KR20210009317A - 미토콘드리아 dna 고갈 증후군을 포함하는 불균형 뉴클레오타이드 풀에 의해 초래된 질환에 대한 유전자 요법 - Google Patents

미토콘드리아 dna 고갈 증후군을 포함하는 불균형 뉴클레오타이드 풀에 의해 초래된 질환에 대한 유전자 요법 Download PDF

Info

Publication number
KR20210009317A
KR20210009317A KR1020207032655A KR20207032655A KR20210009317A KR 20210009317 A KR20210009317 A KR 20210009317A KR 1020207032655 A KR1020207032655 A KR 1020207032655A KR 20207032655 A KR20207032655 A KR 20207032655A KR 20210009317 A KR20210009317 A KR 20210009317A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
acid sequence
nucleic acid
seq
amino acid
transgene
Prior art date
Application number
KR1020207032655A
Other languages
English (en)
Inventor
미치오 히라노
하산 오. 아크만
카를로스 로페즈-고메즈
Original Assignee
더 트러스티스 오브 콜롬비아 유니버시티 인 더 시티 오브 뉴욕
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 더 트러스티스 오브 콜롬비아 유니버시티 인 더 시티 오브 뉴욕 filed Critical 더 트러스티스 오브 콜롬비아 유니버시티 인 더 시티 오브 뉴욕
Publication of KR20210009317A publication Critical patent/KR20210009317A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A61K31/7072—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid having two oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. uridine, uridylic acid, thymidine, zidovudine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/45—Transferases (2)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0093—Oxidoreductases (1.) acting on CH or CH2 groups (1.17)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12N9/1077—Pentosyltransferases (2.4.2)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • C12N9/1205—Phosphotransferases with an alcohol group as acceptor (2.7.1), e.g. protein kinases
    • C12N9/1211—Thymidine kinase (2.7.1.21)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/93—Ligases (6)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y117/00—Oxidoreductases acting on CH or CH2 groups (1.17)
    • C12Y117/04—Oxidoreductases acting on CH or CH2 groups (1.17) with a disulfide as acceptor (1.17.3)
    • C12Y117/04001—Ribonucleoside-diphosphate reductase (1.17.4.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12Y204/02—Pentosyltransferases (2.4.2)
    • C12Y204/02004—Thymidine phosphorylase (2.4.2.4)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
    • C12Y207/07—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
    • C12Y207/07007—DNA-directed DNA polymerase (2.7.7.7), i.e. DNA replicase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y602/00—Ligases forming carbon-sulfur bonds (6.2)
    • C12Y602/01—Acid-Thiol Ligases (6.2.1)
    • C12Y602/01004—Succinate-CoA ligase (GDP-forming) (6.2.1.4)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y602/00—Ligases forming carbon-sulfur bonds (6.2)
    • C12Y602/01—Acid-Thiol Ligases (6.2.1)
    • C12Y602/01005—Succinate-CoA ligase (ADP-forming) (6.2.1.5)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
    • C12Y207/01—Phosphotransferases with an alcohol group as acceptor (2.7.1)
    • C12Y207/01021—Thymidine kinase (2.7.1.21)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
    • C12Y207/01—Phosphotransferases with an alcohol group as acceptor (2.7.1)
    • C12Y207/01076—Deoxyadenosine kinase (2.7.1.76)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
    • C12Y207/01—Phosphotransferases with an alcohol group as acceptor (2.7.1)
    • C12Y207/01113—Deoxyguanosine kinase (2.7.1.113)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

본 발명은 일반적으로 유전자 요법을 이용하여, 인간 유전 질환, 예를 들어, 불균형 뉴클레오타이드 풀을 특징으로 하는 질환, 예를 들어, 미토콘드리아 DNA 고갈 증후군, 및 더욱 상세하게는, 티미딘 키나제 2(TK2) 결핍증을 치료하는 방법에 관한 것이다. 유전자 요법은 기능 단백질을 인코딩하는 핵산을 함유한, 하나 이상의 작제물, 예를 들어, 바이러스 벡터의 투여를 포함할 수 있다. 기능 단백질은 핵 유전자에 해당할 수 있다. TK2 결핍증의 치료를 위해, 유전자 요법은 기능성 TK2 효소를 인코딩하는 핵산을 함유한, 하나 이상의 작제물, 예를 들어, 바이러스 벡터의 투여를 포함할 수 있다. 이러한 치료는 또한, 유전자 요법과 함께 약리학적 요법의 투여를 포함할 수 있다. 본 개시내용의 치료 프로토콜, 예를 들어, 유전자 요법을 단독으로 또는 약리학적 요법과 함께 포함하는 치료 프로토콜은 불균형 뉴클레오사이드 풀의 다양한 다른 장애, 특히, 미토콘드리아 DNA 고갈 증후군에서 발견되는 장애를 치료, 예방 및/또는 치유하기 위해 사용될 수 있다.

Description

미토콘드리아 DNA 고갈 증후군을 포함하는 불균형 뉴클레오타이드 풀에 의해 초래된 질환에 대한 유전자 요법
관련 출원에 대한 상호 참조문헌
본 출원은 2018년 4월 18일자로 출원된 미국 가특허 출원 제62/659,281호를 우선권으로 주장하며, 이러한 문헌은 전문이 본 명세서에 참조에 의해 원용된다.
정부 지원에 관한 기술
본 발명은 NIH에 의해 수여된 HD080642에 따라 정부 지원으로 이루어졌다. 정부는 본 발명의 특정 권리를 갖는다.
본 발명의 분야
본 발명은 불균형 뉴클레오타이드 풀(unbalanced nucleotide pool)을 특징으로 하는 인간 질환을 포함하는, 유전 질환의 치료를 위한 유전자 요법의 분야에 관한 것이다. 이러한 질환의 예에는 미토콘드리아 DNA 고갈 증후군, 예를 들어, 티미딘 키나제 2(thymidine kinase 2: TK2) 결핍증이 있다.
미토콘드리아병(mitochondrial disease)은 미토콘드리아 호흡 사슬(respiratory chain: RC) 및 전자의 에너지를 아데노신 트라이포스페이트(ATP)로 전환시키는 생화학적 경로인 산화적 포스포릴화의 결함으로 인한 임상적으로 이질적인 질환이다. 호흡 사슬은 미토콘드리아의 내막을 가로질러 양성자 구배를 생성하기 위해 전자를 전달하는 4개의 다중-서브유닛 효소(복합체 I 내지 IV)로 이루어진다. 양성자의 흐름은 복합체 V를 통해 이러한 농도 구배를 낮추고, 후속하여 ATP 합성을 유도한다[DiMauro and Schon 2003; DiMauro and Hirano 2005]. 코엔자임 Q10(CoQ10)은 복합체 I 및 II에서 복합체 III으로 전자를 이동시키는 필수 분자이다. 호흡 사슬은 2개의 게놈에 의해 제어됨으로써 진핵 세포, 예를 들어, 포유동물 세포에서 독특하다. 하나의 게놈은 미토콘드리아 DNA(mtDNA)로 이루어지며, 다른 게놈은 핵 DNA(nDNA)로 이루어진다. 결과적으로, 어느 한 게놈의 돌연변이는 미토콘드리아병을 유발할 수 있다.
미토콘드리아병의 서브그룹인 미토콘드리아 DNA 고갈 증후군(MDS)은 조직에서 미토콘드리아 DNA(mtDNA) 카피 수의 감소 및 미토콘드리아 RC 복합체의 불충분한 합성을 분자적으로 특징으로 하는 중증 소아 뇌근육병증의 빈번한 원인이다[Hirano, et al. 2001]. TK2, DGUOK, POLG, POLG2, SCLA25A4, MPV17, RRM2B, SUCLA2, SUCLG1, TYMP, OPA1 및 C10orf2(PEO1)를 포함하는, 여러 핵 유전자의 돌연변이는 유아 MDS의 원인으로서 식별되었다[Bourdon, et al. 2007; Copeland 2008; Elpeleg, et al. 2005; Mandel, et al. 2001; Naviaux and Nguyen 2004; Ostergaard, et al. 2007; Saada, et al. 2003; Sarzi, et al. 2007; Spinazzola, et al, 2006]. 또한, 이러한 핵 유전자의 돌연변이는 또한 mtDNA 고갈의 유무와는 관계없이 mtDNA의 다중 결실을 유발할 수 있다[Behin, et al. 2012; Garone, et al. 2012; Longley, et al. 2006; Nishino, et al. 1999; Paradas, et al. 2012; Ronchi, et al. 2012; Spelbrink, et al. 2001; Tyynismaa, et al. 2012; Tyynismaa, et al. 2009; Van Goethem, et al. 2001].
대부분의 미토콘드리아병은 여러 신체 기관에 영향을 미치고, 통상적으로 아동기 또는 성인 초기 생명에 치명적이다. 미토콘드리아병에 대한 입증된 효과적인 치료법 또는 치유법이 존재하지 않고, 단지 지원 요법만이 존재한다. MDS와 같은 미토콘드리아병을 치료 및 예방하기 위한 조성물 및 방법이 여전히 필요하다.
본 개시내용은 불균형 뉴클레오타이드 풀에 의해 특징되는 질병을 갖거나 이러한 질병이 발병할 위험이 있는 대상체(예를 들어, 포유류 대상체, 예를 들어, 인간 대상체)를 치료하기 위해 사용될 수 있는 조성물 및 방법에 관한 것이다. 본 개시내용의 조성물 및 방법을 사용하여 치료, 예방 및/또는 치유될 수 있는 예시적인 병리에는 미토콘드리아 DNA 고갈 증후군, 예를 들어, 티미딘 키나제 2 단백질을 인코딩하는 TK2; 데옥시구아노신 키나제 단백질을 인코딩하는 DGUOK; 리보뉴클레오타이드 리덕타제의 p53 유도성 서브유닛인 p53R2를 인코딩하는 RRM2B; 티미딘 포스포릴라제를 인코딩하는 TYMP; 석시네이트-CoA 리가제 ADP-형성 베타 서브유닛을 인코딩하는 SUCLA2; 석시네이트-CoA 리가제 ADP-형성 알파 서브유닛을 인코딩하는 SUCLG1; 미토콘드리아 내막 단백질 MPV17을 인코딩하는 MPV17; 및 DNA 폴리머라제 감마, 촉매 서브유닛을 인코딩하는 POLG로부터 선택된 유전자의 결핍증을 포함하는, 미토콘드리아병이 있다.
본 개시내용의 조성물 및 방법을 사용하여, 상기 기술된 질병을 갖거나 질병이 발병할 위험이 있는 대상체(예를 들어, 포유류 대상체, 예를 들어, 인간 대상체)에는 상기 단백질 중 하나 이상을 인코딩하는 형질전환 유전자(transgene)를 함유하는 조성물이 투여될 수 있다. 이러한 조성물은 벡터, 예를 들어, 바이러스 벡터, 예를 들어, 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터일 수 있다. 일부 실시형태에서, 대상체에는 상기 단백질 중 하나 이상을 인코딩하는 형질전환 유전자를 함유하는 제2 조성물이 투여된다. 제2 조성물은 벡터, 예를 들어, 바이러스 벡터, 예를 들어, AAV 벡터일 수 있다. 일부 실시형태에서, 대상체에는 상기 단백질 중 하나 이상을 인코딩하는 형질전환 유전자를 함유하는 하나 이상의 후속 조성물, 예를 들어, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제9 및/또는 제10 조성물이 추가적으로 투여된다. 하나 이상의 후속 조성물은 각각 독립적으로, 벡터, 예를 들어, 바이러스 벡터, 예를 들어, AAV 벡터일 수 있다.
제1 양태에서, 본 개시내용은 이를 필요로 하는 대상체에서 불균형 뉴클레오타이드 풀을 특징으로 하는 질환 또는 장애를 치료, 예방 및/또는 치유하는 방법을 특징으로 한다. 이러한 방법은 대상체에, 치료학적 유효량의, 티미딘 키나제 2(TK2), 데옥시구아노신 키나제(dGK), 티미딘 포스포릴라제(TP), 리보뉴클레오타이드 리덕타제의 p53 유도성 작은 서브유닛(p53R2), 석시닐-CoA 리가제 ADP-형성 서브유닛 베타(SUCLA2), 석시닐-CoA 리가제 GDP-형성 서브유닛 알파(SUCLG1), 미토콘드리아 내막 단백질 MPV17(MPV17), 및/또는 DNA 폴리머라제 서브유닛 감마(POLG)를 인코딩하는 형질전환 유전자를 함유하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다.
추가 양태에서, 본 개시내용은 불균형 뉴클레오타이드 풀을 특징으로 하는 질환 또는 장애를 갖는 대상체에서 효소 활성을 복원시키는 방법을 특징으로 한다. 이러한 방법은 대상체에, 치료학적 유효량의, TK2, dGK, TP, p53R2, SUCLA2, SUCLG1, MPV17 및/또는 POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자를 함유하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다.
추가적인 양태에서, 본 개시내용은 이를 필요로 하는 대상체에서 불균형 뉴클레오타이드 풀을 특징으로 하는 질환 또는 장애와 관련된 하나 이상의 증상을 완화시키는 방법을 특징으로 한다. 이러한 방법은 대상체에 치료학적 유효량의, TK2, dGK, TP, p53R2, SUCLA2, SUCLG1, MPV17 및/또는 POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자를 함유하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 임의의 양태에서, 본 개시내용은 또한, 본 명세서에 기술된 방법에서 사용하기 위한 본 명세서에 기술된 조성물을 제공한다. 본 개시내용은 또한, 본 명세서에 기술된 방법을 위한 약제의 제조를 위한 본 명세서에 기술된 조성물의 용도를 제공한다. 형질전환 유전자는 TK2, dGK, TP, p53R2, SUCLA2, SUCLG1, MPV17 및/또는 POLG를 인코딩할 수 있다. 예를 들어, 형질전환 유전자는 TK2, dGK, TP, p53R2, SUCLA2, SUCLG1 및/또는 MPV17을 인코딩할 수 있다.
이에 따라, 상기 양태의 일부로서, 본 개시내용은 또한, 불균형 뉴클레오타이드 풀을 특징으로 하는 질환 또는 장애를 치료, 예방 및/또는 치유하는 데 사용하기 위한 TK2, dGK, TP, p53R2, SUCLA2, SUCLG1, MPV17 및/또는 POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자를 함유하는 조성물을 제공한다. 또한, 불균형 뉴클레오타이드 풀을 특징으로 하는 질환 또는 장애를 갖는 대상체에서 효소 활성을 복원하는 데 사용하기 위한 TK2, dGK, TP, p53R2, SUCLA2, SUCLG1, MPV17 및/또는 POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자를 함유하는 조성물이 제공된다. 또한, 불균형 뉴클레오타이드 풀을 특징으로 하는 질환 또는 장애와 관련된 하나 이상의 증상의 완화에서 사용하기 위한 TK2, dGK, TP, p53R2, SUCLA2, SUCLG1, MPV17 및/또는 POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자를 함유하는 조성물이 제공된다.
상기 양태의 일부로서, 본 개시내용은 또한, 불균형 뉴클레오타이드 풀을 특징으로 하는 질환 또는 장애를 치료, 예방 및/또는 치유하기 위한 약제의 제조를 위한 TK2, dGK, TP, p53R2, SUCLA2, SUCLG1, MPV17 및/또는 POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자를 함유하는 조성물의 용도를 제공한다. 또한, 불균형 뉴클레오타이드 풀을 특징으로 하는 질환 또는 장애를 갖는 대상체에서 효소 활성을 복원하기 위한 약제의 제조를 위한 TK2, dGK, TP, p53R2, SUCLA2, SUCLG1, MPV17 및/또는 POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자를 함유하는 조성물의 용도가 제공된다. 또한, 불균형 뉴클레오타이드 풀을 특징으로 하는 질환 또는 장애와 관련된 하나 이상의 증상을 완화시키기 위한 약제의 제조를 위한 TK2, dGK, TP, p53R2, SUCLA2, SUCLG1, MPV17 및/또는 POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자를 함유하는 조성물의 용도가 제공된다.
임의의 상기 양태의 일부 실시형태에서, 질환 또는 장애는 미토콘드리아병, 예를 들어, 미토콘드리아 DNA 고갈 증후군(MDS)이다. 일부 실시형태에서, MDS는 TK2를 인코딩하는 내인성 유전자의 하나 이상의 돌연변이를 특징으로 하는 근병증성 MDS이다. 일부 실시형태에서, MDS는 SUCLA2를 인코딩하는 내인성 유전자의 하나 이상의 돌연변이를 특징으로 하는 뇌근병증성 형태이다. 일부 실시형태에서, MDS는 TP를 인코딩하는 내인성 유전자의 하나 이상의 돌연변이를 특징으로 하는 신경위장 뇌근병증성이다. 일부 실시형태에서, MDS는 dGK, MPV17 및/또는 POLG를 인코딩하는 내인성 유전자의 하나 이상의 돌연변이를 특징으로 하는 간병증 형태이다.
일부 실시형태에서, 형질전환 유전자는 TK2를 인코딩한다. TK2는 서열번호 1의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 1의 아미노산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%과 동일한 아미노산 서열)을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, TK2는 서열번호 1의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 1의 아미노산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TK2는 서열번호 1의 아미노산과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 1의 아미노산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TK2는 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의, 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 1과 상이한 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시형태에서, TK2는 하나 이상의 보존적 아미노산 치환에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 1과 상이한 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 2의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 2의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 2의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 2의 핵산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 2의 핵산 서열과 적어도 90% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 2의 핵산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 2의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 2의 핵산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 효율성을 증가시키기 위해 코돈 최적화된다. 일부 실시형태에서, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산은 TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자의 코딩 서열과 적어도 70% 동일하다(예를 들어, 코딩 서열의 핵산 서열의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열). 일부 실시형태에서, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산 서열은 서열번호 17의 핵산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, 형질전환 유전자는 dGK를 인코딩한다. dGK는 서열번호 3의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 3의 아미노산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, dGK는 서열번호 3의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 3의 아미노산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, dGK는 서열번호 3의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 3의 아미노산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, dGK는 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의, 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 3과 상이한 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시형태에서, dGK는 하나 이상의 보존적 아미노산 치환, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 3과 상이한 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, dGK를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 4의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 4의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, dGK를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 4의 핵산 서열와 적어도 85% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 4의 핵산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, dGK를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 4의 핵산 서열과 적어도 90% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 4의 핵산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, dGK를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 4의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 4의 핵산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, dGK를 인코딩하는 형질전환 유전자는 효율성을 증가시키기 위해 코돈 최적화된다. 일부 실시형태에서, dGK를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산은 dGK를 인코딩하는 형질전환 유전자의 코딩 서열과 적어도 70% 동일하다(예를 들어, 코딩 서열의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열). 일부 실시형태에서, dGK를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산 서열은 서열번호 18의 핵산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, 형질전환 유전자는 TP를 인코딩한다. TP는 서열번호 5의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 5의 아미노산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, TP는 서열번호 5의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 5의 아미노산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TP는 서열번호 5의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 5의 아미노산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TP는 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의, 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 5와는 상이한 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시형태에서, TP는 하나 이상의 보존적 아미노산 치환에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 5와는 상이한 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, TP를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 6의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 6의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TP를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 6의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 6의 핵산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TP를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 6의 핵산 서열과 적어도 90% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 6의 핵산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TP를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 6의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 6의 핵산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TP를 인코딩하는 형질전환 유전자는 TP 효율성을 증가시키기 위해 코돈 최적화된다. 일부 실시형태에서, TP를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산은 TP를 인코딩하는 형질전환 유전자의 코딩 서열과 적어도 70% 동일하다(예를 들어, 코딩 서열의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열). 일부 실시형태에서, TP를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산 서열은 서열번호 19의 핵산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, 형질전환 유전자는 p53R2를 인코딩한다. p53R2는 서열번호 7의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 7의 아미노산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, p53R2는 서열번호 7의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 7의 아미노산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, p53R2는 서열번호 7의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 7의 아미노산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, p53R2는 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의, 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 7과는 상이한 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시형태에서, p53R2는 하나 이상의 보존적 아미노산 치환에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 7과는 상이한 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, p53R2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 8의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 8의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, p53R2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 8의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 8의 핵산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, p53R2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 8의 핵산 서열과 적어도 90% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 8의 핵산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, p53R2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 8의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 8의 핵산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, p53R2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 효율성을 증가시키기 위해 코돈 최적화된다. 일부 실시형태에서, p53R2를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산은 p53R2를 인코딩하는 형질전환 유전자의 코딩 서열과 적어도 70% 동일하다(예를 들어, 코딩 서열의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열). 일부 실시형태에서, p53R2를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산 서열은 서열번호 20의 핵산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, 형질전환 유전자는 SUCLA2를 인코딩한다. SUCLA2는 서열번호 9의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 9의 아미노산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, SUCLA2는 서열번호 9의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 9의 아미노산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLA2는 서열번호 9의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 9의 아미노산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLA2는 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의, 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 9와는 상이한 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLA2는 하나 이상의 보존적 아미노산 치환에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 9와는 상이한 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, SUCLA2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 10의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 10의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLA2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 10의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 10의 핵산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLA2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 10의 핵산 서열과 적어도 90% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 10의 핵산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLA2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 10의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 10의 핵산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLA2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 효율성을 증가시키기 위해 코돈 최적화된다. 일부 실시형태에서, SUCLA2를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산은 SUCLA2를 인코딩하는 형질전환 유전자의 코딩 서열과 적어도 70% 동일하다(예를 들어, 코딩 서열의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열). 일부 실시형태에서, SUCLA2를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산 서열은 서열번호 21을 핵산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, 형질전환 유전자는 SUCLG1을 인코딩한다. SUCLG1은 서열번호 11의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 11의 아미노산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, SUCLG1은 서열번호 11의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 11의 아미노산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLG1은 서열번호 11의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 11의 아미노산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLG1은 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의, 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 11과는 상이한 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLG1은 하나 이상의 보존적 아미노산 치환에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 11과는 상이한 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, SUCLG1을 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 12의 핵산 서열과는 적어도 70% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 12의 핵산 서열과는 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLG1을 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 12의 핵산 서열과는 적어도 85% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 12의 핵산 서열과는 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLG1을 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 12의 핵산 서열과는 적어도 90% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 12의 핵산 서열과는 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLG1을 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 12의 핵산 서열과는 적어도 95% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 12의 핵산 서열과는 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLG1을 인코딩하는 형질전환 유전자는 효율성을 증가시키기 위해 코돈 최적화된다. 일부 실시형태에서, SUCLG1을 인코딩하는 핵산은 SUCLG1을 인코딩하는 형질전환 유전자의 코딩 서열과 적어도 70% 동일하다(예를 들어, 코딩 서열의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열). 일부 실시형태에서, SUCLG1을 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산 서열은 서열번호 22의 핵산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, 형질전환 유전자는 MPV17을 인코딩한다. MPV17은 서열번호 13의 아미노산 서열과는 적어도 85% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 13의 아미노산 서열과는 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, MPV17은 서열번호 13의 아미노산 서열과는 적어도 90% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 13의 아미노산 서열과는 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, MPV17은 서열번호 13의 아미노산 서열과는 적어도 95% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 13의 아미노산 서열과는 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, MPV17은 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의, 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 13과는 상이한 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시형태에서, MPV17은 하나 이상의 보존적 아미노산 치환에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 13과는 상이한 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, MPV17을 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 14의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 14의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, MPV17을 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 14의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 14의 핵산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, MPV17을 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 14의 핵산 서열과 적어도 90% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 14의 핵산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, MPV17을 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 14의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 14의 핵산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, MPV17을 인코딩하는 형질전환 유전자는 효율성을 증가시키기 위해 코돈 최적화된다. 일부 실시형태에서, MPV17을 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산은 MPV17을 인코딩하는 형질전환 유전자의 코딩 서열과 적어도 70% 동일하다(예를 들어, 코딩 서열의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열). 일부 실시형태에서, MPV17을 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산 서열은 서열번호 23의 핵산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, 형질전환 유전자는 POLG를 인코딩한다. POLG는 서열번호 15의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 15의 아미노산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, POLG는 서열번호 15의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 15의 아미노산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, POLG는 서열번호 15의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 15의 아미노산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, POLG는 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의, 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 15와는 상이한 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시형태에서, POLG는 하나 이상의 보존적 아미노산 치환에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 15와는 상이한 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 16의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 16의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 16의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 16의 핵산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 16의 핵산 서열과 적어도 90% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 16의 핵산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 16의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 16의 핵산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자는 효율성을 증가시키기 위해 코돈 최적화된다. 일부 실시형태에서, POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산은 POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자의 코딩 서열과 적어도 70% 동일하다(예를 들어, 코딩 서열의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열). 일부 실시형태에서, POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산 서열은 서열번호 24의 핵산 서열을 갖는다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 이를 필요로 하는 대상체에서 TK2 결핍증을 치료, 예방 및/또는 치유하는 방법을 특징으로 한다. 이러한 방법은 대상체에 치료학적 유효량의, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자를 함유하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다.
추가 양태에서, 본 개시내용은 이를 필요로 하는 대상체에서 TK2 효소 활성을 복원하는 방법을 특징으로 한다. 이러한 방법은 대상체에 치료학적 유효량의, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자를 함유하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 이를 필요로 하는 대상체에서 TK2 결핍증과 관련된 하나 이상의 증상을 완화시키는 방법을 특징으로 한다. 이러한 방법은 대상체에 치료학적 유효량의, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자를 함유하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다.
이러한 양태의 일부로서, 본 개시내용은 또한, TK2 결핍증을 치료, 예방 및/또는 치유하는 데 사용하기 위한 TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자를 함유하는 조성물을 제공한다. 또한, TK2 결핍증을 갖는 대상체에서 TK2 효소 활성을 복원하는 데 사용하기 위한 TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자를 함유하는 조성물이 제공된다. 또한, TK2 결핍증과 관련된 하나 이상의 증상을 완화시키는 데 사용하기 위한 TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자를 함유하는 조성물이 제공된다. 통상적으로, 대상체는 TK2 결핍증을 갖는다.
이러한 양태의 일부로서, 본 개시내용은 또한, TK2 결핍증을 치료, 예방 및/또는 치유하기 위한 약제의 제조를 위한 TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자를 함유하는 조성물의 용도를 제공한다. 또한, TK2 결핍증을 갖는 대상체에서 TK2 효소 활성을 복원하기 위한 약제의 제조를 위한 TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자를 함유하는 조성물의 용도가 제공된다. 또한, TK2 결핍증과 관련된 하나 이상의 증상을 완화시키기 위한 약제의 제조를 위한 TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자를 함유하는 조성물의 용도가 제공된다. 통상적으로, 대상체는 TK2 결핍증을 갖는다.
임의의 상기 세 개의 양태의 일부 실시형태에서, 대상체는 MDS를 갖거나 MDS가 발병할 위험이 있다. TK2는 서열번호 1의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 1의 아미노산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, TK2는 서열번호 1의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 1의 아미노산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TK2는 서열번호 1의 아미노산과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 1의 아미노산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TK2는 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의, 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 1과는 상이한 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시형태에서, TK2는 하나 이상의 보존적 아미노산 치환에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 1과는 상이한 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 2의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 2의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 2의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 2의 핵산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 2의 핵산 서열과 적어도 90% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 2의 핵산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 2의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 2의 핵산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 효율성을 증가시키기 위해 코돈 최적화된다. 일부 실시형태에서, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산은 TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자의 코딩 서열과 적어도 70% 동일하다(예를 들어, 코딩 서열의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열). 일부 실시형태에서, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산 서열은 서열번호 17의 핵산 서열을 갖는다.
본 개시내용의 임의의 상기 양태의 일부 실시형태에서, 조성물은 벡터, 예를 들어, 바이러스 벡터를 포함한다. 바이러스 벡터는 예를 들어, AAV, 아데노바이러스, 렌티바이러스, 레트로바이러스, 폭스바이러스, 바큘로바이러스, 단순 헤르페스 바이러스, 우두 바이러스, 또는 합성 바이러스(예를 들어, 키메라 바이러스, 모자이크 바이러스, 또는 의사형 바이러스, 및/또는 외래 단백질, 합성 폴리머, 나노입자, 또는 소분자를 함유하는 바이러스)일 수 있다.
일부 실시형태에서, 바이러스 벡터는 AAV, 예를 들어, AAV1(즉, AAV1 역 말단 반복서열(ITR) 및 AAV1 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), AAV2(즉, AAV2 ITR 및 AAV2 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), AAV3(즉, AAV3 ITR 및 AAV3 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), AAV4(즉, AAV4 ITR 및 AAV4 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), AAV5(즉, AAV5 ITR 및 AAV5 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), AAV6(즉, AAV6 ITR 및 AAV6 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), AAV7(즉, AAV7 ITR 및 AAV7 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), AAV8(즉, AAV8 ITR 및 AAV8 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), AAV9(즉, AAV9 ITR 및 AAV9 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), AAVrh74(즉, AAVrh74 ITR 및 AAVrh74 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), AAVrh.8(즉, AAVrh.8 ITR 및 AAVrh.8 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), 또는 AAVrh.10(즉, AAVrh.10 ITR 및 AAVrh.10 캡시드 단백질을 함유하는 AAV)이다.
일부 실시형태에서, 바이러스 벡터는 하나의 AAV 혈청형으로부터의 ITR 및 다른 AAV 혈청형으로부터의 캡시드 단백질을 함유한, 의사형 AAV이다. 일부 실시형태에서, 의사형 AAV는 AAV2/9(즉, AAV2 ITR 및 AAV9 캡시드 단백질을 함유하는 AAV)이다. 일부 실시형태에서, 의사형 AAV는 AAV2/8(즉, AAV2 ITR 및 AAV8 캡시드 단백질을 함유하는 AAV)이다. 일부 실시형태에서, 의사형 AAV는 AAV2/1(즉, AAV2 ITR 및 AAV1 캡시드 단백질을 함유하는 AAV)이다.
일부 실시형태에서, AAV는 재조합 캡시드 단백질, 예를 들어, AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAVrh74, AAVrh.8 또는 AAVrh.10으로부터의 캡시드 단백질 중 하나 이상의 키메라를 함유하는 캡시드 단백질을 함유한다.
특정 실시형태에서, 바이러스 벡터는 AAV9이다. 예를 들어, 조성물은 TK2, dGK, TP, p53R2, SUCLA2, SUCLG1, MPV17 및/또는 POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자를 포함하는 핵산 서열을 포함하는 AAV9을 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, 조성물은 TK2, dGK, TP, p53R2, SUCLA2, SUCLG1 또는 MPV17을 인코딩하는 형질전환 유전자를 포함하는 핵산 서열을 포함하는 AAV9를 포함한다. 특정 실시형태에서, 조성물은 TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자를 포함하는 핵산 서열을 포함하는 AAV9을 포함한다.
특정 실시형태에서, 바이러스 벡터는 AAV이며, 형질전환 유전자는 TK2이다. 예를 들어, 조성물은 기능성 TK2 단백질을 인코딩하는 형질전환 유전자를 포함하는 핵산 서열을 포함하는, 재조합 AAV(rAAV), 예를 들어, AAV9를 포함할 수 있다.
본 개시내용의 임의의 상기 양태의 일부 실시형태에서, 조성물은 리포솜, 소포, 합성 소포, 엑소좀, 합성 엑소좀, 덴드리머 또는 나노입자이다.
본 개시내용의 임의의 상기 양태의 일부 실시형태에서, 형질전환 유전자는 근세포에서 형질전환 유전자의 발현을 유도하는 프로모터에 작동 가능하게 연결된다. 프로모터는 예를 들어, 닭 베타 액틴 프로모터, 사이토메갈로바이러스(cytomegalovirus: CMV) 프로모터, 미오신 경쇄-2 프로모터, 알파 액틴 프로모터, 트로포닌 1 프로모터, Na+/Ca2+ 교환기 프로모터, 디스트로핀 프로모터, 크레아틴 키나제 프로모터, 알파7 인테그린 프로모터, 뇌 나트륨이뇨 펩타이드 프로모터, 알파 B-크리스탈린/작은 열 충격 단백질 프로모터, 알파 미오신 중쇄 프로모터, 또는 심방 나트륨이뇨 인자 프로모터일 수 있다.
본 개시내용의 임의의 상기 양태의 일부 실시형태에서, 형질전환 유전자는 근세포에서 형질전환 유전자의 발현을 유도하는 인핸서에 작동 가능하게 연결된다. 본 개시내용의 조성물 및 방법과 함께 사용될 수 있는 예시적인 인핸서는 CMV 인핸서, 근세포 인핸서 인자 2(MEF2) 인핸서, 및 MyoD 인핸서이다.
일부 실시형태에서, 조성물은 대상체가 TK2, dGK, TP, p53R2, SUCLA2, SUCLG1, MPV17 및/또는 POLG를 인코딩하는 내인성 유전자의 결핍을 갖는 것으로서 진단되자마자 또는 직후에 대상체에 투여된다. 일부 실시형태에서, 조성물은 대상체가 TK2를 인코딩하는 내인성 유전자의 결핍을 갖는 것으로서 진단되자마자, 또는 직후에 대상체에 투여된다.
일부 실시형태에서, 방법은 대상체에 치료학적 유효량의, TK2, dGK, TP, p53R2, SUCLA2, SUCLG1, MPV17 및/또는 POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자를 함유하는 제2 조성물을 투여하는 것을 더 포함한다.
일부 실시형태에서, 제2 조성물의 형질전환 유전자는 TK2를 인코딩한다. TK2는 서열번호 1의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 1의 아미노산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, TK2는 서열번호 1의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 1의 아미노산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TK2는 서열번호 1의 아미노산과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 1의 아미노산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TK2는 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의, 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 1과는 상이한 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시형태에서, TK2는 하나 이상의 보존적 아미노산 치환에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 1과는 상이한 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, TK2를 인코딩하는 제2 조성물의 형질전환 유전자는 서열번호 2의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 2의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TK2를 인코딩하는 제2 조성물의 형질전환 유전자는 서열번호 2의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 2의 핵산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 2의 핵산 서열과 적어도 90% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 2의 핵산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 2의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 2의 핵산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 효율성을 증가시키기 위해 코돈 최적화된다. 일부 실시형태에서, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산은 TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자의 코딩 서열과 적어도 70% 동일하다(예를 들어, 코딩 서열의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열). 일부 실시형태에서, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산 서열은 서열번호 17을 핵산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, 제2 조성물의 형질전환 유전자는 dGK를 인코딩한다. dGK는 서열번호 3의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 3의 아미노산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, dGK는 서열번호 3의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 3의 아미노산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, dGK는 서열번호 3의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 3의 아미노산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, dGK는 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의, 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 3과는 상이한 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시형태에서, dGK는 하나 이상의 보존적 아미노산 치환에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 3과는 상이한 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, dGK를 인코딩하는 제2 조성물의 형질전환 유전자는 서열번호 4의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 4의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, dGK를 인코딩하는 제2 조성물의 형질전환 유전자는 서열번호 4의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 4의 핵산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, dGK를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 4의 핵산 서열과 적어도 90% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 4의 핵산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, dGK를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 4의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 4의 핵산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, dGK를 인코딩하는 형질전환 유전자는 효율성을 증가시키기 위해 코돈 최적화된다. 일부 실시형태에서, dGK를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산은 dGK를 인코딩하는 형질전환 유전자의 코딩 서열과 적어도 70% 동일하다(예를 들어, 코딩 서열의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열). 일부 실시형태에서, dGK를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산 서열은 서열번호 18의 핵산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, 제2 조성물의 형질전환 유전자는 TP를 인코딩한다. TP는 서열번호 5의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 5의 아미노산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, TP는 서열번호 5의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 5의 아미노산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TP는 서열번호 5의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 5의 아미노산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TP는 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의, 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 5와는 상이한 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시형태에서, TP는 하나 이상의 보존적 아미노산 치환에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 5와는 상이한 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, TP를 인코딩하는 제2 조성물의 형질전환 유전자는 서열번호 6의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 6의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TP를 인코딩하는 제2 조성물의 형질전환 유전자는 서열번호 6의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 6의 핵산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TP를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 6의 핵산 서열과 적어도 90% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 6의 핵산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TP를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 6의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 6의 핵산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TP를 인코딩하는 형질전환 유전자는 효율성을 증가시키기 위해 코돈 최적화된다. 일부 실시형태에서, TP를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산은 TP를 인코딩하는 형질전환 유전자의 코딩 서열과 적어도 70% 동일하다(예를 들어, 코딩 서열의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열). 일부 실시형태에서, TP를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산 서열은 서열번호 19의 핵산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, 제2 조성물의 형질전환 유전자는 p53R2를 인코딩한다. p53R2는 서열번호 7의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 7의 아미노산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, p53R2는 서열번호 7의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 7의 아미노산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, p53R2는 서열번호 7의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 7의 아미노산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, p53R2는 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의, 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 7과는 상이한 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시형태에서, p53R2는 하나 이상의 보존적 아미노산 치환에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 7과는 상이한 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, p53R2를 인코딩하는 제2 조성물의 형질전환 유전자는 서열번호 8의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 8의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, p53R2를 인코딩하는 제2 조성물의 형질전환 유전자는 서열번호 8의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 8의 핵산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, p53R2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 8의 핵산 서열과 적어도 90% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 8의 핵산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, p53R2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 8의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 8의 핵산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, p53R2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 효율성을 증가시키기 위해 코돈 최적화된다. 일부 실시형태에서, p53R2를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산은 p53R2를 인코딩하는 형질전환 유전자의 코딩 서열과 적어도 70% 동일하다(예를 들어, 코딩 서열의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열). 일부 실시형태에서, p53R2를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산 서열은 서열번호 20의 핵산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, 제2 조성물의 형질전환 유전자는 SUCLA2를 인코딩한다. SUCLA2는 서열번호 9의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 9의 아미노산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, SUCLA2는 서열번호 9의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 9의 아미노산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLA2는 서열번호 9의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 9의 아미노산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLA2는 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의, 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 9와는 상이한 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLA2는 하나 이상의 보존적 아미노산 치환에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 9와는 상이한 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, SUCLA2를 인코딩하는 제2 조성물의 형질전환 유전자는 서열번호 10의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 10의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLA2를 인코딩하는 제2 조성물의 형질전환 유전자는 서열번호 10의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 10의 핵산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLA2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 10의 핵산 서열과 적어도 90% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 10의 핵산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLA2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 10의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 10의 핵산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLA2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 효율성을 증가시키기 위해 코돈 최적화된다. 일부 실시형태에서, SUCLA2를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산은 SUCLA2를 인코딩하는 형질전환 유전자의 코딩 서열과 적어도 70% 동일하다(예를 들어, 코딩 서열의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열). 일부 실시형태에서, SUCLA2를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산 서열은 서열번호 21의 핵산 서열이다.
일부 실시형태에서, 제2 조성물의 형질전환 유전자는 SUCLG1을 인코딩한다. SUCLG1은 서열번호 11의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 11의 아미노산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, SUCLG1은 서열번호 11의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 11의 아미노산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLG1은 서열번호 11의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 11의 아미노산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLG1은 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의, 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 11과는 상이한 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLG1은 하나 이상의 보존적 아미노산 치환에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 11과는 상이한 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, SUCLG1을 인코딩하는 제2 조성물의 형질전환 유전자는 서열번호 12의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 12의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLG1을 인코딩하는 제2 조성물의 형질전환 유전자는 서열번호 12의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 12의 핵산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLG1을 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 12의 핵산 서열과 적어도 90% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 12의 핵산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLG1을 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 12의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 12의 핵산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLG1을 인코딩하는 형질전환 유전자는 효율성을 증가시키기 위해 코돈 최적화된다. 일부 실시형태에서, SUCLG1을 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산은 SUCLG1을 인코딩하는 형질전환 유전자의 코딩 서열과 적어도 70% 동일하다(예를 들어, 코딩 서열의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열). 일부 실시형태에서, SUCLG1을 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산 서열은 서열번호 22의 핵산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, 제2 조성물의 형질전환 유전자는 MPV17을 인코딩한다. MPV17은 서열번호 13의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 13의 아미노산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, MPV17은 서열번호 13의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 13의 아미노산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, MPV17은 서열번호 13의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 13의 아미노산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, MPV17은 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의, 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 13과는 상이한 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시형태에서, MPV17은 하나 이상의 보존적 아미노산 치환에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 13과는 상이한 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, MPV17을 인코딩하는 제2 조성물의 형질전환 유전자는 서열번호 14의 핵산 서열과 적어도 70% 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 14의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, MPV17을 인코딩하는 제2 조성물의 형질전환 유전자는 서열번호 14의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 14의 핵산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, MPV17을 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 14의 핵산 서열과 적어도 90% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 14의 핵산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, MPV17을 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 14의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 14의 핵산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, MPV17을 인코딩하는 형질전환 유전자는 효율성을 증가시키기 위해 코돈 최적화된다. 일부 실시형태에서, MPV17을 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산은 MPV17을 인코딩하는 형질전환 유전자의 코딩 서열과 적어도 70% 동일하다(예를 들어, 코딩 서열의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열). 일부 실시형태에서, MPV17을 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산 서열은 서열번호 23의 핵산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, 제2 조성물의 형질전환 유전자는 POLG을 인코딩한다. POLG는 서열번호 15의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 15의 아미노산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, POLG는 서열번호 15의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 15의 아미노산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, POLG는 서열번호 15의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 15의 아미노산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, POLG는 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의, 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 15와는 상이한 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시형태에서, POLG는 하나 이상의 보존적 아미노산 치환에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 15와는 상이한 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, POLG를 인코딩하는 제2 조성물의 형질전환 유전자는 서열번호 16의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 16의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, POLG를 인코딩하는 제2 조성물의 형질전환 유전자는 서열번호 16의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 16의 핵산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 16의 핵산 서열과 적어도 90% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 16의 핵산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 16의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 16의 핵산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자는 효율성을 증가시키기 위해 코돈 최적화된다. 일부 실시형태에서, POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산은 POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자의 코딩 서열과 적어도 70% 동일하다(예를 들어, 코딩 서열의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열). 일부 실시형태에서, POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산 서열은 서열번호 24의 핵산 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, 제2 조성물은 벡터, 예를 들어, 바이러스 벡터이다. 바이러스 벡터는 예를 들어, AAV, 아데노바이러스, 렌티바이러스, 레트로바이러스, 폭스바이러스, 바큘로바이러스, 단순 헤르페스 바이러스, 우두 바이러스, 또는 합성 바이러스(예를 들어, 키메라 바이러스, 모자이크 바이러스, 또는 의사형 바이러스, 및/또는 외래 단백질, 합성 폴리머, 나노입자, 또는 소분자를 함유하는 바이러스)일 수 있다.
일부 실시형태에서, 제2 조성물은 AAV, 예를 들어, AAV1(즉, AAV1 역 말단 반복서열(ITR) 및 AAV1 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), AAV2(즉, AAV2 ITR 및 AAV2 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), AAV3(즉, AAV3 ITR 및 AAV3 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), AAV4(즉, AAV4 ITR 및 AAV4 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), AAV5(즉, AAV5 ITR 및 AAV5 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), AAV6(즉, AAV6 ITR 및 AAV6 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), AAV7(즉, AAV7 ITR 및 AAV7 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), AAV8(즉, AAV8 ITR 및 AAV8 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), AAV9(즉, AAV9 ITR 및 AAV9 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), AAVrh74(즉, AAVrh74 ITR 및 AAVrh74 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), AAVrh.8(즉, AAVrh.8 ITR 및 AAVrh.8 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), 또는 AAVrh.10(즉, AAVrh.10 ITR 및 AAVrh.10 캡시드 단백질을 함유하는 AAV)이다.
일부 실시형태에서, 제2 조성물은 하나의 AAV 혈청형으로부터의 ITR 및 상이한 AAV 혈청형으로부터의 캡시드 단백질을 함유한, 의사형 AAV이다. 일부 실시형태에서, 의사형 AAV는 AAV2/9(즉, AAV2 ITR 및 AAV9 캡시드 단백질을 함유하는 AAV)이다. 일부 실시형태에서, 의사형 AAV는 AAV2/8(즉, AAV2 ITR 및 AAV8 캡시드 단백질을 함유하는 AAV)이다. 일부 실시형태에서, 의사형 AAV는 AAV2/1(즉, AAV2 ITR 및 AAV1 캡시드 단백질을 함유하는 AAV)이다.
일부 실시형태에서, 제2 조성물은 재조합 캡시드 단백질, 예를 들어, AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAVrh74, AAVrh.8 또는 AAVrh.10으로부터의 캡시드 단백질 중 하나 이상의 키메라를 함유하는 캡시드 단백질을 함유하는 AAV이다.
일부 실시형태에서, 제2 조성물은 리포솜, 소포, 합성 소포, 엑소좀, 합성 엑소좀, 덴드리머 또는 나노입자이다.
일부 실시형태에서, 제2 조성물의 형질전환 유전자는 근세포에서 형질전환 유전자의 발현을 유도하는 프로모터에 작동 가능하게 연결된다. 프로모터는 예를 들어, 닭 베타 액틴 프로모터, 사이토메갈로바이러스(CMV) 프로모터, 미오신 경쇄-2 프로모터, 알파 액틴 프로모터, 트로포닌 1 프로모터, Na+/Ca2+ 교환기 프로모터, 디스트로핀 프로모터, 크레아틴 키나제 프로모터, 알파7 인테그린 프로모터, 뇌 나트륨이뇨 펩타이드 프로모터, 알파 B-크리스탈린/작은 열 충격 단백질 프로모터, 알파 미오신 중쇄 프로모터, 또는 심방 나트륨이뇨 인자 프로모터일 수 있다.
일부 실시형태에서, 제2 조성물의 형질전환 유전자는 근세포에서 형질전환 유전자의 발현을 유도하는 인핸서에 작동 가능하게 연결된다. 본 개시내용의 조성물 및 방법과 함께 사용될 수 있는 예시적인 인핸서는 CMV 인핸서, 근세포 인핸서 인자 2(MEF2) 인핸서, 및 MyoD 인핸서이다.
일부 실시형태에서, 제2 조성물은 대상체에 제1 조성물의 투여 후 대상체에 투여된다. 제2 조성물은 예를 들어, 대상체에 제1 조성물의 투여 후 1일 또는 1주 이상 내에, 대상체에 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 제2 조성물은 대상체에 제1 조성물의 투여 후 적어도 1개월에 대상체에 투여된다. 일부 실시형태에서, 제1 조성물의 투여는, 제2 조성물이 대상체에 투여되는 동안에 계속된다.
일부 실시형태에서, 방법은 대상체에 치료학적 유효량의, 약리학적 제제를 함유하는 제3 조성물을 투여하는 것을 더 포함한다. 약리학적 제제는 예를 들어, 데옥시시티딘(dC), 데옥시티미딘(dT), 데옥시아데노신(dA), 데옥시구아노신(dG), 데옥시시티딘 모노포스페이트(dCMP), 데옥시티미딘 모노포스페이트(TMP), 데옥시아데노신 모노포스페이트(dAMP), 데옥시구아노신 모노포스페이트(dGMP), 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 일부 실시형태에서, 약리학적 제제는 dC, dT, 또는 이들의 혼합물이다.
일부 실시형태에서, 제3 조성물은 대상체에 제1 조성물의 투여 후 대상체에 투여된다. 제3 조성물은 예를 들어, 대상체에 제1 조성물의 투여 후 1일 또는 1주 이상 내에 대상체에 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 제3 조성물은 대상체에 제1 조성물의 투여 후 적어도 1개월에 대상체에 투여된다.
일부 실시형태에서, 제3 조성물은 대상체에 제2 조성물의 투여 후 대상체에 투여된다. 제3 조성물은 예를 들어, 대상체에 제2 조성물의 투여 후 1일 또는 1주 이상 내에 대상체에 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 제3 조성물은 대상체에 제2 조성물의 투여 후 적어도 1개월에 대상체에 투여된다.
일부 실시형태에서, 제1 조성물의 투여 및 제2 조성물의 투여는 대상체에 제3 조성물이 투여되는 동안 계속된다.
일부 실시형태에서, 제3 조성물은 대상체에 약 100 ㎎/㎏/일 내지 약 1,000 ㎎/㎏/일(예를 들어, 약 100 ㎎/㎏/일, 105 ㎎/㎏/일, 110 ㎎/㎏/일, 115 ㎎/㎏/일, 120 ㎎/㎏/일, 125 ㎎/㎏/일, 130 ㎎/㎏/일, 135 ㎎/㎏/일, 140 ㎎/㎏/일, 145 ㎎/㎏/일, 150 ㎎/㎏/일, 155 ㎎/㎏/일, 160 ㎎/㎏/일, 165 ㎎/㎏/일, 170 ㎎/㎏/일, 175 ㎎/㎏/일, 180 ㎎/㎏/일, 185 ㎎/㎏/일, 190 ㎎/㎏/일, 195 ㎎/㎏/일, 200 ㎎/㎏/일, 205 ㎎/㎏/일, 210 ㎎/㎏/일, 215 ㎎/㎏/일, 220 ㎎/㎏/일, 225 ㎎/㎏/일, 230 ㎎/㎏/일, 235 ㎎/㎏/일, 240 ㎎/㎏/일, 245 ㎎/㎏/일, 250 ㎎/㎏/일, 255 ㎎/㎏/일, 260 ㎎/㎏/일, 265 ㎎/㎏/일, 270 ㎎/㎏/일, 275 ㎎/㎏/일, 280 ㎎/㎏/일, 285 ㎎/㎏/일, 290 ㎎/㎏/일, 295 ㎎/㎏/일, 300 ㎎/㎏/일, 305 ㎎/㎏/일, 310 ㎎/㎏/일, 315 ㎎/㎏/일, 320 ㎎/㎏/일, 325 ㎎/㎏/일, 330 ㎎/㎏/일, 335 ㎎/㎏/일, 340 ㎎/㎏/일, 345 ㎎/㎏/일, 350 ㎎/㎏/일, 355 ㎎/㎏/일, 360 ㎎/㎏/일, 365 ㎎/㎏/일, 370 ㎎/㎏/일, 375 ㎎/㎏/일, 380 ㎎/㎏/일, 385 ㎎/㎏/일, 390 ㎎/㎏/일, 395 ㎎/㎏/일,400 ㎎/㎏/일, 405 ㎎/㎏/일, 410 ㎎/㎏/일, 415 ㎎/㎏/일, 420 ㎎/㎏/일, 425 ㎎/㎏/일, 430 ㎎/㎏/일, 435 ㎎/㎏/일, 440 ㎎/㎏/일, 445 ㎎/㎏/일, 450 ㎎/㎏/일, 455 ㎎/㎏/일, 460 ㎎/㎏/일, 465 ㎎/㎏/일, 470 ㎎/㎏/일, 475 ㎎/㎏/일, 480 ㎎/㎏/일, 485 ㎎/㎏/일, 490 ㎎/㎏/일, 495 ㎎/㎏/일, 500 ㎎/㎏/일, 505 ㎎/㎏/일, 510 ㎎/㎏/일, 515 ㎎/㎏/일, 520 ㎎/㎏/일, 525 ㎎/㎏/일, 530 ㎎/㎏/일, 535 ㎎/㎏/일, 540 ㎎/㎏/일, 545 ㎎/㎏/일, 550 ㎎/㎏/일, 555 ㎎/㎏/일, 560 ㎎/㎏/일, 565 ㎎/㎏/일, 570 ㎎/㎏/일, 575 ㎎/㎏/일, 580 ㎎/㎏/일, 585 ㎎/㎏/일, 590 ㎎/㎏/일, 595 ㎎/㎏/일, 600 ㎎/㎏/일, 605 ㎎/㎏/일, 610 ㎎/㎏/일, 615 ㎎/㎏/일, 620 ㎎/㎏/일, 625 ㎎/㎏/일, 630 ㎎/㎏/일, 635 ㎎/㎏/일, 640 ㎎/㎏/일, 645 ㎎/㎏/일, 650 ㎎/㎏/일, 655 ㎎/㎏/일, 660 ㎎/㎏/일, 665 ㎎/㎏/일, 670 ㎎/㎏/일, 675 ㎎/㎏/일, 680 ㎎/㎏/일, 685 ㎎/㎏/일, 690 ㎎/㎏/일, 695 ㎎/㎏/일, 700 ㎎/㎏/일, 705 ㎎/㎏/일, 710 ㎎/㎏/일, 715 ㎎/㎏/일, 720 ㎎/㎏/일, 725 ㎎/㎏/일, 730 ㎎/㎏/일, 735 ㎎/㎏/일, 740 ㎎/㎏/일, 745 ㎎/㎏/일, 750 ㎎/㎏/일, 755 ㎎/㎏/일, 760 ㎎/㎏/일, 765 ㎎/㎏/일, 770 ㎎/㎏/일, 775 ㎎/㎏/일, 780 ㎎/㎏/일, 785 ㎎/㎏/일, 790 ㎎/㎏/일, 795 ㎎/㎏/일, 800 ㎎/㎏/일, 805 ㎎/㎏/일, 810 ㎎/㎏/일, 815 ㎎/㎏/일, 820 ㎎/㎏/일, 825 ㎎/㎏/일, 830 ㎎/㎏/일, 835 ㎎/㎏/일, 840 ㎎/㎏/일, 845 ㎎/㎏/일, 850 ㎎/㎏/일, 855 ㎎/㎏/일, 860 ㎎/㎏/일, 865 ㎎/㎏/일, 870 ㎎/㎏/일, 875 ㎎/㎏/일, 880 ㎎/㎏/일, 885 ㎎/㎏/일, 890 ㎎/㎏/일, 895 ㎎/㎏/일, 900 ㎎/㎏/일, 905 ㎎/㎏/일, 910 ㎎/㎏/일, 915 ㎎/㎏/일, 920 ㎎/㎏/일, 925 ㎎/㎏/일, 930 ㎎/㎏/일, 935 ㎎/㎏/일, 940 ㎎/㎏/일, 945 ㎎/㎏/일, 950 ㎎/㎏/일, 955 ㎎/㎏/일, 960 ㎎/㎏/일, 965 ㎎/㎏/일, 970 ㎎/㎏/일, 975 ㎎/㎏/일, 980 ㎎/㎏/일, 985 ㎎/㎏/일, 990 ㎎/㎏/일, 995 ㎎/㎏/일, 또는 1,000 ㎎/㎏/일)의 양으로 투여된다.
일부 실시형태에서, 제3 조성물은 대상체에 약 200 ㎎/㎏/일 내지 약 800 ㎎/㎏/일(예를 들어, 약 200 ㎎/㎏/일, 205 ㎎/㎏/일, 210 ㎎/㎏/일, 215 ㎎/㎏/일, 220 ㎎/㎏/일, 225 ㎎/㎏/일, 230 ㎎/㎏/일, 235 ㎎/㎏/일, 240 ㎎/㎏/일, 245 ㎎/㎏/일, 250 ㎎/㎏/일, 255 ㎎/㎏/일, 260 ㎎/㎏/일, 265 ㎎/㎏/일, 270 ㎎/㎏/일, 275 ㎎/㎏/일, 280 ㎎/㎏/일, 285 ㎎/㎏/일, 290 ㎎/㎏/일, 295 ㎎/㎏/일, 300 ㎎/㎏/일, 305 ㎎/㎏/일, 310 ㎎/㎏/일, 315 ㎎/㎏/일, 320 ㎎/㎏/일, 325 ㎎/㎏/일, 330 ㎎/㎏/일, 335 ㎎/㎏/일, 340 ㎎/㎏/일, 345 ㎎/㎏/일, 350 ㎎/㎏/일, 355 ㎎/㎏/일, 360 ㎎/㎏/일, 365 ㎎/㎏/일, 370 ㎎/㎏/일, 375 ㎎/㎏/일, 380 ㎎/㎏/일, 385 ㎎/㎏/일, 390 ㎎/㎏/일, 395 ㎎/㎏/일,400 ㎎/㎏/일, 405 ㎎/㎏/일, 410 ㎎/㎏/일, 415 ㎎/㎏/일, 420 ㎎/㎏/일, 425 ㎎/㎏/일, 430 ㎎/㎏/일, 435 ㎎/㎏/일, 440 ㎎/㎏/일, 445 ㎎/㎏/일, 450 ㎎/㎏/일, 455 ㎎/㎏/일, 460 ㎎/㎏/일, 465 ㎎/㎏/일, 470 ㎎/㎏/일, 475 ㎎/㎏/일, 480 ㎎/㎏/일, 485 ㎎/㎏/일, 490 ㎎/㎏/일, 495 ㎎/㎏/일, 500 ㎎/㎏/일, 505 ㎎/㎏/일, 510 ㎎/㎏/일, 515 ㎎/㎏/일, 520 ㎎/㎏/일, 525 ㎎/㎏/일, 530 ㎎/㎏/일, 535 ㎎/㎏/일, 540 ㎎/㎏/일, 545 ㎎/㎏/일, 550 ㎎/㎏/일, 555 ㎎/㎏/일, 560 ㎎/㎏/일, 565 ㎎/㎏/일, 570 ㎎/㎏/일, 575 ㎎/㎏/일, 580 ㎎/㎏/일, 585 ㎎/㎏/일, 590 ㎎/㎏/일, 595 ㎎/㎏/일, 600 ㎎/㎏/일, 605 ㎎/㎏/일, 610 ㎎/㎏/일, 615 ㎎/㎏/일, 620 ㎎/㎏/일, 625 ㎎/㎏/일, 630 ㎎/㎏/일, 635 ㎎/㎏/일, 640 ㎎/㎏/일, 645 ㎎/㎏/일, 650 ㎎/㎏/일, 655 ㎎/㎏/일, 660 ㎎/㎏/일, 665 ㎎/㎏/일, 670 ㎎/㎏/일, 675 ㎎/㎏/일, 680 ㎎/㎏/일, 685 ㎎/㎏/일, 690 ㎎/㎏/일, 695 ㎎/㎏/일, 700 ㎎/㎏/일, 705 ㎎/㎏/일, 710 ㎎/㎏/일, 715 ㎎/㎏/일, 720 ㎎/㎏/일, 725 ㎎/㎏/일, 730 ㎎/㎏/일, 735 ㎎/㎏/일, 740 ㎎/㎏/일, 745 ㎎/㎏/일, 750 ㎎/㎏/일, 755 ㎎/㎏/일, 760 ㎎/㎏/일, 765 ㎎/㎏/일, 770 ㎎/㎏/일, 775 ㎎/㎏/일, 780 ㎎/㎏/일, 785 ㎎/㎏/일, 790 ㎎/㎏/일, 795 ㎎/㎏/일, 또는 800 ㎎/㎏/일)의 양으로 투여된다.
일부 실시형태에서, 제3 조성물은 대상체에 약 250 ㎎/㎏/일 내지 약 400 ㎎/㎏/일(예를 들어, 약 250 ㎎/㎏/일, 255 ㎎/㎏/일, 260 ㎎/㎏/일, 265 ㎎/㎏/일, 270 ㎎/㎏/일, 275 ㎎/㎏/일, 280 ㎎/㎏/일, 285 ㎎/㎏/일, 290 ㎎/㎏/일, 295 ㎎/㎏/일, 300 ㎎/㎏/일, 305 ㎎/㎏/일, 310 ㎎/㎏/일, 315 ㎎/㎏/일, 320 ㎎/㎏/일, 325 ㎎/㎏/일, 330 ㎎/㎏/일, 335 ㎎/㎏/일, 340 ㎎/㎏/일, 345 ㎎/㎏/일, 350 ㎎/㎏/일, 355 ㎎/㎏/일, 360 ㎎/㎏/일, 365 ㎎/㎏/일, 370 ㎎/㎏/일, 375 ㎎/㎏/일, 380 ㎎/㎏/일, 385 ㎎/㎏/일, 390 ㎎/㎏/일, 395 ㎎/㎏/일, 또는 400 ㎎/㎏/일)의 양으로 투여된다.
일부 실시형태에서, 제3 조성물은 대상체에 하루에 1회, 하루에 2회, 하루에 3회, 하루에 4회, 하루에 5회, 또는 하루에 6회 투여된다. 제3 조성물은 대상체에 우유, 인간 모유, 영아용 조제분유, 및/또는 물과 함께 경구로 투여될 수 있다.
일부 실시형태에서, 제1 조성물은 대상체에 정맥내, 경막내, 피부내, 경피, 비경구, 근육내, 비강내, 피하, 경피, 기관내, 복강내, 동맥내, 혈관내, 흡입, 관류, 세척, 및/또는 경구 투여에 의해 투여된다.
일부 실시형태에서, 제2 조성물은 대상체에 정맥내, 경막내, 피부내, 경피, 비경구, 근육내, 비강내, 피하, 경피, 기관내, 복강내, 동맥내, 혈관내, 흡입, 관류, 세척, 및/또는 경구 투여에 의해 투여된다.
일부 실시형태에서, 제3 조성물은 대상체에 정맥내, 경막내, 피부내, 경피, 비경구, 근육내, 비강내, 피하, 경피, 기관내, 복강내, 동맥내, 혈관내, 흡입, 관류, 세척, 및/또는 경구 투여에 의해 투여된다.
일부 실시형태에서, 대상체는 포유동물, 예를 들어, 인간이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 소아 인간 대상체, 예를 들어, 약 1개월 내지 약 12세의 인간 대상체(예를 들어, 약 1개월 내지 약 1세, 2세, 3세, 4세, 5세, 6세, 7세, 8세, 9세, 10세, 11세, 또는 12세의 인간 대상체)이다.
추가 양태에서, 본 개시내용은 TK2, dGK, TP, p53R2, SUCLA2, SUCLG1, MPV17 및/또는 POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자를 함유하는 조성물을 특징으로 한다.
상기 양태의 일부 실시형태에서, 형질전환 유전자는 TK2을 인코딩한다. TK2는 서열번호 1의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 1의 아미노산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, TK2는 서열번호 1의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 1의 아미노산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TK2는 서열번호 1의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 1의 아미노산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TK2는 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의, 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 1과는 상이한 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시형태에서, TK2는 하나 이상의 보존적 아미노산 치환에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 1과는 상이한 아미노산 서열을 갖는다.
상기 양태의 일부 실시형태에서, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 2의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 2의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 상기 양태의 일부 실시형태에서, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 2의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 2의 핵산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 2의 핵산 서열과 적어도 90% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 2의 핵산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 2의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 2의 핵산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 효율성을 증가시키기 위해 코돈 최적화된다. 일부 실시형태에서, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산은 TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자의 코딩 서열과 적어도 70% 동일하다(예를 들어, 코딩 서열의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열). 일부 실시형태에서, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산 서열은 서열번호 17의 핵산 서열을 갖는다.
상기 양태의 일부 실시형태에서, 형질전환 유전자는 dGK를 인코딩한다. dGK는 서열번호 3의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 3의 아미노산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, dGK는 서열번호 3의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 3의 아미노산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, dGK는 서열번호 3의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 3의 아미노산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, dGK는 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의, 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 3과는 상이한 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시형태에서, dGK는 하나 이상의 보존적 아미노산 치환에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 3과는 상이한 아미노산 서열을 갖는다.
상기 양태의 일부 실시형태에서, dGK를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 4의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 4의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 상기 양태의 일부 실시형태에서, dGK를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 4의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 4의 핵산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, dGK를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 4의 핵산 서열과 적어도 90% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 4의 핵산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, dGK를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 4의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 4의 핵산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, dGK를 인코딩하는 형질전환 유전자는 효율성을 증가시키기 위해 코돈 최적화된다. 일부 실시형태에서, dGK를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산은 dGK를 인코딩하는 형질전환 유전자의 코딩 서열과 적어도 70% 동일하다(예를 들어, 코딩 서열의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열). 일부 실시형태에서, dGK를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산 서열은 서열번호 18의 핵산 서열을 갖는다.
상기 양태의 일부 실시형태에서, 형질전환 유전자는 TP를 인코딩한다. TP는 서열번호 5의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 5의 아미노산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, TP는 서열번호 5의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 5의 아미노산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TP는 서열번호 5의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 5의 아미노산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TP는 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의, 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 5와는 상이한 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시형태에서, TP는 하나 이상의 보존적 아미노산 치환에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 5와는 상이한 아미노산 서열을 갖는다.
상기 양태의 일부 실시형태에서, TP를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 6의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 6의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 상기 양태의 일부 실시형태에서, TP를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 6의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 6의 핵산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TP를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 6의 핵산 서열과 적어도 90% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 6의 핵산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TP를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 6의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 6의 핵산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, TP를 인코딩하는 형질전환 유전자는 효율성을 증가시키기 위해 코돈 최적화된다. 일부 실시형태에서, TP를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산은 TP를 인코딩하는 형질전환 유전자의 코딩 서열과 적어도 70% 동일하다(예를 들어, 코딩 서열의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열). 일부 실시형태에서, TP를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산 서열은 서열번호 19의 핵산 서열을 갖는다.
상기 양태의 일부 실시형태에서, 형질전환 유전자는 p53R2를 인코딩한다. p53R2는 서열번호 7의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 7의 아미노산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, p53R2는 서열번호 7의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 7의 아미노산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, p53R2는 서열번호 7의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 7의 아미노산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, p53R2는 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의, 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 7과는 상이한 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시형태에서, p53R2는 하나 이상의 보존적 아미노산 치환에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 7과는 상이한 아미노산 서열을 갖는다.
상기 양태의 일부 실시형태에서, p53R2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 8의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 8의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 상기 양태의 일부 실시형태에서, p53R2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 8의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 8의 핵산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, p53R2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 8의 핵산 서열과 적어도 90% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 8의 핵산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, p53R2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 8의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 8의 핵산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, p53R2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 효율성을 증가시키기 위해 코돈 최적화된다. 일부 실시형태에서, p53R2를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산은 p53R2를 인코딩하는 형질전환 유전자의 코딩 서열과 적어도 70% 동일하다(예를 들어, 코딩 서열의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열). 일부 실시형태에서, p53R2를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산 서열은 서열번호 20의 핵산 서열을 갖는다.
상기 양태의 일부 실시형태에서, 형질전환 유전자는 SUCLA2를 인코딩한다. SUCLA2는 서열번호 9의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 9의 아미노산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, SUCLA2는 서열번호 9의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 9의 아미노산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLA2는 서열번호 9의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 9의 아미노산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLA2는 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의, 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 9와는 상이한 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLA2는 하나 이상의 보존적 아미노산 치환에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 9와는 상이한 아미노산 서열을 갖는다.
상기 양태의 일부 실시형태에서, SUCLA2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 10의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 10의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 상기 양태의 일부 실시형태에서, SUCLA2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 10의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 10의 핵산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLA2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 10의 핵산 서열과 적어도 90% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 10의 핵산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLA2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 10의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 10의 핵산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLA2를 인코딩하는 형질전환 유전자는 효율성을 증가시키기 위해 코돈 최적화된다. 일부 실시형태에서, SUCLA2를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산은 SUCLA2를 인코딩하는 형질전환 유전자의 코딩 서열과 적어도 70% 동일하다(예를 들어, 코딩 서열의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열). 일부 실시형태에서, SUCLA2를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산 서열은 서열번호 21의 핵산 서열을 갖는다.
상기 양태의 일부 실시형태에서, 형질전환 유전자는 SUCLG1을 인코딩한다. SUCLG1은 서열번호 11의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 11의 아미노산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, SUCLG1은 서열번호 11의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 11의 아미노산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLG1은 서열번호 11의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 11의 아미노산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLG1은 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의, 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 11과는 상이한 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLG1은 하나 이상의 보존적 아미노산 치환에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 11과는 상이한 아미노산 서열을 갖는다.
상기 양태의 일부 실시형태에서, SUCLG1을 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 12의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 12의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 상기 양태의 일부 실시형태에서, SUCLG1을 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 12의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 12의 핵산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLG1을 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 12의 핵산 서열과 적어도 90% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 12의 핵산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLG1을 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 12의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 12의 핵산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, SUCLG1을 인코딩하는 형질전환 유전자는 효율성을 증가시키기 위해 코돈 최적화된다. 일부 실시형태에서, SUCLG1을 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산은 SUCLG1을 인코딩하는 형질전환 유전자의 코딩 서열과 적어도 70% 동일하다(예를 들어, 코딩 서열의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열). 일부 실시형태에서, SUCLG1을 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산 서열은 서열번호 22의 핵산 서열을 갖는다.
상기 양태의 일부 실시형태에서, 형질전환 유전자는 MPV17을 인코딩한다. MPV17은 서열번호 13의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 13의 아미노산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, MPV17은 서열번호 13의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 13의 아미노산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, MPV17은 서열번호 13의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 13의 아미노산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, MPV17은 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의, 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 13과는 상이한 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시형태에서, MPV17은 하나 이상의 보존적 아미노산 치환에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 13과는 상이한 아미노산 서열을 갖는다.
상기 양태의 일부 실시형태에서, MPV17을 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 14의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 14의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 상기 양태의 일부 실시형태에서, MPV17을 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 14의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 14의 핵산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, MPV17을 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 14의 핵산 서열과 적어도 90% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 14의 핵산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, MPV17을 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 14의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 14의 핵산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, MPV17을 인코딩하는 형질전환 유전자는 효율성을 증가시키기 위해 코돈 최적화된다. 일부 실시형태에서, MPV17을 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산은 MPV17을 인코딩하는 형질전환 유전자의 코딩 서열과 적어도 70% 동일하다(예를 들어, 코딩 서열의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열). 일부 실시형태에서, MPV17을 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산 서열은 서열번호 23의 핵산 서열을 갖는다.
상기 양태의 일부 실시형태에서, 형질전환 유전자는 POLG를 인코딩한다. POLG는 서열번호 15의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 15의 아미노산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 가질 수 있다. 일부 실시형태에서, POLG는 서열번호 15의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 15의 아미노산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, POLG는 서열번호 15의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 15의 아미노산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, POLG는 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의, 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 15와는 상이한 아미노산 서열을 갖는다. 일부 실시형태에서, POLG는 하나 이상의 보존적 아미노산 치환에 의해, 예를 들어, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개, 또는 그 이상의 보존적 아미노산 치환)에 의해 서열번호 15와는 상이한 아미노산 서열을 갖는다.
상기 양태의 일부 실시형태에서, POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 16의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 16의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 상기 양태의 일부 실시형태에서, POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 16의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 16의 핵산 서열과 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 16의 핵산 서열과 적어도 90% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 16의 핵산 서열과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자는 서열번호 16의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열(예를 들어, 서열번호 16의 핵산 서열과 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)을 갖는다. 일부 실시형태에서, POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자는 효율성을 증가시키기 위해 코돈 최적화된다. 일부 실시형태에서, POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산은 POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자의 코딩 서열과 적어도 70% 동일하다(예를 들어, 코딩 서열의 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열). 일부 실시형태에서, POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자의 핵산 서열은 서열번호 24의 핵산 서열을 갖는다.
상기 양태의 일부 실시형태에서, 조성물은 벡터, 예를 들어, 바이러스 벡터이다. 바이러스 벡터는 예를 들어, AAV, 아데노바이러스, 렌티바이러스, 레트로바이러스, 폭스바이러스, 바큘로바이러스, 단순 헤르페스 바이러스, 우두 바이러스, 또는 합성 바이러스(예를 들어, 키메라 바이러스, 모자이크 바이러스, 또는 의사형 바이러스, 및/또는 외래 단백질, 합성 폴리머, 나노입자, 또는 소분자를 함유하는 바이러스)일 수 있다.
상기 양태의 일부 실시형태에서, 바이러스 벡터는 AAV, 예를 들어, AAV1(즉, AAV1 역 말단 반복서열(ITR) 및 AAV1 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), AAV2(즉, AAV2 ITR 및 AAV2 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), AAV3(즉, AAV3 ITR 및 AAV3 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), AAV4(즉, AAV4 ITR 및 AAV4 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), AAV5(즉, AAV5 ITR 및 AAV5 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), AAV6(즉, AAV6 ITR 및 AAV6 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), AAV7(즉, AAV7 ITR 및 AAV7 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), AAV8(즉, AAV8 ITR 및 AAV8 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), AAV9(즉, AAV9 ITR 및 AAV9 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), AAVrh74(즉, AAVrh74 ITR 및 AAVrh74 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), AAVrh.8(즉, AAVrh.8 ITR 및 AAVrh.8 캡시드 단백질을 함유하는 AAV), 또는 AAVrh.10(즉, AAVrh.10 ITR 및 AAVrh.10 캡시드 단백질을 함유하는 AAV)이다.
상기 양태의 일부 실시형태에서, 바이러스 벡터는 하나의 AAV 혈청형으로부터의 ITR 및 다른 AAV 혈청형으로부터의 캡시드 단백질을 함유한, 의사형 AAV이다. 일부 실시형태에서, 의사형 AAV는 AAV2/9(즉, AAV2 ITR 및 AAV9 캡시드 단백질을 함유하는 AAV)이다. 일부 실시형태에서, 의사형 AAV는 AAV2/8(즉, AAV2 ITR 및 AAV8 캡시드 단백질을 함유하는 AAV)이다. 일부 실시형태에서, 의사형 AAV는 AAV2/1(즉, AAV2 ITR 및 AAV1 캡시드 단백질을 함유하는 AAV)이다.
상기 양태의 일부 실시형태에서, AAV는 재조합 캡시드 단백질, 예를 들어, AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAVrh74, AAVrh.8 또는 AAVrh.10으로부터의 캡시드 단백질 중 하나 이상의 키메라를 함유하는 캡시드 단백질을 함유한다.
상기 양태의 일부 실시형태에서, 조성물은 리포솜, 소포, 합성 소포, 엑소좀, 합성 엑소좀, 덴드리머 또는 나노입자이다.
상기 양태의 일부 실시형태에서, 형질전환 유전자는 근세포에서 형질전환 유전자의 발현을 유도하는 프로모터에 작동 가능하게 연결된다. 프로모터는 예를 들어, 닭 베타 액틴 프로모터, 사이토메갈로바이러스(CMV) 프로모터, 미오신 경쇄-2 프로모터, 알파 액틴 프로모터, 트로포닌 1 프로모터, Na+/Ca2+ 교환기 프로모터, 디스트로핀 프로모터, 크레아틴 키나제 프로모터, 알파7 인테그린 프로모터, 뇌 나트륨이뇨 펩타이드 프로모터, 알파 B-크리스탈린/작은 열 충격 단백질 프로모터, 알파 미오신 중쇄 프로모터, 또는 심방 나트륨이뇨 인자 프로모터일 수 있다.
상기 양태의 일부 실시형태에서, 형질전환 유전자는 근세포에서 형질전환 유전자의 발현을 유도하는 인핸서에 작동 가능하게 연결된다. 본 개시내용의 조성물 및 방법과 함께 사용될 수 있는 예시적인 인핸서는 CMV 인핸서, 근세포 인핸서 인자 2(MEF2) 인핸서, 및 MyoD 인핸서이다.
다른 양태에서, 본 개시내용은 상기 양태의 조성물을 함유하는 키트를 특징으로 한다. 키트는 패키지 삽입물, 예를 들어, 키트의 사용자에게 본 개시내용의 임의의 상기 양태 또는 실시형태의 방법에 따라 대상체에 조성물을 투여하라고 지시하는 패키지 삽입물을 추가로 함유할 수 있다. 키트는 dC, dT, dA, dG, dCMP, TMP, dAMP, dGMP, 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 약리학적 제제를 추가로 함유할 수 있다.
본 발명을 예시할 목적으로, 도면에 본 발명의 특정 실시형태가 도시되어 있다. 그러나, 본 발명은 도면에 도시되어 있는 실시형태의 정확한 배열 및 수단으로 제한되지 않는다.
도면에서, 특정 약어가 사용된다. "WT"는 Tk2+인 야생형 마우스를 의미한다. "Het"는 TK2 유전자에 대해 이형 접합 마우스를 의미한다. "Mut"는 Tk2 -/- 마우스를 의미한다. "P#"는 출생 후 날짜 #를 의미한다. "AAV2-hTK2"는 인간 TK2 형질전환 유전자를 함유하는 AAV2 벡터를 지칭한다. "AAV9-hTK2"는 인간 TK2 형질전환 유전자를 함유하는 AAV9 벡터를 지칭한다. "dC"는 데옥시시티딘을 지칭한다. "dT"는 데옥시티미딘을 지칭한다. "IV"는 정맥내 투여를 지칭한다. "vc"는 벡터 게놈 카피의 양을 지칭한다.
도 1은 인간 TK2 cDNA를 포함하는 재조합 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터의 개략도이다.
도 2는 하기 마우스의 생존 곡선을 도시한 것이다(왼쪽에서 오른쪽으로의 곡선): 미처리 Tk2 -/- 마우스(n=13); 우유만 투여된 Tk2 -/- 마우스(n=6); 출생 후 1일에 IV에 의해 4.2×1010 vc의 AAV9-hTK2로 처리된(즉, 치료된) Tk2 -/- 마우스(n=5); 520㎎의 dC+dT로 처리된 Tk2 -/- 마우스(n=11); 및 출생 후 1일에 IV에 의해 4.2×1011의 AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스(n=10). 미처리 Tk2 + (야생형)는 상부 수평선에 의해 나타낸다.
도 3은 하기 수컷 및 암컷 마우스에서 시간에 대한 체중의 그래프를 도시한 것이다: 520㎎의 dC+dT로 처리된 Tk2 + ; 520㎎의 dC+dT로 처리된 Tk2 -/- 마우스; AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 + ; 출생 후 1일에 IV에 의해 4.2×1011 vc의 AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스; 및 출생 후 1일에 IV에 의해 4.2×1010 vc의 AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스.
도 4는 미처리 Tk2 + , AAV9-hTK2로 처리된 Tk2+ 및 AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스를 포함하는 수컷 및 암컷 마우스의 출생 후 29일 및 출생 후 60일에 마우스 체중에 의해 정규화된 앞다리(막대 시험) 및 앞다리 및 뒷다리 둘 다(그리드 시험)의 악력 시험의 결과의 그래프를 도시한 것이다.
도 5는 AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 + 및 AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스를 포함하는 수컷 및 암컷 마우스의 출생 후 29일 및 출생 후 60일에 로타로드 성능 시험을 가속화함으로써 측정한 경우 마우스 운동 기능의 결과의 그래프를 도시한 것이다.
도 6은 하기 마우스의 뇌, 간, 근육 및 신장 조직에서 출생 후 29일에 단백질의 p㏖/분/㎎으로 측정된 TK2 효소의 활성의 그래프를 도시한 것이다: 미처리 Tk2 + ; 4.2×1011 vc에서 AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 + ; 4.2×1011 vc에서 AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스; 520㎎의 dC+dT로 처리된 Tk2 + ; 및 520㎎의 dC+dT로 처리된 Tk2 -/- 마우스.
도 7은 1개월, 2개월 및 6개월에 AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 + 의 뇌, 간, 근육 및 신장 조직에서 마우스 TK2 mRNA의 퍼센트로서 측정한 인간 TK2의 mRNA 발현의 그래프를 도시한 것이다.
도 8은 하기 마우스의 뇌, 간, 신장, 심장, 근육, 및 장 조직에서 출생 후 29일에 mtDNA 카피 수(미처리 Tk2 + 의 퍼센트로서 mtDNA/nDNA)를 나타낸 그래프를 도시한 것이다: 미처리 Tk2 + ; AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 + ; AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 유전자와 이형 접합된 마우스; AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스; 및 520㎎의 dC+dT로 처리된 Tk2 -/- 마우스.
도 9는 하기 마우스의 뇌, 간, 신장, 심장, 근육, 및 장 조직에서 출생 후 60일에 mtDNA 카피 수(미처리 Tk2 + 의 퍼센트로서 mtDNA/nDNA)를 도시한 그래프를 도시한 것이다: 미처리 Tk2 + ; AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 + ; AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 유전자와 이형 접합된 마우스; 및 AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스.
도 10은 하기 마우스의 뇌에서 출생 후 29일에 호흡 사슬 효소 활성의 그래프를 도시한 것이다: 미처리 Tk2 + ; AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 + ; AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 유전자와 이형 접합된 마우스; AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스; 및 520㎎의 dC+dT로 처리된 Tk2 -/- 마우스.
도 11은 하기 마우스의 뇌에서 출생 후 29일에 호흡 사슬 효소 수준(빈쿨린(vinculin)으로 정규화된 옥스포스 정상-상태 수준(oxphos steady-state level))의 그래프를 도시한 것이다: 미처리 Tk2 + ; AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 + ; AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스; 및 520㎎의 dC+dT로 처리된 Tk2 -/- 마우스.
도 12는 출생 후 96일에 AAV9-hTK2 처리된 돌연변이체 및 야생형 마우스의 염색된(H & E) 신장의 이미지를 도시한 것이다.
도 13은 생존 코호트 및 출생 후 60일 코호트에서 AAV9-hTK2 처리된 돌연변이체 및 야생형 마우스에서의 크레아티닌 및 BUN 지수의 그래프를 도시한 것이다.
도 14는 하기 마우스의 생존 곡선(왼쪽에서 오른쪽으로의 곡선)을 도시한 것이다: 미처리 Tk2 -/- 마우스(n=13); 출생 후 1일에 IV에 의해 4.2×1010 vc에서 AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스(n=5); 520㎎의 dC+dT로 처리된 Tk2 -/- 마우스(n=11); 출생 후 1일에 IV에 의해 4.2×1011 vc에서 AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스(n=10); 1일에 2.1×1011에서 AAV9-hTK2로 그리고 29일에 1.05×1011에서 AAV2-hTK2로 동시-처리된 마우스(n=7); 및 1일에 AAV9-hTK2로, 29일에 AAV2-hTK2로 동시-처리되고 21일부터 520 ㎎/㎏/일의 경구 dC+dT가 공급된 마우스(n=7). 미처리 Tk2 + (야생형)의 생존은 상부 수평선으로 나타낸다.
도 15는 하기 수컷 마우스에서 시간에 대한 체중을 도시한 것이다: 미처리 Tk2 + ; 520㎎의 dC+dT로 처리된 Tk2 + ; 520㎎의 dC+dT로 처리된 Tk2 -/- 마우스; 출생 후 1일에 IV에 의해 4.2×1011 vc로 AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 + ; 출생 후 1일에 IV에 의해 4.2×1011 vc에서 AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스("AAV9"); 출생 후 1일에 IV에 의해 4.2×1010 vc로 AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스; 출생 후 1일에 IV에 의해 2.1×1011 vc로 AAV9-hTK2로 처리되고 출생 후 29일에 IV에 의해 1.05×1011 vc로 AAV2-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스("AAV9 + AAV2"); 및 출생 후 1일에 IV에 의해 2.1×1011 vc로 AAV9-hTK2로 처리되고 출생 후 29일에 IV에 의해 1.05×1011 vc로 AAV2-hTK2로 처리되고 21일에 520 ㎎/㎏/일의 경구 dC+dT로 처리된 Tk2 -/- 마우스(AAV9 + AAV2+ dCdT").
도 16은 하기 암컷 마우스에서 시간에 대한 체중을 도시한 것이다: 미처리 Tk2 + ; 520㎎의 dC+dT로 처리된 Tk2 + ; 520㎎의 dC+dT로 처리된 Tk2 -/- 마우스; 출생 후 1일에 IV에 의해 4.2×1011 vc로 AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 + ; 출생 후 1일에 IV에 의해 4.2×1011 vc에서 AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스("AAV9"); 출생 후 1일에 IV에 의해 4.2×1010 vc로 AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스; 출생 후 1일에 IV에 의해 2.1×1011 vc로 AAV9-hTK2로 처리되고 출생 후 29일에 IV에 의해 1.05×1011 vc로 AAV2-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스("AAV9 + AAV2"); 및 출생 후 1일에 IV에 의해 2.1×1011 vc로 AAV9-hTK2로 처리되고 출생 후 29일에 IV에 의해 1.05×1011 vc로 AAV2-hTK2로 처리되고 21일에 520 ㎎/㎏/일의 경구 dC+dT로 처리된 Tk2 -/- 마우스(AAV9 + AAV2+ dCdT").
도 17은 미처리 Tk2 + , AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 + , AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스, AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스 및 AAV2-hTK2, 및 AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스, AAV2-hTK2 및 dC+dT를 포함하는 수컷 및 암컷 마우스의 출생 후 60일에 마우스 체중에 의해 정규화된 앞다리(막대 시험) 및 앞다리 및 뒷다리 둘 다(그리드 시험)의 악력 시험의 결과 그래프를 도시한 것이다.
도 18은 미처리 Tk2 + , AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 + , AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스, AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스 및 AAV2-hTK2, 및 AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스, AAV2-hTK2 및 dC+dT를 포함하는 수컷 및 암컷 마우스의 출생 후 90일에 마우스 체중에 의해 정규화된 앞다리(막대 시험) 및 앞다리 및 뒷다리 둘 다(그리드 시험)의 악력 시험의 결과 그래프를 도시한 것이다.
도 19는 미처리 Tk2 + , AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 + , AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스, AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스 및 AAV2-hTK2, 및 AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스, AAV2-hTK2 및 dC+dT를 포함하는 수컷 및 암컷 마우스의 출생 후 60일 및 출생 후 90일에 가속 로타로드 성능 시험에 의해 측정된 마우스 운동 기능의 결과 그래프를 도시한 것이다.
도 20은 하기 마우스의 뇌, 간, 근육, 심장, 신장, 및 장 조직에서 출생 후 60일에 mtDNA 카피 수(미처리 Tk2+의 백분율로서 mtDNA/nDNA)의 그래프를 도시한 것이다: 미처리 Tk2 + ; AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스; AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스 및 AAV2-hTK2; 및 AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스, AAV2-hTK2 및 dC+dT.
도 21은 21 내지 29일령 및 60일령의 마우스로부터의 소변을 사용하여 소변 딥 스틱(urine dip stick)에서의 단백질 시험으로부터의 결과를 도시한 것이다. 모든 Tk2 -/- 마우스는 1일에 AAV9-hTK2로 치료되었으며, 4마리의 Tk2 -/- 마우스 중 3마리는 29일에 AAV2-hTK2로 치료되었다.
도 22는 미처리 Tk2 + , AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 + , AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스, AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스 및 AAV2-hTK2, 및 AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스, AAV2-hTK2 및 dC+dT를 포함하는 60일의 마우스 및 종료점 코호트(endpoint cohort)에서의 마우스에서 BUN 지수의 그래프를 도시한 것이다.
도 23은 하기 마우스의 뇌, 간, 근육 및 신장 조직에서 출생 후 60일에 p㏖/분/㎎의 단백질로서 측정된 TK2 효소의 활성 그래프를 도시한 것이다: 미처리 Tk2 + ; AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 + ; AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스; AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스 및 AAV2-hTK2; 및 AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스, AAV2-hTK2 및 dC+dT.
본 발명은 적어도 부분적으로, TK2 결핍증을 포함하는 미토콘드리아 DNA 고갈 증후군이 기능 단백질, 예를 들어, 핵 유전자에 의해 인코딩된 기능 단백질에 대해 인코딩하는 핵산의 전달에 의한 유전자 요법을 통해 치료, 예방 및/또는 치유될 수 있다는 놀라운 발견을 기초로 한 것이다. 본 개시내용의 조성물 및 방법과 함께 사용될 수 있는 예시적인 핵산은 티미딘 키나제 2(TK2), 데옥시구아노신 키나제(dGK), 티미딘 포스포릴라제(TP), 리보뉴클레오타이드 리덕타제의 p53 유도성 작은 서브유닛(p53R2), 석시닐-CoA 리가제 ADP-형성 서브유닛 베타(SUCLA2), 석시닐-CoA 리가제 GDP-형성 서브유닛 알파(SUCLG1), 미토콘드리아 내막 단백질 MPV17(MPV17), 및/또는 DNA 폴리머라제 서브유닛 감마(POLG)를 인코딩한다. 이러한 핵산은 본 명세서에 기술된 다른 것들 중에서, 하나 이상의 바이러스 벡터에 의해, 예를 들어, 아데노-연관 바이러스(AAV)에 의해 전달될 수 있다. 유전자 요법은 단독으로 또는 약리학적 요법, 예를 들어, 데옥시뉴클레오사이드 또는 데옥시리보뉴클레오사이드 모노포스페이트 치료법과 함께 투여될 수 있다. 하기의 섹션은 본 발명의 조성물 및 방법을 더욱 상세히 기술하는 것이다.
정의
본 명세서에서 사용되는 용어는 일반적으로 본 발명의 문맥 및 각 용어가 사용되는 특정 문맥 내에서, 당해 분야에서의 이의 일반적인 의미를 갖는다. 특정 용어는 본 발명의 방법 및 이를 사용하는 방법을 기술함에 있어서 실무자에게 추가적인 지침을 제공하기 위해 하기 또는 명세서의 다른 곳에서 논의된다. 또한, 동일한 것이 하나 이상의 방식으로 표현되는 것으로 인식될 것이다. 결과적으로, 대안적인 언어 및 동의어는 본 명세서에서 논의되는 용어 중 임의의 하나 이상에 대해 사용될 수 있으며, 용어가 본 명세서에서 상세히 설명되거나 논의되는지의 여부에 대해 어떠한 특별한 의미도 부여되지 않는다. 특정 용어에 대한 동의어가 제공된다. 하나 이상의 동의어의 인용은 다른 동의어의 사용을 배제하는 것은 아니다. 본 명세서에서 논의되는 임의의 용어의 예를 포함하는, 본 명세서의 임의의 곳에서의 예의 사용은 단지 예시적인 것으로서, 어떠한 방식으로도, 본 발명의 범위 및 의미 또는 임의의 예시된 용어를 제한하지 않는다. 마찬가지로, 본 발명은 이의 바람직한 실시형태로 제한되는 것은 아니다.
용어 "약" 또는 "대략"은 부분적으로 값이 측정되거나 결정되는 방법에 따르는, 당업자에 의해 결정되는 바와 같은 특정 값에 대한 허용 오차 범위, 즉, 측정 시스템의 한계, 즉, 특정 목적, 예를 들어, 약제학적 제형을 위해 요구되는 정밀도 내를 의미한다. 예를 들어, "약"은 당해 분야의 실무에 따라 1 또는 1이 넘는 표준 편차 내를 의미할 수 있다. 대안적으로, "약"은 제공된 값의 최대 20%, 바람직하게는, 최대 10%, 더욱 바람직하게는, 최대 5%, 및 더욱 더 바람직하게는, 최대 1%의 범위를 의미한다. 대안적으로, 특히 생물학적 시스템 또는 과정과 관련하여, 이러한 용어는 값의 10배 내, 바람직하게는, 5배 내, 및 더욱 바람직하게는, 2배 내를 의미할 수 있다. 특정 값이 본 출원 및 청구범위에 기술되는 경우에, 달리 기술하지 않는 한, 특정 값에 대한 허용 오차 범위 내를 의미하는 용어 "약"이 가정되어야 한다.
용어 "돌연변이 마우스", "TK2 넉인 마우스(TK2 knockin mouse)" 및 "Tk2 -/- "는 문헌[Akman, et al. 2008]에 기술된, 동종 접합 Tk2 H126N 넉인 돌연변이(Tk2 -/- ) 마우스 모델을 지칭한다. 용어 "야생형 마우스", "WT", 및 "Tk2+"는 또한 상호 교환적으로 사용될 것이다. 일부 경우에, Tk2 유전자에 대해 이형 접합된 마우스("Tk2 +/- ")는 비교를 위해 사용되고, 야생형 마우스와 동일하게 거동할 것으로 예상될 것이다. 이러한 마우스는 "Het"로 명시된다.
본 출원에서 사용되는 용어 "대상체"는 치료학적 또는 예방학적 치료를 필요로 하는 동물을 지칭한다. 대상체는 포유동물, 예를 들어, 개, 고양이, 설치류, 소, 말, 돼지, 양, 및 영장류를 포함한다. 이에 따라, 본 발명은 예를 들어, 반려 동물, 농장 동물, 동물원의 실험실 동물, 및 야생의 동물을 치료하기 위해 수의학에서 사용될 수 있다. 본 발명은 인간 의료 적용을 위해 특히 바람직하다.
본 출원에서 사용되는 용어 "환자"는 인간 대상체를 의미한다. 본 발명의 일부 실시형태에서, "환자"는 불균형 뉴클레오타이드 풀을 특징으로 하는 질환 또는 장애, 미토콘드리아병, 미토콘드리아 DNA 고갈 증후군, 또는 TK2 결핍증을 갖는 것으로 알려지거나 갖는 것으로 의심된다.
본 명세서에서 사용되는 구 "치료학적 유효량"은 대상체의 임상적으로 유의미한 병태의 개선을 야기시키거나, 질환 또는 장애와 관련된 하나 이상의 증상을 지연시키거나 최소화하거나 완화시키거나, 대상체에서 요망되는 유익한 생리학적 변화를 야기시키기에 충분한 양을 의미한다.
용어 "치료하다", "치료" 등은 질환 또는 장애의 증상 중 적어도 하나를 늦추거나, 경감시키거나, 개선시키거나 완화시키는 것, 또는 이의 발형 후 질환 또는 장애를 역전시키는 것을 의미하도록 지칭된다.
용어 "예방하다", "예방" 등은 명백한 질환 장애 발병 전에 작용하는 것, 질환 또는 장애가 발병하는 것을 방지하거나 질환 또는 장애의 정도를 최소화하는 것, 또는 이의 발달 과정을 늦추는 것을 지칭한다.
용어 "치유하다" 등은 치유하거나, 건강하게 되거나 건강을 회복하거나 재발 위험이 작도록 질환의 재발 없는 시간을 허용하는 것을 의미한다.
용어 "...를 필요로 하는"은 불균형 뉴클레오타이드 풀을 특징으로 하는 질환 또는 장애, 미토콘드리아병, 미토콘드리아 DNA 고갈 증후군, 또는 TK2 결핍증을 갖는 것으로 알려지거나 갖는 것으로 의심되거나 가질 위험이 있는 대상체일 것이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "제제"는 효과를 형성시키거나 형성시킬 수 있고 화학물질, 의약품, 생물학적 제제, 작은 유기 분자, 항체, 핵산, 펩타이드, 및 단백질을 포함하는 물질을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "데옥시뉴클레오사이드" 또는 "dN"은 데옥시티미딘 또는 dT, 데옥시시티딘 또는 dC, 데옥시아데노신 또는 dA, 및 데옥시구아노신 또는 dG를 의미한다. 각각에 대한 전체 길이 명칭 및 통상적인 약어는 상호 교화적으로 사용될 것이다. 이러한 데옥시뉴클레오사이드는 또한, 데옥시뉴클레오사이드의 생리학적 기능성 유도체를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "데옥시리보뉴클레오사이드 모노포스페이트"는 티미딘-5'-모노포스페이트 또는 (TMP) 또는 2'-데옥시시티딘-5'-모노포스페이트(dCMP), 데옥시아데노신 모노포스페이트 또는 dAMP, 및 데옥시구아노신 모노포스페이트 또는 dGMP를 의미한다. 각각에 대한 전체 길이 명칭 및 통상적인 약어는 상호 교화적으로 사용될 것이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "약리학적 제제"는 데옥시뉴클레오사이드 또는 dN 및/또는 데옥시리보뉴클레오사이드 모노포스페이트 또는 dNMP 단독, 또는 조성물 또는 약제 조성물 중의 것을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "약리학적 요법" 또는 "약리학적 치료"는 본 명세서에 개시되고 공동 소유된 미국출원 제15/082,207호(하기에서 "'207 출원") 및 제15/736,092호(하기에서 '092 출원")에 충분히 기술된 바와 같은 dN 및/또는 dNMP의 투여를 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "생리학적 기능성 유도체"는 데옥시뉴클레오사이드를 수득하기 위해 생체내에서 형질 전환된 화합물(예를 들어, 약물 전구체)을 지칭한다. 형질 전환은 다양한 메커니즘(예를 들어, 대사 또는 화학적 과정)에 의해, 예를 들어, 예컨대, 혈액에서의 가수분해를 통해 일어날 수 있다. 전구 약물은 이러한 유도체이며, 전구약물의 사용의 논의는 문헌[T. Higuchi and W. Stella, "Pro-drugs as Novel Delivery Systems," Vol. 14 of the A.C.S. Symposium Series, 및 Bioreversible Carriers in Drug Design, ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987]에 제공된다.
본 명세서에 사용되는 "부작용"은 약물 투여에 의해 야기된 원치 않는 반응이다. 대부분의 경우에, 유전자 및 약리학적 요법의 투여는 부작용을 유발하지 않았다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "담체"는 치료제와 함께 투여되는 희석제, 애주번트, 부형제, 또는 비히클을 지칭하고, 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 비히클, 코팅, 희석제, 항균제 및 항진균제 등장 및 흡수 지연제, 완충제, 담체 용액, 현탁제, 콜로이드 등을 포함한다. 약제학적 활성 물질에 대한 이러한 매질 및 제제의 사용은 당해 분야에 널리 공지되어 있다.
용어 "약제학적으로 허용되는"은 숙주에 투여될 때 알레르기성 또는 유사한 부작용, 예를 들어, 인간에게 투여될 때, 위장 장애, 현기증 등을 형성시키지 않고 연방 또는 주정부의 규제 기관에 의해 승인받거나 동물 및 보다 특히 인간에서 사용하기 위해 미국 약전 또는 다른 일반적으로 인정된 약전에 나열된 분자 독립체 및 조성물을 지칭한다.
"단리된 핵산 분자"는 폴리뉴클레오타이드 전부 또는 일부와 관련되지 않은 게놈의 DNA 또는 RNA, mRNA, cDNA, 또는 합성 기원 또는 이들의 일부 조합물을 의미하며, 여기서, 단리된 폴리뉴클레오타이드는 자연에서 발견되거나, 자연에서 연결되지 않은 폴리뉴클레오타이드에 연결된다. 본 개시내용의 목적을 위해, 특정 뉴클레오타이드 서열을 "포함하는 핵산 분자"가 온전한 염색체를 포함하지 않는 것으로 이해되어야 한다. 특정 핵산 서열을 "포함하는" 단리된 핵산 분자는 특정 서열에 추가하여, 최대 10개 또는 심지어 최대 20개 이상의 다른 단백질 또는 이의 부분 또는 단편에 대한 코딩 서열을 포함할 수 있거나, 인용된 핵산 서열의 코딩 영역의 발현을 조절하는 작동 가능하게 연결된 조절 서열을 포함할 수 있고/있거나 벡터 서열을 포함할 수 있다.
어구 "조절 서열"은 특정 숙주 유기체에서 작동 가능하게 연결된 코딩 서열의 발현을 위해 필수적인 DNA 서열을 지칭한다. 원핵 생물에 적합한 조절 서열은 예를 들어, 프로모터, 선택적으로, 작동자 서열, 및 리보솜 결합 사이트를 포함한다. 진핵 세포는 프로모터, 폴리아데닐화 신호, 및 인핸서를 사용하는 것으로 알려져 있다.
핵산은 다른 핵산 서열과 기능적 관계로 배치될 때 "작동 가능하게 연결"된다. 예를 들어, 전서열 또는 분비 리더에 대한 DNA는 폴리펩타이드의 분비에 참여하는 전단백질로서 발현되는 경우에 폴리펩타이드에 대한 DNA에 작동 가능하게 연결되거나; 프로모터 또는 인핸서는 서열의 전사에 영향을 미치는 경우에 코딩 서열에 작동 가능하게 연결되거나; 리보솜 결합 사이트는 번역을 촉진하기 위해 정위되는 경우에 코딩 서열에 작동 가능하게 연결된다. 일반적으로, "작동 가능하게 연결된"은 연결되는 DNA 서열이 인접하여 있고, 분비 리더의 경우에 및 판독 단계에서 인접한 것을 의미한다. 그러나, 인핸서는 인접할 필요는 없다. 연결은 편리한 제한 사이트에 결찰에 의해 달성된다. 이러한 사이트가 존재하지 않는 경우에, 합성 올리고뉴클레오타이드 어댑터 또는 링커는 보편적인 실무에 따라 사용된다.
본 명세서에서 사용되는 표현 "세포," "세포주" 및 "세포 배양물"은 상호교환하여 사용되며, 이러한 모든 명칭은 자손을 포함한다. 이에 따라, 단어 "형질 전환체" 및 "형질전환된 세포"는 1차 대상체 세포 및 전달 횟수와 무관하게 이로부터 유도된 배양물을 포함한다. 또한, 고의적이거나 우연한 돌연변이로 인해 모든 자손이 정확히 동일한 DNA 함량을 갖는 것은 아닌 것으로 이해된다. 본래 형질전환된 세포에서 스크리닝되는 것과 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이 자손이 포함된다. 고유 지정이 의도되는 경우에, 이는 문맥에서 명확해질 것이다.
일부 양태에서, 본 발명은 단리된 아데노-연관 벡터(AAV)를 제공한다. AAV와 관련하여 본 명세서에서 사용되는 용어 "단리된"은 이의 천연 환경(예를 들어, 숙주 세포, 조직, 또는 대상체)로부터 단리되거나 인공적으로 생성된 AAV를 지칭한다. 단리된 AAV는 재조합 방법을 이용하여 생성될 수 있다. 이러한 AAV는 본 명세서에서 "재조합 AAV"로서 지칭된다. 재조합 AAV(rAAV)는 바람직하게는 조직-특이적 표적화 능력을 가지며, 이에 따라, rAAV의 형질전환 유전자가 하나 이상의 사전결정된 조직(들)에 특이적으로 전달되도록 한다. AAV 캡시드는 이러한 조직-특이적 표적화 능력을 결정하는 데 중요한 요소이다.
요망되는 캡시드 단백질을 갖는 재조합 AAV를 수득하는 방법이 기술되어 있다[예를 들어, 미국특허 제7,906,111호 참조]. 다수의 상이한 AAV 캡시드 단백질, 예를 들어, 문헌[Gao, et al., J. Virology 78(12):6381-6388 (June 2004); Gao, et al., Proc Natl Acad Sci USA 100(10):6081-6086 (May 13, 2003); 및 미국특허 제7,906,111호; 미국특허 제8,999,678호]에 개시된 것이 기술되어 있다. 본 명세서에 기술된 작제물 및 방법의 요망되는 패키징을 위해, AAV9 벡터 및 캡시드, 또는 AAV2 벡터 및 캡시드가 바람직하다. 그러나, rAAVrh.8 및 rAAVrh.10과 같은 다른 적합한 AAV, 또는 다른 유사한 벡터가 본 발명에서 사용하기 위해 구성될 수 있다는 것이 주지된다. 통상적으로, 이러한 방법은 AAV 캡시드 단백질을 인코딩하는 핵산 서열 또는 이의 단편; 기능성 rep 유전자; AAV 역 말단 반복서열(ITR) 및 형질전환 유전자로 이루어진 재조합 AAV 벡터; 및 AAV 캡시드 단백질 내에 재조합 AAV 벡터의 패키징을 가능하게 하기 위한 충분한 헬퍼 기능을 함유하는 숙주 세포를 배양하는 것을 포함한다.
AAV 캡시드에서 rAAV 벡터를 패키징하기 위해 숙주 세포에서 배양되는 성분은 트랜스로 숙주 세포에 제공될 수 있다. 대안적으로, 필수 성분(예를 들어, 재조합 AAV 벡터, rep 서열, cap 서열, 및/또는 헬퍼 기능) 중 임의의 하나 이상은 당업자에게 공지된 방법을 이용하여 필수 성분 중 하나 이상을 함유하도록 조작된 안정한 숙주 세포에 의해 제공될 수 있다. 가장 적합하게, 이러한 안정한 숙주 세포는 유도성 프로모터의 제어 하에서 필수 성분(들)을 함유할 것이다. 그러나, 필수 성분(들)은 보존적 프로모터의 제어 하에 있을 수 있다. 또 다른 대안예에서, 선택된 안정한 숙주 세포는 보존적 프로모터의 제어 하에서의 선택된 성분(들) 및 하나 이상의 유도성 프로모터의 제어 하에서의 다른 선택된 성분(들)을 함유할 수 있다. 예를 들어, 293개의 세포(보존적 프로모터의 제어 하에서 E1 헬퍼 기능을 함유함)로부터 유도되지만, 유도성 프로모터의 제어 하에서 rep 및/또는 cap 단백질을 함유하는 안정한 숙주 세포가 생성될 수 있다.
rAAV를 생성하기 위한 재조합 AAV 벡터, rep 서열, cap 서열, 및 헬퍼 기능은 임의의 적절한 유전적 요소(벡터)를 이용하여 패키징 숙주 세포로 전달될 수 있다. 선택된 유전적 요소는 본 명세서에 기술된 것을 포함하는, 임의의 적합한 방법에 의해 전달될 수 있다[예를 들어, 문헌[Fisher et al, J. Virology 70:520-532 (1993)] 및 미국특허 제5,478,745호 참조].
일부 실시형태에서, 재조합 AAV는 삼중 트랜스펙션 방법을 이용하여 생성될 수 있다[예를 들어, 미국특허 제6,001,650호에서 상세히 기술된 바와 같음]. 통상적으로, 재조합 AAV는 AAV 입자, AAV 헬퍼 기능 벡터, 및 액세서리 기능 벡터로 패키징하도록 숙주 세포에 재조합 AAV 벡터(형질전환 유전자를 포함함)를 트랜스펙션함으로써 생성된다. AAV 헬퍼 기능 벡터는 "AAV 헬퍼 기능" 서열(즉, rep 및 cap)을 인코딩하며, 이는 생산적 AAV 복제 및 캡시드화를 위해 트랜스로 기능한다. 바람직하게는, AAV 헬퍼 기능 벡터는 임의의 검출 가능한 야생형 AAV 비리온(즉, 기능성 rep 및 cap 유전자를 함유하는 AAV 비리온)을 생성시키지 않으면서 효율적인 AAV 벡터 생산을 지지한다. 본 발명과 함께 사용하기 위해 적합한 벡터의 비제한적인 예는 미국특허 제6,001,650호에 기술된 pHLP19, 및 미국특허 제6,156,303호에 기술된 pRep6cap6 벡터를 포함하며, 이러한 두 문헌 둘 다 전체는 본 명세서에 참고로 포함된다. 액세서리 기능 벡터는 AAV가 복제를 위해 의존적인 비-AAV 유도 바이러스 및/또는 세포 기능(즉, "액세서리 기능")에 대해 뉴클레오타이드 서열을 인코딩한다. 액세서리 기능은 비제한적으로, AAV 유전자 전사의 활성화, 단계 특이적 AAV mRNA 접합, AAV DNA 복제, cap 발현 생성물의 합성, 및 AAV 캡시드 어셈블리와 관련된 그러한 모이어티를 포함하는 AAV 복제를 위해 요구되는 그러한 기능을 포함한다. 바이러스-기반 액세서리 기능은 임의의 공지된 헬퍼 바이러스, 예를 들어, 아데노바이러스, 헤르페스바이러스(단순 헤르페스 바이러스 타입-1 이외), 및 우두 바이러스로부터 유도될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "AAV1," "AAV2," "AAV3," "AAV4," 등은 AAV1, AAV2, AAV3, 또는 AAV4 각각으로부터 ITR을 함유하는 AAV 벡터뿐만 아니라 AAV1, AAV2, AAV3, 또는 AAV4 각각으로부터의 캡시드 단백질을 지칭한다. 용어 "AAV2/1," "AAV2/8," "AAV2/9," 등은 AAV2로부터의 ITR 및 AAV1, AAV8, 또는 AAV9 각각으로부터의 캡시드 단백질을 함유하는 의사형 AAV 벡터를 지칭한다.
트랜스펙션된 숙주 세포와 관련하여, 용어 "트랜스펙션"은 세포에 의한 외래 DNA의 흡수를 지칭하기 위해 사용되며, 세포는 외인성 DNA가 세포막 내측에 도입되었을 때 "트랜스펙션"된 것이다. 다수의 트랜스펙션 기술은 일반적으로 당해 분야에 공지되어 있다[예를 들어, 문헌[Graham et al., Virology 52:456 (1973), Sambrook et al., Molecular Cloning, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratories, New York (1989), Davis et al., Basic Methods in Molecular Biology, Elsevier (1986), 및 Chu et al., Gene 13:197(1981)] 참조]. 이러한 기술은 하나 이상의 외인성 핵산, 예를 들어, 뉴클레오타이드 통합 벡터 및 다른 핵산 분자를 적합한 숙주 세포에 도입하기 위해 사용될 수 있다.
"숙주 세포"는 고려되는 물질을 보유하거나 보유할 수 있는 임의의 세포를 지칭한다. 종종, 숙주 세포는 포유류 세포이다. 숙주 세포는 AAV 헬퍼 작제물, AAV 미니유전자 플라스미드, 액세서리 기능 벡터, 또는 재조합 AAV의 생산과 관련된 다른 전달 DNA의 수용자로서 사용될 수 있다. 이러한 용어는 트랜스펙션된 본래 세포의 자손을 포함한다. 이에 따라, 본 명세서에서 사용되는 "숙주 세포"는 외인성 DNA 서열로 트랜스펙션된 세포를 지칭할 수 있다. 단일 부모 세포의 자손이 자연, 우발적, 또는 고의적 돌연변이로 인해 본래 부모와 모폴로지 또는 게놈 또는 전체 DNA 보체에서 반드시 완전히 일치하지 않을 수 있는 것으로 이해된다.
세포와 관련하여, 용어 "단리된"은 이의 천연 환경으로부터(예를 들어, 조직 또는 대상체로부터) 단리된 세포를 지칭한다. 용어 "세포주"는 시험관내에서 연속 또는 지속 성장 및 분화를 가능하게 하는 세포의 집단을 지칭한다. 종종, 세포주는 단일 전구 세포로부터 유도된 클론 집단이다. 또한, 당해 분야에서, 이러한 클론 집단의 저장 또는 이동 동안 핵형에서 자발적인 또는 유도된 변화가 발생할 수 있다는 것이 알려져 있다. 이에 따라, 지칭되는 세포주로부터 유도된 세포는 조상 세포 또는 배양물, 및 이러한 변이체를 포함하는 것으로 지칭된 세포주와 정확하게 일치하지 않을 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "재조합 세포"는 외인성 DNA 세그먼트, 예를 들어, 생물학적 활성 폴리펩타이드의 전사 또는 RNA와 같은 생물학적 활성 핵산의 생산을 유도하는 DNA 세그먼트가 도입되는 세포를 지칭한다.
용어 "벡터"는 임의의 유전적 요소, 예를 들어, 플라스미드, 파지, 트랜스포손, 코스미드, 염색체, 인공 염색체, 바이러스, 또는 비리온을 포함하며, 이는 적절한 조절 요소와 관련이 있을 때 복제될 수 있고, 세포 사이로 유전자 서열을 전달할 수 있다. 이에 따라, 이러한 용어는 클로닝 및 발현 비히클뿐만 아니라 바이러스 벡터를 포함한다. 일부 실시형태에서, 유용한 벡터는 전사되는 핵산 세그먼트가 프로모터의 전사 조절 하에서 정위되는 그러한 벡터로 고려된다. "프로모터"는 유전자의 특정 전사를 개시하기 위해 요구되는, 세포의 합성 기구 또는 도입된 합성 기구에 의해 인지되는 DNA 서열을 지칭한다. 어구 "작동 가능하게 위치된," "작동 가능하게 연결된," "조절 하에서" 또는 "전사 조절 하에서"는 프로모터가 유전자의 RNA 폴리머라제 개시 및 발현을 조절하기 위해 핵산과 관련된 정확한 위치 및 배향을 가짐을 의미한다.
용어 "발현 벡터" 또는 "발현 작제물" 또는 "작제물"은 서열을 인코딩하는 핵산의 일부 또는 전부가 전사될 수 있는 핵산을 함유하는 임의의 타입의 유전적 작제물을 의미한다. 일부 실시형태에서, 발현은 예를 들어, 전사된 유전자로부터 생물학적-활성 폴리펩타이드 생성물 또는 저해 RNA를 생성시키기 위해 핵산의 전사를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "TK2"는 티미딘 키나제 2, 또는 상응하는 단백질 제품을 인코딩하는 유전자를 지칭한다. 용어 "TK2" 및 "티미딘 키나제 2"는 야생형 형태의 TK2 유전자 또는 단백질뿐만 아니라 야생형 TK2 단백질 및 이를 인코딩하는 핵산의 변이체(특히, 예를 들어, 접합 변이체, 절단체, 콘카티머, 및 융합 작제물)를 포함한다. 이러한 변이체의 예에는 야생형 TK2 단백질의 임의의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 1)과 적어도 70% 서열 동일성(예를 들어, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 99.9% 동일성, 또는 그 이상)을 갖는 단백질이 있으며, 단, TK2 변이체는 야생형 TK2의 기능을 보유한다. 추가적으로, 용어 "TK2" 및 "티미딘 키나제 2"는 융합 단백질, 또는 이를 인코딩하는 핵산을 지칭할 수 있으며, 여기서, TK2는 다른 폴리펩타이드, 반감기 조절제, 또는 치료제에 작동 가능하게 연결된다. 용어 "TK2"는 당업자에 의해 인식되는 바와 같이, 문맥에 따라, 단백질, 또는 이러한 단백질을 인코딩하는 유전자를 지칭할 수 있다.
예시적인 TK2 아미노산 서열(서열번호 1):
Figure pct00001
예시적인 TK2 핵산 서열(서열번호 2):
Figure pct00002
Figure pct00003
본 명세서에서 사용되는 용어 "dGK"는 데옥시구아노신 키나제, 또는 상응하는 단백질 제품을 인코딩하는 유전자를 지칭한다. 용어 "dGK" 및 "데옥시구아노신 키나제"는 야생형 형태의 dGK 유전자 또는 단백질뿐만 아니라 야생형 dGK 단백질 및 이를 인코딩하는 핵산의 변이체(특히, 예를 들어, 접합 변이체, 절단체, 콘카티머, 및 융합 작제물)를 포함한다. 이러한 변이체의 예에는 야생형 dGK 단백질의 임의의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 3)과 적어도 70% 서열 동일성(예를 들어, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 99.9% 동일성, 또는 그 이상)을 갖는 단백질이 있으며, 단, dGK 변이체는 야생형 dGK의 기능을 보유한다. 추가적으로, 용어 "dGK" 및 "데옥시구아노신 키나제"는 융합 단백질, 또는 이를 인코딩하는 핵산을 지칭할 수 있으며, 여기서, dGK는 다른 폴리펩타이드, 반감기 조절제, 또는 치료제에 작동 가능하게 연결된다. 용어 "dGK"는 당업자에 의해 인식되는 바와 같이, 문맥에 따라, 단백질, 또는 이러한 단백질을 인코딩하는 유전자를 지칭할 수 있다.
예시적인 dGK 아미노산 서열(서열번호 3):
Figure pct00004
예시적인 dGK 핵산 서열(서열번호 4):
Figure pct00005
본 명세서에서 사용되는 용어 "p53R2"는 리보뉴클레오타이드 리덕타제의 p53 유도성 서브유닛, 또는 상응하는 단백질 제품을 인코딩하는 유전자를 지칭한다. 용어 "p53R2" 및 "리보뉴클레오타이드 리덕타제의 p53 유도성 서브유닛"은 야생형 형태의 p53R2 유전자 또는 단백질뿐만 아니라 야생형 p53R2 단백질 및 이를 인코딩하는 핵산의 변이체(특히, 예를 들어, 접합 변이체, 절단체, 콘카티머, 및 융합 작제물)를 포함한다. 이러한 변이체의 예에는 야생형 p53R2 단백질의 임의의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 5)과 적어도 70% 서열 동일성(예를 들어, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 99.9% 동일성, 또는 그 이상)을 갖는 단백질이 있으며, 단, p53R2 변이체는 야생형 p53R2의 기능을 보유한다. 추가적으로, 용어 "p53R2" 및 "리보뉴클레오타이드 리덕타제의 p53 유도성 서브유닛"은 융합 단백질, 또는 이를 인코딩하는 핵산을 지칭할 수 있으며, 여기서, p53R2는 다른 폴리펩타이드, 반감기 조절제, 또는 치료제에 작동 가능하게 연결된다. 용어 "p53R2"는 당업자에 의해 인식되는 바와 같이, 문맥에 따라, 단백질, 또는 이러한 단백질을 인코딩하는 유전자를 지칭할 수 있다.
예시적인 p53R2 아미노산 서열(서열번호 5):
Figure pct00006
Figure pct00007
예시적인 p53R2 핵산 서열(서열번호 6):
Figure pct00008
Figure pct00009
본 명세서에서 사용되는 용어 "TP"는 티미딘 포스포릴라제, 또는 상응하는 단백질 제품을 인코딩하는 유전자를 지칭한다. 용어 "TP" 및 "티미딘 포스포릴라제"는 야생형 형태의 TP 유전자 또는 단백질뿐만 아니라 야생형 TP 단백질 및 이를 인코딩하는 핵산의 변이체(특히, 예를 들어, 접합 변이체, 절단체, 콘카티머, 및 융합 작제물)를 포함한다. 이러한 변이체의 예에는 야생형 TP 단백질의 임의의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 7)과 적어도 70% 서열 동일성(예를 들어, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 99.9% 동일성, 또는 그 이상)을 갖는 단백질이 있으며, 단, TP 변이체는 야생형 TP의 기능을 보유한다. 추가적으로, 용어 "TP" 및 "티미딘 포스포릴라제"는 융합 단백질, 또는 이를 인코딩하는 핵산을 지칭할 수 있으며, 여기서, TP는 다른 폴리펩타이드, 반감기 조절제, 또는 치료제에 작동 가능하게 연결된다. 용어 "TP"는 당업자에 의해 인식되는 바와 같이, 문맥에 따라, 단백질, 또는 이러한 단백질을 인코딩하는 유전자를 지칭할 수 있다.
예시적인 TP 아미노산 서열(서열번호 7):
Figure pct00010
예시적인 TP 핵산 서열(서열번호 8):
Figure pct00011
Figure pct00012
본 명세서에서 사용되는 용어 "SUCLA2는 석시네이트-CoA 리가제 ADP-형성 베타 서브유닛, 또는 상응하는 단백질 제품을 인코딩하는 유전자를 지칭한다. 용어 "SUCLA2" 및 "석시네이트-CoA 리가제 ADP-형성 베타 서브유닛"은 야생형 형태의 SUCLA2 유전자 또는 단백질뿐만 아니라 야생형 SUCLA2 단백질 및 이를 인코딩하는 핵산의 변이체(특히, 예를 들어, 접합 변이체, 절단체, 콘카티머 및 융합 작제물)를 포함한다. 이러한 변이체의 예에는 야생형 SUCLA2 단백질의 임의의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 9)과 적어도 70% 서열 동일성(예를 들어, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 99.9% 동일성, 또는 그 이상)을 갖는 단백질이 있으며, 단, SUCLA2 변이체는 야생형 SUCLA2의 기능을 보유한다. 추가적으로, 용어 "SUCLA2" 및 "석시네이트-CoA 리가제 ADP-형성 베타 서브유닛"은 융합 단백질, 또는 이를 인코딩하는 핵산을 지칭할 수 있으며, 여기서, SUCLA2는 다른 폴리펩타이드, 반감기 조절제, 또는 치료제에 작동 가능하게 연결된다. 용어 "SUCLA2"는 당업자에 의해 인식되는 바와 같이, 문맥에 따라, 단백질, 또는 이러한 단백질을 인코딩하는 유전자를 지칭할 수 있다.
예시적인 SUCLA2 아미노산 서열(서열번호 9):
Figure pct00013
예시적인 SUCLA2 핵산 서열(서열번호 10):
Figure pct00014
Figure pct00015
본 명세서에서 사용되는 용어 "SUCLG1"은 석시네이트-CoA 리가제 ADP-형성 알파 서브유닛, 또는 상응하는 단백질 제품을 인코딩하는 유전자를 지칭한다. 용어 "SUCLG1" 및 "석시네이트-CoA 리가제 ADP-형성 알파 서브유닛"은 야생형 형태의 SUCLG1 유전자 또는 단백질뿐만 아니라 야생형 SUCLG1 단백질 및 이를 인코딩하는 핵산의 변이체(특히, 예를 들어, 접합 변이체, 절단체, 콘카티머, 및 융합 작제물)를 포함한다. 이러한 변이체의 예에는 야생형 SUCLG1 단백질의 임의의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 11)과 적어도 70% 서열 동일성(예를 들어, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 99.9% 동일성, 또는 그 이상)을 갖는 단백질이 있으며, 단, SUCLG1 변이체는 야생형 SUCLG1의 기능을 보유한다. 추가적으로, 용어 "SUCLG1" 및 "석시네이트-CoA 리가제 ADP-형성 알파 서브유닛"은 융합 단백질, 또는 이를 인코딩하는 핵산을 지칭할 수 있으며, 여기서, SUCLG1은 다른 폴리펩타이드, 반감기 조절제, 또는 치료제에 작동 가능하게 연결된다. 용어 "SUCLG1"은 당업자에 의해 인식되는 바와 같이, 문맥에 따라, 단백질, 또는 이러한 단백질을 인코딩하는 유전자를 지칭할 수 있다.
예시적인 SUCLG1 아미노산 서열(서열번호 11):
Figure pct00016
예시적인 SUCLG1 핵산 서열(서열번호 12):
Figure pct00017
본 명세서에서 사용되는 용어 "MPV17"은 미토콘드리아 내막 단백질 MPV17 또는 상응하는 단백질 제품을 인코딩하는 유전자를 지칭한다. 용어 "MPV17" 및 "미토콘드리아 내막 단백질 MPV17"은 야생형 형태의 MPV17 유전자 또는 단백질뿐만 아니라 야생형 MPV17 단백질 및 이를 인코딩하는 핵산의 변이체(특히, 예를 들어, 접합 변이체, 절단체, 콘카티머, 및 융합 작제물)를 포함한다. 이러한 변이체의 예는 야생형 MPV17 단백질의 임의의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 13)과 적어도 70% 서열 동일성(예를 들어, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 99.9% 동일성, 또는 그 이상)을 갖는 단백질이 있으며, 단, MPV17 변이체는 야생형 MPV17의 기능을 보유한다. 추가적으로, 용어 "MPV17" 및 "미토콘드리아 내막 단백질 MPV17"은 융합 단백질, 또는 이를 인코딩하는 핵산을 지칭할 수 있으며, 여기서, MPV17은 다른 폴리펩타이드, 반감기 조절제, 또는 치료제에 작동 가능하게 연결된다. 용어 "MPV17"은 당업자에 의해 인식되는 바와 같이, 문맥에 따라, 단백질, 또는 이러한 단백질을 인코딩하는 유전자를 지칭할 수 있다.
예시적인 MPV17 아미노산 서열(서열번호 13):
Figure pct00018
예시적인 MPV17 핵산 서열(서열번호 14):
Figure pct00019
본 명세서에서 사용되는 용어 "POLG"는 DNA 폴리머라제 감마, 촉매 서브유닛, 또는 상응하는 단백질 제품을 인코딩하는 유전자를 지칭한다. 용어 "POLG" 및 "DNA 폴리머라제 감마, 촉매 서브유닛"은 야생형 형태의 POLG 유전자 또는 단백질뿐만 아니라 야생형 POLG 단백질 및 이를 인코딩하는 핵산의 변이체(특히, 예를 들어, 접합 변이체, 절단체, 콘카티머, 및 융합 작제물)를 포함한다. 이러한 변이체의 예에는 야생형 POLG 단백질의 임의의 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 15)과 적어도 70% 서열 동일성(예를 들어, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 99.9% 동일성, 또는 그 이상)을 갖는 단백질이 있으며, 단, POLG 변이체는 야생형 POLG의 기능을 보유한다. 추가적으로, 용어 "POLG" 및 "DNA 폴리머라제 감마, 촉매 서브유닛"은 융합 단백질, 또는 이를 인코딩하는 핵산을 지칭할 수 있으며, 여기서, POLG는 다른 폴리펩타이드, 반감기 조절제, 또는 치료제에 작동 가능하게 연결된다. 용어 "POLG"는 당업자에 의해 인식되는 바와 같이, 문맥에 따라, 단백질, 또는 이러한 단백질을 인코딩하는 유전자를 지칭할 수 있다.
예시적인 POLG 아미노산 서열(서열번호 15):
Figure pct00020
예시적인 POLG 핵산 서열(서열번호 16):
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
분자 생물학에서 표준 방법은 문헌[Sambrook, Fritsch 및 Maniatis Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1982 & 1989 2nd Edition, 2001 3rd Edition); Sambrook and Russell Molecular Cloning, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (2001); Wu Recombinant DNA, Vol. 217, Academic Press, San Diego, CA) (1993). Standard methods also appear in Ausbel, et al. Current Protocols in Molecular Biology, Vols.1-4, John Wiley and Sons, Inc. New York, NY (2001)]에 기술되어 있다.
미토콘드리아 DNA 고갈 증후군 치료 및 예방
본 개시내용의 조성물 및 방법은 다양한 병인을 치료, 예방 및/또는 치유하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 기술된 유전자 요법 방법은 미토콘드리아 기능이상과 관련된 질환을 치료, 예방 및/또는 치유하기 위해 기능 단백질을 인코딩하는 핵산을 함유하는 하나 이상의 조성물의 투여를 포함할 수 있다. 미토콘드리아 DNA 고갈 증후군, 예를 들어, TK2, dGK, TP, p53R2, SUCLA2, SUCLG1, MPV17 및/또는 POLG의 결핍증의 치료를 위해, 유전자 요법은 기능성 형태의 결핍 단백질을 인코딩하는 유전자를 함유하는 하나 이상의 조성물의 투여를 포함할 수 있다. 치료는 또한, 유전자 요법과 함께 약리학적 요법의 투여를 포함할 수 있다. 유전자 요법을 단독으로 또는 약리학적 요법과 함께 포함하는 이러한 치료 프로토콜은 불균형 뉴클레오사이드 풀을 특징으로 하는 다양한 장애, 예를 들어, 미토콘드리아 DNA 고갈 증후군에서 발견되는 것을 치료하기 위해 사용될 수 있다.
미토콘드리아 dNA(mtDNA) 고갈 증후군(MDS)은 감염된 조직에서 mtDNA 카피 수의 감소를 특징으로 하는 여러 중증 상염색체 질환을 포함한다. 대부분의 MDS 원인 핵 유전자는 mtDNA 복제 기계에 속하는 단백질을 인코딩하거나, 유전자 요법을 위한 이러한 질환 후보 모두를 만드는 데옥시리보뉴클레오사이드 트라이포스페이트(dNTP) 대사에 관여된다.
한 형태의 MDS는 티미딘 키나제 결핍 또는 TK2이다. 핵 유전자에 의해 인코딩되는 TK2, 즉, TK2는 데옥시티미딘 모노포스페이트(TMP) 및 데옥시시티딘 모노포스페이트(dCMP)를 발생시키기 위해 티미딘 및 시티딘 뉴클레오사이드를 포스포릴화시키는 미토콘드리아 기질 단백질이며, 이는 또한, 미토콘드리아 dNA 합성을 위해 요구되는 데옥시뉴클레오타이드 트라이포스페이트(dNTP)로 전환된다. 상염색체 열성 TK2 돌연변이는 영아 및 소아에서 미토콘드리아 dNA(mtDNA)의 심각한 고갈과 성인에서 mtDNA 다중 결실을 동반한 진행성 외부 안근 마비와 함께 치명적인 신경근 약화를 유발한다. 다수의 환자는 걸을 수 없고, 어떤 타입의 기계적 환기 및 공급 튜브를 필요로 한다. 중추신경계는 발작, 뇌병증, 인지 장애, 및 청력 상실을 포함하는 증상과 함께 이러한 장애에 다양하게 관여된다. 환자의 7% 미만은 42세 이상 생존한다.
이에 따라 진단된 환자의 임상적 및 분자 유전학 발견을 기초로 하여, 3가지 질환 증상이 확인되었다: i) 생후 첫 해에 쇠약이 시작하고 심각한 mtDNA 고갈 및 조기 사항을 동반하는 유아-발병(≤1세) 근병증; ii) 심각한 mtDNA 고갈을 동반한 아동기-발병(>1 내지 11세) 근병증; 및 iii) 종종 mtDNA 다중 결실, 감소된 mtDNA 카피 수, 또는 둘 다와 관련하여 청소년기 또는 성인기에 만성 진행성 외부 안구마비와 함께 발병시 경미한 쇠약 및 이동 상실, 호흡 부전, 또는 둘 다로의 느린 진행을 갖는 후기-발병 근병증(≥12세)[Garone, et al. 2018. 참조].
환자로부터 배양된 섬유아세포를 사용하여 TK2 결핍증에 대한 병인을 연구하고 치료법을 시험하기 위한 시도는 성공하지 못하였는데, 왜냐하면, 복제 세포가 mtDNA 고갈을 나타내지 못했기 때문이다. 상반되게, 동종 접합 Tk2 H126N 녹-인 돌연변이(Tk2 -/- ) 마우스 모델은 빠르게 진행하여 생후 14 내지 16일에 조기 사망에 이르게 하는 감소된 보행, 불안정한 보행, 거친 떨림, 성장 지연, 및 미토콘드리아 dNA(mtDNA)의 고갈을 갖는 생후 10일에 발병하는 것을 특징으로 하는, TK2 돌연변이에 의해 유발된 인간 유아 뇌근육병증과 상당히 유사한 표현형을 나타내며, 이는 인간 유아-발병 질환과 유사한 시기이다[Akman, et al. 2008; Dorado, et al. 2011]. 이러한 마우스 모델은 경구 dC/dT의 투여가 TK2 결핍증의 임상 증상의 발병을 지연시키고, 마우스의 수명을 2배 내지 3배까지 연장시킴을 나타내기 위해 사용되었다('092 출원). 이는 또한, 경구 dCMP/TMP의 투여가 임상 증상을 지연시키고 수명을 연장시킴을 나타내기 위해 사용되었다('207 출원).
MDS의 마우스 모델에서 TK2를 인코딩하는 AAV 벡터로부터의 예시적 소견
Tk2 결핍증의 마우스 모델을 이용하여 본 명세서에 나타낸 바와 같이, 질환은 돌연변이 유전자를 기능성 Tk2 단백질을 인코딩하는 정상 유전자로 대체함으로써 치유될 수 있다. 본 명세서에 기술된 예시적인 유전자 요법은 TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자를 함유하는 AAV(예를 들어, AAV2 또는 AAV9 바이러스)의 사용을 포함한다. 인간 TK2를 발현시키는 AAV9 바이러스의 투여(하기에 제공되는 실시예에서 "AAV9-hTK2"로서 지칭됨)가 TK2 돌연변이 마우스의 수명을 약 4개월의 최대 수명 및 평균 약 3개월까지 연장시킨다는 것이 발견되었다. 이는 경구 dC/dT 약리학적-치료된 TK2 돌연변이 마우스의 수명을 2배 이상으로 했고, 이는 평균 43일이었으며, 미처리 TK2 돌연변이 마우스보다 5배 더 길어졌으며, 이는 18일이었다[예를 들어, 실시예 2 참조]. 체중은 또한, dC/dT 단독 처리된 마우스에 비해 약 55% 및 야생형 마우스의 체중에 비해 약 80% 증가하였다[예를 들어, 실시예 3 참조].
로타로드(Rotarod) 시험에 의해 평가된 근력(체중으로 정규화됨) 및 운동 기능은 출생 후 60일에 수행되었고, 처리된 TK2 돌연변이 마우스와 미처리 야생형 마우스 간에 차이가 나타나지 않았다[예를 들어, 실시예 3 및 4 참조]. 야생형 마우스는 치료법과 관련된 부작용을 나타내지 않았고, 전체적으로 건강하였다.
치료된 돌연변이 마우스의 뇌에서 OXPHOS 효소 복합체의 활성 및 수준은 미처리 및 처리된 야생형 마우스에서 나타난 것과 유사하였다[예를 들어, 실시예 7 및 8 참조].
추가적으로, 치료된 돌연변이 마우스는 미처리 및 dC+dT 처리된 Tk2 -/- 마우스의 특징인 두부 떨림을 나타내지 않았는데, 이는 중추신경계에서 미토콘드리아 기능의 구제가 병리를 예방함을 확인하는 것이다.
미토콘드리아 dNA는 또한 돌연변이 마우스의 대부분의 조직에 AAV9 투여에 의해 구제되었다(예를 들어, 실시예 6 참조).
P1에서 4.2×1011 vc의 AAV9-hTK2로의 치료는 종래의 다른 연구에서 관찰된 바와 같이 신장 세포를 효율적으로 형질도입하지 않는다. 결과적으로, 치료된 돌연변이 마우스에서 TK2 활성은 야생형 마우스에 비해 매우 불량하였으며, 출생후 29일이 되자마자 mtDNA 고갈의 징후가 나타났다. 조직학 및 생화학적 분석은 손상된 신장 기능을 나타내었으며, 이는 Tk2 -/- 마우스의 조기 사망으로 이어지는 기저 병태일 수 있다[예를 들어, 실시예 8 참조].
그러나, TK2 돌연변이 마우스에 AAV9-hTK2 및 인간 Tk2 유전자를 발현시키는 AAV2 바이러스(AAV2-hTK2)의 조합물이 투여되었을 때, 이러한 것은 낮은 수준의 전체 바이러스 용량을 가짐에도 불구하고 유의미하게 더 길게 생존하였다. 두 작제물 모두로 처리된 돌연변이 마우스는 AAV9-hTK2만으로 처리된 마우스 정도로 성장하였고, AAV9-hTK2만으로 처리된 마우스보다 약간 더 높은 수준의 mtDAN를 가졌다. 이러한 것은 AAV9-hTK2만으로 처리된 돌연변이 마우스와 동일한 성장 및 힘 및 운동 조정을 가질 뿐만 아니라 이의 소변에서 단백질 감소 및 지수 BUN의 낮은 수준을 갖는다(예를 들어, 실시예 9 참조).
추가적으로, 돌연변이 마우스가 AAV9-hTK2 및 AAV2-hTK2 둘 다로 치료되고, 수 중 경구 dC+dT가 추가로 투여될 때, 이러한 것은 더 길게 생존하였고, 증가된 성장 및 간 및 신장에서의 MtDNA 수준을 가지고, 이의 소변에서 단백질을 감소시켰다(예를 들어, 실시예 10 참조).
추가적으로, TK2 돌연변이 마우스는 어릴 때, 출생 후 4일에 시작하여, '092 출원에 기술된 바와 같은 경구 dC/dT로, 또는 '207 출원에 기술된 바와 같은 경구 dCMP/TMP로 치료되고, 후속하여 1개월 내지 약 2개월의 범위(약 21일이 이상적임)의 이후 나이에 AAV9-hTK2 벡터가 단독으로 또는 AAV2-hTK2 벡터와 함께 투여된다. AAV2-hTK2 벡터는 AAV9-hTK2 벡터와 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다. 이러한 돌연변이 마우스는 AAV9-hTK2만이 투여된 돌연변이 마우스보다 더 길게 생존하였고, 증가된 성장 및 힘을 가지며, MtDNA 및 RCE는 신장을 포함하는 모든 조직에서 복원된다(예를 들어, 실시예 11 및 12 참조).
환자에서 미토콘드리아병을 치료, 예방 및/또는 치유하는 방법
기술된 유전자 요법의 투여로부터 유익한 환자는 TK2, dGK, TP, p53R2, SUCLA2, SUCLG1, MPV17 및/또는 POLG 중 하나 이상의 결핍으로 진단된 것을 포함한다. 이러한 환자에서, 결핍 단백질 중 하나 이상을 인코딩하는 핵산(예를 들어, 바이러스 벡터, 예를 들어, 이러한 핵산을 함유하는 AAV 벡터)을 함유하는 조성물이 환자에게 투여될 수 있다. 이러한 조성물은 단독으로 또는 약리학적 제제, 예를 들어, 데옥시뉴클레오사이드(예를 들어, dC 및 dT 또는 이들의 혼합물), 또는 데옥시리보뉴클레오사이드 모노포스페이트(예를 들어, dCMP 및 TMP 또는 이들의 혼합물)와 함께 투여될 수 있다. 예를 들어, 대상체는 미토콘드리아 DNA 고갈 증후군을 가질 수 있으며, 치료는 (i) 결핍 단백질 중 하나 이상을 인코딩하는 핵산을 함유하는 바이러스 벡터(예를 들어, AAV, 예를 들어, 적어도 근육 조직, 선택적으로, 적어도 근육 조직 및 CNS를 표적으로 하는 AAV, 예를 들어, AAV9)를 함유하는 조성물, 및 (ii) 데옥시뉴클레오사이드(예를 들어, dC 및 dT 또는 이들의 혼합물), 또는 데옥시리보뉴클레오사이드 모노포스페이트(예를 들어, dCMP 및 TMP 또는 이들의 혼합물)를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 일 실시형태에서, 미토콘드리아 DNA 고갈 증후군은 TK2 결핍증이며, 바이러스 벡터(예를 들어, AAV, 예를 들어, 적어도 근육 조직, 선택적으로, 적어도 근육 조직 및 CNS를 표적으로 하는 AAV, 예를 들어, AAV9)는 TK2를 인코딩하는 핵산을 포함한다. 특정 실시형태에서, 미토콘드리아 DNA 고갈 증후군은 TK2 결핍증이며, 바이러스 벡터는 TK2를 인코딩하는 핵산을 포함하는 AAV9이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 이를 필요로 하는 대상체에 치료학적 유효량의, TK2를 인코딩하는 핵산을 포함한 조성물, 예를 들어, 바이러스 벡터(예를 들어, AAV)를 투여함으로써 TK2 결핍증의 중증도 또는 정도를 치료, 예방, 치유, 및/또는 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 바이러스 벡터는 AAV, 예를 들어, AAV9 또는 AAV2이다. 일부 실시형태에서, TK2를 인코딩하는 핵산을 포함하는 조성물(예를 들어, 바이러스 벡터, 예를 들어, AAV)은 TK2 결핍증으로 진단되거나 의심되자마자 투여된다. 일부 실시형태에서, 투여되는 형질전환 유전자를 포함하는 AAV의 양은 약 4.2×1011 또는 4.2×1010개의 게놈 또는 벡터 또는 벡터 카피를 포함한다.
본 개시내용은 또한, 이를 필요로 하는 대상체에 치료학적 유효량의, TK2를 인코딩하는 핵산을 함유하는 제1 조성물(예를 들어, 바이러스 벡터, 예를 들어, AAV)을 투여하고 대상체에 치료학적 유효량의, TK2를 인코딩하는 핵산을 함유하는 제2 조성물(예를 들어, 바이러스 벡터, 예를 들어, AAV)을 투여하는 것을 더 포함함으로써 TK2 결핍증의 중증도 또는 정도를 치료, 예방, 치유 및/또는 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 제1 AAV 및 제2 AAV는 각각 독립적으로 TK2를 인코딩하는 AAV2 또는 AAV9 벡터이다. 일부 실시형태에서, 제1 AAV 벡터는 제2 AAV 벡터 이전에 투여된다. 일부 실시형태에서, 제1 조성물(예를 들어, AAV 벡터)은 TK2 결핍증으로 진단되거나 의심되자마자 투여되며, 제2 조성물(예를 들어, AAV 벡터)은 제1 조성물 이후의 시점에 투여된다. 일부 실시형태에서, 제2 조성물(예를 들어, AAV 벡터)은 제1 조성물(예를 들어, AAV 벡터) 후 수 일 내에 투여된다. 일부 실시형태에서, 제2 조성물(예를 들어, AAV 벡터)은 제1 조성물(예를 들어, AAV 벡터) 후 수 주 내에 투여된다. 일부 실시형태에서, 제2 조성물(예를 들어, AAV 벡터)은 제1 조성물(예를 들어, AAV 벡터) 후 수 개월 내에 투여된다. 일부 실시형태에서, 제1 조성물(예를 들어, AAV 벡터) 및 제2 조성물(예를 들어, AAV 벡터)은 임의의 제공된 시점에 동시에 투여된다. 일부 실시형태에서, 2개의 조성물(예를 들어, AAV 벡터)은 동일한 더 큰 조성물 내에 존재하며, 일부 실시형태에서, 두 개는 별도의 조성물이다.
일부 실시형태에서, 본 방법은 치료학적 유효량의 약리학적 제제, 예를 들어, dC 및/또는 dT를 추가로 투여하는 것을 더 포함한다. 약리학적 제제는 제1 조성물(예를 들어, 바이러스 벡터, 예를 들어, AAV 벡터)이 투여됨과 동시에 또는 제1 조성물이 투여된 후의 시점에 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 약리학적 제제, 예를 들어, dC 및/또는 dT는 제1 조성물의 수 일 내에 투여된다. 일부 실시형태에서, 약리학적 제제, 예를 들어, dC 및/또는 dT는 제1 조성물의 수 주 내에 투여되며, 일부 실시형태에서, 약리학적 제제, 예를 들어, dC 및/또는 dT는 제1 조성물 후 수 개월 내에 투여된다. 일부 실시형태에서, 제1 조성물, 제2 조성물, 및 약리학적 제제는 임의의 제공된 시점에 동시에 투여된다.
일부 실시형태에서, 제1 조성물(예를 들어, 바이러스 벡터, 예를 들어, AAV, 본 명세서에 기술된 형질전환 유전자, 예를 들어, TK2를 인코딩함)은 TK2 결핍증이 알려지거나 의심되자마자 투여된다. 약리학적 제제(예를 들어, dC 및/또는 dT)는 제1 조성물의 투여 후 약 7일 내지 약 35일에 시작하거나, 제1 조성물의 투여 후 약 14일 내지 약 28일에 시작하거나, 제1 조성물의 투여 후 약 14일 내지 약 21일에 시작하거나, 제1 조성물의 투여 후 21일에 시작하여 투여될 수 있다. 제2 조성물(예를 들어, 바이러스 벡터, 예를 들어, 본 명세서에 기술된 형질전환 유전자, 예를 들어, TK2를 인코딩하는 AAV)은 제1 조성물의 투여 후 약 14일 내지 약 45일에 시작하거나, 제1 조성물의 투여 후 약 21일 내지 약 35일에 시작하거나, 제1 조성물의 투여 후 약 21일 내지 약 30일에 시작하거나, 제1 조성물의 투여 후 약 29일에 시작하여 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 약리학적 제제(예를 들어, dC 및/또는 dT)의 투여는 대상체의 수명 전반에 걸쳐 계속된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 이를 필요로 하는 대상체에 치료학적 유효량의 약리학적 제제(예를 들어, dC 및/또는 dT)를 투여함으로써 TK2 결핍증의 중증도 또는 정도를 치료, 예방, 치유, 및/또는 감소시키는 방법을 제공하고, 대상체에 치료학적 유효량의, TK2를 인코딩하는 핵산을 함유한, 바이러스 벡터, 예를 들어, AAV 벡터(예를 들어, rAAV)를 함유하는 조성물을 투여하는 것을 더 포함한다. 예를 들어, 조성물은 TK2를 인코딩하는 핵산을 함유하는 AAV2 또는 AAV9를 함유할 수 있다. 특정 실시형태에서, AAV는 AAV9이다. 일부 실시형태에서, 약리학적 제제는 AAV 벡터 이전에 투여된다. 일부 실시형태에서, 약리학적 제제는 TK2 결핍증으로 진단되거나 의심되자마자 투여되며, AAV 벡터는 그 후의 시점에 투여된다. 일부 실시형태에서, AAV 벡터는 약리학적 제제의 투여 후 수 일 내에 투여되며, 일부 실시형태에서, AAV 벡터는 약리학적 제제의 투여 후 수 주 내에 투여된다. 일부 실시형태에서, AAV 벡터는 약리학적 제제 후 수 개월에 투여된다. 일부 실시형태에서, 약리학적 제제 및 AAV 벡터는 임의의 제공된 시점에 동시에 투여된다. 일부 실시형태에서, TK2를 인코딩하는 제2 AAV 벡터(예를 들어, AAV2 또는 AAV9)가 또한 투여된다. 제1 AAV 벡터 및 제2 AAV 벡터는 동일하거나 상이할 수 있다. 예를 들어, 제1 AAV 벡터는 AAV2 벡터(즉, AAV2 ITR 및 AAV2 캡시드 단백질을 함유함)일 수 있으며, 제2 AAV 벡터는 AAV9 벡터(예를 들어, AAV9 ITR 및 AAV9 캡시드 단백질을 함유함)일 수 있다. 일부 실시형태에서, 제1 벡터 및 제2 벡터 중 하나 또는 둘 다는 상이한 AAV 혈청형으로부터의 AAV2 ITR 및 캡시드 단백질을 함유하는 의사형 AAV 벡터이다(예를 들어, AAV2/1, AAV2/8, 또는 AAV2/9 벡터). 일부 실시형태에서, 제1 AAV 벡터는 제2 AAV 벡터의 투여와 동시에 이에 비해 후속 시점에 투여된다. 제1 벡터 및 제2 벡터는 동일한 조성물로 또는 상이한 조성물로 투여될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 이를 필요로 하는 대상체에 치료학적 유효량의, dCMP 및/또는 TMP를 함유하는 약리학적 제제를 투여하고, 추가적으로 대상체에 치료학적 유효량의, TK2를 인코딩하는 핵산을 함유하는 AAV 벡터(예를 들어, AAV2 또는 AAV9)를 함유하는 조성물을 투여함으로써 TK2 결핍증의 중증도 또는 정도를 치료, 예방 및/또는 감소시키는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, dCMP 및/또는 TMP는 AAV 벡터의 투여 전에 투여된다. 일부 실시형태에서, dCMP 및/또는 TMP는 TK2 결핍증이 진단되거나 갖는 것으로 의심되자마자 투여되며, AAV 벡터는 그 후 시점에 투여된다. 일부 실시형태에서, AAV 벡터는 dCMP 및/또는 TMP 투여일 내에 투여되며, 일부 실시형태에서, AAV 벡터는 dCMP 및/또는 TMP 이후 수 주 내에 투여된다. 일부 실시형태에서, AAV 벡터는 dCMP 및/또는 TMP 이후 수 개월에 투여된다. 일부 실시형태에서, dCMP 및/또는 TMP 및 AAV 벡터는 임의의 시점에 동시에 투여된다. 일부 실시형태에서, 추가적인 TK2를 인코딩하는 핵산을 함유하는 AAV 벡터(예를 들어, AAV2 또는 AAV9 벡터)는 또한 대상체에 투여된다. 제2 AAV 벡터는 제1 AAV 벡터의 투여와 동시에 이에 비해 시간적으로 나중에 투여될 수 있다. 제1 AAV 벡터 및 제2 AAV 벡터는 동일한 조성물의 일부로서 또는 상이한 조성물로서 투여될 수 있다.
상기 언급된 방법 모두는 TK2 결핍증을 갖는 대상체에서 기능이상성 TK2 단백질의 기능을 복원하기 위해 사용될 수 있다.
dGMP 및 dAMP의 결핍과 함께 DGUOK의 상염색체 열성 돌연변이로 인한, dGK의 병렬 결함은 통상적으로 유아기-발병 간뇌 질환으로서 나타나는 mtDNA 고갈을 유발한다[Mandel, et al. 2001]. 이러한 환자는 dGK를 인코딩하는 핵산 및 적어도 하나의 데옥시퓨린, dG 또는 dA, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 AAV 벡터의 투여로부터 유익할 수 있다. 유사하게, TP, p53R2, SUCLA2, SUCLG1, MPV17 및/또는 POLG의 결핍증을 갖는 환자는 예를 들어, 이러한 환자에게 치료학적 유효량의, 결핍 단백질을 인코딩하는 형질전환 유전자를 함유하는 조성물(예를 들어, 바이러스 벡터, 예를 들어, AAV 벡터)을 제공함으로써 본 개시내용의 조성물 및 방법을 이용하여 치료될 수 있다. 조성물은 환자에게 단독으로 약리학적 제제, 예를 들어, 본 명세서에 기술된 데옥시뉴클레오사이드 또는 데옥시뉴클레오사이드 모노포스페이트와 함께 제공될 수 있다.
예를 들어, 다른 형태의 MDS뿐만 아니라 불균형 뉴클레오타이드 풀과 관련된 다른 장애는 TK2, dGK, TP, p53R2, SUCLA2, SUCLG1, MPV17 및/또는 POLG 중 하나 이상을 인코딩하는 핵산을 함유하는 조성물(예를 들어, 바이러스 벡터, 예를 들어, AAV 벡터)의 투여에 의해 치료될 수 있다. 조성물은 단독으로 또는 약리학적 제제, 예를 들어, 데옥시뉴클레오사이드(예를 들어, dA, dG, dC, 또는 dT, 또는 이들의 혼합물) 또는 데옥시뉴클레오사이드 모노포스페이트(예를 들어, dAMP, dGMP, dCMP, 또는 TMP 또는 이들의 혼합물)와 함께 투여될 수 있다. 이러한 장애는 비제한적으로, 미토콘드리아 신경위장 뇌근육병증(MNGIE)을 유발시키는 RRM2B(리보뉴클레오타이드 리덕타제, RNR의 p53 유도성 작은 서브유닛인 p53R2를 인코딩함)와 관련된 결핍 및 TYMP(티미딘 포스포릴라제, TP를 인코딩함)의 돌연변이를 포함한다. 미토콘드리아 dNTP 풀을 방해하는 추가적인 핵 유전자는 SUCLA2, SUCLG1 및 MPV17을 포함하지만 이로 제한되지 않는다.
미토콘드리아병을 갖는 환자의 병태를 평가함
일반화된 근육긴장저하, 근위 근육 쇠약, 이전에 습득된 운동 기술의 상실, 수유 불량, 및 호흡 곤란을 특징으로 하는 진행성 근육 질환의 가장 통상적인 증상을 포함하는 TK2 결핍증에 대해 상기에서 논의된 표현형을 나타내는 환자는 질환을 최종적으로 진단하기 위해 시험될 수 있다.
임상 양상이 mtDNA 고갈 증후군에 대해 매우 의심스러운 경우에, mtDNA 고갈 증후군을 유발하는 것으로 알려진 유전자의 패널을 사용한 분자 유전 검사가 수행되어야 한다[Chanprasert, et al. 2012]. Tk2 유전자는 돌연변이가 TK2-관련 미토콘드리아 DNA 고갈 증후군을 유발시키는 것으로 알려진 유일한 유전자이다. 이러한 시험은 서열 변이체 및 결실/중복에 대한 TK2의 전체 코딩 및 엑손/인트론 접합 영역의 서열 분석을 포함할 수 있다. 서열 분석에서 화합물 이형 접합 또는 동종 접합 유해 돌연변이가 동정되는 경우에, TK2 결핍증의 진단이 확인되며, 대상체는 본 명세서에 기술된 치료법으로부터 혜택을 받을 것이다. 서열 분석이 2개의 화합물 이형 접합 또는 동종 접합 유해 돌연변이를 동정하지 못하는 경우에, TK2 결핍증 진단을 결정 및/또는 확인하기 위해 결실/중복 분석이 고려되어야 한다.
TK2 결핍증 진단을 결정 및/또는 확인하기 위한 추가 시험은 혈청 크레아틴 키나제(CK) 농도, 근전도, 골격근에 대한 조직병리학, 미토콘드리아 dNA(mtDNA) 함량(카피 수), 및 골격근에서 전자 수송 사슬(ETC) 활성을 시험하는 것을 포함할 수 있다. 하기 중 하나 이상이 이러한 시험에서 발견되는 경우에, TK2 결핍증이 결정 및/또는 확인된다. 건강한 대조군과 비교하여 상승된 CK 농도는 TK2 결핍증을 지시할 수 있다. 골격근 생검이 수행되며, 이후에, 골격근에서 mtDNA 함량 분석이 수행될 수 있다. 골격근 생검이 섬유 크기, 가변 근형질 액포, 가변 증가된 결합 조직, 및 불균일 적색 섬유뿐만 아니라 증가된 석시네이트 데하이드로게나제(SDH) 활성 및 낮은 사이토크롬 c 옥시다제(COX) 활성 또는 이의 부재의 현저한 변화를 나타내고, MtDNA 카피 수가 상당히 감소되는 경우에(통상적으로 연령- 및 조직-매칭된 건강한 대조군의 20% 미만), TK2 결핍증의 진단이 결정되고/되거나 확인될 수 있다[Chanprasert, et al. 2012].
추가적으로, TK2 결핍증은 상염색체 열성 방식으로 유전된다. 이에 따라, 감염된 환자의 형제 자매는 질환을 진단하기 위해 출생후 가능한 한 조기에 시험될 수 있다.
이러한 실시예 모두에서, 유전자 요법은 단독으로 또는 데옥시뉴클레오사이드 치료법 또는 데옥시리보뉴클레오사이드 모노포스페이트 치료법과 함께 가능한 한 TK2 결핍증의 진단 직후에 시작되어야 한다.
재조합 AAV 벡터
본 명세서에 기술된 "재조합 AAV (rAAV) 벡터"는 일반적으로, 형질전환 유전자(예를 들어, TK2, dGK, TP, p53R2, SUCLA2, SUCLG1, MPV17 및/또는 POLG를 인코딩함)를 포함한다. 형질전환 유전자는 5' 및 3' ITR의 측면에 있고, 표적 조직의 세포에서 형질전환 유전자 전사, 번역, 및/또는 발현을 허용하는 방식으로 하나 이상의 조절 요소에 작동 가능하게 연결될 수 있다. 이러한 조절 요소는 본 명세서에 기술된 다른 것들 중에서, 프로모터 또는 인핸서, 예를 들어, 닭 베타 액틴 프로모터 또는 사이토메갈로바이러스 인핸서를 포함할 수 있다. 재조합 AAV 게놈은 일반적으로, 캡시드 단백질에 의해 캡시드화된다(예를 들어, ITR이 유도되는 것과 동일한 AAV 혈청형으로부터 또는 ITR이 유도된 것과는 상이한 AAV 혈청형으로부터). AAV 벡터는 이후에, 선택된 표적 세포로 전달될 수 있다. 일부 실시형태에서, 형질전환 유전자는 벡터 서열과 이종인 핵산 서열이며, 이는 폴리펩타이드, 단백질, 기능성 RNA 분자(예를 들어, miRNA, miRNA 저해제) 또는 고려되는 다른 유전자 산물(예를 들어, TK2)을 인코딩한다. 본 개시내용의 조성물 및 방법과 함께 사용될 수 있는 예시적인 AAV 벡터의 성분은 하기에 기술된다.
임의의 AAV 혈청형 또는 AAV 혈청형의 조합물은 본 발명의 방법 및 조성물에서 사용될 수 있다. 본 발명 및 조성물이 미토콘드리아 장애의 치료 및 치유를 위한 것이기 때문에, 적어도 근육, 또는 적어도 근육 및 중추신경계를 표적으로 하는 AAV 혈청형이 일부 실시형태에서 사용될 수 있고, AAV1, AAV2, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8 및 AAV9를 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
일부 실시형태에서, 광범위한 향성(tropism)을 갖는 AAV9 혈청형이 사용된다.
AAV 벡터의 성분
본 명세서에 기술된 AAV 벡터는 시스-작용 5' 및 3' ITR을 함유할 수 있다[예를 들어, 문헌[Carter, in "Handbook of Parvoviruses", ed., P. Tijsser, CRC Press, pp. 155 168 (1990)] 참조]. ITR 서열의 길이는 통상적으로 약 145 bp이다. 바람직하게는, ITR을 인코딩하는 실질적으로 전체 서열이 분자에서 사용되며, 이러한 서열의 어느 정도의 부수적 변형이 허용된다[예를 들어, 문헌[Sambrook et al, (1989) and Fisher et al., (1996)] 참조]. 이러한 분자의 예는 형질전환 유전자를 함유하는 "시스-작용" 플라스미드이며, 여기서, 선택된 형질전환 유전자 서열 및 관련된 조절 요소는 5' 및 3' AAV ITR 서열의 측면에 있다. AAV ITR 서열은 현재 동정된 포유류 AAV 타입을 포함하는 임의의 공지된 AAV로부터 획득될 수 있다.
재조합 AAV 벡터에 대해 상기 동정된 요소 이외에, 벡터는 또한, 플라스미드 벡터와 트렌스펙션되거나 본 발명에 의해 생성된 바이러스로 감염된 세포에서 이의 전사, 번역 및/또는 발현을 허용하는 방식으로 형질전환 유전자에 작동 가능하게 연결된 통상적인 제어 요소를 포함할 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 "작동 가능하게 연결된" 서열은 고려되는 유전자와 인접한 발현 조절 서열, 및 고려되는 유전자를 조절하기 위해 트랜스에서 또는 소정 거리에서 작용하는 발현 조절 서열 둘 다를 포함한다. 발현 조절 서열은 적절한 전사 개시, 종결, 프로모터 및 인핸서 서열; 효율적인 RNA 처리 신호, 예를 들어, 분할 및 폴리아데닐화(폴리A) 신호; 세포질 mRNA를 안정화시키는 서열; 번역 효율성을 향상시키는 서열(즉, Kozak 공통 서열); 단백질 안정성을 향상시키는 서열; 요망되는 경우, 인코딩된 생성물의 분비를 향상시키는 서열을 포함한다. 천연, 구성적, 유도성 및/또는 조직-특이적인 프로모터를 포함하는, 다수의 발현 조절 서열은 당해 분야에 공지되어 있고, 사용될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 핵산 서열(예를 들어, 코딩 서열) 및 조절 서열은 이러한 것이 조절 서열의 영향 또는 조절 하에서 핵산 서열의 발현 또는 전사를 배치하는 방식으로 공유 결합될 때 작동 가능하게 연결된다고 한다. 핵산 서열이 기능 단백질로 번역되는 것이 바람직한 경우에, 2개의 DNA 서열은, 5' 조절 서열에서 프로모터의 유도가 코딩 서열의 전사를 초래하고 2개의 DNA 서열 사이의 연결의 특성이 (1) 프레임-이동 돌연변이의 도입을 초래하지 않거나 (2) 코딩 서열의 전사를 유도하는 프로모터 영역의 능력을 방해하지 않거나 (3) 단백질로 번역되는 상응하는 RNA 전사체의 능력을 방해하지 않는 경우에, 작동 가능하게 연결된다고 한다. 이에 따라, 프로모터 영역은, 프로모터 영역이 그러한 DNA 서열의 전사에 영향을 미칠 수 있는 경우에, 얻어진 전사체가 요망되는 단백질 또는 폴리펩타이드로 번역될 수 있도록 핵산 서열에 작동 가능하게 연결될 것이다. 유사하게, 둘 이상의 코딩 영역은 이러한 것이 공통 프로모터로부터의 전사가 프레임 내에서 번역된 둘 이상의 단백질의 발현을 초래하는 방식으로 연결될 때 작동 가능하게 연결된다. 일부 실시형태에서, 작동 가능하게 연결된 코딩 서열은 융합 단백질을 생성한다. 일부 실시형태에서, 작동 가능하게 연결된 코딩 서열은 기능성 RNA(예를 들어, shRNA, miRNA)를 생성한다.
단백질을 인코딩하는 핵산에 대하여, 폴리아데닐화 서열은 일반적으로, 형질전환 유전자 서열 이후에 및 3' AAV ITR 서열 이전에 삽입된다. 본 발명에서 유용한 rAAV 작제물은 또한, 바람직하게 프로모터/인핸서 서열과 형질전환 유전자 사이에 위치되는 인트론을 함유할 수 있다. 하나의 가능한 인트론 서열은 SV-40으로부터 유도되고, SV-40 T 인트론 서열로서 지칭된다.
사용될 수 있는 다른 벡터 요소는 내부 리보솜 진입 부위(IRES)이다. IRES 서열은 단일 유전자 전사체로부터 하나 초과의 폴리펩타이드를 생성하기 위해 사용된다. IRES 서열은 하나 초과의 폴리펩타이드 사슬을 함유하는 단백질을 생성하기 위해 사용될 것이다. 이러한 및 다른 공통 벡터 요소의 선택은 통상적이며, 여러 이러한 서열은 입수 가능하다[예를 들어, 문헌[Sambrook et al], 및 인용된 참고문헌 참조]. 이러한 모티프는 예를 들어, 다수의 유전자 또는 이의 부분이 동일한 AAV 벡터로부터 발현되는 경우에 유용할 수 있다.
숙주 세포에서 유전자 발현을 위해 필요한 조절 서열의 정확한 성질은 종, 조직 또는 세포 타입 간에 다를 수 있지만, 일반적으로, 필요한 경우에, 각각 전사 및 번역의 개시와 관련된 5' 비-전사 및 5' 비-번역 서열, 예를 들어, TATA 박스, 캡핑 서열, CAAT 서열, 인핸서 요소 등을 포함할 것이다. 특히, 이러한 5' 비-전사 조절 서열은 작동 가능하게 연결된 유전자의 전사 조절을 위한 프로모터 서열을 포함하는 프로모터 영역을 포함할 것이다. 조절 서열은 또한, 요망되는 경우 인핸서 서열 또는 업스트림 활성자 서열을 포함할 수 있다. 벡터는 선택적으로, 5' 리더 또는 신호 서열을 포함할 수 있다.
보존적 프로모터의 예는 비제한적으로, 닭 베타 액틴 프로모터, 레트로바이러스 라우스 육종 바이러스(RSV) LTR 프로모터(선택적으로, RSV 인핸서를 가짐), 사이토메갈로바이러스(CMV) 프로모터(선택적으로, CMV 인핸서를 가짐), SV40 프로모터, 디하이드로폴레이트 리덕타제 프로모터, 13-액틴 프로모터, 포스포글리세롤 키나제(PGK) 프로모터, 및 EFla 프로모터(Invitrogen)를 포함한다.
유도성 프로모터는 유전자 발현의 조절을 가능하게 하고, 외인성으로 공급되는 화합물, 환경 인자, 예를 들어, 온도, 또는 특정 생리학적 상태, 예를 들어, 급성기, 세포의 특정 분화 상태의 존재에 의해, 또는 복제 세포에서만 조절될 수 있다. 유도성 프로모터 및 유도성 시스템은 비제한적으로, Invitrogen, Clontech 및 Ariad를 포함하는 다양한 상업적 공급처로부터 입수 가능하다. 외인성으로 공급되는 프로모터에 의해 조절되는 유도성 프로모터의 예는 아연-유도성 양 메탈로티오닌(MT) 프로모터, 덱사메타손(Dex)-유도성 마우스 유방 종양 바이러스(MMTV) 프로모터, T7 폴리머라제 프로모터 시스템(WO 98/10088호); 엑디손 곤충 프로모터(No et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:3346-3351 (1996)), 테트라사이클린-억제 시스템(Gossen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:5547-5551 (1992)), 테트라사이클린-유도성 시스템(Gossen et al., Science 268:1766-1769 (1995), RU486-유도성 시스템(Wang et al., Nat. Biotech. 15:239-243 (1997) 및 Wang et al., Gene Ther. 4:432-441 (1997)) 및 라파마이신-유도성 시스템(Magari et al., J. Clin. Invest. 100:2865-2872 (1997))을 포함한다. 본 문맥에서 유용할 수 있는 또 다른 타입의 유도성 프로모터는 특정 생리학적 상태, 예를 들어, 온도, 급성기, 세포의 특정 분화 상태에 의해, 또는 복제 세포에서만 조절되는 것이다.
다른 실시형태에서, 형질전환 유전자를 위한 천연 프로모터, 또는 이의 단편이 사용될 것이다. 형질전환 유전자의 발현이 천연 발현을 모방하는 것이 요망될 때, 천연 프로모터가 바람직할 수 있다. 형질전환 유전자의 발현이 일시적으로 또는 발달적으로 또는 조직-특이적 방식으로, 또는 특정 전사 자극에 반응하여 조절되어야 할 때, 천연 프로모터가 사용될 수 있다. 추가 실시형태에서, 다른 천연 발현 조절 요소, 예를 들어, 인핸서 요소, 폴리아데닐화 부위 또는 Kozak 공통 서열이 또한, 천연 발현을 모방하기 위해 사용될 수 있다.
일부 실시형태에서, 조절 서열은 조직-특이적 유전자 발현 능력을 부여한다. 일부 경우에, 조직-특이적 조절 서열은 조직 특이적 방식으로 전사를 유도하는 조직-특이적 전사 인자에 결합한다.
일부 실시형태에서, miRNA 중 하나 이상에 대한 하나 이상의 결합 부위는 형질전환 유전자를 보유하는 대상체의 하나 이상의 조직에서 형질전환 유전자의 발현을 저해하기 위해, rAAV 벡터의 형질전환 유전자에 도입된다. mRNA에서 miRNA 표적 부위는 5' UTR, 3' UTR에 또는 코딩 영역에 있다. 통상적으로, 표적 부위는 mRNA의 3'UTR에 있다. 또한, 형질전환 유전자는 동일하거나 다수의 부위를 인식함으로써 다수의 miRNA가 mRNA를 조절할 수 있도록 설계될 수 있다. 다수의 miRNA 결합 부위의 존재는 다수의 RISC의 협력 작용을 야기시킬 수 있고, 고도로 효율적인 발현 저해를 제공할 수 있다. 표적 부위 서열은 총 5 내지 100개, 10 내지 60개, 또는 그 이상의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 표적 부위 서열은 표적 유전자 결합 부위의 서열의 적어도 5개의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다.
예를 들어, 간에서 형질전환 유전자의 발현을 저해하는 3'UTR 부위는 형질전환 유전자 내에 도입될 수 있다. 이러한 것은, 투여되는 대부분의 바이러스(대략 60 내지 90%)가 결국 간에서 발견되기 때문에 간에 대해 독성을 나타내는 치료 단백질을 인코딩하는 형질전환 유전자에 유익할 것이다. 이에 따라, 간에서 치료 유전자 발현을 억제하는 것은 간 세포의 부담을 완화시킨다.
일부 실시형태에서, AAV 벡터는 자기-상보적 AAV이도록 변형될 것이다. 자기-상보적 AAV는 형질전환 유전자의 상보적 서열(즉, 형질전환 유전자의 이중 카피)을 운반한다. 자기 상보성은 세포에 진입한 후에 유전자를 더욱 안정하게 만든다.
형질전환 유전자 코딩 서열
본 명세서에 기술된 형질전환 유전자의 핵산 서열은 형질전환 유전자를 발현시키는 특정 조성물(예를 들어, 바이러스 벡터)의 지식을 기초로 하여 설계될 수 있다. 예를 들어, 형질전환 유전자 서열의 하나의 타입은 리포터 서열을 포함하는데, 이는 발현 시에 검출 가능한 신호를 생성한다. 다른 예에서, 형질전환 유전자는 치료 단백질 또는 치료 기능성 RNA를 인코딩한다. 다른 예에서, 형질전환 유전자는 예를 들어, 형질전환 유전자를 보유하는 체세포 형질전환 동물 모델을 생성하기 위해, 예를 들어, 형질전환 유전자 산물의 기능을 연구하기 위해 연구 목적으로 사용하도록 의도된 단백질 또는 기능성 RNA를 인코딩한다. 다른 예에서, 형질전환 유전자는 질환의 동물 모델을 생성하기 위해 사용되도록 의도된 단백질 또는 기능성 RNA를 인코딩한다. 적절한 형질전환 유전자 코딩 서열은 당업자에게 명백할 것이다.
본 발명의 실시형태에서, 형질전환 유전자는 TK2, dGK, p53R2, TP, SUCLA2, SUCLG1, POLG1, 및 미토콘드리아 막 단백질 MPV17을 포함하지만, 이로 제한되지 않는 기능 단백질을 인코딩할 것이다.
인간 Tk2 유전자(유전자 번호 7084)는 기능성 TK2 단백질을 인코딩하는 형질전환 유전자를 획득하기 위해 사용될 수 있다. 인간 DGUOK(유전자 번호 1716)는 기능성 dGK 단백질을 인코딩하는 형질전환 유전자를 획득하기 위해 사용될 수 있다. 인간 TYMP 유전자(유전자 번호 1890)는 기능성 TP 단백질을 인코딩하는 형질전환 유전자를 획득하기 위해 사용될 수 있다. 인간 RRM2B 유전자(유전자 번호 50584)는 기능성 p53R2 단백질을 인코딩하는 형질전환 유전자를 획득하기 위해 사용될 수 있다. 인간 SUCLA2 유전자(유전자 번호 8803)는 기능성 SUCLA2 단백질을 인코딩하는 형질전환 유전자를 획득하기 위해 사용될 수 있다. 인간 SUCLG1 유전자(유전자 번호 8802)는 기능성 SUCLG1 단백질을 인코딩하는 형질전환 유전자를 획득하기 위해 사용될 수 있다. 인간 POLG 유전자(유전자 번호 5428)는 기능성 POLG1 단백질을 인코딩하는 형질전환 유전자를 획득하기 위해 사용될 수 있다. 인간 MPV17 유전자(유전자 번호 4538)는 기능성 미토콘드리아 막 단백질 MPV17을 인코딩하는 형질전환 유전자를 획득하기 위해 사용될 수 있다.
형질전환 유전자 코딩 서열의 코돈 최적화
형질전환 유전자 코딩 서열의 코돈 최적화는 유전자 요법의 효율성을 증가시킬 수 있다. 이에 따라, 일부 실시형태에서, 치료 단백질을 인코딩하는 형질전환 유전자의 코딩 서열과 적어도 70% 동일한 핵산(예를 들어, 핵산 서열과 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일한 핵산 서열)이 사용된다.
코돈 최적화 툴은 당해 분야에 공지되어 있다.
예시적인 코돈 최적화된 핵산은 하기와 같다.
예시적인 코돈 최적화된 TK2 핵산(서열번호 17):
Figure pct00024
예시적인 코돈 최적화된 dGK 핵산(서열번호 18):
Figure pct00025
Figure pct00026
예시적인 코돈 최적화된 TP 핵산(서열번호 19):
Figure pct00027
예시적인 코돈 최적화된 p53R2 핵산(서열번호 20):
Figure pct00028
Figure pct00029
예시적인 코돈 최적화된 SUCLA2 핵산(서열번호 21):
Figure pct00030
예시적인 코돈 최적화된 SUCLG1 핵산(서열번호 22):
Figure pct00031
예시적인 코돈 최적화된 MPV17 핵산(서열번호 23):
Figure pct00032
예시적인 코돈 최적화된 POLG 핵산(서열번호 24):
Figure pct00033
Figure pct00034
Figure pct00035
예시적인 재조합 AAV 조성물
본 개시내용은 기능 단백질을 인코딩하는 핵산 서열을 함유하는 재조합 AAV를 함유하는 조성물을 제공한다. 이러한 단백질은 비제한적으로, TK2, dGK, p53R2, TP, SUCLA2, SUCLG1, POLG1, 및 미토콘드리아 막 단백질 MPV17을 포함한다. 일부 실시형태에서, rAAV는 닭 베타-액틴 프로모터를 포함한다. 일부 실시형태에서, rAAV는 CMV 인핸서를 더 포함한다. 일부 실시형태에서, rAAV는 ITR을 더 포함한다. 일부 실시형태에서, rAAV는 3' UTR을 더 포함한다. 일부 실시형태에서, rAAV는 AAV 2 또는 AAV9이다. 일부 실시형태에서, 형질전환 유전자는 기능성 TK2 효소를 인코딩한다.
인간 TK2 형질전환 유전자, 닭 베타-액틴 프로모터, CMV IE 인핸서, BGH 3'UTR, 폴리 A 신호, 및 5' 및 3'ITR을 포함하는 예시적인 rAAV-hTK2 벡터는 도 1에 도시되어 있다.
rAAV9-hTK2 및 rAAV2-hTK2 벡터 둘 다가 실시예에서 사용되었다. 이러한 작제물은 동일한 ITR을 갖지만, 상이한 캡시드 단백질 서열을 갖는다.
일부 실시형태에서, 조성물은 약제학적 담체를 더 포함한다.
일부 실시형태에서, 조성물은 TK2, dGK, p53R2, TP, SUCLA2, SUCLG1, POLG1, 및 미토콘드리아 막 단백질 MPV17을 포함하지만, 이로 제한되지 않는 기능 단백질을 인코딩하는 형질전환 유전자를 포함하는 하나 초과의 rAAV를 포함한다.
투여 경로 및 투여량
본 발명은 불균형 뉴클레오타이드 풀을 특징으로 하는 질환 또는 장애를 치료, 예방 및/또는 치유하고/하거나, 불균형 뉴클레오타이드 풀을 특징으로 하는 질환 또는 장애에서 기능이상인 단백질의 기능을 복원하고/하거나, 불균형 뉴클레오타이드 풀과 관련된 증상 중 적어도 하나를 대상체에서 완화시키는 방법에서 사용하기 위한 rAAV 벡터를 제공한다. 일부 실시형태에서, 이러한 방법은 불균형 뉴클레오타이드 풀을 특징으로 하는 질환 또는 장애를 갖거나 가질 것으로 의심되는 대상체에서 불균형 뉴클레오타이드 풀을 특징으로 하는 질환 또는 장애를 치료, 예방 및/또는 치유하기에 충분한 기간 양으로 및 기간 동안 대상체 약제학적으로 허용되는 담체 중에, 하나 이상의 치료 펩타이드, 폴리펩타이드, shRNA, 마이크로RNA, 또는 안티센스 뉴클레오타이드를 인코딩하는 rAAV 벡터의 투여를 포함한다.
본 발명의 방법에 의해 치료, 예방 및/또는 치유될 수 있는 불균형 뉴클레오타이드 풀을 특징으로 하는 질환 또는 장애는 하기 유전자의 돌연변이를 특징으로 하는 것을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다: TK2; DGUOK; TYMP; RRM2B; SUCLA2; SUCLG1; 및 MPV17. 이러한 유전자에 의해 인코딩된 단백질은 본 발명의 방법에 의해 복원될 수 있고, TK2, dGK, p53R2, TP, SUCLA2, SUCLG1, POLG1, 및 미토콘드리아 막 단백질 MPV17을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
rAAV는 대상체에 당해 분야에 공지된 임의의 적절한 방법에 따른 조성물로 전달될 수 있다. rAAV, 바람직하게, 생리학적으로 혼화 가능한 담체(예를 들어, 조성물) 중에 현탁된 rAAV가 대상체에 투여될 수 있다. 특정 실시형태에서, 조성물은 rAAV를 단독으로 또는 하나 이상의 다른 바이러스(예를 들어, 하나 이상의 상이한 형질전환 유전자를 갖는 인코딩하는 제2 rAAV)와 함께 포함할 수 있다. 일 실시형태에서, 조성물은 TK2, dGK, p53R2, TP, SUCLA2, SUCLG1, POLG1, 및 미토콘드리아 막 단백질 MPV17을 포함하지만, 이로 제한되지 않는 기능 단백질을 인코딩하는 형질전환 유전자를 포함하는 핵산 서열을 포함하는 rAAV9 벡터를 포함할 수 있다.
추가 실시형태에서, 조성물은 TK2, dGK, p53R2, TP, SUCLA2, SUCLG1, POLG1, 및 미토콘드리아 막 단백질 MPV17을 포함하지만, 이로 제한되지 않는 기능 단백질을 인코딩하는 형질전환 유전자를 포함하는 핵산 서열을 포함하는 rAAV2 벡터를 포함할 수 있다.
또 다른 실시형태에서, 조성물은 기능성 TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자를 포함하는 핵산 서열을 포함하는 rAAV9 벡터를 포함할 수 있다. 추가 실시형태에서, 조성물은 기능성 TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자를 포함하는 핵산 서열을 포함하는 rAAV2 벡터를 포함할 수 있다. 추가 실시형태에서, 조성물은 TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자를 포함하는 핵산 서열을 포함하는 rAAV9 벡터 및 TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자를 포함하는 핵산 서열을 포함하는 rAAV2 벡터를 포함할 수 있다.
적합한 담체는 rAAV와 관련된 적응증의 관점에서 당업자에 의해 용이하게 선택될 수 있다. 예를 들어, 하나의 적합한 담체는 염수를 포함하며, 이는 다양한 완충 용액(예를 들어, 포스페이트 완충 염수)으로 제형화될 수 있다. 다른 예시적인 담체는 멸균 염수, 락토스, 수크로스, 칼슘 포스페이트, 젤라틴, 덱스트란, 아가, 펙틴, 땅콩유, 참깨유, 및 물을 포함한다. 담체의 선택으로 본 발명이 제한되지 않는다.
선택적으로, 본 발명의 조성물은 rAAV 및 담체(들) 이외에, 다른 통상적인 약제학적 성분, 예를 들어, 보존제, 또는 화학적 안정화제를 함유할 수 있다. 적합한 예시적인 보존제는 클로로부탄올, 칼륨 소르베이트, 소르브산, 이산화황, 프로필 갈레이트, 파라벤, 에틸 바닐린, 글리세린, 페놀, 및 파라클로로페놀을 포함한다. 적합한 화학적 안정화제는 젤라틴 및 알부민을 포함한다.
일부 실시형태에서, rAAV 조성물은 특히 높은 rAAV 농도로 존재하는 경우에(예를 들어, 약 1013 GC/㎖ 이상) 조성물에서 AAV 입자의 응집을 감소시키도록 제형화된다. rAAV의 응집을 감소시키는 방법은 당해 분야에 널리 공지되어 있고, 예를 들어, 계면활성제의 첨가, pH 조절, 및 염 농도 조절을 포함한다[예를 들어, 문헌[Wright, et al., Molecular Therapy 12:171-178 (2005)] 참조].
약제학적으로 허용되는 부형제 및 담체 용액의 제형은 다양한 치료 요법에서 본 명세서에 기술된 특정 조성물을 사용하기 위한 적합한 투여량 및 치료 요법의 개발과 같이, 당업자에게 널리 알려져 있다. 통상적으로, 이러한 제형은 적어도 약 0.1% 이상의 활성 성분을 함유할 수 있으며, 활성 성분(들)의 백분율은 물론 변경될 수 있고, 통상적으로 전체 제형의 중량 또는 부피의 약 1 또는 2% 및 약 70% 또는 80% 이상일 수 있다. 자연적으로, 각 치료학적으로 유용한 조성물에서 활성 성분의 양은 적합한 투여량이 화합물의 임의의 제공된 단위 용량에서 얻어지는 방식으로 준비될 수 있다. 용해도, 생체이용률, 생물학적 반감기, 투여 경로, 제품 저장 수명뿐만 아니라 다른 약리학적 고려사항과 같은 인자는 이러한 약제학적 제형을 제조하는 당업자에 의해 고려될 것이며, 이와 같이, 다양한 투여량 및 치료 요법이 요망될 수 있다.
주사 가능한 용도에 적합한 약제학적 형태는 멸균 수용액 또는 분산액 및 멸균 주사 가능한 용액 또는 분산액의 즉흥적 제조를 위한 멸균 수용액 또는 분산액 및 멸균 분말을 포함한다. 분산액은 또한, 글리세롤, 액체 폴리에틸렌 글리콜, 및 이들의 혼합물에서 및 오일에서 제조될 수 있다. 일반적인 저장 및 사용 조건 하에서, 이러한 제조물은 미생물의 성장을 방지하기 위해 보존제를 함유한다. 여러 경우에, 이러한 형태는 멸균성이고, 용이한 주사 가능성이 존재하는 정도까지 유체이어야 한다. 이는 제조 및 저장 조건 하에서 안정적이어야 하고, 미생물, 예를 들어, 박테리아 및 진균의 오염 작용에 대해 보존되어야 한다. 담체는 예를 들어, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 이들의 적합한 혼합물, 및/또는 식물성 오일을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 적절한 유동성은 예를 들어, 레시틴의 코팅 사용에 의해, 분산액의 경우에 요망되는 입자 크기의 유지에 의해, 및 계면활성제를 사용함으로써 유지될 수 있다. 미생물의 작용의 방지는 다양한 항균제 및 항진균제, 예를 들어, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르브산, 티메로살 등에 의해 야기될 수 있다. 여러 경우에 등장제, 예를 들어, 당 또는 나트륨 클로라이드를 포함하는 것이 바람직할 것이다. 주사제 조성물의 장기간 흡수는 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들어, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴의 조성물에서 사용함으로써 달성될 수 있다.
주사용 수용액의 투여를 위해, 예를 들어, 용액은 요망되는 경우 적합하게 완충될 수 있으며, 액체 희석액은 먼저 충분한 염수 또는 글루코스로 등장성을 제공하였다. 이러한 특정 수용액은 특히 정맥내, 근육내, 피하 및 복강내 투여를 위해 적합하다. 이와 관련하여, 사용될 수 있는 멸균 수성 매질은 당업자에게 공지될 것이다. 예를 들어, 하나의 투여량은 1㎖의 등장성 NaCl 용액에 용해되고 1000㎖의 피하주입 유체에 첨가되거나 제안된 주입 부위에 주사될 수 있다. 투여량의 약간의 변화는 필연적으로 숙주의 상태에 따라 일어난다. 투여를 담당하는 사람은 임의의 사건에서, 개별 숙주에 대한 적절한 용량을 결정할 것이다.
멸균 주사 용액은 적절한 용매 중의 요망되는 양의 활성 rAAV를 본 명세서에 나열된 다양한 다른 구성성분과 함께 도입하고 여과된 멸균화를 수행함으로써 제조된다. 일반적으로, 분산액은 염기성 분산 매질 및 상기에 나열된 것으로부터의 요망되는 다른 구성성분을 함유하는 멸균 비히클 내에 다양한 멸균 활성 성분을 도입함으로써 제조된다. 멸균 주사 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우에, 바람직한 제조 방법은 이전의 이의 멸균-여과된 용액으로부터 활성 성분 플러스 임의의 추가적인 요망되는 구성성분의 분말을 수득하는 진공-건조 및 냉동-건조 기술이다.
상기에 기술된 전달 방법 이외에, 하기 기술이 또한 숙주로 rAAV 조성물을 전달하는 대안적인 방법으로서 고려된다. 초음파치료(즉, 초음파)가 미국특허 제5,656,016호에서 순환계 내로 및 순환계를 통한 약물 침투의 속도 및 효능을 향상시키기 위한 디바이스로서 사용되고 기술되었다. 고려되는 다른 약물 전달 대안에는 골내 주사(미국특허 제5,779,708호), 마이크로칩 디바이스(미국특허 제5,797,898호), 안과용 제형, 경피 매트릭스(미국특허 제5,770,219호 및 제5,783,208호) 및 피드백-제어 전달(미국특허 제5,697,899호)이 있다.
rAAVS는 요망되는 조직의 세포를 형질 전환시키기 위해 및 과도한 부작용 없이 충분한 수준의 유전자 전달 및 발현을 제공하기 위해 충분한 양으로 투여된다. 통상적인 및 약제학적으로 허용되는 투여 경로는 선택된 조직에 대한 직접 전달(예를 들어, 뇌내 투여, 경막내 투여), 정맥내, 경구, 흡입(비강내 및 기관내 전달을 포함함), 안구내, 정맥내, 근육내, 피하, 피부내, 및 다른 비경구 투여 경로를 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 투여 경로는 요망되는 경우에 조합될 수 있다. 투여 요법은 치료 조성물의 혈청 또는 조직 회전율, 증상의 수준, 및 생물학적 기질 중 표적 세포의 접근성을 포함하는, 여러 인자에 따른다. 바람직하게는, 투여 요법은 요망되지 않는 부작용을 최소화함과 동시에, 표적 질환 상태의 개선을 달성하기 위해 충분한 치료 조성물을 전달한다. 이에 따라, 전달되는 생물학적 제제의 양은 부분적으로, 특정 치료 조성물 및 치료되는 병태의 중증도에 따른다.
본 발명은 rAAV 비리온을 포함하는 안정한 약제 조성물을 제공한다. 조성물은 심지어 냉동/해동 사이클로 처리될 때에도 및 유리를 포함하는 다양한 물질로 제조된 용기에 저장될 때에도 안정하고 활성을 유지한다.
적절한 용량은 다른 인자들 중에서, 치료되는 대상체(예를 들어, 인간 또는 비인간 영장류 또는 다른 포유도울), 치료되는 대상체의 연령 및 일반적인 상태, 치료되는 병태의 중증도, rAAV 비리온의 투여 모드에 따를 것이다. 적절한 유효량은 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
요망되는 효과 또는 "치료 효과"를 달성하기 위해 요구되는 rAAV 비리온의 용량, 예를 들어, 벡터 게놈에서/체중 1 킬로그램당 용량 단위(vg/kg)는 rAAV 투여 경로; 치료 효과를 달성하기 위해 요구되는 유전자 또는 RNA 발현 수준; 치료되는 특정 질환 또는 장애; 및 유전자 RNA 산물의 안정성을 포함하지만, 이로 제한되지 않는 여러 인자를 기초로 하여 달라질 것이다. 당업자는 상기 언급된 인자뿐만 아니라 당해 분야에 널리 공지된 다른 인자를 기초로 하여 특정 질환 또는 장애를 갖는 대상체를 치료하기 위한 rAAV 비리온 용량 범위를 용이하게 결정할 수 있다. rAAV의 유효량은 대상체당 약 109 내지 1016개 게놈 카피를 함유하는 약 10㎕ 내지 약 100㎖ 범위의 용액이다. 다른 부피의 용액이 사용될 수 있다. 사용되는 부피는 통상적으로, 특히, 대상체의 크기, rAAV의 용량, 및 투여 경로에 따를 것이다. 예를 들어, 경막내 또는 뇌내 투여를 위해, 1㎕ 내지 10㎕ 또는 10㎕ 내지 100㎕ 범위의 용량이 사용될 수 있다. 정맥내 투여를 위해, 10㎕ 내지 100㎕, 100㎕ 내지 1㎖, 1㎖ 내지 10㎖, 또는 그 이상의 범위의 용량이 사용될 수 있다. 일부 경우에, 대상체당 약 1010 내지 1012개 rAAV 게놈 카피의 투여량이 적절하다. 특정 실시형태에서, 대상체당 1012개 rAAV 게놈 카피는 요망되는 조직을 표적화하는 데 효과적이다. 일부 실시형태에서, rAAV는 대상체당 1010, 1011, 1012, 1013, 1014, 또는 1015개 게놈 카피의 용량으로 투여된다. 일부 실시형태에서, rAAV는 kg당 1010, 1011, 1012, 1013, 또는 1014개 게놈 카피의 용량으로 투여된다.
이에 따라, "치료학적 유효량"은 임상 시험을 통해 결정될 수 있는 비교적 넓은 범위에 속할 것이다. 예를 들어, 생체내 주사, 즉, 대상체에 직접 주사를 위해, 치료학적 유효 용량은 약 105 내지 1016개 rAAV 비리온, 더욱 바람직하게는, 108 내지 1014개 rAAV 비리온 수준일 것이다. 시험관내 형질도입을 위해, 세포로 전달되는 rAAV 비리온의 유효량은 105 내지 1013, 바람직하게는, 108 내지 1013개 rAAV 비리온 수준일 것이다. 조성물이 대상체로 역으로 전달되는 형질도입된 세포를 포함하는 경우에, 약제 조성물에서 형질도입된 세포의 양은 약 104 내지 1010개 세포, 더욱 바람직하게는, 105 내지 108개 세포일 것이다. 물론, 용량은 형질도입의 효율성, 프로모터 강도, 메시지의 안정성 및 단백질 인코딩된 치료법 등에 따른다. 유효 투여량은 용량 반응 곡선을 설정하는 일상적인 시험을 통해 당업자에 의해 용이하게 설정될 수 있다.
투약 치료는 궁극적으로 상기 명시된 양을 전달하기 위한 단일 용량 스케쥴 또는 다중 용량 스케쥴일 수 있다. 또한, 대상체는 적절한 경우 여러 용량으로 투여될 수 있다. 이에 따라, 대상체에는 단일 용량, 또는 예를 들어, 총괄적으로 105 내지 1016개 rAAV 비리온의 전달을 야기시키는 2, 4, 5, 6, 또는 그 이상의 용량으로 예를 들어, 105 내지 1016개 rAAV 비리온이 제공될 수 있다. 당업자는 투여하기에 적절한 수의 용량을 용이하게 결정할 수 있다.
이에 따라, 약제 조성물은 치료학적 유효량의 고려되는 단백질을 생산하기 위한 충분한 유전 물질, 즉, 고려되는 질환 상태의 증상을 감소시키거나 완화시키기에 충분한 양 또는 요망되는 이익을 제공하기에 충분한 양의 유전 물질을 포함할 것이다. 이에 따라, rAAV 비리온은 대상 조성물에, 1회 이상의 용량으로 제공될 때 치료 효과를 제공하기에 충분한 양으로 존재할 것이다. rAAV 비리온은 동결건조된 제조물로서 제공되고 즉시 또는 향후 사용을 위해 비리온-안정화 조성물에 희석될 수 있다. 대안적으로, rAAV 비리온은 생산 직후에 제공되고, 향후 사용을 위해 저장될 수 있다.
약제 조성물은 또한, 약제학적으로 허용되는 부형제 또는 담체를 함유할 것이다. 이러한 부형제는 개개 수용 조성물에 유해한 항체의 생산을 유도하지 않고 과도한 독성 없이 투여될 수 있는 임의의 약제학적 제제를 포함한다. 약제학적으로 허용되는 부형제는 액체, 예를 들어, 물, 염수, 글리세롤 및 에탄올을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 그 안에, 약제학적으로 허용되는 염, 예를 들어, 미네랄 산염, 예를 들어, 하이드로클로라이드, 하이드로브로마이드, 포스페이트, 설페이트 등; 및 유기산의 염, 예를 들어, 아세테이트, 프로피오네이트, 말로네이트, 벤조에이트 등이 포함되지만, 이로 제한되지 않는다. 추가적으로, 보조 물질, 예를 들어, 습윤화 또는 유화제, pH 완충 물젤 등이 이러한 비히클에 존재할 수 있다. 약제학적으로 허용되는 부형제의 철저한 논의는 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences and U.S. Pharmacopeia: National Formulary, Mack Publishing Company, Easton, PA (1984)]에서 입수 가능하다.
치료제 및 진단제의 제형은 예를 들어, 동결건조된 분말, 슬러리, 수용액 또는 현탁액 형태로 허용되는 담체, 부형제, 또는 안정화제와 혼합시킴으로써 제조될 수 있다.
단독으로 또는 다른 제제와 함께 투여되는, 치료 조성물의 독성 및 치료 효능은 예를 들어, LD50(집단의 50%에 대해 치명적인 용량) 및 ED50(집단의 50%에서 치료학적으로 효과적인 용량)을 결정하기 위해, 세포 배양물 또는 실험 동물에서 표준 약리학적 절차에 의해 결정될 수 있다. 독성과 치료 효과 사이의 용량 비율은 치료 지수(LD50/ED50)이다. 특정 양태에서, 높은 치료 지수를 나타내는 치료 조성물이 바람직하다. 이러한 세포 배양 검정 및 동물 연구로부터 얻어진 데이터는 인간에서 사용하기 위한 소정 범위의 투여량을 제형화하는 데 사용될 수 있다. 이러한 화합물의 투여량은 바람직하게는 독성이 거의 없거나 전혀 없는 ED50을 포함하는 소정 범위의 순환 농도 내에 있다. 투여량은 사용되는 투약 형태 및 투여 경로에 따라 이러한 범위 내에서 달라질 수 있다.
적절한 용량의 결정은 임상의에 의해, 예를 들어, 치료에 영향을 미치기 위해 당해 분야에 공지되거나 의심되는 파라미터 또는 인자를 이용하여 이루어진다. 일반적으로, 용량은 최적 용량보다 다소 적은 양으로 시작하며, 이후에, 이는 임의의 부작용에 비해 요망되는 또는 최적의 효과가 달성될 때까지 약간의 증감으로 증가된다. 중요한 진단 수단은 예를 들어, 염증의 증상 또는 생성된 염증성 시토카인의 수준의 것을 포함한다. 일반적으로, 사용되는 생물학적 제제가 치료를 위해 표적화된 동물과 동일한 종으로부터 유도되고, 이에 의해 시약에 대한 임의의 면역 반응을 최소화하는 것이 바람직하다.
AAV의 바람직한 투여 경로는 정맥내이다.
바람직한 용량은 약 1×1010 내지 약 8×1011, 약 2×1010 내지 약 6×1011, 약 4×1010 내지 약 4×1011개 게놈 또는 바이러스 커피(vc) 총 투여의 범위이다. 바람직한 용량은 약 4×1011개 게놈 또는 바이러스 카피(vc) rAAV의 총 투여이다.
하나 초과의 rAAV가 사용되는 경우에, 벡터의 바람직한 총 용량은 약 1×1010 내지 약 6×1011, 약 2×1010 내지 약 5×1011, 약 1×1010 내지 약 4×1011개 게놈 또는 바이러스 카피(cv) 총 투여의 범위이다. 전체 벡터의 바람직한 용량은 약 3×1011이다. AAV는 동일한 양, 예를 들어, 50/50의 비율, 또는 약 5/95, 10/90, 15/85, 20/80, 25/75, 30/70, 35/65, 40/60, 45/55, 55/45, 60/40, 65/35, 70/30, 75/25, 80/20, 85/15, 90/10 및 95/5의 비율로 투여될 수 있다.
용량은 대상체에서 효과를 최적화하기 위해 조정될 수 있다. 추가적으로, 대상체는 투여량을 증가시키기 전에 이의 병태의 개선에 대해 모니터링될 수 있다. rAAV의 치료학적 투여에 대한 대상체의 반응은 대상체의 근력 및 조절, 및 운동성뿐만 아니라 키 및 체중의 변화를 관찰함으로써 모니터링될 수 있다. 이러한 파라미터 중 하나 이상이 투여 후에 증가하는 경우, 치료가 계속될 수 있다. 이러한 파라미터 중 하나 이상이 동일하게 유지되거나 감소하는 경우, 투여량이 증가될 수 있다.
약리학적 요법 - 투여 방법 및 투여량
본 발명은 본 명세서에 기술된 단백질을 인코딩하는 형질전환 유전자를 함유하는 조성물의 투여와 함께 데옥시뉴클레오사이드, 및/또는 데옥시리보뉴클레오사이드 모노포스페이트의 투여를 포함한다.
가장 바람직한 투여 방법은 경구, 경막내 및 정맥내를 포함하는 비경구이다. 데옥시뉴클레오사이드 또는 데옥시리보뉴클레오사이드 모노포스페이트는 선택되는 투여를 위한 적절한 형태를 가져야 한다.
데옥시뉴클레오사이드 또는 데옥시리보뉴클레오사이드 모노포스페이트는 액체(예를 들어, 물, 포뮬러 또는 우유) 중에 용이하게 용해되는 반면, 유리산 형태는 액체 중에 용이하게 용해되지 않는다.
투여를 위한 하나 이상의 데옥시뉴클레오사이드 또는 데옥시리보뉴클레오사이드 모노포스페이트를 포함하는 이러한 약제 조성물은 치료학적 유효량의 데옥시뉴클레오사이드 또는 데옥시리보뉴클레오사이드 모노포스페이트 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 이러한 약제학적 담체는 멸균 액체, 예를 들어, 물 및 석유, 동물, 식물 또는 합성 기원의 오일, 예를 들어, 땅콩유, 대두유, 미네랄 오일, 참깨유 등을 포함하는 오일 중 염수 용액일 수 있다. 염수 용액은 약제 조성물이 정맥내로 투여될 때 바람직한 담체이다. 염수 용액 및 수성 덱스트로스 및 글리세롤 용액이 또한 액체 담체로서, 특히, 주사용 용액용으로 사용될 수 있다. 적합한 약제학적 부형제는 전분, 글루코스, 락토스, 수크로스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 밀가루, 쵸크, 실리카겔, 나트륨 스테아레이트, 글리세롤 모노스테아레이트, 탈크, 나트륨 클로라이드, 건조 탈지유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등을 포함한다. 조성물은 요망되는 경우에, 또한, 소량의 습윤화 또는 유화제, 또는 pH 완충제를 함유할 수 있다.
경구 투여는 바람직한 투여 방법이다. 데옥시뉴클레오사이드 또는 데옥시리보뉴클레오사이드 모노포스페이트는 우유 및 모유 둘 다, 영아용 조제분유, 및 물을 포함하지만 이로 제한되지 않는 환자가 소비하는 임의의 형태의 액체에 첨가될 수 있다.
추가적으로, 경구 투여를 위해 구성된 약제 조성물은 캡슐, 정제, 분말, 과립, 용액, 시럽, 현탁액(비수성 또는 수성 액체) 또는 에멀션일 수 있다. 정제 또는 경질 젤라틴 캡슐은 락토스, 전분 또는 이의 유도체, 마그네슘 스테아레이트, 나트륨 사카린, 셀룰로스, 마그네슘 카보네이트, 스테아르산 또는 이의 염을 포함할 수 있다. 연질 젤라틴 캡슐은 식물성 오일, 왁스, 지방, 반-고체, 또는 액체 폴리올을 포함할 수 있다. 용액 및 시럽은 물, 폴리올, 및 당을 포함할 수 있다. 경구 투여를 위해 의도된 활성제는 위장관에서 활성제의 분해 및/또는 흡수를 지연하는 물질로 코팅되거나 이와 혼합될 수 있다. 이에 따라, 지속 방출은 여러 시간에 걸쳐 달성될 수 있으며, 필요한 경우, 활성제는 위 내의 분해로부터 보호될 수 있다. 경구 투여를 위한 약제 조성물은 특정 pH 또는 효소 조건으로 인해 특정 위장 위치에서 활성제의 방출을 촉진시키도록 제형화될 수 있다.
혈액/뇌 배리어를 가로지르는 데옥시뉴클레오사이드 또는 데옥시리보뉴클레오사이드 모노포스페이트의 임의의 문제를 극복하기 위해, 경막내 투여는 추가적인 바람직한 투여 형태이다[Galbiati, et al. 2006; Gotz, et al. 2008]. 경막내 투여는 약물을 척수관, 더욱 상세하게 지주막하 공간 내의 주사를 포함하며, 이에 따라, 이러한 것이 뇌척수액에 도달하도록 한다. 이러한 방법은 일반적으로 척추 마취, 화학요법 및 진통제에 사용된다. 경막내 투여는 요추 천자(볼루스 주입)에 의해 또는 포트-카테터 시스템(볼루스 또는 주입)에 의해 수행될 수 있다. 카테터는 가장 흔하게 요추의 층 사이에 삽입되며, 첨단부는 요망되는 수준까지(일반적으로, L3-L4) 낭 공간 위로 나사맞춤(thread)된다. 경막내 제형은 부형제로서 가장 통상적으로 물 및 염수를 사용하지만, EDTA 및 지질이 또한 사용되었다.
다른 바람직한 투여 형태는 정맥내 투여를 포함하는 비경구이다. 정맥내 투여를 포함하는, 비경구 투여용으로 구성된 약제 조성물은 수성 및 비수성 멸균 주사용 용액 또는 현탁액을 포함하며, 이는 항산화제, 완충제, 세균발육 저지제, 및 대상체의 혈액과 조성물이 실질적으로 등장성을 나타내게 하는 용질을 포함한다. 이러한 조성물에 존재할 수 있는 다른 성분은 이러한 조성물에 존재할 수 있는 다른 성분은 물, 알코올, 폴리올, 글리세린, 및 식물성 오일을 포함한다. 비경구 투여용으로 구성된 조성물은 단위-용량 또는 다중-용량 용기, 예를 들어, 시일링된 앰플 및 바이알에 존재할 수 있고, 사용 직전에, 멸균 담체의 첨가만을 필요로 하는 냉동-건조된(동결건조된) 조건에서 저장될 수 있다. 즉석 주사 용액 및 현탁액은 멸균 분말, 과립, 및 정제로부터 제조될 수 있다. 본 발명의 비경구 투약 형태를 제공하기 위해 사용될 수 있는 적합한 비히클은 당업자에게 널리 공지되어 있다. 예는 주사용 물(USP); 수성 비히클, 예를 들어, 나트륨 클로라이드 주사제, 링거 주사제, 덱스트로스 주사제, 덱스트로스 및 나트륨 클로라이드 주사제, 및 락테이트화된 링거 주사제; 수혼화성 비히클, 예를 들어, 에틸 알코올, 폴리에틸렌 글리콜, 및 폴리프로필렌 글리콜; 및 비-수성 비히클, 예를 들어, 옥수수 오일, 면실유, 땅콩유, 참깨유, 에틸 올레에이트, 이소프로필 미리스테이트, 및 벤질 벤조에이트를 포함한다.
추가적으로, 일부 환자가 데옥시뉴클레오사이드 또는 데옥시리보뉴클레오사이드 모노포스페이트 치료가 시작될 때까지 장내 영양을 받을 수 있기 때문에, dN 또는 dNMP는 요리 공급 튜브 또는 다른 장내 영양 수단을 통해 투여될 수 있다.
추가 투여 방법은 점막, 예를 들어, 비강, 설하, 질, 협측, 또는 직장; 또는 대상체에 대한 경피 투여를 포함한다.
비강 및 폐 투여용으로 구성된 약제 조성물은 고체 담체, 예를 들어, 분말을 포함할 수 있으며, 이는 코를 통한 빠른 흡입에 의해 투여될 수 있다. 비강 투여를 위한 조성물은 액체 담체, 예를 들어, 스프레이 또는 점적을 포함할 수 있다. 대안적으로, 폐로의 직접 흡입은 깊은 흡입 또는 마우스피스를 통한 설비에 의해 달성될 수 있다. 이러한 조성물은 활성 성분의 수용액 또는 오일 용액을 포함할 수 있다. 흡입을 위한 조성물은 가압된 에어로졸, 네뷸라이저 또는 취입기를 포함하지만, 이로 제한되지 않는 특수하게 구성된 디바이스에 공급될 수 있으며, 이는 활성 성분의 사전결정된 투여량을 제공하기 위해 구성될 수 있다.
직장 투여용으로 구성된 약제 조성물은 좌제 또는 관장제로서 제공될 수 있다. 질 투여용으로 구성된 약제 조성물은 페서리, 탐폰, 크림, 겔, 페이스트, 폼(foam), 또는 스프레이 제형으로서 제공될 수 있다.
경피 투여용으로 구성된 약제 조성물은 장시간에 걸쳐 수용자의 표피와 밀접한 접촉을 유지하도록 의도된 별개의 패치로서 제공될 수 있다.
데옥시뉴클레오사이드 치료법은 데옥시티미딘(dT), 데옥시시티딘(dC), 데옥시아데노신(dA) 및 데옥시구아노신(dG)으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 데옥시뉴클레오사이드의 투여를 포함한다.
숙련된 의사는 데옥시뉴클레오사이드가 결핍증을 기반으로 하여 유익한 지를 결정할 수 있다. 또한, 의사는 데옥시뉴클레오사이드들의 혼합물이 투여되어야 하는지의 여부와 어떠한 비율로 투여되는지를 결정하는 것은 당해 분야의 기술 내에 있다. 2개의 데옥시뉴클레오사이드가 투여되는 경우에, 이러한 것은 50/50의 각 데옥시뉴클레오사이드, 예를 들어, dC 및 dT의 비율, 또는 약 5/95, 10/90, 15/85, 20/80, 25/75, 30/70, 35/65, 40/60, 45/55, 55/45, 60/40, 65/35, 70/30, 75/25, 80/20, 85/15, 90/10, 및 95/5의 비율을 가질 수 있다.
일 예로서, dT 및 dC는 TK2 결핍증에 대해 동일한 양의 혼합물로 투여된다.
데옥시리보뉴클레오사이드 모노포스페이트 치료법은 TMP, dCMP, dAMP, 및 dGMP로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 데옥시리보뉴클레오사이드 모노포스페이트의 투여를 포함한다. 2개의 데옥시리보뉴클레오사이드 모노포스페이트가 투여되는 경우에, 비율이 결정될 수 있다.
일 예로서, TMP 및 dCMP는 TK2 결핍증에 대해 동일한 양의 혼합물로 투여된다.
치료학적 유효 용량의 선택은 여러 인자를 고려하여 당업자에 의해 결정될 것이며, 이러한 인자는 당업자에게 알려진 것이다. 이러한 인자는 데옥시뉴클레오사이드 또는 데옥시리보뉴클레오사이드 모노포스페이트의 특정 형태, 및 이의 약동학적 파라미터, 예를 들어, 생체이용률, 대사, 및 반감기를 포함하며, 이는 통상적으로 약제학적 화합물에 대한 규제 승인을 얻는 데 사용되는 일반적인 개발 절차 동안에 확립될 것이다. 용량을 고려하는 추가 인자는 치료되는 병태 또는 질환 또는 정상 개체에서 달성되는 이익, 환자의 체질량, 투여 경로, 투여가 급성인지 만성인지의 여부, 병용 약물, 및 투여되는 약제학적 제제의 효능에 영향을 미치는 것으로 널리 알려진 다른 인자를 포함한다. 이에 따라, 정확한 용량은 당업자의 판단, 및 각 환자의 환경, 및 표준 임상 기술에 따라 결정되어야 한다.
바람직한 용량은 약 100 ㎎/㎏/일 내지 약 1,000 ㎎/㎏/일의 범위이다. 다른 바람직한 용량은 약 200 ㎎/㎏/일 내지 약 800 ㎎/㎏/일의 범위이다. 다른 바람직한 용량은 약 250 ㎎/㎏/일 내지 약 400 ㎎/㎏/일의 범위이다. 이러한 투여량은 개개 데옥시뉴클레오사이드 또는 데옥시리보뉴클레오사이드 모노포스페이트, 또는 하나 초과의 데옥시뉴클레오사이드, 예를 들어, dT 및 dC 또는 데옥시리보뉴클레오사이드 모노포스페이트의 혼합물의 양이다. 예를 들어, 용량은 400 ㎎/㎏/일의 dT 단독을 포함할 수 있다. 추가 예에서, 용량은 200 ㎎/㎏/일의 dT 및 200 ㎎/㎏/일의 dC의 혼합물을 포함할 수 있다. 추가 예에서, 용량은 400 ㎎/㎏/일의 dT와 dC의 혼합물을 포함할 수 있다.
데옥시뉴클레오사이드 또는 데옥시리보뉴클레오사이드 모노포스페이트의 투여는 바람직하게는 규칙적인 간격으로, 하루에 1회, 하루에 2회, 하루에 3회, 하루에 4회, 하루에 5회, 하루에 최대 6회일 수 있다. 예를 들어, 데옥시뉴클레오사이드가 하루에 4회 투여될 때, 용량은 8:00 AM, 12:00 PM, 4:00 PM, 및 8:00 PM에 이루어질 것이다.
용량은 또한, 정맥내 또는 경막내로 투여되는 경우에 낮아질 수 있다. 이러한 투여를 위한 바람직한 용량 범위는 약 50 ㎎/㎏/일 내지 약 500 ㎎/㎏/일이다.
'092 출원에 나타낸 바와 같이, 용량은 대상체에서 효과를 최대화하기 위해 조정될 수 있다. 예를 들어, 데옥시뉴클레오사이드는 출발 시에 100 ㎎/㎏/일로 투여될 수 있고, 이후에 대상체의 반응 및 내약성에 따라, 시간에 따라 200 ㎎/㎏/일까지, 400 ㎎/㎏/일까지, 800 ㎎/㎏/일까지, 최대 1000 ㎎/㎏/일까지 증가될 수 있다.
대상체는 투여량을 증가시키기 전에 이의 병태의 개선에 대해 모니터링될 수 있다. 데옥시뉴클레오사이드 또는 데옥시리보뉴클레오사이드 모노포스페이트의 치료학적 투여에 대한 대상체의 반응은 대상체의 근력 및 조절, 및 운동성뿐만 아니라 키 및 체중의 변화를 관찰함으로써 모니터링될 수 있다. 이러한 파라미터 중 하나 이상이 투여 후 증가하는 경우에, 치료가 계속될 수 있다. 이러한 파라미터 중 하나 이상이 동일하게 유지되거나 감소하는 경우에, 데옥시뉴클레오사이드의 투여량이 증가될 수 있다.
종래 특허 출원에 나타낸 바와 같이, 약리학적 요법은 잘 용인된다. 임의의 관찰된 부작용은 최소였고, 대부분 설사, 복부 팽만감 및 다른 위장 증상이었다. 대상체는 또한 임의의 부작용, 예를 들어, 위장 불내증, 예를 들어, 설사에 대해 모니터링될 수 있다. 하나 이상의 부작용이 투여 후 관찰되는 경우, 투여량이 감소될 수 있다. 이러한 부작용이 관찰되지 않는 경우에, 투여량이 증가될 수 있다. 추가적으로, 부작용의 관찰로 인해 투여량이 감소되고 부작용이 더 이상 관찰되지 않는 경우, 투여량이 증가될 수 있다.
데옥시뉴클레오사이드 또는 데옥시리보뉴클레오사이드 모노포스페이트는 또한 다른 제제와 동시에 투여될 수 있다. 이러한 제제는 특정 형태의 MDS의 증상을 치료하기 위한 치료제를 포함할 것이다. 특히, TK2 결핍증에 대해, dT 및 dC는 테트라하이드로우리딘(시티딘 데아미나제의 저해제) 및 임무실린 H(퓨린 뉴클레오사이드 포스포릴라제의 저해제) 및 티피라실(티미딘 포스포릴라제의 저해제)과 같은 효소를 포함하지만, 이로 제한되지 않는 유비쿼터스 뉴클레오사이드 이화 효소의 저해제와 동시 투여될 수 있다. 이러한 저해제는 일부 암의 치료에서 공지되어 있고 사용된다.
키트
본 발명은 또한, 키트 형태로 본 발명의 조합물의 성분들을 포함하는 키트를 제공한다. 본 발명의 키트는 본 명세서에 기술된 바이러스 벡터(예를 들어, AAV 벡터) 및/또는 약리학적 제제(예를 들어, 데옥시뉴클레오사이드 및/또는 뉴클레오사이드 모노포스페이트)를 포함하지만, 이로 제한되지 않는 하나 이상의 성분을 포함한다. 키트는 본 명세서에 논의된 바와 같이 약제학적으로 허용되는 담체를 더 포함할 수 있다. 바이러스 벡터 또는 약리학적 제제는 순수한 조성물로서 또는 약제 조성물에서 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 제형화될 수 있다.
일부 실시형태에서, 키트는 하나의 용기(예를 들어, 멸균 유리 또는 플라스틱 바이알)에 본 명세서에 기술된 형질전환 유전자를 함유하는 AAV 벡터를 포함한다.
일부 실시형태에서, 키트는 하나의 용기(예를 들어, 멸균 유리 또는 플라스틱 바이알)에 본 명세서에 기술된 형질전환 유전자를 함유하는 AAV 벡터를 및 다른 용기(예를 들어, 멸균 유리 또는 플라스틱 바이알)에 본 명세서에 기술된 형질전환 유전자를 인코딩하는 제2 AAV 벡터를 포함한다.
일부 실시형태에서, 키트는 하나의 용기(예를 들어, 멸균 유리 또는 플라스틱 바이알)에 본 명세서에 기술된 형질전환 유전자를 함유하는 AAV 벡터를 및 다른 용기(예를 들어, 멸균 유리 또는 플라스틱 바이알)에 약리학적 제제를 포함한다.
일부 실시형태에서, 키트는 하나의 용기(예를 들어, 멸균 유리 또는 플라스틱 바이알)에 본 명세서에 기술된 형질전환 유전자를 함유하는 AAV2 벡터를 및 다른 용기(예를 들어, 멸균 유리 또는 플라스틱 바이알)에 약리학적 제제를 포함한다.
일부 실시형태에서, 키트는 하나의 용기(예를 들어, 멸균 유리 또는 플라스틱 바이알)에 본 명세서에 기술된 형질전환 유전자를 함유하는 AAV9 벡터를, 및 다른 용기(예를 들어, 멸균 유리 또는 플라스틱 바이알)에 약리학적 제제를 포함한다.
일부 실시형태에서, 키트는 하나의 용기(예를 들어, 멸균 유리 또는 플라스틱 바이알)에 TK2, dGK, p53R2, TP, SUCLA2, SUCLG1, POLG1, 및/또는 미토콘드리아 막 단백질 MPV17을 인코딩하는 AAV 벡터, 또는 이의 약제 조성물을 포함한다.
키트가 대상체에 비경구 투여를 위한 하나 이상의 약제 조성물을 포함하는 경우에, 키트는 이러한 투여를 수행하기 위한 디바이스를 포함할 수 있다. 예를 들어, 키트는 상기에서 논의된 바와 같은 하나 이상의 피하 니들 또는 다른 주사 디바이스를 포함할 수 있다.
키트는 키트에서 약제 조성물 및 투여 형태에 관한 정보를 포함하는 패키지 삽입물을 포함할 수 있다. 일반적으로, 이러한 정보는 환자 및 의사가 동봉된 약제 조성물 및 투여 형태를 효과적이고 안전하게 사용하도록 돕는다. 예를 들어, 본 발명의 조합물과 관련한 하기 정보는 삽입물에 공급될 수 있다: 약동학, 약력학, 임상 연구, 효능 파라미터, 적응증 및 사용법, 금기 사항, 경고, 예방 조치, 부작용, 과다 복용, 적절한 복용량 및 투여, 공급 방법, 적절한 보관 조건, 참조, 제조업체/유통업체 정보 및 특허 정보.
본 발명의 예시적인 실시형태는 하기를 포함한다:
1. 티미딘 키나제 2(TK2) 결핍증의 예방 또는 치료를 필요로 하는 대상체에서 이러한 결핍증을 예방하거나 치료하는 방법으로서, 대상체에 치료학적 유효량의, 기능성 TK2 단백질을 인코딩하는 형질전환 유전자를 포함하는 핵산 서열을 포함하는 재조합 아데노-연관 벡터(rAAV)를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
2. 실시형태 1에 있어서, rAAV가 AAV9 및 AAV2로 이루어진 군으로부터 선택된 방법.
3. 실시형태 1에 있어서, 대상체가 포유동물인, 방법.
4. 실시형태 1에 있어서, 대상체가 인간인, 방법.
5. 실시형태 1에 있어서, 조성물이 약제 조성물인, 방법.
6. 실시형태 1에 있어서, 조성물이 제1 rAAV를 포함하는 제1 조성물이며, 제1 rAAV는 AAV9이며, 치료학적 유효량의, 기능성 TK2 단백질을 인코딩하는 형질전환 유전자를 포함하는 핵산 서열을 포함하는 제2 rAAV를 포함하는 제2 조성물을 투여하는 것을 더 포함하며, 제2 rAAV는 AAV2이고, 제1 rAAV의 투여 후의 시점에 투여되는, 방법.
7. 실시형태 6에 있어서, 제2 조성물이 약제 조성물인, 방법.
8. 실시형태 6에 있어서, 대상체가 TK2 결핍증으로 진단되거나 TK2 결핍증을 가질 것으로 의심되자마자 제1 조성물이 투여되고, 제2 조성물의 투여 동안 계속 투여되는, 방법.
9. 실시형태 6에 있어서, 제2 조성물이 제1 조성물 후 수 일 내에 투여되는, 방법.
10. 실시형태 6에 있어서, 제2 조성물이 제1 조성물 후 수 주 내에 투여되는, 방법.
11. 실시형태 6에 있어서, 제2 조성물이 제1 조성물 후 적어도 1개월에 투여되는, 방법.
12. 실시형태 6에 있어서, 치료학적 유효량의, 데옥시시티딘(dC), 데옥시티미딘(dT), 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 약리학적 제제를 포함하는 제3 조성물을 투여하는 단계를 더 포함하는, 방법.
13. 실시형태 12에 있어서, 제3 조성물이 제2 조성물과 동일한 시점에 투여되는, 방법.
14. 실시형태 12에 있어서, 제3 조성물이 제2 조성물의 후속 시점에 투여되는, 방법.
15. 실시형태 12에 있어서, 제3 조성물의 치료학적 유효량이 약 100 ㎎/㎏/일 내지 약 1000 ㎎/㎏/일인, 방법.
16. 실시형태 12에 있어서, 제3 조성물의 치료학적 유효량이 약 200 ㎎/㎏/일 내지 약 800 ㎎/㎏/일인, 방법.
17. 실시형태 12에 있어서, 제3 조성물의 치료학적 유효량이 약 250 ㎎/㎏/일 내지 약 400 ㎎/㎏/일인, 방법.
18. 실시형태 12에 있어서, 제3 조성물이 하루에 1회, 하루에 2회, 하루에 3회, 하루에 4회, 하루에 5회 또는 하루에 6회 투여되는, 방법.
19. 실시형태 12에 있어서, 제3 조성물이 경구로, 경막내로, 장내로, 또는 정맥내로 투여되는, 방법.
20. 실시형태 19에 있어서, 제3 조성물이 경구로 투여되고, 우유, 인간 모유, 영아용 조제분유 또는 물과 혼합된 데옥시뉴클레오사이드를 포함하는, 방법.
21. 티미딘 키나제 2(TK2) 결핍증의 예방 또는 치료를 필요로 하는 대상체에서 이러한 결핍증을 예방 또는 치료하는 방법으로서, 대상체에 치료학적 유효량의, 약리학적 제제를 포함하는 제1 조성물을 투여하고, 치료학적 유효량의, 기능성 TK2 단백질을 인코딩하는 형질전환 유전자를 포함하는 핵산 서열을 포함하는 재조합 아데노-연관 벡터(rAAV)를 포함하는 제2 조성물을 추가로 투여하는 것을 포함하는, 방법.
22. 실시형태 21에 있어서, 약리학적 제제가 데옥시시티딘(dC), 데옥시티미딘(dT), 및 이들의 혼합물; 및 데옥시시티딘 모노포스페이트(dCMP), 데옥시티미딘 모노포스페이트(dTMP), 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
23. 실시형태 21에 있어서, rAAV가 AAV9인, 방법.
24. 실시형태 21에 있어서, 제2 조성물이 약제 조성물인, 방법.
25. 실시형태 21에 있어서, 제1 조성물이, 대상체가 TK2 결핍증으로 진단되거나 TK2 결핍증을 갖는 것으로 의심되자마자 투여되고, 제2 조성물의 투여 동안 계속 투여되는, 방법.
26. 실시형태 21에 있어서, 제2 조성물이 제1 조성물 후 수 일 내에 투여되는, 방법.
27. 실시형태 21에 있어서, 제2 조성물이 제1 조성물 후 수 주 내에 투여되는, 방법.
28. 실시형태 21에 있어서, 제2 조성물이 제1 조성물 후 적어도 1개월 내에 투여되는, 방법.
29. 실시형태 21에 있어서, 제1 조성물의 치료학적 유효량이 약 100 ㎎/㎏/일 내지 약 1000 ㎎/㎏/일인, 방법.
30. 실시형태 21에 있어서, 제1 조성물의 치료학적 유효량이 약 200 ㎎/㎏/일 내지 약 800 ㎎/㎏/일인, 방법.
31. 실시형태 21에 있어서, 제1 조성물의 치료학적 유효량이 약 250 ㎎/㎏/일 내지 약 400 ㎎/㎏/일인, 방법.
32. 실시형태 21에 있어서, 제1 조성물이 하루에 1회, 하루에 2회, 하루에 3회, 하루에 4회, 하루에 5회 또는 하루에 6회 투여되는, 방법.
33. 실시형태 21에 있어서, 제1 조성물이 경구로, 경막내로, 장내로, 또는 정맥내로 투여되는, 방법.
34. 실시형태 33에 있어서, 제1 조성물이 경구로 투여되고, 우유, 인간 모유, 영아용 조제분유 또는 물과 혼합된 약리학적 제제를 포함하는, 방법.
35. 실시형태 21에 있어서, 기능성 TK2 단백질을 인코딩하는 형질전환 유전자를 포함하는 핵산 서열을 포함하는 재조합 아데노-연관 벡터(rAAV)를 포함하는 제2 rAAV를 포함하는 제3 조성물의 투여를 더 포함하며, 제2 rAAV는 AAV2인, 방법.
36. 티미딘 키나제 2 효소 활성의 복원을 필요로 하는 대상체에서 이러한 효소 활성을 복원하는 방법으로서, 대상체에 치료학적 유효량의, 기능성 TK2 단백질을 인코딩하는 형질전환 유전자를 포함하는 핵산 서열을 포함하는 재조합 아데노-연관 벡터(rAAV)를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
37. 실시형태 36에 있어서, rAAV가 AAV9 및 AAV2로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
38. 실시형태 36에 있어서, 대상체가 포유동물인, 방법.
39. 실시형태 36에 있어서, 대상체가 인간인, 방법.
40. 실시형태 36에 있어서, 조성물이 약제 조성물인, 방법.
41. 실시형태 36에 있어서, 조성물이 제1 rAAV를 포함하는 제1 조성물이며, 제1 rAAV는 AAV9이며, 치료학적 유효량의, 기능성 TK2 단백질을 인코딩하는 형질전환 유전자를 포함하는 핵산 서열을 포함하는 제2 rAAV를 포함하는 제2 조성물을 투여하는 것을 더 포함하며, 제2 rAAV는 AAV2이고 제1 rAAV의 투여 후의 시점에 투여되는, 방법.
42. 실시형태 41에 있어서, 제2 조성물이 약제 조성물인, 방법.
43. 실시형태 41에 있어서, 제1 조성물이, 대상체가 TK2 결핍증으로 진단되거나 TK2 결핍증을 갖는 것으로 의심되자마자 투여되고, 제2 조성물의 투여 동안 계속 투여되는, 방법.
44. 실시형태 41에 있어서, 제2 조성물이 제1 조성물 후 수 일 내에 투여되는, 방법.
45. 실시형태 41에 있어서, 제2 조성물이 제1 조성물 후 수 주 내에 투여되는, 방법.
46. 실시형태 41에 있어서, 제2 조성물이 제1 조성물 후 적어도 1개월에 투여되는, 방법.
47. 실시형태 41에 있어서, 치료학적 유효량의, 데옥시시티딘(dC), 데옥시티미딘(dT), 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 약리학적 제제를 포함하는 제3 조성물을 투여하는 단계를 더 포함하는, 방법.
48. 실시형태 47에 있어서, 제3 조성물이 제2 조성물과 동일한 시점에 투여되는, 방법.
49. 실시형태 47에 있어서, 제3 조성물이 제2 조성물의 후속 시점에 투여되는, 방법.
50. 실시형태 47에 있어서, 제3 조성물의 치료학적 유효량이 약 100 ㎎/㎏/일 내지 약 1000 ㎎/㎏/일인, 방법.
51. 실시형태 47에 있어서, 제3 조성물의 치료학적 유효량이 약 200 ㎎/㎏/일 내지 약 800 ㎎/㎏/일인, 방법.
52. 실시형태 47에 있어서, 제3 조성물의 치료학적 유효량이 약 250 ㎎/㎏/일 내지 약 400 ㎎/㎏/일인, 방법.
53. 실시형태 47에 있어서, 제3 조성물이 하루에 1회, 하루에 2회, 하루에 3회, 하루에 4회, 하루에 5회 또는 하루에 6회 투여되는, 방법.
54. 실시형태 47에 있어서, 제3 조성물이 경구로, 경막내로, 장내로, 또는 정맥내로 투여되는, 방법.
55. 실시형태 54에 있어서, 제3 조성물이 경구로 투여되고, 우유, 인간 모유, 영아용 조제분유 또는 물과 혼합된 데옥시뉴클레오사이드를 포함하는, 방법.
56. 티미딘 키나제 2 효소 활성의 복원을 필요로 하는 대상체에서 이러한 효소 활성을 복원하는 방법으로서, 대상체에 치료학적 유효량의, 약리학적 제제를 포함하는 제1 조성물을 투여하고, 치료학적 유효량의, 기능성 TK2 단백질을 인코딩하는 형질전환 유전자를 포함하는 핵산 서열을 포함하는 재조합 아데노-연관 벡터(rAAV)를 포함하는 제2 조성물을 추가로 투여하는 것을 포함하는, 방법.
57. 실시형태 56에 있어서, 약리학적 제제가 데옥시시티딘(dC), 데옥시티미딘(dT), 및 이들의 혼합물; 및 데옥시시티딘 모노포스페이트(dCMP), 데옥시티미딘 모노포스페이트(dTMP), 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
58. 실시형태 56에 있어서, rAAV가 AAV9인, 방법.
59. 실시형태 56에 있어서, 제2 조성물이 약제 조성물인, 방법.
60. 실시형태 56에 있어서, 제1 조성물이, 대상체가 TK2 결핍증으로 진단되거나 TK2 결핍증을 가질 것으로 의심되자마자 투여되고, 제2 조성물의 투여 동안 계속 투여되는, 방법.
61. 실시형태 56에 있어서, 제2 조성물이 제1 조성물 후 수 일 내에 투여되는, 방법.
62. 실시형태 56에 있어서, 제2 조성물이 제1 조성물 후 수 주 내에 투여되는, 방법.
63. 실시형태 56에 있어서, 제2 조성물이 제1 조성물 후 적어도 1개월에 투여되는, 방법.
64. 실시형태 56에 있어서, 제1 조성물의 치료학적 유효량이 약 100 ㎎/㎏/일 내지 약 1000 ㎎/㎏/일인, 방법.
65. 실시형태 56에 있어서, 제1 조성물의 치료학적 유효량이 약 200 ㎎/㎏/일 내지 약 800 ㎎/㎏/일인, 방법.
66. 실시형태 56에 있어서, 제1 조성물의 치료학적 유효량이 약 250 ㎎/㎏/일 내지 약 400 ㎎/㎏/일인, 방법.
67. 실시형태 56에 있어서, 제1 조성물이 하루에 1회, 하루에 2회, 하루에 3회, 하루에 4회, 하루에 5회 또는 하루에 6회 투여되는, 방법.
68. 실시형태 56에 있어서, 제1 조성물이 경구로, 경막내로, 장내로, 또는 정맥내로 투여되는, 방법.
69. 실시형태 56에 있어서, 제1 조성물이 경구로 투여되고, 우유, 인간 모유, 영아용 조제분유 또는 물과 혼합된 약리학적 제제를 포함하는, 방법.
70. 실시형태 56에 있어서, 기능성 TK2 단백질을 인코딩하는 형질전환 유전자를 포함하는 핵산 서열을 포함하는 재조합 아데노-연관 벡터(rAAV)를 포함하는 제2 rAAV를 포함하는 제3 조성물의 투여를 더 포함하며, 여기서, 제2 rAAV는 AAV2인, 방법.
71. 불균형 뉴클레오타이드 풀을 특징으로 하는 질환 또는 장애의 예방 또는 치료를 필요로 하는 대상체에서 불균형 뉴클레오타이드 풀을 특징으로 하는 질환 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법으로서, 대상체에 치료학적 유효량의, TK2; DGUOK; TYMP; RRM2B; SUCLA2; SUCLGJ; 및 MPV17로 이루어진 군으로부터 선택된 형질전환 유전자를 포함하는 핵산 서열을 포함하는 재조합 아데노-연관 벡터(rAAV)를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
72. 불균형 뉴클레오타이드 풀을 특징으로 하는 질환 또는 장애의 예방 또는 치료를 필요로 하는 대상체에서 불균형 뉴클레오타이드 풀을 특징으로 하는 질환 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법으로서, 대상체에 치료학적 유효량의, TK2; DGUOK; TYMP; RRM2B; SUCLA2; SUCLGJ; 및 MPV17로 이루어진 군으로부터 선택된 형질전환 유전자를 포함하는 핵산 서열을 포함하는 재조합 아데노-연관 벡터(rAAV)를 포함하는 제2 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
73. 실시형태 72에 있어서, 약리학적 제제가 데옥시시티딘(dC), 데옥시티미딘(dT), 데옥시아데노신(dA), 데옥시구아노신(dG), 및 이들의 혼합물; 및 데옥시시티딘 모노포스페이트(dCMP), 데옥시티미딘 모노포스페이트(dTMP), 데옥시아데노신 모노포스페이트(dAMP), 데옥시구아노신 모노포스페이트(dGMP)및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
74. 불균형 뉴클레오타이드 풀을 특징으로 하는 질환 또는 장애에서 효소 활성을 복원할 필요가 있는 대상체에서의 불균형 뉴클레오타이드 풀을 특징으로 하는 질환 또는 장애에서 효소 활성을 복원하는 방법으로서, 대상체에 치료학적 유효량의, TK2; DGUOK; TYMP; RRM2B; SUCLA2; SUCLGJ; 및 MPV17로 이루어진 군으로부터 선택된 형질전환 유전자를 포함하는 핵산 서열을 포함하는 재조합 아데노-연관 벡터(rAAV)를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
75. 불균형 뉴클레오타이드 풀을 특징으로 하는 질환 또는 장애에서 효소 활성을 복원할 필요가 있는 대상체에서의 불균형 뉴클레오타이드 풀을 특징으로 하는 질환 또는 장애에서 효소 활성을 복원하는 방법으로서, 대상체에, 치료학적 유효량의 약리학적 제제를 포함하는 제1 조성물을 투여하고, 치료학적 유효량의, TK2; DGUOK; TYMP; RRM2B; SUCLA2; SUCLGJ; 및 MPV17로 이루어진 군으로부터 선택된 형질전환 유전자를 포함하는 핵산 서열을 포함하는 재조합 아데노-연관 벡터(rAAV)를 포함하는 제2 조성물을 추가로 투여하는 것을 포함하는, 방법.
76. 실시형태 75에 있어서, 약리학적 제제가 데옥시시티딘(dC), 데옥시티미딘(dT), 데옥시아데노신(dA), 데옥시구아노신(dG), 및 이들의 혼합물; 및 데옥시시티딘 모노포스페이트(dCMP), 데옥시티미딘 모노포스페이트(dTMP), 데옥시아데노신 모노포스페이트(dAMP), 데옥시구아노신 모노포스페이트(dGMP) 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
실시예
본 발명은 본 발명의 바람직한 실시형태를 완전히 예시하기 위해 제시되는, 하기 비제한적인 실시예를 참조하여 더 잘 이해될 수 있다. 이러한 것은 어떠한 방식으로도 본 발명의 넓은 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
실시예 1- 물질 및 방법
TK2 결핍증의 마우스 모델
인간 유아 뇌근육병증과 상당히 유사한 표현형을 나타내는 동형 접합 Tk2 H126N 넉인 돌연변이(Tk2 -/- ) 마우스는 이전에 보고된 바와 같다[Akman, et al. 2008]. 출생 후 10일 내지 13일 사이에, Tk2 -/- 마우스는 이동 감소, 불안정한 보행, 거친 떨림, 성장 지연, 및 14 내지 16일에 조기 사망으로의 급속한 진행을 특징으로 하는 치명적인 뇌근육병증을 빠르게 발달한다. 마우스 모델의 분자 및 생화학적 분석은, 질환의 병인이 효소 활성의 손실 및 뇌에서의 dTTP 수준 감소 및 간에서 dTTP 및 dCTP 수준 둘 다의 감소를 갖는 뒤이은 dNTP 풀 불균형으로 인한 것임을 나타내었으며, 이는 또한, 가장 두드러지게 뇌 및 척수에서 mtDNA 고갈 및 mtDNA-인코딩된 서브유닛을 함유하는 호흡 사슬 효소의 결함을 형성시킨다.
모든 실험을 콜롬비아 대학교 의료 센터의 동물 관리 및 사용 위원회에서 승인된 프로토콜에 따라 수행하였고, 실험실 동물의 관리 및 사용을 위한 국립 보건원 가이드와 일치하였다. 마우스를 12시간 낮, 12시간 밤 사이클로 국제 표준 조건에 따라 하우징하고 사육하고, 4, 13 및 29일령에 희생시켰다.
표준 절차를 이용하여 장기(뇌, 척수, 간, 심장, 간, 대퇴사두근, 폐 및 위장관)를 제거하고, 아이소펜탄의 액체상에서 냉동시키고, 드라이 아이스로 이의 냉동점(-160℃) 부근에서 사전-냉동시키거나, 10% 중성 완충 포르말린 중에서 고정시키고, 파라핀에 임베딩하였다. 파라핀 임베딩된 조직을 모폴로지 연구를 위해 이후에 헤마톡실린 및 에오신(H&E)으로 염색하거나 면역염색 연수를 위해 GFAP, COX I, 또는 복합체 I로 가공하였다. 이형 접합 및 동형 접합 야생형 마우스 둘 다는 대조군(Tk2 + )으로 간주되었는데, 왜냐하면 임상 및 생화학적 차이가 이전에 기술되지 않았기 때문이다[Akman, et al. 2008; Dorado, et al. 2011].
hTK2 작제물
인간 Tk2 유전자를 포함하는 벡터(pAAVsc CB6 PI TK2는 도 1에 도시됨). 작제물의 중요 성분은 인간 TK2 cDNA뿐만 아니라 5'ITR, CMV IE 인핸서, 닭 베타 액틴 프로모터, BGH 3'UTR, 폴리 A 신호, GRE, 및 3' ITR을 포함한다.
이러한 벡터를 후속 실험을 위해 AAV9 및 AAV2 캡시드 둘 다에서 캡슐화하였다.
유전자 요법 투여
야생형 마우스에서 AAV9-GFP 벡터를 사용하고 벡터의 분포를 분석한 이전 결과를 기초로 하여, AAV9 바이러스가 I.P로 투여될 때 뇌를 표적으로 하지 않는 것으로 나타났다(결과는 미도시됨). 이러한 연구를 기초로 하여, AAV9-hTK2 작제물의 투여를 정맥내(IV) 주사에 의해 수행하였다.
AAV9-hTK2를 출생 후 1일에 약 4.2×1011 또는 4.2×1010개 게놈 또는 벡터 카피를 함유하는 총 부피 35㎕의 PBS 1X의 안구뒤 주사로 IV를 통해 투여하였다.
대안적으로, AAV9-hTK2를 출생 후 1일에 약 2.1×1011개 벡터 카피를 함유하는 35㎕의 PBS 1X의 안구뒤 주사로 IV를 통해 투여하고, 이후에 29일에 약 1.05×1011개 벡터 카피를 함유하는 꼬리 정맥 주사로 및 4 ㎖/일/마우스의 물 소비를 가정하여 21일부터 520 ㎎/㎏/일의 경구 dC+dT(음료수 중)를 보충하거나 보충하지 않으면서, IV를 통해 100㎕의 AAV2-hTK2를 투여하였다.
약리학적 치료 투여 및 실험 계획
데옥시시티딘(dC) 및 데옥시티미딘(dT)을 출생 후 4일에서 29일까지, 520 ㎎/㎏/일의 용량을 사용하여 작은 반려 동물(Pet-Ag)을 위한 50㎕의 Esbilac 우유 조제분유 중에 일일 경구 위관으로 Tk2 -/- 및 연령 매칭된 대조군 야생형(Tk2+)에 투여하였다. 출생 후 21일령에, 마우스를 어머니로부터 분리하고, 4 ㎖/일/마우스의 물 소비를 가정하여 음료수 중 dC 및 dT의 투여에 의해 치료를 계속하였다. 미처리 Tk2 돌연변이 및 대조군 야생형 마우스의 음성 대조군을 비교를 위해 계량하고 면밀히 관찰하였다.
데옥시시티딘 모노포스페이트(dCMP) 및 데옥시티미딘 모노포스페이트(TMP)(Hongene Biotech, Inc.)를 출생 후 4일에서 29일까지, 2개의 용량, 즉 200 ㎎/㎏/일 및 400 ㎎/㎏/일을 사용하여 작은 반려 동물(Pet-Ag)을 위한 50㎕의 Esbilac 우유 조제분유 중에 일일 경구 위관으로 Tk2 H126N 넉인 마우스(Tk2 -/- ) 및 연령 매칭된 대조군 야생형(Tk2+)에 투여하였다. 29일령에, 마우스를 어머니로부터 분리하고, 400 ㎎/㎏/일의 용량을 사용하여 음료수 중 dCMP 및 TMP의 투여에 의해 치료를 계속하였다.
표현형 평가
질환의 제1 징후가 체중 증가 능력이 없다는 것이 이전에 관찰되었기 때문에 체중을 매일 평가하였다[Akman, et al. 2008].
유전자 요법의 안전성 및 효능의 정도, 생존 시간, 질환의 발병 연령, 증상의 타입 및 중증도, 부작용의 발생, 및 부작용으로 인한 치료 종료 비율을 규정하기 위해, 처리된 Tk2 마우스와 미처리 Tk2 마우스를 비교하였다. 마우스의 일반적인 거동, 생존 시간, 및 체중을 출생 후 4일에 시작하여 매일 평가하였다.
TK2 효소 측정
TK2 효소의 활성을 이전에 문헌[Franzolin, et al. 2006]에 기술된 바와 같이 측정하였다.
mtDNA 카피 수 측정
mtDNA 카피 수를 이전에 문헌[Spinazzola, et al. 2006/]에 기술된 바와 같이 측정하였다.
미토콘드리아 호흡 사슬 효소 활성
미토콘드리아 RC 효소 분석을 이전에 문헌[DiMauro, et al. 1987; Birch-Machin, et al. 1994; Quinzii, et al. 2013]에 기술된 바와 같이 대뇌 조직에서 수행하였다.
통계 방법
데이터를 그룹당 적어도 3회 실험의 평균 ± SD로서 표현하였다. Gehan-Breslow-Wilcoxon 시험을 이용하여 각 마우스 그룹의 생존 비율을 비교하였다. <0.05의 p-값은 통계학적으로 유의미한 것으로 여겨졌다.
실시예 2 - AAV9-hTK2의 투여는 수명 연장을 야기시킴
실시예 1에 기술된 돌연변이 마우스에 출생 후 1일에 안구뒤 주사로 IV를 통해 실시예 1에 또한 기술된 AAV9-hTK2 작제물(약 4.2×1011 또는 4.2×1010개 게놈 또는 벡터 카피를 함유함)을 투여하였다.
AAV9-hTK2로의 치료는 4.2×1010 vc의 투여로 용량-의존 반응을 초래하여, 520 ㎎/㎏/일의 dC+dT 치료법과 유사한, 수명을 최대 3배(평균 39일) 연장하였다. 4.2×1011 vc의 투여는 수명을 최대 129일로 최대 6배(평균 89일) 연장시켰다. 도 2 참조.
실시예 3 - AAV9-hTK2의 투여는 돌연변이 마우스에서 성장, 힘, 및 운동 기능의 증가를 야기시킴
실시예 1에 기술된 마우스를 실시예 1에 또한 기술된 AAV9-hTK2 작제물로 실시예 1에 기술된 바와 같이 치료하였다.
저용량의 AAV9-hTK2(4.2×1010vc)로 처리된 Tk2 -/- 마우스는 520 ㎎/㎏/일의 dC+dT로 처리된 그러한 Tk2 -/- 마우스와 동일한 속도로 성장하였다. 이러한 것은 또한, 이러한 것이 플래토(plateau)에 도달하였을 때, 출생 후 20일에 Tk2 + 마우스와 동일한 속도로 성장하였다.
고용량의 AAV9-hTK2(4.2×1011vc)로 처리된 Tk2 -/- 마우스는 P30까지 Tk2 + 마우스와 동일한 속도로 성장하였다.
미처리 Tk2+와, 고용량의 AAV9-hTK2(4.2×1011vc)로 처리된 Tk2+ 사이에 어떠한 차이도 발견되지 않았다. 도 3 참조.
P1에서 4.2×1011 vc로 처리된 Tk2 -/- 마우스는 미처리 또는 AAV9-hTK2 처리된 야생형 마우스와 비교하여 힘의 차이를 나타내지 않았다. 힘을 체중에 의해 정규화하였고, P29 및 P60에서 측정하였다. 도 4 참조.
운동 기능을 평가하기 위해 인간 환자에서 관찰되는 운동 행동 결함, 즉, 운동 표현형을 모델링하는 것으로 여겨지는 결과 측정인 로타로드 시험(rotarod testing)을 출생 후 29일 및 60일에 수행하였으며, 이는, 두 돌연변이체, 즉 한 마리의 수컷 및 한 마리의 암컷이 약점 및 균형 부족으로 인해 시험을 수행하지 못했지만, 치료된 돌연변이 마우스와 치료된 야생형 마우스 간에 어떠한 차이도 나타나지 않았다. 도 5 참조.
AAV9-hTK2로 처리된 야생형 마우스는 치료법과 관련된 부작용을 나타내지 않았고, 전체적으로 건강하였다.
힘 및 운동 기능과 관련된 결과는 돌연변이 마우스에서 근병증을 배제하는 것으로 보이고, Tk2 -/- 에 나타난 체중 감소가 비-근육 관련 건강 상태에 의해 유발될 수 있음을 시사한다.
실시예 4 - AAV9-Tk2로의 치료는 대부분의 조직에서 TK2 효소 활성을 복원시킴
실시예 1에 기술된 방법을 이용하여, TK2 효소의 활성을 P29에서 측정하였으며, 이는 뇌 및 간에 P1에서 4.2×1011vc의 AAV9-hTK2로 처리된 돌연변이 마우스가 미처리 야생형 마우스에서 발견된 것과 유사한 수준까지 복원되는 것으로 나타났다. 근육에서, AAV9-hTK2는 미처리 야생형 마우스와 비교하여 TK2 활성을 40배 증가시켰다. 그러나, AAV9-hTK2의 투여는 신장에서 TK2 활성을 복원하는 데 불량한 효율성을 나타내었다. 도 6 참조.
실시예 5 - AAV9-hTk2로의 치료는 대부분의 조직에서 hTK2의 발현을 증가시킴
인간 TK2를 1개월, 2개월, 및 6개월에 뇌, 간, 근육, 및 신장 조직에서 AAV9-hTK2(4×1011 vc)로 처리된 야생형 마우스에서 실시예 1에 기술된 바와 같은 마우스 TK2의 mRNA 발현과 관련한 백분율로서 측정하였다.
인간 TK2는 6개월의 치료 후에 심지어 야생형 마우스에서 표적 조직 상에서 마우스 TK2의 100% 초과의 발현으로 뇌, 간, 및 근육에서 발현되었다. 반대로, 신장에서 TK2의 발현은 치료 2개월 후에 매우 낮았다. 도 7 참조.
실시예 6 - AAV9-hTK2로의 치료는 대부분의 조직에서 mtDNA를 구제시킴
mtDNA 카피 수를 실시예 1에 기술된 바와 같이 측정하였다. 출생 후 29일에, 출생 후 1일에 AAV9-hTK2로 처리된 Tk2-/- 마우스(4×1011 vc)는 신장 조직에서만 심각한 mtDNA 고갈의 징후를 가졌으며, MtDNA는 뇌, 심장, 간, 장 및 근육에서 부분적으로 구제되었다(도 8).
출생 후 60일에, AAV9-hTK 치료된 돌연변이 마우스의 간, 심장, 근육 및 장 조직에서 매우 경미한 mtDNA 고갈이 존재하였다(미처리 야생형 마우스의 65 내지 80%). 치료된 돌연변이 마우스의 뇌 조직에서 mtDNA는 미처리 야생형 마우스의 87%이었다. 이는 AAV9-hTK2 치료된 Tk2 -/- 마우스의 대부분의 조직에서 mtDNA의 구제를 나타내었다. 동일한 치료된 돌연변이 마우스의 신장 조직에서 심각한 mtDNA 고갈이 존재하였다. 도 9 참조.
실시예 7 - AAV9-hTK2로의 치료는 뇌에서 생화학적 이상을 개선시킴
호흡 사슬 효소(RCE) 활성 및 단백질 수준을 실시예 1에 기술된 바와 같이 측정하였다.
출생 후 29일에 뇌에서의 RCE 활성은 AAV9-hTK2로 처리된 Tk2 -/- 마우스(4×1011 vc)의 뇌에서 완전히 복원되었다(도 10). 미처리 야생형 마우스와 비교하여 AAV9-hTK2 처리된 Tk2 -/- 마우스에서만 복합체 III 활성의 약간의 감소가 관찰될 수 있다(도 11).
실시예 8 - AAV9-hTK2는 신장 기능을 구제하지 못함
실시예 1의 방법을 이용하여, 출생 후 96일의 이의 사망 시간에 4.2×1011 vc의 AAV9-hTK2로 처리된 돌연변이 마우스의 신장 조직을 SDH 및 Cox로 염색하였다. 4.2×1011 vc의 AAV9-hTK2로 처리된 연령 매칭된 야생형 마우스의 신장 조직을 또한 염색하였다. SDH(청색) 염색은 Cox(갈색) 염색과 공동-국소화를 나타내지 않았는데, 이는 돌연변이 마우스의 신장 조직에서 Cox 결핍을 나타내고 미토콘드리아 기능이상 가능성을 나타내는 것이다(도 12).
크레아티닌 및 혈액 우레아 질소(BUN) 지수를 4.2×1011 vc의 AAV9-hTK2로 처리된 돌연변이 마우스 및 4.2×1011 vc의 AAV9-hTK2로 처리된 야생형 마우스(둘 다 생존 코호트 및 출생 후 60일) 둘 다에서 평가하였다. 크레아티닌 및 BUN 둘 다는 두 코호트 모두의 돌연변이 마우스에서 더 높았으며, 이는 신장 기능장애를 시사하는 것이다(도 13).
실시예 9 - AAV2-hTK2와 함께 AAV9-hTK2의 투여는 AAV9-hTK2 단독 사용에 비해 생존을 증가시킴
실시예 1에 기술된 돌연변이 마우스에 출생 후 1일에 실시예 1에 또한 기술된 바와 같이 35㎕의 총 부피의 안구뒤 주사를 통해 2.1×1011 vc의 AAV9-hTK2를 투여하였다. 야생형 마우스를 또한, 출생 후 1일에 치료하였다.
출생 후 21일에, 이러한 치료된 돌연변이 및 야생형 마우스의 1/3에 520 ㎎/㎏/일의 경구 dC+dT(음료수 중)를 보충하였다. 출생 후 29일에 마우스(모두는 dC+dT가 보충됨, 및 나머지 마우스의 절반)의 2/3에 100㎕의 총 부피로 꼬리 정맥 주사를 통해 1.05×1011 vc의 AAV2-hTK(실시예 1)를 투여하였다.
AAV9-hTK2 만으로 처리된 돌연변이 마우스는 실시예 2의 결과와 일치하게 평균 89일 생존하였다. AAV9-hTK2 및 AAV2-hTK2 둘 다르 수용한 돌연변이 마우스는 상당히 더 길게, 약 120일 생존하였다(도 14). 전체 저용량의 벡터 카피(전체 3.15×1011 vc 대 4.2×1011 vc)를 가짐에도 불구하고, 두 작제물 모두로 처리된 돌연변이 마우스는 AAV9-hTK2로만 치료된 돌연변이 마우스 정도로 성장하였고(도 15 및 도 16), 동일한 함 및 운동 협응력을 나타내었다(도 17, 도 18 및 도 19). 60일에, AAV9-hTK2 및 AAV2-hTK2 둘 다로 처리된 돌연변이 마우스는 AAV9-hTK2 만으로 처리된 것보다 약간 더 높은 수준의 mtDNA를 나타내었다(도 20). AAV9-hTK2 및 AAV2-hTK2의 조합물로 처리된 마우스는 또한, AAV9-hTK2 만으로 처리된 마우스에 비해, 소변에서 단백질 함량의 감소(도 21) 및 지수 BUN의 약간 더 낮은 수준(도 22)뿐만 아니라 간에서 더 높은 Tk2 활성(도 23)을 나타내었다.
mtDNA, 소변에서의 단백질 및 BUN에 대한 조합된 데이터는 수명을 또한 증가시키는 AAV2 또는 AAV2+dN으로 동시-치료된 마우스에서 신장 기능이상이 지연될 수 있음을 나타내었다.
실시예 10 - 보충 뉴클레오사이드의 투여는 유전자 요법의 효과를 향상시킴
실시예 9에서 AAV9-hTK2 및 AAV2-hTK2 둘 다로 처리된 돌연변이 및 야생형 마우스의 절반에 실시예 1에 기술된 바와 같이 음료수 중 520 ㎎/㎏/일로 경구 dC + dT를 추가로 투여하였다. 마우스는 마우스당 하루 4㎖를 섭취한다고 가정하였다.
보충 뉴클레오사이드가 제공된 돌연변이 마우스는 상당히 더 길게 생존하며, 180일 이상 생존한다(도 14). 이러한 것은 또한, AAV9-hTK2, 또는 AAV9-hTK2 및 AAV2-hTK2의 조합물로 처리된 마우스에 비해 성장 증가(도 15 및 도 16), 및 동일한 힘 및 운동 협응력을 가졌다. AAV9-hTK2 및 AAV2-hTK2의 조합물로 치료되고 dC+dT가 추가로 보충된 마우스는 간에서 더 높은 수준의 mtDNA를 나타내었다.
실시예 11 - dC+dT 증가와 조합한 AAV9-hTK2의 투여
AAV9-hTK2 단독의 사용에 대한 생존
실시예 1에 기술된 바와 같은 돌연변이 마우스에 출생 후 4일부터 경구 dC+dT(각각 우유 중 260 또는 520 ㎎/㎏/일)를 투여하였다. 출생 후 21일에, 마우스의 절반에 실시예 1에 기술된 바와 같이 AAV9-hTK2를 투여하였다.
dC+dT 치료만에 제공된 돌연변이 마우스는 각각 260 및 520 ㎎/㎏/일 용량에서 평균 31일 및 40일 생존하였다. 후속 AAV9-hTK2를 수용한 돌연변이 마우스는 상당히 더 길게 생존한다.
AAV9-hTK2를 수용한 마우스 중에서, 이러한 마우스의 절반에 출생 후 30일에 AAV2-hTK2를 투여하였다. dC+dT 및 AAV9-hTK2 및 AAV2-hTK2를 수용한 이러한 마우스는 dC+dT 및 AAV9-hTK2 만을 수용한 마우스보다 상당히 더 길게 생존한다.
실시예 12 - dCMP + TMP 증가와 함께 AAV9-hTK2의 투여
AAV9-hTK2 단독 사용에 대한 생존
실시예 1에 기술된 바와 같은 돌연변이 마우스에 출생 후 4일에 dCMP + TMP(각각 우유 중 200 ㎎/㎏/일 또는 400 ㎎/㎏/일)를 투여하였다. 출생 후 21일에, 마우스의 절반에 실시예 1에 기술된 바와 같이 AAV9-hTK2를 투여하였다.
dCMP + TMP 치료 만을 제공한 돌연변이 마우스는 각각 200 및 400 ㎎/㎏/일에서 평균 35일 및 44일 생존한다. 후속 AAV9-hTK2를 수용한 돌연변이 마우스는 상당히 더 길게 생존한다.
AAV9-hTK2를 수용한 마우스 중에서, 이러한 마우스의 절반에 출생 후 30일에 AAV2-hTK2를 투여하였다. dCMP + TMP 및 AAV9-hTK2 및 AAV2-hTK2를 수용한 이러한 마우스는 dC+dT 및 AAV9-hTK2 만을 수용한 마우스보다 상당히 더 길게 생존한다.
참고문헌
Figure pct00036
Figure pct00037
Figure pct00038
SEQUENCE LISTING <110> The Trustees of Columbia University in the City of New York <120> Gene Therapy for Diseases Caused by Unbalanced Nucleotide Pools including Mitochondrial DNA Depletion Syndromes <130> WO/2019/204593 <140> PCT/US2019/028108 <141> 2019-04-18 <150> US 62/659,281 <151> 2018-04-18 <160> 24 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 234 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Gly Ala Phe Cys Gln Arg Pro Ser Ser Asp Lys Glu Gln Glu Lys 1 5 10 15 Glu Lys Lys Ser Val Ile Cys Val Glu Gly Asn Ile Ala Ser Gly Lys 20 25 30 Thr Thr Cys Leu Glu Phe Phe Ser Asn Ala Thr Asp Val Glu Val Leu 35 40 45 Thr Glu Pro Val Ser Lys Trp Arg Asn Val Arg Gly His Asn Pro Leu 50 55 60 Gly Leu Met Tyr His Asp Ala Ser Arg Trp Gly Leu Thr Leu Gln Thr 65 70 75 80 Tyr Val Gln Leu Thr Met Leu Asp Arg His Thr Arg Pro Gln Val Ser 85 90 95 Ser Val Arg Leu Met Glu Arg Ser Ile His Ser Ala Arg Tyr Ile Phe 100 105 110 Val Glu Asn Leu Tyr Arg Ser Gly Lys Met Pro Glu Val Asp Tyr Val 115 120 125 Val Leu Ser Glu Trp Phe Asp Trp Ile Leu Arg Asn Met Asp Val Ser 130 135 140 Val Asp Leu Ile Val Tyr Leu Arg Thr Asn Pro Glu Thr Cys Tyr Gln 145 150 155 160 Arg Leu Lys Lys Arg Cys Arg Glu Glu Glu Lys Val Ile Pro Leu Glu 165 170 175 Tyr Leu Glu Ala Ile His His Leu His Glu Glu Trp Leu Ile Lys Gly 180 185 190 Ser Leu Phe Pro Met Ala Ala Pro Val Leu Val Ile Glu Ala Asp His 195 200 205 His Met Glu Arg Met Leu Glu Leu Phe Glu Gln Asn Arg Asp Arg Ile 210 215 220 Leu Thr Pro Glu Asn Arg Lys His Cys Pro 225 230 <210> 2 <211> 4678 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2 gccaagttat gggtgcgttc tgccagcgtc ctagcagtga taaagaacag gaaaaagaga 60 aaaaatcagt gatctgtgtc gagggcaata ttgcaagtgg gaagacgaca tgcctggaat 120 tcttctccaa cgcgacagac gtcgaggtgt taacggagcc tgtgtccaag tggagaaatg 180 tccgtggcca caatcctctg ggcctgatgt accacgatgc ctctcgctgg ggtcttacgc 240 tacagactta tgtgcagctc accatgctgg acaggcatac tcgtcctcag gtgtcatctg 300 tacggttgat ggagaggtcg attcacagcg caagatacat ttttgtagaa aacctgtata 360 gaagtgggaa gatgccagaa gtggactatg tagttctgtc ggaatggttt gactggatct 420 tgaggaacat ggacgtgtct gttgatttga tagtttacct tcggaccaat cctgagactt 480 gttaccagag gttaaagaag agatgcaggg aagaggagaa ggtcattccg ctggaatacc 540 tggaagcaat tcaccatctc catgaggagt ggctcatcaa aggcagcctt ttccccatgg 600 cagcccctgt tctggtgatt gaggctgacc accacatgga gaggatgtta gaactctttg 660 aacaaaatcg ggatcgaata ttaactccag agaatcggaa gcattgccca taggaggcaa 720 aaggtctatg gctcatgtct gaaaaatgcc tgctgctgcc aagttagcta ttgggagcaa 780 tctggaaaaa cttgctccca ggagggcttt gtgtctggcc agcttgattt tcctaatggt 840 ctcatctcct ttgctagtgt ctttgtcatg cgtctctggc cctcgtgggt aaatgacaaa 900 cgggaccaat gggtttgcca agccctttgc tgttcgcagc ctcacattcc cccggtgcct 960 ctcccatggc tttgtgctgc tgagtcgctc tcatgaagcc cttagggaga gcacctgttg 1020 tgtgcctgac accacgctgg agctgtgtac caatcgtctc agccttcatt aggaggccga 1080 ggtaggagtc ttatatccca ggtgaggaat ttgaagctca gaaaggttga ggggctcccc 1140 agaggtcaca cagcctgtgt gcagtggagc tggcaccatt cagactttca gccgactcag 1200 caactttccc ttgccctggg ctgcctcctc ctgagagctg ttccccaccg ccctgcctct 1260 tccggttgga ggctctcatg tctctttggg gagagctggc agtgtgcgga gctgataaca 1320 ttttcccaat attgagcagt tcccaaggac agtcagcatt tctagacttc cacaaaatta 1380 tgctgcattt ggctggagcc cggtgttcag tggtttccct gcccgaggtc gctgcagccc 1440 catctaccac atcttcatgt ggacattgag attcacatgc tggctcctga agggtgctca 1500 gtctccttgg tgattaaggt cctgcttgaa ctgctgccaa ctccatgtca gggaagtcgc 1560 ttttggtgcc tggctggttt gcccagagcc aagctggggc aaggggcagc cagccctggc 1620 ttccaaggct cccgtactgt ctgtgtcctt gtataaggag ctttgctctt ggaattactg 1680 aaagtctgtg gcccaagaga gagacacaag tggccttaag tctttttgaa gtgttatttc 1740 atccagggaa atgcctcgag ccatagagcc tgaaatcatc tttgttggct cagaaaatac 1800 cttagcttca ctcagctgga ctgcattgaa ggcgaggctg ccccttggat caagcagaaa 1860 acaagagaaa gaaagaacgt tccctttggg gatagtctgg aaagttggga tttgcaaata 1920 aaggctctgg aagcattgct ggtcctgaag ctttggaggt gggcagagag agcttcaaga 1980 agactagatg caaaccctgg aaaggattaa ggctcaactc tggagaaaca ggccacagcc 2040 tctcagagca gctgttggct gtaaatagag gtagcaaggc cgctcccagg cccctgtgag 2100 tgtgggcacc tgtgcatgca atgctccgac tctgcagagg tgccaagtgc ccctgctggg 2160 ccagtcccag agagttagga agtcaaggcc tgcaactcct ggttcttcct gtttggacca 2220 gttcttgtgc cattggcagg atgagaggca gcagccaggc gggagctgtg tctagcagca 2280 cctgtagccc acgtgctgct aattagctgg aaaactggcg aaggcagaac ctttgctacc 2340 aggaatcttg acatgtgggg tctgtctttg agaatttgta aatgaacagt ccaatatttc 2400 ctctcggctc attttgcaca tccatttttg gggaaatgtg atttctctct cttttttttt 2460 tttttttttt gcctaaggca caatctcaag aggtcctgag accacgtacc catgattttt 2520 ttcttgctct gtgataccca ataactcctt cacctaagcc ctgttgttga ttttgaagtg 2580 cttcctaggc cagtgatttt agcttctgcc agctgctttt gccagtagat taacgtgttt 2640 ttatttttca aactccgtgt ttcctaacgt ggagtgtatg ggtctaagag agcctgctgt 2700 cctccctgcc ttccaccttg gagaggaggc tggacgcatc agcagtggcc agggcaggtc 2760 gcaaaatctc ccagcctaga gaccacacct gaaacggctg aagccagctt gcacaagggc 2820 tgctgtccct ctgcggcagg cagagctggt gggggcaggg gtcacagagc agtcatagac 2880 accatggacc agggcaggag aagggcagat ggcacatggg cacaacaggg ccttgtcctt 2940 agagcactgg ggggtcatgg ctgggagggg catggcaggg gctggcatcc ctgtagagcc 3000 agaggggcca cccagggcag tgacattcca gatatgttgg gctcacctca tccttgctgt 3060 gagactggag ttccatgggg acatgaagtc agtacaccgc agagctgctc agctgctcta 3120 cctctcgctg acttttttgt tgcacatata cattttcttt caattagcat ttatttcagc 3180 ttttatttaa gctttttgac agtacatgta aaatatatga ttataaccat ttaaaaatac 3240 cttatgtacc tggttttttt tggaaactag atagaaatat atttatcttt tacataaaag 3300 aagtgtgtag tggggtggtc cagggctttg tggtggctta gtggccatcg gggtcccagg 3360 ctcttcccac ctttctcttt tgggtccacc tcttggctcc tggcttcctt cctctggggc 3420 ctgactgtcc aggatggcag ctggagctcc tgctctgggc acggttggca tcagagccca 3480 ctgctcccca tccactcttt aatccagatg ctggtaatgt ccctttccaa ggcataacta 3540 agataagctg gaaggttctt acgaggcttt gctagaggcc ctgggaggtg gggggaaagg 3600 caagagggca gtgcccaccc atagaccggg tcacatgacc tggcatcagc gccgtggggt 3660 cctttgggct tcacctccct ctcccctctg cccccacgtc atcccaccct catcctcacc 3720 ctcaccattc ccatcccgta ccgtaatgtc ccttgcaagg cctaactctg tgaggaatga 3780 aaccacctca tccttgttcc aataacatga gtgaccgaat ttacaaacga gtgaatgtgg 3840 acctctggaa acattaccca gcttgttttt acttttcact ttctctttct gcccctttca 3900 tttccgtagg agccctttac ctagatgaga agtgtccccc cgcctgggga atatatcagt 3960 cagaacaatc ttcctgcaga catgcaccat tagacccgag tgacggtggt gccatttaaa 4020 cctcagagca ggtaaaaggt ggtcctgaaa cctgtctacc cacagggtgc tatggaatct 4080 gaatcacttc ttttttccta gagccctggg gtggggagct ccctcaagtg ttcacatgtg 4140 tgtggaatga ggaacaccca tctccttggc cctctccacc ctgaagagtt agttattaaa 4200 ataattggca agctcttgca aatgtcagtc atccattgtt cagaatggaa tagcaataat 4260 acatccctgg ctgccctggg cttggccagg attactcact gaaggcctca gggttactgg 4320 cacacacttt cttttcctaa taatcccatc ccctcagctt tcctaaggct agagtgaatt 4380 tcgtgttcct ttagtttaca taagatggtg aacttggcaa aagctatcat taaacagaag 4440 ctaagagaaa gcctatgtcg tggaatccag aatgggtatt gccattcact gctgtccaca 4500 gaagctgtct tgaatttctt tctgtgtctt ttcttttttt ttctttaaga ctgttgttta 4560 ccagactggg ctctgtggaa cacaggtgtc ctgggagatg gttaatcatt acaaaatatt 4620 ggtaacaatc taaagatgca tacataagag agtggtcaaa taaaccattt tccattca 4678 <210> 3 <211> 183 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Met Ala Ala Gly Arg Leu Phe Leu Ser Arg Leu Arg Ala Pro Phe Ser 1 5 10 15 Ser Met Ala Lys Ser Pro Leu Glu Gly Val Ser Ser Ser Arg Gly Leu 20 25 30 His Ala Gly Arg Gly Pro Arg Arg Leu Ser Ile Glu Gly Asn Ile Ala 35 40 45 Val Gly Lys Ser Thr Phe Val Lys Leu Leu Thr Lys Thr Tyr Pro Glu 50 55 60 Trp His Val Ala Thr Glu Pro Val Ala Thr Trp Gln Asn Ile Gln Ala 65 70 75 80 Ala Gly Thr Gln Lys Ala Cys Thr Ala Gln Ser Leu Gly Asn Leu Leu 85 90 95 Asp Met Met Tyr Arg Glu Pro Ala Arg Trp Ser Tyr Thr Phe Gln Thr 100 105 110 Phe Ser Phe Leu Ser Arg Leu Lys Val Gln Leu Glu Pro Phe Pro Glu 115 120 125 Lys Leu Leu Gln Ala Arg Lys Pro Val Gln Ile Phe Glu Arg Leu His 130 135 140 Phe Glu Ala Leu Met Asn Ile Pro Val Leu Val Leu Asp Val Asn Asp 145 150 155 160 Asp Phe Ser Glu Glu Val Thr Lys Gln Glu Asp Leu Met Arg Glu Val 165 170 175 Asn Thr Phe Val Lys Asn Leu 180 <210> 4 <211> 879 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 4 aacggtgcgc tggagcgagt gagcagcgat acctagggcg gaagtgctct cggcggaagt 60 gatcgctgtg tgaatcgtgg gtgggatggc cgcgggccgc ctctttctaa gtcggcttcg 120 agcacccttc agttccatgg ccaagagccc actcgagggc gtttcctcct ccagaggcct 180 gcacgcgggg cgcgggcccc gaaggctctc catcgaaggc aacattgctg tgggaaagtc 240 cacgtttgtg aagttactca cgaaaactta cccagaatgg cacgtagcta cagaacctgt 300 agcaacatgg cagaatatcc aggctgctgg cacccaaaaa gcctgcactg cccaaagtct 360 tggaaacttg ctggatatga tgtaccggga gccagcacga tggtcctaca cattccagac 420 attttccttt ttgagccgcc tgaaagtaca gctggagccc ttccctgaga aactcttaca 480 ggccaggaag ccagtacaga tctttgagag gctccacttt gaggctctga tgaacattcc 540 agtgctggtg ttggatgtca atgatgattt ttctgaggaa gtaaccaaac aagaagacct 600 catgagagag gtaaacacct ttgtaaagaa tctgtaacca ataccatgaa gttcaggctg 660 tgatctgggc tccctgactt tctgaagcta gaaaaatgtt gtgtctccca accacctttc 720 catccccagc ccctctcatc cctggagcac tctgccgctc aagagctggt ttgttaatta 780 ttgttagact ttgccattgt tttcttttgt acctgaagca ttttgaaaat aaagtttact 840 taagttatgc ttgtttttct aaaaaaaaaa aaaaaaaaa 879 <210> 5 <211> 423 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Met Leu Leu Leu Arg Leu Pro Pro His Arg Ser His Ala Ser Pro Leu 1 5 10 15 Asp Cys Lys Leu Gln Asp Arg Cys Arg Lys Cys Tyr Ser Pro Arg Ser 20 25 30 Gly Gln Ala Cys Pro Pro Ala Leu Ala Ala Ala Trp Leu Arg Arg Cys 35 40 45 Glu Arg Arg Gly Gly Arg Pro Arg Gly Gly Arg Arg Lys Glu Leu Thr 50 55 60 Leu Gly Leu Arg Pro Ala Arg Cys Ser Ala Pro Gly Pro Ala Lys Asp 65 70 75 80 Asp Ala Trp Arg Pro Gln Ala Gly Arg Ser Ser Ser Asp Thr Asn Glu 85 90 95 Ser Glu Ile Lys Ser Asn Glu Glu Pro Leu Leu Arg Lys Ser Ser Arg 100 105 110 Arg Phe Val Ile Phe Pro Ile Gln Tyr Pro Asp Ile Trp Lys Met Tyr 115 120 125 Lys Gln Ala Gln Ala Ser Phe Trp Thr Ala Glu Glu Val Asp Leu Ser 130 135 140 Lys Asp Leu Pro His Trp Asn Lys Leu Lys Ala Asp Glu Lys Tyr Phe 145 150 155 160 Ile Ser His Ile Leu Ala Phe Phe Ala Ala Ser Asp Gly Ile Val Asn 165 170 175 Glu Asn Leu Val Glu Arg Phe Ser Gln Glu Val Gln Val Pro Glu Ala 180 185 190 Arg Cys Phe Tyr Gly Phe Gln Ile Leu Ile Glu Asn Val His Ser Glu 195 200 205 Met Tyr Ser Leu Leu Ile Asp Thr Tyr Ile Arg Asp Pro Lys Lys Arg 210 215 220 Glu Phe Leu Phe Asn Ala Ile Glu Thr Met Pro Tyr Val Lys Lys Lys 225 230 235 240 Ala Asp Trp Ala Leu Arg Trp Ile Ala Asp Arg Lys Ser Thr Phe Gly 245 250 255 Glu Arg Val Val Ala Phe Ala Ala Val Glu Gly Val Phe Phe Ser Gly 260 265 270 Ser Phe Ala Ala Ile Phe Trp Leu Lys Lys Arg Gly Leu Met Pro Gly 275 280 285 Leu Thr Phe Ser Asn Glu Leu Ile Ser Arg Asp Glu Gly Leu His Cys 290 295 300 Asp Phe Ala Cys Leu Met Phe Gln Tyr Leu Val Asn Lys Pro Ser Glu 305 310 315 320 Glu Arg Val Arg Glu Ile Ile Val Asp Ala Val Lys Ile Glu Gln Glu 325 330 335 Phe Leu Thr Glu Ala Leu Pro Val Gly Leu Ile Gly Met Asn Cys Ile 340 345 350 Leu Met Lys Gln Tyr Ile Glu Phe Val Ala Asp Arg Leu Leu Val Glu 355 360 365 Leu Gly Phe Ser Lys Val Phe Gln Ala Glu Asn Pro Phe Asp Phe Met 370 375 380 Glu Asn Ile Ser Leu Glu Gly Lys Thr Asn Phe Phe Glu Lys Arg Val 385 390 395 400 Ser Glu Tyr Gln Arg Phe Ala Val Met Ala Glu Thr Thr Asp Asn Val 405 410 415 Phe Thr Leu Asp Ala Asp Phe 420 <210> 6 <211> 4913 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 6 atgaggtaaa tgttgctgtt gcgtcttccc cctcaccgca gtcacgccag cccgttagat 60 tgcaagttgc aggaccgctg taggaaatgt tattcgccgc ggtcaggaca ggcctgtccg 120 cccgccctcg ccgcagcctg gcttcgtcgt tgcgagcgcc ggggaggccg tccccgggga 180 gggcggagga aggagctgac tttgggtttg cgtcccgctc gctgctctgc cccggggcca 240 gccaaggacg acgcttggag gcctcaggcc gggagatcat cttcagacac caacgaaagt 300 gaaataaagt caaatgaaga gccactccta agaaagagtt ctcgccggtt tgtcatcttt 360 ccaatccagt accctgatat ttggaaaatg tataaacagg cacaggcttc cttctggaca 420 gcagaagagg tcgacttatc aaaggatctc cctcactgga acaagcttaa agcagatgag 480 aagtacttca tctctcacat cttagccttt tttgcagcca gtgatggaat tgtaaatgaa 540 aatttggtgg agcgctttag tcaggaggtg caggttccag aggctcgctg tttctatggc 600 tttcaaattc tcatcgagaa tgttcactca gagatgtaca gtttgctgat agacacttac 660 atcagagatc ccaagaaaag ggaattttta tttaatgcaa ttgaaaccat gccctatgtt 720 aagaaaaaag cagattgggc cttgcgatgg atagcagata gaaaatctac ttttggggaa 780 agagtggtgg cctttgctgc tgtagaagga gttttcttct caggatcttt tgctgctata 840 ttctggctaa agaagagagg tcttatgcca ggactcactt tttccaatga actcatcagc 900 agagatgaag gacttcactg tgactttgct tgcctgatgt tccaatactt agtaaataag 960 ccttcagaag aaagggtcag ggagatcatt gttgatgctg tcaaaattga gcaggagttt 1020 ttaacagaag ccttgccagt tggcctcatt ggaatgaatt gcattttgat gaaacagtac 1080 attgagtttg tagctgacag attacttgtg gaacttggat tctcaaaggt ttttcaggca 1140 gaaaatcctt ttgattttat ggaaaacatt tctttagaag gaaaaacaaa tttctttgag 1200 aaacgagttt cagagtatca gcgttttgca gttatggcag aaaccacaga taacgtcttc 1260 accttggatg cagattttta aaaaacctct cgttttaaaa ctctataaac ttgtcattgg 1320 taaatagtag tctattttcc tctgcttaaa aaaaatttta agtatatcct ttaaaggact 1380 gggggtttgc tcaaaaggaa atccaaaacc tattctaaac aatttgcatt tatataattt 1440 tcctgtttaa caacaagagt gtgacctaaa tgcttttgtc ttgtcactga aataaaagat 1500 ggcattatgt ggttaagagc atggggcgag gggtcagaca tgagtctaag gttctgccct 1560 tactccagtg tgtgaccctt ggcaagtcag ttaatcttgg taaacctcgg tgtacttatc 1620 tttaaaatgg gagtaatagt aggtcctaaa ttcatagagt ggatattagg attaggatgc 1680 aaaaataaat gcttaaccaa cactactact gttagcacca ctactaatta tcattcattg 1740 ataatattaa ttgcaatgat gttgtaataa aatactctca tttccttaaa ataattgtga 1800 ttctaggtcc taggatctag aattagatct ttgtattttt aatgcttagg ggaagaatat 1860 aagtatctcc ttaaaaagaa cataattctc attcacgcaa gaataagttc tttgaattcc 1920 ttagtatgta gtgaagaaaa tttagttgtt agttgctttg ggaagcctac ttatggagtg 1980 gaaaccagga ggttatcatg gtagttgacc ttataagaaa aatgattctt cttcagaaat 2040 taaaaacata actattgcca gatttagctc tggaatgttt agaatcaggc tagaatagca 2100 ttttccaaag aatattctaa gagctattag ctcctctaga tatttttttg ggggaaaaag 2160 gggattctgt ggtcagatga gtttgggaaa tgctgaacac ttcattcttc tttagcaagt 2220 acagtcagta catcaaagac tgagcagttc agtggtacat aaatttatct cgccctgcat 2280 attcccaaca tacttaacac agatgttttt tacctgttaa catctcaccc agctagtgtt 2340 cctcagaaca aagattggaa aaagctggcc gagaaccatt tatacataga ggaagggctt 2400 atggactgag aaagggagaa catggtaggg attattgaat catttcaaat ttataccagc 2460 ctgaatagtg taccagcaat tgacttaggc tgtgtttctt tatggtttta aaactcttga 2520 gctgttataa gagatagttc ttttaatgtg actatgcaac atgatagcca atggtgaggg 2580 aaaaggaggt ttctctagaa gagtctgatg aaaggccggg aaccaaggtt tttgagaagt 2640 ctgcccctat ttatttttag taagtatcaa gaggtagcct gagcctagtt agagttagac 2700 ctgtctttgg atgaagaagt cttaatactg aaatactgaa tttttaatac attattattt 2760 ggtattctgt ataccccttc aagcagttgt ttcccattcc caacaaactg tactttatac 2820 aattctggat gctaaaactt agagattttc tctttgcata aattttggct ccattctttc 2880 cataacaatc taatcaaaac tgggagttct caagtgaatg caaaaggagc aggccataac 2940 tttatttgtt agatacactg tcagaaactt gagatctttt ggcctatgat aataccatta 3000 atttttgcat tgcttcagtt tgccaagtgt ttttacatca tctcatttga tctcaaaaca 3060 gcttgacaga gcaactgtta ttgaaatatt acagatggaa agaatgaggc tcagggaagt 3120 taaatgactt ggccaagatc tgctcatcgt cactgtctgt acagtatttt tttttagagg 3180 ttgtaatgtc tcagatttag tcctttacca tctatgttga tttgcttttg tctatttcct 3240 cattaattga atatacttta aatatatata ttaaagtatc aaaatataga gagacatttg 3300 aactgtattc aggtaatatg tttaaagata tttatatatt gccatacaaa aacttaacat 3360 ttaaaactga taatatctgt aatgacatca gaatgaaaga aaaaaaattg tacagtgtat 3420 attcctttgt tttgaatcca aatctttttc ataggtaatg acagatgcct taatgtgaag 3480 cttatttata atagcaataa acctaactgg atttggatga agaagtctta atactgacat 3540 actggatttt taatgcactg gtttgttatt tggtattcta tctctttttc caggcctcca 3600 ggttgcacat ttatttatta tgttcaatac tttggttctt agttcttaaa gaatcaagaa 3660 gttgtgtaat cttttaaaaa tattatcttg cagataaaga aaaaaattaa gagtgtgttt 3720 acaactgttt tctctttttt acagtacatg tatttaaatc attgctataa taaagttaag 3780 ttcattagga atataaaaac ttgcagttct atgatagatt gcatttatta aaaatgtttc 3840 attgtatcac atagaaatat ggccaggaag gacttgagaa gacagtttga tccattgctt 3900 ttagacagga ctgggttttg ctgtccaatt atatacaata atagtttttc ttacaactaa 3960 gctggcccca gccttgtctt gatattaata catgaaattt ttataattgt ctcattgtct 4020 catttagaaa catccatatt tttctgcttt ttctattgcc attttttatt tgtgcatgaa 4080 ttgattattg agaaaatgta gcagtttgca tatttaaaaa ttaatcattt tgcattttac 4140 atttaaatat gctaacatca ctgtcataga attcccaaat ttcatttgta gatactgaac 4200 taagggctaa tgtcaggagc tgatttttaa tgataaagct gcagatgggc taaataaaag 4260 ccaaattaat cctacaatca ggtattatgt ttttaaacca agttgagtga attggtagtg 4320 gacttgggaa atcttcccca gcagaatctg gatgaatggc acagaattga aatctctttg 4380 tttcccacca tttcccttta agtgctctgc tcctttgtaa aaagttaaag atttgaaaga 4440 gaatctcata ttcccgaggc attaggaaga aaggatttaa tcccttcaat ttggggctta 4500 atcttgttta aaaaaatgta agtgaagatg gaaggctgga gagaatgatt gctttttgta 4560 cagttaaata aggtcacaat attcttacat actttgtttt acaactgtgt tttcattttt 4620 tcaaatgtct ggccatttag caaagttatt tactatttac tgtgtacata gaaagcttta 4680 ttatgtgtgg tgtatctaaa ttttttttgc tgaaatacat tatggtcaat caagccaagc 4740 ctgcatgtac agaatttgtt tttttttcaa ataaattagt tgttttctta tttttttggc 4800 ttagtatgtt gaaataaact atggtatctt catcattttg tacatttcct ttttgaggaa 4860 ggtttcttta taagtgcaag ggctacccta ataaaggaat gtatatactt act 4913 <210> 7 <211> 482 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Met Ala Ala Leu Met Thr Pro Gly Thr Gly Ala Pro Pro Ala Pro Gly 1 5 10 15 Asp Phe Ser Gly Glu Gly Ser Gln Gly Leu Pro Asp Pro Ser Pro Glu 20 25 30 Pro Lys Gln Leu Pro Glu Leu Ile Arg Met Lys Arg Asp Gly Gly Arg 35 40 45 Leu Ser Glu Ala Asp Ile Arg Gly Phe Val Ala Ala Val Val Asn Gly 50 55 60 Ser Ala Gln Gly Ala Gln Ile Gly Ala Met Leu Met Ala Ile Arg Leu 65 70 75 80 Arg Gly Met Asp Leu Glu Glu Thr Ser Val Leu Thr Gln Ala Leu Ala 85 90 95 Gln Ser Gly Gln Gln Leu Glu Trp Pro Glu Ala Trp Arg Gln Gln Leu 100 105 110 Val Asp Lys His Ser Thr Gly Gly Val Gly Asp Lys Val Ser Leu Val 115 120 125 Leu Ala Pro Ala Leu Ala Ala Cys Gly Cys Lys Val Pro Met Ile Ser 130 135 140 Gly Arg Gly Leu Gly His Thr Gly Gly Thr Leu Asp Lys Leu Glu Ser 145 150 155 160 Ile Pro Gly Phe Asn Val Ile Gln Ser Pro Glu Gln Met Gln Val Leu 165 170 175 Leu Asp Gln Ala Gly Cys Cys Ile Val Gly Gln Ser Glu Gln Leu Val 180 185 190 Pro Ala Asp Gly Ile Leu Tyr Ala Ala Arg Asp Val Thr Ala Thr Val 195 200 205 Asp Ser Leu Pro Leu Ile Thr Ala Ser Ile Leu Ser Lys Lys Leu Val 210 215 220 Glu Gly Leu Ser Ala Leu Val Val Asp Val Lys Phe Gly Gly Ala Ala 225 230 235 240 Val Phe Pro Asn Gln Glu Gln Ala Arg Glu Leu Ala Lys Thr Leu Val 245 250 255 Gly Val Gly Ala Ser Leu Gly Leu Arg Val Ala Ala Ala Leu Thr Ala 260 265 270 Met Asp Lys Pro Leu Gly Arg Cys Val Gly His Ala Leu Glu Val Glu 275 280 285 Glu Ala Leu Leu Cys Met Asp Gly Ala Gly Pro Pro Asp Leu Arg Asp 290 295 300 Leu Val Thr Thr Leu Gly Gly Ala Leu Leu Trp Leu Ser Gly His Ala 305 310 315 320 Gly Thr Gln Ala Gln Gly Ala Ala Arg Val Ala Ala Ala Leu Asp Asp 325 330 335 Gly Ser Ala Leu Gly Arg Phe Glu Arg Met Leu Ala Ala Gln Gly Val 340 345 350 Asp Pro Gly Leu Ala Arg Ala Leu Cys Ser Gly Ser Pro Ala Glu Arg 355 360 365 Arg Gln Leu Leu Pro Arg Ala Arg Glu Gln Glu Glu Leu Leu Ala Pro 370 375 380 Ala Asp Gly Thr Val Glu Leu Val Arg Ala Leu Pro Leu Ala Leu Val 385 390 395 400 Leu His Glu Leu Gly Ala Gly Arg Ser Arg Ala Gly Glu Pro Leu Arg 405 410 415 Leu Gly Val Gly Ala Glu Leu Leu Val Asp Val Gly Gln Arg Leu Arg 420 425 430 Arg Gly Thr Pro Trp Leu Arg Val His Arg Asp Gly Pro Ala Leu Ser 435 440 445 Gly Pro Gln Ser Arg Ala Leu Gln Glu Ala Leu Val Leu Ser Asp Arg 450 455 460 Ala Pro Phe Ala Ala Pro Ser Pro Phe Ala Glu Leu Val Leu Pro Pro 465 470 475 480 Gln Gln <210> 8 <211> 1679 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 8 cgactgccga gctccgccct ccaggcggcc ccacccgcct gccgtcctgg ggcgccgccg 60 ccccgccgcc ggcagtggac cgctgtgcgc gaaccctgaa ccctacggtc ccgacccgcg 120 ggcgaggccg ggtacctggg ctgggatccg gagcaagcgg gcgagggcag cgccctaagc 180 aggcatcccc gcaggcccgg agcgatggca gccttgatga ccccgggaac cggggcccca 240 cccgcgcctg gtgacttctc cggggaaggg agccagggac ttcccgaccc ttcgccagag 300 cccaagcagc tcccggagct gatccgcatg aagcgagacg gaggccgcct gagcgaagcg 360 gacatcaggg gcttcgtggc cgctgtggtg aatgggagcg cgcagggcgc acagatcggg 420 gccatgctga tggccatccg acttcggggc atggatctgg aggagacctc ggtgctgacc 480 caggccctgg ctcagtcggg acagcagctg gagtggccag aggcctggcg ccagcagctt 540 gtggacaagc attccacagg gggtgtgggt gacaaggtca gcctggtcct cgcacctgcc 600 ctggcggcat gtggctgcaa ggtgccaatg atcagcggac gtggtctggg gcacacagga 660 ggcaccttgg ataagctgga gtctattcct ggattcaatg tcatccagag cccagagcag 720 atgcaagtgc tgctggacca ggcgggctgc tgtatcgtgg gtcagagtga gcagctggtt 780 cctgcggacg gaatcctata tgcagccaga gatgtgacag ccaccgtgga cagcctgcca 840 ctcatcacag cctccattct cagtaagaaa ctcgtggagg ggctgtccgc tctggtggtg 900 gacgttaagt tcggaggggc cgccgtcttc cccaaccagg agcaggcccg ggagctggca 960 aagacgctgg ttggcgtggg agccagccta gggcttcggg tcgcggcagc gctgaccgcc 1020 atggacaagc ccctgggtcg ctgcgtgggc cacgccctgg aggtggagga ggcgctgctc 1080 tgcatggacg gcgcaggccc gccagactta agggacctgg tcaccacgct cgggggcgcc 1140 ctgctctggc tcagcggaca cgcggggact caggcccagg gcgctgcccg ggtggccgcg 1200 gcgctggacg acggctcggc ccttggccgc ttcgagcgga tgctggcggc gcagggcgtg 1260 gatcccggtc tggcccgagc cctgtgctcg ggaagtcccg cagaacgccg gcagctgctg 1320 cctcgcgccc gggagcagga ggagctgctg gcgcccgcag atggcaccgt ggagctggtc 1380 cgggcgctgc cgctggcgct ggtgctgcac gagctcgggg ccgggcgcag ccgcgctggg 1440 gagccgctcc gcctgggggt gggcgcagag ctgctggtcg acgtgggtca gaggctgcgc 1500 cgtgggaccc cctggctccg cgtgcaccgg gacggccccg cgctcagcgg cccgcagagc 1560 cgcgccctgc aggaggcgct cgtactctcc gaccgcgcgc cattcgccgc cccctcgccc 1620 ttcgcagagc tcgttctgcc gccgcagcaa taaagctcct ttgccgcgaa aaaaaaaaa 1679 <210> 9 <211> 463 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Met Ala Ala Ser Met Phe Tyr Gly Arg Leu Val Ala Val Ala Thr Leu 1 5 10 15 Arg Asn His Arg Pro Arg Thr Ala Gln Arg Ala Ala Ala Gln Val Leu 20 25 30 Gly Ser Ser Gly Leu Phe Asn Asn His Gly Leu Gln Val Gln Gln Gln 35 40 45 Gln Gln Arg Asn Leu Ser Leu His Glu Tyr Met Ser Met Glu Leu Leu 50 55 60 Gln Glu Ala Gly Val Ser Val Pro Lys Gly Tyr Val Ala Lys Ser Pro 65 70 75 80 Asp Glu Ala Tyr Ala Ile Ala Lys Lys Leu Gly Ser Lys Asp Val Val 85 90 95 Ile Lys Ala Gln Val Leu Ala Gly Gly Arg Gly Lys Gly Thr Phe Glu 100 105 110 Ser Gly Leu Lys Gly Gly Val Lys Ile Val Phe Ser Pro Glu Glu Ala 115 120 125 Lys Ala Val Ser Ser Gln Met Ile Gly Lys Lys Leu Phe Thr Lys Gln 130 135 140 Thr Gly Glu Lys Gly Arg Ile Cys Asn Gln Val Leu Val Cys Glu Arg 145 150 155 160 Lys Tyr Pro Arg Arg Glu Tyr Tyr Phe Ala Ile Thr Met Glu Arg Ser 165 170 175 Phe Gln Gly Pro Val Leu Ile Gly Ser Ser His Gly Gly Val Asn Ile 180 185 190 Glu Asp Val Ala Ala Glu Ser Pro Glu Ala Ile Ile Lys Glu Pro Ile 195 200 205 Asp Ile Glu Glu Gly Ile Lys Lys Glu Gln Ala Leu Gln Leu Ala Gln 210 215 220 Lys Met Gly Phe Pro Pro Asn Ile Val Glu Ser Ala Ala Glu Asn Met 225 230 235 240 Val Lys Leu Tyr Ser Leu Phe Leu Lys Tyr Asp Ala Thr Met Ile Glu 245 250 255 Ile Asn Pro Met Val Glu Asp Ser Asp Gly Ala Val Leu Cys Met Asp 260 265 270 Ala Lys Ile Asn Phe Asp Ser Asn Ser Ala Tyr Arg Gln Lys Lys Ile 275 280 285 Phe Asp Leu Gln Asp Trp Thr Gln Glu Asp Glu Arg Asp Lys Asp Ala 290 295 300 Ala Lys Ala Asn Leu Asn Tyr Ile Gly Leu Asp Gly Asn Ile Gly Cys 305 310 315 320 Leu Val Asn Gly Ala Gly Leu Ala Met Ala Thr Met Asp Ile Ile Lys 325 330 335 Leu His Gly Gly Thr Pro Ala Asn Phe Leu Asp Val Gly Gly Gly Ala 340 345 350 Thr Val His Gln Val Thr Glu Ala Phe Lys Leu Ile Thr Ser Asp Lys 355 360 365 Lys Val Leu Ala Ile Leu Val Asn Ile Phe Gly Gly Ile Met Arg Cys 370 375 380 Asp Val Ile Ala Gln Gly Ile Val Met Ala Val Lys Asp Leu Glu Ile 385 390 395 400 Lys Ile Pro Val Val Val Arg Leu Gln Gly Thr Arg Val Asp Asp Ala 405 410 415 Lys Ala Leu Ile Ala Asp Ser Gly Leu Lys Ile Leu Ala Cys Asp Asp 420 425 430 Leu Asp Glu Ala Ala Arg Met Val Val Lys Leu Ser Glu Ile Val Thr 435 440 445 Leu Ala Lys Gln Ala His Val Asp Val Lys Phe Gln Leu Pro Ile 450 455 460 <210> 10 <211> 2182 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 10 ccgcctgtcg cctgtgcgcc tgcgcgcggc gccgagggga cggggtccga ctcagaaatg 60 gcggcctcca tgttctacgg caggctagtg gccgtggcca cccttcggaa ccaccggcct 120 cggacggccc agcgggctgc tgctcaggtt ctgggaagtt ctggattgtt taataaccat 180 ggactccaag tacagcagca acagcaaagg aatctctcac tacatgaata catgagtatg 240 gaattattgc aagaagctgg tgtctccgtt cccaaaggat atgtggcaaa gtcaccagat 300 gaagcttatg caattgccaa aaaattaggt tcaaaagatg tcgtgataaa ggcacaggtt 360 ttagctggtg gtagaggaaa aggaacattt gaaagtggcc tcaaaggagg agtgaagata 420 gttttctctc cagaagaagc aaaagctgtt tcttcacaaa tgattgggaa aaaattgttt 480 accaagcaaa cgggagaaaa gggcagaata tgcaatcaag tattggtctg tgagcgaaaa 540 tatcccagga gagaatacta ctttgcaata acaatggaaa ggtcatttca aggtcctgta 600 ttaataggaa gttcacatgg tggtgtcaac attgaagatg ttgctgctga gtctcctgaa 660 gcaataatta aagaacctat tgatattgaa gaaggcatca aaaaggaaca agctctccag 720 cttgcacaga agatgggatt tccacctaat attgtggaat cagcagcaga aaacatggtc 780 aagctttaca gcctttttct gaaatacgat gcaaccatga tagaaataaa tccaatggtg 840 gaagattcag atggagctgt attgtgtatg gatgcaaaga tcaattttga ctctaattca 900 gcctatcgcc aaaagaaaat ctttgatcta caggactgga cccaggaaga tgaaagggac 960 aaagatgctg ctaaggcaaa tctcaactac attggcctcg atggaaatat aggctgccta 1020 gtaaatggtg ctggtttggc tatggccaca atggatataa taaaacttca tggagggact 1080 ccagccaact tccttgatgt tggtggtggt gctacagtcc atcaagtaac agaagcattt 1140 aagcttatca cttcagataa aaaggtactg gctattctgg tcaacatttt tggaggaatc 1200 atgcgctgtg atgttattgc acagggtata gtcatggcag taaaagactt ggaaattaaa 1260 atacctgttg tggtacggtt acaaggtaca cgagtcgatg atgctaaggc actgatagcg 1320 gacagtggac ttaaaatact tgcttgtgat gacttggatg aagctgctag aatggttgta 1380 aagctctctg aaatagtgac cttagcgaag caagcacatg tggatgtgaa atttcagttg 1440 ccaatatgat ctgaaaaccc agtggatggc tgaaggtgtt aaatgtgcta taatcattaa 1500 gaatactgtg ttctgtgtta ttgttctttt tctttttagt gtgtggagat tgtaattgcc 1560 atctaggcac acaaacattt aaaaggattt ggactgcatt taattgtacc attcagaatg 1620 gactgtttgt acgaagcatg tataatgcag ttatcttctt tcttttgtcg cagccagtct 1680 tttttgcttc tcctacaaaa cgtaacttgc aatttgccag tttattattg ttggatacaa 1740 agttcttcat tgataagagt cctataaata agataaatac gaagataaag ctttattctt 1800 tagtgttaaa atacagtata tctaataact agcctcatta gtagagcagt atattaaaac 1860 aatgttttat gtaaaaagtg tttatcttca gcaccaaata catgataaat gtatcaatca 1920 ctatttataa acagagcttt caaacactcc tcagaatatt cttctaagta ttttgatgaa 1980 gtaactttgt aattatttga acattgtttt aatcattagg aaacactgat taactgcaag 2040 tcttcatgat tctgtcatat taagaaacac ctgtaggttt gcttcaaata aaggcatata 2100 taccaaggac ttacagacaa aattaagaat gtcaatttaa gttaataaaa atctcccaat 2160 atgaaaaaaa aaaaaaaaaa aa 2182 <210> 11 <211> 346 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11 Met Thr Ala Thr Leu Ala Ala Ala Ala Asp Ile Ala Thr Met Val Ser 1 5 10 15 Gly Ser Ser Gly Leu Ala Ala Ala Arg Leu Leu Ser Arg Ser Phe Leu 20 25 30 Leu Pro Gln Asn Gly Ile Arg His Cys Ser Tyr Thr Ala Ser Arg Gln 35 40 45 His Leu Tyr Val Asp Lys Asn Thr Lys Ile Ile Cys Gln Gly Phe Thr 50 55 60 Gly Lys Gln Gly Thr Phe His Ser Gln Gln Ala Leu Glu Tyr Gly Thr 65 70 75 80 Lys Leu Val Gly Gly Thr Thr Pro Gly Lys Gly Gly Gln Thr His Leu 85 90 95 Gly Leu Pro Val Phe Asn Thr Val Lys Glu Ala Lys Glu Gln Thr Gly 100 105 110 Ala Thr Ala Ser Val Ile Tyr Val Pro Pro Pro Phe Ala Ala Ala Ala 115 120 125 Ile Asn Glu Ala Ile Glu Ala Glu Ile Pro Leu Val Val Cys Ile Thr 130 135 140 Glu Gly Ile Pro Gln Gln Asp Met Val Arg Val Lys His Lys Leu Leu 145 150 155 160 Arg Gln Glu Lys Thr Arg Leu Ile Gly Pro Asn Cys Pro Gly Val Ile 165 170 175 Asn Pro Gly Glu Cys Lys Ile Gly Ile Met Pro Gly His Ile His Lys 180 185 190 Lys Gly Arg Ile Gly Ile Val Ser Arg Ser Gly Thr Leu Thr Tyr Glu 195 200 205 Ala Val His Gln Thr Thr Gln Val Gly Leu Gly Gln Ser Leu Cys Val 210 215 220 Gly Ile Gly Gly Asp Pro Phe Asn Gly Thr Asp Phe Ile Asp Cys Leu 225 230 235 240 Glu Ile Phe Leu Asn Asp Ser Ala Thr Glu Gly Ile Ile Leu Ile Gly 245 250 255 Glu Ile Gly Gly Asn Ala Glu Glu Asn Ala Ala Glu Phe Leu Lys Gln 260 265 270 His Asn Ser Gly Pro Asn Ser Lys Pro Val Val Ser Phe Ile Ala Gly 275 280 285 Leu Thr Ala Pro Pro Gly Arg Arg Met Gly His Ala Gly Ala Ile Ile 290 295 300 Ala Gly Gly Lys Gly Gly Ala Lys Glu Lys Ile Ser Ala Leu Gln Ser 305 310 315 320 Ala Gly Val Val Val Ser Met Ser Pro Ala Gln Leu Gly Thr Thr Ile 325 330 335 Tyr Lys Glu Phe Glu Lys Arg Lys Met Leu 340 345 <210> 12 <211> 1270 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 12 gtcattggcg tatgaccgca acccttgccg ctgccgctga catcgctacc atggtctccg 60 gcagcagcgg cctcgccgcc gcccgtctcc tgtcgcgcag cttcctcctg ccgcagaatg 120 gaattcggca ttgttcctac acagcttctc ggcaacatct ctatgttgat aaaaatacaa 180 agattatttg ccagggtttc actggcaaac agggcacctt tcacagccag caggcattgg 240 aatatggcac caaactcgtt ggaggaacca ctccagggaa aggaggccag acacatctgg 300 gcttacctgt ctttaatact gtgaaggagg ccaaagaaca gacaggagca acggcttctg 360 tcatttatgt tcctccgcct tttgctgctg ctgccattaa tgaagctatt gaggcagaaa 420 ttcccttggt tgtgtgtatc actgaaggaa ttccccagca ggacatggta cgagtcaagc 480 acaaactgct gcgccaggaa aagacaaggc taattgggcc caactgccct ggagtcatca 540 atcctggaga atgtaaaatt ggcatcatgc ctggccatat tcacaaaaaa ggaaggattg 600 gcattgtgtc cagatctggc accctgactt atgaagcagt tcaccaaaca acgcaagttg 660 gattggggca gtctttgtgc gttggcattg gaggtgatcc ttttaatgga acagatttta 720 ttgactgcct cgaaatcttt ttgaacgatt ctgccacaga aggcatcata ttgattggtg 780 aaattggtgg taatgcagaa gagaatgctg cagaattttt gaagcaacat aattcaggtc 840 caaattccaa gcctgtagtg tccttcattg ctggtttaac tgctcctcct gggagaagaa 900 tgggtcatgc cggggcaatt attgctggag gaaaaggtgg agctaaagag aagatctctg 960 cccttcagag tgcaggagtt gtggtcagta tgtctcctgc acagctggga accacgatct 1020 acaaggaatt tgaaaagagg aagatgctat gaaagaaaaa aaaaattcct aaaactgtgg 1080 aatggatcac gtagacatgt aacccagcag cagtttgctt ctgttgtcca ctgattaatc 1140 agcctatgtg cctgacactg gtcttgcagt acaactggaa gccaaaacaa ggtggaagat 1200 gtcctgaatt aagatgtttt caccacattg tattacagag acagccaata aatctactat 1260 ttgatttcaa 1270 <210> 13 <211> 176 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13 Met Ala Leu Trp Arg Ala Tyr Gln Arg Ala Leu Ala Ala His Pro Trp 1 5 10 15 Lys Val Gln Val Leu Thr Ala Gly Ser Leu Met Gly Leu Gly Asp Ile 20 25 30 Ile Ser Gln Gln Leu Val Glu Arg Arg Gly Leu Gln Glu His Gln Arg 35 40 45 Gly Arg Thr Leu Thr Met Val Ser Leu Gly Cys Gly Phe Val Gly Pro 50 55 60 Val Val Gly Gly Trp Tyr Lys Val Leu Asp Arg Phe Ile Pro Gly Thr 65 70 75 80 Thr Lys Val Asp Ala Leu Lys Lys Met Leu Leu Asp Gln Gly Gly Phe 85 90 95 Ala Pro Cys Phe Leu Gly Cys Phe Leu Pro Leu Val Gly Ala Leu Asn 100 105 110 Gly Leu Ser Ala Gln Asp Asn Trp Ala Lys Leu Gln Arg Asp Tyr Pro 115 120 125 Asp Ala Leu Ile Thr Asn Tyr Tyr Leu Trp Pro Ala Val Gln Leu Ala 130 135 140 Asn Phe Tyr Leu Val Pro Leu His Tyr Arg Leu Ala Val Val Gln Cys 145 150 155 160 Val Ala Val Ile Trp Asn Ser Tyr Leu Ser Trp Lys Ala His Arg Leu 165 170 175 <210> 14 <211> 1002 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 14 agttcctagg ccagcctgtc acgtgggagg gaggctcggc gctcaggaag catggcactc 60 tggcgggcat accagcgggc cctggccgct cacccgtgga aagtacaggt cctgacagct 120 gggtccctga tgggcctggg tgacattatc tcacagcagc tggtggagag gcggggtctg 180 caggaacacc agagaggccg gactctgacc atggtgtccc tgggctgtgg ctttgtgggc 240 cctgtggtag gaggctggta caaggttttg gatcggttca tccctggcac caccaaagtg 300 gatgcactga agaagatgtt gttggatcag gggggctttg ccccgtgttt tctaggctgc 360 tttctcccac tggtaggggc acttaatgga ctgtcagccc aggacaactg ggccaaacta 420 cagcgggatt atcctgatgc ccttatcacc aactactatc tatggcctgc tgtgcagtta 480 gccaacttct acctggtccc ccttcattac aggttggccg ttgtccaatg tgttgctgtt 540 atctggaact cctacctgtc ctggaaggca catcggctct aagcctgcct cactccatcg 600 tttccacctt gcagtgatgc agcttgaccc tggaacggtc agacaacctc ctcaaagtgg 660 gcataccagt ttccacgggg ttgggttgcc ggtcagagct taagaggact agcaccctgc 720 aatgcccctc ttcactctaa aatgtacact gactgcttta gagcccttga taatagtctt 780 attcccacca catactaggc actccataaa tatctgttga accttcatga ccttatcaac 840 tttacaccca tatcccagca aatgccactc atccccactc ttcatagaca catttgttac 900 tctaaccctg cctaggcttc ttgtagctcc agctctttag agactcccgg aaccctttat 960 atggtgcctc agtaaatatg ttattaaata tgtaatccgg aa 1002 <210> 15 <211> 1239 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15 Met Ser Arg Leu Leu Trp Arg Lys Val Ala Gly Ala Thr Val Gly Pro 1 5 10 15 Gly Pro Val Pro Ala Pro Gly Arg Trp Val Ser Ser Ser Val Pro Ala 20 25 30 Ser Asp Pro Ser Asp Gly Gln Arg Arg Arg Gln Gln Gln Gln Gln Gln 35 40 45 Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Pro Gln Gln Pro Gln Val Leu Ser Ser 50 55 60 Glu Gly Gly Gln Leu Arg His Asn Pro Leu Asp Ile Gln Met Leu Ser 65 70 75 80 Arg Gly Leu His Glu Gln Ile Phe Gly Gln Gly Gly Glu Met Pro Gly 85 90 95 Glu Ala Ala Val Arg Arg Ser Val Glu His Leu Gln Lys His Gly Leu 100 105 110 Trp Gly Gln Pro Ala Val Pro Leu Pro Asp Val Glu Leu Arg Leu Pro 115 120 125 Pro Leu Tyr Gly Asp Asn Leu Asp Gln His Phe Arg Leu Leu Ala Gln 130 135 140 Lys Gln Ser Leu Pro Tyr Leu Glu Ala Ala Asn Leu Leu Leu Gln Ala 145 150 155 160 Gln Leu Pro Pro Lys Pro Pro Ala Trp Ala Trp Ala Glu Gly Trp Thr 165 170 175 Arg Tyr Gly Pro Glu Gly Glu Ala Val Pro Val Ala Ile Pro Glu Glu 180 185 190 Arg Ala Leu Val Phe Asp Val Glu Val Cys Leu Ala Glu Gly Thr Cys 195 200 205 Pro Thr Leu Ala Val Ala Ile Ser Pro Ser Ala Trp Tyr Ser Trp Cys 210 215 220 Ser Gln Arg Leu Val Glu Glu Arg Tyr Ser Trp Thr Ser Gln Leu Ser 225 230 235 240 Pro Ala Asp Leu Ile Pro Leu Glu Val Pro Thr Gly Ala Ser Ser Pro 245 250 255 Thr Gln Arg Asp Trp Gln Glu Gln Leu Val Val Gly His Asn Val Ser 260 265 270 Phe Asp Arg Ala His Ile Arg Glu Gln Tyr Leu Ile Gln Gly Ser Arg 275 280 285 Met Arg Phe Leu Asp Thr Met Ser Met His Met Ala Ile Ser Gly Leu 290 295 300 Ser Ser Phe Gln Arg Ser Leu Trp Ile Ala Ala Lys Gln Gly Lys His 305 310 315 320 Lys Val Gln Pro Pro Thr Lys Gln Gly Gln Lys Ser Gln Arg Lys Ala 325 330 335 Arg Arg Gly Pro Ala Ile Ser Ser Trp Asp Trp Leu Asp Ile Ser Ser 340 345 350 Val Asn Ser Leu Ala Glu Val His Arg Leu Tyr Val Gly Gly Pro Pro 355 360 365 Leu Glu Lys Glu Pro Arg Glu Leu Phe Val Lys Gly Thr Met Lys Asp 370 375 380 Ile Arg Glu Asn Phe Gln Asp Leu Met Gln Tyr Cys Ala Gln Asp Val 385 390 395 400 Trp Ala Thr His Glu Val Phe Gln Gln Gln Leu Pro Leu Phe Leu Glu 405 410 415 Arg Cys Pro His Pro Val Thr Leu Ala Gly Met Leu Glu Met Gly Val 420 425 430 Ser Tyr Leu Pro Val Asn Gln Asn Trp Glu Arg Tyr Leu Ala Glu Ala 435 440 445 Gln Gly Thr Tyr Glu Glu Leu Gln Arg Glu Met Lys Lys Ser Leu Met 450 455 460 Asp Leu Ala Asn Asp Ala Cys Gln Leu Leu Ser Gly Glu Arg Tyr Lys 465 470 475 480 Glu Asp Pro Trp Leu Trp Asp Leu Glu Trp Asp Leu Gln Glu Phe Lys 485 490 495 Gln Lys Lys Ala Lys Lys Val Lys Lys Glu Pro Ala Thr Ala Ser Lys 500 505 510 Leu Pro Ile Glu Gly Ala Gly Ala Pro Gly Asp Pro Met Asp Gln Glu 515 520 525 Asp Leu Gly Pro Cys Ser Glu Glu Glu Glu Phe Gln Gln Asp Val Met 530 535 540 Ala Arg Ala Cys Leu Gln Lys Leu Lys Gly Thr Thr Glu Leu Leu Pro 545 550 555 560 Lys Arg Pro Gln His Leu Pro Gly His Pro Gly Trp Tyr Arg Lys Leu 565 570 575 Cys Pro Arg Leu Asp Asp Pro Ala Trp Thr Pro Gly Pro Ser Leu Leu 580 585 590 Ser Leu Gln Met Arg Val Thr Pro Lys Leu Met Ala Leu Thr Trp Asp 595 600 605 Gly Phe Pro Leu His Tyr Ser Glu Arg His Gly Trp Gly Tyr Leu Val 610 615 620 Pro Gly Arg Arg Asp Asn Leu Ala Lys Leu Pro Thr Gly Thr Thr Leu 625 630 635 640 Glu Ser Ala Gly Val Val Cys Pro Tyr Arg Ala Ile Glu Ser Leu Tyr 645 650 655 Arg Lys His Cys Leu Glu Gln Gly Lys Gln Gln Leu Met Pro Gln Glu 660 665 670 Ala Gly Leu Ala Glu Glu Phe Leu Leu Thr Asp Asn Ser Ala Ile Trp 675 680 685 Gln Thr Val Glu Glu Leu Asp Tyr Leu Glu Val Glu Ala Glu Ala Lys 690 695 700 Met Glu Asn Leu Arg Ala Ala Val Pro Gly Gln Pro Leu Ala Leu Thr 705 710 715 720 Ala Arg Gly Gly Pro Lys Asp Thr Gln Pro Ser Tyr His His Gly Asn 725 730 735 Gly Pro Tyr Asn Asp Val Asp Ile Pro Gly Cys Trp Phe Phe Lys Leu 740 745 750 Pro His Lys Asp Gly Asn Ser Cys Asn Val Gly Ser Pro Phe Ala Lys 755 760 765 Asp Phe Leu Pro Lys Met Glu Asp Gly Thr Leu Gln Ala Gly Pro Gly 770 775 780 Gly Ala Ser Gly Pro Arg Ala Leu Glu Ile Asn Lys Met Ile Ser Phe 785 790 795 800 Trp Arg Asn Ala His Lys Arg Ile Ser Ser Gln Met Val Val Trp Leu 805 810 815 Pro Arg Ser Ala Leu Pro Arg Ala Val Ile Arg His Pro Asp Tyr Asp 820 825 830 Glu Glu Gly Leu Tyr Gly Ala Ile Leu Pro Gln Val Val Thr Ala Gly 835 840 845 Thr Ile Thr Arg Arg Ala Val Glu Pro Thr Trp Leu Thr Ala Ser Asn 850 855 860 Ala Arg Pro Asp Arg Val Gly Ser Glu Leu Lys Ala Met Val Gln Ala 865 870 875 880 Pro Pro Gly Tyr Thr Leu Val Gly Ala Asp Val Asp Ser Gln Glu Leu 885 890 895 Trp Ile Ala Ala Val Leu Gly Asp Ala His Phe Ala Gly Met His Gly 900 905 910 Cys Thr Ala Phe Gly Trp Met Thr Leu Gln Gly Arg Lys Ser Arg Gly 915 920 925 Thr Asp Leu His Ser Lys Thr Ala Thr Thr Val Gly Ile Ser Arg Glu 930 935 940 His Ala Lys Ile Phe Asn Tyr Gly Arg Ile Tyr Gly Ala Gly Gln Pro 945 950 955 960 Phe Ala Glu Arg Leu Leu Met Gln Phe Asn His Arg Leu Thr Gln Gln 965 970 975 Glu Ala Ala Glu Lys Ala Gln Gln Met Tyr Ala Ala Thr Lys Gly Leu 980 985 990 Arg Trp Tyr Arg Leu Ser Asp Glu Gly Glu Trp Leu Val Arg Glu Leu 995 1000 1005 Asn Leu Pro Val Asp Arg Thr Glu Gly Gly Trp Ile Ser Leu Gln 1010 1015 1020 Asp Leu Arg Lys Val Gln Arg Glu Thr Ala Arg Lys Ser Gln Trp 1025 1030 1035 Lys Lys Trp Glu Val Val Ala Glu Arg Ala Trp Lys Gly Gly Thr 1040 1045 1050 Glu Ser Glu Met Phe Asn Lys Leu Glu Ser Ile Ala Thr Ser Asp 1055 1060 1065 Ile Pro Arg Thr Pro Val Leu Gly Cys Cys Ile Ser Arg Ala Leu 1070 1075 1080 Glu Pro Ser Ala Val Gln Glu Glu Phe Met Thr Ser Arg Val Asn 1085 1090 1095 Trp Val Val Gln Ser Ser Ala Val Asp Tyr Leu His Leu Met Leu 1100 1105 1110 Val Ala Met Lys Trp Leu Phe Glu Glu Phe Ala Ile Asp Gly Arg 1115 1120 1125 Phe Cys Ile Ser Ile His Asp Glu Val Arg Tyr Leu Val Arg Glu 1130 1135 1140 Glu Asp Arg Tyr Arg Ala Ala Leu Ala Leu Gln Ile Thr Asn Leu 1145 1150 1155 Leu Thr Arg Cys Met Phe Ala Tyr Lys Leu Gly Leu Asn Asp Leu 1160 1165 1170 Pro Gln Ser Val Ala Phe Phe Ser Ala Val Asp Ile Asp Arg Cys 1175 1180 1185 Leu Arg Lys Glu Val Thr Met Asp Cys Lys Thr Pro Ser Asn Pro 1190 1195 1200 Thr Gly Met Glu Arg Arg Tyr Gly Ile Pro Gln Gly Glu Ala Leu 1205 1210 1215 Asp Ile Tyr Gln Ile Ile Glu Leu Thr Lys Gly Ser Leu Glu Lys 1220 1225 1230 Arg Ser Gln Pro Gly Pro 1235 <210> 16 <211> 4452 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 16 gcggaccggc cgggtggagg ccacacgcta ccccgaggct gcgtaggccg cgcgaagggg 60 gacgccgtgc cgtgggcctg gggtcggggg agcagcagac cgggaagcac cgatttgggg 120 tggaaggcag gcatggtcaa acccatttca ctgacaggag agcagagaca ggacgtgtct 180 ctctccacgt cttccagcca gtaaaagaag ccaagctgga gcccaaagcc aggtgttctg 240 actcccagcg tgggggtccc tgcaccaacc atgagccgcc tgctctggag gaaggtggcc 300 ggcgccaccg tcgggccagg gccggttcca gctccggggc gctgggtctc cagctccgtc 360 cccgcgtccg accccagcga cgggcagcgg cggcggcagc agcagcagca gcagcagcag 420 cagcagcaac agcagcctca gcagccgcaa gtgctatcct cggagggcgg gcagctgcgg 480 cacaacccat tggacatcca gatgctctcg agagggctgc acgagcaaat cttcgggcaa 540 ggaggggaga tgcctggcga ggccgcggtg cgccgcagcg tcgagcacct gcagaagcac 600 gggctctggg ggcagccagc cgtgcccttg cccgacgtgg agctgcgcct gccgcccctc 660 tacggggaca acctggacca gcacttccgc ctcctggccc agaagcagag cctgccctac 720 ctggaggcgg ccaacttgct gttgcaggcc cagctgcccc cgaagccccc ggcttgggcc 780 tgggcggagg gctggacccg gtacggcccc gagggggagg ccgtacccgt ggccatcccc 840 gaggagcggg ccctggtgtt cgacgtggag gtctgcttgg cagagggaac ttgccccaca 900 ttggcggtgg ccatatcccc ctcggcctgg tattcctggt gcagccagcg gctggtggaa 960 gagcgttact cttggaccag ccagctgtcg ccggctgacc tcatccccct ggaggtccct 1020 actggtgcca gcagccccac ccagagagac tggcaggagc agttagtggt ggggcacaat 1080 gtttcctttg accgagctca tatcagggag cagtacctga tccagggttc ccgcatgcgt 1140 ttcctggaca ccatgagcat gcacatggcc atctcagggc taagcagctt ccagcgcagt 1200 ctgtggatag cagccaagca gggcaaacac aaggtccagc cccccacaaa gcaaggccag 1260 aagtcccaga ggaaagccag aagaggccca gcgatctcat cctgggactg gctggacatc 1320 agcagtgtca acagtctggc agaggtgcac agactttatg taggggggcc tcccttagag 1380 aaggagcctc gagaactgtt tgtgaagggc accatgaagg acattcgtga gaacttccag 1440 gacctgatgc agtactgtgc ccaggacgtg tgggccaccc atgaggtttt ccagcagcag 1500 ctaccgctct tcttggagag gtgtccccac ccagtgactc tggccggcat gctggagatg 1560 ggtgtctcct acctgcctgt caaccagaac tgggagcgtt acctggcaga ggcacagggc 1620 acttatgagg agctccagcg ggagatgaag aagtcgttga tggatctggc caatgatgcc 1680 tgccagctgc tctcaggaga gaggtacaaa gaagacccct ggctctggga cctggagtgg 1740 gacctgcaag aatttaagca gaagaaagct aagaaggtga agaaggaacc agccacagcc 1800 agcaagttgc ccatcgaggg ggctggggcc cctggtgatc ccatggatca ggaagacctc 1860 ggcccctgca gtgaggagga ggagtttcaa caagatgtca tggcccgcgc ctgcttgcag 1920 aagctgaagg ggaccacaga gctcctgccc aagcggcccc agcaccttcc tggacaccct 1980 ggatggtacc ggaagctctg cccccggcta gacgaccctg catggacccc gggccccagc 2040 ctcctcagcc tgcagatgcg ggtcacacct aaactcatgg cacttacctg ggatggcttc 2100 cctctgcact actcagagcg tcatggctgg ggctacttgg tgcctgggcg gcgggacaac 2160 ctggccaagc tgccgacagg taccaccctg gagtcagctg gggtggtctg cccctacaga 2220 gccatcgagt ccctgtacag gaagcactgt ctcgaacagg ggaagcagca gctgatgccc 2280 caggaggccg gcctggcgga ggagttcctg ctcactgaca atagtgccat atggcaaacg 2340 gtagaagaac tggattactt agaagtggag gctgaggcca agatggagaa cttgcgagct 2400 gcagtgccag gtcaacccct agctctgact gcccgtggtg gccccaagga cacccagccc 2460 agctatcacc atggcaatgg accttacaac gacgtggaca tccctggctg ctggtttttc 2520 aagctgcctc acaaggatgg taatagctgt aatgtgggaa gcccctttgc caaggacttc 2580 ctgcccaaga tggaggatgg caccctgcag gctggcccag gaggtgccag tgggccccgt 2640 gctctggaaa tcaacaaaat gatttctttc tggaggaacg cccataaacg tatcagctcc 2700 cagatggtgg tgtggctgcc caggtcagct ctgccccgtg ctgtgatcag gcaccccgac 2760 tatgatgagg aaggcctcta tggggccatc ctgccccaag tggtgactgc cggcaccatc 2820 actcgccggg ctgtggagcc cacatggctc accgccagca atgcccggcc tgaccgagta 2880 ggcagtgagt tgaaagccat ggtgcaggcc ccacctggct acacccttgt gggtgctgat 2940 gtggactccc aagagctgtg gattgcagct gtgcttggag acgcccactt tgccggcatg 3000 catggctgca cagcctttgg gtggatgaca ctgcagggca ggaagagcag gggcactgat 3060 ctacacagta agacagccac tactgtgggc atcagccgtg agcatgccaa aatcttcaac 3120 tacggccgca tctatggtgc tgggcagccc tttgctgagc gcttactaat gcagtttaac 3180 caccggctca cacagcagga ggcagctgag aaggcccagc agatgtacgc tgccaccaag 3240 ggcctccgct ggtatcggct gtcggatgag ggcgagtggc tggtgaggga gttgaacctc 3300 ccagtggaca ggactgaggg tggctggatt tccctgcagg atctgcgcaa ggtccagaga 3360 gaaactgcaa ggaagtcaca gtggaagaag tgggaggtgg ttgctgaacg ggcatggaag 3420 gggggcacag agtcagaaat gttcaataag cttgagagca ttgctacgtc tgacatacca 3480 cgtaccccgg tgctgggctg ctgcatcagc cgagccctgg agccctcggc tgtccaggaa 3540 gagtttatga ccagccgtgt gaattgggtg gtacagagct ctgctgttga ctacttacac 3600 ctcatgcttg tggccatgaa gtggctgttt gaagagtttg ccatagatgg gcgcttctgc 3660 atcagcatcc atgacgaggt tcgctacctg gtgcgggagg aggaccgcta ccgcgctgcc 3720 ctggccttgc agatcaccaa cctcttgacc aggtgcatgt ttgcctacaa gctgggtctg 3780 aatgacttgc cccagtcagt cgcctttttc agtgcagtcg atattgaccg gtgcctcagg 3840 aaggaagtga ccatggattg taaaacccct tccaacccaa ctgggatgga aaggagatac 3900 gggattcccc agggtgaagc gctggatatt taccagataa ttgaactcac caaaggctcc 3960 ttggaaaaac gaagccagcc tggaccatag cactgcctgg aggctctgta tttgctcccg 4020 tggagcttca tcggggtggt gcaggctccc aaactcaggc tttcagctgt gctttttgca 4080 aaagggcttg cctaaggcca gccatttttc agtagcagga cctgccaaga agattccttc 4140 taactgaagg tgcagttgaa ttcagtgggt tcagaaccaa gatgccaaca tcggtgtgga 4200 ctacaggaca aggggcattg ttgcttgttg ggtaaaaatg aagcagaagc cccaaagttc 4260 acattaactc aggcatttca tttatttttt ccttttcttc ttggctggtt ctttgttctg 4320 tcccccatgc tctgatgcag tgccctagaa ggggaaagaa ttaatgctct aacgtgataa 4380 acctgctcca aggcagtgga aataaaaaga aggaaaaaaa agactctatc ttctcaaaaa 4440 aaaaaaaaaa aa 4452 <210> 17 <211> 705 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 17 atgggagcat tttgccagcg acctagttcc gataaagaac aggagaaaga gaagaagagc 60 gtcatctgtg tggaaggtaa catcgctagt ggcaaaacga cctgtttgga atttttctct 120 aatgccaccg atgtggaggt gcttacagag cctgttagta aatggcgaaa tgttcgagga 180 cataatccgc tgggactgat gtatcacgat gcctccagat ggggactgac ccttcagact 240 tatgtccaac ttacaatgct tgacaggcac actagaccgc aggttagcag cgtgaggctg 300 atggagcgct caattcactc tgccaggtat atattcgttg agaacctcta ccgatctggt 360 aagatgcctg aggtagatta cgtagtgctg agtgaatggt ttgactggat tcttcgcaac 420 atggatgtat cagtggatct cattgtttac cttaggacta acccggagac gtgttatcag 480 cgcttgaaaa agcgctgccg ggaagaggaa aaagtgattc ctctggaata cttggaagct 540 attcatcacc ttcacgaaga gtggctgata aaaggttccc tgtttcccat ggcggccccc 600 gtgcttgtca tagaagcgga tcaccacatg gaaaggatgc tcgaactttt cgagcaaaat 660 cgagaccgga ttctcacgcc ggagaatcga aaacattgcc catag 705 <210> 18 <211> 552 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 18 atggctgcag ggaggctttt tttgtctaga ttgagggcac cttttagctc catggcgaag 60 tctccgcttg agggggtgag tagcagccgg gggctccatg ctggcagagg gccccggagg 120 ctgtctattg aggggaatat tgcagttggt aagagcacgt ttgttaaatt gctcacgaag 180 acctatccag aatggcacgt tgctacagaa ccagtagcta catggcaaaa cattcaagca 240 gcaggcacac agaaggcttg cactgcacag tctctcggaa acctgctcga tatgatgtac 300 agagagcccg cccggtggtc atacacgttt cagaccttca gctttctttc tcggttgaag 360 gtacagttgg agcccttccc agagaagttg cttcaagcac ggaaacctgt acagatattc 420 gaacgattgc atttcgaggc gctgatgaac atacctgtgc ttgttctgga tgtgaacgac 480 gatttttccg aggaagttac taagcaagag gacctcatgc gggaggtaaa cacgttcgtt 540 aagaacctgt aa 552 <210> 19 <211> 1449 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 19 atggcagcat tgatgacacc aggaacgggg gctccgcctg cgcctggcga tttttcagga 60 gaggggagtc aaggtctgcc ggacccttca ccggaaccca aacagcttcc cgagcttatt 120 agaatgaagc gagatggggg tcgcctctct gaggctgaca tacgcggctt tgttgcggcg 180 gtcgtcaacg gctcagcaca aggtgcgcaa ataggagcga tgctgatggc tatcaggctg 240 aggggaatgg atttggaaga gaccagtgtg ctgactcaag cgctggcaca gagcggccag 300 cagcttgaat ggccagaagc ttggcgccaa caattggtcg ataaacactc aaccgggggc 360 gtcggggaca aagtctccct tgtactggca cctgctctgg ctgcgtgcgg atgtaaggtt 420 cctatgatta gcgggcgggg cttgggacat acgggaggaa cgttggacaa actcgaatcc 480 atccctggtt tcaacgtgat tcagagccct gaacaaatgc aagtactcct ggatcaggca 540 ggctgctgta ttgttggcca aagcgaacaa ctcgtgcctg cggatggtat cctctatgct 600 gccagggatg tgaccgccac agttgactcc ctcccgctga taacagcgtc aattttgagt 660 aagaagctcg tcgaagggct cagcgctctt gtggttgatg taaaatttgg gggggccgca 720 gtattcccca accaggaaca agcacgggaa ctggcaaaaa ccctggttgg tgtgggcgct 780 tcactgggcc tgagagttgc cgctgccttg accgccatgg ataagccgct cggtaggtgc 840 gtaggtcatg cacttgaagt agaagaagcc cttttgtgca tggatggggc cggtccccct 900 gacttgcggg atctcgtaac cacgcttggc ggcgcgttgc tttggctttc tggacacgct 960 ggtacccaag cgcaaggggc agcaagagtc gcagcagcgc ttgatgacgg atcagctctt 1020 gggcgatttg aaagaatgct tgcagctcag ggcgtagatc cagggctggc gcgggccctt 1080 tgctcaggtt ctccagcaga gcgccgacag ctccttccca gggcgcgaga gcaggaagaa 1140 ttgctggccc cggctgatgg taccgtcgaa ctcgtacggg ctttgccgct ggctcttgtt 1200 ttgcacgaac tgggggctgg gcggagtcgc gccggtgaac ctctcagact cggtgtgggt 1260 gcggagctcc tcgttgacgt cgggcaacga cttcgcaggg gaaccccttg gcttagggta 1320 cacagggacg ggccagcact cagcggccct cagtccaggg cccttcaaga agctctcgtg 1380 ctgagtgatc gagcgccttt tgccgctccc tcaccatttg ctgaattggt attgccaccc 1440 cagcagtaa 1449 <210> 20 <211> 1272 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 20 atgctgcttc tcagactgcc accccaccgc agtcatgctt ccccacttga ctgtaaactt 60 caagataggt gccggaagtg ttactcaccc cgatcaggac aagcgtgccc tcctgcgttg 120 gcggccgcct ggcttcggcg gtgtgaacgc cgaggaggtc ggccgagggg tgggcgacgc 180 aaggaactga cccttggcct gcgccctgca cggtgttcag ctcccggtcc tgccaaggat 240 gatgcatgga gacctcaggc aggtcgctcc tcctcagata ccaacgagag tgaaattaaa 300 tctaatgaag aaccccttct tcgcaagagt agtcgcaggt tcgtgatatt ccccatacaa 360 tatcctgata tctggaaaat gtacaagcaa gcccaagcat cattctggac cgcagaagag 420 gttgatctca gtaaggacct cccacactgg aacaaactga aagccgacga aaaatatttc 480 atatcccata tacttgcttt ctttgcagcc tcagatggaa ttgtgaatga aaacttggta 540 gagcgcttct ctcaagaggt ccaagttcct gaagcacgat gcttttacgg atttcaaatc 600 ctgatagaaa atgtacattc cgaaatgtat tccttgctta tagacacgta tatcagagat 660 cccaaaaaaa gggagttctt gttcaatgcg atcgagacca tgccatatgt taagaaaaaa 720 gccgattggg ccctgaggtg gatagctgat aggaagtcta catttgggga acgcgttgtt 780 gccttcgccg ccgtcgaggg agtcttcttc tccggatcct tcgctgctat cttttggctg 840 aaaaaacgcg gcttgatgcc tggtttgacc tttagcaatg agttgatatc acgggatgaa 900 gggctgcatt gtgactttgc ctgccttatg ttccagtact tggtgaacaa accgtctgag 960 gaacgggtaa gggaaatcat agtggatgca gtaaaaatag agcaggagtt ccttactgaa 1020 gcgctccccg tagggctcat tggcatgaac tgcattctta tgaagcagta catcgagttc 1080 gtggccgata gacttttggt ggagctcggg ttctcaaagg tttttcaggc tgaaaatcct 1140 tttgatttta tggagaacat atctctggag ggcaagacta acttttttga aaaaagagta 1200 tccgagtatc aaaggtttgc cgtgatggca gaaacaacag ataatgtctt cacacttgat 1260 gcggattttt aa 1272 <210> 21 <211> 1392 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 21 atggcggctt ctatgttcta tggacgcctg gtcgccgttg ccacgttgcg gaatcacagg 60 ccccgaactg cacaaagggc tgccgctcag gtgcttggaa gcagcggatt gttcaacaat 120 cacggcctcc aagttcagca acagcagcag agaaacctct ctctgcatga gtatatgagt 180 atggaactgc tccaggaagc aggggtgtct gtaccaaagg gctacgtagc aaaaagcccc 240 gacgaggcgt acgccatagc taaaaaactg ggaagtaagg acgtagttat caaagcacag 300 gttctggccg gtggccgcgg taagggaacc ttcgagagtg gtttgaaagg cggtgtcaag 360 atcgtattta gtcccgagga ggccaaggct gtaagttccc agatgatcgg caaaaaattg 420 ttcacaaagc aaaccggcga aaagggtaga atttgcaacc aagtacttgt ctgcgaaaga 480 aagtatccga gaagggagta ttatttcgct ataaccatgg aaagatcatt ccaaggtccc 540 gtgctcatcg gcagttcaca cgggggcgtt aatatagagg atgtcgctgc agagtctccg 600 gaggccataa ttaaggagcc tatagacatc gaggaaggca ttaaaaaaga acaagccttg 660 caactggcac aaaaaatggg ttttcctccg aacatcgtcg agagtgccgc agaaaatatg 720 gtgaaactgt acagcctgtt tttgaagtac gatgcgacaa tgatagaaat taatccgatg 780 gtcgaggact cagatggagc cgtgctttgt atggacgcca aaattaactt cgattcaaac 840 agcgcttatc gacagaagaa aattttcgat ttgcaagatt ggacccaaga ggatgagcga 900 gacaaagatg ccgccaaagc aaatctcaat tatataggac tcgatggtaa tattggatgt 960 ttggtcaatg gtgccggtct cgcgatggca actatggata taatcaagtt gcatggtggg 1020 actcccgcca actttcttga cgtcggggga ggcgccaccg ttcaccaagt tacggaggct 1080 ttcaaactca taacctctga caagaaggtg ctggcgattc ttgtaaatat ctttggtggc 1140 attatgcggt gtgatgttat tgcccaggga atagtaatgg ctgtcaaaga tttggagatt 1200 aaaatacccg tcgtggtgcg gctccaaggt actcgagtag atgatgctaa ggctctgatt 1260 gccgacagcg ggctgaagat tctggcatgt gatgatttgg acgaggcagc gagaatggtc 1320 gtgaagctct cagaaatagt aactttggcg aaacaggctc atgtcgatgt aaagttccaa 1380 cttcctatat ga 1392 <210> 22 <211> 1041 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 22 atgaccgcta cgcttgcggc tgcagccgac atcgcgacaa tggtctctgg aagttcaggc 60 ttggccgcgg ctcggcttct gagtagaagt ttcttgttgc cgcaaaacgg tatcaggcac 120 tgctcctaca ccgccagtag acaacacctt tatgttgata agaacacgaa gataatttgc 180 caaggattca ccggtaaaca ggggaccttc cattcccagc aggcactgga atatggaact 240 aaattggtag gcggcactac gcctgggaag ggtggccaaa cacatcttgg tcttcccgtt 300 tttaacacag tgaaggaggc taaagaacaa acgggggcaa cggctagcgt tatctatgtc 360 ccacccccgt ttgccgctgc agccataaat gaggcgattg aagccgagat cccgcttgta 420 gtctgcataa cggagggaat tccgcaacaa gacatggtgc gagtaaagca caagcttctt 480 cgacaggaaa aaacaagact gataggtccg aattgtcctg gcgtaattaa ccccggtgaa 540 tgcaaaatcg gaattatgcc gggacatatt cacaaaaaag gccgaatcgg gatagtcagc 600 agatcaggca ccttgacata cgaagcggtt caccagacta cgcaagtcgg tttgggacaa 660 agcctttgcg tcggtatcgg tggcgaccca tttaacggga cggatttcat tgactgtctg 720 gagatcttcc tcaacgattc cgcgacagaa ggaatcattt tgataggaga aataggcggg 780 aacgccgaag agaatgcagc ggaattcctc aaacaacata actctggccc taatagtaag 840 ccggtggtat cattcatagc cggtcttaca gcgccgccgg gtcgcagaat gggccacgca 900 ggtgcaatta tagcgggggg caagggaggt gccaaagaaa agatatccgc tcttcaaagc 960 gcaggtgtag tagttagtat gagtccagct caactgggca caaccatcta caaagaattt 1020 gaaaagcgga aaatgctttg a 1041 <210> 23 <211> 531 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 23 atggccctct ggagagctta ccaacgagcc ttggccgcgc acccttggaa ggtacaggtc 60 ttgaccgccg gatctttgat gggtcttgga gatattattt ctcaacagtt ggttgaacgg 120 cgaggcctcc aggaacacca aagggggaga acccttacaa tggtaagtct gggttgcgga 180 ttcgtcgggc ctgtcgtggg gggatggtat aaggttctgg atcgctttat accggggacc 240 accaaggtcg atgccttgaa gaagatgttg ctggatcagg gaggattcgc tccgtgtttt 300 ttgggatgtt ttctgccact tgttggggct ctgaacggac tgtccgcgca ggataactgg 360 gcgaagttgc aacgcgacta cccagacgcc ctgataacaa attactatct ctggccagca 420 gttcagttgg ccaattttta cctggtacct ctccactatc gccttgctgt agtacagtgt 480 gtcgccgtca tctggaactc atacctttca tggaaggctc atagattgta a 531 <210> 24 <211> 3720 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 24 atgtccaggc tgctctggcg gaaggtcgca ggcgccactg tcggtccagg accagttcca 60 gctcccggtc gctgggtgag cagcagcgtg ccagctagcg atccgagcga cggtcagcgg 120 cgacggcaac aacagcagca acagcaacaa cagcaacaac aacagcccca gcagcctcag 180 gttctcagtt ccgagggtgg ccaactccga cacaacccac tggatataca gatgctctcc 240 cgcggtctcc acgaacaaat attcggacaa gggggtgaga tgccgggaga ggctgcggtc 300 aggcgcagtg tagaacatct ccagaaacac gggttgtggg gccaaccggc cgttcctctc 360 cccgatgttg aactgcggct tccacctctc tacggtgata atctggacca gcactttaga 420 ctgctcgctc aaaagcagag tctcccttac ctggaagccg ctaacctcct gctccaagcc 480 caattgcccc ctaaaccgcc agcctgggct tgggcggagg gatggacgag gtatggaccc 540 gaaggggagg ctgtgccagt tgctatacca gaggaacgcg ctctggtttt cgacgtagag 600 gtttgtctcg cggagggaac ttgtcctaca ctggctgtag caatttcccc ttcagcctgg 660 tacagctggt gctctcagag attggtggaa gaaaggtata gctggactag ccagctgagt 720 cccgcggacc tcattccact tgaggtaccc accggggcgt caagcccaac tcagagggac 780 tggcaggaac aattggtagt tgggcataat gtgagttttg acagggctca tatccgcgaa 840 cagtatctta tccagggctc tagaatgcga ttccttgaca cgatgagcat gcacatggca 900 atcagcggac ttagttcctt tcagaggtca ttgtggattg cagccaagca gggaaagcat 960 aaggtccaac ccccgacaaa acaaggtcag aaatcccaga gaaaagcccg gcgaggcccc 1020 gccatcagtt cctgggattg gttggatatc agtagtgtga atagccttgc tgaggtgcat 1080 cgcctgtatg tgggtggacc cccacttgag aaagagccta gggagctctt cgtcaaaggc 1140 accatgaagg atattagaga gaattttcaa gatctcatgc aatactgcgc acaagacgta 1200 tgggcaacgc atgaggtctt tcaacagcaa ctccccctct ttttggaacg atgtccacat 1260 cccgtcactc ttgctgggat gttggaaatg ggtgtaagtt atttgccagt caatcaaaat 1320 tgggagagat acttggctga agcgcagggt acatatgagg aacttcagcg agaaatgaaa 1380 aaaagtctta tggatttggc caatgacgcc tgccagctgc tttccggtga gcggtacaaa 1440 gaagatccat ggctttggga tctcgaatgg gatttgcagg aatttaaaca gaaaaaggcc 1500 aagaaggtca agaaagagcc agctacagcc tcaaagctcc ctatagaggg agcgggagca 1560 ccgggtgatc cgatggatca agaggatttg ggaccttgct ccgaagagga ggaattccaa 1620 caagatgtaa tggcaagggc ctgcctgcaa aagctcaaag ggacaacaga actcttgccc 1680 aagaggcctc aacatctgcc cggccatcca ggttggtatc gcaaactctg tccaaggctg 1740 gacgatcccg cctggacccc ggggccctcc cttctgagtc tgcagatgag agtgacacct 1800 aagctgatgg cacttacttg ggatgggttc cctcttcact attcagagag acacgggtgg 1860 ggatatcttg tcccaggtcg aagggacaat ctggcgaagc ttcccacagg aactaccttg 1920 gagagtgcgg gcgtagtatg tccttatcga gccatagaaa gtctgtatag aaagcattgc 1980 cttgaacaag gcaaacaaca actcatgcct caggaagccg gcctcgctga agaatttctt 2040 cttactgata actctgctat ctggcaaaca gtggaggaac tggattacct cgaagtcgag 2100 gccgaagcga agatggaaaa tttgcgggcg gcggtcccag gtcagcccct tgctttgaca 2160 gcacgggggg gccctaagga tacccagccc agctatcatc acgggaacgg tccatataat 2220 gatgttgata tacctggttg ttggtttttt aaacttcctc ataaagatgg caattcatgt 2280 aacgttggat ccccattcgc aaaggacttc ctccccaaaa tggaggatgg gacgttgcaa 2340 gcaggtcccg gtggagcttc tgggccgcga gccctggaaa taaataagat gattagcttc 2400 tggaggaatg cacacaagcg catttcttca cagatggtag tgtggctgcc tcggagtgct 2460 ttgcccaggg ctgtgatcag acaccccgat tatgatgaag agggactgta cggggcaata 2520 ttgccccagg tggttacggc tggtactatt acccgccggg cagttgagcc gacctggctg 2580 acagcatcta atgccaggcc tgatcgcgtg ggttctgaac ttaaagcaat ggtccaagct 2640 ccgcctggat acacgcttgt cggcgcggac gtggactccc aggaactttg gatagcggct 2700 gtccttggcg atgcacattt tgcagggatg cacgggtgca cggcttttgg ctggatgaca 2760 cttcagggga ggaaatcaag ggggaccgac ctgcactcca agaccgcgac aacggtagga 2820 atctcaaggg aacacgctaa aattttcaat tatgggagaa tatatggtgc cggtcaaccg 2880 ttcgctgagc gccttctgat gcagtttaac cataggctga cacagcagga ggcagcggag 2940 aaggcgcagc agatgtacgc cgcaactaag ggtctcagat ggtatcgcct ctcagacgag 3000 ggcgagtggc ttgtccggga attgaacctc ccggtcgatc ggacggaagg tggttggatt 3060 agtcttcagg atctcagaaa ggtgcagcgg gaaacagcac gcaagtctca gtggaagaaa 3120 tgggaggtgg tcgccgagcg ggcatggaag ggtggaacag aatccgagat gtttaacaag 3180 ctggagagca tagcaactag tgacatccct aggacaccgg tcttgggatg ttgcattagc 3240 cgggcactcg agccatctgc cgtacaggaa gaattcatga cgtcacgggt caactgggtt 3300 gtccagtctt cagccgtcga ttatctgcat ttgatgctgg tcgcgatgaa gtggctcttc 3360 gaagagtttg ctatagatgg ccgattttgc atctctattc acgatgaggt gcgctacctg 3420 gtaagggaag aagaccgata ccgagccgcc ctcgcccttc agataacaaa tctgcttacc 3480 aggtgtatgt ttgcatacaa gctggggttg aacgaccttc cccagtccgt cgctttcttt 3540 tcagctgttg atatagatcg ctgcctgaga aaagaggtta cgatggactg caaaacgccc 3600 tcaaacccca ctggtatgga gcgcagatat ggcatccccc aaggagaagc cctcgacata 3660 taccagataa ttgagctcac gaagggcagc ctggagaaga gatcccaacc tggcccatag 3720

Claims (176)

  1. 불균형 뉴클레오타이드 풀(unbalanced nucleotide pool)을 특징으로 하는 질환 또는 장애의 치료, 예방 및/또는 치유를 필요로 하는 대상체에서 불균형 뉴클레오타이드 풀을 특징으로 하는 질환 또는 장애를 치료, 예방 및/또는 치유하는 방법으로서,
    상기 대상체에 치료학적 유효량의, 티미딘 키나제 2(thymidine kinase 2: TK2), 데옥시구아노신 키나제(dGK), 티미딘 포스포릴라제(TP), 리보뉴클레오타이드 리덕타제의 p53 유도성 작은 서브유닛(p53R2), 석시닐-CoA 리가제 ADP-형성 서브유닛 베타(SUCLA2), 석시닐-CoA 리가제 GDP-형성 서브유닛 알파(SUCLG1), 미토콘드리아 내막 단백질 MPV17(MPV17), 및/또는 DNA 폴리머라제 서브유닛 감마(POLG)를 인코딩하는 형질전환 유전자(transgene)를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  2. 불균형 뉴클레오타이드 풀을 특징으로 하는 질환 또는 장애를 갖는 대상체에서 효소 활성을 복원하는 방법으로서,
    상기 대상체에 치료학적 유효량의, TK2, dGK, TP, p53R2, SUCLA2, SUCLG1, MPV17 및/또는 POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  3. 불균형 뉴클레오타이드 풀을 특징으로 하는 질환 또는 장애와 관련된 하나 이상의 증상의 완화를 필요로 하는 대상체에서 불균형 뉴클레오타이드 풀을 특징으로 하는 질환 또는 장애와 관련된 하나 이상의 증상을 완화시키는 방법으로서,
    상기 대상체에 치료학적 유효량의, TK2, dGK, TP, p53R2, SUCLA2, SUCLG1, MPV17 및/또는 POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 질환 또는 장애가 미토콘드리아병인, 방법.
  5. 제4항에 있어서, 상기 미토콘드리아병이 미토콘드리아 DNA 고갈 증후군(mitochondrial dNA depletion syndrome: MDS)인, 방법.
  6. 제5항에 있어서, 상기 MDS가 TK2를 인코딩하는 내인성 유전자의 하나 이상의 돌연변이를 특징으로 하는 근병증성 MDS인, 방법.
  7. 제5항에 있어서, 상기 MDS가 SUCLA2를 인코딩하는 내인성 유전자의 하나 이상의 돌연변이를 특징으로 하는 뇌근병증성 형태인, 방법.
  8. 제5항에 있어서, 상기 MDS가 TP를 인코딩하는 내인성 유전자의 하나 이상의 돌연변이를 특징으로 하는 신경위장 뇌근병증성 형태인, 방법.
  9. 제5항에 있어서, 상기 MDS가 dGK, MPV17 및/또는 POLG를 인코딩하는 내인성 유전자의 하나 이상의 돌연변이를 특징으로 하는 간병증 형태인, 방법.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 TK2를 인코딩하는, 방법.
  11. 제10항에 있어서, 상기 TK2가 서열번호 1의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  12. 제11항에 있어서, 상기 TK2가 서열번호 1의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  13. 제12항에 있어서, 상기 TK2가 서열번호 1의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  14. 제13항에 있어서, 상기 TK2가 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  15. 제10항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 2의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열을 갖는, 방법.
  16. 제15항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 2의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 갖는, 방법.
  17. 제16항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 2의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 갖는, 방법.
  18. 제17항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 2의 핵산 서열을 갖는, 방법.
  19. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 dGK를 인코딩하는, 방법.
  20. 제19항에 있어서, 상기 dGK가 서열번호 3의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  21. 제20항에 있어서, 상기 dGK가 서열번호 3의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  22. 제21항에 있어서, 상기 dGK가 서열번호 3의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  23. 제22항에 있어서, 상기 dGK가 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  24. 제19항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 4의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열을 갖는, 방법.
  25. 제24항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 4의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 갖는, 방법.
  26. 제25항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 4의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 갖는, 방법.
  27. 제26항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 4의 핵산 서열을 갖는, 방법.
  28. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 TP를 인코딩하는, 방법.
  29. 제28항에 있어서, 상기 TP가 서열번호 5의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  30. 제29항에 있어서, 상기 TP가 서열번호 5의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  31. 제30항에 있어서, 상기 TP가 서열번호 5의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  32. 제31항에 있어서, 상기 TP가 서열번호 5의 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  33. 제28항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 6의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열을 갖는, 방법.
  34. 제33항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 6의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 갖는, 방법.
  35. 제34항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 6의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 갖는, 방법.
  36. 제35항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 6의 핵산 서열을 갖는, 방법.
  37. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 p53R2를 인코딩하는, 방법.
  38. 제37항에 있어서, 상기 p53R2가 서열번호 7의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  39. 제38항에 있어서, 상기 p53R2가 서열번호 7의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  40. 제39항에 있어서, 상기 p53R2가 서열번호 7의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  41. 제40항에 있어서, 상기 p53R2가 서열번호 7의 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  42. 제37항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 8의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열을 갖는, 방법.
  43. 제42항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 8의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 갖는, 방법.
  44. 제43항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 8의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 갖는, 방법.
  45. 제44항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 8의 핵산 서열을 갖는, 방법.
  46. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 SUCLA2를 인코딩하는, 방법.
  47. 제46항에 있어서, 상기 SUCLA2가 서열번호 9의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  48. 제47항에 있어서, 상기 SUCLA2가 서열번호 9의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  49. 제48항에 있어서, 상기 SUCLA2가 서열번호 9의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  50. 제49항에 있어서, 상기 SUCLA2가 서열번호 9의 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  51. 제46항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 10의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열을 갖는, 방법.
  52. 제51항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 10의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 갖는, 방법.
  53. 제52항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 10의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 갖는, 방법.
  54. 제53항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 10의 핵산 서열을 갖는, 방법.
  55. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 SUCLG1을 인코딩하는, 방법.
  56. 제55항에 있어서, 상기 SUCLG1이 서열번호 11의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  57. 제56항에 있어서, 상기 SUCLG1이 서열번호 11의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  58. 제57항에 있어서, 상기 SUCLG1이 서열번호 11의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  59. 제58항에 있어서, 상기 SUCLG1이 서열번호 11의 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  60. 제55항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 12의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열을 갖는, 방법.
  61. 제60항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 12의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 갖는, 방법.
  62. 제61항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 12의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 갖는, 방법.
  63. 제62항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 12의 핵산 서열을 갖는, 방법.
  64. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 MPV17을 인코딩하는, 방법.
  65. 제64항에 있어서, 상기 MPV17이 서열번호 13의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  66. 제65항에 있어서, 상기 MPV17이 서열번호 13의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  67. 제66항에 있어서, 상기 MPV17이 서열번호 13의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  68. 제67항에 있어서, 상기 MPV17이 서열번호 13의 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  69. 제64항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 14의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열을 갖는, 방법.
  70. 제69항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 14의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 갖는, 방법.
  71. 제70항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 14의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 갖는, 방법.
  72. 제71항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 14의 핵산 서열을 갖는, 방법.
  73. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 POLG를 인코딩하는, 방법.
  74. 제73항에 있어서, 상기 POLG가 서열번호 15의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  75. 제74항에 있어서, 상기 POLG가 서열번호 15의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  76. 제75항에 있어서, 상기 POLG가 서열번호 15의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  77. 제76항에 있어서, 상기 POLG가 서열번호 15의 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  78. 제73항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 16의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열을 갖는, 방법.
  79. 제78항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 16의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 갖는, 방법.
  80. 제79항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 16의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 갖는, 방법.
  81. 제80항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 16의 핵산 서열을 갖는, 방법.
  82. TK2 결핍증의 치료, 예방 및/또는 치유를 필요로 하는 대상체에서 TK2 결핍증을 치료, 예방 및/또는 치유하는 방법으로서,
    상기 대상체에 치료학적 유효량의, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  83. TK2 효소 활성의 복원을 필요로 하는 대상체에서 TK2 효소 활성을 복원하는 방법으로서,
    상기 대상체에 치료학적 유효량의, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  84. TK2 결핍증과 관련된 하나 이상의 증상의 완화를 필요로 하는 대상체에서 TK2 결핍증과 관련된 하나 이상의 증상을 완화시키는 방법으로서,
    상기 대상체에 치료학적 유효량의, TK2를 인코딩하는 형질전환 유전자를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  85. 제82항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 MDS를 갖거나 MDS가 발병할 위험이 있는, 방법.
  86. 제82항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 TK2가 서열번호 1의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  87. 제86항에 있어서, 상기 TK2가 서열번호 1의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  88. 제87항에 있어서, 상기 TK2가 서열번호 1의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  89. 제88항에 있어서, 상기 TK2가 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는, 방법.
  90. 제82항 내지 제89항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 2의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열을 갖는, 방법.
  91. 제90항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 2의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 갖는, 방법.
  92. 제91항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 2의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 갖는, 방법.
  93. 제92항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 2의 핵산 서열을 갖는, 방법.
  94. 제1항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 벡터인, 방법.
  95. 제94항에 있어서, 상기 벡터가 바이러스 벡터인, 방법.
  96. 제95항에 있어서, 상기 바이러스 벡터가 아데노-연관 바이러스(AAV), 아데노바이러스, 렌티바이러스, 레트로바이러스, 폭스바이러스, 바큘로바이러스, 단순 헤르페스 바이러스, 우두 바이러스, 및 합성 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  97. 제96항에 있어서, 상기 합성 바이러스가 키메라 바이러스, 모자이크 바이러스, 또는 의사형 바이러스이고/이거나, 외래 단백질, 합성 폴리머, 나노입자, 또는 소분자를 포함하는, 방법.
  98. 제96항에 있어서, 상기 바이러스 벡터가 AAV인, 방법.
  99. 제98항에 있어서, 상기 AAV가 AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAVrh74, AAVrh.8 또는 AAVrh.10 혈청형인, 방법.
  100. 제99항에 있어서, 상기 AAV가 AAV1, AAV2, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8 및 AAV9인, 방법.
  101. 제98항에 있어서, 상기 바이러스 벡터가 의사형 AAV인, 방법.
  102. 제101항에 있어서, 상기 의사형 AAV가 AAV2/9인, 방법.
  103. 제101항에 있어서, 상기 의사형 AAV가 AAV2/8인, 방법.
  104. 제98항에 있어서, 상기 AAV가 재조합 캡시드 단백질을 포함하는, 방법.
  105. 제1항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 리포솜, 소포, 합성 소포, 엑소좀, 합성 엑소좀, 덴드리머 또는 나노입자인, 방법.
  106. 제1항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 근세포에서 형질전환 유전자의 발현을 유도하는 프로모터에 작동 가능하게 연결되는, 방법.
  107. 제106항에 있어서, 상기 프로모터가 닭 베타 액틴 프로모터, 사이토메갈로바이러스(CMV) 프로모터, 미오신 경쇄-2 프로모터, 알파 액틴 프로모터, 트로포닌 1 프로모터, Na+/Ca2+ 교환기 프로모터, 디스트로핀 프로모터, 크레아틴 키나제 프로모터, 알파7 인테그린 프로모터, 뇌 나트륨이뇨 펩타이드 프로모터, 알파 B-크리스탈린/작은 열 충격 단백질 프로모터, 알파 미오신 중쇄 프로모터, 또는 심방 나트륨이뇨 인자 프로모터인, 방법.
  108. 제1항 내지 제107항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 근세포에서 형질전환 유전자의 발현을 유도하는 인핸서에 작동 가능하게 연결되는, 방법.
  109. 제108항에 있어서, 상기 인핸서가 CMV 인핸서, 근세포 인핸서 인자 2(MEF2) 인핸서, 또는 MyoD 인핸서인, 방법.
  110. 제1항 내지 제109항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이, 대상체가 TK2, dGK, TP, p53R2, SUCLA2, SUCLG1, MPV17 및/또는 POLG를 인코딩하는 내인성 유전자의 결핍증을 갖는 것으로 진단되자마자 또는 직후에 상기 대상체에 투여되며, 선택적으로, 상기 조성물은 상기 대상체가 TK2를 인코딩하는 내인성 유전자의 결핍증을 갖는 것으로서 진단되자마자 또는 직후에 상기 대상체에 투여되는, 방법.
  111. 제1항 내지 제110항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체에 치료학적 유효량의, TK2, dGK, TP, p53R2, SUCLA2, SUCLG1, MPV17 및/또는 POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자를 포함하는 제2 조성물을 투여하는 단계를 더 포함하는, 방법.
  112. 제111항에 있어서, 상기 제2 조성물이 벡터인, 방법.
  113. 제112항에 있어서, 상기 벡터가 바이러스 벡터인, 방법.
  114. 제113항에 있어서, 상기 바이러스 벡터가 아데노-연관 바이러스(AAV), 아데노바이러스, 렌티바이러스, 레트로바이러스, 폭스바이러스, 바큘로바이러스, 단순 헤르페스 바이러스, 우두 바이러스, 및 합성 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  115. 제114항에 있어서, 상기 합성 바이러스가 키메라 바이러스, 모자이크 바이러스, 또는 의사형 바이러스이고/이거나, 외래 단백질, 합성 폴리머, 나노입자, 또는 소분자를 포함하는, 방법.
  116. 제114항에 있어서, 상기 바이러스 벡터가 AAV인, 방법.
  117. 제116항에 있어서, 상기 AAV가 AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAVrh74, AAVrh.8 또는 AAVrh.10 혈청형인, 방법.
  118. 제116항에 있어서, 상기 바이러스 벡터가 의사형 AAV인, 방법.
  119. 제118항에 있어서, 상기 의사형 AAV가 AAV2/9인, 방법.
  120. 제118항에 있어서, 상기 의사형 AAV가 AAV2/8인, 방법.
  121. 제116항에 있어서, 상기 AAV가 재조합 캡시드 단백질을 포함하는, 방법.
  122. 제111항에 있어서, 상기 제2 조성물이 리포솜, 소포, 합성 소포, 엑소좀, 합성 엑소좀, 덴드리머 또는 나노입자인, 방법.
  123. 제110항 내지 제121항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 조성물에 포함되는 상기 형질전환 유전자가 근세포에서 형질전환 유전자의 발현을 유도하는 프로모터에 작동 가능하게 연결되는, 방법.
  124. 제122항에 있어서, 상기 프로모터가 닭 베타 액틴 프로모터, CMV 프로모터, 미오신 경쇄-2 프로모터, 알파 액틴 프로모터, 트로포닌 1 프로모터, Na+/Ca2+ 교환기 프로모터, 디스트로핀 프로모터, 크레아틴 키나제 프로모터, 알파7 인테그린 프로모터, 뇌 나트륨이뇨 펩타이드 프로모터, 알파 B-크리스탈린/작은 열 충격 단백질 프로모터, 알파 미오신 중쇄 프로모터, 또는 심방 나트륨이뇨 인자 프로모터인, 방법.
  125. 제110항 내지 제124항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 조성물에 포함되는 상기 형질전환 유전자가 근세포에서 형질전환 유전자의 발현을 유도하는 인핸서에 작동 가능하게 연결되는, 방법.
  126. 제125항에 있어서, 상기 인핸서가 CMV 인핸서, MEF2 인핸서 또는 MyoD 인핸서인, 방법.
  127. 제110항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 조성물이, 상기 대상체에 상기 제1 조성물의 투여 후에 상기 대상체에 투여되는, 방법.
  128. 제127항에 있어서, 상기 제2 조성물이, 상기 대상체에 상기 제1 조성물의 투여 후 1일 또는 1주 이상 내에 상기 대상체에 투여되는, 방법.
  129. 제128항에 있어서, 상기 제2 조성물이, 상기 대상체에 상기 제1 조성물의 투여 후 적어도 1개월 내에 상기 대상체에 투여되는, 방법.
  130. 제110항 내지 제129항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 조성물이 상기 대상체에 투여되는 동안 상기 제1 조성물의 투여가 계속되는, 방법.
  131. 제1항 내지 제130항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 상기 대상체에 치료학적 유효량의 약리학적 제제를 함유하는 제3 조성물을 투여하는 단계를 더 포함하는, 방법.
  132. 제131항에 있어서, 상기 약리학적 제제가 데옥시시티딘(dC), 데옥시티미딘(dT), 데옥시아데노신(dA), 데옥시구아노신(dG), 데옥시시티딘 모노포스페이트(dCMP), 데옥시티미딘 모노포스페이트(TMP), 데옥시아데노신 모노포스페이트(dAMP), 데옥시구아노신 모노포스페이트(dGMP), 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  133. 제132항에 있어서, 상기 약리학적 제제가 dC, dT, 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  134. 제131항 내지 제133항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제3 조성물이, 상기 대상체에 상기 제1 조성물의 투여 후에 상기 대상체에 투여되는, 방법.
  135. 제134항에 있어서, 상기 제3 조성물이, 상기 대상체에 상기 제1 조성물의 투여 후 1일 또는 1주 이상 이내에 상기 대상체에 투여되는, 방법.
  136. 제135항에 있어서, 상기 제3 조성물이, 상기 대상체에 상기 제1 조성물의 투여 후 적어도 1개월 내에 상기 대상체에 투여되는, 방법.
  137. 제131항 내지 제136항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제3 조성물이, 상기 대상체에 상기 제2 조성물의 투여 후에 상기 대상체에 투여되는, 방법.
  138. 제137항에 있어서, 상기 제3 조성물이, 상기 대상체의 상기 제2 조성물의 투여 후 1일 또는 1주 이상 이내에 상기 대상체에 투여되는, 방법.
  139. 제138항에 있어서, 상기 제3 조성물이, 상기 대상체에 상기 제2 조성물의 투여 후 적어도 1개월 내에 상기 대상체에 투여되는, 방법.
  140. 제131항 내지 제139항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 조성물의 투여 및 상기 제2 조성물의 투여가, 상기 제3 조성물이 상기 대상체에 투여되는 동안 계속되는, 방법.
  141. 제131항 내지 제140항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제3 조성물이 약 100 ㎎/㎏/일 내지 약 1,000 ㎎/㎏/일의 양으로 상기 대상체에 투여되는, 방법.
  142. 제141항에 있어서, 상기 제3 조성물이 약 200 ㎎/㎏/일 내지 약 800 ㎎/㎏/일의 양으로 상기 대상체에 투여되는, 방법.
  143. 제142항에 있어서, 상기 제3 조성물이 약 250 m/kg/일 내지 약 400 ㎎/㎏/일의 양으로 상기 대상체에 투여되는, 방법.
  144. 제131항 내지 제143항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제3 조성물이 하루에 1회, 하루에 2회, 하루에 3회, 하루에 4회, 하루에 5회, 또는 하루에 6회 상기 대상체에 투여되는, 방법.
  145. 제131항 내지 제143항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제3 조성물이 우유, 인간 모유, 영아용 조제분유, 또는 물과 혼합하여 경구로 상기 대상체에 투여되는, 방법.
  146. 제1항 내지 제145항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 조성물이 정맥내, 경막내, 피부내, 경피, 비경구, 근육내, 비강내, 피하, 경피, 기관내, 복강내, 동맥내, 혈관내, 흡입, 관류, 세척, 및/또는 경구 투여에 의해 상기 대상체에 투여되는, 방법.
  147. 제1항 내지 제146항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 조성물이 정맥내, 경막내, 피부내, 경피, 비경구, 근육내, 비강내, 피하, 경피, 기관내, 복강내, 동맥내, 혈관내, 흡입, 관류, 세척, 및/또는 경구 투여에 의해 상기 대상체에 투여되는, 방법.
  148. 제1항 내지 제147항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제3 조성물이 정맥내, 경막내, 피부내, 경피, 비경구, 근육내, 비강내, 피하, 경피, 기관내, 복강내, 동맥내, 혈관내, 흡입, 관류, 세척, 및/또는 경구 투여에 의해 상기 대상체로 투여되는, 방법.
  149. 제1항 내지 제148항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 포유동물인, 방법.
  150. 제149항에 있어서, 상기 대상체가 인간인, 방법.
  151. 제150항에 있어서, 상기 대상체가 소아 인간 대상체인, 방법.
  152. TK2, dGK, TP, p53R2, SUCLA2, SUCLG1, MPV17 및/또는 POLG를 인코딩하는 형질전환 유전자를 포함하는, 재조합 바이러스 벡터.
  153. 제152항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 TK2를 인코딩하는, 재조합 바이러스 벡터.
  154. 제153항에 있어서, 상기 TK2가 서열번호 1의 아미노산 서열과 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 재조합 바이러스 벡터.
  155. 제154항에 있어서, 상기 TK2가 서열번호 1의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 재조합 바이러스 벡터.
  156. 제155항에 있어서, 상기 TK2가 서열번호 1의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는, 재조합 바이러스 벡터.
  157. 제156항에 있어서, 상기 TK2가 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는, 재조합 바이러스 벡터.
  158. 제153항 내지 제157항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 2의 핵산 서열과 적어도 70% 동일한 핵산 서열을 갖는, 재조합 바이러스 벡터.
  159. 제158항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 2의 핵산 서열과 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 갖는, 재조합 바이러스 벡터.
  160. 제159항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 2의 핵산 서열과 적어도 95% 동일한 핵산 서열을 갖는, 재조합 바이러스 벡터.
  161. 제160항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 서열번호 2의 핵산 서열을 갖는, 재조합 바이러스 벡터.
  162. 제152항 내지 제161항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 벡터가 아데노-연관 바이러스(AAV), 아데노바이러스, 렌티바이러스, 레트로바이러스, 폭스바이러스, 바큘로바이러스, 단순 헤르페스 바이러스, 우두 바이러스, 및 합성 바이러스로 이루어진 군으로부터 선택되는, 재조합 바이러스 벡터.
  163. 제162항에 있어서, 상기 합성 바이러스가 키메라 바이러스, 모자이크 바이러스, 또는 의사형 바이러스이고/이거나 외래 단백질, 합성 폴리머, 나노입자, 또는 소분자를 포함하는, 재조합 바이러스 벡터.
  164. 제163항에 있어서, 상기 바이러스 벡터가 AAV인, 재조합 바이러스 벡터.
  165. 제164항에 있어서, 상기 AAV가 AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAVrh74, AAVrh.8 또는 AAVrh.10 혈청형인, 재조합 바이러스 벡터.
  166. 제165항에 있어서, 상기 AAV가 AAV1, AAV2, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8 및 AAV9인, 재조합 바이러스 벡터.
  167. 제164항에 있어서, 상기 바이러스 벡터가 의사형 AAV인, 재조합 바이러스 벡터.
  168. 제167항에 있어서, 상기 의사형 AAV가 AAV2/9인, 재조합 바이러스 벡터.
  169. 제167항에 있어서, 상기 의사형 AAV가 AAV2/8인, 재조합 바이러스 벡터.
  170. 제165항에 있어서, 상기 AAV가 재조합 캡시드 단백질을 포함하는, 재조합 바이러스 벡터.
  171. 제152항 내지 제170항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 근세포에서 상기 형질전환 유전자의 발현을 유도하는 프로모터에 작동 가능하게 연결되는, 재조합 바이러스 벡터.
  172. 제171항에 있어서, 상기 프로모터가 닭 베타 액틴 프로모터, 사이토메갈로바이러스(CMV) 프로모터, 미오신 경쇄-2 프로모터, 알파 액틴 프로모터, 트로포닌 1 프로모터, Na+/Ca2+ 교환기 프로모터, 디스트로핀 프로모터, 크레아틴 키나제 프로모터, 알파7 인테그린 프로모터, 뇌 나트륨이뇨 펩타이드 프로모터, 알파 B-크리스탈린/작은 열 충격 단백질 프로모터, 알파 미오신 중쇄 프로모터, 또는 심방 나트륨이뇨 인자 프로모터인, 재조합 바이러스 벡터.
  173. 제152항 내지 제172항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 형질전환 유전자가 근세포에서 상기 형질전환 유전자의 발현을 유도하는 인핸서에 작동 가능하게 연결되는, 재조합 바이러스 벡터.
  174. 제173항에 있어서, 상기 인핸서가 CMV 인핸서, 근세포 인핸서 인자 2(MEF2) 인핸서, 또는 MyoD 인핸서인, 재조합 바이러스 벡터.
  175. 제152항 내지 제174항 중 어느 한 항의 벡터, 및 키트의 사용자에게 제1항 내지 제158항 중 어느 한 항의 방법에 따라 대상체에게 상기 벡터를 투여하라고 지시하는 패키지 삽입물을 포함하는, 키트.
  176. 제175항에 있어서, 상기 키트가 dC, dT, dA, dG, dCMP, TMP, dAMP, dGMP, 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 약리학적 제제를 더 포함하는, 키트.
KR1020207032655A 2018-04-18 2019-04-18 미토콘드리아 dna 고갈 증후군을 포함하는 불균형 뉴클레오타이드 풀에 의해 초래된 질환에 대한 유전자 요법 KR20210009317A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862659281P 2018-04-18 2018-04-18
US62/659,281 2018-04-18
PCT/US2019/028108 WO2019204593A1 (en) 2018-04-18 2019-04-18 Gene therapy for diseases caused by unbalanced nucleotide pools including mitochondrial dna depletion syndromes

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20210009317A true KR20210009317A (ko) 2021-01-26

Family

ID=68239912

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020207032655A KR20210009317A (ko) 2018-04-18 2019-04-18 미토콘드리아 dna 고갈 증후군을 포함하는 불균형 뉴클레오타이드 풀에 의해 초래된 질환에 대한 유전자 요법

Country Status (12)

Country Link
US (1) US20210100917A1 (ko)
EP (1) EP3781671A4 (ko)
JP (1) JP2021522173A (ko)
KR (1) KR20210009317A (ko)
CN (1) CN112312929A (ko)
AU (1) AU2019255745A1 (ko)
BR (1) BR112020021324A2 (ko)
CA (1) CA3097392A1 (ko)
CL (1) CL2020002704A1 (ko)
CO (1) CO2020014193A2 (ko)
MX (1) MX2020010994A (ko)
WO (1) WO2019204593A1 (ko)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SG11201804811WA (en) 2015-12-22 2018-07-30 Zogenix International Ltd Fenfluramine compositions and methods of preparing the same
AU2016379345B2 (en) 2015-12-22 2020-09-17 Zogenix International Limited Metabolism resistant fenfluramine analogs and methods of using the same
JP2019526544A (ja) 2016-08-24 2019-09-19 ゾゲニクス インターナショナル リミテッド ５−ｈｔ２ｂアゴニストの形成を阻害するための製剤およびその使用方法
US10682317B2 (en) 2017-09-26 2020-06-16 Zogenix International Limited Ketogenic diet compatible fenfluramine formulation
EP3790537A1 (en) 2018-05-11 2021-03-17 Zogenix International Limited Compositions and methods for treating seizure-induced sudden death
US20220403417A1 (en) * 2019-11-20 2022-12-22 University Of Massachusetts Aav-based delivery of thymine kinase 2
US11612574B2 (en) 2020-07-17 2023-03-28 Zogenix International Limited Method of treating patients infected with severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2)
US20220096514A1 (en) * 2020-09-29 2022-03-31 Zogenix International Limited Methods of treating thymidine kinase 2 deficiency by administering deoxycytidine and deoxythymidine
JP2024515025A (ja) * 2021-03-26 2024-04-04 ゾジェニックス，インコーポレイテッド プリン及びピリミジンを含有する水性溶液及びその使用

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK2009990T3 (en) * 2006-04-07 2017-01-09 Univ Texas METHODS AND COMPOSITIONS RELATED TO adenoassociated VIRUSFAGPARTIKLER
US10292996B2 (en) * 2015-03-26 2019-05-21 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Deoxyribonucleoside monophospate bypass therapy for mitochondrial DNA depletion syndrome

Also Published As

Publication number Publication date
EP3781671A1 (en) 2021-02-24
CA3097392A1 (en) 2019-10-24
AU2019255745A1 (en) 2020-11-19
MX2020010994A (es) 2021-01-08
EP3781671A4 (en) 2022-01-26
BR112020021324A2 (pt) 2021-01-19
CO2020014193A2 (es) 2021-01-18
US20210100917A1 (en) 2021-04-08
CL2020002704A1 (es) 2021-01-29
WO2019204593A1 (en) 2019-10-24
CN112312929A (zh) 2021-02-02
JP2021522173A (ja) 2021-08-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20210009317A (ko) 미토콘드리아 dna 고갈 증후군을 포함하는 불균형 뉴클레오타이드 풀에 의해 초래된 질환에 대한 유전자 요법
US11975078B2 (en) Muscle-specific nucleic acid regulatory elements and methods and use thereof
JP7082050B2 (ja) 脊髄性筋萎縮症の処置において有用なアデノ－関連ウイルスベクター
ES2836258T3 (es) Construcciones de vectores virales adenoasociados de GLUT1 recombinante y métodos relacionados para restaurar la expresión de GLUT1
US20210393802A1 (en) Gene therapy for neuronal ceroid lipofuscinoses
TW201723179A (zh) 用於基因治療之經修飾的弗里德賴希（ｆｒｉｅｄｒｅｉｃｈ）運動失調基因及載體
JP6824169B2 (ja) 改変ｇ６ｐｃをコードするアデノ随伴ウイルスベクターおよびその使用
KR20210049833A (ko) Mma의 치료를 위한 비-붕괴적 유전자 요법
TW202310880A (zh) 靶向肌肉之基因療法之功效改進
US20220152223A1 (en) Vector and method for treating angelman syndrome
WO2023202469A1 (zh) 一种用于遗传性凝血因子缺乏病治疗的核酸构建体及其用途
CN111601620A (zh) 用于21-羟化酶缺乏症的腺相关病毒基因疗法
KR20190028389A (ko) 디스펄린병증의 치료를 위한 절단형 디스펄린
EP3624856B1 (en) Gene therapy for tuberous sclerosis
KR20210138030A (ko) 안구인두 근이영양증 (opmd) 치료용 조성물 및 방법
WO2024125494A1 (zh) 一种基因调节的方法及其应用
TW202221119A (zh) Dna結合域轉活化子及其用途
WO2024069144A1 (en) Rna editing vector
WO2023159190A1 (en) Gene therapy for arrhythmogenic cardiomyopathy
WO2022011099A1 (en) Modified hexosaminidase and uses thereof
CN115838725A (zh) 在哺乳动物心脏中特异性启动基因的启动子序列及其应用
CN116694640A (zh) 提高体内基因递送心脏特异性的核酸调控元件组合及应用
CN112236516A (zh) 针对氧化应激的基因疗法
BR112016021017B1 (pt) Partículas de raav, composições e uso das mesmas no tratamento para retinite pigmentosa ou no tratamento do estresse do retículo endoplasmático