 사용될 수 있다.

본 발명의 다른 일 측면은 a) 액상 제제를 제조하는 단계; b) 상기 제제에 벤조산 계열 화합물 및 EDTA를 첨가하는 단계를 포함하는, 보존용 조성물의 제조방법에 관한 것이다. 구체적으로, 상기 액상 제제는 용해보조제 및 점증제를 물과 혼합하여 제조한 것일 수 있다.

상기 용해보조제 및 점증제는 의약품, 화장품, 식품 둥의 제조시 통상적으로 첨가되는 부형제로서, 특히 의약품에 적용되는 부형제의 한 종류로서의 용해보조제, 점증제일 수 있다.

상기 용해보조제는 글리세린, 프로필렌 글리콜(propylene glycol) 등이 사용될 수 있으며, 상기 점증제는 소듐 메틸셀룰로오스(sodium carboxymethyl cellulose)를 사용할 수 있으나 상기에 제한되는 것은 아니며, 필요에 따라 적절히 변형하여 사용할 수 있다.

구체적으로, 상기 벤조산 계열 화합물은 벤조산, 벤조산나트륨, 파라옥시벤조산메틸, 파라옥시벤조산에틸, 파라옥시벤조산프로필 및 파라옥시벤조산부틸로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한 구체적으로, 상기 벤조산 계열 화합물은 0.01 내지 0.5 중량%로 첨가되는 것일 수 있다.

또한 구체적으로, 상기 EDTA는 0.01 내지 0.2중량%로 첨가되는 것일 수 있다.

상기 '벤조산 계열 화합물', 'EDTA', '보존용 조성물' 등은 상기 설명한 바와 같다.

상기 제조방법에 의해 제조된 본 발명의 보존용 조성물은 중성의 pH에서도 우수한 방부 효과를 가질 수 있다. 예컨대, pH 6.7인 중성의 액상 제제에 상기 제조방법에 의해 제조된 의약보존용 조성물을 첨가할 경우 우수한 방부 효과를 가지면서 인체에 안정한 제제를 제공할 수 있다.

또한 구체적으로, pH를 중성으로 조절하기 위하여, 상기 보존용 조성물에 pH 조절제를 포함하는 단계를 추가로 더 포함하는 것일 수 있다.

본 발명의 보존용 조성물은 기존에 인체에 독성 또는 부작용이 없는 것으로 알려진 보존제 및 안정제를 일정비율로 혼합시킴으로써 안정성이 보장될 뿐 아니라, 중성 조건에서 약리 활성이 뛰어난 의약품의 첨가제로도 사용이 가능한 바 의약품 보존용 조성물로서 활용도가 높다.

본 발명의 효과는 상기한 효과로 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 상세한 설명 또는 청구범위에 기재된 발명의 구성으로부터 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야한다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

제조예 1. 의약품 보존용 조성물의 제조

물의 함량이 79 내지 85 중량%인 액상 제제를 제조하였다.

구체적으로, 물을 포함하고, 6% 농글리세린, 5% 프로필렌 글리콜(propylene glycol) 및 점증제인 소듐 메틸셀룰로오스를 교반기를 이용하여 섞어, 액상 제제를 제조하였다. 이후 제조단계에서 만들어진 제형에 벤조산나트륨을 첨가한 후, 에틸렌다이아민테트라아세트산(ethylenediaminetetra acetic acid, EDTA)을 첨가하였다. 첨가된 벤조산나트륨 및 EDTA 각각의 함량에 따라 하기 표 1에 정리된 바와 같이 실시예 1 및 실시예 2로 구분된다.

구분(중량%)	실시예 1	실시예 2
벤조산나트륨	0.2	1.0
EDTA	0.15	0.15

이후, 상기와 같이 완성된 액제에 pH 조절제를 첨가하여 pH를 중성으로 조절하였다.상기pH조절제는 NaOH 용액을 사용하였으며, 수산화물을 증류수에 녹여 만든 것으로, 염기성 용액이면 대체하여 사용가능하다. pH조절제를 첨가하여 액상 제제를 pH 6.7로 조절하여 의약 보존용 조성물 1을 함유하는 액상 제제를 제조하였다.

비교예. 타사 보존제

벤조산나트륨 1%를 포함하는 pH 6.8의 타사의 기존 보존제를 비교예로 사용하였다.

실험예 1. 보존력 시험

상기 제조한 실시예 1 및 실시예 2의 중성 pH조건에서 의약품 보존 효과를 확인하였으며, 대조군으로 상기 비교예를 사용하였다.

대한약전 일반시험법 보존력 시험법에 따라 보존력을 평가하였다. 시험 제제 및 카테고리는 카테고리I C: 경구액제 (쓸 때 용해 또는 현탁하여 쓰는 시럽제 포함)이며, 시험 균주는 하기 표 2의 세균 3종 및 진균 2종을 사용하였다.

연번	세균	진균
1	Escherichia coli (ATCC 8739)	Candida albicans (ATCC 10231)
2	Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027)	Aspergillus niger (ATCC 16404)
3	Staphylococcus aureus (ATCC 6538)	-

상기 시험균들은 제제의 제조, 사용 또는 보존 중에 사람이나 환경으로부터 혼입될 염려가 있는 미생물을 대표하며 또한 감염 병원체이다. 시험균주는 미생물 보존기관에서 입수한 후 신선한 배지에 심어 계대마다 1계대로 정의하고 5계대 이내의 것을 사용하였다. 시험균은 혼합하지 않고 각각 단독으로 제제에 혼입하여 시험한다. 접종균은 한천배지 또는 액체배지 중 하나를 선택하여 배양하였다.

<한천평판배양>

상기 5종의 균주를 각각 한천평판배지 또는 한천사면배지의 표면에 접종하여 배양한다. 한천배지로는 세균의 경우 대두카제인소화한천배지를 쓰고 진균의 경우에는 사브로·포도당한천배지(Sabourauds dextrose agar), 포도당·펩톤 한천배지, 또는 감자· 포도당 한천배지 중 하나를 사용하였다. 세균의 경우에는 30 ~ 35 ℃에서 18 ~ 24 시간, C. albicans는 20 ~ 25 ℃에서 40 ~ 48 시간, A. niger는 20 ~ 25 ℃에서 1 주간 또는 충분히 포자가 형성될 때까지 배양하였다. 이들의 배양균체를 백금이 등으로 무균적으로 채취하고 멸균생리식염액 또는 0.1 % 펩톤식염액에 부유시키고 약 10⁸ 개/mL의 생균을 함유하는 부유액을 조제하였다. A. niger의 경우에는 폴리솔베이트 80을 0.05 %의 비율로 첨가한 멸균생리식염액 또는 0.1 %펩톤식염액에 부유시켜 약 10⁸ 개/mL의 포자를 함유하는 부유액을 조제하고, 상기 부유액을 접종균액으로 사용하였다.

<액체배양>

A. niger를 제외한 나머지 4종의 균주를 각각 적당한 액체배지에 배양 후 원심분리하여 배지를 제거하였다. 균체는 멸균생리식염액 또는 0.1 % 펩톤식염액으로 세정하고 같은 용액으로 약 10⁸개/mL의 생균 또는 포자를 함유하는 접종균액을 조제하였다.

상기 한천평판배지법과 액체배양법을 통해 수득된 접종균액은 24 시간 이내에 사용하며, 2 시간 이내에 피검체에 접종할 수 없는 경우에는 냉장고에 보존하였다. 접종균액 중의 균수를 사용직전에 계측하고 얻어진 균수값으로부터 접종직후의 제제 1 mL(g)당의 이론균수를 산출하였다.

시험 과정을 구체적으로 나타내면 아래와 같다.

제제를 함유하는 용기 5개의 각각에 접종균액을 무균적으로 주입하고 균일하게 혼합하였다. 제제의 용기 중에 균액을 무균적으로 혼합하기 어려울 때 또는 제제량이 적은 경우에는 멸균한 다른 용기에 시험에 필요한 충분한 양의 제제를 무균적으로 옮겨서 접종균액을 혼합하였다. 비무균제제의 경우, 균을 접종하지 않은 제제를 대조로 보존하며 생균수(세균수 및 진균수)를 측정한다. 균액을 제제 중에 균일하게 혼합하기 위하여 멸균한 주사침, 스파튜라, 유리봉 등을 사용할 수 있다.

제제 1 mL 또는 1 g당 10⁵ ~ 10⁶ 개의 생균수가 되도록 접종 혼합하고, 용기를 차광 하에서 20 ~ 25 ℃로 보존하고 0, 14 및 28일째에 피검제제에서 1 mL 또는 1 g를 취하여 생균수를 측정하였다. 상기의 기간 중 검체에 현저한 변화(예를 들면 색조의 변화나 다른 냄새의 발생)가 관찰되었을 때에는 기록을 하고 해당제제의 보존력에 대하여 평가검토 하였다. 생균수의 경시적인 변화는 시험개시 때의 균수를 100으로 한 백분율로 나타내었다. 생균수측정은 원칙적으로 「미생물 한도시험법」에 기재되어있는 한천평판희석법을 이용하였다. 또한 이 경우 발육저지물질의 확인시험을 하여 그 영향을 제거하여야 할 때에는 검액의 조제에 쓰는 완충액이나 액체배지 및 한천배지에 효과적인 불활성화제를 첨가할 수 있다. 다만 분활성제가 미생물의 증식에 영향을 주지 않는다는 확인이 필요하다. 보존제나 제제 그 자체의 존재가 생균수측정에 영향을 미치며 동시에 적당한 불활성제가 없는 경우에는 「미생물 한도시험법」에 기재되어 있는 멤브레인 필터법에 따라 생균수를 측정하였다.

판정 방법을 구체적으로 나타내면 아래와 같다.

보존력의 판정은 하기 표 3에 따르며, 표 3에 기록되어 있는 시험결과가 얻어진 경우 보존력이 있다고 판정하였다.

미생물	판정기준
미생물	14일 후	28일 후
세균	접종균수의 10% 이하	14일후의 수준과 동등하거나 또는 그 이하
진균	접종균수와 같은 수준 또는 그 이하	접종균수와 같은 수준 또는 그 이하

그 결과, 하기 표 4에 나타난 바와 같이 실시예 1, 2 및 비교예 모두 대한약전 보존력 시험 기준에 따라 보존력 시험을 통과하였다. 그러나, 본 발명의 실시예 1 및 2는 비교예 대비 항균 및 항진균 효과가 현저히 우수하여 방부 효과가 뛰어남을 확인하였다.

평가항목	1일차		14일차		28일차
평가항목	세균	진균	세균	진균	세균	진균
실시예 1	7.6X10⁵	6.4X10⁴	5.10X10³	2.9X10³	<20	1.9X10³
실시예 2	8.0X10⁵	5.0X10⁴	1.9X10³	8.0X10³	<20	3.6X10²
비교예	8.8X10⁵	8.6X10⁴	1.0X10⁴	1.0X10⁴	24X10³	6.0X10³

단위: CFU/ml

나아가, 실시예 1은 식약처 고시 내 기준으로 비교예 대비 벤조산나트륨의 함량을 1/5 수준으로 현저히 낮추었음에도 중성 pH 환경에서도 우수한 항균 및 항진균 효과를 나타내었는 바, 매우 우수한 보존력을 확보하였음을 확인하였다.

상기 결과를 통해 본 발명의 보존용 조성물이 의약품의 품목허가 신고 심사규정에 고시된 허용 함량을 초과하지 않는 범위 내에서도 우수한 효능을 가지는 바, 이는 본 발명의 보존용 조성물이 의약품 보존제 적용 pH 범위를 중성으로 확장하여 다양한 의약품에서 활용될 수 있음을 시사한다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시 예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단 일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.

Claims

벤조산 계열 화합물; 및
에틸렌다이아민테트라아세트산(ethylenediaminetetraacetic acid, EDTA)을 포함하는, 보존용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 벤조산 계열 화합물은 벤조산, 벤조산나트륨, 파라옥시벤조산메틸, 파라옥시벤조산에틸, 파라옥시벤조산프로필 및 파라옥시벤조산부틸로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상인 것인, 보존용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 벤조산 계열 화합물은 0.01 내지 0.5 중량%로 포함되는 것인, 보존용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 EDTA는 0.01 내지 0.2중량%로 포함되는 것인, 보존용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 보존용 조성물은 pH 조절제를 더욱 포함하는 것인, 보존용 조성물.
제5항에 있어서,
상기 pH 조절제는 포타슘하이드록사이드(KOH), 칼슘하이드록사이드(Ca(OH)₂), 소듐 카본네이트(Na₂CO₃), 포타슘카본네이트(K₂CO₃), 소듐바이카보네이트(NaHCO₃), 리튬하이드록사이드(LiOH) 시트릭액씨드(citric acid), 락틱액씨드(lactic acid), 2-아미노부탄올(2-Aminobutanol), 아세틱 액씨드(Acetic Acid), 아세틸 만델릭 액씨드(Acetyl Mandelic Acid), 아디픽 액씨드(Adipic Acid), 알루미늄 하이드록사이드 옥사이드(Aluminum Hydroxide Oxide), 알루미늄 트리포르메이트(Aluminum Triformate), 아미노에틸 프로판디올(Aminoethyl Propanediol), 아미노메틸 프로판디올(Aminomethyl Propanediol), 아미노메틸 프로판올(Aminomethyl Propanol), 아미노프로판디올(Aminopropanediol), 암모니아(Ammonia), 암모늄 바이카르보네이트(Ammonium Bicarbonate), 암모늄 카바메이트(Ammonium Carbamate), 암모늄 카르보네이트(Ammonium Carbonate), 암모늄 글리코레이트(Ammonium Glycolate), 암모늄 하이드록사이드(Ammonium Hydroxide), 암모늄 포스페이트(Ammonium Phosphate), 아스코르빅 액씨드(Ascorbic Acid), 아젤라익 액씨드(Azelaic Acid), 바바수 액씨드(Babassu Acid), 벤질릭 액씨드(Benzilic Acid), 벤조익 액씨드(Benzoic Acid), 비스-하이드록시에틸 트로메타민(Bis-Hydroxyethyl Tromethamine), 부틸 디에탄올아민(Butyl Diethanolamine), 부틸에탄올아민(Butylethanolamine), 칼슘 시트레이트(Calcium Citrate), 칼슘 디하이드로젠 포스페이트(Calcium Dihydrogen Phosphate), 칼슘 글라이시네이트(Calcium Glycinate), 칼슘 옥사이드(Calcium Oxide), 캠포르 술포닉 액씨드(Camphor Sulfonic Acid), 클로로아세틱 액씨드(Chloroacetic Acid), 쿠퍼 글리시네이트(Copper Glycinate), 디부틸 에탄올아민(Dibutyl Ethanolamine), 디에탄올아민(Diethanolamine), 디에탄올아민 바이설페이트(Diethanolamine Bisulfate), 디이소프로판올아민(Diisopropanolamine), 디이소프로필아민(Diisopropylamine), 디메틸 이소프로판올아민(Dimethyl Isopropanolamine), 디메틸 MEA(Dimethyl MEA), 디올레오일 에데톨모늄 메쏘설페이트(Dioleoyl Edetolmonium Methosulfate), 디올레일 포스페이트(Dioleyl Phosphate), 디포타지움 포스페이트(Dipotassium Phosphate), 디프로필렌트리아민(Dipropylenetriamine), 디소듐 푸마레이트(Disodium Fumarate), 디소듐 포스페이트(Disodium Phosphate), 디소듐 파이로포스페이트(Disodium Pyrophosphate), 디소듐 타트레이트(Disodium Tartrate), 에탄올아민(Ethanolamine), 에탄올아민 염화수소(Ethanolamine HCl), 에틸 에탄올아민(Ethyl Ethanolamine), 포믹 액씨드(Formic Acid), 푸마릭 액씨드(Fumaric Acid), 갈락투로닉 액씨드(Galacturonic Acid), 제라닉 액씨드(Geranic Acid), 글루코헵토닉 액씨드(Glucoheptonic Acid), 글루코사민 염화수소(Glucosamine HCl), 글루쿠로닉 액씨드(Glucuronic Acid), 글루타릭 액씨드(Glutaric Acid), 글라이콜릭 액씨드(Glycolic Acid), 글리옥실릭액씨드(Glyoxylic Acid), 구아니딘 카보네이트(Guanidine Carbonate), 하이드로브로믹 액씨드(Hydrobromic Acid), 하이드록클로릭 액씨드(Hydrochloric Acid), 이미다졸(Imidazole), 이소프로판올아민(Isopropanolamine), 이소프로필아민(Isopropylamine), 케토글루타릭 액씨드(Ketoglutaric Acid), 락토비오닉 액씨드(Lactobionic Acid), 리튬 카르보네이트(Lithium Carbonate), 마그네슘 카르보네이트(Magnesium Carbonate), 마그네슘 카르보네이트 하이드록사이드(Magnesium Carbonate Hydroxide), 마그네슘 글리시네이트(Magnesium Glycinate), 마그네슘 하이드록사이드(Magnesium Hydroxide), 마그네슘 옥사이드(Magnesium Oxide), 말레익 액씨드(Maleic Acid), 말릭 액씨드(Malic Acid), 말로닉 액씨드(Malonic Acid), 말토바이오닉 액씨드(Maltobionic Acid), 메타포스포릭 액씨드(Metaphosphoric Acid), 메톡시 PEG-100/폴리엡실론 카프로락톤 에틸헥사노에이트(Methoxy PEG-100/Polyepsilon Caprolactone Ethylhexanoate), 메톡시 PEG-100/폴리엡실록 카프로락톤 팔미테이트(Methoxy PEG-100/Polyepsilon Caprolactone Palmitate), 메톡시 PEG-114/폴리엡실론 카프로락톤(Methoxy PEG-114/Polyepsilon Caprolactone), 메틸에탄올아민(Methylethanolamine), 메틸글루카민(Methylglucamine), 모르폴린(Morpholine), 모르폴리노프로판 설포닉 액씨드(Morpholinopropane Sulfonic Acid Oxalic Acid), p-아니식 액씨드(p-Anisic Acid), 펜타포타슘 트리포스페이트(Pentapotassium Triphosphate), 펜타소듐 트리포스페이트(Pentasodium Triphosphate), 페놀설포프탈레인(Phenolsulfonphthalein), 포스포릭 액씨드(Phosphoric Acid), 포타슘 바이카보네이트(Potassium Bicarbonate), 포타슘 바이프탈레이트(Potassium Biphthalate), 포타슘 보레이트(Potassium Borate), 포타슘 시트레이트(Potassium Citrate), 포타슘 마그네슘 아스팔테이트(Potassium Magnesium Aspartate), 포타슘 옥사이드(Potassium Oxide), 포타슘 포스페이트(Potassium Phosphate), 포타슘 타트레이트(Potassium Tartrate), 프로피오닉 액씨드(Propionic Acid), 퀴닉 액씨드(Quinic Acid), 리보닉 액씨드(Ribonic Acid), 세바식 액씨드(Sebacic Acid), 세스퀴에톡시트리에탄올아민(Sesquiethoxytriethanolamine), 소듐 알루미네이트(Sodium Aluminate), 소듐 아니세이트(Sodium Anisate), 소듐 아라키데이트(Sodium Arachidate), 소듐 바이설페이트(Sodium Bisulfate), 소듐 보레이트(Sodium Borate), 소듐 칼슘 보론 포스페이트(Sodium Calcium Boron Phosphate), 소듐 칼슘 쿠퍼 포스페이트(Sodium Calcium Copper Phosphate), 소듐 칼슘 징크 포스페이트(Sodium Calcium Zinc Phosphate), 소듐 신남메이트(Sodium Cinnamate), 소듐 시트레이트(Sodium Citrate), 소듐 시아네이트(Sodium Cyanate), 소듐 푸마레이트(Sodium Fumarate), 소듐 글라이콜레이트(Sodium Glycolate), 소듐 하이드록사이드(Sodium Hydroxide), 소듐 옥사이드(Sodium Oxide), 소듐 세스퀴카르보네이트(Sodium Sesquicarbonate), 소듐 실리케이트(Sodium Silicate), 소듐 숙시네이트(Sodium Succinate), 소듐 트리메타포스페이트(Sodium Trimetaphosphate), 소듐 텅스테이트 안디모네이트(Sodium Tungstate Antimonate), 스트론튬 하이드록사이드(Strontium Hydroxide), 숙시닉 액씨드(Succinic Acid), 설포네이티드 스티렌/DVB 크로스폴리머(Sulfonated Styrene/DVB Crosspolymer), 설포릭 액씨드(Sulfuric Acid), 타타릭 액씨드(Tartaric Acid), TEA-디리시놀에이트/IPDI 코폴리머(TEA-Diricinoleate/IPDI Copolymer), 테트라포타지움 파이로포스페이트(Tetrapotassium Pyrophosphate), 테트라소듐 파이로포스페이트(Tetrasodium Pyrophosphate), 트리에탄올아민(Triethanolamine), 트리이소프로판올아민(Triisopropanolamine), 트리소듐 포스페이트(Trisodium Phosphate), 트리소듐 설포숙시네이트(Trisodium Sulfosuccinate), 트로메타민(Tromethamine), 비니거(Vinegar), 징크 카르보네이트 하이드록사이드(Zinc Carbonate Hydroxide), 징크 글라이시네이트(Zinc Glycinate) 및 징크 마그네슘 아스팔테이트(Zinc Magnesium Aspartate)로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상인 것인, 보존용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 보존용 조성물은 의약품, 의약외품 또는 외용 의약품의 보존 용도인 것인, 보존용 조성물.
a) 액상 제제를 제조하는 단계;
b) 상기 제제에 벤조산 계열 화합물 및 EDTA를 첨가하는 단계를 포함하는, 보존용 조성물의 제조방법.
제8항에 있어서,
상기 벤조산 계열 화합물은 벤조산, 벤조산나트륨, 파라옥시벤조산메틸, 파라옥시벤조산에틸, 파라옥시벤조산프로필 및 파라옥시벤조산부틸로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상인 것인, 보존용 조성물의 제조방법.
제8항에 있어서,
상기 벤조산 계열 화합물은 0.01 내지 0.5 중량%로 첨가되는 것인, 보존용 조성물의 제조방법.
제8항에 있어서,
상기 EDTA는 0.01 내지 0.2중량%로 첨가되는 것인, 보존용 조성물의 제조방법.