KR20210003767A - Mage-b2 특이성을 갖는 t 세포 수용체 및 이의 용도 - Google Patents

Mage-b2 특이성을 갖는 t 세포 수용체 및 이의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20210003767A
KR20210003767A KR1020207031165A KR20207031165A KR20210003767A KR 20210003767 A KR20210003767 A KR 20210003767A KR 1020207031165 A KR1020207031165 A KR 1020207031165A KR 20207031165 A KR20207031165 A KR 20207031165A KR 20210003767 A KR20210003767 A KR 20210003767A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
tcr
polypeptide
cells
mage
Prior art date
Application number
KR1020207031165A
Other languages
English (en)
Inventor
캐시안 이
케 판
Original Assignee
보드 오브 리전츠, 더 유니버시티 오브 텍사스 시스템
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 보드 오브 리전츠, 더 유니버시티 오브 텍사스 시스템 filed Critical 보드 오브 리전츠, 더 유니버시티 오브 텍사스 시스템
Publication of KR20210003767A publication Critical patent/KR20210003767A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4632—T-cell receptors [TCR]; antibody T-cell receptor constructs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464484—Cancer testis antigens, e.g. SSX, BAGE, GAGE or SAGE
    • A61K39/464486—MAGE
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2833—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against MHC-molecules, e.g. HLA-molecules
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5158—Antigen-pulsed cells, e.g. T-cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
    • A61K2239/55—Lung
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/35—Valency
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/50—Fusion polypeptide containing protease site
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
    • C12N2502/11—Coculture with; Conditioned medium produced by blood or immune system cells
    • C12N2502/1121—Dendritic cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells

Abstract

본 개시내용은 MAGE-B2 특이적 T 세포를 생성하는 방법, 및 조작된 MAGE-B2-특이적 T 세포 수용체를 포함하는 조성물을 제공한다. 추가로, MAGE-B2-특이적 T 세포를 투여하는 것을 포함하는 암을 치료하는 방법이 제공된다.

Description

MAGE-B2 특이성을 갖는 T 세포 수용체 및 이의 용도
본 출원은, 2018년 4월 19일자로 출원된 미국 가특허원 제62/660,083호의 이익을 주장하고, 이의 전체가 본원에서 참조로서 도입된다.
"UTFCP1372WOβST25.txt"이란 명칭의 화일에 함유되어 있는 서열 목록은 29 KB(마이크로소프트 윈도우에서 측정)이고 2019년 4월 19일에 작성되었고, 전자 제출에 의해 여기에 제출되고, 본원에서 참조로서 도입된다.
분야
본 발명은 일반적으로 의약 및 면역학의 분야에 관한 것이다. 보다 특히, 이는 흑색종-연관 항원 B2(MAGE-B2)를 특이적으로 인식하는 T 세포 수용체에 관한 것이다.
T 세포-기반 치료는 다수의 암을 치료하는 방법으로서 현저히 유망한 것으로 밝혀졌고; 불운하게도, 이 접근법은 일반적 암에 대한 면역원성 항원 표적의 부족 및 비-암성 조직에 대한 잠재적 독성에 의해 방해되어 왔다. 이들 T 세포-기반 요법은 양자 세포 요법(ACT) 및/또는 항종양 T 세포 반응을 유도하는 백신접종 접근법을 포함할 수 있다. 암 백신접종 접근법은 펩티드, 단백질, DNA 또는 RNA 백신에 의한 특정 항원의 전달, 또는 수지상 세포(DC) 백신을 사용한 항-암 반응의 유도를 포함할 수 있다.
ACT는 일반적으로, 예를 들면, 암을 치료하기 위해, 자가 활성화 종양-특이적 T 세포를 환자에게 주입하는 것을 포함한다. ACT는 흑색종 환자에서 치료적 임상 반응을 야기했다. 일반적으로, 효과적 항-종양 T 세포 반응을 개발하기 위해, 하기 3개 단계가 통상 필요하다: 항원-특이적 T 세포의 프라이밍 및 활성화, 활성화 T 세포의 종양 부위로의 이동, 및 항원-특이적 T 세포에 의한 종양의 인식 및 사멸.
표적 항원의 선택은 효과적 항원-특이적 T 세포의 유도에 중요하다. 흑색종 및 다른 소수의 고형 종양 악성종양에 대하여 몇몇 종양-연관 항원이 동정(identify)되어 있지만, 췌장암, 난소암, 위암, 폐암, 자궁경부암, 유방암 및 두경부암의 면역원성 표적은 거의 없다. 발현 패턴, 암의 치료에 효과적이고 실질적 표적외 부작용을 회피하는데 필요한 특성에서, 면역원성 및 종양-특이성 둘 다인 표적 항원이 부족하다. 따라서, 이들 악성종양의 추가 표적 항원에 대한 신규의 T 세포-기반 요법에 대한 만족되지 않은 의학적 필요성이 존재한다.
본 개시내용의 특정 실시형태는, 흑색종-연관 항원 B2(MAGE-B2)로부터 유래된 항원성 펩티드에 결합할 수 있는 T 세포 수용체(TCR)을 제공한다. 한 가지 실시형태에서, TCR은 서열번호 3의 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성(identity)을 갖는 TCR 알파 폴리펩티드, 및 서열번호 5와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 TCR 베타 폴리펩티드를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, CDR1(서열번호 7), CDR2(서열번호 9) 및 CDR3(서열번호 11)과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 TCR 알파 폴리펩티드 및 CDR1(서열번호 13), CDR2(서열번호 15) 및 CDR3(서열번호 17)과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 TCR 베타 폴리펩티드를 포함하는 TCR이 제공된다. 특정 국면에서, TCR은 서열번호 3의 서열을 갖는 TCR 알파 폴리펩티드 및 서열번호 5의 서열을 갖는 TCR 베타 폴리펩티드를 포함한다.
또 다른 실시형태에서, TCR은 서열번호 19의 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 TCR 알파 폴리펩티드, 및 서열번호 22의 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 TCR 베타 폴리펩티드를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, CDR1(서열번호 23), CDR2(서열번호 25) 및 CDR3(서열번호 27)과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 TCR 알파 폴리펩티드, 및 CDR1(서열번호 29), CDR2(서열번호 31) 및 CDR3(CDR33)과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 TCR 베타 폴리펩티드를 포함하는 TCR을 제공한다. 특정 국면에서, TCR은 서열번호 19의 서열을 갖는 TCR 알파 폴리펩티드 및 서열번호 22의 서열을 갖는 TCR 베타 폴리펩티드를 포함한다.
일부 국면에서, 항원성 펩티드는 HLA-A2 제한된 것이다. 일부 국면에서, 항원성 펩티드는 HLA-A*0201, HLA-A*0202, HLA-A*0203, HLA-A*0204 또는 HLA-A*0205 제한된 것이다. 특정 국면에서, 항원성 펩티드는 HLA-A*0201 제한된 것이다.
일부 국면에서, TCR은 막관통 도메인을 결여하는 가용성 TCR이다. 특정 국면에서, TCR은 검출가능한 표지 및/또는 치료제를 추가로 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 실시형태에 따르는 복수의 TCR(예를 들면, MAGE-B2로부터 유래된 항원성 펩티드에 결합할 수 있는 TCR)을 포함하는 다가 TCR 복합체(multivalent TCR complex)가 제공된다. 일부 국면에서, 다가 TCR은 2, 3, 4 또는 그 이상의 TCR을 포함한다. 특정 국면에서, 다가 TCR은 지질 이층에 존재하거나 입자에 부착되어 있다. 특정 국면에서, TCR은 링커 분자를 통해 접합되어 있다.
추가의 실시형태는 서열번호 3의 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 TCR 알파 폴리펩티드 및/또는 서열번호 5의 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 TCR 베타 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 또 다른 실시형태는 CDR1(서열번호 7), CDR2(서열번호 9) 및 CDR3(서열번호 11)과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 TCR 알파 폴리펩티드 및 CDR1(서열번호 13), CDR2(서열번호 15) 및 CDR3(서열번호 17)과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 TCR 베타 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 특정 국면에서, 폴리펩티드는 서열번호 3의 TCR 알파 폴리펩티드 및 서열번호 5의 TCR 베타 폴리펩티드를 포함한다. 일부 국면에서, 폴리펩티드는 서열번호 3의 TCR 알파 폴리펩티드를 포함한다. 특정 국면에서, 폴리펩티드는 서열번호 5의 TCR 베타 폴리펩티드를 포함한다. 본원에서는 실시형태의 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 추가로 제공된다.
추가의 실시형태는, 서열번호 19의 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 TCR 알파 폴리펩티드 및/또는 서열번호 22의 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 TCR 베타 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 또 다른 실시형태는 CDR1(서열번호 23), CDR2(서열번호 25) 및 CDR3(서열번호 27)과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 TCR 알파 폴리펩티드 및 CDR1(서열번호 29), CDR2(서열번호 31) 및 CDR3(서열번호 33)과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 TCR 베타 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 특정 국면에서, 폴리펩티드는 서열번호 19의 TCR 알파 폴리펩티드 및 서열번호 22의 TCR 베타 폴리펩티드를 포함한다. 일부 국면에서, 폴리펩티드는 서열번호 19의 TCR 알파 폴리펩티드를 포함한다. 특정 국면에서, 폴리펩티드는 서열번호 22의 TCR 베타 폴리펩티드를 포함한다. 추가로, 본원에서는 실시형태의 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 제공된다.
또 다른 실시형태에서, 실시형태의 TCR(예를 들면, MAGE-B2로부터 유래된 항원성 펩티드에 결합할 수 있는 TCR)을 포함하는 발현 벡터를 제공한다. 일부 국면에서, 발현 벡터는 바이러스 벡터이다. 특정 국면에서, 바이러스 벡터는 레트로바이러스 벡터 또는 렌티바이러스 벡터이다. 추가의 국면에서, TCR은 링커 도메인(linker domain)을 포함한다. 일부 국면에서, 링커 도메인은 TCR 알파 폴리펩티드와 TCR 베타 폴리펩티드 사이에 존재한다. 특정 국면에서, 링커 도메인은 하나 이상의 절단 부위를 포함한다. 일부 국면에서, 하나 이상의 절단 부위는 퓨린 절단 부위(Furin cleavage site) 및/또는 P2A 절단 부위이다. 일부 국면에서, 하나 이상의 절단 부위는 스페이서에 의해 분리되어 있다. 특정 국면에서, 스페이서는 SGSG 또는 GSG이다. 일부 국면에서, TCR 알파 폴리펩티드 및 TCR 베타 폴리펩티드는 IRES 서열에 의해 연결되어 있다.
추가로, 본원에는 실시형태의 TCR(예를 들면, MAGE-B2로부터 유래된 항원성 펩티드에 결합할 수 있는 TCR)을 발현하도록 조작된(engineered) 숙주 세포가 제공된다.
일부 국면에서, 세포는 면역 세포이다. 특정 국면에서, 세포는 제대 또는 혈액으로부터 단리된다. 일부 국면에서, 면역 세포는 T 세포 또는 말초혈 림프구이다. 특정 국면에서, T 세포는 CD8+ T 세포, CD4+ T 세포 또는 γδT 세포이다. 일부 국면에서, 관련 신호전달 분자는 TCR에 부착될 수 있고, TCR이 관여하면, 비-T 세포 면역 이펙터 세포에서 활성화 신호를 전달한다. 특정 국면에서, 세포는 NK 세포, 불변 NK 세포, NKT 세포, 중간엽 줄기 세포(MSC) 또는 유도된 다능성 줄기(iPS) 세포이다. 일부 국면에서, 세포는 동종이계 또는 자가이다. 추가로, 본원에는 실시형태의 MAGE-B2 TCR-특이적 세포의 모집단(population)을 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
추가로, 본원에는, 상기 면역 세포를 실시형태의 발현 벡터와 접촉시키는 단계를 포함하는, MAGE-B2-특이적 면역 세포를 조작하는 방법이 제공된다. 일부 국면에서, 면역 세포는 T 세포, 말초혈 림프구, NK 세포, 불변 NK 세포 또는 NKT 세포이다. 일부 국면에서, 접촉은 추가로 형질감염 또는 형질도입으로서 정의된다. 특정 국면에서, 말초혈 림프구는 OKT3 및 IL-2로 자극된다. 추가의 국면에서, 상기 방법은 면역 세포를 선별하여 TCR 조작된 T 세포를 단리하고, 연속 희석에 의한 T 세포 클로닝, 및 신속 확장 프로토콜에 의한 T 세포 클론의 확장을 수행하는 단계를 추가로 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 암을 치료하기 위한, 실시형태에 따르는 치료학적 유효량의 MAGE-B2-특이적 TCR 발현 세포의 용도를 제공한다. 또한, 본원에는 대상체에서 암을 치료하기 위한, 실시형태에 따르는 유효량의 MAGE-B2-특이적 세포를 포함하는 조성물이 제공된다. 특정 국면에서, MAGE-B2-특이적 TCR 발현 세포는 T 세포이다.
또 다른 실시형태에서, 실시형태의 치료학적 유효량의 MAGE-B2-특이적 세포(예를 들면, MAGE-B2로부터 유래된 항원성 펩티드에 결합할 수 있는 TCR을 발현하는)를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 국면에서, MAGE-B2-특이적 세포는 T 세포이다.
특정 국면에서, 대상체는 HLA-A2 대립인자, 예컨대, HLA-A*0201, HLA-A*0202, HLA-A*0203, HLA-A*0204 또는 HLA-A*0205 대립인자를 갖는 것으로 동정되어 있다. 특정 국면에서, 대상체는 HLA-A*0201 대립인자를 갖는 것으로 동정되어 있다. 추가의 국면에서, 상기 방법은 치료학적 유효량의 MAGE-B2-특이적 T 세포의 투여 전에 대상체에 대해 림프구고갈(lymphodepletion)을 수행하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 국면에서, 치료학적 유효량의 MAGE-B2-특이적 T 세포는 항종양 활성을 갖는 자가 종양 침윤 림프구(TIL)의 샘플로부터 유래한다. 일부 국면에서, MAGE-B2-특이적 세포는 대상체에게 정맥내, 복강내 또는 종양내 투여된다. 특정 국면에서, 대상체는 인간이다. 일부 국면에서, 상기 방법은 적어도 하나의 추가 치료제를 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 특정 국면에서, 적어도 하나의 추가 치료제는 화학요법, 방사선요법 및 면역요법으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 국면에서, 적어도 하나의 추가 치료제는 면역요법이다. 일부 국면에서, 면역요법은 면역 체크포인트 억제제이다. 특정 국면에서, 면역 체크포인트 억제제는 CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, BTLA, B7H3, B7H4, TIM3, KIR 또는 아데노신 A2a 수용체(A2aR)로 이루어진 그룹으로부터 선택된 면역 체크포인트 단백질 또는 이의 리간드를 억제한다. 일부 국면에서, 면역 체크포인트 억제제는 PD-1 또는 CTLA-4를 억제한다.
하기 도면은 본 명세서의 일부를 형성하고, 본 발명의 특정 국면을 추가로 입증하기 위해 포함된다. 본 발명은, 본원에 제공된 특정 실시형태의 상세한 설명과 조합하여 하나 이상의 이들 도면을 참조함으로써 보다 잘 이해될 수 있다.
도 1: 폐암 세포주 및 불사멸 정상 인간 소공 상피 세포(HSAEC1-KT 및 HSAEC2-KT)에서 MAGE-B2 발현의 웨스턴-블롯 검출.
도 2: MAGE-B2 HLA-A2 제한된 펩티드-특이적 세포독성 T 림프구(CTL) 생성. HLA-A2 제한된 MAGE-B2 에피토프(GVYDGEEHSV)를 갖는 사량체를 포함하는 T 세포 모집단의 검출(좌측). 신속 확장 프로토콜(REP)에 의한 CD8+사량체+ 모집단의 선별 및 확장(중간). 제한 희석 방법을 사용한 CTL 클론의 생성(우측).
도 3a-3d: MAGE-B2 CTL 클론의 사멸 능력 검출. (도 3a) MAGE-B2 펩티드로 펄스시킨 T2 세포의 펩티드 적정 검정. (도 3b) 51Cr 방출 검정에 의한 폐암 세포주 H2023(HLA-A*0201) 및 정상 폐 세포주 HSAEC2-KT(HLA-A*0201)에 대한 CTL 클론의 세포독성. (도 3c) 폐암 세포주 H522, H1355, H1755 및 DFC-1032에 대한 CTL 클론의 세포독성. (도 3d) 세포주 둘 다에서 HLA-A2 강제 발현 뿐만 아니라, 모체 폐암 세포주 PC-9 및 H1573에 대한 MAGE-B2 CTL 클론의 세포독성.
도 4: MAGE-B2 T 세포 수용체 조작된 T 세포(TCR-T) 생성. 활성화 동종이계 PBMC(좌측)을 레트로바이러스에 감염시키고, 감염 후에 CD8*사량체*가 출현했다(중앙). TCR-T 세포주는 CD8*사량체* 모집단을 선별 및 확장시켜 발달시켰다(우측).
도 5a-b: MAGE-B2 TCR-T 사멸 능력 검정. (도 5a) 펩티드 적정 검정. 상이한 농도의 MAGE-B2 펩티드로 펄스시킨 T2 세포. (도 5b) 표준 51Cr 방출 검정에 의해 검출된 폐암 세포주 H2023(HLA-A*0201) 및 정상 폐 세포주 HSAEC2-KT(HLA-A*0201)에 대한 MAGE-B2 TCR-T 세포독성.
도 6: 세포내 사이토킨 염색(ICS)에 의한 MAGE-B2 TCR-T 기능 검출.
도 7: 건강한 공여체 PBMC와의 수지상 세포-T 세포(DC-T) 공-배양 시스템으로부터의 MAGE-B2 특이적 T 세포 생성물의 대표적 생성. 작은 CD8+/사량체+ 모집단은 MB2-231 펩티드 펄스 DC를 사용한 2회 자극 후에 1매의 48 웰 플레이트 중의 3 웰에서 관찰되었다. 3개 양성 웰을 사량체 가이드 선별 기술을 사용하여 별도로 선별하고, REP에 의한 1 또는 2회의 확장을 수행했다. 최종 생성물의 CD8 및 사량체 염색이 제시되어 있다.
도 8a-8e: MAGE-B2 특이적 T 세포의 기능적 결합력. (도 8a) 이펙터 대 표적(E:T) 비율이 20:1인 상이한 농도의 MB2-231 펩티드로 펄스시킨 3 MAGE-B2 CTL 세포주 용해. (도 8b) 상이한 E:T 비율에서 3 MAGE-B2 CTL 세포주 용해 MAGE-B2 발현 종양 세포주 H2023(HLA-A2+). 정상 폐 세포주 HSAEC2-KT(MAGE-B2-, HLA-A2+)는 음성 대조군이다. (도 8c) 다양한 E:T 비율에서 3 MAGE-B2 CTL 세포주 용해 MAGE-B2 발현 및 HLA-A2 강제 발현 종양 세포주 H1299-A2. 모체 세포주 H1299(HLA-A2-)는 음성 대조군이다. (도 8d-8e)는 3 MAGE-B2 CTL 세포주 용해 종양 세포주 H1395(MAGE-B2+, HLA-A2+), 522(MAGE-B2+, HLA-A2+), H1355(MAGE-B2+, HLA-A2+), H1755(MAGE-B2+, HLA-A2+) 및 DFC-1032(MAGE-B2+, HLA-A2+).
도 9a-9e: MAGE-B2 TCR-T의 생성 및 기능적 결합력. (도 9a) 고기능성 CTL 세포주 MB2-231 C5로부터의 TCR-T 유전자를 함유하는 레트로바이러스에 의한 감염 전, 감염 후, 및 사량체 가이드 선별 및 확장 후, TCR-T의 사량체 검출. (도 9b) 이펙터 대 표적(E:T) 비율이 20:1인 상이한 농도의 MB2-231 펩티드로 펄스시킨 MB2-231 C5 TCR-T 용해 T2 세포. (도 9c) MB2-231 C5 TCR-T 용해 MAGE-B2 발현 종양 세포주 H2023(HLA-A2+), 정상 폐 세포주 HSAEC2-KT(MAGE-B2-, HLA-A2+)는 음성 대조군이다. (도 9d) 상이한 E:T 비율에서 MB2-231 C5 TCR-T 용해 MAGE-B2 발현 및 HLA-A2 강제 발현 종양 세포주 H1299-A2. 모체 세포주 H1299(HLA-A2-)는 음성 대조군이다. (도 9e) 상이한 E:T 비율에서 MB2-231 C5 TCR-T 용해 종양 세포주 H1395(MAGE-B2+, HLA-A2+), H522(MAGE-B2+, HLA-A2+), H1355(MAGE-B2+, HLA-A2+), H1755(MAGE-B2+, HLA-A2+) 및 DFC-1032(MAGE-B2+, HLA-A2+).
도 10a-10c: 세포내 사이토킨 염색(ICS) 검정에 의한 MB2-231 C5 TCR-T의 기능적 검출. MB2-231 C5 TCR-T를 E:T=10:1 비율에서 MB2-231 펩티드/M26 펩티드, 종양 세포주 H2023(MAGE-B2+, HLA-A2+), 정상 폐 세포주 HSAEC2-KT(MAGE-B2-, HLA-A2+), 종양 세포주 H1395(MAGE-B2+, HLA-A2+), H522(MAGE-B2+, HLA-A2+), H1299-A2(MAGE-B2+, HLA-A2 강제 발현), H1299(MAGE-B2+, HLA-A2-), H1355(MAGE-B2+, HLA-A2+), H1755(MAGE-B2+, HLA-A2+) 및 DFC-1032(MAGE-B2+, HLA-A2+)로 펄스시킨 T2와 공-배양했다. 하룻밤 후, TCR 경로의 하류 활성화 마커, CD137, CD69, IFN-γ 및 TNF-α를 ICS 검정으로 검출했다. M26 펩티드 펄스 T2, HSAEC2-KT, H1299를 음성 대조군으로 사용했다. MB2-231 펩티드, H2023, H1395, H1299-A2, H1755로 펄스시킨 T2와 공-배양한 후, CD137, CD69, IFN-γ 및 TNF-α의 수준은 음성 대조군과 비교하여 유의적으로 증강되었다.
암/정소 항원 3.2(UniProt No. O15479)(CT3.2)로서도 또한 공지된 흑색종-연관 항원 B2(MAGE-B2)는 X 염색체 상에 위치하는 유전자에 의해 코딩되어 있다. MAGE-B2는, 단백질 및 RNA 수준에서 측정할 때, 정소에서 발현되지만, 다른 정상 조직에서는 발현되지 않는다. MAGE-B2는 폐암, 간암, 두경부암, 위암, 교아종 및 결장직장암을 포함하는 몇몇 암에서 과발현된다. 하나의 HLA-A2(예를 들면, HLA-A*0201, HLA-A*0202, HLA-A*0203, HLA-A*0204 또는 HLA-A*0205) 제한된 펩티드(GVYDGEEHSV, 서열번호 1)은 난소암 세포로부터 용출 및 동정되었다[참조: Barnea et al., 2002]. 에피토프는 또한 교아종 다형태 세포 T98G 및 U-87의 펩티돔 분석으로부터 동정되었다[참조: Shraibman et al., 2016].
MAGE-B2 펩티드 에피토프를 사용하여, 항원-특이적 CTL은, 내인적으로-제시된 항원을 HLA-정합 동종이계 종양 세포주 상에서 인식하는 환자 말초혈 단핵구 세포(PBMC)로부터 본 연구에서 생성했다. 이러한 HLA-A2-제한된 MAGE-B2 펩티드를 제시하는 항원-제시 세포에 의해 자극된 이들 항원-특이적 CTL은 폐암 세포에 대해 선택적으로 세포독성인 것으로 밝혀졌다.
따라서, 특정 국면에서, 본 개시내용은, MAGE-B2 HLA-A2 제한된 에피토프 GVYDGEEHSV(서열번호 1)을 인식하고 특이적으로 결합하는 TCR을 제공한다. 본 개시내용은 또한 이러한 TCR을 코딩하는 뉴클레오티드 서열, 나이브 T 세포를 변형시키고 MAGE-B2-특이적 T 세포를 생성하기 위해 사용될 수 있는 이러한 뉴클레오티드 서열을 포함하는 발현 벡터를 제공한다. 본 개시내용은 추가로, 악성 T 세포가 MAGE-B2 항원을 발현하는 HLA-A2-양성 암 환자 등의 암 환자에 대한 양자 세포 요법 등의 치료를 위한 MAGE-B2-특이적 T 세포의 용도를 제공한다. 본원에서 제공된 CTL 등의 항원-특이적 T 세포는 고형 암을 표적화하기 위해 사용될 수 있다.
I. 정의
본원 및 첨부 특허청구범위에서 사용된 단수형 "a", "an" 및 "the"는, 문맥이 명확하게 달리 지시하지 않는 한, 복수의 대상을 포함한다. 따라서, 예를 들면, "세포"에 대한 언급은 복수의 이러한 세포를 포함하고, "펩티드"에 대한 언급은 당업자에게 공지되어 있는 하나 이상의 펩티드 및 이의 등가물(예: 폴리펩티드)에 대한 언급을 포함한다.
본원에서 및 첨부 청구범위에서 사용된 용어 "또는"은, 단지 양자택일을 지칭하는 것으로 명시적으로 나타내거나 양자택일이 상호 배타적이지 않는 한, "및/또는"을 의미한다.
본원에서 사용되는 용어 "또 다른"은 적어도 제2 이상을 의미할 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "약"은, 특정 수치 또는 측정치가 측정치를 수득하고 수치를 계산하기 위해 사용된 장치와 연관된 고유 편차, 또는 연구 대상체 사이에 존재하는 자연 편차를 포함하는 것을 나타낸다.
용액의 성분(예를 들면, 하나 이상의 단백질, 폴리머 또는 소분자의 조제물)과 관련하여 본원에서 사용되는 용어 "본질적으로 포함하지 않는"은 제조물이 성분을 포함하도록 제형화되지 않거나 이러한 성분이 미량(예를 들면, 오염물로서)으로만 존재하는 것을 의미한다. 특정 실시형태에서, 목적 분자의 조제물은, 조제물이 0.05%(w/w) 미만의 당해 성분을 포함하는 경우, 특정 성분을 본질적으로 포함하지 않는다. 특정 실시형태에서, 목적 분자의 조제물은, 조제물이 0.01%(w/w) 미만의 해당 성분을 포함하는 경우, 특정 성분을 본질적으로 포함하지 않는다. 특정 실시형태에서, 목적 분자의 조제물은, 표준 분석 방법(예를 들면, UV 분광광도법, 질량 분석법, 핵자기 공명 분광법 등)을 사용하여 조제물에서 특정 성분의 양을 검출할 수 없는 경우, 특정 성분을 본질적으로 포함하지 않는다.
용액 또는 현탁액의 성분(예를 들면, 하나 이상의 특정 유형, 단백질, 폴리머 또는 소분자의 조제물)과 관련하여 본원에서 사용된 용어 "농후화"는 조제물이 정상 농도보다 높은 농도 또는 정상 수보다 많은 수로 해당 성분을 포함하도록 제형화되었음을 의미한다(예를 들면, 림프구의 현탁액은 이펙터 T 림프구가 농후화될 수 있다).
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "치료하다", "치료", "치료하는" 등은, 예를 들면, 대상체에게 치료제를 투여함으로써 또는 대상체에 대해 외과수술, 임상 또는 기타 의약적 처리를 수행함으로써 대상체에서 질환 또는 병태의 증상을 개선, 경감 또는 완화시키는 프로세스를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "대상체" 또는 "환자"는 개체, 예를 들면, 영장류, 포유동물 또는 척추동물 등의 인간 또는 비-인간 생물을 지칭하기 위해 본원에서 호환적으로 사용된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "치료학적으로 유효한" 또는 "치료학적으로 유익한" 등은, 질환, 장애 또는 병태의 하나 이상의 증상을 개선, 경감 또는 완화시키고, 이에 의해, 예를 들면, 질환, 장애 또는 병태의 징후 또는 증상의 빈도 또는 중증도를 감소시킴으로써 질환, 장애 또는 병태를 갖는 대상체의 행복을 증강시키는 치료제 또는 외과수술, 임상 또는 기타 의약적 처치를 지칭한다. 따라서, 치료학적으로 유효한 또는 치료학적으로 유익한 암 치료는, 예를 들면, 종양의 크기를 감소시키고 종양의 성장 속도를 저하시키고 종양의 파종 또는 전이의 가능성을 저하시킬 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "약제학적으로 허용되는" 또는 "약리학적으로 허용되는"은, 포유동물 또는 척추동물 대상체에게 투여되는 경우, 부작용, 알러지 또는 기타 바람직하지 않은 반응을 생성하지 않는 치료제의 약제 제형을 지칭한다. 이러한 조제물은 무균성, 발열성, 순도에 대한 적정 제조 기준(GMP) 및 FDA 생물학적 기준국이 요구하는 이의 기타 관련 기준에 준거하여 제형화되어야 한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "약제학적으로 허용되는 담체"는, 예를 들면, 당업자에게 공지되어 있는 바와 같이, 수성 용매(예: 물, 알콜/수용액, 식염수 용액, 비경구 비히클, 예컨대, 염화나트륨, 링거 덱스트로즈 등), 비수성 용매(예: 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물성 오일 및 주사가능한 유기 에스테르, 예컨대, 에틸올레에이트), 분산 매질, 코팅, 계면활성제, 항산화제, 보존제(예: 항균제 또는 항진균제, 항산화제, 킬레이트제 및 불활성 가스), 등장제, 흡수 지연제, 염, 약물, 약물 안정화제, 겔, 결합제, 부형제, 붕해제, 윤활제, 감미제, 향미제, 염료, 유체 및 영양 보충제 및 이의 임의의 조합과 같이, 포유동물 또는 척추동물 대상체에게 전달하기 위해 치료제를 제형화하는데 사용된 임의의 및 모든 화학적 화합물 또는 용매를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "단위 투여량", "용량" 또는 "투약량"은, 바람직한 치료 섭생에 따라 적절한 경로에 의해 투여되는 경우, 대상체에서 치료학적으로 효과적일 것으로 예상되는 소정량의 제제를 함유하는, 포유동물 또는 척추동물 대상체에 대한 투여에 적합한 치료제의 제형을 지칭한다. 대상체에게 투여되는 특정 치료제의 실제 투여량은, 예를 들면, 대상체의 체중, 연령, 건강 및 성별, 치료되는 질환의 유형, 질환 진행의 정도, 이전 또는 동시의 치료적 개입, 투여 경로 및 특정 치료 물질의 효력, 안정성 및 독성을 포함하는, 다양한 신체적 및 생리학적 파라미터에 비추어 의료 제공자에 의해 경험적으로 결정될 수 있다.
II. MAGE-B2 TCR 방법 및 조성물
특정 실시형태에서, 본 개시내용은 서열 GVYDGEEHSV(서열번호 1)을 포함하는 MAGE-B2 펩티드 에피토프를 제공한다. MAGE-B2 펩티드 에피토프는, MAGE-B2 펩티드 에피토프를 인식하거나 이에 결합하는 T 세포의 증식을 유도하기 위해 T 세포의 모집단과 접촉하거나 모집단의 자극에 사용될 수 있다. MAGE-B2 펩티드 에피토프는 인간 환자 등의 대상체에게 투여되어, 암에 대한 대상체의 면역 반응을 증강시킬 수 있다. MAGE-B2 펩티드 에피토프는 능동 면역요법(예: 암 백신) 또는 수동 면역요법(예: 양자 세포 요법)에서 포함될 수 있다. 능동 면역요법은 대상체를 정제된 종양 항원 또는 MAGE-B2 펩티드 에피토프(천연 또는 변형된)로 면역시키는 것을 포함한다. 또는, MAGE-B2 펩티드 에피토프(또는 종양 항원을 코딩하는 유전자로 형질감염시킨)로 펄스시킨 항원 제시 세포를 대상체에게 투여할 수 있다. MAGE-B2 펩티드 에피토프는 변형시킬 수 있거나, 하나 이상의 돌연변이, 예를 들면, 치환 돌연변이를 함유할 수 있다. 양자 세포 요법은 세포를 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 세포(예: 세포독성 T 세포)는 MAGE-B2 펩티드 에피토프에 대해 시험관내에서 감작화되어 있다.
특히, T 세포는, 6 내지 8주 등의 짧은 기간 이내에 양자 세포 요법을 위해 생체외에서 활성화시키거나 확장시킬 수 있다. T 세포는, 사량체 가이드 선별 및 신속 확장 프로토콜(REP) 등에 의해 말초혈로부터 단리된 T 세포(예: CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, γδT 세포 및 조절 T 세포(Treg))로부터 단리 및 확장시킬 수 있다. 이어서, 펩티드 또는 상응하는 폴리뉴클레오티드(예: 전장 MAGE-B2 또는 MAGE-B2 펩티드 에피토프)를 HLA-A2 양성 수지상 세포, 림프아구 세포주(LCL), PBMC 또는 인공 항원 제시 세포(aAPC)에 로딩할 수 있고, 이어서 수회의 자극에 의해 T 세포와 공-배양하여 항원-특이적 CTL 세포주 또는 클론을 생성할 수 있다. 추가로, 면역 조절 파라미터의 조작에 의해, 이들 확장된 항원 특이적 T 세포의 이펙터 기능 및 생체내 장기간 지속성을 증강시킬 수 있다. 이들 CTL은 MAGE-B2 및 HLA-A2 양성 암 환자의 양자 세포 요법에 사용될 수 있다. 추가로, 본 개시내용으로부터 생성될 수 있는 다른 MAGE-B2-특이적 세포는 NK 세포, 불변 NK 세포, NKT 세포, 중간엽 줄기 세포(MSC) 및 유도된 다능성 줄기(iPS) 세포를 포함한다. 이들 세포는 혈액 또는 제대로부터 단리할 수 있다. 본 개시내용의 항원-특이적 세포는 자가 또는 동종이계일 수 있다.
또 다른 방법에서, 항원-특이적 세포는 본원에 제공된 MAGE-B2 TCR(예를 들면, 서열번호 2 내지 5 또는 18 내지 22)을 사용하여 생성할 수 있다. 이러한 방법에서, TCR 서열은, 암 환자의 양자 세포 요법에 사용될 수 있는 항원-특이적 세포를 생성하기 위해, T 세포(예: CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, γδT 세포 및 Treg), NK 세포, 불변 NK 세포, NKT 세포, MSC 또는 iPS 세포 등의 숙주 세포에 삽입된다.
MAGE-B2 펩티드 에피토프 및 TCR 서열은 하기에 제공되어 있다.
· 펩티드 에피토프: GVYDGEEHSV (서열번호 1)
· 알파 쇄 (TRAV9-2*01F):
ATGAACTATTCTCCAGGCTTAGTATCTCTGATACTCTTACTGCTTGGAAGAACCCGTGGAAATTCAGTGACCCAGATGGAAGGGCCAGTGACTCTCTCAGAAGAGGCCTTCCTGACTATAAACTGCACGTACACAGCCACAGGATACCCTTCCCTTTTCTGGTATGTCCAATATCCTGGAGAAGGTCTACAGCTCCTCCTGAAAGCCACGAAGGCTGATGACAAGGGAAGCAACAAAGGTTTTGAAGCCACATACCGTAAAGAAACCACTTCTTTCCACTTGGAGAAAGGCTCAGTTCAAGTGTCAGACTCAGCGGTGTACTTCTGTGCTCTGACCAACGACTACAAGCTCAGCTTTGGAGCCGGAACCACAGTAACTGTAAGAGCAAATATCCAGAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGATTTTGATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGAAAGTTCCTGTGATGTCAAGCTGGTCGAGAAAAGCTTTGAAACAGATACGAACCTAAACTTTCAAAACCTGTCAGTGATTGGGTTCCGAATCCTCCTCCTGAAAGTGGCCGGGTTTAATCTGCTCATGACGCTGCGGCTGTGGTCCAGCTGA (서열번호 2)
· 알파 쇄
MNYSPGLVSL ILLLLGRTRG NSVTQMEGPV TLSEEAFLTI NCTYTATGYP SLFWYVQYPG EGLQLLLKAT KADDKGSNKG FEATYRKETT SFHLEKGSVQ VSDSAVYFCA LTNDYKLSFG AGTTVTVRAN IQNPDPAVYQ LRDSKSSDKS VCLFTDFDSQ TNVSQSKDSD VYITDKTVLD MRSMDFKSNS AVAWSNKSDF ACANAFNNSI IPEDTFFPSP ESSCDVKLVE KSFETDTNLN FQNLSVIGFR ILLLKVAGFN LLMTLRLWSS (서열번호 3)
· 베타 쇄 (TRBV15*02F)
ATGGGTCCTGGGCTTCTCCACTGGATGGCCCTTTGTCTCCTTGGAACAGGTCATGGGGATGCCATGGTCATCCAGAACCCAAGATACCAGGTTACCCAGTTTGGAAAGCCAGTGACCCTGAGTTGTTCTCAGACTTTGAACCATAACGTCATGTACTGGTACCAGCAGAAGTCAAGTCAGGCCCCAAAGCTGCTGTTCCACTACTATGACAAAGATTTTAACAATGAAGCAGACACCCCTGATAACTTCCAATCCAGGAGGCCGAACACTTCTTTCTGCTTTCTTGACATCCGCTCACCAGGCCTGGGGGACGCAGCCATGTACCTGTGTGCCACCAGCAGGGGCGGGAGGTACAATGAGCAGTTCTTCGGGCCAGGGACACGGCTCACCGTGCTAGAGGACCTGAAAAACGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTGTGTTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATCTCCCACACCCAAAAGGCCACACTGGTGTGCCTGGCCACAGGCTTCTTCCCTGACCACGTGGAGCTGAGCTGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTGCACAGTGGGGTCAGCACGGACCCGCAGCCCCTCAAGGAGCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAGATACTGCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGCCACCTTCTGGCAGAACCCCCGCAACCACTTCCGCTGTCAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAATGACGAGTGGACCCAGGATAGGGCCAAACCCGTCACCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGGGTAGAGCAGACTGTGGCTTTACCTCGGTGTCCTACCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCTCTATGAGATCCTGCTAGGGAAGGCCACCCTGTATGCTGTGCTGGTCAGCGCCCTTGTGTTGATGGCCATGGTCAAGAGAAAGGATTTCTGA (서열번호 4)
· 베타 쇄
MGPGLLHWMA LCLLGTGHGD AMVIQNPRYQ VTQFGKPVTL SCSQTLNHNV MYWYQQKSSQ APKLLFHYYD KDFNNEADTP DNFQSRRPNT SFCFLDIRSP GLGDAAMYLC ATSRGGRYNE QFFGPGTRLT VLEDLKNVFP PEVAVFEPSE AEISHTQKAT LVCLATGFFP DHVELSWWVN GKEVHSGVST DPQPLKEQPA LNDSRYCLSS RLRVSATFWQ NPRNHFRCQV QFYGLSENDE WTQDRAKPVT QIVSAEAWGR ADCGFTSVSY QQGVLSATIL YEILLGKATL YAVLVSALVL MAMVKRKDF (서열번호 5)
· 알파 쇄 CDR1
GCCACAGGATACCCTTCC (서열번호 6)
ATGYPS (서열번호 7)
· 알파 쇄 CDR2
GCCACGAAGGCTGATGACAAG (서열번호 8)
ATKADDK(서열번호 9)
· 알파 쇄 CDR3
GCTCTGACCAACGACTACAAGCTCAGC (서열번호 10)
ALTNDYKLS(서열번호 11)
· 베타 쇄 CDR1
TTGAACCATAACGTC (서열번호 12)
LNHNV(서열번호 13)
· 베타 쇄 CDR2
TACTATGACAAAGATTTT (서열번호 14)
YYDKDF (서열번호 15)
· 베타 쇄 CDR3
GCCACCAGCAGGGGCGGGAGGTACAATGAGCAGTTC (서열번호 16)
ATSRGGRYNEQF(서열번호 17)
MAGE-B2-231 C5 TCR 서열은 하기에 제공되어 있다. 신호 펩티드는 밑줄되어 있고, 가변 영역은 이탤릭체로 되어 있다.
· 알파 쇄 (TRAV10*01):
ATGAAAAAGCATCTGACGACCTTCTTGGTGATTTTGTGGCTTTATTTTTATAGGGGGAATGGC AAAAACCAAGTGGAGCAGAGTCCTCAGTCCCTGATCATCCTGGAGGGAAAGAACTGCACTCTTCAATGCAATTATACAGTGAGCCCCTTCAGCAACTTAAGGTGGTATAAGCAAGATACTGGGAGAGGTCCTGTTTCCCTGACAATCATGACTTTCAGTGAGAACACAAAGTCGAACGGAAGATATACAGCAACTCTGGATGCAGACACAAAGCAAAGCTCTCTGCACATCACAGCCTCCCAGCTCAGCGATTCAGCCTCCTACATCTGTGTGGTGATTTCAGGCTTTCAGAAACTTGTATTTGGAACTGGCACCCGACTTCTGGTCAGTCCAAATATCCAGAACCCTGACCCTGCCGTGTACCAGCTGAGAGACTCTAAATCCAGTGACAAGTCTGTCTGCCTATTCACCGATTTTGATTCTCAAACAAATGTGTCACAAAGTAAGGATTCTGATGTGTATATCACAGACAAAACTGTGCTAGACATGAGGTCTATGGACTTCAAGAGCAACAGTGCTGTGGCCTGGAGCAACAAATCTGACTTTGCATGTGCAAACGCCTTCAACAACAGCATTATTCCAGAAGACACCTTCTTCCCCAGCCCAGAAAGTTCCTGTGATGTCAAGCTGGTCGAGAAAAGCTTTGAAACAGATACGAACCTAAACTTTCAAAACCTGTCAGTGATTGGGTTCCGAATCCTCCTCCTGAAAGTGGCCGGGTTTAATCTGCTCATGACGCTGCGGCTGTGGTCCAGCTAA (서열번호 18)
· 알파 쇄
MKKHLTTFLVILWLYFYRGNG KNQVEQSPQSLIILEGKNCTLQCNYTVSPFSNLRWYKQDTGRGPVSLTIMTFSENTKSNGRYTATLDADTKQSSLHITASQLSDSASYICVVISGFQKLVFGTGTRLLVSPNIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS (서열번호 19)
· 베타 쇄 (TRBV11-3*04)
ATGGGTACCAGGCTCCTCTGCTGGGTGGCCTTCTGTCTCCTGGTGGAAGAACTCATA GAAGCTGGAGTGGTTCAGTCTCCCAGATATAAGATTATAGAGAAAAAACAGCCTGTGGCTTTTTGGTGCAATCCTATTTCTGGCCACAATACCCTTTACTGGTACCGGCAGAACTTGGGACAGGGCCCGGAGCTTCTGATTCGATATGAGAATGAGGAAGCAGTAGACGATTCACAGTTGCCTAAGGATCGATTTTCTGCAGAGAGGCTCAAAGGAGTAGACTCCACTCTCAAGATCCAGCCTGCAGAGCTTGGGGACTCGGCCGTGTATCTCTGTGCCAGCAGCTTCCCTAAACAGGGATCCTACAATGAGCAGTTCTTCGGGCCAGGGACACGGCTCACCGTGCTAGAGGACCTGAAAAACGTGTTCCCACCCGAGGTCGCTGTGTTTGAGCCATCAGAAGCAGAGATCTCCCACACCCAAAAGGCCACACTGGTGTGCCTGGCCACAGGCTTCTTCCCTGACCACGTGGAGCTGAGCTGGTGGGTGAATGGGAAGGAGGTGCACAGTGGGGTCAGCACGGACCCGCAGCCCCTCAAGGAGCAGCCCGCCCTCAATGACTCCAGATACTGCCTGAGCAGCCGCCTGAGGGTCTCGGCCACCTTCTGGCAGAACCCCCGCAACCACTTCCGCTGTCAAGTCCAGTTCTACGGGCTCTCGGAGAATGACGAGTGGACCCAGGATAGGGCCAAACCCGTCACCCAGATCGTCAGCGCCGAGGCCTGGGGTAGAGCAGACTGTGGCTTTACCTCGGTGTCCTACCAGCAAGGGGTCCTGTCTGCCACCATCCTCTATGAGATCCTGCTAGGGAAGGCCACCCTGTATGCTGTGCTGGTCAGCGCCCTTGTGTTGATGGCCATGGTCAAGAGAAAGGATTTCTAA (서열번호 20)
· 베타 쇄
MGTRLLCWVAFCLLVEELI EAGVVQSPRYKIIEKKQPVAFWCNPISGHNTLYWYRQNLGQGPELLIRYENEEAVDDSQLPKDRFSAERLKGVDSTLKIQPAELGDSAVYLCASSFPKQGSYNEQFFGPGTRLTVLEDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFFPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYCLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSVSYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDF (서열번호 21)
· 알파 쇄 CDR1
GTGAGCCCCTTCAGCAAC (서열번호 22)
VSPFSN (서열번호 23)
· 알파 쇄 CDR2
ATGACTTTCAGTGAGAACACA (서열번호 24)
MTFSENT (서열번호 25)
· 알파 쇄 CDR3
GTGGTGATTTCAGGCTTTCAGAAACTTGTA (서열번호 26)
VVISGFQKLV (서열번호 27)
· 베타 쇄 CDR1
TCTGGCCACAATACC (서열번호 28)
SGHNT (서열번호 29)
· 베타 쇄 CDR2
TATGAGAATGAGGAAGCA (서열번호 30)
YENEEA (서열번호 31)
· 베타 쇄 CDR3
GCCAGCAGCTTCCCTAAACAGGGATCCTACAATGAGCAGTTC (서열번호 32)
ASSFPKQGSYNEQF (서열번호 33)
A. MAGE-B2 펩티드
부 국면에서, 본 개시내용은 MAGE-B2 펩티드 에피토프를 포함한다. MAGE-B2 펩티드 에피토프는 HLA-A2 제한된 MAGE-B2 펩티드 GVYDGEEHSV; 서열번호 1을 가질 수 있다. MAGE-B2 펩티드 에피토프는 서열번호 1의 펩티드 서열과 적어도 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
MAGE-B2 펩티드 에피토프는 7 내지 35개 아미노산, 바람직하게는 8 내지 35개 아미노산 잔기 및 보다 더 바람직하게는 8 내지 25개 아미노산 또는 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 또는 35개 아미노산 길이 또는 그 중에서 유도가능한 임의의 범위를 포함하거나 이들로 이루어질 수 있다. 예를 들면, 본 개시내용의 MAGE-B2 펩티드 에피토프는, 일부 실시형태에서, 서열번호 1의 MAGE-B2 펩티드 에피토프를 포함하거나 이들로 이루어질 수 있다. 항원성 펩티드는 면역반응성 MAGE-B2 펩티드 에피토프를 포함할 수 있고, 추가 서열을 포함할 수 있다. 추가 서열은 천연 항원으로부터 유래할 수 있고 이종일 수 있으며, 이러한 서열은 면역원성일 수 있지만 반드시 면역원성일 필요는 없다. 일부 실시형태에서, MAGE-B2 펩티드 에피토프는 HLA-A2, 특히 HLA-A*0201, HLA-A*0202, HLA-A*0203, HLA-A*0204 또는 HLA-A*0205와 선택적으로 결합할 수 있다.
당업자에게 이해되는 바와 같이, MHC 분자는 상이한 크기의 펩티드에 결합할 수 있지만, 전형적으로 전장 단백질에 결합할 수 없다. MHC 클라스 I 분자는 8 내지 11개 아미노산 길이의 펩티드에 결합하는 것으로 전통적으로 기재되어 있지만, 15개 아미노산 길이의 펩티드는 결합 부위의 중앙에서 팽창하거나 MHC 클라스 I 결합 그룹으로부터 확장함으로써 MHC 클라스 I 분자에 결합할 수 있다. 당업자에게 즉시 이해되는 바와 같이, MAGE-B2 증의 천연 존재 전장 종양 항원은, 세포흡수되어 T 세포의 증식을 생성하도록 클라스 II MHC에 선택적으로 결합하는데 유용하지 않을 것이다. 일반적으로, 천연 존재 전장 종양 항원 단백질은 이들 특성을 나타내지 않고 따라서 이들 면역요법 목적에 유용하지 않을 것이다.
특정 실시형태에서, MAGE-B2 펩티드 에피토프는 면역원성 또는 항원성이다. 하기 실시예에 제시된 바와 같이, 본 개시내용의 MAGE-B2 펩티드 에피토프는 T 세포의 증식을 촉진할 수 있다.
MAGE-B2 펩티드 에피토프는 재조합 펩티드, 합성 펩티드, 정제된 펩티드, 고정화 펩티드, 검출가능하게 표지된 펩티드, 캡슐화 펩티드 또는 벡터-발현 펩티드(예를 들면, 핵산에 작동가능하게 연결된 이종성 프로모터를 포함하는 벡터에서 핵산에 의해 코딩된 펩티드)일 수 있다. 일부 실시형태에서, 합성 MAGE-B2 펩티드 에피토프는 인간 환자 등의 대상체에게 투여되어, 대상체에서 면역 반응을 유도할 수 있다. 합성 펩티드는 특정 잇점, 예컨대, 재조합 발현된 펩티드와 비교하여 세균 오염의 위험 감소를 나타낼 수 있다. 또한, MAGE-B2 펩티드는, 예를 들면, 포유동물 또는 인간 대상체에게 투여하기 위해 제형화되는 백신 조성물 등의 약제학적 조성물에 포함될 수 있다.
1. 세포 투과성 펩티드
일부 실시형태에서, 면역요법은, 리포좀 또는 세포 투과 펩티드(CPP) 등의 세포 투과인자와 연관되는 본 개시내용의 MAGE-B2 펩티드 에피토프를 이용할 수 있다. 펩티드로 펄스시킨 항원 제시 세포(예: 수지상 세포)를 사용하여 항종양 면역을 증강시킬 수 있다. 일부 실시형태에서, 면역요법은 본 개시내용의 MAGE-B2 펩티드 에피토프를 코딩하는 핵산을 사용할 수 있고, 여기서 핵산은, 예를 들면, 바이러스 벡터 또는 비-바이러스 벡터에서 전달된다.
종양 항원-특이적 펩티드(예: MAGE-B2 펩티드)에 공유 결합할 수 있는 세포 투과 펩티드는, 예를 들면, HIV Tat, 헤르페스 바이러스 VP22, 드로소필라 안테나페디아 호메오박스(Drosophila Antennapedia homeobox) 유전자 생성물, 신호 서열, 융합 서열 또는 프로테그린 I을 포함한다. 펩티드를 CPP에 공유결합시키면, 수지상 세포에 의한 펩티드의 제시를 연장시킬 수 있고, 따라서 항종양 면역을 증강시킬 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 MAGE-B2 펩티드(예를 들면, 펩티드 또는 폴리에피토프 스트링 내에 포함됨)는 CPP에 공유 결합(예를 들면, 펩티드 결합을 통해)하여 융합 단백질을 생성할 수 있다. 다른 실시형태에서, MAGE-B2 펩티드 에피토프 또는 이러한 펩티드 에피토프를 코딩하는 핵산은 리포좀, 예를 들면, 다중층, 소포, 또는 다소포성 리포좀, 외포성 소포 또는 엑소좀 내에 캡슐화되거나 이와 연관될 수 있다.
일부 실시형태에서, 세포 흡수는 폴리펩티드에 대한 스테아레이트 또는 미리스테이트 등의 지질의 부착에 의해 촉진된다. 지질화는 세포 내로 펩티드의 통과를 증강시키는 것으로 밝혀졌다. 지질 모이어티의 부착은 본 개시내용이 세포에 의한 폴리펩티드 흡수를 증가시키는 또 다른 방식이다. 세포 흡수는 하기에 추가로 설명된다.
본 개시내용의 MAGE-B2 펩티드 에피토프는 리포좀 백신 조성물에 포함될 수 있다. 예를 들면, 리포좀 조성물은 프로테오리포좀 조성물일 수 있거나 이를 포함할 수 있다.
일부 실시형태에서, MAGE-B2 펩티드 에피토프는 나노 입자와 연관되어 나노입자-폴리펩티드 복합체를 형성할 수 있다. 일부 실시형태에서, 나노입자는 리포좀 또는 다른 지질-기반 나노입자, 예컨대, 지질-기반 소포(예를 들면, DOTAP:콜레스테롤 소포)이다. 다른 실시형태에서, 나노입자는 철-산화물 기반 상자성 나노입자이다. 일부 실시형태에서, 나노입자는 반도체 나노결정 또는 반도체 양자 도트이고, 이들 둘 다는 광학 이미징에서 사용될 수 있다. 추가의 실시형태에서, 나노입자는 나노쉘일 수 있고, 이는 실리카의 코어 위에 금 층을 포함한다.
2. 생물학적 기능적 등가물
본 개시내용의 MAGE-B2 펩티드 에피토프는, HLA-A2 등의 HLa 클라스 단백질 결합 영역과의 이들의 각 상호작용을 변화시키지 않는 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 함유하도록 변형될 수 있다. 비제한적 예로서, 특정 아미노산은, HLA-A2에 대한 검출가능하게 변화되지 않은 펩티드 결합에 의해 입증된 바와 같이, HLA-결합의 감지가능한 손실 없이 본원에 개시된 MAGE-B2 펩티드에서 다른 아미노산으로 치환할 수 있다. 따라서, 서열 및/또는 구조가 변형되지만 생물학적 이용성 또는 활성이 변화되지 않은 본원에 개시된 MAGE-B2 펩티드(또는 이러한 펩티드를 코딩하는 핵산)은 본원에 개시된 조성물 및 방법의 범위 내인 것으로 생각된다.
또한, 생물학적으로 기능적 등가 펩티드의 정의에서 고유한 것은, 등가의 생물학적 활성의 허용되는 수준을 또한 유지하면서, 분자의 규정된 부분에서 이루어질 수 있는 다수의 변화에 대한 제한이 있다는 개념이라는 것이 당업자에게 이해된다. 따라서, 생물학적으로 기능적 등가 펩티드는 특정(대부분 또는 전부는 아님) 아미노산이 치환될 수 있는 이들 펩티드로서 정의된다. 물론, 본 개시내용에 따라, 상이한 치환을 갖는 복수의 개별 펩티드를 용이하게 제조 및 사용할 수 있다.
또한, 당업자는, 특정 잔기가 펩티드, 예를 들면, 특정 에피토프 중의 잔기의 생물학적 또는 구조적 특성에 특히 중요한 것으로 밝혀진 경우, 이러한 잔기는 일반적으로 교환될 수 없는 것도 인식하고 있다. 본원에 개시된 MAGE-B2 펩티드 중의 돌연변이는 종=특이성의 상실을 야기하고 또한 본 개시내용의 방법에 사용하기 위한 생성 펩티드의 유용성을 저하시키기 때문에, 이는 본 개시내용의 경우일 수 있다. 따라서, 항원성(예를 들면, HLA-A*0201, HLA-A*0202, HLA-A*0203, HLA-A*0204 또는 HLA-A*0205에 특이적으로 결합)이고 보존적 아미노산 치환을 포함하는 펩티드는 본 개시내용에 포함되는 것으로 이해된다. 보존적 치환은 단백질의 활성을 현저히 변화시킬 가능성이 최저이다. "보존적 아미노산 치환"은 아미노산을 화학적으로 유사한 아미노산으로 치환하는 것, 즉 비극성 아미노산을 다른 비극성 아미노산으로 치환하는 것; 극성 아미노산을 다른 극성 아미노산으로 치환하는 것, 산성 잔기를 다른 산성 아미노산으로 치환하는 것 등을 지칭한다.
본원에 개시된 MAGE-B2 펩티드를 변형시키는데 사용될 수 있는 것들 등의 아미노산 치환은 일반적으로 아미노산 측쇄 치환기의 상대적 유사성, 예를 들면, 이들의 소수성, 친수성, 전하, 크기 등에 기초한다. 아미노산 측쇄 치환기의 크기, 형상 및 유형의 분석은, 아르기닌, 리신 및 히스티딘이 모든 양으로 하전된 잔기이고; 알라닌, 글리신 및 세린이 모두 유사한 크기이고; 페닐알라닌, 트립토판 및 티로신이 모두 일반적으로 유사한 형상을 갖는 것을 나타낸다. 따라서, 이들 고려사항에 기초하여, 아르기닌, 리신 및 히스티딘; 알라닌, 글리신 및 세린; 및 페닐알라닌, 트립토판 및 티로신은 생물학적으로 기능적 등가물로서 본원에서 정의된다. 일부 실시형태에서, 돌연변이는 TCR-pMHC 상호작용 및/또는 펩티드-MHC 결합을 증강시킬 수 있다.
본 개시내용은 또한 본원에 개시된 MAGE-B2 펩티드의 이소형을 고려한다. 이소형은 본 개시내용의 펩티드로서 동일한 수 및 종류의 아미노산을 함유하지만, 이소형은 상이한 분자 구조를 갖는다. 본 개시내용에 의해 고려된 이소형은 본원에 기재된 바와 같이 본 개시내용의 펩티드와 동일한 특성을 갖는 것들이다.
비표준 아미노산은 기존의 아미노산의 화학적 변형에 의해 또는 본원에 개시된 펩티드의 드 노보 합성에 의해 단백질에 도입될 수 있다. 비표준 아미노산은, 유전자 코드에 의해 코딩된 20개 표준 아미노산과는 화학 구조가 상이한 아미노산을 지칭한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 본원에 개시된 MAGE-B2 펩티드의 화학 유도체를 고려한다. "화학 유도체"는, 관능성 측쇄의 반응에 의해 화학적으로 유도체화되고 생물학적 활성 및 유용성을 보유하는 하나 이상의 잔기를 갖는 펩티드를 지칭한다. 이러한 유도체화 펩티드는, 예를 들면, 유리 아미노산이 유도체화되어 특정 염을 형성하거나 알킬화 및/또는 아실화에 의해 유도체화된 것들, 그 중에서도 p-톨루엔 설포닐 그룹, 카보벤즈옥시 그룹, t-부틸옥시카보닐 그룹, 클로로아세틸 그룹, 포르밀 또는 아세틸 그룹을 포함한다. 유리 카복실 그룹은 유도체화되어, 유기 또는 무기 염, 메틸 및 에틸 에스테르 또는 다른 유형의 에스테르 또는 하이드라지드 및 바람직하게는 아미드(일급 또는 이급)을 형성할 수 있다. 화학적 유도체는, 20개 표준 아미노산의 하나 이상의 천연 존재 아미노산 유도체를 포함하는 이들 펩티드를 포함할 수 있다. 예를 들면, 4-하이드록시프롤린이 세린 대신에 치환될 수 있고; 오르니틴이 리신 대신에 치환될 수 있다.
모든 아미노산 잔기 서열은 이의 좌우 방향의 배향이 아미노 말단에서 카복시-말단으로의 종래의 방향으로 존재하는 것에 유의해야 한다. 추가로, 아미노산 잔기 서열의 최초 또는 최후의 대쉬는 하나 이상의 아미노산 잔기의 추가 서열에 대한 펩티드 결합을 나타내는 것에 유의해야 한다. 본원에 기재된 아미노산은 "L" 이성체 형태로 존재하는 것이 바람직하다. 그러나, "D" 이성체 형태의 잔기는, 본원에 기재된 목적하는 기능적 특성이 단백질에 의해 유지되는 한, 임의의 L-아미노산 잔기 대신에 치환될 수 있다.
바람직한 MAGE-B2 펩티드 또는 이의 유사체는 바람직하게는 HLA-A2에 특이적으로 또는 우선적으로 결합한다. 특정 종양 항원-특이적 펩티드 또는 표지된 펩티드 또는 이의 유사체가 HLA-A2에 결합할 수 있는지 또는 어느 정도 결합할 수 있는지를 측정하는 것은, 예를 들면, 효소-연결된 면역흡착 검정(ELISA), 면역블롯팅, 면역침전, 방사면역검정(RIA), 면역염색, 라텍스 응집, 간접 적혈구응집 검정(IHA), 보체 고정, 간접 면역흡착 검정(FA), 네펠로메트리, 유세포 분석 검정, 화학발광 검정, 측면 유동 면역검정, u-포획 검정, 질량 분석 검정, 입자-기반 검정, 억제 검정 및/또는 결합력 검정 등의 시험관내 검정을 사용하여 평가할 수 있다.
B. 조작된 MAGE-B2-특이적 세포　
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 MAGE-B2-특이적 TCR을 제공한다. TCR은 서열번호 6 내지 12의 알파 쇄 CDR 및/또는 서열번호 13 내지 17의 베타 쇄 CDR을 포함할 수 있다. TCR은 서열번호 2 내지 3과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성 또는 유사성을 갖는 알파 쇄 및 서열번호 4 내지 5와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일성 또는 유사성을 갖는 베타 쇄를 포함할 수 있다. 또한, 본원에는 본원에 제공된 MAGE-B2 TCR의 알파 쇄 및/또는 베타 쇄를 코딩하는 폴리펩티드 및 폴리뉴클레오티드가 제공된다. 추가로, 본원에는, 본원에 제공된 MAGE-B2-특이적 TCR을 발현하도록 조작된, T 세포, NK 세포, 불변 NK 세포, NKT 세포, MSC 또는 iPS 세포 등의 세포가 제공된다. 이들 비-T 세포 이펙터 면역 세포는 TCR에 연결된 CD3 분자 또는 기타 신호전달 도메인과 함께 TCR을 발현할 수 있고, 이는 이들 세포에서 신호 형질도입을 개시할 것이다.
조작된 면역 세포는 당업자에게 공지된 임의의 다수 잘-확립된 유전자 전달 방법을 사용하여 작제할 수 있다. 특정 실시형태에서, 조작된 세포는, MAGE-B2-특이적 TCR을 코딩하는 핵산을 도입하는 바이러스 벡터-기반 유전자 전달 방법을 사용하여 작제한다. 바이러스 벡터-기반 유전자 전달 방법은 렌티바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터, 아데노바이러스 또는 아데노-연관 바이러스 벡터를 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, 조작된 세포는, MAGE-B2-특이적 TCR을 코딩하는 핵산을 도입하는 비-바이러스 벡터-기반 유전자 전달 방법을 사용하여 작제한다. TCR을 위한 벡터는 알파 쇄 폴리펩티드 및 베타 쇄 폴리펩티드를 포함할 수 있고, 이는 링커 도메인 또는 IRES 서열에 의해 연결할 수 있다. 링커 도메인은 하나 이상의 절단 부위, 예컨대, 퓨린 절단 부위 및/또는 P2A 절단 부위를 포함할 수 있고, 이는 스페이서, 예컨대, SGSG 또는 GSG에 의해 분리할 수 있다. 특정 실시형태에서, 비-바이러스 벡터-기반 유전자 전달 방법은 징크-핑거 뉴클레아제(ZFN), 전사 활성화인자-유사 이펙터 뉴클레아제(TALEN), 및 클러스터링된 규칙적 간격의 짧은 회문 반복(CRISPR)/CRISPR-연관된 단백질 9(Cas9) 뉴클레아제로 이루어진 그룹으로부터 선택된 유전자-편집 방법을 포함한다. 특정 실시형태에서, 비-바이러스-기반 유전자 편집 방법은 리포펙션, 뉴클레오펙션, 바이로좀, 리포좀, 폴리양이온 또는 지질:핵산 접합체, 네이키드 DNA, 인공 비리온 및 DNA의 제제-증강된 흡수로 이루어진 그룹으로부터 선택된 형질감염 또는 형질전환 방법을 포함한다.
C. 가용성 TCR 및 BiTE
또한, 본 개시내용은 직접 HLA-A2 양성 암 환자를 치료하기 위해 사용될 수 있는 가용성 TCR을 제공한다. 가용성 이중특이적 T 세포-결합 분자(BiTE)는 MAGE-B2 TCR을 CD3-특이적 Fab 단편에 결합시킴으로써 생성할 수 있다. 이들 이중특이적 분자는, 펩티드/HLA 복합체에 대한 이들의 MAGE-B2 TCR 결합을 통해 종양 세포 표면에 결합할 수 있고, CD3-특이적 Fab 단편은 표적 T 세포 등의 TCR을 가교할 것이다. 이는 세포 활성화 및 표적 세포의 배제를 야기할 것이다. 따라서, 이들 가용성 이중특이적 TCR 작제물은 암 환자를 치료하기 위해 직접 사용될 수 있다.
최후로, 가용성 TCR은 종양 세포 또는 종양 부위에 대한 치료 분자의 지시에 대한 펩티드/MHC의 진단 평가를 위한 프로브로서 사용될 수 있다. 이러한 가용성 TCR 분자는 또한 형광 프로브 또는 방사선활성 프로브 등의 트레이서로 표지될 수 있고, 이어서 종양 세포에서 펩티드/MHC의 제시의 진단 평가를 위해 사용될 수 있다. 추가로, 이러한 가용성 TCR 분자는 독소 등의 치료 분자와 결합하고, 이어서 암 환자의 치료를 위해 이들 치료 분자를 종양 부위로 지시할 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 가용성 TCR, 예컨대, 본원에 제공된 MAGE-B2-특이적 TCR을 제공한다. 가용성 TCR은 특이적 TCR-pMHC 상호작용을 조사하기 위해 또는 감염을 검출하거나 자가면역 질환 마커를 검출하는 진단 도구로서 사용될 수 있다. 가용성 TCR은 염색, 예를 들면, MHC의 문맥에서 제시된 특정 펩티드의 존재에 대해 세포를 염색하기 위한 용도를 가질 수 있다. 유사하게는, 가용성 TCR은 치료제, 예를 들면, 세포독성 화합물 또는 면역자극 화합물을, 특정 항원을 제시하는 세포에 전달하기 위해 사용될 수 있다. 가용성 TCR은 또한 T 세포, 예를 들면, 자가-면역 펩티드 항원과 반응하는 것들을 억제하기 위해 사용될 수 있다. 일부 국면에서, TCR은 종양에 인접하여 세포를 전달하는 또 다른 분자에 연결된다. 추가의 국면에서, TCR은 독소, 사이토킨, 공자극 리간드 또는 억제 리간드를 전달하고, 분자, 세포 또는 화합물을, 펩티드-MHC를 발현하는 표적 세포로 지시한다.
일부 국면에서, 본 개시내용은 가용성 T 세포 수용체(sTCR)를 제공하고, 이는 (i) 이의 막관통 도메인을 제외한 TCR α 쇄의 전부 또는 일부(예를 들면, 서열번호 2 또는 3), 및 (ii) 이의 막관통 도메인을 제외한 TCR β 쇄의 전부 또는 일부(예를 들면, 서열번호 4 또는 5)를 포함하고, 여기서 (i) 및 (ii)는 각각 TCR 쇄의 관능성 가변 도메인 및 불변 도메인의 적어도 일부를 포함하고, 천연 TCR에 존재하지 않는 불변 도메인 잔기 사이에 디설파이드 결합에 의해 연결된다.
일부 국면에서, 가용성 TCR은, 류신 지퍼 등의 C-말단 이량체화 펩티드의 쌍에 의해 각각 TCR β 또는 δ 쇄 세포외 도메인으로 이량체화된 TCR α 또는 γ 쇄 세포외 도메인을 포함한다.
본 개시내용의 가용성 TCR은 실질적으로 순수한 형태 또는 정제된 또는 단리된 조제물로서 제공될 수 있다. 예를 들면, 이는 다른 단백질을 실질적으로 포함하지 않는 형태로 제공될 수 있다.
본 개시내용의 복수의 가용성 TCR은 다가 복합체로 제공될 수 있다. 따라서, 본 개시내용은, 한 가지 국면에서, 본원에 기재된 복수의 가용성 TCR을 포함하는 다가 TCR 복합체를 제공한다. 복수의 가용성 TCR 각각은 바람직하게는 동일하다.
이의 가장 단순한 형태에서, 본 개시내용에 따르는 다가 TCR 복합체는, 바람직하게는 링커 분자를 통해 서로 연관된(예: 공유 또는 달리 연결된) 2 또는 3 또는 4 또는 그 이상의 T 세포 수용체 분자의 다량체를 포함한다. 적합한 링커 분자는 아비딘, 스트렙트아비딘, 뉴트라비딘 및 엑스트라비딘 등의 다가 부착 분자를 포함하지만 이로써 한정되지 않고, 각각은 비오틴에 대한 4개 결합 부위를 갖는다. 따라서, 비오티닐화 TCR 분자는 복수의 TCR 결합 부위를 갖는 TCR의 다량체로 형성될 수 있다. 다량체 중의 TCR 분자의 수는, 다량체를 제조하는데 사용된 링커 분자의 양과 관련하는 TCR의 양, 및 임의의 기타 비오티닐화 분자의 존재 또는 부재에 의존할 것이다. 바람직한 다량체는 이량체, 삼량체 또는 사량체 TCR 복합체이다.
본 방법에서 사용하기 위한 적합한 구조는 리포좀 등의 막 구조, 및 바람직하게는 비드, 예를 들면, 라텍스 비드 등의 입자인 고체 구조를 포함한다. T 세포 수용체 분자로 외부 코팅될 수 있는 다른 구조가 또한 적합하다. 바람직하게는, 구조는, 개개 T 세포 수용체 분자 이외의 T 세포 수용체 다량체로 코팅된다.
리포좀의 경우에, T 세포 수용체 분자 또는 이의 다량체는 막에 부착되거나 달리는 막과 연관될 수 있다. 이 기술은 당업자에게 공지되어 있다.
표지 또는 또 다른 모이어티, 예컨대, 독성 또는 치료적 모이어티는 본 개시내용의 다가 TCR 복합체에 포함될 수 있다. 예를 들면, 표지 또는 다른 모이어티는 혼합된 분자 다량체에 포함될 수 있다. 이러한 다량체 분자의 예는 3개 TCR 분자와 1개 퍼옥시다제 분자를 함유하는 사량체이다. 이는 TCR 및 효소를 3:1의 몰 비율로 혼합하여 사량체 복합체를 형성하고, 정확한 비율의 분자를 함유하지 않는 임의의 복합체로부터 목적하는 복합체를 단리함으로써 달성할 수 있다. 이들 혼합된 분자는, 입체 장애가 분자의 목적하는 기능을 손상시키지 않거나 현저히 손상시키지 않는 한, 임의의 분자 조합을 함유할 수 있다. 스트렙트아비딘 분자 상의 결합 부위의 배치는, 입체 장애가 발생할 가능성이 없기 때문에, 혼합 사량체에 적합하다.
본 개시내용의 TCR(또는 이의 다가 복합체)는 대체적 또는 추가적으로, 예를 들면, 세포 사멸에 사용하기 위한 독성 모이어티일 수 있는 치료제, 또는 인터류킨 또는 사이토킨 등의 면역자극제와 연관될 수 있다(예를 들면, 공유 또는 달리는 연결된). 본 개시내용의 다가 TCR 복합체는 비-다량체 T 세포 수용체 헤테로이량체와 비교하여 TCR 리간드에 대한 결합능을 증강시킬 수 있다. 따라서, 본 개시내용에 따르는 다가 TCR 복합체는 시험관내 또는 생체내에서 특정 항원을 제시하는 세포를 추적 또는 표적화하는데 특히 유용하고, 또한 이러한 용도를 갖는 추가의 다가 TCR 복합체의 생성을 위한 중간체로서 유용하다. 따라서, TCR 또는 다가 TCR 복합체는 생체내에서 사용하기 위한 약제학적으로 허용되는 제형으로 제공될 수 있다.
본 개시내용은 또한 치료제를 표적 세포로 전달하는 방법을 제공하고, 이 방법은, 표적 세포에 대한 TCR 또는 다가 TCR 복합체의 부착을 가능하게 하는 조건하에서 잠재적 표적 세포를 본 개시내용에 따르는 TCR 또는 다가 TCR 복합체와 접촉시키는 단계를 포함하고, 상기 TCR 또는 다가 TCR 복합체는 TCR 리간드에 특이적이고, 이와 연관된 치료제를 갖는다.
특히, 가용성 TCR 또는 다가 TCR 복합체를 사용하여 치료제를, 특정 항원을 제시하는 세포의 장소로 전달할 수 있다. 이는 다수의 상황 및 특히 종양에 대해 유용할 수 있다. 치료제는, 이것이 결합하는 세포 뿐만 아니라 이의 효과를 국소적으로 발휘하도록 전달될 수 있다. 따라서, 한 가지 특정 전략은 T 세포 수용체 또는 종양 항원에 특이적인 다가 TCR 복합체에 연결된 항-종양 분자를 상정한다.
다수의 치료제는, 예를 들면, 방사성 화합물, 효소(예: 페르포린) 또는 화학요법제(예: 시스플라틴)에 대하여 이러한 용도로 사용될 수 있다. 독성 효과가 목적하는 장소에서 발휘되는 것을 확실하게 하기 위해, 독소는 화합물이 서서히 방출되도록 스트렙트아비딘에 연결된 리포좀 내부에 존재할 수 있다. 이는 체내에서의 수송 중의 손상 효과를 방지하고, 관련 항원 제시 세포에 대한 TCR의 결합 후에 독소가 최대 효과를 갖는 것을 보장한다.
본 개시내용의 가용성 TCR은, 특이적 TCR 리간드에 결합하고 이에 의해 T 세포 활성화를 억제함으로써 T 세포 활성화를 조절하기 위해 사용될 수 있다. T 세포-매개된 염증 및/또는 조직 손상을 수반하는 자가면역 질환, 예를 들면, I형 당뇨병은 이러한 접근법에 적합할 것이다. 이 사용에는 관련 pMHC에 의해 제시된 특정 펩티드 에피토프의 지식이 필요하다.
암 또는 자가면역 질환의 치료를 위한 조성물의 조제물에서 본 개시내용의 가용성 TCR 및/또는 다가 TCR 복합체의 사용이 또한 상정된다.
또한, 본 개시내용의 유효량의 가용성 TCR 및/또는 다가 TCR 복합체를 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 암 또는 자가면역 질환의 치료 방법이 제공된다.
항암 및 자가면역 치료에서 일반적인 바와 같이, 본 개시내용의 가용성 TCR은, 암 및 자가면역 질환, 및 유사한 환자 그룹에서 발견된 다른 관련 병태의 치료를 위해 다른 약제와 조합하여 사용할 수 있다.
III. 사용 방법
또 다른 국면에서, 본원에는, 본원에 제공된 임의의 방법에 의해 생성된, 치료학적 유효량의 MAGE-B2 TCR-특이적 세포, 예컨대, T 세포, NK 세포, 불변 NK 세포, NKT 세포, MSC 또는 iPS 세포의 모집단을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 세포는, TIL이 배양될 수 있는 암을 갖는 환자에게 양자 전달되거나, 종양 항원-특이적 CTL이 시험관내에서 생성될 수 있다.
본원에는, 유효량의 MAGE-B2-특이적 T 세포 요법을 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암의 진행을 치료 또는 지연시키는 방법이 제공된다. 유전자 조작된 TCR-형질도입 T 세포(TCR을 다른 생체반응성 단백질(예: 항-CD3)에 결합시키는)을 사용한 양자 T 세포 요법이 또한 본원에서 제공된다. 추가의 실시형태에서, 대상체를 정제된 종양 항원 또는 면역우성 종양 항원-특이적 펩티드로 면역화시키는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법이 제공된다.
본원에 제공된 MAGE-B2 펩티드는 암 백신 또는 면역원을 개발하기 위해 이용할 수 있다. 이들 펩티드 특이적 백신 또는 면역원은 암 환자를 직접 면역화시켜 생체내에서 항-종양 면역-반응을 유도하거나, 항원 특이적 T 세포를 시험관내에서 펩티드 또는 코드화 폴리뉴클레오티드 로딩된 APC 자극으로 확장시키기 위해 이용할 수 있다. 이들 다수의 T 세포는 종양 퇴축을 유도하기 위해 환자에게 양자 전달될 수 있다.
본 치료 방법이 유용한 종양은 MAGE-B2를 발현하는 임의의 악성 세포 유형, 예를 들면, 고형 종양 또는 혈액 종양에서 발견되는 것들을 포함한다. 예시적인 고형 종양은, 이에 제한되지 않지만, 췌장, 결장, 맹장, 위, 뇌, 머리, 목, 난소, 신장, 후두, 육종, 폐, 방광, 흑색종, 전립선, 및 유방으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 장기의 종양을 포함할 수 있다. 예시적인 혈액 종양은 골수의 종양, T 또는 B 세포 악성종양, 백혈병, 림프종, 아세포종, 골수종 등을 포함한다. 본원에서 제공된 방법을 사용하여 치료될 수 있는 암의 추가 예는, 이에 제한되지 않지만, 폐암(소세포 폐암, 비소세포 폐암, 폐선암종, 폐의 편평상피암종 포함), 복막암, 위 또는 위장암(위장관암, 위장관기질암을 포함), 췌장암, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 유방암, 결장암, 대장암, 자궁내막암 또는 자궁 암종, 침샘 암종, 콩팥 또는 신장암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 다양한 유형의 두경부암, 및 흑색종을 포함한다.
암은 구체적으로 다음의 조직학적 유형을 가질 수 있지만, 이에 제한되지 않는다: 신생물(neoplasm), 악성(malignant); 암종(malignant); 암종(carcinoma), 미분화(undifferentiated); 거대 방추 세포 암종(giant and spindle cell carcinoma); 소세포 암종(small cell carcinoma); 유두상 암종(papillary carcinoma); 편평세포 암종(squamous cell carcinoma); 림프표피 암종(lymphoepithelial carcinoma); 기저 세포 암종(basal cell carcinoma); 모기질 암종(pilomatrix carcinoma); 이행세포 암종(transitional cell carcinoma); 유두상 이행세포 암종(papillary transitional cell carcinoma); 선암종(adenocarcinoma); 가스트린종(gastrinoma), 악성(malignant); 담도암종(cholangiocarcinoma); 간세포 암종(hepatocellular carcinoma); 복합형 간세포 암종(combined hepatocellular carcinoma) 및 담도암종(cholangiocarcinoma); 육주상 선암종(trabecular adenocarcinoma); 선양 낭포 암종(adenoid cystic carcinoma); 선종폴립 내 선암종(adenocarcinoma in adenomatous polyp); 선암종(adenocarcinoma), 가족성 용종증(familial polyposis coli); 고형 암종(solid carcinoma); 유암종(carcinoid tumor), 악성(malignant); 기관지-폐포 선암종(branchiolo-alveolar adenocarcinoma); 유두상 선암종(papillary adenocarcinoma); 난염성 암종(chromophobe carcinoma); 호산성 암종(acidophil carcinoma); 호산성 선암종(oxyphilic adenocarcinoma); 호염기성 암종(basophil carcinoma); 투명세포 선암종(clear cell adenocarcinoma); 과립세포 암종(clear cell adenocarcinoma); 소포성 선암종(follicular adenocarcinoma); 유두상 및 소포성 선암종(papillary and follicular adenocarcinoma); 비캡슐화 경화성 암종(nonencapsulating sclerosing carcinoma); 부신 피질 암종(adrenal cortical carcinoma); 자궁내막양 암종(endometroid carcinoma); 피부 부속기 암종(skin appendage carcinoma); 아포크린 선암종(apocrine adenocarcinoma); 피지선 선암종(sebaceous adenocarcinoma); 귀지 선암종(ceruminous adenocarcinoma); 점막표피양 암종(mucoepidermoid carcinoma); 낭선종(cystadenocarcinoma); 유두상 낭선종(papillary cystadenocarcinoma); 유두상 장액성 낭선종(papillary serous cystadenocarcinoma); 점액성 낭선종(mucinous cystadenocarcinoma); 점액성 선암종(mucinous adenocarcinoma); 인환세포 암종(signet ring cell carcinoma); 침윤성 관암종(infiltrating duct carcinoma); 수질 암종(medullary carcinoma); 소엽 암종(lobular carcinoma); 염증성 암종(inflammatory carcinoma); 파제트병(paget's disease), 유선(mammary); 선방 세포 암종(acinar cell carcinoma); 선편평 암종(adenosquamous carcinoma); 선암종 w/편평상피 화생(adenocarcinoma w/squamous metaplasia); 흉선종(thymoma), 악성; 난소 기질 종양(ovarian stromal tumor), 악성; 난포막종(thecoma), 악성; 과립막 세포종양(granulosa cell tumor), 악성; 남성아세포종(androblastoma), 악성; 세르톨리 세포 암종(sertoli cell carcinoma); 간질세포종(leydig cell tumor), 악성; 지질 세포 종양(lipid cell tumor), 악성; 부신경절종(paraganglioma), 악성; 유방외 부신경절종(extra-mammary paraganglioma), 악성; 갈색세포종(pheochromocytoma); 사구맥관육종(glomangiosarcoma); 악성 흑색종(malignant melanoma); 무흑색소성 흑색종(amelanotic melanoma); 표재 확산 흑색종(superficial spreading melanoma); 흑색점 악성 흑색종(lentigo malignant melanoma); 말단흑자성 흑색종(acral lentiginous melanomas); 결절성 흑색종(nodular melanomas); 거대색소 모반 내 악성 흑색종(malignant melanoma in giant pigmented nevus); 유상피세포 흑색종(epithelioid cell melanoma); 청색모반(blue nevus), 악성; 육종(sarcoma); 섬유육종(fibrosarcoma); 섬유성 조직구종(fibrous histiocytoma), 악성; 점액육종(myxosarcoma); 지방육종(liposarcoma); 평활근육종(leiomyosarcoma); 횡문근육종(rhabdomyosarcoma); 배아형 횡문근육종(rhabdomyosarcoma); 폐포 횡문근육종(alveolar rhabdomyosarcoma); 기질 육종(stromal sarcoma); 혼합종양(mixed tumor), 악성; 뮐러 혼합 종양(mullerian mixed tumor); 신아세포종(nephroblastoma); 간아세포종(hepatoblastoma); 암육종(carcinosarcoma); 간엽소포종(mesenchymoma), 악성; 브레너 종양(brenner tumor), 악성; 엽상종양(phyllodes tumor), 악성; 활막 육종(synovial sarcoma); 중피종(mesothelioma), 악성; 미분화세포종(dysgerminoma); 배아형 암종(embryonal carcinoma); 기형종(embryonal carcinoma), 악성; 난소갑상선종(struma ovarii), 악성; 융모막 암종(choriocarcinoma); 중신종(mesonephroma), 악성; 혈관육종(hemangiosarcoma); 혈관내피종(hemangioendothelioma), 악성; 카포시 육종(Kaposi's sarcoma); 혈관주위세포종(hemangiopericytoma), 악성; 림프관육종(lymphangiosarcoma); 골육종(osteosarcoma); 방피질성 골육종(juxtacortical osteosarcoma); 연골육종(chondrosarcoma); 연골모세포종(chondroblastoma), 악성; 간충직 연골육종(mesenchymal chondrosarcoma); 골거대세포종(giant cell tumor of bone); 유잉 육종(ewing's sarcoma); 치원성 종양(odontogenic tumor), 악성; 사기질모세포성 치아육종(ameloblastic odontosarcoma); 에나멜상피종(ameloblastoma), 악성; 에나멜 아세포 섬유육종(ameloblastic fibrosarcoma); 송과체종(pinealoma), 악성; 척색종(chordoma); 신경교종(glioma), 악성; 상의세포종(ependymoma); 성상세포종(astrocytoma); 원형질 성상세포종(protoplasmic astrocytoma); 섬유질 성상세포종(fibrillary astrocytoma); 성모세포종(astroblastoma); 교모모세포종(glioblastoma); 핍지교종(oligodendroglioma); 핍지모세포종(oligodendroblastoma); 원시 신경외배엽성(primitive neuroectodermal); 소뇌 육종(cerebellar sarcoma); 신경절모세포종(ganglioneuroblastoma); 신경모세포종(neuroblastoma); 망막모세포종(retinoblastoma); 후각 신경성 종양(olfactory neurogenic tumor); 뇌수막종(meningioma), 악성; 신경섬유육종(neurofibrosarcoma); 신경초종(neurilemmoma), 악성; 과립세포 종양(granular cell tumor), 악성; 악성림프종(malignant lymphoma); 호지킨병(Hodgkin's disease); 호지킨(Hodgkin's); 부육아종(paragranuloma); 악성 림프종(malignant lymphoma), 소세포성 림프종(small lymphocytic); 악성 림프종(malignant lymphoma), 거대세포(large cell), 미만성; 악성 림프종(malignant lymphoma), 소포성; 균상식육종(mycosis fungoides); 기타 명시된 비-호지킨 림프종(non-hodgkin's lymphomas); B-세포 림프종(B-cell lymphoma); 저등급/소포성 비호지킨 림프종(low grade/follicular non-Hodgkin's lymphoma)(NHL); 소세포성 림프종(small lymphocytic)(SL) NHL; 중간 등급/소포성(intermediate grade/follicular) NHL; 중간 등급 미만성(intermediate grade diffuse) NHL; 고등급 면역아구성(high grade immunoblastic) NHL; 고등급 림프모구성(high grade lymphoblastic) NHL; 고등급 소 비분할 세포(high grade small non-cleaved cell) NHL; 거대 종양(bulky disease) NHL; 맨틀 세포 림프종(mantle cell lymphoma); AIDS-관련 림프종(AIDS-related lymphoma); 발덴스트롬 마크로글로불린혈증(Waldenstrom's macroglobulinemia); 악성 조직구증(malignant histiocytosis); 다발성 골수종(multiple myeloma); 비만 세포 육종(mast cell sarcoma); 면역 증식 소장병증(immunoproliferative small intestinal disease); 백혈병(leukemia); 림프성 백혈병(lymphoid leukemia); 형질세포 백혈병(plasma cell leukemia); 적백혈병(erythroleukemia); 림프육종 세포 백혈병(lymphosarcoma cell leukemia); 골수성 백혈병(myeloid leukemia); 호염기성 백혈병(basophilic leukemia); 호산성 백혈병(eosinophilic leukemia); 단구성 백혈병(monocytic leukemia); 비만 세포 백혈병(mast cell leukemia); 거핵아구 백혈병(megakaryoblastic leukemia); 골수성 육종(myeloid sarcoma); 모발세포 백혈병(hairy cell leukemia); 만성 림프구성백혈병(chronic lymphocytic leukemia)(CLL); 급성 림프모구성 백혈병(acute lymphoblastic leukemia)(ALL); 급성 골수성 백혈병(acute myeloid leukemia)(AML); 및 만성 골수아구성 백혈병(chronic myeloblastic leukemia).
특정 실시형태에서, 상기 방법은, 치료학적 유효량의 MAGE-B2 TCR 세포의 모집단을 투여하기 전에 림프구고갈을 수행하는 단계를 추가로 포함한다. 특정 실시형태에서, 림프구고갈은 비-골수파괴적 림프구고갈 화학요법을 포함한다. 특정 실시형태에서, 비-골수파괴적 림프구고갈 화학요법은 사이클로포스파미드 및 플루다라빈의 투여를 포함한다.
특정 실시형태에서, 상기 방법은, 자가 T 세포와 동시에 또는 자가 T 세포에 후속적으로, 자가 T 세포의 성장 및 활성화를 촉진시키는 T-세포 성장 인자를 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 특정 실시형태에서, T 세포 성장 인자는 자가 T-세포의 성장 및 활성화를 촉진시키는 임의의 적합한 성장 인자를 포함한다. 특정 실시형태에서, T 세포 성장 인자는 인터류킨(IL)-2, IL-7, IL-15 및 IL-12, 및 이의 조합(예: IL-2와 IL-7, IL-2와 IL-15, IL-7과 IL-15, IL-2, IL-7과 IL-15, IL-12와 IL-7, IL-12와 IL-15 또는 IL-12와 IL-2)로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
특정 실시형태에서, 본원에 제공된 임의의 방법에 의해 생성된 MAGE-B2 TCR-특이적 세포의 모집단의 유효량은 대상체에게 정맥내, 종양내 또는 복강내 투여된다. 세포 요법의 적절한 투여량은, 치료되는 암의 유형, 질환의 중증도 및 경과, 개인의 임상 상태, 개인의 병력 및 치료에 대한 반응, 및 주치의의 재량에 기초하여 결정될 수 있다.
A. 병용 요법
특정 실시형태에서, 본원에 제공된 방법은 적어도 하나의 추가 치료제를 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 본원에 개시된 모든 추가 치료제는, 잠재적 독성, 가능한 부작용 및 임의의 기타 관련 요인을 고려하여, 각각의 특정 조성물 또는 요법에 대한 양호한 임상 관행에 따라 대상체에게 투여될 것이다.
특정 실시형태에서, 추가 치료는 면역요법, 방사선 요법, 외과수술(예: 종양의 외과적 절제), 화학요법, 골수 이식, 또는 이들의 조합일 수 있다. 특정 실시형태에서, 추가 치료는 일차 치료 전에(즉, 보조 요법으로서) 투여된다. 특정 실시형태에서, 추가 치료는 일차 치료 후에(즉, 네오보조 요법으로서) 투여된다.
특정 실시형태에서, 추가 치료는 면역요법을 포함한다. 특정 실시형태에서, 면역요법은 면역 체크포인트 억제제를 포함한다. 특정 실시형태에서, 면역 체크포인트 억제제는, 프로그램된 세포 사멸 경로 1(PD-1/CD279) 및 이의 리간드(PD-L1/CD274 및 PD-L2/CD273), 세포독성 T 림프구-연관된 항원 4(CTLA-4/CD152), 림프구-활성화 유전자 3(LAG-3/CD223), B 및 T 림프구 감쇠기(BTLA), Ig 및 면역수용체 티로신-기반 억제 모티프(ITIM) 도메인(TIGIT)을 갖는 T 세포 면역수용체, T 세포 면역글로불린 도메인 및 뮤친 도메인 3(TIM-3/HAVcr2), 킬러 면역글로불린-유사 수용체(KIR/CD158), T 세포 활성화의 V-도메인 면역글로불린 억제인자(VISTA) 및 아데노신 A2a 수용체(A2aR)로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
특정 실시형태에서, 면역 체크포인트 억제제는 PD-1 결합 길항제이다. 특정 실시형태에서, PD-1 결합 길항제는 항-PD-1 항체이다. 특정 실시형태에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙, 펨브롤리주맙 및 CT-011로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, PD-1 결합 길항제는 면역접착제(예: 면역글로불린 불변 영역(예: 면역글로불린 서열의 Fc 영역)에 융합된 PDL1 또는 PDL2의 세포외 또는 PD-1 결합 부분)이다.
특정 실시형태에서, 면역 체크포인트 억제제는 CTLA-4 결합 길항제이다. 특정 실시형태에서, CTLA-4 결합 길항제는 항-CTLA-4 항체이다. 특정 실시형태에서, 항-CTLA-4 항체는 이필리무맙 및 트레멜리무맙으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
특정 실시형태에서, 추가 치료제는 방사선요법에 의한 치료를 포함한다. 특정 실시형태에서, 방사선요법은 감마선(γ-선), X-선, 마이크로파, 프로톤 빔 조사, 적외선 조사, 및 종양에 방사성동위원소의 직접 전달로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, 방사선요법은 X-선에 의한 치료를 포함한다. 특정 실시형태에서, X-선은 3 내지 4주간에 걸쳐 50 내지 200 뢴트겐의 1일 용량으로 투여된다. 특정 실시형태에서, X-선은 2000 내지 6000 뢴트겐의 1일 용량으로 투여된다. 특정 실시형태에서, 방사선요법은 종양으로의 방사성동위원소의 직접 전달을 포함한다. 방사성동위원소의 선량 범위는 동위체의 반감기, 방출된 방사선의 강도와 종류, 및 종양 세포에 의한 흡수 정도에 따라 광범위하게 달라지지만, 적절한 치료학적 유효 선량의 결정은 당업자 수준의 범위내이다.
특정 실시형태에서, 추가 치료제는 일차 치료와 연관된 부작용(예: 오심, 악액질 등)의 치료를 위한 약제의 투여를 포함한다. 특정 실시형태에서, 추가 치료는 면역요법을 포함한다. 특정 실시형태에서, 추가 치료는 방사선 요법을 포함한다. 일부 실시형태에서, 방사선요법은 감마선 조사를 포함한다. 특정 실시형태에서, 추가 치료는 수술을 포함한다. 특정 실시형태에서, 추가 치료는 방사선 요법과 수술의 조합을 포함한다. 특정 실시형태에서, 추가 치료는 알킬화제, 안트라사이클린, 세포골격 파괴제, 에포틸론, 히스톤 데아세틸라제 억제제, 토포이소머라제 I 억제제, 토포이소머라제 II 억제제, 키나제 억제제, 뉴클레오티드 유사체 및 뉴클레오티드 전구체 유사체, 펩티드 항생물질, 백금계 화합물, 레티노이드, 빈카 알칼로이드 및 이들의 유도체로 이루어진 그룹으로부터 선택된 화학요법제의 클라스에 의한 치료를 포함한다.
본원에서 고려된 추가 치료는, 본원에 제공된 조성물의 투여 전, 후 또는 동시에 투여될 수 있다. 특정 실시형태에서, 추가 치료는 본원에 제공된 조성물 전에 투여된다. 특정 실시형태에서, 추가 치료는 본원에 제공된 조성물 후에 투여된다. 특정 실시형태에서, 추가 치료는 본원에 제공된 조성물의 투여 전후에 하나 이상의 간격으로 투여된다. 치료되는 대상체가 병용 요법으로부터 이익을 받도록, 추가 치료를 투여하기 위한 적절한 간격의 결정은 당업자 수준의 범위내이다.
B. 약제학적 조성물　
또 다른 국면에서, 본원에는 MAGE-B2 TCR-특이적 세포 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물 및 제형이 제공된다.
본원에 기재된 약제학적 조성물 및 제형은, 수용액, 예를 들면, 통상의 생리식염수(예: 0.9%) 및 인간 혈청 알부민(예: 10%)의 형태로, 목적하는 순도를 갖는 활성 성분(예: 항체 또는 폴리펩티드)을 하나 이상의 임의의 약제학적으로 허용되는 담체와 혼합함으로써 제조할 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences 22nd　edition, 2012). 약제학적으로 허용되는 담체는 일반적으로 사용되는 투여량 및 농도에서 수용자에게 무독성이고, 이로써 한정되지 않지만, 완충액, 예컨대, 포스페이트, 시트레이트 또는 기타 무기 산; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 방부제(예컨대, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드; 벤즈에토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예컨대, 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 사이클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량(약 10 잔기 미만)의 폴리펩티드; 단백질, 예컨대, 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 폴리머, 예컨대, 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신; 글루코즈, 만노즈 또는 덱스트란을 포함하는 단당, 이당 및 기타 탄수화물; 킬레이트제, 예컨대, EDTA; 당, 예컨대, 슈크로즈, 만니톨, 트레할로즈 또는 솔비톨; 염-형성 카운터-이온, 예컨대, 나트륨; 금속 착물(예: 아연-단백질 복합체); 및/또는 비-이온성 계면활성제, 예컨대, 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함한다.
IV. 실시예
이하의 실시예는 본 발명의 바람직한 실시형태를 입증하기 위해 포함된다. 하기 실시예에 개시된 기술은 본 발명의 실시에서 양호하게 기능하기 위해 본 발명자에 의해 발견된 기술을 나타낸다는 것이 당업자에게 이해되고, 따라서 이의 실시를 위한 바람직한 모드를 구성하는 것으로 간주될 수 있다. 그러나, 당업자는, 본 개시내용에 비추어, 개시된 특정 실시형태에서 다수의 변화가 이루어질 수 있고 본 발명의 정신 및 범위로부터 일탈하지 않고서 동일 또는 유사한 결과를 수득할 수 있다는 것을 이해해야 한다.
실시예 1 -　MAGE-B2-특이적 T 세포의 생성 및 특성화
MAGE-B2의 발현은 폐암 세포주 및 불사멸 정상 인간 소공 상피 세포(HSAEC1-KT 및 HSAEC2-KT)에서 분석했다(도 1). MAGE-B2 단백질은 대부분의 폐암 세포주에서 강력하게 발현되는 것으로 밝혀졌고, 정상 폐 세포주에서는 발현이 거의 관찰되지 않았다.
MAGE-B2 특이적 CD8+ CTL를 생성하기 위해, MAGE-B2 HLA-A2 제한된 에피토프를 코딩하는 RNA로 수지상 세포를 펄스시켰다. 이어서, T 세포를 펄스 수지상 세포로 자극시키고, CD8+ 사량체를 유세포분석에 의해 검출했다. 이어서, T 세포를 선별하고, 클로닝하고, 랜덤 확장 프로토콜(REP)에 의해 확장시켰다. 이어서, T 세포를 기능적 MAGE-B2-특이적 TCR의 클로닝 전에 기능적 스크리닝에 의해 특성화했다.
따라서, MAGE-B2 HLA-A2 제한된 에피토프는 MAGE-B2-특이적 세포독성 T 림프구(CTL)의 생성에 사용했다. 나이브 T 세포는 건강한 HLA-A2 공여체로부터 유래하고, 전장 MAGE-B2 RNA로 펄스시킨 자가 성숙 수지상 세포(mDC)로 자극시켰다. 2회의 자극 후, HLA-A2 제한된 MAGE-B2 에피토프(GVYDGEEHSV; 서열번호 1)를 갖는 사량체를 사용하여, 에피토프를 인식한 T 세포 모집단을 검출했다. 이어서, CD8+사량체+ 모집단을 선별하고, 신속 확장 프로토콜(REP)로 확장시켜 CTL 세포주를 생성했다. 상관 CTL 클론은 제한 희석 방법을 사용하여 생성했다. 세포의 99% 이상이 CD8+ 및 사량체+인 것으로 관찰되었다(도 2).
MAGE-B2-특이적 T 세포의 기능적 결합력을 후속적으로 시험했다. 펩티드 적정 검정에서, T2 세포를 상이한 농도의 MAGE-B2 펩티드(10pg/ml 내지 10㎍/ml)로 펄스시켰다(도 3a). T2 세포를 표적 세포로서 사용하고, 단리된 MAGE-B2 CTL 클론(E:T=20:1)과 공배양했다. CTL 클론의 세포독성 활성(도 3b)를 폐암 세포주 H2023(HLA-A*0201) 및 정상 폐 세포주 HSAEC2-KT(HLA-A*0201)에 대해 측정했다. 표적 세포를 상이한 E:T 비율로 MAGE-B2 CTL 클론과 공배양했다. 세포독성 활성을 표준 51Cr 방출 검정으로 검출했다. MAGE-B2 CTL 클론은 폐암 세포주에 대해 세포독성인 것으로 관찰되었지만, 정상 폐 세포주에서는 관찰되지 않았다(도 3b). 또한, HLA-A2+ 폐암 세포주 H522, H1355, H1755 및 DFC-1032를 표적 세포로서 사용하고, 상이한 E:T 비율로 MAGE-B2 CTL 클론과 공배양하고, 세포독성을 측정했다. MAGE-B2 CTL 클론은 폐암 세포주 DFC-1032 및 H1755에 대해 세포독성인 것으로 관찰되었다(도 3c). 마지막으로, CTL 클론의 세포독성을 모체 폐암 세포주 PC-9 및 H1573, 게다가 HLA-A2 강제 발현을 수반하는 세포주 둘 다에 대해 평가했다. 보다 큰 세포독성 활성은, 모체 PC-9 및 H1573 세포와 비교하여 HLA-A2 강제 발현을 수반하는 세포주에 대해 관찰되었다(도 3d).
MAGE-B2 TCR 조작된 T 세포(TCR-T)를 생성하기 위해, MAGE-B2 CTL 클론으로부터의 TCR을 클로닝하고, 레트로바이러스 벡터 pMSGV1에 삽입했다. 퓨린 절단 부위, SGSG 링커 및 P2A 절단 부위를 함유하는 링커 단편을 TCR-β 쇄와 TCR-α 쇄 사이에 삽입하여, 쇄 둘 다가 MSCV 프로모터하에 동등하게 발현되는 것을 보장했다. 재조합 레트로바이러스는 레트로바이러스 및 엔벨로프 벡터 RD114를 팩키지 세포주 GP2-292에 공-형질감염시 생성했다. 형질감염 2 내지 3일후, 레트로바이러스를 함유하는 상청액을 사용하여, 50ng/mg OKT3 및 300U/ml IL-2 자극으로 2일 동안 활성화시킨 동종이계 PBMC를 감염시켰다. 감염은 1차 감염 1일 후에 1회 이상 수행했다. 5일 후, 청명한 CD8+사량체+ 모집단을 유세포분석에 의해 검출했다(도 4). TCR-T 세포주는 신속 확장 프로토콜을 사용하여 CD8+사량체+ 모집단을 선별 및 확장시킴으로써 개발했다.
펩티드 적정 검정은 표적 세포로서 상이한 농도의 MAGE-B2 펩티드(10pg/ml 내지 10㎍/ml)로 펄스시킨 T2 세포로 수행했다. T2 세포를 MAGE-B2 TCR-T 세포주(E:T=20:1)과 공-배양했다. 세포독성은 표준 51Cr 방출 검정으로 검출했다(도 5a). 또한, 폐암 세포주 H2023(HLA-A*0201) 및 정상 폐 세포주 HSAEC2-KT(HLA-A*0201)에 대한 MAGE-B2 TCR-T의 세포독성을 평가했다(도 5b). 폐암 세포주 H2023 및 정상 폐 세포주 HSAEC2-KT를 상이한 E:T 비율에서 MAGE-B2 TCR-T 세포와 공-배양했다. 사멸 활성은 표준 51Cr 방출 검정으로 검출했다. MAGE-B2 TCR-T 세포주는 폐암 세포주에 대해 특이적으로 세포독성인 것으로 관찰되었다.
마지막으로, MAGE-B2 TCR-T 세포를 세포내 사이토킨 염색(ICS)에 의해 기능적으로 특성화했다. MAGE-B2 TCR-T 세포주는, 폐암 세포주 H2023, 정상 폐 세포주 HSAEC2-KT, MAGE-B2 펩티드로 펄스시킨 T2, 게다가 MART-1 펩티드 M26으로 펄스시킨 T2와 공-배양했다. IFN-γ, TNF-α, IL-2 및 항원 특이적 반응 마커 CD137 및 CD69를 ICS 검정에 의해 검출했다. 공-배양 후, MAGE-B2 TCR-T 세포주의 IFN-γ, TNF-α, IL-2, CD137 및 CD69 수준은, 정상 폐 세포주 HSAEC2-KT 또는 대조군 펩티드 M26으로 펄스시킨 T2와 비교하여, TCR-T 세포를 폐암 세포주 H2023 또는 MAGE-B2 펩티드로 펄스시킨 T2와 공-배양하는 경우, 현저히 증강되었다(도 6).
따라서, MAGE-B2 TCR-T 세포는, 동종이계 PBMC를 사용한 TCR 유전자 변형된 CTL을 생성 및 확장시킴으로써 고도의 또는 재발성 암을 갖는 HLA-A2(예: HLA-A*0201, HLA-A*0202, HLA-A*0203, HLA-A*0204 또는 HLA-A*0205) 양성 환자의 치료에 사용될 수 있다. 기능적 검출(예: 표현형 및 세포독성) 후, TCR 변형된 T 세포를 환자에게 주입한다.
실시예 2 - 재료 및 방법
T 세포 클론의 생성: 전장 MAGE-B2 RNA를, HLA-A2 건강한 공여체로부터 유래된 성숙 수지상 세포(DC)에 형질감염시켰다. RNA 형질감염된 DC를 IL-21의 존재하에 DC:T = 1:10의 비율에서 나이브 T 세포와 공-배양했다. 1주 후, RNA-형질감염된 DC를 사용하여 T 세포를 재-자극시켰다. 2회의 자극 후, CD8 및 사량체 이중 양성 T 세포 모집단을 선별하고 신속 확장 프로토콜(REP)로 확장시켰다. T 세포 클론은 제한 희석 방법으로 생성했다. 고활성 CTL 클론은 암 세포에 대한 세포독성 검정을 통해 스크리닝했다.
T 세포 수용체(TCR) 클로닝 및 레트로바이러스 발현 벡터 작제: TCR(알파 쇄 및 베타 쇄 포함)은 제조업자의 지시에 따라 5'-RACE 방법을 사용하여 클로닝했다. TCR V-알파 및 TCR V-베타의 사용은 IMGT/V-QUEST 주석 툴로 식별했다. TCR 발현 레트로바이러스 벡터 작제를 위해, 전방 프라이머는 TCR V-알파 또는 베타 사용에 따라 설계했다. 역방 프라이머는 TCR 알파 또는 베타 불변 영역의 서열에 따라 설계했다. 퓨린 및 P2A 링커 펩티드에 의해 분리된 알파- 및 베타-TCR 쇄를 함유하는 발현 카세트를 생성하고, 전장 PCR 생성물을 레트로바이러스 벡터 pMSGV1에 클로닝했다. 클로닝된 DNA 서열은 서열분석으로 검증했다.
레트로바이러스 생성 및 인간 말초혈 림프구(PBL)의 감염: TCR을 함유하는 pMSGV1 및 엔벨로프 벡터 RD114를 팩키지 세포주 GP2-293에 공-형질감염시켰다. 6 내지 8시간 형질감염 후, 배지를 새롭게 했다. 상청액을 14시간 후에 수거하고, 20㎍/mL 레트로넥틴(RetroNectin)으로 코팅된 6웰 플레이트에 첨가한 다음, 32℃에서 2시간 동안 원심분리했다(2000×g). 이어서, 상청액을 제거하고, 2일 동안 50ng/ml OKT3 및 300U/ml IL-2로 활성화시킨 PBL을 레트로바이러스 로딩된 플레이트에 첨가한 다음, 10분 동안 32℃에서 원심분리했다(1000×g). 이어서, 세포를 밤새 32℃에서 인큐베이팅하고, 절차를 다음날 반복했다(합계 2회의 형질도입). 그 후, 세포를 5% CO2 인큐베이터 내에서 37℃로 확장시키고, 필요에 따라 분할했다.
TCR 조작된 T 세포 클론 생성: 감염 후, CD8+ 및 사량체+ T 세포 모집단을 신속 확장 프로토콜(REP)로 선별하고 확장시켰다.
51 Cr 방출 검정: HLA-A2 종양 표적을 용해시키는 TCR 조작된 T 세포 또는 CTL 클론의 사멸 능력은 표준 51Cr 방출 검정을 사용하여 측정했다. 종양 세포 또는 정상 세포를 200μCi의 51Cr로 2시간 동안 37℃에서 표지했다. 표지된 표적 세포를 세척한 다음, 0.2ml의 완전 배지에서 4시간 동안 37℃에서 상이한 비율로 이펙터 세포와 인큐베이팅했다. 수확된 상청액은 자동 감마 계수기를 사용하여 계수했다. 최대 및 자발적 51Cr 방출은, 표지된 표적 세포를 트립판 용해 완충액 또는 배지에서 4시간 동안 37℃에서 인큐베이팅하여 측정했다. 각 데이터 포인트는 4개 웰의 평균으로서 결정했다. 퍼센트 특이적 용해는 다음과 같이 계산했다: % 사멸 = ((특이적 방출 - 자발적 방출)/(합계 방출 - 자발적 방출))×100.
세포내 사이토킨 염색(ICS) 검정: T 세포를 37℃에서 밤새 브레펠딘 A(BFA)의 존재하에 10:1 비율로 표적 세포와 함께 인큐베이팅했다. 공-배양 후, 표적 세포를 회수하고 세척했다. 세포를 먼저 유동 항체 항-표면 마커로 염색했다. 그 후, 세포를 세척하고, 고정 완충액으로 고정시킨 다음, 투과 용액을 사용하여 투과처리했다. 이어서, 투과처리한 세포를 세포내 사이토킨 유동 항체로 염색했다. 마지막으로, 세포에서 생성되는 사이토킨의 수준을 FACS를 사용하여 분석했다.
실시예 3 - MAGE-B2 HLA-A2 제한된-펩티드(MB2-231)-특이적 TCR-T 생성의 생성
MAGE-B2 펩티드(GVYDGEEHSV; 서열번호 1) 펄스 수지상 세포를 사용하여 추가의 MAGE-B2 특이적 T 세포 생성물을 생성하여, 동일한 건강한 공여체로부터 유래된 PBMC를 자극시켰다(도 7). 작은 CD8+/사량체+ 모집단은 2회의 자극 후에 1매의 48개 웰 플레이트 중의 3개 웰에서 관찰되었다. 3개 양성 웰은 사량체 가이드 선별 기술을 사용하여 별도로 선별하고, REP를 사용하여 1 또는 2회의 확장을 수행했다. 최종 생성물의 CD8 및 사량체 염색은 도 7에 제시되어 있다.
3 MAGE-B2 특이적 CTL 세포주의 기능적 결합력은 20:1의 이펙터 대 표적(E:T) 비율에서 상이한 농도의 MAGE-B2 펩티드(GVYDGEEHSV; 서열번호 1)로 펄스시킨 T2 세포주의 용해에 의해 제시되었다. 세포독성은 표준 51Cr 방출 검정으로 검출했다(도 8a). 폐암 세포주 H2023(HLA-A*0201+, MAGE-B2+) 및 정상 폐 세포주 HSAEC2-KT(HLA-A*0201+, MAGE-B2-)에 대한 3 MAGE-B2 특이적 CTL 세포주의 세포독성을 또한 평가했다(도 8b). 폐암 세포주 H2023 및 정상 폐 세포주 HSAEC2-KT를 상이한 E:T 비율에서 MAGE-B2 TCR-T 세포와 공-배양했다. 사멸 활성은 표준 51Cr 방출 검정을 사용하여 검출했다. 3개 모든 MAGE-E2 특이적 CTL 세포주는 폐암 세포주 H2023에 대해 특이적으로 세포독성인 것으로 관찰되었다(도 8b). 다른 폐암 세포주 H1299(HLA-A*0201-, MAGE-B2+), H1299-A2(HLA-A*0201 강제 발현, MAGE-B2+), H1395(HLA-A*0201+, MAGE-B2+), H522(HLA-A*0201+, MAGE-B2-), H1355(HLA-A*0201+, MAGE-B2-), H1755(HLA-A*0201+, MAGE-B2+) 및 DFC-1032(HLA-A*0201+, MAGE-B2-)에 대한 3 MAGE-B2 특이적 CTL 세포주의 세포독성을 추가로 평가했다(도 8c, 8d, 8e).
MAGE-B2 TCR 조작된 T 세포(TCR-T)를 생성하기 위해, MAGE-B2 CTL 세포주 C5로부터의 TCR을 클로닝시키고, 레트로바이러스 벡터 pMSGV1에 삽입했다. 퓨린 절단 부위, SGSG 링커 및 P2A 절단 부위를 함유하는 링커 단편을 TCR-β 쇄와 TCR-α 쇄 사이에 삽입하여, 쇄 둘 다가 MSCV 프로모터하에 동등하게 발현되는 것을 보장했다. 재조합 레트로바이러스는, 레트로바이러스 벡터 및 엔벨로프 벡터 RD114를 팩키지 세포주 Phoenix-GP에 공-형질감염시켜 생성했다. 형질감염 2 내지 3일 후, 레트로바이러스를 함유하는 상청액을 사용하여, 50ng/ml OKT3 및 300U/ml IL-2 자극으로 2일 동안 활성화시킨 동종이계 HLA-A*0201+ 건강한 공여체의 PBMC를 감염시켰다. 5일 후, 청명한 CD8+사량체+ 모집단을 유세포분석에 의해 검출했다(도 9a). CD8+사량체+ 모집단은 사량체 가이드 선별 기술을 사용하여 선별하고, REP로 확장시켰다. 최종 생성물의 CD8 및 사량체 염색은 도 9a에 제시되어 있다. MAGE-B2 TCR-T의 기능적 결합력은, 20:1의 이펙터 대 표적(E:T) 비율로 다양한 농도의 MAGE-B2 펩티드(GVYDGEEHSV; 서열번호 1)로 펄스시킨 T2 세포주의 용해에 의해 제시되었다. 세포독성은 표준 51Cr 방출 검정으로 검출했다(도 9b). 폐암 세포주 H2023(HLA-A*0201+, MAGE-B2+) 및 정상 폐 세포주 HSAEC2-KT(HLA-A*0201+, MAGE-B2-)에 대한 MAGE-B2 TCR-T의 세포독성을 또한 평가했다(도 9c). 다른 폐암 세포주 H1299(HLA-A*0201-, MAGE-B2+), H1299-A2(HLA-A*0201 강제 발현, MAGE-B2+), H1395(HLA-A*0201+, MAGE-B2+), H522(HLA-A*0201+, MAGE-B2-), H1355(HLA-A*0201+, MAGE-B2-), H1755(HLA-A*0201+, MAGE-B2+) 및 DFC-1032(HLA-A*0201+, MAGE-B2-)에 대한 MAGE-B2 TCR-T의 세포독성을 추가로 평가했다(도 9d, 9e).
마지막으로, MAGE-B2 TCR-T 세포를 세포내 사이토킨 염색(ICS)에 의해 기능적으로 특성화했다. MAGE-B2 TCR-T 세포주를, MAGE-B2 펩티드(GVYDGEEHSV; 서열번호 1)로 펄스시킨 T2, 게다가 MART-1 펩티드 M26으로 펄스시킨 T2(대조군으로서)와 함께 공-배양했다(도 10a). 폐암 세포주 H2023, 정상 폐 세포주 HSAEC2-KT(대조군으로서)에 대한 MAGE-B2 특이적 TCR-T의 반응을 또한 평가했다(도 10a). 추가로, 다른 폐암 세포주, H1395, H522, H1299, H1299-A2, DFC-1032, H1355 및 H1755를 표적으로서 사용하여 MAGE-B2 TCR-T의 기능 및 특이성을 평가했다(도 10b, 10c). IFN-γ, TNF-α의 사이토킨 방출, 및 MAGE-B2 TCR-T 세포주의 항원 특이적 마커 CD137 및 CD69의 상향-조절이 ICS로 검출되었다.
* * *
본원에 개시되고 청구되는 모든 방법은 본 개시내용에 비추어 과도한 실험 없이 이루어지고 실시될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법이 바람직한 실시형태에 관해 설명되었지만, 당업자는, 본 발명의 개념, 사상, 및 범위를 벗어나지 않고 본원에 개시된 방법 및 본원에 개시된 방법의 단계 또는 단계의 순서에 변형이 적용될 수 있음을 이해할 것이다. 보다 구체적으로는, 화학적으로 및 생리학적으로 관련된 특정 약제가, 본원에 개시된 약제를 대체할 수 있는 동시에 동일하거나 유사한 결과가 달성되는 것이 자명할 것이다. 당업자에게 자명한 이러한 모든 유사한 치환물 및 변형은, 첨부된 청구범위에 의해 한정되는 본 발명의 사상, 범위 및 개념 내에 있는 것으로 간주된다.
참고 문헌
하기의 참고 문헌은, 본원에 개시된 것들에 예시적 절차 또는 기타 상세한 보충을 제공하는 정도로, 본원에 참조로서 구체적으로 포함된다.
Barnea et al., Eur J Immunol, 32(1):213-22, 2002.
Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22nd Edition, Pharmaceutical Press, 2012. Shraibman et al., Mol Cell Proteomics, 15(9):3058-70, 2016.
SEQUENCE LISTING <110> The Board of Regents of the University of Texas <120> T CELL RECEPTORS WITH MAGE-B2 SPECIFICITY AND USES THEREOF <130> IPA201286-US <150> US 62/660,083 <151> 2018-04-19 <160> 45 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic amino acid <400> 1 Gly Val Tyr Asp Gly Glu Glu His Ser Val 1 5 10 <210> 2 <211> 813 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 2 atgaactatt ctccaggctt agtatctctg atactcttac tgcttggaag aacccgtgga 60 aattcagtga cccagatgga agggccagtg actctctcag aagaggcctt cctgactata 120 aactgcacgt acacagccac aggataccct tcccttttct ggtatgtcca atatcctgga 180 gaaggtctac agctcctcct gaaagccacg aaggctgatg acaagggaag caacaaaggt 240 tttgaagcca cataccgtaa agaaaccact tctttccact tggagaaagg ctcagttcaa 300 gtgtcagact cagcggtgta cttctgtgct ctgaccaacg actacaagct cagctttgga 360 gccggaacca cagtaactgt aagagcaaat atccagaacc ctgaccctgc cgtgtaccag 420 ctgagagact ctaaatccag tgacaagtct gtctgcctat tcaccgattt tgattctcaa 480 acaaatgtgt cacaaagtaa ggattctgat gtgtatatca cagacaaaac tgtgctagac 540 atgaggtcta tggacttcaa gagcaacagt gctgtggcct ggagcaacaa atctgacttt 600 gcatgtgcaa acgccttcaa caacagcatt attccagaag acaccttctt ccccagccca 660 gaaagttcct gtgatgtcaa gctggtcgag aaaagctttg aaacagatac gaacctaaac 720 tttcaaaacc tgtcagtgat tgggttccga atcctcctcc tgaaagtggc cgggtttaat 780 ctgctcatga cgctgcggct gtggtccagc tga 813 <210> 3 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic amino acid <400> 3 Ser Leu Phe Trp Tyr Val Gln Tyr Pro Gly Glu Gly Leu Gln Leu Leu 1 5 10 15 Leu Lys Ala Thr Lys Ala Asp Asp Lys Gly Ser Asn Lys Gly Phe Glu 20 25 30 Ala Thr Tyr Arg Lys Glu Thr Thr Ser Phe His Leu Glu Lys Gly Ser 35 40 45 Val Gln Val Ser Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Leu Thr Asn Asp 50 55 60 Tyr Lys Leu Ser Phe Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Arg Ala Asn 65 70 75 80 Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser Lys Ser 85 90 95 Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Thr Asn 100 105 110 Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys Thr Val 115 120 125 Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val Ala Trp 130 135 140 Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn Ser Ile 145 150 155 160 Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser Ser Cys Asp Val 165 170 175 Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr Asn Leu Asn Phe Gln 180 185 190 Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly 195 200 205 Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser 210 215 220 <210> 4 <211> 930 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 4 atgggtcctg ggcttctcca ctggatggcc ctttgtctcc ttggaacagg tcatggggat 60 gccatggtca tccagaaccc aagataccag gttacccagt ttggaaagcc agtgaccctg 120 agttgttctc agactttgaa ccataacgtc atgtactggt accagcagaa gtcaagtcag 180 gccccaaagc tgctgttcca ctactatgac aaagatttta acaatgaagc agacacccct 240 gataacttcc aatccaggag gccgaacact tctttctgct ttcttgacat ccgctcacca 300 ggcctggggg acgcagccat gtacctgtgt gccaccagca ggggcgggag gtacaatgag 360 cagttcttcg ggccagggac acggctcacc gtgctagagg acctgaaaaa cgtgttccca 420 cccgaggtcg ctgtgtttga gccatcagaa gcagagatct cccacaccca aaaggccaca 480 ctggtgtgcc tggccacagg cttcttccct gaccacgtgg agctgagctg gtgggtgaat 540 gggaaggagg tgcacagtgg ggtcagcacg gacccgcagc ccctcaagga gcagcccgcc 600 ctcaatgact ccagatactg cctgagcagc cgcctgaggg tctcggccac cttctggcag 660 aacccccgca accacttccg ctgtcaagtc cagttctacg ggctctcgga gaatgacgag 720 tggacccagg atagggccaa acccgtcacc cagatcgtca gcgccgaggc ctggggtaga 780 gcagactgtg gctttacctc ggtgtcctac cagcaagggg tcctgtctgc caccatcctc 840 tatgagatcc tgctagggaa ggccaccctg tatgctgtgc tggtcagcgc ccttgtgttg 900 atggccatgg tcaagagaaa ggatttctga 930 <210> 5 <211> 309 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic amino acid <400> 5 Met Gly Pro Gly Leu Leu His Trp Met Ala Leu Cys Leu Leu Gly Thr 1 5 10 15 Gly His Gly Asp Ala Met Val Ile Gln Asn Pro Arg Tyr Gln Val Thr 20 25 30 Gln Phe Gly Lys Pro Val Thr Leu Ser Cys Ser Gln Thr Leu Asn His 35 40 45 Asn Val Met Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Ser Gln Ala Pro Lys Leu 50 55 60 Leu Phe His Tyr Tyr Asp Lys Asp Phe Asn Asn Glu Ala Asp Thr Pro 65 70 75 80 Asp Asn Phe Gln Ser Arg Arg Pro Asn Thr Ser Phe Cys Phe Leu Asp 85 90 95 Ile Arg Ser Pro Gly Leu Gly Asp Ala Ala Met Tyr Leu Cys Ala Thr 100 105 110 Ser Arg Gly Gly Arg Tyr Asn Glu Gln Phe Phe Gly Pro Gly Thr Arg 115 120 125 Leu Thr Val Leu Glu Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro Glu Val Ala 130 135 140 Val Phe Glu Pro Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr 145 150 155 160 Leu Val Cys Leu Ala Thr Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser 165 170 175 Trp Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro 180 185 190 Gln Pro Leu Lys Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu 195 200 205 Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn 210 215 220 His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu 225 230 235 240 Trp Thr Gln Asp Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu 245 250 255 Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Val Ser Tyr Gln Gln 260 265 270 Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala 275 280 285 Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val 290 295 300 Lys Arg Lys Asp Phe 305 <210> 6 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 6 gccacaggat acccttcc 18 <210> 7 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic amino acid <400> 7 Ala Thr Gly Tyr Pro Ser 1 5 <210> 8 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 8 gccacgaagg ctgatgacaa g 21 <210> 9 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic amino acid <400> 9 Ala Thr Lys Ala Asp Asp Lys 1 5 <210> 10 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 10 gctctgacca acgactacaa gctcagc 27 <210> 11 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic amino acid <400> 11 Ala Leu Thr Asn Asp Tyr Lys Leu Ser 1 5 <210> 12 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 12 ttgaaccata acgtc 15 <210> 13 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic amino acid <400> 13 Leu Asn His Asn Val 1 5 <210> 14 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 14 tactatgaca aagatttt 18 <210> 15 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic amino acid <400> 15 Tyr Tyr Asp Lys Asp Phe 1 5 <210> 16 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic oligonucleotide <400> 16 gccaccagca ggggcgggag gtacaatgag cagttc 36 <210> 17 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic amino acid <400> 17 Ala Thr Ser Arg Gly Gly Arg Tyr Asn Glu Gln Phe 1 5 10 <210> 18 <211> 822 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Alpha Chain (TRAV10*01) <400> 18 atgaaaaagc atctgacgac cttcttggtg attttgtggc tttattttta tagggggaat 60 ggcaaaaacc aagtggagca gagtcctcag tccctgatca tcctggaggg aaagaactgc 120 actcttcaat gcaattatac agtgagcccc ttcagcaact taaggtggta taagcaagat 180 actgggagag gtcctgtttc cctgacaatc atgactttca gtgagaacac aaagtcgaac 240 ggaagatata cagcaactct ggatgcagac acaaagcaaa gctctctgca catcacagcc 300 tcccagctca gcgattcagc ctcctacatc tgtgtggtga tttcaggctt tcagaaactt 360 gtatttggaa ctggcacccg acttctggtc agtccaaata tccagaaccc tgaccctgcc 420 gtgtaccagc tgagagactc taaatccagt gacaagtctg tctgcctatt caccgatttt 480 gattctcaaa caaatgtgtc acaaagtaag gattctgatg tgtatatcac agacaaaact 540 gtgctagaca tgaggtctat ggacttcaag agcaacagtg ctgtggcctg gagcaacaaa 600 tctgactttg catgtgcaaa cgccttcaac aacagcatta ttccagaaga caccttcttc 660 cccagcccag aaagttcctg tgatgtcaag ctggtcgaga aaagctttga aacagatacg 720 aacctaaact ttcaaaacct gtcagtgatt gggttccgaa tcctcctcct gaaagtggcc 780 gggtttaatc tgctcatgac gctgcggctg tggtccagct aa 822 <210> 19 <211> 273 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Alpha Chain <400> 19 Met Lys Lys His Leu Thr Thr Phe Leu Val Ile Leu Trp Leu Tyr Phe 1 5 10 15 Tyr Arg Gly Asn Gly Lys Asn Gln Val Glu Gln Ser Pro Gln Ser Leu 20 25 30 Ile Ile Leu Glu Gly Lys Asn Cys Thr Leu Gln Cys Asn Tyr Thr Val 35 40 45 Ser Pro Phe Ser Asn Leu Arg Trp Tyr Lys Gln Asp Thr Gly Arg Gly 50 55 60 Pro Val Ser Leu Thr Ile Met Thr Phe Ser Glu Asn Thr Lys Ser Asn 65 70 75 80 Gly Arg Tyr Thr Ala Thr Leu Asp Ala Asp Thr Lys Gln Ser Ser Leu 85 90 95 His Ile Thr Ala Ser Gln Leu Ser Asp Ser Ala Ser Tyr Ile Cys Val 100 105 110 Val Ile Ser Gly Phe Gln Lys Leu Val Phe Gly Thr Gly Thr Arg Leu 115 120 125 Leu Val Ser Pro Asn Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu 130 135 140 Arg Asp Ser Lys Ser Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe 145 150 155 160 Asp Ser Gln Thr Asn Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile 165 170 175 Thr Asp Lys Thr Val Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn 180 185 190 Ser Ala Val Ala Trp Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala 195 200 205 Phe Asn Asn Ser Ile Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu 210 215 220 Ser Ser Cys Asp Val Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr 225 230 235 240 Asn Leu Asn Phe Gln Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu 245 250 255 Leu Lys Val Ala Gly Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser 260 265 270 Ser <210> 20 <211> 939 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Beta Chain (TRBV11-3*04) <400> 20 atgggtacca ggctcctctg ctgggtggcc ttctgtctcc tggtggaaga actcatagaa 60 gctggagtgg ttcagtctcc cagatataag attatagaga aaaaacagcc tgtggctttt 120 tggtgcaatc ctatttctgg ccacaatacc ctttactggt accggcagaa cttgggacag 180 ggcccggagc ttctgattcg atatgagaat gaggaagcag tagacgattc acagttgcct 240 aaggatcgat tttctgcaga gaggctcaaa ggagtagact ccactctcaa gatccagcct 300 gcagagcttg gggactcggc cgtgtatctc tgtgccagca gcttccctaa acagggatcc 360 tacaatgagc agttcttcgg gccagggaca cggctcaccg tgctagagga cctgaaaaac 420 gtgttcccac ccgaggtcgc tgtgtttgag ccatcagaag cagagatctc ccacacccaa 480 aaggccacac tggtgtgcct ggccacaggc ttcttccctg accacgtgga gctgagctgg 540 tgggtgaatg ggaaggaggt gcacagtggg gtcagcacgg acccgcagcc cctcaaggag 600 cagcccgccc tcaatgactc cagatactgc ctgagcagcc gcctgagggt ctcggccacc 660 ttctggcaga acccccgcaa ccacttccgc tgtcaagtcc agttctacgg gctctcggag 720 aatgacgagt ggacccagga tagggccaaa cccgtcaccc agatcgtcag cgccgaggcc 780 tggggtagag cagactgtgg ctttacctcg gtgtcctacc agcaaggggt cctgtctgcc 840 accatcctct atgagatcct gctagggaag gccaccctgt atgctgtgct ggtcagcgcc 900 cttgtgttga tggccatggt caagagaaag gatttctaa 939 <210> 21 <211> 312 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Beta Chain <400> 21 Met Gly Thr Arg Leu Leu Cys Trp Val Ala Phe Cys Leu Leu Val Glu 1 5 10 15 Glu Leu Ile Glu Ala Gly Val Val Gln Ser Pro Arg Tyr Lys Ile Ile 20 25 30 Glu Lys Lys Gln Pro Val Ala Phe Trp Cys Asn Pro Ile Ser Gly His 35 40 45 Asn Thr Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Asn Leu Gly Gln Gly Pro Glu Leu 50 55 60 Leu Ile Arg Tyr Glu Asn Glu Glu Ala Val Asp Asp Ser Gln Leu Pro 65 70 75 80 Lys Asp Arg Phe Ser Ala Glu Arg Leu Lys Gly Val Asp Ser Thr Leu 85 90 95 Lys Ile Gln Pro Ala Glu Leu Gly Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys Ala 100 105 110 Ser Ser Phe Pro Lys Gln Gly Ser Tyr Asn Glu Gln Phe Phe Gly Pro 115 120 125 Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu Glu Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro 130 135 140 Glu Val Ala Val Phe Glu Pro Ser Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln 145 150 155 160 Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ala Thr Gly Phe Phe Pro Asp His Val 165 170 175 Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn Gly Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser 180 185 190 Thr Asp Pro Gln Pro Leu Lys Glu Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg 195 200 205 Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn 210 215 220 Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu 225 230 235 240 Asn Asp Glu Trp Thr Gln Asp Arg Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val 245 250 255 Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala Asp Cys Gly Phe Thr Ser Val Ser 260 265 270 Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser Ala Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu 275 280 285 Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met 290 295 300 Ala Met Val Lys Arg Lys Asp Phe 305 310 <210> 22 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Alpha Chain CDR1 <400> 22 gtgagcccct tcagcaac 18 <210> 23 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Alpha chain CDR1 <400> 23 Val Ser Pro Phe Ser Asn 1 5 <210> 24 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Alpha chain CDR2 <400> 24 atgactttca gtgagaacac a 21 <210> 25 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Alpha chain CDR2 <400> 25 Met Thr Phe Ser Glu Asn Thr 1 5 <210> 26 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Alpha chai CDR3 <400> 26 gtggtgattt caggctttca gaaacttgta 30 <210> 27 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Alpha chain CDR3 <400> 27 Val Val Ile Ser Gly Phe Gln Lys Leu Val 1 5 10 <210> 28 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Beta chain CDR1 <400> 28 tctggccaca atacc 15 <210> 29 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Beta chain CDR1 <400> 29 Ser Gly His Asn Thr 1 5 <210> 30 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Beta chain CDR2 <400> 30 tatgagaatg aggaagca 18 <210> 31 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Beta hain CDR2 <400> 31 Tyr Glu Asn Glu Glu Ala 1 5 <210> 32 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Beta chain CDR3 <400> 32 gccagcagct tccctaaaca gggatcctac aatgagcagt tc 42 <210> 33 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Beta chain CDR3 <400> 33 Ala Ser Ser Phe Pro Lys Gln Gly Ser Tyr Asn Glu Gln Phe 1 5 10 <210> 34 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Alpha chain signal peptide <400> 34 atgaactatt ctccaggctt agtatctctg atactcttac tgcttggaag aacccgt 57 <210> 35 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Alpha chain signal peptide 3 <400> 35 Met Asn Tyr Ser Pro Gly Leu Val Ser Leu Ile Leu Leu Leu Leu Gly 1 5 10 15 Arg Thr Arg <210> 36 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Alpha chain variable region 2 <400> 36 ggaaattcag tgacccagat ggaagggcca gtgactctct cagaagaggc cttcctgact 60 ataaactgca cgtacacagc cacaggatac ccttcccttt tctggtatgt ccaatatcct 120 ggagaaggtc tacagctcct cctgaaagcc acgaaggctg atgacaaggg aagcaacaaa 180 ggttttgaag ccacataccg taaagaaacc acttctttcc acttggagaa aggctcagtt 240 caagtgtcag actcagcggt gtacttctgt gctctgacca acgactacaa gctcagcttt 300 ggagccggaa ccacagtaac tgtaagagca aatatc 336 <210> 37 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Alpha chain variable region 3 <400> 37 Gly Asn Ser Val Thr Gln Met Glu Gly Pro Val Thr Leu Ser Glu Glu 1 5 10 15 Ala Phe Leu Thr Ile Asn Cys Thr Tyr Thr Ala Thr Gly Tyr Pro Ser 20 25 30 Leu Phe Trp Tyr Val Gln Tyr Pro Gly Glu Gly Leu Gln Leu Leu Leu 35 40 45 Lys Ala Thr Lys Ala Asp Asp Lys Gly Ser Asn Lys Gly Phe Glu Ala 50 55 60 Thr Tyr Arg Lys Glu Thr Thr Ser Phe His Leu Glu Lys Gly Ser Val 65 70 75 80 Gln Val Ser Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Leu Thr Asn Asp Tyr 85 90 95 Lys Leu Ser Phe Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Arg Ala Asn 100 105 110 <210> 38 <211> 420 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Alpha chain constant region 2 <400> 38 cagaaccctg accctgccgt gtaccagctg agagactcta aatccagtga caagtctgtc 60 tgcctattca ccgattttga ttctcaaaca aatgtgtcac aaagtaagga ttctgatgtg 120 tatatcacag acaaaactgt gctagacatg aggtctatgg acttcaagag caacagtgct 180 gtggcctgga gcaacaaatc tgactttgca tgtgcaaacg ccttcaacaa cagcattatt 240 ccagaagaca ccttcttccc cagcccagaa agttcctgtg atgtcaagct ggtcgagaaa 300 agctttgaaa cagatacgaa cctaaacttt caaaacctgt cagtgattgg gttccgaatc 360 ctcctcctga aagtggccgg gtttaatctg ctcatgacgc tgcggctgtg gtccagctga 420 <210> 39 <211> 140 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Alpha chain constant region 3 <400> 39 Ile Gln Asn Pro Asp Pro Ala Val Tyr Gln Leu Arg Asp Ser Lys Ser 1 5 10 15 Ser Asp Lys Ser Val Cys Leu Phe Thr Asp Phe Asp Ser Gln Thr Asn 20 25 30 Val Ser Gln Ser Lys Asp Ser Asp Val Tyr Ile Thr Asp Lys Thr Val 35 40 45 Leu Asp Met Arg Ser Met Asp Phe Lys Ser Asn Ser Ala Val Ala Trp 50 55 60 Ser Asn Lys Ser Asp Phe Ala Cys Ala Asn Ala Phe Asn Asn Ser Ile 65 70 75 80 Ile Pro Glu Asp Thr Phe Phe Pro Ser Pro Glu Ser Ser Cys Asp Val 85 90 95 Lys Leu Val Glu Lys Ser Phe Glu Thr Asp Thr Asn Leu Asn Phe Gln 100 105 110 Asn Leu Ser Val Ile Gly Phe Arg Ile Leu Leu Leu Lys Val Ala Gly 115 120 125 Phe Asn Leu Leu Met Thr Leu Arg Leu Trp Ser Ser 130 135 140 <210> 40 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Beta chain signal peptide 4 <400> 40 atgggtcctg ggcttctcca ctggatggcc ctttgtctcc ttggaacagg tcatggg 57 <210> 41 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Beta chain signal peptide 5 <400> 41 Met Gly Pro Gly Leu Leu His Trp Met Ala Leu Cys Leu Leu Gly Thr 1 5 10 15 Gly His Gly <210> 42 <211> 342 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Beta chain variable region 4 <400> 42 gatgccatgg tcatccagaa cccaagatac caggttaccc agtttggaaa gccagtgacc 60 ctgagttgtt ctcagacttt gaaccataac gtcatgtact ggtaccagca gaagtcaagt 120 caggccccaa agctgctgtt ccactactat gacaaagatt ttaacaatga agcagacacc 180 cctgataact tccaatccag gaggccgaac acttctttct gctttcttga catccgctca 240 ccaggcctgg gggacgcagc catgtacctg tgtgccacca gcaggggcgg gaggtacaat 300 gagcagttct tcgggccagg gacacggctc accgtgctag ag 342 <210> 43 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Beta chain variable region 5 <400> 43 Asp Ala Met Val Ile Gln Asn Pro Arg Tyr Gln Val Thr Gln Phe Gly 1 5 10 15 Lys Pro Val Thr Leu Ser Cys Ser Gln Thr Leu Asn His Asn Val Met 20 25 30 Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Ser Gln Ala Pro Lys Leu Leu Phe His 35 40 45 Tyr Tyr Asp Lys Asp Phe Asn Asn Glu Ala Asp Thr Pro Asp Asn Phe 50 55 60 Gln Ser Arg Arg Pro Asn Thr Ser Phe Cys Phe Leu Asp Ile Arg Ser 65 70 75 80 Pro Gly Leu Gly Asp Ala Ala Met Tyr Leu Cys Ala Thr Ser Arg Gly 85 90 95 Gly Arg Tyr Asn Glu Gln Phe Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val 100 105 110 Leu Glu <210> 44 <211> 531 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Beta chain constant region 4 <400> 44 gacctgaaaa acgtgttccc acccgaggtc gctgtgtttg agccatcaga agcagagatc 60 tcccacaccc aaaaggccac actggtgtgc ctggccacag gcttcttccc tgaccacgtg 120 gagctgagct ggtgggtgaa tgggaaggag gtgcacagtg gggtcagcac ggacccgcag 180 cccctcaagg agcagcccgc cctcaatgac tccagatact gcctgagcag ccgcctgagg 240 gtctcggcca ccttctggca gaacccccgc aaccacttcc gctgtcaagt ccagttctac 300 gggctctcgg agaatgacga gtggacccag gatagggcca aacccgtcac ccagatcgtc 360 agcgccgagg cctggggtag agcagactgt ggctttacct cggtgtccta ccagcaaggg 420 gtcctgtctg ccaccatcct ctatgagatc ctgctaggga aggccaccct gtatgctgtg 480 ctggtcagcg cccttgtgtt gatggccatg gtcaagagaa aggatttctg a 531 <210> 45 <211> 175 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Beta chain constant region 5 <400> 45 Asp Leu Lys Asn Val Phe Pro Pro Glu Val Ala Val Phe Glu Pro Ser 1 5 10 15 Glu Ala Glu Ile Ser His Thr Gln Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ala 20 25 30 Thr Gly Phe Phe Pro Asp His Val Glu Leu Ser Trp Trp Val Asn Gly 35 40 45 Lys Glu Val His Ser Gly Val Ser Thr Asp Pro Gln Pro Leu Lys Glu 50 55 60 Gln Pro Ala Leu Asn Asp Ser Arg Tyr Cys Leu Ser Ser Arg Leu Arg 65 70 75 80 Val Ser Ala Thr Phe Trp Gln Asn Pro Arg Asn His Phe Arg Cys Gln 85 90 95 Val Gln Phe Tyr Gly Leu Ser Glu Asn Asp Glu Trp Thr Gln Asp Arg 100 105 110 Ala Lys Pro Val Thr Gln Ile Val Ser Ala Glu Ala Trp Gly Arg Ala 115 120 125 Asp Cys Gly Phe Thr Ser Val Ser Tyr Gln Gln Gly Val Leu Ser Ala 130 135 140 Thr Ile Leu Tyr Glu Ile Leu Leu Gly Lys Ala Thr Leu Tyr Ala Val 145 150 155 160 Leu Val Ser Ala Leu Val Leu Met Ala Met Val Lys Arg Lys Asp 165 170 175

Claims (75)

  1. 흑색종-연관 항원 B2(MAGE-B2)로부터 유래된 항원성 펩티드()에 결합할 수 있는 단리된 T 세포 수용체(TCR)로서,
    서열번호 3 또는 19의 서열과 적어도 90% 동일성(identity)을 갖는 TCR 알파 폴리펩티드 및 서열번호 5 또는 22의 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 TCR 베타 폴리펩티드를 포함하는, 단리된 T 세포 수용체(TCR).
  2. 제1항에 있어서, 항원성 펩티드가 HLA-A2 제한된 것인, TCR.
  3. 제2항에 있어서, 항원성 펩티드가 HLA-A*0201 제한된 것인, TCR.
  4. 제1항에 있어서, TCR 알파 폴리펩티드가 CDR1(서열번호 7), CDR2(서열번호 9) 및 CDR3(서열번호 11)와 적어도 95% 동일성을 갖는 서열을 포함하고, TCR 베타 폴리펩티드가 CDR1(서열번호 13), CDR2(서열번호 15) 및 CDR3(서열번호 17)과 적어도 95% 동일성을 갖는 서열을 포함하는, TCR.
  5. 제1항에 있어서, TCR 알파 폴리펩티드가 CDR1(서열번호 7), CDR2(서열번호 9) 및 CDR3(서열번호 11)과 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함하고, TCR 베타 폴리펩티드가 CDR1(서열번호 13), CDR2(서열번호 15) 및 CDR3(서열번호 17)과 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함하는, TCR.
  6. 제1항에 있어서, TCR 알파 폴리펩티드가 서열 CDR1(서열번호 7), CDR2(서열번호 9) 및 CDR3(서열번호 11)을 포함하고, TCR 베타 폴리펩티드가 서열 CDR1(서열번호 13), CDR2(서열번호 15) 및 CDR3(서열번호 17)을 포함하는, TCR.
  7. 제1항에 있어서, 폴리펩티드가 서열번호 3의 서열과 적어도 95% 동일성을 갖고, TCR 베타 폴리펩티드가 서열번호 5의 서열과 적어도 95% 동일성을 갖는, TCR.
  8. 제1항에 있어서, TCR 알파 폴리펩티드가 서열번호 3의 서열과 적어도 99% 동일성을 갖고, TCR 베타 폴리펩티드가 서열번호 5의 아미노산 서열과 적어도 99% 동일성을 갖는, TCR.
  9. 제1항에 있어서, TCR 알파 폴리펩티드가 서열번호 3의 서열을 갖고, TCR 베타 폴리펩티드가 서열번호 5의 서열을 갖는, TCR.
  10. 제1항에 있어서, TCR 알파 폴리펩티드가 CDR1(서열번호 23), CDR2(서열번호 25) 및 CDR3(서열번호 27)과 적어도 95% 동일성을 갖는 서열을 포함하고, TCR 베타 폴리펩티드가 CDR1(서열번호 29), CDR2(서열번호 31) 및 CDR3(서열번호 33)과 적어도 95% 동일성을 갖는 서열을 포함하는, TCR.
  11. 제1항에 있어서, TCR 알파 폴리펩티드가 CDR1(서열번호 23), CDR2(서열번호 25) 및 CDR3(서열번호 27)과 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함하고, TCR 베타 폴리펩티드가 CDR1(서열번호 29), CDR2(서열번호 31) 및 CDR3(서열번호 33)과 적어도 99% 동일성을 갖는 서열을 포함하는, TCR.
  12. 제1항에 있어서, TCR 알파 폴리펩티드가 서열 CDR1(서열번호 23), CDR2(서열번호 25) 및 CDR3(서열번호 27)을 포함하고, TCR 베타 폴리펩티드가 서열 CDR1(서열번호 29), CDR2(서열번호 31) 및 CDR3(서열번호 33)을 포함하는, TCR.
  13. 제1항에 있어서, 폴리펩티드가 서열번호 19의 서열과 적어도 95% 동일성을 갖고, TCR 베타 폴리펩티드가 서열번호 22의 서열과 적어도 95% 동일성을 갖는, TCR.
  14. 제1항에 있어서, TCR 알파 폴리펩티드가 서열번호 19의 서열과 적어도 99% 동일성을 갖고, TCR 베타 폴리펩티드가 서열번호 22의 아미노산 서열과 적어도 99% 동일성을 갖는, TCR.
  15. 제1항에 있어서, TCR 알파 폴리펩티드가 서열번호 19의 서열을 갖고, TCR 베타 폴리펩티드가 서열번호 22의 서열을 갖는, TCR.
  16. 제1항에 있어서, TCR이 막관통 도메인(transmembrane domain)을 결여하는 가용성 TCR인, TCR.
  17. 제16항에 있어서, 검출가능한 표지를 추가로 포함하는, TCR.
  18. 제16항 또는 제17항에 있어서, 치료제를 추가로 포함하는, TCR.
  19. 제1항 내지 제18항 중의 어느 한 항에 따르는 TCR을 복수개 포함하는, 다가 TCR 복합체(multivalent TCR complex).
  20. 제19항에 있어서, 다가 TCR이 2, 3, 4개 또는 그 이상의 TCR을 포함하는, 복합체.
  21. 제20항에 있어서, 다가 TCR이 지질 이층에 존재하거나 입자에 부착되어 있는, 복합체.
  22. 제20항에 있어서, TCR이 링커 분자를 통해 접합되어 있는, 복합체.
  23. 서열 CDR1(서열번호 7), CDR2(서열번호 9) 및 CDR3(서열번호 11)를 포함하는 TCR 알파 폴리펩티드 및/또는 서열 CDR1(서열번호 13), CDR2(서열번호 15) 및 CDR3(서열번호 17)을 포함하는 TCR 베타 폴리펩티드를 포함하는, 폴리펩티드.
  24. 제23항에 있어서, 폴리펩티드가 서열번호 3의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 TCR 알파 폴리펩티드 및/또는 서열번호 5의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 TCR 베타 폴리펩티드를 포함하는, 폴리펩티드.
  25. 제23항에 있어서, 폴리펩티드가 서열번호 3의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일성을 갖는 TCR 알파 폴리펩티드 및/또는 서열번호 5의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일성을 갖는 TCR 베타 폴리펩티드를 포함하는, 폴리펩티드.
  26. 제23항에 있어서, 폴리펩티드가 서열번호 3의 TCR 알파 폴리펩티드 및 서열번호 5의 TCR 베타 폴리펩티드를 포함하는, 폴리펩티드.
  27. 제23항에 있어서, 폴리펩티드가 서열번호 3의 TCR 알파 폴리펩티드를 포함하는, 폴리펩티드.
  28. 제23항에 있어서, 폴리펩티드가 서열번호 5의 TCR 베타 폴리펩티드를 포함하는, 폴리펩티드.
  29. 서열 CDR1(서열번호 23), CDR2(서열번호 25) 및 CDR3(서열번호 27)을 포함하는 TCR 알파 폴리펩티드 및/또는 서열 CDR1(서열번호 29), CDR2(서열번호 31) 및 CDR3(서열번호 33)을 포함하는 TCR 베타 폴리펩티드를 포함하는, 폴리펩티드.
  30. 제23항에 있어서, 폴리펩티드가 서열번호 19의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 TCR 알파 폴리펩티드 및/또는 서열번호 22의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일성을 갖는 TCR 베타 폴리펩티드를 포함하는, 폴리펩티드.
  31. 제23항에 있어서, 폴리펩티드가 서열번호 19의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일성을 갖는 TCR 알파 폴리펩티드 및/또는 서열번호 22의 아미노산 서열과 적어도 95% 동일성을 갖는 TCR 베타 폴리펩티드를 포함하는, 폴리펩티드.
  32. 제23항에 있어서, 폴리펩티드가 서열번호 19의 TCR 알파 폴리펩티드 및 서열번호 22의 TCR 베타 폴리펩티드를 포함하는, 폴리펩티드.
  33. 제23항에 있어서, 폴리펩티드가 서열번호 19의 TCR 알파 폴리펩티드를 포함하는, 폴리펩티드.
  34. 제23항에 있어서, 폴리펩티드가 서열번호 22의 TCR 베타 폴리펩티드를 포함하는, 폴리펩티드.
  35. 제23항 내지 제34항 중의 어느 한 항의 폴리펩티드를 코딩하는(encoding) 폴리뉴클레오티드.
  36. 제1항 내지 제18항 중의 어느 한 항의 TCR을 포함하는 발현 벡터.
  37. 제36항에 있어서, 발현 벡터가 바이러스 벡터인, 발현 벡터.
  38. 제37항에 있어서, 바이러스 벡터가 레트로바이러스 벡터 또는 렌티바이러스 벡터인, 발현 벡터.
  39. 제36항 내지 제38항 중의 어느 한 항에 있어서, 링커 도메인(linker domain)을 추가로 포함하는, 발현 벡터.
  40. 제39항에 있어서, 링커 도메인이 TCR 알파 폴리펩티드와 TCR 베타 폴리펩티드 사이에 존재하는, 발현 벡터.
  41. 제39항 또는 제40항에 있어서, 링커 도메인이 하나 이상의 절단 부위를 포함하는, 발현 벡터.
  42. 제41항에 있어서, 하나 이상의 절단 부위가 퓨린 절단 부위(Furin cleavage site) 및/또는 P2A 절단 부위인, 발현 벡터.
  43. 제41항 또는 제39항에 있어서, 하나 이상의 절단 부위가 스페이서(spacer)에 의해 분리되어 있는, 발현 벡터.
  44. 제43항에 있어서, 스페이서가 SGSG 또는 GSG인, 발현 벡터.
  45. 제39항에 있어서, TCR 알파 폴리펩티드 및 TCR 베타 폴리펩티드가 IRES 서열에 의해 연결되어 있는, 발현 벡터.
  46. 제1항 내지 제18항 중의 어느 한 항의 TCR을 발현하도록 조작된(engineered) 숙주 세포.
  47. 제46항에 있어서, 세포가 면역 세포인, 숙주 세포.
  48. 제46항에 있어서, 세포가 NK 세포, 불변 NK 세포, NKT 세포, 중간엽 줄기 세포(MSC) 또는 유도된 다능성 줄기(iPS) 세포인, 숙주 세포.
  49. 제46항에 있어서, 세포가 제대 또는 혈액으로부터 단리되는, 숙주 세포.
  50. 제46항에 있어서, 면역 세포가 T 세포 또는 말초혈 림프구인, 숙주 세포.
  51. 제50항에 있어서, T 세포가 CD8+ T 세포, CD4+ T 세포 또는 γδ T 세포인, 숙주 세포.
  52. 제50항에 있어서, 세포가 동종이계 또는 자가인, 숙주 세포.
  53. 제46항 내지 제52항 중의 어느 한 항에 따르는 MAGE-B2 TCR-특이적 세포의 모집단(population)을 포함하는 약제학적 조성물.
  54. MAGE-B2-특이적 면역 세포를 조작하는 방법으로서,
    면역 세포를 제36항 내지 제44항 중의 어느 한 항의 발현 벡터와 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
  55. 제54항에 있어서, 면역 세포가 T 세포, 말초혈 림프구, NK 세포, 불변 NK 세포 또는 NKT 세포인, 방법.
  56. 제54항 또는 제55항에 있어서, 접촉시키는 단계가 형질감염 또는 형질도입으로서 추가로 정의되는, 방법.
  57. 제55항에 있어서, 말초혈 림프구가 OKT3 및 IL-2로 자극되는, 방법.
  58. 제54항 내지 제57항 중의 어느 한 항에 있어서, 면역 세포를 선별하여 TCR 조작된 T 세포를 단리하고, 연속 희석에 의한 T 세포 클로닝, 및 신속 확장 프로토콜에 의한 T 세포 클론의 확장을 수행하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  59. 암을 치료하기 위한, 제46항 내지 제52항 중의 어느 한 항에 따르는 치료학적 유효량의 MAGE-B2 TCR-특이적 세포의 용도.
  60. 제59항에 있어서, MAGE-B2 TCR-특이적 세포가 T 세포인, 용도.
  61. 대상체에서 암을 치료하기 위한, 제46항 내지 제52항 중의 어느 한 항에 따르는 치료학적 유효량의 MAGE-B2 특이적 세포를 포함하는 조성물.
  62. 제59항에 있어서, MAGE-B2 TCR-특이적 세포가 T 세포인, 조성물.
  63. 제46항 내지 제52항 중의 어느 한 항에 따르는 치료학적 유효량의 MAGE-B2-특이적 세포를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 암을 치료하는 방법.
  64. 제63항에 있어서, MAGE-B2-특이적 세포가 T 세포인, 방법.
  65. 제63항에 있어서, 대상체가 HLA-A*0201, HLA-A*0202, HLA-A*0203, HLA-A*0204, 또는 HLA-A*0205 대립인자를 갖는 것으로 동정(identify)되는, 방법.
  66. 제63항에 있어서, 치료학적 유효량의 MAGE-B2-특이적 T 세포의 투여 전에 대상체에게 림프구고갈(lymphodepletion)을 수행하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  67. 제64항에 있어서, 치료학적 유효량의 MAGE-B2-특이적 T 세포가 항종양 활성을 갖는 자가 종양 침윤 림프구(TIL)의 샘플로부터 유래된, 방법.
  68. 제63항에 있어서, MAGE-B2-특이적 세포가 대상체에게 정맥내, 복강내 또는 종양내 투여되는, 방법.
  69. 제63항에 있어서, 대상체가 인간인, 방법.
  70. 제63항에 있어서, 적어도 하나의 추가 치료제를 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  71. 제70항에 있어서, 적어도 하나의 추가 치료제가 화학요법, 방사선요법 및 면역요법으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
  72. 제70항에 있어서, 적어도 하나의 추가 치료제가 면역요법인, 방법.
  73. 제72항에 있어서, 면역요법이 면역 체크포인트(checkpoint) 억제제인, 방법.
  74. 제73항에 있어서, 면역 체크포인트 억제제가, CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, BTLA, B7H3, B7H4, TIM3, KIR, 또는 아데노신 A2a 수용체(A2aR)로 이루어진 그룹으로부터 선택된 면역 체크포인트 단백질 또는 이의 리간드를 억제하는, 방법.
  75. 제74항에 있어서, 면역 체크포인트 억제제가 PD-1 또는 CTLA-4를 억제하는, 방법.
KR1020207031165A 2018-04-19 2019-04-19 Mage-b2 특이성을 갖는 t 세포 수용체 및 이의 용도 KR20210003767A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862660083P 2018-04-19 2018-04-19
US62/660,083 2018-04-19
PCT/US2019/028239 WO2019204683A1 (en) 2018-04-19 2019-04-19 T cell receptors with mage-b2 specificity and uses thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20210003767A true KR20210003767A (ko) 2021-01-12

Family

ID=68239239

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020207031165A KR20210003767A (ko) 2018-04-19 2019-04-19 Mage-b2 특이성을 갖는 t 세포 수용체 및 이의 용도

Country Status (7)

Country Link
US (1) US20210363215A1 (ko)
EP (1) EP3784255A4 (ko)
JP (1) JP7469807B2 (ko)
KR (1) KR20210003767A (ko)
CN (1) CN112236447B (ko)
CA (1) CA3097399A1 (ko)
WO (1) WO2019204683A1 (ko)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MA48487B1 (fr) 2014-12-23 2021-11-30 Immatics Biotechnologies Gmbh Nouveaux peptides et combinaison de peptides à utiliser dans l'immunothérapie contre le carcinome hépatocellulaire (hcc) et d'autres cancers
GB201501017D0 (en) 2014-12-23 2015-03-04 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel peptides and combination of peptides for use in immunotherapy against hepatocellular carcinoma (HCC) and other cancers
CA3142513A1 (en) 2019-06-25 2020-12-30 Gilead Sciences, Inc. Flt3l-fc fusion proteins and methods of use
BR112022014623A2 (pt) 2020-02-14 2022-09-13 Jounce Therapeutics Inc Anticorpos e proteínas de fusão que se ligam a ccr8 e usos dos mesmos
CN111718409B (zh) * 2020-06-17 2021-03-02 深圳豪石生物科技有限公司 一种t细胞受体及其应用
TWI815194B (zh) 2020-10-22 2023-09-11 美商基利科學股份有限公司 介白素2-Fc融合蛋白及使用方法
WO2022212831A1 (en) * 2021-04-02 2022-10-06 Amgen Inc. Mageb2 binding constructs
TW202313094A (zh) 2021-05-18 2023-04-01 美商基利科學股份有限公司 使用ＦＬＴ３Ｌ—Ｆｃ融合蛋白之方法
WO2023076983A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Gilead Sciences, Inc. Pyridizin-3(2h)-one derivatives
AU2022376954A1 (en) 2021-10-29 2024-05-02 Gilead Sciences, Inc. Cd73 compounds
US20230242508A1 (en) 2021-12-22 2023-08-03 Gilead Sciences, Inc. Ikaros zinc finger family degraders and uses thereof
WO2023122581A2 (en) 2021-12-22 2023-06-29 Gilead Sciences, Inc. Ikaros zinc finger family degraders and uses thereof
TW202340168A (zh) 2022-01-28 2023-10-16 美商基利科學股份有限公司 Ｐａｒｐ７抑制劑
TW202346277A (zh) 2022-03-17 2023-12-01 美商基利科學股份有限公司 Ｉｋａｒｏｓ鋅指家族降解劑及其用途
TW202400138A (zh) 2022-04-21 2024-01-01 美商基利科學股份有限公司 Ｋｒａｓ ｇ１２ｄ調節化合物
US20240116928A1 (en) 2022-07-01 2024-04-11 Gilead Sciences, Inc. Cd73 compounds

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE550356T1 (de) * 2006-05-03 2012-04-15 Us Gov Health & Human Serv Chimäre t-zellen-rezeptoren sowie entsprechende materialien und verwendungsverfahren
EP3590530B1 (en) * 2010-09-20 2021-12-29 Biontech Cell & Gene Therapies Gmbh Antigen-specific t cell receptors and t cell epitopes
ES2734889T3 (es) * 2010-09-21 2019-12-12 Us Health Receptores de células T anti-SSX-2 y materiales relacionados y métodos de uso
WO2012054825A1 (en) * 2010-10-22 2012-04-26 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Anti-mage-a3 t cell receptors and related materials and methods of use
CA2848209C (en) * 2011-09-15 2021-06-01 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services T cell receptors recognizing hla-a1- or hla-cw7-restricted mage
KR102480188B1 (ko) * 2012-09-14 2022-12-21 더 유나이티드 스테이츠 오브 어메리카, 애즈 리프리젠티드 바이 더 세크러테리, 디파트먼트 오브 헬쓰 앤드 휴먼 서비씨즈 Mhc ii형 제한된 mage-a3을 인식하는 t 세포 수용체
WO2016093350A1 (ja) * 2014-12-11 2016-06-16 国立研究開発法人理化学研究所 改変型免疫細胞、改変型免疫細胞の製造方法、およびこれらの利用
EP3757211A1 (en) * 2014-12-19 2020-12-30 The Broad Institute, Inc. Methods for profiling the t-cell-receptor repertoire
GB201603568D0 (en) * 2016-03-01 2016-04-13 Immatics Biotechnologies Gmbh Efficient treatment options including peptides and combination of peptide and cell based medicaments for use in immunotherapy against urinary bladder cancer
MX2018012268A (es) * 2016-04-08 2019-02-07 Adaptimmune Ltd Receptores de celulas t.
CA3020530A1 (en) * 2016-04-08 2017-10-12 Adaptimmune Limited T cell receptors
EA201990591A1 (ru) * 2016-09-23 2019-08-30 Фред Хатчинсон Кэнсер Рисерч Сентер Tcr, специфичные к минорному антигену гистосовместимости (h) ha-1, и их применения
GB201616238D0 (en) * 2016-09-23 2016-11-09 Adaptimmune Ltd Modified T cells
MX2019003768A (es) * 2016-10-03 2019-06-24 Juno Therapeutics Inc Moleculas de enlace especificas de hpv.
DE102016123859B3 (de) * 2016-12-08 2018-03-01 Immatics Biotechnologies Gmbh Neue T-Zellrezeptoren und deren Verwendung in Immuntherapie
JP7233103B2 (ja) * 2017-03-07 2023-03-06 ウニヴェルズィテート バーゼル 癌免疫療法用ｍｒ１制限ｔ細胞受容体
AU2018318303A1 (en) * 2017-08-18 2020-04-09 Gritstone Bio, Inc. Antigen-binding proteins targeting shared antigens

Also Published As

Publication number Publication date
CN112236447A (zh) 2021-01-15
US20210363215A1 (en) 2021-11-25
CN112236447B (zh) 2023-10-20
JP2021521776A (ja) 2021-08-30
EP3784255A1 (en) 2021-03-03
EP3784255A4 (en) 2022-06-22
WO2019204683A1 (en) 2019-10-24
CA3097399A1 (en) 2019-10-24
JP7469807B2 (ja) 2024-04-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20210003767A (ko) Mage-b2 특이성을 갖는 t 세포 수용체 및 이의 용도
EP3182994B1 (en) Chimeric antigen receptor specific for ssea4 antigen
EP3209696B1 (en) Methods and compositions for diagnosis and treatment of glioblastoma
KR102186180B1 (ko) 면역 기능 제어 인자를 발현하는 면역 담당 세포 및 발현 벡터
WO2017205810A1 (en) Neoepitope vaccine compositions and methods of use thereof
CN112979783A (zh) 获得肿瘤特异性t细胞受体的方法
JP2023145687A (ja) Ｔｃｒ及びペプチド
KR20220149505A (ko) 종양 세포 백신
KR20200064126A (ko) 면역요법을 위한 t 세포 수용체
CN114588255A (zh) 基于mRNA的肿瘤疫苗及其制备和联合抗癌方法
JP6250288B2 (ja) Ｔ細胞レセプターおよびその利用
KR20220070487A (ko) 면역원성 egfr 펩타이드 조성물 및 암의 치료에서 그의 용도
AU2022260281A1 (en) Methods and compositions comprising mhc class i peptides
WO2022216856A1 (en) Methods and compositions comprising mhc class i peptides
US20240024438A1 (en) Methods and compositions comprising mhc class peptides
WO2023211972A1 (en) Chimeric antigen receptor modified regulatory t cells for treating cancer
JP2023526416A (ja) Ｖｇｌｌ１特異性を有するｔ細胞受容体およびその使用法
TW202132326A (zh) Hla限制性hormad1 t細胞受體及其用途