KR20210030572A - 리카니아 매크로카르파 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 리카니아 매크로카르파 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부주름, 탄력저하, 피부 수분함유 저하, 색소침착 및 피부노화의 예방 또는 개선용 조성물 등에 관한 것으로, 리카니아 매크로카르파(Licania macrocarpa) 추출물은 천연물로서 세포독성이 없기 때문에, 주름, 탄력 저하, 수분 저하, 색소침착 및 노화 등의 피부 문제의 개선, 예방, 또는 치료제로서 폭넓게 사용될 수 있을 것으로 기대된다.

Description

리카니아 매크로카르파 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물{Cosmetic Composition comprising Licania macrocarpa extract as active ingredient}

본 발명은 리카니아 매크로카르파 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부주름, 탄력저하, 피부 수분함유 저하, 색소침착 및 피부노화의 예방 또는 개선용 조성물 등에 관한 것이다.

피부는 외부환경의 자극으로부터 체내의 기관들을 보호해주며, 체온조절 등의 생체 항상성 유지에 중요한 역할을 한다. 이러한 피부는 노화가 진행됨에 따라 피부 탄력 감소, 피부색 변화, 피부주름 형성 등의 외형적인 변형이 함께 수반된다. 이러한 피부 노화 과정은 나이가 들어감에 따라 자연히 발생하는 내인성 노화(intrinsic aging 또는 자연노화)와 외인성 노화인 주위 환경, 특히 자외선(ultraviolet; UV)에 의환 광노화(photoaging)가 복합적으로 작용해 나타난다. 두 가지 노화 사이에는 주름이 생성되는 기전이 세부적으로 차이가 있지만 피부에서는 표피 세포의 증식이나 신진대사가 저하되며, 표피-진피 사이의 결합이 약해 조그만 자극에도 손상을 입기 쉽고, 콜라겐 합성 감소와 과다한 콜라겐 분해 효소인 MMPs(Matrix Metalloproteinases)의 발현 증가 등의 생리적 변화들이 나타나 피부가 건조해지며 표피, 진피 층의 구조적 변화로 인해 피부가 탄력성을 잃고 늘어져 보이며 점차적으로 주름이 깊어지게 된다. 피부 노화 현상에서 자연노화 현상은 어쩔 수 없다고 하더라도 환경적이 요인인 자외선에 의한 광노화를 효과적으로 차단하는 것이 피부노화를 지연하고 억제하는 방법이다.

최근 환경오염으로 인한 오존층 파괴는 자외선의 양을 증가시켰고 이에 따라 광노화에 대한 연구가 주목되고 있다. 광노화된 피부에서는 거칠어짐, 탄력 손실, 주름발생 등과 같은 외관상의 특징이 관찰되며, 이 중 광노화의 주된 연구 분야는 피부 주름의 변화에 대한 것이다. 상기 광노화에 의한 피부 주름형성에 관해 피부의 주요 구성성분인 콜라겐(collagen)의 합성, 분해 및 수분 함유량 등의 기초적인 생리 대사 변화에 대한 연구 결과가 다수 보고되고 있다.

피부 진피층에 존재하는 콜라겐은 피부 전체 건조 중량의 약 70-80%를 차지하며 탄력섬유인 엘라스틴(elastin)과 함께 피부의 탄력을 주관하는 것으로 알려져 있다. 특히 자외선에 의해 활성 산소종(reactive oxygen species) 생성이 증가되고 피부의 효소적, 비효소적 항산화 방어체계가 붕괴되어 콜라겐의 분해 증가 및 생합성을 감소시켜 진피층 내의 콜라겐이 현저하게 감소된다. 상기 콜라겐 감소에 중요한 영향을 미치는 것은 matrix metalloproteinases(MMP)로, 이는 세포외기질(extracellular matrix)과 기저막(basement membrane)의 분해에 관여한다. 상기 효소는 자외선에 의해활성이 증가되며 이를 억제함으로써 자외선에 의해 유도되는 피부 두께 증가 및 주름 형성이 감소된다는 연구 결과들이 보고되어 있다. 따라서, 광노화의 예방 및 치료를 위해서는 MMP를 조절하는 것이 효과적인 방법이다

사람의 피부색은 주로 피부 세포 속에 들어있는 멜라닌을 함유하는 멜라노좀(melanosome)의 숫자, 크기, 종류 및 분포도에 따라 다르게 나타난다. 멜라닌은 햇빛 중 자외선의 빛 에너지를 흡수하여 더 깊숙이 있는 세포들이 자외선에 의해 손상되는 것을 막아주는 역할을 한다. 다만, 이러한 멜라닌이 비정상적으로 적게 생산되면 백반증과 같은 피부병변이 유발되고, 반대로 자외선 등에 의해 멜라닌이 과도하게 합성되면 피부에 손상을 줄 뿐만 아니라 기미, 주근깨를 형성하고, 더 나아가 피부암의 원인이 되기도 한다.

멜라닌 형성과정에서 가장 중요한 역할을 하는 것은 티로시나제(tyrosinase) 효소로 알려져 있으며, 이 효소는 조직 중에 존재하는 티로신(tyrosine)에 작용하여 도파(dopa)를 생성시키고, 다시 도파퀴논(dopaquinone)을 생성시키며, 이 도파퀴논으로부터 여러 단계의 자동 산화과정을 거쳐 흑색 색소인 멜라닌이 생성된다.

피부 흑화의 원인과 기작이 밝혀지면서, 피부 흑화 과정에 관여하는 티로시나제(tyrosinase) 활성 저해효과를 갖는 물질들을 화장료에 배합하거나, 멜라닌 생성과정 중의 일부 반응을 저해함으로써 멜라닌의 생성을 감소시키는 방법이 피부 흑화를 방지하기 위해 일반적으로 사용되고 있다.

한편, 최근에는 화장품의 화학성분으로 인해 부작용이 발생하는 사례가 적지않게 알려지면서, 천연성분을 함유하여 제조되는 화장품에 대한 소비자의 관심이 갈수록 높아지고 있는 실정이다. 이에 따라, 여러 화학물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연물을 사용한 화장품이 많이 개발되고 있다. 천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐 아니라, 최근 천연 재료를 이용한 화장품에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 화장품 원료로서 개발 가치가 한층 늘어나고 있다. 그러나, 천연소재 리카니아 매크로카르파(Licania macrocarpa)가 피부주름, 탄력저하, 피부 수분함유 저하, 색소침착 및 피부노화의 개선에 효과적인지는 거의 알려진 바 없다.

한국 등록특허 제10-1961152호

이에 본 발명자들은 리카니아 매크로카르파 추출물이 세포독성은 없으면서, 피부주름, 탄력저하, 피부 수분함유 저하, 색소침착 및 피부 노화 개선 효과가 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 리카니아 매크로카르파(Licania macrocarpa) 추출물을 유효성분으로 포함하며, 피부주름, 탄력저하, 피부 수분함유 저하, 색소침착 및 피부노화로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 예방 또는 개선하는 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 리카니아 매크로카르파(Licania macrocarpa) 추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 손상 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 리카니아 매크로카르파(Licania macrocarpa) 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물을 제공하는 것이다.

그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

상기 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 리카니아 매크로카르파(Licania macrocarpa) 추출물을 유효성분으로 포함하며,

피부주름, 탄력저하, 피부 수분함유 저하, 색소침착 및 피부노화로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 예방 또는 개선하는 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 리카니아 매크로카르파(Licania macrocarpa) 추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 손상 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공한다.

본 발명의 일실시예에서, 상기 조성물은 약학적 조성물, 식품 조성물 또는 화장료 조성물일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 다른 실시예에서, 상기 식품 조성물은 건강기능식품일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 본 발명은 리카니아 매크로카르파(Licania macrocarpa) 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물을 제공한다.

본 발명의 다른 실시예에서, 상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 6개의 알코올(alcohol), 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane), 시클로헥산(cyclohexane), 석유에테르(petroleum ether), 아임계 유체, 및 초임계 유체로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 용매에 의한 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 다른 실시예에서, 상기 자외선에 의한 피부 손상 질환은 피부발적(erythema), 광과민, 일광화상, 피부부종, 일광염증, 피부 광노화, 피부 모세혈관 확장 및 피부암으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 조성물은 MMP(matrix metalloproteinase) 활성을 억제하는 것일 수 있다.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 조성물은 Tyrosinase, MITF(Microphthalmia-associated transcription factor), TYRP1(Tyrosinase-related protein 1), 및 TYRP2(Tyrosinase-related protein 2)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 발현 수준을 감소시키는 것일 수 있다.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 조성물은 HAS-2, HAS-3 및 TGM-1으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 보습 관련 인자의 발현 수준을 증가시키는 것일 수 있다.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 조성물은 ERK, JNK, 및 p-38로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 신호전달 단백질의 인산화를 증가시키는 것일 수 있다.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 조성물은 멜라닌 분비를 억제하는 것일 수 있다.

또한 본 발명은 리카니아 매크로카르파(Licania macrocarpa) 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 자외선에 의한 피부 손상 질환의 예방, 개선 또는 치료 방법을 제공한다.

또한 본 발명은 리카니아 매크로카르파(Licania macrocarpa) 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물의 자외선에 의한 피부 손상 질환의 예방, 개선 및/또는 치료 용도를 제공한다.

또한 본 발명은 리카니아 매크로카르파(Licania macrocarpa) 추출물의 자외선에 의한 피부 손상 질환에 이용되는 약제를 생산하기 위한 용도를 제공한다.

또한 본 발명은 리카니아 매크로카르파(Licania macrocarpa) 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 피부주름, 탄력저하, 피부 수분함유 저하, 색소침착 및 피부노화로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 예방 또는 개선 방법을 제공한다.

또한 본 발명은 리카니아 매크로카르파(Licania macrocarpa) 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물의 피부주름, 탄력저하, 피부 수분함유 저하, 색소침착 및 피부노화로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 예방 및/또는 개선 용도를 제공한다.

또한 본 발명은 리카니아 매크로카르파(Licania macrocarpa) 추출물의 피부주름, 탄력저하, 피부 수분함유 저하, 색소침착 및 피부노화로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상에 이용되는 화장품 및/또는 식품을 생산하기 위한 용도를 제공한다.

본 발명에 따른 리카니아 매크로카르파(Licania macrocarpa) 추출물은 UV에 의한 세포 사멸을 감소시키고, 멜라닌 분비 및 형성을 억제하며, 멜라닌 형성 인자를 억제하고, 주름 관련 사이토카인은 감소시키며, 보습관련 유전자는 증가시는 효과가 있다. 또한, 리카니아 매크로카르파(Licania macrocarpa) 추출물은 천연물로서 세포독성이 없기 때문에, 주름, 탄력 저하, 수분 저하, 색소침착 및 노화 등의 피부 문제의 개선, 예방, 또는 치료제로서 폭넓게 사용될 수 있을 것으로 기대된다.

도 1은 Licania macrocarpa의 메탄올 추출물(이하 Lm-ME)의 HaCaT cells에 대한 세포 독성 효과를 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 2a는 Lm-ME의 항산화 효능 측정을 위하여 DPPH scavenging activity를 확인한 결과를 나타낸 것이다(대조군 : ascorbic acid).
도 2b는 Lm-ME의 항산화 효능 측정을 위하여 ABTS scavenging activity를 확인한 결과를 나타낸 것이다(대조군 : ascorbic acid).
도 3은 Lm-ME가 UV 상황에서 주름관련 사이토카인 MMP-1 및 MMP-2의 mRNA 발현에 미치는 영향을 나타낸 것이다.
도 4는 Lm-ME가 보습 관련 유전자 HAS-2, HAS-3 및 TGM-1의 mRNA 발현에 미치는 영향을 나타낸 것이다.
도 5는 Lm-ME가 UV 상황에서 세포사멸에 미치는 영향을 확인하기 위하여, Annexing V/PI staining을 수행한 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 Lm-ME가 UV 상황에서 세포 내 AP-1 신호전달 단백질 ERK(extracellular signal-regulated kinases), JNK(c-Jun N-terminal kinase), p-38 인산화 증가 효과를 나타낸 것이다.
도 7은 Lm-ME의 B16F10 cells에 대한 세포 독성 효과를 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 8은 멜라닌 형성 세포 B16F10 세포에 α-MSH를 처리하여 멜라닌 분비를 유도하고, Lm-ME의 멜라닌 분비 감소 효과를 나타낸 것이다.
도 9는 멜라닌 형성 세포 B16F10 세포에 α-MSH를 처리하여 멜라닌 분비를 유도하고, Lm-ME의 멜라닌 형성 감소 효과를 나타낸 것이다(대조군 : Arbutin).
도 10은 Lm-ME에 의해 멜라닌에 의해 검은색으로 변한 세포에서, 멜라닌 감소 효과를 나타낸 것이다(대조군 : Arbutin).
도 11은 Lm-ME에 의한 멜라닌 형성 관련 인자 MITF, Tyrosinase, TYRP1 및 TYRP2의 전사 수준 감소 효과를 나타낸 것이다.
도 12는 Lm-ME에 의한 멜라닌 형성 관련 유전자 CREB의 인산화 감소 및 MITF 발현 감소 효과를 나타낸 것이다.
도 13은 Lm-ME가 항노화, 보습, 미백 및 항염증 효과를 나타내는 기전을 도시한 것이다.

본 발명은 리카니아 매크로카르파(Licania macrocarpa) 추출물을 유효성분으로 포함하며, 피부주름, 탄력저하, 피부 수분함유 저하, 색소침착 및 피부노화로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 예방 또는 개선하는 조성물을 제공한다.

이하, 본 발명에 대해 상세히 설명한다.

본 발명의 리카니아 매크로카르파(Licania macrocarpa)는 바람직하게는 Licania macrocarpa cuatrec 일 수 있으며, 상기 리카니아 매크로카르파는, 그 원형을 회손하지 않고 그대로 사용하거나, 당업자가 의도하는 공정 속도 및 공정(제조) 효율을 고려하여 전처리 과정을 수행한 후 사용할 수 있으며, 상기 전처리 과정으로는 예를 들어 통상적인 선별, 수세, 절단, 분말화, 건조 등의 단계를 거칠 수 있다.

본 발명의 리카니아 매크로카르파 추출물은 공지의 천연물 추출방법에 의하여 추출될 수 있다. 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 6개의 유기용매 및 아임계 또는 초임계 유체로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 용매로 추출될 수 있다. 상기 탄소수 1 내지 6개의 유기용매는 탄소수 1 내지 6개의 알코올(alcohol), 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane), 시클로헥산(cyclohexane) 및 석유에테르(petroleum ether)로 이루어진 군에서 선택된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 리카니아 매크로카르파 추출물은 바람직하게는 메탄올로 추출될 수 있다.

본 발명의 일 실시예에서는 리카니아 매크로카르파(Licania macrocarpa) 추출물의 활성을 검증한 결과, 상기 추출물이 세포독성 없고(실시예 3 참조),

항산화 효과가 우수하며(실시예 4 참조),

UV 상황에서 주름 관련 사이토카인 MMP-1, MMP-2가 감소시키고, 보습 관련 유전자 HAS-2(hyaluronan synthase-2), HAS-3(hyaluronan synthase-3) 및 TGM-1(transglutaminase-1)를 증가시키며(실시예 5 참조),

UVB에 의한 세포사멸을 억제하고(실시예 6 참조),

UV 상황에서 감소된 AP-1 시그널의 ERK, JNK, p38의 인산화를 증가시키며(실시예 7 참조),

멜라닌 형성세포의 멜라닌 분비량 및 형성량을 감소시키고(실시예 8 참조),

MITF, Tyrosinase, TYRP1 및 TYRP2의 전사수준, 및 멜라닌 형성 관련 유전자인 CREB의 인산화, MITF를 감소시킴을 확인하였다(실시예 9 참조).

따라서, 본 발명의 리카니아 매크로카르파 추출물은 피부주름, 탄력저하, 피부 수분함유 저하, 색소침착, 피부노화, 및 자외선에 의한 피부 손상 질환으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 예방 및 개선하거나, 피부 미백을 위한 화장료, 의약, 의약외품, 식품 또는 건강기능식품 조성물의 유효성분으로 사용할 수 있다.

본 발명에 있어서, '피부 항노화 효과'라 함은 나이가 들어감에 따라 자연히 발생하는 노화 또는 자외선(UV)에 의한 광노화로 인해 나타나는 거칠어짐, 탄력 손실, 주름 발생 등을 억제하는 효과를 말한다.

본 발명에 있어서, '주름 개선 효과'라 함은 콜라겐 분해효소를 억제하고 콜라겐 생성을 촉진하여 피부에 주름이 생성되는 것을 억제 또는 저해하거나, 이미 생성된 주름을 완화시키는 것을 말한다.

본 발명에 있어서, '탄력 증진' 또는 ‘탄력저하 개선’이란 피부에 대한 탄력성이 증가되는 것으로, 콜라겐 분해효소를 억제하고 콜라겐 생성을 촉진하여 피부 탄력의 손실을 억제 또는 저해하거나, 이미 감소된 탄력을 완화시키는 것을 말한다.

본 발명에 있어서, '피부 보습' 또는 ‘피부 수분함유 저하 개선’이란 각질형성 세포의 분화를 촉진하여 피부의 수분이 감소되는 것을 저해 또는 억제하거나 피부의 수분 함유량을 증가시켜 피부 표면을 매끄럽게 하며, 윤기를 부여하는 것을 말한다.

본 발명에 있어서, 상기 자외선에 의한 피부 손상 질환은 피부발적(erythema), 광과민, 일광화상, 피부부종, 일광염증, 피부 광노화, 피부 주름, 탄력 저하, 피부 내 수분 저하, 피부 모세혈관 확장 및 피부암으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 질환을 포함할 수 있다.

본 발명의 리카니아 매크로카르파 추출물은 조성물에 1 pg 내지 30g w/v%로 포함될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에 있어서, '유효량'이라 함은 손상된 피부의 항노화 효과를 나타내거나, 주름을 개선하거나, 탄력을 증진시키거나, 보습 효과를 나타낼 수 있는 추출물의 양을 의미한다. 본 발명의 조성물이 유효량의 상기 추출물을 포함할 때 바람직한 자외선에 의한 피부 손상 질환 예방 및 개선 효과를 제공할 수 있다. 본 발명의 조성물에 포함되는 상기 추출물의 유효량은 조성물이 제품화되는 형태, 상기 추출물이 피부에 적용되는 방법 및 피부에 머무르는 시간 등에 따라 달라질 것이다. 예컨대, 상기 조성물이 약학 제형으로 제품화되는 경우에는 일상적으로 피부에 적용하게 되는 화장품으로 제품화되는 경우에 비해 높은 농도로 상기 마리안 플럼 추출물을 포함할 수 있을 것이다. 따라서, 일일 투여량은 상기 추출물의 양을 기준으로 0.1 내지 100 ㎎/㎏이고, 바람직하게는 30 내지 80 ㎎/㎏이고, 더욱 바람직하게는 50 내지 60 mg/kg이며, 하루 1 내지 6 회 투여될 수 있다.

본 발명에서 “개체”란 척추동물이라면 제한되지 아니하나, 구체적으로는 인간, 마우스, 래트, 기니어 피그, 토끼, 원숭이, 돼지, 말, 소, 양, 영양, 개 및 고양이에 적용될 수 있으며, 바람직하게는 인간일 수 있다.

본 발명에서, "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 환자에게 본 발명의 약학적 조성물을 도입하는 것을 의미하며, 본 발명의 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 경구 또는 비경구의 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있다.

본 발명에서 “예방”이란 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 자외선에 의한 피부 손상 질환을 지연시키는 모든 행위를 의미하고, “치료”란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 자외선에 의한 피부 손상 질환 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미하며, “개선”이란 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 자외선에 의한 피부 손상 질환과 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 감소시키는 모든 행위를 의미한다.

본 발명에서 약학적 조성물(pharmaceutical composition)은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제, 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명에서 "담체(carrier)"란 비이클(vehicle)이라고도 불리며, 세포 또는 조직 내로의 단백질 또는 펩타이드의 부가를 용이하게 하는 화합물을 의미하는 것으로서, 예를 들어 디메틸술폭사이드(DMSO)는 생물체의 세포 또는 조직 내로의 많은 유기물의 투입을 용이하게 하는 통상 사용되는 담체이다.

본 발명에서 "희석제(diluent)"란 대상 단백질 또는 펩타이드의 생물학적 활성 형태를 안정화시킬 뿐만 아니라, 단백질 또는 펩타이드를 용해시키게 되는 물에서 희석되는 화합물로 정의된다. 버퍼 용액에 용해되어 있는 염은 당해 분야에서 희석제로 사용된다. 통상 사용되는 버퍼 용액은 포스페이트 버퍼 식염수이며, 이는 인간 체액의 염 상태를 모방하고 있기 때문이다. 버퍼 염은 낮은 농도에서 용액의 pH를 제어할 수 있기 때문에, 버퍼 희석제가 화합물의 생물학적 활성을 변형하는 일은 드물다. 여기에 사용된 아젤라산을 함유하는 화합물들은 인간 환자에게 그 자체로서, 또는 결합 요법에서와 같이 다른 성분들과 함께 또는 적당한 담체나 부형제와 함께 혼합된 약학적 조성물로서, 투여될 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 리카니아 매크로카르파 추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 손상 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 외용제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 상기 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 분해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 경구 또는 비경구, 바람직하게는 비경구로 투여할 수 있고, 비경구 투여인 경우에는 근육 주입, 정맥내 주입, 피하 주입, 복강 주입, 국소 투여, 경피 투여 등으로 투여할 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 대용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.

아울러, 본 발명은 리카니아 매크로카르파 추출물을 유효성분으로 포함하는 식품 조성물을 제공한다.

또한, 리카니아 매크로카르파 추출물은 자외선에 의한 피부 손상 질환의 개선하거나, 피부주름, 탄력저하, 피부 수분함유 저하, 색소침착 및 피부노화로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 예방 또는 개선하는 목적으로 식품에 첨가될 수 있다.

본 발명에 있어서 식품은 기능성 식품 및 건강기능성 식품을 포함한다.

바람직하게는, 상기 건강기능성 식품은 이너뷰티 푸드(inner beauty) 형태로 섭취함으로써 더욱 우수한 효과를 갖는 장점을 가진다. 상기 이너뷰티(inner beauty)는 '먹는 화장품 또는 뷰티 푸드'로 일컬어지는 푸드로, 피부에 좋은 여러 가지 성분을 몸속으로 흡수시켜 피부 체질을 건강하게 바꾸는 식품을 지칭하며, 피부 타입에 맞는 화장품을 고르듯 피부 컨디션과 라이프스타일을 고려해 개개인에게 맞는 이너 뷰티 푸드를 선택하여 섭취할 수 있다. 보다 바람직하게는 상기 화장료 조성물을 포함하는 화장품과 본 발명의 추출물을 포함하는 이너뷰티 푸드를 혼용할 경우, 화장품 또는 약제만 사용하는 것에 비해 피부주름, 탄력저하, 피부 수분함유 저하, 색소침착 및 피부노화로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 예방 또는 개선하는 효과가 월등히 높아져 더욱 효과적인 피부 미백 효과를 볼 수 있는 장점을 가진다.

본 발명의 리카니아 매크로카르파 추출물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 리카니아 매크로카르파 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조 시 본 발명의 리카니아 매크로카르파 추출물은 원료에 대하여 30 중량% 이하, 바람직하게는 20 중량% 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.

본 발명에 따른 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당 및 과당과 같은 모노사카라이드, 말토오스 및 수크로오스와 같은 디사카라이드, 덱스트린 및 시클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 및 자일리톨, 소르비톨 및 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 mL당 일반적으로 약 0.01-0.20g, 바람직하게는 약 0.04-0.10g이다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01-0.20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

상기 리카니아 매크로카르파 추출물은 화장료 조성물의 형태로 제공될 수 있다. 본 발명에 따른 화장료 조성물의 제형은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스쳐 크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 또는 바디클렌저의 형태일 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 및 스핑고 지질로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 더 포함할 수 있다.

수용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 그들의 염(티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체(아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)도 본 발명에서 사용할 수 있는 수용성 비타민에 포함된다. 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득할 수 있다.

유용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E(d1-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤) 등을 들 수 있으며, 그들의 유도체(팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산dl-알파 토코페롤, 니코틴산dl-알파 토코페롤비타민 E, DL-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르 등) 등도 본 발명에서 사용되는 유용성 비타민에 포함된다. 유용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 취득할 수 있다.

고분자 펩티드로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 콜라겐, 가수 분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴, 케라틴 등을 들 수 있다. 고분자 펩티드는 미생물의 배양액으로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 정제 취득할 수 있으며, 또는 통상 돼지나 소 등의 진피, 누에의 견섬유 등의 천연물로부터 정제하여 사용할 수 있다.

고분자 다당으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨, 콘드로이틴 황산 또는 그 염(나트륨염 등) 등을 들 수 있다. 예를 들어, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 등은 통상 포유 동물이나 어류로부터 정제하여 사용할 수 있다.

스핑고지질로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질 등을 들 수 있다. 스핑고지질은 통상 포유류, 어류, 패류, 효모 또는 식물 등으로부터 통상의 방법에 의해 정제하거나 화학 합성법에 의해 취득할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장품에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다.

이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

유지 성분으로서는 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지, 식물 유지 등을 들 수 있다.

에스테르계 유지로서는 트리2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴,카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등의 에스테르계 등을 들 수 있다.

탄화 수소계 유지로서는 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스, 와셀린 등의 탄화 수소계 유지 등을 들 수 있다.

실리콘계 유지로서는 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산ㆍ메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산ㆍ메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유, 아미노 변성 실리콘유 등을 들 수 있다.

불소계 유지로서는 퍼플루오로폴리에테르 등을 들 수 있다.

동물 또는 식물 유지로서는 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인(杏仁)유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지(牛脂), 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린, 경화피마자유 등의 동물 또는 식물 유지를 들 수 있다.

보습제로서는 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자, 지용성 고분자 등을 들 수 있다.

수용성 저분자 보습제로서는 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜B(중합도 n = 2 이상), 폴리프로필렌글리콜(중합도 n = 2 이상), 폴리글리세린B(중합도 n = 2 이상), 락트산, 락트산염 등을 들 수 있다.

지용성 저분자 보습제로서는 콜레스테롤, 콜레스테롤에스테르 등을 들 수 있다.

수용성 고분자로서는 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성 키틴, 키토산, 덱스트린 등을 들 수 있다.

지용성 고분자로서는 폴리비닐피롤리돈ㆍ에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈ㆍ헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르, 고분자 실리콘 등을 들 수 있다.

에몰리엔트제로서는 장쇄아실글루타민산콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산, 라놀린지방산콜레스테릴에스테르 등을 들 수 있다.

계면 활성제로서는 비이온성 계면 활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제, 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

비이온성 계면 활성제로서는 자기 유화형 모노스테아르산글리세린, 프로필렌글리콜지방산에스테르, 글리세린지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, POE(폴리옥시에틸렌)솔비탄지방산에스테르, POE 솔비트지방산에스테르, POE 글리세린지방산에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산에스테르, POE 경화피마자유, POE 피마자유, POEㆍPOP(폴리옥시에틸렌ㆍ폴리옥시프로필렌) 공중합체, POEㆍPOP 알킬에테르, 폴리에테르변성실리콘, 라우린산알카놀아미드, 알킬아민옥시드, 수소첨가대두인지질 등을 들 수 있다.

음이온성 계면 활성제로서는 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인산염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염, 퍼플루오로알킬인산에스테르 등을 들 수 있다.

양이온성 계면 활성제로서는 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드, 라놀린 유도체 제 4급 암모늄염 등을 들 수 있다.

양성 계면 활성제로서는 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형, 아미드아민형 등의 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

유기 및 무기 안료로서는 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체등의 무기 안료; 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트수지, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트오렌지 등의 유기 안료 및 이들의 무기 안료와 유기 안료의 복합 안료 등을 들 수 있다.

유기 분체로서는 스테아르산칼슘 등의 금속비누; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염 ; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염 ; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염 ; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파-파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산 ; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드 ; 알파-아미노카프릴산, 알파-아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산 ; 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 사불화에틸렌 등을 들 수 있다.

자외선 흡수제로서는 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리신산페닐, 살리신산옥틸, 살리신산벤질, 살리신산부틸페닐, 살리신산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산-2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모노-2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시계피산이소프로필, 디이소프로필ㆍ디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p-(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸 등을 들 수 있다.

살균제로서는 히노키티올, 트리클로산, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 크로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살리칠산, 진크필리티온, 염화벤잘코늄, 감광소 301 호, 모노니트로과이어콜나트륨, 운데시렌산 등을 들 수 있다.

산화 방지제로서는 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필, 엘리소르빈산 등을 들 수 있다.

pH 조정제로서는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨, 인산일수소나트륨 등을 들 수 있다.

알코올로서는 세틸알코올 등의 고급 알코올을 들 수 있다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지만, 총중량에 대하여 바람직하게는 0.01-5% 중량 백분율, 보다 바람직하게는 0.01-3% 중량 백분율로 배합된다.

본 발명의 제형이 로션, 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

[실시예]

실시예 1. 실험 준비

Licania macrocarpa cuatrec. 메탄올 추출물(이하, Lm-ME 추출물)을 해외생물소재센터(www.ibmrc.re.kr, FBM160-098)에서 구입하였다.

실시예 2. 세포배양법

인간 keratinocyte 세포인 HaCaT cell 및 murine melanoma 세포주를 페니실린(100 IU/ml) 및 스트렙토마이신(100 μg/ml)과 10% FBS를 함유하는 DMEM 배지를 이용하여 100 mm 세포배양 디쉬에 70-80%의 밀도로 배양하였다.

실시예 3. 세포 생존률(cell viability) 확인

MTT(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphinyltetrazolium bromide) assay법을 이용하여 분석하였다. 96-well plate에 3 × 10⁵ cell/ml(HaCaT cells), 1 × 10⁵ cell/ml(B16F10 cells) 의 세포를 plating하고 37℃에서 각 면역실험 조건에 상응하는 배양시간 동안 CO₂ incubator에서 배양하였다. 이후 10 ㎕ MTT 용액(stock concentration : 5 mg/ml)을 첨가하고 3시간 동안 추가반응을 유도하였다. 반응 종료 및 formazan crystal 용해를 위해 각 well에 100 ㎕ MTT stopping solution(10% Sodium dodecyl sulfate in 0.01M HCl)을 추가적으로 첨가하였다. 세포 생존율은 MTT가 formazan으로 환원된 양을 570 nm에서 흡광도를 측정하여 얻어진 OD 값을 통해 산출하였다.

그 결과, 도 1 및 도 7에 나타난 바와 같이, Lm-ME의 대식세포, HaCaT 및 B16F10 세포에 대한 세포 독성효과가 유의하지 않음을 확인하였다. 즉, Lm-ME 추출물이 세포독성 없이 피부에 대한 개선 효과가 우수함을 확인하였다.

실시예 4. 항산화 효능 확인

1,1-Diphenyl-2-picryl-hydrazyl(DPPH)을 300 μM로 메탄올에 희석하여 만든 후, 96 well plate에 100μl 씩 넣어주었으며, 이후 측정하고자 하는 물질을 메탄올에 희석하여 100μl 씩 넣어준 후 5분간 실온에서 반응을 기다린 후, 517 nM에서 흡광도를 측정하였다.

ABTS assay 에서는 ABTS(2,2′-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt) 7.4mM로 DW에 녹여주고, potassium persulfate 2.6mM로 DW에 녹여준 뒤, 각각의 용액을 1:1로 섞어주었다. 이후 두 용액을 상온에서 12시간 동안 반응 시킨 이후, DW 10 ml에 섞어 희석하였다. 이후 96 well plate에 100μl 씩 넣어주고, 측정하고자 하는 물질을 DW에 희석하여 100μl 씩 넣어준 후 5분간 반응을 기다린 후 , 730nM에서 흡광도를 측정하여 항산화 효능을 평가하였다.

그 결과, 도 2a 및 도 2b에 나타난 바와 같이, 항산화 효능이 우수하다고 알려진 대조 물질 ascorbic acid와 비교하여 보았을 때에 비슷한 항산화 효능를 나타내어, Lm-ME 추출물 또한 항산화 효과가 우수함을 확인하였다.

실시예 5. RT-PCR을 이용한 주름 및 보습 관련 인자의 mRNA 발현량 확인

전사수준에서의 조절을 측정하기 위해 각 시료를 일정시간 동안 처리하고 Trizol reagent를 사용하여 total RNA를 추출하였다. 추출한 total RNA를 First strand cDNA synthesis kit(Thermo scientific)를 사용하여 cDNA를 제조한 다음, 동량의 cDNA를 PCR로 증폭하였으며, 대조군 유전자로는 GAPDH을 사용하였다. PCR amplication은 Hipi PCR kit(Elpis biotech)을 사용하여 각 실험군 cDNA와 표적단백질들의 sense 및 antisense primers, 대조군 GAPDH primers를 dNTP 250 uM, Tris-HCL(pH 8.3) 10 mM, KCl 50 mM, NgCl₂ 1.5 mM를 포함한 Hipi PCR kit 20ul에서 시행하였다. PCR은 95 ℃에서 45초 간 denaturing, 55 ℃에서 45초 간 annealing 그리고 72 ℃에서 1분간 extension 하는 조건으로 시행하며, 총 30 cycles을 수행하였다. PCR로 증폭된 DNA는 1.5 % agarose gel에서 전기영동 하였고 분획된 DNA band의 intensity를 측정하였다.

프라이머		sequence(5’->3’)	서열번호
MMP-1	Forward	TCTGACGTTGATCCCAGAGAGCAG	1
	Reverse	CAGGGTGACACCAGTGACTGCAC	2
MMP-2	Forward	AAAACGGACAAAGAGTTGGCA	3
	Reverse	CTGGGGCAGTCCAAAGAAC	4
HAS-2	Forward	TTCTTTATGTGACTCATCTGTCTCACCGG	5
	Reverse	ATTGTTGGCTACCAGTTTATCCAAACG	6
HAS-3	Forward	TATACCGCGCGCTCCAA	7
	Reverse	GCCACTCCCGGAAGTAAGACT	8
TGM-1	Forward	GAAATGCGGCAGATGACGAC	9
	Reverse	AACTCCCCAGCGTCTGATTG	10

도 3에 나타난 바와 같이, UV 상황에서 Lm-ME를 처리하였을 때, 주름 관련 사이토 카인 MMP-1, MMP-2가 감소함을 확인하였으며,

도 4에 나타난 바와 같이, Lm-ME를 처리하였을 때, 보습 관련 유전자 HAS-2(hyaluronan synthase-2), HAS-3(hyaluronan synthase-3) 및 TGM-1(transglutaminase-1)이 증가함을 확인하였는 바,

본 발명의 Lm-ME 추출물을 이용하여 주름 및 보습 관련 인자 조절이 가능함에 따라, 주름 개선 및 보습 효과가 우수함을 확인하였다.

실시예 6. UV에 의한 세포사멸 억제 효능 확인

UV에 의한 세포사멸 억제 효능 평가을 평가하기 위하여, Annexin V/ PI staining을 실시하였다.

각질형성세포(Keratinocyte) 유래 세포인 HaCaT cell을 3X10⁵ cell/ml 농도로 60mm의 디쉬에서 전배양시켰다. 이후, UVB(30 mJ/cm³) 로 처리하여 약물에 따른 일정시간 후 cell 들을 모아서 annexin-binding buffer(10 mM HEPES, 140 mM NaCl, and 2.5 mM CaCl2, pH 7.4)로 5X10⁵ cell/ml의 농도로 다시 세포를 풀어주었다. 그리고나서, 100μL에다가 5μL의 annexin V 및 PI conjugate를 처리한 후, 15분 동안 반응을 시켜준 뒤, 400μL의 추가 annexin-binding buffer를 넣어주고, 유세포 분석을 실시하여, 세포사멸의 억제 효과를 평가하였다.

도 5에 나타난 바와 같이, UV에 의하여 감소된 Annexin V의 비율이 Lm-ME 추출물의 농도에 의존적으로 증가함을 확인하였는 바, Lm-ME가 세포 사멸 감소를 통해 항노화 효과를 나타냄을 확인하였다.

실시예 7. UVB 상황에서의 단백질 발현 및 신호전달 과정 확인

각질형성세포 유래 세포인 HaCaT을 이용하여 penicillin(100 IU/ml) 및 streptomycin(100 μg/ml)과 10%의 FBS를 함유하는 DMEM 배지를 이용해서 배양한 세포를 3X10⁵ cell/ml 농도로 60mm의 디쉬에서 전배양시켰다. 이후 각 분획들을 처리하고 일정시간 후 UVB(30 mJ/cm³) 로 처리하여 약물에 따른 일정시간 이후의 cell 들을 모아서 lysis buffer를 사용해 세포를 파괴하여 western 표본을 얻었다. 그리고나서, 각 표본의 단백질 농도는 BSA를 표준으로 잡고 측정하였다. 이렇게 얻어진 값을 기준으로 단백질 농도가 되는 각 표본량을 가지고 SDS-PAGE를 실행하고, wet blotting 방법을 사용해 PVDF membrane으로 단백질을 blotting시킨 후 membrane을 3 % BSA를 사용해 blocking시키고, 표적 단백질 항체 및 신호전달 단백질 항체(p-ERK, ERK, p-JNK, JNK, p-p38, p38, β-actin) 용액을 사용해 1차 처리하고, 다시 washing 단계 후 2차 항체 용액을 처리하고 씻어냈다. 그리고 암실에서 membrane에 ECL 용액(Amersham, England)을 골고루 분주하여 X-ray film으로 감광하였다.

도 6에 나타난 바와 같이, Lm-ME가 UV 상황에서 감소된 AP-1 시그널의 ERK, JNK, p38의 인산화를 증가시킴에 따라, 세포 증식 효과를 나타내고, 세포 사멸은 억제하는 효과를 통하여 항노화 효과가 있음을 확인하였다.

실시예 8. 멜라닌 분비 및 형성 억제 효능 확인

멜라노마 세포인 B16F10 cells을 이용하여 penicillin(100 IU/ml) 및 streptomycin(100 μg/ml)과 10%의 FBS를 함유하는 DMEM 배지를 이용해서 배양한 세포를 1X10⁵ cell/ml 농도로 12 well plate에서 전배양시켰다. 이후 각 분획들을 처리하고 일정시간 후 α-MSH(100nM) 로 처리하고 각각에 맞는 약물 및 대조 약물을 일정시간 동안 처리한 후, 현미경으로 사진을 찍었다. 이후 배양한 상층액을 200μL 씩 96 well plate로 옮긴 후 475 nM 흡광도를 측정하여 멜라닌 분비를 측정하였다.

이후 세포를 모아 lysis buffer를 사용해 세포를 파괴한 후 원심분리기로 처리하여 세포 내부 물질들을 아래로 침착시켜 세포 내부에 형성된 멜라닌을 수득하였다. 이후 상층액을 다 제거하고 NaOH 1M + 10% DMSO 로 100μl 넣어 형성된 멜라닌을 녹여준 후 , 80μL 씩 96 well plate로 옮겨 405 nM 흡광도 측정하여 멜라닌 형성 양을 측정하였다.

도 8에 나타난 바와 같이, 멜라닌 형성 세포 B16F10 세포에 α-MSH를 48시간 동안 처리하여, 멜라닌 분비와 형성을 유도한 결과, Lm-ME에 의해 멜라닌 분비가 줄어든 것을 확인하였다.

도 9에 나타난 바와 같이, 멜라닌 형성량이 Lm-ME에 의해 줄어들었으며, 대조 물질인 Arbutin보다 미백 효과가 우수함을 확인하였다.

도 10에 나타난 바와 같이, 멜라닌에 의해 검은색으로 변한 세포를 측정한 결과, Lm-ME에 의해 멜라닌이 줄어들어 미백효과가 나타남을 확인하였다.

실시예 9. 멜라닌 형성 관련 단백질 발현 및 신호전달 과정 확인

멜라노마 세포인 B16F10 cells을 이용하여 penicillin(100 IU/ml) 및 streptomycin(100 μg/ml)과 10%의 FBS를 함유하는 DMEM 배지를 이용해서 배양한 세포를 1X10⁵ cell/ml 농도로 12 well plate에서 전배양하였다. 이후 각 분획들을 처리하고 일정시간 후 α-MSH(100nM) 로 처리하고 각각에 맞는 약물 및 대조 약물을 일정시간 동안 처리한 후, cell 들을 모아서 lysis buffer를 사용해 세포를 파괴하여 western 표본을 얻었다. 그리고 각 표본의 단백질 농도를 BSA를 표준으로 잡고 측정하였다. 이렇게 얻어진 값을 기준으로 단백질 농도가 되는 각 표본량을 가지고 SDS-PAGE를 실행하고, wet blotting 방법을 사용해 PVDF membrane으로 단백질을 blotting시킨 후 membrane을 3 % BSA를 사용해 blocking시키고, 멜라닌 형성 관련 단백질인(p-CREB, CREB, MITF, GAPDH) 용액을 사용해 1차 처리하고, 다시 washing 단계 후 2차 항체 용액을 처리하고 washing하였다. 그리고 암실에서 membrane에 ECL 용액(Amersham, England)을 골고루 분주하여 X-ray film으로 감광하였다.

도 11에 나타난 바와 같이, 멜라닌 형성 관련 인자들의 전사수준을 측정한 결과 Lm-ME을 처리한 경우 MITF, Tyrosinase, TYRP1 및 TYRP2에서 전사수준이 감소할 뿐만 아니라, 대조물질인 Arbutin보다 억제 효과가 우수함을 확인하였다.

도 12에 나타난 바와 같이, 멜라닌 형성 관련 유전자인 CREB의 인산화 형태가 줄어들고, MITF의 양이 줄어드는 것을 통해 Lm-ME에 의해 단백질의 양을 줄여 멜라닌 형성이 감소함을 확인하였다.

이상의 실시예를 종합하여, 본 발명자들은 Licania macrocarpa cuatrec. 메탄올 추출물이 세포 독성이 없이, 항산화 효과가 우수하며, 멜라닌 형성 관련 단백질 발현량을 감소시키고, 멜라닌 형성 관련 유전자인 CREB의 인산화 및 MITF 발현을 감소시킴에 따라, 멜라닌 생성량을 감소시키고, 자외선에 의해 증가되는 MMP 및 세포 사멸을 감소시킬 뿐만 아니라, 보습인자인 HAS, TGM의 발현량을 증가시킴을 확인하였다.

따라서, Licania macrocarpa cuatrec. 메탄올 추출물을 항산화, 보습, 주름 개선, 미백용 조성물로서, 약제, 건강기능식품, 및 화장품과 이들의 개발을 위한 물질에 이용될 수 있음을 알 수 있다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

<110> Research & Business Foundation SUNGKYUNKWAN UNIVERSITY <120> Cosmetic Composition comprising Licania macrocarpa extract as active ingredient <130> MP19-201 <160> 10 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP-1 Forward primer <400> 1 tctgacgttg atcccagaga gcag 24 <210> 2 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP-1 Reverse primer <400> 2 cagggtgaca ccagtgactg cac 23 <210> 3 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP-2 Forward primer <400> 3 aaaacggaca aagagttggc a 21 <210> 4 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MMP-2 Reverse primer <400> 4 ctggggcagt ccaaagaac 19 <210> 5 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> HAS-2 Forward primer <400> 5 ttctttatgt gactcatctg tctcaccgg 29 <210> 6 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> HAS-2 Reverse primer <400> 6 attgttggct accagtttat ccaaacg 27 <210> 7 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> HAS-3 Forward primer <400> 7 tataccgcgc gctccaa 17 <210> 8 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> HAS-3 Reverse primer <400> 8 gccactcccg gaagtaagac t 21 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TGM-1 Forward primer <400> 9 gaaatgcggc agatgacgac 20 <210> 10 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TGM-1 Reverse primer <400> 10 aactccccag cgtctgattg 20

Claims (11)

1. 리카니아 매크로카르파(Licania macrocarpa) 추출물을 유효성분으로 포함하며,
   피부주름, 탄력저하, 피부 수분함유 저하, 색소침착 및 피부노화로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 예방 또는 개선하는 조성물.
   
2. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 화장료 조성물 또는 식품 조성물인 것을 특징으로 하는, 조성물.
   
3. 제1항에 있어서,
   상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 6개의 알코올(alcohol), 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane), 시클로헥산(cyclohexane), 석유에테르(petroleum ether), 아임계 유체, 및 초임계 유체로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 용매에 의한 추출물인 것을 특징으로 하는, 조성물.
   
4. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 MMP(matrix metalloproteinase) 활성을 억제하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
   
5. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 Tyrosinase, MITF(Microphthalmia-associated transcription factor), TYRP1(Tyrosinase-related protein 1), 및 TYRP2(Tyrosinase-related protein 2)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 발현 수준을 감소시키는 것을 특징으로 하는, 조성물.
   
6. 리카니아 매크로카르파(Licania macrocarpa) 추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선에 의한 피부 손상 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물.
   
7. 제6항에 있어서,
   상기 조성물은 약학적 조성물, 식품 조성물 및 화장료 조성물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나인 것을 특징으로 하는, 조성물.
   
8. 제6항에 있어서,
   자외선에 의한 피부 손상 질환은 피부발적(erythema), 광과민, 일광화상, 피부부종, 일광염증, 피부 광노화, 피부 모세혈관 확장 및 피부암으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 조성물.
   
9. 제6항에 있어서,
   상기 조성물은 ERK, JNK, 및 p-38로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 신호전달 단백질의 인산화를 증가시키는 것을 특징으로 하는, 조성물.
   
10. 리카니아 매크로카르파(Licania macrocarpa) 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물.
    
11. 제10항에 있어서,
    상기 조성물은 멜라닌 분비를 억제하는 것을 특징으로 하는, 피부 미백용 조성물.

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