CN115443996A - 一种柠檬醛的应用 - Google Patents

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吴阔
郑雪
张丽珍
史云超
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王小红
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Abstract

本发明公开了一种柠檬醛的应用，本发明为实现作物病害的绿色防控，从芳香植物源中筛选高效的杀菌活性成分，采用菌丝生长速率法测定了柠檬醛对烟草疫霉的抑菌活性。结果表明，当柠檬醛浓度达到44.5µg/mL时，柠檬醛对烟草疫霉有显著的抑制作用。透射电子显微镜观察柠檬醛处理的烟草疫霉细胞结构发现，柠檬醛能显著破坏烟草疫霉的细胞结构。本发明的柠檬醛具有环保、低细胞毒性、广谱性及避免菌株抗药性产生等诸多优点，有望成为防治烟草疫霉环境友好型的新型农药。

Description

一种柠檬醛的应用
技术领域
本发明属于生物应用技术领域，进一步属于生物农药技术领域，具体涉及一种柠檬醛的应用。
背景技术
烟草疫霉（Phytophtora parasitica var. nicotianae Tucker）是一种土传病原菌，具有广泛的寄主范围，在世界范围内严重危害烟草和其他茄科作物，特别在云南烟区，给烟农带来严重的经济损失。烟草疫霉可引起根、茎腐烂以及叶片枯萎，在烟草生长的各个生育期均可侵染引起发病。目前对该病的防治主要采取连续、大量使用化学农药的方法，由此导致病原菌抗性生理小种的产生、土壤微生物群落的破坏、农田生态环境的破坏以及农产品农药残留超标对人的健康带来危害。因此，研发安全、有效、环境友好型的生物源农药替代化学农药极为重要。
发明内容
本发明的目的在于提供一种柠檬醛的应用。
本发明的目的是这样实现的，所述的柠檬醛在制备防治烟草疫霉产品中的应用。
本发明研究结果表明，当柠檬醛浓度达到44.5µg/mL时，柠檬醛对烟草疫霉有显著的抑制作用。透射电子显微镜观察柠檬醛处理的烟草疫霉细胞结构发现，柠檬醛能显著破坏烟草疫霉的细胞结构。本发明的柠檬醛具有环保、低细胞毒性、广谱性及避免菌株抗药性产生等诸多优点，有望成为防治烟草疫霉环境友好型的新型农药。
附图说明
图1为柠檬醛对烟草疫霉菌落大小的影响；
图2为柠檬醛对烟草疫霉菌丝细胞结构的影响。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。
本发明所述的柠檬醛在制备防治烟草疫霉产品中的应用。
所述的柠檬醛的浓度为25.7-62.3µg/ml。
所述的柠檬醛的浓度为40~50µg/mL。
所述的柠檬醛的浓度为44.5µg/mL。
所述的产品为农药。
所述的产品为微乳剂、气雾剂或水乳剂。
所述的产品是由柠檬醛与有机溶剂或乳化剂组成的烟草疫霉杀菌剂。
所述的柠檬醛与有机溶剂或乳化剂的体积配比为1：（1~10）。
所述的有机溶剂为DMSO（二甲基亚砜）、丙酮或乙醇。
所述的乳化剂为吐温-20或吐温-80。
本发明所述的柠檬醛在制备防治烟草疫霉杀菌剂时包括柠檬醛药剂的制备、柠檬醛药剂的使用以及柠檬醛药剂抗病形态的观察等步骤，具体包括：
1、柠檬醛药剂配制：将柠檬醛按照1：1～10倍的比例与吐温-20或吐温-80或DMSO或丙酮或乙醇混合，充分混匀后，待用。
2、柠檬醛药剂熏蒸处理
用打孔器在无菌条件下取直径为5mm的烟草疫霉菌饼接入20mL黑麦培养基的培养皿(直径90mm)中央。将平板倒置，取1片直径为5mm的无菌滤纸置于皿盖中央，分别吸取0.5、1、1.5、2、2.5和3.5µL的柠檬醛滴于滤纸片上，以滤纸片上不添加柠檬醛的平板为对照。封口膜密封后置于25℃温度下培养7d左右，测量菌落直径并计算抑菌率。
3、柠檬醛药剂对菌丝细胞结构的影响
用打孔器在无菌条件下取直径为5mm的烟草疫霉菌饼接入黑麦培养基的培养皿中央。将平板倒置，取1片直径为5mm的无菌滤纸置于皿盖中央，吸取2.5µL的柠檬醛滴于滤纸片上，以滤纸片上不添加柠檬醛的平板为对照。封口膜密封后置于25℃温度下培养7d左右。制样，透射电子显微镜下观察柠檬醛对烟草疫霉菌丝细胞结构的影响。
下面以具体实施案例对本发明做进一步说明：
实施例1
柠檬醛药剂配制：将柠檬醛按照1：10的比例与吐温-20混合，充分混匀后，再用蒸馏水稀释，使柠檬醛的终浓度为10µg/mL。
实施例2
柠檬醛药剂配制：将柠檬醛按照1：7的比例与吐温-80混合，充分混匀后，再用蒸馏水稀释，使柠檬醛的终浓度为25µg/mL。
实施例3
柠檬醛药剂配制：将柠檬醛按照1：5的比例与丙酮混合，充分混匀后，再用蒸馏水稀释，使柠檬醛的终浓度为50µg/mL。
实施例4
柠檬醛药剂配制：将柠檬醛按照1：1的比例与乙醇混合，充分混匀后，再用蒸馏水稀释，使柠檬醛的终浓度为250µg/mL。
实施例5
柠檬醛药剂配制：将柠檬醛按照1：1的比例与DMSO混合，充分混匀后，再用蒸馏水稀释，使柠檬醛的终浓度为250µg/mL。
实施例6
熏蒸法柠檬醛浓度的计算：分别取0.5、1、1.5、2、2.5和3.5µL的柠檬醛，与适量有机溶剂或乳化剂充分混匀后滴于滤纸片上。以柠檬醛密度0.889g/mL，90mm直径的培养皿中空气体积50mL计算，则熏蒸法实验中柠檬醛的终浓度分别8.9µg/mL、17.8µg/mL、25.7µg/mL、35.6µg/mL、44.5µg/mL和62.3µg/mL。
实施例7
柠檬醛药剂熏蒸处理的烟草疫霉菌斑观察：用打孔器在无菌条件下取直径为5mm的烟草疫霉菌饼接入20mLPDA培养基的培养皿(直径90mm)中央。将平板倒置，取1片直径为5mm的无菌滤纸置于皿盖中央，吸取2.5µL柠檬醛滴于滤纸片上，以滤纸片上不添加柠檬醛的平板为对照。封口膜密封后置于25℃温度下培养7d左右，观察烟草疫霉菌斑大小及形状。
结果如图1所示：柠檬醛对烟草疫霉有一定的体外抑制作用，限制了烟草疫霉菌丝的生长。与空白对照相比，柠檬醛处理导致烟草疫霉菌落显著变小。
实施例8
柠檬醛药剂熏蒸处理对烟草疫霉的抑制率计算：用打孔器在无菌条件下取直径为5mm的烟草疫霉菌饼接入20mL黑麦培养基的培养皿(直径90mm)中央。将平板倒置，取1片直径为5mm的无菌滤纸置于皿盖中央，分别吸取0.5、1、1.5、2、2.5和3.5μL的柠檬醛，与适量有机溶剂或乳化剂充分混匀后滴于滤纸片上，以滤纸片上不添加柠檬醛的平板为对照。封口膜密封后置于25℃温度下培养7d左右，测量菌落直径并计算抑制率，每处理3次重复。按如下公式计算抑制率：抑制率(%)=(dC-dT)/(dC-5)×100。式中：dC为对照菌落直径；dT为不同处理条件下的菌落直径。
结果如表1所示，通过计算菌落生长抑制率发现，柠檬醛对烟草疫霉有显著的抑制效果。当其浓度为44.5µg/mL时，柠檬醛对烟草疫霉的抑制率达到了64.9%。然而，在其更高的浓度（大于62.3µg/mL）时，其抑制率反而有所下降。
Figure 544766DEST_PATH_IMAGE002
实施例9
柠檬醛药剂对菌丝细胞结构的影响：用打孔器在无菌条件下取直径为5mm的烟草疫霉菌饼接入黑麦培养基的培养皿中央。将平板倒置，取1片直径为5mm的无菌滤纸置于皿盖中央，吸取2.5µL的柠檬醛滴于滤纸片上，以滤纸片上不添加柠檬醛药剂的平板为对照。封口膜密封后置于25℃温度下培养7d左右。制样，透射电子显微镜下观察柠檬醛药剂对烟草疫霉菌丝细胞结构的影响。
结果如图2显示，柠檬醛药剂对烟草疫霉菌丝细胞结构有较大的影响。图2的A中空白对照组菌丝大部分细胞器正常，如线粒体膜结构和内脊明显可见。经过柠檬醛药剂处理的图2的B中烟草疫霉菌丝细胞内大部分线粒体降解，小液泡融合为大液泡，脂滴消失，细胞质中出现大量电子密度较深的黑色素颗粒，疑似脂滴被溶酶体吞噬，演变为了自噬溶酶体。推测柠檬醛药剂通过破坏烟草疫霉菌丝细胞结构而抑制烟草疫霉。

Claims (10)

1.一种柠檬醛的应用，其特征在于，所述的柠檬醛在制备防治烟草疫霉产品中的应用。
2.根据权利要求1所述的柠檬醛的应用，其特征在于，所述的柠檬醛的浓度为25.7~62.3µg/mL。
3.根据权利要求1或2所述的柠檬醛的应用，其特征在于，所述的柠檬醛的浓度为40~50µg/mL。
4.根据权利要求1或2所述的柠檬醛的应用，其特征在于，所述的柠檬醛的浓度为44.5µg/mL。
5.根据权利要求1所述的柠檬醛的应用，其特征在于，所述的产品为农药。
6.根据权利要求1或5所述的柠檬醛的应用，其特征在于，所述的产品为微乳剂、气雾剂或水乳剂。
7.根据权利要求1或5所述的柠檬醛的应用，其特征在于，所述的产品是由柠檬醛与有机溶剂或乳化剂组成的烟草疫霉杀菌剂。
8.根据权利要求7所述的柠檬醛的应用，其特征在于，所述的柠檬醛与有机溶剂或乳化剂的体积配比为1：（1~10）。
9.根据权利要求5所述的柠檬醛的应用，其特征在于，所述的有机溶剂为DMSO、丙酮或乙醇。
10.根据权利要求5所述的柠檬醛的应用，其特征在于，所述的乳化剂为吐温-20或吐温-80。
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