CN116508792A - 一种复合型消毒剂 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种复合型消毒剂，包括：天然植物提取物10～15份、生物活性物质10～15份、磷酸盐缓冲液40～50份和Tween‑80，所述Tween‑80的添加量为3％；其中，所述生物活性物质包括苦参碱、盐酸血根碱和绿原酸，所述苦参碱、盐酸血根碱和绿原酸的质量比为3:3:5。采用纯植物提取物和生物活性成分的复合配方，将苦参碱、盐酸血根碱和绿原酸按照一定比例复配，可充分利用三者的优良性能，有效增强了抗菌的广谱性和抑制效果。对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的杀灭效果良好，作用0.5min即可达到99.99％的灭杀效果；作用1.0min可全部灭杀。且本产品具有良好的稳定性。

Description

一种复合型消毒剂
技术领域
本发明属于消毒剂技术领域，具体涉及一种复合型消毒剂。
背景技术
消毒剂主要应用于医疗、工业、公共设施以及家庭防护领域，起到医疗消毒、公共环境消毒除臭、室内环境消毒杀菌等作用。使用消毒剂可以有效杀灭生活环境中的一些病菌，减少环境中的病菌对人体的侵害。近年来，消毒剂迅速走进普通家庭，成为多数家庭中必备防护用品。目前市面上的消毒剂根据化学成分不同主要分为无机消毒剂、有机消毒剂以及生物消毒剂三大类。
生物消毒剂主要包含的一些天然植物活性成分、生物酶等具有良好的杀菌消毒功效，而上述植物活性成分可从天然植物中提取，很好地符合绿色环保、使用安全等需求。随着人们的环保意识以及对生活质量的要求逐渐提高，绿色环保、使用安全、无毒无味的生物消毒剂已经成为了首选。
但是在实际使用中，单纯以植物提取物制成的消毒剂，其杀菌消毒效力有限，也存在稳定性不佳的缺点，无法满足一些使用场合的杀菌消毒需求。而现阶段，配制的生物杀菌剂中，会搭配一些表面活性剂来提升杀菌剂的杀菌效力，而一些植物提取物中含有的生物碱等成分会与阳离子表面活性剂发生配伍，使得阳离子表面活性剂的抗菌活性减弱，进而影响消毒剂的杀菌消毒功效。且现阶段的生物消毒剂存在稳定性不佳的问题。
发明内容
本发明的目的是要解决上述的技术问题，提供一种复合型消毒剂。
为了解决上述问题，本发明按以下技术方案予以实现的：
第一方面，本发明提供了一种复合型消毒剂，所述复合型消毒剂包括：
天然植物提取物10～15份、生物活性物质10～15份、磷酸盐缓冲液40～50份和Tween-80，所述Tween-80的添加量为3％；
其中，所述生物活性物质包括苦参碱、盐酸血根碱和绿原酸，所述苦参碱、盐酸血根碱和绿原酸的质量比为5:1:2。
在一种优选实施中，所述生物活性物质由苦参碱、盐酸血根碱、槐果碱和绿原酸组成，所述苦参碱、盐酸血根碱、槐果碱和绿原酸的质量比为5:1:2:4。
在一种优选实施中，所述复合型消毒剂包括：
天然植物提取物10～15份、生物活性物质10～15份、磷酸盐缓冲液40～50份、50％乙醇20～30份和Tween-80，所述Tween-80的添加量为3％。
在一种优选实施中，所述天然植物提取物包括金银花提取物、葡萄籽提取物、大青叶提取物、金橘黄酮提取物和生姜提取物，所述金银花提取物、葡萄籽提取物、大青叶提取物、金橘黄酮提取物和生姜提取物的质量比为3:1:3:1:2。
在一种优选实施中，所述磷酸盐缓冲液的PH为7.0。
在一种优选实施中，所述复合型消毒剂通过以下方法制备得到：
将生物活性物质与3％的Tween-80混合，在60℃恒温水域中搅拌溶解30min，然后加入部分溶有天然植物提取物的磷酸盐缓冲液，并补加剩余的磷酸盐缓冲液，继续搅拌1h，最后加入50％乙醇，即得复合型消毒剂。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明提供了一种复合型消毒剂，包括：天然植物提取物10～15份、生物活性物质10～15份、磷酸盐缓冲液40～50份和Tween-80，所述Tween-80的添加量为3％；其中，所述生物活性物质包括苦参碱、盐酸血根碱和绿原酸，所述苦参碱、盐酸血根碱和绿原酸的质量比为3:3:5。
本发明采用纯植物提取物和生物活性成分的复合配方，将苦参碱、盐酸血根碱和绿原酸按照一定比例复配，可充分利用三者的优良性能，有效增强了抗菌的广谱性和抑制效果。对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的杀灭效果良好，作用0.5min即可达到99.99％的灭杀效果；作用1.0min可全部灭杀。另一方面，经过14d、54℃的加速试验，本产品颜色、性状以及其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的杀菌效果不变，证明了本产品具有良好的稳定性。
综上所述，此新型复合型消毒剂具有良好的稳定性和杀菌性，能够满足抗菌、储藏等方面的要求。
具体实施方式
以下结合本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
随着消毒技术和水平的不断发展，绿色环保、杀菌谱广且高效低毒的植物源杀菌消毒剂正逐渐受到越来越多人的重视，植物被认为是化学类消毒剂替代品的最好开发资源。我国植物资源丰富，在开发植物源消毒剂上具有天然的优势和更为广阔及诱人的前景。
天然植物体是获得生物活性物质的宝库，地球上植物种类繁多，已统计的就有近50万种，其中有很多种都具有杀菌或抑菌功能。为此，申请人从现有植物种类及其生物活性物质中，创造性的筛选出若干原料，并发现该若干原料的组合所制得复合型消毒剂，其具有良好的稳定性和杀菌性，能够满足抗菌、储藏等方面的要求。
在本发明实施例中，所述复合型消毒剂，以重量份为单位，包括以下原料：天然植物提取物10～15份、生物活性物质10～15份、磷酸盐缓冲液40～50份和Tween-80，所述Tween-80的添加量为3％；
其中，所述生物活性物质包括苦参碱、盐酸血根碱和绿原酸，所述苦参碱、盐酸血根碱和绿原酸的质量比为5:1:2。
抗菌植物品种众多，其活性成分也有很多种，因此抗菌活性成分对细菌、真菌及植物本身的作用机制和原理是非常复杂的。本发明采用纯植物提取物和生物活性成分的复合配方，将苦参碱、盐酸血根碱和绿原酸按照一定比例复配，可充分利用三者的优良性能，有效增强了抗菌的广谱性和抑制效果。对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的杀灭效果良好，作用0.5min即可达到99.97％的灭杀效果；作用1.0min可全部灭杀。另一方面，经过14d、54℃的加速试验，本产品颜色、性状以及其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的杀菌效果不变，证明了本产品具有良好的稳定性。
综上所述，此新型复合型消毒剂具有良好的稳定性和杀菌性，能够满足抗菌、储藏等方面的要求。
在一种优选实施中，所述复合型消毒剂包括：天然植物提取物10～15份、生物活性物质10～15份、磷酸盐缓冲液40～50份、50％乙醇20～30份和Tween-80，所述Tween-80的添加量为3％；
其中，所述生物活性物质由苦参碱、盐酸血根碱、槐果碱和绿原酸组成，所述苦参碱、盐酸血根碱、槐果碱和绿原酸的质量比为5:1:2:4。所述磷酸盐缓冲液的PH为7.0。
其中，Tween-80的添加量为3％，能够起到极佳的增溶效果。
在一种优选实施中，所述天然植物提取物包括金银花提取物、葡萄籽提取物、大青叶提取物、金橘黄酮提取物和生姜提取物，所述金银花提取物、葡萄籽提取物、大青叶提取物、金橘黄酮提取物和生姜提取物的质量比为3:1:3:1:2。
其中，金橘黄酮提取物对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌及毛霉有抑制作用。低浓度下对细菌研究表现出明显的抑菌效果，可以有效降低杀菌浓度。
在一种实施中，本发明还提供了所述复合型消毒剂的制备方法，所述复合型消毒剂通过以下方法制备得到：将生物活性物质与3％的Tween-80混合，在60℃恒温水域中搅拌溶解30min，然后加入部分溶有天然植物提取物的磷酸盐缓冲液，并补加剩余的磷酸盐缓冲液，继续搅拌1h，最后加入50％乙醇，即得复合型消毒剂。
由于抗菌植物单一活性成分的抗菌谱窄，且长期使用易使细菌产生抗药性。为此，本发明利用多种生物活性成分的有效配伍联用，一方面是减小抑菌作用浓度，提高抗菌效力，另一方面是增强抗菌的广谱性。
下面通过更具体的实施例加以说明。
实施例1
本实施例1提供了一种复合型消毒剂，以重量份为单位，包括以下原料：天然植物提取物10份、生物活性物质10份、磷酸盐缓冲液40份和Tween-80，所述Tween-80的添加量为3％；
其中，所述生物活性物质包括苦参碱、盐酸血根碱和绿原酸，所述苦参碱、盐酸血根碱和绿原酸的质量比为5:1:2。所述天然植物提取物包括金银花提取物、葡萄籽提取物、大青叶提取物、金橘黄酮提取物和生姜提取物，所述金银花提取物、葡萄籽提取物、大青叶提取物、金橘黄酮提取物和生姜提取物的质量比为3:1:3:1:2。
具体的，所述复合型消毒剂通过以下方法制备得到：将生物活性物质与3％的Tween-80混合，在60℃恒温水域中搅拌溶解30min，然后加入部分溶有天然植物提取物的磷酸盐缓冲液，并补加剩余的磷酸盐缓冲液，继续搅拌1h，最后加入50％乙醇，即得复合型消毒剂。
实施例2
本实施例2提供了一种复合型消毒剂，以重量份为单位，包括以下原料：天然植物提取物10份、生物活性物质10份、磷酸盐缓冲液40份和Tween-80，所述Tween-80的添加量为3％；
其中，所述生物活性物质由苦参碱、盐酸血根碱、槐果碱和绿原酸组成，所述苦参碱、盐酸血根碱、槐果碱和绿原酸的质量比为5:1:2:4。所述天然植物提取物包括金银花提取物、葡萄籽提取物、大青叶提取物、金橘黄酮提取物和生姜提取物，所述金银花提取物、葡萄籽提取物、大青叶提取物、金橘黄酮提取物和生姜提取物的质量比为3:1:3:1:2。
具体的，所述复合型消毒剂通过以下方法制备得到：将生物活性物质与3％的Tween-80混合，在60℃恒温水域中搅拌溶解30min，然后加入部分溶有天然植物提取物的磷酸盐缓冲液，并补加剩余的磷酸盐缓冲液，继续搅拌1h，最后加入50％乙醇，即得复合型消毒剂。
实施例3
本实施例3提供了一种复合型消毒剂，以重量份为单位，包括以下原料：天然植物提取物10份、生物活性物质10份、磷酸盐缓冲液40份、50％乙醇20份和Tween-80，所述Tween-80的添加量为3％；
其中，所述生物活性物质由苦参碱、盐酸血根碱、槐果碱和绿原酸组成，所述苦参碱、盐酸血根碱、槐果碱和绿原酸的质量比为5:1:2:4。所述天然植物提取物包括金银花提取物、葡萄籽提取物、大青叶提取物、金橘黄酮提取物和生姜提取物，所述金银花提取物、葡萄籽提取物、大青叶提取物、金橘黄酮提取物和生姜提取物的质量比为3:1:3:1:2。
具体的，所述复合型消毒剂通过以下方法制备得到：将生物活性物质与3％的Tween-80混合，在60℃恒温水域中搅拌溶解30min，然后加入部分溶有天然植物提取物的磷酸盐缓冲液，并补加剩余的磷酸盐缓冲液，继续搅拌1h，最后加入50％乙醇，即得复合型消毒剂。
实施例4
本实施例4提供了一种复合型消毒剂，以重量份为单位，包括以下原料：天然植物提取物13份、生物活性物质13份、磷酸盐缓冲液45份、50％乙醇25份和Tween-80，所述Tween-80的添加量为3％；
其中，所述生物活性物质由苦参碱、盐酸血根碱、槐果碱和绿原酸组成，所述苦参碱、盐酸血根碱、槐果碱和绿原酸的质量比为5:1:2:4。所述天然植物提取物包括金银花提取物、葡萄籽提取物、大青叶提取物、金橘黄酮提取物和生姜提取物，所述金银花提取物、葡萄籽提取物、大青叶提取物、金橘黄酮提取物和生姜提取物的质量比为3:1:3:1:2。
具体的，所述复合型消毒剂通过以下方法制备得到：将生物活性物质与3％的Tween-80混合，在60℃恒温水域中搅拌溶解30min，然后加入部分溶有天然植物提取物的磷酸盐缓冲液，并补加剩余的磷酸盐缓冲液，继续搅拌1h，最后加入50％乙醇，即得复合型消毒剂。
实施例5
本实施例5提供了一种复合型消毒剂，以重量份为单位，包括以下原料：天然植物提取物15份、生物活性物质15份、磷酸盐缓冲液50份、50％乙醇30份和Tween-80，所述Tween-80的添加量为3％；
其中，所述生物活性物质由苦参碱、盐酸血根碱、槐果碱和绿原酸组成，所述苦参碱、盐酸血根碱、槐果碱和绿原酸的质量比为5:1:2:4。所述天然植物提取物包括金银花提取物、葡萄籽提取物、大青叶提取物、金橘黄酮提取物和生姜提取物，所述金银花提取物、葡萄籽提取物、大青叶提取物、金橘黄酮提取物和生姜提取物的质量比为3:1:3:1:2。
具体的，所述复合型消毒剂通过以下方法制备得到：将生物活性物质与3％的Tween-80混合，在60℃恒温水域中搅拌溶解30min，然后加入部分溶有天然植物提取物的磷酸盐缓冲液，并补加剩余的磷酸盐缓冲液，继续搅拌1h，最后加入50％乙醇，即得复合型消毒剂。
植物源消毒剂抗菌效果试验方法
多种抗菌活性成分的联合作用效果研究，对于广谱、安全、高效的新型消毒剂的研发有着十分重要的科学意义和应用价值。抗菌植物种类很多，其活性物质也多种多样，申请人在众多原料中，创造性的筛选出苦参碱、盐酸血根碱、槐果碱和绿原酸进行联合抗菌效果研究。
首先通过最小抑菌浓度试验(双倍MH稀释法)来测定各种抗菌活性成分的最小抑菌浓度(MIC)，得到其抑菌效力；再采用协同指数法测定多种物质的联合抗菌效应，得出其分级抑菌浓度指数(FIC)，并依据FIC的判定标准确定出最佳的复配组合。
一、实验方法-生物活性物质/天然植物提取物
1.1受试菌悬液的制备
在无菌环境条件下打开冻干菌种管，吸取营养肉汤适量加入其中，使菌种充分融化分散。然后取少量菌种悬浮液滴加到含5～10ml营养肉汤培养液的无菌试管中，在37℃下培育18～24h。用无菌接种环挑取第一代培养的菌悬液，轻轻划线接种在营养琼脂平板上，于37℃下培育18～24h。取出适量的上述第二代菌落接种在营养琼脂斜面上，在37℃下培育18～24h，即得到第三代菌体。第三代到第十四代的菌体繁殖比较稳定，可于每月在无菌条件下，划线传代接种于试管斜面上(每菌管可接种3～4支试管)，于37℃恒温培养18～24h，然后放在0～4℃下冷藏备用。
取培养的含菌株斜面的试管，加入适量无菌胰蛋白胨生理盐水溶液(TPS)，用吸管将菌落轻轻刮下并反复吹洗，完全洗下菌落后用吸管将洗液移至无菌试管中，用涡旋混合仪混合几十秒使菌悬液均匀。然后再用TPS将菌悬液稀释至107cfu/mL作为受试浓度菌悬液，注意要现配现用。放在0～4℃下冷藏备用。
1.2最小抑菌浓度(MIC)测定试验—琼脂稀释法
本试验采用水解酪蛋白琼脂(MH)稀释法将不同浓度的抗菌物质混匀在MH培养基中，然后于其表面接种细菌，观察细菌能否生长，从而得到该成分对受试菌种的最小抑菌浓度(MIC)。具体操作步骤如下：
(1)不同浓度抗菌药液的配制：在无菌条件下，将5g试验样品放入45mL灭菌磷酸盐缓冲液(PBS，0.03mol/L)中，震荡使其充分溶解，配制成10％分散均匀的溶液或悬浮液。然后采用二倍稀释法，将其用PBS对倍稀释成不同浓度梯度的受试液，于45～50℃水浴中恒温备用。
(2)双浓度MH培养基的配制：精确称取76gMH培养基，溶于1L蒸馏水中，不断搅拌加热至沸腾状态，然后于121℃下高压灭菌20min后备用。
(3)含抗菌液MH培养基的制备：取10mL抗菌液加入到无菌培养皿中，再将10ml双浓度MH培养基加入到上述培养皿中，且边加边轻轻摇晃平板，使抗菌液与MH培养基完全混合均匀，然后待其完全凝固后备用。
(4)用微量移液器取0.2ml菌悬液(浓度约为107cfu/mL)置于凝固后的培养皿中，并用灭菌棉签将培养基上的菌悬液涂抹均匀。
(5)用相同的方法制备不含抗菌物质的MH培养基，并对其进行接种，作为阳性对照试验。
(6)将上述涂菌后的培养皿倒置于37℃的恒温恒湿箱中，培养18～24h后，观察受试菌的生长情况。
(7)评判标准：培养基中完全无菌存在的最小相应浓度值即为该试样对试验菌的MIC。注意培养基中单一的菌落生长可以忽略不计。
1.3分级抑菌浓度(FIC)指数的测定
以各抗菌物质的MIC值为基础，采用二倍稀释法来配制不同浓度梯度的抗菌液(2、1、1/2、1/4及1/8MIC等)。将上述各浓度的抗菌液两两联合后用MH稀释法测其联合作用后的MIC，即先将A、B两种抗菌液各5ml加入到灭菌培养皿中，然后再加入10mL的无菌双浓度MH培养基，经过培养基稀释后，则实际上加入的两种抗菌液的量分别为1、1/2、1/4、1/8及1/16等MIC。待含抗菌液的MH培养基凝固后，在其表面均匀涂抹受试菌悬液，然后将其倒置在37℃恒温水浴箱中进行培养18～24h。取出后观察受试菌的生长抑制情况，从而得到各复配液联合作用后的MIC大小。根据如下FIC指数计算公式求出试验样品两两联合使用后的FIC值。重复进行3次，取平均值。
FIC指数的判定标准如下：当FIC≤0.5时，两种抗菌药物联合使用后发挥协同效果；当0.5＜FIC≤1.0，两种抗菌药物联合使用后起相加效果；当1.0＜FIC≤2.0，两种抗菌药物联合使用后表现为无相关作用；当FIC＞2.0时，则两种抗菌药物显示出拮抗作用。通过FIC指数的判定标准，来筛选出发挥协同抗菌效果的抗菌药物组合，并根据相加后FIC指数最小的试验药物组合来确定药物的最佳复配比。
1.4五种生物活性物质的抑菌效果
用大肠杆菌与金黄色葡萄球菌作试验菌，通过最小抑菌浓度测定试验(MH琼脂稀释法)来观察苦参碱、盐酸血根碱、槐果碱、黄芩苷和绿原酸分别对受试菌的生长抑制情况，测得各种单一物质的MIC，并根据MIC值大小判断出不同物质的抑菌能力。表1为所测得的五种抗菌提取物对两种试验菌的MIC值。
表1各种植物提取物的MIC(mg/ml)
表1中的MIC数据说明苦参碱、盐酸血根碱、槐果碱、黄芩苷和绿原酸对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均具有较好的抑菌能力，并且不同植物提取物的抑菌能力有很大的差别。所选取的五种提取物中抑菌效果最好的为盐酸血根碱，其次是槐果碱、绿原酸及苦参碱，而黄芩苷的抑菌效果排在最后。
1.5两种生物活性物质的复配联合抗菌效果
(1)苦参碱和盐酸血根碱的的联合抗菌效果
在苦参碱和盐酸血根碱各自MIC值基础上，先分别配置2MIC浓度，再不断对倍稀释成1、1/2、1/4、1/8及1/16等MIC，然后两两复配，并测试观察复配液对两种试验菌的生长抑制情况，结果如表2和表3所示，其中MICA和MICB分别为苦参碱和盐酸血根碱对菌体的MIC值。
表2苦参碱和盐酸血根碱复配物对大肠杆菌生长的抑制效果
表3苦参碱和盐酸血根碱复配物对金黄色葡萄球菌生长的抑制效果
注：“+”代表有菌生长，“-”代表无菌生长；MICA1和MICB1分别代表苦参碱和盐酸血根碱对大肠杆菌的MIC值；MICA2和MICB2分别代表苦参碱和盐酸血根碱对金黄色葡萄球菌的MIC值。
从以上两表可以看出：对于大肠杆菌，苦参碱和盐酸血根碱联合作用的MIC值为1/4MICA1+1/8MICB1，即10.3125mg/ml，分别为其单用时MIC值的1/4和1/8；而对于金黄色葡萄球菌，两者联合作用的MIC值为1/4MICA2+1/4MICB2，即18.125mg/ml，均为其各自单用时MIC值的1/4。据此，可以计算出两者复配后的FIC值，并且根据其判定标准可知，苦参碱和盐酸血根碱联合使用后，对大肠杆菌表现出协同作用，分别增效4倍和8倍，两者的质量比约为3:1；对金黄色葡萄球菌也表现出协同作用，均增效4倍，苦参碱和盐酸血根碱的质量比约为6:1。
表3苦参碱和盐酸血根碱联合作用的FIC指数
(2)通过以上方法，由FIC指数的判定标准可知，苦参碱和黄芩苷合使用后，对大肠杆菌表现为相加作用，分别增效2倍和8倍，两者的质量比为5:4；对金黄色葡萄球菌同样表现为相加作用，分别增效2倍和8倍，苦参碱和黄芩苷的质量比为5:2。
(3)通过以上方法，由FIC指数的判定标准可知，苦参碱和绿原酸联合使用后，对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌同时表现出协同作用，对两种受试菌均分别增效4倍和8倍，且两者联用对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的质量比分别为5:2和5:1。
(4)通过以上方法，由FIC指数的判定标准可知，苦参碱和绿原酸联合使用后，对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌同时表现出协同作用，对两种受试菌均分别增效4倍和8倍，且两者联用对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的质量比分别为5:2和5:1。
(5)通过以上方法，由FIC指数的判定标准可知，槐果碱和绿原酸联合使用后，对大肠杆菌表现出协同作用，分别增效4倍和8倍，两者的质量比为2:1；对金黄色葡萄球菌也表现为协同作用，均增效4倍，两者的质量比为1:1。
(6)通过以上方法，由FIC指数的判定标准可知，槐果碱和盐酸血根碱联合使用后，对大肠杆菌表现出协同作用，分别增效4倍和16倍，质量比为5:1；对金黄色葡萄球菌也表现为协同作用，均增效4倍，质量比为5:2。
(7)通过以上方法，由FIC指数的判定标准可知，盐酸血根碱和绿原酸联合使用后，对大肠杆菌表现出协同作用，均增效8倍，两者的质量比为5:4；对金黄色葡萄球菌也表现为协同作用，分别均增效4倍和8倍，两者的质量比为5:1。
1.5抗菌生物活性物质复配组合的确定
在所选取的五种抗菌物质中，黄芩苷对受试菌的MIC值最大，且通过两两复配联合抗菌试验发现：黄芩苷与苦参碱、槐果碱联合使用时FIC指数较大，对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均表现出相加作用，而苦参碱、槐果碱、盐酸血根碱与绿原酸两两配伍使用时，FIC指数较小，大多对两种受试菌表现出协同抗菌效果。据此，筛选出发挥协同抗菌效果的苦参碱-盐酸血根碱-槐果碱-绿原酸的复配组合，并测试其对受试菌的联合抗菌效果，确定复配组合中各组分的用量。
通过采用1.4中的相关试验方法，得到苦参碱、槐果碱、盐酸血根碱与绿原酸复配使用后对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均具有较好的抗菌性能，复配组合对两种受试菌的联用MIC分别为1/2MICA1(苦参碱)+1/16MICB1(盐酸血根碱)+1/4MICD1(槐果碱)+1/16MICE1(绿原酸)与1/8MICA2(苦参碱)+1/8MICB2(盐酸血根碱)+1/8MICD2(槐果碱)+1/4MICE2(绿原酸)，相应值约为25mg/ml和18.75mg/ml，其中苦参碱、槐果碱、盐酸血根碱与绿原酸的质量比分别约为10:1:4:1和5:1:2:4。
由所选五种物质的复配实验结果可以看出，在特定原料及特定配比下，植物活性抗菌物质之间具有最优的复配联合抗菌效果。
1.6抗菌天然植物提取物复配组合的确定
通过采用1.1-1.6的试验方法，从多种具有抗菌效果的天然植物中，得到金银花提取物、葡萄籽提取物、大青叶提取物、金橘黄酮提取物和生姜提取物的组合，且金银花提取物、葡萄籽提取物、大青叶提取物、金橘黄酮提取物和生姜提取物质量比约为3:1:3:1:2。
二、产品试验方法
2.1试验菌的制备
在无菌环境下打开大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌的冻干菌种管，加入适量营养肉汤轻轻吹洗数次，使菌种充分融化分散；然后取少量菌悬液滴加到5～10ml营养肉汤中，37℃培育18～24h，为第1代菌悬液。用无菌接种环挑取第1代菌悬液接种到营养琼脂平板上，37℃培育18～24h；取第2代菌落接种到营养琼脂斜面，37℃培育18～24h，得到第3代菌。将第3代菌接种于试管斜面上，37℃培养18～24h，保存于4℃冰箱。
2.2定量杀灭试验
(1)染菌样液的制备：分别以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌为试验菌，配制菌悬液，含菌量为1×107～5×107CFU/ml。
(2)中和剂鉴定试验：复合型消毒剂原液(实施例1-5)为待测消毒剂，用含0.5％硫代硫酸钠、0.3％卵磷脂、3.0％Tween-80的PBS为中和剂，作用于试验菌0.5min试验温度20℃±1℃，重复3次。
试验分为6组：①复合型消毒剂原液+染菌样液；②复合型消毒剂原液+染菌样液+4.5ml中和剂；③4.5ml中和剂+染菌样液对照；④复合型消毒剂原液+4.5ml中和剂+染菌样液对照；⑤染菌样液对照+4.5ml胰蛋白胨(TPS)；⑥试验所用同批次TPS。
(3)菌悬液定量杀菌试验：挑取典型菌落接种于普通琼脂培养基上，37℃培养24h，加入2～3ml无菌PBS清洗菌苔，用PBS将试验菌悬液稀释至1×107～5×107CFU/ml。20℃±1℃下，将0.5ml菌悬液与4.5ml复合型消毒剂原液(实施例1-5)混匀，分别作用0.5、1.0、1.5min。
取菌样混合液0.5ml加入4.5ml灭菌的中和剂溶液中，中和作用后取0.1ml接种于普通琼脂平板，37℃培养24h，计数菌落；同时以PBS稀释菌为阴性对照。重复3次，取平均值。根据各组活菌数(CFU/ml)计算杀菌率，杀菌率＝[(对照样品平均菌落数-被试样品平均菌落数)/对照样品平均菌落数]×100％。
2.3稳定性试验
将制备好的复合型消毒剂原液密封包装，置于54℃恒温箱中，存放14d。分别在存放前、存放后观察其颜色、澄清度变化及pH值，按定量杀灭试验程序检测其杀灭效果。
2.3试验结果
(1)中和剂鉴定试验：以实施例4为例，在20℃±1℃条件下，用消毒剂原液对白色念珠菌进行中和剂鉴定试验，重复3次，结果如表4所示。各组平板菌落平均生长量为：第1组0CFU/ml，第2组11CFU/ml，第3、4、5组分别为1890000CFU/ml、1870000CFU/ml、1900000CFU/ml，第3、4、5组三组间误差率为0.53％。表明中和剂可有效中和最高试验浓度复合型消毒剂对细菌的残余作用，且中和剂对试验菌无明显影响。而针对实施例1、实施例2、实施例3和实施例5，结果大致相同。
表4中和剂鉴定试验结果(CFU/ml)
(2)复合型消毒剂杀菌效果
复合型消毒剂原液(实施例一和实施例二)对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌分别作用0.5、1.0、1.5min，结果如表5所示。复合型消毒剂原液作用0.5min时，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的杀菌率≥99.97％；作用1min杀菌率均达到100.00％。
表5复合型消毒剂对试验菌的灭杀效果
注：阴性对照组无菌生长。
(3)复合型消毒剂的稳定性
54℃存放14d后，复合型消毒剂pH中性，为无不溶物的澄清溶液，性状无明显改变。对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌作用1min的灭杀效果，存放前为100.00％，存放后为100.00％(表6)。
表6复合型消毒剂稳定性试验
一方面，通过金橘黄铜提取物和生姜提取物联合使用，具有协同抗氧化和天然防腐的效果，对增强生物型消毒剂的稳定性起到一定的协助作用。金橘黄铜提取物和生姜提取物在消毒剂产品中起到植物源天然防腐保鲜的双层功效。
三、产品低温试验方法
3.1试验方法
(1)低温试验
取20ml制备的复合型消毒剂放置于-18℃，过夜(>8h)，观察其性状。
(2)菌悬液及染菌载体的制备
取大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的典型菌落分别接种于营养琼脂斜面、沙保营养琼脂培养基斜面，新鲜培养物用胰蛋白胨大豆肉汤(TSB)制备菌悬液。大肠杆菌、金黄色葡萄球菌含菌量为(1～5)×108cfu/ml，白色念珠菌含菌量为(1～5)×107cfu/ml。分别用无菌脱脂平纹白棉布(10mm×10mm)和灭菌牛皮纸(5cm×5cm)为载体，在无菌脱脂平纹白棉布上滴染10μl菌悬液，在灭菌牛皮纸表面滴染50μl菌悬液，涂抹均匀，干燥后于-18℃放置30min，备用。检测菌量为5×105～5×106cfu/cm2。
(3)试验条件
常温为(20.0±0.1)℃，低温为(-18.0±0.2)℃和(-5.0±0.2)℃。将消毒剂与菌悬液及染菌载体置于不同温度水浴中。
3.2试验结果：
(1)实施例1-实施例2的复合型消毒剂已结冰为固态。实施例3-实施例5的复合消毒剂在-18℃条件下过夜(>8h)，仍保持液体状态，无析出，无结晶。
(2)实施例3-实施例5的复合消毒剂原液在不同温度下的载体定量杀菌试验结果表明，常温(20℃)作用1min，对大肠杆菌的杀灭对数值>5.00；在-5℃作用5min，对大肠杆菌的杀灭对数值>5.00；在-18℃作用10min，对大肠杆菌的杀灭对数值>5.00。
可见，申请人研究发现，通过加入50％乙醇制备成复合型低温消毒剂，在低温条件下具有较好的杀菌效果，适用于低温消毒。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，故凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何修改、等同变化与修饰,均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims (6)

1.一种复合型消毒剂，其特征在于，所述复合型消毒剂包括：
天然植物提取物10～15份、生物活性物质10～15份、磷酸盐缓冲液40～50份和Tween-80，所述Tween-80的添加量为3％；
其中，所述生物活性物质包括苦参碱、盐酸血根碱和绿原酸，所述苦参碱、盐酸血根碱和绿原酸的质量比为5:1:2。
2.根据权利要求1所述的一种复合型消毒剂，其特征在于：
所述生物活性物质由苦参碱、盐酸血根碱、槐果碱和绿原酸组成，所述苦参碱、盐酸血根碱、槐果碱和绿原酸的质量比为5:1:2:4。
3.根据权利要求1或2所述的一种复合型消毒剂，其特征在于，所述复合型消毒剂包括：
天然植物提取物10～15份、生物活性物质10～15份、磷酸盐缓冲液40～50份、50％乙醇20～30份和Tween-80，所述Tween-80的添加量为3％。
4.根据权利要求3所述的一种复合型消毒剂，其特征在于：
所述天然植物提取物包括金银花提取物、葡萄籽提取物、大青叶提取物、金橘黄酮提取物和生姜提取物，所述金银花提取物、葡萄籽提取物、大青叶提取物、金橘黄酮提取物和生姜提取物的质量比为3:1:3:1:2。
5.根据权利要求4所述的一种复合型消毒剂，其特征在于：
所述磷酸盐缓冲液的PH为7.0。
6.根据权利要求5所述的一种复合型消毒剂，其特征在于，所述复合型消毒剂通过以下方法制备得到：
将生物活性物质与3％的Tween-80混合，在60℃恒温水域中搅拌溶解30min，然后加入部分溶有天然植物提取物的磷酸盐缓冲液，并补加剩余的磷酸盐缓冲液，继续搅拌1h，最后加入50％乙醇，即得复合型消毒剂。
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CN117751948A (zh) * 2023-12-21 2024-03-26 山东利尔康医疗科技股份有限公司 一种复合消毒剂及其制备方法与应用

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